用于降低癫痫发生的危险和/或用于治疗癫痫发作疾病的组合物和方法

摘要

本发明涉及用于降低癫痫发生的危险和/或用于减轻患者癫痫症状的化合物和组合物。根据本发明，所述的化合物和组合物具有至少以下两种组分：a)维生素B6基组分，选自吡哆醛、吡哆胺、吡多辛、它们药学上可接受的官能衍生物和盐；和b)至少一种抗癫痫药物(AED)或抗惊厥药物、神经保护药物或吡乙酰胺化合物或部分。本发明进一步涉及用于预防癫痫急性发作和用于减轻癫痫急性发作的方法，以及用于减小抗癫痫药物副作用的方法。

权利要求

1.化合物，其选自[5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)-吡啶-3-基]甲基-4-氨基丁酸酯，[3-(5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)吡啶基]甲基-2-[(4-羟基)喹啉]甲酸酯，或[4-(4-羟基喹啉-2-碳酰氨基)]丁酸5-羟基-4-羟甲基-6-甲基-吡啶-3-基)甲基酯，及其药学上可接受的盐。

2.一种药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1的化合物和药学上可接受的赋形剂。

3.权利要求2的药物组合物，其中所述药学上可接受的赋形剂是药学上可接受的载体。

4.权利要求1的化合物在制备用于治疗神经系统疾病或病症的药物中的用途。

5.根据权利要求4的用途，其中所述的神经系统疾病或病症是癫痫症。

6.权利要求1的化合物在制备用于预防癫痫急性发作、减轻癫痫急性发作和/或减少抗癫痫药副作用的药物中的用途。

7.根据权利要求4的用途，其中所述的化合物是口服给药的。

8.根据权利要求5的用途，其中所述的化合物是口服给药的。

9.根据权利要求6的用途，其中所述的化合物是口服给药的。

说明书

用于降低癫痫发生的危险和/或用于治疗癫痫发作疾病的

组合物和方法

发明领域

[0001] 本发明涉及用于癫痫症和相关疾病的治疗和预防的组合物以及使用这种组合物的方法。

[0002] 发明背景

[0003] 癫痫症是最常见的慢性神经系统紊乱之一。该疾病的特点在于复现性的癫痫发作，其源于异常和过度的脑神经元活性并导致发作性的脑功能混乱。癫痫症的类型包括部分(症状的)和普遍性的自发癫痫发作。部分性癫痫是“局部相关的”并且发生于脑的有限区域。癫痫症的普遍形成不是由特定的脑损害或疾病所引起的，除了可能的遗传倾向以产生癫痫发作外。普遍性或大发作癫痫发作包括强直-阵挛性癫痫发作，其中整个身体经受惊厥。剩下未经治疗的癫痫症可以变成癫痫持续状态，即可能致命的神经急症[Antiepileptic Drugs；R.H.Levy，R.H.Mattson和B.S.Meldrum编写；第4版，Raven Press，NY，NY；Aicardi.Epilepsy in children.，第2版.New York：Raven Press，1994：18-43]。虽然对精确遗传或所包括的生化缺陷的了解很少，但是原发性癫痫可能是一种可遗传的疾病(Andermann In Genetic Basis of theEpilepsies，Anderson VE，Hauser WA，Penry JK，Sing CF编写，NewYork：Raven Press 1982：355-74；Anderson EV，Hauser WA，Genetics.In：Dam M，Gram L，ed.Comprehensive Epileptology.New York：Raven Press
1990：57-76)。最近的研究表明遗传倾向对局部-相关的癫痫症(特别是外伤后癫痫)形成的可能性。在这种类型的癫痫症中，颅脑损伤是诱导病理遗传因素的低介入疾病的解决外因。

[0004] 全世界超过五千三百万人患有癫痫症，仅在美国就有二百五十万人已经或将要癫痫发作。癫痫症主要影响儿童和年轻的成人。几乎50％的新癫痫症病例发生在25岁之前。大约28％的癫痫患者患有对抗癫痫药治疗具有抵抗力的顽固癫痫症。宽谱的抗癫痫药用于癫痫症治疗[Antiepileptic Drugs；R.H.Levy、R.H.Mattson和B.S.Meldrum编写；第4版，Raven Press，NY，NY；Aicardi，Epilepsy in children，第2版，Raven Press，1994]。
然而，至今没有完成十年前表达的目标(Drugs and Market Development，1992，v.2，N3)，即开发同样有效的而且比现在销售的AEDs毒性更小的抗癫痫药(AEDs)。一种癫痫症的特殊形式，被称为“吡多辛-依赖性癫痫症”已被描述为罕见的(1∶100000)常染色体隐性遗传疾病，该疾病在新生儿和婴儿中引起严重的惊厥并伴有随后的智力迟钝(Hunt等人，Pediatrics 1954；13：140；Rosenberg In：Medical Genetics McKusic VA，ed.1995：73-8；
Shideler Am.J.Med.Technol.1983；49：17-22；Scriver 和 HutchisonPediatrics 1963；
31：240-50)。

[0005] 据报告吡多辛-依赖性癫痫症可以通过给予吡多辛来治疗(Aicardi，Epilepsy in children， 第 2 版，Raven Press 1994；EpilepsyProblems Solving in Clinical Practice；D.Schmidt，S.C.Schachter编写；Martin Dunitz，2000)。但是，文献建议治疗吡多辛-依赖性癫痫症的药物方法不适于其它癫痫症形式的治疗。

[0006] 维生素B6(吡多辛)在氨基酸、蛋白质、碳水化合物、脂类、激素和神经介质的代谢中起重要的作用(Lumeng L，Li TK.Mammalianvitamin B6 metabolism：regulatory role of protein-binding and thehydrolysis of pyridoxine 5′-Phosphate in storage and transport.In：G.P.Tryfiates，ed.Vitamin B6，Metabolism and Role in Growth.Food &Nutrition Press，Inc.，Westport，CT 06880 USA，1980：27-51)。活性形式吡哆醛-5’-磷酸盐(PLP)是哺乳动物组织中很多酶(包括转氨酶、脱羧酶和裂合酶，等)的辅酶。神经递质(例如，多巴胺、去甲肾上腺素、血清素、酪胺、色胺、牛磺酸、GABA(γ-氨基丁酸)和间接乙酰胆碱)也是通过PLP-依赖性的酶促反应合成和/或代谢的(参见：Metzler，Biochemistry，Academic Press，1977；Ebadi M.，Regulationand function of pyridoxine phosphate in CNS.Neurochem.Int 1981，3，181-206；Leklem 1988 Vitamin B6 metabolism and function in humans.In：Clinical and physiological Application of vitamin B6(Leklem &Reynolds eds.，)Alan R.Liss，NY，1988；Shideler Ch.Vitamin B6：An Overview.Am.J.Med.Technol.1983；49：17-22)。

[0007] 发明简述

[0008] 根据本发明的优选实施方案，提供了一种用于降低癫痫发生的危险和/或用于减轻患者癫痫症状的组合物。在本发明的优选实施方案中，所述的组合物包含由维生素B6部分组成的化合物，所述维生素B6部分化学连接到另外的化学部分，另外的化学部分选自抗癫痫药物(AEDs)和抗惊厥药物、神经保护药物、神经递质以及吡乙酰胺(nootrope)部分。优选地，组合物的剂量是维生素B6部分和AED部分/抗惊厥部分都以不超过该部分的安全最大剂量存在。这种化合物可以由下列通式表示：

[0009]

[0010] 其中R’表示AED部分或抗惊厥药物、神经保护药物、神经递质或吡乙酰胺部分并且R选自-CH2OH、-CHO和-CH2NH2；及其药学上可接受的盐。

[0011] 在本发明的另一优选实施方案中，组合物包括(a)和(b)的物理混合物：

[0012] (a)具有以下通式的维生素B6化合物：

[0013]

[0014] 其中R选自-CH2OH、-CHO和-CH2NH2，并且应用维生素B6化合物的单独剂量不超过其单独给药的最大安全剂量并且其日剂量不超过最大安全日剂量，和

[0015] (b)AED或抗惊厥药物、神经保护药物或吡乙酰胺化合物，应用AED或化合物的剂量不超过其单独给药的最大安全剂量并且其日剂量不超过最大安全日剂量。

[0016] 根据本发明的另一优选实施方案，将上述组合物以维生素B6化合物和AED、抗惊厥药物、神经保护药物或吡乙酰胺化合物均存在于患者的单个制剂中的方式给予患者。

[0017] 本发明还提供一种治疗方法，该方法是给予需要治疗的患者至少一种选自吡哆醛、吡哆胺和吡多辛、它们药学上可接受的官能衍生物和这些物质的盐的物质，给予的量相当于吡多辛的建议日饮食容许量的大约2到大约500倍。这样的至少一种物质可以和至少一种AED、抗惊厥药物、神经保护药物或吡乙酰胺化合物共同给予。

[0018] 本发明还提供一种药物组合物，其包含混合物，优选为至少以下组分(i)、(ii)和(iii)的混合物，即：

[0019] (i)至少一种选自吡哆醛、吡哆胺和吡多辛、它们药学上可接受的官能衍生物和这些物质的盐的物质；

[0020] (ii)至少一种AED或抗惊厥药物、神经保护药物或吡乙酰胺化合物；和

[0021] (iii)至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

[0022] 在本发明的优选实施方案中，可使用常规的微密封技术将混合物或掺和物和/或其独立组分以微囊包封，例如在美国专利6,156,347中公开的微包封技术，在此引入其内容作为参考。如本领域已知，也可将脂质体用于掺和物或其组分的微囊密封。

[0023] 如上所述，一方面本发明涉及向受试者给予至少一种规定的物质，给予的量不超过500毫克/天，即相当于吡多辛建议日饮食容许量的大约2到大约500倍。在本申请的说明书和权利要求中，吡多辛的建议日饮食容许量是指由美国国家科学院-国家研究委员会的食物和营养部(the Food and Nutrition Board of the National Academy ofSciences-National Research Council(U.S.A))公开的容许量，1968年修订，例如在“The Pharmaceutical Basis of Therapeutics”中转载，1970年第4版，Goodman和Gilman编写(The Macmillan Company)。为了方便起见，将有关的数据复制在下面。

[0024] 吡多辛的建议日饮食容许量

[0025] 年龄 数量

[0026] (以年计，婴儿除外) (mg)

[0027] 婴儿 2个月以下 0.2

[0028] 2-6个月 0.3

[0029] 儿童 6-12个月 0.4

[0030] 1-2 0.5

[0031] 2-3 0.6

[0032] 3-4 0.7

[0033] 4-6 0.9

[0034] 6-8 1.0

[0035] 8-10 1.2

[0036] 男性 10-12 1.4

[0037] 12-14 1.6

[0038] 14-18 1.8

[0039] 18-22 2.0

[0040] 22-35 2.0

[0041] 35-55 2.0

[0042] 55-75+ 2.0

[0043] 女性 10-12 1.4

[0044] 12-14 1.6

[0045] 14-18 1.8

[0046] 16-18 2.0

[0047] 18-22 2.0

[0048] 22-35 2.0

[0049] 35-55 2.0

[0050] 55-75+ 2.0

[0051] 妊娠期 2.5

[0052] 哺乳期 2.5

[0053] 根据本发明的优选实施方案，一种在高危人受试者中降低癫痫发生危险的方法，该方法包括给予所述受试者至少一种选自吡哆醛、吡哆胺和吡多辛、它们药学上可接受的官能衍生物和任何这些物质的盐的物质，给予的量相当于吡多辛建议日饮食容许量的大约2到大约500倍。

[0054] 该高危受试者可以是，例如具有癫痫发作疾病家族史的怀孕或哺乳期的女性；具有癫痫发作疾病家族史的儿童，特别是大约1-5岁年龄范围内的此类儿童，其次是在青春期11-15岁的此类儿童；具有癫痫发作(如发热的或屏吸惊厥)个人病史的儿童；具有先天性损伤或窒息，特别是在儿童期或青春期年龄内的儿童。或者，高危受试者可以是，例如忍受脑外伤的人，而在这样情况下优选地将吡多辛以上面描述的数量给予发作后大约1-2年的时间。在本发明的另一优选实施方案中，高危受试者是过去接受过至少一种AED的治疗过程，其治疗过程从那以后停止的人。在这种情况下，吡多辛给予的过程优选是在连续的大约1-2年期间，以2-20毫克/公斤，优选4-10毫克/公斤的剂量。优选地，吡多辛的给予的过程在AED疗程结束后立即开始。重要的是注意到癫痫症的一些特殊形式，如癫痫不发作、非典型的不发作和弛缓的癫痫发作[ILAE revised classification of epileptic seizures(1981)]表现出不适于用吡多辛治疗。

[0055] 根据本发明的另一优选实施方案，一种降低癫痫发作的危险和减少癫痫发生，以及减轻受试者的AEDs副作用的方法，该方法包括给予诊断为癫痫患者的受试者至少一种选自吡哆醛、吡哆胺和吡多辛、它们药学上可接受的官能衍生物和任何这些物质的盐的步骤，给予的量相当于吡多辛建议日饮食容许量的大约2到大约500倍，但每日不超过500毫克吡多辛。在本发明的这一实施方案中，优选地和所述的至少一种物质、至少一种抗癫痫药(AED)共同给予，例如，作为实例，至少一种这样的药物选自苯妥英或其它乙内酰脲；苯巴比妥或其它巴比妥类药物、扑米酮、卡马西平和奥卡西平(oxacarbamazepine)、丙戊酸或它的衍生物；噁唑烷；苯并二氮杂卓；非氨酯、加巴喷丁、拉莫三嗪、氨己烯酸、促肾上腺皮质激素(ACTH)的这样的药物(“Antiepileptic Drugs”，第4版，由R.Levy、R.H.Mattson、B.S.Meldrum编写，Raven Press，NY，NY，1995)，以及任何其它在使用的AED或潜在的AED。虽然神经保护药物和吡乙酰胺不被认为是AEDs，但是在上述提到的联用中可用于代替AEDs。

[0056] 根据本发明优选实施方案，一种预防癫痫发作和减轻癫痫发作和AEDs副作用的方法包括向所述受试者给予：

[0057] (a)至少一种选自吡哆醛、吡哆胺和吡多辛、它们药学上可接受的官能衍生物和任何这些物质的盐的物质，给予的量相当于吡多辛的建议日饮食容许量的大约2到大约500倍；和

[0058] (b)至少一种可选自上述指定的那些之中的AED联合。

[0059] 在本发明的这一实施方案中，受试者可以是已接受至少一种AED的治疗过程并且处于AED治疗取消期的人。在这些条件下，和维生素B6(或其衍生物，如上定义)联合给予的AED的日剂量优选地小于在没有维生素B6或其衍生物的情况下每日给予的AED数量的大约10-90％。

[0060] 应当领会在本发明的那些实施方案中，将AED和至少一种选自吡哆醛、吡哆胺和吡多辛、它们药学上可接受的官能衍生物以及任何这些物质的盐的物质共同给药，然后采取所述两种组分分开给予的形式共同给药。但是，通常更方便的是将所述两种组分以整体的组合物的形式共同给药，整体组合物的形式为片剂、胶囊、糖衣丸或糖浆或任何其它制剂。

[0061] 因此，根据本发明的另一优选实施方案提供一种药物组合物，其包括混合物，优选以下(a)、(b)、(c)的掺合物：

[0062] (a)至少一种选自吡哆醛、吡哆胺和吡多辛、它们药学上可接受的官能衍生物和任何这些物质的盐的物质；

[0063] (b)至少一种AED、神经保护药物或吡乙酰胺化合物；和

[0064] (c)至少一种载体、稀释剂或赋形剂。

[0065] 在本发明的优选实施方案中，可使用常规的微囊密封工艺将混合物或掺和物和/或其独立组分微囊密封，例如在美国专利6,156,347中公开的微囊密封工艺，在此引入其内容作为参考。如本领域已知，也可以将脂质体用于掺和物或其组分的微囊密封。载体、稀释剂或赋形剂是药学领域中已知的，并根据相应的给药方式，例如口服、非肠道、鼻内、直肠、经眼或其它可接受的给药方式，按照本领域的公知常识进行选择。

[0066] 在本发明的药物组合物中，(a)∶(b)的重量比优选在大约1∶0.1至大约1∶1的范围内，在治疗开始时以1∶0.1开始，逐渐增加AED的剂量，如果必要，至多达到大约1∶1的稳定比例。(a)和(b)以大约1∶1的比例给药一段时期后，在治疗取消期间，逐渐减少(b)的剂量并且将(a)∶(b)的比例相应地逐渐从大约1∶1改变到大约1∶0.1，从而当(b)的剂量变得等于0时，逐渐导致由(a)完全代替(b)。这些组合物将令人期望地处于剂量单位形式，该剂量单位包含总量不超过组分(a)和(b)各自的安全最大成人日剂量，优选包含不超过大约500毫克组分(a)，和不超过典型成人日剂量的组分(b)。

[0067] 在以下范围内对本领域的技术人员而言是显而易见的，一方面，本发明涉及对成人日剂量不适合的个体(包括婴儿和儿童)的治疗方法，另一方面，成人和儿童的日剂量可以在任何情况下以分开的剂量给药，本发明的剂量单位可以含有组分(b)的典型成人日剂量的一部分和组分(a)的最大日剂量的一部分。至少一种AED可以是，例如选自苯妥英或其它乙内酰脲；苯巴比妥或其它巴比妥类药物、扑米酮、卡马西平和奥卡西平、丙戊酸或它的衍生物；噁唑烷；苯并二氮杂卓；非氨酯、加巴喷丁、拉莫三嗪、氨己烯酸、促肾上腺皮质激素(ACTH)(“Antiepileptic Drugs”，第4版，由R.Levy、R.H.Mattson、B.S.Meldrum编写；Raven Press，NY，NY，1995)，以及任何其它在使用的AED或潜在的AED。神经保护化合物和吡乙酰胺虽然不被认为是AEDs，但是也可用作组分(b)。

[0068] 在参考以上本发明药物组合物中组分(b)的典型成人日剂量范围内，会便于某些已知的AED复制此类数据(Antiepileptic Drugs 4th Ed.Ed.R.Levy，R.H.Mattson，B.S.Meldrum)。但是，必须强调的是需要利用已知AED的本发明的实施方案可同样地利用未在此指定或列表的药物，包括潜在的AED、神经保护化合物或吡乙酰胺。

[0069] 一些已知的抗惊厥药的典型成人日剂量

[0070] 药物名称 日剂量(毫克/公斤)

[0071] 卡马西平 5-20

[0072] 丙戊酸 10-20

[0073] 苯妥英 4-7

[0074] 唑尼沙胺 8-12

[0075] 氯硝西泮 10-40

[0076] 因此，本发明提供一类新的组合物，其降低癫痫发作的危险和/或减轻癫痫发作，以及减少AED的副作用。本发明的组合物的特征在于包含具有神经保护和抗惊厥性质的无毒组分，从而大大减少了副作用的可能性。所述组合物的活性是足够的，以致它们在比常规的抗惊厥药物相对低的剂量水平下同样有效。

[0077] 应注意到通过给予吡多辛治疗被称为“吡多辛-依赖的癫痫症”类型的癫痫症已在现有技术中报道(Hunt等人，Pediatrics 1954；13：140；Rosenberg In：Medical Genetics McKusic VA，ed.1995：73-8；ShidelerAm.J.Med.Technol.1983；49：17-22；Scriver and Hutchison Pediatrics1963；31：240-50)。文献也建议治疗吡多辛-依赖性的癫痫症的药物方法不适于其它癫痫症形式的治疗。相反，本发明提供单独用吡多辛以适用于预防和治疗所述疾病的初期形式，以及预防除吡多辛-依赖性的癫痫症之外的癫痫症的复发。根据本发明，提供以混合物或化学键合部分形式的与AED联用的吡多辛，用于除吡多辛-依赖型之外不同阶段癫痫症的药物治疗。但是，应注意到一些癫痫症的特定形式，例如癫痫不发作、非典型的不发作和弛缓的癫痫发作，这些不适合用吡多辛治疗的病症也不适合用吡多辛和AED联合以混合物或化学键合部分的方式治疗。

[0078] 附图简述

[0079] 图1描述了用NC-001、维生素B6、GABA，或维生素B6和GABA联合治疗的有遗传癫痫症-倾向(EP)的小鼠中PTZ-诱导的惊厥性反应的得分，如图中所示。

[0080] 图2描述了用5毫克/公斤、7.5毫克/公斤或10毫克/公斤的NC-001治疗的有遗传癫痫症-倾向(EP)BALB/c小鼠中的PTZ-诱导的惊厥性应答。

[0081] 图3描述了NC-001口服给药对有遗传癫痫症-倾向(EP)小鼠的抗惊厥作用。

[0082] 实施本发明的最佳方式

[0083] 根据本发明提出了一类化合物，用于降低癫痫发生的危险、减轻癫痫发生和减少AED的副作用。根据本发明的优选实施方案，组合物是包含(a)维生素B6部分和(b)AED部分的化合物。所述维生素B6部分化学连结到AED、神经保护或神经递质化合物或吡乙酰胺以得到新的AED化合物，其可由下列通式表示：

[0084]

[0085] 其中R’表示AED部分并且R选自-CH2OH、-CHO和-CH2NH2，所述组合物以不大于其最大安全剂量的剂量应用。

[0086] AED部分可以是实际上地任何AED(或其它参与的化合物)，其可以经过醚化作用或类似于连接在维生素B6部分的吡啶核的-CH2OH或-OH基团连接到维生素B6部分。非限制性并且作为例证和实例的AED部分可以通过苯妥英或其它乙内酰脲；苯巴比妥或其它巴比妥类药物、扑米酮、卡马西平和奥卡西平、丙戊酸或它的衍生物；噁唑烷；苯并二氮杂卓；非氨酯、加巴喷丁、拉莫三嗪、氨己烯酸、促肾上腺皮质激素(ACTH)的任何AED，(“Antiepileptic Drugs”，第4版，由R Levy、R.H.Mattson、B.S.Meldrum编写；Raven Press，NY，NY，1995)，以及任何其它在使用的AED或潜在的AED与上述维生素B6的-CH2OH基团反应得到。虽然神经递质、神经保护化合物和吡乙酰胺不被认为是AED，但是可用于代替上述联用中的AEDs。

[0087] 因此，化学偶联的维生素B6部分和AED部分的优选剂量范围限制在不超过每种组分的最高安全日剂量。可将这样用于成人和儿童的日剂量以分开剂量给药。建议保持在这些范围内，因为指导剂量能显著地减轻癫痫惊厥和/或用来显著地降低癫痫发生的危险。根据得到的数据，与其它抗惊厥药物(或神经保护药物、神经递质、吡乙酰胺)部分化学偶联的维生素B6部分在足够低的剂量是有效的，以减少或消除不良的副作用。

[0088] 不希望由任何具体的理论加以限定，认为大多数上述AED以及其它AED存在于血流中时仅以很小的比例透过血-脑屏障，并因此需要相当高数量的这些化合物留在血流中以便在脑内达到AED的有效量。据推测是因为维生素B6容易被吸收到胃肠道中去和相对容易地通过血-脑屏障，通过化学连结AED和维生素B6部分，AED部分会被更容易地吸收并被携带穿过血-脑屏障，因此要求AED在血流中的浓度较低以达到AED在脑中的有效浓度。这提供了对癫痫发作疾病具有更小或没有有害的副作用的有效治疗，所述的副作用多数是由AED在血流中的高浓度所引起的。

[0089] 根据本发明的另一优选实施方案，可将维生素B6和抗惊厥的化合物以两者同时给予受治疗者的方式分开或以物理混合物的形式向患者给药。优选地，将维生素B6和AED化合物以单个制剂给予。优选的维生素B6与AED的重量比范围在剂量-滴定(dose-titration)期间治疗开始时的大约0.1∶1，到治疗状况稳定时升至大约1∶1。建议在疗程取消时使逐渐增加的维生素B6与AED的重量比达到大约1.0∶0.1，优选地通过单独用吡多辛的长期治疗结束所述的疗程。

[0090] 维生素B6化合物具有以下通式：

[0091]

[0092] 其中R选自-CH2OH、-CHO和-CH2NH2。所述AED可以是，例如苯妥英或其它乙内酰脲；苯巴比妥或其它巴比妥类药物、扑米酮、卡马西平和奥卡西平、丙戊酸或它的衍生物；噁唑烷；苯并二氮杂卓；非氨酯、加巴喷丁、拉莫三嗪、氨己烯酸或肾上腺促肾皮素(ACTH)，或其它AED。虽然神经保护或神经递质化合物和吡乙酰胺不被认为是AED，但是在上述提到的联用中可用于代替AED。

[0093] 维生素B6化合物数量的更优选范围是每天每公斤体重大约2毫克到大约10毫克维生素B6，和不超过每种AED允许的最大日剂量。可将成人和儿童的日剂量以分开剂量给药。保持在这些范围内是非常适当的，因为指导剂量能显著地减轻癫痫发作和/或用来显著地降低癫痫发生的危险。使用具有吡多辛的混合物可降低包含在混合物中的AED的剂量，以便减少或消除不良的副作用。

[0094] 通过参考说明性的实施例将更好地理解本发明，随后阐述根据本发明的许多化合物的合成。

[0095] 实施例

[0096] 在下面的实施例1-3中举例说明维生素B6与γ-氨基丁酸(GABA)、与犬尿喹啉酸以及与GABA和犬尿喹啉酸两者的共轭物的合成方案。但是，应当清楚的是类似的步骤也可用于将吡多辛或它的衍生物共价连结到其它天然或非天然的生物活性酸上，例如抗癫痫药物或其它神经保护化合物和吡乙酰胺、天然或合成的神经递质等。例如，可通过与实施例1-3中描述的相似的合成步骤将抗癫痫药物如丙戊酸、1-(氨甲基)环己烷乙酸(加巴喷丁)和4-氨基-5-己烯酸(vigabactrin)化学连接到吡多辛。终产物是酯，例如如下所示的丙戊酸和维生素B6衍生物的酯：

[0097]

[0098] 丙戊酸和维生素B6衍生物的酯。

[0099] 其它的生物活性分子，例如(氨基-)抗癫痫药物如5-乙基-5-苯基-2，4，6(1H，3H，5H)-嘧啶三酮(苯巴比妥)；5，5-二苯基-2，4-咪唑啉二酮(苯妥英)；5-乙基二氢-5-苯基-4，6(1H，5H)六氢嘧啶二酮(扑米酮)；5H-二苯并[b，f]氮杂卓(卡马西平)；
二(氨基甲酸)2-苯基-1，3-丙二醇酯(非氨酯)等也可化学连接到吡多辛。这些分子的合成步骤包括如下详述的三个阶段：

[0100] 1、5-溴甲基-3-羟基-4-羟甲基-2-甲基吡啶氢溴化物(3)的合成，如以下实施例1，步骤2中所示。

[0101] 2、锂-氨基-衍生物的合成，如下所示：

[0102] R-NH+BuLi→R-NLi+BuH

[0103] 其中R-NH表示具有氨基基团的抗癫痫药物。

[0104] 以下举例说明其中R-NH药物是苯妥英的反应：

[0105]

[0106] (Ph＝苯基)

[0107] 3、吡多辛-(氨基-)药物共轭物的合成：

[0108]

[0109] 实施例1：[5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)-吡啶-3-基]甲基-4-氨基丁酸酯，二盐酸化物(＝B6-GABA)的合成

[0110] [5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)-吡啶-3-基]甲基-4-氨基丁酸酯，二盐酸化物的化学结构是：

[0111]

[0112] [5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)-吡啶-3-基]甲基-4-氨基丁酸酯，二盐酸化物的合成是一个五步过程。所有合成的化合物通过NMR和质谱分析来表征。

[0113] 1.3，4-二(溴甲基)-5-羟基-6-甲基吡啶(2)的合成：

[0114]

[0115] 在第一步中，将吡多辛(1)(20g，0.097mol)在48％氢溴酸(150ml)中回流1小时。在-15℃结晶后分离沉淀，用丙酮洗涤并干燥。产量为25g(68％)。

[0116] MS(ES)：m/z 295.95；297.93(M+H)+.

[0117] 2.3-溴甲基-5-羟基-4-羟甲基-6-甲基吡啶氢溴化物(3)的合成。

[0118]

[0119] 将4，5-二(溴甲基)-3-羟基-2-甲基吡啶(2)(3g，0.008mol)在45-50℃在水中搅拌40分钟。将溶液过滤并在真空下蒸发。将得到的残余物从乙醇中结晶。产量为1.2g(50％)。通过使用2，6-二氯醌-4-氯酰亚胺进行定性分析来验证溴甲基在吡啶环上的位置(Harris andFolkers(1939)J.Am.Chem.Soc.61：247)。M.p.158-159℃。

[0120] 1H NMR(CD3OD)，δ：2.62(s.，3H)，4.72(s.，2H)，5.18(s.，2H)，8.30(s.，1H).+MS(ES)：m/z 231.92；233.91(M+H).

[0121] 3.4-(叔)丁氧羰基氨基丁酸(Boc-GABA)的合成。

[0122] NH2(CH2)3COOH+Boc2O→Boc-NH-(CH2)3COOH(4)

[0123] 其中Boc2O＝[CO2C(CH3)3]2O

[0124] 在冰-水浴中，将4-氨基丁酸(GABA)(5.15g，0.05mol)在水∶1NNaOH(1∶1v/v)的100ml溶液中搅拌。在相同温度下加入焦碳酸二-叔丁基酯(11.99g，0.055mol)。在室温下搅拌反应混合物1小时。在真空下将溶液浓缩至大约70ml，在冰-水浴中冷却，用乙酸乙酯层(100ml)覆盖。然后用KHSO4的稀溶液酸化至pH值2-3。用乙酸乙酯萃取(2×50ml)水相。将乙酸乙酯萃取物合并，用水洗涤(2×70ml)，经无水Na2SO4干燥并在真空下蒸发。产量为10.00g(98％)。

[0125] 1H NMR(DMSO-d6)δ：1.37(s.，9H)，1.60(m.，2H)，2.19(t.，2H)，2.92(t.，2H).-MS(ES)：m/z 202.08(M-H).

[0126] 4.[5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)-吡啶-3-基]甲基-4-氨基丁酸酯的合成。

[0127]

[0128] 在室温、氩气条件下，将4-(叔)丁氧羰基氨基丁酸(4)(2.03g，0.01mol)和碳酸铯(4.89g.，0.015mol)在干燥的DMSO(50ml)中搅拌1.5小时。将3-溴甲基-5-羟基-4-羟甲基-甲基吡啶氢溴化物(3)加入反应混合物。将所得的褐色溶液在室温下保存18小时。第二天将溶液用水稀释(150ml)并用乙酸乙酯萃取(3×50ml)。将乙酸乙酯萃取物合并，用水洗涤(3×50ml)，经无水Na2SO4干燥并在真空下蒸发。将粗沉淀物通过梯度硅胶柱色谱上纯化。洗脱剂：氯仿(100％)、氯仿∶乙酸乙酯(50％∶50％)、乙酸乙酯(100％)。产量为1.0g(28％)。

[0129] 1H NMR(DMSO-d6)δ：1.34(s.，9H)，1.60(m.，2H)，2.29(t.，2H)，2.32(s.，3H)，+2.88(t.，2H)，4.66(s.，2H)，5.08(s.，2H)，7.87(s.，1H).MS(ES)：m/z 355.28(M+H).[0130] 5.[5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)-吡啶-3-基]甲基-4-氨基丁酸酯，二盐酸化物(6)的合成。

[0131]

[0132] 在0℃下，将5N HCl的乙酸乙酯溶液(7ml)加入[5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)-吡啶-3-基]甲基-4-氨基丁酸酯(5)(1.8g，5.08mmol)的乙酸乙酯溶液(20ml)中。
将反应混合物在0-5℃下搅拌2小时。分离残余的混合物并从甲醇-醚的混合物中结晶。
产量为0.7g(42％)。

[0133] 1H NMR(CD3OD)δ：1.95(m.，2H)，2.64(t.，2H)，2.65(s.，3H)，2.99(t.，2H)，+5.09(s.，2H)，5.38(s.，2H)，8.22(s.，1H).MS(ES)：m/z 255.13(M+H).

[0134] 实施例2：[3-(5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)吡啶基]甲基-2-[(4-羟基)喹啉甲酸酯(＝B6-Kyn)的合成

[0135] [3-(5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)吡啶基]甲基-2-[(4-羟基)喹啉甲酸酯的化学结构是：

[0136]

[0137] 在氩气下，将4-羟基喹啉-2-甲酸水合物(犬尿喹啉酸(7))(1.80g，8.70mmol)和碳酸铯(4.25g，13.05mmol)的混合物在室温下在干燥的DMSO(70ml)中搅拌1.5小时。随后加入3-溴甲基-5-羟基-4-羟甲基-6-甲基吡啶氢溴化物(3)(3.58g，11.42mmol)。将得到的褐色溶液在室温下保存18小时，然后用水稀释(200ml)并用乙酸乙酯萃取(12×150ml)。在5℃结晶后将沉淀物分离，用乙酸乙酯、乙醚洗涤并干燥。产量为0.25g(7.8％)。

[0138] 1H NMR(DMSO-d6)δ：2.36(s，3H)，4.77(s，2H)，5.47(s，2H)，6.60(s，1H)，7.37(t，+1H)，7.69(t，1H)，7.89(d，1H)，8.05(s，1H)，8.06(d，1H).MS(ES)：m/z 341.17(M+H).[0139]

[0140] 实施例3：[4-(4-羟基喹啉-2-碳酰氨基)]丁酸5-羟基-4-羟甲基-6-甲基-吡啶-3-基)甲基酯(B6-GABA-Kyn)的合成

[0141] [4-(4-羟基喹啉-2-碳酰氨基)]丁酸5-羟基-4-羟甲基-6-甲基-吡啶-3-基)甲基酯的化学结构是：

[0142]

[0143] 1.4-(4-羟基喹啉-2-碳酰氨基)丁酸(10)的合成。

[0144] 在50℃下，将BSA(N，O-二(三甲基甲硅烷基)乙酰胺)(3.26ml，13.20mmol)加入4-氨基丁酸(GABA)(0.62g，6.00mmol)在干燥的二氯甲烷(10ml)的悬浮液中并将混合物搅拌6小时。将所得的溶液加入混合酸酐中，所述混合酸酐由犬尿喹啉酸(7)(0.95g，5.00mmol)、Et3N(1ml)、EtOCOCl(0.5ml，5.25mmol)在干燥的DMF(10ml)在-20℃保温20分钟制成。将反应混合物在-5℃下搅拌2小时并在4℃再保存18小时。然后加入水(50ml)和乙酸乙酯(30ml)。从水层分离出化合物(10)和犬尿喹啉酸的混合物(0.5g)。

[0145] 1H NMR(DMSO-d6)δ：1.79(m，2H)，2.28(t，2H)，6.67(s，1H)，7.33(t，1H)，7.67(t，-1H)，7.91(d，1H)，8.05(d，1H)，9.00(s，1H)，11.78(s，1H)；m/z 273.06(M-H).[0146]

[0147] 2.[4-(4-羟基喹啉-2-碳酰氨基)]丁酸5-羟基-4-羟甲基-6-甲基-吡啶-3-基)甲基酯(11)的合成

[0148] 在氩气下，将化合物(10)(0.47g，1.71mmol)和碳酸铯(0.89g，2.74mmol)的混合物在室温下在干燥的DMSO(40ml)中搅拌1.5小时。然后加入化合物(3)(0.72g，2.30mmol)。在用水稀释(120ml)并用乙酸乙酯萃取(5×100ml)之前，将所得的褐色溶液在室温下保存
18小时。在5℃结晶后将沉淀物分离，用乙酸乙酯、醚洗涤并干燥。产量为0.04g。

[0149] 1H NMR(DMSO-d6)δ：1.82(m，2H)，2.48(s，3H)，2.50(t，2H)，4.79(s，2H)，5.28(s，2H)，6.79(s，1H)，7.37(t，1H)，7.69(t，1H)，7.93(d，1H)，8.05(s，1H)，8.06(d，1H)；9.03(s，
1H)；m/z 424.08(M-H)-.

[0150]

[0151] 实施例4：与GABA化学连结的吡多辛(NC-001化合物)的抗惊厥作用

[0152] 在遗传性癫痫症的动物模型中测定与GABA化学连结的吡多辛，即[5-羟基-6-甲基-4-(羟甲基)-吡啶-3-基]甲基-4-氨基丁酸酯，二盐酸化物(＝B6-GABA共轭物；也称为NC-001化合物)的抗惊厥作用。

[0153] 所用的动物模型是具有癫痫倾向(EP)的小鼠，所述小鼠有选择地繁殖于BALB/c种小鼠(Dolina等人，in Epilepsia(1993)43：33-42)。EP小鼠的特性为对癫痫发作具有遗传性增加的敏感性。通过腹膜内(i.p.)注射50-60毫克/公斤溶于盐水的戊四唑(PTZ)来诱导EP小鼠的癫痫发作。在PTZ注射之前，用测试化合物将EP动物腹膜内处理10至60分钟。

[0154] 测试化合物如下：

[0155] 1)NC-001 10mg/kg

[0156] 2)盐酸吡哆辛(＝维生素B6)10mg/kg

[0157] 3)GABA 10mg/kg

[0158] 4)分别注射维生素B6和GABA，各10mg/kg。

[0159] 将只注射了PTZ，没有进一步的处理的一组EP动物作为对照组。

[0160] 根据以下等级的得分来评价每组PTZ-诱导的惊厥反应的强度：

[0161] PTZ-诱导的惊厥反应强度的得分：

[0162] 1.少量肌阵挛性的痉挛(小于10次)

[0163] 2.小于20次痉挛

[0164] 3.小于30次痉挛

[0165] 4.30-40次痉挛/痉挛和跳动/短暂的部分惊厥

[0166] 5.不间断的痉挛/连续的痉挛和跳动/反复的部分惊厥

[0167] 5.5顿挫的普遍性惊厥

[0168] 6.单独的普遍性惊厥发作

[0169] 7.连续的痉挛、跳动和单独的普遍性惊厥发作；带有进一步地运动原刺激的单独的普遍性惊厥

[0170] 7.5严重的长时间的普遍性惊厥

[0171] 8.反复的普遍性惊厥

[0172] 9.连续的痉挛/跳动和反复的惊厥

[0173] 10.癫痫持续状态

[0174] 12.致命性惊厥

[0175] 在给予癫痫发作诱导剂后的第一个30分钟期间，在每组EP动物中记录惊厥性反应。

[0176] 如图1所示，在PTZ注射前30分钟注射共轭的化合物NC-001对惊厥性症状提供了几乎彻底的防护。六只测试小鼠中的四只不显示任何惊厥性反应，而另两只动物只有很少的惊厥性痉挛。在相同的实验设置下，单独用GABA以及以两者联合的方式同时注射GABA和维生素B6，在10毫克/公斤的测试剂量下不显示任何抗惊厥的作用。维生素B6自身显示一些对PTZ-诱导普遍性的惊厥的防护作用。

[0177] 实施例5：NC-001的抗惊厥作用是剂量依赖性的

[0178] 为了进一步地描述本发明化合物的抗惊厥活性，检验NC-001，即与GABA化学连结的吡多辛的不同剂量。

[0179] 将有遗传性癫痫倾向(EP)的BALB/c小鼠以3-5只为一组，在腹膜内注射PTZ(60毫克/公斤)前三十分钟在腹膜内给予5毫克/公斤、7.5毫克/公斤或者10毫克/公斤的NC-001。然后在PTZ注射后的30分钟期间记录每只动物的癫痫发作次数。对每个试验组的惊厥反应强度评分。

[0180] 可以从图2中看出，NC-001化合物显示出剂量-依赖性的抗惊厥保护作用。腹膜内(i.p.)注射五毫克/公斤NC-001已经诱导出保护作用；用该化合物治疗的四只EP小鼠中只有两只表现出普遍性惊厥，而另两只动物有大量痉挛。在7.5毫克/公斤的剂量下，在全部三只治疗的EP小鼠中NC-001能防止普遍性PTZ-诱导的惊厥，尽管在它们中都观察到很多痉挛。以10毫克/公斤的剂量注射NC-001能彻底地预防普遍性惊厥反应，而只在一只EP小鼠中出现单独的痉挛。

[0181] 结论：NC-001能有效地保护有遗传性癫痫倾向的动物使其不发生PTZ-诱导的惊厥，其特征在于增强了易患癫痫发作的体质。抗惊厥的作用是剂量依赖性的。

[0182] 实施例6：NC-001化合物在口服给药时显示出抗惊厥作用

[0183] 为了测试维生素B6-GABA共轭化合物穿过GI屏障的能力，将NC-001口服给予有癫痫倾向(EP)的小鼠。

[0184] 将一组12只雌性EP小鼠在腹膜内用50毫克/公斤PTZ处理以诱发癫痫发作。在PTZ给予前30分钟，将NC-001以30毫克/公斤的剂量口服给予四只动物(＝治疗组)，另外八只动物只用赋形剂处理并且作为对照组。在腹膜内给予PTZ后的30分钟期间，对全部十二只动物的惊厥反应强度评分(参见以上实施例4中出现的惊厥反应评分表)。

[0185] 在图3中可以看出，在口服给予NC-001化合物的EP小鼠中表现出显著的保护作用。

[0186] 实施例7：AED和吡多辛的物理混合物及其测试

[0187] 制备(a)盐酸吡哆辛和(b)AED的物理混合物。将其同时或基本上同时给予患癫痫的患者。(a)∶(b)的重量比在接近处理开始时是在大约0.1∶1至1∶1范围内而在接近治疗结尾时是1∶0.1。这些组合物将令人期望地以剂量单位形式存在，其包含总量不超过组分(a)和(b)各自的最大安全成人日剂量，优选地在2-10毫克/公斤，特别是4-7毫克/公斤的日剂量下包含不超过大约500毫克的组分(a)，和不超过典型成人日剂量的组分(b)。

[0188] 混合物降低癫痫发生的危险或减轻癫痫的发生并使AED的毒性减小。混合物可以以片剂、胶囊、糖浆、微胶囊、脂质体或任何其它药学上可接受的形式给予。

[0189] 实施例8：吡多辛-补充的苯妥英作为AED与吡多辛共同给药的例子

[0190] 将苯妥英(PHT)指定用于普遍性强直-慢性普遍性惊厥、复合部分癫痫发作和单纯部分癫痫发作的药物治疗。在遗传性癫痫-音源性敏感的老鼠的动物模型中显示出根据本发明的混合物的功效，所述老鼠对声音刺激反应出普遍性的惊厥。在实验中，使用100db的声音刺激强度。

[0191] 在两组用PHT长期处理的音源性敏感的老鼠中测试癫痫发作对声音刺激的敏感性。将一组老鼠长期用吡多辛处理(在饮用水中75毫克/公斤)。第二组包括未经吡多辛治疗的老鼠。在75毫克/公斤PHT的开始注射后连续12次注射PHT(50毫克/公斤，一天一次)。每个组用十一只老鼠。在第13天和第14天比较评价两组老鼠的声音诱发的惊厥的发生率和强度，每只动物测试两次。

[0192] 实验表明在吡多辛-处理的EP老鼠的组中，22只试验老鼠中只有两只(9％)产生了声音-诱发的惊厥，而在只用PHT处理的动物(未经吡多辛治疗的动物)的组中有6只(27.3％)存在惊厥反应。而且，在长期地给予相同剂量PHT的情况下，吡多辛处理的动物与未经处理的EP老鼠相比，其以得分评价的声音-诱发的惊厥的强度显著地降低。

[0193] 因此，可以表明高剂量吡多辛的共同给药显著地增加了在癫痫动物中长期PHT给药的功效。

[0194] 实施例9：通过吡多辛的共同给药降低PHT毒性

[0195] 检验在实施例8中描述的吡多辛处理的和未处理的组中死亡的动物。在全部11只长期单独用PHT处理，而没有给予相同剂量的与吡多辛(75毫克/升饮用水)共同给药的PHT的EP老鼠中发现PHT毒性的病征，例如压缩的肝脏、肺中的出血区域和增大的肾上腺。因此，吡多辛的共同给予减少了在以75毫克/公斤剂量开始注射后以每天50毫克剂量在12天期间内长期给予的PHT的毒性。

[0196] 实施例10：组合物的使用

[0197] 以不大于独立组分的最大安全剂量的剂量使用上述各实施例中的组合物以治疗患者并减轻和延缓癫痫性惊厥。在该浓度范围，各组合物在癫痫的延缓和减轻中表现出显著的活性。

[0198] 以上实施例举例说明了根据本发明的各种不同组合物的合成和功效。

[0199] 虽然已经连同具体的实施方案描述了本发明，但是应当理解能够进一步地改进，并且本申请意在涵盖按照本发明的一般原理和包括以在已知的或本领域常识的方式从本发明出发的任何本发明的变化、应用或改变，并可以应用于在此提出的必要特征。