四唑衍生物和其代谢相关的疾病的治疗方法转让专利
申请号 : CN200480029937.6
文献号 : CN1867562B
文献日 : 2011-07-13
发明人 : 格雷默·森普尔 , 托马斯·施拉德尔 , 菲利普·J·斯金纳 , 史蒂文·L·科莱蒂 , 陶菲克·加尔巴维 , 贾森·E·因布里格里奥 , 金杰俈 , 梁瑞 , 苏巴雷哈·拉加万 , 达比·施密特 , 詹姆斯·R·塔塔
申请人 : 艾尼纳制药公司 , 默克大药厂
摘要 :
本发明涉及某些式(I)四唑衍生物和其医药上可接受的盐，其表现出有用的药理学特性，例如，可作为RUP25受体的激动剂。本发明还提供含有本发明化合物的医药组合物，以及使用本发明的化合物和组合物治疗代谢相关疾病的方法，所述代谢相关疾病包括血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗、2型糖尿病、X综合症和诸如此类病症。此外，本发明还提供了本发明化合物与其它活性剂的组合使用，所述其它活性剂可为例如那些属于α-葡萄糖苷酶抑制剂类的活性剂、醛糖还原酶抑制剂、双胍、HMG-CoA还原酶抑制剂、角鲨烯合成抑制剂、贝特类(fibrate)、LDL分解代谢增强剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、胰岛素分泌增强剂和其类似物。
权利要求 :
1.一种式(I)化合物：
其中：
X为NH；
R1选自由H、卤素、羟基、硫氧基、氰基、硝基、C1-4卤代烷基、氨基、C1-4烷基胺基、C2-8二烷基胺基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-5环烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亚磺酰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4卤代烷硫基、C1-4卤代烷基亚磺酰基和C1-4卤代烷基磺酰基组成的群组；
R2选自由H、卤素、羟基、硫氧基、氰基、硝基、C1-4卤代烷基、氨基、C1-4烷基胺基、C2-8二烷基胺基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-5环烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亚磺酰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4卤代烷硫基、C1-4卤代烷基亚磺酰基和C1-4卤代烷基磺酰基组成的群组；或R2不存在；
当R2存在时 为单键，或当R2不存在时 为双0键；并且环A为5元碳环或5元杂环；其中“5元碳环”代表含有5个环碳的环，其中两个环碳被环A和环B共享；其中“5元杂环”代表5元碳环，其中未被环A和环B共享的1、2、或3个环碳独立地被-O-、-S-、-S(O)-、或-S(O)2-代替；且其中环A视情况经1到4个取代基取代，所述取代基选自由卤素、羟基、硫氧基、氰基、硝基、C1-4卤代烷基、氨基、C1-4烷基胺基、C2-8二烷基胺基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-5环烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亚磺酰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4卤代烷硫基、C1-4卤代烷基亚磺酰基和C1-4卤代烷基磺酰基组成的群组；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
2.根据权利要求1所述的化合物、或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物，其中环A是5元碳环。
3.根据权利要求1所述的化合物、或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物，其中环A是5元杂环。
4.根据权利要求1所述的化合物、或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物，其中环A是5元杂环；其中“5元杂环”代表5元碳环，且该5元碳环中未被环A和环B共享的1个环碳独立地被-O-、-S-、-S(O)-、或-S(O)2-代替。
5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的化合物，其中：X为NH；
R1为H或羟基；
R2为H或不存在；
当R2为H时 为单键，或当R2不存在时 为双键；并且环A为5元碳环或5元杂环，其视情况经1到4个选自由卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基和C3-5环烷基组成的群组的取代基取代；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
6.根据权利要求1或2所述的化合物，其具有式(If)：其中：
R1为H或羟基；并且
环A视情况经1或2个选自由卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基和C3-5环烷基组成的群组的取代基取代；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
7.根据权利要求1或2所述的化合物，其具有式(Ih)：其中：
环A视情况经1或2个选自由卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基和C3-5环烷基组成的群组的取代基取代；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
8.根据权利要求1或2所述的化合物，其具有式(Ih)：其中：
环A未经取代或经乙基取代；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
9.根据权利要求1或2所述的化合物，其具有式(Ih)：其中：
环A经1或2个选自由卤素、正丙基、正丁基、C1-4烷氧基和C3-5环烷基组成的群组的取代基取代；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
10.根据权利要求1所述的化合物，其为3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
11.根据权利要求1所述的化合物，其为3-(1H-四唑-5-基)-2，6-二氢-4H-噻吩并[3，4-c]吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
12.根据权利要求1所述的化合物，其为6-甲基-3-(1H-四唑-5-基)-2，6-二氢-4H-呋喃并[3，4-c]吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
13.根据权利要求1所述的化合物，其为3-(1H-四唑-5-基)-2，4-二氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
14.根据权利要求1所述的化合物，其为3-(1H-四唑-5-基)-2，6-二氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
15.根据权利要求1所述的化合物，其为3-(1H-四唑-5-基)-2，6-二氢-4H-呋喃并[3，4-c]吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
16.根据权利要求1所述的化合物，其为5-乙基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
17.根据权利要求1所述的化合物，其为5-丁基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
18.根据权利要求1所述的化合物，其为5-甲基-3-(1H-四唑-5-基)-2，6-二氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
19.根据权利要求1所述的化合物，其为5-甲基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4-二氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
20.根据权利要求1所述的化合物，其为5-丙基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
21.根据权利要求1所述的化合物，其为5-丙氧基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
22.根据权利要求1所述的化合物，其为5-环戊基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
23.根据权利要求1所述的化合物，其为5-氟-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
24.根据权利要求1所述的化合物，其为5-异丁氧基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，
6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
25.根据权利要求1所述的化合物，其为5-丁氧基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
26.根据权利要求1所述的化合物，其为3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑-6-醇或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
27.根据权利要求1所述的化合物，其为5-甲氧基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
28.根据权利要求1所述的化合物，其为5，5-二氟-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
29.根据权利要求1所述的化合物，其为5-乙氧基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
30.一种医药组合物，其包含：根据权利要求1到29中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物、与一医药上可接受的载剂的组合。
31.一种根据权利要求1到29中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物在制造用于通过疗法治疗人类或动物体的药物中的用途。
32.一种根据权利要求1到29中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物在制造用于治疗代谢相关疾病的药物中的用途。
33.一种根据权利要求1到29中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物、在制造用于治疗选自由血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗和2型糖尿病组成的群组的代谢相关疾病的药物中的用途。
34.一种根据权利要求1到29中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物、在制造用于治疗动脉硬化症的药物中的用途。
35.一种根据权利要求1到29中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物、在制造用于提高个体中HDL的药物中的用途。
36.一种生产医药组合物的方法，其包括将根据权利要求1到29中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物、与一医药上可接受的载剂混合。
说明书 :
四唑衍生物和其代谢相关的疾病的治疗方法
技术领域
[0001] 本发明涉及特定四唑衍生物，和其医药上可接受的盐，这些化合物表现出有用的药理学特性，例如作为烟酸受体RUP25的激动剂。本发明还提供含有本发明的一种或一种以上化合物的医药组合物，以及使用本发明的化合物和组合物治疗代谢相关疾病的方法，所述代谢相关疾病包括血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗、2型糖尿病、X综合症和其类似病症。此外，本发明还提供本发明的化合物结合其它活性剂的使用方法，所述其它活性剂为，例如，属于α-葡萄糖苷酶抑制剂类的活性剂、醛糖还原酶抑制剂、双胍、HMG-CoA还原酶抑制剂、角鲨烯合成抑制剂、贝特类(fibrate)、LDL分解代谢增强剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、胰岛素分泌增强剂和其类似物。
背景技术
[0002] 作为抗脂解剂的本发明化合物
[0003] 动脉硬化症和中风是美国男性和女性死亡的第一位和第三位主要原因。2型糖尿病是严重的、普遍的并且在逐渐增加的公共健康问题。低密度脂蛋白(LDL)胆固醇的水平升高或高密度脂蛋白(HDL)胆固醇的低水平都是动脉硬化症和相关心血管病变的危险因素。此外，血浆游离脂肪酸的高水平与胰岛素抵抗和2型糖尿病相关。一种减少LDL胆固醇、增加HDL胆固醇并减少血浆游离脂肪酸的策略是抑制脂肪组织中的脂解作用。此方法涉及激素敏感性脂肪酶的调节，所述激素敏感性脂肪酶是脂解作用中的限速酶。脂解剂增加cAMP的细胞水平，导致脂肪细胞内激素敏感性脂肪酶的激活。相反，降低细胞内cAMP水平的药剂则为抗脂解的。
[0004] 顺便提起，还值得注意cAMP细胞水平的增加下调脂肪细胞中的脂联素分泌[Delporte，ML等人Biochem J(2002)7月]。血浆脂联素水平的降低与包括动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗和2型糖尿病的代谢相关疾病相关联[Matsuda，M等人J Biol Chem(2002)7月和其中的综述]。
[0005] 烟酸(尼克酸，吡啶-3-羧酸)是一种人体健康、生长和生殖所需的水溶性维生素，它是维生素B群的一员。烟酸还是一种最早的用于治疗血脂异常的药物。它是一种颇具价值的药物，因为它有效地影响大体上所有上文列举的脂质参数[Goodman and Gilman’sPharmacological Basis of Therapeutics，编者Harmon JG和Limbird LE，第36章，Mahley RW and Bersot TP(2001)第971-1002页]。烟酸在动脉粥样硬化的心血管疾病的治疗或预防中的益处已在六个主要临床试验中有文件记载[Guyton JR(1998)Am JCardiol 82：18U-23U]。最近对烟酸和相关衍生物(例如阿西莫司(acipimox))已有所论述[Lorenzen，A等人(2001)Molecular Pharmacology 59：349-357]。在Merck索引(Merck Index)、An Encyclopedia of Chemicals、Drugs和第十版(1983)Biologicals的全文中对烟酸的其它类似物或衍生物的结构和合成有所讨论，所述文献以全文引用的方式并入本文。
[0006] 烟酸可能经由腺苷酰基环化酶的抑制、细胞内cAMP水平的减少以及伴随的激素敏感性脂肪酶活性的降低，抑制游离脂肪酸从脂肪组织中产生和释放。导致血浆游离脂肪酸水平下降的下调激素敏感性脂肪酶活性的激动剂可能具有治疗价值。减少血浆游离脂肪酸的结果是双重的。首先，它将最终降低LDL胆固醇并提高HDL胆固醇水平(独立的危险因素)，从而减少由于心血管发生动脉粥样硬化的并发症造成的死亡危险。其次，它将增加患有胰岛素抵抗或2型糖尿病的个体的胰岛素敏感性。不幸的是，烟酸作为治疗剂的用途因许多相关的、不利的副作用而部分地受到限制。这些副作用包括面部发红、游离脂肪酸反弹和肝脏毒性。
[0007] 合理地研制出新的、具有较少副作用的烟酸受体激动剂将是颇有价值的，但迄今由于无法从分子结构上识别烟酸受体而受到阻碍。此外，相同类型的其他受体可能存在于脂肪细胞表面上，且同样通过细胞内cAMP水平的减少而降低激素敏感性脂肪酶活性，而不会引起例如面部发红的副作用，因而意味着有希望的新的治疗目标。近期的工作显示，烟酸可能通过一种特异性GPCR起作用[Lorenzen A等人(2001)MolecularPharmacology 59：349-357和其中的综述]。进一步的工作已显示，烟酸对巨噬细胞、脾和可能地脂肪细胞的作用是经此特异性GPCR介导的[Lorenzen A等人(2002)Biochemical Pharmacology 64：
645-648和其中的综述]。
645-648和其中的综述]。
发明内容
[0008] 本发明的一个方面包含如式(I)展示的四唑衍生物
[0009]
[0010] 其中：
[0011] X是NH或0；
[0012] R1选自由H、卤素、羟基、硫氧基、氰基、硝基、C1-4卤代烷基、氨基、C1-4烷基胺基、C2-8二烷基胺基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-5环烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亚磺酰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4卤代烷硫基、C1-4卤代烷基亚磺酰基和C1-4卤代烷基磺酰基组成的群组；
[0013] R2选自由H、卤素、羟基、硫氧基、氰基、硝基、C1-4卤代烷基、氨基、C1-4烷基胺基、C2-8二烷基胺基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-5环烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亚磺酰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4卤代烷硫基、C1-4卤代烷基亚磺酰基和C1-4卤代烷基磺酰基组成的群组；或不存在R2；
[0014] 当R2存在时 为一单键，或当R2不存在时 为一双键；且
[0015] 环A为5、6或7元碳环或5、6或7元杂环，其视情况可经1到4个取代基取代，所述取代基选自由卤素、羟基、硫氧基、氰基、硝基、C1-4卤代烷基、氨基、C1-4烷基胺基、C2-8二烷基胺基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-5环烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亚磺酰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4卤代烷硫基、C1-4卤代烷基亚磺酰基和C1-4卤代烷基磺酰基组成的群组；或
[0016] 其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
[0017] 本发明的一个方面包含含有至少一种如本文中所描述的式(I)化合物的医药组合物。
[0018] 在一些实施例中，所述医药组合物进一步包含一种或一种以上选自由α-葡萄糖苷酶抑制剂、醛糖还原酶抑制剂、双胍、HMG-CoA还原酶抑制剂、角鲨烯合成抑制剂、贝特类、LDL分解代谢增强剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、胰岛素分泌增强剂和噻唑烷二酮组成的群组的药剂。
[0019] 本发明的一个方面关于治疗代谢相关疾病的方法，其包含向需要此治疗的个体给予治疗有效量的如本文所描述的式(I)化合物或其医药组合物。
[0020] 本发明的一个方面关于调节RUP25受体的方法，其包含使所述受体与如本文描述的根据式(I)的化合物接触。
[0021] 本发明的一个方面关于调节RUP25受体的方法，其用于治疗需要此调节的个体中的代谢相关疾病，所述方法包含使所述受体与治疗有效量的如本文描述的根据式(I)的化合物接触。
[0022] 本发明的一个方面关于提高个体中HDL的方法，其包含向所述个体给予治疗有效量的如本文描述的根据式(I)的化合物。
[0023] 本发明的一个方面关于如本文描述的式(I)化合物，其用在通过疗法治疗人类或动物体的方法中。
[0024] 本发明的一个方面关于如本文描述的式(I)化合物，其用在通过疗法治疗人类或动物体的代谢相关疾病的方法中。
[0025] 本发明的一个方面关于如本文描述的式(I)化合物的用途，其用于制造治疗代谢相关疾病的药物。
[0026] 在本发明的一些实施例中，所述代谢相关疾病选自由血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗、肥胖症、葡萄糖耐受减低、动脉粥样硬化症、高血压、中风、X综合症、心脏病和2型糖尿病组成的群组。在一些实施例中所述代谢相关疾病为血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗和2型糖尿病。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为血脂异常。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为动脉硬化症。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为冠心病。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为胰岛素抵抗。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为2型糖尿病。
[0027] 本发明的一个方面包含一种产生医药组合物的方法，其包含将如本文描述的至少一种式(I)化合物与医药上可接受的载剂或赋形剂混合。
[0028] 在此揭示的本发明的这些和其它方面将在专利说明书随后的内容中更详细地阐述。
具体实施方式
[0029] 科学文献中已采用许多术语，为达成一致和清楚起见，以下定义将在本专利文件中通篇使用。
[0030] 激动剂意指与受体(例如RUP2S受体)相互作用并激活受体并且引发所述受体的生理或药理响应特征的部分。举例来说，当部分一旦结合到受体而激活细胞内响应时，或增强GTP结合到膜。
[0031] 本文使用的氨基酸缩写列在表1中：
[0032]
[0033]
[0034] 术语拮抗剂意指在与激动剂(例如内源性配体)相同位点竞争性地与受体结合的部分，但其并不激活由受体的活性形式所引发的细胞内响应，且可借此抑制由激动剂或部分激动剂引起的细胞内响应。拮抗剂不减少缺乏激动剂或部分激动剂时的基本细胞内响应。
[0035] 动脉硬化症在本文中意在包含导致平滑肌细胞和脂质的内膜内的渐进性累积的大型和中等大小动脉的疾病。
[0036] 化学基团
[0037] 术语“C1-4酰基”是指连接到一个羰基的C1-4烷基，其中烷基的定义与本文描述的定义相同；一些实例包括(但不限于)乙酰基、丙酰基、正丁酰基、异丁酰基、仲丁酰基、叔丁酰基(即特戊酰基)、戊酰基和其类似物。
[0038] 术语“C1-4酰氧基”是指连接到一个氧原子的酰基，其中酰基具有与本文描述的相同的定义；一些实例包括(但不限于)乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、异丁酰氧基、仲丁酰氧基、叔丁酰氧基和其类似物。
[0039] 术语“C2-4烯基”是指含有2到4个碳的基团，其中存在至少一个碳碳双键，一些实施例为2到3个碳，而一些实施例有2个碳。E和Z异构体都包含在术语“烯基”中。此外，术语“烯基”包括二烯。因此，如果存在不止一个双键，那么所述键可能是E或Z或者E和Z的混合体。烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、烯丙基、异丙烯基、2-甲基-丙烯基、1-甲基-丙烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1，3-二烯基和其类似物。
[0040] 术语“C1-4烷氧基”是指直接连接到一个氧原子的如本文定义的烷基。实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和其类似物。
[0041] 术语“C1-4烷基”是指含有指定数目的碳原子的直链或支链碳基团，例如，在一些实施例中，烷基为“C1-4烷基”且所述基团含有1到4个碳原子。在一些实施例中，烷基含有1到13个碳原子，一些实施例含有1到2个碳，一些实施例含有1个碳。烷基的实例包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基和其类似物。
[0042] 术语“C1-4烷基亚磺酰基”是指连接到式-S(O)-的亚砜基团的C1-4烷基，其中所述烷基具有与本文中相同的定义。实例包括(但不限于)甲亚磺酰基、乙亚磺酰基、正丙亚磺酰基、异丙亚磺酰基、正丁亚磺酰基、仲丁亚磺酰基、异丁亚磺酰基、叔丁基和其类似物。
[0043] 术语“C1-4烷基磺酰基”是指连接到式-S(O)2-的砜基团的C1-4烷基，其中所述烷基具有与本文中相同的定义。实例包括(但不限于)甲磺酰基、乙磺酰基、正丙磺酰基、异丙磺酰基、正丁磺酰基、仲丁磺酰基、异丁磺酰基、叔丁磺酰基和其类似物。
[0044] 术语“C1-4烷硫基”是指连接到式-S-的硫基团的C1-4烷基，其中所述烷基具有与本文中相同的定义。实例包括(但不限于)甲硫基(即CH3S-)、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、仲丁硫基、异丁硫基、叔丁基和其类似物。
[0045] 术语“C2-4炔基”是指含有2到4个碳和至少一个碳碳三键的基团，一些实例为2到3个碳，而一些实例具有2个碳。炔基的实例包括(但不限于)乙炔基、丙-1-炔基、
3-丙-2-炔基、丁-1-炔基、1-甲基-丙-2-炔基、丁-1，3-二炔基和其类似物。术语“炔基”包括二炔基。
3-丙-2-炔基、丁-1-炔基、1-甲基-丙-2-炔基、丁-1，3-二炔基和其类似物。术语“炔基”包括二炔基。
[0046] 术语“氨基”是指基团-NH2。
[0047] 术语“C1-4烷基胺基”是指连接到一个氨基的一个烷基，其中所述烷基具有与本文中相同的定义。一些实例包括(但不限于)甲氨基、乙氨基、正丙氨基、异丙氨基、正丁氨基、仲丁氨基、异丁氨基、叔丁氨基和其类似物。一些实施例为“C1-2烷基胺基”。
[0048] 术语“芳基”是指含有6到10个环碳的芳环基团。实例包括苯基和萘基。
[0049] 术语“羰-C1-4-烷氧基”是指羧酸的C1-4烷基酯，其中所述烷基具有与本文中相同的定义。实例包括(但不限于)甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、异丙氧羰基、丁氧羰基、仲丁氧羰基、异丁氧羰基、叔丁氧羰基和其类似物。
[0050] 术语“甲酰胺”是指基团-CONH2。
[0051] 术语“羧基”表示基团-CO2H；也指羧酸基团。
[0052] 术语“氰基”表示基团-CN。
[0053] 术语“C3-5环烷基”表示含有3到6个碳的饱和环状基团；一些实施例含有3到5个碳；一些实施例含有3到4个碳。实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
[0054] 术语“C2-8二烷基胺基”表示用两个相同或不同的烷基取代的氨基，其中烷基具有本文中描述的相同定义。C2-8二烷基胺基可由以下基团表示：
[0055]
[0056] C2-8二烷基胺基的实例包括(但不限于)二甲氨基、甲基乙基氨基、二乙氨基、甲基丙基氨基、甲基异丙基氨基和其类似物。
[0057] 术语“C1-4卤代烷氧基”表示直接连接到一个氧原子的如本文定义的卤代烷基。实例包括(但不限于)二氟甲氧基、三氟甲氧基、2，2，2-三氟乙氧基、五氟乙氧基和其类似物。
[0058] 术语“C1-4卤代烷基”表示烷基，其中所述烷基经卤素取代，取代范围从一个到完全取代，其中完全取代的卤代烷基可由式ChL2h+1表示，其中L为卤素且“h”代表碳原子数目；当存在不止一个卤素时，那么所述卤素可相同或不同并且选自由F、Cl、Br和I组成的群组；
应了解术语“烷基”和“卤素”具有与本文所述的相同定义。在一些实施例中，卤代烷基为“C1-4卤代烷基”且所述基团含有1到4个碳，一些实施例含有1到3个碳，一些实施例含有
1到2个碳，一些实施例含有1个碳。当所述卤代烷基被卤素原子完全取代时，此基团在本文中称为全卤代烷基，一个实例为由氟原子完全取代的烷基，且在本文中称为“全氟烷基”。
在一些实施例中，卤代烷基的实例包括(但不限于)二氟甲基、氟甲基、2，2，2-三氟-乙基、
2，2-二氟-乙基、2-氟-乙基、1，2，2-三氟-乙基、1，2-二氟-乙基、1，1-二氟-乙基、1，
1，2-三氟-乙基、3，3，3-三氟-丙基、2，2-二氟-丙基、3，3-二氟-丙基、3-氟-丙基、2，
3，3-三氟-丙基、2，3-二氟-丙基、2，2，3，3，3-五氟-丙基、2，2，3，3-四氟-丙基、2，2，
3-三氟-丙基、1，2，3，3-四氟-丙基、1，2，3-三氟-丙基、3，3-二氟-丙基、1，2，2，3-四氟-丙基、4，4-二氟-丁基、3，3-二氟-丁基、4，4，4-三氟-丁基、3，3-二氟-丁基和其类似物。在一些实施例中，全氟烷基的实例包括(但不限于)三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基、
1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基和其类似物。
应了解术语“烷基”和“卤素”具有与本文所述的相同定义。在一些实施例中，卤代烷基为“C1-4卤代烷基”且所述基团含有1到4个碳，一些实施例含有1到3个碳，一些实施例含有
1到2个碳，一些实施例含有1个碳。当所述卤代烷基被卤素原子完全取代时，此基团在本文中称为全卤代烷基，一个实例为由氟原子完全取代的烷基，且在本文中称为“全氟烷基”。
在一些实施例中，卤代烷基的实例包括(但不限于)二氟甲基、氟甲基、2，2，2-三氟-乙基、
2，2-二氟-乙基、2-氟-乙基、1，2，2-三氟-乙基、1，2-二氟-乙基、1，1-二氟-乙基、1，
1，2-三氟-乙基、3，3，3-三氟-丙基、2，2-二氟-丙基、3，3-二氟-丙基、3-氟-丙基、2，
3，3-三氟-丙基、2，3-二氟-丙基、2，2，3，3，3-五氟-丙基、2，2，3，3-四氟-丙基、2，2，
3-三氟-丙基、1，2，3，3-四氟-丙基、1，2，3-三氟-丙基、3，3-二氟-丙基、1，2，2，3-四氟-丙基、4，4-二氟-丁基、3，3-二氟-丁基、4，4，4-三氟-丁基、3，3-二氟-丁基和其类似物。在一些实施例中，全氟烷基的实例包括(但不限于)三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基、
1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基和其类似物。
[0059] 术语“C1-4卤代烷基亚磺酰基”表示连接到式-S(O)-的亚砜基团的卤代烷基，其中所述卤代烷基具有与本文描述的相同定义。
[0060] 术语“C1-4卤代烷基磺酰基”表示连接到式-S(O)2-的砜基团的卤代烷基，其中所述卤代烷基具有与本文描述的相同定义。
[0061] 术语“C1-4卤代烷硫基”表示直接连接到一个硫原子的卤代烷基，其中所述与本文描述的相同含义。
[0062] 术语“卤素”或“卤基”表示氟、氯、溴或碘基团。
[0063] 术语“羟基”表示基团-OH。
[0064] 术语“硝基”表示基团-NO2。
[0065] 术语“硫氧基”表示基团-SH。
[0066] 首字母缩写词DMF表示二甲基甲酰胺。
[0067] 首字母缩写词DMSO表示二甲亚砜。
[0068] 首字母缩写词THF表示四氢呋喃。
[0069] 首字母缩写词DCM表示二氯甲烷。
[0070] 首字母缩写词Hex表示己烷。
[0071] 首字母缩写词TBDMS表示叔丁基二甲基硅烷基。
[0072] 首字母缩写词PTSA表示对甲苯磺酸。
[0073] 首字母缩写词LDA表示二异丙基胺锂。
[0074] 首字母缩写词LHMDS表示六甲基二硅氮烷锂。
[0075] 首字母缩写词TFA表示三氟乙酸。
[0076] 首字母缩写词EDC表示1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二酰亚胺盐酸盐。
[0077] 首字母缩写词dppf表示1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁。
[0078] 术语密码子意指三个核苷酸(或等同于核苷酸)的群族，其通常包含与磷酸根偶合的核苷(腺嘌呤核苷(A)、鸟嘌呤核苷(G)、胞嘧啶核苷(C)、尿嘧啶核苷(U)和胸腺嘧啶核苷(T))，并且在翻译时编码氨基酸。
[0079] 术语组合物意指包含至少两种化合物或两种组份的物质，举例来说，且没有限制地，一种医药组合物为含有本发明的化合物和医药上可接受的载剂的组合物。
[0080] 术语化合物效力意指化合物抑制或刺激受体功能性相对于受体结合亲和力的量度。
[0081] 术语组成型激活受体意指经受组成型受体激活的受体。
[0082] 术语组成型受体激活意指通过不同于受体与其内源性配体或其化学等效物结合的方式而在活性状态中使受体稳定。
[0083] 术语接触意指在活体外系统或活体内系统中将指定部分放在一起。因此使RUP25受体与本发明的化合物“接触”包括将本发明的化合物给予具有RUP25受体的个体(例如人体)，以及(例如)将本发明的化合物引入含有具有RUP25受体的细胞或进一步纯化的制品的样品中。
[0084] 冠心病在本文中旨在包含向心脏供应血液和氧气的小血管的收缩的疾病。冠心病通常起因于脂肪性物质和斑块的堆积。随着冠状动脉的收缩，血液向心脏的流动变慢或停止。冠心病可导致胸痛(稳定性绞痛)、呼吸短促、心脏病发作或其他症状。
[0085] 减少是指可测量数量的缩减并与术语“缩减”、“变小”、“降低”和“减轻”同义使用。
[0086] 本文中使用的糖尿病旨在涵盖通过包含(但不限于)下列任何方法的方法所进行的普通的糖尿病诊断：糖尿病的症状(例如多尿、多饮和多食)加上偶发血浆葡萄糖水平大于或等于200mg/dl，其中偶发血浆葡萄糖定义为一天中与膳食或饮料消化时间无关的任何时间；8小时空腹血浆葡萄糖水平小于或等于126mg/dl；和口服摄入溶于水的75g无水葡萄糖之后2小时血浆葡萄糖水平大于或等于200mg/dl。
[0087] 短语脂类代谢疾病在本文中包含(但不限于)血脂异常。
[0088] 术语血脂异常在本文中旨在涵盖包含任何一种高血浆游离脂肪酸水平、高血浆胆固醇水平、高LDL胆固醇水平、低HDL胆固醇水平和高血浆甘油三酯水平的疾病。
[0089] 本文中使用的短语需要治疗是指护理者(例如在人类的情况下的医师、护士和从事护理者等；在包括非人类哺乳动物的动物情况下的兽医)做出的个体或动物需要治疗或将受益于治疗的判断。此判断是基于护理者的专业领域中的各种因素(包括知道可由本发明的化合物治疗的疾病、病况或失调已导致或将会导致所述个体生病)做出的。另外，短语“需要治疗”还指经护理者判断将会生病的个体的预防。在此情形下，本发明的化合物以保护性或预防性方式使用。因此，“需要治疗”是指护理者做出的个体己生病或将生病并且本发明的化合物可用来减轻、抑制、改善或预防此疾病、病况或失调的判断。
[0090] 本文所使用的术语个体是指任何动物，包括哺乳动物，例如小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类，在一个实施例中指人。
[0091] 与术语“响应”相关的术语抑制意指相对于化合物不存在时，化合物存在时的响应减弱或受阻。
[0092] 本文中使用的胰岛素抵抗旨在涵盖由包括(但不限于)下列许多方法中的任何方法做出的胰岛素抵抗的普通诊断：静脉葡萄糖耐量试验或空腹胰岛素水平测量。众所周知，空腹胰岛素水平与胰岛素抵抗程度之间存在非常好的相关性。因此，可使用高空腹胰岛素水平作为胰岛素抵抗的替代标志，以达到鉴别哪个正常葡萄糖耐量(NGT)个体具有胰岛素抵抗的目的。胰岛素抵抗的诊断还可使用血糖正常的葡萄糖钳制试验进行。
[0093] 术语反向激动剂意指与内源性形式受体或组成型激活形式受体结合的部分，其抑制由活性形式受体在正常活性基本水平之下引发的在激动剂或部分激动剂不存在时所观察到的基本细胞内响应，或减少GTP与膜的结合。在一些实施例中，基本细胞内响应在反向激动剂存在时，与反向激动剂不存在时的基本响应相比，至少被抑制30％，在其它实施例中至少50％，而在另一些实施例中，至少75％。
[0094] 术语配体意指对于内源性、自然发生的受体具特异性的内源性、自然发生的分子。
[0095] 本文中的短语代谢相关疾病旨在包括(但不限于)血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗、肥胖症、葡萄糖耐受减低、动脉粥样硬化症、高血压、中风、X综合症、心脏病和2型糖尿病。
[0096] 如本文中所使用，术语调节意指特定活性、功能或分子在数量、质量、响应或效力上的增加或减少。
[0097] 术语医药组合物意指用于预防、治疗或控制疾病状态或疾况的组合物，其包含至少一种活性化合物(例如本发明的化合物，包括其医药上可接受的盐、医药上可接受的溶剂化物和/或水合物)和至少一种医药上可接受的载剂。
[0098] 术语医药上可接受的载剂或赋形剂意指用作本发明化合物的稀释液或载体的任何实质惰性物质。
[0099] 本文中使用的短语治疗有效量是指由研究人员、兽医、医生或其他临床医师调查得到的能够引起组织、系统、动物、个体或人体中生物学或医药学响应的活性化合物或医药试剂的量，所述响应包括以下一种或一种以上：
[0100] (1)预防疾病；例如预防个体中的疾病、疾况或失调，其中所述个体可能易感染所述疾病、疾况或失调但仍尚未经受或表现出所述疾病的病理或症状，
[0101] (2)抑制疾病；例如抑制个体中的疾病、病况或失调，其中所述个体正在经受或表现出所述疾病、病况或失调的病理或症状(即阻止所述病理和/或症状的进一步发展)，和[0102] (3)改善疾病；例如改善个体中的疾病、病况或失调，其中所述个体正在经受或表现出所述疾病、病况或失调的病理或症状(即逆转所述病理和/或症状)。
[0103] 本发明的化合物
[0104] 本发明的一个方面涵盖式(I)所示的四唑衍生物：
[0105]
[0106] 其中：
[0107] X是NH或0；
[0108] R1选自由H、卤素、羟基、硫氧基、氰基、硝基、C1-4卤代烷基、氨基、C1-4烷基胺基、C2-8二烷基胺基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-5环烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亚磺酰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4卤代烷硫基、C1-4卤代烷基亚磺酰基和C1-4卤代烷基磺酰基组成的群组；
[0109] R2选自由H、卤素、羟基、硫氧基、氰基、硝基、C1-4卤代烷基、氨基、C1-4烷基胺基、C2-8二烷基胺基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-5环烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亚磺酰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4卤代烷硫基、C1-4卤代烷基亚磺酰基和C1-4卤代烷基磺酰基组成的群组；或不存在R2；
[0110] 当R2存在时 为一单键，或当R2不存在时 为一双键；且
[0111] 环A为5、6或7元碳环或5、6或7元杂环，其视情况可经1到4个取代基取代，所述取代基选自由卤素、羟基、硫氧基、氰基、硝基、C1-4卤代烷基、氨基、C1-4烷基胺基、C2-8二烷基胺基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C3-5环烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亚磺酰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4卤代烷硫基、C1-4卤代烷基亚磺酰基和C1-4卤代烷基磺酰基组成的群组；或
[0112] 其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
[0113] 本发明的化合物可以各种互变异构形式存在。举例来说，所属领域的技术人员应了解四唑可存在至少两种互变异构形式，尽管式(I)表示一种形式，但应理解本发明包含所有互变异构形式；举例来说，式(I)中四唑的两种可能的互变异构体如下所示：
[0114]
[0115] 另一实例包括X为NH的实施例。所属领域的技术人员应了解吡唑杂环可存在至少两种互变异构形式，尽管式(I)表示一种形式，但应理解本发明包含所有互变异构形式；举例来说，其中X为NH的式(I)吡唑的两种可能的互变异构体如下所示：
[0116]
[0117] 另外，应理解当X为NH时，那么对于环B以及相结合的四唑环可存在互变异构体。应理解对于本文揭示的化合物存在的所有互变异构体都在本发明的范畴之内。
[0118] 本发明还涵盖非对映异构体和光学异构体，例如包括外消旋混合物的对映异构体混合物，以及个别对映异构体和非对映异构体，其源于本发明的特定化合物的结构不对称性。在一些实施例中，本发明的化合物为R。在一些实施例中，本发明的化合物为S。在一些实施例中，本发明的化合物为外消旋混合物。
[0119] 应了解，为清楚起见而在分开的实施例中描述的本发明的特定特征也可以在一个实施例中合并提供。相反，为简短起见而在一个实施例中描述的各种特征也可以分别或以任何合适的子组合方式提供。
[0120] 如本文中所使用，“取代”表示化学基团的至少一个氢原子被非氢取代基或基团替代。当本文的化学基团经取代时，它可以具有高达全价的取代，例如，甲基可由1、2或3个取代基取代，亚甲基可由1或2个取代基取代，苯基可由1、2、3、4或5个取代基取代，等等。
[0121] 本发明的一个实施例是关于其中X为NH的式(I)化合物。此实施例可由如下说明的式(Ia)表示：
[0122]
[0123] 其中式(Ia)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。
[0124] 本发明的一个实施例是关于以下的式(I)化合物：其中X为NH，R1为H或羟基；
[0125] R2为H或不存在；当R2为H时 为单键，或当R2不存在时 为双键；并且环A为5元碳环或5元杂环，其可视情况地用1到4个选自由卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基和C3-5环烷基组成的群组的取代基取代；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
[0126] 本发明的一个实施例是关于其中X为0的式(I)化合物。此实施例可由如下说明的式(Ic)表示：
[0127]
[0128] 其中式(Ic)的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。
[0129] 本发明的一个实施例是关于以下的式(I)化合物：其中R1选自由H、卤素、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷硫基和C1-4卤代烷氧基组成的群组。在一些实施例中，R1选自由H、卤素、C1-4卤代烷基和C1-4烷基组成的群组。在一些实施例中，R1为F。在一些实施例中，R1为H。
[0130] 本发明的一个实施例是关于以下的式(I)化合物：其中R2选自由H、卤素、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷硫基和C1-4卤代烷氧基组成的群组。在一些实施例中，R2选自由H、卤素、C1-4卤代烷基和C1-4烷基组成的群组。在一些实施例中，R2为F。在一些实施例中，R2为H。
[0131] 本发明的一个实施例是关于其中R1和R2都为H的式(I)化合物。
[0132] 本发明的一个实施例是关于其中环A为5、6或7元碳环的式(I)化合物，。术语“5、6或7元碳环”表示含有5、6或7个环碳原子的环，其中两个环碳原子由环A和环B共享。环A可以是饱和的(即没有环双键)、不饱和的(即含有环双键)或其组合。
[0133] 在一些实施例中， 为单键并且存在R2。这个实施例可由下面说明的式(Ie)表示：
[0134]
[0135] 其中式(Ie)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。
[0136] 本发明的一个实施例是关于具有式(If)的化合物：
[0137]
[0138] 其中：
[0139] R1为H或羟基；且环A可以视情况地用1或2个取代基取代，所述取代基选自由卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基和C3-5环烷基组成的群组；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
[0140] 在一些实施例中，环A为5元碳环。在一个实施例中，环A为5元碳环并且可由下面说明的式(Ig)表示：
[0141]
[0142] 其中，式(Ig)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。在一些实施例中，R1为C1-4烷氧基。在一些实施例中，R1为C1-4烷基。在一些实施例中，R1和R2都是H。
[0143] 本发明的一个实施例是关于具有式(Ih)的化合物：
[0144]
[0145] 其中：
[0146] 环A可以视情况地用1或2个选自由卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基和C3-5环烷基组成的群组的取代基取代；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
[0147] 本发明的一个实施例是关于具有式(Ih)的化合物：
[0148]
[0149] 其中：
[0150] 环A可以视情况地用1或2个选自由卤素、正丙基、正丁基、C1-4烷氧基和C3-5环烷基组成的群组的取代基取代；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
[0151] 本发明的一个实施例是关于具有式(Ih)的化合物：
[0152]
[0153] 其中：
[0154] 环A未被取代或被乙基取代；或其医药上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
[0155] 在一个实施例中，环A是5元碳环并且是不饱和的(即环双键)。此实施例可由下面说明的式(Ii)表示：
[0156]
[0157] 其中，式(Ii)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。
[0158] 本发明的一个实施例是关于其中环A为6元碳环的式(I)化合物。此实施例可由下面说明的式(Ik)表示：
[0159]
[0160] 其中，式(Ik)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。
[0161] 本发明的一个实施例是关于其中环A为7元碳环的式(I)化合物。此实施例可由下面说明的式(Im)表示：
[0162]
[0163] 其中，式(Im)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。
[0164] 本发明的一个实施例是关于其中环A为如上文所描述的5、6或7元碳环的式(I)化合物。在一些实施例中， 为双键并且不存在R2。此实施例可由下面说明的式(Io)表示：
[0165]
[0166] 其中，式(Io)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。在一些实施例中，环A为5元碳环。此实施例可由下面说明的式(Iq)表示：
[0167]
[0168] 其中，式(Iq)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。在一些实施例中，环A为6元碳环。在一些实施例中，环A为非芳香族6元碳环。在一些实施例中，环A为7元碳环。
[0169] 本发明的一个实施例是关于其中环A为5、6或7元杂环的式(I)化合物。术语“5、6或7元杂环”表示其中环A和环B未共享的1、2或3个环碳原子分别
由-O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-替代的如上文所述的5、6或7元碳环。为清楚起见，如上文所描述，环A可以是饱和的(即没有环双键)、不饱和的(即有环双键)或其组合。在一些实施例中， 是单键并且存在R2。在一些实施例中，环A为5元杂环。在一些实施例中，所述5元杂环的一个环碳原子由一环氧原子替代；这些实施例可以由以下式(Is)和(It)表示：
由-O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-替代的如上文所述的5、6或7元碳环。为清楚起见，如上文所描述，环A可以是饱和的(即没有环双键)、不饱和的(即有环双键)或其组合。在一些实施例中， 是单键并且存在R2。在一些实施例中，环A为5元杂环。在一些实施例中，所述5元杂环的一个环碳原子由一环氧原子替代；这些实施例可以由以下式(Is)和(It)表示：
[0170]
[0171] 其中，式(Is)和式(It)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(Is)且X为NH。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(Is)且X为0(氧原子)。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(It)且X为NH。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(It)且X为0(氧原子)。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(Is)，其中R1为C1-4烷基且R2为H。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(Is)，其中R1和R2都是H。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(It)，其中R1为C1-4烷基且R2为H。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(It)，其中R1和R2都是H。在一些实施例中，所述5元杂环的一个环碳原子由一环硫原子替代；这些实施例可由以下式(Iu)和(Iv)表示：
[0172]
[0173] 其中，式(Iu)和式(Iv)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。在一些实施例中，式(Iu)和式(Iv)中的环硫原子进一步氧化成亚砜(即-S(O)-)。在一些实施例中，式(Iu)和式(Iv)中的环硫原子进一步氧化成砜(即-S(O)2-)。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(Iu)，其中X为NH。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(Iu)，其中X为0(氧原子)。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(Iv)，其中X为NH。在一些实施例中，本发明的化合物具有式(Iv)，其中X为0(氧原子)。在一些实施例中，环A为6元杂环。在一些实施例中，所述6元杂环的一个环原子经一环氧原子替代；这些实施例可由以下式(Ix)、(Iy)和式(Iz)表示：
[0174]
[0175] 其中，式(Ix)、(Iy)和式(Iz)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。在一些实施例中，环A是7元杂环。
[0176] 本发明的一个实施例是关于其中环A为5、6或7元杂环的式(I)化合物。在一些实施例中， 为双键并且不存在R2。在一些实施例中，环A为一5元杂环。此实施例可以由下面说明的式(IIa)表示：
[0177]
[0178] 其中，式(IIa)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义，并且Z为-O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-。
[0179] 在一些实施例中，环A为6元杂环。在一些实施例中，所述6元杂环为二氢吡喃环(即一个环碳原子被一氧原子替代)；这些实施例可以由以下式(IIc)和(IId)表示：
[0180]
[0181] 其中，式(IIc)和式(IId)中的每个变量具有与上文和下文中的描述相同的含义。在一些实施例中，环A是7元杂环。
[0182] 本发明的一个实施例是关于式(I)化合物，以及本文中揭示的亚属，其中环A视情况可经选自由卤素、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷硫基和C1-4卤代烷氧基组成的群组的取代基取代。在一些实施例中，环A视情况可经选自由卤素、C1-4卤代烷基和C1-4烷基组成的群组的取代基取代。在一些实施例中，环A视情况可经F取代。在一些实施例中，环A视情况可经1到4个取代基取代。在一些实施例中，环A视情况可经1到3个取代基取代。在一些实施例中，环A视情况可经1到2个取代基取代。在一些实施例中，环A视情况可经1个取代基取代。在一些实施例中，环A未经取代。
[0183] 本发明的化学反应
[0184] 式(I)化合物的合成
[0185] 本发明的一个实施例为制备新颖的式(I)四唑的合成方法。本发明的化合物可根据此新颖方法容易地制备，所述方法是利用各种可购得的或由所属领域的技术人员熟悉的合成方案容易地制备的起始材料。除非另有说明，否则在下面概述的例示性合成法中，所标注的取代基具有与上文对式(I)所述的化合物定义中提及的相同含义。
[0186] 一种可以用来制备本发明的化合物(其中X为NH，即环B为吡唑)的方法利用衍生自式(A)的环状酮的中间物，如下面的反应流程图I所说明：
[0187] 流程图I
[0188]
[0189] 式(Ia)的化合物可通过将式(A)的环状酮与式(C(O)OR10)2(其中R10为C1-8烷基)的草酸二烷基酯反应制备，所述反应在碱和例如(但不限于)C1-8烷醇、甲醇、乙醇、丁醇、戊醇、己醇、2-甲氧基乙醇、异丙醇、THF、DMF和其类似物的极性溶剂的存在下进行，以得到式(B)的酮酯。合适的碱包括碱金属醇盐，例如甲醇钠、乙醇钠、乙醇钾、叔丁醇钾和其类似物；碱金属氨化物(即碱金属-NR11，其中R11是C1-8烷基或硅烷基-C1-8-烷基)，例如二异丙基胺锂、六甲基二硅氮烷基锂、六甲基二硅氮烷基钠、六甲基二硅氮烷基钾和类似碱。在合适条件下使酮酯(B)与受保护或未受保护的肼反应以得到式(C)的吡唑酯。视情况而定，可以用，例如，苯甲基和其类似基团保护所述肼。使用所属领域中已知的方法将所述酯转化成式(D)的氨化物，例如在极性溶剂中从室温到所述溶剂的沸点之间的温度下用氨水处理。
用纯的或溶于非质子溶剂(例如乙腈、DMF和其类似物)的脱水试剂(例如磷酰氯、五氧化磷、亚硫酰氯和其类似物)处理氨化物(D)以得到腈(E)。用叠氮化物(即N3)或叠氮化物等效物(例如叠氮化钠、叠氮化钾、叠氮基三甲基硅烷(即(CH3)SiN3)和其类似物)处理腈(E)以得到式(Ia)的四唑。在一些情况中，在例如DMF和其类似物的合适溶剂中存在路易斯酸(例如AlCl3、ZnBr2和其类似物)是有利的。
用纯的或溶于非质子溶剂(例如乙腈、DMF和其类似物)的脱水试剂(例如磷酰氯、五氧化磷、亚硫酰氯和其类似物)处理氨化物(D)以得到腈(E)。用叠氮化物(即N3)或叠氮化物等效物(例如叠氮化钠、叠氮化钾、叠氮基三甲基硅烷(即(CH3)SiN3)和其类似物)处理腈(E)以得到式(Ia)的四唑。在一些情况中，在例如DMF和其类似物的合适溶剂中存在路易斯酸(例如AlCl3、ZnBr2和其类似物)是有利的。
[0190] 一种可以用来制备式(I)的化合物(其中X为环氧，即环B为异恶唑)的方法是利用衍生自式(J)的炔基醇的中间物，如下面反应流程图II所示：
[0191] 流程图II
[0192]
[0193] 为制备式(Ic)的化合物，可以通过用合适保护基团(例如THP、TBDMS和其类似物)保护式(J)的炔基醇以得到炔基(K)。通过用强碱处理随后与氯甲酸C1-8烷基酯反应将炔基(K)转化成式(L，其中R15为C1-8烷基)的炔基酯。合适的强碱为烷基锂，例如(但不限于)正丁基锂、叔丁基锂和其类似物。接着用所属领域中已知的方法将中间物(L)去保护，例如经由用酸(例如PTSA)处理通常可移除THP基团，而经由用氟化四烷基铵处理通常可移除BDMS基团。使用任何各种方法将所得醇氧化成醛(M)，所述方法为，例如，戴斯-马丁(Dess-Martin)高碘烷(即1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氢-1，2-苯并碘氧杂环戊-3(1H)-酮)、斯文(Swern)氧化反应、用NCS的Corey氧化反应或由Hudlicky，M在Oxidations in Organic Chemi stry，ACS Monograph 186(1990)中描述的任何其它合适的方法。在碱的存在下用羟胺、接着用NCS和碱处理醛(M)得到异恶唑烷基酯(N)。可以以与在上文的反应流程图I中描述的方式实质上相似的方式(即-CO2-C1-8-烷基→CONH2→-C≡N→四唑)将异恶唑(N)转化成式(Ic)的化合物。
[0194] 一种可以用来制备式(I)的特定化合物的方法是利用中间物(AJ)，如下面的反应流程图III和IV所说明：
[0195] 流程图III
[0196]
[0197] 制备结构(AJ)的化合物(其中R为C1-4烷基、C2-4烯基和C2-4炔基)可通过在作为碱的NaOH的存在下在合适溶剂(例如THF)中用苄基溴处理不饱和吡唑(AA)以得到N-苄基吡唑(AB)来完成。可以使用所述领域的技术人员已知的方法，例如，在如THF/MeOH的溶剂混合物中用氢氧化钠水溶液处理来使吡唑(AB)皂化。使用例如EDC的偶合试剂可以使酸(AC)与N-羟基丁二酰亚胺偶合。通过在例如1，4-二氧六环的溶剂中用浓NH4OH溶液处理使酯(AD)转化成酰胺(AE)。酰胺(AE)可以在例如DMF的非质子溶剂存在下与例如氰尿酰氯、三氟乙酸酐、亚硫酰氯和其类似物的脱水试剂反应以得到腈(AF)。低温下在例如THF的溶剂中用过量硼烷-THF溶液处理所述腈(AF)，接着用过氧化氢在氢氧化钠的存在下氧化以得到如(AG’)和(AG”)所展示的1∶1的醇混合物。
[0198] 利用醇(AG’)或醇(AG”)可以制备多种醚。在反应流程图IV中展示使用醇(AG’)的代表性合成法。应理解，以醇(AG”)起始可以利用相似的合成流程。
[0199] 流程图IV
[0200]
[0201] 可以通过用过量的烷基卤在例如DMF的非质子溶剂中于例如氢氧化钠的碱的存在下处理醇中间物(AG’)来制备结构(AH)的化合物。在例如溴化锌的路易斯酸的存在下，用例如叠氮化钠的叠氮化物处理所述腈(AH)，得到结构(AI)的四唑。最终的化合物可以通过在氧化条件下在例如DMSO的溶剂中使用例如叔丁醇钾的碱和氧气移除苯甲基保护基团来制备。
[0202] 一种可以用来制备式(I)的特定化合物的方法利用中间物(AS)，如下面的反应流程图V说明：
[0203] 流程图V
[0204]
[0205]
[0206] 结构(AV)的化合物的制备可以从3-乙氧基-环戊烯酮通过在例如LDA或LHMDS的非亲核碱的存在下、在例如THF的溶剂中用例如草酸二叔丁酯或草酸二乙酯的草酸二烷基酯处理得到酮酯(AM)来完成。使所述酮酯(AM)与苄基肼在例如含有冰醋酸的乙醇或甲醇的极性溶剂中于回流下反应，得到吡唑(AN)。或者，所述酮酯(AM)可以与肼反应，接着使用碳酸铯作为碱在例如DMF的非质子溶剂中用苄基溴对所述吡唑进行烷基化。可以使用与对(AG’)描述的相似顺序的步骤将所述吡唑酯(AN)转化成腈(AR)。使用Commins试剂在例如THF的溶剂中在LDA的存在下将酮(AR)转化成三氟甲磺酸乙烯酯(AS)。
[0207] 如反应流程图VI所示，利用化合物(AS)可以在C-5位上引入多种取代基(其中R’为C1-4烷基、C2-4烯基和C2-4炔基)。
[0208] 流程图VI
[0209]
[0210]
[0211] 可以在例如氯化锂的碱和例如四三苯基膦钯(O)的催化剂的存在下在例如THF或甲苯的合适溶剂中使所述三氟甲磺酸酯(AS)与合适的锡烷试剂反应。或者，可以在例如磷酸钾的碱和例如四三苯基膦钯(O)的催化剂的存在下在例如1，4-二氧六环的合适溶剂中使所述三氟甲磺酸酯(AS)与合适的烯基硼酸反应。在例如溴化锌的路易斯酸的存在下使所述腈(AT)与例如叠氮化钠的叠氮化物反应，得到结构(AU)的四唑。通过移除苯甲基保护基团制备最终化合物，此移除步骤可在还原条件下在例如甲醇或乙醇的极性溶剂和例如甲酸或浓盐酸的酸中使用钯黑来进行。
[0212] 或者，可以使用所属领域的技术人员已知的方法(例如DAST[(二乙氨基)三氟化硫])对醇(AG’)进行氟化，而提供含氟化合物，其可以转变成它的四唑衍生物并使用本文中描述的方法去保护。
[0213] 一种可用来制备式(I)的特定化合物的方法在下面的反应流程图VII中展示：
[0214] 流程图VII
[0215]
[0216]
[0217] 结构(BF)的化合物可以从酮酯(AM)通过在例如含有冰醋酸的乙醇的极性溶剂中与水合肼反应得到吡唑(AW)来制备。可以将吡唑(AW)在例如吡啶的碱的存在下、在例如CH2Cl2的溶剂中与例如对甲苯磺酰氯的磺酰氯反应，得到N-磺酰化衍生物(AX)。所述吡唑酯(AX)可以在酸性条件下在CH2Cl2中使用例如TFA的酸去保护而形成(AY)。可以使用对(AG’)描述的相似的顺序步骤将吡唑酸(AY)转化成腈(BB)。可以在例如LDA的碱的存在下在例如THF的溶剂中使用Commins试剂将所述酮(BB)转化成三氟甲磺酸乙烯酯(BC)。
[0218] 可以在例如氯化锂的碱和例如四三苯基膦钯(O)的催化剂的存在下在例如THF或甲苯的合适溶剂中将三氟甲磺酸酯(BC)与四甲基锡偶合。可以通过在例如THF的溶剂中与四丁基氟化铵溶液反应来移除对甲苯磺酰基，得到吡唑(BE)。最终的化合物可以通过在例如溴化锌的路易斯酸的存在下，将腈(BE)与例如叠氮化钠的叠氮化物反应来制备，得到四唑(BF)。
[0219] 本文中所利用的各种有机基团转化和保护基团可以通过除上文描述的程序以外的许多程序实施。可以用来制备本文所揭示的中间物或化合物的其它合成程序的参考可见于(例如)Smith，M.B.和March，J.，Advanced Organic Chgemistry，第5版，Wiley-lnterscience(2001)；Larock，R.C.，Comprehensive Organic Transformations，A Guide to Functional Group Preparations，第2版，VCHPublishers，Inc(1999)；或Wuts，P.G.M.，Greene，T.W.，Protective Groups in Organic Synthesis，第三版，John Wiley and Sons(1999)，三者均以全文引用的方式并入本文中。
[0220] 式(I)化合物可能具有一个或一个以上手性中心，并因此存在对映异构体或非对映异构体。应理解本发明涵盖所有这样的对映异构体、非对映异构体和其混合物，包括外消旋体。式(I)和上文所描述的结构式意在代表所有单个的异构体和其混合物，除非另有说明或展示。
[0221] 可以通过已知方法将外消旋混合物拆分为光学纯对映异构体，例如用光学活性酸分离其非对映异构体盐，并通过用碱处理而释放光学活性胺化合物。另一种用于将外消旋体拆分为光学纯对映异构体的方法是基于光学活性基质或手性载体的色谱法。因此可以将本发明的特定化合物拆分为其光学对映体，例如，通过d-或1-(酒石酸盐、扁桃酸盐或樟脑磺酸盐)盐的分步结晶。本发明化合物的拆分还可以通过将本发明的化合物与，例如，衍生自(+)或(-)苯丙氨酸、(+)或(-)苯甘氨酸、(+)或(-)樟脑酸的光学活性活化羧酸反应而形成非对映异构体氨化物或酯，或者通过将本发明的化合物与光学活性氯甲酸酯或其类似物反应然后水解而形成非对映异构体氨基甲酸盐来达到。
[0222] 可以使用所属领域技术人员已知的拆分光学异构体的其它方法，并且所述方法对于所属领域的一般工作人员是显而易见的。这些方法包括J.Jaques、A.Collet和S.Wilen在″Enantiomers，Racemates，and Resolutions″，John Wiley and Sons，纽约(1981)中讨论的方法。
[0223] 应理解本文所描述的化学反应是代表性的，而并不希望以任何方式加以限制。
[0224] 在表A中展示式(I)化合物的代表性实例。
[0225] 表A
[0226]
[0227]
[0228]
[0229]
[0230] 方法和用途
[0231] 本发明的化合物适用于抑制游离脂肪酸的产生。另外，本发明的化合物适用于抑制游离脂肪酸的产生，同时导致实质上较低的或在一些情况下无可测量面部发红的副作用，这些作用通常与尼克酸的给药相关。本发明的化合物通常在剂量高达约300mpk时不会引起血管舒张，如使用所属领域中已知的方法所测量，例如在实例7中所示的方法。
[0232] 在一些实施例中，相对于大致等效剂量的尼克酸，本发明的化合物基本不会引起个体中可测量的面部发红。在其它实施例中，相对于大致等效剂量的尼克酸，本发明的化合物引起个体中小于约80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％或1％的可测量的面部发红。
[0233] 本发明的化合物可以调节RUP25受体的活性。术语“调节”意指增加或减少受体的活性。在一些实施例中，本发明的化合物可以用在通过将受体与任何一种或一种以上的本文描述的化合物接触来调节RUP25受体的方法中。在另一些实施例中，本发明的化合物可以用在在需要调节的个体中调节RUP25受体从而治疗代谢相关疾病的方法中，所述调节方法包含将受体与治疗有效量的式(I)化合物接触。在一些实施例中，本发明的化合物增加RUP25受体的活性。在另一些实施例中，本发明的化合物是RUP25受体的激动剂。本文所使用的术语“激动剂”是指可以刺激如RUP25受体的受体的活性(即激活)的试剂。在一些实施例中，本发明的化合物为RUP25受体的部分激动剂。
[0234] 本发明的另一方面是关于治疗代谢相关疾病的方法，其包含向需要治疗的个体给予治疗有效量的式(I)化合物。
[0235] 本发明的另一方面关于提高个体中HDL的方法，其包含向所述个体给予治疗有效量的式(I)化合物。
[0236] 本发明的另一方面关于本文描述的式(I)化合物，用于通过疗法治疗人类或动物体的方法中。
[0237] 本发明的另一方面关于本文描述的式(I)化合物，用于通过疗法治疗人类或动物体的代谢相关疾病的方法中。
[0238] 本发明的另一方面关于本文描述的式(I)化合物，用于通过疗法治疗人类或动物体的代谢相关疾病的方法中，其中所述代谢相关疾病选自由血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗、肥胖症、葡萄糖耐受减低、动脉粥样硬化症、高血压、中风、X综合症、心脏病和2型糖尿病组成的群组。
[0239] 本发明的另一方面关于本文描述的式(I)化合物，用于通过疗法治疗人类或动物体的代谢相关疾病的方法中，其中所述代谢相关疾病选自由血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗和2型糖尿病组成的群组。
[0240] 本发明的另一方面关于本文描述的式(I)化合物，用于通过疗法治疗人类或动物体的动脉硬化症的方法中。
[0241] 本发明的另一方面关于本文描述的式(I)化合物，用于通过疗法提高人类或动物体的HDL的方法中。
[0242] 本发明的另一方面关于本文描述的式(I)化合物的用途，其用于制造用在治疗代谢相关疾病中的药物。
[0243] 本发明的另一方面关于本文描述的式(I)化合物的用途，其用于制造用在治疗选自由血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗、肥胖症、葡萄糖耐受减低、动脉粥样硬化症、高血压、中风、X综合症、心脏病和2型糖尿病组成的群组的代谢相关疾病中的药物。
[0244] 本发明的另一方面关于本文描述的式(I)化合物的用途，其用于制造用来治疗动脉硬化症的药物。
[0245] 本发明的另一方面关于本文描述的式(I)化合物的用途，其用于制造用来提高个体中的HDL的药物。
[0246] 本发明的一些实施例涉及治疗代谢相关疾病的方法。在一些实施例中，所述代谢相关疾病选自由血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗、肥胖症、葡萄糖耐受减低、动脉粥样硬化症、高血压、中风、X综合症、心脏病和2型糖尿病组成的群组。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为血脂异常、动脉硬化症、冠心病、胰岛素抵抗和2型糖尿病。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为血脂异常。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为动脉硬化症。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为冠心病。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为胰岛素抵抗。在一些实施例中，所述代谢相关疾病为2型糖尿病。
[0247] 在一些涉及本发明的方法的实施例中，所述个体为哺乳动物。在另一些实施例中，所述哺乳动物为人类。
[0248] 本发明的另一方面关于产生医药组合物的方法，其包含将本文中描述的式(I)的化合物与医药上可接受的载剂混合或组合。
[0249] 本发明的组合物
[0250] 本发明的一些实施例包括包含根据式(I)的化合物与医药上可接受的载剂的组合的医药组合物。
[0251] 本发明的一些实施例包括产生医药组合物的方法，其包含将根据本文所揭示的任何化合物实施例的至少一种化合物与医药上可接受的载剂混合。
[0252] 可以通过任何合适的方法制备配方，通常通过将活性化合物与液体和/或精细分割的固体载剂或两者按需要的比例均匀混合，并且必要时随后使所得混合物形成希望的形状。
[0253] 例如粘合剂、填充剂、可接受的润湿剂、压片润滑剂和崩解剂的常规赋形剂可以用在口服片剂和胶囊中。口服液体制剂的形式可以是溶液、乳液、水性或油性悬浮液和糖浆。或者，口服制剂的形式可以是干粉，其可以在使用前用水或其它合适的液体媒剂复原。可以向液体制剂中加入例如悬浮剂或乳化剂、非水性媒剂(包括食用油)、防腐剂、调味剂和着色剂的其它添加剂。非肠道剂型可以通过将本发明的化合物溶解在合适的液体媒剂中并在填充与密封合适的小瓶或安瓿之前对所述溶液过滤杀菌而制备。这些仅是所属领域中众所周知的用于制备剂型的许多合适方法的几个实例。
[0254] 可以使用所属领域中众所周知的技术将本发明的化合物调配成医药组合物。除在本文中提及的以外，合适的医药上可接受的载剂在所属领域中已是已知的；例如，见Remington，The Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000，LippincottWilliams & Wilkins，(编者：Gennaro，A.R.等人)。
[0255] 尽管用在本发明的治疗中的化合物可以以替代用法作为原料化学品或纯化学品给药，然而优选的是将所述化合物或“活性成分”以进一步包含医药上可接受的载剂的医药配方或组合物提供。因此，本发明的一个方面涵盖包含医药上可接受的载剂与至少一种根据式(I)的化合物的组合的医药组合物。
[0256] 本发明提供包含本发明的化合物或其医药上可接受的盐、水合物或溶剂化无连同为此所用的一种或一种以上医药上可接受的载剂的医药配方。所述载剂就与配方的其他成分的相容性以及对其接受者的毒害程度而言必须是“可接受的”。
[0257] 医药配方包括适于口服、经直肠、经鼻腔、局部(包括面颊、舌下)、阴道或非肠道(包括肌肉内、皮下和静脉内)给药或以适合于通过吸入、吹入或通过皮肤贴片给药的形式的配方。皮肤贴片通过用药物降解最少的有效方式提供药物吸收而以受控速率分配药物。通常，皮肤贴片包含不透水衬层、单面压敏粘胶剂和具有释放衬垫的可移除保护层。所属领域的技术人员应理解并了解适合于根据技术人员的需要制造理想效果的皮肤贴片的技术。
[0258] 因此可以将本发明的化合物连同常规辅剂、载剂或稀释液制成医药配方和其单位剂型的形式，并且此形式可作为口服给药的固体，例如片剂或填充胶囊，或液体，例如溶液、悬浮液、乳液、酏剂，凝胶体或填充有这些凝胶体的胶囊；直肠给药的栓剂形式；或非肠道(包括皮下)使用的无菌注射溶液的形式。因此不管有没有其它活性化合物或成分，这些医药组合物和其单位剂型均可包含常规比例的常规成分，并且此单位剂型可以含有与将要采用的预定每日剂量范围相当的任何合适有效量的活性成分。
[0259] 对于口服给药，医药组合物的形式可以是，例如，片剂、胶囊、悬浮液或液体。所述医药组合物优选地以含有特定量活性成分的剂量单位形式制造。所述剂量单位的实例为胶囊、片剂、粉剂、颗粒或悬浮液，其具有例如乳糖、甘露醇、玉米淀粉或马铃薯淀粉的常规添加剂；具有例如结晶纤维素、纤维素衍生物、阿拉伯胶、玉米淀粉或白明胶的粘合剂；具有例如玉米淀粉、马铃薯淀粉或羧甲基纤维素钠的崩解剂；以及具有例如滑石或硬脂酸镁的润滑剂。所述活性成分还可以作为组合物通过注射给药，其中，例如盐水、葡萄糖或水可以用作合适的医药上可接受的载剂。
[0260] 本发明的化合物或溶剂化物或其生理功能性衍生物可以用作医药组合物中的活性成分，尤其是作为RUP25受体的激动剂。术语“活性成分”在“医药组合物”的内容中有所定义，并应指医药组合物中提供主要药理学效应的组分，而“非活性成分”通常被认为不提供医药学益处。
[0261] 当使用本发明的化合物时，剂量可在广泛范围内变化，并且如常识和医师所知，其视个体状况不同而变化。所述剂量取决于，例如，待治疗的疾病的性质和严重程度、患者的情况、所采用的化合物或所治疗为急性或慢性病况或在本发明的化合物之外是否另外给予其他活性化合物。本发明的典型剂量包括(但不限于)约0.001mg到约5000mg、约0.001到约2500mg、约0.001到约1000mg、0.001到约500mg、0.001mg到约250mg、约0.001mg到100mg、约0.001mg到约50mg，以及约0.001mg到约25mg。在一天中可以多剂量给药，当认为需要相对大剂量时尤其如此，例如2、3或4次剂量。根据个体情况并且如果患者的医师或护理者认为合理，那么可能有必要与本文描述的剂量有向上或向下的偏离。
[0262] 治疗中需要使用的活性成分或其活性盐或衍生物的量不仅将随所选的特定盐变动，而且还将随给药途径、正在治疗病况的性质和患者的年龄和状况变动，并且最终取决于随从医师或临床医生的判断。通常，所属领域的技术人员了解如何从一种模型系统中获得的活体内数据推断至另一种模型系统，例如，从动物模型推断至人。通常，动物模型包括(但不限于)如下文的实例1中描述的啮齿类动物糖尿病模型、下文的实例2中描述的小鼠动脉硬化症模型或下文的实例5中描述的活体内动物动脉硬化症模型。在一些情况下，这些推断可能仅仅基于动物模型与另一种(例如哺乳动物，优选人)的体重比较，然而，更通常地，这些推断不仅是简单地基于体重的差别，而是并入了多种因素。典型因素包括患者的类型、年龄、体重、性别、饮食和医疗状况、疾病的严重性、给药途径、例如所采用的特定化合物的活性、效力、药物代谢动力学和毒理学特性的药理学因素、是否利用药物递送系统、进行治疗的疾病是急性的还是慢性的，以及在式(I)的化合物之外是否给予其它活性化合物作为药物组合的部分。用于用本发明的化合物和/或组合物治疗疾病的剂量方案是根据例如以上列举的各种因素而选择的。因此，实际采用的剂量方案可以有很大的变化，因此可以与优选剂量方案有偏差，并且所述领域的技术人员应认识到这些典型范围之外的剂量和剂量方案是可以测试的，而且当合适的时候可以用在本发明的方法中。
[0263] 预期剂量可以方便地以单一剂量提供或以合适的间隔作为分开剂量给药，例如每天两次、三次、四次或更多次的分剂量。所述分剂量本身又可以进一步划分，例如，分成多次松散离散的间隔给药。尤其当认为适于给予相对大的量的时候，每日剂量可以分成若干份，例如2、3或4份给药。如果合适，视个体状态，可以有必要与所指定的每日剂量有向上或向下的偏离。
[0264] 本发明的化合物可以以多种多样的口服和非肠道剂型给药。所属领域的技术人员将明显可见，以下剂型可以包含作为活性组分的本发明的化合物或本发明的化合物的医药上可接受的盐。
[0265] 为从本发明的化合物制备医药组合物，医药上可接受的载剂可以是固体或液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、药丸、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒剂。固体载剂可以为一种或一种以上也可充当稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或成胶囊材料的物质。
[0266] 在粉剂中，载剂为精细分割的固体，其与精细分割的活性组分混合。
[0267] 在片剂中，活性组分与具有必要的粘合能力的载剂按适当的比例混合并压缩成预期的形状和尺寸。
[0268] 粉剂和片剂可以含有不同百分含量的活性化合物。粉剂或片剂中的典型量可以含有0.5到约90百分比的活性化合物，然而技术人员应了解超出此范围的量在何时是必要的。用于粉剂和片剂的合适载剂为碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、胶质、糊精、淀粉、白明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔蜡、可可脂和其类似物。术语“制剂”意在包括活性化合物与作为提供胶囊的载剂的成胶囊材料的配方，在所述胶囊中，含有或不含有载剂的活性组分被载剂包围，因此与其相联合。同样地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、药丸、扁囊剂和锭剂可以用作适合于口服的固体形式。
[0269] 为制备栓剂，首先将例如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物的低熔蜡熔化并将活性组分通过搅拌均匀地分散在其中。接着将熔融的均匀混合物倒入常规尺寸的模子中，令其冷却，进而凝固。
[0270] 适合于阴道给药的配方可以作为除活性成分以外还含有所属领域中已知的合适载剂的阴道栓剂、棉塞、乳膏、凝胶体、糊膏剂、泡沫或喷雾提供。
[0271] 液体形态制剂包括溶液、悬浮液和乳液，例如，水或水-丙二醇溶液。举例来说，非肠道注射液制剂可以作为含水聚乙二醇溶液中的溶液调配。可注射的制剂，例如无菌可注射的水性或油性悬浮液也可以根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂调配。无菌可注射制剂还可以是在无毒非肠道的可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如1，3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的媒剂和溶剂包括水、林格氏溶液(Ringer’s solution)和等渗氯化钠溶液。此外，常规采用无菌、不易挥发的油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可以采用任何无刺激的不易挥发的油，包括合成的甘油一酯或甘油二酯。此外，例如油酸的脂肪酸也可用于注射液的制备中。
[0272] 因此，根据本发明的化合物可以经调配用于非肠道给药(例如，通过注射，例如弹丸注射(bolus injection)或连续输液)并且可以在安瓿、预充注射器、小量输液器或在另外添加防腐剂的多剂量容器中以单位剂量形式提供。所述组合物可以采用在油性或水性媒剂中的悬浮液、溶液或乳液等形式，并且可以含有调配剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是通过无菌固体的无菌离析或通过溶液冻干所获得的粉末形式，在使用前用合适媒剂(例如无菌、无热原水)构造。
[0273] 适合口服使用的含水溶液可以通过将活性组份溶解在水中并在需要时加入合适的着色剂、香料、稳定剂和增稠剂来制备。
[0274] 适合口服使用的含水悬浮液可以通过将精细分割的活性组份分散到具有粘性物质的水中制成，所述粘性物质为，例如，天然或合成胶状体、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其它众所周知的悬浮剂。
[0275] 还包括固体形态的制剂，其预期在使用前不久转化成用于口服的液体形态。这些液体形态包括溶液、悬浮液和乳液。在活性组份之外，这些制剂还可以含有着色剂、香料、稳定剂、缓冲剂、合成的和天然的甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂和其类似物。
[0276] 用于向表皮局部给药的根据本发明的化合物可以调配成软膏、乳膏或洗液，或透皮贴片。
[0277] 举例来说，软膏和乳膏可以用水性或油性基质并添加的合适增稠剂和/或胶凝剂调配。洗液可以用水性或油性基质调配并且通常还含有一种或一种以上乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。
[0278] 适合于口腔中局部给药的配方包括：在加味基质中包含活性剂的锭剂，所述基质通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶；在惰性基质(例如白明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性成分的软锭剂；以及在合适液体载剂中包含活性成分的漱口液。
[0279] 溶液或悬浮液可通过常规装置直接施用于鼻腔，例如用滴管、吸管或喷雾器。所述配方可以以单剂量或多剂量形式提供。在使用滴管或吸管的多剂量情况下，可以通过耐心给予适当的、预定量的溶液或悬浮液达到。在喷雾情况下，可以通过，例如，计量式雾化喷射泵达到。
[0280] 呼吸道给药也可以通过气雾剂配方实现，其中活性成分在具有合适推进剂的加压容器中提供。如果式(I)化合物或包含它们的医药组合物作为气雾剂给药，例如作为鼻用气雾剂或吸入气雾剂，那么这可以使用，例如，喷雾器、雾化器、泵雾化器、吸入装置、计量式吸入器或干粉吸入器进行。用于将式(I)化合物作为气雾剂给药的医药形式可以通过所属领域技术人员熟知的方法制备。举例来说，为制备上述医药形式，可以采用水、水/醇混合物或合适的盐水溶液中的式(I)化合物的溶液或悬浮液，并使用常规添加剂，例如苄基醇或其它合适防腐剂、用于提高生物利用率的吸收增强剂、增溶剂、分散剂和其它试剂，并在适当时使用常规推进剂，例如，包括二氧化碳、CFC类(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷)和其类似物。所述气雾剂还可适当地含有例如卵磷脂的表面活性剂。可以通过提供定量阀控制药物的剂量。
[0281] 在预期用于呼吸道给药的配方(包括鼻内配方)中，化合物通常会具有小粒度，例如约10微米或更小。这样的粒度可以通过所属领域中已知的方法获得，例如微粉化。当需要时，可以采用用于得到活性成分持续释放的配方。
[0282] 或者，活性成分可以以干粉的形式提供，例如所述化合物在例如蔗糖、淀粉、淀粉衍生物(例如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP))的合适粉末基质中的粉末混合物。便利地，粉末载剂将在鼻腔中形成胶体。粉剂组合物可以在例如白明胶的胶囊或药筒或泡罩包装中以单位计量形式提供，其中粉剂可以借助吸入器从泡罩包装给药。
[0283] 医药制剂优选为单位计量形式。在此形式中，所述制剂再分为含有合适量的活性组分的单位计量。所述单位剂量形式可以是经过包装的制剂，所述包装含有离散量的制剂，例如经过包装的片剂、胶囊和小瓶或安瓿中的粉剂。此外，所述单位剂量形式可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者可以是包装形式的合适数量的这些剂型中的任一种剂型。
[0284] 口服片剂或胶囊和非肠道给药的液体是优选组合物。
[0285] 本发明的化合物可以转化成“前药(pro-drug)”。术语“前药”是指已经用所属领域中已知的特定化学基团修饰并且当向个体给药时这些基团经历生物转化得到母体化合物的化合物。因此前药可以视为含有一种或一种以上特定无毒保护基团的本发明的化合物，所用的这些保护基团以暂时的方式改变或消除化合物的特性。一般来说，“前药”方法用于促进口服吸收。在T.Higuchi和V.Stella，″Pro-drugs as Novel DeliverySystems，″A.C.S.Symposium Series的第14卷中和Bioreversible Carriers in DrugDesign，编者Edward B.Roche，American Pharmaceuticai Association and PergamonPress，1987中提供有详细论述，这两个文献以全文引用的方式并入本文中。
[0286] 联合疗法
[0287] 尽管本发明的化合物可以作为单独的活性医药试剂(即单一疗法)给药，但它们还可以联合其它医药试剂(即联合疗法)，例如，用于治疗本文中描述的疾病/疾况/失调。因此，本发明的另一方面包括治疗代谢相关疾病的方法，其包含向需要治疗的个体给予治疗有效量的本发明的化合物连同一种或一种以上本文中描述的另外的医药试剂。
[0288] 可以联合本发明的化合物使用的合适医药试剂包括抗肥胖剂例如载脂蛋白-B分泌/微粒体甘油三酯转移蛋白(apo-B/MTP)抑制剂、MCR-4激动剂、缩胆囊素-A(CCK-A)激动剂、血清素和去甲肾上腺素重吸收抑制剂(例如西布曲明(Sibutramine))、拟交感神经剂、β3肾上腺素能受体激动剂、多巴胺激动剂(例如溴麦角环肽(bromocriptine))、促黑激素受体类似物、大麻素1受体拮抗剂[例如，SR141716：N-(哌啶-1-基)-5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺]、黑色素聚集激素拮抗剂、瘦素(OB蛋白)、瘦素类似物、瘦素受体激动剂、甘丙肽拮抗剂、脂肪酶抑制剂(例如四氢尼伯司他汀(tetrahydrolipstatin)，即奥利司他(Orlistat))、厌食剂(例如蛙皮素(bombesin)激动剂)、神经肽-Y拮抗剂、甲状腺激素拟似剂、脱氢表雄甾酮或其类似物、糖皮质激素受体激动剂或拮抗剂、食欲素受体拮抗剂、尿皮质素结合蛋白拮抗剂、类胰高血糖素肽-1受体激动剂、睫状神经营养因子(例如从RegeneronPharmaceuticals有限公司，Tarrytown，纽约TM和Procter&Gamble公司，Cincinnati，OH购得的Axokine )、人类豚鼠相关蛋白(AGRP)、胃促生长素受体拮抗剂、组胺3受体拮抗剂或反向激动剂、神经介素U受体激动剂、去甲肾上腺素能厌食剂(例如苯丁胺(phentermine)、马吲哚(mazindol)和其类似物)和食欲抑制素(例如丁氨苯丙酮(bupropion))。
[0289] 其它抗肥胖剂，包括下文将提及的药剂，是所述领域的普通技术人员熟知的或根据本发明就容易明了的。
[0290] 在一些实施例中，抗肥胖剂选自由奥利司他、西布曲明、溴麦角环肽、麻黄素、瘦素和伪麻黄碱所组成的群组。在另一实施例中，本发明的化合物和联合疗法与锻炼和/或合理饮食共同施行。
[0291] 应理解，本发明的化合物与其它抗肥胖剂、厌食剂、食欲抑制素和相关药剂的联合疗法的范畴并不限于以上所列的范围，而是原则上包括与适用于治疗超重和肥胖个体的任何医药试剂或医药组合物的联合。
[0292] 除了抗肥胖剂，其它可以与本发明的化合物联合使用的合适的医药试剂包括适用于治疗伴随病症的医药试剂。这些病症的治疗包括使用一种或一种以上所属领域中已知的医药试剂，它们属于(但不限于)以下药物类别：磺酰脲类、美格列奈类(meglitinide)、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂、过氧化物酶体增生物活化受体-γ(即PPAR-γ)激动剂、胰岛素、胰岛素类似物、HMG-CoA还原酶抑制剂、降低胆固醇药物(例如包括非诺贝特(fenofibrate)、苯扎贝特(bezafibrate)、吉非罗齐(gemfibrozil)、安妥明(clofibrate)和其类似物的贝特类；包括消胆胺、考来替泼(colestipol)和其类似物的胆酸螯合剂；以及尼克酸)、抗血小板剂(例如阿司匹林和包括氯吡格雷(clopidogrel)、噻氯匹定(ticlopidine)和其类似物的二磷酸腺苷受体拮抗剂)、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂和脂联素。根据本发明的一个方面，本发明的化合物可以与属于本文提及药物类别中的一种或一种以上医药试剂联合使用。
[0293] 应理解，本发明的化合物与其它医药试剂的联合疗法的范畴不限于上文或下文中列举的那些，而原则上包括与适用于治疗与代谢相关疾病相关的疾病、疾况或失调的任何医药试剂或医药组合物的任何组合。
[0294] 本发明的一些实施例包括如本文所描述的治疗疾病、失调或疾况的方法，其包含向需要此治疗的个体给予治疗有效量或治疗有效剂量的本发明的化合物连同至少一种选自由磺酰脲类、美格列奈类、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂、过氧化物酶体增生物活化受体-γ(即PPAR-γ)激动剂、胰岛素、胰岛素类似物、HMG-CoA还原酶抑制剂、降低胆固醇药物(例如包括非诺贝特、苯扎贝特、吉非罗齐、安妥明和其类似物的贝特类；包括消胆胺、考来替泼和其类似物的胆酸螯合剂；以及尼克酸)、抗血小板剂(例如阿司匹林和包括氯吡格雷、噻氯匹定和其类似物的二磷酸腺苷受体拮抗剂)、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂和脂联素组成的群组的医药试剂。在一些实施例中，所述医药组合物进一步包含一种或一种以上选自由α-葡萄糖苷酶抑制剂、醛糖还原酶抑制剂、双胍、HMG-CoA还原酶抑制剂、角鲨烯合成抑制剂、贝特类、LDL分解代谢增强剂、血管紧张素转化酶抑制剂、胰岛素分泌增强剂和噻唑烷二酮组成的群组的药剂。
[0295] 本发明的一个方面涵盖包含至少一种如本文所描述的式(I)化合物的医药组合物。在一些实施例中，所述医药组合物进一步包含一种或一种以上选自由(例如)α-葡萄糖苷酶抑制剂、醛糖还原酶抑制剂、双胍、HMG-CoA还原酶抑制剂、角鲨烯合成抑制剂、贝特类、LDL分解代谢增强剂、血管紧张素转化酶抑制剂、胰岛素分泌增强剂和噻唑烷二酮组成的群组的药剂。
[0296] 可以联合本发明的化合物使用的合适医药试剂包括α-葡萄糖苷酶抑制剂。α-葡萄糖苷酶抑制剂是竞争性抑制胰腺或小肠中的例如α-淀粉酶、麦芽糖酶、α-糊精酶和蔗糖酶等的消化酶的一类药物。α-葡萄糖苷酶抑制剂的可逆抑制通过延迟淀粉和糖的消化而阻碍、减少或以其他方式降低血糖水平。α-葡萄糖苷酶抑制剂的一些代表性实例包括阿卡波糖(acarbose)、N-(1，3-二羟基-2-丙基)valiolamine(通用名：伏格列波糖(voglibose))、米格列醇(miglitol)和所属领域中已知的其它α-葡萄糖苷酶抑制剂。
[0297] 可以联合本发明的化合物使用的合适医药剂包括磺酰脲类。所述磺酰脲类(SU)为通过经由细胞膜上的SU受体传递胰岛素分泌信号来促进胰岛素从胰腺β细胞的分泌的药物。磺酰脲类的实例包括优格列本脲(glyburide)、格列吡嗪(glipizide)、格列美脲(glimepiride)和所属领域中已知的其它磺酰脲类。
[0298] 可以联合本发明的化合物使用的合适医药试剂包括美格列奈类。所述美格列奈类是代表新的一类胰岛素促分泌素的苯甲酸衍生物。这些药剂针对餐后高血糖症并在降低HbAIC方面表现出与磺酰脲类相当的效力。美格列奈类的实例包括瑞格列奈(rapaglinide)、那格列奈(nateglinide)和所属领域中已知的其它美格列奈类。
[0299] 可以联合本发明的化合物使用的合适医药试剂包括双胍类。所述双胍类代表一类刺激无氧糖酵解、增加外周组织对胰岛素敏感性、抑制葡萄糖的肠道吸收、抑制肝脏糖异生作用并且抑制脂肪酸氧化的药物。双胍类的实例包括苯乙双胍(phenformin)、二甲双胍(metformin)、丁双胍(buformin)和所属领域中已知的双胍类。
[0300] 可以联合本发明的化合物使用的合适医药试剂包括α-葡萄糖苷酶抑制剂。所述α-葡萄糖苷酶抑制剂竞争性抑制胰腺或小肠中的例如α-淀粉酶、麦芽糖酶、α-糊精酶和蔗糖酶等的消化酶。α-葡萄糖苷酶抑制剂的可逆抑制通过延迟淀粉和糖的消化而阻碍、减少或以其他方式降低血糖水平。α-葡萄糖苷酶抑制剂的实例包括阿卡波糖、N-(1，3-二羟基-2-丙基)valiolamine(通用名：伏格列波糖)、米格列醇和所属领域中已知的其它α-葡萄糖苷酶抑制剂。
[0301] 可以联合本发明的化合物使用的合适医药试剂包括过氧化物酶体增生物活化受体-γ(即PPAR-γ)激动剂。所述过氧化物酶体增生物活化受体-γ激动剂是一类激活核受体PPAR-γ并因此调节与葡萄糖产生、运输和利用的控制有关的胰岛素响应基因的转录的化合物。此类药剂还有利于脂肪酸代谢的调节。PPAR-γ激动剂的实例包括罗格列酮(rosiglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)、泰沙格列赛(tesaglitazar)、netoglitazone、GW-409544、GW-501516和所属领域中已知的PPAR-γ激动剂。
[0302] 可以联合本发明的化合物使用的合适医药试剂包括HMG-CoA还原酶抑制剂。所述HMG-CoA还原酶抑制剂还称为抑制素化合物，其属于一类通过抑制羟甲基戊二酰基CoA(HMG-CoA)还原酶来降低血液胆固醇水平的药物。所述抑制素通过上调LDL受体的活性降低血清LDL浓度并负责将LDL从血液中清除。所述抑制素的一些代表性实例包括罗素伐他汀(rosuvastatin)、普伐他汀(pravastatin)和其钠盐、辛伐他汀(simvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、BMS的“超级他汀(superstatin)”和所属领域中已知的HMG-CoA还原酶。
[0303] 可以联合本发明的化合物使用的合适医药试剂包括血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂。所述血管紧张素转化酶抑制剂属于一类通过抑制血管紧张素转化酶部分降低血糖水平并降低血压的药物。血管紧张素转化酶抑制剂的实例包括卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)、阿拉普利(alacepril)、地拉普利(delapril)、雷米普利(ramipril)、赖诺普利(lisinopril)、咪达普利(imidapril)、贝那普利(benazepril)、西罗普利(ceronapril)、西拉普利(cilazapril)、依那普拉(enalaprilat)、福辛普利(fosinopril)、莫福普利(moveltopril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、螺普利(spirapril)、替莫普利(temocapril)、群多普利(trandolapril)和所属领域中已知的血管紧张素转化酶抑制剂。
[0304] 可以联合本发明的化合物使用的合适医药试剂包括血管紧张素II受体拮抗剂。血管紧张素II受体拮抗剂是针对血管紧张素II受体1亚型(即AT1)并显示对高血压的有益作用。血管紧张素II受体拮抗剂的实例包括洛沙坦(losartan)(和其钠盐形式)和所属领域中已知的血管紧张素II受体拮抗剂。
[0305] 对一种或一种以上本文所提及的疾病的其它治疗包括使用一种或一种以上所属领域中已知的医药试剂，其属于(但不限于)以下药物种类：胰淀素(amylin)激动剂(例如普兰林肽(pramlintide))、胰岛素促分泌素(例如GLP-1激动剂、exendin-4和胰岛素促生素(NN2211))、二肽酰肽酶抑制剂(例如NVP-DPP-728)、酰基CoA胆固醇乙酰基转移酶抑制剂(例如依泽替米贝(Ezetimibe)、eflucimibe和类似化合物)、胆固醇吸收抑制剂(例如依泽替米贝、帕马喹(pamaqueside)和类似化合物)、胆固醇酯转移蛋白抑制剂(例如CP-529414、JTT-705、CETi-1、torcetrapib和类似化合物)、微粒体甘油三酯转移蛋白抑制剂(例如impl itapide和类似化合物)、胆固醇调节剂(例如NO-1886和类似化合物)、胆酸调节剂(例如GT103-279和类似化合物)和角鲨烯合成抑制剂。
[0306] 角鲨烯合成抑制剂属于一类通过抑制角鲨烯合成来降低血液胆固醇水平的药物。角鲨烯合成抑制剂的实例包括(S)-a-[双[2，2-二甲基-1-氧代丙氧基)甲氧基]氧膦基]-3-苯氧基苯丁磺酸、单钾盐(BMS-188494)和所属领域中已知的角鲨烯合成抑制剂。
[0307] 根据本发明，可以通过将代表性活性组份一同或单独与上文描述的医药上可接受的载剂、赋形剂、粘合剂、稀释液等混合并将所述混合物作为医药组合物通过口服或非口服给药来使用所述组合。当本发明的化合物或化合物的混合物作为联合疗法与另一活性化合物一起给药时，所述治疗剂可以经调配成同时或不同时间给药的单独医药组合物或所述治疗剂可以作为单一组合物给药。
[0308] 根据本发明，本发明的化合物与医药试剂的组合优选地是通过将代表性活性组份一同或单独与上文描述的医药上可接受的载剂、赋形剂、粘合剂、稀释液等混合并将所述混合物作为医药组合物通过口服或非口服给药来制备。当本发明的化合物或化合物的混合物作为联合疗法与另一活性化合物一起给药时，所述治疗剂可以经调配成同时或不同时间给药的单独医药组合物或所述治疗剂可以作为单一组合物给药。
[0309] 标记化合物和分析方法
[0310] 本发明的另一个目标涉及式(I)的放射性标记化合物，其不仅适用于放射成像，也适用于活体外和活体内分析，以用于在包括人的组织样品中定位和计数RUP25并用于通过抑制放射性标记化合物的结合来识别RUP25配体。本发明的另一目标包括新颖的RUP25分析法，其中包含此类放射性标记化合物。
[0311] 本发明包含同位素标记的式(I)化合物和任何亚属，例如(但不限于)式(Ia)到(Iz)以及(IIa)到(IId)。“同位素”或“放射性标记”的化合物与本文揭示的化合物的不同之处仅在于一个或一个以上的原子被原子量或质量数与自然中(即，天然发生)通常发现的原子量或质量数不同的原子替代或取代。可以并入本发明化合物中的合适的放射性核2 3 11 13 14 13 15 15
素包括(但不限于)H(还写作D，代表氘)、H(还写作T代表氚)、C、C、C、N、N、O、
17 18 18 35 36 82 75 76 77 123 124 125 131
O、O、F、S、Cl、Br、Br、Br、Br、I、 I、I和 I。并入本发明放射性标记化合物中的放射性核素将取决于所述放射性标记化合物的特定应用。例如，对于活体外RUP25标
3 14 82 125 131 34
记和竞争分析，并入 H、C、Br、 I、I、S或的化合物通常会是最有用的。对于放射成像
11 18 125 123 124 131 75 76 77
应用，C、F、I、 I、I、 I、Br、Br或 Br通常会是最有用的。
素包括(但不限于)H(还写作D，代表氘)、H(还写作T代表氚)、C、C、C、N、N、O、
17 18 18 35 36 82 75 76 77 123 124 125 131
O、O、F、S、Cl、Br、Br、Br、Br、I、 I、I和 I。并入本发明放射性标记化合物中的放射性核素将取决于所述放射性标记化合物的特定应用。例如，对于活体外RUP25标
3 14 82 125 131 34
记和竞争分析，并入 H、C、Br、 I、I、S或的化合物通常会是最有用的。对于放射成像
11 18 125 123 124 131 75 76 77
应用，C、F、I、 I、I、 I、Br、Br或 Br通常会是最有用的。
[0312] 应理解，“放射性标记”或“标记化合物”是已经并入至少一个放射性核素的式(I)3 14 125 35 82
化合物，在一些实施例中，所述放射性核素选自由 H、C、 I、S和 Br组成的群组。
化合物，在一些实施例中，所述放射性核素选自由 H、C、 I、S和 Br组成的群组。
[0313] 本发明的特定同位素标记化合物适用于化合物和/或基底组织分布分析。在一些3 14 2
实施例中，放射性核素 H和/或 C同位素适用于这些研究。另外，用例如氘(即 H)的较重的同位素取代因更强的代谢稳定性(例如活体内半衰期的增加或剂量要求的减少)而能够提供特定的治疗优势并因而在一些情况中成为优选。本发明的同位素标记化合物通常可以通过以下与上文的流程图和下文的实例中揭示的相似的程序利用同位素标记试剂替代非同位素标记试剂而制备。其它有用的合成方法在下文中有所论述。此外，应理解在本发明的化合物中提供的所有原子可以是这些原子最常见的同位素也可以是更稀有的放射性同位素或非放射性同位素。
实施例中，放射性核素 H和/或 C同位素适用于这些研究。另外，用例如氘(即 H)的较重的同位素取代因更强的代谢稳定性(例如活体内半衰期的增加或剂量要求的减少)而能够提供特定的治疗优势并因而在一些情况中成为优选。本发明的同位素标记化合物通常可以通过以下与上文的流程图和下文的实例中揭示的相似的程序利用同位素标记试剂替代非同位素标记试剂而制备。其它有用的合成方法在下文中有所论述。此外，应理解在本发明的化合物中提供的所有原子可以是这些原子最常见的同位素也可以是更稀有的放射性同位素或非放射性同位素。
[0314] 用于将放射性同位素并入有机化合物中的合成方法适用于本发明的化合物并且是所属领域中众所周知的。举例来说，这些合成方法将放射水平的氚并入目标分子中，并且如下所述：
[0315] A.用氚气催化还原--此程序通常产生高特异性放射性产物并需要卤化的或不饱和的前体。
[0316] B.用硼氢[3H]化钠还原--此程序成本非常高，并且需要前体含有例如醛、酮、内酯、酯和其类似物的可还原官能团。
[0317] C.用氢[3H]化铝锂还原--此程序提供具有几乎理论上的特异性放射性的产物。它也需要前体含有例如醛、酮、内酯、酯和其类似物的可还原官能团。
[0318] D.氚气暴射标记--此程序涉及将含有可交换质子的前体在合适催化剂的存在下暴露于氚气中。
[0319] E.使用甲基碘[3H]的N-甲基化--此程序通常用于通过用高特异性放射性的甲3 3
基碘(H)处理合适的前体来制备O-甲基或N-甲基(H)产物。此方法通常得到高特异性放射性，例如约70-90Ci/mmol。
基碘(H)处理合适的前体来制备O-甲基或N-甲基(H)产物。此方法通常得到高特异性放射性，例如约70-90Ci/mmol。
[0320] 将放射性水平的125I并入目标分子的合成方法包括：
[0321] A.Sandmeyer和类似反应--此程序将芳基或杂芳基胺转化成例如四氟硼酸盐的125 125
重氮盐，并接着使用Na I转化成 I标记的化合物。代表性程序由Zhu，D.-G.和同事在J.Org Chem.2002，67，943-948中有报道。
重氮盐，并接着使用Na I转化成 I标记的化合物。代表性程序由Zhu，D.-G.和同事在J.Org Chem.2002，67，943-948中有报道。
[0322] B.苯酚的邻位125碘化--此程序允许在苯酚的邻位并入125I，如Collier，T.L.和同事在J.Labeled Compd Radiopharm.1999，42，S264-S266的报道。
[0323] C.用125I替换芳基溴和杂芳基溴--此方法通常包括两个步骤。第一个步骤是将芳基或杂芳基溴在三烷基卤化锡或六烷基二锡[例如(CH3)3SnSn(CH3)3]的存在下利用(例如)Pd催化反应[即Pd(Ph3P)4]转化成相应的三烷基锡中间体。代表性程序由Bas，M.-D.和同事在J.Labeled Compd Radiopharm.2001，44，S280-S282中有报道。
[0324] 式(I)的放射性标记RUP25化合物可用于筛选分析以鉴定/评价化合物。一般来说，可以评价新合成的或经鉴定的化合物(即受试化合物)降低“式(I)的放射性标记化合物”与RUP25受体结合的能力。因此，受试化合物与“式(I)的放射性标记化合物”竞争结合到RUP25受体的能力直接与其结合亲和性相关。
[0325] 本发明的标记化合物结合到RUP25受体。在一个实施例中，所述标记化合物具有小于约500μM的ICa0；在另一实施例中，所述标记化合物具有小于约100μM的ICa0；在另一实施例中，所述标记化合物具有小于约10μM的IC50；在另一实施例中，所述标记化合物具有小于约1μM的IC50；在另一实施例中，所述标记化合物具有小于约0.1μM的ICa0。
[0326] 所述领域的技术人员尤其在阅读本揭示内容后将显而易见所揭示受体和方法的其它用途。
[0327] 应了解，本发明方法的步骤不需要实施任何特定次数或以任何特定顺序实施。在查阅以下实例之后，所属领域的技术人员将明显可见本发明的其它目标、优势和新颖特征，所述实例仅欲具有说明性而不欲具有限制性。
[0328] 实例
[0329] 以下实例仅为说明性目的提供而没有限制性含义。所属领域的普通技术人员将能够根据本文揭示内容设计等效的分析和方法，所有这些都形成本发明的一部分。
[0330] 实例1
[0331] 啮齿类动物糖尿病模型
[0332] 人们已研发出与肥胖症和胰岛素抵抗相关的啮齿类动物2型糖尿病模型。为了解疾病的病理生理学和测试候选治疗化合物[Diabetes(1983)32：830-838；Annu Rep SankyoRes Lab(1994)46：1-57]，人们已研发出例如小鼠中的db/db和ob/ob基因模型[见Diabetes(1982)31：1-6]和zucker大鼠中的fa/fa基因模型。由Jackson实验室研发的纯合子动物C57BL/KsJ-db/db小鼠是肥胖、高血糖、高胰岛素和胰岛素抵抗的[J ClinInvest(1990)85：962-967]，而杂合子动物是瘦的并且血糖正常的。在db/db模型中，随着年龄增长小鼠逐渐形成胰岛素缺乏，这是在人类2型糖尿病晚期中当糖水平未能充分控制时的常见特征。由于此模型类似于人类2型糖尿病，因此测试本发明化合物对包括(但不限于)降低血浆葡萄糖和甘油三酯的活性。Zucker(fa/fa)大鼠为严重肥胖、高胰岛素和胰岛素抵抗的{Coleman，Diabetes(1982)31：1；E Shafrir in DiabetesMellitus，H Rifkin和D Porte，Jr，Eds[Elsevier Science Publishing公司，纽约，第4版，(1990)，第299-340页]}，并且fa/fa突变可能是鼠类db突变的大鼠等效突变[Friedman等人，Cell(1992)69：217-220；Truett等人，Proc Natl Acad Sci USA(1991)88：7806]。矮胖(tub/tub)小鼠的特征是肥胖、中等胰岛素抵抗和高胰岛素而无显著高血糖[Coleman等人，Heredity(1990)81：424]。
[0333] 本发明涵盖本发明的化合物在任一种或所有以上啮齿类动物糖尿病模型中、在患有2型糖尿病或其它优选代谢相关疾病或先前描述的脂类代谢病症的人或基于其它哺乳动物的模型中降低胰岛素抵抗和高血糖症的用途。将测试血浆葡萄糖和胰岛素水平，以及其它包括(但不限于)血浆游离脂肪酸和甘油三酯的因素。
[0334] 本发明化合物抗高血糖活性的活体内分析
[0335] 遗传改变的肥胖糖尿病小鼠(db/db)(雄性，7-9周)在22℃和50％的相对湿度的标准实验条件下饲养(每笼7-9只小鼠)，并且用Purina啮齿类动物食物和随意量的水的饮食供养。在治疗之前，从每个动物的尾静脉采集血液，并使用One Touch BasicGlucose Monitor System(Lifescan)确定血糖浓度。使用血浆葡萄糖水平在250到500mg/dl之间的小鼠。每个治疗组由七只小鼠组成，按照研究开始时每个组的平均葡萄糖水平相等来分配小鼠。db/db小鼠通过使用异氟烷麻醉插入的微渗泵，向小鼠皮下(s.c.)提供本发明的化合物、生理盐水或不相关的化合物。此后，定期从尾静脉采集血样并分析血糖浓度。使用Student t-test评价各组之间的显著差异(将用本发明的化合物处理的与生理盐水处理的相比较)。
[0336] 实例2
[0337] 小鼠动脉硬化症模型
[0338] 通过剔除脂联素基因产生的脂联素缺乏的小鼠已显示易感于动脉硬化并呈胰岛素抵抗。所述小鼠同时还是缺血性心脏病的合适模型[Matsuda，M等人.J Biol Chem(2002)7月，和文中引用的参考文献，其全文以引用的方式并入本文中]。
[0339] 脂联素剔除小鼠在22℃和50％的相对湿度的标准实验条件下饲养(每笼7-9只小鼠)。所述小鼠通过使用异氟烷麻醉插入的微渗泵，向小鼠皮下(s.c.)提供本发明的化合物、生理盐水或不相关的化合物。对不同时间间隔处死的不同组的小鼠确定新内膜增厚和缺血性心脏病。使用Student t-test评价各组之间的显著差异(将用本发明的化合物处理的与生理盐水处理的相比较)。
[0340] 实例3
[0341] 活体外生物学活性
[0342] 根据以下方案，利用改进的Flash PlateTM腺苷酸环化酶试剂盒(NewEnglandNuclear，编号SMP004A)来直接鉴定作为hRUP25的激动剂的候选化合物。术语hRUP25包括在核苷酸的基因库登录号NM_177551和多肽的基因库登录号NP 808219中发现的人类序列和其自然发生的等位基因突变、哺乳动物直系同源基因和重组突变。
[0343] 用编码hRUP25的表达载体稳定转染并在允许细胞表面表达编码hRUP25受体的条件下培养的CHO细胞经由非酶方式从烧瓶中收获。将细胞在PBS中洗涤并重悬于厂商的分析缓冲液中。使用血球计数器和台盼蓝拒染法(Trypan blue exclusion)对活细胞进行计6
数，并将细胞浓度调整到每毫升2×10 个细胞。根据厂商说明书制备并保存cAMP标准液
125
和检测缓冲液(包含2μCi的示踪[ I]-cAMP(100μl)对11ml的检测缓冲液)。将如上文鉴定的候选化合物(如果冰冻，在室温下解冻)按增加的浓度(3微升/孔；12μM最终分析浓度)添加到各自的孔中(优选96孔板)。向这些孔中加入其中有100，000个细胞的
50μl分析缓冲液，并将所述混合物在室温下培育30分钟，同时轻微振荡。培育之后，向每TM
个孔中加入100μl的检测缓冲液，接着培育2-24小时。在Wallac MicroBeta 平板阅读器中使用“Prot.#31”对板进行计数(根据厂商说明书)。
数，并将细胞浓度调整到每毫升2×10 个细胞。根据厂商说明书制备并保存cAMP标准液
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和检测缓冲液(包含2μCi的示踪[ I]-cAMP(100μl)对11ml的检测缓冲液)。将如上文鉴定的候选化合物(如果冰冻，在室温下解冻)按增加的浓度(3微升/孔；12μM最终分析浓度)添加到各自的孔中(优选96孔板)。向这些孔中加入其中有100，000个细胞的
50μl分析缓冲液，并将所述混合物在室温下培育30分钟，同时轻微振荡。培育之后，向每TM
个孔中加入100μl的检测缓冲液，接着培育2-24小时。在Wallac MicroBeta 平板阅读器中使用“Prot.#31”对板进行计数(根据厂商说明书)。
[0344] 本发明的特定化合物在cAMP全细胞方法中的EC50为约25μM或更少。
[0345] 实例4：活体外生物学活性
[0346] 35S-GTPγS结合分析：
[0347] 将从稳定表达尼克酸受体或载体对照(7微克/分析液)的中国仓鼠卵巢(CHO)-K1细胞制备的膜用分析缓冲液(100mM HEPES、100mM NaCl和10mM MgCl2，pH 7.4)在
35
Wallac Scintistrip板中稀释，并在加入 S-GTPγS到0.3nM之前，与在含有40μMGDP(最终[GDP]为10μM)的分析缓冲液中稀释的测试化合物一同预培育约10分钟。为避免可能的化合物沉淀，将所有的化合物首先在100％DMSO中制备并接着用分析缓冲液稀释，得到分析液中3％的DMSO终浓度。结合进行一个小时之后，将板以4000rpm离心15分钟，接着在TopCount闪烁计数器中计数。结合曲线的非线性回归分析在GraphPadPrism中实施。
35
Wallac Scintistrip板中稀释，并在加入 S-GTPγS到0.3nM之前，与在含有40μMGDP(最终[GDP]为10μM)的分析缓冲液中稀释的测试化合物一同预培育约10分钟。为避免可能的化合物沉淀，将所有的化合物首先在100％DMSO中制备并接着用分析缓冲液稀释，得到分析液中3％的DMSO终浓度。结合进行一个小时之后，将板以4000rpm离心15分钟，接着在TopCount闪烁计数器中计数。结合曲线的非线性回归分析在GraphPadPrism中实施。
[0348] 膜制备
[0349] 材料：
[0350] CHO-K1细胞培养基：F-12Kaighn’s改进细胞培养基，含有10％FBS、2mM L-谷氨酸、1mM丙酮酸钠和400μg/ml G418
[0351] 膜刮除缓冲液：20mM HEPES
[0352] 10mM EDTA，pH 7.4
[0353] 膜洗涤缓冲液：20mM HEPES
[0354] 0.1mM EDTA，pH 7.4
[0355] 蛋白酶抑制剂混合液：P-8340(Sigma，St.Louis，MO)
[0356] 步骤：
[0357] ○将细胞培养基从15cm2板中吸出，用5ml冷的PBS冲洗并吸出。
[0358] ○加入5ml膜刮除缓冲液并刮除细胞。将刮除物转移到50ml离心管中。加入50μL蛋白酶抑制剂混合液。
[0359] ○在4℃下以20,000rpm离心17分钟。
[0360] ○吸出上清液并将沉淀物(pellet)重悬于30ml膜洗涤缓冲液中。加入50μL蛋白酶抑制剂混合液。
[0361] ○在4℃下以20,000rpm离心17分钟。
[0362] ○将上清液从膜沉淀物中吸出。将沉淀物在-80℃下冰冻以供以后使用或可以立即使用。
[0363] 分析
[0364] 材料：
[0365] 鸟嘌呤核苷5’-二磷酸钠盐(GDP，Sigma-Aldrich编号87127)
[0366] 鸟 嘌 呤 核 苷5’-[γ35S] 硫 代 三 磷 酸 盐、三 乙 基 铵 盐 ([35S]GTPγS，AmershamBiosciences编号SJ1320，约1000Ci/mmol)
[0367] 96孔闪烁板(Perkin-Elmer型号1450-501)
[0368] 结合缓冲液：20mM HEPES，pH 7.4
[0369] 100mM NaCl
[0370] 10mM MgCl2
[0371] GDP缓冲液：结合缓冲液加上GDP，0.4到0μM，分析前新鲜配制
[0372] 步骤：
[0373] (总分析容量＝100μl/孔)
[0374] 25μL GDP缓冲液，含有或不含有化合物(最终GDP 10μM-因此使用40μM储备液)
[0375] 结合缓冲液中的50μL膜(0.4mg蛋白质/毫升)
[0376] 结合缓冲液中的25μL[35S]GTPyS。通过将5μl[35S]GTPγS储备液添加到10ml结合缓冲液(此缓冲液不含GDP)中制成。
[0377] ○解冻将要筛选的化合物板(子板具有5μl化合物，在100％DMSO中2mM)。
[0378] ○用245μL GDP缓冲液将2mM的化合物按1∶50稀释成2％DMSO中的40μM。将冰冻的膜沉淀物在冰上解冻。
[0379] ○快速摇匀膜，直至使用POLYTRON PT3100(探针PT-DA 3007/2设定为7000rpm)重悬。通过Bradford分析确定膜蛋白质浓度。将膜在结合缓冲液中稀释到蛋白质浓度为0.40mg/ml。(注意：最终分析浓度为20微克/孔)
[0380] ○向闪烁板中每孔加入25μL在GDP缓冲液中的化合物。
[0381] ○向闪烁板中每孔加入50μL膜。
[0382] ○室温下预培育5-10分钟。
[0383] ○加入25μL经过稀释的[35S]6TPyS。室温下在振荡器(Lab-Line型号1314，振荡设定为4)上培育60分钟。
[0384] ○通过22℃下以2500rpm旋转用板盖密封的板20分钟停止分析。
[0385] ○在TopCount NXT闪烁计数器上阅读--35S方案。
[0386] 本发明的特定化合物在此功能性活体外GTPγS结合分析中的EC50为约10-100μM。本发明的更具优势的化合物在此分析中的EC50值为约1-10μM。另外更具优势的化合物在此分析中的EC50值小于约1μM。
[0387] 实例5
[0388] 活体内动物模型
[0389] 本发明的化合物作为医药试剂在预防和治疗高总胆固醇/HDL-胆固醇比和与其相关的病况中的一个用途由所述化合物在活体内猪模型中降低总胆固醇与HDL-胆固醇之比、提高HDL-胆固醇或避免动脉硬化症的活性而得到体现。因为猪比大多数其它动物模型更接近地反映人类的生理学、尤其是脂类代谢，所以将其用作动物模型。本文提出说明性而无限制性目的的活体内猪模型。
[0390] 在50天期间用富含饱和脂肪酸和胆固醇(SFA-CHO)的食物喂养约克郡(Yorkshire)白化病猪(体重25.5±4kg)(每35千克体重喂食1千克)，所述食物由标
准食物补充2％胆固醇和20％牛脂组成[Royo T等人，European Journal of Clinical Investigation(2000)30：843-52，此文以全文引用的方式并入本文中]。在SFA-CHO饮食中，饱和与不饱和脂肪酸的比从正常猪食物的0.6调到1.12。将动物分成两组，一组(n＝
8)用SFA-CHO饮食喂养并用安慰剂处理，一组(n＝8)用SFA-CHO食物喂养并用化合物处-1
理(3.0mg kg )。对照动物用标准食物喂养50天。在基线时(动物接收后2天)和所述饮食起始后50天采集血样。分析血脂。处死动物并验尸。
准食物补充2％胆固醇和20％牛脂组成[Royo T等人，European Journal of Clinical Investigation(2000)30：843-52，此文以全文引用的方式并入本文中]。在SFA-CHO饮食中，饱和与不饱和脂肪酸的比从正常猪食物的0.6调到1.12。将动物分成两组，一组(n＝
8)用SFA-CHO饮食喂养并用安慰剂处理，一组(n＝8)用SFA-CHO食物喂养并用化合物处-1
理(3.0mg kg )。对照动物用标准食物喂养50天。在基线时(动物接收后2天)和所述饮食起始后50天采集血样。分析血脂。处死动物并验尸。
[0391] 或者，前述分析包含多个组，每个组用不同剂量的化合物处理。优选的所述剂量选-1 -1 -1 -1 -1 -1 -1自由0.1mg kg 、0.3mg g 、1.0mg kg 、3.0mg kg 、10mg kg 、30mgkg 和100mg kg 组成的群组。或者，前述分析在多个时间点进行。优选的所述时间点选自由10周、20周、30周、
40周和50周组成的群组。
40周和50周组成的群组。
[0392] HDL-胆固醇
[0393] 血液采集在柠檬酸三钠(3.8％，1∶10)中。离心(1200g，15分钟)后获得血浆并立即处理。使用自动分析仪Kodak Ektachem DT系统(美国纽约Rochester的EastmanKodak公司)测量总胆固醇、HDL-胆固醇和LDL-胆固醇。值参数超出所述范围的样品用厂商提供的溶液稀释，并接着重新分析。确定总胆固醇/HDL-胆固醇比。比较各组之间的HDL-胆固醇水平。比较各组之间的总胆固醇/HDL-胆固醇比。
[0394] 给予所述化合物后，HDL-胆固醇的上升或总胆固醇/HDL-胆固醇比的降低作为所述化合物具有前述效用的指示。
[0395] 动脉硬化症
[0396] 将胸部和腹部大动脉完整移出，沿腹部表面纵向剪开，并在从胸部和腹部大动脉的标准位置切下样品之后在中性缓冲的福尔马林中固定，以用于组织学检测和脂质组合物与合成研究。固定后，用苏丹IV将整个动脉染色并用针铺平，用连接到计算机图像分析系统(Image Pro Plus；Media Cybernetics，Silver Spring，MD)的TV相机获得数字图像，用以确定有动脉粥样硬化损伤的动脉表面的百分比[Gerrity RG等人，Diabe tes(2001)50：1654-65；Cornhill JF等人，Arteriosclerosis，Thrombosis，andVascular Biology(1985)5：415-26；均以全文引用的方式并入本文中]。比较各组之间有动脉粥样硬化损伤的动脉表面的百分比。
[0397] 给予所述化合物后有动脉粥样硬化损伤的动脉表面的百分比的降低作为所述化合物具有前述效用的指示。
[0398] 实例6
[0399] 受体结合分析
[0400] 除本文描述的方法之外，另一种用于评价受试化合物的方法是通过确定它与RUP25受体的结合亲和力来实现。此类型的分析通常需要RUP25受体的放射性标记配体。不使用RUP25受体的已知配体和其放射性标记配体时，式(I)化合物可以用放射性同位素标记并在用于评价受试化合物与RUP25受体的亲和力的分析法中使用。
[0401] 式(I)的放射性标记RUP25化合物可以用在筛选分析中以鉴定/评价化合物。一般来说，可以评价新合成或经鉴定的化合物(即受试化合物)降低“式(I)的放射性标记化合物”与RUP25受体结合的能力。因此，受试化合物与“式(I)的放射性标记化合物”或放射性标记RUP25配体竞争结合到RUP25受体的能力直接与它与RUP25受体的结合亲和力相关。
[0402] 用于确定RUP25受体结合的分析方案：
[0403] A.RUP25受体制备
[0404] 用10μg人RUP25受体和60μl脂质转染试剂(每15cm培养皿)瞬间转染的293个细胞(人肾脏，ATCC)在培养皿中生长24小时(75％融合)，其中用10毫升/培养皿的Hepes-EDTA缓冲液(20mM Hepes+10mM EDTA，pH 7.4)替换并移除培养基。在Beckman Coulter离心机中将细胞以17,000rpm离心20分钟(JA-25.50转子)。此后，将沉淀物在
20mM Hepes+1mM EDTA(pH 7.4)中并用50ml杜恩斯(Dounce)匀浆器匀化，并再次离心。除去上清液之后，将沉淀物在-80℃下储存，直至用于结合分析。当用于分析中时，使膜在冰上解冻20分钟并接着加入10ml培育缓冲液(20mM Hepes，1mM MgCl2，100mM NaCl，pH 7.4)。
将所述膜形成旋流用来重悬粗制膜沉淀物并用Brinkmann PT-3100Polytron匀浆器设定为
6匀化15秒。使用BRL Bradford蛋白质分析确定膜蛋白质的浓度。
20mM Hepes+1mM EDTA(pH 7.4)中并用50ml杜恩斯(Dounce)匀浆器匀化，并再次离心。除去上清液之后，将沉淀物在-80℃下储存，直至用于结合分析。当用于分析中时，使膜在冰上解冻20分钟并接着加入10ml培育缓冲液(20mM Hepes，1mM MgCl2，100mM NaCl，pH 7.4)。
将所述膜形成旋流用来重悬粗制膜沉淀物并用Brinkmann PT-3100Polytron匀浆器设定为
6匀化15秒。使用BRL Bradford蛋白质分析确定膜蛋白质的浓度。
[0405] B.结合分析
[0406] 为完全结合，向96孔聚丙烯微滴定板加入总量为50μl的适当稀释的膜(在含有50mM的Tris HCl(pH 7.4)、10mM MgCl2和1mM EDTA的分析缓冲液中稀释；5-50μg的蛋白质)，接着加入100μl分析缓冲液和50μl放射性标记的RUP25配体。对于非特异性结合，加入50μl的分析缓冲液而不是100μl，并在加入50μl放射性标记RUP25配体之前，加入另外的50μl的10μM冷RUP25。将板在室温下培育60-120分钟。通过带有Brandell 96孔板收集器的Microplate Devices GF/C Unifilter过滤板过滤分析板来终止结合反应，接着用冷的含有0.9％NaCl的50mM Tris HCl(pH 7.4)洗涤。接着，密封所述过滤板的底部，向每孔中加入50μl Optiphase Supermix，密封板的顶部。并在Trilux MicroBeta闪烁计数器中对板计数。对于化合物竞争性研究，不是加入100μl的分析缓冲液，而是向合适的孔中加入适当稀释的受试化合物，接着加入50μl放射性标记的RUP25配体。
[0407] C.计算
[0408] 受试化合物最初以1和0.1μM的浓度分析并且随后在一定浓度范围中选择，使得中间剂量将会导致放射-RUP25配体结合约50％的抑制(即IC50)。受试化合物不存在时的特异性结合(Bo)是完全结合(BT)减去非特异性结合(NSB)的差值，类似地，特异性结合(存在受试化合物时)(B)为偏移结合(displacement binding)(BD)减去非特异性结合(NSB)的差值。从抑制响应曲线-B/Bo％对受试化合物浓度的logit-log曲线，来确定IC50。
[0409] 通过Cheng和Prustoff转换计算Ki：
[0410] Ki＝IC50/(1+[L]/K0)
[0411] 其中，[L]为分析中使用的放射-RUP25配体的浓度，且KD为在相同结合条件下单独确定的放射-RUP25配体的解离常数。
[0412] D.替代性结合分析程序
[0413] 3H尼克酸结合竞争分析。
[0414] 使用可稳定表达尼克酸受体的CHO-KI细胞来制备用于结合分析的膜。细胞在生长培养基(F-12Kaighn氏改进培养基(ATCC，#30-2004)，含有10％FBS(GIBCO，#10438-026)、1mg/ml G418(GIBCO，#10131-027)和1×Pen-Strep(Sigma P-0871))中生长到约80％铺满、通过刮除收集、并在4摄氏度以12000Xg离心10分钟。将细胞沉淀物重悬在收集缓冲液(20mM HEPES，10mM EDTA，pH 7.4)中，并用12mm Polytron匀浆器(设定为5)以4×10秒脉冲匀浆化。将溶胞产物在4℃下以2000×g离心10分钟，以移除未裂解细胞和核，并将所得上清液在4℃下以39000×g离心45分钟以沉淀膜。将所得沉淀物重悬在洗涤缓冲液(20mM HEPES，0.1mM EDTA，pH 7.4)中，用12mm Polytron(设定为4)以3×10秒脉冲匀浆化，并在4℃下以39000×g再次离心45分钟。将所得沉淀物重悬在洗涤缓冲液中并保存在液氮中直到使用。用BSA作为标准品，使用Pierce BCA蛋白质分析确定在此制剂中的膜蛋白质浓度。
[0415] 在96孔聚丙烯板中实施3H尼克酸平衡结合(equilibrium binding)。反应物含有140μl稀释于分析缓冲液中的膜(20mM HEPES，pH 7.4，1mM MgCl2，和0.01％CHAPS；15-30μg膜蛋白质/分析)、20μl稀释于分析缓冲液中的受试化合物(化合物储备液存在于100％DMSO中；此分析中的DMSO最终浓度为0.25％)和40μl 250nM氚化尼克酸([5，
3
6-H]-尼克酸：American Radiolabeled Chemicals有限公司，20μM，存于乙醇中；每次分析中的乙醇最终浓度为1.5％)。在250μM未标记尼克酸的存在下测定非特异性结合。室温下混合3-4个小时后，使用Packard收集器通过Packard UnifilterGF/C板过滤反应物，并用8×200μl的冰冷结合缓冲液洗涤。将板过夜干燥，并用为GF/C板设计的PerkinElmer胶带密封其背面。向每个孔中加入40μl PerkinElmerMicroscint-20闪烁液，密封顶部，并在Packard TopCount闪烁计数器中对板进行分析。
3
6-H]-尼克酸：American Radiolabeled Chemicals有限公司，20μM，存于乙醇中；每次分析中的乙醇最终浓度为1.5％)。在250μM未标记尼克酸的存在下测定非特异性结合。室温下混合3-4个小时后，使用Packard收集器通过Packard UnifilterGF/C板过滤反应物，并用8×200μl的冰冷结合缓冲液洗涤。将板过夜干燥，并用为GF/C板设计的PerkinElmer胶带密封其背面。向每个孔中加入40μl PerkinElmerMicroscint-20闪烁液，密封顶部，并在Packard TopCount闪烁计数器中对板进行分析。
[0416] 如上文C中所述进行计算。
[0417] 本发明的特定化合物在3H尼克酸结合竞争性分析中的EC50为约10到约100μM。本发明的更具优势的化合物在此分析中的EC50值为约1到约10μM。另外更具优势的化合物在此分析中的EC50值为小于约1μM。
[0418] 实例7：经由激光多普勒仪(Laser Doppler)测试面部发红
[0419] 步骤：使用10mg/ml/kg戊巴比妥钠将雄性C57B16小鼠(约25g)麻醉。当给予拮抗剂时，与戊巴比妥麻醉剂一同注射。十分钟后将动物置于激光下，并且将耳朵向后合拢以暴露前侧。将激光定位于耳朵的中央并聚焦到8.4-9.0V的强度(通常在耳朵上方约4.5cm)。以15乘15的图像格式开始获取数据，自动间隔，60个图像和20秒时间延迟，中等分辨率。受试化合物在第10个图像后注射腹腔内给药。图像1-10视为动物的基线并将数据归一化成基线平均强度的平均值。
[0420] 材料和方法--激光多普勒Pirimed Pimll；尼克酸(Sigma)；戊巴比妥(Abbott实验室)。
[0421] 实例8：在插入导管的雄性Sprague-Daly大鼠中游离脂肪酸产生的活体内抑制[0422] 对来源于活的、自由活动的大鼠的血清进行非酯化游离脂肪酸(NEFA)分析。向颈静脉内手术植入颈静脉导管，并在手术后允许动物恢复至少48小时。分析前使动物禁食约16小时。从所述导管抽取约200μl血液并代表基线NEFA血清样品。以各种浓度向个体大鼠腹膜内(IP)给药并且接着在指定时间点从所述导管抽取约200μl血液用于进一步的NEFA分析。根据厂商说明书(Wako Chemicals，美国；NEFA C)进行NEFA分析并且经由对已知标准曲线(已知游离脂肪酸的范围)的回归分析确定游离脂肪酸浓度。使用Excel和PrismGraph对数据做分析。
[0423] 实例9
[0424] 本发明将通过以下非限制性实例进行说明，其中(除另有说明)：
[0425] (i)所有操作均在室温或环境温度下进行，即在18-25℃的温度范围内；
[0426] (ii)溶剂的蒸发是在高达50℃的水浴温度中在减压下(4.5-30mmHg)使用旋转蒸发器进行的；
[0427] (iii)反应过程之后进行薄层色谱(TLC)和/或串联高效液相色谱(HPLC)，接着进行质谱分析(MS)，文中称为LCMS，并且任何反应时间都仅是说明性地给出；
[0428] (iv)所有最终化合物的结构都通过以下技术中的至少一种技术确认：MS或质子1
核磁共振(HNMR)波谱法，并且纯度经过以下技术中的至少一种技术确认：TLC或HPLC；
核磁共振(HNMR)波谱法，并且纯度经过以下技术中的至少一种技术确认：TLC或HPLC；
[0429] (v)如果给出产率，则仅是说明性的；
[0430] (vi)使用指定溶剂在Bruker Avance-400或Varian Unity或Varian Inova仪器1
上记录在400或500或600MHz下的 H NMR波谱；当以行列出时，NMR数据为主要鉴定质子的δ值的形式，相对于残留溶剂峰以每百万之份数(ppm)给出(氢的倍数和数目)；用于信号形状的常规缩写是：s.单峰；d.二重峰(明显)；t.三重峰(明显)；m.多重峰；br.宽峰；
上记录在400或500或600MHz下的 H NMR波谱；当以行列出时，NMR数据为主要鉴定质子的δ值的形式，相对于残留溶剂峰以每百万之份数(ppm)给出(氢的倍数和数目)；用于信号形状的常规缩写是：s.单峰；d.二重峰(明显)；t.三重峰(明显)；m.多重峰；br.宽峰；
[0431] (vii) 在 Waters Micromass 单 元 或 API 150EX 上 记 录 MS 数 据，用Hewlett-Packard(Agilent 1100)或Shimadzu(LC-10AD VP)HPLC仪器连接并在MassLynx/OpenLynx或Analyst 1.2软件上操作；用正(ES+)或负离子(ES-)检测使用电喷雾电离；用于LCMS ES+的方法是5.5分钟，1-2mL/min，10-95％B线性梯度(B＝0.05％TFA-乙腈，A＝0.05％TFA-水)，用于LCMS ES-的方法是5.5分钟，1-2mL/min，10-95％B线性梯度(B＝0.1％甲酸-乙腈，A＝0.1％甲酸-水)，Waters XTerra C 18-3.5um-50×3.0minID和二极管阵列检测；
[0432] (viii)由反相制备型HPLC(RPHPLC)纯化化合物的步骤可以在Waters Symmetry PrepdC18-5μm-30×100mmID上进行，或在Waters Atlantis Prep dC18-5μm-20×100mm ID上进行；20mL/min，10-100％B线性梯度，15分钟(B＝0.05％TFA-乙腈，A＝0.05％TFA-水)，和二极管阵列检测；
[0433] (ix)由反相制备型HPLC(RPHPLC)自动纯化化合物的步骤在Gilson系统上，使用YMC-Pack Pro C18柱(150×20mm内径)，以20mL/min用水中0-50％乙腈(0.1％TFA)洗脱来进行。
[0434] (x)由制备型薄层色谱法(PTLC)纯化化合物的步骤在涂覆有硅胶的20×20cm玻璃制备板(glass prep plate)上进行，或离心色谱法在chromatotron上使用涂覆有硅胶的转子进行，两者均从Analtech购得；
[0435] (xi)柱色谱法在硅胶柱上进行，使用Kieselgel 60，0.063-0.200mm(Merck)。
[0436] (xii)微波照射使用Smith合成器(Personal Chemistry)进行。
[0437] (xiii)化学符号具有其通常的含义；还使用以下缩写：v(容积)，w(重量)，b.p.(沸点)，m.p.(熔点)，L(升)，mL(毫升)，g(克)，mg(毫克)，mol(摩尔)，mmol(毫摩尔)，eq或equiv(当量)，IC50(产生最大可能抑制的50％的分子浓度)，EC50(产生最大可能效力或响应的50％的分子浓度)，μM(微摩尔)，nM(纳摩尔)。
[0438] 提供以下实例，以便更完全地理解本发明。所述实例不应理解为以任何方式限制本发明。
[0439] 实例9.1：3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物1)。
[0440]
[0441] 方法A：化合物1的制备。
[0442] 将1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-腈(0.022g，0.165mmol)和叠氮化钠(0.086g，3
1.30mmol)在DMF(3cm)中处理，在微波照射下经20分钟加热到175℃。将此溶液冷却到室
3
温，过滤并用乙酸乙酯洗涤过滤的固体。将合并后的溶液加入饱和碳酸氢钠水溶液(20cm)中并用乙酸乙酯洗涤。通过加入1M盐酸将水层酸化到pH 1并萃取到乙酸乙酯中。合并乙酸乙酯洗涤液并在减压下移除溶剂，所得的固体通过制备型HPLC纯化，得到呈白色固体
1
的3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑(0.012g，0.068mmol，41％)。H NMR δ(CD3OD)：2.88(类三重峰，2H，J＝7.0)，2.82(类三重峰，2H，J＝7.3)，2.64(类五重峰，+ +
2H，J＝7.1)；m/z(ES)：177[M+H]。
1.30mmol)在DMF(3cm)中处理，在微波照射下经20分钟加热到175℃。将此溶液冷却到室
3
温，过滤并用乙酸乙酯洗涤过滤的固体。将合并后的溶液加入饱和碳酸氢钠水溶液(20cm)中并用乙酸乙酯洗涤。通过加入1M盐酸将水层酸化到pH 1并萃取到乙酸乙酯中。合并乙酸乙酯洗涤液并在减压下移除溶剂，所得的固体通过制备型HPLC纯化，得到呈白色固体
1
的3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑(0.012g，0.068mmol，41％)。H NMR δ(CD3OD)：2.88(类三重峰，2H，J＝7.0)，2.82(类三重峰，2H，J＝7.3)，2.64(类五重峰，+ +
2H，J＝7.1)；m/z(ES)：177[M+H]。
[0443] 使用以下程序制备中间物1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-腈。
[0444] 步骤A：1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯
[0445]
[0446] 将环戊酮(10.0g，118.9mmol)在无水乙醇(30cm3)中处理并加入乙醇钠(53cm3，乙醇中21％，143mmol)。所得的溶液在氩气下搅拌10分钟，接着加入草酸二乙酯(19.1g，3
131mmol)。再加入乙醇(10cm)并将所述溶液在75℃加热3小时并冷却至室温。加入在
3
水(20cm)中处理过的盐酸肼(8.15g，119mmol)并将溶液加热到75℃过夜。在减压下移
3 3
除溶剂并将所得物在乙酸乙酯(200cm)中处理并用水(200cm)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在减压下移除溶剂，得到呈灰白色的1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯(16.16g，
90.0mmol，76％)。δH(CD3OD)：4.34(q，2H，J＝7.1，OCH2CH3)，2.78(类三重峰，2H，J＝7.0)，+ +
2.72(br s，2H)，2.49(br s，2H)，1.36(t，3H，J-7.1，OCH2CH3).m/z(ES)：181[M+H]。
131mmol)。再加入乙醇(10cm)并将所述溶液在75℃加热3小时并冷却至室温。加入在
3
水(20cm)中处理过的盐酸肼(8.15g，119mmol)并将溶液加热到75℃过夜。在减压下移
3 3
除溶剂并将所得物在乙酸乙酯(200cm)中处理并用水(200cm)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在减压下移除溶剂，得到呈灰白色的1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯(16.16g，
90.0mmol，76％)。δH(CD3OD)：4.34(q，2H，J＝7.1，OCH2CH3)，2.78(类三重峰，2H，J＝7.0)，+ +
2.72(br s，2H)，2.49(br s，2H)，1.36(t，3H，J-7.1，OCH2CH3).m/z(ES)：181[M+H]。
[0447] 步骤B：1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺
[0448]
[0449] 将1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯(0.808g，4.48mmol)在甲醇氨(约7M，3
12cm)中处理并在95℃搅拌过夜。冷却所得的溶液并通过真空过滤收集呈白色结晶固体的沉淀1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(0.438g，2.90mmol，65％)。δH(CD3OD)：
+
2.79(类三重峰，2H，J＝6.9)，2.73(类三重峰，2H，J＝7.3)，2.55(br s，2H)；m/zS)：
+
152[M+H]。
12cm)中处理并在95℃搅拌过夜。冷却所得的溶液并通过真空过滤收集呈白色结晶固体的沉淀1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(0.438g，2.90mmol，65％)。δH(CD3OD)：
+
2.79(类三重峰，2H，J＝6.9)，2.73(类三重峰，2H，J＝7.3)，2.55(br s，2H)；m/zS)：
+
152[M+H]。
[0450] 步骤C：1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-腈
[0451]
[0452] 将1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(0.210g，1.39mmol)加入无水乙腈3
(12cm)中，加热到80℃并加入氯化钠(2.0g，34mmol)。15分钟后加入磷酰氯(0.128g，
0.83mmol)并将溶液加热到80℃过夜，冷却，过滤，并将收集的固体用乙腈洗涤。在减压下从合并后的溶液中移除溶剂，并用制备型HPLC纯化所得固体，得到呈深紫色固体的1，4，5，
6-四氢-环戊吡唑-3-腈(0.031g，0.23mmol，17％)。δH(CD3OD)：2.79(类三重峰，2H，J+ +
＝7.3)，2.73(类三重峰，2H，J＝7.1)，2.65-2.55(m，2H)；m/z(ES ：134[M+H]。
(12cm)中，加热到80℃并加入氯化钠(2.0g，34mmol)。15分钟后加入磷酰氯(0.128g，
0.83mmol)并将溶液加热到80℃过夜，冷却，过滤，并将收集的固体用乙腈洗涤。在减压下从合并后的溶液中移除溶剂，并用制备型HPLC纯化所得固体，得到呈深紫色固体的1，4，5，
6-四氢-环戊吡唑-3-腈(0.031g，0.23mmol，17％)。δH(CD3OD)：2.79(类三重峰，2H，J+ +
＝7.3)，2.73(类三重峰，2H，J＝7.1)，2.65-2.55(m，2H)；m/z(ES ：134[M+H]。
[0453] 方法B：化合物1的制备。
[0454]
[0455] 使空气在搅拌中的1-苯甲基-3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑(1.92g，7.21mmol)和KOt-Bu(65mL 1M的THF溶液)的DMSO(50mL)溶液内起泡2.0小时。通过加入HCl(3M水溶液)将反应物酸化到pH＝2。过滤混合物并在真空中将滤出液浓缩以移除挥发物。通过反相HPLC纯化所得物质： Luna C18柱(10μm，250×50mm)，
水(含有1％v/v TFA)中5％(v/v)CH3CN(含有1％v/v TFA)梯度到50％H2O，60ml/min，λ＝214nm。通过将物质装在Varian mL、10g SCX滤芯上进一步纯化产物。
使MeOH(150mL)流过所述色谱柱以移除未结合的杂质。借由使2N NH3的MeOH(150mL)溶液流过所述色谱柱而洗脱产物。浓缩洗脱液，得到呈白色固体的化合物1的铵盐(947mg，
5.38mmol，产率75％)。1H NMR(铵盐，400MHz，CD3OD)：δ2.88(2H，t，J＝6.8Hz)，2.74(2H，t，J＝6.8Hz)，2.52(2H，quin，J＝6.8Hz)。HPLC/MS： 柱(5μm，50×2.1mm)，
梯度为H2O(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含有1％v/v TFA)到H2O中99％v/v
+
CH3CN，0.75mL/min，tr＝1.22min，ESI ＝177.3(M+H)。C7H8N6(中性化合物)分析计算值：
C，47.72；H，4.58。实验值：C，47.27；H，4.16。C7H11N7(铵盐)分析计算值：C，43.51；H，5.74。
实验值：C，42.94；H，5.30。
水(含有1％v/v TFA)中5％(v/v)CH3CN(含有1％v/v TFA)梯度到50％H2O，60ml/min，λ＝214nm。通过将物质装在Varian mL、10g SCX滤芯上进一步纯化产物。
使MeOH(150mL)流过所述色谱柱以移除未结合的杂质。借由使2N NH3的MeOH(150mL)溶液流过所述色谱柱而洗脱产物。浓缩洗脱液，得到呈白色固体的化合物1的铵盐(947mg，
5.38mmol，产率75％)。1H NMR(铵盐，400MHz，CD3OD)：δ2.88(2H，t，J＝6.8Hz)，2.74(2H，t，J＝6.8Hz)，2.52(2H，quin，J＝6.8Hz)。HPLC/MS： 柱(5μm，50×2.1mm)，
梯度为H2O(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含有1％v/v TFA)到H2O中99％v/v
+
CH3CN，0.75mL/min，tr＝1.22min，ESI ＝177.3(M+H)。C7H8N6(中性化合物)分析计算值：
C，47.72；H，4.58。实验值：C，47.27；H，4.16。C7H11N7(铵盐)分析计算值：C，43.51；H，5.74。
实验值：C，42.94；H，5.30。
[0456] 使用以下程序制备中间物1-苯甲基-3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑。
[0457] 步骤A：1-苯甲基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺和2-苯甲基-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺的制备。
[0458]
[0459] 在25℃下，向搅拌中的1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(2.57g，17.0mmol)的DMF(34mL)溶液中加入K2CO3(5.87g，42.5mmol)，接着加入苄基溴(4.36g，25.5mmol)。在环境温度下搅拌反应物16小时，此时将混合物用EtOAc(75mL)稀释并过滤。用H2O(100mL)洗涤滤出液并且用EtOAc(75mL)和CH2Cl2(75mL)反萃取水相。用MgSO4干燥合并后的有机萃取物，过滤并在真空中浓缩。由硅胶色谱法(梯度为己烷中50％EtOAc到己烷中95％EtOAc)纯化，得到分离为呈白色固体的2-苯甲基-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(739mg，3.07mmol，产率18％)接着是分离为呈白色固体的1-苯甲基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(3.24g，13.4mmol，产率79％)。
[0460] 1-苯甲基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺
[0461] 1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.37-7.30(3H，m)，7.19(2H，m)，6.67(1H，bs)，5.34(1H，13
bs)，5.19(2H，s)，2.82(2H，m)，2.51(4H，m)。 C APTNMR(100MHz，CDCl3)：δ向上：164.8，
155.2，139.0，136.0，129.5，55.3，31.2，24.1；向 下：129.0，128.3，127.8。HPLC/MS：
Prevail C18柱(5μm，50×4.6mm)，梯度为水(含有1％v/v TFA)中5％v/
+
v CH3CN(含有1％v/v TFA)到水中99％v/v CH3CN，3.5mL/min，tr＝2.13min，ESI ＝
242.2(M+H)。
bs)，5.19(2H，s)，2.82(2H，m)，2.51(4H，m)。 C APTNMR(100MHz，CDCl3)：δ向上：164.8，
155.2，139.0，136.0，129.5，55.3，31.2，24.1；向 下：129.0，128.3，127.8。HPLC/MS：
Prevail C18柱(5μm，50×4.6mm)，梯度为水(含有1％v/v TFA)中5％v/
+
v CH3CN(含有1％v/v TFA)到水中99％v/v CH3CN，3.5mL/min，tr＝2.13min，ESI ＝
242.2(M+H)。
[0462] 2-苯甲基-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺
[0463] 1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.34-7.21(5H，m)，5.76(2H，s)，5.70-5.38(2H，bs)，13
2.78(4H，m)，2.49(2H，m). C APT NMR(100MHz，CDCl3)：δ 向 上：161.9，160.1，138.3，
128.3，127.1，55.1，29.9，24.8，24.7；向 下：128.6，128.0，127.6。HPLC/MS：
Prevail C18柱(5μm，50×4.6mm)，梯度为水(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含有+
1％v/v TFA)到水中99％v/v CH3CN，3.5mL/min，tr＝1.98min，ESI ＝242.1(M+H)。
2.78(4H，m)，2.49(2H，m). C APT NMR(100MHz，CDCl3)：δ 向 上：161.9，160.1，138.3，
128.3，127.1，55.1，29.9，24.8，24.7；向 下：128.6，128.0，127.6。HPLC/MS：
Prevail C18柱(5μm，50×4.6mm)，梯度为水(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含有+
1％v/v TFA)到水中99％v/v CH3CN，3.5mL/min，tr＝1.98min，ESI ＝242.1(M+H)。
[0464] 步骤B：1-苯甲基-3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑的制备[0465]
[0466] 室温下向1-苯甲基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(3.02g，12.53mmol)的DMF(25mL)溶液中加入亚硫酰氯(1.94g，16.3mmol)。将反应物搅拌18小时，此时加入NaHCO3(饱和水溶液，6mL)以抑制过量的亚硫酰氯。用EtOAc(150mL)稀释所述混合物并接着用NaHCO3(饱和水溶液，100mL)和盐水(100mL)洗涤。用EtOAc(2×100mL)反萃取水相洗涤液并用MgSO4干燥合并后的有机相，过滤，并在真空中浓缩，得到粗黄色油状物。
[0467] 将所述浓缩物溶解在DMF(20mL)中并放入有厚壁的密封反应容器中，此时先后加入ZnBr2(4.70g，18.0mmol)和NaN3(2.73g，42.0mmol)。密封所述容器并加热到120℃，历时18小时。将混合物冷却到室温并加入HCl(3M水溶液，2mL)并持续搅拌5分钟。用EtOAc(150mL)稀释混合物并用HCl(1M，水溶液，100mL)洗涤。用MgSO4干燥有机物，过滤，并浓缩。通过硅胶色谱法(梯度为从50∶50∶0.2的己烷∶EtOAc∶AcOH到100∶0.2的EtOAc∶AcOH)纯化，得到呈白色固体的1-苯甲基-3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四1
氢-环戊吡唑(2.06g，7.74mmol，产率62％)。H NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.36-7.25(5H，
13
m)，5.30(2H，s)，2.84(2H，t，J＝6.4Hz)，2.62-2.56(4H，m)。 C APT NMR(100MHz，CD3OD)：
δ向上：153.8，151.9，137.6，131.5，128.9，55.8，31.9，24.8，24.6；向下：129.9，129.1，
129.0。HPLC/MS： 柱(5μm，50×2.1mm)，梯度为水(含有1％v/v TFA)中5％
+
v/v CH3CN(含有1％v/v TFA)到水中99％v/v CH3CN，0.75mL/min，tr＝2.18min，ESl ＝
267.1(M+H)。
氢-环戊吡唑(2.06g，7.74mmol，产率62％)。H NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.36-7.25(5H，
13
m)，5.30(2H，s)，2.84(2H，t，J＝6.4Hz)，2.62-2.56(4H，m)。 C APT NMR(100MHz，CD3OD)：
δ向上：153.8，151.9，137.6，131.5，128.9，55.8，31.9，24.8，24.6；向下：129.9，129.1，
129.0。HPLC/MS： 柱(5μm，50×2.1mm)，梯度为水(含有1％v/v TFA)中5％
+
v/v CH3CN(含有1％v/v TFA)到水中99％v/v CH3CN，0.75mL/min，tr＝2.18min，ESl ＝
267.1(M+H)。
[0468] 方法C：化合物1的制备。
[0469]
[0470] 向1-苯甲基-3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑(59.4g，223mmol)的10％甲酸/MeOH(vol/vol，900mL)溶液中加入钯黑(39.8g，374mmol)。在N2气氛中将混合物机械搅拌24小时。过滤并浓缩反应物。经由将物质(作为溶于MeOH中的溶液)装载到含有Bondesil SCX SPE树脂(750g)的色谱柱上通过以下方法进一步纯化产物并转化成铵盐。用MeOH(2.0L)冲洗所述色谱柱以移除未结合杂质。使用2NNH3/MeOH(约1.5L)洗脱产物。浓缩后即得到呈白色固体的四唑的铵盐(39.3g，203mmol，91％产率)。
[0471] 使用以下程序制备中间物1-苯甲基-3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑。
[0472] 步骤A：1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯的制备。
[0473]
[0474] 室温下，在N2中经0.5小时由加料漏斗向环戊酮(42.0g，0.50mol)和草酸二乙酯(73.1g，0.50mol)的EtOH(2.5L)溶液中加入KO t-Bu的THF溶液(500mL 1M溶液，0.50mol)。将反应物搅拌3.5小时，此时将烧瓶冷却到0℃。通过加料漏斗经0.5小时添加水(250mL)中的盐酸肼(37.6g，0.55mol)。使反应物加温至室温并搅拌16小时。在真空中移除挥发物并用NaHCO3(饱和水溶液，500mL)和H2O(500mL)洗涤所得固体。进一步在真空中浓缩，得到呈黄色固体的纯1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯(63.6g，0.35mol，产率71％)。
[0475] 步骤B：1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺的制备。
[0476]
[0477] 将1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯(63.5g，0.35mmol)溶解在7N NH3/MeOH(1.0L)溶液中。将溶液分成相等的四份，每份转移到350ml有厚壁的密封反应容器中。将所述容器加热到95℃并搅拌20小时。冷却反应物到室温，此时沉淀出固体。过滤溶液并用NaOH(1N水溶液，200ml)洗涤，得到呈白色固体的纯的1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(42.0g，0.20mol，产率80％)。
[0478] 步骤C：1-苯甲基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺和2-苯甲基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺的制备。
[0479]
[0480] 室温下，向1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(41.5g，275mmol)的THF(460ml)中加入NaOH(5N水溶液，110ml，0.54mol)溶液。搅拌5分钟后加入苄基溴(49.2g，0.29mol)并搅拌反应物16小时。在真空中移除挥发物并用水(3×250mL)洗涤所得的固体。进一步浓缩得到作为20∶1混合物的区域异构体1-苯甲基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺和2-苯甲基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(65.3g，270mmol，产率98％)，两者未经分离便使用。
[0481] 步骤D：1-苯甲基-3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑的制备。
[0482]
[0483] 在N2气氛下将无水DMF(250mL)装入配备有干燥管的烧瓶中。将所述烧瓶冷却到0℃并经由注射器经5分钟加入亚硫酰氯(36.7g，309mmol)。再搅拌10分钟后，使用加料漏斗经5分钟加入1-苯甲基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(67.7g，281mmol)的DMF(310mL)溶液。使混合物缓慢加温至室温并搅拌16小时。加入NaHCO3(饱和水溶液，
100mL)并搅拌混合物10分钟。在真空中移除挥发物并用EtOAc(700mL)和NaHCO3(饱和水溶液，700mL)稀释残余物。分层，并且用EtOAc(400mL)反萃取水相。用NaHCO3(饱和水溶液，600mL)和盐水(600mL)洗涤合并后的有机相，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到63.1g呈褐色固体的腈。
100mL)并搅拌混合物10分钟。在真空中移除挥发物并用EtOAc(700mL)和NaHCO3(饱和水溶液，700mL)稀释残余物。分层，并且用EtOAc(400mL)反萃取水相。用NaHCO3(饱和水溶液，600mL)和盐水(600mL)洗涤合并后的有机相，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到63.1g呈褐色固体的腈。
[0484] 向所述腈(从上面得到的)的DMF(560mL)溶液中加入ZnBr2(95.6g，425mmol)接着加入NaN3(55.2g，849mmol)。将混合物加热到120℃并搅拌14小时。反应物冷却到室温并在真空中移除DMF。加入HCl(2N水溶液，800mL)并将此混合物搅拌15分钟，接着过滤。将固体加入EtOAc(500mL)和HCl(5N水溶液，300mL)的两相混合物中，并搅拌0.5小时。过滤该溶液并分层。再次用EtOAc和HCl(5N水溶液)以上文描述的方式处理残余固体，并重复此过程(搅拌、过滤和分离)直至所有固体物质都溶解。将合并后的有机滤出液浓缩，得到呈亮褐色固体的1-苯甲基-3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑(61.0g，
229mmol，自酰胺的产率81％)。
229mmol，自酰胺的产率81％)。
[0485] 实例9.2：3-(1H-四唑-5-基)-2，6-二氢-4H-噻吩并[3，4-c]吡唑(化合物2)。
[0486]
[0487] 以与实例9.1中描述的类似方式制备化合物2，并且由NMR和MS表征；1HNMR(400MHz，MeOD)：(400MHz，CD3OD)δ4.11(dd，.J＝4.0，2.2Hz，2H)，4.03(dd，J＝3.6，
2.2Hz，2H)。HPLC/MS： YMC ODS-A C18柱(5μm，50×4.6mm)，梯度为水(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含有1％v/v TFA)到水中99％v/v CH3CN，3.5mL/min，tr＝
1.27min，ESI+＝194(M+H)。
2.2Hz，2H)。HPLC/MS： YMC ODS-A C18柱(5μm，50×4.6mm)，梯度为水(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含有1％v/v TFA)到水中99％v/v CH3CN，3.5mL/min，tr＝
1.27min，ESI+＝194(M+H)。
[0488] 实例9.3：6-甲基-3-(1H-四唑-5-基)-2，6-二氢-4H-呋喃并[3，4-c]吡唑(化合物3)。
[0489]
[0490] 以与实例9.1中描述的类似方式制备化合物3，在形成吡唑之后，通过柱色谱法分离区域异构体。1
[0491] 化合物3由NMR和MS表征；H NMR(400MHz，DMSO)：δ5.20(m，1H)，4.94(dd，y＝34.7，10.3Hz，2H)，1.39(d，J＝4.4Hz，3H)。HPLC/MS： Prevail C18柱 (5μm，
50×4.6mm)，梯度为水(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含有1％v/vTFA)到水中99％v/v CH3CN，3.5mL/min，tr＝1.03min，ESI+＝192(M+H)。
50×4.6mm)，梯度为水(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含有1％v/vTFA)到水中99％v/v CH3CN，3.5mL/min，tr＝1.03min，ESI+＝192(M+H)。
[0492] 实例9.4：3-1H-四唑-5-基)-1，4-二氢-环戊吡唑(化合物4)和3-(1H-四唑-5-基)-1，6-二氢-环戊吡唑(化合物5)。
[0493]
[0494] 化合物9.4A
[0495] 将作为异构体混合物(50mg，0.38mmol)的化合物9.4A、叠氮化钠(86.5mg，1.33mmol)和溴化锌(300mg，1.33mmol)的DMF(2mL)溶液在微波下200℃照射6小时。冷却到室温后，用2N HCl溶液处理反应混合物，用EtOAc萃取并用H2O洗涤，并且在真空中浓缩。
HPLC分离(C18柱，H2O中5到99％CH3CN)提供40.3mg(61％)的预期产物-2∶1的烯系
1
异构体混合物。LC-MS m/z 175(M+1)；H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.94(m，0.5H)，6.87(m，
1H)，6.76(m，1H)，6.40(m，0.5H)，3.35(m，3H)。
HPLC分离(C18柱，H2O中5到99％CH3CN)提供40.3mg(61％)的预期产物-2∶1的烯系
1
异构体混合物。LC-MS m/z 175(M+1)；H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.94(m，0.5H)，6.87(m，
1H)，6.76(m，1H)，6.40(m，0.5H)，3.35(m，3H)。
[0496] 通过反相HPLC分离异构体： Luna C18柱(10μm，250×21.2mm)，梯度为H2O(含有1％v/v TFA)中5％(v/v)CH3CN(含有1％v/v TFA)到70％H2O，20ml/min，λ＝280nm。
[0497] 或者通过正相HPLC分离异构体：Dynamax Micorsorb Si(prep)柱(8μm，250×10mm)，梯度为己烷(含有2％v/v AcOH)中80％(v/v)EtOAc(含有2％v/v AcOH)到
99％EtOAc，7.5ml/min，λ＝280nm。对于正相和反相柱，异构体洗脱的顺序是相同的。
99％EtOAc，7.5ml/min，λ＝280nm。对于正相和反相柱，异构体洗脱的顺序是相同的。
[0498] 异构体1(高Rf异构体)：
[0499] 1H NMR(400MHz，MeOD)：δ6.79(2H，m)，3.42(2H，m)。HPLC/MS： 柱(5μm，50×2.1mm)，H2O(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含有1％v/v TFA)到H2O中
99％v/v CH3CN，0.75mL/min，tr＝1.10min，ESI+＝174.9(M+H)。
99％v/v CH3CN，0.75mL/min，tr＝1.10min，ESI+＝174.9(M+H)。
[0500] 异构体2(低Rf异构体)：
[0501] 1H NMR(400MHz，MeOD)：δ6.98(1H，m)，6.44(1H，m)，3.33(2H，m)。HPLC/MS：柱(5μm，50×2.1mm)，梯度为H2O(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含
+
有1％v/v TFA)到H2O中99％v/v CH3CN，0.75mL/min，tr＝1.11min，ESI ＝175.1(M+H)。
+
有1％v/v TFA)到H2O中99％v/v CH3CN，0.75mL/min，tr＝1.11min，ESI ＝175.1(M+H)。
[0502] 使用以下步骤制备作为异构体混合物的中间物化合物9.4A。
[0503] 步骤A：2，6-二氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯和2，4-二氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯(混合物)的制备。
[0504]
[0505] 化合物9.4B 化合物9.4C
[0506] 使用类似于本文描述的用于制备吡唑酯(见实例14.2)的方法从相应酮制备化合物9.4B。化合物9.4B(2.0g，8.19mmol)的苯基醚溶液(25mL)在氮气下回流加热(250~260℃)2小时。
[0507] 将溶液冷却到室温后，将其装载到SiO2柱上，用DCM冲洗以冲出苯基醚，并用EtOAc/Hex(1/3)洗脱，提供1.05g(72％)作为烯系异构体的化合物9.4C。LC-MS m/z179(M+1)。
[0508] 步骤B：2，6-二氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺和2，4-二氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(混合物)的制备。
[0509]
[0510] 化合物9.4C 化合物9.4D
[0511] 将作为异构体混合物的化合物9.4C(1.0g，5.61mmol)溶解到最少量的二氧六环(小于5ml)中并在紧密密封的容器中与28％氢氧化铵溶液(100mL)混合。在室温下搅拌溶液24小时并在真空中浓缩，得到定量产率的作为异构体混合物的固体化合物9.4D。LC-MS m/z 150(M+1)。
[0512] 步骤C：2，6-二氢-环戊吡唑-3-腈和2，4-二氢-环戊吡唑-3-腈(混合物)的制备。
[0513]
[0514] 化合物9.4D 化合物9.4A
[0515] 室温下，向作为异构体混合物的化合物9.4D(0.80g，5.36mmol)和碳酸钾(0.445g，3.22mmol)的乙腈(30mL)悬浮液中加入POCl3(0.785mL，8.58mmol)。将反应混合物回流加热2小时。在真空中浓缩后，用EtOAc(150mL)洗涤残余物，用H2O和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩以提供141mg(20％)作为异构体混合物的化合物9.4A。LC-MS m/z132(M+1)。
[0516] 实例9.5：3-(1H-四唑-5-基)-2，6-二氢-4H-呋喃并[3，4-c]吡唑(化合物6)。
[0517]
[0518] 以与实例9.1中描述的类似方式制备化合物6，并由NMR和MS表征；LC-MS m/z1
179(M+1)；H NMR(400MHz，CD3OD)δ5.07(t，J＝2.2Hz，2H)，4.92(t，J＝2.2Hz，2H)。
179(M+1)；H NMR(400MHz，CD3OD)δ5.07(t，J＝2.2Hz，2H)，4.92(t，J＝2.2Hz，2H)。
[0519] 实例9.6：5-乙基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(混合物7)。
[0520]
[0521] 以与实例9.1中描述的类似方式制备化合物7，并由NMR和MS表征；1HNMR(MeOA400MHz)：δ3.07(1H，dd，J＝14.8，7.6Hz)，2.94-2.82(2H，m)，2.51(1H，dd，J＝
15.2，6.8Hz)2.41(1H，dd，J＝13.6，5.6Hz)，1.6(2H，m)，1.02(3H，t，J＝7.2Hz).HPLC/MS：
柱(5μm，50×2.1mm)，梯度为H2O(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含
+
有1％v/v TFA)到H2O中99％v/v CH3CN，0.75mL/min，tr＝1.42min，ESI ＝205.2(M+H)。
15.2，6.8Hz)2.41(1H，dd，J＝13.6，5.6Hz)，1.6(2H，m)，1.02(3H，t，J＝7.2Hz).HPLC/MS：
柱(5μm，50×2.1mm)，梯度为H2O(含有1％v/v TFA)中5％v/v CH3CN(含
+
有1％v/v TFA)到H2O中99％v/v CH3CN，0.75mL/min，tr＝1.42min，ESI ＝205.2(M+H)。
[0522] 实例9.7：中间物1-苯甲基-5-羟基-1，4，5，6-四氢环戊|c|吡唑-3-腈的制备。
[0523]
[0524] 步骤A：1-苯甲基-1，6-二氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯和1-苯甲基-1，4-二氢-环戊吡唑-3-甲酸乙酯(混合物)的制备。
[0525]
[0526] 向吡唑(化合物9.4C，见实例9.4，步骤A，2.0g，11.22mmol)在无水THF(100mL)中的溶液中加入苄基溴(5.36mmol，44.88mmol)和NaOH(1.79g，44.88mmol)。在室温下搅拌1小时后，用1N HCl(100ml)终止反应。用乙酸乙酯萃取所得混合物，用1N HCl、饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，并用无水Na2SO4干燥。过滤溶液并在真空中浓缩。在Biotage快速40M柱(SiO2)上使用30％乙酸-己烷纯化此物质。得到无色油状物。LC-MS：3.22min；(M+Na)＝291.1。
[0527] 步骤B：1-苯甲基-1，6-二氢-环戊吡唑-3-甲酸和1-苯甲基-1，4-二氢-环戊吡唑-3-甲酸(混合物)的制备。
[0528]
[0529] 向来自步骤A的中间物(3.55g，13.23mmol)在1∶1THF/MeOH(40mL)中的溶液中加入NaOH溶液(5N，3.9mL，20mmol)。室温下3小时后，通过加入1N HCl(22mL)终止反应。用乙酸乙酯(3x)萃取水层并用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。得到未经进一步纯化便用于下一步骤的黄色固体。LC-MS：2.62min；(M+H)＝241.1。
[0530] 步骤C：1-苯甲基-1，6-二氢-环戊吡唑-3-甲酸2，5-二氧-吡咯烷-1-基酯和1-苯甲基-1，4-二氢-环戊吡唑-3-甲酸2，5-二氧-吡咯烷-1-基酯(混合物)的制备。
[0531]
[0532] 向来自步骤B的中间物(3.17g，13.23mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液中加入N-羟基丁二酰亚胺(3.04g，26.46mmol)接着加入EDC(5.07g，26.46mmol)。室温下搅拌反应混合物18小时之后，在真空中浓缩。用乙酸乙酯(200ml)稀释残余物，用饱和NaHtCO3溶液和盐水洗涤。用无水Na2SO4干燥有机层、过滤，并在真空中浓缩。得到黄色固体。LC-MS：2.99min；
(M+H)＝338.1。
(M+H)＝338.1。
[0533] 步骤D：1-苯甲基-1，6-二氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺和1-苯甲基-1，4-二氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺(混合物)的制备。
[0534]
[0535] 向来自步骤C的中间物(4.45g，13.22mmol)的1，4-二氧六环(150mL)溶液中加入NH4OH(14.8N，10.0eq，9.1mL)。立即形成沉淀。室温下搅拌15分钟之后，通过烧结漏斗过滤反应混合物并用1，4-二氧六环洗涤沉淀。在真空中浓缩滤出液以得到黄色固体。LC-MS：2.55min；(M+H)＝240.1。
[0536] 步骤E：1-苯甲基-1，6-二氢-环戊吡唑-3-腈和1-苯甲基-1，4-二氢-环戊吡唑-3-腈(混合物)的制备。
[0537]
[0538] 向来自步骤D的中间物的无水DMF(50mL)溶液中加入氰尿酰氯(2.33g，13.2mmol)。室温下搅拌15分钟之后通过将反应物倒入水(100ml)中终止反应。用乙酸乙酯萃取所得混合物，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。
在Biotage快速40M柱(SiO2)上使用20％乙酸乙酯-己烷纯化残余物。得到白色固体。
LC-MS：3.22min；(M+H)＝222.2。
在Biotage快速40M柱(SiO2)上使用20％乙酸乙酯-己烷纯化残余物。得到白色固体。
LC-MS：3.22min；(M+H)＝222.2。
[0539] 步骤F：1-苯甲基-5-羟基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-腈的制备。
[0540]
[0541] 在N2气氛下将来自步骤E的中间物(0.95g，4.29mmol)的无水THF(40ml)溶液冷却到0℃并加入硼烷-THF(23mmol，5.36eq，1.0M溶液)。将反应物加温至室温并搅拌1小时。接着使反应物冷却到0℃。加入水(3ml)接着加入NaOH(4.29mmol，1.43mL，3N)和H2O2(12.88mmol，1.32mL，30％水溶液)。在50℃加热反应物30分钟之后，将其冷却到室温并通过加水终止反应。用乙酸乙酯(3x)萃取所得混合物。用无水Na2SO4干燥有机层，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱法使用30％乙酸乙酯-己烷纯化残余物，得到C-5和C-6醇的1∶1的混合物。
[0542] 弱极性异构体(C-6醇，化合物17)1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ7.2(m，5H)，5.35(d，J＝14.9Hz，1H)，5.31(d，J＝14.6Hz，1H)，4.99(dd，J＝3.4，6.9Hz，1H)，2.9(m，2H)，2.6(m，1H)，2.35(m，1H).LC-MS：2.76min；(M+H)＝240.1。
[0543] 强极性异构体(C-5醇)1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ7.4-7.2(m，5H)，5.28(d，J＝ 14.8Hz，1H)，5.25(d，J ＝ 14.9Hz，1H)，5.01(m，1H)，3.13(dd，J ＝ 6.4，15.8Hz，1H)，2.89(dd，J＝6.6，16.2Hz，1H)，2.68(dd，J＝3.7，16.0Hz，1H)，2.52(dd，J＝3.4，16.2Hz，
1H).LC-MS：2.60min；(M+H)＝240.1。
1H).LC-MS：2.60min；(M+H)＝240.1。
[0544] 实例9.8：中间物三氟甲磺酸1-苯甲基-3-氰基-1，6-二氢-环戊吡唑-5-基酯和三氟甲磺酸1-苯甲基-3-氰基-1，4-二氢-环戊吡唑-5-基酯的区域异构体混合物的制备。
[0545]
[0546] 步骤A：(4-乙氧基-2-氧-环戊-3-烯基)-氧-乙酸叔丁酯的制备。
[0547]
[0548] 在氮气下将3-乙氧基环戊烯酮(2.12g，16.82mmol)的无水THF(40mL)溶液冷却到-78℃并向其中加入二异丙基胺锂(12mL，24mmol，THF中2.0M)。15分钟后，加入二草酸二叔丁酯(3.73g，18.5mmol)的THF(15mL)溶液。在-78℃下搅拌反应混合物15分钟并接着加温至-20℃并再搅拌15分钟。用1N HCL(40ml)终止反应并用乙酸乙酯(3x)萃取。用盐水洗涤有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱法(SiO2)使用35％乙酸乙酯-己烷纯化残余物，得到呈灰白色固体的预期产物(2.53g)。
[0549] 步骤B：1-苯甲基-5-氧-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸叔丁酯的制备。
[0550]
[0551] 向从步骤A得到的中间物(2.15g，8.45mmol)的乙醇(100mL)溶液中加入苯肼盐酸盐(1.8g，9.22mmol)和HOAc(10mL)。室温下搅拌反应混合物16小时并接着在70℃回流30分钟。将反应物冷却到室温并在真空中浓缩。将残余物溶解到乙酸乙酯中并用水、饱和NaHCO3和盐水洗涤。经无水Na2SO4干燥有机层并在真空中浓缩。通过快速色谱法(SiO2)使用30％乙酸乙酯-己烷纯化残余物，得到呈褐色油状物的预期产物(1.64g)。
[0552] 步骤C：1-苯甲基-5-氧-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸的制备。
[0553]
[0554] 向从步骤B得到的中间物(1.64g，5.25mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三氟乙酸(20ml)且在室温下搅拌所得溶液4小时。在真空中浓缩反应混合物并与甲苯(3x)共沸。此物质未经任何进一步纯化便用入下一步骤。
[0555] 步骤D：1-苯甲基-5-氧-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸2，5-二氧-吡咯烷-1-基酯的制备。
[0556]
[0557] 向从步骤C得到的中间物(1.34g，5.25mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中加入N-羟基丁二酰亚胺(1.21g，10.5mmol)，接着加入EDC(2.01g，10.5mmol)。室温下搅拌18小时之后，在真空中浓缩反应混合物。用乙酸乙酯(200ml)稀释残余物，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。用无水Na2SO4干燥有机层，过滤并在真空中浓缩。得到黄色固体。
[0558] 步骤E：1-苯甲基-5-氧-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺的制备。
[0559]
[0560] 向从步骤D得到的中间物(2.0g，5.25mmol)的1，4-二氧六环(50mL)溶液中加入NH4OH(14.8N，10.0eq，3.53mL)。立即形成沉淀。室温下搅拌15分钟后，通过烧结漏斗过滤反应混合物，并用1，4-二氧六环洗涤沉淀。在真空中浓缩滤出液以得到固体。
[0561] 步骤F：1-苯甲基-5-氧-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-腈的制备。
[0562]
[0563] 向从步骤E得到的中间物(5.25mmol)的DMF(60mL)溶液中按三份加入氰尿酰氯(3.12g，17mmol)。室温下30分钟之后，用水终止反应，并用乙酸乙酯(2x)萃取。用水和盐水洗涤有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。通过快速色谱法(SiO2)使用30％乙酸乙酯-己烷纯化残余物，得到呈黄色固体的预期产物(0.95g)。
[0564] 步骤G：三氟甲磺酸1-苯甲基-3-氰基-1，6-二氢-环戊吡唑-5-基酯和三氟甲磺酸1-苯甲基-3-氰基-1，4-二氢-环戊吡唑-5-基酯(混合物)的制备。
[0565]
[0566] 在-78℃下，向从步骤F得到的中间物(447mg，1.87mmol)的无水THF(14mL)溶液中加入新鲜制备的二异丙基胺锂(1.89mmol)的THF(6ml)溶液。在-78℃下搅拌反应物30分钟后，加入2[N，N-双(三氟甲磺酰基)胺]-5-氯吡啶(1.4g，3.6mmol)。将反应物加温至-20℃并搅拌3小时。用饱和NH4Cl溶液终止反应，并用乙酸乙酯萃取所得混合物，用1N HCl溶液、饱和NaHCO3溶液洗涤，并用无水Na2SO4干燥。过滤溶液并在真空中浓缩。在chromatotron上使用2000-微米转子(SiO2)和5％乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂纯化残余
1
物，以提供393mg作为双键区域异构体的2∶1混合物的预期产物。HNMR(500MHz，CDCl3)：
1
(主异构体)δ7.45-7.3(m，5H)，6.06(bt，1H)，5.41(s，2H)，3.56(bd，2H)。H NMR(500MHz，CDCl3)：(次异构体)δ7.45-7.3(m，5H)，6.63(bt，1H)，5.39(s，2H)，3.18(bd，2H).LC-MS：
(M+H)＝370.25。
1
物，以提供393mg作为双键区域异构体的2∶1混合物的预期产物。HNMR(500MHz，CDCl3)：
1
(主异构体)δ7.45-7.3(m，5H)，6.06(bt，1H)，5.41(s，2H)，3.56(bd，2H)。H NMR(500MHz，CDCl3)：(次异构体)δ7.45-7.3(m，5H)，6.63(bt，1H)，5.39(s，2H)，3.18(bd，2H).LC-MS：
(M+H)＝370.25。
[0567] 实例9.9：5-丙氧基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物12)。
[0568]
[0569] 步骤A：1-苯甲基-5-丙氧基-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-腈的制备。
[0570]
[0571] 向1-苯甲基-5-羟基-1，4，5，6-四氢环戊[c]吡唑-3-腈(见实例9.7，30mg，0.125mmol)的无水DMF(2ml)的溶液中加入氢化钠(6mg，0.15mmol，60％油分散液)。搅拌
3分钟后加入丙基溴(14μL，0.15mmol)并搅拌所得混合物一个小时。搅拌结束时加入氢化钠(6mg，0.15mmol，60％油分散液)和丙基溴。30分钟后，通过加入饱和NH4Cl(3mL)终止反应。用乙酸乙酯萃取所得混合物，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。
通过PTLC(SiO2)使用15％乙酸乙酯-己烷纯化残余物，得到预期产物。
3分钟后加入丙基溴(14μL，0.15mmol)并搅拌所得混合物一个小时。搅拌结束时加入氢化钠(6mg，0.15mmol，60％油分散液)和丙基溴。30分钟后，通过加入饱和NH4Cl(3mL)终止反应。用乙酸乙酯萃取所得混合物，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。
通过PTLC(SiO2)使用15％乙酸乙酯-己烷纯化残余物，得到预期产物。
[0572] 步骤B：1-苯甲基-5-丙氧基-3-(2H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑的制备。
[0573]
[0574] 向来自步骤A的中间物(25mg，0.089mmol)的2-丙醇(1mL)溶液中加入水(2ml)、叠氮化钠(14mg，0.222mmol)和溴化锌(10mg，0.04mmol)。在90℃加热反应混合物18小时后，将其冷却到室温并加入HCl(3mL，3N)。用乙酸乙酯萃取反应混合物，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过PTLC(SiO2)使用100％乙酸乙酯纯化残余物，得到预期产物。
[0575] 步骤C：5-丙氧基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物12)。
[0576] 向来自步骤B的中间物(26mg，0.08mmol)的DMSO(0.6mL)溶液中加入叔丁醇钾(0.6mL，0.6mmol，THF中1.0M)。使氧气在反应混合物内起泡15分钟。用HCl(3mL，3N)终止反应。用乙酸乙酯(5x)萃取所得混合物，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。1
通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物。H NMR(CDCl3)δ4.80(m，1H)，3.51(m，2H)，
3.24(dd，J＝6.8，15.5Hz，1H)，3.18(dd，J＝6.9，16.0Hz，1H)，2.85(dd，J＝4.1，15.6Hz，
1H)，2.79(dd，J＝4.4，16.1Hz，1H)，1.62(m，2H)，0.96(t，J＝7.6Hz，3H).LC-MS：2.15min；
(M+H)＝235。
通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物。H NMR(CDCl3)δ4.80(m，1H)，3.51(m，2H)，
3.24(dd，J＝6.8，15.5Hz，1H)，3.18(dd，J＝6.9，16.0Hz，1H)，2.85(dd，J＝4.1，15.6Hz，
1H)，2.79(dd，J＝4.4，16.1Hz，1H)，1.62(m，2H)，0.96(t，J＝7.6Hz，3H).LC-MS：2.15min；
(M+H)＝235。
[0577] 实例9.10：5-异丁氧基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物15)。
[0578]
[0579] 使用与实例9.8描述的合成程序类似的程序从1-苯甲基-5-羟基-1，4，5，6-四氢1
环戊[c]吡唑-3-腈(见实例9.7)制备标题化合物。H NMR(CDCl3)δ4.77(m，1H)，3.33(m，
2H)，3.23(dd，J ＝ 6.9，15.5Hz，1H)，3.17(dd，J ＝ 6.9，16.0Hz，1H)，2.85(dd，J ＝ 4.1，
15.6Hz，1H)，2.79(dd，J＝4.2，15.9Hz，1H)，1.85(m，1H)，0.94(d，J＝6.7Hz，3H).LC-MS：
2.42min；(M+H)＝249。
环戊[c]吡唑-3-腈(见实例9.7)制备标题化合物。H NMR(CDCl3)δ4.77(m，1H)，3.33(m，
2H)，3.23(dd，J ＝ 6.9，15.5Hz，1H)，3.17(dd，J ＝ 6.9，16.0Hz，1H)，2.85(dd，J ＝ 4.1，
15.6Hz，1H)，2.79(dd，J＝4.2，15.9Hz，1H)，1.85(m，1H)，0.94(d，J＝6.7Hz，3H).LC-MS：
2.42min；(M+H)＝249。
[0580] 实例9.11：5-丁氧基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物16)。
[0581]
[0582] 使用与实例9.8描述的合成程序类似的程序从1-苯甲基-5-羟基-1，4，5，6-四氢1
环戊[c]吡唑-3-腈(见实例9.7)制备标题化合物。H NMR(CDCl3)δ4.78(m，1H)，3.56(m，
2H)，3.24(dd，J ＝ 6.8，15.6Hz，1H)，3.17(dd，J ＝ 6.9，15.9Hz，1H)，2.84(dd，J ＝ 4.1，
15.6Hz，1H)，2.77(dd，J＝4.6，16.0Hz，1H)，1.58(m，2H)，1.42(m，2H)，0.95(t，J＝7.3Hz，
3H).LC-MS：2.50min；(M+H)＝249。
环戊[c]吡唑-3-腈(见实例9.7)制备标题化合物。H NMR(CDCl3)δ4.78(m，1H)，3.56(m，
2H)，3.24(dd，J ＝ 6.8，15.6Hz，1H)，3.17(dd，J ＝ 6.9，15.9Hz，1H)，2.84(dd，J ＝ 4.1，
15.6Hz，1H)，2.77(dd，J＝4.6，16.0Hz，1H)，1.58(m，2H)，1.42(m，2H)，0.95(t，J＝7.3Hz，
3H).LC-MS：2.50min；(M+H)＝249。
[0583] 实例9.12：5-氟-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物14)。
[0584]
[0585] 步骤A：1-苯甲基-5-氟-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-腈的制备。
[0586] 在氮气中向1-苯甲基-5-羟基-1，4，5，6-四氢环戊[c]吡唑-3-腈(见实例9.7，30mg，0.125mmol)的无水二氯甲烷(0.9mL)溶液中加入DAST(33μL，0.25mmol)。室温下搅拌15分钟后，用乙酸乙酯稀释反应混合物，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。用无水Na2SO4干燥有机层，过滤并在真空中浓缩。通过PTLC(SiO2)使用30％乙酸乙酯-己烷纯化残余物，得到预期化合物(16mg)。
[0587] 步骤B：1-苯甲基-5-氟-3-(1H-四唑-5-基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑的制备。
[0588]
[0589] 使用与实例9.8步骤B描述的合成程序类似的程序从步骤A的氰基中间物制备所述化合物。
[0590] 步骤C：5-氟-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物14)。
[0591] 向来自步骤B的中间物(13mg，0.04mmol)的MeOH(1mL)溶液中加入甲酸(0.1mL)接着加入钯黑(10mg)。氮气下搅拌反应混合物96小时之后，将其过滤并在真空中浓缩。1
通过反相HPLC(Gil son)纯化残余物，得到标题化合物(4.9mg)。H NMR(CD3OD，500MHz)δ5.8(d，J＝51.9Hz，1H)，3.31-3.17(m，2H)，3.14-2.92(m，2H).LC-MS：0.99min；(M+H)＝
195.17。
通过反相HPLC(Gil son)纯化残余物，得到标题化合物(4.9mg)。H NMR(CD3OD，500MHz)δ5.8(d，J＝51.9Hz，1H)，3.31-3.17(m，2H)，3.14-2.92(m，2H).LC-MS：0.99min；(M+H)＝
195.17。
[0592] 实例9.13：5-丙基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物11)。
[0593]
[0594] 步骤A：5-烯丙基-1-苯甲基-1，6-二氢-环戊吡唑-3-腈和5-烯丙基-1-苯甲基-1，4-二氢-环戊吡唑-3-腈(混合物)的制备。
[0595]
[0596] 向实例9.8中描述的三氟甲磺酸酯中间物(114mg，0.307mmol)的无水THF(2mL)溶液中加入三正丁基烯丙基锡(112mg，0.338mmol)、氯化锂(39mg，0.923mmol)和四三苯基膦钯(0)(7.1mg，0.006mmol)。反应混合物回流6小时以后，将其冷却到室温并过滤。在真空中浓缩残余物并在chromatotron上使用2000-微米转子(SiO2)和20％乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂纯化，得到预期化合物(33mg)。
[0597] 步骤B：5-烯丙基-1-苯甲基-3-(1H-四唑-5-基)-1，6-二氢-环戊吡唑和5-烯丙基-1-苯甲基-3-(1H-四唑-5-基)-1，4-二氢-环戊吡唑(混合物)的制备。
[0598]
[0599] 从上文的步骤A得到的中间物使用在实例9.8步骤B中描述的相似程序制备所述化合物。
[0600] 步骤C：5-丙基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑。
[0601] 向来自步骤B的中间物(18mg，0.059mmol)的甲醇溶液中加入几滴浓HCl直至反应物变均匀。加入Pd/C(1.8mg)并将所得混合物在氢气气氛(气瓶)下搅拌24小时。过1
滤反应混合物，在真空中浓缩并用反相HPLC纯化，得到标题化合物。H NMR(CD3OD，500MHz)δ3.06(m，2H)，2.97(dd，J＝7.5，15.1Hz，1H)，2.5(m，2H)，1.6(m，2H)，1.4(m，2H)，0.98(t，J＝7.3Hz，3H).LC-MS：2.60min；(M+H)＝219.36。
滤反应混合物，在真空中浓缩并用反相HPLC纯化，得到标题化合物。H NMR(CD3OD，500MHz)δ3.06(m，2H)，2.97(dd，J＝7.5，15.1Hz，1H)，2.5(m，2H)，1.6(m，2H)，1.4(m，2H)，0.98(t，J＝7.3Hz，3H).LC-MS：2.60min；(M+H)＝219.36。
[0602] 实例9.14：5-环戊基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物13)。
[0603]
[0604] 步骤A：1-苯甲基-5-环戊-1-烯基-1，6-二氢-环戊吡唑-3-腈和1-苯甲基-5-环戊-1-烯基-1，4-二氢-环戊吡唑-3-腈(混合物)的制备。
[0605]
[0606] 向实例9.8中描述的三氟甲磺酸酯中间物(185mg，0.501mmol)的1，4-二氧六环溶液中加入环戊烯-1-基硼酸(62mg，0.551mmol)、磷酸钾(160mg，751mmol)和四三苯基膦钯(O)。在85℃加热反应混合物。反应完成后，用乙酸乙酯稀释反应物，用1N NaOH和盐水洗涤，并用无水Na2SO4干燥。过滤溶液并在真空中浓缩。在chromatotron上用2000-微米转子(SiO2)和乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂纯化残余物。
[0607] 步骤B：1-苯甲基-5-环戊-1-烯基-3-(1H-四唑-5-基)-1，6-二氢-环戊吡唑和1-苯甲基-5-环戊-1-烯基-3-(1H-四唑-5-基)-1，4-二氢-环戊吡唑(混合物)的制备。
[0608]
[0609] 使用实例9.8步骤B中描述的类似程序从上文步骤A得到的中间物制备所述化合物。
[0610] 步骤C：5-环戊基-3-(1H-四氢-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物13)。
[0611] 向来自步骤B的中间物(16mg，0.048mmol)的甲醇(2mL)溶液中加入甲酸(200μL)。加入钯黑(8.2mg，0.078mmol)，并用氮气净化所得混合物并搅拌24小时。加入另一份钯黑(8.2mg，0.078mmol)。搅拌48小时后，过滤反应物，在真空中浓缩，并通过反相
1
HPLC纯化，得到标题化合物。H NMR(CD3OD，500MHz)δ3.1-2.9(m，2H)，2.6(m，2H)，2.03(m，
2H)，1.87(m，2H)，1.63(m，2H)，1.59(m，2H)，1.28(m，2H).LC-MS：2.99min；(M+H)＝245.46。
1
HPLC纯化，得到标题化合物。H NMR(CD3OD，500MHz)δ3.1-2.9(m，2H)，2.6(m，2H)，2.03(m，
2H)，1.87(m，2H)，1.63(m，2H)，1.59(m，2H)，1.28(m，2H).LC-MS：2.99min；(M+H)＝245.46。
[0612] 实例9.15：5-丁基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物8)。
[0613]
[0614] 步骤A：1-苯甲基-5-丁基-1，6-二氢-环戊吡唑-3-腈和1-苯甲基-5-丁基-1，4-二氢-环戊吡唑-3-腈(混合物)的制备。
[0615] 向实例9.8中描述的三氟甲磺酸酯中间物(180mg，0.486mmol)的甲苯(3mL)溶液中加入正丁基硼酸(99mg，0.973mmol)、K2CO3(201mg，1.46mmol)、PdCl2(dppf)2(12mg，0.0146mmol)和Ag2O(225mg，0.973mmol)。回流反应混合物6小时后，将其冷却到室温并过滤。在真空中浓缩残余物并在chromatotron上使用2000-微米转子(SiO2)和乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂纯化，得到预期产物(52mg)。
[0616] 步骤B：1-苯甲基-5-丁基-3-(1H-四唑-5-基)-1，6-二氢-环戊吡唑和1-苯甲基-5-丁基-3-(1H-四唑-5-基)-1，4-二氢-环戊吡唑(混合物)的制备。
[0617]
[0618] 使用实例9.8步骤B描述的类似程序从上文的步骤A得到的中间物制备所述化合物。
[0619] 步骤C：5-丁基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4，5，6-四氢-环戊吡唑(化合物8)。
[0620] 使用实例5步骤C描述的类似程序从上文的步骤B得到的中间物制备所述化合1
物。H NMR(CD3OD，500MHz)δ3.1(m，2H)，2.9(m，1H)，2.5(m，2H)，1.6(m，2H)，1.4(m，4H)，
0.9(t，J＝7.0Hz，3H).LC-MS：2.86min；(M+H)＝233.34。
物。H NMR(CD3OD，500MHz)δ3.1(m，2H)，2.9(m，1H)，2.5(m，2H)，1.6(m，2H)，1.4(m，4H)，
0.9(t，J＝7.0Hz，3H).LC-MS：2.86min；(M+H)＝233.34。
[0621] 实例9.16：5-甲基-3-(1H-四唑-5-基)-2，6-二氢-环戊吡唑(化合物9)和5-甲基-3-(1H-四唑-5-基)-2，4-二氢-环戊吡唑(化合物10)。
[0622]
[0623] 步骤A：5-乙氧基-1，4-二氢-环戊吡唑-3-甲酸叔丁酯的制备。
[0624]
[0625] 向如上文实例9.8的步骤A中从3-乙氧基环戊烯酮制备的酮酯(254mg，1.0mmol)的乙醇(5mL)溶液中加入水合肼(34μL，1.1mmol)，接着加入乙酸(0.5ml)。反应混合物回流1.5小时之后，将其冷却至室温并在真空中浓缩。将残余物悬浮于水中并用乙酸乙酯萃取。用无水Na2SO4干燥有机层，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱法(SiO2)使用25％乙酸乙酯-己烷纯化残余物，得到呈白色固体的预期产物。
[0626] 步骤B：5-乙氧基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1，4-二氢-环戊吡唑-3-甲酸叔丁酯的制备。
[0627]
[0628] 向来自上文的步骤A的吡唑中间物(275mg，1.1mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液中加入吡啶(178μL，2.2mmol)和对甲苯磺酰氯(230mg，1.21mmol)。室温下搅拌所得反应混合物3小时后，用CH2Cl2稀释，用1N HCl、饱和NaHCO3洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱法(SiO2)使用10％乙酸乙酯-己烷纯化残余物。
[0629] 步骤C：5-氧-1-(甲苯-4-磺酰基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸的制备。
[0630]
[0631] 向来自以上步骤B的中间物(414mg，1.02mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入三氟乙酸(2ml)。室温下搅拌反应物1.5小时后，将其在真空中浓缩，并与甲苯共沸(2x)。此物质未经任何进一步的纯化便用于下一步骤。
[0632] 步骤D：5-氧-1-(甲苯-4-磺酰基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸2，5-二氧-吡啶烷-1-基酯的制备。
[0633]
[0634] 向来自以上步骤C的中间物(320mg，1.0mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液中加入N-羟基丁二酰亚胺(230mg，2.0mmol)，接着加入EDC(384mg，2.0mmol)。室温下搅拌18小时后，将反应物在真空中浓缩。用乙酸乙酯(20mL)稀释残余物，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。用无水Na2SO4干燥有机层，过滤并在真空中浓缩。得到黄色固体。
[0635] 步骤E：5-氧-1-(甲苯-4-磺酰基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-甲酸酰胺的制备。
[0636]
[0637] 向来自以上步骤D的中间物(380mg，0.91mmol)的1，4-二氧六环(10mL)溶液中加入NH4OH(14.8N，10.0eq，0.61mL)。立即形成沉淀。在室温下搅拌15分钟后，将反应混合物通过烧结漏斗过滤并用1，4-二氧六环洗涤沉淀。在真空中浓缩滤出液，得到黄色油状物。
[0638] 步骤F：5-氧-1-(甲苯-4-磺酰基)-1，4，5，6-四氢-环戊吡唑-3-腈的制备。
[0639]
[0640] 向来自以上步骤E的中间物(0.91mmol)的无水DMF(5mL)溶液中按两份加入氰尿酰氯(334mg，2.0mmol)。室温下搅拌15分钟后，通过将反应物倒入水(10mL)中而终止反应。用乙酸乙酯萃取所得混合物，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱法(SiO2)使用25％乙酸乙酯-己烷纯化残余物。得到白色固体。
[0641] 步骤G：三氟-甲磺酸3-氰基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1，6-二氢-环戊吡唑-5-基酯和三氟-甲磺酸3-氰基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1，4-二氢-环戊吡唑-5-基酯(混合物)的制备。
[0642]
[0643] 在-78℃下向来自步骤F的中间物(100mg，0.33mmol)的无水THF(5mL)溶液中加入二异丙基胺锂(0.33mmol，166μL，THF中2.0M)的THF(6mL)溶液。在-78℃下搅拌反应物30分钟后，加入2[N，N-双(三氟甲基磺酰基)胺]-5-氯吡啶(195mg，0.496mmol)。将反应物加温至0℃并搅拌45分钟。用1N HCl溶液终止反应，并用乙酸乙酯萃取所得混合物，用饱和NaHCO3溶液洗涤并用无水Na2SO4干燥。过滤溶液并在真空中浓缩。通过快速色谱法(SiO2)使用5％乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂纯化残余物，以提供79mg作为双键区域异构体的4∶1混合物的预期产物。
[0644] 步骤H：5-甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1，6-二氢-环戊吡唑-3-腈和5-甲基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1，4-二氢-环戊吡唑-3-腈(混合物)的制备。
[0645]
[0646] 向来自以上步骤G的中间物(79mg，0.182mmol)的甲苯(1.5mL)溶液中加入氯化锂(39mg，0.912mmol)、四甲基锡(126μL，0.912mmol)和四三苯基膦钯(O)。搅拌反应物45分钟后，将其冷却到室温，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。用无水Na2SO4干燥有机层，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱法(SiO2)使用30％乙酸乙酯-己烷纯化残余物，得到预期产物(28mg)。
[0647] 步骤I：5-甲基-1，6-二氢-环戊吡唑-3-腈和5-甲基-1，4-二氢-环戊吡唑-3-腈(混合物)的制备。
[0648]