同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验的装置和方法转让专利
申请号 : CN200480025576.8
文献号 : CN1894584B
文献日 : 2010-10-13
发明人 : P·施温特 , K·洛斯特
申请人 : 麦迪奥诊断产品股份公司
摘要 :
本发明涉及一种用于同时定性或定量检测液体样品中的几种分析物的装置，所述装置包括膜(2)，膜上具有供涂布液体样品的加样区(5)，至少两个可与分析物相互作用的指示区，和至少一个在液体通过指示区之后接受液体吸收区(3)，其中，指示区位于加样区(5)和吸收区(3)之间，其特征在于，从加样区(5)通过每个指示区到吸收区(3)的流动方向(流动轨迹)基本平行，且存在至少两个不同的流动轨迹。本发明还涉及检测液体样品中的几种分析物或其衍生物的方法，所述方法包括：将样品施加到如权利要求1-8所给装置的膜的加样区(5)，其中，所述样品的存在量足以使样品流通过指示区朝吸收区(3)流动，并能使液体样品中的分析物或其衍生物在指示区形成复合物。
权利要求 :
1.一种用于同时定性或定量检测液体样品中的多个分析物的装置，其中至少一个分析物是细胞结合分析物，使用至少两种类型的指示剂颗粒用于测定，其中至少一种类型为细胞，所述装置包括：-用于涂布液体样品的加样区(5)，
-便于细胞组分流入的多孔的膜(2)，而且所述膜(2)上具有能与分析物互相作用的至少两个指示区，以及-至少一个在液体通过指示区后吸收液体的膜上的吸收区(3)，
其中，所述指示区位于加样区(5)和吸收区(3)之间，其中，
从加样区(5)通过对应的指示区到吸收区(3)的流动方向(流动轨迹)基本平行，并存在至少两个不同的流动轨迹，其中，至少两个指示区设置在膜上，其中至少一个指示区具有用于结合细胞结合分析物，至少另一个指示区具有用于结合血浆中含有的分析物的结合部分。
2.如权利要求1所述的装置，其特征在于，指示区排列成：对于任何一个流动轨迹，待测液体流过至多一个指示区。
3.如权利要求1所述的装置，其特征在于，指示区排列成对角的V-、W-、M-、N-形，或排成直线。
4.如权利要求1至3中任何一项所述的装置，其特征在于，至少两排指示区沿流动方向排成一个在另一个后面和/或侧向交错，且不同排的指示区排列成相互之间存在间隙，以使对于任何一个流动轨迹，待测液体流过至多一个指示区。
5.如权利要求1或3所述的装置，其特征在于，至少两排指示区沿流动方向排成一个在另一个后面和/或并排，且不同排的指示区排列成相互之间不存在一间隙，以使对于任何一个流动轨迹，待测液体流过一个以上指示区。
6.如权利要求1至3中任何一项所述的装置，其特征在于，排列至少两组指示区，从加样区开始它们被放置在不同流动方向上。
7.如权利要求1至3中任何一项所述的装置，其特征在于，指示区含有抗体或抗体片段或凝集素，抗原或抗原表位，和/或细胞或细胞碎片。
8.如权利要求7所述的装置，其特征在于，指示区尤其含有抗血型抗原或抗原表位的抗体或抗体片段以及A1、A2、B和/或O血型红细胞的膜或细胞碎片。
9.如权利要求7所述的装置，其特征在于，指示区尤其含有抗血型抗原或抗原表位的抗体或抗体片段以及合成肽、重组抗原和/或抗感染标记的抗体或抗体片段。
10.如权利要求7所述的装置，其特征在于，指示区尤其含有抗血型抗原或抗原表位的抗体或抗体片段以及血小板和/或淋巴细胞的碎片。
11.如权利要求1所述的装置，其特征在于，所有膜(2)优选由聚乙烯、硝酸纤维素或尼龙构成。
12.如权利要求1所述的装置，其特征在于，在加样区(5)下游和指示区上游，在膜(2)上提供至少一个密封元件(4)。
13.如权利要求12所述的装置，其特征在于，在密封元件(4)下游和指示区上游施加至少一个相配的垫。
14.如权利要求13所述的装置，其特征在于，装置的部件施加到支承层(1)上以作机械加强。
15.如权利要求14所述的装置，其特征在于，装置的部件一体地形成在外壳内。
16.如权利要求1至15中任何一项所述的装置在血液分析中的用途。
17.如权利要求16所述的用途，其特征在于，分析包括同时进行血型测定和血清逆向分型(血清交叉核对)和/或抗体检测试验。
18.如权利要求16所述的用途，其特征在于，同时进行血型测定和感染血清标记或其片段的检测。
19.如权利要求16所述的用途，其特征在于，同时进行血型测定和抗血细胞抗体尤其是抗血小板或抗淋巴细胞抗体或其对应片段的检测。
20.一种测定液体样品中的多个分析物或其衍生物的方法，其中至少一个分析物是细胞结合分析物，该方法包括：将样品施加到如上述权利要求1至15中任何一项所述装置的至少一个膜(2)的加样区(5)上，其中，该样品的量足以使待测液体通过指示区朝吸收区(3)的方向流动，并使待测液体中的分析物或其衍生物在指示区内形成复合物，其中，使用至少两种类型的指示剂颗粒，其中至少一种类型为细胞。
21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述分析物或其衍生物是血型抗原或抗原表位、直接抗血型抗原或其片段的抗体、直接抗血小板或白细胞的抗体或其片段，或直接抗传染物或者传染物的抗原或抗原表位的抗体或其片段。
22.如权利要求20或21所述的方法，其特征在于，所述分析物或其衍生物尤其包括ABO、Rh和Kell血型系统的抗原或抗原表位。
23.如权利要求20或21所述的方法，其特征在于，所述分析物或其衍生物尤其包括抗血小板和/或淋巴细胞的抗体或其片段。
24.如权利要求20或21所述的方法，其特征在于，所述分析物或其衍生物尤其包括抗细菌性和/或病毒性试剂或者病毒性或细菌性抗原或抗原表位的抗体。
25.如权利要求20或21所述的方法，其特征在于，所述液体样品优选包括全血、血细胞浓缩物、血清、血浆和/或待测液体。
26.如权利要求25所述的方法，其特征在于，待测液体包括对照血清或对照细胞。
27.如权利要求20或21所述的方法，其特征在于，使用至少两种类型的指示剂颗粒，其中至少一种类型代表红细胞。
说明书 :
技术领域
本发明涉及一种用于侧向-对角流多参数试验的装置，尤其用于免疫血液病学和传染血清学的领域，以对液体样品中的多个分析物同时作定性或定量测定，该装置包括至少一个膜，所述膜具有施加液体样品的加样区，至少两个能与分析物互相作用的指示区，以及至少一个在液体通过指示区后吸收液体的吸收区，指示区位于加样区和吸收区之间，其特征在于，从加样区通过对应的指示区到吸收区的流动方向(流动轨迹)基本上平行，且存在至少两个不同的流动轨迹。
本发明还涉及一种分析液体样品中多个分析物的方法，该方法包括将样品施加到本发明所述装置的膜的加样区上，其中，该样品的存在量足以使待测液体通过指示区朝吸收区的方向流动，并使待测液体中的分析物或其衍生物在指示区内形成复合物，尤其用于同时测定细胞和血浆参数，优选同时进行血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验，以及同时进行血型测定和输血相关感染血清标记的测定，以及同时进行血型测定和测定直接抗红细胞之外的血细胞的抗体，尤其是抗血小板和抗淋巴细胞抗体。
背景技术
为防止发生并发症，例如在输血过程中，尤其是血型不合，病毒性和/或细菌性污染，已知需对供体和病人血液实施各种实验室试验，以便能提供在血型血清意义上与受体相容的组分，并且没有已知的传输病原体。对应的血清试验通常包括供体和受体血型测定，尤其是，ABO、Rh和Kell血型系统的血型，对供体和受体的血清交叉核对，对供体和受体不规则抗体实施的抗体检测试验，以及在受体中存在不规则抗体时的抗体识别。同样地，在输液和移植中需实施抗血小板和/或淋巴细胞的抗体的检测。
对供体的传染血清试验包括已知方式的常规的抗体测定，尤其是，抗HIV-I、HIV-II，抗HCV，抗梅毒螺旋体(梅毒)。以及乙型肝炎表面抗原(＝HbsAg：肝炎表面抗原)的测定。
在血型血清诊断学中，一般需试验多个参数，它们特别地关联到输液或新生儿溶血病(Mhn)。这包括红细胞表面上抗原的检测，它们是血型的特征(血型测定)。此外，重要的抗原系统还存在于血小板、粒细胞、淋巴细胞，它们同样地在输液和移植中起到重要作用。在母亲和胎儿之间的血小板和粒细胞抗原不一致性的情形中，新生儿可发生类似于Mhn的病理症状。此外，血清或血浆中的规则血型抗体(同种凝集素)和不规则血型抗体的检测在这里也是实用的。
同种凝集素或规则抗体在人类诞生后就立即获得，并对应于ABO系统的对应血型。它们抗个体本身所缺乏的血型抗原A或B，即，A血型的人具有抗-B，B血型的人具有抗-A，O血型的人具有抗-A和抗-B；AB血型的人没有同种凝集素。规则的抗体也称之为“完全的”，因为它们能够在NaCl介质中直接凝集红细胞。
与同种凝集素相比，不规则抗体或同种抗体是在晚期通过免疫获得的，尤其是通过输液或怀孕。为此原因，大多数人没有不规则血型抗体。与输液有关的不规则抗体一般是热反应性的，且多数属于IgG类。与规则抗体相反，它们不能够在NaCl介质中直接凝集红细胞。
众所周知，为了测定血型，将待测的人体红细胞(供体或受体)与含有血型特异性抗体的试剂放在一起。一般地，这些试验在液体状态下进行，其中，将含有红细胞的样品与含有抗特定血型特征的抗体的样品混合，由此形成试验的一批。然后，该试验的一批在规定的时间内在规定的条件下进行培养，在培养结束后，直接地或在离心步骤之后进行肉眼观察或光学方法的试验，以试验红细胞可能的凝集或吸附性。血型血清学的主要的终点测量仍然是血细胞凝集试验。对于待测定的每个血型，必须用吸液管吸取单独的一批，即，例如为测定九种最重要的血型A、B、D、C、c、E、e、Cw和K，需要九个单独批次，其中不包括任何对照。
对于血清交叉核对，以已知的方式使用具有已知ABO血型(A1、A2、B、O)的细胞试剂，将它们与待测试的人血清或血浆一起进行培养。在离心分离步骤之后，用肉眼观察或光学方法试验红细胞可能的凝集性。用上述试验进行血清交叉核对时，细胞通常必须用吸液管吸取四批。
为了研究不规则的抗体，通常使用试验板，试验板包括两种或三种血型O细胞，它们的组合抗原图形包含最重要的抗原，尤其是，血型系统Rh、Kell、Duffy、Kidd、MNS、P、Lewis、Lutheran。细胞试剂与待测试人的血清或血浆放在一起并进行培养，在离心分离步骤之后，用肉眼方法或光学方法对红细胞的任何凝血进行试验。为测试一个病人的样品，必须用吸液管吸取两至三批。
为了鉴定不规则抗体，它们一般地在阳性抗体检测试验之后发生，使用包括多达16种血型O细胞的试验板，它的抗原图形涵盖最重要的抗原，尤其是，以准确预定方式排列的血型系统Rh、Kell、Duffy、Kidd、MNS、P、Lewis、Lutheran。细胞试剂与待测试人的血清或血浆放在一起，用肉眼方法或光学方法对红细胞的任何凝集进行试验。为测试一个病人的样品，必须用吸液管吸取多达16批。
由于大部分与输液相关的不规则抗体是IgG型，因此不完全地，通常必须加强上述抗体检测和识别反应以便能检测血细胞凝集终点。用于此目的的最常用的试剂是多克隆抗-人球蛋白试剂，其中通常添加有抗-补体的抗体(通常为抗-C3d和/或抗-C3d)。
用来检测血小板抗体的普通采用的方法是所谓的MAIPA试验(血小板抗原的单克隆抗体固定(monoclonal antibody immobilization of platelet antigens))。在此情形中，将试验血小板与待测血清一起培养。在冲洗步骤之后，用例如特异于特定血小板糖蛋白的单克隆小鼠抗体进行培养。然后溶解血小板并将稀释的溶解产物加入涂布有例如羊抗-小鼠抗体的微量滴定板的反应皿中。羊抗-小鼠抗体结合鼠抗体及与其结合的血小板糖蛋白人抗体复合体。通过添加酶偶联的羊抗-人IgG对人抗体进行试验。
采用传统的诊断试验，只能测定细胞或血浆的参数。为了测定血液组分，总是需要首先从血浆中分离出细胞。
如今侧向流试验(lateral flow test)通常用作为快速试验，例如妊娠试验，用来确定感染标记或药物筛选。已知方式的侧向流试验装置包括刚性支承物，其上提供用于待测样品的加样区，分离膜，膜上结合有结合成分，例如捕获抗体或抗原，并且可在膜上检测结合反应，以及产生抽吸的吸收区，这使得待测样品以线性的方式流过分离膜。
传统的侧向流试验的试验膜通常描述为包括层析法样的分离。样品中的分析物特异性结合到固定在膜内的结合成分，结合成分一般以连续或重叠的带出现，作为指示区。结合复合体通过指示剂颗粒而可见，指示剂颗粒通常已经以脱水形式存在于装置中相配的释放垫内。相配的释放垫设置在加样区和膜之间。用例如针对待测分析物的抗体涂布预涂布的有色指示剂颗粒。
传统的侧向流试验模式对应于所谓的“夹心试验”，其中，指示区以及指示剂颗粒用针对待测分析物(通常为抗体)的配体涂布。文中，配体(结合成分)固定在膜上。检测试剂，通常是结合到着色的聚苯乙烯颗粒或胶体金属的抗体，以可滤去的方式沉积在相配的释放垫内。该结合复合体作为指示剂颗粒。一旦施加了待测样品，它非常快地润湿相配的释放垫，从而指示剂颗粒可移动。指示剂颗粒沿着多孔膜随液体前沿迁移。存在于样品中的分析物变得被与指示剂颗粒偶联的抗体经结合。当样品通过指示区时，由于分析物与结合在指示区内的抗体反应，指示区内的分析物/指示剂颗粒复合体被固定，产生可见信号。
另一已知的用于小分析物的试验模式是所谓的“竞争性试验”，所述小分析物只含有一个抗原决定簇，无法同时结合两种抗体。结合到指示剂颗粒上的检测试剂通常是与分析物相同的或类似的分子。指示剂颗粒沉积在相配的释放垫上。指示剂颗粒沿着多孔膜随液体前沿迁移。如果样品含有分析物，且如果指示剂颗粒(其同样有效地含有分析物)通过指示区，则样品中的分析物分子部分结合到指示剂颗粒的部分。样品中的分析物越多，则它将更有效地竞争结合指示剂颗粒，且信号将变得越弱。
根据现有技术，这些指示剂颗粒主要由胶体金或聚苯乙烯构成，并根据技术人员所熟知的方法进行制造和涂敷。在典型的侧向流试验模式中，间接测定分析物。文中，直接测定分析物表示分析物已经自然地结合到指示剂颗粒(例如，红细胞)。在间接测定分析物这种更为普通的情形中，待测样品通常含有诸如血浆组分的非细胞结合组分作为分析物，除了待测样品，还需要两种反应试剂组分，即指示剂颗粒和结合成分。在间接测定中，分析物起初结合到从相配的释放垫溶解出来的指示剂颗粒，然后，借助于第二反应用结合成分将此复合物固定在指示区。
当使用传统的侧向流试验时，用已经结合到诸如血型特异性抗原的待测分析物的红细胞作为指示剂颗粒，目前通常在指示区内以连续或重叠条带的形式提供针对作为结合成分的相应血型抗原的抗体，但只在一个流动轨迹内提供，例如，抗血型抗原A或B的抗-A或抗-B或者抗Rh血型系统抗原的抗体。这里，传统的侧向流试验有这样的缺点，即，结合到抗体上的红细胞形成了阻止样品中仍旧待测的分析物，如与抗原有关的其它细胞，的流动屏障。由于靠近加样区的排列的结合成分带内的细胞的聚集或吸收，其它分析物(尤其是待测样品中的细胞或细胞碎片)不再无阻碍地和可见地被分离，因此不能不含糊地或完全地进行试验。例如，在AB Rh D血型呈阳性的人中，这可导致减弱或消除B和D带，它们可以导致一可解释为血型A Rh为负的缺陷。为此原因，迄今为止不能在血型血清诊断学中使用具有一个以上指示区的侧向流试验。为了测定多个尤其是细胞的和血浆的血型参数，至此有必要单独地实施单一的参数试验。
对供体的传染血清试验包括已知方式的常规的抗体测定，尤其是，抗HIV-I、HIV-II，抗HCV，抗梅毒螺旋体(梅毒)。以及乙型肝炎表面抗原(＝HbsAg：肝炎表面抗原)的测定。
在血型血清诊断学中，一般需试验多个参数，它们特别地关联到输液或新生儿溶血病(Mhn)。这包括红细胞表面上抗原的检测，它们是血型的特征(血型测定)。此外，重要的抗原系统还存在于血小板、粒细胞、淋巴细胞，它们同样地在输液和移植中起到重要作用。在母亲和胎儿之间的血小板和粒细胞抗原不一致性的情形中，新生儿可发生类似于Mhn的病理症状。此外，血清或血浆中的规则血型抗体(同种凝集素)和不规则血型抗体的检测在这里也是实用的。
同种凝集素或规则抗体在人类诞生后就立即获得，并对应于ABO系统的对应血型。它们抗个体本身所缺乏的血型抗原A或B，即，A血型的人具有抗-B，B血型的人具有抗-A，O血型的人具有抗-A和抗-B；AB血型的人没有同种凝集素。规则的抗体也称之为“完全的”，因为它们能够在NaCl介质中直接凝集红细胞。
与同种凝集素相比，不规则抗体或同种抗体是在晚期通过免疫获得的，尤其是通过输液或怀孕。为此原因，大多数人没有不规则血型抗体。与输液有关的不规则抗体一般是热反应性的，且多数属于IgG类。与规则抗体相反，它们不能够在NaCl介质中直接凝集红细胞。
众所周知，为了测定血型，将待测的人体红细胞(供体或受体)与含有血型特异性抗体的试剂放在一起。一般地，这些试验在液体状态下进行，其中，将含有红细胞的样品与含有抗特定血型特征的抗体的样品混合，由此形成试验的一批。然后，该试验的一批在规定的时间内在规定的条件下进行培养，在培养结束后，直接地或在离心步骤之后进行肉眼观察或光学方法的试验，以试验红细胞可能的凝集或吸附性。血型血清学的主要的终点测量仍然是血细胞凝集试验。对于待测定的每个血型，必须用吸液管吸取单独的一批，即，例如为测定九种最重要的血型A、B、D、C、c、E、e、Cw和K，需要九个单独批次，其中不包括任何对照。
对于血清交叉核对，以已知的方式使用具有已知ABO血型(A1、A2、B、O)的细胞试剂，将它们与待测试的人血清或血浆一起进行培养。在离心分离步骤之后，用肉眼观察或光学方法试验红细胞可能的凝集性。用上述试验进行血清交叉核对时，细胞通常必须用吸液管吸取四批。
为了研究不规则的抗体，通常使用试验板，试验板包括两种或三种血型O细胞，它们的组合抗原图形包含最重要的抗原，尤其是，血型系统Rh、Kell、Duffy、Kidd、MNS、P、Lewis、Lutheran。细胞试剂与待测试人的血清或血浆放在一起并进行培养，在离心分离步骤之后，用肉眼方法或光学方法对红细胞的任何凝血进行试验。为测试一个病人的样品，必须用吸液管吸取两至三批。
为了鉴定不规则抗体，它们一般地在阳性抗体检测试验之后发生，使用包括多达16种血型O细胞的试验板，它的抗原图形涵盖最重要的抗原，尤其是，以准确预定方式排列的血型系统Rh、Kell、Duffy、Kidd、MNS、P、Lewis、Lutheran。细胞试剂与待测试人的血清或血浆放在一起，用肉眼方法或光学方法对红细胞的任何凝集进行试验。为测试一个病人的样品，必须用吸液管吸取多达16批。
由于大部分与输液相关的不规则抗体是IgG型，因此不完全地，通常必须加强上述抗体检测和识别反应以便能检测血细胞凝集终点。用于此目的的最常用的试剂是多克隆抗-人球蛋白试剂，其中通常添加有抗-补体的抗体(通常为抗-C3d和/或抗-C3d)。
用来检测血小板抗体的普通采用的方法是所谓的MAIPA试验(血小板抗原的单克隆抗体固定(monoclonal antibody immobilization of platelet antigens))。在此情形中，将试验血小板与待测血清一起培养。在冲洗步骤之后，用例如特异于特定血小板糖蛋白的单克隆小鼠抗体进行培养。然后溶解血小板并将稀释的溶解产物加入涂布有例如羊抗-小鼠抗体的微量滴定板的反应皿中。羊抗-小鼠抗体结合鼠抗体及与其结合的血小板糖蛋白人抗体复合体。通过添加酶偶联的羊抗-人IgG对人抗体进行试验。
采用传统的诊断试验，只能测定细胞或血浆的参数。为了测定血液组分，总是需要首先从血浆中分离出细胞。
如今侧向流试验(lateral flow test)通常用作为快速试验，例如妊娠试验，用来确定感染标记或药物筛选。已知方式的侧向流试验装置包括刚性支承物，其上提供用于待测样品的加样区，分离膜，膜上结合有结合成分，例如捕获抗体或抗原，并且可在膜上检测结合反应，以及产生抽吸的吸收区，这使得待测样品以线性的方式流过分离膜。
传统的侧向流试验的试验膜通常描述为包括层析法样的分离。样品中的分析物特异性结合到固定在膜内的结合成分，结合成分一般以连续或重叠的带出现，作为指示区。结合复合体通过指示剂颗粒而可见，指示剂颗粒通常已经以脱水形式存在于装置中相配的释放垫内。相配的释放垫设置在加样区和膜之间。用例如针对待测分析物的抗体涂布预涂布的有色指示剂颗粒。
传统的侧向流试验模式对应于所谓的“夹心试验”，其中，指示区以及指示剂颗粒用针对待测分析物(通常为抗体)的配体涂布。文中，配体(结合成分)固定在膜上。检测试剂，通常是结合到着色的聚苯乙烯颗粒或胶体金属的抗体，以可滤去的方式沉积在相配的释放垫内。该结合复合体作为指示剂颗粒。一旦施加了待测样品，它非常快地润湿相配的释放垫，从而指示剂颗粒可移动。指示剂颗粒沿着多孔膜随液体前沿迁移。存在于样品中的分析物变得被与指示剂颗粒偶联的抗体经结合。当样品通过指示区时，由于分析物与结合在指示区内的抗体反应，指示区内的分析物/指示剂颗粒复合体被固定，产生可见信号。
另一已知的用于小分析物的试验模式是所谓的“竞争性试验”，所述小分析物只含有一个抗原决定簇，无法同时结合两种抗体。结合到指示剂颗粒上的检测试剂通常是与分析物相同的或类似的分子。指示剂颗粒沉积在相配的释放垫上。指示剂颗粒沿着多孔膜随液体前沿迁移。如果样品含有分析物，且如果指示剂颗粒(其同样有效地含有分析物)通过指示区，则样品中的分析物分子部分结合到指示剂颗粒的部分。样品中的分析物越多，则它将更有效地竞争结合指示剂颗粒，且信号将变得越弱。
根据现有技术，这些指示剂颗粒主要由胶体金或聚苯乙烯构成，并根据技术人员所熟知的方法进行制造和涂敷。在典型的侧向流试验模式中，间接测定分析物。文中，直接测定分析物表示分析物已经自然地结合到指示剂颗粒(例如，红细胞)。在间接测定分析物这种更为普通的情形中，待测样品通常含有诸如血浆组分的非细胞结合组分作为分析物，除了待测样品，还需要两种反应试剂组分，即指示剂颗粒和结合成分。在间接测定中，分析物起初结合到从相配的释放垫溶解出来的指示剂颗粒，然后，借助于第二反应用结合成分将此复合物固定在指示区。
当使用传统的侧向流试验时，用已经结合到诸如血型特异性抗原的待测分析物的红细胞作为指示剂颗粒，目前通常在指示区内以连续或重叠条带的形式提供针对作为结合成分的相应血型抗原的抗体，但只在一个流动轨迹内提供，例如，抗血型抗原A或B的抗-A或抗-B或者抗Rh血型系统抗原的抗体。这里，传统的侧向流试验有这样的缺点，即，结合到抗体上的红细胞形成了阻止样品中仍旧待测的分析物，如与抗原有关的其它细胞，的流动屏障。由于靠近加样区的排列的结合成分带内的细胞的聚集或吸收，其它分析物(尤其是待测样品中的细胞或细胞碎片)不再无阻碍地和可见地被分离，因此不能不含糊地或完全地进行试验。例如，在AB Rh D血型呈阳性的人中，这可导致减弱或消除B和D带，它们可以导致一可解释为血型A Rh为负的缺陷。为此原因，迄今为止不能在血型血清诊断学中使用具有一个以上指示区的侧向流试验。为了测定多个尤其是细胞的和血浆的血型参数，至此有必要单独地实施单一的参数试验。
发明内容
本发明的一个目的是克服现有技术状态中所涉及的诸多缺点，具体来说，为同时测定不同的样品参数(尤其是细胞和血浆参数)现有技术的传统侧向流试验需连续的或重叠的指示区或试验区域。
一方面通过同时定性或定量测定一个液体样品或多个液体样品中的一种或多种分析物的装置来达到本发明的这个目的，该装置包括至少一层膜，膜上具有用于涂布液体样品的加样区，至少一组能与分析物互相作用或分析物可与其发生反应的至少两个指示区，以及一个在液体通过指示区后吸收液体的吸收区，其中，该指示区位于加样区和吸收区之间，其特征在于，从加样区通过一组对应的指示区到吸收区的流动方向基本平行，存在至少两个不同的流动轨迹。
本发明所述装置的指示区存在于膜上，并包含捕捉或结合样品中待测分析物的结合成分。分析物和结合成分之间的结合反应在指示区内被检测到。抗体或抗体片段、凝集素、抗原或抗原表位，和/或细胞或细胞碎片都固定到多孔膜，作为特别优选的结合成分。指示区优选各包含针对一种待测分析物的一种结合成分。
在本发明的一个实施方案中，指示区排列成：对于每个流动轨迹，待测液体将流过至多一个指示区。例如，指示区以交叉的关系设置在膜上。指示区的这种排列最好构造成一排，其从近端到远端对角地延伸，反之亦然。特定的例子是V形、W形、M形或N形，或倒置的V形、W形、M形或N形。在另一实施方案中，指示区交叉地平行并排排成一排。
提供交叉的指示区对于多参数试验是先决条件，使红细胞在侧向排列中作为指示剂颗粒。对角排列的特别优选的实施方案提供了这样的优点：所显示的结果可以特别实用和容易读取的方式应用于本发明的装置；因为待测试的各参数占据一规定的X和Y位置，所以，根据本发明装置的结构可被看作为一具有纵坐标(流动方向的平面)和横坐标(加样区的平面)的坐标系。
在本发明的另一个实施方案中，指示区的一个以上的这样的排最好各从近端到远端对角方向地延伸，反之亦然，或者，例如，其是V形、W-、M-或N形，或倒置的V形、W-、M-或N形，沿流动方向延伸，相继地和/或侧向地交叉，各排的指示区以间隔开的关系排列，以使对于各流动轨迹的待测液体流过不多于一单一指示区，或者各排的指示区彼此接触地延伸，以使对于各流动轨迹的待测液体流过一个以上的指示区。
一个以上这样的指示区，例如，具有离加样区不同距离的两排指示区在以下情形中特别具有优点，即从一全血样品中测定细胞和血浆的参数。在一实施方案中，例如，在一含有全血作为样品的试验一批中，选择结合成分，以使流过装置从加样区通过指示区到吸收区的包含在血浆中的分析物(例如，各种类型的抗体)，变得结合到靠近加样区排列的成排的指示区内的结合成分。另一方面，选择用来检测细胞结合分析物(例如，红细胞抗原)的结合成分，以使它们变得结合到远离加样区排列的成排的指示区内的结合成分。在该优选的实施方案中，除了红细胞之外，优选操作另一类型的指示剂颗粒，最好是胶体金或聚苯乙烯，或固定的红细胞。使用这些指示剂颗粒是特别为了在指示区内的结合复合体中可见那些未结合到红细胞上的分析物，例如，在血浆中自由发生的抗体。例如，如果使用两种类型的指示剂颗粒，其中一个不是红细胞，则两排的指示区可并排地排列而彼此接触，或其后成一单一的流动轨迹。这里的该结构具有这样的优点，其中，血浆的待测试的分析物在近端的指示区内检测，而结合红细胞的分析物在远端的指示区内检测。本发明的一实施方案包括如上所述的一排以上的指示区，其中，各排的结合成分反应或结合到红细胞而起作指示剂颗粒，指示区的各排保持彼此间隔开的关系，或位于一单一的流动轨迹内且不连续。
在另一特别优选的本发明的实施方案中，指示区的一个以上的这样的排最好在从近端到远端对角方向延伸的一排中设置，反之亦然，或者，例如，其是呈V形、W-、M-或N形方式延伸的排，或是倒置的V形、W-、M-或N形排，或甚至是相对于一中心的加样区以交叉的关系双向地(例如，彼此成180°角度)并排地平行延伸的排。这样的结构特别在从全血样品中测试细胞和血浆参数的情形中具有优点。
在一实施方案中，例如，在包括全血作为样品的试验一批中，选择结合成分，以使从加样区通过指示区流到吸收区的包含在血浆中的分析物(例如，各种类型的抗体)，变得结合到设置在加样区一侧上的成排的指示区内的结合成分。另一方面，选择用来检测细胞地结合的分析物(例如，红细胞抗原)的结合成分，以使它们变得结合到在加样区相对侧上排列的端部排的指示区的结合成分。在该优选的实施方案的情形中，除了红细胞之外，优选操作另一类型的指示剂颗粒，最好是胶体金或聚苯乙烯。使用这些指示剂颗粒是特别为了在指示区内的结合复合体中可见那些未结合到红细胞上的分析物，例如，在血浆中自由地发生的抗体。
在一优选的实施方案中，加样区还包括两个不同孔隙率的不同的膜。在此优选的实施方案中，除了红细胞之外，优选操作另一类型的指示剂颗粒，最好是胶体金或聚苯乙烯。使用这些指示剂颗粒是特别为了在指示区内的结合复合体中可见那些未结合到红细胞上的分析物，例如，在血浆中自由发生的抗体。
在一特别优选的实施方案中，加样区包括一种膜或两种不同孔隙率的不同的膜。此外，其中一种膜包括一排列在一密封元件和指示区之间的相配的垫。在此优选的实施方案中，除了红细胞之外，优选操作另一类型的指示剂颗粒，最好是胶体金或聚苯乙烯。使用这些指示剂颗粒是特别为了在指示区内的结合复合体中可见那些未结合到红细胞上的分析物，例如，在血浆中自由地发生的抗体。除了用于红细胞之外，该类型的指示剂颗粒以干的形式存在于相配垫内。此外，相配垫小心顾及使红细胞流动减缓。这在包括一单一共用的加样区的双向的结构中具有的这样的效应：沿一个方向保持优化的条件以检测细胞的特性，而沿相对方向保持优化的条件以检测血浆的特性。
借助于本发明的装置，可提供侧向流试验，尤其是用于血液血清诊断学，借助于该装置红细胞可用作为指示剂颗粒，其中，在一单一的试验一批中，在各待测样品中，可同时地测定若干个细胞参数，具体来说，红细胞抗原或抗原表位，血浆参数和/或血细胞特性，尤其可测定每个待测样品的全血组分。此外，这样可提供一试验系统，其可特别容易地进行制造并可特别地用于少数的试验系列而不需样品准备，并且成本经济有效，但借助于该系统，可同时地测定待测一个样品或多个样品的各种细胞参数和/或血浆参数。
本发明的装置在所有医学诊断学领域内提供上述的优点，其中，同时地测定不同的细胞参数和血浆参数，具体来说，在血型和传染血清的领域中，在与输血医学相关的任何诊断学中，例如，对于同时进行血型测定，其中，特别地测定结合红细胞的抗原或抗原表位，而对于血清交叉核对，其中，特别地测定规则抗体(同种凝集素)，和/或抗体检测试验，其中，特别地测定不规则抗体，例如，对于同时进行血型测定和与感染血清标记相关的输液的检测，例如，抗HIV-I、HIV-2、HCV、梅毒螺旋体的抗体，以及乙型肝炎病毒的表面抗原，以及同时进行血型测定和检测抗诸如红细胞的其它血细胞的抗体(尤其是抗血小板和抗淋巴细胞抗体)。
在本文中，可使用抗凝血处理的或天然的全血，其中，在试验之前不必过度地将红细胞和血清或血浆组分彼此分离。可以手工方式实施测定，即完全不使用仪器(包括电流)。
在根据本发明装置的一优选实施方案中，指示区优选包括一排对加样区成对角排列的指示区，抗体或抗体片段或凝集素存在于样品中，它们捕捉或结合所有可能的血型系统的待测血型抗原和由此的起作其载体的细胞。抗体或抗体片段或抗抗原的凝集素，或抗原表位，具体来说，它们属于ABO、Rh和Kell血型系统(例如，抗-A、抗-B、抗-D、抗-K)，它们在多孔的膜上的指示区内用作为优选结合成分，优选，位于其它指示剂排的远端的一排中。
优选将对照结合成分(对照＝ctl)施加到该排指示区的一个指示区内，优选，在该排的所有其余指示区远端的指示区内，其对通过指示区的样品流动给予正确指示。对照结合成分优选是多克隆的抗红细胞抗体。
本发明装置的该优选实施方案包括另一排的指示区，优选靠近加样区排列，抗原或抗原表位捕捉或结合样品中的规则的抗体。为此目的，A1、A2、B、O血型抗原或抗原表位，起作为优选的结合成分，例如，将规定血型(A1、A2、B、O)的红细胞的红细胞膜或合成的血型物质施加到多孔的膜上。优选，在该排指示区的一指示区中，优选，在该排的所有其余指示区远端的指示区内，施加对照结合成分(对照＝ctl)，它正确指示通过指示区的样品流动。对照结合成分优选是抗IgG的抗体。
本发明装置的该优选实施方案可以位于另一排的指示区内，优选靠近加样区，其包括抗原或抗原表位，它们捕捉或结合样品中的不规则抗体或抗体片段。作为用于该目的的优选的结合成分，不同血型O红细胞准备的细膜、它们组合的抗原图形覆盖针对与重要的输液相关的不规则抗体的那些抗原，所有这些固定到多孔的膜上。优选，将正确指示通过指示区的样品流动的对照结合成分(对照＝ctl)施加到该排指示区的一个指示区内，优选，在该排的所有其余指示区远端的指示区内。对照结合成分优选是抗IgG的抗体。
在本发明装置的另一优选实施方案中，指示区优选排列在加样区远端的一排指示区内，其包括抗体或抗体片段或凝集素，它们捕捉或结合血型测定中待测定的血型抗原和由此的承载这些抗原的样品中的细胞。抗体或抗体片段或抗抗原的凝集素，或ABO血型系统的抗原表位，例如，抗-A、抗-B、抗-A和抗-B，它们固定在多孔的膜上的指示区内用作为优选结合成分，优选，位于加样区和其它指示剂排的远端的一排中。
优选，将正确指示通过指示区的样品流动的对照结合成分(对照＝ctl)施加到该排指示区的一个指示区内，优选，在该排的所有其余指示区远端的指示区内。对照结合成分优选是多克隆的抗红细胞的抗体。
本发明装置的该优选实施方案包括另一排的指示区，其优选靠近加样区排列，血小板和/或淋巴细胞膜或膜部件起作结合成分，以检测抗血小板/淋巴细胞抗体。
在本发明装置的另一优选的实施方案中，优选位于加样区远端的一排指示区中的指示区包括抗体或抗体片段或凝集素，它们捕捉或结合血型测定中待测定的血型抗原，以及承载上述抗原的样品中的细胞。抗体或抗体片段或抗抗原的凝集素，或ABO血型系统的抗原表位，例如，抗-A、抗-B、抗-A和抗-B，它们附连在多孔的膜上的指示区内用作为优选结合成分，优选，位于加样区和其它指示剂排的远端的一排中。
优选，在该排指示区的一指示区中，优选，在该排的所有其余指示区远端的指示区内施加对照结合成分(对照＝ctl)，其对通过指示区的样品流动给予正确指示。对照结合成分优选是多克隆的抗红细胞的抗体。
本发明装置的该优选的实施方案包括位于另一排优选靠近加样区排列的指示区中的结合成分，其用来检测传染的试剂，尤其是，合成的肽或用重组DNA方法表达的重组抗原，它们包括在诊断上重要的各种标记表面蛋白的序列(抗体检测)或针对感染物(表面)蛋白的抗体的序列(抗原检测)。
由于本发明的装置不再需要同时地测定样品的细胞和血浆参数而对每个个别的测定实施单独的吸液管的吸取，但相反，所有需要的参数可在一样品中同时地测定，尤其是，在同时执行血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验，以及同时执行血型测定和与感染血清标记相关的输液的测定的情形中，其中，可将血型测定与任何感染血清标记测定组合起来，以及在同时执行血型测定和对抗红细胞之外的血细胞的抗体测定中，尤其是，抗血小板和抗淋巴细胞的抗体。
这代表了该方法罕见的合理性。除了具有同时测定许多血清参数的优点之外，与传统的试验相比，应提一下样品准备的事实上的全部冗余性。对角图形中表示的结果读取同样更具优点。因此，在本发明的装置中，可在装置中平行地进行测定和读取，例如，尤其是ABO特征的血型和血清交叉核对以及抗体检测试验，或者尤其是ABO特征的血型和其它免疫血液病学参数，尤其是抗血小板和/或抗淋巴细胞抗体或其片段，或尤其是ABO特征的血型和感染血清标记，尤其是抗细菌和/或病毒试剂的抗体或其片段，或病毒性或细菌性抗原或抗原表位。
二维平面显示以及稳定的反应终点，不仅便于肉眼读取而且用传统的显示分析方法自动读取结果，例如，CCD照相机。甚至在执行手工评估时也可减少花费的工作量。本发明的装置还导致减小对环境的影响，并有利于成本降低。即使在时间紧迫的紧急情形中，也可在短时间内在一单一试验装置中对不规则抗体实施一完全的ABO血型测定和血清交叉核对及抗体检测试验，例如，完全ABO血型测定和感染血清标记测定或抗血小板/淋巴细胞抗体测定。
从生产技术的观点来看，侧向-对角流图形较之于现有技术状态提供了相当的优点，鉴于在一单一装置内提供多个试验参数，这在过去必须单独地进行试验，所以大大地减少所用试剂的消耗量。
由于本发明的装置，尤其是对于免疫的血液病学和传染的血清诊断学提供了一种侧向流动试验，借助于该试验，在一单一的试验批中，可根据试验的样品同时测定若干细胞尤其是红细胞的抗原或抗原表位、血浆参数和/或血细胞特性(尤其是全血组分)，其使用至少两种类型的指示剂颗粒，其中至少一种类型由红细胞表示。此外，由此可提供一种成本经济的试验系统，其能以可能的最简单的方式进行操作，以少的试验循环容易地进行生产，不需样品的准备，借助于该系统，可同时地测定样品的不同的细胞参数和/或血浆参数(尤其是血型特征)，检测抗血小板和/或淋巴细胞的规则的和不规则的抗体，和/或感染血清标记(尤其是与输液医学相关的那些标记物)。
本发明所述装置的膜是多孔膜。优选的膜材料是硝酸纤维素(例如，Sartorius的UniS-art，Millipore的HiFlow，Whatman，Schleicher&Schüell的AE99或FF85/100)、聚乙烯(Porex Corporation的Lateral Flo)或尼龙(CUNO的Novalon)。该膜优选具有最大可能的孔尺寸，因为膜的高孔隙率便于待测样品的细胞组分(例如，红细胞)流入多孔的结构内。使用吸收的膜特别地有利。然而，本发明的装置不局限于这样的特性。优选是所有的膜都具有高毛细管流速(毛细管速度)，其中，毛细管流量代表染料溶液为在给定膜上通过四十毫米所需要的时间。特别优选的是具有小于100的毛细管流量的膜。
在使用两种不同膜的双向实施方案中，一种膜优选具有较高的毛细管流量，优选小于100，而另一种膜优选具有较低的毛细管流量，优选大于100。
在本发明的一优选实施方案中，一密封元件设置在位于根据本发明装置的加样区下游的多孔膜上。可使用二维或三维的密封元件，它们放置在多孔膜上，借助于密封元件，样品的加样区与多孔膜的其余表面分离。根据本发明，密封元件主要具有液体屏障的作用，并允许在多孔膜内定向分布待测液体和试验试剂。此外，本发明的密封元件密封样品的加样区，以便防止液体无意地进入侧向流装置的其余部分内。
密封元件的优选实施方案是丝网形状或槽形状或漏斗形状。密封元件的形状通过从用于密封元件生产的材料中切割下的过程而发生。在漏斗或槽形状的情形中，密封元件设置有一内孔，其优选改型是圆形、方形或矩形，并在漏斗形状的情形中，朝向密封元件的底侧(膜接触侧)呈现锥形。
用于密封元件的优选的材料是不易沾水的材料。在一特定的实施方案中，材料在一侧上涂敷有结合膜，例如，压敏的或自结合的丙烯酸盐的粘合剂。因此，密封元件可以直接地结合到多孔膜的表面上。或者，密封元件可以结合到侧向流外壳上，例如，用粘合剂粘合，这样，在此实施方案中，侧向流外壳压迫密封元件抵靠在多孔膜的表面上，以达到密封元件的功能。
形成二维密封元件的优选材料是任何形式的粘合剂带或粘合剂箔(例如，Beiersdorf AG的Tesa 4124，Adhesives Research的Arcare 7815)。
形成三维密封元件的优选材料是各种材料厚度的柔性闭合的多孔弹性体材料，或柔性硅材料，厚度最好是3-5毫米(例如，Pitzner的蜂窝状天然橡胶EPDM140，硅树脂橡胶或固体天然橡胶，Castan硬度为40°或更小)。
由于本发明的结构，本发明的装置能够容纳含有细胞的液体样品，例如，全血，而不需过滤细胞。此外，密封元件允许大量的样品涂敷到多孔的膜上(加样区)，没有发生泛滥。因此，密封元件支持利用多孔膜的吸收特性。此外，密封元件确保样品的定向流动。但是，不管有无任何的密封元件，本发明的装置都能很好地发挥功能。
对于根据本发明装置的吸收区(吸收垫)，机械上稳定的材料是优选的，最好具有20-30g/100cm2的吸水能力(例如，300型Wicking Papier，Schleicher andSchüll)。吸收垫和根据本发明装置的侧向流膜之间的接触，通过接触压力和与多孔膜的叠合而形成。通过吸收垫与承载侧向流膜的载体层(背衬片)的结合，实现吸收垫在膜上的正确定位。
相配的垫优选包括玻璃纤维或纤维素，且优选具有阻碍天然红细胞流动的特性。
在另一实施方案中，为了达到机械上加强的目的，将根据本发明装置的诸部件应用到支承或载体层上。然而，本发明的装置没有一载体层也可发挥功能。优选，机械上稳定和无水的吸收剂材料，优选具有100μm或以上的厚度用一粘合剂薄膜粘贴在一侧或两侧上，例如，一压敏的或自结合的丙烯酸盐的粘合剂(例如，0.005英寸聚酯W/GL-187，G&L)。多孔膜和吸收垫固定在载体层上。在粘合剂呈现在两侧上的载体层的情形中，使用粘合剂第二侧以将堆叠固定到其它的表面上，例如，在侧向流外壳内。
在本发明装置的另一实施方案中，本发明装置的诸部件施加到其上的载体层可有可无，其一体地形成在外壳内，膜诸部件通过载体层彼此压靠，而外壳支持密封元件的功能。然而，不管有无一外壳，本发明的装置都可很好地发挥功能。
本发明的另一目的是使用本发明的装置来作血液分析，尤其是同时进行血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验，和/或同时进行血型测定和抗感染性试剂尤其是细菌性和/或病毒性试剂的抗体或其片段的检测，和/或同时进行血型测定和抗血细胞之外的红细胞的抗体，尤其是抗血小板和/或抗淋巴细胞抗体，或其片段的检测。
还通过测定液体样品中的多个分析物或其衍生物的方法实现了本发明的该目的，所述方法包括将样品施加到本发明所述装置的膜的加样区上，其中，该样品的量足以使待测液体通过指示区朝吸收区的方向流动，并使待测液体中的分析物或其衍生物结合到对应的指示区或在指示区内形成复合物。
本发明所述方法的特定实施方案同时地实施血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验。
例如，全血或其稀释的形式施加到装置的加样区上。所有的组分在密封元件的导向下渗透到多孔膜内并在迁移过程中沿吸收垫的方向通过，起初通过指示区以便作血清交叉核对，接受细胞A1、A2、B、O的片段，并通过包括抗IgG/IgM的所示的对照指示剂。存在于血清内的同种凝集素变得结合到对应的细胞连接的抗原。血清IgG结合到对照结合成分(血清交叉核对：敏感)。
细胞结合抗原迁移到指示区区域远端的指示区内，以作血清交叉核对，作血型测定，其中，在每个指示区内，抗体对于不同的血型特征(例如，抗-A、抗-B、抗-AB)固定。最远离加样区的该区域的指示区包括作为结合成分的多克隆的抗红细胞抗体。在该指示区内，红细胞变得结合到对应于相应血型特征的结合成分上。无论哪种血型的红细胞都结合到对照结合成分上(血型测定)。
在其后的冲洗步骤中，未结合的材料从膜上洗掉。在其后的检测步骤中，通过涂布有抗-IgG/IgM的合成颗粒可见固定的同种凝集素和固定在指示区近端系列结合成分上的对照抗体(血清交叉核对：检测)。
在本发明方法的另-实施方案中，同时进行血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验，如上所述，血型特征直接地测定，而血清交叉核对和/或抗体检测试验作为竞争性试验进行。
例如，全血或其稀释形式施加到装置的加样区上。在密封元件的导向下，所有组分渗透到多孔膜内并在其迁移过程中沿吸收垫的方向通过，起初通过指示区以便作血清交叉核对，其包括血型A和B细胞碎片，以及对照指示区，其包括血型O的片段。存在于血清内的同种凝集素变得结合到对应的细胞连接的抗原(血清交叉核对：敏感)。
细胞结合抗原迁移到位于指示区区域远端的供血型确定的指示区内，以进行血清交叉核对，其中，在每个指示区内，针对不同血型特征的抗体(例如，抗-A、抗-B、抗-D)被固定。该区域中最远离加样区的指示区例如可包含作为结合成分的多克隆的抗红细胞抗体。在该指示区区域内，红细胞变得结合到对应于相应血型特征的结合成分上。无论哪种血型的红细胞都结合对照结合成分(血型测定)。
在其后的冲洗步骤中，未结合的材料从膜上冲洗掉。在其后的步骤中，分别涂敷有抗-A、抗-B或抗-H的不同的合成颗粒的悬浮液施加到加样区上。颗粒只能各结合到指示区内的结合成分上，以作血清交叉核对，在敏感步骤中，其与血清同种凝集素还未接触，即显示颜色的带，在此情形中，其指示对应的同种凝集素不存在。例如，在血型A(具有同种凝集素抗-B的人)的情形中，通过其后施加的合成颗粒的混合，因抗-A颗粒包含在其中，B细胞的细胞碎片被同种凝集素阻塞，这导致A细胞的细胞碎片被染色。血型O片段在所有可想像的组群中被染色，因为它们不被同种凝集素阻塞，并因此总是不与被染色的抗-H颗粒反应，由此，在竞争性试验的改进中也可提供对照成分(血清交叉核对：检测)。
在本发明方法的另一实施方案中，其同时地实施血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验，其包括直接地测定血型特征，而血清交叉核对和/或抗体检测试验作为竞争性试验执行，将遵循以下的程序。
全血或其稀释形式施加到具有两个不同多孔膜的装置的非对称的加样区上。其中一个多孔膜具有比另一膜低的毛细管流量。在后者的情形中，一包含干的抗-A/抗-B/抗-H颗粒的相配垫施加到密封元件和指示区之间的膜上。在密封元件导向下，所有的组分渗透到两个多孔膜内，导致以下的流动特征：
“膜唯一侧”：在其迁移过程中所有组分沿相关的吸收垫方向通过指示区以作血型测定，其中，在每个指示区内，存在呈固定不动形式的抗不同血型特征的抗体(例如，抗-A、抗-B、抗-D)。最远离加样区的该区域的指示区包括作为结合成分的多克隆的抗红细胞抗体。在该指示区内，红细胞变得结合到对应于相应血型特征的结合成分上。每个血型的红细胞变得结合到对照结合成分上。
“膜/相配垫侧”：渗透到膜内并通过密封元件的所有组分进入与相配垫外壳接触，细胞的组分被保持或阻止，而液体(血浆)可向前流动而无阻碍。后者致使抗-A/抗-B/抗-H颗粒从相配垫中释放。血清交叉核对的指示区包括血型A和B的细胞碎片以及血型O的对照成分的细胞碎片。存在于血清中的同种凝集素变得结合到对应的细胞结合抗原上，并由此竞争而结合染色的抗-A、抗-B颗粒。这意味着，如果不存在对应的同种凝集素，则才可结合颗粒。例如，一血型为A的人具有抗-B同种凝集素，其导致血型B片段阻塞在指示区内，这样，只有血型A片段可被着色的抗-A颗粒染色。因此，不存在同种凝集素的对于这种对照成分总是保持未被阻塞，并变得被包含在相配垫的颗粒混合物内的抗-H颗粒染色成可见带。
本发明方法的另一特定实施方案同时进行血型测定和抗血小板和/或抗淋巴细胞抗体或其片段的测定。
举例来说，对于抗血小板抗体的测定，靠近加样区的指示区包括作为结合成分的血小板碎片，包含在血清中的抗血小板抗体(如果存在于样品中的话)将变得结合到结合成分上。该方法的其余部分如同根据本发明方法的上述实施方案中所描述的，尤其是，血型测定如上所述地进行。
根据本发明方法的另一特定实施方案同时地实施血型测定和输液相关的感染血清标记的测定。
举例来说，对于感染标记的测定，第一近端指示区的指示区包括作为结合成分的合成肽和/或对应于病毒或细菌试剂的蛋白质序列的重组蛋白质(测定抗感染标记的抗体，例如，抗-HIV-I)，以及针对感染标记的蛋白质的抗体(测定抗原，例如，HbsAg)。如上情形的抗体或抗原可被包含在血清中，在第一步骤中结合到对应的抗原或抗体。该方法的其余部分如同根据本发明方法的上述实施方案中所描述的，尤其是，血型测定如上所述地进行。
在本发明的方法中，待测定的分析物更加特定地代表血型抗原或抗原表位，优选，代表ABO、Rh、Kell血型系统的那些抗原或抗原表位，以便与血型抗原或抗抗体或其片段的抗原表位互相作用，优选是规则的抗体、不规则的抗体，以便检测抗传染物的传染物(表面)抗原的抗体和/或抗血小板或抗淋巴细胞抗体或其片段。
待检查的样品，例如，天然或抗凝血的全血，或红细胞浓度或稀释的红细胞悬浮液、血组分或诸如对照血清或对照细胞的待测液体，它们施加到根据本发明装置的加样区上。包含在样品中的红细胞，它们携带分析物同时起作指示剂颗粒的作用。
尤其是，使用了两组指示剂颗粒。其中之一独特地由红细胞代表以便直接检测结合红细胞的分析物。另一组由任何可想像类型和组合的颗粒组成，借助于它可显示结合反应，优选，颗粒是胶合金或聚苯乙烯或固定不动的红细胞。在一优选的实施方案中，在每一试验循环中使用不同的指示剂颗粒，其至少一种类型代表天然红细胞。
一方面通过同时定性或定量测定一个液体样品或多个液体样品中的一种或多种分析物的装置来达到本发明的这个目的，该装置包括至少一层膜，膜上具有用于涂布液体样品的加样区，至少一组能与分析物互相作用或分析物可与其发生反应的至少两个指示区，以及一个在液体通过指示区后吸收液体的吸收区，其中，该指示区位于加样区和吸收区之间，其特征在于，从加样区通过一组对应的指示区到吸收区的流动方向基本平行，存在至少两个不同的流动轨迹。
本发明所述装置的指示区存在于膜上，并包含捕捉或结合样品中待测分析物的结合成分。分析物和结合成分之间的结合反应在指示区内被检测到。抗体或抗体片段、凝集素、抗原或抗原表位，和/或细胞或细胞碎片都固定到多孔膜，作为特别优选的结合成分。指示区优选各包含针对一种待测分析物的一种结合成分。
在本发明的一个实施方案中，指示区排列成：对于每个流动轨迹，待测液体将流过至多一个指示区。例如，指示区以交叉的关系设置在膜上。指示区的这种排列最好构造成一排，其从近端到远端对角地延伸，反之亦然。特定的例子是V形、W形、M形或N形，或倒置的V形、W形、M形或N形。在另一实施方案中，指示区交叉地平行并排排成一排。
提供交叉的指示区对于多参数试验是先决条件，使红细胞在侧向排列中作为指示剂颗粒。对角排列的特别优选的实施方案提供了这样的优点：所显示的结果可以特别实用和容易读取的方式应用于本发明的装置；因为待测试的各参数占据一规定的X和Y位置，所以，根据本发明装置的结构可被看作为一具有纵坐标(流动方向的平面)和横坐标(加样区的平面)的坐标系。
在本发明的另一个实施方案中，指示区的一个以上的这样的排最好各从近端到远端对角方向地延伸，反之亦然，或者，例如，其是V形、W-、M-或N形，或倒置的V形、W-、M-或N形，沿流动方向延伸，相继地和/或侧向地交叉，各排的指示区以间隔开的关系排列，以使对于各流动轨迹的待测液体流过不多于一单一指示区，或者各排的指示区彼此接触地延伸，以使对于各流动轨迹的待测液体流过一个以上的指示区。
一个以上这样的指示区，例如，具有离加样区不同距离的两排指示区在以下情形中特别具有优点，即从一全血样品中测定细胞和血浆的参数。在一实施方案中，例如，在一含有全血作为样品的试验一批中，选择结合成分，以使流过装置从加样区通过指示区到吸收区的包含在血浆中的分析物(例如，各种类型的抗体)，变得结合到靠近加样区排列的成排的指示区内的结合成分。另一方面，选择用来检测细胞结合分析物(例如，红细胞抗原)的结合成分，以使它们变得结合到远离加样区排列的成排的指示区内的结合成分。在该优选的实施方案中，除了红细胞之外，优选操作另一类型的指示剂颗粒，最好是胶体金或聚苯乙烯，或固定的红细胞。使用这些指示剂颗粒是特别为了在指示区内的结合复合体中可见那些未结合到红细胞上的分析物，例如，在血浆中自由发生的抗体。例如，如果使用两种类型的指示剂颗粒，其中一个不是红细胞，则两排的指示区可并排地排列而彼此接触，或其后成一单一的流动轨迹。这里的该结构具有这样的优点，其中，血浆的待测试的分析物在近端的指示区内检测，而结合红细胞的分析物在远端的指示区内检测。本发明的一实施方案包括如上所述的一排以上的指示区，其中，各排的结合成分反应或结合到红细胞而起作指示剂颗粒，指示区的各排保持彼此间隔开的关系，或位于一单一的流动轨迹内且不连续。
在另一特别优选的本发明的实施方案中，指示区的一个以上的这样的排最好在从近端到远端对角方向延伸的一排中设置，反之亦然，或者，例如，其是呈V形、W-、M-或N形方式延伸的排，或是倒置的V形、W-、M-或N形排，或甚至是相对于一中心的加样区以交叉的关系双向地(例如，彼此成180°角度)并排地平行延伸的排。这样的结构特别在从全血样品中测试细胞和血浆参数的情形中具有优点。
在一实施方案中，例如，在包括全血作为样品的试验一批中，选择结合成分，以使从加样区通过指示区流到吸收区的包含在血浆中的分析物(例如，各种类型的抗体)，变得结合到设置在加样区一侧上的成排的指示区内的结合成分。另一方面，选择用来检测细胞地结合的分析物(例如，红细胞抗原)的结合成分，以使它们变得结合到在加样区相对侧上排列的端部排的指示区的结合成分。在该优选的实施方案的情形中，除了红细胞之外，优选操作另一类型的指示剂颗粒，最好是胶体金或聚苯乙烯。使用这些指示剂颗粒是特别为了在指示区内的结合复合体中可见那些未结合到红细胞上的分析物，例如，在血浆中自由地发生的抗体。
在一优选的实施方案中，加样区还包括两个不同孔隙率的不同的膜。在此优选的实施方案中，除了红细胞之外，优选操作另一类型的指示剂颗粒，最好是胶体金或聚苯乙烯。使用这些指示剂颗粒是特别为了在指示区内的结合复合体中可见那些未结合到红细胞上的分析物，例如，在血浆中自由发生的抗体。
在一特别优选的实施方案中，加样区包括一种膜或两种不同孔隙率的不同的膜。此外，其中一种膜包括一排列在一密封元件和指示区之间的相配的垫。在此优选的实施方案中，除了红细胞之外，优选操作另一类型的指示剂颗粒，最好是胶体金或聚苯乙烯。使用这些指示剂颗粒是特别为了在指示区内的结合复合体中可见那些未结合到红细胞上的分析物，例如，在血浆中自由地发生的抗体。除了用于红细胞之外，该类型的指示剂颗粒以干的形式存在于相配垫内。此外，相配垫小心顾及使红细胞流动减缓。这在包括一单一共用的加样区的双向的结构中具有的这样的效应：沿一个方向保持优化的条件以检测细胞的特性，而沿相对方向保持优化的条件以检测血浆的特性。
借助于本发明的装置，可提供侧向流试验，尤其是用于血液血清诊断学，借助于该装置红细胞可用作为指示剂颗粒，其中，在一单一的试验一批中，在各待测样品中，可同时地测定若干个细胞参数，具体来说，红细胞抗原或抗原表位，血浆参数和/或血细胞特性，尤其可测定每个待测样品的全血组分。此外，这样可提供一试验系统，其可特别容易地进行制造并可特别地用于少数的试验系列而不需样品准备，并且成本经济有效，但借助于该系统，可同时地测定待测一个样品或多个样品的各种细胞参数和/或血浆参数。
本发明的装置在所有医学诊断学领域内提供上述的优点，其中，同时地测定不同的细胞参数和血浆参数，具体来说，在血型和传染血清的领域中，在与输血医学相关的任何诊断学中，例如，对于同时进行血型测定，其中，特别地测定结合红细胞的抗原或抗原表位，而对于血清交叉核对，其中，特别地测定规则抗体(同种凝集素)，和/或抗体检测试验，其中，特别地测定不规则抗体，例如，对于同时进行血型测定和与感染血清标记相关的输液的检测，例如，抗HIV-I、HIV-2、HCV、梅毒螺旋体的抗体，以及乙型肝炎病毒的表面抗原，以及同时进行血型测定和检测抗诸如红细胞的其它血细胞的抗体(尤其是抗血小板和抗淋巴细胞抗体)。
在本文中，可使用抗凝血处理的或天然的全血，其中，在试验之前不必过度地将红细胞和血清或血浆组分彼此分离。可以手工方式实施测定，即完全不使用仪器(包括电流)。
在根据本发明装置的一优选实施方案中，指示区优选包括一排对加样区成对角排列的指示区，抗体或抗体片段或凝集素存在于样品中，它们捕捉或结合所有可能的血型系统的待测血型抗原和由此的起作其载体的细胞。抗体或抗体片段或抗抗原的凝集素，或抗原表位，具体来说，它们属于ABO、Rh和Kell血型系统(例如，抗-A、抗-B、抗-D、抗-K)，它们在多孔的膜上的指示区内用作为优选结合成分，优选，位于其它指示剂排的远端的一排中。
优选将对照结合成分(对照＝ctl)施加到该排指示区的一个指示区内，优选，在该排的所有其余指示区远端的指示区内，其对通过指示区的样品流动给予正确指示。对照结合成分优选是多克隆的抗红细胞抗体。
本发明装置的该优选实施方案包括另一排的指示区，优选靠近加样区排列，抗原或抗原表位捕捉或结合样品中的规则的抗体。为此目的，A1、A2、B、O血型抗原或抗原表位，起作为优选的结合成分，例如，将规定血型(A1、A2、B、O)的红细胞的红细胞膜或合成的血型物质施加到多孔的膜上。优选，在该排指示区的一指示区中，优选，在该排的所有其余指示区远端的指示区内，施加对照结合成分(对照＝ctl)，它正确指示通过指示区的样品流动。对照结合成分优选是抗IgG的抗体。
本发明装置的该优选实施方案可以位于另一排的指示区内，优选靠近加样区，其包括抗原或抗原表位，它们捕捉或结合样品中的不规则抗体或抗体片段。作为用于该目的的优选的结合成分，不同血型O红细胞准备的细膜、它们组合的抗原图形覆盖针对与重要的输液相关的不规则抗体的那些抗原，所有这些固定到多孔的膜上。优选，将正确指示通过指示区的样品流动的对照结合成分(对照＝ctl)施加到该排指示区的一个指示区内，优选，在该排的所有其余指示区远端的指示区内。对照结合成分优选是抗IgG的抗体。
在本发明装置的另一优选实施方案中，指示区优选排列在加样区远端的一排指示区内，其包括抗体或抗体片段或凝集素，它们捕捉或结合血型测定中待测定的血型抗原和由此的承载这些抗原的样品中的细胞。抗体或抗体片段或抗抗原的凝集素，或ABO血型系统的抗原表位，例如，抗-A、抗-B、抗-A和抗-B，它们固定在多孔的膜上的指示区内用作为优选结合成分，优选，位于加样区和其它指示剂排的远端的一排中。
优选，将正确指示通过指示区的样品流动的对照结合成分(对照＝ctl)施加到该排指示区的一个指示区内，优选，在该排的所有其余指示区远端的指示区内。对照结合成分优选是多克隆的抗红细胞的抗体。
本发明装置的该优选实施方案包括另一排的指示区，其优选靠近加样区排列，血小板和/或淋巴细胞膜或膜部件起作结合成分，以检测抗血小板/淋巴细胞抗体。
在本发明装置的另一优选的实施方案中，优选位于加样区远端的一排指示区中的指示区包括抗体或抗体片段或凝集素，它们捕捉或结合血型测定中待测定的血型抗原，以及承载上述抗原的样品中的细胞。抗体或抗体片段或抗抗原的凝集素，或ABO血型系统的抗原表位，例如，抗-A、抗-B、抗-A和抗-B，它们附连在多孔的膜上的指示区内用作为优选结合成分，优选，位于加样区和其它指示剂排的远端的一排中。
优选，在该排指示区的一指示区中，优选，在该排的所有其余指示区远端的指示区内施加对照结合成分(对照＝ctl)，其对通过指示区的样品流动给予正确指示。对照结合成分优选是多克隆的抗红细胞的抗体。
本发明装置的该优选的实施方案包括位于另一排优选靠近加样区排列的指示区中的结合成分，其用来检测传染的试剂，尤其是，合成的肽或用重组DNA方法表达的重组抗原，它们包括在诊断上重要的各种标记表面蛋白的序列(抗体检测)或针对感染物(表面)蛋白的抗体的序列(抗原检测)。
由于本发明的装置不再需要同时地测定样品的细胞和血浆参数而对每个个别的测定实施单独的吸液管的吸取，但相反，所有需要的参数可在一样品中同时地测定，尤其是，在同时执行血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验，以及同时执行血型测定和与感染血清标记相关的输液的测定的情形中，其中，可将血型测定与任何感染血清标记测定组合起来，以及在同时执行血型测定和对抗红细胞之外的血细胞的抗体测定中，尤其是，抗血小板和抗淋巴细胞的抗体。
这代表了该方法罕见的合理性。除了具有同时测定许多血清参数的优点之外，与传统的试验相比，应提一下样品准备的事实上的全部冗余性。对角图形中表示的结果读取同样更具优点。因此，在本发明的装置中，可在装置中平行地进行测定和读取，例如，尤其是ABO特征的血型和血清交叉核对以及抗体检测试验，或者尤其是ABO特征的血型和其它免疫血液病学参数，尤其是抗血小板和/或抗淋巴细胞抗体或其片段，或尤其是ABO特征的血型和感染血清标记，尤其是抗细菌和/或病毒试剂的抗体或其片段，或病毒性或细菌性抗原或抗原表位。
二维平面显示以及稳定的反应终点，不仅便于肉眼读取而且用传统的显示分析方法自动读取结果，例如，CCD照相机。甚至在执行手工评估时也可减少花费的工作量。本发明的装置还导致减小对环境的影响，并有利于成本降低。即使在时间紧迫的紧急情形中，也可在短时间内在一单一试验装置中对不规则抗体实施一完全的ABO血型测定和血清交叉核对及抗体检测试验，例如，完全ABO血型测定和感染血清标记测定或抗血小板/淋巴细胞抗体测定。
从生产技术的观点来看，侧向-对角流图形较之于现有技术状态提供了相当的优点，鉴于在一单一装置内提供多个试验参数，这在过去必须单独地进行试验，所以大大地减少所用试剂的消耗量。
由于本发明的装置，尤其是对于免疫的血液病学和传染的血清诊断学提供了一种侧向流动试验，借助于该试验，在一单一的试验批中，可根据试验的样品同时测定若干细胞尤其是红细胞的抗原或抗原表位、血浆参数和/或血细胞特性(尤其是全血组分)，其使用至少两种类型的指示剂颗粒，其中至少一种类型由红细胞表示。此外，由此可提供一种成本经济的试验系统，其能以可能的最简单的方式进行操作，以少的试验循环容易地进行生产，不需样品的准备，借助于该系统，可同时地测定样品的不同的细胞参数和/或血浆参数(尤其是血型特征)，检测抗血小板和/或淋巴细胞的规则的和不规则的抗体，和/或感染血清标记(尤其是与输液医学相关的那些标记物)。
本发明所述装置的膜是多孔膜。优选的膜材料是硝酸纤维素(例如，Sartorius的UniS-art，Millipore的HiFlow，Whatman，Schleicher&Schüell的AE99或FF85/100)、聚乙烯(Porex Corporation的Lateral Flo)或尼龙(CUNO的Novalon)。该膜优选具有最大可能的孔尺寸，因为膜的高孔隙率便于待测样品的细胞组分(例如，红细胞)流入多孔的结构内。使用吸收的膜特别地有利。然而，本发明的装置不局限于这样的特性。优选是所有的膜都具有高毛细管流速(毛细管速度)，其中，毛细管流量代表染料溶液为在给定膜上通过四十毫米所需要的时间。特别优选的是具有小于100的毛细管流量的膜。
在使用两种不同膜的双向实施方案中，一种膜优选具有较高的毛细管流量，优选小于100，而另一种膜优选具有较低的毛细管流量，优选大于100。
在本发明的一优选实施方案中，一密封元件设置在位于根据本发明装置的加样区下游的多孔膜上。可使用二维或三维的密封元件，它们放置在多孔膜上，借助于密封元件，样品的加样区与多孔膜的其余表面分离。根据本发明，密封元件主要具有液体屏障的作用，并允许在多孔膜内定向分布待测液体和试验试剂。此外，本发明的密封元件密封样品的加样区，以便防止液体无意地进入侧向流装置的其余部分内。
密封元件的优选实施方案是丝网形状或槽形状或漏斗形状。密封元件的形状通过从用于密封元件生产的材料中切割下的过程而发生。在漏斗或槽形状的情形中，密封元件设置有一内孔，其优选改型是圆形、方形或矩形，并在漏斗形状的情形中，朝向密封元件的底侧(膜接触侧)呈现锥形。
用于密封元件的优选的材料是不易沾水的材料。在一特定的实施方案中，材料在一侧上涂敷有结合膜，例如，压敏的或自结合的丙烯酸盐的粘合剂。因此，密封元件可以直接地结合到多孔膜的表面上。或者，密封元件可以结合到侧向流外壳上，例如，用粘合剂粘合，这样，在此实施方案中，侧向流外壳压迫密封元件抵靠在多孔膜的表面上，以达到密封元件的功能。
形成二维密封元件的优选材料是任何形式的粘合剂带或粘合剂箔(例如，Beiersdorf AG的Tesa 4124，Adhesives Research的Arcare 7815)。
形成三维密封元件的优选材料是各种材料厚度的柔性闭合的多孔弹性体材料，或柔性硅材料，厚度最好是3-5毫米(例如，Pitzner的蜂窝状天然橡胶EPDM140，硅树脂橡胶或固体天然橡胶，Castan硬度为40°或更小)。
由于本发明的结构，本发明的装置能够容纳含有细胞的液体样品，例如，全血，而不需过滤细胞。此外，密封元件允许大量的样品涂敷到多孔的膜上(加样区)，没有发生泛滥。因此，密封元件支持利用多孔膜的吸收特性。此外，密封元件确保样品的定向流动。但是，不管有无任何的密封元件，本发明的装置都能很好地发挥功能。
对于根据本发明装置的吸收区(吸收垫)，机械上稳定的材料是优选的，最好具有20-30g/100cm2的吸水能力(例如，300型Wicking Papier，Schleicher andSchüll)。吸收垫和根据本发明装置的侧向流膜之间的接触，通过接触压力和与多孔膜的叠合而形成。通过吸收垫与承载侧向流膜的载体层(背衬片)的结合，实现吸收垫在膜上的正确定位。
相配的垫优选包括玻璃纤维或纤维素，且优选具有阻碍天然红细胞流动的特性。
在另一实施方案中，为了达到机械上加强的目的，将根据本发明装置的诸部件应用到支承或载体层上。然而，本发明的装置没有一载体层也可发挥功能。优选，机械上稳定和无水的吸收剂材料，优选具有100μm或以上的厚度用一粘合剂薄膜粘贴在一侧或两侧上，例如，一压敏的或自结合的丙烯酸盐的粘合剂(例如，0.005英寸聚酯W/GL-187，G&L)。多孔膜和吸收垫固定在载体层上。在粘合剂呈现在两侧上的载体层的情形中，使用粘合剂第二侧以将堆叠固定到其它的表面上，例如，在侧向流外壳内。
在本发明装置的另一实施方案中，本发明装置的诸部件施加到其上的载体层可有可无，其一体地形成在外壳内，膜诸部件通过载体层彼此压靠，而外壳支持密封元件的功能。然而，不管有无一外壳，本发明的装置都可很好地发挥功能。
本发明的另一目的是使用本发明的装置来作血液分析，尤其是同时进行血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验，和/或同时进行血型测定和抗感染性试剂尤其是细菌性和/或病毒性试剂的抗体或其片段的检测，和/或同时进行血型测定和抗血细胞之外的红细胞的抗体，尤其是抗血小板和/或抗淋巴细胞抗体，或其片段的检测。
还通过测定液体样品中的多个分析物或其衍生物的方法实现了本发明的该目的，所述方法包括将样品施加到本发明所述装置的膜的加样区上，其中，该样品的量足以使待测液体通过指示区朝吸收区的方向流动，并使待测液体中的分析物或其衍生物结合到对应的指示区或在指示区内形成复合物。
本发明所述方法的特定实施方案同时地实施血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验。
例如，全血或其稀释的形式施加到装置的加样区上。所有的组分在密封元件的导向下渗透到多孔膜内并在迁移过程中沿吸收垫的方向通过，起初通过指示区以便作血清交叉核对，接受细胞A1、A2、B、O的片段，并通过包括抗IgG/IgM的所示的对照指示剂。存在于血清内的同种凝集素变得结合到对应的细胞连接的抗原。血清IgG结合到对照结合成分(血清交叉核对：敏感)。
细胞结合抗原迁移到指示区区域远端的指示区内，以作血清交叉核对，作血型测定，其中，在每个指示区内，抗体对于不同的血型特征(例如，抗-A、抗-B、抗-AB)固定。最远离加样区的该区域的指示区包括作为结合成分的多克隆的抗红细胞抗体。在该指示区内，红细胞变得结合到对应于相应血型特征的结合成分上。无论哪种血型的红细胞都结合到对照结合成分上(血型测定)。
在其后的冲洗步骤中，未结合的材料从膜上洗掉。在其后的检测步骤中，通过涂布有抗-IgG/IgM的合成颗粒可见固定的同种凝集素和固定在指示区近端系列结合成分上的对照抗体(血清交叉核对：检测)。
在本发明方法的另-实施方案中，同时进行血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验，如上所述，血型特征直接地测定，而血清交叉核对和/或抗体检测试验作为竞争性试验进行。
例如，全血或其稀释形式施加到装置的加样区上。在密封元件的导向下，所有组分渗透到多孔膜内并在其迁移过程中沿吸收垫的方向通过，起初通过指示区以便作血清交叉核对，其包括血型A和B细胞碎片，以及对照指示区，其包括血型O的片段。存在于血清内的同种凝集素变得结合到对应的细胞连接的抗原(血清交叉核对：敏感)。
细胞结合抗原迁移到位于指示区区域远端的供血型确定的指示区内，以进行血清交叉核对，其中，在每个指示区内，针对不同血型特征的抗体(例如，抗-A、抗-B、抗-D)被固定。该区域中最远离加样区的指示区例如可包含作为结合成分的多克隆的抗红细胞抗体。在该指示区区域内，红细胞变得结合到对应于相应血型特征的结合成分上。无论哪种血型的红细胞都结合对照结合成分(血型测定)。
在其后的冲洗步骤中，未结合的材料从膜上冲洗掉。在其后的步骤中，分别涂敷有抗-A、抗-B或抗-H的不同的合成颗粒的悬浮液施加到加样区上。颗粒只能各结合到指示区内的结合成分上，以作血清交叉核对，在敏感步骤中，其与血清同种凝集素还未接触，即显示颜色的带，在此情形中，其指示对应的同种凝集素不存在。例如，在血型A(具有同种凝集素抗-B的人)的情形中，通过其后施加的合成颗粒的混合，因抗-A颗粒包含在其中，B细胞的细胞碎片被同种凝集素阻塞，这导致A细胞的细胞碎片被染色。血型O片段在所有可想像的组群中被染色，因为它们不被同种凝集素阻塞，并因此总是不与被染色的抗-H颗粒反应，由此，在竞争性试验的改进中也可提供对照成分(血清交叉核对：检测)。
在本发明方法的另一实施方案中，其同时地实施血型测定和血清交叉核对和/或抗体检测试验，其包括直接地测定血型特征，而血清交叉核对和/或抗体检测试验作为竞争性试验执行，将遵循以下的程序。
全血或其稀释形式施加到具有两个不同多孔膜的装置的非对称的加样区上。其中一个多孔膜具有比另一膜低的毛细管流量。在后者的情形中，一包含干的抗-A/抗-B/抗-H颗粒的相配垫施加到密封元件和指示区之间的膜上。在密封元件导向下，所有的组分渗透到两个多孔膜内，导致以下的流动特征：
“膜唯一侧”：在其迁移过程中所有组分沿相关的吸收垫方向通过指示区以作血型测定，其中，在每个指示区内，存在呈固定不动形式的抗不同血型特征的抗体(例如，抗-A、抗-B、抗-D)。最远离加样区的该区域的指示区包括作为结合成分的多克隆的抗红细胞抗体。在该指示区内，红细胞变得结合到对应于相应血型特征的结合成分上。每个血型的红细胞变得结合到对照结合成分上。
“膜/相配垫侧”：渗透到膜内并通过密封元件的所有组分进入与相配垫外壳接触，细胞的组分被保持或阻止，而液体(血浆)可向前流动而无阻碍。后者致使抗-A/抗-B/抗-H颗粒从相配垫中释放。血清交叉核对的指示区包括血型A和B的细胞碎片以及血型O的对照成分的细胞碎片。存在于血清中的同种凝集素变得结合到对应的细胞结合抗原上，并由此竞争而结合染色的抗-A、抗-B颗粒。这意味着，如果不存在对应的同种凝集素，则才可结合颗粒。例如，一血型为A的人具有抗-B同种凝集素，其导致血型B片段阻塞在指示区内，这样，只有血型A片段可被着色的抗-A颗粒染色。因此，不存在同种凝集素的对于这种对照成分总是保持未被阻塞，并变得被包含在相配垫的颗粒混合物内的抗-H颗粒染色成可见带。
本发明方法的另一特定实施方案同时进行血型测定和抗血小板和/或抗淋巴细胞抗体或其片段的测定。
举例来说，对于抗血小板抗体的测定，靠近加样区的指示区包括作为结合成分的血小板碎片，包含在血清中的抗血小板抗体(如果存在于样品中的话)将变得结合到结合成分上。该方法的其余部分如同根据本发明方法的上述实施方案中所描述的，尤其是，血型测定如上所述地进行。
根据本发明方法的另一特定实施方案同时地实施血型测定和输液相关的感染血清标记的测定。
举例来说，对于感染标记的测定，第一近端指示区的指示区包括作为结合成分的合成肽和/或对应于病毒或细菌试剂的蛋白质序列的重组蛋白质(测定抗感染标记的抗体，例如，抗-HIV-I)，以及针对感染标记的蛋白质的抗体(测定抗原，例如，HbsAg)。如上情形的抗体或抗原可被包含在血清中，在第一步骤中结合到对应的抗原或抗体。该方法的其余部分如同根据本发明方法的上述实施方案中所描述的，尤其是，血型测定如上所述地进行。
在本发明的方法中，待测定的分析物更加特定地代表血型抗原或抗原表位，优选，代表ABO、Rh、Kell血型系统的那些抗原或抗原表位，以便与血型抗原或抗抗体或其片段的抗原表位互相作用，优选是规则的抗体、不规则的抗体，以便检测抗传染物的传染物(表面)抗原的抗体和/或抗血小板或抗淋巴细胞抗体或其片段。
待检查的样品，例如，天然或抗凝血的全血，或红细胞浓度或稀释的红细胞悬浮液、血组分或诸如对照血清或对照细胞的待测液体，它们施加到根据本发明装置的加样区上。包含在样品中的红细胞，它们携带分析物同时起作指示剂颗粒的作用。
尤其是，使用了两组指示剂颗粒。其中之一独特地由红细胞代表以便直接检测结合红细胞的分析物。另一组由任何可想像类型和组合的颗粒组成，借助于它可显示结合反应，优选，颗粒是胶合金或聚苯乙烯或固定不动的红细胞。在一优选的实施方案中，在每一试验循环中使用不同的指示剂颗粒，其至少一种类型代表天然红细胞。
附图说明
下面本发明将用附图和实施例(不受限制)作进一步阐述。其中：
图1是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和血清交叉核对；
图2是示于图1中的用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图；
图3是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用呈一网膜形式的三维密封元件来同时进行血型测定和血清交叉核对；
图4是示于图3中的用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图；
图5是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用呈一槽形式的三维密封元件来同时进行血型测定和血清交叉核对；
图6是示于图5中的用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图；
图7是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来对受者同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验；
图8是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来对供者同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验；
图9是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和感染标记的检测；
图10是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和抗血小板抗原的抗体的检测；
图11示出用于采用双向流的侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测试和血清交叉核对；
图12示出如图11所示的用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图。
图1是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和血清交叉核对；
图2是示于图1中的用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图；
图3是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用呈一网膜形式的三维密封元件来同时进行血型测定和血清交叉核对；
图4是示于图3中的用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图；
图5是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用呈一槽形式的三维密封元件来同时进行血型测定和血清交叉核对；
图6是示于图5中的用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图；
图7是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来对受者同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验；
图8是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来对供者同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验；
图9是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和感染标记的检测；
图10是用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和抗血小板抗原的抗体的检测；
图11示出用于采用双向流的侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测试和血清交叉核对；
图12示出如图11所示的用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图。
具体实施方式
图1借助于实例示出用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和血清交叉核对。在本实施例中，该装置包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及带形的二维密封元件4。多孔膜2借助于压敏丙烯酸粘合剂固定到支承层1。同样地，吸收垫3被固定到支承层1上，部分吸收垫3与多孔膜2重叠。固定在多孔膜2上侧上的密封元件4将加样区5与其余的膜表面分离，并能使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2中。在加样区5和与吸收垫3接触的多孔膜2的区域之间设置指示区6。后者是由排列在规定的X和Y位置内的对角交叉的点形指示区I-IX形成的，其中，指示区I-V表示“血清交叉核对”指示区，而指示区VI-IX表示“血型测定”指示区，且它们由以下结合成分组成：
指示区V是血清交叉核对的对照(ctl)，并含有抗-人IgG/IgM抗体。指示区X是血型测定的对照(ctl)，并含有多克隆的抗-红细胞抗体。它位于全部剩余指示区的远侧。
在图2中，显示了图1所示用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图，其包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3以及将加样区5与膜的其余部分分离的密封元件4，膜又包括“血清交叉核对”和“血型测定”指示区，其包括对角交叉的指示区I-IX。
在图3中，显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和血清交叉核对。在本实施例中，装置的诸部件对应于图1所示装置的诸部件，例外地是，固定到多孔膜2上侧的密封元件呈三维板条4的形式。
在图4中，显示了图3所示用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图，其包括诸部件有支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及将加样区5与其余的膜分离的三维板条形式的密封元件4，膜又包括指示区6，它包括“血清交叉核对”和“血型测定”指示区，其包括对角交叉的指示区I-IX。
在图5中，借助于实例显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和血清交叉核对。在本实施例中，装置的诸部件对应于图1所示装置的诸部件，例外地是，固定到多孔膜2上的密封元件4呈三维槽的形式。
在图6中，显示了图5中所示的用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图，其包括诸部件有支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及将加样区5与其余的膜分离的呈三维槽形式的密封元件4，膜又包括由“血清交叉核对”和“血型测定”指示区构成的指示区6，其包括对角交叉的指示区I-IX。
图7借助于实例显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来对受者同时进行对血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验。此时，该装置包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及呈条带形式的二维密封元件4。多孔膜2附加到具有压敏丙烯酸粘合剂的支承层1。同样地，吸收垫3附加到支承层1上，有部分吸收垫3与多孔膜2重叠。固定在多孔膜2上侧的密封元件4将加样区5与其余的膜表面分离，并使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2内。在加样区5和与吸收垫3接触的多孔膜2的区域之间设置指示区6。后者是由排列在规定的X和Y位置内的对角交叉的点形指示区I-XII形成的，其中，指示区I-VIII表示“血清交叉核对/抗体检测试验”指示区，而指示区IX-XII表示“血型测定”指示区，且它们由以下结合成分组成：
指示区VIII是血清交叉核对和抗体检测试验的对照(ctl)，并含有抗-人IgG/IgM抗体。指示区XII是血型测定的对照，并含有多克隆的抗-红细胞抗体。它位于全部剩余指示区的远处。
在图8中，借助于实例显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来对血液供者同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验。此时，该装置包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及呈条带形式的二维密封元件4。多孔膜2固定到具有压敏丙烯酸粘合剂的支承层上。同样地，吸收垫3固定到支承层1上，有部分吸收垫3与多孔膜2重叠。固定在多孔膜2上侧的密封元件4将加样区5与其余的膜表面分离，并使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2内。在加样区5和与吸收垫3接触的多孔膜2的区域之间设置指示区6。它是由在规定的X和Y位置内对角交叉排列的点形指示区I-X形成的，其中，指示区I-VI表示“血清交叉核对/抗体检测试验”指示区，而指示区VII-X包括“血型测定”指示区，且它们由以下结合成分组成：
指示区VI是血清交叉核对和抗体检测试验的对照，并含有抗-人IgG/IgM抗体。指示区X是血型测定的对照，并含有多克隆的抗-红细胞抗体。它们位于全部剩余指示区的远处。
在图9中，借助于实例显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和感染标记的检测。在本实施例中，该装置包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及呈条带形式的二维密封元件4。多孔膜2固定到具有压敏丙烯酸粘合剂的支承层1上。同样地，吸收垫3固定到支承层1上，有部分吸收垫3与多孔膜2重叠。固定在多孔膜2上侧的密封元件4将加样区5与其余的膜表面分离，并使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2内。在加样区5和与吸收垫3接触的多孔膜2的区域之间设置指示区6。后者是由排列在规定的X和Y位置内的对角交叉的点形指示区I-XII形成的，其中，指示区I-VI表示“感染标记检测”指示区，而指示区VII-XII包括“血型测定”指示区，且它们由以下结合成分组成：
指示区VI是抗感染剂抗体检测的对照，并含有抗-人IgG/IgM抗体。指示区XII是血型测定的对照，并含有多克隆的抗-红细胞抗体。它们相对于所有其它指示区排列在远处。
在图10中，借助于实例显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和抗血小板抗体的检测。在本实施例中，该装置包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及呈条带形式的二维密封元件4。多孔膜2固定到具有压敏丙烯酸粘合剂的支承层1上。同样地，吸收垫3固定到支承层1上，有部分吸收垫3与多孔膜2重叠。固定在多孔膜2上侧的密封元件4将加样区5与其余的膜表面分离，并使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2内。在加样区5和与吸收垫3接触的多孔膜2的区域之间设置指示区6。它是由在规定的X和Y位置内对角交叉的点形指示区I-IX形成的，其中，指示区I-III包括“抗血小板抗原抗体的检测”指示区，而指示区IV-IX包括“血型测定”指示区，且它们由以下结合成分组成：
指示区III是抗细胞系抗原抗体检测的对照，并包含抗-人IgG/IgM抗体。指示区IX是血型测定的对照，并包含多克隆的抗-红细胞抗体。它们相对于所有其它指示区定位在远处。
在图11中，借助于实例显示了用于双向流的侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和血清交叉核对。在本实施例中，该装置包括支承层1、用于血型测定的多孔膜2a、不同于膜2a的用于血清交叉核对的多孔膜2b、吸收垫3a和3b、呈一槽形式的三维密封元件4、以及相配的垫6。多孔膜2a和2b固定到具有压敏丙烯酸粘合剂的支承层1上。同样地，吸收垫3a和3b固定到支承层1上，各吸收垫3a和3b的一部分与多孔膜2a和2b重叠。固定在多孔膜2a和2b上侧的密封元件4将加样区5a和5b分别与其余的膜表面分离，并使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2a和2b内。在加样区5a和与吸收垫3a接触的多孔膜2a的区域之间设置指示区7a(血型测定)。后者是由排列在规定的X和Y位置内的对角交叉的点形指示区I-VI形成的，其中，指示区区域7a的指示区由以下结合成分组成：
指示区VI是血型测定的对照，并包含多克隆的抗-红细胞抗体。它相对于指示区I-V定位在远处。
在加样区5b和与吸收垫3b接触的多孔膜2b的区域之间设置指示区7b(血清交叉核对)。它是由在规定的X和Y位置内的偏离对角设置的点形指示区VII-IX形成的，其中，指示区区域7b的指示区由以下结合成分组成：
在图12中，显示了用于双向流的侧向流试验的如图11所示的本发明装置的分解立体图，该装置包括一下部件：支承层1、用于血型测定的多孔膜2a、不同于膜2a的用于血清交叉核对的多孔膜2b、吸收垫3a和3b、呈一槽形状设计的三维密封元件4、以及相配的垫6。样品的加样区在两个多孔膜上方延伸，其包括膜2a的探针加样区5a和膜2b的探针加样区5b，并通过呈槽形式的密封元件4与膜2a和2b的其余表面分离。膜2a包含指示区区域7a，其包括从近端到远端成对角交叉排列的指示区I-VI，而膜2b包含指示区区域7b，其包括从近端到远端成对角交叉排列的指示区VII-IX。
实施例
实施例1：同时进行血型测定(直接测定)和血清交叉核对(直接结合测定)
试验带的准备：
试验带包括加样区、指示区和吸收区。将Millipore HiFlow Plus 065型膜切割成15mm×35mm(宽度/长度；x/y)带形的规格，并用粘合剂结合到支承层(背衬片，例如，G&L)。用例如AD3200(Biodot)将各种结合成分对角交叉地点到指示区，每个点0.2μl，指示区被分成“血清交叉核对”指示区(靠近加样区)和血型测定指示区(加样区远端)：
“血清交叉核对”指示区：规格血型A1、血型A2、血型B和血型O(由红细胞浓缩形成)的红细胞影以及作为对照的抗-人IgG/IgM抗体(羊抗人IgG、羊抗人IgM，sigma，I-3382、I-0759)的悬浮液，“血型测定”指示区：抗-A抗体-Birma-1克隆(Serologials，TLJ0105)；抗-B抗体-ES-4克隆(Serologials，NCA0201)；抗-AB抗体-AB6、AB26、AB92克隆(Medion Diagnostics，010062)；抗-红细胞抗体(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
“血清交叉核对”指示区区域结合成分的位置开始于x＝2.5mm/y＝10mm位置上的规格血型A1的红细胞影。所有其它结合成分相对于规格血型A1的红细胞影的位置以距离x＝2.5mm/y＝1.5mm重复分配。红细胞影配制成在15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的悬浮液，抗-人IgG/IgM抗体为用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇配制的浓度为50μg/ml的1∶1混合物。
“血型测定”指示区区域结合成分的位置开始于x＝3mm/y＝20mm位置上的抗-A抗体。所有其它结合成分相对于抗-A抗体的位置以距离x＝3mm/y＝1.5mm重复分配。用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀释抗体：抗-A抗体1∶3，抗-B抗体1∶2，抗-AB抗体1∶4，抗-RBC抗体1∶3。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为15×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝5mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
对于血样品采用抗凝血的全血。对于试验，将合适的100μl未稀释或用稀释缓冲液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀释的血施加到加样区内。一旦将血留在加样区，则用100μl EnlisstII冲洗两次，以从膜上除去未结合的红细胞。之后在加样区中加入50μl以1∶10(v/v)稀释于0.08％明胶、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶联的金颗粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)。也可采用100-400nm的着色的聚苯乙烯颗粒代替金颗粒，例如，Merck Eurolab France/Estapor的聚苯乙烯颗粒。一旦金颗粒留在加样区，则用100μl EnlisstII再次冲洗膜一遍或两遍。
结果：
(a)对照：如果抗-RBC对照(指示区IX、“血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，并且如果抗-IgG/IgM对照(指示区V、“血清交叉核对”指示区)呈现特征性的紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。
(b)试验结果：根据有无对应的血型抗原，“血型测定”指示区区域内的对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。通过紫色形状点形式的金颗粒的特征性紫色或所用聚苯乙烯颗粒的颜色，可在“血清交叉核对”指示区内识别相应的同种凝集素。在没有同种凝集素的情况下，在这些位置未发现不同于背景的信号。
实施例2：同时进行血型测定(直接试验)和血清交叉核对(竞争试验)
试验带的准备：
试验带包括加样区、位于加样区两侧的两个指示区和两个吸收区。将MilliporeHiFlow Plus 065和HiFlow Plus 140型号的膜切割成15mm×20mm(宽度/长度；x/y)带形的规格，并用粘合剂并排地结合到支承层(背衬片，例如，G&L)。另外，在HiFlowPlus 140上施加含有抗-A/抗-B/抗-H偶联的金颗粒的经过干燥的相配的垫，使其位于密封元件(粘合剂带)和指示区之间。也可采用100-400nm的着色的聚苯乙烯颗粒代替金颗粒，例如，Merck Eurolab France/Estapor的聚苯乙烯颗粒。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，将以下各个结合成分施加到HiFlow Plus 065膜上“血型测定”指示区的对角交叉位置上，每个点0.2μl：抗-A抗体-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗体-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗体-AB6、AB26、AB92克隆(Medion Diagnostics，010062)；抗-红细胞抗体(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
以同样的方式将血型A、B和血型O(由红细胞浓缩制成)的红细胞影的悬浮液施加到HiFlow Plus 140膜上的“血清交叉核对”指示区区域。
“血清交叉核对”指示区区域结合成分的位置开始于x＝3mm/y＝10mm位置上的规格血型A的红细胞影。所有其它结合成分相对于规格血型A的红细胞影的位置以距离x＝3mm/y＝1.5mm重复地分配。红细胞影配制成在15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的悬浮液。
“血型测定”指示区区域结合成分的位置开始于x＝2.5mm/y＝20mm位置上的抗-A抗体。所有其它结合成分相对于抗-A抗体的位置以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复分配。用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀释抗体：抗-A抗体1∶3，抗-B抗体1∶2，抗-AB抗体1∶4，抗-RBC抗体1∶3。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为15×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝5mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
采用抗凝血的全血作为血样品。对于实际的试验，将100μl未稀释或用稀释缓冲液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1DiaMed)1∶3或1∶6稀释的血施加到加样区内。一旦将血留在加样区，则用100μl EnlisstII冲洗两次，以从膜上除去未结合的红细胞。。
结果：
(a)对照：如果抗-RBC对照(”血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，并且如果红细胞血型O对照(“血清交叉核对”指示区)被特征性染成紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。
(b)试验结果：根据有无对应的血型抗原，“血型测定”指示区区域内的对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。根据没有对应的带，则“血清交叉核对”指示区区域内表征为对应的同种凝集素。如果没有同种凝集素，则对应的带被特征性地染色。
实施例3：对受者同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验
试验带的准备：
试验带包括加样区、指示区和吸收区。将Millipore HiFlow Plus 065型膜切割成20mm×35mm(宽度/长度；x/y)带形的规格，并用粘合剂结合到支承层(背衬片，例如，G&L)。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，将各种结合成分对角交叉地施加到指示区区域中，每个点0.2μl，指示区区域被进一步分成“血清交叉核对/抗体检测”指示区区域(靠近加样区)和“血型测定”指示区区域(加样区远端)。
“血清交叉核对/抗体检测”指示区：规格血型A1、血型A2、血型B和血型O、血型O Rh-公式R1R1w(检测细胞1)、血型O Rh-公式R2R2(检测细胞2)、血型O RH-公式R1R1(检测细胞3)，以及作为对照的抗-人IgG/IgM(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，sigma，I-3382、I-0759)；“血型测定”指示区：抗-A抗体-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗体-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗体-AB6、Ab26、AB92克隆(Medion Diagnostics，010062)；抗-红细胞抗体(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
“血清交叉核对”指示区区域结合成分的位置开始于x＝3mm/y＝10mm位置上的规格血型A1的红细胞影。所有其它结合成分相对于规格血型A2、B、O的红细胞影的位置以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复分配。检测细胞1的红细胞影的定位前进到位置x＝11mm/y＝10mm，而检测细胞2和3的红细胞影及人IgG/IgM的定位以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复。红细胞影配制成在15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的悬浮液，抗-人IgG/IgM抗体为用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇配制的浓度为50μg/ml的1∶1混合物。
“血型测定”指示区区域结合成分的位置开始于x＝4mm/y＝20mm位置上的抗-A抗体。所有其它结合成分相对于抗-A抗体的位置以距离x＝4mm/y＝1.5mm重复分配。用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀释抗体：抗-A抗体1∶3，抗-B抗体1∶2，抗-AB抗体1∶4，抗-RBC抗体1∶3。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为20×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝5mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
对于血样品采用抗凝血的全血。对于试验，将合适的120μl未稀释或用稀释缓冲液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀释的血施加到加样区内。一旦将血留在加样区，则用120μl EnlisstII冲洗两次，以从膜上除去未结合的红细胞。之后在加样区中加入75μl以1∶10(v/v)稀释于0.08％明胶、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶联的金颗粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)。也可采用100-400nm的着色的聚苯乙烯颗粒代替金颗粒，例如，Merck Eurolab France/Estapor的聚苯乙烯颗粒。一旦金颗粒留在加样区，则用120μl EnlisstII再次冲洗膜一遍或两遍。
结果：
(a)对照：如果抗-RBC对照(指示区XII、“血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，并且如果抗-IgG/IgM对照(指示区VIII、“血清交叉核对/抗体检测”指示区)呈现特征性的紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。在每种情形下抗-IgG/IgM对照必须被染色，以使在没有不规则抗体的AB血型的人的情形中，在“血清交叉核对/抗体检测”指示区区域中完全不存在其它信号时，该指示区的染色能够确保正确的试验结果。指示区IV(红细胞影血型O)是同种凝集素是阴性对照。该指示区的染色意味着，除了同种凝集素外还必须存在不规则的抗体，即三个指示区V、VI、VII中的至少一个必须同样地染色。如果不是这样的情形，则试验无效。
(b)试验结果：根据有无对应的血型抗原，“血型测定”指示区区域内的对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。通过紫色形状点形式的金颗粒的特征性紫色或所用聚苯乙烯颗粒的颜色，可在“血清交叉核对”指示区内识别相应的同种凝集素。在没有同种凝集素的情况下，在这些位置未发现不同于背景的信号。如果存在不规则的抗体，则包括检测细胞1、2或3的红细胞影的指示区中的一个、两个或全部三个被金颗粒的特征紫色或所用聚苯乙烯颗粒的颜色染色。
实施例4：对供者同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验
试验带的准备：
原则上试验带的结构与实施例2的试验带的结构相同。Millipore HiFlow Plus065膜的尺寸为15mm×35mm(宽度/长度；x/y)。“血型测定”指示区区域的指示区与实施例2相同。在“血清交叉核对/抗体检测”指示区中，使用分配器，例如AD3200(Biodot)，来分配以下结合成分的0.2μl的点：
以下物质的悬浮液：规格血型A1、血型A2、血型B、血型O的红细胞影，待测细胞1-3的混合物的红细胞影(见实施例2)以及作为对照的抗-人IgG/IgM(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，sigma，I-3382、I-0759)。
“血清交叉核对/抗体检测”指示区的结合成分的位置开始于x＝2.5mm/y＝10mm位置上的规格血型A1的红细胞影，而规格血型A2、B、O的红细胞影的位置以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复分配。检测细胞1-3的混合物的红细胞影的定位发生在位置x＝10.5mm/y＝13mm，而人IgG/IgM定位在位置x＝12.5mm/y＝14.5mm。红细胞影配制成在15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的悬浮液，抗-人IgG/IgM抗体为用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇配制的浓度为50μg/ml的1∶1混合物。
“血型测定”指示区区域结合成分的位置开始于x＝3mm/y＝20mm位置上的抗-A抗体。所有其它结合成分相对于抗-A抗体的位置以距离x＝3mm/y＝1.5mm重复分配。用50mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀释抗体：抗-A抗体1∶3，抗-B抗体1∶2，抗-AB抗体1∶4，抗-RBC抗体1∶3。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为15×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝6mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
该试验的一批与实施例1中的一批相同。
结果：
(a)对照：如果抗-RBC对照(指示区X、“血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，或者如果抗-IgG/IgM对照(指示区VI、“血清交叉核对/抗体检测”指示区)呈现特征性的紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。在每种情形下抗-IgG/IgM对照必须被染色，以使在没有不规则抗体的AB血型的人的情形中，在“血清交叉核对/抗体检测”指示区区域中完全不存在其它信号时，该指示区的染色能够确保正确的试验结果。指示区IV(红细胞影血型O)是阴性对照。该指示区的染色表面，除了同种凝集素外还必须存在不规则的抗体，即三个指示区V、VI、VII中的至少一个必须同样地染色。如果不是这样的情形，则试验无效。
(b)试验结果：
根据有无对应的血型抗原，“血型测定”指示区区域内的对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。通过紫色形状点形式的金颗粒的特征性紫色或所用聚苯乙烯颗粒的颜色，可在“血清交叉核对”指示区内识别相应的同种凝集素。在没有同种凝集素的情况下，在这些位置未发现不同于背景的信号。如果存在不规则的抗体，则包括检测细胞1、2或3的红细胞影的指示区中的一个、两个或全部三个被金颗粒的特征紫色或所用聚苯乙烯颗粒的颜色染色。
实施例5：同时进行血型测定和感染标记的检测
试验带的准备：
试验带由加样区、指示区和吸收区组成。将Millipore HiFlow Plus 065型膜切割成15mm×35mm(宽度/长度；x/y)的规格，并用粘合剂结合到支承层(例如，G&L的背衬片)。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，将各种结合成分对角交叉地施加到指示剂区域，每个点0.2μl，指示剂区域被进一步分成“感染标记检测”指示区区域(靠近加样区)和“血型测定”指示区区域(加样区远端)：
“感染标记的检测”指示区区域：重组抗原(梅毒；TpN15、TpN17、TpN47)、糖蛋白gp-14、gp-41(HIV-1；HIV-0)和gp-36(HIV-2)序列的合成肽、重组HCV抗原(C-100、C-200、C33c、C22)、单克隆抗体(HBsAg)以及作为对照的抗-人IgG/IgM抗体(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，Sigma，I-3382、I-0759)的溶液；“血型测定”指示区区域：抗-A抗体-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗体-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗体-AB6、Ab26、AB92克隆(MedionDiagnostics，010062)；抗-D抗体-LDM3/ESD1克隆(SNBTS)，抗-CDE抗体-MS-24/MS-201/MS 80/MS-258克隆(serologicals)，抗-红细胞抗体(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
“感染标记检测”指示区区域结合成分的位置开始于x＝2.5mm/y＝10mm位置上特异性HIV-1(gp-14、gp-41)的合成肽。所有其它结合成分以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复分配到指示区I的位置。指示区I-V的结合成分用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成合适浓度，抗-人IgG/IgM抗体用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成50μg/ml的浓度。
“血型测定”
指示区区域结合成分的位置开始于x＝2.5mm/y＝20mm位置上的抗-A抗体。指示区区域的所有其它结合成分以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复分配到抗-A抗体的位置。用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀释抗体：抗-A抗体1∶3，抗-B抗体1∶2，抗-AB抗体1∶4，抗-RBC抗体1∶3。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为15×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝6mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
对于血样品采用抗凝血的全血。对于试验，将合适的100μl未稀释或用稀释缓冲液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀释的血施加到加样区内。一旦将血留在加样区，则用100μl EnlisstII冲洗两次，以从膜上除去未结合的红细胞。
之后在加样区中加入50μl以1∶10(v/v)稀释于0.08％明胶、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶联的金颗粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)和抗-HbsAg偶联的金颗粒(Arista Biologicals，ABHBS-0500)的混合物。也可采用100-400nm的着色的聚苯乙烯颗粒代替金颗粒，例如，Merck EurolabFrance/Estapor的聚苯乙烯颗粒。一旦金颗粒留在加样区，则用100μl EnlisstII再次冲洗膜一遍或两遍。
结果：
如果抗-RBC对照(指示区XII、“血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，并且如果抗-IgG/IgM对照(指示区VI、“感染标记检测”指示区)呈现特征性的紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。根据有无对应的血型抗原，对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。在存在抗HIV-1、HIV-2、梅毒抗体或存在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)时，由于被金颗粒染成特征性紫色从而可以根据紫色染色点来检测对应的位置。如果使用聚苯乙烯颗粒作为指示剂颗粒，则对应的位置被染成所用聚苯乙烯颗粒的颜色。在最常见的情形中，即对于所有感染标记为阴性反应，只有抗-IgG/IgM对照(指示区VI，“感染标记检测”指示区)被染色。
实施例6：同时进行血型测定和抗血小板抗原抗体的检测
试验带的准备：
原则上试验带的结构和模式与实施例4的试验带的结构相同。指示区区域被进一步划分为“血型测定”指示区和“抗血小板抗原抗体的检测”指示区。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，来分配以下各种结合成分的0.2μl点：
“抗血小板抗原抗体的检测”指示区区域：具有诸如HPA 1bb3aa5bb和HPA1aa3bb5aa的独特HPA抗原特征的O型血血小板的膜蛋白，以及作为对照的抗-人IgG/IgM(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，Sigma，I-3382、I-0759)；“血型测定”指示区区域：抗-A抗体-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗体-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗体-AB6、Ab26、AB92克隆(MedionDiagnostics，010062)；抗-D抗体-LDM3/ESD1克隆(SNBTS)，抗-CDE抗体-MS-24/MS-201/MS 80/MS-258克隆(serologicals)，抗-红细胞抗体(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。作为血小板膜蛋白的替代物，也可应用具有相应特征(HPA-抗原特征)的重组抗原。“抗血小板抗原的抗体检测”指示区区域结合成分的位置开始于x＝4mm/y＝10mm位置上具有HPA 1bb3aa5bb特征的膜蛋白抗原。所有其它结合成分以距离x＝3.5mm/y＝2mm重复地分配到指示区I的位置。指示区I和II的结合成分用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成合适浓度，抗-人IgG/IgM抗体用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成15μg/ml的浓度。
“血型测定”指示区结合成分的定位与实施例4相同。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为15×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝6mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
对于血样品采用抗凝血的全血。对于试验，将合适的100μl未稀释或用稀释缓冲液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀释的血施加到加样区内。一旦将血留在加样区，则用100μl EnlisstII冲洗两次，以从膜上除去未结合的红细胞。
之后在加样区中加入50μl以1∶10(v/v)稀释于0.08％明胶、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶联的金颗粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)。也可采用100-400nm的着色的聚苯乙烯颗粒代替金颗粒，例如，MerckEurolab France/Estapor的聚苯乙烯颗粒。一旦金颗粒留在加样区，则用100μlEnlisstII再次冲洗膜一遍或两遍。
结果：
如果抗-RBC对照(指示区IX、“血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，并且如果抗-IgG/IgM对照(指示区III、“抗血小板抗原的抗体检测”指示区)呈现特征性的紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。根据有无对应的血型抗原，对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。在存在抗血小板抗原的抗体时，通过金颗粒特有的紫色染色以及紫色的点可识别对应的位置。如果使用聚苯乙烯颗粒作为指示剂颗粒，则对应的位置被染成所用聚苯乙烯颗粒的颜色。
指示区V是血清交叉核对的对照(ctl)，并含有抗-人IgG/IgM抗体。指示区X是血型测定的对照(ctl)，并含有多克隆的抗-红细胞抗体。它位于全部剩余指示区的远侧。
在图2中，显示了图1所示用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图，其包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3以及将加样区5与膜的其余部分分离的密封元件4，膜又包括“血清交叉核对”和“血型测定”指示区，其包括对角交叉的指示区I-IX。
在图3中，显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和血清交叉核对。在本实施例中，装置的诸部件对应于图1所示装置的诸部件，例外地是，固定到多孔膜2上侧的密封元件呈三维板条4的形式。
在图4中，显示了图3所示用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图，其包括诸部件有支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及将加样区5与其余的膜分离的三维板条形式的密封元件4，膜又包括指示区6，它包括“血清交叉核对”和“血型测定”指示区，其包括对角交叉的指示区I-IX。
在图5中，借助于实例显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和血清交叉核对。在本实施例中，装置的诸部件对应于图1所示装置的诸部件，例外地是，固定到多孔膜2上的密封元件4呈三维槽的形式。
在图6中，显示了图5中所示的用于侧向流试验的本发明的装置的分解立体图，其包括诸部件有支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及将加样区5与其余的膜分离的呈三维槽形式的密封元件4，膜又包括由“血清交叉核对”和“血型测定”指示区构成的指示区6，其包括对角交叉的指示区I-IX。
图7借助于实例显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来对受者同时进行对血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验。此时，该装置包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及呈条带形式的二维密封元件4。多孔膜2附加到具有压敏丙烯酸粘合剂的支承层1。同样地，吸收垫3附加到支承层1上，有部分吸收垫3与多孔膜2重叠。固定在多孔膜2上侧的密封元件4将加样区5与其余的膜表面分离，并使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2内。在加样区5和与吸收垫3接触的多孔膜2的区域之间设置指示区6。后者是由排列在规定的X和Y位置内的对角交叉的点形指示区I-XII形成的，其中，指示区I-VIII表示“血清交叉核对/抗体检测试验”指示区，而指示区IX-XII表示“血型测定”指示区，且它们由以下结合成分组成：
指示区VIII是血清交叉核对和抗体检测试验的对照(ctl)，并含有抗-人IgG/IgM抗体。指示区XII是血型测定的对照，并含有多克隆的抗-红细胞抗体。它位于全部剩余指示区的远处。
在图8中，借助于实例显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来对血液供者同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验。此时，该装置包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及呈条带形式的二维密封元件4。多孔膜2固定到具有压敏丙烯酸粘合剂的支承层上。同样地，吸收垫3固定到支承层1上，有部分吸收垫3与多孔膜2重叠。固定在多孔膜2上侧的密封元件4将加样区5与其余的膜表面分离，并使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2内。在加样区5和与吸收垫3接触的多孔膜2的区域之间设置指示区6。它是由在规定的X和Y位置内对角交叉排列的点形指示区I-X形成的，其中，指示区I-VI表示“血清交叉核对/抗体检测试验”指示区，而指示区VII-X包括“血型测定”指示区，且它们由以下结合成分组成：
指示区VI是血清交叉核对和抗体检测试验的对照，并含有抗-人IgG/IgM抗体。指示区X是血型测定的对照，并含有多克隆的抗-红细胞抗体。它们位于全部剩余指示区的远处。
在图9中，借助于实例显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和感染标记的检测。在本实施例中，该装置包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及呈条带形式的二维密封元件4。多孔膜2固定到具有压敏丙烯酸粘合剂的支承层1上。同样地，吸收垫3固定到支承层1上，有部分吸收垫3与多孔膜2重叠。固定在多孔膜2上侧的密封元件4将加样区5与其余的膜表面分离，并使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2内。在加样区5和与吸收垫3接触的多孔膜2的区域之间设置指示区6。后者是由排列在规定的X和Y位置内的对角交叉的点形指示区I-XII形成的，其中，指示区I-VI表示“感染标记检测”指示区，而指示区VII-XII包括“血型测定”指示区，且它们由以下结合成分组成：
指示区VI是抗感染剂抗体检测的对照，并含有抗-人IgG/IgM抗体。指示区XII是血型测定的对照，并含有多克隆的抗-红细胞抗体。它们相对于所有其它指示区排列在远处。
在图10中，借助于实例显示了用于侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和抗血小板抗体的检测。在本实施例中，该装置包括支承层1、多孔膜2、吸收垫3，以及呈条带形式的二维密封元件4。多孔膜2固定到具有压敏丙烯酸粘合剂的支承层1上。同样地，吸收垫3固定到支承层1上，有部分吸收垫3与多孔膜2重叠。固定在多孔膜2上侧的密封元件4将加样区5与其余的膜表面分离，并使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2内。在加样区5和与吸收垫3接触的多孔膜2的区域之间设置指示区6。它是由在规定的X和Y位置内对角交叉的点形指示区I-IX形成的，其中，指示区I-III包括“抗血小板抗原抗体的检测”指示区，而指示区IV-IX包括“血型测定”指示区，且它们由以下结合成分组成：
指示区III是抗细胞系抗原抗体检测的对照，并包含抗-人IgG/IgM抗体。指示区IX是血型测定的对照，并包含多克隆的抗-红细胞抗体。它们相对于所有其它指示区定位在远处。
在图11中，借助于实例显示了用于双向流的侧向流试验的本发明的装置的立体图，其用来同时进行血型测定和血清交叉核对。在本实施例中，该装置包括支承层1、用于血型测定的多孔膜2a、不同于膜2a的用于血清交叉核对的多孔膜2b、吸收垫3a和3b、呈一槽形式的三维密封元件4、以及相配的垫6。多孔膜2a和2b固定到具有压敏丙烯酸粘合剂的支承层1上。同样地，吸收垫3a和3b固定到支承层1上，各吸收垫3a和3b的一部分与多孔膜2a和2b重叠。固定在多孔膜2a和2b上侧的密封元件4将加样区5a和5b分别与其余的膜表面分离，并使样品液和检测试剂定向分布到多孔膜2a和2b内。在加样区5a和与吸收垫3a接触的多孔膜2a的区域之间设置指示区7a(血型测定)。后者是由排列在规定的X和Y位置内的对角交叉的点形指示区I-VI形成的，其中，指示区区域7a的指示区由以下结合成分组成：
指示区VI是血型测定的对照，并包含多克隆的抗-红细胞抗体。它相对于指示区I-V定位在远处。
在加样区5b和与吸收垫3b接触的多孔膜2b的区域之间设置指示区7b(血清交叉核对)。它是由在规定的X和Y位置内的偏离对角设置的点形指示区VII-IX形成的，其中，指示区区域7b的指示区由以下结合成分组成：
在图12中，显示了用于双向流的侧向流试验的如图11所示的本发明装置的分解立体图，该装置包括一下部件：支承层1、用于血型测定的多孔膜2a、不同于膜2a的用于血清交叉核对的多孔膜2b、吸收垫3a和3b、呈一槽形状设计的三维密封元件4、以及相配的垫6。样品的加样区在两个多孔膜上方延伸，其包括膜2a的探针加样区5a和膜2b的探针加样区5b，并通过呈槽形式的密封元件4与膜2a和2b的其余表面分离。膜2a包含指示区区域7a，其包括从近端到远端成对角交叉排列的指示区I-VI，而膜2b包含指示区区域7b，其包括从近端到远端成对角交叉排列的指示区VII-IX。
实施例
实施例1：同时进行血型测定(直接测定)和血清交叉核对(直接结合测定)
试验带的准备：
试验带包括加样区、指示区和吸收区。将Millipore HiFlow Plus 065型膜切割成15mm×35mm(宽度/长度；x/y)带形的规格，并用粘合剂结合到支承层(背衬片，例如，G&L)。用例如AD3200(Biodot)将各种结合成分对角交叉地点到指示区，每个点0.2μl，指示区被分成“血清交叉核对”指示区(靠近加样区)和血型测定指示区(加样区远端)：
“血清交叉核对”指示区：规格血型A1、血型A2、血型B和血型O(由红细胞浓缩形成)的红细胞影以及作为对照的抗-人IgG/IgM抗体(羊抗人IgG、羊抗人IgM，sigma，I-3382、I-0759)的悬浮液，“血型测定”指示区：抗-A抗体-Birma-1克隆(Serologials，TLJ0105)；抗-B抗体-ES-4克隆(Serologials，NCA0201)；抗-AB抗体-AB6、AB26、AB92克隆(Medion Diagnostics，010062)；抗-红细胞抗体(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
“血清交叉核对”指示区区域结合成分的位置开始于x＝2.5mm/y＝10mm位置上的规格血型A1的红细胞影。所有其它结合成分相对于规格血型A1的红细胞影的位置以距离x＝2.5mm/y＝1.5mm重复分配。红细胞影配制成在15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的悬浮液，抗-人IgG/IgM抗体为用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇配制的浓度为50μg/ml的1∶1混合物。
“血型测定”指示区区域结合成分的位置开始于x＝3mm/y＝20mm位置上的抗-A抗体。所有其它结合成分相对于抗-A抗体的位置以距离x＝3mm/y＝1.5mm重复分配。用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀释抗体：抗-A抗体1∶3，抗-B抗体1∶2，抗-AB抗体1∶4，抗-RBC抗体1∶3。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为15×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝5mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
对于血样品采用抗凝血的全血。对于试验，将合适的100μl未稀释或用稀释缓冲液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀释的血施加到加样区内。一旦将血留在加样区，则用100μl EnlisstII冲洗两次，以从膜上除去未结合的红细胞。之后在加样区中加入50μl以1∶10(v/v)稀释于0.08％明胶、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶联的金颗粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)。也可采用100-400nm的着色的聚苯乙烯颗粒代替金颗粒，例如，Merck Eurolab France/Estapor的聚苯乙烯颗粒。一旦金颗粒留在加样区，则用100μl EnlisstII再次冲洗膜一遍或两遍。
结果：
(a)对照：如果抗-RBC对照(指示区IX、“血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，并且如果抗-IgG/IgM对照(指示区V、“血清交叉核对”指示区)呈现特征性的紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。
(b)试验结果：根据有无对应的血型抗原，“血型测定”指示区区域内的对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。通过紫色形状点形式的金颗粒的特征性紫色或所用聚苯乙烯颗粒的颜色，可在“血清交叉核对”指示区内识别相应的同种凝集素。在没有同种凝集素的情况下，在这些位置未发现不同于背景的信号。
实施例2：同时进行血型测定(直接试验)和血清交叉核对(竞争试验)
试验带的准备：
试验带包括加样区、位于加样区两侧的两个指示区和两个吸收区。将MilliporeHiFlow Plus 065和HiFlow Plus 140型号的膜切割成15mm×20mm(宽度/长度；x/y)带形的规格，并用粘合剂并排地结合到支承层(背衬片，例如，G&L)。另外，在HiFlowPlus 140上施加含有抗-A/抗-B/抗-H偶联的金颗粒的经过干燥的相配的垫，使其位于密封元件(粘合剂带)和指示区之间。也可采用100-400nm的着色的聚苯乙烯颗粒代替金颗粒，例如，Merck Eurolab France/Estapor的聚苯乙烯颗粒。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，将以下各个结合成分施加到HiFlow Plus 065膜上“血型测定”指示区的对角交叉位置上，每个点0.2μl：抗-A抗体-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗体-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗体-AB6、AB26、AB92克隆(Medion Diagnostics，010062)；抗-红细胞抗体(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
以同样的方式将血型A、B和血型O(由红细胞浓缩制成)的红细胞影的悬浮液施加到HiFlow Plus 140膜上的“血清交叉核对”指示区区域。
“血清交叉核对”指示区区域结合成分的位置开始于x＝3mm/y＝10mm位置上的规格血型A的红细胞影。所有其它结合成分相对于规格血型A的红细胞影的位置以距离x＝3mm/y＝1.5mm重复地分配。红细胞影配制成在15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的悬浮液。
“血型测定”指示区区域结合成分的位置开始于x＝2.5mm/y＝20mm位置上的抗-A抗体。所有其它结合成分相对于抗-A抗体的位置以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复分配。用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀释抗体：抗-A抗体1∶3，抗-B抗体1∶2，抗-AB抗体1∶4，抗-RBC抗体1∶3。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为15×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝5mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
采用抗凝血的全血作为血样品。对于实际的试验，将100μl未稀释或用稀释缓冲液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1DiaMed)1∶3或1∶6稀释的血施加到加样区内。一旦将血留在加样区，则用100μl EnlisstII冲洗两次，以从膜上除去未结合的红细胞。。
结果：
(a)对照：如果抗-RBC对照(”血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，并且如果红细胞血型O对照(“血清交叉核对”指示区)被特征性染成紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。
(b)试验结果：根据有无对应的血型抗原，“血型测定”指示区区域内的对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。根据没有对应的带，则“血清交叉核对”指示区区域内表征为对应的同种凝集素。如果没有同种凝集素，则对应的带被特征性地染色。
实施例3：对受者同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验
试验带的准备：
试验带包括加样区、指示区和吸收区。将Millipore HiFlow Plus 065型膜切割成20mm×35mm(宽度/长度；x/y)带形的规格，并用粘合剂结合到支承层(背衬片，例如，G&L)。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，将各种结合成分对角交叉地施加到指示区区域中，每个点0.2μl，指示区区域被进一步分成“血清交叉核对/抗体检测”指示区区域(靠近加样区)和“血型测定”指示区区域(加样区远端)。
“血清交叉核对/抗体检测”指示区：规格血型A1、血型A2、血型B和血型O、血型O Rh-公式R1R1w(检测细胞1)、血型O Rh-公式R2R2(检测细胞2)、血型O RH-公式R1R1(检测细胞3)，以及作为对照的抗-人IgG/IgM(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，sigma，I-3382、I-0759)；“血型测定”指示区：抗-A抗体-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗体-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗体-AB6、Ab26、AB92克隆(Medion Diagnostics，010062)；抗-红细胞抗体(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
“血清交叉核对”指示区区域结合成分的位置开始于x＝3mm/y＝10mm位置上的规格血型A1的红细胞影。所有其它结合成分相对于规格血型A2、B、O的红细胞影的位置以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复分配。检测细胞1的红细胞影的定位前进到位置x＝11mm/y＝10mm，而检测细胞2和3的红细胞影及人IgG/IgM的定位以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复。红细胞影配制成在15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的悬浮液，抗-人IgG/IgM抗体为用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇配制的浓度为50μg/ml的1∶1混合物。
“血型测定”指示区区域结合成分的位置开始于x＝4mm/y＝20mm位置上的抗-A抗体。所有其它结合成分相对于抗-A抗体的位置以距离x＝4mm/y＝1.5mm重复分配。用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀释抗体：抗-A抗体1∶3，抗-B抗体1∶2，抗-AB抗体1∶4，抗-RBC抗体1∶3。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为20×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝5mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
对于血样品采用抗凝血的全血。对于试验，将合适的120μl未稀释或用稀释缓冲液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀释的血施加到加样区内。一旦将血留在加样区，则用120μl EnlisstII冲洗两次，以从膜上除去未结合的红细胞。之后在加样区中加入75μl以1∶10(v/v)稀释于0.08％明胶、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶联的金颗粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)。也可采用100-400nm的着色的聚苯乙烯颗粒代替金颗粒，例如，Merck Eurolab France/Estapor的聚苯乙烯颗粒。一旦金颗粒留在加样区，则用120μl EnlisstII再次冲洗膜一遍或两遍。
结果：
(a)对照：如果抗-RBC对照(指示区XII、“血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，并且如果抗-IgG/IgM对照(指示区VIII、“血清交叉核对/抗体检测”指示区)呈现特征性的紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。在每种情形下抗-IgG/IgM对照必须被染色，以使在没有不规则抗体的AB血型的人的情形中，在“血清交叉核对/抗体检测”指示区区域中完全不存在其它信号时，该指示区的染色能够确保正确的试验结果。指示区IV(红细胞影血型O)是同种凝集素是阴性对照。该指示区的染色意味着，除了同种凝集素外还必须存在不规则的抗体，即三个指示区V、VI、VII中的至少一个必须同样地染色。如果不是这样的情形，则试验无效。
(b)试验结果：根据有无对应的血型抗原，“血型测定”指示区区域内的对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。通过紫色形状点形式的金颗粒的特征性紫色或所用聚苯乙烯颗粒的颜色，可在“血清交叉核对”指示区内识别相应的同种凝集素。在没有同种凝集素的情况下，在这些位置未发现不同于背景的信号。如果存在不规则的抗体，则包括检测细胞1、2或3的红细胞影的指示区中的一个、两个或全部三个被金颗粒的特征紫色或所用聚苯乙烯颗粒的颜色染色。
实施例4：对供者同时进行血型测定、血清交叉核对和抗体检测试验
试验带的准备：
原则上试验带的结构与实施例2的试验带的结构相同。Millipore HiFlow Plus065膜的尺寸为15mm×35mm(宽度/长度；x/y)。“血型测定”指示区区域的指示区与实施例2相同。在“血清交叉核对/抗体检测”指示区中，使用分配器，例如AD3200(Biodot)，来分配以下结合成分的0.2μl的点：
以下物质的悬浮液：规格血型A1、血型A2、血型B、血型O的红细胞影，待测细胞1-3的混合物的红细胞影(见实施例2)以及作为对照的抗-人IgG/IgM(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，sigma，I-3382、I-0759)。
“血清交叉核对/抗体检测”指示区的结合成分的位置开始于x＝2.5mm/y＝10mm位置上的规格血型A1的红细胞影，而规格血型A2、B、O的红细胞影的位置以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复分配。检测细胞1-3的混合物的红细胞影的定位发生在位置x＝10.5mm/y＝13mm，而人IgG/IgM定位在位置x＝12.5mm/y＝14.5mm。红细胞影配制成在15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的悬浮液，抗-人IgG/IgM抗体为用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5、10％(v/v)甲醇配制的浓度为50μg/ml的1∶1混合物。
“血型测定”指示区区域结合成分的位置开始于x＝3mm/y＝20mm位置上的抗-A抗体。所有其它结合成分相对于抗-A抗体的位置以距离x＝3mm/y＝1.5mm重复分配。用50mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀释抗体：抗-A抗体1∶3，抗-B抗体1∶2，抗-AB抗体1∶4，抗-RBC抗体1∶3。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为15×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝6mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
该试验的一批与实施例1中的一批相同。
结果：
(a)对照：如果抗-RBC对照(指示区X、“血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，或者如果抗-IgG/IgM对照(指示区VI、“血清交叉核对/抗体检测”指示区)呈现特征性的紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。在每种情形下抗-IgG/IgM对照必须被染色，以使在没有不规则抗体的AB血型的人的情形中，在“血清交叉核对/抗体检测”指示区区域中完全不存在其它信号时，该指示区的染色能够确保正确的试验结果。指示区IV(红细胞影血型O)是阴性对照。该指示区的染色表面，除了同种凝集素外还必须存在不规则的抗体，即三个指示区V、VI、VII中的至少一个必须同样地染色。如果不是这样的情形，则试验无效。
(b)试验结果：
根据有无对应的血型抗原，“血型测定”指示区区域内的对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。通过紫色形状点形式的金颗粒的特征性紫色或所用聚苯乙烯颗粒的颜色，可在“血清交叉核对”指示区内识别相应的同种凝集素。在没有同种凝集素的情况下，在这些位置未发现不同于背景的信号。如果存在不规则的抗体，则包括检测细胞1、2或3的红细胞影的指示区中的一个、两个或全部三个被金颗粒的特征紫色或所用聚苯乙烯颗粒的颜色染色。
实施例5：同时进行血型测定和感染标记的检测
试验带的准备：
试验带由加样区、指示区和吸收区组成。将Millipore HiFlow Plus 065型膜切割成15mm×35mm(宽度/长度；x/y)的规格，并用粘合剂结合到支承层(例如，G&L的背衬片)。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，将各种结合成分对角交叉地施加到指示剂区域，每个点0.2μl，指示剂区域被进一步分成“感染标记检测”指示区区域(靠近加样区)和“血型测定”指示区区域(加样区远端)：
“感染标记的检测”指示区区域：重组抗原(梅毒；TpN15、TpN17、TpN47)、糖蛋白gp-14、gp-41(HIV-1；HIV-0)和gp-36(HIV-2)序列的合成肽、重组HCV抗原(C-100、C-200、C33c、C22)、单克隆抗体(HBsAg)以及作为对照的抗-人IgG/IgM抗体(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，Sigma，I-3382、I-0759)的溶液；“血型测定”指示区区域：抗-A抗体-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗体-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗体-AB6、Ab26、AB92克隆(MedionDiagnostics，010062)；抗-D抗体-LDM3/ESD1克隆(SNBTS)，抗-CDE抗体-MS-24/MS-201/MS 80/MS-258克隆(serologicals)，抗-红细胞抗体(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
“感染标记检测”指示区区域结合成分的位置开始于x＝2.5mm/y＝10mm位置上特异性HIV-1(gp-14、gp-41)的合成肽。所有其它结合成分以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复分配到指示区I的位置。指示区I-V的结合成分用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成合适浓度，抗-人IgG/IgM抗体用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成50μg/ml的浓度。
“血型测定”
指示区区域结合成分的位置开始于x＝2.5mm/y＝20mm位置上的抗-A抗体。指示区区域的所有其它结合成分以距离x＝2mm/y＝1.5mm重复分配到抗-A抗体的位置。用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀释抗体：抗-A抗体1∶3，抗-B抗体1∶2，抗-AB抗体1∶4，抗-RBC抗体1∶3。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为15×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝6mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
对于血样品采用抗凝血的全血。对于试验，将合适的100μl未稀释或用稀释缓冲液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀释的血施加到加样区内。一旦将血留在加样区，则用100μl EnlisstII冲洗两次，以从膜上除去未结合的红细胞。
之后在加样区中加入50μl以1∶10(v/v)稀释于0.08％明胶、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶联的金颗粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)和抗-HbsAg偶联的金颗粒(Arista Biologicals，ABHBS-0500)的混合物。也可采用100-400nm的着色的聚苯乙烯颗粒代替金颗粒，例如，Merck EurolabFrance/Estapor的聚苯乙烯颗粒。一旦金颗粒留在加样区，则用100μl EnlisstII再次冲洗膜一遍或两遍。
结果：
如果抗-RBC对照(指示区XII、“血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，并且如果抗-IgG/IgM对照(指示区VI、“感染标记检测”指示区)呈现特征性的紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。根据有无对应的血型抗原，对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。在存在抗HIV-1、HIV-2、梅毒抗体或存在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)时，由于被金颗粒染成特征性紫色从而可以根据紫色染色点来检测对应的位置。如果使用聚苯乙烯颗粒作为指示剂颗粒，则对应的位置被染成所用聚苯乙烯颗粒的颜色。在最常见的情形中，即对于所有感染标记为阴性反应，只有抗-IgG/IgM对照(指示区VI，“感染标记检测”指示区)被染色。
实施例6：同时进行血型测定和抗血小板抗原抗体的检测
试验带的准备：
原则上试验带的结构和模式与实施例4的试验带的结构相同。指示区区域被进一步划分为“血型测定”指示区和“抗血小板抗原抗体的检测”指示区。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，来分配以下各种结合成分的0.2μl点：
“抗血小板抗原抗体的检测”指示区区域：具有诸如HPA 1bb3aa5bb和HPA1aa3bb5aa的独特HPA抗原特征的O型血血小板的膜蛋白，以及作为对照的抗-人IgG/IgM(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，Sigma，I-3382、I-0759)；“血型测定”指示区区域：抗-A抗体-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗体-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗体-AB6、Ab26、AB92克隆(MedionDiagnostics，010062)；抗-D抗体-LDM3/ESD1克隆(SNBTS)，抗-CDE抗体-MS-24/MS-201/MS 80/MS-258克隆(serologicals)，抗-红细胞抗体(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。作为血小板膜蛋白的替代物，也可应用具有相应特征(HPA-抗原特征)的重组抗原。“抗血小板抗原的抗体检测”指示区区域结合成分的位置开始于x＝4mm/y＝10mm位置上具有HPA 1bb3aa5bb特征的膜蛋白抗原。所有其它结合成分以距离x＝3.5mm/y＝2mm重复地分配到指示区I的位置。指示区I和II的结合成分用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成合适浓度，抗-人IgG/IgM抗体用15mM磷酸钾缓冲液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成15μg/ml的浓度。
“血型测定”指示区结合成分的定位与实施例4相同。
分配结合成分之后，将膜在40℃下干燥20分钟，然后储存在恒定的空气湿度下，直到进行试验。在远离加样区的一端将规格为15×15mm的吸收垫(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，与膜重叠3mm。通过在位置y＝6mm处粘贴1-2mm宽的粘合剂带(Tesa 4124)使加样区在整个膜宽度上与其余的膜分离。
试验的一批：
对于血样品采用抗凝血的全血。对于试验，将合适的100μl未稀释或用稀释缓冲液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀释的血施加到加样区内。一旦将血留在加样区，则用100μl EnlisstII冲洗两次，以从膜上除去未结合的红细胞。
之后在加样区中加入50μl以1∶10(v/v)稀释于0.08％明胶、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶联的金颗粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)。也可采用100-400nm的着色的聚苯乙烯颗粒代替金颗粒，例如，MerckEurolab France/Estapor的聚苯乙烯颗粒。一旦金颗粒留在加样区，则用100μlEnlisstII再次冲洗膜一遍或两遍。
结果：
如果抗-RBC对照(指示区IX、“血型测定”指示区)显示一清晰的阳性信号(红点)，并且如果抗-IgG/IgM对照(指示区III、“抗血小板抗原的抗体检测”指示区)呈现特征性的紫色(金颗粒)或呈所用聚苯乙烯颗粒的颜色，则试验有效。根据有无对应的血型抗原，对应位置上显示红点(阳性)或几乎白背景膜着色(阴性)。在存在抗血小板抗原的抗体时，通过金颗粒特有的紫色染色以及紫色的点可识别对应的位置。如果使用聚苯乙烯颗粒作为指示剂颗粒，则对应的位置被染成所用聚苯乙烯颗粒的颜色。