酶抑制剂的分析方法与模块

摘要

本发明提供一种测量水溶液的酶抑制剂含量的方法与模块，包含利用抛弃式试片、胶囊及多功能的容器，以使化学反应与检测可在同一容器中进行。本发明亦可用来检测蔬果中的农药残留量。

权利要求

1.一种酶抑制剂的定量分析方法，包含：

(a)提供第一化合物；酶，用以催化该第一化合物的化学反应；及第二化合物，用以与该化学反应的产物反应，而生成第三化合物，该第三化合物是可吸收特定波长的光；其中该第一化合物、该酶、及该第二化合物均呈现干燥形式，且分别仅含单次分析剂量，且该第一化合物是固定于第一试片上，该酶则固定于第二试片上；

(b)提供第一样品，具有已知含量的酶抑制剂，用以抑制该酶的催化能力，该已知含量包含零；

(c)混合该第一样品、该酶、该第一化合物、及该第二化合物，以形成水溶液；

(d)利用光学比色仪，于该特定波长下，测量该水溶液于固定时间内的吸光度差，定义为第一吸光度差；

(e)提供第二样品，具有未知含量的该酶抑制剂；

(f)以该第二样品取代该第一样品，进行上述(a)至(c)的步骤，并测量所形成水溶液于该固定时间内的吸光度差，定义为第二吸光度差；

(g)比较该第二吸光度差与该第一吸光度差的比率，以计算该水溶液中该酶抑制剂的含量，其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。

2.如权利要求1所述的方法，其中该(a)步骤更包含指示剂，具有肉眼可辨识的颜色。

3.如权利要求2所述的方法，其中部分含量的该指示剂是固定于该第一试片上；另一部分含量的该指示剂则固定于该第二试片上。

4.如权利要求1所述的方法，其中该酶抑制剂是选自有机磷化物及氨基甲酸盐类化物。

5.如权利要求1所述的方法，其中该(a)步骤更包含缓冲盐类。

6.如权利要求1所述的方法，其中该光学比色仪更包含恒温槽或温度计。

7.一种酶抑制剂的定量分析方法，包含：

(a)提供第一化合物；酶，用以催化该第一化合物的化学反应；及第二化合物，用以与该化学反应的产物反应，而生成第三化合物，该第三化合物是可吸收特定波长的光；其中该第一化合物、该酶、及该第二化合物均呈现干燥形式，且分别仅含单次分析剂量；

(b)提供第一样品，具有已知含量的酶抑制剂，用以抑制该酶的催化能力，该已知含量包含零；

(c)混合该第一样品、该酶、该第一化合物、及该第二化合物，以形成水溶液；

(d)利用光学比色仪，于该特定波长下，测量该水溶液于固定时间内的吸光度差，定义为第一吸光度差；

(e)提供第二样品，具有未知含量的该酶抑制剂；

(f)以该第二样品取代该第一样品，进行上述(a)至(c)的步骤，并测量所形成水溶液于该固定时间内的吸光度差，定义为第二吸光度差；

(g)比较该第二吸光度差与该第一吸光度差的比率，以计算该水溶液中该酶抑制剂的含量，其中该方法更包含提供一容器，用以盛装该水溶液，使充作该第一化合物进行水解反应的反应器；该容器为该特定波长的光可穿透的材料所制成，可置于该光学比色仪中以执行该步骤(d)或(f)，且该酶或该第一化合物固定于该容器的底部，且其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。

8.如权利要求7所述的方法，更包含该容器的上盖，该上盖的内侧含有指示剂，具有肉眼可辨识的颜色。

9.一种酶抑制剂的定量分析方法，包含：

(a)提供第一化合物；酶，用以催化该第一化合物的化学反应；及第二化合物，用以与该化学反应的产物反应，而生成第三化合物，该第三化合物是可吸收特定波长的光；其中该第一化合物、该酶、及该第二化合物均呈现干燥形式，且分别仅含单次分析剂量；

(b)提供第一样品，具有已知含量的酶抑制剂，用以抑制该酶的催化能力，该已知含量包含零；

(c)混合该第一样品、该酶、该第一化合物、及该第二化合物，以形成水溶液；

(d)利用光学比色仪，于该特定波长下，测量该水溶液于固定时间内的吸光度差，定义为第一吸光度差；

(e)提供第二样品，具有未知含量的该酶抑制剂；

(f)以该第二样品取代该第一样品，进行上述(a)至(c)的步骤，并测量所形成水溶液于该固定时间内的吸光度差，定义为第二吸光度差；

(g)比较该第二吸光度差与该第一吸光度差的比率，以计算该水溶液中该酶抑制剂的含量，其中该方法更包含提供容器，用以盛装该水溶液，使充作该第一化合物进行反应的反应器；该容器为该特定波长的光可穿透的材料所制成，可置于该光学比色仪中以执行该步骤(d)或(f)，该容器包含上盖，该酶或该第一化合物固定于该上盖的内侧，且其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。

10.一种酶抑制剂定量分析模块，包含：

容器，供盛装水溶液，该水溶液具有含量为X的酶抑制剂；其中，该容器充作第一化合物进行化学反应的反应器，该化学反应可被酶所催化，该酶的催化能力可被该酶抑制剂所抑制，该化学反应的产物可与第二化合物反应以生成第三化合物，是可吸收具有特定波长的光，且该容器为该特定波长的光可穿透的材料所制成，其中该第一化合物或该酶固定在该容器的底部；及光学比色仪，可容纳该容器，并透过该容器测量该水溶液于该特定波长的吸光度，且其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。

11.如权利要求10所述的模块，更包含试片，该试片包含指示剂，是具有肉眼可辨识的颜色。

12.如权利要求10所述的模块，其中该容器更包含上盖，该上盖包含指示剂，是具有肉眼可辨识的颜色。

13.如权利要求10所述的模块，其中该X包含零。

14.一种酶抑制剂定量分析模块，包含：

容器，供盛装水溶液，该水溶液具有含量为X的酶抑制剂；其中，该容器充作第一化合物进行化学反应的反应器，该化学反应可被酶所催化，该酶的催化能力可被该酶抑制剂所抑制，该化学反应的产物可与第二化合物反应以生成第三化合物，是可吸收具有特定波长的光，且该容器为该特定波长的光可穿透的材料所制成；

光学比色仪，可容纳该容器，并透过该容器测量该水溶液于该特定波长的吸光度；及试片，该试片包含该第一化合物或该酶，且

其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。

15.一种酶抑制剂定量分析模块，包含：

容器，供盛装水溶液，该水溶液具有含量为X的酶抑制剂；其中，该容器充作第一化合物进行化学反应的反应器，该化学反应可被酶所催化，该酶的催化能力可被该酶抑制剂所抑制，该化学反应的产物可与第二化合物反应以生成第三化合物，是可吸收具有特定波长的光，且该容器为该特定波长的光可穿透的材料所制成，其中该容器更包含上盖，该上盖更包含该第一化合物或该酶；及光学比色仪，可容纳该容器，并透过该容器测量该水溶液于该特定波长的吸光度，且其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。

说明书

技术领域

本发明涉及一种酶抑制剂定量分析的方法与模块，尤其涉及具有抑制酶活性的农药的定量分析。

背景技术

已知分析蔬果中农药残余量的方法有分光光度法、极谱法、原子吸收光谱法、薄层层析法、气相色谱法、液相色谱法、同位素标记法、核磁共振波谱法、色质联用法、萤光法、免疫分析法等等。目前普遍被采用的还是以气相色谱法和液相色谱法为主，因其具有良好的再现性、灵敏度、并可确定农药品种等优点。
然而，前述各方法均需专业技术人员在实验室进行大量试液的配制，无法简便地在农作物产地、市场、量贩超市等一般消费者采购场所，由未经严格训练的人员进行快速的分析。因此，需要一种便于一般人员使用的定量分析方法，使分析的工作可在任意场所进行，免除多种大量试液的配置。

发明内容

本发明是利用一般农药具抑制酶活性的特性，提供一种简便的酶抑制剂定量分析方法与模块，以分析样品中农药的含量。
本发明包含提供酶、用以催化第一化合物的化学反应，此酶的催化能力可被酶抑制剂所抑制，因此从酶被抑制程度的变化(即此化学反应变慢的程度)可推算酶抑制剂的含量。本发明测量酶被抑制程度的方法是利用第二化合物。此第二化合物会与此化学反应的产物快速反应而生成第三化合物。由于光学比色仪能侦测第三化合物所吸收的特定波长的光，故可藉由测量此水解反应过程中第三化合物于该特定波长的吸光度变化，测得此化学反应变慢的程度；而计算出酶抑制剂的含量。
本发明更包含一种用以定量分析酶抑制剂的组成物，含上述的酶、第一化合物与第二化合物。
本发明更包含，于每次分析时，使用干燥形式呈现的各种试剂，且均仅含单次分析剂量，可免除多种大量试液的配置。
本发明更包含多功能容器，供盛装待测溶液，亦供各种干燥试剂在此容器中进行混合反应，此容器还可直接置入携带式光学比色仪中，测量待测溶液的吸光度，使分析工作可简便地在任意场所进行。
本发明涉及一种酶抑制剂的定量分析方法，包含：
(a)提供第一化合物；酶，用以催化该第一化合物的化学反应；及第二化合物，用以与该化学反应的产物反应，而生成第三化合物，该第三化合物是可吸收特定波长的光；其中该第一化合物、该酶、及该第二化合物均呈现干燥形式，且分别仅含单次分析剂量，且该第一化合物是固定于第一试片上，该酶则固定于第二试片上；
(b)提供第一样品，具有已知含量的酶抑制剂，用以抑制该酶的催化能力，该已知含量包含零；
(c)混合该第一样品、该酶、该第一化合物、及该第二化合物，以形成水溶液；
(d)利用光学比色仪，于该特定波长下，测量该水溶液于固定时间内的吸光度差，定义为第一吸光度差；
(e)提供第二样品，具有未知含量的该酶抑制剂；
(f)以该第二样品取代该第一样品，进行上述(a)至(c)的步骤，并测量所形成水溶液于该固定时间内的吸光度差，定义为第二吸光度差；
(g)比较该第二吸光度差与该第一吸光度差的比率，以计算该水溶液中该酶抑制剂的含量，
其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。
本发明还涉及一种酶抑制剂的定量分析方法，包含：
(a)提供第一化合物；酶，用以催化该第一化合物的化学反应；及第二化合物，用以与该化学反应的产物反应，而生成第三化合物，该第三化合物是可吸收特定波长的光；其中该第一化合物、该酶、及该第二化合物均呈现干燥形式，且分别仅含单次分析剂量；
(b)提供第一样品，具有已知含量的酶抑制剂，用以抑制该酶的催化能力，该已知含量包含零；
(c)混合该第一样品、该酶、该第一化合物、及该第二化合物，以形成水溶液；
(d)利用光学比色仪，于该特定波长下，测量该水溶液于固定时间内的吸光度差，定义为第一吸光度差；
(e)提供第二样品，具有未知含量的该酶抑制剂；
(f)以该第二样品取代该第一样品，进行上述(a)至(c)的步骤，并测量所形成水溶液于该固定时间内的吸光度差，定义为第二吸光度差；
(g)比较该第二吸光度差与该第一吸光度差的比率，以计算该水溶液中该酶抑制剂的含量，
其中该方法更包含提供一容器，用以盛装该水溶液，使充作该第一化合物进行水解反应的反应器；该容器为该特定波长的光可穿透的材料所制成，可置于该光学比色仪中以执行该步骤(d)或(f)，且该酶或该第一化合物固定于该容器的底部，且
其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。
本发明还涉及一种酶抑制剂的定量分析方法，包含：
(a)提供第一化合物；酶，用以催化该第一化合物的化学反应；及第二化合物，用以与该化学反应的产物反应，而生成第三化合物，该第三化合物是可吸收特定波长的光；其中该第一化合物、该酶、及该第二化合物均呈现干燥形式，且分别仅含单次分析剂量；
(b)提供第一样品，具有已知含量的酶抑制剂，用以抑制该酶的催化能力，该已知含量包含零；
(c)混合该第一样品、该酶、该第一化合物、及该第二化合物，以形成水溶液；
(d)利用光学比色仪，于该特定波长下，测量该水溶液于固定时间内的吸光度差，定义为第一吸光度差；
(e)提供第二样品，具有未知含量的该酶抑制剂；
(f)以该第二样品取代该第一样品，进行上述(a)至(c)的步骤，并测量所形成水溶液于该固定时间内的吸光度差，定义为第二吸光度差；
(g)比较该第二吸光度差与该第一吸光度差的比率，以计算该水溶液中该酶抑制剂的含量，
其中该方法更包含提供容器，用以盛装该水溶液，使充作该第一化合物进行反应的反应器；该容器为该特定波长的光可穿透的材料所制成，可置于该光学比色仪中以执行该步骤(d)或(f)，该容器包含上盖，该酶或该第一化合物固定于该上盖的内侧，且
其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。
本发明还涉及一种酶抑制剂定量分析模块，包含：
容器，供盛装水溶液，该水溶液具有含量为X的酶抑制剂；其中，该容器充作第一化合物进行化学反应的反应器，该化学反应可被酶所催化，该酶的催化能力可被该酶抑制剂所抑制，该化学反应的产物可与第二化合物反应以生成第三化合物，是可吸收具有特定波长的光，且该容器为该特定波长的光可穿透的材料所制成，其中该第一化合物或该酶固定在该容器的底部；及
光学比色仪，可容纳该容器，并透过该容器测量该水溶液于该特定波长的吸光度，且
其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。
本发明还涉及一种酶抑制剂定量分析模块，包含：
容器，供盛装水溶液，该水溶液具有含量为X的酶抑制剂；其中，该容器充作第一化合物进行化学反应的反应器，该化学反应可被酶所催化，该酶的催化能力可被该酶抑制剂所抑制，该化学反应的产物可与第二化合物反应以生成第三化合物，是可吸收具有特定波长的光，且该容器为该特定波长的光可穿透的材料所制成；
光学比色仪，可容纳该容器，并透过该容器测量该水溶液于该特定波长的吸光度；及
试片，该试片包含该第一化合物或该酶，且
其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。
本发明还涉及一种酶抑制剂定量分析模块，包含：
容器，供盛装水溶液，该水溶液具有含量为X的酶抑制剂；其中，该容器充作第一化合物进行化学反应的反应器，该化学反应可被酶所催化，该酶的催化能力可被该酶抑制剂所抑制，该化学反应的产物可与第二化合物反应以生成第三化合物，是可吸收具有特定波长的光，且该容器为该特定波长的光可穿透的材料所制成，其中该容器更包含上盖，该上盖更包含该第一化合物或该酶；及
光学比色仪，可容纳该容器，并透过该容器测量该水溶液于该特定波长的吸光度，且
其中所述第一化合物为乙酰硫代胆碱酯，所述酶为乙酰硫代胆碱酯酶，所述第二化合物为5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)。

附图说明

图1至图4分别显示本发明的各种示范模块。
图5显示美文松含量与其吸光度差的关系。
主要元件符号说明
11第一试片
12第二试片
13试片
21，22，23，24容器
30光学比色仪
31微处理器
32恒温槽
41第一上盖
42第二上盖
43上盖
51第一胶囊
52第二胶囊
S控制组溶液
B缓冲盐类

具体实施方式

如前述，本发明是利用一般农药具抑制酶活性的特性，提供一种简便的酶抑制剂定量分析方法，以分析样品中农药的含量。本发明所能分析的农药以具有酶抑制特性为主，包含但不仅限于有机磷、以溴水处理过的硫代有机磷、及氨基甲酸盐。
以下例示本发明所采用的试剂及其化学反应，应了解此仅是举例说明，而非用以限制本发明的范围：
第一化合物：乙酰硫代胆碱酯
(Acetylthiocholine，简称ACTC)。
酶：乙酰硫代胆碱酯酶(简称AChE)。
第二化合物：5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)(5，5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)，简称DTNB)。
ACTC经水解会产生乙酸盐(Acetate)及硫代胆碱(Thiocholine)。硫代胆碱会与DTNB反应形成5-硫-2-硝基苯甲酸酯(5-Thio-2-nitrobenzoate，简称TNBZ)，即为上述的第三化合物，其于可见光区412nm有一吸收尖峰。有关上述反应的原理可详见于Biochemical Pharmacology，1961，Vol.7，page88-95，在此纳入本发明供参考。
本发明是设计多功能的容器，供盛装待测溶液，待测溶液可含具有酶抑制剂成分的农药。此容器亦供上述各种试剂在其中进行混合反应，更可将此容器直接置入光学比色仪中以测量待测溶液的吸光度。应注意到此容器是有容量刻度的标示，以方便使用者控制待测溶液的体积。而且，容器的材质需至少能使测量用的特定波长(如412nm)的光穿透，待测溶液才可接收到此光，此材质通常为玻璃或透明塑胶，但不限于此。故应可了解本发明的容器除可用作反应器，更可直接置入光学比色仪中进行分析，免除已知需更换多种容器的不便。
兹详细说明本发明定量分析方法的步骤如下：
(a)提供第一化合物(如ACTC)；酶(如AChE)；及第二化合物(如DTNB)。
应注意本发明所使用的第一化合物、酶、及第二化合物均呈现干燥形式，且分别仅含单次分析剂量。例如使用不溶于水的基材，如塑胶试片，其上固定有单次分析剂量的试剂，使用时可简便地将基材直接插入待测溶液中，使固定其上的试剂溶解。基材上可同时固定指示剂，是可溶于水且有肉眼可辩识的颜色。当基材插入待测溶液中时，观察基材上的指示剂颜色是否完全除去，以判断试剂是否完全溶入待测溶液中。指示剂的使用与否，可视其他试剂性质的变化而定。例如，第二化合物DTNB本身即有颜色，而可兼具指示剂的功能，因而无需额外使用另一指示剂。
上述试剂除了固定在基材上外，也可固定在容器底部，或容器的上盖的内侧，上盖的内侧也可同时含有指示剂。或者，也可使用胶囊，以包装各种试剂。应注意酶与第一化合物在溶入水溶液前，宜相互分隔开较佳。
另外，宜注意本发明所用试剂并不仅限于上述几种，熟悉此项技艺者可视需要加入其他必要试剂，例如缓冲盐类，以调节水溶液的酸碱值。
(b)提供第一样品，具有已知含量的酶抑制剂，此种为控制组。宜注意此已知含量亦包含零。
(c)混合第一样品、酶、第一化合物、及第二化合物，以形成水溶液。其混合顺序是使第一化合物最后溶入水中较佳，然而宜注意本发明的范围并未限制其顺序。
(d)利用光学比色仪，于特定波长下(如412nm)，测量此水溶液于一固定时间内的吸光度差，定义为第一吸光度差(ΔAbs，控制)。可以多个浓度不同的控制组进行上述分析步骤，以取得酶抑制剂浓度与吸光度差的关系，其中亦包含酶抑制剂浓度为零的空白测试。测量结果的范例可参考图5所示：美文松农药含量与其吸光度差的关系图。
(c)提供第二样品，具未知含量的酶抑制剂，此称为测试组。宜注意此未知含量亦可能为零。
(f)以该第二样品取代该第一样品进行(a)至(c)的步骤，测量该水溶液于相同的固定时间内的吸光度差，定义为第二吸光度差(ΔAbs测试)。
(g)比较该第二吸光度差与该第一吸光度差，以计算该第二样品中该酶抑制剂的含量。举例而言，依据图5，可获得酶抑制剂浓度对吸光度差的函数，以微处理器处理ΔAbs测试与此函数的关系，即可获得第二样品所含酶抑制剂的浓度。或者，可利用上述空白测试所测得的吸光度差(ΔAbs空白)，直接与第二样品所测的吸光度差比较，即可计算出第二样品中所含酶抑制酶活性的程度，称为抑制百分比，计算式如下：
抑制百分比＝1-ΔAbs测试/ΔAbs空白)×100％
上述的计算皆可利用设置于光学比色仪中的微处理器自动处理。
藉由以下范例是详细说明本发明的方法与模块的操作，应了解本发明并不仅限于此等范例。
第一模块
如图1所示，取第一试片11(含约0.03mg的AChE与约0.132mg的DTNB)；取第二试片12(含约0.288mg的ACTC与约0.132mg的DTNB)，第一试片11与第二试片12均不含水。于室温中，依序将控制组溶液S置入容器21中，容器21的底部事先涂有适量的缓冲盐类B。接着，依次将第一试片11与第二试片12插入容器21中，待其上的试剂溶解后取出此等试片。继而将容器21置入携带式光学比色仪30中，测定以2分钟为间距的吸光度差(ΔAbs控制)。然后改用测试组溶液，重复上述步骤测得吸光度差(ΔAbs测试)。以携带式光学比色仪30的微处理器31自动计算测试组的浓度或抑制百分比，并将结果显示于荧幕上。
第二模块
如图2所示，提供容器22、及可用以覆盖容器22的第一上盖41与第二上盖42。容器22底部涂有约0.03mg的AChE与适量的缓冲盐类B，均不含水；第一上盖41内侧涂有约0.288mg的ACTC与约0.264mg的DTNB，均不含水。第二上盖42不含任何ACTC或BTNB。将控制组溶液S置入容器22中，以第二上盖42覆盖容器22并剧烈混合使容器22底部的试剂完全溶解，然后将容器22置于37℃恒温槽32中。到达设定温度后，取出容器22，除去第二上盖42，改以第一上盖41覆盖容器22并剧烈混合，使第一上盖41内侧的试剂完全溶解，然后将容器22置恒温槽32中恒温。到达设定温度后，测定以2分钟为间距的吸光度差(ΔAbs，control)。继而改用测试组溶液，重复上述步骤测得吸光度差(ΔAbs测试)。最后，以携带式光学比色仪30的微处理器31，自动计算测试组的浓度或抑制百分比，并将结果显示于荧幕上。
第三模块
如图3所示，提供容器23、可用以覆盖该容器的上盖43、及试片13。容器23底部涂有适量的缓冲盐类B，上盖43内侧涂有0.03mg的AChE与0.264mg的DTNB，试片13上涂有约0.288mg的ACTC。将控制组溶液S置入容器23中，以上盖43覆盖容器23并剧烈混合使其完全溶解。随后将试片13插入容器23中，待其上的试剂溶解后取出试片13。继而将容器23置入携带式光学比色仪30中，测定以2分钟为间距的吸光度差(ΔAbs，control)。最后改用测试组溶液，重复上述步骤测得吸光度差(ΔAbs测试)，并以携带式光学比色仪30的微处理器31自动计算测试组的浓度或抑制百分比，并将结果显示于荧幕上。
第四模块
如图4所示，取第一胶囊51(含约0.03mg的AChE、约0.264mg的DTNB与适当量的缓冲盐类B)及第二胶囊52(含约0.288mg的ACTC)，第一胶囊51与第二胶囊52均不含水。于室温中，依序将控制组溶液S置入容器24中，容器24的底部含有缓冲盐类B。接着，依次将第一胶囊51与第二胶囊52中的试剂倒入容器24中，待其溶解后，将容器24置入携带式光学比色仪30中，测定以2分钟为间距的吸光度差(ΔAbs，control)。最后改用测试组溶液，重复上述步骤测得吸光度差(ΔAbs测试)，并以携带式光学比色仪30的微处理器31自动计算测试组的浓度或抑制百分比，并将结果显示于荧幕上。