诊断拭子和活组织检查穿刺器,以及用在这些系统中的诊断帽

摘要

诊断测试设备，包括：具有第一末端和第二末端的杆状物(1)；安装在杆状物第一末端上的拭子(2)或活组织检查穿刺器；套在杆状物第一末端上的帽(3，4)，所述帽含有至少一种诊断测试试剂(16、22、23)；其中杆状物包括至少一个位于靠近第一末端的帽接合(6)元件，所述元件由拭子或活组织检查穿刺器向外放射状延伸，用来与帽接合以将帽保持在杆状物上。也提供了用于测试设备中的诊断帽，其具有较小的内部体积以及位于帽内部的吸收性塞内部或上面的至少一种诊断测试试剂。也提供了用于测试设备中的诊断帽，其具有从样品接收口延伸出来的凹槽，所述凹槽限定了样品的侧流路径。也提供了测试系统，包括根据发明的拭子杆状物、活组织检查穿刺器杆状物以及诊断帽，其中帽可在两种不同杆状物之间互换使用。

权利要求

1.诊断测试设备，包括：

具有第一末端和第二末端的杆状物；

安装在杆状物第一末端上的拭子或活组织检查穿刺器；和

套在杆状物第一末端上的帽，所述帽含有至少一种诊断测试试剂，其特征在于，杆状物包括至少一个靠近第一末端的帽接合元件，所述元件由拭子或活组织检查穿刺器向外放射状延伸，用来与帽接合以将帽保持在杆状物上，其中帽包括具有构造用于与杆状物上的帽接合元件接合的内表面的样品接收口、以及限定液体样品侧流路径的凹槽，侧流路径具有与样品接收口进行流体联通的入口端。

2.根据权利要求1的诊断测试设备，其中帽接合元件选自形成与帽的干涉配合的杆状物的锥形区、与帽内表面上的一个或更多互补突出部形成搭扣配合的搭扣配合突出部、以及与帽内表面上的一个或更多互补螺纹形成螺旋配合的螺纹突出部。

3.根据权利要求1的诊断测试设备，其中杆状物是中空的，由此流体可沿杆状物往下流以将生物样品从拭子或活组织检查穿刺器排出。

4.根据权利要求1的诊断测试设备，其中帽和杆状物上的互补配合元件适于提供帽和杆状物之间的不漏液的密封。

5.根据权利要求1的诊断测试设备，其中当帽固定在杆状物上时，拭子或活组织检查穿刺器与吸收性材料接触，该材料能够将流体从拭子或活组织检查穿刺器中吸到一种或多种诊断试剂中。

6.根据权利要求1的诊断测试设备，其中拭子被连接在杆状物第一末端上并且帽的样品接收口形成特定尺寸，以便在帽固定到杆状物上时，拭子被帽压缩而将流体从拭子中挤压出来。

7.根据权利要求1的诊断测试设备，其中将活组织检查穿刺器连接到杆状物的第一末端，帽进一步包括内部突出部，其适于在穿刺器固定在帽上时将活组织检查穿刺器中的组织样品压碎或浸渍。

8.根据权利要求1的诊断测试设备，其中帽是至少部分透明的，或者帽包括一个或多个窗孔在其中，以允许可视化观察帽内部的诊断指示剂。

9.根据权利要求1到8任一项的诊断测试设备，其中帽包括杯状的帽体、位于帽体内部的吸收性塞、以及位于吸收性塞内部或周围的至少一种诊断测试试剂。

10.根据权利要求9的诊断测试设备，其中至少一种诊断测试试剂被提供在环状诊断条中或其上面，该诊断条在帽体内部的周围圆周状延伸。

11.根据权利要求9的诊断测试设备，其中至少一种诊断测试试剂被提供在诊断片中或其上面，该诊断片延伸横过帽体内部。

3

12.根据权利要求9的诊断测试设备，其中吸收性塞具有10到1000mm 的未压缩体积。

3

13.根据权利要求12的诊断测试设备，其中未压缩体积为50到300mm。

14.根据权利要求1的诊断测试设备，其中凹槽进一步包括用于帽的基底，由此可将帽固定在所述基底上，所述基底在水平面上，帽具有向上方开口的样品接收口来接受杆状物。

15.根据权利要求14的诊断测试设备，其中凹槽具有平坦的下表面来形成所述凹槽的基底，样品接收口从与所述平坦的下表面相对的凹槽上表面向上开口。

16.根据权利要求14的诊断测试设备，其中侧流路径在与样品接收口的轴垂直的平面中延伸。

17.根据权利要求14的诊断测试设备，其中凹槽包括多个侧流路径来检测多个不同的分析物。

18.根据权利要求17的诊断测试设备，其中多个侧流路径以放射状间隔围绕样品接收口。

19.根据权利要求18的诊断测试设备，其中多个侧流路径位于垂直于样品接收口的轴的平面中。

20.根据权利要求1的诊断测试设备，包括两个所述杆状物，其是第一杆状物和第二杆状物，其中所述第一杆状物具有连接在其上的拭子，所述第二杆状物具有连接在其上的活组织检查穿刺器，其中帽可互换地固定在第一杆状物和第二杆状物上。

说明书

诊断拭子和活组织检查穿刺器，以及用在这些系统中的诊

断帽

发明领域

[0001] 本发明涉及诊断拭子和活组织检查穿刺器系统，以及用在这些系统中的诊断帽。

[0002] 发明的技术背景

[0003] 吸收性拭子是医学领域中公知的，用于收集患者的流体标本用于进一步分析。医学用拭子一般包括在伸长的条状物或杆状物的一端的纤维拭子尖端，手动操作之以使拭子尖端与患者所选部位接触，例如伤口表面。结果，包括细胞物质在内的一些组织流体就粘附到拭子尖端上，然后可将其与一种或多种所选试剂接触以指示与患者健康状况相关的感染或者其它信息的存在。用拭子标本进行的测试一般包括荧光测试、酶学测试、基于单克隆抗体的测试以及凝集测试。

[0004] 有时候还可以通过分析活组织检查样品而获得更高的诊断精确性。典型地，活组织检查样品的取得可通过圆柱状的、位于伸长的条状物或杆状物一端的锐利的活组织穿刺器，手动将其穿刺入感兴趣的组织。然后将穿刺样品均质化并用合适试剂分析以获得诊断。

[0005] 根据标准技术，通常将采集的生物学标本(拭子或活组织切片)从拭子尖端或活组织穿刺器上转移到载片或其它实验室设备诸如试管或类似物上与所选试剂接触并进一步分析。然而，很难确保从拭子尖端转移了足够的标本量到实验载片或试管中以确保精确的测试结果。在转移过程中偶尔可能发生样品的污染，标本采集和实际测试进行的时间之间的延迟也可能导致测试可靠性的降低。需要单独的分析步骤也增加了诊断程序的总成本。

[0006] US-A-5266266描述了在适于采集目标标本的拭子尖端和突出到试剂溶液蓄池中的中断嘴之间具有延伸的中空拭子杆状物的诊断拭子。在拭子尖端上采样之后，对蓄池实施变形而将尖嘴从拭子上切下以打开拭子杆状物的后端并使得试剂从试剂室通过拭子杆状物流到拭子尖端。拭子被完全封入具有帽的室中，在其中可以提供另外的试剂，诸如处理过的珠子，用于与拭子尖端的流出液反应。这种拭子配置需要相当大量的热塑性成型材料用于它的构造，需要相当大量的试剂溶液以良好运转，由于对拭子样品的稀释而导致了增加的成本和灵敏度的丧失。

[0007] US-A-6248294描述了独立的诊断拭子配置，包括常规的拭子和诊断凹槽以在采样后接受和容纳拭子。诊断凹槽包括试剂液体的蓄池，诊断测试条延伸出凹槽的一侧。这种诊断拭子设备需要相当大量的热塑性成型材料用于它的构造，需要过量的试剂溶液以良好运转。

[0008] 发明概述

[0009] 在第一方面，本发明提供了诊断测试设备，包括：具有第一末端和第二末端的杆状物；安装在杆状物第一末端上的拭子或活组织检查穿刺器；套在杆状物第一末端上的帽，所述帽含有至少一种诊断测试试剂；其中杆状物包括至少一个靠近第一末端的帽接合元件，所述元件由拭子或活组织检查穿刺器向外放射状延伸，用来与帽接合以将帽保持在杆状物上。

[0010] 以这种方式适应于使帽安装在第一末端附近的杆状物的使用使得能够在设备上使用小的诊断帽。这样就提供了材料使用的节约。

[0011] 在第二方面，本发明提供了诊断帽，包括基本上为杯状的帽体、位于帽体内部的吸收性塞、以及位于吸收性塞内部或周围的至少一种诊断测试试剂。

[0012] 非常紧凑的诊断测量和显示配置可安装在这种小帽的内部，从而最小化设备的整体大小、试剂使用以及样品稀释，这将在下面的讨论中变得清楚。

[0013] 在第三方面，本发明提供了用于诊断设备中的诊断帽，其中帽包括具有适合于与杆状物上的帽接合元件接合的内表面的样品接收口、以及限定液体样品侧流路径的凹槽，侧流路径具有与样品接收口进行流体联通的入口端。

[0014] 在第四方面，本发明提供了诊断测试系统，包括根据本发明的拭子杆状物、活组织检查穿刺器杆状物以及诊断帽，其中帽在两种不同杆状物之间可互换地使用。

[0015] 发明详述

[0016] 拭子/活组织检查穿刺器以及杆状物

[0017] 杆状物上配合帽的帽接合元件典型地位于离拭子或活组织检查穿刺器的基底(尖端)1mm到大约30mm处。这与所述相对紧凑的诊断帽的使用是一致的。

[0018] 杆状物上配合帽的帽接合元件可以是形成与帽的干涉配合的杆状物的锥形区，例如它可以作为与杆状物同轴的截锥出现并朝向杆状物的第一末端逐渐变细。或者整个杆状物可以具有比拭子或活组织检查穿刺器更大的直径，在邻近第一末端处带有锥形区。无论如何，锥形区在它与帽接合部位的直径要比拭子或活组织检查穿刺器的直径更大，以便帽可被套在拭子或活组织检查穿刺器上。

[0019] 在其它实施方案中，帽接合元件可以包括搭扣配合的突出部，与帽内表面上的一个或更多互补突出部形成搭扣配合，或者包括螺纹突出部，与帽内表面上的一个或更多互补螺纹形成螺旋配合。诸如卡扣螺纹(bayonet threads)或路厄氏锁(Luer lock)这样的快速配合螺纹特别适合用作帽和杆状物上的接合元件。

[0020] 拭子可以是任何吸收性拭子，例如无纺纤维拭子。典型地，拭子的直径是大约2到大约5mm，例如大约3mm。在某些实施方案中，拭子可以由医学上可接受的开孔泡沫形成，例如聚氨酯泡沫，因为这些泡沫具有高吸收性并能够容易地挤压排出吸收的流体。活组织检查穿刺器典型地是不锈钢的圆柱穿刺器，直径大约1mm到大约10mm，例如大约3mm到大约8mm，合适地大约6mm。

[0021] 在某些实施方案中杆状物是中空的，由此流体可从第二末端往下流以将拭子或活组织检查穿刺器中的生物样品排出到帽中进行诊断分析。杆状物可在第二末端包括配件来连接注射器或其它流体源。在某些实施方案中，设备可包括连接在杆状物第二末端上的液体蓄池，例如含有液体的可压缩球，在使用拭子或活组织检查穿刺器后可将其激活。这种类型的合适设备描述在例如US-A-5266266中，将其全部内容通过引用包括在这里。在其它实施方案中，设备可包括活塞，可从杆状物的中空孔往下推动它以将拭子或活组织检查穿刺器上的流体或其它标本排出。

[0022] 中空杆状物的另一优点在于，当设备是活组织检查穿刺器时，活组织检查样品可更容易地从穿刺器推出或吹出。活组织检查穿刺器设备可进一步包括均质化工具，它能够通过中空杆状物往下以均质化活组织检查穿刺器中的组织样品。该均质化步骤之后，如果必要的话，可接着将液体从第二末端通过杆状物往下以将均质化的组织从活组织检查穿刺器排出到帽中进行诊断分析。

[0023] 帽结构-通用

[0024] 根据本发明各个方面的诊断帽包括并可基本上由通常为杯状的帽体部分(样品接收口)组成，也就是说在一端开口的短管，用于接收拭子或活组织检查穿刺器。

[0025] 合适地，帽体部分(样品接收口)具有大约1cm到大约4cm的长度(当帽固定在杆状物上时沿杆状物的轴测定)，例如大约15mm到大约25mm。合适地，帽体部分(样品接收口)具有大约1mm到大约10mm的内径，例如大约2mm到大约6mm。此外当帽固定在杆状3 3
物上时，它(以及样品接收口)的内部体积是很小的，合适地为大约10mm 到大约1000mm，
3 3
例如大约50mm 到300mm。这种小体积使得诊断测试能够在小的样品，例如通过典型的拭子或活组织检查穿刺器采集的很少或不稀释的样品上实施。

[0026] 帽体的内表面优选配备帽配合元件来将帽固定到杆状物上。这些元件可包括搭扣配合的突出部，与杆状物外表面上的一个或更多互补突出部形成搭扣配合，或者包括螺纹突出部，与杆状物外表面上的一个或更多互补螺纹形成螺旋配合。诸如卡扣螺纹(bayonet threads)或路厄氏锁(Luer lock)这样的快速配合螺纹元件特别适合用作帽和杆状物上的接合元件。帽和杆状物上的互补配合元件优选适于提供帽和杆状物之间的基本上不漏液的密封。这确保了液体样品从帽的样品接收口漏出是通过流过帽到出口而发生的，出口是一种或多种诊断测试材料的下游。

[0027] 锥形突出部可帽体基底向上延伸到帽的开口，拭子或活组织检查穿刺器被插入该开口。在某些实施方案中，锥形突出部可具有锐利的、磨蚀的或者锯齿状的表面用于浸渍插入帽中的活组织检查穿刺器中的组织样品。

[0028] 合适地，帽至少是部分透明的。这样使得能够不移去帽就能通过帽观察可见的诊断指示剂。在一些实施方案中，帽至少是部分透紫外光的，例如具有300-350纳米波长的光。在这些或其它实施方案中，可以在帽中有窗孔来允许观察帽内部的诊断指示剂。

[0029] 帽含有紧凑的诊断测试设备，其能够安装在上文描述的小帽内部，并能够用于分析一种或多种诊断指示剂，特别是具有小体积的样品中的指示剂。

[0030] 在根据发明第二方面的实施方案中，帽包含至少一种诊断测试试剂，提供在位于3
帽体内部的吸收性塞内部或周围。合适地，吸收性塞具有大约10到大约1000mm 的未压缩
3
体积，例如大约50到大约300mm。吸收性塞有效的将分析溶液吸到帽体中的诊断指示剂上。

[0031] 例如，在根据发明第二方面的一些实施方案中，至少一种诊断测试试剂被提供在环状诊断条中或其上面，在围绕帽体内部的至少部分方向延伸，优选在围绕帽体内部的全部方向。条带可以被分割为多个适于检测不同诊断指示剂的区域，这样这些区域在帽体内部的周围放射状隔开。条带可以被缠绕在位于帽体内部的吸收性塞的周围，这样吸收性塞就将测试中的流体吸到条带上。已经发现特别适合于这种吸取类型的塞是通过圆柱状的一束亲水纤维提供的，诸如亲水的聚酯纤维。

[0032] 在根据发明第二方面的其它实施方案中，至少一种诊断测试试剂被提供在诊断片中或其上面，片延伸横过帽体内部。当通过帽体侧壁观察，片边缘则似乎象环。这些片的叠层可组成帽体内部的塞，叠层中不同的片可适合于指示不同生物标志的存在。优选地，片是由诸如滤纸的吸收性材料组成的，以便将流体样品从拭子或活组织检查穿刺器中汲取出来。

[0033] 在上述实施方案中，诊断帽体本身(即样品接收口)可具有放射状和/或轴向隔开的对应于帽内部诊断材料的不同区域或层的标记。

[0034] 在根据发明第二方面的上述实施方案中，可以在帽体的基底配备通风空。这有助于生物样品从拭子或活组织检查穿刺器平稳流动到帽体中用于诊断测试。

[0035] 在根据发明第二方面的某些实施方案中，诊断帽基本上由杯状的帽体组件组成。这些实施方案在材料和样品使用方面是特别简单和节约的。

[0036] 优选地，根据发明第二方面的诊断帽适合用在根据方面第一方面的设备中。

[0037] 侧流

[0038] 在根据本发明第三方面的诊断帽实施方案中，帽合适地包括具有适合于与杆状物上的帽接合元件接合的内表面的样品接收口、以及限定液体样品流体流动路径的凹槽，流体流动路径具有与样品接收口进行流体联通的入口端。

[0039] 样品接收口的大小、形状和配置优选如上文相关的发明其它方面所述。在根据发明的这一方面以及其它方面的实施方案中，凹槽优选进一步包括帽基底，由此可将帽固定在水平面上的所述基底上，所述帽具有向上方开口的样品接收口来接受杆状物。优选地，样品接收口的轴是垂直或接近垂直的(例如大约30°的垂直之内)，无论如何基底和口都要配置成使得拭子和活组织检查穿刺器在固定在样品接收口中时能够保持向上。这是有利的，因为它使得样品能够在重力影响下从拭子或活组织检查穿刺器中排到诊断设备中，简单地通过将设备放置在帽基底上就行。

[0040] 合适地，凹槽具有基本上平坦的下表面来形成凹槽基底，样品接收口从与所述平坦的下表面相对的凹槽上表面向上开口。例如，基底可以是基本上层状的结构，样品接收口由此向上突出，优选从其中部区域突出以在样品接收口接受拭子杆状物时提供最大的稳定性。

[0041] 接下来，流体流动路径优选基本上在与样品接收口的轴基本上垂直的平面中延伸。术语“基本上垂直”一般表示具有样品接收口的轴大约30°之内的正轴的平面。这使得流动路径的侧壁能够形成如上所述的与样品接收口的轴垂直的凹槽基底的至少一部分。

[0042] 分析设备的流体流动路径将典型地能够支持水性液体的侧流。“侧流”意指液体流动侧向通过载体，其中所有溶解的或分散的组分都被携带，优选以基本上相等的速度并相对无损的流动。合适地，流体流动路径含有一种或多种多孔载体材料。多孔载体材料优选沿基本上整个流体流动路径进行流体联通以便帮助流体沿路径经毛细作用传送。合适地，多孔载体材料是亲水的，但是优选地它们本身不吸水。多孔载体材料可作为固体基质起作用，用于附着反应区的试剂部分和/或检测区的检测器部分。

[0043] 用于形成多孔载体材料的合适材料包括任何合适的天然或合成聚合物，包括不溶的多糖诸如纤维素、合成聚合物诸如聚丙烯酸酯、高密度多孔聚乙烯片材料、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙酸乙烯酯和氯乙烯的共聚物、聚酰胺、聚碳酸酯、尼龙、玻璃纤维、奥纶、聚酯、聚苯乙烯、以及它们的混合物和组合。合适的材料是POREX(注册商标)侧流膜，获自Porex Technologies Corp.，Fairburn Georgia，USA。合适地，载体材料包括附属的胺、酯或羧酸酯基团以辅助缀合。

[0044] 诊断帽可在流体路径中包括反应区，包括与伤口的流体中的分析物反应以释放指示剂部分的试剂部分；以及位于流体流动路径中反应区下游的检测区的检测器部分，其中检测器部分能够与指示剂部分相互作用以产生检测区中可检测的变化。试剂部分和/或检测器部分可以至少在最初被结合在合适的固体载体材料上并因此被固定。

[0045] 载体的大小和形状不是关键的，可以变化。载体限定了侧流路径。合适地，多孔载体是一根或多根拉长的条或柱的形式。在某些实施方案中，多孔载体是片材料的一根或多根拉长的条的形式，或者多个片结合组成的拉长的条的形式。反应区和检测区则通常会沿条带长轴分隔开。然而，在一些实施方案中，多孔载体可以是例如其它的片形式，诸如圆盘状。在这些情况下，反应区和检测区通常会集中排列在片中心周围，样品施加区在片中心。在另外的其它实施方案中，载体成形为载体珠，例如由任何上述材料制成的珠。珠可以合适地具有大约1微米到大约1mm的大小。珠可以被包裹在凹槽内部的流动路径中，或者可以被捕获或支持在合适的多孔基质上诸如玻璃纤维垫上。

[0046] 通常，流体流动路径进一步包括反应区上游的样品施加区，其与帽体内部进行流体联通。将设备配置成这样，在使用时，流体样品从样品施加区侧流到反应区然后流到检测区。

[0047] 将会理解到的是，根据本发明的设备可适合于检测一种以上分析物。这可以通过在单一反应区中使用几种不同试剂部分来实现，或者优选通过在单一设备中配备多个侧流路径，每个都具有在其各自反应区中的不同试剂部分来检测不同分析物，例如多个侧流路径可放射状分布在帽体周围。在一些实施方案中，多个侧流路径通过凹槽物理分开。在其它实施方案中，多个侧流路径(通道)可通过在通道之间沉积多行蜡或类似的疏水材料而被限定在单一的侧流膜中。

[0048] 合适地，多种侧流路径被限定为凹槽中分开的流体流动路径，优选地多个侧流路径放射状间隔在样品接收口周围的平面中，该平面基本上垂直于样品接收口的轴。多种放射状间隔的流动路径的凹槽能够随后提供放射状延伸在样品接收口周围的稳定基底。

[0049] 凹槽通常是由热塑性材料制成的，优选至少部分凹槽与帽体铸成一个整体。合适的材料包括聚乙烯、聚丙烯、聚丙烯酸酯、聚酰胺或聚苯乙烯。合适地，凹槽是通过将两种塑料部件组合分别形成凹槽的顶部和底部而制成的。用于制造凹槽部件的合适方法包括注射成型和立体平板印刷。合适地，凹槽是至少部分透明的。这样就能够通过凹槽观察到可见的诊断指示剂。在一些实施方案中，凹槽至少部分地透紫外光，例如具有300-350纳米波长的光。在一些实施方案中，凹槽包括用来观察检测区的小窗。

[0050] 优选地，根据发明第三方面的诊断帽适合用在根据发明第一方面的诊断设备中。

[0051] 在所有上述实施方案中，当帽固定在杆状物上时，拭子或活组织检查穿刺器优选与吸收性材料接触，该材料能够将流体从拭子或活组织检查穿刺器中吸到一种或多种诊断试剂中。这样就最小程度减少了稀释液体以将样品从拭子或活组织检查穿刺器上冲洗到诊断材料中的需求，这种需求是上文所述的现有技术中所需要的。在某些实施方案中，诊断帽被成形并配置为在帽固定到杆状物上时压缩拭子，这样就将液体样品从拭子中挤压出来并进入诊断材料中。这个实施方案在拭子包括开孔泡沫材料时是特别适合的。

[0052] 合适地，可给帽配备滤器，当帽固定在杆状物上使用时，滤器位于拭子或活组织检查穿刺器与诊断材料之间。滤器可以是任何适于将固体碎片与要传到诊断材料去的分析物溶液分离开的纸或微孔膜。

[0053] 合适地，可给帽配备满量指示剂。也就是说，当诊断材料均被分析溶液润湿时进行指示的工具。例如，满量指示剂可以是帽基底中或者侧流路径远端的一片滤纸，其已被处理过以在被分析物溶液润湿时改变颜色。

[0054] 诊断化学

[0055] 帽中的至少部分诊断材料优选在一种或多种分析物存在下经历颜色变化(术语颜色变化包括化学发光和/或在UV光下的外外变化)，优选地这种颜色变化通过帽侧壁是可见的。

[0056] 可通过根据本发明的诊断帽进行检测的分析物包括但不限于pH、氧化还原电势、3+
自由基活性、活性氧、Fe ；诸如下文更详细论述的那些蛋白酶；其它酶，诸如溶菌酶、酸性水解酶、乳酸脱氢酶、糖苷酶、组织蛋白酶B、L、D、G、纤溶酶、以及纤溶酶原激活物；伤口感染指示剂，诸如脂多糖，特别是磷脂酶A蛋白，或者外膜蛋白，诸如omp T；蛋白酶抑制剂，诸如TIMPs、PAIs、α1抗胰蛋白酶、巨球蛋白；细胞因子，诸如TNFα；白介素，诸如IL-1、IL-6、IL-10；生长因子，包括GM-CSF、VEGF、PDGF、TGF-β、IGF；可溶性生长因子受体；细胞因子拮抗剂；可溶性VEGF受体IL-1受体拮抗剂；基质成分或其片段，诸如包括透明质酸的糖胺聚糖、胶原蛋白、纤连蛋白片段、血纤蛋白(ogen)片段；细胞表面受体(特别用于组织活组织检查)，诸如CD44、整联蛋白、PDGF-受体、纤溶酶原/u PA受体；以及趋化分子，包括白三烯B4、C5A、以及甲酰化肽。

[0057] 分析物可以是酶。例如，酶可以选自源自哺乳动物宿主的酶以及微生物酶。术语“源自哺乳动物宿主的酶”指的是在哺乳动物伤口的流体中发现的内源酶。术语“微生物酶”包括由微生物分泌的、或者在诸如细菌或真菌的微生物细胞表面表达的蛋白酶。术语“蛋白酶”指的是特异性或非特异性裂解肽、多肽或蛋白质的酶。

[0058] 可被本发明的设备和系统检测的内源性的(即源自宿主的)蛋白酶合适地选自基质金属蛋白酶(MMP′s)、弹性蛋白酶、溶基质素、激肽释放酶以及凝血酶。合适地，内源蛋白酶选自嗜中性白细胞蛋白酶和巨噬细胞蛋白酶。优选的蛋白酶包括胶原酶(例如MMP-1和MMP-8)、明胶酶(例如MMP-9)和嗜中性白细胞弹性蛋白酶、MMP-2、MMP-12、蛋白酶3、纤溶酶、低分子量明胶酶以及潜在的或活性的弹性蛋白酶、白介素转化酶以及肿瘤坏死因子(TNFα)转化酶。

[0059] 可由本发明检测到的病原性细菌的例子包括但不限于葡萄球菌(例如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌或者腐生葡萄球菌)、链球菌(例如酿脓链球菌、肺炎链球菌或者无乳链球菌)、肠球菌(例如粪肠球菌或者屎肠球菌)、棒状杆菌种(例如白喉棒状杆菌)、芽孢杆菌(例如炭疽杆菌)、利斯特氏菌(例如单核细胞增生性利斯特氏菌)、梭状芽孢杆菌种(例如产气荚膜梭菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌、艰难梭菌)、奈瑟氏球菌种(例如脑膜炎奈瑟氏球菌或者淋病奈瑟氏球菌)、大肠杆菌、志贺氏杆菌种、沙门氏菌种、耶尔森氏菌种(例如鼠疫耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌或者小肠结肠炎耶尔森氏菌、霍乱弧菌、弯曲杆菌种(例如空肠弯曲杆菌或者胚胎弯曲杆菌)、幽门螺杆菌、假单胞菌(例如绿脓杆菌或者Pseudomonas mallei)、消化链球菌(例如大消化链球菌)、脆弱拟杆菌、流感嗜血杆菌、百日咳博德特氏菌、肺炎支原体、解脲支原体、嗜肺军团菌、苍白密螺旋体、问号钩端螺旋体、Borrelia burgdorferi、分枝杆菌(例如结核分枝杆菌)、麻风分枝杆菌、放线菌属类、诺卡氏菌属类、衣原体(例如鹦鹉热衣原体、沙眼衣原体或者肺炎衣原体)、立克次氏体(例如立氏立克次氏体、普氏立克次氏体或者小蛛立克次氏体)、布鲁氏菌(例如流产布鲁氏菌、羊布鲁氏菌或者猪布鲁氏菌)、奇异变形菌、粘质沙雷氏菌、阴沟肠杆菌、Acetinobacter anitratus、肺炎克雷伯氏杆菌以及土拉热弗朗西丝氏菌。

[0060] 在某些实施方案中，微生物酶分析物包括选自绿脓杆菌、粪肠球菌、大肠杆菌、酿脓链球菌以及金黄色葡萄球菌的细菌酶的细菌蛋白酶。这些酶是物种特异性的，有时候检测到的实际酶标志是未知的。

[0061] 在合适的实施方案中，本发明设备中的诊断材料包括pH指示剂或者氧化还原指示剂。低pH和高氧化应激都是感染的或慢性的伤口的特征。结合到固体基质上的比色pH指示剂诸如通用试纸是本领域公知的。氧化还原指示剂包括在活性氧物质诸如超氧化物或羟基存在下经历颜色变化的物质。一种这样的指示剂分子是二苯基苦基偕腙肼，它在自由基存在下经历紫色到无色的颜色变化。

[0062] 在合适的实施方案中，本发明的设备中的诊断材料含有一种或多种免疫结合配偶体来结合样品中存在的一种或多种分析物分子。免疫结合配偶体可以例如包括单克隆或多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体。可替代地，当样品中预定抗体的存在被定位时，免疫结合配偶体可包括抗原。优选地，免疫结合配偶体包括单克隆抗体。优选地，免疫结合配偶体或其它结合配偶体被固定在固体载体材料上，例如通过抗生物素蛋白-生物素连接，或者支持物(载体)材料的二醛衍生化，接着通过交联到肽结合配偶体上。其它的免疫结合配偶体和/或试剂或指示剂分子可存在于溶液中，任选地用于将样品从拭子或活组织检查穿刺器中排出，如上文所描述的。

[0063] 固体支持物材料免疫结合配偶体或其它结合配偶体可用于一系列的免疫分析中来定位生物活性分子的存在。例如，结合有抗体或抗体片段的支持物可用于夹心式免疫分析类型的定位。可替代地，支持物可具有结合到抗体上的类似物配体，由此可通过亲和替代免疫分析来检测伤口流体中存在的分子。其它的各种免疫分析对本领域技术人员来说将是显而易见的。

[0064] 在例如WO95/04280中描述了侧流免疫分析设备，通过引用将其全部内容引入这里。

[0065] 如同已经提到的那样，感兴趣的分析物可包括能够通过裂解修饰底物，例如蛋白质或者多肽的酶。可以检测这样的肽底物修饰来确定样品中分析物的存在或缺乏。因此，在适合的实施方案中，本发明设备中的诊断材料包括用于样品中存在的酶分析物的化学发光底物、生色底物或产生荧光的底物。

[0066] 一种通过酶检测底物修饰的方法是用两种不同染料标记底物，其中当染料分子紧密靠近的时候，一种染料是通过荧光共振能量转移(FRET)来淬灭另一种染料的荧光。共振能量转移的典型受体和供体对由4-[[-(二甲基氨基)苯基]偶氮]苯甲酸(DABCYL)和5-[(2-氨基乙基氨基)]萘磺酸(EDANS)。EDANS用336纳米的光照射激发，然后发出波长
490纳米的光子。如果DABCYL部分位于EDANS的2纳米范围内，该光子将被有效地吸收。
DABCYL和EDANS可被连接在用于本发明系统中的诊断材料中的肽的相对的末端。如果肽是完整的，FRET将是非常有效的。如果肽被酶分析物裂解，两种染料将不再紧密靠近，则FRET将失效。裂解反应后可接着观察到DABCYL荧光的减少或者EDANS荧光的增加(淬灭的消失)。

[0067] 另一种适合的诊断材料包括生色染料，其通过适合的可裂解底物部分，例如肽，缀合到固体支持物上。当连接基团被感兴趣的分析物裂解时，生色染料将改变颜色。例如，对硝基苯基当连接到支持物上时是无色的，而当裂解后变成了黄色。分析物的浓度可通过在415纳米下测定吸光度来确定。在裂解时产生可检测的颜色变化的其它染料对本领域技术人员来说是已知的。

[0068] 在另一实施方案中，诊断材料可包括具有通过连接部分缀合到其上的不同颜色分子的有色支持物，该连接部分能被分析物，例如样品中的酶裂解。来自有色支持物的染料裂解因而将产生诊断材料的颜色变化。

[0069] 用于酶活性和免疫分析的上述鉴别分析的固体支持物材料可包括上面论述的任何合适的固体材料。其中存在的可裂解的交联一般包括可裂解的寡肽序列或可裂解的寡糖，典型地每个有20个残基或者更少，例如从3到15个残基。

[0070] 诊断材料的灵敏度将取决于许多因素，包括可裂解连接序列的长度。通过适当的间隔区将可裂解的寡肽序列连接到聚合物上，这样也可减少空间位阻。因此，寡肽序列可以直接连接聚合物(在这种情况下交联链由寡肽序列组成)或借助适当的间隔基。在US-A-5770229中描述了插入间隔区的合适缀合方法。

[0071] 下面的论文对用于药物化学中的生物缀合技术给出了有用的综述：Veronese，F.M.and Morpurgo，M(1999)Bioconjugation inPharmaceutical chemistry 11 Farmaco，54，497-516和Ulbrich，K，et al(2000)Journal of controlled release 64，63-79。这些论文的完整内容通过引用引入这里。

[0072] 本发明特别适合检测生物样品中广泛的各种酶。典型地，如此选择酶，以便伤口流体中的酶水平升高是与疼痛、伤口感染或者慢性创伤相关的。通常，酶是蛋白酶，连接基团包括用作蛋白酶底物的寡肽序列。

[0073] 在某些实施方案中，要检测的蛋白酶可包括弹性蛋白酶。在一些范围的伤口愈合障碍，包括伤口感染和慢性创伤中，弹性蛋白酶水平提高。在这些实施方案中，适合的底物连接物可包括寡肽序列lys-gly-ala-ala-ala-lys-Ala-Ala-Ala-、Ala-Ala-Pro-Val、Ala-Ala-Pro-Leu、Ala-Ala-Pro-Phe、Ala-Ala-Pro-Ala或Ala-Tyr-Leu-Val中的一种或多种。

[0074] 在某些实施方案中，要检测的蛋白酶可包括基质金属蛋白酶，特别是MMP-2或MMP-9。这些基质金属蛋白酶在慢性创伤，例如静脉溃疡、糖尿病性溃疡和压迫性创伤中增加。在这些实施方案中，可裂解的连接物可包括寡肽序列-Gly-Pro-Y-Gly-Pro-Z-、-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-Z-、-Gly-Pro-Ile-Gly-Pro-Z-或-Ala-Pro-Gly-Leu-Z-，其中Y和Z是氨基酸。

[0075] 在某些实施方案中，要检测的蛋白酶可包括胶原酶。胶原酶在慢性创伤，例如静脉溃疡、糖尿病性溃疡和压迫性创伤中增加。在这些实施方案中，可裂解的连接物可包括寡肽序列-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg-Z-、-ProLeu-Gly-Leu-Leu-Gly-Z-、-Pro-Gln-Gly-Ile-Ala-Gly-Trp-、-Pro-Leu-Gly-Cys(Me)-His-、-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-、-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg-或-Pro-Leu-Ala-Tyr-Trp-Ala-Arg-，其中Z是氨基酸。

[0076] 在某些实施方案中，要检测的蛋白酶可包括明胶酶。明胶酶在慢性创伤，例如静脉溃疡、糖尿病性溃疡和压迫性创伤中增加。在这些实施方案中，可裂解的连接物可包括寡肽序列-Pro-LeuGly-Met-Trp-Ser-Arg-。

[0077] 在某些实施方案中，要检测的蛋白酶可包括凝血酶。在这些实施方案中，可裂解的连接物可包括寡肽序列-Gly-Arg-Gly-Asp-、-Gly-Gly-Arg-、-Gly-Arg-Gly-Asp-Asn-Pro-、-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-、-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys-、-Gly-Pro-Arg-、-Val-Pro-Arg-或-Phe-Val-Arg-。

[0078] 在某些实施方案中，要检测的蛋白酶可包括溶基质素。在这些实施方案中，可裂解的连接物可包括寡肽序列-Pro-TyrAla-Tyr-Trp-Met-Arg-。

[0079] 在某些实施方案中，要检测的蛋白酶可包括激肽释放酶。术语“激肽释放酶”是指所有这样的丝氨酸蛋白酶，其激活与激肽原降解形成激肽相关，激肽与疼痛发作相关。用于激肽释放酶可裂解的底物的合适的肽序列包括-Phe-Arg-Ser-Ser-Arg-Gln-或-Met-Ile-Ser-Leu-Met-Lys-Arg-Pro-Gln-，其可被激肽释放酶在Lys-Arg或Arg-Ser键处降解。

[0080] 除了蛋白酶，也可以设想到酶可以是例如抗菌几丁质酶或壳聚糖酶，如溶菌酶(在感染伤口处增加)，在这种情况下，酶的底物将是多糖或寡糖，包括D-葡萄糖胺或N-乙酰D-葡萄糖胺残基。

[0081] 使用各种技术来确定检测特定微生物蛋白酶的肽连接物，包括酶的天然底物和经验性筛选的参考文献。鉴别细菌酶和肽底物的方法为此描述于WO03/063693、US-A-2003/0096315和WO2004/047614中，通过引用将其完整内容引入这里。适合的肽连接物包括下面的序列：

[0082] 序列1：ETKVEENEAIQK

[0083] 序列2：VTLENTALARC

[0084] 序列3：QADALHDQASALKC

[0085] 序列4：KVSRRRRRGGDKVSRRRRRGGD

[0086] 上面的序列1和2是特异于葡萄球菌的，序列3是特异于假单胞菌的，序列4是特异于大肠杆菌的。

[0087] 在一些实施方案中，肽是与此处所列序列之一具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列，使用此处描述的序列比较程序和参数来确定。

[0088] 在侧流实施方案中，指示剂部分可包括指示酶，然后检测区优选含有在指示酶存在下经历可见变化的试剂。例如，指示酶可以是氧化还原酶。适合的指示酶包括漆酶(CotA)、绿色荧光蛋白(GFP)、荧光素酶、碱性磷酸酶(ALP)、p-半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶，特别是辣根过氧化物酶(HRP)。

[0089] 检测区的检测剂部分优选在一种或多种指示剂部分存在下经历颜色变化(术语颜色变化包括化学发光和/或在紫外光下的外观变化)，优选地该颜色变化通过窗口或凹槽侧壁是可见的。在本发明的这些和其它实施案例中，颜色变化可以被可视化评估(例如通过用色键比较)或由光学检测设备评估，例如反射分析器、视频图像分析器以及类似设备。因此，目标分析物的水平可由本发明的设备来确定。

[0090] 合适地，指示剂部分是氧化还原酶，在这些实施方案中，检测区的试剂则可以是氧化还原指示剂。例如指示剂部分是HRP时，指示剂部分可包括4-氯-1-萘酚，其在HRP和过氧化氢存在下经历从无色到蓝色的颜色变化。也可能可以使用其它HRP底物。这些底物将包括TBM(3，3，5，5-四甲联苯胺)、DAB(3，3-二氨基联苯胺)、带有金属增强剂例如钴和镍的DAB、AEC(3-氨基-9-乙基咔唑)，或者这些底物的组合。

[0091] 当指示剂部分包括碱性磷酸酶时，则检测剂部分可包括BCIP/NBT或对硝基苯基磷酸酯。当指示剂部分包括CotA时，检测剂部分可包括萘酚，其在CotA存在下，从无色变成深蓝色。当指示剂部分包括荧光素酶时，检测剂部分可包括荧光素，其经历与荧光素酶的化学发光反应。

[0092] 要理解的是，为了检测期望的分析物，使用根据本发明的设备可包括另外的反应步骤。例如，帽可以从杆状物上移去，然后用其它试剂处理，或可以在原处用一种或多种试剂通过将试剂流过中空杆状物来处理帽。

[0093] 在进一步的方面，本发明提供诊断测试系统，包括根据任何前述权利要求的第一诊断测试设备，其中杆状物具有连接到其上的拭子，以及包括根据任何前述权利要求的第二诊断测试设备，其中杆状物具有连接到其上的活组织检查穿刺器，其中单个诊断帽能够可互换地固定在第一和第二设备的杆状物上。当在由任一种方法获得的样品上进行同样的诊断测试时，而且仅使用单一类型的诊断帽时，这种类型的系统允许医学从业者在拭子或活组织检查穿刺器之间根据临床选择作出选择。

[0094] 在发明的所有方面，连接有拭子或活组织检查穿刺器的杆状物都可被消毒，然后可包装在不能透过微生物的容器中。诊断帽也可被消毒，但是优选不消毒它们，因为帽不和被诊断的病人接触。发明很重要的优势是诊断帽不需要按拭子/活组织检查穿刺器一样的方式消毒。因为许多分析化学，例如基于抗体的分析，能够被消毒医用品的条件降解，所以这个特征极大扩展了诊断化学有效的范围。

[0095] 要理解的是，任何与本发明的一个或多个方面相关的已经描述的特征或实施方案同样适合用于发明的其它任何方面。

[0096] 现在将进一步经由实施例，参照附图描述本发明的特定实施方案，附图中：

[0097] 附图简述

[0098] 图1显示根据本发明的设备，包括拭子、两个诊断帽以及将流体引入到拭子杆状物中的注射器；

[0099] 图2显示图1实施方案的纵向截面，诊断帽和注射器固定在拭子杆状物上；

[0100] 图3显示包括活组织检查穿刺器的替代性实施例的纵向截面图；

[0101] 图4显示用于本发明设备的诊断帽实施方案的纵向截面图；

[0102] 图5是根据本发明的第二诊断帽和拭子系统的透视图；

[0103] 图6是在活组织检查穿刺器插入到帽的样品接收口之前，根据本发明的帽和活组织检查穿刺器系统的纵向截面图；

[0104] 图7是在使用设备的分析过程中，在活组织检查穿刺器插入到帽的样品接收口之后，图6系统的纵向截面图；

[0105] 图8是图5诊断帽的更详细的纵向截面图；

[0106] 图9是图5诊断帽的底面视图；

[0107] 图10是底端凹槽部分被移去后的图5诊断帽底面视图；以及

[0108] 图11是通过根据本发明的第二侧流诊断帽的一条侧流路径的示意性局部截面图，类似图5，显示了流体流动路径的不同区。

[0109] 优选实施方案的描述

[0110] 参看图1和2，设备包括中空的杆状物1，其一般由热塑性聚合物铸成整体。医学上可接受的海绵或无纺纤维的传统拭子2被固定在杆状物1的第一末端，与杆状物1的中空内部进行流体联通。

[0111] 设备进一步包括两个可选择的诊断帽3、4。帽3、4每个都能够形成与拭子杆状物扩张区6的紧密干涉配合。扩张区6具有截头圆锥体的横截面，与帽3、4的开孔内部横截面互补。特别地，可以看见突出部6放射状地向拭子2外扩张。结果，相当小的帽3、4就能够用在根据本发明的设备中。

[0112] 在中空杆状物1顶部，有开孔7能够与注射器5喷嘴8形成不透液体的干涉配合。注射器5可以用气体填充，简单地用来将液体样品从拭子2吹到诊断帽3、4中去。可替代地，注射器5可以含有水、盐或缓冲盐，用来把拭子2的样品冲洗到帽3、4中去。在另一实施方案中，注射器5可以含有在水性溶液中的诊断试剂。在其它实施方案中，设备可包括含有不同水溶液的多种注射器5，例如，用于实施帽中期望分析的不同水性溶液。要理解的是，注射器5不需要消毒，因为它们不用于患者。

[0113] 参看图3，可替代的实施方案的结构与图1和图2中所示实施方案基本相同，除了用不锈钢活组织检查穿刺器9来替代拭子2。在使用中，在诊断帽12连接之前或之后，可将匀化器(没有显示出来)往下传递到杆状物11的孔10以均质化活组织检查穿刺器样品。

[0114] 现在将更加详细地描述诊断帽3的结构。诊断帽3通过注射成型由透明聚合物形成，例如聚乙烯对苯二酸酯(PET)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)或透明的聚氯乙烯(PVC)。在某些优选的实施方案中，帽对于紫外光和300-350纳米以及可见光来说都是透明的。这可以通过例如用一些透明PVC塑料来实现。帽3顶部有开孔13，其成形为与拭子杆状物1的突出部6形成不透液体的干涉配合。在帽3底部配备小的通气孔14以辅助样品从拭子2流进帽3中。帽3的下部由液体可渗透的圆盘15、16、17的叠层占据。这些圆盘包括过滤层15，用于从样品中除去固体和细胞碎片，诊断层16的每层在不同预定分析物存在下经历颜色变化，以及填充指示剂层17变湿的时候会经历颜色变化。要使所有诊断层16和指示剂层17变湿的整个液体量只要大约100微升，由此为了对多种分析物实施诊断分析就很少或不需要稀释拭子上采集的样品。并且，从图2和图3中可见，使用的时候，诊断拭子接触到帽3中的吸收性诊断层，由此拭子中的液体样品能够直接吸入那些层中。

[0115] 诊断帽4包括透明的类似帽3的帽体。然而，帽4没有如帽3中显示的传感器圆盘16的叠层，而是有插入其下部的分段环状诊断条20。环状条20包括许多对样品中不同分析物具有敏感性的隔开的条带22、23。通过帽的透明侧可看到这些条带22、23中的颜色变化。塞子21插入到环状诊断条20中以将液体样品从拭子吸到诊断条20中。塞子21由与帽基本共轴的一束亲水聚酯细丝组成。该束也可以用来在样品到达诊断条20前从样品中过滤固体和细胞碎片。这种排列的优点类似于帽3，但是形成条带20需要甚至更少的相当昂贵的诊断试剂。甚至更多的适合甚至更小的流动样品的紧凑帽也可以通过配备塞子21来制成，塞子中心带有拭子2能够被插入其中的圆柱形孔。

[0116] 参看图5到8，分析系统包括侧流检测帽30、拭子32或活组织检查穿刺器44、以及注射器34。检测帽30一般是圆盘状的，带有管状的样品接收口38，以一般圆柱状形式从盘中央向上突出。拭子32或活组织穿刺器44、以及注射器34一般在结构上类似于图1实施方案中的那些，除了图5到8的实施方案包括在杆状物扩大区域上以及样品接收口内表面上的互补路厄氏锁螺纹42、46。

[0117] 示于图6和7中的实施方案中的样品接收口配备锥形凸起48，从口的底部向上突出。使用的时候，当穿刺器固定在帽上的时候，锥形凸起48将穿刺器44中的活组织检查样品压碎以将样品中的液体释放到帽中，如图7所示。

[0118] 参看图8到10，诊断帽30包括由上部50和基本圆盘状的下部52形成的凹槽。各个部分可以通过热塑性塑料的注射成型而形成。上部凹槽部分本身由两个独立的构件组成。上部和下部凹槽部分借助搭扣配合54安装在一起。上部凹槽部分50的下表面包括五个放射状隔开的浅槽59用来接受各自多孔载体材料的测试条64，如图10所示。每个测试条适合测试不同分析物，例如表征不同创伤病理学的分析物。测试条64通过下部凹槽部分52保持在槽中。当下部凹槽部分52和上部凹槽部分50是搭扣配合在一起的时候，样品的流体流动路径在上部和下部凹槽部分之间沿着槽59延伸。

[0119] 如同已经提到的那样，上部凹槽部分50包括向上突出部的管状的样品接收口38用来接受拭子。过滤膜可位于区域60的入口底部处，用来去除来自样品的微粒和细胞，但是在该实施方案中为了允许自由传递到细胞表面的酶分析物而省略了膜。然后将样品流过圆柱状的(环状的)入口通道62到达五个测试条64的上游末端。

[0120] 下部凹槽部分52包括观察测试条的窗孔。对于各个放射状配置的测试条带，在条带的测试区上面有检测窗口56，在测试条带的分析末端指示区之上有控制窗口58。第二凹槽部分的下表面可以进一步配备压花或其它标记来识别条带中检测到的特定分析物。要理解的是，如果优选从设备顶部观察，可替代地，可以在上部凹槽部分50中配备窗口56、58以及任选的标记。

[0121] 参看图11，显示了垂直于类似图5设备的侧流路径之一的示意性的、放大的横截面。该设备中的流动路径含有许多由塑料凹槽保持的元件。在流动路径中的第一元件是无纺织物材料的吸水垫66。这位于流动路径的放射状的最内部末端，并直接定位在设备入口通道62下面。吸水垫66与流动路径的反应区68毛细接触。

[0122] 反应区68是多孔玻璃纤维垫，大约1mm厚、1cm宽、3cm长(即从入口62处大约向外放射状延伸3cm)。玻璃纤维垫包括通过如上文所述的含有肽的连接物在其上缀合了辣根过氧化酶(HRP)的支持珠。肽有10-15个残基，含有特异于弹性蛋白酶的序列ala-ala-pro-val。

[0123] HRP缀合到结合底物的肽上可以通过例如双功能交联剂磺基-SMCC实现。反应是两步过程，包括1)HRP-马来酰亚胺的形成，接着2)使用常规方法与已经缀合到底物表面的肽反应。

[0124] 由Mitehell C.Sanders et al.(前文所引)所描述的HRP缀合的典型条件是：(1)HRP-马来酰亚胺缀合：将2.5mg的RocheHRP溶于500μl1M的磷酸钠(pH 7.4)中。将磺基-SMCC溶于50μl的DMSO中，在室温下与HRP混合20分钟。在马来酰亚胺缀合缓冲液中用凝胶过滤完成分离；(2)HRP-肽-膜缀合：将不含磺基-SMCC的组分(约1ml)与结合底物的肽混合，在约4℃下旋转反应过夜。进行几次漂洗，包括两次用100ml0.1％triton的PBS漂洗20分钟，接着两次用0.1％PEG5000溶液漂洗20分钟，以及在250ml10％的蔗糖溶液中漂洗1小时，接着高速真空过夜。

[0125] 然后将含有10μl10％缀合珠溶液的一份试样吸取到玻璃纤维条上形成反应区。

[0126] 反应区垫68的放射状最外末端与检测条70毛细接触。检测条70由总长度大约是4cm的POREX膜形成，其上沉积有4-氯-1-萘酚的检测区74，在HRP存在的时候经历颜色变化。检测区74是通过将乙醇中的0.5μl40mg/ml的4-氯-1-萘酚溶液沉积到检测条的1cm区域上制成。

[0127] 检测条70进一步配备硝酸纤维素控制线72，其与预定阈值量的游离HRP反应以减少假阳性结果的发生率。为了形成控制线72，制备2％硝酸纤维素的甲醇溶液，将0.5μl沉积在1cm的线上，离测试线1cm。

[0128] 最后，检测条70的放射状向外的末端和吸收性蓄池76毛细接触，其用于通过测试条吸取液体样品并在条带末端捕获液体。吸收性蓄池76是无纺人造纤维/聚丙烯酸酯条带，长度大约是3cm，已经用1％四溴苯酚蓝的蒸馏水溶液浸渍，然后干燥。当浸泡在测试溶液中时，吸收性蓄池76中的指示剂改变颜色，这种颜色变化可通过凹槽的窗孔58看见。颜色变化可以用来证实预定最小体积的液体样品已经通过检测区，从而减少假阳性结果的可能性。

[0129] 在替代性的实施方案中，拭子可以被活组织检查穿刺器替代，任选用手段来浸渍样品。

[0130] 在使用中，拭子用来获得伤口流体样品。典型地，样品将具有大约100μl体积的伤口流体。将拭子通过路厄氏锁方式插入到设备的样品接收口。然后通过拭子中央通道用注射器注射盐水(无菌PBS)而将样品从拭子上排出。样品通过入口通道并沿着测试条带流过。在预定时间后，观察设备的下侧以估测分析结果。

[0131] 上面的实施方案只是通过实施例的方式进行了描述。落在所附权利要求范围内的许多其它实施方案对于熟练的读者来说将是显而易见的。