一种脉络宁注射制剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种脉络宁注射制剂及其制备方法。本发明由石斛、牛膝、玄参、金银花四种药材按重量比等量份配比提取有效成分后加入甘露醇和PVP，经超滤、调pH值，除菌过滤，加塞，冷冻干燥得冻干粉针剂；或灭菌后封盖，得注射液。有效成分制备过程为：金银花加入乙醇渗漉提取后以乙酸乙酯纯化；牛膝、玄参和石斛乙醇浸泡、回流提取后上大孔吸附树脂纯化。本发明的脉络宁注射制剂制备过程最大限度地去除了杂质，从而保证了其安全、有效、稳定。

权利要求

1.一种脉络宁注射制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用8～16倍量的50～95％乙醇渗漉提取，10～

40h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，50℃减压浓缩至相对密度为1.05～1.30的浸膏，离心去除不溶性杂质，加4～8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液50℃减压浓缩至相对密度为1.05～1.25的浸膏，过滤，去除沉淀，10％～30％盐酸调节pH值至2～6，乙酸乙酯萃取2～6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物Ⅰ；

(2)取牛膝、石斛、玄参粉碎后用50％～90％乙醇浸泡1～3h后回流提取2～3次，每次1～3h，合并提取液，滤过，滤液50℃减压浓缩至相对密度为1.05～1.20的浸膏，加入4～6倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液上中极性或强极性大孔吸附树脂，分别用

2倍床体积水、2倍床体积25％乙醇、2倍床75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真空干燥提取物Ⅱ；

(3)将提取物Ⅰ和提取物Ⅱ合并后加注射用水加热煮沸8～15分钟，自然放冷，冷藏

24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液，冷藏过夜后过滤，滤液中加入处方量的甘露醇和PVP，滤过，滤液补加注射用水至处方量，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂；或灭菌后封盖，包装，得注射液；

所述的牛膝、玄参、石斛和金银花药材按照1∶1∶1∶1的重量份配比。

2.如权利要求1所述的脉络宁注射制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用12倍量的80％乙醇渗漉提取，20h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，温度≤70℃减压浓缩至50℃相对密度为1.20的浸膏，离心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液温度≤70℃减压浓缩至50℃相对密度为1.15的浸膏，过滤，去除沉淀，滤液确定体积，20％盐酸调节pH值至2，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物Ⅰ；

(2)取牛膝、石斛、玄参粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，滤过，滤液温度≤70℃减压浓缩至50℃相对密度为1.15的浸膏，加入5倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液上AB-8或SA-1大孔吸附树脂，分别用2倍床体积水冲洗树脂、2倍床体积25％乙醇冲洗杂质、2倍床75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真空干燥提取物Ⅱ；

(3)将提取物Ⅰ和提取物Ⅱ合并后加注射用水加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液，冷藏过夜后过滤，滤液中加入处方量的甘露醇和PVP，滤过，滤液补加注射用水至处方量，调pH值6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂；或灭菌后封盖，包装，得注射液。

3.如权利要求2所述的脉络宁注射制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的大孔吸附树脂为SA-1型大孔吸附树脂。

说明书

一种脉络宁注射制剂及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种以中药复方提取物为活性成分的注射制剂，具体而言，是一种脉络宁注射制剂及其制备方法。

背景技术

[0002] 脉络宁注射液是在著名医方“四妙勇安汤”的基础上研制而成的中药复方注射剂，由牛膝、玄参、石斛、金银花四味中药组成，广泛应用于血栓闭塞性脉管炎、动脉硬化性闭塞
症、脑血栓形成及后遗症、多发性大动脉炎、四肢急性动脉栓塞症、糖尿病坏疽、静脉血栓形
成及血栓性静脉炎等。但近年来不良反应的报道日益增多(罗治华，蒋三员.中国药物与
临床.2002，2(6)：412-413；陈爱群等.70例脉络宁注射液不良反应文献分析.药物不良反
应杂志.2003，2：162-165.)，集中在皮肤损害、急性呼吸窘、咽喉痉挛、过敏性休克、头痛、
微循环障碍、心绞痛、四肢震颤、腰痛、水肿、肾功能衰竭等多个方面。

[0003] 中国专利CN1078148A公开了脉络宁注射液的生产方法，该方法采用水提醇沉法将四种药材同时提取，然后再用乙酸乙酯萃取得有效成分。上述方法存在以下几方面缺
陷：

[0004] 1.采用水提法提取组方中各味药材有效成分的同时水溶性杂质溶出较多，之后的醇沉工艺虽可去除部分杂质，但不够彻底；

[0005] 2.四味中药混合水提后仅采用乙酸乙酯进行纯化，纯化效果不彻底；

[0006] 3.乙酸乙酯纯化后溶液直接进行制剂工艺，没有进一步除去树脂、蛋白、鞣质等大分子物质。

[0007] 以上分析可以看出，现有的脉络宁注射制剂制备工艺较落后、粗放，一方面使得有效成分含量不高，一方面使异源性杂质得不到有效控制，所以不良反应的发生频率越来越
高。而且，水针剂在运输、储藏过程中还存在不稳定的问题。

[0008] 因此，开发出更加安全、有效、稳定的脉络宁制剂在临床中具有重要意义。

发明内容

[0009] 本发明的目的之一是针对现有技术的不足，根据组方中各味药不同的理化性质，采用不同的方法提取，分离，精制，提供一种安全、有效、稳定的脉络宁注射制剂。

[0010] 本发明的另一目的是提供该脉络宁注射制剂的制备方法。

[0011] 本发明是通过下面的技术方案实现的：

[0012] 本发明的脉络宁注射制剂包括由牛膝、玄参、石斛、金银花为原料制得的提取物和注射制剂中可接受的载体。优选地，所述的提取物由牛膝、玄参、石斛和金银花药材按照
1∶1∶1∶1的重量份配比提取制得；所述的载体选自甘露醇、乳糖、蔗糖和PVP中的一
种或两种。更优选地，所述的原料药和载体具有以下重量份配比：牛膝900 玄参900
石斛900 金银花900 甘露醇53 PVP 1。

[0013] 本发明的脉络宁制剂可以制成注射液、冻干粉针剂和输液剂；优选注射液和冻干粉针剂；最佳为冻干粉针剂。

[0014] 本发明的脉络宁注射制剂的制备方法包括以下步骤：

[0015] (1)取处方量的金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用乙醇渗漉提取，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩成浸膏，离心去除不溶性杂质，加水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液
减压浓缩成浸膏，过滤，去除沉淀，盐酸调节pH值，乙酸乙酯萃取，合并萃取液，回收乙酸乙
酯后真空干燥得提取物I；

[0016] (2)取处方量的牛膝、石斛、玄参粉碎后用乙醇浸泡后回流提取，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩成浸膏，加入水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液上大孔吸附树脂，分别用
水、25％乙醇、75％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇减压浓缩并真空干燥得提取物II；

[0017] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水加热，溶解，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液，冷藏过夜后过滤，滤液中加入甘
露醇和PVP，滤过，滤液补加注射用水至处方量，调pH值5.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于
西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂；或灭菌后封盖，包装，得注射液。

[0018] 优选地，本发明的脉络宁注射制剂的制备方法包括以下步骤：

[0019] (1)取处方量的金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用8～16倍量的50～95％乙醇渗漉提取，10～40h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.05～
1.30(50℃)的浸膏，离心去除不溶性杂质，加4～8倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤
液减压浓缩至相对密度为1.05～1.25(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，10％～30％盐酸调
节pH值至2～6，乙酸乙酯萃取2～6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提
取物I；

[0020] (2)取处方量的牛膝、石斛、玄参粉碎后用50％～90％乙醇浸泡1～3h后回流提取2～3次，每次1～3h，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.05～
1.20(50℃)的浸膏，加入4～6倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液上中极性或强极
性大孔吸附树脂，分别用2倍床体积水、2倍床体积25％乙醇、2倍床75％乙醇洗脱，收集
75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真空干燥提取物II；

[0021] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水加热煮沸8～15分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液，冷藏过夜后过滤，滤
液中加入处方量的甘露醇和PVP，滤过，滤液补加注射用水至处方量，调pH值6.5～7.0，除
菌过滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂；或灭菌后封盖，包装，
得注射液。

[0022] 更优选地，本发明的脉络宁注射制剂的制备方法包括以下步骤：

[0023] (1)取处方量的金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用12倍量的80％乙醇渗漉提取，20h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为
1.20(50℃)的浸膏，离心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减
压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，滤液确定体积，
20％盐酸调节pH值至2，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空
干燥得提取物I；

[0024] (2)取处方量的牛膝、石斛、玄参粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩(温度
≤70℃)至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤
液上AB-8或SA-1大孔吸附树脂，分别用2倍床体积水冲洗树脂、2倍床体积25％乙醇冲洗
杂质、2倍床75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真空干燥提取
物II；

[0025] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液，冷藏过夜后过滤，滤液中
加入处方量的甘露醇和PVP，滤过，滤液补加注射用水至处方量，调pH值6.5～7.0，除菌过
滤，滤液分装于西林瓶中，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干粉针剂；或灭菌后封盖，包装，得注
射液。

[0026] 其中，步骤(2)中所述的大孔吸附树脂优选SA-1型大孔吸附树脂。

[0027] 最佳地，本发明的脉络宁注射制剂为粉针剂，其处方及制备方法为：

[0028] 处方：

[0029] 牛膝4500g 玄参4500g 石斛4500g 金银花4500g 甘露醇265g PVP 5g

[0030] 制备方法：

[0031] (1)取处方量的金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用12倍量的80％乙醇渗漉提取，20h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为
1.20(50℃)的浸膏，离心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减
压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，滤液确定体积，
20％盐酸调节pH值至2，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空
干燥得提取物I；

[0032] (2)取处方量的牛膝、石斛、玄参粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩(温度
≤70℃)至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤
液上AB-8或SA-1大孔吸附树脂，分别用2倍床体积水冲洗树脂、2倍床体积25％乙醇冲洗
杂质、2倍床75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真空干燥提取
物II；

[0033] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水2000ml，加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液3000ml，冷藏过夜
后过滤，滤液中加入处方量的甘露醇和PVP，滤过，滤液补加注射用水至3500ml，调pH值至
6.5～7.0，除菌过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷冻干燥，包装，得冻干
粉针剂；或灭菌后封盖，包装，得注射液。

[0034] 本发明的脉络宁注射制剂是大量科学实验的结果，每种药材的提取方法和制剂工艺都经过反复地实验和验证。下面通过具体试验说明本发明制备方法的科学性。

[0035] 金银花提取物制备工艺的研究

[0036] 1.实验方法：

[0037] 将金银花过粉碎机打成粗粉，准确称取两份，每份100g。样品1用12倍量水回流提取两次，第一次用7倍量搅拌下回流提取3h，倾出上清夜；药渣第二次加入5倍量搅拌下
回流提取2h，倾出上清夜；合并二次水提取液，确定体积后HPLC测定绿原酸的浓度。样品2
用12倍量75％乙醇渗漉，渗漉液确定体积，HPLC测定绿原酸的浓度。

[0038] 2.结果：

[0039] 两组实验提取液测定体积和绿原酸的浓度，计算绿原酸的量，并计算提取率。取提取液20ml置挥发皿中蒸干，真空干燥称重，计算每种提取方法总的所得固形物的量。结果
见表1。

[0040] 表1两种提取方法有效成分绿原酸的提取率

[0041] 由表1可以看出，乙醇渗漉提取的提取率高于水提取总提取率，并且所得固形物的量也低于水提取，所以，用乙醇提取金银花的方法优于水提取。

[0042] 牛膝、玄参和石斛提取物制备工艺的研究

[0043] 1.实验方法：

[0044] 分别将牛膝和石斛粉碎成粗粉，玄参切片，各取100g均匀混合，称取2份。样品1用14倍量的水回流提取两次，第一次用8倍量的水浸泡2h，然后搅拌下回流提取3h，倾出
上清夜；药渣第二次加6倍量的水搅拌下回流提取2h，倾出上清夜；合并两次水提取液，确
定体积后HPLC测定肉桂酸、齐墩果酸型皂苷、滨蒿内酯的浓度。样品2同法操作，改用80％
乙醇提取，合并两次提取液后确定体积，HPLC测定肉桂酸、齐墩果酸型皂苷、滨蒿内酯的浓
度。

[0045] 2.结果：

[0046] 两组实验提取液测定体积和肉桂酸、齐墩果酸型皂苷、滨蒿内酯的浓度，计算指标成分的量，并计算提取率。取提取液20ml置挥发皿中蒸干，真空干燥称重，计算每种提取方
法总的所得固形物的量。结果见表2。

[0047] 表2两种提取方法指标成分的提取率

[0048] 由表2可以看出，三个指标成分乙醇提取的提取率均高于水提取总提取率，并且所得固形物的量也低于水提取，所以，用乙醇提取牛膝、玄参和石斛的方法优于水提取。

[0049] 超滤工艺合理性的研究

[0050] 1.实验方法：

[0051] 取粉碎后牛膝玄参石斛提取物4g，金银花提取物15g，均匀混合记为样品1。同样的操作再取两份，分别记为样品2样品3。分别加注射水200ml，分别加热煮沸10分钟，自
然放冷，冷藏24h后过滤，滤过液分别过截留分子量为3000的超滤膜超滤，分别收集超滤液
300ml。HPLC法测定超滤液中肉桂酸，齐墩果酸型皂苷、滨蒿内酯的浓度。分别精密量取超
滤液20ml至蒸发皿中水浴上烘干，105℃烘箱里烘3h，取出后放置干燥器里半小时，称重。

[0052] 2、结果：

[0053] 计算超滤前后肉桂酸、齐墩果酸型皂苷、滨蒿内酯的转移率和固形物收率，结果见表3。

[0054] 表3超滤前后指标成分的转移率和固形物收率

[0055] 超滤前后的溶液分别按照药典方法检测树脂、鞣质、蛋白质项，结果见表4。

[0056] 表4超滤前后检测项目结果的对比

[0057] 由试验结果可以看出，超滤后色泽明显变好，并且超滤可以出去绝大部分树脂、鞣质、蛋白质杂质。由表4可以看出指标成分的转移率均较高，因此可以确定超滤是必要的。

[0058] 冻干曲线的确定

[0059] 1.实验方法：

[0060] 取粉碎后牛膝玄参石斛提取物4g，金银花提取物15g，均匀混合加注射用水200ml，加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h后过滤，滤过液过截留分子量为3000的超滤
膜超滤，收集超滤液300ml。超滤液中加入甘露醇26.5g，PVP0.5g滤过，滤液补加注射用水
至350ml。调PH至6.5-7.0，除菌滤过，滤液分装于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，样品移入冷
冻干燥箱中，将样品测温探头和测定电极分插入3个样品瓶内，使冷冻机以20℃/小时的速
度降温，待样品完全解冻后〔从视窗观察，样品为色泽、质地均匀的晶柱〕，停止压缩机，并开
始降温，使隔板的温度以10℃/小时的速度上升，记录样品的温度和隔板温度以及相对应
的电阻，得共熔点为：-21℃。

[0061] 2、结果：

[0062] 经多次冷冻干燥试验确定冻干曲线，具体参数见下表。
时间(小时) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

隔板温度(℃) 30 -20 -8 -40 -40 -40 -40 -40 -25 -20 25 7.5 10 12.5 15 15

样品温度(℃) 25 -5 -5 -35 -36 -38 -38 -38 -36 -35 -31 -30 -28 -27 -25 -25

时间(小时) 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

隔板温度(℃) 15.2 15.2 20 20 30 31 31 35 35 35 40 40 40 40 40

样品温度(℃) -22 -20 -15 -15 -10 -8 -4 -1 10 30 35 35 35 35 35

[0063] 本发明的脉络宁注射制剂具有以下有益效果：

[0064] 1.根据组方中各单味药的理化性质，采用醇提水沉的方法分别提取，提高了有效成分的含量；

[0065] 2.根据组方中各单味药的理化性质，采用乙酸乙酯和大孔树脂的方法分别精制，进一步纯化有效成分；

[0066] 3.制剂过程中的超滤步骤最大程度上去除杂质，从而保证了最终产品的安全、有效、稳定。

附图说明

[0067] 图1为本发明药物脉络宁冻干粉的冻干曲线图

[0068] 为了更好的理解本发明，以下通过实验例来进一步阐述发明药物的有益效果，实验例包括本发明药物的药效学动物试验和稳定性研究。下面试验旨在进一步说明本发明药
物的作用，而非对本发明的限制。本实验例采用的发明药物是按实施例4制备而成。

[0069] 实验例一对大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血再灌注损伤模型的治疗作用

[0070] 经过脑梗塞的大鼠麻醉清醒出现对侧面前肢内收，肩内旋，肌张力下降，推右肩向对侧移动，抵抗阻力降低，甚至有些动物还出现不停地向一侧转圈现象等偏瘫样症状。将24
小时存活的大鼠进行神经病学评分，脉络宁组大鼠与模型组比较，大鼠的行为障碍明显改
善(p＜0.01)：脉络宁高、中剂量组的脑含水量明显低于模型组(p＜0.01)；TTC染色结果
显示用药组脑缺血再灌注24h后脑组织梗塞程度明显减小，在光镜下观察脑组织主要呈缺
血性改变，出现明显的软化灶，经脉络宁组大鼠脑组织缺血程度减轻，减小软化灶。

[0071] 实验例二对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用

[0072] 全脑缺血模型组鼠脑组织含水量明显于假手术组，脉络宁用药高，中剂量组与模型组对比均有差异性显著(p＜0.01)；模型组脑组织SOD活动明显降低，MDA含量明
显提高，脉络宁各剂量组与模型对照组比较则SOD活性明显提高，MDA含量显著下降(p
＜0.05)；病理结果表明，模型组6例见小灶性梗死区，可见细胞核固缩，染色加深，核仁不
清，海马区神经细胞明显减少，排列紊乱，细胞体积变小，形态不规则，部分胞核固缩深染，
核仁消失，胞质不均，部分细胞出现空泡，细胞间分离。脉络宁用药组神经元及脑实质细胞
结构基本正常，未见梗死灶，部分样本可见细胞核固缩，染色加深，核仁不清，变化数量与程
度明显较模型组轻。

[0073] 实验例三对局灶性脑缺血(MCAO)大鼠脑血流量的影响

[0074] 模型对照组大鼠脑栓塞后脑血流量明显减少，MCAO10min后下降为原来的51.3％，之后继续下降，但各时点下降幅度与10min无明显差异，各给药量组显示，MACO后
其脑血流值比模型组明显增加(p＜0.05)，以脉络宁高剂量最为明显，表明脉络宁能明显
增加MCAO后大鼠的脑血流量。

[0075] 实验例四活血化淤作用

[0076] 脉络宁对ADP诱导的家兔血小板聚集有明显的抑制作用，在0.1ml～0.4g/ml剂量间随着剂量的增大抑制作用逐渐增强，即其对ADP诱导的家兔血小板聚集的抑制作用有
明显的剂量依赖性；体内抗血栓形成实验中脉络宁三个剂量均能明显抑制大鼠血栓形成；
脉络宁三个剂量均有明显的延长凝血时间的作用。大鼠给予脉络宁3d后，各剂量组与复方
丹参注射液的作用相似，使凝血酶时间明显延长，凝血酶原时间和部分凝血活酶时间也显
著延长，降低血纤维蛋白原浓度。

[0077] 实验例五急性毒性试验

[0078] 脉络宁按338g/kg原生药体重小鼠灌胃给药后，一日两次，第二次给药30min后活动量、采食量减少，第2天后恢复正常，未见其他异常反应，在以后的连续7天观察期中未见
其它明显毒性反应，无一只动物死亡，平均体重增长1.21g，解剖观察，各动物主要脏器无肉
眼可见病变。累计剂量676g/kg，最大给药量相当于临床用量的1127倍以上。

[0079] 实验例六大鼠长期毒性试验

[0080] 脉络宁，大鼠连续90天灌胃给药120.0 60.0 12.0g/kg生药三个剂量，对照组给蒸馏水，以及停药后观察恢复期15天。

[0081] 连续给药90天，三个剂量组动物的外观体征、行为活动无明显异常，饲料日耗量随体重增长而增加，各组动物对饲料消耗量无明显差别。给药90天与给药前(0天)比，体
重平均增长：大剂量151.93g、中剂量117.36g、小剂量152.13g，对照组157.9g。给药90天，
大、中、小剂量组外周血象检查指标与对照组均无统计学差异，血液生化检查10项指标，大
剂量组T-bil与对照组比较有统计学差异(p＜0.05)，其他血液生化检查，数据均在正常范
围内波动，停药观察15天，未见异常。解剖观察各组动物除有个别动物肺组织有肉眼可见
异常外，其它组织均无肉眼可见病变；给药90天大、中剂量组肝脏系数与小剂量组和对照
组比较p＜0.05，其它各肝脏系数组间比较均无统计学差异；停药15天也无统计学差异。
组织病理学检查，大剂量组和对照组心、肝、脾、肺、肾、脑(小脑)、性腺(睾丸、前列腺、子
宫、卵巢)、甲状腺、胸腺、胰腺、肾上腺、胃、上指肠、回、结肠、淋巴结等。给药90天，停药15
天以上各脏器均无形态、结构改变。

[0082] 实验例六稳定性试验

[0083] 1.方法：三批脉络宁冻干粉样品(批号分别为030515、030521、030526)以临床试验用包装(在包装材料质地与结构上相当于上市药品的包装)室温放置，连续考察12个
月，观察其变异情况，取其平均值。

[0084] 2.结果：结果见表5。

[0085] 表5三批样品稳定性研究结果

[0086] 本发明药物是通过以下实施例制备而成，以下具体实施例是对本发明的解释，并不能限制本发明。

具体实施方式

[0087] 实施例1：脉络宁冻干粉的制备

[0088] (1)取金银花1500g粉碎成粗粉，过2号筛，用8倍量的50乙醇渗漉提取，15h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.05(50℃)的浸膏，离
心去除不溶性杂质，加4倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为
1.15(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，10％盐酸调节pH值至2.5，等体积乙酸乙酯萃取4次，
合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；

[0089] (2)取牛膝、石斛、玄参各1500g粉碎后用60％乙醇浸泡2h后回流提取2次，每次2h，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩(≤70℃)至相对密度为1.05(50℃)的浸膏，加入4
倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液上AB-8大孔吸附树脂，分别用2倍床体积水、2倍
床体积25％乙醇、2倍床75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真
空干燥提取物II；

[0090] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水600ml，加热煮沸8分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液1000ml，冷藏过夜
后过滤，滤液中加入100g的甘露醇和2gPVP，滤过，滤液补加注射用水至1050ml，调pH值
6.5～7.0，0.22μm微孔滤膜除菌过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷冻
干燥，包装，得冻干粉针剂。

[0091] 实施例2脉络宁冻干粉的制备

[0092] (1)取2000g金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用12倍量的75％乙醇渗漉提取，20h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，离
心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为
1.20(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，30％盐酸调节pH值至3，等体积乙酸乙酯萃取4次，合
并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；

[0093] (2)取牛膝、石斛、玄参各2000g粉碎后用70％乙醇浸泡3h后回流提取3次，每次1h，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为1.20(50℃)的浸膏，
加入6倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液上AB-8大孔吸附树脂，分别用2倍床体积
水、2倍床体积25％乙醇、2倍床75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并
60℃真空干燥提取物II；

[0094] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水1200ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液1500ml，冷藏过
夜后过滤，滤液中加入100g甘露醇和3gPVP，滤过，滤液补加注射用水至1575ml，调pH值
6.5～7.0，0.22μm微孔滤膜除菌过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷冻
干燥，包装，得冻干粉针剂。

[0095] 实施例3脉络宁冻干粉的制备

[0096] (1)取5000g金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用14倍量的90％乙醇渗漉提取，30h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.25(50℃)的浸膏，离
心去除不溶性杂质，加5倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为
1.15(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，20％盐酸调节pH值至4，等体积乙酸乙酯萃取5次，合
并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；

[0097] (2)取牛膝、石斛、玄参各4500g粉碎后用80％乙醇浸泡2h后回流提取2次，每次3h，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为1.05(50℃)的浸膏，
加入5倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液上SA-1大孔吸附树脂，分别用2倍床体积
水、2倍床体积25％乙醇、2倍床75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并
60℃真空干燥提取物II；

[0098] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水2000ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液3000ml，冷藏过夜
后过滤，滤液中加入275g甘露醇和5gPVP，滤过，滤液补加注射用水至3500，调pH值6.5～
7.0，0.22μm微孔滤膜除菌过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷冻干燥，包
装，得冻干粉针剂。

[0099] 实施例4脉络宁冻干粉的制备

[0100] (1)取4500g金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用12倍量的80％乙醇渗漉提取，20h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为1.20(50℃)
的浸膏，离心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩(温度
≤70℃)至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，滤液确定体积，20％盐酸调节
pH值至2，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物
I；

[0101] (2)取牛膝、石斛、玄参各4500g粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩(温度
≤70℃)至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤
液上AB-8或SA-1大孔吸附树脂，分别用2倍床体积水冲洗树脂、2倍床体积25％乙醇冲洗
杂质、2倍床75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真空干燥提取
物II；

[0102] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水2000ml，加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液3000ml，冷藏过夜
后过滤，滤液中加入265g甘露醇和5gPVP，滤过，滤液补加注射用水至3500ml，调pH值至
6.5～7.0，0.22μm微孔滤膜除菌过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷冻
干燥，包装，得冻干粉针剂。

[0103] 实施例5脉络宁冻干粉的制备

[0104] (1)取6000g金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用12倍量的80％乙醇渗漉提取，20h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为1.05(50℃)
的浸膏，离心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩(温度
≤70℃)至相对密度为1.05(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，滤液确定体积，20％盐酸调节
pH值至2，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物
I；

[0105] (2)取牛膝、石斛、玄参各6000g粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩(温度
≤70℃)至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，加入6倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤
液上AB-8大孔吸附树脂，分别用2倍床体积水冲洗树脂、2倍床体积25％乙醇冲洗杂质、2
倍床75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真空干燥提取物II；

[0106] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水2500ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液3500ml，冷藏过
夜后过滤，滤液中加入350g甘露醇和6gPVP，滤过，滤液补加注射用水至4550ml，调pH值
6.5～7.0，0.22μm微孔滤膜除菌过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷冻
干燥，包装，得冻干粉针剂。

[0107] 实施例6脉络宁冻干粉的制备

[0108] (1)取3000g金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用10倍量的80％乙醇渗漉提取，25h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为1.20(50℃)
的浸膏，离心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩(温度
≤70℃)至相对密度为1.20(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，滤液确定体积，20％盐酸调节
pH值至2.5，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取
物I；

[0109] (2)取牛膝、石斛、玄参各3000g粉碎后用70％乙醇浸泡2h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩(温度≤70℃)
至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液上SA-1
大孔吸附树脂，分别用2倍床体积水冲洗树脂、2倍床体积25％乙醇冲洗杂质、2倍床75％
乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真空干燥提取物II；

[0110] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水1500ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液2000ml，冷藏过
夜后过滤，滤液中加入180g甘露醇和2gPVP，滤过，滤液补加注射用水至2500ml，调pH值
6.5～7.0，0.22μm微孔滤膜除菌过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，加塞，冷冻
干燥，包装，得冻干粉针剂。

[0111] 实施例7脉络宁注射液的制备

[0112] (1)取4500g金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用10倍量的75％乙醇渗漉提取，20h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为1.20(50℃)
的浸膏，离心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩(温度
≤70℃)至相对密度为1.20(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，滤液确定体积，30％盐酸调节
pH值至2，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物
I；

[0113] (2)取牛膝、石斛、玄参各5000g粉碎后用70％乙醇浸泡2h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩(温度≤70℃)
至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，加入4倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液上SA-1
大孔吸附树脂，分别用2倍床体积水冲洗树脂、2倍床体积25％乙醇冲洗杂质、2倍床75％
乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真空干燥提取物II；

[0114] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水2500ml加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液3000ml，冷藏过
夜后过滤，滤液中加入270g甘露醇和5gPVP，滤过，滤液补加注射用水至3500ml，调pH值
6.5～7.0，0.22μm微孔滤膜除菌过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，灭菌后封
盖，包装，得注射液。

[0115] 实施例8脉络宁注射液的制备

[0116] (1)取4500g金银花粉碎成粗粉，过2号筛，用12倍量的80％乙醇渗漉提取，20h渗漉完毕，渗漉液滤过，续滤液回收乙醇，减压浓缩(温度≤70℃)至相对密度为1.20(50℃)
的浸膏，离心去除不溶性杂质，加6倍量水，充分搅拌，静置过夜，过滤，滤液减压浓缩(温度
≤70℃)至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，过滤，去除沉淀，滤液确定体积，20％盐酸调节
pH值至2，等体积乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯后60℃真空干燥得提取物I；

[0117] (2)取牛膝、石斛、玄参各4500g粉碎后用70％乙醇浸泡1.5h后回流提取2次，每次2h，第一次加入8倍量，第二次加入6倍量，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩(温度
≤70℃)至相对密度为1.15(50℃)的浸膏，加入5倍量的水充分搅拌，静置过夜，过滤，滤
液上AB-8或SA-1大孔吸附树脂，分别用2倍床体积水冲洗树脂、2倍床体积25％乙醇冲洗
杂质、2倍床75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，回收乙醇减压浓缩并60℃真空干燥提取
物II；

[0118] (3)将提取物I和提取物II合并后加注射用水2000ml，加热煮沸10分钟，自然放冷，冷藏24h，过滤，滤液过截留分子量为3000的超滤膜超滤，收集超滤液3000ml，冷藏过夜
后过滤，滤液中加入265g甘露醇和5gPVP，滤过，滤液补加注射用水至3500ml，调pH值至
6.5～7.0，0.22μm微孔滤膜除菌过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每瓶3.5ml，灭菌后封
盖，包装，得注射液。