一种中药注射制剂的质量控制方法

摘要

本发明提供了一种以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，以灯盏细辛、红参或人参或党参和麦冬的活性成分或特征成分进行鉴别与含量测定，更建立了指纹图谱，对其物质群整体予以控制，覆盖面广，特异性强。利用本发明方法，能够有效控制以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量，对药品的生产进行具体的指导，同时这种方法具有操作简单，精密度高，重现性好的特点。

权利要求

1.一种由麦冬1-500份、人参或红参或党参1-300份、灯盏细辛1-1000份经提取精制并加适当辅料制作而成的注射剂，或是由相应重量份药材经提取后得到的提取物经精制并加适当辅料制作而成的注射剂的检测方法，其特征在于：该方法包括以下内容：A.灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬全部或部分成分的指纹图谱测试方法：

a.采用高效液相色谱法测试以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：

供试品溶液的制备：取注射剂样品适量，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；

参照物溶液的制备：取适量灯盏细辛的主要成分野黄芩苷对照品，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备参照物溶液；

色谱条件：色谱柱采用硅烷键合硅胶为填料，流动相为乙腈或甲醇-水-0.005mol/L～

0.3mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～3％冰醋酸溶液或0.2％～3％甲酸溶液或0.03％～1％磷酸溶液＝10～70∶0～35∶30～90，梯度洗脱，流速为0.5～1.8ml/min、检测波长为190-400nm范围内的一个或几个，柱温为

20～60℃；

以灯盏细辛成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

以上述方法作为注射剂中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；

b.采用高效液相色谱法测试以红参或人参或麦冬中一种或几种的成分特征为主的指纹图谱：

供试品溶液的制备：取注射剂样品适量，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；

参照物溶液的制备：取适量红参或人参或麦冬药材中的主要成分对照品，包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′中的一种或几种，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备参照物溶液；

色谱条件：色谱柱采用硅烷键合硅胶为填料，流动相为乙腈或甲醇-水-0.008mol/L～

0.25mol/L磷酸二氢钠溶液或0.008mol/L～0.25mol/L磷酸二氢钾溶液或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.01％～1.5％磷酸溶液＝16～72∶0～40∶10～

80，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、检测波长为190-410nm范围内的一个或几个，柱温为20～50℃；

以红参或人参或麦冬中一种或几种的成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

以上述方法作为注射剂中以红参或人参或麦冬中一种或几种的成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；

c.采用高效液相色谱法测试以党参成分特征为主的指纹图谱：

供试品溶液的制备：取注射剂样品适量，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；

参照物溶液的制备：取适量党参药材中的主要成分对照品，包括党参炔苷、党参苷I、苍术内酯III中的一种或几种，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备参照物溶液；

色谱条件：色谱柱采用硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈或甲醇-水或0.01mol/L～0.2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～0.2mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～2％冰醋酸溶液或0.2％～2％甲酸溶液或0.02％～1％磷酸溶液＝10～90∶90～10，梯度或非梯度洗脱，流速为0.6～1.4ml/min、检测波长为190-390nm范围内的一个或几个，柱温为

20～50℃；

以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

以上述方法作为注射剂中以党参成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；

B.灯盏细辛药材、红参或人参或党参药材、麦冬药材、野黄芩苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、党参炔苷、党参苷I的鉴别测试方法：a.注射剂中灯盏细辛、野黄芩苷中一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，以水或乙醇或甲醇中的一种或几种为溶剂提取，制备供试品溶液；

取灯盏细辛对照药材，先除去酯溶性杂质，再参照供试品溶液制法，制成对照药材溶液；取野黄芩苷对照品，制备对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液适量、对照溶液中的一种或两种适量，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲酸或冰醋酸＝5～20∶0.5～5∶0.01～3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含三氯化铝或三氯化铁的显色剂，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

b.注射剂中野黄芩苷的高效液相色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，以水或乙醇或甲醇中的一种或几种为溶剂提取，制备供试品溶液；

取野黄芩苷对照品，制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝10～50∶50～80为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温

20～60℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液适量，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，应具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

c.注射剂中麦冬药材、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元中一种或几种的薄层色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，加水与强酸加热处理，再用醋酸乙酯或三氯甲烷或乙醚提取，制备供试品溶液；另取麦冬对照药材，参照供试品溶液制法制成对照药材溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元中的一种或几种，制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液适量、对照溶液中的一种或两种适量，分别点于同一硅胶薄层板上，以苯或甲苯或二甲苯-甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸＝60～100∶1～20∶0～3为展开剂，或以三氯甲烷或二氯甲烷-丙酮或丁酮＝2～6∶0.5～3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视，或喷以含硫酸的显色剂加热后检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

d.注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，用水溶解或润湿后用正丁醇提取，制备供试品溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′中的一种或几种，制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液适量，分别点于同一硅胶薄层板上，以醋酸乙酯或醋酸丁酯或甲酸乙酯-甲醇或乙醇-水＝3～50∶1～15∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸的显色剂，加热至显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

e.注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的高效液相色谱鉴别：

取注射剂样品适量，用水或甲醇或乙醇或流动相中的一种或几种为提取溶剂，制备供试品溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′中的一种或几种做为对照品，制备对照品溶液；，采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或

0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～

0.4mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.4mol/L磷酸二氢钾溶液＝10～80∶20～

90为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～60℃范围内，精密吸取供试品溶液及对照品溶液适量，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，应具与对照色谱保留时间一致的色谱峰；

f.注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的高效液相色谱鉴别：

取注射剂样品适量，加水与强酸加热，再用三氯甲烷或醋酸乙酯提取，制备供试品溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷中的一种或几种，制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝30～92∶8～70为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内，精密吸取供试品溶液及对照品溶液适量，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，应具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

g.注射剂中红参或人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法：取注射剂样品适量，用正丁醇或乙醇或甲醇或水中的一种或几种为溶剂提取，必要时用三氯甲烷或醋酸乙酯或氨溶液除去杂质，制备供试品溶液；取红参或人参对照药材，参照供试品溶液的制备方法，制备对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品中的一种或几种，制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液适量、对照溶液中的一种或两种适量，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲醇或乙醇-水＝10～20∶0～

60∶1～40∶0.02～30为展开剂，或以正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-水＝1～10∶2～10∶0.5～3展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸的显色剂，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

h.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的高效液相色谱鉴别：

取注射剂样品适量，置量瓶中，用乙醇或甲醇或水中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品中的一种或几种为对照品，制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈或甲醇-水或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～

0.5mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～3％冰醋酸溶液或0.2％～3％甲酸溶液或0.01％～

2％磷酸溶液＝15～90∶10～85，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为200～390nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内，精密吸取供试品溶液及对照品溶液适量，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，应具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

i.注射剂中党参药材、党参炔苷、党参苷I的薄层色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，加水适量，再用正丁醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提取，制备供试品溶液；或取注射剂样品适量，进行柱层析，制备供试品溶液；另取党参对照药材，参照供试品溶液制法制成对照药材溶液；再取党参炔苷或党参苷I对照品中的一种或两种，制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液适量、对照溶液中的一种或两种适量，分别点于同一硅胶薄层板上，正丁醇或甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸或乙醇或甲醇-水1～

10∶0.1～10∶0.05～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸的显色剂，加热，置紫外光灯或可见光下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

j.注射剂中党参炔苷、党参苷I的高效液相色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，用乙醇或甲醇或水中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；以党参炔苷或党参苷I中的一种或两种制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～

0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝8～50∶50～92为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内，精密吸取供试品溶液及对照品溶液适量，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，应具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

C.野黄芩苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、总皂苷、总多糖、党参炔苷、党参苷I的含量测试方法：a.注射剂中野黄芩苷的含量测定：

取注射剂样品适量，以水或乙醇或甲醇中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；取野黄芩苷对照品，制备对照品溶液；采用薄层色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝8～50∶50～92为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～

60℃，以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂中含野黄芩苷的限度不得少于6.0mg；

b.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定：

取注射剂样品适量，以甲醇或乙醇或水或流动相中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品制备对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈或甲醇-水或0.005mol/L～

2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～5％冰醋酸溶液或0.2％～5％甲酸溶液或0.05％～2％磷酸溶液＝15～90∶10～85，流速为0.5～

2.0ml/min，检测波长为200～400nm范围内的一个或几个，柱温在20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂样品含人参皂苷Rg1的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.25mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于1.25mg；

c.注射剂中总皂苷的含量测定：

取注射剂样品适量，以甲醇或乙醇或水或流动相中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；取人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′作为对照品，同法制得对照品溶液；分别量取供试品溶液与对照品溶液适量，水浴蒸干，先后加香草醛-冰醋酸溶液、高氯酸，摇匀，加热，放冷后加冰醋酸，摇匀，以随行溶剂为空白，采用分光光度法，选400～700nm中的一个或几个波长处测定吸收度，以外标法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含总皂苷以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′计，不得少于6.0mg；

d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定：

取注射剂样品适量，以甲醇或乙醇或水或流动相中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品，同法制得对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇或乙腈-水或或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝20～80∶20～80，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含麦冬皂苷B的限度不得少于0.025mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.025mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.005mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的总和的限度不得少于0.055mg；

e.注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定：

取注射剂样品适量，加水与强酸加热水解，再用三氯甲烷或醋酸乙酯提取，制备供试品溶液；假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元，加甲醇或乙醇制成对照品溶液，按高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝30～95∶5～70为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含假叶树皂苷元的限度不得少于0.005mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.005mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.005mg；含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.015mg；

f.注射剂中党参炔苷、党参苷I的含量测定：

取注射剂样品适量，置量瓶中，用乙醇或甲醇或水中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；以党参炔苷或党参苷I中的一种或两种制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～

3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或

0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝10～50∶50～90为流动相，检测波长为200～

410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含党参炔苷的限度不得少于0.05mg；

g.注射剂中总多糖含量测定：

单糖取注射剂样品适量，置碘量瓶中，加水适量，调PH值至中性，精密加入碘液适量，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液适量，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置，加稀硫酸适量，立即用硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加入淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得；每1ml的0.1mol/L碘液相当于9.008mg的无水葡萄糖，由此折算出每瓶单糖的含量；

总糖取注射剂样品适量，置碘量瓶中，加水与强酸加热水解，放冷，加酚酞指示液，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液适量，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液适量，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置，加稀硫酸适量，立即用硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得；每1ml的0.1mol/L碘液相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；

以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；

每日用剂量的注射剂含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于35mg。

2.按照权利要求1所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的检测方法，其特征在于该方法包括如下内容：a.采用高效液相色谱法测试灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：

供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加甲醇提取，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为乙腈-水＝80∶20，流动相B为0.1％磷酸，梯度洗脱，从0分钟至60分钟，流动相A的比例由15％升至44％，流速为1.0ml/min，检测波长为270±2nm，柱温为30℃；

以灯盏细辛成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

以上述方法作为待测注射剂中灯盏细辛成分指纹图谱的测试手段；

将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；

b.采用高效液相色谱法测定以红参或人参或麦冬中一种或几种的成分特征为主的指纹图谱：

供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加水稀释或溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；

色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈-水＝80∶20，梯度洗脱，从0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至60分钟，流动相B的比例由64％升至75％，流速为1.0ml/min，检测波长为203±2nm，柱温为40℃；

以红参或人参或麦冬中一种或几种的成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

以上述方法作为待测注射剂中红参或人参或麦冬中一种或几种的成分指纹图谱的测试手段；

将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；

c.采用高效液相色谱法测试党参成分特征为主的指纹图谱：

供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加95％乙醇提取，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

参照物溶液的制备：取适量党参药材中的主要活性成分党参炔苷，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为水，B为乙腈，梯度洗脱，从0分钟至5分钟，流动相B的比例为15％，从5分钟至60分钟，流动相B的比例由

15％升至50％，流速为1.0ml/min，检测波长为268±2nm，柱温为30℃；

以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

以上述方法作为待测注射剂中党参成分指纹图谱的测试手段；

将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00。

3.按照权利要求1所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的检测方法，其特征在于：所述注射剂的鉴别方法是以下内容：a.注射剂中野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，以甲醇为溶剂提取，制备供试品溶液；取野黄芩苷对照品，加甲醇溶解，制备对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含2％的三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

b.注射剂中野黄芩苷的高效液相色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液＝20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

c.注射剂中麦冬药材、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，加水与盐酸适量，加热水解，放冷，再用醋酸乙酯提取，提取液浓缩，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材，加水煎煮，水煮液同供试品溶液处理，制成对照药材溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品，加醋酸乙酯制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸＝80∶5∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

d.注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，用水适量，用正丁醇萃取，萃取液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶5∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

e.注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的高效液相色谱鉴别：

取注射剂样品适量，以甲醇为溶剂，制备供试品溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝53∶47为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液各15μl，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

f.注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，加3％硫酸水解4小时，调节pH至中性，蒸干，残渣用三氯甲烷溶解，作为供试品溶液；另取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元，分别加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮＝4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

g.注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的高效液相色谱鉴别：

取注射剂样品适量，加水适量，用3％硫酸回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用三氯甲烷提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝70∶30为流动相，检测波长为208nm，柱温30℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，具有与对照色谱保留时间一致的色谱峰；

h.注射剂中红参或人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法：取注射剂样品适量，加水适量，用氨水饱和的正丁醇提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；取红参或人参对照药材，加三氯甲烷回流提取，弃去三氯甲烷液，残渣加水饱和正丁醇提取，提取液加入氨试液，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶40∶22∶10在10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，

105℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

i.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的高效液相色谱鉴别：

取注射剂样品适量，以甲醇为溶剂，制备供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温在30℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

j.注射剂中党参药材、党参炔苷、党参苷I的薄层色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，将其置于500mg，用甲醇、20％甲醇各10ml预洗的C18固相萃取小柱中，依次用20％甲醇、甲醇各5ml洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷、党参苷I对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝7∶1∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热5分钟，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

k.注射剂中党参炔苷、党参苷I的高效液相色谱鉴别方法：

取注射剂样品适量，以甲醇为溶剂，制备供试品溶液；以党参炔苷、党参苷I对照品的甲醇溶液为对照，采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液10μl，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰。

4.按照权利要求1所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的检测方法，其特征在于：所述注射剂含量的测试方法如下：a.注射剂中野黄芩苷的含量测定：

取注射剂样品适量，精密称定或量取，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液＝

20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含野黄芩苷的限度不得少于12.0mg；

b.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re含量测定：

取注射剂样品适量，精密称定或量取，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品，加甲醇制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至60分钟，乙腈的比例由29％升至90％；流速为

1.0ml/min，检测波长203nm；以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.5mg；

c.注射剂中总皂苷的含量测定：

取注射剂样品适量，精密称定或量取，置量瓶中，加甲醇使溶解并定至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1对照品，同法制成对照品溶液；精密量取对照品溶液0.2ml、

0.4ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，供试品溶液1ml，分别加至10ml具塞试管中，水浴蒸干，取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴冷却2分钟，精密加冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，采用分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含总皂苷以人参皂苷Rg1计，不得少于8.0mg；

d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定：

取注射剂样品适量，精密称定或量取，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品，同法制成对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝

53∶47为流动相，检测波长为208nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含麦冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′总和的限度不得少于0.11mg；

e、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定：

取注射剂样品适量，精密称定或量取，置圆底烧瓶中，用3％硫酸回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用三氯甲烷提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品，以甲醇制备对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算，以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含假叶树皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.01mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.03mg；

f、注射剂中党参炔苷的含量测定：

取注射剂样品适量，精密称定或量取，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取党参炔苷对照品，加甲醇制备对照溶液，按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含党参炔苷的限度不得少于0.1mg；

g.注射剂中总多糖含量测定：

单糖取注射剂样品适量，精密称定或量取，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入0.1mol/L的碘液25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得，每1ml的0.1mol/L碘液相当于9.008mg的无水葡萄糖，由此折算出每瓶单糖的含量；

总糖取注射剂样品适量，精密称定或量取，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加稀硫酸

25ml，加热回流4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入

0.1mol/L的碘液25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置

10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的0.1mol/L碘液相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；

以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；

每日用剂量的注射剂含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于70mg。

5.按照权利要求4所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的检测方法，其特征在于：除辅料外，所述注射剂的含量可测定成分，野黄芩苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、总皂苷、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、总多糖、党参炔苷、党参苷I全部或部分成分的总量在注射剂中占25％以上。

说明书

一种中药注射制剂的质量控制方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，属于医药技术的领域。

背景技术

[0002] 随着人类文明的发展，人们生活水平的提高，冠心病、心绞痛、脑中风等心脑血管疾病已成为人类的第二大杀手。开发心脑血管病类药物已成为制药业一项刻不容缓的艰巨任务。中医药治疗心脑血管疾病具有疗效确切、副作用小、成本低等优势。本申请人将中药灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬进行组配，研制了一种注射剂，它包括注射液、注射用无菌粉末、注射用浓溶液等剂型。按照重量组分计算，它由麦冬1-500份、人参或红参或党参1-300份、灯盏细辛1-1000份经提取精制并加适当辅料制作而成的注射剂，或是由相应重量份药材经提取后得到的提取物经精制并加适当辅料制作而成的注射剂。为了有效的控制产品的质量，满足生产的要求、保证生产的药物安全、可靠和疗效准确，本申请人建立了其质量标准。已知的灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬的化学成分有几十种。如果用其一、二种活性成分来说明其内在质量，具有一定的片面性，更不用说无药效性的指标成分了。因此，申请人不仅选取了灯盏细辛、红参或人参或党参和麦冬的活性成分或特征成分进行鉴别与含量测定，更建立了指纹图谱，对其物质群整体予以控制，从整体上有效的表征其质量。中药指纹图谱是指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。在现阶段，中药大多数的有效成分没有明确的情况下，指纹图谱对于有效控制中药材或中成药的质量，具有重要的意义。日本汉方药主要生产企业在20世纪80年代就已经在企业内部采用高效液相指纹图谱控制质量。德国、法国在对银杏叶提取物联合开发的过程中，发现银杏叶提取物的医疗作用是提取物所得物质群的整体作用结果，而对这样一个整体的质量控制，亦采用高效液相色谱法。美国FDA已经明确将指纹图谱作为草药混合物质群的质量控制方法。鉴别、含量测定、指纹图谱联合应用，覆盖面广，特异性强，所以十分必要对复方灯盏注射剂的质量控制方法进行研究。

发明内容

[0003] 本发明的目的是通过提供一种以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，利用本发明人提供的这种方法，能够有效控制以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量，对药品的生产进行具体的指导，同时提供的这种方法简单，精密度高，重现性好。

[0004] 本发明是这样构成的：

[0005] 一种以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于：该方法包括以下全部或部分内容：

[0006] (1)灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬等全部或部分成分的指纹图谱测试方法；

[0007] (2)灯盏细辛药材、红参或人参或党参药材、麦冬药材、野黄芩苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、党参炔苷、党参苷I等全部或部分成分的鉴别测试方法；

[0008] (3)野黄芩苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、总皂苷、总多糖、党参炔苷、党参苷I等全部或部分成分的含量测试方法。

[0009] 所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下指纹图谱中的全部或部分内容：

[0010] a.采用高效液相色谱法测试以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：

[0011] (1)供试品溶液的制备：取注射剂样品适量，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；

[0012] (2)参照物溶液的制备：取适量灯盏细辛的主要成分野黄芩苷对照品，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备参照物溶液；

[0013] (3)色谱条件：色谱柱采用硅烷键合硅胶为填料，流动相为乙腈或甲醇-水-0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～3％冰醋酸溶液或0.2％～3％甲酸溶液或0.03％～1％磷酸溶液＝10～70∶0～35∶30～90，梯度洗脱，流速为0.5～1.8ml/min、检测波长为190-400nm范围内的一个或几个，柱温为20～60℃；

[0014] (4)以灯盏细辛成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0015] (5)以上述方法作为注射剂中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0016] (6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；

[0017] b.采用高效液相色谱法测试以红参或人参或麦冬中一种或几种的成分特征为主的指纹图谱：

[0018] (1)供试品溶液的制备：取注射剂样品适量，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；

[0019] (2)参照物溶液的制备：取适量红参或人参或麦冬药材中的主要成分对照品，包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′中的一种或几种，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备参照物溶液；

[0020] (3)色谱条件：色谱柱采用硅烷键合硅胶为填料，流动相为乙腈或甲醇-水-0.008mol/L～0.25mol/L磷酸二氢钠溶液或0.008mol/L～0.25mol/L磷酸二氢钾溶液或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.01％～1.5％磷酸溶液＝16～72∶0～40∶10～80，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、检测波长为190-410nm范围内的一个或几个，柱温为20～50℃；

[0021] (4)以红参或人参或麦冬中一种或几种的成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0022] (5)以上述方法作为注射剂中以红参或人参或麦冬中一种或几种的成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0023] (6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；

[0024] c.采用高效液相色谱法测试以党参成分特征为主的指纹图谱：

[0025] (1)供试品溶液的制备：取注射剂样品适量，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；

[0026] (2)参照物溶液的制备：取适量党参药材中的主要成分对照品，包括党参炔苷、党参苷I、苍术内酯III中的一种或几种，以水或甲醇或乙醇中的一种或几种为溶剂，制备参照物溶液；

[0027] (3)色谱条件：色谱柱采用硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈或甲醇-水或0.01mol/L～0.2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～0.2mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～2％冰醋酸溶液或0.2％～2％甲酸溶液或0.02％～1％磷酸溶液＝10～90∶90～10，梯度或非梯度洗脱，流速为0.6～1.4ml/min、检测波长为190-390nm范围内的一个或几个，柱温为20～50℃；

[0028] (4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0029] (5)以上述方法作为注射剂中以党参成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0030] (6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00。

[0031] 所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下指纹图谱中的全部或部分内容：

[0032] a.采用高效液相色谱法测试灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：

[0033] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加甲醇提取，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0034] (2)参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

[0035] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为乙腈-水＝80∶20，流动相B为0.1％磷酸，梯度洗脱，从0分钟至60分钟，流动相A的比例由15％升至44％，流速为1.0ml/min，检测波长为270±2nm，柱温为30℃；

[0036] (4)以灯盏细辛成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0037] (5)以上述方法作为待测注射剂中灯盏细辛成分指纹图谱的测试手段；

[0038] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；

[0039] b.采用高效液相色谱法测定以红参或人参或麦冬中一种或几种的成分特征为主的指纹图谱：

[0040] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加水稀释或溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0041] (2)参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；

[0042] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈-水＝80∶20，梯度洗脱，从0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至60分钟，流动相B的比例由64％升至75％，流速为1.0ml/min，检测波长为203±2nm，柱温为40℃；

[0043] (4)以红参或人参或麦冬中一种或几种的成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0044] (5)以上述方法作为待测注射剂中红参或人参或麦冬中一种或几种的成分指纹图谱的测试手段；

[0045] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；

[0046] c.采用高效液相色谱法测试党参成分特征为主的指纹图谱：

[0047] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加95％乙醇提取，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0048] (2)参照物溶液的制备：取适量党参药材中的主要活性成分党参炔苷，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

[0049] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为水，B为乙腈，梯度洗脱，从0分钟至5分钟，流动相B的比例为15％，从5分钟至60分钟，流动相B的比例由15％升至50％，流速为1.0ml/min，检测波长为268±2nm，柱温为30℃；

[0050] (4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0051] (5)以上述方法作为待测注射剂中党参成分指纹图谱的测试手段；

[0052] (6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00。

[0053] 所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于：所述注射剂的鉴别方法包括以下全部或部分内容：

[0054] a.注射剂中灯盏细辛、野黄芩苷中一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

[0055] 取注射剂样品适量，以水或乙醇或甲醇中的一种或几种为溶剂提取，制备供试品溶液；取灯盏细辛对照药材，先除去酯溶性杂质，再参照供试品溶液制法，制成对照药材溶液；取野黄芩苷对照品，制备对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液适量、对照溶液中的一种或两种适量，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲酸或冰醋酸＝5～20∶0.5～5∶0.01～3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含三氯化铝或三氯化铁的显色剂，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

[0056] b.注射剂中野黄芩苷的高效液相色谱鉴别方法：

[0057] 取注射剂样品适量，以水或乙醇或甲醇中的一种或几种为溶剂提取，制备供试品溶液；取野黄芩苷对照品，制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝10～50∶50～80为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～60℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液适量，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，应具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0058] c.注射剂中麦冬药材、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元中一种或几种的薄层色谱鉴别方法：

[0059] 取注射剂样品适量，加水与强酸加热处理，再用醋酸乙酯或三氯甲烷或乙醚等酯溶性溶剂提取，制备供试品溶液；另取麦冬对照药材，参照供试品溶液制法制成对照药材溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元中的一种或几种，制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液适量、对照溶液中的一种或两种适量，分别点于同一硅胶薄层板上，以苯或甲苯或二甲苯-甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸＝60～100∶1～20∶0～3为展开剂，或以三氯甲烷或二氯甲烷-丙酮或丁酮＝2～6∶0.5～3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视，或喷以含硫酸的显色剂加热后检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0060] d.注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法：

[0061] 取注射剂样品适量，用水溶解或润湿后用正丁醇提取，制备供试品溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′中的一种或几种，制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液适量，分别点于同一硅胶薄层板上，以醋酸乙酯或醋酸丁酯或甲酸乙酯-甲醇或乙醇-水＝3～50∶1～15∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸的显色剂，加热至显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0062] e.注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的高效液相色谱鉴别：

[0063] 取注射剂样品适量，用水或甲醇或乙醇或流动相中的一种或几种为提取溶剂，制备供试品溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′中的一种或几种做为对照品，制备对照品溶液；，采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.4mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.4mol/L磷酸二氢钾溶液＝
10～80∶20～90为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～
60℃范围内，精密吸取供试品溶液及对照品溶液适量，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，应具与对照色谱保留时间一致的色谱峰；

[0064] f.注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的高效液相色谱鉴别：

[0065] 取注射剂样品适量，加水与强酸加热，再用三氯甲烷或醋酸乙酯提取，制备供试品溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷中的一种或几种，制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝30～92∶8～70为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内，精密吸取供试品溶液及对照品溶液适量，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，应具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0066] g.注射剂中红参或人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法：

[0067] 取注射剂样品适量，用正丁醇或乙醇或甲醇或水中的一种或几种为溶剂提取，必要时用三氯甲烷或醋酸乙酯或氨溶液除去杂质，制备供试品溶液；取红参或人参对照药材，参照供试品溶液的制备方法，制备对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品中的一种或几种，制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液适量、对照溶液中的一种或两种适量，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲醇或乙醇-水＝10～20∶0～60∶1～40∶0.02～30为展开剂，或以正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-水＝1～10∶2～10∶0.5～3展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸的显色剂，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0068] h.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的高效液相色谱鉴别：

[0069] 取注射剂样品适量，置量瓶中，用乙醇或甲醇或水中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品中的一种或几种为对照品，制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈或甲醇-水或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～3％冰醋酸溶液或0.2％～3％甲酸溶液或0.01％～
2％磷酸溶液＝15～90∶10～85，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为200～390nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内，精密吸取供试品溶液及对照品溶液适量，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，应具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0070] i.注射剂中党参药材、党参炔苷、党参苷I的薄层色谱鉴别方法：

[0071] 取注射剂样品适量，加水适量，再用正丁醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提取，制备供试品溶液；或取注射剂样品适量，进行柱层析，制备供试品溶液；另取党参对照药材，参照供试品溶液制法制成对照药材溶液；再取党参炔苷或党参苷I对照品中的一种或两种，制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液适量、对照溶液中的一种或两种适量，分别点于同一硅胶薄层板上，正丁醇或甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸或乙醇或甲醇-水1～10∶0.1～10∶0.05～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含硫酸的显色剂，加热，置紫外光灯或可见光下检视。供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0072] j.注射剂中党参炔苷、党参苷I的高效液相色谱鉴别方法：

[0073] 取注射剂样品适量，用乙醇或甲醇或水中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；以党参炔苷或党参苷I中的一种或两种制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝8～50∶50～92为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内，精密吸取供试品溶液及对照品溶液适量，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，应具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰。

[0074] 所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于：所述注射剂的鉴别方法是以下全部或部分内容：

[0075] a.注射剂中野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法：

[0076] 取注射剂样品适量，以甲醇为溶剂提取，制备供试品溶液；取野黄芩苷对照品，加甲醇溶解，制备对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含2％的三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

[0077] b.注射剂中野黄芩苷的高效液相色谱鉴别方法：

[0078] 取注射剂样品适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液＝20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别注入高效液相色谱仪；
供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0079] c.注射剂中麦冬药材、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法：

[0080] 取注射剂样品适量，加水与盐酸适量，加热水解，放冷，再用醋酸乙酯提取，提取液浓缩，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材，加水煎煮，水煮液同供试品溶液处理，制成对照药材溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品，加醋酸乙酯制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸＝80∶5∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0081] d.注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法：

[0082] 取注射剂样品适量，用水适量，用正丁醇萃取，萃取液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶5∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0083] e.注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的高效液相色谱鉴别：

[0084] 取注射剂样品适量，以甲醇为溶剂，制备供试品溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝53∶47为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液各15μl，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0085] f.注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法：

[0086] 取注射剂样品适量，加3％硫酸水解4小时，调节pH至中性，蒸干，残渣用三氯甲烷溶解，作为供试品溶液；另取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元，分别加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮＝4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0087] g.注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的高效液相色谱鉴别：

[0088] 取注射剂样品适量，加水适量，用3％硫酸回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用三氯甲烷提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝70∶30为流动相，检测波长为208nm，柱温30℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，具有与对照色谱保留时间一致的色谱峰；

[0089] h.注射剂中红参或人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法：

[0090] 取注射剂样品适量，加水适量，用氨水饱和的正丁醇提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；取红参或人参对照药材，加三氯甲烷回流提取，弃去三氯甲烷液，残渣加水饱和正丁醇提取，提取液加入氨试液，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶40∶22∶10在10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0091] i.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的高效液相色谱鉴别：

[0092] 取注射剂样品适量，以甲醇为溶剂，制备供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温在30℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0093] j.注射剂中党参药材、党参炔苷、党参苷I的薄层色谱鉴别方法：

[0094] 取注射剂样品适量，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，置C18固相萃取小柱(500mg，用甲醇、20％甲醇各10ml预洗)中，依次用20％甲醇、甲醇各5ml洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷、党参苷I对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝7∶1∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热5分钟，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

[0095] k.注射剂中党参炔苷、党参苷I的高效液相色谱鉴别方法：

[0096] 取注射剂样品适量，以甲醇为溶剂，制备供试品溶液；以党参炔苷、党参苷I对照品的甲醇溶液为对照，采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃，精密吸取供试品溶液及对照品溶液10μl，分别注入高效液相色谱仪；供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰。

[0097] 所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于：所述注射剂含量的测试方法应包括以下全部或部分内容：

[0098] a.注射剂中野黄芩苷的含量测定：

[0099] 取注射剂样品适量，以水或乙醇或甲醇中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；取野黄芩苷对照品，制备对照品溶液；采用薄层色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝8～50∶50～92为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温
20～60℃，以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂中含野黄芩苷的限度不得少于6.0mg；

[0100] b.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定：

[0101] 取注射剂样品适量，以甲醇或乙醇或水或流动相中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品制备对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈或甲醇-水或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～5％冰醋酸溶液或0.2％～5％甲酸溶液或0.05％～2％磷酸溶液＝15～90∶10～85，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为200～400nm范围内的一个或几个，柱温在20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂样品含人参皂苷Rg1的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.25mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于1.25mg；

[0102] c.注射剂中总皂苷的含量测定：

[0103] 取注射剂样品适量，以甲醇或乙醇或水或流动相中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；取人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′作为对照品，同法制得对照品溶液；分别量取供试品溶液与对照品溶液适量，水浴蒸干，先后加香草醛-冰醋酸溶液、高氯酸，摇匀，加热，放冷后加冰醋酸，摇匀，以随行溶剂为空白，采用分光光度法，选400～700nm中的一个或几个波长处测定吸收度，以外标法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含总皂苷以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′计，不得少于6.0mg；

[0104] d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定：

[0105] 取注射剂样品适量，以甲醇或乙醇或水或流动相中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品，同法制得对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇或乙腈-水或或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝20～80∶20～80，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含麦冬皂苷B的限度不得少于0.025mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.025mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.005mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的总和的限度不得少于0.055mg；

[0106] e.注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定：

[0107] 取注射剂样品适量，加水与强酸加热水解，再用三氯甲烷或醋酸乙酯等酯溶性溶剂提取，制备供试品溶液；假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元，加甲醇或乙醇制成对照品溶液，按高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～
0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝30～95∶5～
70为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含假叶树皂苷元的限度不得少于0.005mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.005mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.005mg；含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.015mg；

[0108] f.注射剂中党参炔苷、党参苷I的含量测定：

[0109] 取注射剂样品适量，置量瓶中，用乙醇或甲醇或水中的一种或几种为溶剂，制备供试品溶液；以党参炔苷或党参苷I中的一种或两种制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.1％～3％冰醋酸溶液或0.1％～3％甲酸溶液或0.02％～2％磷酸溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～0.5mol/L磷酸二氢钾溶液＝10～50∶50～90为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含党参炔苷的限度不得少于0.05mg。

[0110] g.注射剂中总多糖含量测定：

[0111] 单糖取注射剂样品适量，置碘量瓶中，加水适量，调PH值至中性，精密加入碘液适量，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液适量，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置，加稀硫酸适量，立即用硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加入淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，由此折算出每瓶单糖的含量；

[0112] 总糖取注射剂样品适量，置碘量瓶中，加水与强酸加热水解，放冷，加酚酞指示液，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液适量，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液适量，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置，加稀硫酸适量，立即用硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；

[0113] 以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；

[0114] 每日用剂量的注射剂含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于35mg。

[0115] 所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于：所述注射剂含量的测试方法是以下一种或几种方法：

[0116] a.注射剂中野黄芩苷的含量测定：

[0117] 取注射剂样品适量，精密称定或量取，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液＝20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含野黄芩苷的限度不得少于12.0mg；

[0118] b.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re含量测定：

[0119] 取注射剂样品适量，精密称定或量取，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品，加甲醇制备对照品溶液；采用高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至60分钟，乙腈的比例由29％升至90％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm；以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.5mg；

[0120] c.注射剂中总皂苷的含量测定：

[0121] 取注射剂样品适量，精密称定或量取，置量瓶中，加甲醇使溶解并定至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1对照品，同法制成对照品溶液；精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，供试品溶液1ml，分别加至10ml具塞试管中，水浴蒸干，取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，60℃水浴上加热
15分钟，取出，立即以冰水浴冷却2分钟，精密加冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，采用分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含总皂苷以人参皂苷Rg1计，不得少于8.0mg；

[0122] d.注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定：

[0123] 取注射剂样品适量，精密称定或量取，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品，同法制成对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝53∶47为流动相，检测波长为208nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含麦冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′总和的限度不得少于0.11mg；

[0124] e.注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定：

[0125] 取注射剂样品适量，精密称定或量取，置圆底烧瓶中，用3％硫酸回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用三氯甲烷提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品，以甲醇制备对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算，以外标一点法或标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含假叶树皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.01mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；
含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.03mg；

[0126] f.注射剂中党参炔苷的含量测定：

[0127] 取注射剂样品适量，精密称定或量取，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取党参炔苷对照品，加甲醇制备对照溶液，按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃；以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含党参炔苷的限度不得少于0.1mg。

[0128] g.注射剂中总多糖含量测定：

[0129] 单糖取注射剂样品适量，精密称定或量取，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖)，由此折算出每瓶单糖的含量；

[0130] 总糖取注射剂样品适量，精密称定或量取，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加稀硫酸25ml，加热回流4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；

[0131] 以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；

[0132] 每日用剂量的注射剂含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于70mg。

[0133] 所述的以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于：除辅料外，所述注射剂的含量可测定成分，野黄芩苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、总皂苷、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、总多糖、党参炔苷、党参苷I等全部或部分成分的总量在注射剂中占25％以上。

[0134] 与现有技术相比，本发明能更加完善的控制以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂产品的质量。中药成分复杂，如果只用其中一、两种成分来说明其内在质量，具有一定的片面性，更无法判断无药效的指标成分。因此本申请人制定了鉴别、含量测定、指纹图谱三类质量控制方法，每一类又包括具体的方法若干。处方中每味药材所含的化学成分复杂，并且制剂成型后相互干扰，对鉴别、含量测定、指纹图谱均会造成较大影响。原来曾适用于单味药材的鉴别、含量测定或指纹图谱测试方法，在用于测试含有该药材的复方制剂时往往无法实施。因此，复方制剂的质量控制方法必须在原单味药材相应方法的基础上作以较大改进，或放弃原方法而建立完全不同的新方法。也就是说，本发明所述的质控方法并非是处方中单味药材质控方法的简单叠加，而是经大量试验研究后发明的。

[0135] 通过实验证明，本发明质量控制方法对以灯盏细辛、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂产品的质量控制更为有效，方法精密度、稳定性均较高。

[0136] 实验例1注射剂用无菌粉末中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱的制备[0137] 1.色谱柱的选择

[0138] 研究过程中，选用了常规的硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱，分别试用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS三种牌号的色谱柱多种，结果显示Diamonsil ODS(C18，250mm×4.6mm，5μm)色谱柱分离效果最好。

[0139] 2.流动相的选择

[0140] 研究过程中分别考察了(1)乙腈-水(20∶80)；(2)甲醇-水(50∶50)；(3)甲醇-0.1％冰醋酸(梯度洗脱)；(4)乙腈-水-5％冰醋酸(梯度洗脱)；(5)甲醇-水-0.005moL/L磷酸二氢钠(梯度洗脱)；(6)乙腈-水-0.1％磷酸(梯度洗脱)等
6种流动相系统；结果显示流动相(1)条件下，峰形拖尾，分离不好；流动相(2)条件下，峰形拖尾，峰与峰重叠较多；流动相(3)条件下，1小时内出峰较少，仍有不少组分滞留在后出峰；流动相(4)、(5)、(6)条件下，组分比例在10～70∶0～35∶30～90效果均较佳；
最佳条件为：流动相A为乙腈-水＝80∶20，流动相B为0.1％磷酸，梯度洗脱，从0分钟至60分钟，流动相A的比例由15％升至44％，流速为1.0ml/min，检测波长为270±2nm，柱温为30℃，在该条件下，峰形好，出峰快而完全且分布均匀。

[0141] 3.检测波长的确定

[0142] 在以上可行的色谱条件下，以二极管阵列检测器绘制了波长在190-400nm的三维指纹图谱，结果样品洗脱后在多个波长下均有明显的指纹图谱，而以270nm下色谱峰较多且分离良好，多数峰吸收度较高，基线平稳，故最终选用270nm作为最佳检测波长。

[0143] 4.仪器、色谱柱及积分参数

[0144] 4.1仪器参数：选用了液相色谱分析领域主流配置和性能良好的Agilent1100系列高效液相色谱仪，Chemstation色谱工作站，柱温40℃，流速1.0ml/min。

[0145] 4.2积分参数：Slope Sensitivity：1，peak width：0.05，最小峰面积为参照物(S)峰峰面积的5％，最小峰高为S峰峰高的5％。如此设定可以避免一些很小面积的色谱峰(单峰面积占总峰面积小于0.5％)的计算，同时保证与参照物的相关性。

[0146] 5.供试品溶液的制备

[0147] 精密称取本品适量，加甲醇制成每1ml含12mg的溶液，即得.

[0148] 6.参照物溶液的制备

[0149] 野黄芩苷为灯盏细辛主要活性成分之一，其积分面积在指纹图谱中所占比例较大且较稳定，同时兼顾中间体和药材的研究，因此选定野黄芩苷作为参照物。

[0150] 7.指纹图谱及技术参数

[0151] 根据10批样品制定标准指纹图谱，将供试品指纹图谱与标准指纹图谱比较，相似度均在0.90～1.00之间。

[0152] 实验例2注射用无菌粉末中以红参和麦冬成分特征为主的指纹图谱的制备[0153] 1.色谱柱的选择

[0154] 研究过程中，选用了常规的烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱，分别试用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS三种牌号的色谱柱多种，结果显示Diamonsil ODS(C18，4.6mm×200mm，5μm)色谱柱分离效果最好。

[0155] 2.流动相的选择

[0156] 研究过程中分别考察了(1)乙腈-水(15∶85)；(2)甲醇-水(40∶60)；(3)乙腈-0.001moL/L磷酸二氢钾(梯度洗脱)；(4)乙腈-水-1％甲酸(梯度洗脱)；(5)乙腈-水-0.05moL/L磷酸二氢钾(梯度洗脱)；(6)甲醇-水-0.2％磷酸(梯度洗脱)等6种流动相系统；结果显示流动相(1)条件下，出峰时间较长，峰形拖尾，分离不好；流动相(2)条件下，出峰时间较短，峰与峰重叠较多，峰形较差；流动相(3)条件下，峰形较差；流动相(4)、(5)、(6)条件下，组分比例在16～72∶0～40∶10～80效果均较佳；最佳条件为：流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈-水＝80∶20，梯度洗脱，从
0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至60分钟，流动相B的比例由64％升至75％，流速为1.0ml/min，检测波长为203±2nm，柱温为40℃；

[0157] 3.检测波长的确定

[0158] 在以上可行的色谱条件下，以二极管阵列检测器绘制了波长在190-410nm的三维指纹图谱，结果样品洗脱后在多个波长下均有明显的指纹图谱，而以203nm下色谱峰较多且分离良好，多数峰吸收度较高，基线平稳，故最终选用203nm作为最佳检测波长。

[0159] 4.仪器、色谱柱及积分参数

[0160] 4.1仪器参数：选用了液相色谱分析领域主流配置和性能良好的Agilent1100系列高效液相色谱仪，Chemstation色谱工作站。色谱柱为Diamonsil ODS(4.6mm×200mm，5μm)；柱温40℃，流速1.0ml/min。

[0161] 4.2积分参数：Slope Sensitivity：1，peak width：0.05，最小峰面积为参照物(S)峰峰面积的5％，最小峰高为S峰峰高的5％。如此设定可以避免一些很小面积的色谱峰(单峰面积占总峰面积小于0.5％)的计算，同时保证与参照物的相关性。

[0162] 5.供试品溶液的制备

[0163] 精密称取本品适量，加水制成每1ml含50mg的溶液，即得.

[0164] 6.参照物溶液的制备

[0165] 人参皂苷Rg1为红参主要活性成分之一，其积分面积在指纹图谱中所占比例较大且较稳定，同时兼顾中间体和药材的研究，因此选定人参皂苷Rg1作为参照物。

[0166] 7.指纹图谱及技术参数

[0167] 根据10批样品制定标准指纹图谱，将供试品指纹图谱与标准指纹图谱比较，相似度均在0.90～1.00之间。

[0168] 实验例3注射用浓溶液中灯盏细辛、野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法

[0169] 为了突出灯盏细辛的特征，选择以野黄芩苷作为其特征斑点，但是制剂中存在较多与野黄芩苷结构相近、极性相似的成分。例如人参中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re等成分，麦冬中的麦冬皂苷B、麦冬皂甙D等成分。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的薄层效果。薄层色谱法效果优劣的关键因素为展开条件，特别是展开剂的组成。因此，试验筛选了多种展开条件，部分展开条件与结果见表1。

[0170] 表1注射用浓溶液中灯盏细辛与野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法

[0171] 条件 结果

[0172] 氯仿-甲醇＝9∶1 硅胶G薄层板 对照品拖尾

[0173] 醋酸乙酯-甲酸-水＝15∶3∶1 硅胶H薄层板 阴性有干扰

[0174] 甲醇-醋酸乙酯-甲酸-水＝20∶5∶1∶1 对照品展开至前沿[0175] 聚酰胺薄膜

[0176] 乙醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶5∶0.01 分离较清晰，Rf值适，中阴性无干

[0177] 聚酰胺薄膜 扰

[0178] 甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1 分离清晰，Rf值适中，阴性无干扰[0179] 聚酰胺薄膜

[0180] 甲苯-醋酸乙酯-甲酸＝8∶8∶1 分离较清晰，Rf值适中，阴性无干[0181] 硅胶G薄层板 扰

[0182] 经过筛选，确定了最佳条件为：甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1为展开剂，聚酰胺薄膜为固定相；在此条件下，野黄芩苷的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

[0183] 实验例4注射用无菌粉末中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法

[0184] 为了突出灯盏细辛的特征，选择以野黄芩苷作为其特征峰，但是制剂中存在较多与野黄芩苷结构相近、极性相似的成分。例如人参中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re等成分，麦冬中的麦冬皂苷B、麦冬皂甙D等成分。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的色谱效果。液相色谱法效果优劣的关键因素为洗脱条件，特别是流动相的组成。因此，试验筛选了多种洗脱条件，部分洗脱条件与结果见表2。

[0185] 表2注射用无菌粉末中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法

[0186] 条件 结果

[0187] 甲醇-水＝80∶20 出峰时间过快，峰形拖尾[0188] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0189] 乙腈-水＝40∶60 峰形拖尾

[0190] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0191] 甲醇-0.2％冰醋酸水溶液＝60∶30 阴性有干扰

[0192] 八烷基硅烷键合硅胶

[0193] 甲醇-四氢呋喃-0.2％磷酸水溶液＝14∶14∶72 峰形不太对称[0194] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0195] 乙腈-四氢呋喃-0.2％磷酸水溶液＝14∶14∶72 峰有分叉，

[0196] 二烷基硅烷键合硅胶

[0197] 甲醇-2mol/L磷酸二氢钠溶液＝30∶70 峰形较好，阴性无干扰[0198] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0199] 乙腈-0.1％磷酸水溶液＝20∶80 保留时间适中，峰行尖锐，对称，

[0200] 十八烷基硅烷键合硅胶 阴性无干扰

[0201] 经过筛选，确定了最佳条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-0.1％磷酸水溶液＝20∶80为流动相；在此条件下，野黄芩苷保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

[0202] 实验例5注射液中麦冬的薄层色谱鉴别方法

[0203] 为了突出麦冬的特征，选择以麦冬药材为对照，但是由于制剂中存在较多与麦冬所含成分结构相近、极性相似的成分。例如人参中的皂甙类、多糖成分，灯盏细辛中的黄酮类成分等。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的薄层效果。薄层色谱法效果优劣的关键因素为展开条件，特别是展开剂的组成。因此，试验筛选了多种展开条件，部分展开条件与结果见表3。

[0204] 表3注射液中麦冬的薄层色谱鉴别方法

[0205] 条件 结果

[0206] 苯-冰醋酸＝10∶1硅胶GF254薄层板 对照品未展开甲苯-甲醇-冰醋酸＝5∶10∶3)硅胶H薄层板 对照品展开至前沿

[0207] 氯仿-丁酮＝1∶6硅胶G薄层板 对照品展开至前沿

[0208] 氯仿-甲醇-甲酸-水＝5∶2∶3∶1 阴性有干扰

[0209] 硅胶G薄层板

[0210] 三氯甲烷-丙酮＝4∶1硅胶H薄层板 分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

[0211] 甲苯-甲醇-冰醋酸＝10∶0.1∶0.1 分离较清晰，阴性无干扰[0212] 硅胶GF254薄层板

[0213] 甲苯-甲醇-冰醋酸＝80∶5∶0.1 分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

[0214] 硅胶GF254薄层板

[0215] 经过筛选，确定了最佳条件：以硅胶GF254薄层板为固定相，以甲苯-甲醇-冰醋酸(80∶5∶0.1)为展开剂；在此条件下，主斑点的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

[0216] 实验例6注射用浓溶液中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法

[0217] 为了突出麦冬的特征，选择以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′为特征斑点，但是由于制剂中存在较多与麦冬所含成分结构相近、极性相似的成分。例如人参中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re等成分，灯盏细辛中的野黄芩苷等成分。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的薄层效果。薄层色谱法效果优劣的关键因素为展开条件，特别是展开剂的组成。因此，试验筛选了多种展开条件，部分展开条件与结果见表4。

[0218] 表4注射用浓溶液中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法[0219] 条件 结果

[0220] 醋酸乙酯-乙醇(1∶1)硅胶G薄层板 分离不清晰

[0221] 丙酮-甲醇-水＝10∶10∶1硅胶H薄层板 对照品展开至前沿

[0222] 醋酸乙酯-甲醇-水(10-3-0.2)硅胶G薄层板 对照品未分开，阴性有干扰[0223] 氯仿-甲醇＝15∶10硅胶GF254薄层板 对照品未展开

[0224] 醋酸乙酯-丙酮-水(20-3-1)硅胶GF254薄层板 阴性有干扰

[0225] 醋酸丁酯-甲醇-水＝10∶2∶3 分离清晰，阴性无干扰[0226] 硅胶H薄层板

[0227] 醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶5∶1 分离清晰，Rf值适中，阴性无干

[0228] 硅胶G薄层板 扰

[0229] 经过筛选，确定了最佳条件：硅胶G薄层板为固定相，以醋酸乙酯-甲醇-水(15∶5∶1)为展开剂；在此条件下，麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′斑点的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

[0230] 实验例7注射剂用无菌粉末中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的液相色谱鉴别方法

[0231] 为了突出麦冬的特征，选择了麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′结构相近、极性相似的成分。例如人参中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re等成分，灯盏细辛中的野黄芩苷等成分。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的色谱效果。液相色谱法效果优劣的关键因素为洗脱条件，特别是流动相的组成。因此，试验筛选了多种洗脱条件，部分洗脱条件与结果见表5。

[0232] 表5注射剂用无菌粉末中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的液相色谱鉴别方法

[0233] 条件 结果

[0234] 甲醇-水＝8∶92 出峰时间过长

[0235] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0236] 乙腈-水＝95∶5 出峰时间过快

[0237] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0238] 甲醇-2％冰醋酸水溶液＝85∶15 阴性有干扰

[0239] 八烷基硅烷键合硅胶

[0240] 甲醇-0.2％磷酸酸水溶液＝95∶5 阴性有干扰

[0241] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0242] 乙腈-1％冰醋酸水溶液＝20∶80 分离清晰，阴性无干扰

[0243] 八烷基硅烷键合硅胶

[0244] 乙腈-0.5％磷酸酸水溶液＝95∶5 样品分离不清晰，出峰过快

[0245] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0246] 乙腈-水＝53∶47 保留时间适中，分离清晰，阴性无干扰[0247] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0248] 经过筛选，确定了最佳条件：十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-水(53∶47)为流动相，在此条件下，麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

[0249] 实验例8注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法

[0250] 为了突出人参的特征，选择以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf作为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf结构相近、极性相似的成分。例如麦冬中的麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′等成分，灯盏细辛中的野黄芩苷等成分。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的薄层效果。薄层色谱法效果优劣的关键因素为展开条件，特别是展开剂的组成。因此，试验筛选了多种展开条件，部分展开条件与结果见表6。

[0251] 表6注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法

[0252] 条件 结果

[0253] 甲酸乙酯-甲醇-丙酮＝2∶4∶1硅胶G薄层板 分离不清晰

[0254] 正丁醇-甲酸乙酯-水＝10∶1∶5下层溶液硅胶H 对照品展开至前沿[0255] 薄层板

[0256] 氯仿-甲酸乙酯-乙醇-水＝15∶30∶10∶10在 分离清晰，阴性无干扰[0257] 10℃以下放置的下层溶液硅胶H薄层板

[0258] 氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水＝10∶40∶15∶5 对照品展开至前沿[0259] 在室温放置的下层溶液硅胶G薄层板

[0260] 正丁醇-醋酸乙酯-水＝4∶1∶5的上层液 分离清晰，阴性无干扰[0261] 硅胶G薄层板

[0262] 三氯甲烷-甲醇-水＝75∶20∶2 分离清晰，阴性无干扰[0263] 硅胶G薄层板

[0264] 氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶40∶22∶10在 分离清晰，Rf值适中，阴性无

[0265] 10℃以下放置的下层溶液硅胶G薄层板 干扰

[0266] 经过筛选，确定了最佳条件：以硅胶G薄层板为固定相，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下层溶液为展开剂；在此条件下，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

[0267] 实验例9注射剂用无菌粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的液相色谱鉴别方法

[0268] 为了突出红参或人参的特征，选择了人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re结构相近、极性相似的成分，例如麦冬中的麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′等成分，灯盏细辛中的野黄芩苷等成分。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的色谱效果。液相色谱法效果优劣的关键因素为洗脱条件，特别是流动相的组成。因此，试验筛选了多种洗脱条件，部分洗脱条件与结果见表7。

[0269] 表7注射剂用无菌粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的液相色谱鉴别方法

[0270] 条件 结果

[0271] 甲醇-水＝95∶5 出峰时间过快

[0272] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0273] 乙腈-1％甲酸溶液＝10∶90 出峰时间过长

[0274] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0275] 甲醇-2％冰醋酸溶液＝15～60∶40～85，梯 分离良好，阴性无干扰[0276] 度洗脱；八烷基硅烷键合硅胶

[0277] 甲醇-0.2％磷酸酸水溶液＝50∶50 阴性有干扰

[0278] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0279] 甲醇-水＝20∶80 分离良好，阴性无干扰，保留时间较长

[0280] 八烷基硅烷键合硅胶

[0281] 乙腈-水＝19～40∶60～81，梯度洗脱 保留时间适中，分离良好，阴性无干扰

[0282] 十八烷基硅烷键合硅胶

[0283] 乙腈-1mol/L磷酸二氢钾溶液＝19～90∶ 分离良好，阴性无干扰[0284] 10～81，梯度洗脱十八烷基硅烷键合硅胶

[0285] 经过筛选，确定了最佳条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；在此条件下，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

[0286] 实验例10注射用无菌粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定方法学考察[0287] 1.仪器与试药

[0288] 仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，chemstationsys工作站。TU-1800SPC紫外分光光度计。

[0289] 试药：人参皂苷Rg1、人参皂苷Re：中国药品生物制品检定所；

[0290] 2.检测波长的选择：

[0291] 精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re，分置10ml量瓶中，加甲醇稀释制成每1ml含0.5mg的溶液，在200-400nm波长范围扫描。人参皂苷Rg1、人参皂苷Re均在203nm处有最大吸收，因此选择203nm作为含量测定的检测波长。

[0292] 3.色谱条件：

[0293] Dikma ODS(4.6mm×250mm，5um)；流动相：乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至60分钟，乙腈的比例由29％升至90％；检测波长为203nm；流速：1.0ml/min。

[0294] 4.阴性干扰试验为考察其它药材和辅料是否干扰人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的测定，取阴性对照品(缺红参)与供试品溶液同法制成阴性对照品溶液并测定。结果表明，阴性样品对人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的含量测定无干扰。

[0295] 5.线性关系

[0296] 精密量取对照品混合溶液(每1ml分别含人参皂苷Rg10.8392mg，人参皂苷Re0.7384mg)0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分置10ml量瓶中，加甲醇定至刻度，摇匀，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，结果见表8与表9。

[0297] 表8人参皂苷Rg1线性关系

[0298] 编号 人参皂苷Rg1量(μg)Y 峰面积X

[0299] 1 0.4196 74808

[0300] 2 0.8392 149986

[0301] 3 1.2588 224265

[0302] 4 1.6784 299711

[0303] 5 2.0980 375094

[0304] 回归方程Y＝0.000006X+0.001778

[0305] 相关系数γ＝0.9999

[0306] 人参皂苷Rg1在0.4196～2.0980μg范围内线性良好。

[0307] 经过计算，人参皂苷Rg1标准曲线为一过原点的直线，因此选择外标一点法测定人参皂苷Rg1的含量。

[0308] 表9人参皂苷Re线性关系

[0309] 编号 人参皂苷Re量(μg)Y 峰面积X

[0310] 1 0.3692 50774

[0311] 2 0.7384 101663

[0312] 3 1.1076 152753

[0313] 4 1.4768 203422

[0314] 5 1.8460 254691

[0315] 回归方程Y＝0.000007X+0.001577

[0316] 相关系数γ＝0.9999

[0317] 人参皂苷Re在0.3692～1.8460μg范围内线性良好。

[0318] 经过计算，人参皂苷Re标准曲线为一过原点的直线，因此选择外标一点法测定人参皂苷Re的含量。

[0319] 6.精密度试验精密吸取对照品混合溶液(每1ml分别含人参皂苷Rg10.100704mg，人参皂苷Re0.088608mg)10μl，注入液相色谱仪，连续进样测定5次，考察对照品溶液的精密度，测定结果见表10。

[0320] 表10人参皂苷Rg1和人参皂苷Re对照品精密度试验

[0321] 试验次数 1 2 3 4 5 平均值 RSD(％)

[0322] 人参皂苷Rg1峰面积 173185 172264 171957 172221 173085172542 0.32

[0323] 人参皂苷Re峰面积 122714 121007 122315 122084 123157122255 0.66

[0324] 结果表明，精密度良好。

[0325] 7.供试品溶液稳定性试验

[0326] 供试品溶液的稳定性试验取本品5瓶，取内容物，混匀，从中精密称取0.48577g，至10ml量瓶中，按正文供试品溶液的制备法项下操作，得供试品溶液，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、10、24小时重复测定，考察供试品溶液的稳定性，测定结果见表11。

[0327] 表11供试品稳定性试验

[0328] 时间(h) 0 2 6 10 24 平均值 RSD(％)

[0329] 人参皂苷Rg1(mg/瓶)1.326 1.338 1.297 1.305 1.348 1.3231.63

[0330] 人参皂苷Re(mg/瓶) 0.881 0.856 0.873 0.864 0.879 0.8711.21

[0331] 合计(mg/瓶) 2.207 2.194 2.170 2.169 2.227 2.1931.13

[0332] 结果表明，供试品溶液在24小时内稳定性良好。

[0333] 8.重复性试验取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，取约0.5g(共5份)，精密称定，分至10ml量瓶中，按正文供试品溶液的制备法项下操作，得供试品溶液，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定结果见表12。

[0334] 表12重复性试验

[0335] 编号 1 2 3 4 5 平均值 RSD(％)

[0336] 人参皂苷Rg1(mg/瓶)1.334 1.317 1.329 1.341 1.308 1.3261.00

[0337] 人参皂苷Re(mg/瓶) 0.849 0.862 0.853 0.844 0.867 0.8551.10

[0338] 合计(mg/瓶) 2.183 2.179 2.182 2.185 2.175 2.1811.79

[0339] 结果表明，供试品重复性良好。

[0340] 9.加样回收率试验取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，取约0.25g(共5份)，精密称定，分至10ml量瓶中；精密吸取对照品混合溶液(每1ml分别含人参皂苷Rg10.6852mg，人参皂苷Re0.4728mg)1ml，分置上述10ml量瓶中，加甲醇适量超声处理使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。回收率测定与计算结果，人参皂苷Rg1见表13，人参皂苷Re见表14。

[0341] 表13人参皂苷Rg1回收率

[0342] 供试品称量 供试品中纯 纯品加入量 测量值 回收率[0343] 编号

[0344] (g) 品量(mg) (mg) (mg) (％)[0345] 1 0.25554 0.6808 0.6852 1.351 97.81[0346] 2 0.26013 0.6930 0.6852 1.365 98.07[0347] 3 0.24795 0.6605 0.6852 1.325 96.98[0348] 4 0.25084 0.6682 0.6852 1.346 98.92[0349] 5 0.25703 0.6847 0.6852 1.353 97.53[0350] 人参皂苷Rg1平均回收率＝97.86％ RSD＝0.73％

[0351] 表14人参皂苷Re回收率

[0352] 供试品称量 供试品中纯 纯品加入量 测量值 回收率[0353] 编号

[0354] (g) 品量(mg) (mg) (mg) (％)[0355] 1 0.25554 0.4390 0.4728 0.9042 98.39[0356] 2 0.26013 0.4469 0.4728 0.9171 99.45[0357] 3 0.24795 0.4260 0.4728 0.8896 98.05[0358] 4 0.25084 0.4309 0.4728 0.8967 98.52[0359] 5 0.25703 0.4416 0.4728 0.9105 99.18[0360] 人参皂苷Re平均回收率＝98.72％RSD＝0.59％

[0361] 10.三批注射剂样品含量测定取注射剂样品三批，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，见表15。

[0362] 表15三批中试样品人参皂苷Rg1、人参皂苷Re含量测定

[0363] 批号 人参皂苷Rg1(mg/瓶) 人参皂苷Re(mg/瓶) 合计(mg/瓶)[0364] 040404 1.318 0.834 2.152

[0365] 040405 1.334 0.902 2.236

[0366] 040406 1.417 0.915 2.332

[0367] 根据三批样品含量测定结果暂定，本品每瓶含人参皂苷Rg1(C42H72O14)和人参皂苷Re(C48H82O18)的总量不得少于1.60mg。

[0368] 经方法学考察，建立了注射剂用无菌粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定方法的最佳条件：

[0369] 色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水为流动相，梯度洗脱，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至60分钟，乙腈的比例由29％升至90％；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000。

[0370] 对照品溶液的制备取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml各含0.05mg的溶液，摇匀，即得。

[0371] 供试品溶液的制备取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，从中取约0.5g，精密称定，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[0372] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[0373] 本品每瓶含人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的总量不得少于1.60mg。

[0374] 实验例11注射用浓溶液中总皂苷含量测定方法学考察

[0375] 1.仪器与试药

[0376] 仪器：紫外/可见分光光度仪普析通TU-1810SPC

[0377] 试药：人参皂苷Rg1中国药品生物制品检定所

[0378] 2.检测波长的选择

[0379] 精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，摇匀，精密量取1.0ml，置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，在700～400nm波长范围内进行扫描，结果表明，人参皂苷Rg1在547nm处有最大吸收，空白无干扰，因此选择547nm为分光光度法测定注射剂中总皂苷的检测波长。

[0380] 3.线性关系的考察精密量取人参皂苷Rg1对照品溶液(0.0702mg/ml)0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)，在547nm的波长处测定吸收度，结果见表16。

[0381] 表16人参皂苷Rg1标准曲线测定数据

[0382] 编号 人参皂苷Rg1(μg)Y 吸收度X

[0383] 1 28.08 0.175

[0384] 2 56.16 0.341

[0385] 3 84.24 0.506

[0386] 4 112.32 0.684

[0387] 5 140.40 0.858

[0388] 回归方程Y＝164.264599X+0.005113；

[0389] 相关系数γ＝0.9997

[0390] 人参皂苷Rg1在28.08～140.40μg范围线性良好。

[0391] 经过计算，人参皂苷Rg1标准曲线为一过原点的直线，因此选择外标一点法测定总皂苷的含量

[0392] 4.精密度试验精密量取人参皂苷Rg1对照品溶液(0.0702mg/ml)1.0ml，置10ml具塞试管中，按正文测定法项下操作，连续测定5次，结果见表17。

[0393] 表17精密度实验

[0394] 编号 1 2 3 4 5 X平均 RSD％

[0395] 吸光度 0.426 0.421 0.422 0.435 0.424 0.426 1.31[0396] 结果表明，精密度良好。

[0397] 5.稳定性试验

[0398] 对照品溶液的稳定性试验精密量取人参皂苷Rg1对照品溶液(0.0702mg/ml)1.0ml，置10ml具塞试管中，按正文测定法项下操作，分别在0、5、10、20、30分钟时测定，结果见表18。

[0399] 表18对照品溶液稳定性实验

[0400] 时间(min) 0 5 10 20 30 X平均 RSD％

[0401] 吸光度 0.426 0.421 0.422 0.435 0.424 0.426 1.31[0402] 结果表明，对照品溶液在30分钟内稳定。

[0403] 供试品溶液的稳定性实验精密量取本品0.5ml，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，按正文测定法项下进行操作，分别在0、5、10、20、30分钟时测定，结果见表19。

[0404] 表19供试品溶液稳定性实验

[0405] 时间(min) 0 5 10 20 30X 平均 RSD％

[0406] 总皂苷(mg/ml)12.172 12.054 12.228 12.194 12.112 12.1520.57

[0407] 结果表明，供试品溶液在30分钟内稳定。

[0408] 6、重复性试验精密量取本品0.5ml (共5份)，分置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，按正文测定法项下进行操作，测定，即得，结果见表20。

[0409] 表20重复性实验

[0410] 编号 1 2 3 4 5 X平均 RSD％

[0411] 总皂苷(mg/ml)12.206 12.168 12.194 12.010 12.042 12.1240.75

[0412] 结果表明，重复性良好。

[0413] 7、回收率试验采用加样回收法，精密量取本品0.25ml(共5份)，分置100ml量瓶中；精密量取人参皂苷Rg1对照品溶液(1.0852mg/ml)3ml，分置上述100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别从中精密量取1ml，分置具塞试管中，按正文测定法项下进行操作，以随行溶剂为空白，依法测定吸收度，计算，即得，结果见表21。

[0414] 表21加样回收率实验

[0415] 编号 供试品中纯品量 纯品加入量 测量值 回收率

[0416] (mg) (mg) (mg) (％)

[0417] 1 3.031 3.2556 6.226 98.13

[0418] 2 3.031 3.2556 6.268 99.43

[0419] 3 3.031 3.2556 6.209 97.62

[0420] 4 3.031 3.2556 6.141 95.53

[0421] 5 3.031 3.2556 6.226 98.14

[0422] 平均回收率＝97.77％RSD＝1.45％

[0423] 8.三批注射剂样品含量测定取注射剂样品三批，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，结果表22。

[0424] 表22射剂样品人参总皂苷含量测定

[0425] 批号 总皂苷(mg/ml)

[0426] 1批 12.374

[0427] 2批 12.668

[0428] 3批 13.024

[0429] 根据三批样品含量测定结果暂定，本品含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计不得少于8.0mg/ml。

[0430] 经方法学考察，建立了注射用浓溶液中总皂苷的含量测定方法的最佳条件：

[0431] 对照品溶液的制备取人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，摇匀，即得。

[0432] 供试品溶液的制备取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，从中精密量取约0.25ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得

[0433] 测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各1ml，分置10ml具塞试管中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，60℃水浴15分钟，取出，立即以冰水浴冷却2分钟，精密加冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)，在547nm的波长处测定吸收度，计算，即得。

[0434] 本品每ml含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计，不得少于8.0mg。

[0435] 实验例12注射用无菌粉末中野黄芩苷含量测定方法学考察

[0436] 1.仪器与试药

[0437] 仪器：高效液相色谱仪SHIMADZU 2010-Aht

[0438] 试药：野黄芩苷 中国药品生物制品检定所 842-200102

[0439] 2.检测波长的选择

[0440] 取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液，在200～600nm波长范围内扫描。结果表明，野黄芩苷在335nm处有最大吸收，且其它干扰峰吸收较小，选择335nm作为测定野黄芩苷含量的检测波长。

[0441] 3.色谱条件

[0442] 色谱柱：Diamonsil(钻石)C18(250×4.6mm 5μm)；流动相：乙腈-0.1％磷酸(20∶80)；流速：1.0ml/min；检测波长：335nm；柱温：30℃；进样量：10μl。根据上述条件得到野黄芩苷对照品、供试品色谱图，其理论板数大于5000，样品中野黄芩苷色谱峰与相近峰分离清晰完全，分离度均大于1.5。

[0443] 4.阴性干扰试验

[0444] 为考察其它药材是否干扰野黄芩苷的测定，取阴性对照品(缺灯盏花素)与供试品溶液同法制成阴性对照品溶液并测定。结果表明，阴性样品对野黄芩苷的含量测定无干扰。

[0445] 5.线性关系的考察

[0446] 精密量取野黄芩苷对照品溶液(0.8824mg/ml)0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定，结果见表23。

[0447] 表23野黄芩苷线性关系

[0448] 编号 野黄芩苷(μg)Y 峰面积X

[0449] 1 0.4412 741073

[0450] 2 0.8824 1483014

[0451] 3 1.3236 2223865

[0452] 4 1.7648 2964432

[0453] 5 2.2060 3706419

[0454] 回归方程：Y＝0.000001X-0.000076

[0455] 相关系数：γ＝0.9999

[0456] 结果表明，野黄芩苷在0.4412μg～2.2060μg之间线性关系良好。

[0457] 经过计算，野黄芩苷标准曲线为一过原点的直线，因此选择外标一点法测定野黄芩苷的含量。

[0458] 6.精密度试验精密吸取对照品溶液(0.105888mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，连续进样测定5次，考察对照品溶液精密度，测定结果表24。

[0459] 表24野黄芩苷标准品精密度试验

[0460] 试验次数 1 2 3 4 5 平均值 RSD(％)[0461] 峰面积 1770028 1759764 1761102 1767026 1778027 1767189 0.42[0462] 结果表明，对照品溶液精密度良好。

[0463] 7.供试品溶液稳定性试验

[0464] 取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，取约0.1g，精密称定，按正文供试品溶液制备和测定项下进行操作，分别在0、2、4、8、24小时进样测定，测定结果见表25。

[0465] 25供试品溶液稳定性试验

[0466] 时间(h) 0 2 4 8 24 平均值 RSD(％)

[0467] 含量(mg/瓶) 5.318 5.094 5.211 5.183 5.265 5.2141.63

[0468] 结果表明，供试品溶液在24小时内稳定性良好。

[0469] 8.重复性试验取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，从中取约0.1g(共5份)，精密称定，按正文供试品溶液制备和测定项下进行操作。结果见表26。

[0470] 表26重复性试验

[0471] 编号 1 2 3 4 5 平均值 RSD(％)[0472] 含量(mg/瓶) 5.174 5.205 5.131 5.246 5.309 5.213 1.31

[0473] 结果表明，重复性良好。

[0474] 9.加样回收率试验采用加样回收法，取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，从中取约50mg(共5份)，精密称定，分置10ml量瓶中；精密量取野黄芩苷对照品溶液(0.582mg/ml)1ml，分置上述10ml量瓶中，加甲醇适量超声处理使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定结果见表27。(样品中野黄芩苷的含量：10.474mg/g；野黄芩苷纯度按97.12％折算)

[0475] 表27野黄芩苷加样回收率试验

[0476] 供试品称量 供试品中纯品量 纯品加入量 测得量 回收率[0477] 编号

[0478] (mg) (mg) (mg) (mg) (％)[0479] 1 52.38 0.5486 0.5652 1.099 97.38[0480] 2 54.29 0.5686 0.5652 1.126 98.62[0481] 3 48.55 0.5085 0.5652 1.055 96.69[0482] 4 46.94 0.4916 0.5652 1.047 98.27[0483] 5 47.36 0.4960 0.5652 1.056 99.08[0484] 平均回收率＝98.01％，RSD＝0.98％。

[0485] 10.样品含量测定取本品样品三批，按正文所述方法处理，进样测定，结果见表28。

[0486] 表28 三批样品含量测定结果

[0487] 批号 野黄芩苷平均含量(mg/瓶)

[0488] 040404 5.094

[0489] 040405 5.122

[0490] 040406 5.278

[0491] 结论：根据三批样品含量测定结果暂定，本品每瓶含野黄芩苷(C21H18O12)不得少于4.0mg。

[0492] 经方法学考察，建立了注射剂用无菌粉末中野黄芩苷的含量测定方法的最佳条件：

[0493] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸溶液(20∶80)为流动相；检测波长为335nm。理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于5000。

[0494] 对照品溶液的制备取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

[0495] 供试品溶液的制备取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，从中取约0.1g，精密称定，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[0496] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[0497] 本品每瓶含野黄芩苷(C21H18O12)不得少于4.0mg。

[0498] 经方法学考察，建立了注射剂用无菌粉末中野黄芩苷的含量测定方法的最佳条件：

[0499] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸溶液(20∶80)为流动相；检测波长为335nm。理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于5000。

[0500] 对照品溶液的制备取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

[0501] 供试品溶液的制备取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，精密称取0.2g，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，超声5分钟，补足损失的甲醇，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

[0502] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[0503] 本品每瓶含野黄芩苷(C21H18O12)不得少于3.0mg。

[0504] 实验例13注射用浓溶液中总多糖的含量测定方法学考察

[0505] 1.线性关系考察

[0506] 精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品22.27mg、83.15mg、118.74mg、159.38mg、210.77mg，分置碘量瓶中，加蒸馏水60ml使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖(C6H12O6)。测定结果见表29。

[0507] 表29无水葡萄糖标准曲线

[0508] 编号 样品滴定液消耗体积(ml)X 无水葡萄糖(mg)Y

[0509] 1 2.51 22.27

[0510] 2 9.25 83.15

[0511] 3 13.29 118.74

[0512] 4 17.75 159.38

[0513] 5 23.51 210.77

[0514] 回归方程Y＝8.975682X-0.173496

[0515] 决定系数γ＝0.9999

[0516] 无水葡萄糖在22.27～210.77mg范围线性良好。

[0517] 2、重复性实验精密量取本品1ml(5份)，按正文测定法项下操作，测定，即得，测定结果表30。

[0518] 表30重复性实验

[0519] 编号 总糖(mg/ml) 单糖(mg/ml) 总多糖(mg/ml)

[0520] 1 114.42 47.18 67.24

[0521] 2 113.98 47.92 66.06

[0522] 3 116.26 48.08 68.18

[0523] 4 114.68 47.92 66.76

[0524] 5 113.98 47.48 66.50

[0525] 均值 114.66 47.72 66.95

[0526] RSD(％) 0.82 0.78 1.21

[0527] 3、回收率实验

[0528] 3.1总糖的回收率采用加样回收法，精密量取本品0.5ml，分置碘量瓶中；取在105℃干燥至恒重的无水葡萄糖约55mg，精密称定，分置上述碘量瓶中，加蒸馏水至60ml溶解后加稀硫酸25ml，加热回流4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖(C6H12O6)。结果见表31。

[0529] 表31总糖加样回收率试验

[0530] 编号 供试品中总糖量(mg) 无水葡萄糖加入量(mg )测量值(mg) 回收率(％)

[0531] 1 57.33 56.18 112.17 97.61[0532] 2 57.33 57.64 113.89 98.13[0533] 3 57.33 55.39 112.31 99.26[0534] 4 57.33 52.81 109.53 98.84[0535] 5 57.33 57.75 113.49 97.25[0536] 平均回收率＝98.22％；RSD＝0.85％。

[0537] 3.2单糖的回收率采用加样回收法，精密量取本品0.5ml，分置碘量瓶中；取在105℃干燥至恒重的无水葡萄糖约20mg，精密称定，分置上述碘量瓶中，加蒸馏水60ml使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液
4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖(C6H12O6)。结果见表32。

[0538] 表32单糖加样回收率试验

[0539] 编号 供试品中单糖量(mg) 无水葡萄糖加入量(mg) 测量值(mg) 回收率(％)

[0540] 1 23.86 22.47 45.71 97.24[0541] 2 23.86 21.95 45.40 98.13[0542] 3 23.86 24.68 47.78 96.92[0543] 4 23.86 22.73 46.17 98.15[0544] 5 23.86 20.98 44.64 99.05[0545] 平均回收率＝97.90％；RSD＝0.86％。

[0546] 4.样品的含量测定取本品中试样品三批，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，结果见表33。

[0547] 表33总多糖含量测定

[0548] 批 号总多糖含(mg/ml)

[0549] 1批 72.36

[0550] 2批 70.88

[0551] 3批 69.26

[0552] 根据三批样品测定结果暂定，本品含总多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计，不得少于40mg/ml。

[0553] 经方法学考察，建立了注射液中总多糖的含量测定方法的最佳条件：

[0554] 单糖取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，从中取精密量约1ml，置碘量瓶中，加蒸馏水60ml稀释，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖(C6H12O6)，由此折算出每ml注射剂中单糖的含量。

[0555] 总糖取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，从中取精密量约1ml，置碘量瓶中，加蒸馏水20ml稀释，加稀硫酸25ml，加热回流4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖(C6H12O6)，以此计算出样品每ml注射剂中总糖的含量。

[0556] 以总糖的含量减去单糖的含量即得总多糖的含量。

[0557] 本品每ml含总多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计，不得少于40mg。

具体实施方式

[0558] 实施例1采用高效液相色谱法测试注射用无菌粉末中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：

[0559] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加甲醇超声提取，制成每1ml含12mg的溶液，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0560] (2)参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

[0561] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为乙腈-水＝80∶20，流动相B为0.1％磷酸，梯度洗脱，从0分钟至60分钟，流动相A的比例由15％升至44％，流速为1.0ml/min，检测波长为270±2nm，柱温为30℃；

[0562] (4)以灯盏细辛成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0563] (5)以上述方法作为待测注射剂中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0564] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；

[0565] 实施例2采用高效液相色谱法测试注射液中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：

[0566] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加1倍量乙醇稀释，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0567] (2)参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加50％乙醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作为参照物溶液；

[0568] (3)色谱条件：色谱柱采用八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为乙腈-水＝50∶50，流动相B为1％磷酸，梯度洗脱，从0分钟至100分钟，流动相A的比例由25％升至70％，流速为0.5ml/min，检测波长为192±2nm，柱温为60℃；

[0569] (4)以灯盏细辛成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0570] (5)以上述方法作为待测注射剂中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0571] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.85～1.00；

[0572] 实施例3采用高效液相色谱法测试注射用浓溶液中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：

[0573] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加3倍量水稀释，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0574] (2)参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加25％甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作为参照物溶液；

[0575] (3)色谱条件：色谱柱采用二烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为甲醇，流动相B为0.03％磷酸溶液，梯度洗脱，从0分钟至70分钟，流动相A的比例由10％升至70％，流速为1.8ml/min，检测波长为398±2nm，柱温为20℃；

[0576] (4)以灯盏细辛成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0577] (5)以上述方法作为待测注射剂中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0578] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；

[0579] 实施例4采用高效液相色谱法测试注射用无菌粉末中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：

[0580] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加75％乙醇超声提取，制成每1ml含10mg的溶液，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0581] (2)参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加75％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

[0582] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为乙腈-水＝70∶30，流动相B为0.05mol/L磷酸二氢钠溶液，梯度洗脱，从0分钟至60分钟，流动相A的比例由15％升至55％，流速为1.0ml/min，检测波长为350±2nm，柱温为30℃；

[0583] (4)以灯盏细辛成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0584] (5)以上述方法作为待测注射剂中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0585] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；

[0586] 实施例5采用高效液相色谱法测试注射液中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：

[0587] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加1倍量甲醇稀释，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0588] (2)参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加50％甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作为参照物溶液；

[0589] (3)色谱条件：色谱柱采用二烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为甲醇-水＝60∶40，流动相B为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(加磷酸调PH值为3.8)，梯度洗脱，从0分钟至90分钟，流动相A的比例由25％升至70％，流速为0.5ml/min，检测波长为292±2nm，柱温为60℃；

[0590] (4)以灯盏细辛成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0591] (5)以上述方法作为待测注射剂中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0592] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.85～1.00；

[0593] 实施例6采用高效液相色谱法测试注射用浓溶液中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：

[0594] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加3倍量乙醇稀释，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0595] (2)参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加75％乙醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作为参照物溶液；

[0596] (3)色谱条件：色谱柱采用二烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为甲醇，流动相B为1％冰醋酸溶液，梯度洗脱，从0分钟至60分钟，流动相A的比例由10％升至70％，从60分钟至70分钟，流动相A的比例由70％降至10％，流速为1.2ml/min，检测波长为320±2nm，柱温为25℃；

[0597] (4)以灯盏细辛成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各15μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0598] (5)以上述方法作为待测注射剂中以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0599] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.85～1.00；

[0600] 实施例7采用高效液相色谱法测定注射用无菌粉末中以红参和麦冬成分特征为主的指纹图谱：

[0601] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加甲醇超声提取，制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0602] (2)参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；

[0603] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈-水＝80∶20，梯度洗脱，从0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至60分钟，流动相B的比例由64％升至75％，从60分钟至65分钟，流动相B的比例由75％降至25％，流速为1.0ml/min，检测波长为203±2nm，柱温为40℃；

[0604] (4)以红参和麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0605] (5)以上述方法作为待测注射剂中以红参和麦冬成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0606] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；

[0607] 实施例8采用高效液相色谱法测定注射液中以人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱：

[0608] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加2倍乙醇稀释，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0609] (2)参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Re适量，加30％乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为参照物溶液；

[0610] (3)色谱条件：色谱柱采用二烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.008mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为甲醇-水＝50∶50，梯度洗脱，从0分钟至10分钟，流动相B的比例为40％，从10分钟至40分钟，流动相B的比例由40％升至80％，从40分钟至60分钟，流动相B的比例为80％，从60分钟至65分钟，流动相B的比例降至40％，流速为1.5ml/min，检测波长为192±2nm，柱温为20℃；

[0611] (4)以人参和麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0612] (5)以上述方法作为待测注射剂中以人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0613] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；

[0614] 实施例9采用高效液相色谱法测定注射用浓溶液中以红参成分特征为主的指纹图谱：

[0615] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加4倍量乙醇稀释，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0616] (2)参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Rb1适量，加20％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

[0617] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.25mol/L磷酸二氢钠溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱，从0分钟至80分钟，流动相B的比例由20％升至70％，流速为0.5ml/min，检测波长为408±2nm，柱温为50℃；

[0618] (4)以红参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0619] (5)以上述方法作为待测注射剂中以红参成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0620] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；

[0621] 实施例10采用高效液相色谱法测定注射用无菌粉末中以红参和麦冬成分特征为主的指纹图谱：

[0622] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加甲醇超声提取，制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0623] (2)参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1、麦冬皂苷B适量，加甲醇制成每1ml各含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

[0624] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为1％冰醋酸溶液，流动相B为乙腈-水＝80∶20，梯度洗脱，从0分钟至15分钟，流动相B的比例为20％，从15分钟至40分钟，流动相B的比例由20％升至80％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为80％，从50分钟至60分钟，流动相B的比例由80％升至90％，从60分钟至
65分钟，流动相B的比例由90％降至20％，流速为1.0ml/min，检测波长为273±2nm，柱温为40℃；

[0625] (4)以红参和麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0626] (5)以上述方法作为待测注射剂中以红参和麦冬成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0627] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；

[0628] 实施例11采用高效液相色谱法测定注射液中以人参成分特征为主的指纹图谱：

[0629] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加2倍乙醇稀释，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0630] (2)参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Re适量，加65％乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为参照物溶液；

[0631] (3)色谱条件：色谱柱采用二烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为3％甲酸溶液，流动相B为甲醇-水＝60∶40，梯度洗脱，从0分钟至10分钟，流动相B的比例为40％，从10分钟至40分钟，流动相B的比例由40％升至80％，从40分钟至60分钟，流动相B的比例为80％，从60分钟至65分钟，流动相B的比例降至40％，流速为1.5ml/min，检测波长为305±2nm，柱温为30℃；

[0632] (4)以人参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0633] (5)以上述方法作为待测注射剂中以人参成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0634] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；

[0635] 实施例12采用高效液相色谱法测定注射用浓溶液中以麦冬成分特征为主的指纹图谱：

[0636] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加4倍量乙醇稀释，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0637] (2)参照物溶液的制备：精密称取麦冬皂苷B适量，加80％乙醇制成每1ml含0.08mg的溶液，作为参照物溶液；

[0638] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.3％磷酸溶液，流动相B为甲醇，梯度洗脱，从0分钟至80分钟，流动相B的比例由20％升至70％，流速为0.8ml/min，检测波长为408±2nm，柱温为50℃；

[0639] (4)以麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各15μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0640] (5)以上述方法作为待测注射剂中以麦冬成分特征为主的指纹图谱的测试手段；

[0641] (6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.88～1.00；

[0642] 实施例13采用高效液相色谱法测试注射用无菌粉末中以党参成分特征为主的指纹图谱：

[0643] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品0.1g，加95％乙醇20ml超声提取，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0644] (2)参照物溶液的制备：取适量党参药材中的主要活性成分党参炔苷，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

[0645] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为水，B为乙腈，梯度洗脱，从0分钟至5分钟，流动相B的比例为15％，从5分钟至60分钟，流动相B的比例由15％升至50％，流速为1.0ml/min，检测波长为268±2nm，柱温为30℃；

[0646] (4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0647] (5)以上述方法作为待测注射剂中党参成分指纹图谱的测试手段；

[0648] (6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00。

[0649] 实施例14采用高效液相色谱法测试注射液中以党参成分特征为主的指纹图谱：

[0650] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加2倍量甲醇稀释，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0651] (2)参照物溶液的制备：取适量党参药材中的主要活性成分党参炔苷，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

[0652] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为水，B为乙腈，梯度洗脱，从0分钟至5分钟，流动相B的比例为10％，从5分钟至60分钟，流动相B的比例由10％升至90％，从60分钟至65分钟，流动相B的比例由90％降至10％，流速为0.6ml/min，检测波长为388±2nm，柱温为20℃；

[0653] (4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液各5μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0654] (5)以上述方法作为待测注射剂中以党参成分特征为主指纹图谱的测试手段；

[0655] (6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00。

[0656] 实施例15采用高效液相色谱法测试注射用浓溶液中以党参成分特征为主的指纹图谱：

[0657] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加4倍量乙醇稀释，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0658] (2)参照物溶液的制备：取适量党参药材中的主要活性成分苍术内酯III，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作为参照物溶液；

[0659] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，B为甲醇，梯度洗脱，从0分钟至60分钟，流动相B的比例为由15％升至60％，从60分钟至70分钟，流动相B的比例为由60％降至15％，流速为1.4ml/min，检测波长为192±2nm，柱温为50℃；

[0660] (4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0661] (5)以上述方法作为待测注射剂中以党参成分特征为主指纹图谱的测试手段；

[0662] (6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00。

[0663] 实施例16采用高效液相色谱法测试注射用无菌粉末中以党参成分特征为主的指纹图谱：

[0664] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品0.1g，加95％乙醇20ml超声提取，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0665] (2)参照物溶液的制备：取适量党参药材中的主要活性成分党参炔苷，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

[0666] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为0.2mol/L磷酸二氢钠溶液，B为甲醇，梯度洗脱，从0分钟至5分钟，流动相B的比例为15％，从5分钟至60分钟，流动相B的比例由15％升至50％，流速为1.0ml/min，检测波长为268±2nm，柱温为30℃；

[0667] (4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0668] (5)以上述方法作为待测注射剂中党参成分指纹图谱的测试手段；

[0669] (6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00。

[0670] 实施例17采用高效液相色谱法测试注射液中以党参成分特征为主的指纹图谱：

[0671] (1)供试品溶液的制备：精密取注射剂样品适量，加2倍量甲醇稀释，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

[0672] (2)参照物溶液的制备：取适量党参药材中的主要活性成分党参炔苷，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；

[0673] (3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为0.1％磷酸，B为甲醇，梯度洗脱，从0分钟至5分钟，流动相B的比例为10％，从5分钟至60分钟，流动相B的比例由10％升至90％，从60分钟至65分钟，流动相B的比例由90％降至10％，流速为0.6ml/min，检测波长为388±2nm，柱温为20℃；

[0674] (4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供试品溶液及参照物溶液各5μl，分别注入高效液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；

[0675] (5)以上述方法作为待测注射剂中以党参成分特征为主指纹图谱的测试手段；

[0676] (6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00。

[0677] 实施例18注射用无菌粉末中野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法：

[0678] 取注射剂样品0.3g，以甲醇超声提取，制备供试品溶液；取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，制备对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含2％的三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

[0679] 实施例19注射用浓溶液中灯盏细辛药材与野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法：

[0680] 取注射剂样品0.5ml，以甲醇10ml超声提取，滤液做为供试品溶液；取野黄芩苷对照品，加50％甲醇溶解，制备对照品溶液；取灯盏细辛对照药材0.5g，用三氯甲烷适量，回流，回流液弃去，药渣再用甲醇10ml超声提取，滤液做为对照药材溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝5∶5∶0.01为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含2％的三氯化铝甲醇溶液，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

[0681] 实施例20注射用无菌粉末中野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法：

[0682] 取注射剂样品0.4g，以50％乙醇超声提取，制备供试品溶液；取野黄芩苷对照品，加50％乙醇制成每1ml含1mg的溶液，制备对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各30μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-醋酸乙酯-冰醋酸＝20∶0.5∶0.01为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含2％的三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

[0683] 实施例21注射液中灯盏细辛药材与野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法：

[0684] 取注射剂样品3ml，以乙醇10ml超声提取，滤液做为供试品溶液；取野黄芩苷对照品，加50％甲醇溶解，制备对照品溶液；取灯盏细辛对照药材0.5g，用醋酸乙酯适量，超声，超声液弃去，药渣再用95％乙醇10ml超声提取，滤液做为对照药材溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-醋酸乙酯-甲酸＝5∶5∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含2％的三氯化铝甲醇溶液，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；

[0685] 实施例22注射用无菌粉末中野黄芩苷的高效液相色谱鉴别方法：

[0686] 取注射剂样品0.5g，用90％乙醇20ml提取，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取野黄芩苷对照品，用50％乙醇制成每1ml含0.1mg的对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液＝20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃；吸取上述溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具有与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0687] 实施例23注射用无菌粉末中野黄芩苷的高效液相色谱鉴别方法：

[0688] 取注射剂样品1g，用甲醇20ml提取，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取野黄芩苷对照品，用50％乙醇制成每1ml含0.1mg的对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.5mol/L磷酸二氢钠溶液＝50∶50为流动相，检测波长为200nm，柱温20℃；吸取上述溶液各15μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具有与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0689] 实施例24注射液中野黄芩苷的高效液相色谱鉴别方法：

[0690] 取注射剂样品，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取野黄芩苷对照品，用50％乙醇制成每1ml含0.1mg的对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％甲酸溶液＝50∶50为流动相，检测波长为400nm，柱温60℃；吸取上述溶液各1μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具有与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0691] 实施例25注射用浓溶液中野黄芩苷的高效液相色谱鉴别方法：

[0692] 取注射剂样品，加4倍量乙醇稀释，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取野黄芩苷对照品，用50％乙醇制成每1ml含0.05mg的对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.005mol/L磷酸二氢钾溶液＝
15∶85为流动相，检测波长为200nm，柱温20℃；吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具有与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0693] 实施例26注射用无菌粉末中麦冬药材、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法：

[0694] 取注射剂样品1g，加水20ml与盐酸3ml，100℃加热1小时，放冷，再用醋酸乙酯30ml提取，提取液浓缩，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材0.5g，加水煎煮，水煮液同供试品溶液处理，制成对照药材溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品，加醋酸乙酯制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸＝80∶5∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0695] 实施例27注射用无菌粉末中麦冬药材的薄层色谱鉴别方法：

[0696] 取注射剂样品1g，加水20ml与硫酸3ml，100℃加热1小时，放冷，再用醋酸乙酯20ml提取，提取液浓缩，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材0.5g，加水煎煮，水煮液同供试品溶液处理，制成对照药材溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸＝60∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0697] 实施例28注射用浓溶液中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法：

[0698] 取注射剂样品1ml，加水20ml与硫酸10ml，加热回流4小时，放冷，再用醋酸乙酯30ml提取，提取液浓缩，作为供试品溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品，加三氯甲烷制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以苯-甲醇-甲酸＝100∶1∶3为展开剂，展开，取出，晾干，
105℃烘至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0699] 实施例29注射液中麦冬药材的薄层色谱鉴别方法：

[0700] 取注射剂样品10ml，加硫酸3ml，加热回流1小时，放冷，再用乙醚30ml提取，提取液挥干，醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材0.5g，加水煎煮，水煮液同供试品溶液处理，制成对照药材溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮＝4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，105℃烘至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0701] 实施例30注射用浓溶液中麦冬药材的薄层色谱鉴别方法：

[0702] 取注射剂样品10ml，加水10ml与硫酸3ml，加热回流1小时，放冷，再用三氯甲烷30ml提取，提取液挥干，三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材0.5g，加水煎煮，水煮液同供试品溶液处理，制成对照药材溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各30μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丁酮＝2∶3为展开剂，展开，取出，晾干，热风吹至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0703] 实施例31注射用用无菌粉末中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法：

[0704] 取注射剂样品1g，加水10ml与硫酸3ml，加热回流3小时，放冷，再用三氯甲烷30ml提取，提取液挥干，三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品，加甲醇制成对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各
30μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮＝6∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，热风吹至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

[0705] 实施例32注射用无菌粉末中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法：

[0706] 取注射剂样品1g，用水10ml溶解，用水饱和的正丁醇20ml萃取，萃取液蒸干，残渣用甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶5∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0707] 实施例33注射用浓溶液中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D的薄层色谱鉴别方法：

[0708] 取注射剂样品2ml，用水8ml稀释，用水饱和的正丁醇20ml萃取，萃取液再用氨试液洗涤，正丁醇液蒸干，残渣用乙醇醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D，分别加乙醇醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-乙醇-水＝50∶15∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0709] 实施例34注射用液中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D的薄层色谱鉴别方法：

[0710] 取注射剂样品，用氨水饱和的正丁醇20ml萃取，正丁醇液蒸干，残渣用乙醇醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D，分别加乙醇醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各30μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以醋酸乙酯-乙醇-水＝3∶15∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸甲醇试剂，烘烤至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0711] 实施例35注射液中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的高效液相色谱鉴别：

[0712] 取注射剂样品，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品，用50％甲醇制成每1ml各含0.05mg的对照品溶液；采用采用高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝53∶47为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；吸取上述溶液各3μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0713] 实施例36注射用浓溶液中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D的高效液相色谱鉴别：

[0714] 取注射剂样品，加5倍量水稀释，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D对照品，用20％乙醇制成每1ml各含0.1mg的对照品溶液；采用采用高效液相色谱法试验，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-2％甲酸溶液＝10∶90为流动相，检测波长为410nm，柱温20℃；吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0715] 实施例37注射用无菌粉末中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D的高效液相色谱鉴别：

[0716] 取注射剂样品0.2，加水20ml溶解，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D对照品，用20％乙醇制成每1ml各含0.1mg的对照品溶液；采用采用高效液相色谱法试验，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.005mol/L磷酸二氢钠溶液溶液＝80∶20为流动相，检测波长为200nm，柱温60℃；吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0717] 实施例38注射用无菌粉末中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的高效液相色谱鉴别：

[0718] 取注射剂样品0.2g，用3％硫酸20ml回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用三氯甲烷30ml提取，提取液蒸干，残渣用甲醇1ml溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品加甲醇制成每1ml各含0.1mg的对照品溶液；采用采用高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝70∶30为流动相，检测波长为208nm，柱温30℃；吸取上述溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具有与对照色谱保留时间一致的色谱峰；

[0719] 实施例39注射用浓溶液中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元的高效液相色谱鉴别：

[0720] 取注射剂样品0.1ml，加水15ml盐酸2ml回流6小时，取出，放至室温，调pH至中性，用醋酸乙酯30ml提取，提取液蒸干，残渣用乙醇1ml溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元对照品加乙醇制成每1ml各含0.05mg的对照品溶液；采用采用高效液相色谱法试验，色谱柱用二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水＝30∶70为流动相，检测波长为410nm，柱温50℃；吸取上述溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具有与对照色谱保留时间一致的色谱峰；

[0721] 实施例40注射液中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元的高效液相色谱鉴别：

[0722] 取注射剂样品5ml，加水15ml盐酸2ml回流6小时，取出，放至室温，调pH至中性，用醋酸乙酯30ml提取，提取液蒸干，残渣用乙醇1ml溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元对照品加乙醇制成每1ml各含0.05mg的对照品溶液；采用采用高效液相色谱法试验，色谱柱用二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-3％冰醋酸溶液＝92∶8为流动相，检测波长为200nm，柱温20℃；吸取上述溶液各1μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具有与对照色谱保留时间一致的色谱峰；

[0723] 实施例41注射用无菌粉末中红参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的薄层色谱鉴别方法：

[0724] 取注射剂样品0.25g，加水5ml，用氯仿振摇提取3次，每次5ml，弃去氯仿层，用氨水饱和的正丁醇提取3次，每次5ml，提取液蒸干，残渣用甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；取红参对照药材0.5g，加三氯甲烷适量回流提取，弃去三氯甲烷液，残渣加水饱和正丁醇
10ml提取，提取液加入氨试液，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇1ml溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水＝15∶40∶22∶10在10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0725] 实施例42注射用浓溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的薄层色谱鉴别方法：

[0726] 取注射剂样品0.2ml，用氨水饱和的正丁醇15ml提取，提取液蒸干，残渣用甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水＝10∶60∶1∶30的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％硫酸甲醇醇试剂，100℃左右烘烤至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0727] 实施例43注射液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法：

[0728] 取注射剂样品10ml，用氨水饱和的正丁醇15ml提取，提取液蒸干，残渣用甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各30μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸丁酯-乙醇-水＝20∶20∶40∶0.02为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％硫酸甲醇醇试剂，100℃左右烘烤至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0729] 实施例44注射用浓溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的薄层色谱鉴别方法：

[0730] 取注射剂样品0.2ml，用氨水饱和的正丁醇15ml提取，提取液蒸干，残渣用甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝15∶4∶0.4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0731] 实施例45注射液中人参药材、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的薄层色谱鉴别方法：

[0732] 取注射剂样品1ml，正丁醇15ml提取，提取液用氨试液30ml提取除杂质，正丁醇液挥干，用乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；取人参对照药材0.5g，加三氯甲烷适量回流提取，弃去三氯甲烷液，残渣用水润湿后加水饱和正丁醇10ml提取，提取液加入氨试液，分取正丁醇层，蒸干，残渣用乙醇1ml溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水＝4∶5∶1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％硫酸甲醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0733] 实施例46注射用浓溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的薄层色谱鉴别方法：

[0734] 取注射剂样品0.1ml，加水10ml稀释，正丁醇15ml提取，提取液用氨试液30ml提取除杂质，正丁醇液挥干，用乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水＝10∶2∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0735] 实施例47注射用无菌粉末中人参药材、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的薄层色谱鉴别方法：

[0736] 取注射剂样品0.2g，加水10ml溶解，正丁醇15ml提取，提取液用氨试液30ml提取除杂质，正丁醇液挥干，用乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；取人参对照药材0.5g，加三氯甲烷适量回流提取，弃去三氯甲烷液，残渣用水润湿后加水饱和正丁醇10ml提取，提取液加入氨试液，分取正丁醇层，蒸干，残渣用乙醇1ml溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取上述溶液各30μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水＝1∶10∶3的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％硫酸甲醇试剂，烘烤至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0737] 实施例48注射用无菌粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的高效液相色谱鉴别：

[0738] 取注射剂样品0.5g，以水10ml溶解，微孔滤膜滤过，制备供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品加50％乙醇制成每1ml各含0.05mg的对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温30℃；吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0739] 实施例49注射用浓溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的高效液相色谱鉴别：

[0740] 取注射剂样品0.5ml，以水10ml稀释，微孔滤膜滤过，制备供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品加甲醇制成每1ml各含0.05mg的对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水＝15∶85为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长390nm，柱温60℃；吸取上述溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0741] 实施例50注射液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的高效液相色谱鉴别：

[0742] 取注射剂样品，微孔滤膜滤过，制备供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品加10％甲醇制成每1ml各含0.05mg的对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.5mol/L磷酸二氢钠溶液＝90∶10为流动相，流速为0.5ml/min，检测波长390nm，柱温20℃；吸取上述溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0743] 实施例51注射液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的高效液相色谱鉴别：

[0744] 取注射剂样品，微孔滤膜滤过，制备供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品加10％甲醇制成每1ml各含0.05mg的对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.01％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至20分钟，乙腈的比例为15％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由15％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至85％；流速为0.8ml/min，检测波长200nm，柱温20℃；吸取上述溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰；

[0745] 实施例52注射用无菌粉末中党参药材、党参炔苷、党参苷I的薄层色谱鉴别方法：

[0746] 取注射剂样品0.5g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，置C18固相萃取小柱(500mg，用甲醇、20％甲醇各10ml预洗)中，依次用20％甲醇、甲醇各5ml洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷、党参苷I对照品，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝7∶1∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热，置可见光或紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0747] 实施例53注射液中党参药材、党参炔苷的薄层色谱鉴别方法：

[0748] 取注射剂样品2ml，置C18固相萃取小柱(500mg，用乙醇、30％乙醇各10ml预洗)中，依次用30％乙醇、95％乙醇各5ml洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷对照品，加95％乙醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各
1μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以正丁醇-甲酸-水＝10∶0.1∶0.05为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热，置可见光或紫外光灯365nm下检视；
供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0749] 实施例54注射用浓溶液中党参药材、党参炔苷的薄层色谱鉴别方法：

[0750] 取注射剂样品0.2ml，置C18固相萃取小柱(500mg，用乙醇、30％乙醇各10ml预洗)中，依次用30％乙醇、95％乙醇各5ml洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷对照品，加95％乙醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；采用薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各1μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以正丁醇-甲酸-水＝1∶10∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸甲醇醇溶液，105℃加热，置可见光或紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

[0751] 实施例55注射液中党参炔苷、党参苷I的高效液相色谱鉴别方法：

[0752] 取注射剂样品，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；再取党参炔苷、党参苷I对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg溶液，作为对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃；吸取上述溶液各2μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰。

[0753] 实施例56注射用浓溶液中党参炔苷、党参苷I的高效液相色谱鉴别方法：

[0754] 取注射剂样品，加3倍量乙醇，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；再取党参炔苷、党参苷I对照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg溶液，作为对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-2％磷酸溶液＝50∶50为流动相，检测波长为410nm，柱温50℃；吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰。

[0755] 实施例57注射液中党参炔苷、党参苷I的高效液相色谱鉴别方法：

[0756] 取注射剂样品，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；再取党参炔苷、党参苷I对照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg溶液，作为对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.5mol/L磷酸二氢钠溶液＝50∶50为流动相，检测波长为410nm，柱温50℃；吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰。

[0757] 实施例58注射用无菌粉末中党参炔苷、党参苷I的高效液相色谱鉴别方法：

[0758] 取注射剂样品0.3g，加甲醇10ml超声提取，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；再取党参炔苷、党参苷I对照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg溶液，作为对照品溶液；采用高效液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％甲酸溶液＝8∶92为流动相，检测波长为200nm，柱温20℃；吸取上述溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，供试品色谱中，具与对照色谱有保留时间一致的色谱峰。

[0759] 实施例59注射用无菌粉末中野黄芩苷的含量测定：

[0760] 取注射剂样品0.1g，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg溶液，作为对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液＝20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃；吸取上述溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含野黄芩苷的限度不得少于12.0mg；

[0761] 实施例60注射用浓溶液中野黄芩苷的含量测定：

[0762] 精密量取注射剂样品0.1ml，置10ml量瓶中，加80％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取野黄芩苷对照品，加80％乙醇制成每1ml含0.1mg溶液，作为对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.02％磷酸溶液＝8∶92为流动相，检测波长为200nm，柱温20℃；吸取上述溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含野黄芩苷的限度不得少于12.0mg；

[0763] 实施例61注射液中野黄芩苷的含量测定：

[0764] 精密量取注射剂样品1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg溶液，作为对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.005mol/L磷酸二氢钾溶液＝50∶50为流动相，检测波长为410nm，柱温60℃；吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含野黄芩苷的限度不得少于8.0mg；

[0765] 实施例62注射液中野黄芩苷的含量测定：

[0766] 精密量取注射剂样品1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg溶液，作为对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.5mol/L磷酸二氢钠溶液＝50∶50为流动相，检测波长为302nm，柱温40℃；吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含野黄芩苷的限度不得少于8.0mg；

[0767] 实施例63注射用无菌粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re含量测定：

[0768] 取注射剂样品0.2g，精密称定，置5ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml各含0.05mg溶液，作为对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至60分钟，乙腈的比例由29％升至90％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm；吸取上述溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于1.5mg；

[0769] 实施例64注射液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定：

[0770] 精密取注射剂样品0.3ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml各含0.05mg溶液，作为对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至
40％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm；吸取上述溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.5mg；

[0771] 实施例65注射液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定：

[0772] 精密量取注射剂样品0.5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml各含0.05mg溶液，作为对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-5％甲酸溶液＝15∶85为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长400nm；吸取上述溶液各5

[0773] μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于0.8mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.3mg；

[0774] 实施例66注射用浓溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定：

[0775] 精密量取注射剂样品0.1ml，置10ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1ml各含0.05mg溶液，作为对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.005mol/L磷酸二氢钠溶液＝90∶10为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长200nm；吸取上述溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.6mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于1.2mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.8mg；

[0776] 实施例67注射用浓溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定：

[0777] 精密量取注射剂样品0.1ml，置10ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1ml各含0.05mg溶液，作为对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-5％冰醋酸溶液＝90∶10为流动相，流速为0.5ml/min，检测波长200nm；吸取上述溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.6mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于1.2mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.8mg；

[0778] 实施例68注射用无菌粉末中总皂苷的含量测定：

[0779] 取注射剂样品0.25g，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并定至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，供试品溶液1ml，分别加至10ml具塞试管中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴冷却2分钟，精密加冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，采用分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含总皂苷以人参皂苷Rg1计，不得少于
12.0mg；

[0780] 实施例69注射用浓溶液中总皂苷的含量测定：

[0781] 精密取注射剂样品0.3ml，置100ml量瓶中，加甲醇混匀并定至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液0.4ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，供试品溶液1ml，加至10ml具塞试管中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.3ml，高氯酸0.9ml，摇匀，50℃水浴上加热25分钟，取出，冷却，精密加冰醋酸6ml，摇匀，以随行溶剂为空白，采用分光光度法，在700nm的波长处测定吸收度，以标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含总皂苷以人参皂苷Rb1计，不得少于8.0mg；

[0782] 实施例70注射液中总皂苷的含量测定：

[0783] 精密取注射剂样品1.0ml，置100ml量瓶中，加乙醇混匀并定至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取麦冬皂苷B对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液0.4ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，供试品溶液1ml，加至10ml具塞试管中，水浴蒸干，立即取出，精密加10％香草醛-冰醋酸溶液0.1ml，高氯酸1.0ml，摇匀，80℃水浴上加热30分钟，取出，冷却，精密加冰醋酸6ml，摇匀，以随行溶剂为空白，采用分光光度法，在400nm的波长处测定吸收度，以标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含总皂苷以麦冬皂苷B计，不得少于10.0mg；

[0784] 实施例71注射用无菌粉末中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定：

[0785] 取注射剂样品1.0g，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品，加甲醇制成每1ml各含0.03mg的对照品溶液；同法制成对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝53∶47为流动相，流速1.0ml/min，检测波长为208nm；吸取供试品溶液20μl，对照品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含麦冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′总和的限度不得少于0.11mg；

[0786] 实施例72注射液中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D的含量测定：

[0787] 精密量取注射剂样品，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D对照品，加70％乙醇制成每1ml各含0.02mg的对照品溶液；同法制成对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.005mol/L磷酸二氢钠溶液＝20∶80为流动相，流速1.5ml/min，检测波长为410nm；吸取供试品溶液20μl，对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含麦冬皂苷B的限度不得少于0.1mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.1mg；

[0788] 实施例73注射用浓溶液中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D的含量测定：

[0789] 精密量取注射剂样品2ml，置10ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D对照品，加70％乙醇制成每1ml各含0.02mg的对照品溶液；同法制成对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-2％磷酸＝80∶20为流动相，流速0.5ml/min，检测波长为200nm；吸取供试品与对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含麦冬皂苷B的限度不得少于0.1mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于
0.1mg；

[0790] 实施例74注射用无菌粉末中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定：

[0791] 取注射剂样品1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加3％硫酸20ml回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用三氯甲烷提取4次，每次20ml，提取液合并，蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品，加甲醇制成每1ml各含0.005mg的对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝88∶12为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；吸取供试品与对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，以标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含假叶树皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于
0.01mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.03mg；

[0792] 实施例75注射用浓溶液中薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定：

[0793] 精密量取注射剂样品2ml，置圆底烧瓶中，加水20ml与盐酸3ml回流3小时，取出，放至室温，调pH至中性，用醋酸乙酯提取4次，每次30ml，提取液合并，蒸干，残渣用乙醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品，加乙醇制成每1ml各含0.01mg的对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.005mol/L磷酸二氢钾溶液＝30∶70为流动相，检测波长为410nm，柱温20℃；吸取供试品与对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.01mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；

[0794] 实施例76注射液中含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定：

[0795] 精密量取注射剂样品20ml，置圆底烧瓶中，加硫酸3ml回流3小时，取出，放至室温，调pH至中性，用醋酸乙酯提取4次，每次30ml，提取液合并，蒸干，残渣用乙醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品，加乙醇制成每1ml各含0.01mg的对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-3％甲酸溶液＝95∶5为流动相，检测波长为200nm，柱温50℃；以标准曲线法进行计算，每日用剂量的注射剂含假叶树皂苷元的限度不得少于0.02mg薯蓣皂苷元的限度不得少于0.02mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；

[0796] 实施例77注射用浓溶液中党参炔苷的含量测定：

[0797] 精密量取注射剂样品1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取党参炔苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg的对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.5mol/L磷酸二氢钠溶液＝10∶90为流动相，检测波长为200nm，柱温20℃；吸取供试品与对照品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含党参炔苷的限度不得少于0.1mg。

[0798] 实施例78注射用无菌粉末中党参炔苷、党参苷I的含量测定：

[0799] 取注射剂样品1g，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取党参炔苷、党参苷I对照品，加甲醇制成每1ml各含0.05mg的对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃；吸取供试品与对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含党参炔苷的限度不得少于0.1mg，含党参苷I的限度不得少于0.1mg。

[0800] 实施例79注射液中党参炔苷的含量测定：

[0801] 取注射剂样品，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取党参炔苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.03mg的对照品溶液；按高效液相色谱法试验，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.02％磷酸溶液＝50∶50为流动相，检测波长为410nm，柱温50℃；吸取供试品与对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，以外标一点法进行计算，每日用剂量的注射剂含党参炔苷的限度不得少于0.1mg。

[0802] 实施例80注射用无菌粉末中总多糖含量测定：

[0803] 单糖取注射剂样品1g，精密称定，置碘量瓶中，加蒸馏水60ml使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖)，由此折算出每瓶单糖的含量；

[0804] 总糖取注射剂样品1g，精密称定，置碘量瓶中，加蒸馏水60ml使溶解，加稀硫酸25ml，加热回流3小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液
2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；

[0805] 以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；

[0806] 每日用剂量的注射剂含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于70mg。

[0807] 实施例81注射用浓溶液中总多糖含量测定：

[0808] 单糖精密量取注射剂样品1ml，置碘量瓶中，加蒸馏水30ml稀释，加氨试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)20ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液3ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液10滴，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖)，由此折算出每瓶单糖的含量；

[0809] 总糖精密量取注射剂样品1ml，精密称定或量取，置碘量瓶中，加蒸馏水30ml稀释，加稀硫酸25ml，加热回流1～4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氨试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)20ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液3ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液10滴，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；

[0810] 以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；

[0811] 每日用剂量的注射剂含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于50mg。

[0812] 实施例82注射用浓溶液中总多糖含量测定

[0813] 单糖取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，从中取精密量约1ml，置碘量瓶中，加蒸馏水60ml稀释，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖(C6H12O6)，由此折算出每ml注射剂中单糖的含量。