具有镇痛作用的药物组合物转让专利
申请号 : CN200580019914.1
文献号 : CN1968694B
文献日 : 2010-04-14
发明人 : 王建生
申请人 : 王建生
摘要 :
本发明涉及一种具有镇痛作用的药物组合物，它是乌头碱类化合物苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱、中乌头碱中的两种或三种为活性成分制备而成的药剂。毒性试验结果显示，中乌头碱的LD50为6.41mg/kg，下乌头碱的LD50为12.8mg/kg，苯甲酰中乌头原碱的毒性相对最低，未测出LD50值，测出的最大耐受量为1000毫克/千克体重。本发明三个乌头碱类化合物两两配比使用、三个化合物同时配比使用均能达到较好的协同增效作用，且具有最佳配比，能达到了高效、低毒的目的，为临床提供了一种新的选择。
权利要求 :
1.一种具有镇痛作用的药物组合物，其特征在于：它是乌头碱类化合物苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱、中乌头碱为活性成分制备而成的药剂，其重量配比为：苯甲酰中乌头原碱0-600份、下乌头碱0-6份、中乌头碱0-3份，其中苯甲酰中乌头原碱和下乌头碱的配比取值不能为零。
2.根据权利要求1所述的具有镇痛作用的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：苯甲酰中乌头原碱100-300份、下乌头碱1-3份。
3.根据权利要求2所述的具有镇痛作用的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：苯甲酰中乌头原碱100份、下乌头碱1份。
4.根据权利要求1所述的具有镇痛作用的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：苯甲酰中乌头原碱100-600份、下乌头碱1-6份、中乌头碱1-3份。
5.根据权利要求4所述的具有镇痛作用的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：苯甲酰中乌头原碱100份、下乌头碱1份、中乌头碱1份。
6.根据权利要求1-5任一项所述的具有镇痛作用的药物组合物，其特征在于：所述的药剂是：口服制剂、外用制剂或注射剂。
7.根据权利要求6所述的具有镇痛作用的药物组合物，其特征在于：所述的口服制剂是片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂。
8.根据权利要求6所述的具有镇痛作用的药物组合物，其特征在于：所述的外用制剂是洗剂、软膏剂、栓剂或药用敷料。
9.根据权利要求6所述的具有镇痛作用的药物组合物，其特征在于：所述的注射剂是注射液、注射用粉针。
说明书 :
所属技术领域
本发明涉及一种具有镇痛作用的药物组合物，具体地讲是一种以由附子植物提取分离的乌头碱类成分为有效药物成分配伍制备而成的镇痛药物。
背景技术
附子为毛莨科植物乌头(Aconitum carmicgaeli Debx.)的侧生子根，为传统中药中的大热之药，是古代温剂中常用的回阳救逆的药物。由于其具有明显的较强毒性，且用药剂量与中毒剂量接近，临床上出现中毒和死亡现象屡有报道，因此已有大量有关对其生药进行炮制、方剂、化学、药理、毒理和临床等方面试验工作的报道，如：张敏凤，川乌中毒致心律失常，《山东中医杂志》1999年5月第18卷，公开了“乌头碱口服0.2mg即能使人中毒”，因此为了减少其毒性，增加疗效，并不断寻找其中具有药效活性的高效低毒性化合物成分的研究至关重要。
张迪华等在《中草药》1982：73(11)，1-4中曾报道，从白附片分离出包括下乌头碱、中乌头碱和苯甲酰中乌头原碱等生物碱在内的八个成分，并证明其可具有抗炎和抗心衰作用。王朝虹，乌头中剧毒生物碱的提取分离，《刑事技术》2002年第3期，公开了从乌头中提取乌头碱、中乌头碱、下乌头碱的方法。关于乌头成分在镇痛药方面的应用，张勇忠等人在《中草药》2002：33(2)，106-109中报道了对由元胡、乌头等4味中药组成的“镇痛汤”在治疗癌症中晚期疼痛方面的研究，证明可具有较好疗效。对于单一乌头碱类成分的进行提取、分离、含量和结构鉴定等方面的研究也有报道，在显示其具有镇痛作用的同时，也在力图分进行其中有效成分和毒性成分的区分。将乌头碱类化合物进行配伍，达到高效低毒的目的，目前尚无相关的报道。
张迪华等在《中草药》1982：73(11)，1-4中曾报道，从白附片分离出包括下乌头碱、中乌头碱和苯甲酰中乌头原碱等生物碱在内的八个成分，并证明其可具有抗炎和抗心衰作用。王朝虹，乌头中剧毒生物碱的提取分离，《刑事技术》2002年第3期，公开了从乌头中提取乌头碱、中乌头碱、下乌头碱的方法。关于乌头成分在镇痛药方面的应用，张勇忠等人在《中草药》2002：33(2)，106-109中报道了对由元胡、乌头等4味中药组成的“镇痛汤”在治疗癌症中晚期疼痛方面的研究，证明可具有较好疗效。对于单一乌头碱类成分的进行提取、分离、含量和结构鉴定等方面的研究也有报道，在显示其具有镇痛作用的同时，也在力图分进行其中有效成分和毒性成分的区分。将乌头碱类化合物进行配伍，达到高效低毒的目的，目前尚无相关的报道。
发明内容
本发明的技术方案是提供一种以由附子植物提取分离的乌头碱类成分为有效药物成分的镇痛药物组合物，能达到高效、低毒的满意镇痛效果。
本发明提供的具有镇痛作用的药物组合物，它是乌头碱类化合物苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱、中乌头碱中的两种或三种为活性成分制备而成的药剂，其重量配比为：
苯甲酰中乌头原碱0-600份、下乌头碱0-6份、中乌头碱0-3份，其中至少两种成分配比取值不能为零。
下乌头碱(Hypaconitine)、中乌头碱(Mesaconitine)和苯甲酰中乌头原碱(Benzoylmesaconine)三种生物碱是本发明药物组合物中的有效成分。下乌头碱的结构如式(II)所示，中乌头碱的结构如式(III)所示，苯甲酰中乌头原碱的结构如式(IV)所示。这些成分可以按照目前已多有文献报道的方法由药用植物附子中提取、分离得到。
所述药物组合物是由下重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：苯甲酰中乌头原碱100-300份、下乌头碱1-3份。优选：苯甲酰中乌头原碱100份、下乌头碱1份。
或由下述重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：下乌头碱2-6份、中乌头碱1-3份。优选：下乌头碱2份、中乌头碱3份。
或由下述重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：苯甲酰中乌头原碱200-600份、中乌头碱1-3份。优选：苯甲酰中乌头原碱200份、中乌头碱3份。
或由下述重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：苯甲酰中乌头原碱100-600份、下乌头碱1-6份、中乌头碱1-3份。优选：苯甲酰中乌头原碱100份、下乌头碱1份、中乌头碱1份。
其中，所述的药剂是：口服制剂、外用制剂、注射剂。
所述的口服制剂是片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂。
所述的外用制剂是洗剂、软膏剂、栓剂、药用敷料。
所述的注射剂是注射液、注射用粉针。
对上述各有效药物成分进行的毒性试验结果显示，中乌头碱的LD50为6.41mg/kg，下乌头碱的LD50为12.8mg/kg，苯甲酰中乌头原碱的毒性相对最低，未测出LD50值，测出的最大耐受量为1000毫克/千克体重。
本发明三个乌头碱类化合物的用量均在上述安全范围之内，三个化合物两两配伍使用或三个化合物同时配伍使用均能达到较好的协同增效作用。而且，配伍后的药物组合物与药效并不呈简单的量效线性关系，即：用量越多，药效越好，而是在一个特定的配比下，药效最好。试验证明，按最佳配比配伍的药物组合物，在用量较少的情况下，即可达到最好的药效，毒性却显著降低。总之，本发明药物组合物达到了高效、低毒的目的，为临床提供了一种新的选择。
本发明提供的具有镇痛作用的药物组合物，它是乌头碱类化合物苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱、中乌头碱中的两种或三种为活性成分制备而成的药剂，其重量配比为：
苯甲酰中乌头原碱0-600份、下乌头碱0-6份、中乌头碱0-3份，其中至少两种成分配比取值不能为零。
下乌头碱(Hypaconitine)、中乌头碱(Mesaconitine)和苯甲酰中乌头原碱(Benzoylmesaconine)三种生物碱是本发明药物组合物中的有效成分。下乌头碱的结构如式(II)所示，中乌头碱的结构如式(III)所示，苯甲酰中乌头原碱的结构如式(IV)所示。这些成分可以按照目前已多有文献报道的方法由药用植物附子中提取、分离得到。
所述药物组合物是由下重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：苯甲酰中乌头原碱100-300份、下乌头碱1-3份。优选：苯甲酰中乌头原碱100份、下乌头碱1份。
或由下述重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：下乌头碱2-6份、中乌头碱1-3份。优选：下乌头碱2份、中乌头碱3份。
或由下述重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：苯甲酰中乌头原碱200-600份、中乌头碱1-3份。优选：苯甲酰中乌头原碱200份、中乌头碱3份。
或由下述重量配比的乌头碱类化合物为活性成分制备而成的药剂：苯甲酰中乌头原碱100-600份、下乌头碱1-6份、中乌头碱1-3份。优选：苯甲酰中乌头原碱100份、下乌头碱1份、中乌头碱1份。
其中，所述的药剂是：口服制剂、外用制剂、注射剂。
所述的口服制剂是片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂。
所述的外用制剂是洗剂、软膏剂、栓剂、药用敷料。
所述的注射剂是注射液、注射用粉针。
对上述各有效药物成分进行的毒性试验结果显示，中乌头碱的LD50为6.41mg/kg，下乌头碱的LD50为12.8mg/kg，苯甲酰中乌头原碱的毒性相对最低，未测出LD50值，测出的最大耐受量为1000毫克/千克体重。
本发明三个乌头碱类化合物的用量均在上述安全范围之内，三个化合物两两配伍使用或三个化合物同时配伍使用均能达到较好的协同增效作用。而且，配伍后的药物组合物与药效并不呈简单的量效线性关系，即：用量越多，药效越好，而是在一个特定的配比下，药效最好。试验证明，按最佳配比配伍的药物组合物，在用量较少的情况下，即可达到最好的药效，毒性却显著降低。总之，本发明药物组合物达到了高效、低毒的目的，为临床提供了一种新的选择。
具体实施方式
以上述的各乌头碱类生物碱成分为有效药物成分，与药物中允许使用和可以接受的其他辅助和/或添加成分混合，并按相应的制药方法加工，即可以制备成可供使用的相应镇痛制剂药物组合物。例如，与口服制剂中可以被接受的崩解剂、赋形剂、润滑剂、粘合剂、填充剂等常用的辅料成分混合，并按相应的常规工艺方法处理，即可制成为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂及相应的缓释剂、控释剂等固体制剂形式的口服药物。按注射药物制剂中允许使用的适当溶剂和附加剂配合及相应的工艺操作处理后，可以制备成相应的注射剂型药物。与相应的外用药物分散剂、固化剂、稳定剂等混合，可制备成相应的包括软膏、栓剂、洗剂及药用敷料等常用的外用型药物。
实施例1～7：口服胶囊药物
以重量份计的各例药物组成如表1所示。
表1胶囊型药物组成
制备方法：将有效药物成分按胶囊药物的常规制剂方式粉碎并过筛，然后加入淀粉并与适量医用乙醇混合，于摇摆制粒机上制粒，干燥，整粒后，用适量的硬脂酸镁等润滑剂混合后，按所需药物剂量充填胶囊。
实施例8～14：口服片剂药物
各例药物组成同实例1～7。
制备方法：按实例1～7的方式制粒并干燥后过筛，加适量滑石粉模压制片，再按常规包衣方式用由HPMC、丙二醇、钛白粉、医用乙醇和吐温-80共同组成的包衣液对所压制的药片进行包衣。
实施例15～21：口服颗粒剂止痛药
以重量份计的各例药物组成如表2所示。
制备方法：将有效药物成分按颗粒药物的常规制剂方式粉碎并过筛，然后加入淀粉、糖粉和适量医用乙醇混合均匀，于摇摆制粒机上制粒，干燥，整粒后，按所需药物剂量分装。
表2颗粒剂止痛药的组成
实施例22～28：止痛注射剂药物
以重量份计的各例药物组成如表3所示。
表3各注射剂药物的组成
制备方法：将有效药物成分加入适量注射用水、吐温-80、EDTA及常规量范围的CMC-Na充分搅拌并超声波混合，使充分溶解后用注射用水稀释定量，过滤，需要时用适量盐酸调整pH4-9，用安瓿灌封。
实施例29～35：外用止痛药
各例有效药物的组成及用量同实例15～21。
1.止痛膏药
制备方法：将有效药物成分用医用乙醇加热溶解后过滤，再分别均与100(×1000)份(均为重量)的十八醇和150(×1000)份硬脂酸混合并加热搅拌均匀后保温，为备用的油相物料。另将10,000份十二烷基硫酸钠、1,000份对羟基苯甲酸乙酯和加足至1000(×1000)份的纯化水加热下搅拌均匀，与备用的油相物料混合，高速搅拌均匀后，冷却、封装即可。
2.止痛贴敷剂(橡皮膏)制备方法：按橡皮膏常规制备方法，分别将400(×1000)份橡胶基质压胶和浸胶后，与有效药物成分及100(×1000)份凡士林、50(×1000)份羊毛脂、4000(×1000)份松香、30(×1000)份氧化锌等填充剂和分散剂辅料共同混合打膏和过滤后，在贴敷载体上涂布膏料并回收溶剂，按需要大小切割并加衬后包装。
实施例36～42：止痛气雾剂
以重量份计的各例药物组成如表4所示。
表4各例止痛气雾剂的组成
制备方法：将有效药物成分加入医用乙醇，根据需要还可加入适量的香味剂，混合均匀并过滤。定量装入耐压容器，按规定标准充压并注入经微孔过滤后的二氯二氟甲烷，即成为止痛气雾剂药物。
实施例43～49：止痛擦剂/洗剂
各例的有效药物组成分别同上述的止痛气雾剂。
制备方法：将有效药物成分加入医用乙醇(擦剂为300(×1000)份；洗剂为100(×1000)份)混合均匀并过滤，用医用水调整至总量1000(×1000)份，即分别得到可供使用的止痛擦剂/洗剂药物；混合均匀并过滤后，根据需要加入或不加入医用水，定量装入耐压容器并按规定标准充压，即可成为止痛气雾剂药物。
实施例50～56：止痛膜剂药物
各例的有效药物组成分别同上述的止痛气雾剂。
制备方法：将有效药物成分充分粉碎后，分别均与100(×1000)份甘油和约5,000份吐温-80搅拌混合均匀，再与由聚乙烯醇(PVA)制得的溶浆搅拌混合均匀，消泡后再与液体石蜡充分混合后制膜，干燥后即可。
实施例57～63：止痛湿敷料
以重量份计的各例药物组成如表5所示。
表5各例湿敷料的组成
制备方法：将有效药物成分医用乙醇溶解后用水定量稀释，然后将医用纱布在药液中充分浸泡，取出带药液的纱布封装。
以下通过药效学试验、毒理学试验证明本发明的有益效果。
试验例1本发明药物活性成分三个乌头碱类化合物的毒理试验
一、下乌头碱急性毒性试验
试验测得：昆明种小鼠灌胃给予药物下乌头碱，有一定毒性，LD50为12.8mg/kg，95％的可信限为10.93～14.99mg/kg。
半数致死量(LD50)的测定
1、试验材料
1.1受试药物及配制
药物下乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。取下乌头碱20mg，加蒸馏水至20ml，按1∶0.8等比稀释配成0.80、0.64、0.51、0.41mg/ml一系列浓度的药液备用。
1.2试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：川实动管质第67号；饲料提供者同动物，自由饮水，饲养室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
2、试验方法
通过预试找出最大致死量为20mg/kg，最小致死量为5mg/kg。取禁食不禁水14小时的昆明种小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，由20mg/kg开始，按1∶0.8比例剂量递减，分别给5组小鼠一次性灌胃给予药物下乌头碱，给药体积均为0.2ml/10g，给药后立即观察动物反应情况，连续观察7日，逐日记录小鼠出现的毒性反应及死亡情况。
3、试验结果
小鼠在灌胃后10分钟～4小时内，大多数出现倦缩少动，竖毛，并随剂量增加，出现程度递增的似呃逆反应及部分或全部动物死亡。未死亡小鼠一日后行为、活动、饮食、皮毛光泽和体重增长基本恢复正常。死亡小鼠经解剖，各主要脏器肉眼观察均未见明显异常改变。7日后，处死小鼠，解剖，各主要脏器肉眼观察未见明显异常改变。各剂量组小鼠死亡情况见表6。
表6药物下乌头碱各剂量组小鼠死亡数
按NDST软件包中Bliss法计算得LD50为12.8mg/kg，95％的可信限为10.93～14.99mg/kg。
4、结论
药物下乌头碱有一定毒性，昆明种小鼠灌胃给药，LD50为12.8mg/kg，95％的可信限为10.93～14.99mg/kg。
二、中乌头碱急性毒性试验
试验测得：昆明种小鼠灌胃给予药物中乌头碱有一定毒性，LD50为6.41mg/kg，95％的可信限为5.19～7.74mg/kg。
半数致死剂量(LD50)的测定
1、试验材料
1.1受试药物及配制
药物中乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。取中乌头碱15mg，加蒸馏水至23.4ml(0.64mg/ml)，取出16ml，按1∶0.8等比稀释配成0.51、0.41、0.33、0.26、0.21mg/ml一系列浓度的药液，备用。
1.2试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：川实动管质第67号；饲料提供者同动物，自由饮水，饲养室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
2、试验方法
通过预试找出最大致死量为12.8mg/kg，最小致死量为2.5mg/kg。取禁食而不禁水14小时的昆明种小鼠60只，随机分成6组，每组10只，雌雄各半；由12.8mg/kg开始，按1∶0.8比例剂量递减，分别给6组小鼠一次性灌胃给予药物中乌头碱，给药体积均为0.2ml/10g。给药后立即观察动物反应情况，连续观察7日，逐日记录小鼠出现的毒性反应及死亡情况。
3、试验结果
小鼠在灌胃后10分钟～4小时内，大多数出现倦缩少动，竖毛，并随剂量增加，出现程度递增的似呃逆反应及部分或全部动物死亡。未死亡小鼠一日后行为、活动、饮食、皮毛光泽和体重增长基本恢复正常。死亡小鼠经解剖，各主要脏器肉眼观察均未见明显异常改变。7日后，处死小鼠，解剖，各主要脏器肉眼观察未见明显异常改变。各剂量组小鼠死亡情况见表7。
表7药物中乌头碱各剂量组小鼠死亡数
按NDST软件包中Bliss法计算得LD50为6.41mg/kg，95％的可信限为5.19～7.74mg/kg。
4、结论
药物中乌头碱有一定毒性，昆明种小鼠一次灌胃给药，LD50为6.41mg/kg，95％的可信限为5.19～7.74mg/kg。
三、苯甲酰中乌头原碱急性毒性试验资料
试验测得：昆明种小鼠一次灌胃给予药物苯甲酰中乌头原碱的最大耐受剂量为1g/kg。
最大耐受量的测定
1、试验材料
1.1受试药物
药物苯甲酰中乌头原碱，淡黄色结晶颗粒，有蒜臭味，由成都芝芝药业有限公司提供。
1.2试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：川实动管质第67号；饲料提供者同动物，自由饮水，饲养室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
2、试验方法
将药物苯甲酰中乌头原碱结晶颗粒用极少量乙醇超声助溶，然后加蒸馏水配成液度为0.5g/ml的溶液，给禁食不禁水14小时的20只昆明种小鼠分别灌胃给予药物苯甲酰中乌头原碱的溶液0.2ml/10g，立即观察动物反应情况，连续观察7天，记录小鼠的行为活动、皮毛光泽、饮食、体重和死亡情况。
3、试验结果
小鼠在灌胃后15分钟～4小时内，大多数倦缩少动、竖毛，4小时后行为、活动、饮食均逐渐恢复正常。观察期间，7日内无一动物死亡，动物饮食、行为活动正常，毛色光滑，体重增长正常(实验前小鼠体重为19.5±1.1g，观察7天后体重为25.2±1.8g)。7日后，处死小鼠尸检，各脏器肉眼观察未见明显异常。故药物苯甲酰中乌头原碱一次灌胃的最大耐受剂量为1g/kg。
4、结论
昆明种小鼠一次灌胃给予药物苯甲酰中乌头原碱的最大耐受剂量为1g/kg。
在上述毒理试验结果的基础下，进行药效学试验，保证本发明药物用药安全。
试验例2本发明药物活性成分三个乌头碱类化合物的镇痛效果试验
1.扭体法小鼠镇痛试验
以体重18～22克雌雄各半的昆明种小鼠为试验动物，同样饲喂条件下进行试验。
试验药物：分别以下乌头碱(简称“式(II)成分”)，中乌头碱(简称“式(III)成分”)，苯甲酰中乌头原碱(简称“式(IV)成分”)为试验药物。其中：式(II)成分用蒸馏水分别配制成梯度含量为0.2、0.1、0.05和0.025mg/ml的药液；式(III)成分用蒸馏水分别配制成梯度含量为0.1、0.05、0.025和0.0125mg/ml的药液；式(IV)成分用蒸馏水分别配制成梯度含量为20、10、5和2.5mg/ml的药液。
对照药物A为将盐酸哌替啶注射液(青海制药厂，批号20020510)以生理盐水稀释成的含量为2mg/ml的药液。
对照药物B为由肠溶阿司匹林片(南京白敬宇制药厂，批号031016)经研磨后以蒸馏水溶解得到的含量为10mg/ml药液。
随机将试验小鼠按10只为一组分组，其中一组为空白对照组，按0.2ml/10g体重剂量灌胃给以蒸馏水；阳性对照组A按40mg/kg体重(相当于临床用量20倍)剂量以腹腔注射给以对照药物A；阳性药物对照组B按200mg/kg体重(相当于临床用量20倍)剂量灌胃给以对照药物B；其余为按不同剂量梯度灌胃给以本发明对应试验药物的试验组。各灌胃给药组的给药容积均为0.2ml/10g体重。除对照药物A组在给药15分钟后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只外，其余各组均于给药30分钟后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射冰醋酸溶液后第5～20分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部抬高)次数，并对试验结果进行统计分析，计算各试验组的扭体均数及标准差与疼痛抑制率，用t检验比较各给药组与阴性对照组的组间差异。试验结果如表8所示。
表8扭体法小鼠镇痛试验结果
注：与空白组相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001；△P＜0.01；△P＜0.05，△△P＜0.01。
上述试验结果显示，对照药物A和B两组的镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率分别为100％和92.11％。在式(II)的下乌头碱成分中，除0.5mg/kg剂量组外，其余各组均可有不同程度的较明显镇痛作用；式(III)的中乌头碱成分中，除0.25mg/kg组外，其余各组也均可有较明显的镇痛作用；式(IV)的苯甲酰中乌头原碱中，400mg/kg和200mg/kg两剂量组可具有较明显的镇痛作用。同时，上述结果显示，三个化合物单独使用对疼痛的抑制率都存在一定的剂量依赖性。
2热板法小鼠镇痛试验
试验动物及其分组，各试验药物剂量梯度及给药剂量和给药方法均分别与上述扭体法试验的方式相同，其中对照药物组仅以盐酸哌替啶作为对照药物。
将恒温水浴温度控制为55±0.5℃，取小鼠置于恒温的铝桶内，记录从放入至舔后足的时间(痛值阈)，连续测定两次，两次测定时间间隔5分钟，取其平均值为该小鼠给药前的痛阈值。选痛阈值在5～30秒内的小鼠，按每组10只分组。各组试验动物分别于给药后15、30、60、90和120分钟各测定小鼠痛阈值两次，并计算各时间点的平均痛阈值及痛阈值提高率。对试验数据作统计分析，计算各组痛阈值提高率及标准差，用t检验比较各给药组与阴性对照组的组间差异。试验过程中小鼠在热刺激下出现舔足、踢后腿、跳跃等疼痛反应，仅选舔后足作为疼痛反应指标。试验结果如表9。
表9热板法小鼠镇痛试验结果
注：与空白组相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001；△P＜0.05，△△P＜0.01；△P＜0.05，△△P＜0.01。
表中可知，本发明所述的各有效成分，单独使用均有较明显的镇痛作用，并呈量线性效关系。式(II)下乌头碱成分的大剂量给药组在所测各时间点处的痛阈值均明显提高，较对照药物A盐酸哌替啶的镇痛效果维持时间长，在2小时内均有较明显的镇痛作用。
试验例3苯甲酰中乌头原碱与下乌头碱不同比例配伍的镇痛作用试验
试验证明，药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及下乌头碱1mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为33.7％和46.9％。苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱的300∶1、100∶1、100∶3配比药物也同样具有明显抑制醋酸所致小鼠的扭体反应，其疼痛抑制率分别为57.1％、61.7％和40.0％，其中300∶1、100∶1配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及1mg/kg的下乌头碱。从疼痛抑制率可看出，以苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱配比比例为100∶1时，镇痛作用最强。可以认为：苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为100∶1。
一、试验材料
1、试验药品及配制
苯甲酰中乌头原碱，淡黄色粉末；下乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。称取苯甲酰中乌头原碱250mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含苯甲酰中乌头原碱10mg/ml的溶液；称取下乌头碱2.5mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含下乌头碱0.1mg/ml的溶液。按表10取不同体积的苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱溶液，配成含不同比例的苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱药液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取1ml无水乙醇，加蒸馏水至10ml配成10％的乙醇。
表10苯甲酰中乌头原碱/下乌头碱不同配比剂量组
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠70只，随机分成7组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，灌胃给予10％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3、4、5、6、7组为药物苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱及其3个不同配比剂量组，分别灌胃给予苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱及其3个不同配比药物，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药30分钟后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为82.9％。药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及下乌头碱1mg/kg剂量均有明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，其疼痛抑制率分别为33.7％和46.9％。苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱的300∶1、100∶1、100∶3配比药物也均有不同程度抑制醋酸所致小鼠扭体反应，其扭体数与阴性对照组相比，有显著性差异，显示较明显的镇痛作用；其疼痛抑制率分别为57.1％、61.7％和40.0％，其中300∶1、100∶1配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及1mg/kg的下乌头碱，结果见表11。从疼痛抑制率看，以苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱配比比例为100∶1时，镇痛作用最强。可以认为：苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为100∶1。
表11药物苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱不同配比对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及下乌头碱1mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为33.7％和46.9％。苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱的300∶1、100∶1、100∶3配比药物也同样具有明显抑制醋酸所致小鼠的扭体反应，其疼痛抑制率分别为57.1％、61.7％和40.0％，其中300∶1、100∶1配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及1mg/kg的下乌头碱。从疼痛抑制率看，以苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱配比的组合物，用量与药效并没有剂量依赖性；二者比例为100∶1时，用量较少，镇痛作用最强，达到高效低毒的目的。
试验例4下乌头碱与中乌头碱不同比例配伍的镇痛作用试验
试验证明，药物下乌头碱1mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为46.9％和73.1％。下乌头碱、中乌头碱的6∶1、2∶1、2∶3配比药物也同样具有显著抑制醋酸所致小鼠扭体反应，其疼痛抑制率分别为74.3％、66.9％和78.3％。从疼痛抑制率可看出，以下乌头碱、中乌头碱配比比例为2∶3时，镇痛作用最强。可以认为：下乌头碱、中乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为2∶3。
一、试验材料
1、试验药品及配制
下乌头碱，白色结晶颗粒；中乌头碱，近白色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取下乌头碱2.5mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含下乌头碱0.1mg/ml的溶液；称取中乌头碱1.25mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含中乌头碱0.05mg/ml的溶液。按表12取不同体积的下乌头碱、中乌头碱溶液，配成含不同比例的下乌头碱、中乌头碱药液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取1ml无水乙醇，加蒸馏水至10ml配成10％的乙醇。
表12下乌头碱/中乌头碱不同配比剂量组
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠70只，随机分成7组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，灌胃给予10％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3、4、5、6、7组为药物下乌头碱、中乌头碱及其3个不同配比剂量组，分别灌胃给予下乌头碱、中乌头碱及其3个不同配比药液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为82.9％。药物下乌头碱1mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，其疼痛抑制率分别为46.9％和73.1％。下乌头碱、中乌头碱的6∶1、2∶1、2∶3配比药物也均有不同程度抑制醋酸所致小鼠扭体反应，其扭体数与阴性对照组相比，有显著性差异，显示较明显的镇痛作用；其疼痛抑制率分别为74.3％、66.9％和78.3％，结果见表13。从疼痛抑制率看，下乌头碱、中乌头碱配比的组合物，用量与药效并没有剂量依赖性；二者比例为2∶3时，用量少，镇痛作用最强，达到高效低毒的目的。
表13药物下乌头碱、中乌头碱不同配比对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物下乌头碱1mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为46.9％和73.1％。下乌头碱、中乌头碱的6∶1、2∶1、2∶3配比药物也同样具有显著抑制醋酸所致小鼠扭体反应，其疼痛抑制率分别为74.3％、66.9％和78.3％。从疼痛抑制率可看出，以下乌头碱、中乌头碱配比比例为2∶3时，镇痛作用最强。可以认为：下乌头碱、中乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为2∶3。
试验例5苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱不同比例配伍的镇痛作用试验
试验明，药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为33.7％和73.1％。苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱的600∶1、200∶1、200∶3配比药物也同样具有明显抑制醋酸所致小鼠的扭体反应，其疼痛抑制率分别为51.4％、75.4％和84.6％，其中200∶1、200∶3的配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及0.5mg/kg的中乌头碱。从疼痛抑制率可看出，随着中乌头碱的比例加大，镇痛作用逐渐增强。以苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱配比比例为200∶3时，镇痛作用最强。可以认为：苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为200∶3。
一、试验材料
1、试验药品及配制
苯甲酰中乌头原碱，淡黄色粉末；中乌头碱，近白色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取苯甲酰中乌头原碱250mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含苯甲酰中乌头原碱10mg/ml的溶液；称取中乌头碱1.25mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含中乌头碱0.05mg/ml的溶液。按下表取不同体积的苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱溶液，配成含不同比例的苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱药液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取1ml无水乙醇，加蒸馏水至10ml配成10％的乙醇。
表14苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱不同配比剂量组
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠70只，随机分成7组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，灌胃给予10％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3、4、5、6、7组为药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱及其3个不同配比剂量组，分别灌胃给予苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱及其3个不同配比药液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为82.9％。药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，其疼痛抑制率分别为33.7％和73.1％。苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱的600∶1、200∶1、200∶3配比药物也均有不同程度抑制醋酸所致小鼠扭体反应，其扭体数与阴性对照组相比，有显著性差异，显示较明显的镇痛作用；其疼痛抑制率分别为51.4％、75.4％和84.6％，其中200∶1、200∶3的配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及0.5mg/kg的中乌头碱，结果见表15。从疼痛抑制率看，苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱配比的药物组合物，用量与药效并没有剂量依赖性；比例为200∶3时，用量少，镇痛作用最强。
表15药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱不同配比对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为33.7％和73.1％。苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱的600∶1、200∶1、200∶3配比药物也同样具有明显抑制醋酸所致小鼠的扭体反应，其疼痛抑制率分别为51.4％、75.4％和84.6％，其中200∶1、200∶3的配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及0.5mg/kg的中乌头碱。从疼痛抑制率可看出，随着中乌头碱的比例加大，镇痛作用逐渐增强。以苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱配比比例为200∶3时，镇痛作用最强。可以认为：苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为200∶3。
试验例6苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱、中乌头碱不同比例配伍的镇痛作用试验
试验证明，药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱不同比例配伍组成的复方药物均具有明显的镇痛作用，在苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱配比比例为200∶1∶2、400∶1∶2、100∶1∶1和200∶1∶4中，以100∶1∶1的配比比例镇痛作用最强，故苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱的镇痛作用最强的最佳配比为100∶1∶1。
一、试验材料
1、试验药品及配制
苯甲酰中乌头原碱，淡黄色粉末；中乌头碱，近白色粉末；下乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。称取苯甲酰中乌头原碱250mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含苯甲酰中乌头原碱10mg/ml的溶液；称取中乌头碱1.25mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含中乌头碱0.05mg/ml的溶液；称取下乌头碱2.5mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含下乌头碱0.1mg/ml的溶液。按表16取不同体积的苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱溶液，配成含不同比例的苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱药液，备用。
表16苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱不同配比剂量组
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取1ml无水乙醇，加蒸馏水至10ml配成10％的乙醇。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠60只，随机分成6组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，灌胃给予10％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3、4、5、6组为药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱的4个不同配比剂量组，分别灌胃给予苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱的4个不同配比药液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药30分钟后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为88.0％。药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱配比比例为200∶1∶2、400∶1∶2、100∶1∶1和200∶1∶4组成的复方药物均有不同程度减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，有显著性差异，显示较明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为85.0％、65.3％、90.1％、和86.1％，结果见表17。从疼痛抑制率看，以苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱配比，用量与药效并没有剂量依赖性；比例为100∶1∶1时，用量少，镇痛作用最强，达到高效低毒的目的。
表17药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱不同配比
对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱不同比例配伍组成的复方药物均具有明显的镇痛作用，在苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱配比比例为200∶1∶2、400∶1∶2、100∶1∶1和200∶1∶4中，以100∶1∶1的比例镇痛作用最强，故苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱的镇痛作用最强的最佳配比为100∶1∶1。
试验例7苯甲酰中乌头原碱肌肉注射给药的镇痛作用试验
试验证明，肌肉注射药物苯甲酰中乌头原碱100和25mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其镇痛作用明显强于100mg/kg的灌胃给药，疼痛抑制率分别为98.6％和93.5％，而100mg/kg的灌胃给药疼痛抑制率为37.2％。但同时肌肉注射相同剂量的毒性反应也重于灌胃给药，说明在实际应用中，苯甲酰中乌头原碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低得多，才能避免毒性反应的发生。
一、试验材料
1、试验药品及配制
苯甲酰中乌头原碱，淡黄色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取苯甲酰中乌头原碱125mg，加入1.25ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加生理盐水至25ml，配成含苯甲酰中乌头原碱5mg/ml的溶液，取2.5ml，加生理盐水到10ml，配成1.25mg/ml的溶液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取0.5ml无水乙醇，加生理盐水至10ml配成5％的乙醇。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，腿部肌肉注射给予5％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组灌胃给予5mg/ml的苯甲酰中乌头原碱溶液，第4组肌肉注射给予5mg/ml的苯甲酰中乌头原碱溶液，第5组肌肉注射给予1.25mg/ml的苯甲酰中乌头原碱溶液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。药物苯甲酰中乌头原碱肌肉注射和灌胃给予100mg/kg均能明显减少醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率分别为98.6％和37.2％。但肌肉注射镇痛作用明显强于灌胃给药，即使肌肉注射25mg/kg剂量镇痛作用也明显强于100mg/kg的灌胃给药，其疼痛抑制率为93.5％，结果见表18。我们同时也发现，肌肉注射100mg/kg苯甲酰中乌头原碱组小鼠出现萎缩、少动的毒性反应较明显，说明在实际应用中，苯甲酰中乌头原碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低得多，才能避免毒性反应的发生。
表18药物苯甲酰中乌头原碱对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
肌肉注射药物苯甲酰中乌头原碱100和25mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其镇痛作用明显强于100mg/kg的灌胃给药，疼痛抑制率分别为98.6％和93.5％，而100mg/kg的灌胃给药疼痛抑制率为37.2％。但同时肌肉注射相同剂量的毒性反应也重于灌胃给药，说明在实际应用中，苯甲酰中乌头原碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低得多，才能避免毒性反应的发生。试验表明苯甲酰中乌头原碱与中乌头碱或下乌头碱配伍使用时，镇痛作用明显，可以达到高效低毒的目的，是一种新的用药途径。
试验例8苯甲酰中乌头原碱皮肤给药的镇痛作用试验
试验证明，药物苯甲酰中乌头原碱皮肤外用约800mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为33.6％；400mg/kg剂量组镇痛作用不明显。结果表明，苯甲酰中乌头原碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。
一、试验材料
1、试验药品及配制
苯甲酰中乌头原碱，淡黄色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取苯甲酰中乌头原碱400mg，加入2.5ml乙醚溶解后，加入到2.1g医药凡士林中，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成含苯甲酰中乌头原碱约16mg/g的凡士林膏，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液，备用。
取2g医药凡士林，加入2.5ml乙醚，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成阴性对照的凡士林膏，备用。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
乙醚，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050407。
硫化钠：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20040921。
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
医药凡士林：武汉石油化工厂生产。
二、试验方法
取昆明种小鼠40只，随机分成4组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。给药前一天，用剪刀粗略剪去小鼠背部毛后，用8％硫化钠溶液脱毛，面积1.5cm×1.5cm。第1组为阴性对照组，在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布阴性对照的凡士林膏0.1g/只，然后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布含16mg/g苯甲酰中乌头原碱的药膏0.1g/只；第4组涂布含16mg/g苯甲酰中乌头原碱的药膏0.05g/只。两涂药膏组也在涂药后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖。除第2组在给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液外，其余各组均在贴敷1.5小时后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。药物苯甲酰中乌头原碱作为皮肤外用的尝试，在约800mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为33.6％；400mg/kg剂量组小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，显示镇痛作用不明显，结果见表19。结果表明，苯甲酰中乌头原碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。
表19药物苯甲酰中乌头原碱外用对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物苯甲酰中乌头原碱皮肤外用约800mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为33.6％；400mg/kg剂量组镇痛作用不明显。结果表明，苯甲酰中乌头原碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。试验表明苯甲酰中乌头原碱与中乌头碱或下乌头碱配伍使用时，可以协同增效，达到高效低毒的目的，是一种新的用药途径。
试验例9下乌头碱肌肉注射给药的镇痛作用试验
试验证明，肌肉注射药物下乌头碱100和25mg/kg剂量均有非常明显的镇痛作用，疼痛抑制率均为100％。相同剂量肌肉注射给药镇痛作用明显强子灌胃给药，但同时毒性反应也重于灌胃给药，说明，在实际应用中，附子灵肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低很多，既能保持药效，又能避免毒性反应的发生。
一、试验材料
1、试验药品及配制
下乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。称取下乌头碱1.25mg，加入1.25ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加生理盐水至25ml，配成含下乌头碱0.05mg/ml的溶液；取2.5ml，加生理盐水到10ml，配成0.0125mg/ml的溶液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取0.5ml无水乙醇，加生理盐水至10ml配成5％的乙醇。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，腿部肌肉注射给予5％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组灌胃给予0.05mg/ml的下乌头碱溶液，第4组肌肉注射给予0.05mg/ml的下乌头碱溶液，第5组肌肉注射给予0.0125mg/ml的下乌头碱溶液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。药物下乌头碱肌肉注射和灌胃给予1mg/kg均能明显减少醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率分别为47.7％和100％。但肌肉注射镇痛作用明显强于灌胃给药，即使肌肉注射0.25mg/kg剂量镇痛作用也明显强于100mg/kg的灌胃给药，其疼痛抑制率也为100％，结果见表20。我们同时也发现，肌肉注射1mg/kg下乌头碱组小鼠出现萎缩、少动、呃逆样毒性反应也很明显，说明，在实际应用中，下乌头碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低得多，才能避免毒性反应的发生。
表20药物下乌头碱对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
肌肉注射药物下乌头碱100和25mg/kg剂量均有非常明显的镇痛作用，疼痛抑制率均为100％。相同剂量肌肉注射给药镇痛作用明显强于灌胃给药，但同时毒性反应也重于灌胃给药，说明，在实际应用中，附子灵肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低很多，既能保持药效，又能避免毒性反应的发生。试验表明下乌头碱与中乌头碱或苯甲酰中乌头原碱配伍使用时，可以协同增效，达到高效低毒的目的，是一种新的用药途径。
试验例10下乌头碱皮肤给药的镇痛作用试验
试验证明，药物下乌头碱皮肤外用约8mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为37.2％；4mg/kg剂量组尽管疼痛抑制率为31.8％，但小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，表明镇痛作用不明显。结果表明，下乌头碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，下乌头碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进下乌头碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。
一、试验材料
1试验药品及配制
下乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。称取下乌头碱3.2mg，加入2.5ml乙醚溶解后，加入到2g医药凡士林中，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成含下乌头碱约1.6mg/g的凡士林膏，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取2g医药凡士林，加入2.5ml乙醚，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成阴性对照的凡士林膏，备用。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
乙醚：分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050407。
硫化钠：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20040921。
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
医药凡士林：武汉石油化工厂生产。
二、试验方法
取昆明种小鼠40只，随机分成4组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。给药前一天，用剪刀粗略剪去小鼠背部毛后，用8％硫化钠溶液脱毛，面积1.5cm×1.5cm。第1组为阴性对照组，在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布阴性对照的凡士林膏0.1g/只，然后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布含1.6mg/g下乌头碱的药膏0.1g/只；第4组涂布含1.6mg/g下乌头碱的药膏0.05g/只。两涂药膏组也在涂药后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖。除第2组在给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液外，其余各组均在贴敷1.5小时后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。药物下乌头碱作为皮肤外用的尝试，在约8mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为37.2％；4mg/kg剂量组尽管疼痛抑制率为31.8％，但小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，显示镇痛作用不明显，结果见表21。结果表明，下乌头碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，下乌头碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进下乌头碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。
表21药物下乌头碱外用对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物下乌头碱皮肤外用约8mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为37.2％；4mg/kg剂量组尽管疼痛抑制率为31.8％，但小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，表明镇痛作用不明显。结果表明，下乌头碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，下乌头碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进下乌头碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。试验表明下乌头碱与中乌头碱或苯甲酰中乌头原碱配伍使用时，可以协同增效，达到高效低毒的目的，是一种新的用药途径。
试验例11中乌头碱肌肉注射给药的镇痛作用试验
试验证明，肌肉注射0.5mg/kg的中乌头碱毒性太大。肌肉注射中乌头碱0.125和0.031mg/kg均具有明显的镇痛作用，其镇痛作用明显强于0.5mg/kg的灌胃给药，疼痛抑制率分别为99.6％和77.6％，而0.5mg/kg的灌胃给药疼痛抑制率为56.7％。肌肉注射0.125mg/kg中乌头碱组小鼠同样也出现了萎缩、少动、呃逆样毒性反应，仅程度稍轻。说明在实际应用中，中乌头碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低很多，才能避免毒性反应的发生。
一、试验材料
1、试验药品及配制
中乌头碱，近白色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取中乌头碱1.25mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加生理盐水至50ml，配成含下乌头碱0.025mg/ml的溶液；取2.5ml，加生理盐水到10ml，配成0.00625mg/ml的溶液；再取0.0625mg/ml的溶液2.5ml，加生理盐水到10ml，配成0.00156mg/ml的溶液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取0.5ml无水乙醇，加生理盐水至10ml配成5％的乙醇。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠60只，随机分成6组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，腿部肌肉注射给予5％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组灌胃给予0.025mg/ml的中乌头碱溶液，第4组肌肉注射给予0.025mg/ml的中乌头碱溶液，第5组肌肉注射给予0.00625mg/ml的中乌头碱溶液，第6组肌肉注射给予0.00165mg/ml的中乌头碱溶液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。在本实验中，由于肌肉注射药物0.5mg/kg的中乌头碱毒性太大，10只小鼠肌肉注射后出现明显的萎缩、少动、呼吸困难、呃逆样反应，30min内，已死亡8只，尽管剩余两只在实验中未出现扭体反应。将浓度进一步稀释，降低剂量给药，结果发现，肌肉注射药物中乌头碱0.125和0.031mg/kg的镇痛作用明显强于0.5mg/kg的灌胃给药，其疼痛抑制率分别为99.6％和77.6％，而0.5mg/kg的灌胃给药疼痛抑制率为56.7％。结果见表22。我们同样也发现，肌肉注射0.125mg/kg中乌头碱组小鼠也出现了萎缩、少动、呃逆样毒性反应，仅程度稍轻。说明在实际应用中，中乌头碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低很多，才能避免毒性反应的发生。
表22药物中乌头碱不同给药途径对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
※10只小鼠肌肉注射0.5mg/kg中乌头碱后30min，死亡8只，此数据为剩余两只的观察结果。
四、试验结论
肌肉注射0.5mg/kg的中乌头碱毒性太大。肌肉注射药物中乌头碱0.125和0.031mg/kg均具有明显的镇痛作用，其镇痛作用明显强于0.5mg/kg的灌胃给药，疼痛抑制率分别为99.6％和77.6％，而0.5mg/kg的灌胃给药疼痛抑制率为56.7％。肌肉注射0.125mg/kg中乌头碱组小鼠同样也出现了萎缩、少动、呃逆样毒性反应，仅程度稍轻。说明在实际应用中，中乌头碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低很多，才能避免毒性反应的发生。
试验例12中乌头碱皮肤给药的镇痛作用试验
一、试验材料
1、试验药品及配制
中乌头碱，近白色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取中乌头碱1.6mg，加入2.5ml乙醚溶解后，加入到2g医药凡士林中，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成含中乌头碱约0.8mg/g的凡士林膏，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取2g医药凡士林，加入2.5ml乙醚，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成阴性对照的凡士林膏，备用。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
乙醚：分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050407。
硫化钠：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20040921。
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
医药凡士林：武汉石油化工厂生产。
二、试验方法
取昆明种小鼠40只，随机分成4组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。给药前一天，用剪刀粗略剪去小鼠背部毛后，用8％硫化钠溶液脱毛，面积1.5cm×1.5cm。第1组为阴性对照组，在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布阴性对照的凡士林膏0.1g/只，然后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布含0.8mg/g中乌头碱的药膏0.1g/只；第4组涂布含0.8mg/g中乌头碱的药膏0.05g/只。两涂药膏组也在涂药后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖。除第2组在给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液外，其余各组均在贴敷1.5小时后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。药物中乌头碱作为皮肤外用的尝试，在约4mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为34.3％；2mg/kg剂量组小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，显示镇痛作用不明显，结果见表23。结果表明，中乌头碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，中乌头碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进中乌头碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。
表23药物中乌头碱外用对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物中乌头碱皮肤外用约4mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为34.3％；2mg/kg剂量组小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，显示镇痛作用不明显。结果表明，中乌头碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，中乌头碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进中乌头碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。试验表明中乌头碱与下乌头碱或苯甲酰中乌头原碱配伍使用时，可以协同增效，达到高效低毒的目的，是一种新的用药途径。
上述试验结果显示，单一化合物的用量与药效呈量效关系，配伍后的药物组合物与药效并不呈简单的量效线性关系，而是在一个特定的配比下，在用量较少的情况下，即可达到最好的药效，高效、低毒的镇痛药物组合物为临床提供了一种心的选择。
实施例1～7：口服胶囊药物
以重量份计的各例药物组成如表1所示。
表1胶囊型药物组成
制备方法：将有效药物成分按胶囊药物的常规制剂方式粉碎并过筛，然后加入淀粉并与适量医用乙醇混合，于摇摆制粒机上制粒，干燥，整粒后，用适量的硬脂酸镁等润滑剂混合后，按所需药物剂量充填胶囊。
实施例8～14：口服片剂药物
各例药物组成同实例1～7。
制备方法：按实例1～7的方式制粒并干燥后过筛，加适量滑石粉模压制片，再按常规包衣方式用由HPMC、丙二醇、钛白粉、医用乙醇和吐温-80共同组成的包衣液对所压制的药片进行包衣。
实施例15～21：口服颗粒剂止痛药
以重量份计的各例药物组成如表2所示。
制备方法：将有效药物成分按颗粒药物的常规制剂方式粉碎并过筛，然后加入淀粉、糖粉和适量医用乙醇混合均匀，于摇摆制粒机上制粒，干燥，整粒后，按所需药物剂量分装。
表2颗粒剂止痛药的组成
实施例22～28：止痛注射剂药物
以重量份计的各例药物组成如表3所示。
表3各注射剂药物的组成
制备方法：将有效药物成分加入适量注射用水、吐温-80、EDTA及常规量范围的CMC-Na充分搅拌并超声波混合，使充分溶解后用注射用水稀释定量，过滤，需要时用适量盐酸调整pH4-9，用安瓿灌封。
实施例29～35：外用止痛药
各例有效药物的组成及用量同实例15～21。
1.止痛膏药
制备方法：将有效药物成分用医用乙醇加热溶解后过滤，再分别均与100(×1000)份(均为重量)的十八醇和150(×1000)份硬脂酸混合并加热搅拌均匀后保温，为备用的油相物料。另将10,000份十二烷基硫酸钠、1,000份对羟基苯甲酸乙酯和加足至1000(×1000)份的纯化水加热下搅拌均匀，与备用的油相物料混合，高速搅拌均匀后，冷却、封装即可。
2.止痛贴敷剂(橡皮膏)制备方法：按橡皮膏常规制备方法，分别将400(×1000)份橡胶基质压胶和浸胶后，与有效药物成分及100(×1000)份凡士林、50(×1000)份羊毛脂、4000(×1000)份松香、30(×1000)份氧化锌等填充剂和分散剂辅料共同混合打膏和过滤后，在贴敷载体上涂布膏料并回收溶剂，按需要大小切割并加衬后包装。
实施例36～42：止痛气雾剂
以重量份计的各例药物组成如表4所示。
表4各例止痛气雾剂的组成
制备方法：将有效药物成分加入医用乙醇，根据需要还可加入适量的香味剂，混合均匀并过滤。定量装入耐压容器，按规定标准充压并注入经微孔过滤后的二氯二氟甲烷，即成为止痛气雾剂药物。
实施例43～49：止痛擦剂/洗剂
各例的有效药物组成分别同上述的止痛气雾剂。
制备方法：将有效药物成分加入医用乙醇(擦剂为300(×1000)份；洗剂为100(×1000)份)混合均匀并过滤，用医用水调整至总量1000(×1000)份，即分别得到可供使用的止痛擦剂/洗剂药物；混合均匀并过滤后，根据需要加入或不加入医用水，定量装入耐压容器并按规定标准充压，即可成为止痛气雾剂药物。
实施例50～56：止痛膜剂药物
各例的有效药物组成分别同上述的止痛气雾剂。
制备方法：将有效药物成分充分粉碎后，分别均与100(×1000)份甘油和约5,000份吐温-80搅拌混合均匀，再与由聚乙烯醇(PVA)制得的溶浆搅拌混合均匀，消泡后再与液体石蜡充分混合后制膜，干燥后即可。
实施例57～63：止痛湿敷料
以重量份计的各例药物组成如表5所示。
表5各例湿敷料的组成
制备方法：将有效药物成分医用乙醇溶解后用水定量稀释，然后将医用纱布在药液中充分浸泡，取出带药液的纱布封装。
以下通过药效学试验、毒理学试验证明本发明的有益效果。
试验例1本发明药物活性成分三个乌头碱类化合物的毒理试验
一、下乌头碱急性毒性试验
试验测得：昆明种小鼠灌胃给予药物下乌头碱，有一定毒性，LD50为12.8mg/kg，95％的可信限为10.93～14.99mg/kg。
半数致死量(LD50)的测定
1、试验材料
1.1受试药物及配制
药物下乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。取下乌头碱20mg，加蒸馏水至20ml，按1∶0.8等比稀释配成0.80、0.64、0.51、0.41mg/ml一系列浓度的药液备用。
1.2试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：川实动管质第67号；饲料提供者同动物，自由饮水，饲养室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
2、试验方法
通过预试找出最大致死量为20mg/kg，最小致死量为5mg/kg。取禁食不禁水14小时的昆明种小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，由20mg/kg开始，按1∶0.8比例剂量递减，分别给5组小鼠一次性灌胃给予药物下乌头碱，给药体积均为0.2ml/10g，给药后立即观察动物反应情况，连续观察7日，逐日记录小鼠出现的毒性反应及死亡情况。
3、试验结果
小鼠在灌胃后10分钟～4小时内，大多数出现倦缩少动，竖毛，并随剂量增加，出现程度递增的似呃逆反应及部分或全部动物死亡。未死亡小鼠一日后行为、活动、饮食、皮毛光泽和体重增长基本恢复正常。死亡小鼠经解剖，各主要脏器肉眼观察均未见明显异常改变。7日后，处死小鼠，解剖，各主要脏器肉眼观察未见明显异常改变。各剂量组小鼠死亡情况见表6。
表6药物下乌头碱各剂量组小鼠死亡数
按NDST软件包中Bliss法计算得LD50为12.8mg/kg，95％的可信限为10.93～14.99mg/kg。
4、结论
药物下乌头碱有一定毒性，昆明种小鼠灌胃给药，LD50为12.8mg/kg，95％的可信限为10.93～14.99mg/kg。
二、中乌头碱急性毒性试验
试验测得：昆明种小鼠灌胃给予药物中乌头碱有一定毒性，LD50为6.41mg/kg，95％的可信限为5.19～7.74mg/kg。
半数致死剂量(LD50)的测定
1、试验材料
1.1受试药物及配制
药物中乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。取中乌头碱15mg，加蒸馏水至23.4ml(0.64mg/ml)，取出16ml，按1∶0.8等比稀释配成0.51、0.41、0.33、0.26、0.21mg/ml一系列浓度的药液，备用。
1.2试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：川实动管质第67号；饲料提供者同动物，自由饮水，饲养室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
2、试验方法
通过预试找出最大致死量为12.8mg/kg，最小致死量为2.5mg/kg。取禁食而不禁水14小时的昆明种小鼠60只，随机分成6组，每组10只，雌雄各半；由12.8mg/kg开始，按1∶0.8比例剂量递减，分别给6组小鼠一次性灌胃给予药物中乌头碱，给药体积均为0.2ml/10g。给药后立即观察动物反应情况，连续观察7日，逐日记录小鼠出现的毒性反应及死亡情况。
3、试验结果
小鼠在灌胃后10分钟～4小时内，大多数出现倦缩少动，竖毛，并随剂量增加，出现程度递增的似呃逆反应及部分或全部动物死亡。未死亡小鼠一日后行为、活动、饮食、皮毛光泽和体重增长基本恢复正常。死亡小鼠经解剖，各主要脏器肉眼观察均未见明显异常改变。7日后，处死小鼠，解剖，各主要脏器肉眼观察未见明显异常改变。各剂量组小鼠死亡情况见表7。
表7药物中乌头碱各剂量组小鼠死亡数
按NDST软件包中Bliss法计算得LD50为6.41mg/kg，95％的可信限为5.19～7.74mg/kg。
4、结论
药物中乌头碱有一定毒性，昆明种小鼠一次灌胃给药，LD50为6.41mg/kg，95％的可信限为5.19～7.74mg/kg。
三、苯甲酰中乌头原碱急性毒性试验资料
试验测得：昆明种小鼠一次灌胃给予药物苯甲酰中乌头原碱的最大耐受剂量为1g/kg。
最大耐受量的测定
1、试验材料
1.1受试药物
药物苯甲酰中乌头原碱，淡黄色结晶颗粒，有蒜臭味，由成都芝芝药业有限公司提供。
1.2试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：川实动管质第67号；饲料提供者同动物，自由饮水，饲养室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
2、试验方法
将药物苯甲酰中乌头原碱结晶颗粒用极少量乙醇超声助溶，然后加蒸馏水配成液度为0.5g/ml的溶液，给禁食不禁水14小时的20只昆明种小鼠分别灌胃给予药物苯甲酰中乌头原碱的溶液0.2ml/10g，立即观察动物反应情况，连续观察7天，记录小鼠的行为活动、皮毛光泽、饮食、体重和死亡情况。
3、试验结果
小鼠在灌胃后15分钟～4小时内，大多数倦缩少动、竖毛，4小时后行为、活动、饮食均逐渐恢复正常。观察期间，7日内无一动物死亡，动物饮食、行为活动正常，毛色光滑，体重增长正常(实验前小鼠体重为19.5±1.1g，观察7天后体重为25.2±1.8g)。7日后，处死小鼠尸检，各脏器肉眼观察未见明显异常。故药物苯甲酰中乌头原碱一次灌胃的最大耐受剂量为1g/kg。
4、结论
昆明种小鼠一次灌胃给予药物苯甲酰中乌头原碱的最大耐受剂量为1g/kg。
在上述毒理试验结果的基础下，进行药效学试验，保证本发明药物用药安全。
试验例2本发明药物活性成分三个乌头碱类化合物的镇痛效果试验
1.扭体法小鼠镇痛试验
以体重18～22克雌雄各半的昆明种小鼠为试验动物，同样饲喂条件下进行试验。
试验药物：分别以下乌头碱(简称“式(II)成分”)，中乌头碱(简称“式(III)成分”)，苯甲酰中乌头原碱(简称“式(IV)成分”)为试验药物。其中：式(II)成分用蒸馏水分别配制成梯度含量为0.2、0.1、0.05和0.025mg/ml的药液；式(III)成分用蒸馏水分别配制成梯度含量为0.1、0.05、0.025和0.0125mg/ml的药液；式(IV)成分用蒸馏水分别配制成梯度含量为20、10、5和2.5mg/ml的药液。
对照药物A为将盐酸哌替啶注射液(青海制药厂，批号20020510)以生理盐水稀释成的含量为2mg/ml的药液。
对照药物B为由肠溶阿司匹林片(南京白敬宇制药厂，批号031016)经研磨后以蒸馏水溶解得到的含量为10mg/ml药液。
随机将试验小鼠按10只为一组分组，其中一组为空白对照组，按0.2ml/10g体重剂量灌胃给以蒸馏水；阳性对照组A按40mg/kg体重(相当于临床用量20倍)剂量以腹腔注射给以对照药物A；阳性药物对照组B按200mg/kg体重(相当于临床用量20倍)剂量灌胃给以对照药物B；其余为按不同剂量梯度灌胃给以本发明对应试验药物的试验组。各灌胃给药组的给药容积均为0.2ml/10g体重。除对照药物A组在给药15分钟后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只外，其余各组均于给药30分钟后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射冰醋酸溶液后第5～20分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部抬高)次数，并对试验结果进行统计分析，计算各试验组的扭体均数及标准差与疼痛抑制率，用t检验比较各给药组与阴性对照组的组间差异。试验结果如表8所示。
表8扭体法小鼠镇痛试验结果
注：与空白组相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001；△P＜0.01；△P＜0.05，△△P＜0.01。
上述试验结果显示，对照药物A和B两组的镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率分别为100％和92.11％。在式(II)的下乌头碱成分中，除0.5mg/kg剂量组外，其余各组均可有不同程度的较明显镇痛作用；式(III)的中乌头碱成分中，除0.25mg/kg组外，其余各组也均可有较明显的镇痛作用；式(IV)的苯甲酰中乌头原碱中，400mg/kg和200mg/kg两剂量组可具有较明显的镇痛作用。同时，上述结果显示，三个化合物单独使用对疼痛的抑制率都存在一定的剂量依赖性。
2热板法小鼠镇痛试验
试验动物及其分组，各试验药物剂量梯度及给药剂量和给药方法均分别与上述扭体法试验的方式相同，其中对照药物组仅以盐酸哌替啶作为对照药物。
将恒温水浴温度控制为55±0.5℃，取小鼠置于恒温的铝桶内，记录从放入至舔后足的时间(痛值阈)，连续测定两次，两次测定时间间隔5分钟，取其平均值为该小鼠给药前的痛阈值。选痛阈值在5～30秒内的小鼠，按每组10只分组。各组试验动物分别于给药后15、30、60、90和120分钟各测定小鼠痛阈值两次，并计算各时间点的平均痛阈值及痛阈值提高率。对试验数据作统计分析，计算各组痛阈值提高率及标准差，用t检验比较各给药组与阴性对照组的组间差异。试验过程中小鼠在热刺激下出现舔足、踢后腿、跳跃等疼痛反应，仅选舔后足作为疼痛反应指标。试验结果如表9。
表9热板法小鼠镇痛试验结果
注：与空白组相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001；△P＜0.05，△△P＜0.01；△P＜0.05，△△P＜0.01。
表中可知，本发明所述的各有效成分，单独使用均有较明显的镇痛作用，并呈量线性效关系。式(II)下乌头碱成分的大剂量给药组在所测各时间点处的痛阈值均明显提高，较对照药物A盐酸哌替啶的镇痛效果维持时间长，在2小时内均有较明显的镇痛作用。
试验例3苯甲酰中乌头原碱与下乌头碱不同比例配伍的镇痛作用试验
试验证明，药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及下乌头碱1mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为33.7％和46.9％。苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱的300∶1、100∶1、100∶3配比药物也同样具有明显抑制醋酸所致小鼠的扭体反应，其疼痛抑制率分别为57.1％、61.7％和40.0％，其中300∶1、100∶1配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及1mg/kg的下乌头碱。从疼痛抑制率可看出，以苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱配比比例为100∶1时，镇痛作用最强。可以认为：苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为100∶1。
一、试验材料
1、试验药品及配制
苯甲酰中乌头原碱，淡黄色粉末；下乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。称取苯甲酰中乌头原碱250mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含苯甲酰中乌头原碱10mg/ml的溶液；称取下乌头碱2.5mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含下乌头碱0.1mg/ml的溶液。按表10取不同体积的苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱溶液，配成含不同比例的苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱药液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取1ml无水乙醇，加蒸馏水至10ml配成10％的乙醇。
表10苯甲酰中乌头原碱/下乌头碱不同配比剂量组
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠70只，随机分成7组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，灌胃给予10％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3、4、5、6、7组为药物苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱及其3个不同配比剂量组，分别灌胃给予苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱及其3个不同配比药物，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药30分钟后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为82.9％。药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及下乌头碱1mg/kg剂量均有明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，其疼痛抑制率分别为33.7％和46.9％。苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱的300∶1、100∶1、100∶3配比药物也均有不同程度抑制醋酸所致小鼠扭体反应，其扭体数与阴性对照组相比，有显著性差异，显示较明显的镇痛作用；其疼痛抑制率分别为57.1％、61.7％和40.0％，其中300∶1、100∶1配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及1mg/kg的下乌头碱，结果见表11。从疼痛抑制率看，以苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱配比比例为100∶1时，镇痛作用最强。可以认为：苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为100∶1。
表11药物苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱不同配比对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及下乌头碱1mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为33.7％和46.9％。苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱的300∶1、100∶1、100∶3配比药物也同样具有明显抑制醋酸所致小鼠的扭体反应，其疼痛抑制率分别为57.1％、61.7％和40.0％，其中300∶1、100∶1配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及1mg/kg的下乌头碱。从疼痛抑制率看，以苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱配比的组合物，用量与药效并没有剂量依赖性；二者比例为100∶1时，用量较少，镇痛作用最强，达到高效低毒的目的。
试验例4下乌头碱与中乌头碱不同比例配伍的镇痛作用试验
试验证明，药物下乌头碱1mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为46.9％和73.1％。下乌头碱、中乌头碱的6∶1、2∶1、2∶3配比药物也同样具有显著抑制醋酸所致小鼠扭体反应，其疼痛抑制率分别为74.3％、66.9％和78.3％。从疼痛抑制率可看出，以下乌头碱、中乌头碱配比比例为2∶3时，镇痛作用最强。可以认为：下乌头碱、中乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为2∶3。
一、试验材料
1、试验药品及配制
下乌头碱，白色结晶颗粒；中乌头碱，近白色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取下乌头碱2.5mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含下乌头碱0.1mg/ml的溶液；称取中乌头碱1.25mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含中乌头碱0.05mg/ml的溶液。按表12取不同体积的下乌头碱、中乌头碱溶液，配成含不同比例的下乌头碱、中乌头碱药液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取1ml无水乙醇，加蒸馏水至10ml配成10％的乙醇。
表12下乌头碱/中乌头碱不同配比剂量组
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠70只，随机分成7组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，灌胃给予10％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3、4、5、6、7组为药物下乌头碱、中乌头碱及其3个不同配比剂量组，分别灌胃给予下乌头碱、中乌头碱及其3个不同配比药液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为82.9％。药物下乌头碱1mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，其疼痛抑制率分别为46.9％和73.1％。下乌头碱、中乌头碱的6∶1、2∶1、2∶3配比药物也均有不同程度抑制醋酸所致小鼠扭体反应，其扭体数与阴性对照组相比，有显著性差异，显示较明显的镇痛作用；其疼痛抑制率分别为74.3％、66.9％和78.3％，结果见表13。从疼痛抑制率看，下乌头碱、中乌头碱配比的组合物，用量与药效并没有剂量依赖性；二者比例为2∶3时，用量少，镇痛作用最强，达到高效低毒的目的。
表13药物下乌头碱、中乌头碱不同配比对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物下乌头碱1mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为46.9％和73.1％。下乌头碱、中乌头碱的6∶1、2∶1、2∶3配比药物也同样具有显著抑制醋酸所致小鼠扭体反应，其疼痛抑制率分别为74.3％、66.9％和78.3％。从疼痛抑制率可看出，以下乌头碱、中乌头碱配比比例为2∶3时，镇痛作用最强。可以认为：下乌头碱、中乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为2∶3。
试验例5苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱不同比例配伍的镇痛作用试验
试验明，药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为33.7％和73.1％。苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱的600∶1、200∶1、200∶3配比药物也同样具有明显抑制醋酸所致小鼠的扭体反应，其疼痛抑制率分别为51.4％、75.4％和84.6％，其中200∶1、200∶3的配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及0.5mg/kg的中乌头碱。从疼痛抑制率可看出，随着中乌头碱的比例加大，镇痛作用逐渐增强。以苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱配比比例为200∶3时，镇痛作用最强。可以认为：苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为200∶3。
一、试验材料
1、试验药品及配制
苯甲酰中乌头原碱，淡黄色粉末；中乌头碱，近白色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取苯甲酰中乌头原碱250mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含苯甲酰中乌头原碱10mg/ml的溶液；称取中乌头碱1.25mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含中乌头碱0.05mg/ml的溶液。按下表取不同体积的苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱溶液，配成含不同比例的苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱药液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取1ml无水乙醇，加蒸馏水至10ml配成10％的乙醇。
表14苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱不同配比剂量组
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠70只，随机分成7组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，灌胃给予10％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3、4、5、6、7组为药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱及其3个不同配比剂量组，分别灌胃给予苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱及其3个不同配比药液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为82.9％。药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，其疼痛抑制率分别为33.7％和73.1％。苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱的600∶1、200∶1、200∶3配比药物也均有不同程度抑制醋酸所致小鼠扭体反应，其扭体数与阴性对照组相比，有显著性差异，显示较明显的镇痛作用；其疼痛抑制率分别为51.4％、75.4％和84.6％，其中200∶1、200∶3的配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及0.5mg/kg的中乌头碱，结果见表15。从疼痛抑制率看，苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱配比的药物组合物，用量与药效并没有剂量依赖性；比例为200∶3时，用量少，镇痛作用最强。
表15药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱不同配比对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物苯甲酰中乌头原碱100mg/kg及中乌头碱0.5mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为33.7％和73.1％。苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱的600∶1、200∶1、200∶3配比药物也同样具有明显抑制醋酸所致小鼠的扭体反应，其疼痛抑制率分别为51.4％、75.4％和84.6％，其中200∶1、200∶3的配比剂量组高于100mg/kg的苯甲酰中乌头原碱及0.5mg/kg的中乌头碱。从疼痛抑制率可看出，随着中乌头碱的比例加大，镇痛作用逐渐增强。以苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱配比比例为200∶3时，镇痛作用最强。可以认为：苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱镇痛作用最强的最佳配比为200∶3。
试验例6苯甲酰中乌头原碱、下乌头碱、中乌头碱不同比例配伍的镇痛作用试验
试验证明，药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱不同比例配伍组成的复方药物均具有明显的镇痛作用，在苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱配比比例为200∶1∶2、400∶1∶2、100∶1∶1和200∶1∶4中，以100∶1∶1的配比比例镇痛作用最强，故苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱的镇痛作用最强的最佳配比为100∶1∶1。
一、试验材料
1、试验药品及配制
苯甲酰中乌头原碱，淡黄色粉末；中乌头碱，近白色粉末；下乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。称取苯甲酰中乌头原碱250mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含苯甲酰中乌头原碱10mg/ml的溶液；称取中乌头碱1.25mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含中乌头碱0.05mg/ml的溶液；称取下乌头碱2.5mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加蒸馏水至25ml，配成含下乌头碱0.1mg/ml的溶液。按表16取不同体积的苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱溶液，配成含不同比例的苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱药液，备用。
表16苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱不同配比剂量组
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取1ml无水乙醇，加蒸馏水至10ml配成10％的乙醇。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠60只，随机分成6组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，灌胃给予10％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3、4、5、6组为药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱的4个不同配比剂量组，分别灌胃给予苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱的4个不同配比药液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药30分钟后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为88.0％。药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱配比比例为200∶1∶2、400∶1∶2、100∶1∶1和200∶1∶4组成的复方药物均有不同程度减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，有显著性差异，显示较明显的镇痛作用，其疼痛抑制率分别为85.0％、65.3％、90.1％、和86.1％，结果见表17。从疼痛抑制率看，以苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱配比，用量与药效并没有剂量依赖性；比例为100∶1∶1时，用量少，镇痛作用最强，达到高效低毒的目的。
表17药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱、下乌头碱不同配比
对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱不同比例配伍组成的复方药物均具有明显的镇痛作用，在苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱配比比例为200∶1∶2、400∶1∶2、100∶1∶1和200∶1∶4中，以100∶1∶1的比例镇痛作用最强，故苯甲酰中乌头原碱、中乌头碱与下乌头碱的镇痛作用最强的最佳配比为100∶1∶1。
试验例7苯甲酰中乌头原碱肌肉注射给药的镇痛作用试验
试验证明，肌肉注射药物苯甲酰中乌头原碱100和25mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其镇痛作用明显强于100mg/kg的灌胃给药，疼痛抑制率分别为98.6％和93.5％，而100mg/kg的灌胃给药疼痛抑制率为37.2％。但同时肌肉注射相同剂量的毒性反应也重于灌胃给药，说明在实际应用中，苯甲酰中乌头原碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低得多，才能避免毒性反应的发生。
一、试验材料
1、试验药品及配制
苯甲酰中乌头原碱，淡黄色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取苯甲酰中乌头原碱125mg，加入1.25ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加生理盐水至25ml，配成含苯甲酰中乌头原碱5mg/ml的溶液，取2.5ml，加生理盐水到10ml，配成1.25mg/ml的溶液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取0.5ml无水乙醇，加生理盐水至10ml配成5％的乙醇。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，腿部肌肉注射给予5％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组灌胃给予5mg/ml的苯甲酰中乌头原碱溶液，第4组肌肉注射给予5mg/ml的苯甲酰中乌头原碱溶液，第5组肌肉注射给予1.25mg/ml的苯甲酰中乌头原碱溶液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。药物苯甲酰中乌头原碱肌肉注射和灌胃给予100mg/kg均能明显减少醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率分别为98.6％和37.2％。但肌肉注射镇痛作用明显强于灌胃给药，即使肌肉注射25mg/kg剂量镇痛作用也明显强于100mg/kg的灌胃给药，其疼痛抑制率为93.5％，结果见表18。我们同时也发现，肌肉注射100mg/kg苯甲酰中乌头原碱组小鼠出现萎缩、少动的毒性反应较明显，说明在实际应用中，苯甲酰中乌头原碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低得多，才能避免毒性反应的发生。
表18药物苯甲酰中乌头原碱对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
肌肉注射药物苯甲酰中乌头原碱100和25mg/kg剂量均有明显的镇痛作用，其镇痛作用明显强于100mg/kg的灌胃给药，疼痛抑制率分别为98.6％和93.5％，而100mg/kg的灌胃给药疼痛抑制率为37.2％。但同时肌肉注射相同剂量的毒性反应也重于灌胃给药，说明在实际应用中，苯甲酰中乌头原碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低得多，才能避免毒性反应的发生。试验表明苯甲酰中乌头原碱与中乌头碱或下乌头碱配伍使用时，镇痛作用明显，可以达到高效低毒的目的，是一种新的用药途径。
试验例8苯甲酰中乌头原碱皮肤给药的镇痛作用试验
试验证明，药物苯甲酰中乌头原碱皮肤外用约800mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为33.6％；400mg/kg剂量组镇痛作用不明显。结果表明，苯甲酰中乌头原碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。
一、试验材料
1、试验药品及配制
苯甲酰中乌头原碱，淡黄色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取苯甲酰中乌头原碱400mg，加入2.5ml乙醚溶解后，加入到2.1g医药凡士林中，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成含苯甲酰中乌头原碱约16mg/g的凡士林膏，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液，备用。
取2g医药凡士林，加入2.5ml乙醚，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成阴性对照的凡士林膏，备用。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
乙醚，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050407。
硫化钠：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20040921。
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
医药凡士林：武汉石油化工厂生产。
二、试验方法
取昆明种小鼠40只，随机分成4组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。给药前一天，用剪刀粗略剪去小鼠背部毛后，用8％硫化钠溶液脱毛，面积1.5cm×1.5cm。第1组为阴性对照组，在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布阴性对照的凡士林膏0.1g/只，然后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布含16mg/g苯甲酰中乌头原碱的药膏0.1g/只；第4组涂布含16mg/g苯甲酰中乌头原碱的药膏0.05g/只。两涂药膏组也在涂药后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖。除第2组在给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液外，其余各组均在贴敷1.5小时后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。药物苯甲酰中乌头原碱作为皮肤外用的尝试，在约800mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为33.6％；400mg/kg剂量组小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，显示镇痛作用不明显，结果见表19。结果表明，苯甲酰中乌头原碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。
表19药物苯甲酰中乌头原碱外用对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物苯甲酰中乌头原碱皮肤外用约800mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为33.6％；400mg/kg剂量组镇痛作用不明显。结果表明，苯甲酰中乌头原碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进苯甲酰中乌头原碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。试验表明苯甲酰中乌头原碱与中乌头碱或下乌头碱配伍使用时，可以协同增效，达到高效低毒的目的，是一种新的用药途径。
试验例9下乌头碱肌肉注射给药的镇痛作用试验
试验证明，肌肉注射药物下乌头碱100和25mg/kg剂量均有非常明显的镇痛作用，疼痛抑制率均为100％。相同剂量肌肉注射给药镇痛作用明显强子灌胃给药，但同时毒性反应也重于灌胃给药，说明，在实际应用中，附子灵肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低很多，既能保持药效，又能避免毒性反应的发生。
一、试验材料
1、试验药品及配制
下乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。称取下乌头碱1.25mg，加入1.25ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加生理盐水至25ml，配成含下乌头碱0.05mg/ml的溶液；取2.5ml，加生理盐水到10ml，配成0.0125mg/ml的溶液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取0.5ml无水乙醇，加生理盐水至10ml配成5％的乙醇。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，腿部肌肉注射给予5％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组灌胃给予0.05mg/ml的下乌头碱溶液，第4组肌肉注射给予0.05mg/ml的下乌头碱溶液，第5组肌肉注射给予0.0125mg/ml的下乌头碱溶液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。药物下乌头碱肌肉注射和灌胃给予1mg/kg均能明显减少醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率分别为47.7％和100％。但肌肉注射镇痛作用明显强于灌胃给药，即使肌肉注射0.25mg/kg剂量镇痛作用也明显强于100mg/kg的灌胃给药，其疼痛抑制率也为100％，结果见表20。我们同时也发现，肌肉注射1mg/kg下乌头碱组小鼠出现萎缩、少动、呃逆样毒性反应也很明显，说明，在实际应用中，下乌头碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低得多，才能避免毒性反应的发生。
表20药物下乌头碱对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
肌肉注射药物下乌头碱100和25mg/kg剂量均有非常明显的镇痛作用，疼痛抑制率均为100％。相同剂量肌肉注射给药镇痛作用明显强于灌胃给药，但同时毒性反应也重于灌胃给药，说明，在实际应用中，附子灵肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低很多，既能保持药效，又能避免毒性反应的发生。试验表明下乌头碱与中乌头碱或苯甲酰中乌头原碱配伍使用时，可以协同增效，达到高效低毒的目的，是一种新的用药途径。
试验例10下乌头碱皮肤给药的镇痛作用试验
试验证明，药物下乌头碱皮肤外用约8mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为37.2％；4mg/kg剂量组尽管疼痛抑制率为31.8％，但小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，表明镇痛作用不明显。结果表明，下乌头碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，下乌头碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进下乌头碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。
一、试验材料
1试验药品及配制
下乌头碱，白色结晶颗粒，由成都芝芝药业有限公司提供。称取下乌头碱3.2mg，加入2.5ml乙醚溶解后，加入到2g医药凡士林中，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成含下乌头碱约1.6mg/g的凡士林膏，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取2g医药凡士林，加入2.5ml乙醚，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成阴性对照的凡士林膏，备用。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
乙醚：分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050407。
硫化钠：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20040921。
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
医药凡士林：武汉石油化工厂生产。
二、试验方法
取昆明种小鼠40只，随机分成4组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。给药前一天，用剪刀粗略剪去小鼠背部毛后，用8％硫化钠溶液脱毛，面积1.5cm×1.5cm。第1组为阴性对照组，在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布阴性对照的凡士林膏0.1g/只，然后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布含1.6mg/g下乌头碱的药膏0.1g/只；第4组涂布含1.6mg/g下乌头碱的药膏0.05g/只。两涂药膏组也在涂药后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖。除第2组在给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液外，其余各组均在贴敷1.5小时后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。药物下乌头碱作为皮肤外用的尝试，在约8mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为37.2％；4mg/kg剂量组尽管疼痛抑制率为31.8％，但小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，显示镇痛作用不明显，结果见表21。结果表明，下乌头碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，下乌头碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进下乌头碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。
表21药物下乌头碱外用对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物下乌头碱皮肤外用约8mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为37.2％；4mg/kg剂量组尽管疼痛抑制率为31.8％，但小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，表明镇痛作用不明显。结果表明，下乌头碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，下乌头碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进下乌头碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。试验表明下乌头碱与中乌头碱或苯甲酰中乌头原碱配伍使用时，可以协同增效，达到高效低毒的目的，是一种新的用药途径。
试验例11中乌头碱肌肉注射给药的镇痛作用试验
试验证明，肌肉注射0.5mg/kg的中乌头碱毒性太大。肌肉注射中乌头碱0.125和0.031mg/kg均具有明显的镇痛作用，其镇痛作用明显强于0.5mg/kg的灌胃给药，疼痛抑制率分别为99.6％和77.6％，而0.5mg/kg的灌胃给药疼痛抑制率为56.7％。肌肉注射0.125mg/kg中乌头碱组小鼠同样也出现了萎缩、少动、呃逆样毒性反应，仅程度稍轻。说明在实际应用中，中乌头碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低很多，才能避免毒性反应的发生。
一、试验材料
1、试验药品及配制
中乌头碱，近白色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取中乌头碱1.25mg，加入2.5ml无水乙醇，经42℃水浴加热及超声助溶后，加生理盐水至50ml，配成含下乌头碱0.025mg/ml的溶液；取2.5ml，加生理盐水到10ml，配成0.00625mg/ml的溶液；再取0.0625mg/ml的溶液2.5ml，加生理盐水到10ml，配成0.00156mg/ml的溶液，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取0.5ml无水乙醇，加生理盐水至10ml配成5％的乙醇。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
无水乙醇，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050313。
二、试验方法
取昆明种小鼠60只，随机分成6组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。第1组为阴性对照组，腿部肌肉注射给予5％的乙醇0.2ml/10g体重；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组灌胃给予0.025mg/ml的中乌头碱溶液，第4组肌肉注射给予0.025mg/ml的中乌头碱溶液，第5组肌肉注射给予0.00625mg/ml的中乌头碱溶液，第6组肌肉注射给予0.00165mg/ml的中乌头碱溶液，各组给药容积均为0.2ml/10g，于给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。在本实验中，由于肌肉注射药物0.5mg/kg的中乌头碱毒性太大，10只小鼠肌肉注射后出现明显的萎缩、少动、呼吸困难、呃逆样反应，30min内，已死亡8只，尽管剩余两只在实验中未出现扭体反应。将浓度进一步稀释，降低剂量给药，结果发现，肌肉注射药物中乌头碱0.125和0.031mg/kg的镇痛作用明显强于0.5mg/kg的灌胃给药，其疼痛抑制率分别为99.6％和77.6％，而0.5mg/kg的灌胃给药疼痛抑制率为56.7％。结果见表22。我们同样也发现，肌肉注射0.125mg/kg中乌头碱组小鼠也出现了萎缩、少动、呃逆样毒性反应，仅程度稍轻。说明在实际应用中，中乌头碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低很多，才能避免毒性反应的发生。
表22药物中乌头碱不同给药途径对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
※10只小鼠肌肉注射0.5mg/kg中乌头碱后30min，死亡8只，此数据为剩余两只的观察结果。
四、试验结论
肌肉注射0.5mg/kg的中乌头碱毒性太大。肌肉注射药物中乌头碱0.125和0.031mg/kg均具有明显的镇痛作用，其镇痛作用明显强于0.5mg/kg的灌胃给药，疼痛抑制率分别为99.6％和77.6％，而0.5mg/kg的灌胃给药疼痛抑制率为56.7％。肌肉注射0.125mg/kg中乌头碱组小鼠同样也出现了萎缩、少动、呃逆样毒性反应，仅程度稍轻。说明在实际应用中，中乌头碱肌肉注射给药时，剂量应比灌胃给药低很多，才能避免毒性反应的发生。
试验例12中乌头碱皮肤给药的镇痛作用试验
一、试验材料
1、试验药品及配制
中乌头碱，近白色粉末，由成都芝芝药业有限公司提供。称取中乌头碱1.6mg，加入2.5ml乙醚溶解后，加入到2g医药凡士林中，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成含中乌头碱约0.8mg/g的凡士林膏，备用。
阿司匹林肠溶片，白色，25mg/片，徐州恩华药业集团有限公司，批号：20050312。取阿司匹林肠溶片4片，研磨，用蒸馏水至10ml，配成含阿司匹林10mg/ml的药液备用。
取2g医药凡士林，加入2.5ml乙醚，充分混匀，37℃烘箱过夜挥去乙醚，制成阴性对照的凡士林膏，备用。
2、试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由四川大学实验动物中心提供，一级动物，合格证号：第10号；饲料提供者同动物，自由饮水，观察室温度为21±2℃，相对湿度为：50～60％。
3、试剂
乙醚：分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20050407。
硫化钠：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20040921。
冰醋酸：分析纯，成都化学试剂厂，批号：20050423。
医药凡士林：武汉石油化工厂生产。
二、试验方法
取昆明种小鼠40只，随机分成4组，每组10只，雌雄各半，体重18～22g。给药前一天，用剪刀粗略剪去小鼠背部毛后，用8％硫化钠溶液脱毛，面积1.5cm×1.5cm。第1组为阴性对照组，在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布阴性对照的凡士林膏0.1g/只，然后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖；第2组为阳性对照组，灌胃给予阿司匹林200mg/kg(相当于临床用量的20倍)；第3组在背部经脱毛处理处皮肤均匀涂布含0.8mg/g中乌头碱的药膏0.1g/只；第4组涂布含0.8mg/g中乌头碱的药膏0.05g/只。两涂药膏组也在涂药后用一层纱布(1.5cm×1.5cm)轻轻覆盖。除第2组在给药后30分钟腹腔注射0.6％冰醋酸溶液外，其余各组均在贴敷1.5小时后腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，观察记录注射醋酸溶液5分钟后的10分钟内每只小鼠的扭体反应(腹部后腿伸张，臀部高起)次数。对试验数据做统计分析，计算各剂量组扭体均数、标准差及疼痛抑制率，用t检验，比较各给药组与阴性对照组的组间差异。
三、试验结果
注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠反复出现腹部后腿伸张，臀部高起(扭体)反应。阿司匹林阳性对照组，对冰醋酸所致小鼠扭体次数明显下降(P＜0.001)，镇痛作用非常明显，其疼痛抑制率为81.6％。药物中乌头碱作为皮肤外用的尝试，在约4mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为34.3％；2mg/kg剂量组小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，显示镇痛作用不明显，结果见表23。结果表明，中乌头碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，中乌头碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进中乌头碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。
表23药物中乌头碱外用对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
注：t检验，与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
四、试验结论
药物中乌头碱皮肤外用约4mg/kg剂量时能明显减少由醋酸所致的小鼠扭体反应，疼痛抑制率为34.3％；2mg/kg剂量组小鼠扭体反应数与阴性对照组相比，无显著性差异，显示镇痛作用不明显。结果表明，中乌头碱作皮肤外用发挥镇痛作用，所用剂量较高。表明在本实验中，中乌头碱的皮肤吸收效率不高，今后若能改进赋形剂的添加，促进中乌头碱的皮肤吸收，将有助于降低剂量，降低成本。试验表明中乌头碱与下乌头碱或苯甲酰中乌头原碱配伍使用时，可以协同增效，达到高效低毒的目的，是一种新的用药途径。
上述试验结果显示，单一化合物的用量与药效呈量效关系，配伍后的药物组合物与药效并不呈简单的量效线性关系，而是在一个特定的配比下，在用量较少的情况下，即可达到最好的药效，高效、低毒的镇痛药物组合物为临床提供了一种心的选择。