2,4-二氨基噻唑-5-酮衍生物

摘要

本发明公开了新的式(I)的4-氨基噻唑衍生物。这些化合物抑制依赖于细胞周期蛋白的激酶。这些化合物以及它们的药用盐和酯具有抗增殖活性，并用于治疗或控制癌症，特别是实体瘤。本发明还涉及含有这些化合物的药物组合物，治疗或控制癌症的方法，更具体地治疗或控制乳腺、肺、结肠及前列腺肿瘤的方法。本发明还公开了用于制备这些新的4-氨基噻唑衍生物的中间体。

权利要求

1.式I的化合物，

其中：

R1是

R3选自由下列各项组成的组：H，

CO2R6，

C(O)R6，

SO2R6，和

SO2NR5R6；

R5和R6各自独立地选自由下列各项组成的组：H，和

C1-C6烷基；

R2是苯基，其被取代基取代一、二或三次，所述取代基独立地选自卤素，或

-O-(C1-C6)烷基；

或其药用盐。

2.根据权利要求1的化合物，其中R2是3-氟苯基，其任选地被一个或两个取代基取代，所述取代基选自-F，和-O-CH3。

3.权利要求1的化合物，其选自由下列各项组成的组：

4-[4-氨基-5-(3-氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯

4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯

4-[4-氨基-5-(2，3-二氟-6-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯，[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟苯基)甲酮，[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基苯基)甲酮，[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮，和

1-[4-[4-氨基-5-(3-氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-基]乙酮。

4.权利要求1的化合物，其选自由下列各项组成的组：[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-苯基)甲酮，

1-[4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-基]乙酮，[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基-苯基)甲酮，

4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-磺酸二甲基酰胺，[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮，和[4-氨基-2-(1-甲磺酰基-哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，6-二氟苯基)甲酮。

5.药物组合物，其包含有效量的权利要求1的化合物作为活性成分和药用载体或赋形剂。

6.权利要求5的药物组合物，其适于肠胃外给药。

7.根据权利要求1的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。

8.根据权利要求1的化合物在制备用于治疗实体瘤的药物中的应用。

9.根据权利要求1的化合物在制备用于治疗乳腺或结肠癌的药物中的应用。

10.制备根据权利要求1的式I化合物的方法，其中a)将式(2)的化合物

                    R1-N＝C＝S                                    (2)与式(5)的化合物反应，

                    H2N-C≡N                                    (5)，以获得式(6)的化合物

并且

b)所述式(6)的化合物进一步与式(4)的化合物反应，

以获得式I化合物，其中

R1和R2具有在权利要求1中给出的含义。

说明书

本发明涉及新的抑制依赖于细胞周期蛋白的激酶的4-氨基噻唑衍生物。这些化合物和它们的药用盐和酯具有抗增殖活性，并尤其用于治疗或控制癌症，特别是实体瘤。本发明还涉及含有这些化合物的药物组合物和治疗或控制癌症的方法，最具体地治疗或控制乳腺、肺、结肠及前列腺肿瘤的方法。最后，本发明还涉及用于制备本文公开的新的4-氨基噻唑衍生物的中间体化合物。

不受控制的细胞增殖是癌症的标志。癌性肿瘤细胞典型地具有某种形式的对直接或间接调节细胞分裂周期的基因的损伤。

在细胞周期的各个时期中细胞的进展受一系列多酶复合物调节，该多酶复合物由调节蛋白、细胞周期蛋白和激酶组成。这些激酶被称为依赖于细胞周期蛋白的激酶(Cdks)。Cdks在整个细胞周期中表达，而细胞周期蛋白的水平根据细胞周期的阶段不同而变化。

细胞周期控制的四个主要时期通常被描述为G1，S，G2和M。细胞周期控制的一些关键酶似乎是细胞周期蛋白D/Cdk4，细胞周期蛋白D/Cdk6，细胞周期蛋白E/Cdk2，细胞周期蛋白A/Cdk2，和细胞周期蛋白B/Cdk1(也称为Cdc2/细胞周期蛋白B)。细胞周期蛋白D/Cdk4，细胞周期蛋白D/Cdk6，和细胞周期蛋白E/Cdk2通过磷酸化成视网膜细胞瘤磷蛋白(pRb)控制通过G1期和G1-至S-期的转变。细胞周期蛋白A/Cdk2调节通过S-期，并且细胞周期蛋白B/Cdk1控制G2关卡并调节进入M(有丝分裂)期。

当细胞进行胞质分裂时在G1早期之后，细胞周期进展受Cdk1(cdc2)和Cdk2的调节。因此，这些Cdks的药物抑制可能不仅抑制细胞增殖，而且引发编程性细胞死亡。一旦细胞经过G1限制点和转向S期，它们变得与用于持续细胞周期进展的生长因子刺激无关。

在完成DNA复制以后，细胞进入细胞周期的G2期为M期和胞质分裂做准备。已经表明Cdk1联合细胞周期蛋白A和B调节细胞通过这些细胞周期的较后时期。Cdk1的完全活化要求细胞周期蛋白结合和特异磷酸化(Morgan，D.O.，De Bondt，H.L.，Curr.Opin.Cell.Biol.1994，6，239-246)。一旦被活化，Cdk1/细胞周期蛋白复合物为细胞在M期分裂做好准备。

如上所述从G1期转变为S期受Cdk4与细胞周期蛋白D和Cdk2与细胞周期蛋白E的复合物的调节。这些复合物将肿瘤抑制蛋白成视网膜细胞瘤磷蛋白(pRb)磷酸化，释放转录因子E2F和允许表达S期所需的基因(Nevins，J.R.Science 1992，258，424-429；Lavia，P.BioEssays 1999，21，221-230)。阻断Cdk4/细胞周期蛋白D和Cdk2/细胞周期蛋白E复合物的活性将细胞周期停滞在G1期。例如，包括p16INK4a的INK4家族的蛋白质阻断Cdk4/细胞周期蛋白D复合物的激酶活性，导致停滞在G1期(Sherr，C.J.Science 1996，274，1672-1677)。已经综述了特异的阻断(Vidal，A.Gene2000，247，1-15)。

近来的实验显示Cdk4和细胞周期蛋白D3的复合物也在通过G2期的细胞周期进展中发挥作用。通过p16或使用显性失活的Cdk4抑制该复合物，在不表达pRb的细胞中导致停滞在G2期(Gabrielli B.G.等J.Biol.Chem.1999，274，13961-13969)。

已显示pRb途径中的大量缺陷与多种癌症有关。例如，已在遗传性黑素瘤中发现Cdk4的过度表达(Webster，K.R.Exp.Opin.Invest.Drugs 1998，7，865-887)；细胞周期蛋白D在许多人癌症中过度表达(Sherr，C.J.Science1996，274，1672-1677)；p16在许多肿瘤中变异或缺失(Webster，K.R.Exp.Opin.Invest.Drugs 1998，7，865-887)；和在许多人癌症中通过变异或缺失pRb丧失功能(Weinberg，R.A.Cell 1995，81，323-330)。在该途径的缺陷已显示对预后有影响。例如p16的丧失与非小细胞肺癌(NSCLC)和恶性黑色素瘤的差的预后相关(Tsihlias，J.等Annu.Rev.Med.1999，50，401-423)。在多于90％的一系列非小细胞肺癌样本中存在细胞周期蛋白D1和/或pRb在基因和/或表达水平上的异常，显示细胞周期蛋白D1和/或pRb代表肺肿瘤发生中的一个重要步骤(Marchetti，A.等Int.J Cancer 1998，75，573-582)。在50例胰腺癌中的49例中(98％)，通过将p16基因和相关的细胞周期蛋白D失活，pRb/p16途径被完全废除(Schutte，M.等Cancer Res.1998，57，3126-3134)。关于在多种组织中pRb表达和细胞周期蛋白/依赖于细胞周期蛋白的激酶之间的关系的综述，参见Teicher，B.A.CancerChemother.Pharmacol.2000，46，293-304。

由于Cdk4/细胞周期蛋白D/pRb途径通过其在调控细胞周期从G1期到S期进展的作用而与人癌症相关，以及调控该途径的潜在治疗益处，抑制或促进该途径要素的药物引起广泛的兴趣。例如，应用抗体、反义寡核苷酸，以及涉及该途径的蛋白的过度表达或增加，已显示对癌细胞产生作用。参见，例如，Lukas，J.等，Nature 1995，79，573-582；Nevins，J.R.Science1992，258，424-429；Lim，I.K.等，Molecular Carcinogenesis 1998，23，25-35；Tam，S.W.等，Oncogene 1994，9，2663-2674；Driscoll，B.等，Am.J.Physiol.1997，273(Lung Cell.Mol.Physiol)，L941-L949；及Sang，J.等，Chin.Sci.Bull.1999，44，541-544)。

因此，完全确立了cdks在调节细胞增殖中的作用。例如，如上所示，存在极其大量的文献证实抑制Cdk4，Cdk2和Cdk1途径中的靶标的化合物作为抗增殖治疗剂的应用。细胞增殖抑制剂因此用作可逆的细胞生长抑制剂，用于治疗特征为异常细胞生长的疾病过程，如癌症和其它细胞增殖病症，包括例如炎症(例如良性前列腺增生，家族性腺瘤病，息肉病，神经纤维瘤病，动脉粥样硬化，肺纤维化，关节炎，银屑病，炎性肠病，移植排斥感染)，病毒感染(包括但不限于疱疹病毒，痘病毒，E-B病毒)，自身免疫病(例如狼疮，类风湿性关节炎，银屑病，炎性肠病)，神经变性病症(包括但不限于早老性痴呆)，和神经变性疾病(例如帕金森病，肌萎缩性侧索硬化，色素性视网膜炎，脊髓病性肌萎缩，和大脑退化)。

作为Cdks的抑制剂已经鉴定了几种不同类别的小分子：例如奥罗莫星和其它嘌呤类似物，黄酮类抗肿瘤药(flavopiridol)，星孢素，UCN-01和其它吲哚并咔唑类，9-羟基椭圆玫瑰树碱，靛玉红，paullones，二芳基脲类，喹唑啉类，吲哚吡唑类，[2，3-d]吡啶并嘧啶类，fascaplysin，氨基噻唑类，二氨基噻唑类，蝶啶酮(p-teridinones)，和吡唑类(Carlson等，CancerRes..1996，56，2973-2978：De Azevedo等，Eur.J.Biochem.，1997，243，518-526；Bridges，A.J.，Exp.Opin.Ther.Patents.1995，5，12451257；Reinhold等，J.Biol.Chem.1998，278，3803-3807；Kakeya，H.等，Cancer Res..1998，58，704-710；Harper，J.W.，Cancer Surveys 1997，29，91-107；Harrington，E.A.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1998，95，11945-11950；Meijer，L.，等，Eur.J.Biochem..2000，267，1-13；Garrett，M.D.等，CurrentOpin.Genetics Develop.1999，9，104-111；Mgbonyebi，O.P.等，Cancer Res..1999，59，1903-1910；Hoessel等，Nature Cell Biology.1999，1，60-67；Zaherevitz等，Cancer Res.，1999，59，2566-2569；Honma，T.，等，221StNational ACS Meeting..2001：Medi 136；Sielecki，T.M.，等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2001，11，1157-1160；Nugiel，D.A.，等，J.Med.Chem.，2001，44，1334-1336；Fry，D.W.等，J.Biol.Chem.2001，276，16617-15523；Soni，R.，等，Biochem.Biophys.Res.Commun.2000，275，877；Ryu，C-K.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，2000，10，461；Jeong，H-W.，等，Bioorg.Med.Chem.Lett..2000，10，1819；Toogood等，J.Med.Chem.，2000，43，4606-4616；Chong，W.，Fischer，Curr.Opin.in Drug Discov.and Develop.，2001，4，623-634，WO0009921845，Toogood.P.，WO0119825，Toogood P.，WO0138315，ReichS.H.，WO0179198，Webster，K.US 6,262,096。

关于抑制Cdk4/细胞周期蛋白D途径的化合物的综述，参见：Harris，W.和Wilkinson，S.，Emerging Drugs..2000，5，287-297；Dumas，J.，Exp.Opin.Ther.Patents.2001，11，405-429；Sielecki T.，等，J.Med.Chem..2000，43，1-18.WO 99/21845，6,569,878 B1，2003/0220326 A1，和WO 2003011843A1，所有这些是相关的，公开了以下通式的4-氨基噻唑类：

这些化合物据称是依赖于细胞周期蛋白的激酶的抑制剂。

本发明涉及新的下式的4-氨基噻唑衍生物：

其中

R1选自由下列各项组成的组：

(a)被芳基取代的低级烷基，

R2选自由下列各项组成的组：芳基，杂芳基，环烷基和杂环，其中每个可以被至多四个取代基取代，所述取代基独立地选自由下列各项组成的组：

(a)低级烷基，

(b)卤素，

(c)OR5，

(d)NH2；和

(e)NO2；

R3选自下组：

(a)H，

(b)低级烷基，

(c)CO2R6，

(d)C(O)R6，

(e)SO2R6，和

(f)SO2NR5R6；

R4和R4′各自独立地选自由下列各项组成的组：

(a)H，

(b)任选地被氧代(oxo)、CO2R6、OR6和/或NH2取代的低级烷基，

(c)S(O)nR7，

(d)OR8，

(e)NR5R6，和

(f)CO2R6；

R5和R6各自独立地选自由下列各项组成的组：

(a)H，

(b)N，

(c)低级烷基，

(d)被氧代、CO2R9、OR9、和/或NR10R11取代的低级烷基，

(e)芳基，其任选地可以被卤素取代，

(f)杂芳基，

(g)N-芳基，其中所述芳基任选地被一个或多个卤素取代基取代，和

(h)被卤素或CF3取代的芳基；

R7是低级烷基或芳基；

R8选自由下列各项组成的组：

(a)H，

(b)低级烷基，和

(c)被NR5R6取代的低级烷基；

R9选自下组：H和低级烷基；

R10和R11各自独立地选自H和低级烷基；并且

n是0，1或2；

或其药用盐或酯。

这些化合物抑制依赖于细胞周期蛋白的激酶。这些化合物以及它们的药用盐和酯具有抗增殖活性，并用于治疗或控制癌症，特别是实体瘤。

本发明还涉及含有一种或多种本发明化合物、或其药用盐或酯以及药用载体或赋形剂的药物组合物。

本发明进一步涉及式I化合物在制备药物中的应用，所述药物用于治疗癌症，优选实体瘤且更优选乳腺、肺、结肠和前列腺癌。

本发明进一步涉及治疗或控制癌症的方法，更具体地治疗或控制实体瘤的方法，最具体地治疗或控制乳腺、肺和结肠和前列腺肿瘤的方法，所述方法通过向需要该治疗的患者施用治疗有效量式I化合物、或其药用盐或酯。

最后，本发明还涉及用于制备式I化合物的新的中间体化合物。

如本文所用，下列术语应当具有下列定义。

“芳基”是指一价、单环或二环、芳族碳环烃基，优选6-10元芳族芳环系统。优选的芳基包括但不限于苯基，萘基，甲苯基和二甲苯基。

“环烷基”是指非芳香的、部分或完全饱和的一价环状烃基，其含有3至8个原子。环烷基的实例包括环丙基，环丁基，环戊基和环己基。

“有效量”是指对于预防、减轻或改善疾病的症状或延长被治疗的受试者的生存有效的量。

“卤素”是指氟、氯、溴或碘，优选氟或氯。

“杂原子”是指选自N、O和S的原子。

“杂芳基”是指含有最多达两个环的芳族杂环系统。优选的杂芳基包括但不限于噻吩基，呋喃基，吲哚基，吡咯基，吡啶基，吡啶，吡嗪基，噁唑基，噻唑基(thiaxolyl)，喹啉基，嘧啶基，咪唑基，苯并呋喃基和四唑基。

“杂环”或“杂环基”是指饱和或部分饱和的、3-8个环原子的非芳族环基团，其中1-3个环原子是选自氮、氧、S(O)n(其中n是0-2的整数)或其组合的杂原子，其余的环原子是C。优选的杂环实例有哌啶，哌嗪，吡咯烷，吗啉，二氢吲哚，四氢吡喃基，硫代吗啉代，五甲撑硫，和五甲撑砜。

“KI”是指配体/抑制剂(即，按照本发明的化合物)与靶蛋白的热力学结合的量度。Ki尤其可以如下文实施例18所述进行测定。

“低级烷基”，单独或与另一术语组合，例如低级烷基-杂环，表示含有1至6个、优选1至4个碳原子的直链或支链饱和脂族烃基。典型的低级烷基包括：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、2-丁基、戊基、己基等。

“氧代”表示＝O。

“药用酯”是指含有羧基的式I的常规酯化化合物，该酯保留式I化合物的生物学功效和性质，并且在活体内(在有机体内)裂解为相应的活性羧酸。在活体内裂解(在此情况下，水解)为相应的羧酸(R40C(＝O)OH)的酯基的实例是：可以被NR41R42所取代的低级烷基酯，其中R41和R42为低级烷基，或其中NR41R42一起形成单环脂族杂环，如吡咯烷，哌啶，吗啉，N-甲基哌嗪等；式R40C(＝O)OCHR43OC(＝O)R44的酰氧基烷基酯，其中R43为氢或甲基，R44为低级烷基或环烷基；式R40C(＝O)OCHR43OC(＝O)OR45的碳酸酯，其中R43为氢或甲基，R45为低级烷基或环烷基；或式R40C(＝O)OCH2C(＝O)NR41R42的氨基羰基甲基酯，其中R41和R42为氢或低级烷基，或其中NR41R42一起形成单环脂族杂环，如吡咯烷，哌啶，吗啉，N-甲基哌嗪等。如本文所用，R40具有与R2、R3、R4和R4′相同的定义。

低级烷基酯的实例有甲酯，乙酯和正丙酯等。用NR41R42取代的低级烷基的实例有二乙氨基乙酯，2-(4-吗啉基)乙酯，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酯等。酰氧基烷基酯的实例有新戊酰氧基甲酯，1-乙酰氧基乙酯，和乙酰氧基甲酯。碳酸酯的实例有1-(乙氧基羰基氧基)乙酯和1-(环己基氧基羰基氧基)乙酯。氨基羰基甲酯的实例有N，N-二甲基氨基甲酰基甲酯和氨基甲酰基甲酯。

关于用于递送药物化合物的酯的实例和应用的更多信息在Design ofProdrugs.Bundgaard H ed.(Elsevier，1985)中提供。还参见H.Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(6th Ed.1995)第108-109页；Krogsgaard-Larsen，等，Textbook of Drug Design andDevelopment(2d Ed.1996)第152-191页。

“药用盐”指保留了式I化合物的生物学功效和性质、并由合适的非毒性有机或无机酸或有机或无机碱形成的常规酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐的实例包括从无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨磺酸、磷酸和硝酸衍生的那些盐，和从有机酸如对-甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等衍生的那些盐。碱加成盐的实例包括从铵、钾、钠和季铵的氢氧化物，例如氢氧化四甲铵，衍生的那些盐。为了获得改善的化合物的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性，药物化合物(即，药物)形成盐的化学修饰是药物化学家公知的技术。参见，例如H.Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems(第6版，1995)第196和1456-1457页。

“药用的”，如药用载体、赋形剂等，指药理学上可接受的、并对给药具体化合物的受试者基本上无毒性。

“取代的”，如在被取代的烷基中，是指取代可以发生在一个或多个位置上，并且除非另有说明，在每个取代位置的取代基独立地选自具体的选项。

“治疗有效量”是指能明显抑制人肿瘤细胞、包括人类肿瘤细胞系的增殖，和/或防止人类肿瘤细胞、包括人类肿瘤细胞系的分化的至少一种式I化合物、或其药用盐或酯的量。

在本发明的一个优选实施方案中，提供式I化合物，其中

R1选自由下列各项组成的组：被芳基取代的低级烷基，

R2选自下组：芳基，杂芳基，环烷基和杂环，其中每个可以被至多四个取代基取代，所述取代基独立地选自下组：

低级烷基，

卤素，

OR5，

NH2，和

NO2；

R3选自下组：

CO2R6，和

SO2R6，

R4和R4′各自独立地选自下组：

H，

任选地被氧代、CO2R6、OR6和/或NH2取代的低级烷基，

S(O)nR7，

OR8，

NR5R6，和

CO2R6；

R5和R6各自独立地选自下组：

H，

N，

被氧代、CO2R9、OR9、和NR10R11取代的低级烷基，

芳基，其任选地可以被卤素取代，

杂芳基，

N-芳基，其中所述芳基任选地被一个或多个卤素取代基取代，和

被卤素或CF3取代的芳基；

R7是低级烷基或芳基；

R8选自下组：

H，

低级烷基，和

被NR5R6取代的低级烷基；

R9选自下组：H和低级烷基；

R10和R11各自独立地选自H和低级烷基；并且

n是0，1或2；

或其药用盐或酯。

在式I化合物的一个优选实施方案中，R2是苯基，优选被卤素(最优选F)或OR5(其中R5是低级烷基)取代的苯基。在最优选的实施方案中，R2是被一个或两个F分子和一个OR5基团取代的苯基，其中R5是低级烷基，优选甲基。

在式I化合物的另一个优选实施方案中，R2如上定义并且R1是

其中

R3选自下组：

H，

CO2R6，

C(O)R6，

SO2R6，和

SO2NR5R6；

R5和R6各自独立地选自下组：

H，和

低级烷基；

或其药用盐或酯。

特别优选如上定义的化合物，其中

R2是苯基，其被取代基取代一、二或三次，所述取代基独立地选自卤素，或

-O-低级烷基。

在本发明还有的另一个优选实施方案中，提供式I化合物，其中

R1是

R2是3-氟苯基，其任选地被一个或两个取代基取代，所述取代基选自：

-F，和

-O-CH3-；

R3选自下组：

H，

CO2R6，

C(O)R6，

SO2R6，和

SO2NR5R6；

R5和R6各自独立地选自下组：

H，和

低级烷基；

或其药用盐或酯。

以上式I化合物的实例包括但不限于：

4-[4-氨基-5-(3-氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯，

4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯，

4-[4-氨基-5-(2，3-二氟-6-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯，

[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟苯基)甲酮，

[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基苯基)甲酮，

[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮，

1-[4-[4-氨基-5-(3-氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-基]乙酮，

[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-苯基)甲酮)，

1-[4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-基]乙酮，

[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基-苯基)甲酮，

4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-磺酸二甲基酰胺，

[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮，和

[4-氨基-2-(1-甲磺酰基-哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，6-二氟苯基)甲酮。

在本发明另一个实施方案中，R1是

其中R4是S(O)nR7，其中R7是低级烷基，优选甲基。

最优选地，R4是-S(O)2CH3。

上述式I化合物的实例包括：[4-氨基-2-(4-甲磺酰基苯基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮。

本文公开的和上述式I涵盖的化合物可以表现出互变异构或结构异构现象。意欲本发明包括这些化合物的任何互变异构型或结构异构型，或这些异构型的混合物，并且不限于上式描述的任何一种互变异构型或结构异构型。

在另一个实施方案中，本发明的化合物的实例包括但不限于：

可以通过任何常规的方法制备本发明的化合物。在实施例中提供了用于合成这些化合物的适合的方法。通常，式I化合物可以按照下面描述的合成路线之一制备。

环的形成

如反应路线III所示，应用已知的反应，可以通过多种硫脲衍生物的烷基化和环化来制备本发明的化合物。在硫脲衍生物中，可以使用的是：硝基脒基硫脲(Binu，R.等，Org.Prep.Proced.Int.1998，30，93-96)；1-[(芳基硫代氨基甲酰基)氨基]-3，5-二甲基吡唑(Jenardanan，G.C.等，Synth.Commun.1997，27，3457-3462)；和N-(氨基亚氨基甲基)-N’-苯基硫脲(Rajasekharan，K.N.等，Synthesis 1986，353-355)。

可以通过烷基化和环化用于制备本发明化合物的另一种硫脲衍生物为N-氰基硫脲(Gewald，K.等，J.Prakt.Chem.1967，97-104)。例如，依照下述反应路线III，式6的N-氰基硫脲可以与卤代甲基酮如式4的溴代甲基酮在约室温至约65℃的温度下反应，得到式7化合物。当不可商购时，式(2)和(4)的原材料在单独实施例中列举。

                          反应路线I

                          反应路线II

                          反应路线III

备选地，如以下反应路线IV所示，本发明的化合物也可以便利地通过将树脂结合的式9的取代的(氨基硫代甲基)氨甲亚氨硫代酸(carbamimidothioic acid)甲酯与式4的溴甲基酮反应来制备。

                          反应路线IV

通过有机合成领域技术人员已知的任何常规技术可以制备式9的树脂结合的硫脲衍生物。例如，它可以通过式8的树脂结合的硫脲鎓(thiouronium)盐与式2的异硫氰酸酯在碱如叔胺(例如，三乙胺或二异丙基乙胺)存在下、在惰性溶剂如极性非质子溶剂(例如，N，N-二甲基甲酰胺)中反应而制备。在大约室温的温度下方便地进行该反应。然后，在适当的惰性溶剂如极性非质子溶剂(例如，N，N-二甲基甲酰胺)中、大约室温的温度下，通过用卤代甲基酮(例如，式4的溴代甲基酮)处理，式9的树脂结合的硫脲衍生物于是转化成式7的产物。

将立体异构体的混合物分离成旋光纯的立体异构体(当式I化合物为手性时)

按照已知的方法，例如拆分或手性高效液相色谱法(也被称为手性HPLC)，可以进行式I的异构体结构的任选的分离。拆分的方法是众所周知的，且总结在“Enantiomers，Racemates，and Resolutions”(Jacques，J.等，John Wiley and Sons，NY，1981)中。手性HPLC的方法也是众所周知的，且总结在“Separation of Enantiomers by Liquid ChromatographicMethods”(Pirkle，W.H.和Finn，J.“Asymmetric Synthesis”，卷1，Morrison，J.D.，Ed.，Academic Press，Inc.，NY 1983，第87-124页)中。

将带有碱性氮的式I化合物转化成药用酸加成盐

带有碱性氮的式I化合物向药用酸加成盐的任选的转化可以通过常规方法进行。例如，可以用无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸，或用合适的有机酸如乙酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸、对-甲苯磺酸等处理该化合物。

将带有羧酸基的式I化合物转化成药用碱金属盐

可以通过常规方法任选将带有羧酸基的式I化合物转化成药用碱金属盐。例如，可以用无机碱如氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾等处理该化合物。

将带有羧酸基的式I化合物转化成药用酯

可以通过常规方法任选地将带有羧酸基的式I化合物转化成药用酯。形成酯的条件将取决于分子中其它官能团对反应条件的稳定性。如果分子中的其它部分对酸性条件稳定，则可以在无机酸(例如硫酸)的醇溶液中加热，来方便地制备酯。如果分子对酸性条件不稳定，则可以方便地制备酯的其它方法包括：在偶合剂存在下，在另外的可以加速反应的试剂任选存在下，用醇处理该化合物。许多这类偶合剂是有机化学领域技术人员所公知的。两个实例为：二环己基碳二亚胺和三苯膦/偶氮二羧酸二乙酯。在将二环己基碳二亚胺用作偶合剂的情况下，在惰性溶剂如卤代烃(例如，二氯甲烷)中，在约0℃至约室温的温度下，优选在约室温的温度下，通过用醇、二环己基碳二亚胺和任选存在的催化量的(0-10摩尔％)N，N-二甲基氨基吡啶处理酸，可以方便地进行该反应。在将三苯膦/偶氮二羧酸二乙酯用作偶合剂的情况下，在惰性溶剂如醚(例如，四氢呋喃)或芳香烃(例如，苯)中，在约0℃至约室温的温度下，优选在约0℃的温度下，通过用醇、三苯膦和偶氮二羧酸二乙酯处理酸，可以方便地进行该反应。

组合物/制剂 

在备选实施方案中，本发明包括药物组合物，该药物组合物包含至少一种式I化合物、或其药用盐或酯以及药用赋形剂和/或载体。

这些药物组合物可以口服给药，例如以片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬或软明胶胶囊、溶液剂、乳剂或混悬剂的形式。它们还可以直肠给药，例如以栓剂的形式，或非胃肠给药，例如以注射液的形式。

包含式I化合物和/或其盐或酯的本发明药物组合物可以用本领域已知的方法制备，例如通过常规混合、包囊化、溶解、造粒、乳化、捕集、制糖丸或冻干法制备。这些药物制剂可以用治疗惰性的、无机或有机的载体配制。可以将乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬酯酸(steric acid)或其盐用作片剂、包衣片剂、糖丸和硬明胶胶囊的载体。软明胶胶囊的合适载体包括：植物油、蜡和脂肪。根据活性物质的性质，在软明胶胶囊的情况下，通常不需要载体。制备溶液剂和糖浆所用的合适载体是水、多元醇、蔗糖、转化糖和葡萄糖。注射液的合适载体是水、醇、多元醇、甘油、植物油、磷脂和表面活性剂。栓剂的合适载体是天然或硬化的油、蜡、脂肪和半液体多元醇。

该药物制剂还可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、改变渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。它们也可以含有其它有治疗价值的物质，包括式I化合物之外的其它活性成分。

剂量

如上所述，本发明化合物，包括式I化合物，有效用于治疗或控制细胞增生性疾病，包括癌症的化学预防。化学预防被定义为通过阻断诱变事件或通过阻止癌前期细胞的进展来抑制侵入性癌的发展，所述癌前期细胞已经遭受抑制肿瘤复发的损害。这些化合物和含有所述化合物的制剂特别用于治疗或控制实体瘤，如例如乳腺、结肠、肺和前列腺肿瘤。

按照本发明的化合物的治疗有效量指有效预防、减缓或改善被治疗受试者疾病症状或延长被治疗受试者生存时间的量。本领域普通技术人员可以确定治疗有效量。

按照本发明的化合物的治疗有效量或剂量可以在很宽的范围内变化，并可以根据本领域已知的方法确定。根据各具体病例的个体需要调节该剂量，包括给药的一种或多种具体化合物，给药途径，治疗的疾病状况，以及治疗的患者。一般而言，在对体重约70Kg的成人口服或肠胃外给药的情况下，日剂量约10mg至约10,000mg，优选约200mg至约1,000mg将是合适的，尽管当指示时上限可以被超过。日剂量可以分单剂量或多剂量给药，或者对于肠胃外给药，可以连续输注。

组合

本发明的化合物可以与已知的抗癌治疗如放射疗法或与细胞生长抑制剂或细胞毒剂联合使用(联合或顺序给药)，所述细胞抑制剂或细胞毒剂例如但不限于DNA相互作用剂，如顺铂或多柔比星；拓扑异构酶II抑制剂如依托泊苷；拓扑异构酶I抑制剂如CPT-11或托泊替康；微管蛋白相互作用剂，如紫杉醇，多西他塞或大环内酯类抗肿瘤药(epothilones)；激素药剂如他莫昔芬：胸苷酸合成酶抑制剂，如5-氟尿嘧啶；和抗代谢物如甲氨蝶呤。式I化合物也可以与p53反式激活的调节剂组合使用。

如果配制为固定剂量，上述组合产品包括在上述剂量范围内的本发明的化合物和在其批准剂量范围内的其它药物活性剂或疗法。例如，已经发现早期cdk1抑制剂奥罗莫星与公知的细胞毒剂在诱导编程性细胞死亡中协同作用。(J.Cell Sci.，1995，108，2897-2904)。当同时给药或组合不适当时，式I化合物也可以与已知的抗癌或细胞毒剂顺序施用。本发明在给药顺序方面没有限制：式I化合物可以在已知的抗癌剂或细胞毒剂施用之前或之后施用。例如，cdk抑制剂黄酮类抗肿瘤药(flavopiridol)的细胞毒活性受与抗癌剂的给药顺序影响。(Cancer Research，1997，57，3375)。

实施例

下列实施例举例说明了合成和使用本发明的化合物和制剂的优选方法。这些实施例和制剂是举例说明性的并且目的不是在于限制。应当理解可以存在属于由本文后附权利要求限定的本发明实质和范围内的其它实施方案。

                        实施例1

                异硫氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯

将4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.0g，25mmol)(Astatech，Inc)溶解在二甲基甲酰胺(120ml)中并冷却至-150℃。在低于-10℃下缓慢加入二甲基甲酰胺(100mL)中的硫代羰二咪唑(4.8g，27mmol)(Aldrich)。室温下搅拌混合物14h。真空去除所有溶剂，将残余物溶解在二氯甲烷(200ml)中，用2x水洗涤。去除溶剂，用己烷研制残余物。将其过滤，用苏长岩处理溶液并过滤通过硅藻土。去除溶剂获得4-异硫氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.7g，94％产率)，为油。LR-MS-EI(+)：相合于242MW。

                         实施例2

                  2-溴-1-(3-氟苯基)乙酮

将1-(3-氟苯基)乙酮(14.0g，100mmol)(Aldrich)在二噁烷(250ml)中的溶液在12-15℃下在0.5h内用溴(17g，105mmol)在二噁烷(120ml)中的溶液逐滴处理。将其搅拌15min，去除大部分溶剂。将残余物置入己烷(200ml)中，用2x水洗涤，并干燥(MgSO4)。去除溶剂，获得2-溴-1-(3-氟苯基)乙酮。

1H NMR(CDCl3)，300MHz)δ3.71(s，2H，CH2)，7.30-7.77(m，4H，芳族)。

                          实施例3

4-[4-氨基-5-(3-氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯

在20℃下，将4-异硫氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.4g，10mmol)(实施例1)和氨腈(0.42g，10mmol)(Aldrich)在叔丁醇(5ml)和乙腈(35mL)中的混合物用叔丁醇钾(1.0M/THF，10ml，10mmol，Aldrich)处理15min。加入2-溴-1-(3-氟苯基)乙酮(2.0g，9.2mmol)(实施例2)，搅拌悬浮液2h。去除溶剂，通过硅胶色谱法(60％-70％乙酸乙酯/己烷)纯化固体残余物，获得2.4g(57％产率)的4-[4-氨基-5-(3-氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.36(m，2H，NCH2)，1.41(s，9H，3CH3)，1.88(m，2H，NCH2)，2.88(brd，2H，NCH2)，3.6-4.0(m，1H，CH)，3.87(m，2H，NCH2)，7.31(t，1H，芳族)，7.38(d，1H，芳族)，7.48(t，1H，芳族)，7.51(q，1H，芳族)，8.01(brd，1H，NH)，8.48(brd，1H，NH)，8.70(brd，1H，NH)。

                            实施例4

4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯

如下制备4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯：按照实施例2，由1-(3-氟-4-甲氧基苯基)乙酮(Aldrich)的溴化开始，接着如实施例3所述进行环化，获得4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.37(m，2H，CH2)，1.41(s，9H，3CH3)，1.80(m，2H，CH2)，2.78(brd，2H，NCH2)，3.32(m，2H，NCH2)，3.6-4.0(宽，1H，CH)，3.85(m，3H，OCH3)，7.22(t，1H，芳族)，7.45(d，1H，芳族)，7.48(m，1H，芳族)，7.94(brd，1H，NH)，8.45(brd，1H，NH)，8.65(brd，1H，NH)。

HRMS：(M+H)+：观察值：451.1813；计算值451.1810。

                         实施例5

4-[4-氨基-5-(2，3-二氟-6-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯

如下制备4-[4-氨基-5-(2，3-二氟-6-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯：按照实施例2，由1-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)乙酮(Matrix)的溴化开始，接着如实施例3所述环化，获得4-[4-氨基-5-(2，3-二氟-6-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.48(m，2H，CH2)，1.92(m，2H，CH2)，2.55(s，9H，3CH3)，2.75(m，2H，CH2)，3.39(m，2H，CH2)，3.6-4.0(宽，1H，CH)，3.81(s，3H，OCH3)，6.92(m，1H，芳族)，7.50(m，1H，芳族)，7.6(2xbrd，1H，NH)，7.8(brd，1H，NH)，7.99(m，1H，芳族)，9.0(brd，1H，NH)。

LR-MS-ES(+/-)：相合于468MW。

                        实施例6

    [4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟苯基)甲酮

将4-[4-氨基-5-(3-氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.82g，1.95mmol)(实施例3)溶解在三氟乙酸(16mL)和二氯甲烷(30ml)的混合物中。在1小时后，去除所有溶剂，将残余物溶解在二氯甲烷(300mL)中。将其用10％Na2CO3(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，获得半固体。将其用乙醚研制并过滤，获得450mg(72％产率)的[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟苯基)甲酮。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.38(m，2H，CH2)，1.88(m，2H，CH2)，2.95(m，2H，CH2)，3.32(brd，2H，CH2)，3.6-4.0(宽，1H，CH)，3.78(s，3H，OCH3)，7.31(t，1H，芳族)，7.38(d，1H，芳族)，7.48(t，1H，芳族)，7.51(q，1H，芳族)，8.01(brd，1H，NH)，8.48(brd，1H，NH)，8.70(brd，1H，NH)。

LR-MS-ES(+/-)：相合于320MW。

                        实施例7

[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基苯基)甲酮)

以关于实施例6所述的方式，将4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.30g，0.66mmol)(实施例4)去保护，获得220mg(90％产率)的[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基苯基)甲酮。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.36(m，2H，CH2)，1.75(m，2H，CH2)，2.88(brd，2H，CH2)，3.32(m，2H，CH2)，3.2-3.4(brd，1H，NCH)，3.78(s，3H，OCH3)，7.23(t，1H，芳族)，7.48(t，1H，芳族)，7.62(t，1H，芳族)，8.01(brd，1H，NH)，8.48(brd，1H，NH)，8.70(brd，1H，NH)。

LR-MS-ES(+/-)：相合于350MW。

                        实施例8

[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮

以关于实施例6所述的方式，将4-[4-氨基-5-(2，3-二氟-6-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.30g，0.64mmol)(实施例5)去保护，获得123mg(52％产率)的[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.38(m，2H，CH2)，1.78(m，2H，CH2)，2.91(brd，2H，CH2)，3.35(m，3H，CH&NCH2)，3.75(s，3H，OCH3)，6.95(m，1H，芳族)，7.43(m，1H，芳族)，8.01(brd，1H，NH)，8.48(brd，1H，NH)，8.70(brd，1H，NH)。

LR-MS-ES(H-/-)：相合于368MW。

                        实施例9

1-[4-[4-氨基-5-(3-氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-基]乙酮

将[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟苯基)甲酮(0.10g，0.31mmol)(实施例6)溶解在四氢呋喃(20ml)、氯仿(6ml)、和哌啶的混合物中，并冷却至-10℃。将其用乙酰氯(0.032g，43mmol)处理并在室温下搅拌0.5小时。将其用冷二氯甲烷(100mL)稀释，用10％Na2CO3(aq)(2x)洗涤。在干燥(Na2SO4)和去除溶剂后，从四氢呋喃和己烷的混合物中沉淀残余物，获得35mg(30％产率)的1-[4-[4-氨基-5-(3-氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-基]乙酮。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.28(m，1H，CH)，1.41(m，1H，CH)1.92(m，2H，CH2)，2.75(t，1H，NCH)，3.14(t，H，NCH)，3.32(s，3H，COCH3)，3.6-4.0(宽，1H，CH)，3.77(d，1H，NCH)，4.22(d，1H，NCH)，7.31(t，1H，芳族)，7.38(d，1H，芳族)，7.48(t，1H，芳族)，7.51(q，1H，芳族)，8.01(brd，1H，NH)，8.48(brd，1H，NH)，8.72(brd，1H，NH)。

HRMS：(M+H)+：观察值：363.1288；计算值363.1286。

                        实施例10

[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-苯基)甲酮

以类似于实施例9的方式，用甲磺酰氯处理[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟苯基)甲酮(0.09g，0.28mmol)(实施例6)，获得35mg(40％产率)的[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-苯基)甲酮。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.54(m，2H，CH2)，2.03(m，2H，CH2)，2.88(m，5H，NCH2&SCH3)，3.6-4.0(宽，1H，CH)，3.51(d，2H，NCH2)，7.32(t，1H，芳族)，7.38(d，1H，芳族)，7.48(t，1H，芳族)，7.52(q，1H，芳族)，7.99(brd，1H，NH)，8.48(brd，1H，NH)，8.77(brd，1H，NH)。

HRMS：(M+H)+：观察值：399.0960；计算值399.0956。

                        实施例11

1-[4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-基]乙酮

以类似于实施例9的方式，用乙酰氯处理[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基-苯基)甲酮(0.125g，0.36mmol)(实施例7)，获得100mg(77％产率)的1-[4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-基]乙酮。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.38(dm，2H，CH2)，1.92(m，2H，CH2)，2.02(s，3H，COCH3)，2.76(t，1H，NCH)，3.26(t，1H，NCH)，3.6-4.0(宽，1H，CH)，3.77(m，1H，NCH)，3.90(s，3H，OCH3)，4.22(m，1H，NCH)，7.23(t，1H，芳族)，7.47(t，1H，芳族)，7.50(t，1H，芳族)，7.9-8.5(brd，2H，2NH)，8.69(brd，1H，NH)。

HRMS：(M+H)+：观察值：393.1396；计算值393.1391。

                        实施例12

[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基-苯基)甲酮

以类似于实施例9的方式，用甲磺酰氯处理[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基-苯基)甲酮(0.11g，0.31mmol)(实施例7)，获得30mg(23％产率)的[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基-苯基)甲酮。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.46(m，2H，CH2)，2.01(m，2H，CH2)，2.90(m，5H，CH2&SCH3)，3.55(m，2HCH2)，3.6-4.0(宽，1H，CH)，3.91(s，3H，OCH3)，7.24(t，1H，芳族)，7.47(t，1H，芳族)，7.59(t，1H，芳族)，7.9-8.5(brd，2H，2NH)，8.71(brd，1H，NH)。

HRMSEI：(M+H)+：观察值：428.0982；计算值428.0988。

                        实施例13

4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-磺酸二甲基酰胺

除了将二异丙基乙胺另外用作催化剂和将硅胶(乙酸乙酯)用于预先纯化样品以外，以类似于实施例9的方式，用二甲基氨磺酰氯处理[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(3-氟-4-甲氧基-苯基)甲酮(0.08g，0.022mmol)(实施例7))，获得30mg(22％产率)的4-[4-氨基-5-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)噻唑-2-基氨基]哌啶-1-磺酸二甲基酰胺。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.51(m，2H，CH2)，1.97(m，2H，CH2)，2.77(s，6H，2xNCH2)，2.99(m，2H，CH2)，3.52(m，2H，CH2)，3.6-4.0(宽，1H，CH)，3.89(s，3H，OCH3)，7.9-8.5(brd，2H，2NH)，8.71(brd，1H，NH)。

HRMS：(M+H)+：观察值：458.1331；计算值458.1327。

                        实施例14

[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮

除了将二异丙基乙胺另外用作催化剂以外，以类似于实施例9所述方式，用甲磺酰氯处理[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基-苯基)甲酮(0.05g，0.14mmol)(实施例8)，获得50mg(90％产率)的[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮。

1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.57(m，2H，CH2)，1.92(m，2H，CH2)，2.85(m，5H，SCH3&NCH2)，3.53(m，2H，NCH2)，3.6-4.0(宽，1H，CH)，3.88(s，3H，OCH3)，6.72(m，1H，芳族)，7.42(m，1H，芳族)，7.6(2xbrd，1H，NH)，7.8(brd，1H，NH)，7.99(m，1H，芳族)，9.0(brd，1H，NH)。

LR/LC/MS：(M+H)：相合于446MW。

Ki CDK1＝0.001μM；Ki CDK2＝0.001μM；Ki CDK4＝0.002μM。

                        实施例15

                 异硫氰基-4-甲磺酰基苯

将4-甲磺酰基苯基胺(2.4g，14mmol)的溶液溶解在水(30ml)和盐酸(9mL，37％)的混合物中。将其在室温下在良好搅拌下用硫光气(1.5g，13.2mmol)逐滴处理。在1小时后，过滤悬浮液，用水洗涤，通过P2O5干燥，获得2.4g(85％产率)的1-异硫氰基-4-甲磺酰基苯。

1H NMR(CDCl3)，300MHzδ3.09(s，3H，CH3)，7.41(d，2H，芳族)，7.98(d，2H，芳族)。

                        实施例16

[4-氨基-2-(4-甲磺酰基苯基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮

如下制备[4-氨基-2-(4-甲磺酰基苯基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮：按照实施例2从1-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)乙酮(Matrix)的溴化开始，接着如实施例3所述的二氨基噻唑形成，获得固体。将其通过硅胶色谱法(2.5％甲醇/二氯甲烷)纯化，在用乙醚研制纯的级分并过滤后，获得15mg(12％产率)的[4-氨基-2-(4-甲磺酰基苯基氨基)噻唑-5-基]-(2，3-二氟-6-甲氧基苯基)甲酮。

1H NMR(DMSOd-6，300MHz)δ3.18(s，3H，SCH3)，3.68(s，3H，OCH3)，6.95(m，1H，芳族)，7.50(m，1H，芳族)，7.74(dd，4H，芳族)，8.2(brd，1H，NH)，11.21(s，1H，NH)。

HRMS：(M+H)+：观察值：440.0545；计算值440.0545。

                        实施例17

[4-氨基-2-(1-甲磺酰基-哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，6-二氟苯基)甲酮

2-甲基-异硫脲树脂(34350-95)

在乙醇和1，4-二噁烷(500ml，1∶4)的混合物中加入Merrifield树脂(50g，装载4.3mmol Cl/g，Fluka)和硫脲(5eq，82g，1.8mol，Aldrich)。将混合物在85℃下振荡5天。在过滤后，将树脂用二甲基甲酰胺(3×50ml)、异丙醇(3×50ml)、二氯甲烷(3×50ml)和乙基醚(3×50mL)洗涤。在干燥器中干燥产物树脂3天后，获得77.5g灰白色2-甲基-异硫脲树脂。微量分析表明该产物具有3mmol/g的载荷。

4-[3-(2-甲基异硫脲基)硫脲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯树脂

向100ml容器中装填甲基异硫脲树脂(2.9g)(实施例17a)，4-异硫氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(实施例1)的二甲基甲酰胺溶液和4当量的二异丙基乙胺。将混合物在室温下振荡过夜。过滤反应混合物，用二甲基甲酰胺(3×30ml)、异丙醇(3×30ml)、二氯甲烷(3×30ml)和二乙基醚(3×30mL)洗涤产物树脂，然后在干燥器中干燥3天。获得3.93g灰白色产物，分析载荷为1.8mmol/g。

4-[4-氨基-5-(2，6-二氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基-哌啶-1-羧酸叔丁酯

将烧瓶装填有无水二甲基甲酰胺(10mL)，4-[3-(2-甲基-异硫脲基)硫脲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯树脂(0.60g，1.08mmol)，2-溴-1-(2，6-二氟苯基)乙酮(0.616g，2.6mmol，2eq)(实施例2)，二异丙基乙胺，聚合物bound(PS-DIEA，Aldrich)(823mg，3eq)的混合物，并振荡过夜。将清除树脂PS-Trisamine(0.612g，2.5eq，Argonaut)加入反应混合物。将反应混合物振荡过夜，然后过滤通过短的硅胶柱体。用二氯甲烷(3×10ml)洗涤树脂，将洗涤溶液与原滤液合并。将合并的溶液浓缩并通过硅胶色谱法纯化。获得0.276g的4-[4-氨基-5-(2，6-二氟苯甲酰基)噻唑-2-基氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯，为灰白色固体(62％产率)。

[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，6-二氟苯基)甲酮

将含有4-[4-氨基-5-(2，6-二氟苯甲酰基-噻唑-2-基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.276g，0.63mmol)的烧瓶装填在1，4-二噁烷溶液(10ml)中的4NHCl(2ml)。室温下搅拌混合物2小时。浓缩反应混合物，用乙醚研制残余物，获得0.262g粗制[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基](2，6-二氟苯基)甲酮，将其直接用于下一步骤。

[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，6-二氟苯基-甲酮

将烧瓶装填[4-氨基-2-(哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，6-二氟苯基)甲酮(0.25g，来自步骤D的粗产物)，无水二氯甲烷(1.5ml)和甲磺酰氯(3eq，155uL)。然后向以上混合物中加入二乙基异丙胺(6eq，697uL)。室温下搅拌反应混合物过夜。浓缩反应混合物，将残余物通过硅胶柱纯化。获得0.38g的[4-氨基-2-(1-甲磺酰基哌啶-4-基氨基)噻唑-5-基]-(2，6-二氟苯基)甲酮，为淡棕色固体。步骤D和E的总产率是15％。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ1.45-1.57(m，2H，CH2)，1.95-2.05(m，2H，CH2)，2.82-2.90(m，5H，CH3，CH2，)，3.45-3.55(m，2H，CH2)，3.6-4.0(宽，1H，CH)，7.14-7.20(m，2H，芳族)，7.45-7.55(m，1H，芳族)，8.15-8.25(宽，1H，NH2)，8.7-8.9(宽，1H，NH)。

HR-MS(M+H)+：观察值：417.0865：计算值417.0861。

Ki：CDK1 0.003μM；CDK2 0.005μM；CDK4 0.006μM。

本发明化合物的药理性质可以通过多种药理学检测证实。用本发明的化合物及其盐进行了以下例举的药理学检测。本发明的化合物显示cdk4活性，Ki值小于3μM，优选小于0.5μM；显示cdk2活性，Ki值小于8μM，优选小于0.5μM，显示cdk1活性，Ki值小于10μM，优选小于0.5μM。

                        实施例18：

                        激酶测定

Ki：测量

使用重组人细胞周期蛋白B-CDK1、人细胞周期蛋白E-CDK2或人细胞周期蛋白D1-CDK4复合物，进行该实验。在杆状病毒载体中的GST-细胞周期蛋白E(GST-cycE)，CDK2，GST-细胞周期蛋白B(GST-cycB)，CDK1，GST-CDK4和细胞周期蛋白D1(cycD1)的cDNA克隆由Houston，TX的贝勒医学院的Dr.W.Harper提供。蛋白质在High FiveTM昆虫细胞中共表达，如前所述(Harper，J.W.等Cell 1993，75，805-816)在谷胱甘肽琼脂糖树脂(Pharmacia，Piscataway，NJ)上纯化该复合物。将6x-组氨酸标记的截短形式的成视网膜细胞瘤(Rb)蛋白(氨基酸386-928)用作cycD1-CDK4，cycB-CDK1和cycE-CDK2测定的底物(表达质粒由英国Welwyn GardenCity，Roche Research Centre，分子病毒学系Dr.Veronica Sullivan提供)。Rb蛋白是被CDK4，CDK2和CDK1磷酸化的天然底物(参见Herwig和Strauss Eur.J.Biochem.卷246(1997)第581-601页和其中引用的参考文献)。

在M15大肠杆菌菌株中62Kd蛋白的表达在IPTG诱导型启动子的控制下。通过超声处理裂解细胞，通过在pH 8.0下将裂解物与用1mM咪唑预处理的Ni-螯合琼脂糖柱结合来进行纯化。然后用逐渐降低的pH缓冲液洗涤树脂数次至pH 6.0，用500mM咪唑洗脱。洗脱的蛋白质对20mMHEPES pH 7.5，30％甘油，200mM NaCl，和1mM DTT透析。将纯化的Rb融合蛋白贮液定量蛋白质浓度，等分并贮存在-70℃。

使用上述的蛋白质构建体，建立CDK1、CDK2、和CDK4HTRF测定。这些是在96-孔格中完成并在384-孔板格中读数。测定在3x它们各自对于ATP的Km下进行。

在CDK4测定中，将试验化合物在25mM Hepes，pH 7.0，6.25mMMgCl2，1.5mM DTT，135μM ATP中稀释至3x它们的终浓度。DMSO浓度不大于4.76％。加入20μl到96孔板的孔中。通过加入40μl/孔在25mMHepes，pH 7.0，6.25mM MgCl2，0.003％吐温-20，0.3mg/ml BSA，1.5mMDTT中含有0.185μM Rb和2.25μg/ml CDK4的溶液引发激酶反应。包括不含CDK4的空白孔。将板在37℃振荡温育30分钟。通过加入15μl/孔的在25mM Hepes，pH 7.0，24mM EDTA，0.2mg/ml BSA中的1.6uM抗-磷酸-Rb(Ser780)抗体(Cell Signaling Inc.)终止激酶反应。在37℃下30分钟后，加入15μl/孔的在25mM Hepes，pH 7.0，0.5mg/ml BSA中的3nMLance-Eu-W1024标记的抗兔IgG和60nM别藻蓝蛋白偶联的抗-His6(PerkinElmer Life Sciences)。在37℃温育1小时后，一式两份将每孔中的35μl转移到384-孔黑平板中。使用ViewLux或Victor V读数器(PerkinElmerLife Sciences)读取板，使用340nm的激发波长与615nm和665nm的双重发射波长。首先在665nm下从净读数中计算IC50值(将测定对照荧光读数减小50％的试验化合物的浓度)，对615nm下的铕读数归一化。对于ATP竞争性抑制剂，按照下列方程式计算Ki值：

Ki＝IC50/(1+S/Km)

其中S是指底物浓度(ATP)且Km是指对于ATP的Michaelis-Menten常数。

除了在试剂和蛋白质浓度方面有小的差异以外，类似地进行CDK1和CDK2测定。

对于两种测定的化合物和酶缓冲液都含有10mM MgCl2。对于CDK1和CDK2，各自试剂ATP浓度为162μM和90μM。使用试剂浓度为0.15ng/μl的CDK1和试剂浓度为0.06ng/μl的CDK2。将检测试剂的试剂浓度调节至3-12nM Eu-Ab和60-90nM APC-antiHis 6之间以提供至少10∶1的信号与背景的比率。

                        实施例19

                        片剂制剂

*化合物A代表本发明的化合物。

制备方法：

将项目1，2和3在合适的混合器中混合15分钟。

将步骤1的粉末混合物用20％聚乙烯吡咯烷酮K30溶液(项目4)制粒。

在50℃干燥步骤2的颗粒。

将步骤3的颗粒通过合适的研磨设备。

将项目5加入研磨后的步骤4的颗粒中，并混合3分钟。

将步骤5的颗粒在合适的压片机上压片。

                        实施例20

                        胶囊制剂

*化合物A代表本发明的化合物。

制备方法：

将项目1、2和3在合适的混合器中混合15分钟。

加入项目4和5并混合3分钟。

填充到合适的胶囊内。

          实施例21

       注射液/乳剂制剂  项目   成分   mg/ml   1   化合物A*  1mg   2   PEG 400   10-50mg   3   卵磷脂   20-50mg   4   豆油   1-5mg   5   甘油   8-12mg   6   水适量   1mL

*化合物A代表本发明的化合物。

制备方法：

将项目1溶于项目2中。

将项目3、4和5加入项目6并混合直至分散，然后均化。

将步骤1的溶液加入步骤2的混合物中，并均化直至分散液透明。

无菌滤过0.2μm过滤器并填充到小瓶内。

                        实施例22

        注射液/乳剂制剂  项目   成分   mg/ml   1   化合物A*  1mg   2   Glycofurol   10-50mg   3   卵磷脂   20-50mg   4   大豆油   1-5mg   5   甘油   8-12mg   6   水   适量1ml

*化合物A代表本发明的化合物。

制备方法：

将项目1溶于项目2中。

将项目3、4和5加入项目6并混合直至分散，然后均化。

将步骤1的溶液加入步骤2的混合物中，并均化直至分散液澄清。

无菌滤过0.2μm过滤器并填充到小瓶内。

尽管通过参考特定的和优选的实施方案举例说明了本发明，但是本领域技术人员应该理解通过常规实验和本发明的实施可以进行各种变化和改进。因此，本发明不限于前面的说明，而由后附权利要求书及其等同替换来限定。