脂肪酶抑制剂的新制药用途

摘要

本发明提供脂肪酶抑制剂及添加有该抑制剂的饮食品、医药品，所述脂肪酶抑制剂含有具有来自茶的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)单体的2聚体。更加具体地说，本发明是含有下述化学式1表示的原花色素(Proanthocyanidin)类化合物中的至少一种的脂肪酶抑制剂、以及添加该脂肪酶抑制剂的饮食品及医药品组合物。[化学式1]上式中，R1和R2分别独立表示H或OH，R3和R4分别独立表示H或没食子酰基。

权利要求

1.原花色素类中的至少一种在制备用于通过抑制胰脂肪酶活性来抑制餐后脂肪吸收和/或抑制哺乳动物血中中性脂肪升高的饮食品或医药品中的用途，其中，所述的原花色素类选自含有原飞燕草素B-2、原飞燕草素B-2 3’-O-没食子酸酯、原飞燕草素B-2 3，

3’-二-O-没食子酸酯的组。

2.如权利要求1所述的用途，其中，所述原花色素类中的至少一种是原飞燕草素B-2

3，3’-二-O-没食子酸酯。

3.如权利要求1或2所述的用途，其中，所述饮食品以每餐摄取量为0.1mg～10g的量含有所述原花色素类中的至少一种。

4.如权利要求1或2所述的用途，其中，所述医药品以每次服用量为0.1mg～10g的量含有所述原花色素类中的至少一种。

5.如权利要求3所述的用途，其中，所述饮食品是从含有茶饮料、清凉饮料及健康食品的组中选择的。

6.原花色素类中的至少一种在制备用于通过抑制脂肪酶活性来防止或消除肥胖的医药品中的用途，其中，所述的原花色素类选自含有原飞燕草素B-2、原飞燕草素B-2

3’-O-没食子酸酯、原飞燕草素B-2 3，3’-二-O-没食子酸酯的组。

7.如权利要求6所述的用途，其中，所述原花色素类中的至少一种是原飞燕草素B-2

3，3’-二-O-没食子酸酯。

8.原花色素类中的至少一种在制备用于通过抑制餐后脂肪吸收和/或抑制哺乳动物血中中性脂肪升高来防止或消除肥胖的医药品中的用途，其中，所述的原花色素类选自含有原飞燕草素B-2、原飞燕草素B-2 3’-O-没食子酸酯、原飞燕草素B-2 3，3’-二-O-没食子酸酯的组。

9.如权利要求8所述的用途，其中，所述原花色素类中的至少一种是原飞燕草素B-2

3，3’-二-O-没食子酸酯。

说明书

脂肪酶抑制剂的新制药用途

技术领域

[0001] 本发明提供含有来自于茶的原花色素(Proanthocyanidin)类化合物的脂肪酶抑制剂。

背景技术

[0002] 近年来，伴随日本人生活模式的欧美化，高脂肪饮食的摄取在不断增加。根据1999年(平成11年)日本国国民营养调查，有报告指出尽管能量摄取量在逐年减少，但脂质能量比超过正常比例25％，中性脂肪值、胆固醇值高的人的比例在60岁以上的人中占5～6成(日本国厚生劳动省平成11年国民营养调查结果概要临床营养2001；98(5)：577-588)(日语原名；厚生労働省平成11年国民栄養調查結果の概要臨床栄養2001；98(5)：577-588)。

[0003] 肥胖是现代社会中最重大的疾病之一，其主要原因是过剩摄取脂肪。并且已知过剩摄取脂肪不仅引起肥胖，而且还诱发起因于肥胖的糖尿病、高血脂症、高血压、动脉硬化等。作为治疗这种肥胖的药物，在日本国内唯一批准了食欲抑制剂马吲哚(Mazindol)(日本国注册商标「マジンド一ル」)，但报告其有口渴、便秘、胃部不适感、恶心、呕吐等副作用(临床评价1985；13(2)：419-459、临床评价1985；13(2)：461-515)。此外，在日本国外，塞尼克(Xenical)(日本国注册商标「ゼニカル」)作为肥胖改善药已在市场销售，该药具有通过脂肪酶抑制活性抑制从肠管吸收脂肪的作用，但仍报告其有脂肪便、排便次数增加、软便、下痢、腹痛等副作用，很难说一定安全(Lancet 1998；352：67-172)。 [0004] 为了预防肥胖，通过限制饮食从而减少摄取的热量是有效的手段，但必须接受严格的营养指导，在日常生活中很多情况下难于实行。因此，安全且健康地抑制餐后脂肪在体内吸收，从治疗肥胖及其相关疾病或增进健康的目的来看，认为其是实际有用的对策。 [0005] 在这种背景下，安全且证明对人体有效的特定保健用食品的开发正在受到 关注，到目前为止，作为抑制餐后血清中性脂肪值升高的食品材料，通过抑制胰脂肪酶从而抑制脂肪吸收的珠蛋白分解物(J.Nutr.1988；128：56-60、日本临床·食粮学会志1999；52(2)：71-77、健康·营养食品研究2002；5(3)：131-144)(J.Nutr.1988；128：56-60、日语原名；
日本臨床·食糧学会誌1999；52(2)：71-77、日语原名；健康·栄養食品研究2002；5(3)：
131-144)、具有与三酰基甘油不同消化吸收特性的二酰基甘油(J.Am.Coll.Nutr.2000；
19(6)：789-796、Clin.Chim.Acta.2001；11(2)：109-117)、从鱼油中精制的二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等已成为日本国特定保健用食品在销售。

[0006] 另一方面，最近来自植物的脂肪酶抑制活性物质也正在受到关注，特别是关于具有脂肪酶抑制活性的多酚类，报道了来自植物树皮的单宁(日本国特公昭60-11912)，在豆科植物水皂角中含有的单宁类、类黄酮类化合物及其糖苷(日本国特开平8-259557)，配合有绿茶中的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯及表儿茶素没食子酸酯的抑制脂质吸收的食品(日本国特开平3-228664)，含有青椒、丛生口蘑、南瓜、灰树花(Grifola frondosa)、羊栖菜、绿茶、乌龙茶等水提取物的脂肪酶抑制剂(日本国特开平3-219872)，黄酮及黄酮醇类化合物(日本国特开平7-61927)，羟基安息香酸类化合物(没食子酸)(日本国特开平1-102022)，三萜类化合物及其衍生物(日本国特开平9-40689)，以罗望子的原花青素(Procyanidin)为有效成分的抗肥胖剂(日本国特开平9-291039)等。并且知道葡萄种子提取物的脂肪酶抑制作用(Nutrition 2003；19(10)：876-879)，来自五层龙属(salacia)植物的多酚的脂肪酶抑制作用和对大白鼠的抗肥胖作用(J.Nutr.2002；132：1819-1824)，乌龙茶提取物对小白鼠的抗肥胖作用(Int.J.Obes.1999；23：98-105)等。 [0007] 但是，上述所报道的来自植物的脂肪酶抑制剂，其效果并不充分。如即使某植物的提取物有效果，但只要其中含有的活性成分的量不确定，且因为来自于天然物质，所以难于维持稳定的脂肪酶抑制活性。此外，如果是来自不受欢迎的植物的抑制剂，作为饮食品利用时会产生影响香味的问题。例如在说明乌龙茶的脂质改善效果的报告中，有下述报告，即、每日饮用1330ml市售乌龙茶，服用6周后发现血中中性脂肪值显著降低(日本营养·食粮学会志 1991；44(4)：251-259)；以102名单纯性肥胖症男女为对象，使其连续6周经口摄取乌龙茶(2g×4/日)，结果发现67％被验者体重减少1kg以上，并且发现血中中性脂肪值为高值的被验者摄取乌龙茶后有显著的改善效果(日本临床营养学会杂志1998；20(1)：
83-90)。虽然证明如此大量饮用乌龙茶会有效果，但在日常生活中难于持续，并且即使提供单纯浓缩的乌龙茶，因为有强的苦味、涩味，且咖啡因的量也会增加，所以作为实际的对策不合适。

[0008] [专利文献1]

[0009] 日本国特公昭60-11912

[0010] [专利文献2]

[0011] 日本国特开平8-259557

[0012] [专利文献3]

[0013] 日本国特开平3-228664

[0014] [专利文献4]

[0015] 日本国特开平3-219872

[0016] [专利文献5]

[0017] 日本国特开平7-61927

[0018] [专利文献6]

[0019] 日本国特开平1-102022

[0020] [专利文献7]

[0021] 日本国特开平9-40689

[0022] [专利文献8]

[0023] 日本国特开平9-291039

[0024] [非专利文献1]

[0025] 日本国厚生劳动省“平成11年国民营养调查结果”概要[日语原名；厚生労働省平成11年国民栄養調查結果の概要]

[0026] [非专利文献2]

[0027] 临床营养2001；98(5)：577-588

[0028] [非专利文献3]

[0029] 临床评价1985；13(2)：419-459、临床评价1985；13(2)：461-515 [0030] [非专利文献4]

[0031] Lancet 1998；352：67-172

[0032] [非专利文献5]

[0033] J.Nutr.1988；128：56-60，1988

[0034] [非专利文献6]

[0035] 日本临床·食粮学会志1999；52(2)：71-77

[0036] [非专利文献7]

[0037] 健康·营养食品研究2002；5(3)：131-144

[0038] [非专利文献8]

[0039] J.Am.Coll.Nutr.2000；19(6)：789-796

[0040] [非专利文献9]

[0041] Clin.Chim.Acta.2001；11(2)：109-117

[0042] [非专利文献10]

[0043] Nutrition 2003；19(10)：876-879

[0044] [非专利文献11]

[0045] J.Nutr.2002；132：1819-1824

[0046] [非专利文献12]

[0047] Int.J.Obes.1999；23：98-105

[0048] [非专利文献13]

[0049] 日本营养·食粮学会志1991；44(4)：251-259

[0050] [非专利文献14]

[0051] 日本临床营养学会杂志1998；20(1)：83-90

[0052] [非专利文献15]

[0053] Chem.Pharm.Bull 1983；31(11)：3906-3914

[0054] [非专利文献16]

[0055] Chem.Pharm.Bull 1989；37(1)：77-85

发明内容

[0056] 本发明关注受欢迎的茶中含有的成分，提供含有来自茶的原花色素类化合 物中的至少一种的脂肪酶抑制剂。

[0057] 本发明还提供添加有上述脂肪酶抑制剂、受欢迎且以降低血中中性脂肪、促进健康为目的饮食品。

[0058] 本发明进一步提供含有上述脂肪酶抑制剂、抑制餐后脂肪吸收、抑制血中中性脂肪升高的医药组合物。

[0059] 作为解决上述课题的手段，从茶中发现抑制脂肪吸收时所必需的胰脂肪酶的成分，对其中存在的各种多酚的脂肪酶抑制活性进行评价，证明原花色素类化合物、特别是具有没食子酸酯基的原花色素类化合物具有强的脂肪酶抑制活性。

[0060] 更加具体地说，本发明的脂肪酶抑制剂的特征在于，含有下述化学式1表示的原花色素类化合物中的至少一种。

[0061] [化学式1]

[0062]

[0063] 上式中，R1和R2分别独立表示H或OH，R3和R4分别独立表示H或没食子酰基。此外，没食子酰基G的结构式是化学式2。

[0064] [化学式2]

[0065]

[0066] 本发明的原花色素类化合物可以根据如Chem.Pharm.Bull.1983；31(11)：3906-3914，1983或Chem.Pharm.Bull.1989；37(1)：77-85所述的方法，从市售绿茶、红茶、乌龙茶等天然材料中提取精制。

[0067] 脂肪酶抑制剂

[0068] 本发明的原花色素类化合物可以不含其他成分而单独作为脂肪酶抑制剂使用，或者也可以与溶剂、固体担体同时作为脂肪酶抑制剂使用。对于溶剂或担体，考虑到要作为下述饮食品及/或医药品使用，所以优选食品或医药品能够安全使用的物质。本发明的脂肪酶抑制剂有多种用途，例如可以为试验研究用、作为预防中性脂肪蓄积的食品、医药品的有效成分使用。

[0069] 脂肪酶抑制活性的测定方法

[0070] 本发明的脂肪酶抑制剂，对脂肪酶特别是胰脂肪酶具有强的抑制作用，其抑制活性可根据实施例1具体描述的方法进行测定。

[0071] 含有脂肪酶抑制剂的饮食品

[0072] 将本发明的含有原花色素类化合物的脂肪酶抑制剂作为脂肪酶抑制活性成分添加到饮食品中，能够防止伴随餐后脂肪成分的摄取所产生的不期望的血中中性脂肪的升高及/或使已升高的血中中性脂肪降低。优选的饮食品为日常摄取的饮食品，如绿茶、麦茶、乌龙茶、红茶、咖啡、运动饮料、饮料水、调味料、调味汁(dressing)。并且饮食品可以为通常食用的饮食品，也可以为清凉饮料、鸡尾酒、啤酒、威士忌、蒸馏酒、葡萄酒、清酒、调味料、调味汁(dressing)、 调味米、加工食品、方便食品、蒸煮袋食品、巧克力、鲜奶油、洋式点心、乳制品、健康食品、营养补充品等。

[0073] 饮食品中本发明的脂肪酶抑制剂的添加量，以每餐原花色素类化合物的摄取量为0.1mg～10g进行添加。但因本发明的原花色素类化合物来自食品，其安全性非常高，在饮食品中的添加量实际上没有上限。

[0074] 含有脂肪酶抑制剂的医药品

[0075] 本发明的含有原花色素类化合物的脂肪酶抑制剂，还能够作为抑制餐后脂肪吸收、防止不期望的血中中性脂肪升高及/或使升高的不期望的血中中性脂肪降低的药剂的有效成分使用。优选药剂为口服药剂，如可以为保健饮料、片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖果型制剂、滴丸剂等。药剂中含有的本发明化合物的量，每次服用量为0.1mg～10g。 [0076] 本发明的医药品，因为其脂肪酶抑制成分的安全性高，即使长期服用也很安全，因此，为了防止或消除成为生活习惯病的肥胖，能够日常服用。

[0077] 本发明能够提供添加有脂肪酶抑制剂、不损坏香味、受欢迎且以降低中性脂肪促进健康为目的的饮食品，所述脂肪酶抑制剂含有来自茶叶的原花色素类化合物中的至少一种。为了抑制餐后脂肪的吸收，期望进餐的同时进行摄取，从茶中得到的有效成分得到强化的饮料意义重大。特别是通过增强这些成分，使能够降低中性脂肪的茶的开发成为可能。 附图说明

[0078] 图1表示实施例2中用于评价脂肪酶活性的化合物的化学结构式。

[0079] 实施例

[0080] 实施例1脂肪酶抑制活性的测定

[0081] 脂肪酶活性的测定通过下述步骤实施，即、使用荧光性4-甲基伞形酮油酸酯(4-UMO)作为基质，测定反应生成的4-甲基伞形酮的荧光。

[0082] 测定时，缓冲液使用含有150mM NaCl、1.36mM CaCl2的13mM Tris-HCl(pH8.0)，基质4-UM0(Sigma公司制)为将制备成的0.1M DMSO溶液用上述缓冲液 稀释1000倍后的溶液，脂肪酶为将猪胰脂肪酶(Sigma公司制)同样用上述缓冲液制备成400U/ml溶液，以供酶测定使用。

[0083] 酶反应是在25℃条件下，在96孔微型板上添加并混合50μl的4-UMO缓冲溶液、25μl蒸馏水(或试料水溶液)，然后添加25μl脂肪酶缓冲液溶液使反应开始，反应进行
30分钟后，添加100μl的0.1M柠檬酸缓冲液(pH 4.2)终止反应。反应生成的4-甲基伞形酮的荧光(激发波长355nm、荧光发射波长460nm)用荧光分析仪(Labsystems公司制Fluoroskan Asent CF)测定。

[0084] 被检试料的抑制活性，以相对于对照(蒸馏水)的活性产生50％抑制的试料量IC50(μM)求出。

[0085] 测定样品

[0086] 对照化合物儿茶素(5)、表儿茶素(1)、没食子儿茶素(7)、表没食子儿茶素(3)、儿茶素没食子酸酯(6)、表儿茶素没食子酸酯(2)、没食子儿茶素没食子酸酯(8)、表没食子儿茶素没食子酸酯(4)从和光纯药(株式会社)购入。

[0087] 本发明的原花色素类化合物采用下述论文所述的方法得到，Chem.Pharm.Bull.1983；31(11)：3906-3914，Chem.Pharm.Bull.1989；37(1)：77-85。概述为：用80％丙酮提取乌龙茶叶，然后去除丙酮，用乙酸乙酯进行溶剂分离。通过葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(Pharmacia公司制造)，使用水、甲醇、50％丙酮对乙酸乙酯层进行分离，接着，使各分离物吸附在Diaion HP-20(三菱化学公司制造)上，用水-甲醇体系进行洗脱，再次利用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(Pharmacia公司制造)进行精制。

[0088] 实施例2儿茶素类化合物及其2聚体(原花色素类化合物)的脂肪酶抑制活性 [0089] 对于茶的主要多酚的儿茶素类化合物(单体)以及由儿茶素类化合物聚合形成的原花色素类化合物，根据实施例1的方法测定其脂肪酶活性，其结果如表1所示。此外，图1表示用于评价的化合物的化学结构式。茶中存在的主要儿茶素类化合物(8种)中具有脂肪酶抑制活性的物质是没食子酸形成酯键的黄烷-3-醇。特别是茶中大量含有的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在主要儿茶素类化合物中显示的活性最强。

[0090] 对于原花色素类化合物，证明结构内具有没食子酸酯基的化合物、特别是含有EGCG单体的2聚体，具有比EGCG更强的脂肪酶抑制活性。

[0091] [表1]

[0092] 表1来自茶的多酚的脂肪酶抑制作用

[0093]

[0094] 由上述结果可知，茶中除含有主要儿茶素类化合物(8种)外，还存在活性非常强的2聚体。