用于治疗焦虑、抑郁和癫痫的作为GABA受体配体的4-(硫基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉衍生物和相关的化合物转让专利
申请号 : CN200580006619.2
文献号 : CN1925859B
文献日 : 2010-11-24
发明人 : P·马勒布 , R·马夏德里 , E·普林森 , W·斯布伦 , A·W·托马斯
申请人 : 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司
摘要 :
权利要求 :
1.通式I的化合物和其可药用的酸加成盐，
其中
X是-S-或-NH-；
R1是C1-C12烷基或芳基C1-C12烷基，其中所述芳基是苯基或萘基，并且任选地被一个或多个选自C1-C7烷基或C1-C7卤代烷基的取代基取代；
R2是氢或C1-C7烷基；
R3/R4与它们所连接的N-原子一起形成一个非芳族5、6或7元环，该环除了所述的N-原子外还任选含有一个另外的选自O、S或N的杂原子，并且其中该环任选地被C1-C7烷基取代；或者与它们所连接的N-原子一起形成一个含有至少两个环并且任选含有一个或两个另外的选自N或O的杂原子的杂环环系；
R5是氢或C1-C7烷基。
2.权利要求1的化合物，其中X是-S-。
3.权利要求2的化合物，其中R1是C1-C12烷基，R3和R4与N-原子一起形成一个五或六元环，该环任选含有一个另外的O-杂原子，并且其是未取代的或者被C1-C7烷基取代。
4.权利要求3的化合物，其中R3和R4与N-原子一起形成吗啉环。
5.权利要求4的化合物，所述化合物是
4-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉，
4-(6-甲基-2-戊硫基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉，
4-(2-丁硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉，
4-[2-(1，3-二甲基-丁硫基)-6-甲基-嘧啶-4-基甲基]-吗啉，
4-(2-乙硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉，
4-(2-己硫基-6-乙基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉和
4-[1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙基]-吗啉。
6.权利要求3的化合物，其中R3和R4与N-原子一起形成吡咯烷或哌啶环，其任选地被C1-C7烷基取代。
7.权利要求6的化合物，所述化合物是
2-己硫基-4-甲基-6-吡咯烷-1-基甲基-嘧啶，
2-己硫基-4-甲基-6-(2-甲基-哌啶-1-基甲基)-嘧啶，
4-(2，6-二甲基-哌啶-1-基甲基)-2-己硫基-6-甲基-嘧啶和
4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-1-基甲基)-2-己硫基-6-甲基-嘧啶。
8.权利要求2的化合物，其中R1是芳基C1-C12烷基，其中所述芳基是苯基或萘基，并且任选地被C1-C7烷基取代，R3和R4与N-原子一起形成一个五或六元环，该环任选含有一个另外的O-杂原子。
9.权利要求8的化合物，其中所述化合物是
4-[2-(4-叔丁基-苄硫基)-6-甲基-嘧啶-4-基甲基]-吗啉，
4-[6-甲基-2-(4-甲基-苄硫基)-嘧啶-4-基甲基]-吗啉和
4-[6-甲基-2-(3-苯基-丙硫基)-嘧啶-4-基甲基]-吗啉。
10.权利要求2的化合物，其中R3和R4与N-原子一起形成一个含有至少两个环并且任选含有一个或两个选自N或O的杂原子的杂环环系。
11.权利要求10的化合物，其中所述化合物是(1S，5S)-3-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-1，2，3，4，5，6-六氢-1，5-亚甲基-吡啶并[1，2-a][1，5]二氮杂环辛间四烯-8-酮。
12.权利要求1的式I化合物，其中R5是氢。
13.权利要求1的式I化合物，其中R5是甲基。
14.化合物4-(2-己硫基-6-三氟甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉。
15.用于治疗与GABAB受体有关的疾病的药物，其含有一种或多种权利要求1-14中任意一项所述的式I化合物或其可药用的盐以及惰性载体。
16.权利要求15的药物，其用于治疗焦虑、抑郁、癫痫、精神分裂症、认知障碍、痉挛状态和骨骼肌强直、脊髓损伤、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化、脑性瘫痪、神经性疼痛和与可卡因和尼古丁有关的成瘾、精神病、惊恐症、创伤后应激障碍或胃肠障碍。
17.制备权利要求1所定义的式I化合物的方法，该方法包括a)使式V的化合物
与式VI-a的化合物反应，
得到式Ia的化合物，
其中R1至R4如权利要求1中所述，或b)使下式的化合物
与下式的胺反应，
R1NH2得到式Ib的化合物，
其中R1至R4如权利要求1中所述，或c)使式XI的化合物
与式II的胺反应，
HNR3R4 II得到式Ia的化合物，
其中R1至R4如权利要求1中所述，或d)使下式的化合物
与式II的胺反应，
HNR3R4 II得到式Ic的化合物，
其中R1至R4如权利要求1中所述，和如果需要，将获得的式I化合物转化成可药用的盐。
18.权利要求1-14中任意一项的式I化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗焦虑、抑郁、癫痫、精神分裂症、认知障碍、痉挛状态和骨骼肌强直、脊髓损伤、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化、脑性瘫痪、神经性疼痛和与可卡因和尼古丁有关的成瘾、精神病、惊恐症、创伤后应激障碍或胃肠障碍。
说明书 :
本发明涉及式I的化合物和其可药用的酸加成盐，
其中
X是-S-或-NH-；
R1是烷基、链烯基、芳基烷基、芳基链烯基或芳基-O-烷基，其中芳基任选地被一个或多个选自低级烷基、低级烷氧基、卤素或低级卤代烷基的取代基取代；
R2是氢、低级烷基或环烷基；
R3/R4可以与它们所连接的N-原子一起形成一个非芳族5、6或7元环，该环除了所述的N-原子外还可以含有一个另外的选自O、S或N的杂原子，并且其中该环任选地被羟基、低级烷基、低级烷氧基、-NR2、-CONR2、-CO-低级烷基或苄基取代；或者
可以与它们所连接的N-原子一起形成一个含有至少两个环并且可以含有一个或两个另外的选自N或O的杂原子的杂环环系；
R5是氢或低级烷基；
R是氢或低级烷基。
式I的化合物和它们的盐具有有价值的治疗性质。已经发现这些化合物对GABAB受体有活性。
γ-氨基丁酸(GABA)-最丰富的抑制性神经递质-既活化亲离子GABAA/C受体又活化促代谢GABAB受体(Hill和Bowery，Nature，290，149-152，1981)。在哺乳动物脑的大多数区域中存在于突触前末梢和突触后神经元上的GABAB受体参与抑制性突触传递的微调。突触前GABAB受体通过调节高电压活化的Ca2+通道(P/Q-和N-型)抑制许多神经递质的释放。突触后GABAB受体活化G-蛋白偶联的内向整流型K+(GIRK)通道并调节腺苷酸环化酶(Billinton等人，Trends Neurosci.，24，277-282，2001；Bowery等人，Pharmacol.Rev..54，247-264，2002)。因为GABAB受体在战略上被定位于调控各种神经递质系统、GABAB受体配体的活性，因此其具有作为治疗剂用于治疗焦虑、抑郁、癫痫、精神分裂症和认知障碍的潜能(Vacher和Bettler，Curr.Drug Target，CNS Neurol.Disord.2，248-259，2003；Bettler等人，Physiol Rev.84，835-867，2004)。
天然GABAB受体是由两类亚基-GABABR1和GABABR2亚基-组成的异聚(heteromeric)结构(Kaupmann等人，Nature，386，239-246，1997和Nature，396，683-687，1998)。GABABR1和R2的结构表明它们属于被称为第3族的G-蛋白偶联受体(GPCR)族。第3族GPCR的其它成员包括代谢型谷氨酸(mGlu1-8)受体、钙敏感受体(calcium-sensing receptor)、犁鼻(vomeronasal)受体、信息素受体和推定的味觉感受器(Pin等人，Pharmaco..Ther.98，325-354，2003)。第3族受体(包括GABAB受体)的特征在于两个清楚分开的局部解剖学区域：特别长的细胞外氨基-末端区域(ATD，500-600个氨基酸)(其含有用于激动剂结合的venus flytrap模块(orthosteric部位)(Galvez等人，J.Biol.Chem.，275，41166-41174，2000)和受体活化和G-蛋白偶联中涉及的7TM螺旋片段加细胞内羧基-末端区域。GABABR1R2异二聚体中激动剂的受体活化机理在GPCR中是独特的。在该异聚体中，仅GABABR1亚基与GABA结合，而GABABR2负责G-蛋白的偶联和活化(Havlickova等人，Mol.Pharmacol.62，343-350，2002；Kniazeff等人，J.Neurosci，22，7352-7361，2002)。
Schuler等人，Neuron，31，47-58，2001已经证明GABABR1剔除(KO)小鼠表现出自发性癫痫发作和痛觉过敏。这些KO小鼠丧失了所有的生物化学和电生理学GABAB响应。有趣的是，GABABR1KO小鼠在两种焦虑范例中更焦虑，所述的焦虑范例即明-暗穿箱试验(在明室的时间减少)和爬梯试验(站立数和爬梯数减少)。它们在被动回避行为模型中表现出明显受损，这表明其记忆过程受损。GABABR1 KO也表现出在新环境中快速移动(hyperlocomotion)增加和活动过度(hyperactivity)。GABABR1基因被定位于染色体6p21.3，其在HLA class I内，是一个与精神分裂症、癫痫和诵读困难有关的区域(Peters等人，Neurogenetics，2，47-54，1998)。Mondabon等人，Am.J.Med.Genet 122B/1，134，2003已经报道了GABABR1基因的Ala20Val多态性与精神分裂症的弱联系。此外，Gassmann等人，J Neurosci.24，6086-6097，2004已经表明与GABABR1KO小鼠相比，GABABR2KO小鼠患有自发性癫痫发作、痛觉过敏、自发活动过高(hyperlocomotor activity)和严重的记忆受损。因此，异聚GABAB R1R2受体负责这些表型。
巴氯芬(力奥来素θ，β-氯苯基GABA)是一种选择性GABAB受体激动剂，其对天然受体的EC50＝210nM，其是唯一的配体，从1972年开始，其已经在临床研究中被用于治疗脊髓损伤后患者的痉挛状态和骨骼肌强直、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化、脑性瘫痪。用巴氯芬和GABAB受体激动剂进行的大部分临床前和临床研究均是用于治疗神经性疼痛和与可卡因和尼古丁有关的成瘾(Misgeld等人，Prog.Neurobiol.46，423-462，1995；Enna等人，Life Sci，62，1525-1530，1998；McCarson和Enna，Neuropharmacology，38，1767-1773，1999；Brebner等人，Neuropharmacology，38，1797-1804，1999；Paterson等人，Psychopharmacology，172，179-186，2004)。如用Hamilton焦虑量表、Zung焦虑量表和Katz-R神经质亚量表(nervousness subscale)所评估的那样，在惊恐症患者中，巴氯芬在降低惊恐发作次数和焦虑症状方面十分有效(Breslow等人，Am.J.Psychiatry，146，353-356，1989)。在用患有与战争有关的慢性创伤后应激障碍(PTSD)的退伍军人小组进行的研究中，发现巴氯芬是一种有效的且耐受性良好的治疗。其显著改善PTSD的整体症状，最明显的是回避、感情麻木和过度觉醒症状，并且还降低相伴的焦虑和抑郁(Drake等人，Ann.Pharmacother.37，1177-1181，2003)。在临床前研究中，巴氯芬能逆转精神病大鼠PPT模型中由地佐环平、而非阿朴吗啡诱导的听觉惊吓反应的前脉冲抑制(PPT)降低(Bortolato等人，Psychopharmacology，171，322-330，2004)。因此，GABAB受体激动剂在精神障碍的药理学治疗中具有潜能。不幸的是，巴氯芬具有许多限制其应用的不利副作用，包括血脑屏障渗透性差、作用持续时间非常短以及治疗窗窄(肌肉松弛、镇静和耐受性)。
Urwyler等人，Mol.Pharmacol.，60，963-971，2001报道了一类被称为正性(positive)变构调节剂的新GABAB受体配体，CGP7930[2，6-二-叔丁基-4-(3-羟基-2，2-二甲基-丙基)-苯酚]以及其醛类似物CGP13501。这些配体自身对GABAB受体没有作用，但是与内源性GABA配合，它们增加GABA在GABABR1R2上的效力和最大效能(Pin等人，Mol.Pharmacol.，60，881-884，2001)。有趣的是，最近用CGP7930进行的研究(Binet等人，J BiolChem.，279，29085-29091，2004)表明这种正性调节剂直接活化GABABR2亚基的七个跨膜结构域(7TMD)。Mombereau等人，Neuropsychopharmacology，1-13，2004最近报道了在明-暗穿箱和零升高迷宫试验(elevated zero maze test)焦虑模型中GABAB受体正性调节剂，GS39783(N，N-二环戊基-2-甲硫基-5-硝基-嘧啶-4，6-二胺)急性和长期治疗的抗焦虑作用(Urwyler等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.，307，322-330，2003)。因为GABAB增强剂在不存在GABA的情况下对受体活性没有影响，但是变构增强GABAB受体对内源性GABA的亲和力，所以预期与巴氯芬相比，这些配体的副作用应得到改善。实际上，GS39783在以0.1-200mg/kg口服施用时与巴氯芬相比对自发活动、旋转杆(rotarod)、体温和牵引试验没有影响，其表明在用小鼠和大鼠进行的被动回避行为试验进行评估时，在2.5-15mg/kg口服施用GS39783下这些副作用对认识行为没有任何影响。此外，GS39783在高架十字迷宫(大鼠)、零升高迷宫(小鼠和大鼠)以及应激诱导的高热(小鼠)试验模型中还表现出抗焦虑样作用。因此，GS39783代表了一种没有与巴氯芬或苯并二氮杂类有关的副作用的新的抗焦虑药(Cryan等人，J Pharmacol Exp Ther.，310，952-963，2004)。用CGP7930和GS39783进行的临床前研究表明这两种化合物在降低大鼠可卡因自我给药方面均是有效的(Smith等人，Psychopharmacology，173，105-111，2004)。也已经对正性调节剂CGP7930治疗胃食管反流病(GERD)进行了临床前研究，发现其是有效的(WO 03/090731，GABAB受体正性调节剂在胃肠障碍中的应用(Use of GABAB receptor positive modulators in gastro-intestinaldisorders))。
已经报道了一些其它第3族GPCR的正性变构调节剂，包括mGlu1受体(Knoflach等人，Proc.Natl.A cad.Sci，USA，98，13402-13407，2001；Wichmann等人，Farmaco，57，989-992，2002)、钙敏感受体(NPS R-467和NPS R-568)(Hammerland等人，Mol.Pharmacol.，53，1083-1088，1998)(US6,313,146)、mGlu2受体[LY487379，N-(4-(2-甲氧基苯氧基)-苯基-N-(2，2，2-三氟乙基磺酰基)-吡啶-3-基甲基胺及其类似物)(WO 01/56990，谷氨酸受体增效剂(Potentiators of glutamate receptors))和mGlu5受体(CPPHA，N-{4-氯-2-[(1，3-二氧代-1，3-二氢-2H-异吲哚-2-基)甲基]苯基}-2-羟基苯甲酰胺)(O′Brien等人，J.Pharmaco.Exp.Ther.，27，2004年1月27)。有趣的是，已经证明了这些正性调节剂与位于七个跨膜结构域(7TMD)中的一个新变构部位结合，从而通过稳定7TMD区域的活性状态而增强激动剂亲和性(Knoflach等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 98，13402-13407，2001；Schaffhauser等人，Mol.Pharmacol.，64，798-810，2003)。此外，NPS R-467、NPS R-568(Tecalcet)和相关的化合物代表了由于其变构作用方式而进入临床试验的第一类正性变构调节剂。
本发明的目的是式I化合物和其可药用的酸加成盐、式I化合物和其盐的制备、含有式I化合物或其可药用的酸加成盐的药物、该类药物的制备和式I化合物及其可药用盐在控制或预防疾病、尤其是上文提及的那些种类的疾患和障碍、如焦虑、抑郁、癫痫、精神分裂症、认知障碍、痉挛状态和骨骼肌强直、脊髓损伤、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化、脑性瘫痪、神经性疼痛和与可卡因和尼古丁有关的成瘾、精神病、惊恐症、创伤后应激障碍或胃肠障碍中的用途以及分别在制备相应药物中的用途。
无论所讨论的术语单独出现还是组合出现，在本说明书中所用的一般术语适用下列定义。
本文所用的术语“烷基”表示含有1至12个碳原子的直链或支链的碳链基团，例如，甲基、乙基、戊基、己基、辛基、壬基等。
术语“低级烷基”表示含有1至7个碳原子的直链或支链的烷基。优选的低级烷基含有1至4个碳原子。
本文所用的术语“链烯基”表示含有2至12个碳原子和至少一个双键的直链或支链的碳链基团，例如，乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基等。
本文所用的术语“芳基烷基”或“芳基链烯基”表示与上文所定义的烷基或链烯基碳链结合的不饱和的芳族环例如苯基或萘基。
术语“卤素”表示氯、碘、氟和溴。
术语“卤代烷基”表示被一个或多个卤素原子取代的上文所定义的烷基。
术语“低级烷氧基”表示其中烷基残基如上文所定义并且该烷基通过一个氧原子被连接的基团。
术语“环烷基”表示具有3至6个碳原子的碳环，优选的是环丙基。
术语“5、6或7元环，该环除了所述的N-原子外还可以含有一个另外的选自O、S或N的杂原子”表示非芳族环，例如吡咯烷、哌啶、吗啉、硫代吗啉、1-氧代-硫代吗啉、1，1-二氧代-硫代吗啉、哌嗪、1，4-二氮杂环庚烷、1，4-氧氮杂环庚烷等。
术语“其中R3和R4与N-原子一起形成一个含有至少两个环并且可以含有一个或两个另外的选自N或O的杂原子的杂环环系”表示例如以下的基团：
术语“可药用的酸加成盐”包括与无机酸和有机酸如盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、马来酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、对甲苯磺酸等形成的盐。
本发明优选的化合物是其中X是-S-的那些化合物。其中尤其优选的化合物是其中R1是烷基且R3和R4与N-原子一起形成一个可以包含另外的O-杂原子并且可以是未取代的或者被低级烷基取代的五或六元环的那些化合物。
其中优选的化合物是其中R3和R4与N-原子一起形成吗啉环的那些化合物，例如以下的化合物：
4-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉，
4-(6-甲基-2-戊硫基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉，
4-(2-己硫基-6-三氟甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉，
4-(2-己硫基-6-乙基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉和
4-[1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙基]-吗啉。
其中优选的化合物还有其中R3和R4与N-原子一起形成任选地被低级烷基取代的吡咯烷或哌啶环的那些化合物，例如以下的化合物：
2-己硫基-4-甲基-6-吡咯烷-1-基甲基-嘧啶，
2-己硫基-4-甲基-6-(2-甲基-哌啶-1-基甲基)-嘧啶，
4-(2，6-二甲基-哌啶-1-基甲基)-2-己硫基-6-甲基-嘧啶和
4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-1-基甲基)-2-己硫基-6-甲基-嘧啶。
本发明优选的化合物还有其中R1是任选地被低级烷基取代的芳基烷基且R3和R4与N-原子一起形成一个可以含有另外的O-杂原子的五或六元环的那些化合物，例如以下的化合物：
4-[2-(4-叔丁基-苄硫基)-6-甲基-嘧啶-4-基甲基]-吗啉。
还优选的是其中R3和R4与N-原子一起形成一个含有至少两个环并且可以含有一个或两个另外的选自N或O的杂原子的杂环环系的化合物，例如以下的化合物：
(1S，5S)-3-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-1，2，3，4，5，6-六氢-1，5-亚甲基-吡啶并[1，2-a][1，5]二氮杂环辛间四烯-8-酮。
最优选其中R5是氢的式I化合物。
本发明的另一个目的是其中R5是甲基或X是-NH-的另外的化合物。
根据本发明，上述的式I化合物可以用以下方法变体来制备：
a)使式V的化合物
与式VI-a的化合物反应，
得到式Ia的化合物，
其中R1至R4如上文所定义，或者
b)使下式的化合物
与式
R1NH2
的胺反应，得到式Ib的化合物，
其中R1至R4如上文所定义，或者
c)使式XI的化合物
与式II的胺反应，
HNR3R4 II
得到式Ia的化合物，
其中R1至R4如上文所定义，或者
d)使下式的化合物
与式II的胺反应，
HNR3R4 II
得到式Ic的化合物，
其中R1至R4如上文所定义，和
如果需要，将所得的式I化合物转化成可药用的盐。
在下文更详细地描述了式I化合物的制备：
在流程图1-4中描述了制备式I化合物的方法，这些方法以已知化合物、市售产品或可以用常规方式制备的化合物为原料。
在实施例1-43中对式I化合物的制备进一步进行了详细描述。
在方法描述中，使用了下列缩写：
TEA＝三乙胺
THF＝四氢呋喃
OXONE＝单过硫酸氢钾三合盐(potassium monopersulfate triple salt)
DCM＝4-(二氰基亚甲基)-2-甲基-6-(4-二甲基氨基苯乙烯基)-4H-吡喃
DMF＝N，N-二甲基甲酰胺
流程图1
a)硫脲，EtOH，回流，24小时，
b)NH2OH HCl，TEA，EtOH，回流，24小时，
c)MsOH，RaNi，EtOH，H2，3小时。
按照流程图1，可以如下制备式VI-a和VI-b的中间体：
步骤a：
将硫脲和相应的式R1Br的化合物、例如1-溴己烷在氮气下在醇例如乙醇中在回流下加热约20小时。将醇蒸发，在常规的分离和纯化后，得到相应的式VI-a的异硫脲氢溴酸盐。
步骤b：
将式R1CN的氰化物和盐酸羟胺溶解于醇例如乙醇中，用三乙胺处理。
在分离和纯化后，得到相应的N-羟基-脒。
步骤c：
向得自步骤b的N-羟基-脒和醇例如乙醇的溶液中加入新鲜的阮内镍和甲磺酸(MsOH)。将反应混合物在室温下在氢气氛下搅拌约3小时。在分离和纯化后，得到相应的脒甲磺酸盐。
流程图2
A1)K2CO3，MeOH，0-20℃，
A2)iPrMgCl，THF，-20℃或BuLi，THF-70℃，
A3)TEA，THF，20℃或NaOMe，MeOH，
A4)OXONE(单过硫酸氢钾三合盐)，MeOH，
A5)THF，20℃。
根据流程图2，可以如下制备式VI-a和VI-b的中间体：
式IV的中间体化合物：
将N，O-二甲基-羟胺HCl在氮气下混悬于DCM中并在冰中进行冷却。缓慢加入三乙胺，然后缓慢加入乙酰氯，尽管用冰进行冷却并缓慢加入，温度还是达到约20℃。在不冷却的情况下继续搅拌约30分钟。在萃取和纯化后，得到N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺。
或者
将N，O-二甲基-羟胺HCl在氮气下混悬于DCM中并在冰中进行冷却。缓慢加入三乙胺，然后缓慢加入环丙烷碳酰氯。在不冷却的情况下继续搅拌1小时。萃取：2×DCM，1×1N HCl，1×NaCl。蒸馏：75℃/20mbar。得到环丙烷甲酸甲氧基-甲基-酰胺。
步骤A1：
将式HNR3R4(II)的化合物例如吗啉溶解于醇例如MeOH中并在冰中在氮气下进行冷却，然后在冰中进行搅拌的同时加入碳酸钾和炔丙基溴。在不进行冷却的情况下继续搅拌约4h。将所得的混悬液用常规方式进行后处理。得到式III的化合物，例如4-丙-2-炔基-吗啉。
步骤A2：
将步骤A1中获得的化合物在氮气下溶解于THF中并冷却至约-40℃。然后，加入异丙基氯化镁在THF中的溶液，同时保持温度低于-20℃。在-40℃至-30℃下继续搅拌约30分钟。在一个独立的烧瓶中，将式IV的化合物例如N-甲氧基-N-甲基乙酰胺在氮气下溶解于THF中并在冰/MeOH中冷却至-10℃。将以上制备的格氏试剂溶液通过聚四氟乙烯管转移到在容器1中的、在略微正氮气压下、在-10℃下的Weinreb酰胺溶液中。在-10℃至0℃下继续搅拌约2小时。将所得的混悬液用常规方式进行后处理。得到式V的化合物，例如5-吗啉-4-基-戊-3-炔-2-酮。
步骤A3：
将步骤A2中所得的化合物例如5-吗啉-4-基-戊-3-炔-2-酮和式VI-a的化合物例如2-己基-异硫脲氢溴酸盐在氮气下溶解于DMF中，然后加入N，N-二异丙基乙基胺并在室温下继续搅拌约18小时。将所得的混悬液用常规方式进行后处理。得到式Ia的化合物，例如4-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉。
步骤A4：
将步骤A3中获得的式Ia的化合物例如4-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉溶解于MeOH中并用单过硫酸氢钾三合盐(OXONE)处理约2小时。得到式VII的化合物，例如4-(2-己基磺酰基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉。
步骤A5：
将被溶解于THF中的步骤A4中获得的式VII的化合物和式R1NH2的胺在20℃下搅拌过夜。得到式Ib的化合物。
流程图3
B1)BuLi，THF-70℃至-30℃，
B2)TEA，THF，20℃，
B3)4N HCl或TFA/H2O，
B4)NaBH3CN或pyBH3，EtOH/AcOH 10∶1，20℃或Ti(OiPr)4，纯净的，
NaBH3CN，iPrOH
根据流程图3，可以如下制备式Ia的化合物：
步骤B1：
在氩气下将炔丙醛二乙缩醛溶解于THF中并冷却至-70℃。然后，加入丁基锂在己烷中的溶液并在-30℃下继续搅拌约30分钟。然后，加入位于THF中的相应的式IV化合物，例如N-甲氧基-N-甲基乙酰胺。在-30℃下30分钟后，通过加入饱和NH4Cl溶液将反应淬灭。在常规后处理后，得到相应的式IX的化合物，例如5，5-二乙氧基-戊-3-炔-2-酮。
步骤B2：
将步骤B1中获得的化合物例如5，5-二乙氧基-戊-3-炔-2-酮和相应的式VI-a的化合物例如2-己基-异硫脲氢溴酸盐在氮气下溶解于THF中。然后，缓慢加入三乙胺，同时在冰浴中进行冷却以将温度保持在20℃。将该混悬液在不冷却的情况下搅拌约5小时。将所获得的产物例如4-二乙氧基甲基-2-己硫基-6-甲基-嘧啶用常规方法进行后处理。
步骤B3：
将步骤B2中获得的化合物例如4-二乙氧基甲基-2-己硫基-6-甲基-嘧啶溶解于THF和H2SO4水溶液中并在50℃下加热约33小时。然后，将该溶液倾倒在冷的Na2CO3溶液中并用常规方式进行后处理。得到式XI的化合物，例如2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-甲醛。
步骤B4：
将步骤B3中获得的式XI的化合物例如2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-甲醛溶解于乙醇和乙酸中。然后，在20℃下缓慢加入式II的化合物，例如吡咯烷和氰基硼氢化钠并继续搅拌约24小时。将反应混合物用常规方式进行后处理。得到式Ia的化合物，例如2-己硫基-4-甲基-6-吡咯烷-1-基甲基-嘧啶。
流程图4
C1)在4N H2SO4中的CrO3，丙酮，0-20℃，
C2)TEA，THF，20℃，
C3)在4N H2SO4中的CrO3，丙酮，0-20℃
C4)Ti(OiPr)4，NaBH3CN，iPrOH。
根据流程图4，可以如下制备式Ic的化合物：
步骤C1：
将3-己炔-2，5-二醇在丙酮中的溶液在氮气下在冰中进行冷却。在5℃下历经2小时缓慢加入琼斯试剂(45mmol，2M的在4M H2SO4中的CrO3)。将所得的绿色溶液从铬盐上倾出并用AcOEt和饱和NaCl溶液进行萃取。对粗产物进行纯化。得到式XII的5-羟基-己-3-炔-2-酮。
步骤C2：
将5-羟基-己-3-炔-2-酮和式VI-a的化合物例如2-己基-异硫脲氢溴酸盐溶解于THF中。然后，加入三乙胺并继续搅拌约3小时。将所得的产物分离并进行纯化。得到式XIII的化合物，例如1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙醇。
步骤C3：
将步骤C2中获得的化合物例如1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙醇在氮气下溶解于丙酮中。然后，滴加由20g在100mL 4M H2SO4中的CrO3制得的琼斯试剂。在20℃下搅拌约2小时后，将所得的溶液分离并用常规方式进行纯化。得到式XIV的化合物，例如1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙酮。
步骤C4：
将式XIV的化合物例如1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙酮和式II的化合物例如吗啉溶解于原钛酸四异丙酯中并在约80℃下加热16小时。将该溶液用2-丙醇稀释并用氰基硼氢化钠在约20℃下处理6小时。将所得的式Ic的产物例如4-[1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙基]-吗啉分离并用常规方式进行纯化。
如前文所提及的那样，式I化合物和它们可药用的加成盐具有有价值的药理学性质。已经发现本发明的化合物对GABAB受体具有亲和力。
根据下文所给出的试验对所述化合物进行了研究。
细胞内Ca2+动员(mobilization)试验
将稳定表达人GABABR1aR2a和Gα16的中国苍鼠卵巢(CHO)细胞以5×104个细胞/孔接种到聚-D-赖氨酸处理的黑色/透明-底的96-孔板(BDBiosciences，Palo Alto，CA)中。24小时后，将细胞在37℃下用4μM的在加样缓冲液(1×HBSS，20mM HEPES，2.5mM丙磺舒)中的Flou-4乙酰氧基甲酯(目录号：F-14202，Molecular Probes，Eugene，OR)荷载90分钟。Hanks平衡盐溶液(HBSS)(10×)(目录号：14065-049)和HEPES(1M)(目录号：15630-056)购自Invitrogen，Carlsbad，CA。丙磺舒(250mM)(目录号：P8761)购自Sigma，Buchs，瑞士。将细胞用加样缓冲液洗涤5次以除去过量的染料并如之前所述的那样(Porter等人，Br.J.Pharmacol.，128，13-20，1999)用荧光成像读板仪(FLIPR，Molecular Devices，Menlo Park，CA)来测量细胞内钙动员，[Ca2+]i。在应用GABA前15分钟应用增强剂。对于GABA迁移试验，在不存在和存在10μM增强剂的情况下测定GABA的浓度-响应曲线(0.0003-30μM)。将GABA-迁移定义为Log[EC50(GABA+10μM增强剂)/EC50(仅GABA)]。由存在10nM GABA(EC10)情况下增强剂的浓度-响应曲线(0.001-30μM)来确定各增强剂的最大增强作用百分比(％Emax)和效力(EC50值)。以荧光的峰值增加减去基底来测量响应，用仅用10μMGABA(被认为是100％)和仅用10nM GABA(被认为是0％)诱导的最大刺激作用进行标准化。将数据用方程Y＝100+(Max-100)/(1+(EC50/[药物])n)拟合，其中Max是最大作用，EC50是引起半数最大作用的浓度，n是Hill斜率。
实施例 CHO-GABABR1aR2a-Gα16细胞中细胞内Ca2+动员试验 GABA迁移 Emax(％)在仅10nMGABA下＝0％在仅10μMGABA下＝100％ 在10nM GABA下的EC50(μM) Log[EC50(GABA+10μM cp)/EC50(仅GABA)] 1 46 2.2 -0.75 2 52 1.7 -0.55 11 41 4.2 -0.60 16 48 8.5 -0.50 31 60 9.6 -0.69 35 62 1.8 -0.92 37 74.2 8.2 -0.76 38 61 6.3 -0.71 39 62 6.4 -0.48 41 60 4.1 -0.86 43 49 4.4 -0.70
式I的化合物以及它们可药用的酸加成盐可用作药物，例如以药物制剂的形式用作药物。所述药物制剂可以被口服施用，例如以片剂、包衣片剂、糖衣丸(dragée)、硬明胶胶囊和软明胶胶囊、溶液剂、乳剂或混悬剂的形式口服施用。但是，也可以进行直肠施用，例如以栓剂形式进行直肠施用，或者胃肠外施用，例如以注射溶液的形式胃肠外施用。
可以用用于制备片剂、包衣片剂、糖衣丸和硬明胶胶囊的药学上惰性的无机或有机赋形剂对式I化合物荷它们可药用的酸加成盐进行加工。可以使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其盐等作为赋形剂，例如用于片剂、糖衣丸和硬明胶胶囊剂。
用于软明胶胶囊的适宜的赋形剂有例如植物油、蜡类、脂类、半固体和液体多元醇等。
用于制造溶液剂和糖浆剂的适宜赋形剂有例如水、多元醇、蔗糖、转化糖、葡萄糖等。
用于注射溶液的适宜赋形剂有例如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。
用于栓剂的适宜赋形剂有例如天然或硬化油、蜡类、脂类、半液体或液体多元醇等。
此外，所述药物制剂可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、改变渗透压的盐、缓冲剂、掩味剂或抗氧化剂。他们还可以含有其它治疗上有价值的物质。
剂量可以在宽限度内变化，并且当然将符合各特定情况中个体的需求。一般而言，在口服施用的情况下，每人约10至1000mg通式I的化合物的日剂量应当是适宜的，但是必要时也可以超出以上的上限。
项目 成分 片剂制剂(湿法制粒) mg/片 5mg 25mg 100mg 500mg 1.2.3. 式IA或IB的化合物无水乳糖DTGSta-Rx 1500 5 125 6 25 105 6 100 30 6 500 150 30
4. 5. 微晶纤维素 硬脂酸镁 30 1 30 1 30 1 150 1 共计 167 167 167 831
制造方法
1.将第1、2、3和4项混合并用纯化水制粒。
2.将颗粒在50℃下干燥。
3.使颗粒通过适宜的研磨装置。
4.加入第5项并混合3分钟；在适宜的压片机上进行压制。
项目 成分 胶囊制剂 mg/胶囊 5mg 25mg 100mg 500mg 1.2.3.4.5. 式IA或IB的化合物无水乳糖玉米淀粉滑石粉硬脂酸镁 5 159 25 10 1 25 123 35 15 2 100 148 40 10 2 500 --- 70 25 5
项目 成分 胶囊制剂 mg/胶囊 5mg 25mg 100mg 500mg 共计 200 200 300 600
制造方法
1.将第1、2和3项在适宜的混合器中混合30分钟。
2.加入第4和5项并混合3分钟。
3.填充到适宜的胶囊中。
用以下实施例对本发明进行非限制性说明。所有温度均以摄氏度为单位给出。
中间体IV：
N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺
将N，O-二甲基-羟胺HCl(100g，1025mmol)在氮气下混悬于DCM(1000mL)中并在冰中进行冷却。缓慢加入三乙胺(300mL，2152mmol)，然后缓慢加入乙酰氯(76.5mL，1076mmol)，尽管用冰进行冷却并缓慢加入，但是温度仍然达到20℃。在不进行冷却的情况下继续搅拌30分钟。萃取：1×DCM，1×1N HCl，2×饱和NaCl溶液。在42℃/20mbar下蒸馏，得到69g(65％)无色油状物。
环丙烷甲酸甲氧基-甲基-酰胺
将N，O-二甲基-羟胺HCl(40g，410mmol)在氮气下混悬于DCM(400mL)中并在冰中进行冷却。缓慢加入三乙胺(63mL，451mmol)，然后缓慢加入环丙烷碳酰氯(41mL，451mmol)。在不进行冷却的情况下继续搅拌1h。萃取：2×DCM，1×1N HCl，1×NaCl。蒸馏：75℃/20mbar。得到32.5g(61％)无色油状物。
中间体VI：
2-己基-异硫脲氢溴酸盐
将硫脲(50g，657mmol)和1-溴己烷(119mL，723mmol)在回流下于氮气下在乙醇(500mL)中加热20小时。蒸发掉乙醇，将浓稠的油状物在乙醚(500mL)中进行搅拌。产物自动沉淀出来。过滤后，得到144.5g(91％)白色晶体，m.p.75℃。
2-硫代-2-(3，7，9-三甲基-2，6-癸二烯基)假脲氢溴酸盐
以类似的方式，用(2E，6E)-1-溴-3，7，9-三甲基-癸-2，6-二烯制备。
2-(4-甲基-苄基)-异硫脲氢溴酸盐
以类似的方式，用4-甲基-苄基溴制备。
2-((E)-3-间-甲苯基-烯丙基)-异硫脲氢溴酸盐
以类似的方式，用1-((E)-3-溴-丙烯基)-3-甲基-苯制备。
2-(4-叔丁基-苄基)-异硫脲氢溴酸盐
以类似的方式，用4-叔丁基-苄基溴制备。
2-(3-苯基-丙基)-异硫脲氢溴酸盐
以类似的方式，用1-溴-3-苯基丙烷制备。得到25.9g(72％)白色固体，m.p.96℃。
2-(1，3-二甲基-丁基)-异硫脲氢溴酸盐
以类似的方式，用2-溴-4-甲基-戊烷制备。
2-丁基-异硫脲氢碘酸盐
以类似的方式，用1-碘丁烷制备。
2-(4-苯氧基-丁基)-异硫脲氢溴酸盐
以类似的方式，用4-苯氧基丁基溴制备。
N-羟基-壬脒
将辛基氰(octyl cyanide)(2g，14mmol)和盐酸羟胺(2.495g，36mmol)溶解于EtOH(10mL)中并用三乙胺(5mL，36mmol)在回流下处理过夜。萃取：AcOEt/水。硅胶色谱：庚烷/AcOEt 1∶2，得到白色固体(0.65g，26％)。MS：m/z＝173(M+H)。
壬脒甲磺酸盐
向N-羟基-壬脒(0.6g，3.48mmol)在乙醇(5mL)中的溶液中加入新鲜的阮内镍(0.05g)和甲磺酸(0.08ml，1.26mmol)。将反应混合物在20℃下在氢气氛下搅拌2小时。用硅藻土过滤并蒸发，得到淡绿色的油状物(0.5g，56％)。MS：m/z＝157(M+H)。
步骤A1：
4-丙-2-炔基-吗啉
将吗啉(100ml，1.148mol)溶解于MeOH(1L)中并在氮气下在冰中进行冷却，然后在冰中进行搅拌的同时加入碳酸钾(120g，0.63mol)和炔丙基溴(124mL，1.148mol)。在不进行冷却的情况下继续搅拌4h。将白色混悬液用滤纸过滤，将固体用MeOH(100ml)洗涤并小心地蒸发MeOH。将白色沉淀混悬于DCM(400ml)中，用滤液过滤，小心地进行蒸发。最后，将油状物在60℃/16mbar下进行蒸馏。得到100g(70％)无色油状物。
步骤A2：
5-吗啉-4-基-戊-3-炔-2-酮
将4-丙-2-炔基-吗啉(22g，176mmol)在氮气下溶解于THF(40mL)中并冷却至-40℃。然后，加入2M异丙基氯化镁在THF中的溶液(97mL，193mmol)，同时将温度保持在低于-20℃。在-40℃至-30℃下继续搅拌30分钟。在一个独立的烧瓶中，将N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(20g，193mmol)在氮气下溶解于THF(40mL)中并在冰/MeOH中冷却至-10℃。将以上制备的格氏试剂溶液通过聚四氟乙烯管转移到在容器1中的、在略微正氮气压下、在-10℃下的Weinreb酰胺溶液中。不发生放热。在-10℃至0℃下继续搅拌2小时。将所得的白色混悬液倾倒在1∶1的冰和饱和NH4Cl溶液的混合物(400mL)上。萃取：2×AcOEt，1×饱和NaCl溶液。得到黄色油状物(26.1g，89％)。用硅胶色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯1∶2洗脱，得到19.4g(66％)棕色油状物，将其在Kugelrohr中在130℃/0.2mbar下进行蒸馏。得到15.8g(53％)黄色油状物。
步骤A3：
实施例1
4-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉
将5-吗啉-4-基-戊-3-炔-2-酮(1g，6mmol)和2-己基-异硫脲氢溴酸盐(1.06g，7mmol)在氮气下溶解于DMF(10mL)中，然后加入N，N-二异丙基乙基胺(4.1mL，24mmol)并在室温下继续搅拌18小时。蒸发掉DMF。用AcOEt(2×50mL)、饱和NH4Cl溶液(2×50mL)萃取产物，干燥并浓缩。将残余物在氨基化硅胶柱上用快速色谱法进行纯化，用庚烷/乙酸乙酯梯度洗脱，得到440mg(24％)黄色液体。MS：m/z＝310(M+H)。
实施例2
4-(6-甲基-2-戊硫基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉
以类似的方式，用N-戊基异硫脲盐酸盐制备。得到260mg(29％)棕色油状物。MS：m/z＝296(M+H)。
实施例3
4-[6-甲基-2-((2E，6E)-3，7，9-三甲基-癸-2，6-二烯基硫基)-嘧啶-4-基甲基]-吗啉
以类似的方式，用2-硫代-2-(3，7，9-三甲基-2，6-癸二烯基)假脲氢溴酸盐制备。得到300mg(35％)无色油状物。MS：m/z＝404(M+H)。
实施例4
4-[6-甲基-2-((E)-3-苯基-烯丙基硫基)-嘧啶-4-基甲基]-吗啉
以类似的方式，用2-((E)-3-苯基-烯丙基)-异硫脲制备。得到300mg(34％)无色油状物。MS：m/z＝342(M+H)。
实施例5
4-[2-(4-甲氧基-苄硫基)-6-甲基-嘧啶-4-基甲基]-吗啉
以类似的方式，用2-(对-甲氧基苄基)-2-硫代假脲制备。得到414mg(40％)无色油状物。MS：m/z＝346(M+H)。
实施例6
4-[6-甲基-2-(4-甲基-苄硫基)-嘧啶-4-基甲基]-吗啉
以类似的方式，用2-(4-甲基-苄基)-异硫脲氢溴酸盐制备。得到427mg(48％)无色油状物。MS：m/z＝330(M+H)。
实施例7
4-[6-甲基-2-((E)-3-间甲苯基-烯丙基硫基)-嘧啶-4-基甲基]-吗啉
以类似的方式，用2-((E)-3-间甲苯基-烯丙基)-异硫脲制备。得到100mg(20％)黄色油状物。MS：m/z＝356(M+H)。
实施例8
4-[6-甲基-2-(4-苯氧基-丁硫基)-嘧啶-4-基甲基]-吗啉
以类似的方式，用2-(4-苯氧基-丁基)-异硫脲氢溴酸盐制备。得到100mg(18％)黄色油状物。MS：m/z＝374(M+H)。
实施例9
4-(2-丁硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉
以类似的方式，用2-丁基-异硫脲氢碘酸盐制备。得到100mg(23％)黄色油状物。MS：m/z＝282(M+H)。
实施例10
4-[2-(1，3-二甲基-丁硫基)-6-甲基-嘧啶-4-基甲基]-吗啉
以类似的方式，用2-(1，3-二甲基-丁基)-异硫脲氢溴酸盐制备。得到100mg(20％)黄色油状物。MS：m/z＝310(M+H)。
实施例11
4-[2-(4-叔丁基-苄硫基)-6-甲基-嘧啶-4-基甲基]-吗啉
以类似的方式，用2-(4-叔丁基-苄基)-异硫脲氢溴酸盐制备。得到200mg(32％)黄色油状物。MS：m/z＝372(M+H)。
实施例12
4-[6-甲基-2-(3-苯基-丙硫基)-嘧啶-4-基甲基]-吗啉
以类似的方式，用2-(3-苯基-丙基)-异硫脲氢溴酸盐制备。得到300mg(48％)黄色油状物。MS：m/z＝344(M+H)。
实施例13
4-(2-乙硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉
以类似的方式，用2-乙基-2-硫代假脲氢溴酸盐制备。得到1.5g(55％)黄色油状物。MS：m/z＝254(M+H)。
实施例14
4-(6-甲基-2-辛基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉
将5-吗啉-4-基-戊-3-炔-2-酮(0.2g，1.2mmol)和壬脒甲磺酸盐(0.5g，3mmol)溶解于MeOH(5ml)中并用5.4M甲醇钠在MeOH中的溶液(1.33mL，7mmol)在回流下处理15小时。蒸发掉MeOH，将混合物用AcOEt和水进行萃取。将粗产物在Si-胺上用色谱法进行纯化，用100∶0至80∶20的庚烷/AcOEt梯度洗脱，得到淡黄色油状物(0.2g，54％)。MS：m/z＝306.4(M+H)。
步骤A4：
4-(2-乙磺酰基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉
将4-(2-乙硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉(2g，6.4mmol)溶解于MeOH(20mL)中并用单过硫酸氢钾三合盐(5.57g，9mmol)处理2小时。过滤，将滤液与10％NaHSO3水溶液(10mL)一起搅拌5分钟，然后用AcOEt/H2O萃取。在硅胶上进行色谱处理，用3∶2至2∶3庚烷/AcOEt梯度洗脱，得到无色油状物(0.6g，36％)。MS：m/z＝286(M+H)。
步骤A5：
实施例15
(3，5-双-三氟甲基-苄基)-(4-甲基-6-吗啉-4-基甲基-嘧啶-2-基)-胺
将溶解于THF(2mL)中的4-(2-乙磺酰基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉(0.2g，0.55mmol)和3，5-双(三氟甲基)苄胺(0.51g，2.1mmol)在20℃下搅拌过夜。蒸发并用AcOEt(40mL)和NaHCO3(40mL)萃取。在硅胶上进行色谱处理，用2∶1的AcOEt/庚烷洗脱，得到淡黄色油状物(60mg，20％)。MS：m/z＝435(M+H)。
步骤B1：
5，5-二乙氧基-戊-3-炔-2-酮
将炔丙醛二乙缩醛(40g，312mmol)在氮气下溶解于THF(200mL)中并冷却至-70℃。然后，加入1.6M正丁基锂在己烷中的溶液(234mL，374mmol)并在-30℃下搅拌30分钟。然后，加入在THF(10mL)中的N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(38.6g，374mmol)。在-30℃下30分钟后，通过加入饱和NH4Cl溶液(20mL)将反应淬灭。用AcOEt(2×200mL)、饱和NH4Cl溶液(2×200mL)萃取产物，干燥并浓缩。在硅胶上进行色谱处理，用100∶0至95∶5的庚烷/乙酸乙酯梯度洗脱，得到38.5g(72％)无色油状物。GC/MS：m/z＝232(M)。
5，5-二乙氧基-1，1，1-三氟-戊-3-炔-2-酮
将3，3-二乙氧基-1-丙炔(10mL，70mmol)在氩气下溶解于THF(200mL)中并冷却至-70℃。然后，在-70℃下缓慢加入1.6M正丁基锂在己烷中的溶液(48mL，77mmol)，然后使之温热至-30℃并在-30℃下搅拌30分钟，然后再次冷却至-70℃。在-70℃下一次性加入三氟乙酸乙酯(9.2mL，77mmol)(温度升至-50℃)，然后在不冷却的情况下进行搅拌直至温度达到-30℃，然后用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭。萃取：2×AcOEt，1×饱和NH4Cl，1×饱和NaCl。在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯5∶1洗脱，得到4.94g(31％)橙色油状物。GC/MS：m/z＝223(M-H)。
1-环丙基-4，4-二乙氧基-丁-2-炔-1-酮
将3，3-二乙氧基-1-丙炔(10mL，70mmol)在氩气下溶解于THF(150mL)中并冷却至-70℃。然后，在-70℃下缓慢加入1.6M正丁基锂在己烷中的溶液(48mL，77mmol)，使之温热至-30℃并在-30℃下搅拌30分钟，然后再次冷却至-70℃。在-70℃下立即加入环丙烷甲酸甲氧基-甲基-酰胺(10g，77mmol)(温度升至-50℃)，然后，在不进行冷却的情况下进行搅拌直至温度达到0℃，然后用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭。萃取：2×AcOEt，1×饱和NH4Cl，1×饱和NaCl。将棕色油状物粗品(15g)在硅胶上通过色谱法进行纯化，用庚烷/乙酸乙酯10∶1洗脱。得到6g(43％)微黄色油状物。MS：m/z＝151(M)。
4，4-二乙氧基-丁-2-炔醛
将3，3-二乙氧基-1-丙炔(10mL，70mmol)在氩气下溶解于THF(50mL)中并冷却至-70℃。然后，在-70℃下缓慢加入1.6M正丁基锂在己烷中的溶液(48mL，77mmol)，使之温热至-40℃并在-40℃下搅拌15分钟，然后再次冷却至-70℃。在-70℃下加入DMF(6mL，77mmol)，然后在不进行冷却的情况下进行搅拌直至温度达到-10℃，然后用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭。萃取：AcOEt，饱和NH4Cl溶液。色谱法∶庚烷/乙酸乙酯95∶5。得到300mg(2.7％)挥发性的无色油状物，将其直接用于下一步。
步骤B2：
4-二乙氧基甲基-2-己硫基-6-甲基-嘧啶
将5，5-二乙氧基-戊-3-炔-2-酮(15g，88mmol)和2-己基-异硫脲氢溴酸盐(23g，97mmol)在氮气下溶解于THF(150mL)中。然后缓慢加入三乙胺(27mL，194mmol)，同时用冰浴进行冷却以将温度保持在20℃。将该混悬液在不进行冷却的情况下搅拌5小时。将产物用AcOEt、饱和NH4Cl溶液进行萃取，干燥并浓缩。将残余物用硅胶色谱法进行纯化，用庚烷/AcOEt20∶1洗脱。得到22.3g(80％)无色油状物和2.8g黄色副产物。
4-二乙氧基甲基-2-己硫基-6-三氟甲基-嘧啶
将5，5-二乙氧基-1，1，1-三氟-戊-3-炔-2-酮(2g，8.9mmol)和2-己基-异硫脲氢溴酸盐(2.4g，9.8mmol)在氮气下溶解于THF(20mL)中。然后缓慢加入三乙胺(2.7mL，19.6mmol)。该反应放热性(40℃)。将该混悬液在20℃下搅拌4小时。用AcOEt、饱和NH4Cl溶液萃取产物，干燥并浓缩。将残余物用硅胶色谱法进行纯化，用庚烷/AcOEt 20∶1洗脱。得到2.5g(76％)无色油状物。MS：m/z＝367(M+H)。
4-环丙基-6-二乙氧基甲基-2-己硫基-嘧啶
将1-环丙基-4，4-二乙氧基-丁-2-炔-1-酮(2g，10mmol)和2-己基-异硫脲氢溴酸盐(2.7g，11.2mmol)在氮气下溶解于THF(20mL)中。然后缓慢加入三乙胺(3.1mL，22.4mmol)。该反应轻微放热(28℃)。将该混悬液在20℃下搅拌5小时。用AcOEt、饱和NH4Cl溶液萃取产物，干燥并浓缩。将残余物用硅胶色谱法进行纯化，用庚烷/乙酸乙酯95∶5洗脱。得到2.86g(83％)无色油状物。MS：m/z＝339(M+H)。
4-二乙氧基甲基-2-己硫基-嘧啶
将(4，4-二乙氧基-丁-2-炔醛和2-己基-异硫脲氢溴酸盐(300mg，1.9mmol)(509g，2.1mmol)在氮气下溶解于THF(3mL)中。然后加入三乙胺(0.6mL，4.2mmol)。然后，将该混悬液在20℃下搅拌过夜。用AcOEt、饱和NH4Cl溶液萃取产物，干燥并浓缩。将残余物用硅胶色谱法进行纯化，用庚烷/乙酸乙酯95∶5洗脱。得到260mg(45％)无色油状物。MS：m/z＝299(M+H)。
步骤B3：
2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-甲醛
将4-二乙氧基甲基-2-己硫基-6-甲基-嘧啶(19g，60.8mmol)溶解于THF(100mL)和4N H2SO4水溶液(100mL)中并在50℃下搅拌33小时。倾倒到冷10％Na2CO3溶液(400mL)中，用乙酸乙酯和饱和NaCl溶液进行萃取。将油状物粗品用硅胶色谱法进行纯化，用庚烷/DCM 100∶0至67∶33梯度洗脱。得到10.7g(74％)黄色油状物。
2-己硫基-6-三氟甲基-嘧啶-4-甲醛
将4-二乙氧基甲基-2-己硫基-6-三氟甲基-嘧啶(1.6g，4.4mmol)在三氟乙酸(15mL)和水(1.5mL)中于20℃下搅拌10小时。将反应混合物蒸发至干，用乙酸乙酯、饱和Na2CO3溶液和饱和NaCl溶液萃取残余物。得到1.18g(92％)黄色油状物。MS：m/z＝311(M+H+H2O，水合物)。
6-环丙基-2-己硫基-嘧啶-4-甲醛
将4-环丙基-6-二乙氧基甲基-2-己硫基-嘧啶(2.7g，8mmol)溶解于THF(13mL)和4N HCl(13mL)中并在20℃下搅拌19小时。将反应混合物倾倒到冷10％Na2CO3(100mL)中，用AcOEt萃取两次并用饱和NaCl溶液萃取一次。将粗产物用硅胶色谱法进行纯化，用庚烷/DCM 100∶0至67∶33梯度洗脱。得到2g(94％)黄色油状物，在冰箱中放置厚其固化。MS：m/z＝264(M)。
2-己硫基-嘧啶-4-甲醛
将4-二乙氧基甲基-2-己硫基-嘧啶(250mg，0.8mmol)在THF(5mL)和4N HCl(5mL)中于20℃下搅拌64小时。将反应混合物倾倒到冷的10％Na2CO3中，用AcOEt萃取两次并用饱和NaCl溶液萃取一次。将粗产物在硅胶上用色谱法进行纯化，用庚烷/AcOEt 10∶1洗脱。得到138mg(73％)黄色油状物。MS：m/z＝224(M)。
步骤B4：
实施例16
2-己硫基-4-甲基-6-吡咯烷-1-基甲基-嘧啶
将2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-甲醛(0.1g，0.42mmol)溶解于乙醇(1mL)和乙酸(0.1mL)中。然后在20℃下缓慢加入吡咯烷(0.07mL，1mmol)和氰基硼氢化钠(26mg，0.4mmol)并继续搅拌24小时。将反应混合物蒸发至干，溶解于最少量的DMF(0.8mL)中并直接在YMC combiprep ODS-AQ柱(75×20mm iD，S-5μM，12nm)上用制备型HPLC色谱法进行纯化，用乙腈-水梯度洗脱。得到34.7mg(28％)黄色液体。MS：m/z＝294(M+H)。
实施例17
1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吡咯烷-3-醇
以类似的方式，用3-吡咯烷醇制备。MS：m/z＝310(M+H)。
实施例18
[1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-吡咯烷-3-基]-二甲基-胺
以类似的方式，用3-(二甲基氨基)吡咯烷制备。MS：m/z＝337(M+H)。
实施例19
2-己硫基-4-甲基-6-哌啶-1-基甲基-嘧啶
以类似的方式，用哌啶制备。MS：m/z＝308(M+H)。
实施例20
8-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷
以类似的方式，用1，4-二氧杂-8-氮杂螺(4.5)癸烷制备。MS：m/z＝366(M+H)。
实施例21
1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-哌啶-3-甲酰胺
以类似的方式，用哌啶-3-甲酰胺(nipecotamide)制备。MS：m/z＝351(M+H)。
实施例22
4-(3，5-二甲基-哌啶-1-基甲基)-2-己硫基-6-甲基-嘧啶
以类似的方式，用3，5-二甲基-哌啶制备。MS：m/z＝336(M+H)。
实施例23
1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-哌啶-4-醇
以类似的方式，用4-羟基哌啶制备。MS：m/z＝324(M+H)。
实施例24
2-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-十氢-异喹啉
以类似的方式，用十氢异喹啉制备。MS：m/z＝362(M+H)。
实施例25
1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-4-甲基-[1，4]二氮杂环庚烷
以类似的方式，用N-甲基高哌嗪(homopiperazine)制备。MS：m/z＝337(M+H)。
实施例26
2-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-1，2，3，4-四氢-异喹啉
以类似的方式，用1，2，3，4-四氢异喹啉制备。MS：m/z＝356(M+H)。
实施例27
1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-氮杂环庚烷
以类似的方式，用六亚甲基亚胺制备。MS：m/z＝322(M+H)。
实施例28
(2S，6R)-4-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-2，6-二甲基-吗啉
以类似的方式，用顺式-2，6-二甲基吗啉制备。MS：m/z＝338(M+H)。
实施例29
1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-哌啶-3-醇
以类似的方式，用3-羟基哌啶制备。MS：m/z＝324(M+H)。
实施例30
4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-2-己硫基-6-甲基-嘧啶
以类似的方式，用N-乙基哌嗪制备。MS：m/z＝337(M+H)。
实施例31
2-己硫基-4-甲基-6-(2-甲基-哌啶-1-基甲基)-嘧啶
以类似的方式，用2-甲基哌啶制备。MS：m/z＝322(M+H)。
实施例32
1-[4-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基]-乙酮
以类似的方式，用N-乙酰基高哌嗪制备。MS：m/z＝365(M+H)。
实施例33
4-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-[1，4]氧氮杂环庚烷
以类似的方式，用高吗啉(homomorpholine)盐酸盐制备。MS：m/z＝323(M+H)。
实施例34
4-(3，5-二甲基-哌嗪-1-基甲基)-2-己硫基-6-甲基-嘧啶
以类似的方式，用2，6-二甲基哌嗪制备。MS：m/z＝337(M+H)。
实施例35
(1S，5S)-3-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-1，2，3，4，5，6-六氢-1，5-亚甲基-吡啶并[1，2-a][1，5]二氮杂环辛间四烯-8-酮
以类似的方式，用(-)-野靛碱制备。MS：m/z＝413(M+H)。
实施例36
1-苄基-4-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基甲基)-[1，4]二氮杂环庚烷
以类似的方式，用1-苄基-六氢-1，4-二氮杂(diazepine)制备。MS：m/z＝413(M+H)。
实施例37
4-(2，6-二甲基-哌啶-1-基甲基)-2-己硫基-6-甲基-嘧啶
将2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-甲醛(0.2g，1mmol)和2，6-二甲基哌啶(0.23mL，2mmol)溶解于原钛酸四异丙酯(0.5mL)中并在20℃下搅拌1小时。将该溶液用2-丙醇(5mL)稀释并用氰基硼氢化钠(105mg，2mmol)在20℃下处理20小时。加入水(1mL)，将所得的沉淀滤出并蒸发。用AcOEt、饱和NH4Cl溶液萃取产物，干燥并浓缩。将残余物在YMC combiprepODS-AQ柱(75×20mm iD，S-5μM，12nm)上用制备型HPLC色谱法进行纯化，用乙腈-水梯度洗脱。得到37mg(36％)无色固体。MS：m/z＝336(M+H)。
实施例38
4-(顺式-2，6-二甲基-哌啶-1-基甲基)-2-己硫基-6-甲基-嘧啶
以类似的方式，用顺式-2，6-二甲基哌啶来制备。MS：m/z＝336(M+H)。
实施例39
4-(2-己硫基-6-三氟甲基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉
将2-己硫基-6-三氟甲基-嘧啶-4-甲醛(0.5g，1.7mmol)和吗啉(0.16mL，1.9mmol)溶解于乙醇(5mL)和乙酸(0.5mL)中并用硼烷-吡啶复合物(0.19mL，1.9mmol)在20℃下处理4小时。将反应混合物蒸发至干。萃取：2×AcOEt，1×10％Na2CO3水溶液。得到预期产物和极性更高的被还原的醛的混合物。将该混合物在得自Silicycle的Si-胺上用色谱法进行分离，用10∶1到高至1∶1的庚烷/乙酸乙酯梯度洗脱。得到220mg(35％)无色油状物。MS：m/z＝364(M+H)。
实施例40
4-(6-环丙基-2-己硫基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉
以类似的方式，用6-环丙基-2-己硫基-嘧啶-4-甲醛制备。得到342mg(54％)无色油状物。MS：m/z＝336(M+H)。
实施例41
4-(2-己硫基-6-乙基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉
以类似的方式，用6-乙基-2-己硫基-嘧啶-4-甲醛制备。得到无色油状物。MS：m/z＝324(M+H)。
实施例42
4-(2-已硫基-嘧啶-4-基甲基)-吗啉
以类似的方式，用2-己硫基-嘧啶-4-甲醛制备。得到62mg(36％)无色油状物。MS：m/z＝296(M+H)。
步骤C1：
5-羟基-己-3-炔-2-酮
将3-己炔-2，5-二醇(5mL，45mmol)在丙酮(50mL)中的溶液在冰中于氮气下进行冷却。在5℃下历经2小时缓慢加入琼斯试剂(22mL，45mmol，2M在4M H2SO4中的CrO3)。将所得的绿色溶液从铬盐上倾出，用AcOEt和饱和NaCl溶液进行萃取。将粗产物在硅胶上用色谱法进行纯化，用庚烷/AcOEt梯度洗脱。得到2.2g(45％)无色油状物。
步骤C2：
1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙醇
将5-羟基-己-3-炔-2-酮(2g，18mmol)和2-己基-异硫脲氢溴酸盐(5.2g，21mmol)溶解于THF(10mL)中。然后加入三乙胺(5.5mL，40mmol)并继续搅拌3小时。该反应轻微放热。将该混合物用AcOEt和饱和NH4Cl溶液萃取。将粗产物在硅胶上用色谱法进行纯化，用庚烷/AcOEt梯度洗脱。得到2.8g(61％)淡黄色油状物。MS：m/z＝254(M)
步骤C3：
1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙酮
将1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙醇(2.2g，8.65mmol)在氮气下溶解于丙酮(20mL)中。然后滴加2M由20g在100mL 4M H2SO4中的CrO3制得的琼斯试剂(6.5mL，13mmol)。在20℃下搅拌2小时后，将所得的绿色溶液从铬盐上倾出，用AcOEt和饱和NaCl溶液萃取。将粗产物在硅胶上用色谱法进行纯化，用庚烷/AcOEt梯度洗脱。得到960mg(44％)白色晶体。MS：m/z＝252(M)。
步骤C4：
实施例43
4-[1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙基]-吗啉
将1-(2-己硫基-6-甲基-嘧啶-4-基)-乙酮(200mg，0.79mmol)和吗啉(138μL，1.58mol)溶解于原钛酸四异丙酯(0.5mL)中并在80℃下加热16小时。将棕色溶液用2-丙醇(5mL)稀释并用氰基硼氢化钠(32mg，0.5mmol)在20℃下处理6小时。萃取：2×AcOEt，2×饱和NH4Cl溶液。色谱法：Si-胺，庚烷/乙酸乙酯85∶15。得到86mg(34％)黄色油状物。MS：m/z＝324(M+H)。