多杀菌素用于伤口愈合

本发明涉及多杀菌素(spinosyn)在人体内促进或加速正常人和愈 合受损人的伤口愈合的治疗用途。多杀菌素或其生理学上可接受的衍 生物或盐可用于需要软组织生长和再生的人的治疗适应症。伤口愈合 受损是人的重要发病源，可导致并发症如伤口不愈合。在正常个体 中，伤口愈合通过不复杂的内生过程完成。相比之下，伤口愈合受损 与若干病症如糖尿病、感染、免疫抑制、肥胖症和营养失调有关。

                        发明背景

伤口愈合是涉及细胞外基质、血细胞、实质细胞和介质如细胞因 子的复杂生物过程。在伤口达到止血即出血停止时，愈合过程开始。 它分三个阶段：炎症、组织形成(增生)和组织再生(重塑)。在创伤发生 之后愈合很快开始；例如，皮肤伤口的上皮重新形成在数小时之内开 始(Singer和Clark，New Eng.J.Med.341(10)：738-746(1999))。伤口 愈合过程由有髓的传入感觉神经启动，该神经介导神经性炎症、免疫 应答(Eglezos等，Adv.Exp.Biol.Med.273：499-503(1989)；Immunol. Cell Biol.69：285-294(1991))和血管紧张度(Khalil & Helme，Brain Res.500：256-262(1989)；Brain Res.527：292-298(1990))，它们都是愈 合的必要成分。在感觉神经启动愈合之后，愈合的过程由影响细胞迁 移、增生和蛋白质生产的生长因子和细胞因子调节。在止血中，蛋白 质如纤维蛋白和纤连蛋白相互作用使血液凝结，细胞因子和生长因子 受到增量调节。创伤发生后，炎症开始。

炎症反应出现三个明显不同的阶段，每个阶段明显由不同的机理 介导：(1)急性瞬变阶段，以局部血管舒张和毛细血管通透性增加为特 征；(2)延迟的、亚急性阶段，最显著的特征是白细胞和吞噬细胞的渗 入；和(3)慢性增生阶段，其中发生组织变性和纤维化。许多不同的机 理与炎症过程有关。建立炎症反应的能力对面对环境中的病原体和创 伤而生存是必要的，尽管在一些情形和疾病中炎症反应可能被夸大和 出于非明显有益的理由而维持。在炎症期间，嗜中性细胞(多形核粒细 胞，PMN)、单核细胞和巨噬细胞渗入伤口。这些吞噬细胞释放增生 阶段的生长因子、降解蛋白质的酶介质(蛋白酶)，并吞噬细菌、死亡的 和快死的细胞，从而清除伤口。

在下一阶段，增生开始。胶原蛋白沉积，形成疤痕组织。成纤 维细胞产生蛋白多糖，其将胶原纤维粘结在一起。随着时间的过去， 胶原蛋白被蛋白酶降解并重塑成更坚固的疤痕结构。

多杀菌素(又名A83453因子)为农业、家畜和配对动物杀虫剂，其 证明有以下的活性，抗1)鳞翅目昆虫，2)同翅目的成员，3)双翅目昆 虫成员，4)鞘翅目的成员，和5)虱目的成员。适于农业、家畜和配对 物动物给药的制剂包括各种混悬液、溶液、片剂、胶囊、液体和处理 剂(treats)。

赐诺杀(Spinosad)(一种主要由多杀菌素A，85％和多杀菌素D，15％ 组成的产品)目前在澳大利亚和新西兰被批准用于羊身上虱子的治疗以 及羊身上肉蝇蛆病的治疗和预防。在巴西，赐诺杀被批准用于某些 蜱、蝇和虱子的局部治疗和控制以及作为防腐剂和愈合驱虫剂用于 牛、绵羊、山羊、马、猪、鸟以及狗的马蝇蝇蛆病和皮肤伤口的治疗。

已知多杀菌素用于控制人的虱子感染，U.S.6,063,771和EP 1 252 820。适于这类用于人的杀蚊剂用途的制剂也在那些专利中有述。

尽管已知关于多杀菌素的杀体外寄生虫药活性和市售许可，但目 前发现多杀菌素或其生理上可接受的衍生物或盐有伤口愈合活性，该 活性与包含防腐剂/消毒剂的制剂无关。

                    发明概述

本发明涉及通过将多杀菌素或其生理学上可接受的衍生物或盐施 用于需要其的人来治疗人的伤口以促进或加速伤口愈合的方法，其中 包括愈合不良的或长期的伤口、皮肤病和变态反应性疾病，尤其是那 些与皮肤相关的机能障碍、以及与之相关的病症或症状。优选地，这 些方法通过施用赐诺杀或其生理学上可接受的衍生物或盐来实施。

                    发明详述

本发明提供促进或加速人的伤口愈合的方法，包括将多杀菌素或 其生理学上可接受的衍生物或盐施用于需要其的人。另一方面，本发 明提供多杀菌素、或其生理学上可接受的衍生物或盐、或含多杀菌素 或其衍生物或盐的制剂的用途，其用于制备促进或加速人的伤口愈合 的药物。

多杀菌素是自然派生的发酵产品。它们是由土壤放线菌 (Saccharopolyspora spinosa)培养产生的大环内酯。发酵产生几种因 子，包括多杀菌素A和多杀菌素D(也称为A83543A和A83543D)。多 杀菌素A和多杀菌素D作为杀虫剂是最具有活性的两种多杀菌素。主 要由这两种多杀菌素组成的农产品(大约85％A和15％D)以商品名赐 诺杀购自Dow AgroSciences。包含赐诺杀的外寄生虫产品可购自Eli Lilly and Company。名称“赐诺杀(spinosad)”来自多杀菌素 (spinosyns)“A”和“D”的缩写。

每一多杀菌素具有12元大环的环，该环是四环体系的一部分，两 个不同的糖即氨基糖forosamine和中性糖2N，3N，4N-三-O-甲基鼠李糖 连在该四环体系上。这一独特的结构使得多杀菌素与其它大环化合物 不同。

多杀菌素A(A83543A)是第一个从土壤放线菌(Saccharapolyspora spinosa)的发酵肉汤中分离和鉴定的多杀菌素。对发酵肉汤的后续检 验表明土壤放线菌的亲株产生了许多多杀菌素，已经被标记为A至J (A83543A至J)。与多杀菌素A相比，多杀菌素B-J的特征为forosamine 的氨基上、四环体系和2N，3N，4N-三-O-甲基鼠李糖上所选择的位点上 的取代型式有差异。目前应用的土壤放线菌菌株产生多杀菌素的混合 物，其中主要成分为多杀菌素A(～85％)和多杀菌素D(～15％)。其 它多杀菌素，编字码为K至W，从土壤放线菌的突变株中鉴定。

本文中所用的术语“多杀菌素或其生理学上可接受的衍生物或 盐”指单个的多杀菌素因子(A，B，C，D，E，F，G，H，J，K，L， M，N，O，P，Q，R，S，T，U，V，W或Y)、单个多杀菌素因子的 N-去甲基(N-demethyl)衍生物、它们的组合或生理学上可接受的盐。为 了方便起见，术语“多杀菌素”也将用于本文中指单个的多杀菌素、 或其生理学上可接受的衍生物或盐、或它们的组合。用于人的伤口愈 合最优选的是赐诺杀或其生理学上可接受的衍生物或盐。

EP 375 316描述了多杀菌素A-H和J(它们称其为A83543因子A， B，C，D，E，F，G，H和J)及其盐。Mynderse等在美国专利5,202,242 中描述了多杀菌素L-N(它们称其为A83543因子L，M和N)、它们 的N-去甲基衍生物及其盐；Turner等在美国专利5,591,606和美国专 利5,631,155中描述了多杀菌素Q-T(它们称其为A83543因子Q，R， S和T)、它们的N-去甲基衍生物及其盐。这些专利引入本文作为参 考。多杀菌素K，O，P，U，V，W和Y有描述，例如由Carl V.DeAmicis， James E.Dripps，Chris J.Hatton和Laura I.Karr在American Chemical Society′s Symposium Series：Phytochemicals for Pest Control， Chapter 11，″Physical and Biological Properties of多杀菌素：Novel Macrolide Pest-Control Agents from Fermentation，″第146-154页 (1997)中作了描述。在美国专利6,001,981中描述了各种多杀菌素的 合成衍生物，在US 6,455,504中描述了各种多杀菌素类似物，它们均 在此引入作为参考。这些参考文献中提供了关于多杀菌素的发酵和分 离的细节和制备合成衍生物的方法。

每一份美国专利和EP专利申请都描述了多杀菌素及其生理学上 可接受的衍生物或盐的各种不同制剂类型、杀寄生物的活性和在动物 中和农业上的施用方案。

在美国专利6,063,771和6,342,482以及在EP 1 252 820中，描述了 多杀菌素或其生理学上可接受的衍生物或盐的制剂和用于控制人身上 的虱子的应用以及制备这些制剂的方法。

如上所述，赐诺杀制剂购自Dow AgroSciences，9330 Zionsville Road，Indianapolis，Indiana，46268-1054，USA和Elanco Animal Health，a Division of Eli Lilly and Company，P.O.Box 708，2001 W. Main Street，Greenfield，Indiana，46140，U.S.A.。此外，土壤放线菌及 突变株已经保藏在Agricultural Research Service Patent Culture Collection (NRRL) National Center for Agricultural Utilization Research，ARS，USDA，1815 North University Street，Peoria，Illinois， 61604，USA.(NRRL 18395，18537，18538，18539，18719，18720，18743， 18823和30141(美国专利6,455,504)。

多杀菌素可反应形成盐。生理学上可接受的盐也用于本发明的方 法中。采用制备盐的标准方法制备这些盐。例如，多杀菌素A可用 适宜的酸中和形成酸加成盐。多杀菌素的酸加成盐特别有效。代表性 的适宜的酸加成盐包括与有机酸或无机酸反应形成的盐，所述的酸例 如硫酸、盐酸、磷酸、乙酸、琥珀酸、柠檬酸、乳酸、马来酸、富马 酸、胆酸、pamoic酸、粘酸、谷氨酸、樟脑酸、戊二酸、乙醇酸、酞 酸、酒石酸、甲酸、月桂酸、硬脂酸、水杨酸、甲磺酸、苯磺酸、山 梨酸、苦味酸、苯甲酸、肉桂酸等酸。

在本文中所述的所有的比、百分比和份数为“按重量计”，除非 另有说明。

“伤口”指对人的组织被切割、撕破、断裂、烧伤或以其它方式 受到损伤的创伤，或由导致这类创伤的机能障碍或疾病引起的创伤。

本发明给出的“愈合”是促进或加速从伤口发生(施用多杀菌素) 至伤口闭合(伤口完全收缩)的时间。

术语“组织”指人体内集合在一起形成特定功能的一团细胞。组 织包括但不限于骨、皮肤、结缔组织和神经如脊髓。

本文中所用的术语“处理”和“治疗”指治愈性治疗。需要治疗 的那些人包括有伤口、机能障碍或疾病的那些人。

“联合”一种或多种其它治疗剂给药包括同时(并行)和以任何顺序 顺次给药于人。

“治疗有效量”为给予人治疗益处所必需的活性剂(例如多杀菌 素，最优选赐诺杀)的最小量。例如，给予受伤口之苦的人的“治疗有 效量”是这样一种量：其诱导、促进、加速或以其它方式导致病理症 状、愈合进展、相关的生理条件的改善或改善对愈合的抗力。

本文中所用的“载体”包括可药用载体、赋形剂或稳定剂，其在 使用的剂量和浓度下对与之接触的人无毒性。通常生理学可接受的载 体为pH缓冲水溶液。生理学可接受的载体的实例包括缓冲液如磷酸 盐、柠檬酸盐及其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；亲水性聚合 物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、 精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露 糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖醇，如甘露醇或山梨醇；成盐平衡离 子如钠；和/或非离子型表面活性剂，如聚氧化乙烯山梨糖醇酐脂肪酸 酯(TWEEN)、聚乙二醇(PEG)和聚氧化乙烯/聚氧化丙烯嵌段共聚物 (PLURONIC)。

本发明的多杀菌素和最尤其是赐诺杀能刺激愈合的神经原性激活 以及继发的与细胞生长和增生有关的炎症活性。因此，本发明的组合 物可用于刺激上皮细胞增生和基底的角化细胞以便伤口愈合，尤其是 皮肤伤口的愈合。这些伤口可能是浅表性质的或者是深部的并涉及皮 肤的真皮和表皮的损伤。

多杀菌素用于治疗许多伤口和病症。例如，在多种伤口愈合模型 中多杀菌素在体内具有活性。

接受多杀菌素给药的人可以以正常速度愈合伤口，或者可以是愈 合受损的人。当给药于非愈合受损的个体时，给予多杀菌素以加速正 常愈合的过程。当给药于愈合受损的个体时，给予多杀菌素以促进伤 口的愈合，否则伤口将愈合缓慢或根本不愈合。许多痛苦和病症可导 致愈合损伤。这类痛苦和病症包括糖尿病(例如，II型糖尿病)、同时 用类固醇和非类固醇药剂治疗以及缺血性阻塞(blockage)或创伤。

已经证明许多生长因子能促进愈合受损的个体中的伤口愈合。这 类生长因子包括生长激素释放因子、血小板衍生的生长因子和碱性成 纤维细胞生长因子。因此，本发明也包括至少一种多杀菌素与一种或 多种生长因子或其它促进伤口愈合的治疗剂结合给药。

本发明的多杀菌素能促进以正常速度愈合伤口或愈合受损的人的 吻合性(anastomotic)伤口及其它由外科手术操作所引起的伤口的愈 合。

本发明的多杀菌素和尤其是赐诺杀临床上可用于正常个体和那些 遭受诱发异常的伤口愈合的病症的个体中刺激伤口的伤口愈合，其中 所述伤口包括外科手术伤口、切除的伤口、涉及真皮和表皮损伤的深 部伤口、软组织创伤如肌肉撕裂、眼组织伤口、牙组织伤口、口腔伤 口、胃肠粘膜的伤口和溃疡、糖尿病性溃疡、皮肤溃疡、肘溃疡、动 脉性溃疡、静脉淤滞性溃疡、和由热、暴露于热或冷的极端温度或暴 露于化学品而引起的灼伤，所述诱发异常的伤口愈合的病症比如有尿 毒症、营养失调、维生素缺乏、肥胖症、感染、免疫抑制以及与用类 固醇、放射治疗以及抗肿瘤药和抗代谢物全身性治疗相关的并发症。 该组合物还可用于促进与缺血和缺血性创伤例如由静脉循环系统恢复 损害和/或不足所引起的慢性腿静脉溃疡相关的伤口的愈合；用于促进 在皮肤丧失之后的真皮重建；增加表皮的抗张强度和表皮的厚度；以 及增加皮肤移植体对伤口床的粘着和刺激伤口床的上皮重新形成。

本文中所用的“个体”指人。

多杀菌素制剂可以使用适宜的已知可用于药物组合物中的药物稀 释剂。这类稀释剂包括但不限于盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油、 乙醇以及它们的组合。制剂应当适合给药的方式。优选地，将药物 组合物配制用于给药。

多杀菌素可以以与一种或多种可药用赋形剂结合的药物组合物形 式给药。应当理解，当给药于人患者时，本发明药物组合物的每日总 用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。对于任何具体的患 者具体的治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括要取得的响应的 类型和程度；具体的组合物，包括是否使用另一种治疗剂，若有的话； 患者的年龄、体重、全身健康、性别和饮食；组合物的给药时间、给 药途径以及排泄速率；治疗的持续时间；与具体的组合物组合或同时 应用的药物(如化疗剂)；以及医学领域公知的类似因素。本领域已知 的适宜制剂可见于Remington′s Pharmaceutical Sciences(最新版)， Mach Publishing Company，Easton，PA。因此用于本发明目的的多 杀菌素的“有效量”(包括某种多杀菌素的有效量)由诸如此类需要考虑 的因素确定。

本发明的药物组合物可以以方便的方式给药，如经口腔、直肠、 局部、静脉内、腹腔内、肌肉内、关节内、表皮下、鼻内、吸入、眼 内或真皮内的途径给药。肠胃外和局部递送为优选的给药途径。

本文中所用的术语“肠胃外”指包括静脉内、肌肉内、腹腔内、 胸骨内、表皮下和关节内注射和输注的给药方式。

药物组合物以有效治疗特定适应症的量给药。大多数情况下，多 杀菌素的剂量为每日约0.5μg/kg至约50mg/kg体重，考虑给药途 径、症状等。不过，剂量可低至0.05μg/kg体重。例如，在局部给 药的具体情况下给药剂量优选为约0.2μg至2μg/cm2。在鼻内和眼内 给药的情况下，给药的剂量优选为约0.05μg/kg至约50μg/kg体 重，更优选约0.5μg/kg至约5μg/kg体重。

作为一般的建议，多杀菌素胃肠外给药的总药学有效量将在约0.5 μg/kg/天至5mg/kg/天患者体重的范围内，尽管如上所述，但这将根据 治疗的判断决定。如果连续给药，通过每天1-4次注射或通过连续的 表皮下输注例如采用微泵，多杀菌素通常以约10μg/kg/小时至约100 μg/kg/小时的剂量速率给药。也可以使用静脉袋装溶液或瓶装溶液。

多杀菌素的治疗过程如果比某些最小的天数(对于人1至5天) 持续更长则似乎最理想。观察变化所需的治疗时间以及治疗后出现反 应的间隔将根据预期效果而变化。

关于肠胃外给药，在一实施方案中，多杀菌素通常如下配制：在 单位剂量的可注射形式(溶液、混悬液或乳液)中将其以需要的纯度与可 药用载体混合，其中可药用载体即一种在所用剂量和浓度下对接受者 无毒并且与制剂的其它成分相容的载体。

通常，该制剂通过使多杀菌素与液体载体或精细粉碎的固体载体 或两者均匀和密切接触来制备。然后，如有必要，使产品成形为所需 制剂。就肠胃外载体而言，优选使用与接受者的血液等渗的溶液。这 类载体赋形剂的实例包括水、盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。非水 赋形剂如不挥发油(fixed oils)和油酸乙酯，以及脂质体，也用于本发 明中。本领域已知的适宜制剂可见于Remington′s Pharmaceutical Sciences(最新版)，Mach Publishing Company，Easton，PA。

对于局部的给药，制剂如软膏、乳膏和凝胶剂可以以如上对于组 合物所述的剂量应用。本领域已知的适宜制剂可见于Remington′s Pharmaceutical Sciences(最新版)，Mach Publishing Company，Easton， PA。

软膏通常使用以下基质制备：(1)油脂性基质，即由不挥发油或烃 组成的基质，如白凡士林或矿物油，或(2)吸收基质，即由任何无水物 质或能吸水的物质组成的基质，例如无水羊毛脂。通常，在基质形成 之后，无论是油脂性的还是吸收性的，活性成分(多杀菌素)均以提供所 需浓度的量加入。

乳膏为油/水型乳剂。它们由油相(内相)和水相(连续相)组成，其 中油相典型地包括不挥发油、烃等，如蜡、矿脂、矿物油等，水相包 括水和任何水溶性的物质如加入的盐。通过使用乳化剂和亲水胶体等 使两相稳定，其中乳化剂例如为表面活性剂，如十二烷基硫酸钠，亲 水胶体例如是阿拉伯胶胶体粘土、硅酸镁铝(veegum)等。在乳剂形 成时，通常将活性成分(多杀菌素)以达到所需浓度的量加入。

凝胶剂包含选自油脂性基质、水或乳剂-混悬液基质的基质，如前 述的基质。向基质中加入在该基质中形成基体、增加其粘性的胶凝 剂。胶凝剂的实例为羟丙基纤维素、丙烯酸聚合物等。通常，将活 性成分(多杀菌素)以需要的浓度在加入胶凝剂之前的时间点加入到制 剂中。

口服药物制剂通过已知的方法使用熟知的和容易得到的成分来制 备。在制备该组合物时，通常将活性成分与可药用载体混合，或者用 载体稀释，或者包装在载体(可以是胶囊、香袋、纸或其它容器的形 式)内。当载体用作稀释剂时，它可以是用作活性成分的载体、赋形 剂或介质的固体、半固体或液体物质。因此，该组合物可以是片剂、 丸剂、粉剂、锭剂、混悬液、乳剂、溶液、糖浆、软和硬胶囊等形式。

除用于组合物的如上所述剂量的活性或治疗成分之外，片剂还含 许多被称为添加剂或赋形剂的惰性物质。这些物质有助于赋予制剂令 人满意的加工和压缩特性，包括稀释剂、粘合剂、助流剂和润滑剂。其 它加入的一组物质有助于赋予成品片剂其它期望的物理特性。该组物 质中包括崩解剂、颜料，就咀嚼片而言，包括调味剂和甜味剂，就控 释片而言，包括聚合物或蜡或其它延缓溶解的物质。

“可药用”指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂中的其它成分相容 且对接受者无害。

更详细的内容，包括代表性的制剂，可见于Remington′s Pharmaceutical Sciences(最新版)，Mach Publishing Company， Easton，PA。

本发明的组合物也可考虑用于伤口护理敷料或绷带，其包含治疗 有效量的多杀菌素或其生理学上可接受的衍生物或盐。用于伤口护理 的绷带或敷料包含外织物支持体和内衬垫，其中，外织物支持体优选 弹性体织物支持体；内衬垫包含外膜表面，优选由成膜材料制造，并 在基质中以上述用于组合物的剂量掺入治疗有效量的多杀菌素或其生 理学上可接受的衍生物或盐、优选赐诺杀或其生理学上可接受的衍生 物或盐。该衬垫可以与外织物支持体构成整体或与之分开。

理想的是，将多杀菌素掺入膜基质中，但也可掺入膜所含的内衬 垫材料中。

治疗活性剂保持在聚合物基质中以抑制迁移并允许多杀菌素随时 间逐渐释放。

另一方面，伤口敷料包含具有液体可渗透的体侧衬里的吸收衬 垫、分开的外罩层(任选地液体不能透过)和置于两者之间的吸收体。 内体和/或吸收体由在基质或interstutual间隙中掺入治疗有效量的多 杀菌素以确保多杀菌素在伤口附近恒久接近的材料制造。

绷带的内表面或衬垫优选由天然或人工膜或有机或无机的、动物 或植物来源的成膜材料制造，或者由塑料材料制造。例如，由明胶或 由植物树胶制造，或由亲水性或疏水性成膜塑料材料制造，成膜塑性 材料如聚氯乙烯多醋酸酯或聚酰胺，它们按常规方法铸造或以薄膜或 膜包膜。

适宜的聚合物材料包括但不限于硅橡胶或其它硅树脂基材料、聚 对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene tecephtalate)(PET)、涤纶、针织涤 纶、丝绒涤纶、羟乙酸乳酸聚酯(polyglacin)、尼龙、蚕丝、聚乙烯(PE)、 聚氨酯、聚氯乙烯硅橡胶弹性材料、硅酮、橡胶、PMMA(聚-(甲基丙 烯酸甲酯))、胶乳、聚丙烯(PP)、聚烯烃(polyofefin)、纤维素、聚乙烯 醇(PVA)、聚(甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯 腈)(PAN)、氟化乙烯-cohexa-氟化丙烯(FEP)、聚四氟乙烯(PTFE)、它 们的共聚物和它们的混合物。

将治疗活性化合物掺入聚合物材料中的最简单方法是直接将治疗 活性物质在铸造等之前掺入塑料树脂中。

薄膜或膜理想地由液体和气体均可透过的、但不能使微生物透过 的疏水性聚合物制造。薄膜或膜的疏水性是有用的特征，因为它能降 低薄膜或膜粘附于伤口部位的趋势。

多杀菌素掺入制剂中的量并不关键；浓度只需在足以允许将制剂 以输送所需量的多杀菌素的量准备施用于伤口区域的范围之内。

施用于伤口的制剂的常规量将取决于伤口尺寸和制剂中多杀菌素 的浓度。通常，该制剂将以提供约0.1μg至约5μg多杀菌素/cm2伤 口的量施用于伤口。优选地，多杀菌素的施用量将为约0.2μg至约2 μg/cm2，最优选约0.25μg至约0.5μg/cm2。

还可将多杀菌素以液体、滴剂或增稠的液体、凝胶形式施用于眼 睛以治疗人的泪腺创伤、机能障碍和病状。

还可将多杀菌素以液体滴剂或以喷雾剂形式鼻内给药于鼻粘膜， 以治疗人的鼻粘膜和鼻窦上皮的机能障碍、创伤和病状。

多杀菌素通常以约0.01μg/ml至50mg/ml、优选地0.01μg/ml至 10mg/ml的浓度、在约5至约8、优选约6至约7的pH、最优选约pH 6.2下在载体中进行配制。应当理解，使用某些上述赋形剂、载体或 稳定剂可导致多杀菌素盐的形成。

通常将多杀菌素以水溶液的形式或以用于重建的冻干制剂形式贮 存于单位剂量或多剂量的容器例如密封的安瓿或小瓶中。作为冻干制 剂的例子，3-ml小瓶充入1ml的无菌过滤的1％(w/v)多杀菌素水溶液， 然后将所得混合物冻干。输注溶液通过使用注射用水(可任选地含一 种或多种抗氧化剂)重建冻干的多杀菌素来制备。

剂量也可以按患者的具体方式来调整，以在血液中提供预定浓度 的多杀菌素活性，例如，通过RIA技术进行测定。因此，可调节患者 的用药剂量以取得有规律的最小工作(on-going trough)血浓度，通过 RIA测量，约为50-1000ng/ml，优选150-500ng/ml量级。

                        实施例1

局部施用赐诺杀改善羊的摩勒氏手术(Mulesing operation)伤口的愈 合。(研究编号T9CAL0205)

对阉割和剪掉尾巴的美利奴羔羊进行摩勒氏手术(摩勒氏手术包括 外科手术切除支撑(crutch)区域带有羊毛的皮，愈合时会降低羊对苍蝇 (fly)侵袭的敏感性)。50只羊未经处理，一组381只羊用7.1g的4mg/g 赐诺杀气雾剂(参见表1的制剂)处理。将赐诺杀气雾剂局部施用于伤 口直到伤口被产品变湿，护理该部分。

表1.赐诺杀气雾剂制剂   组分   量   ％w/w   Soinosad@89.9％   0.445   醇100AGF4   20   氨己定二葡萄糖酸盐20％   0.08   亮蓝FCF   0.02   没食子酸丙酯   0.01   乳酸85％   0.06   丙二醇   10   去离子水   64.43   吐温20   2   PVP K30   3

对每组18只羔羊的摩勒氏手术伤口在处理后7和17天伤口愈合的 证据严格检查和评价(表1)。对疤的形成和伤口收缩以0(完全或正常 愈合)至3(相当于没有愈合)进行评分。对出血/浆液性渗出物和受损的 愈合根据视觉以0(没有出血/渗出且正常愈合)至3(严重出血或愈合受 损)进行评分。

表2.局部施用赐诺杀对摩勒氏手术之后的羊的伤口愈合的影响。   组  #疤的形成  #伤口收缩  #出血/   严重渗出  @愈合受损   天   7   17   7   17   7   17   7   17   未处理   0.04   0.57   0.12   0.88   0.12   0.08   0   0   赐诺杀气雾剂   0.04   0   0.08   0.36   0.12   0   0   0

#几何平均值。评分低表示愈合较好。

@18只羊中受影响的羊数。

在摩勒氏手术之后7天，用赐诺杀处理的羊的摩勒氏手术伤口比 未经处理的对照羊有更大的收缩，通过伤口收缩的较低平均评分所测 定。在摩勒氏手术之后第17天，与未经处理的对照羊相比较，用赐 诺杀处理的羊的疤形成、伤口收缩有改善，并且出血和浆液性渗出物 减少，表明伤口愈合有改善。

与未经处理的动物相比较，局部施用赐诺杀至羊的摩勒氏手术伤 口将导致处理后17天伤口愈合改善。这种伤口愈合的改善在缺少混 淆因素如丽蝇侵袭的情况下发生。不过，在该实施例中使用的制剂还 包含抗菌化合物氯己定。在该实施例中氯己定抑制细菌性感染的能力 可能对伤口愈合也有正效应。

                        实施例2

局部施用赐诺杀改善羊的摩勒氏手术伤口的愈合。(研究编号 T9CAL0206)

对剪掉尾巴的和支撑的(crutched)美利奴羊母羔进行摩勒氏手 术。将约46ml稀释了的(125ppm)Extinosad(指表3的制剂)使用小(2 或5L)加压园艺手动喷雾器施用于150只羔羊的摩勒氏手术伤口，其 中园艺手动喷雾器在有园艺供货的有人零售店可买到。容器或储液器 呈圆锥形并通过手工泵送加压。喷雾剂由锥形喷嘴释放。使用气雾 剂喷射将赐诺杀气雾剂4mg/g(参见表1制剂)施用于伤口，直到伤口和 周围的羊毛被产品湿润。在摩勒氏手术之后，50只羊保持未处理(对 照羊)。

表3.Extinosad(25g/L赐诺杀)制剂   组分   量   ％w/w   Soinosad@92％   2.7   硅酸镁铝(Veegum)   1   Proxel GXL   0.2   丙二醇   10   黄原胶   0.2   Pluronic P123或Pluronic P105   1.0   消泡剂C(30％)   0.2   Lomar PWA(44.5％溶液)   4.5   去离子水   80.2

处理14天后将羔羊集中在畜栏中。在15分钟内观察羔羊并鉴定 任何苍蝇侵袭的体征如尾巴的抽搐、咬该区域或顿足。从每个组中随 机选择25只羔羊并放在围栏(rail)上，评价它们的摩勒氏手术伤口 苍蝇侵袭和伤口愈合的证据(表4)。对疤的形成和伤口收缩以0(完全 或正常愈合)至3(相当于没有愈合)进行评分。对出血/浆液性渗出物和 愈合受损根据视觉以0(没有出血/渗出且正常愈合)至3(严重出血或愈 合受损)进行评分。

表4.局部施用赐诺杀对伤口愈合的影响，其中赐诺杀以2种不同制剂 递送，在摩勒氏手术和处理之后14天的羊中存在苍蝇侵袭和感染。   组  #疤的   形成  #伤口   收缩  #出血/浆   液性渗出  @愈合   受损  @存在   幼虫  @存在   感染   未处理   0.15   0.15   0.15   4   4   6   Extinosad   (赐诺杀   125mg/L)   0.06   0.03   0   0   l   0   赐诺杀气雾剂   (4mg/L)   0.03   0.06   0   0   0   0

#几何平均值。评分低表示愈合较好。

@25只羊中受影响的羊数。

用赐诺杀以气雾剂制剂(4mg/L)或以手工喷雾剂(125mg/L)处理的 羊显示出伤口愈合改善，这由对疤形成、伤口收缩以及伤口部位出血 和浆液性渗出物的出现的评分降低所证明。而且，在每个处理组接受 检验的25只羊中，没有一只动物愈合受损，相比较在未处理的对照组 中有4只愈合受损的动物的记录。在25只未处理的对照羊中有4只 存在铜绿蝇(Lucilia cuprina)的幼虫，相比较用Extinosad处理的组 中有一只羊发生该状况，而用赐诺杀气雾剂处理的组中没有羊发生该 状况。在未处理的组的25只羊中有6只存在伤口部位的感染，但在 用赐诺杀处理的组中不存在该感染。

与未处理的对照动物相比较，用赐诺杀局部处理摩勒氏手术伤口 导致伤口愈合改善，如上面的实施例1所示。伤口愈合的改善伴随有 感染率的降低和铜绿蝇幼虫存在的减少。这种伤口愈合改善的出现与 施用于摩勒氏手术伤口的赐诺杀的剂型或剂量无关。而且，在没有氯 己定(Extinosad)的情况下赐诺杀也能增强伤口愈合。该数据表明在实 施例1和2观察到的伤口愈合增强可能是赐诺杀本身的作用，而不是 氯己定抑制感染性能的作用。

                        实施例3

在使用热损伤模型的大鼠中赐诺杀改善伤口愈合

a)在正常的幼小大鼠中赐诺杀对激光致伤口愈合的影响

将3个月大和大约300g的幼小远系杂交雄性Sprague-Dawley大鼠 在伤口诱发之前24h从肩胛间区除掉毛。将大鼠麻醉并使用CO2激光 器(四次连续的刺激周期，每次在25瓦特的功率、0.5秒的脉冲下，束 斑的直径定在10mm)诱发热灼伤，结果形成2cm2的圆形伤口面积。将 12只大鼠的各组用盐水、柠檬酸(5％)或赐诺杀(0.5％在5％柠檬酸中) 处理。在伤口诱发之后每天在伤口的对面通过2次皮内注射100μl 输送两次，处理5天。

疤形成导致伤口收缩速度暂时下降(Snowden等，Aust.J.Exp. Biol.Med.Sd.60：73-82(1982))。因此，在检测时轻轻地除去疤和轻微 粘连的焦痂，以便使所有的伤口可进行比较并允许精确探测伤口面 积。

在伤口诱发之后连续6天每天测量伤口，此后每48h测量直到出 现伤口完全闭合/上皮重新形成。在立体显微镜下精确探测烧伤的面积 (伤口的最大直径)然后用数字式面积仪测量。愈合终点为伤口完全收 缩出现的时间(表5)。

表5.与盐水和柠檬酸对照相比较，在暴露于热灼伤损伤的大鼠中赐诺 杀(0.5％)对伤口愈合速度的影响。   伤口引发后的天数   伤口尺寸，cm2(组均值±SEM，n＝12)   盐水   柠檬酸   赐诺杀0.5％   1   2.5±0   2.6±0.1   2.6±0.1   2   2.8±0.1   3.1±0.1   1.9±0.1   3   4.1±0.2   4.5±0.2   1.7±0.1   4   4.3±0.1   4.4±0.2   1.4±0.1   5   4.5±0.1   4.8±0.1   1.3±0.1   7   3.4±0.1   3.6±0.2   1.2±0.1   9   2.3±0.3   2.5±0.1   1.0±0.1   11   1.9±0.1   1.5±0.2   0.4±0.1   12   *   *   消除   13   1.1±0.1   0.6±0.2   15   0.4±0.2   0.1±0   16   消除   消除

在伤口诱发2天之后赐诺杀对伤口愈合的影响是显著的，其中赐 诺杀处理的大鼠比盐水和柠檬酸处理处理对照的大鼠伤口小30％。用 赐诺杀处理的大鼠到第12天时显示出伤口完全消除，它比用盐水或柠 檬酸处理的对应物早4天。

这些数据表明赐诺杀的简单水溶液能加快正常的幼小健康大鼠的 伤口愈合。

b)在糖尿病(愈合受损的)的大鼠中赐诺杀对激光致伤口愈合的影响 使用链脲菌素诱导糖尿病

使用链脲菌素(STZ)在3个月大的远系杂交雄性Sprague-Dawley 大鼠中诱导糖尿病。将链脲菌素(75mg/kg)溶于0.1M冷柠檬酸钠缓冲 液(pH 4)中并在冰上保存以避免分解。在24小时的禁食之后，给大鼠 腹膜注射单一剂量的新鲜制备的(冷)STZ(Rakienten等，Cancer Chemotherapy Report 29：73-82(1963))。在2-3天之内这些大鼠中的糖 尿病症状变得明显，其糖尿病病症由尿糖试验确认。当允许有规律的 和严重的高血糖时使用胰岛素治疗使该病症的分解代谢优势获得有规 律的暂缓(Willars等，J.Neurol.Sci. 91：153-164(1989))。给新诱发的 糖尿病大鼠皮下注射一至二次胰岛素(Protophane 2IU/100g)，取决于其 身体健康状况的严重程度(例如几乎不吃或饮水，体重减轻至约115g， 极度不活泼)。将没有改善或其体重减少15％以上的大鼠处死。

在伤口诱导之前24h，将约200g的糖尿病大鼠除掉肩胛间区的毛。 将大鼠麻醉并使用CO2激光器(四次连续的刺激周期，每次在25瓦特 的功率、0.5秒的脉冲下，束斑的直径定在10mm)诱发热灼伤，结果形 成2cm2的圆形伤口面积。将12只大鼠的各组用盐水或赐诺杀(0.5％ 在5％柠檬酸中)处理。在伤口诱发之后通过直接将100μl的溶液滴到 伤口部位上每天局部地输送两次，处理5天。

在检测时轻轻地除去疤和轻微粘连的焦痂，以便使所有的伤口可 进行比较并允许精确探测伤口面积。如上所述测量伤口(实施例3a)， 直到伤口闭合明显(表6)。

表6.与盐水对照相比较，在暴露于热灼伤损伤的糖尿病大鼠中赐诺杀 (0.5％)对伤口愈合速度的影响。   伤口引发后的天数   伤口尺寸，cm2(组均值，n＝12)   盐水   赐诺杀0.5％   1   2.2±0   2.1±0   2   2.2±0.1   2.1±0.1   3   2.1±0.1   1.5±0.1   4   2.1±0.1   1.6±0.1   5   2.4±0.2   1.9±0.1   6   3±0   2.5±0.2   8   3±0.1   2.1±0.1   10   2.3±0.2   1.2±0.2   12   1.2±0.1   0.6±0.1   13   *   消除   14   0.6±0.1   16   0.2±0.1   17   消除

与盐水对照相比较，用赐诺杀局部处理的糖尿病大鼠在伤口诱发3 天之后显示出伤口愈合改善，这由伤口面积减少得到说明。在赐诺杀 处理的大鼠中伤口尺寸继续收缩，速度更快，结果在第13天伤口消除， 比盐水处理的对照中伤口消除早发生4天。

c)在年老的(愈合受损的)大鼠中赐诺杀对激光致伤口愈合的影响

将24个月大和大约600g的远系杂交雄性Sprague-Dawley大鼠在 伤口诱发之前24h从肩胛间区除掉毛。将大鼠麻醉并使用CO2激光器 (四次连续的刺激周期，每次在25瓦特的功率、0.5秒的脉冲下，束斑 的直径定在10mm)诱发热灼伤，结果形成2cm2的圆形伤口面积。将 12只大鼠的各组用盐水或赐诺杀(0.5％在5％柠檬酸中)处理。在伤口 诱发之后通过直接将100μl的溶液滴到伤口部位上每天局部地输送两 次，处理5天。

在检测时轻轻地除去疤和轻微粘连的焦痂，以便使所有的伤口可 进行比较并允许精确探测伤口面积。如上所述测量伤口(实施例3a)， 直到伤口闭合明显(表7)。

表7.与盐水对照相比较，在暴露于热灼伤损伤的 老年大鼠中赐诺杀(0.5％)对伤口愈合速度的影响。   伤口引发后的天数   伤口尺寸，cm2(组均值，n＝12)   盐水   赐诺杀0.5％   1   2.3±0   2.4±0   2   2.3±0   2.9±0.1   3   3.5±0.2   2.7±0.2   4   4±0.2   2.3±0.2   5   4.9±0.2   2±0.2   6   5.6±0.2   3.3±0.1   8   4.6±0.1   3.5±0.1   10   3.2±0.1   2.5±0.2   12   2.2±0.1   1.2±0.1   14   1.6±0.1   0.8±0.1   15   *   消除   16   1.2±0   18   0.9±0.1   20   0.5±0.1   21   消除

与盐水对照相比较，用赐诺杀局部处理的老年大鼠在伤口诱发3 天之后显示出伤口愈合改善，这由伤口面积减少得到说明。在赐诺杀 处理的大鼠中伤口尺寸继续收缩直到第6天，在这段时间内在盐水处 理的大鼠中伤口尺寸增加。与盐水对照相比较，用赐诺杀处理的大鼠 伤口尺寸继续收缩，结果在第15天伤口消除，比盐水处理的对照中伤 口消除早发生6天。

赐诺杀能改善伤口愈合的速度，无论是局部施用还是皮内施用。

赐诺杀能改善具有慢性感觉神经缺陷的老年大鼠的伤口愈合。这 样的数据表明赐诺杀可能通过与感觉神经相关的和与感觉神经无关的 机理增强伤口愈合。因此赐诺杀可以使与老龄化相关的慢性溃疡愈 合。

赐诺杀能改善患诱发的糖尿病(感觉神经缺陷的另一种形式)的 大鼠的伤口愈合。该数据还表明赐诺杀的伤口愈合性能可以通过与感 觉神经相关的和与感觉神经无关的两种途径调节。因此赐诺杀可以使 慢性溃疡及其它与糖尿病患者中愈合力差相关的伤口愈合。

赐诺杀能改善感觉神经完好的正常的幼小健康大鼠的愈合。这样 的发现表明赐诺杀可能通过与感觉神经无关的机理起作用，或者可能 增强感觉神经的功能。因此赐诺杀可以增强健康人患者如那些有创伤 或进行外科手术的患者的伤口愈合。

实施例3的结果表明赐诺杀可能通过许多机理刺激伤口愈合，并 将在愈合受损的人和正常人中都有效。

与健康幼小大鼠相比较(表5)，糖尿病和老年大鼠通常在任何对创 伤的有效响应之前显示出延迟期(表6 & 7)。这种延迟期归因于糖尿病 大鼠(Gibran等，J.Surg.Res.108：122：128(2002))和老年大鼠 (Khalil & Helme，J.Gerontol.Biol.Sd.51A(5)：B354-B361(1996))的传 入感觉神经元的活力全面衰退，在伤口愈合的炎症阶段期间很明显。 赐诺杀能在糖尿病大鼠中产生伤口愈合效果，这可能是由于刺激了局 部传入感觉神经或者利用了与传入感觉神经激活无关的机理。

在感觉神经完好的对照动物中，赐诺杀的效果更显著(表5)。该 效果在早期炎症阶段(2-5天)、增生期的初期(2-6天)期间特别明显，在 增生期的晚期(6-8天)和重塑阶段(9-12天)期间有进一步的正效应。

赐诺杀还似乎在伤口修复的重塑阶段期间(其涉及细胞浸渗和增 生)有效果。在此阶段期间真皮通过产生胶原蛋白和基质蛋白对创伤 作出反应，导致伤口收缩和消除。因此赐诺杀可能对影响细胞浸渗和 激活的介质如细胞因子、趋化因子及其它细胞信号体有影响，或者可 能直接增强伤口部位基质的产生和皮肤的重塑。

实施例3表明赐诺杀在整个愈合的3阶段期间能改善伤口的愈 合。实施例3的数据证实了实施例1和2得到的结果：赐诺杀有助于 外科手术或烧伤导致的伤口的愈合。赐诺杀能增强二种伤口中的伤口 愈合。

                        实施例4

使用神经性炎症的泡模型对赐诺杀在增强大鼠的伤口愈合中的作用方 式进行研究

a)赐诺杀的剂量对血管流量的影响

采用公认的方法评价神经性炎症反应(Khalil & Helme，Brain Res. 527：292-298(1990))。用戊巴比妥钠(60mg/kg皮下注射)在远系杂交雄 性Sprague-Dawley大鼠中诱导麻醉。通过追加注射15mg/kg维持全 身麻醉。已经证明这种麻醉方法不会改变外周微脉管系统中的基础血 管舒张反应(Khalil & Helme，Brain Res.500：256-262(1989))。左侧颈 静脉插入聚乙烯导管用于肝素/盐水溶液或药物的静脉给药。体温维持 在37℃。在试验结束时，通过巴比妥酸盐的过量用药将动物处死。

采用-40kPa的真空压力经加热至40℃的金属排气罩壳(suction cap)施加30分钟在麻醉的大鼠的后爪中央部位诱导出泡。一旦泡形 成，除去表皮(表面上皮)并将有入口和出口端的有机玻璃盒固定在泡的 基底上。在泡表面之上灌注林格氏溶液(Ringer′s solution)并通过蠕 动泵以4ml/小时维持，以建立基线测量。通过激光多普勒流量计经紧 挨泡基底上方放置的探针来监测随时间的相对血流量，并在图表记录 仪上连续监测相对血流量(伏特)。

将赐诺杀在5％的林格氏溶液中的柠檬酸中稀释，并在泡基底上灌 注达30分钟。

表8.与林格氏溶液相比较，不同浓度的赐诺杀对经过泡基底的血流量 的影响。  赐诺杀的浓度  0.05％  0.5％   5％  曲线下面积cm2  (均值±SEM，n＝6)  32(±5)  113.6(±9.4)   62.4(±4.8)

根据响应的高度和响应的持续时间两者，以0.5％的浓度穿过泡伤 口灌注的赐诺杀对血管流量有最大的影响。0.05％赐诺杀的溶液对血 流量有正效应，尽管响应的强度与0.5％赐诺杀相比降低。5％浓度的 赐诺杀产生中等响应，与0.5％赐诺杀得到的响应相比，峰的持续时间 和强度降低。由0.5％赐诺杀观察到的维持的响应强度暗示存在与降 血钙素基因相关肽(CGRP)神经途径相互作用，而由更高浓度赐诺杀观 察到的减敏现象往往与P物质介导的途径相关。这些数据表明赐诺杀 对血管流量有正效应，这是伤口愈合的必要条件。这种作用可能是由 于对血管的直接作用或通过从感觉神经释放肽如CGRP和P物质进而 介导血管的响应。

b)感觉神经肽拮抗剂和一氧化氮合酶抑制剂对大鼠对0.5％赐诺杀的 血管响应的影响

采用公认的方法评价神经性炎症反应(Khalil & Helme，Brain Res. 527：292-298(1990))。用戊巴比妥钠(60mg/kg皮下注射)在远系杂交雄 性Sprague-Dawley大鼠中诱导麻醉。通过追加注射15mg/kg维持全 身麻醉。已经证明这种麻醉方法不会改变外周微脉管系统中的基础血 管舒张反应(Khalil & Helme，Brain Res.500：256-262(1989))。左侧颈 静脉插入聚乙烯管导管用于肝素/盐水溶液或药物的静脉给药。体温维 持在37℃。在试验结束时，通过巴比妥酸盐的过量用药将动物处死。

采用-40kPa的真空压力经加热至40℃的金属排气罩壳施加30分 钟在麻醉的大鼠的后爪中央部位诱导出泡。一旦泡形成，除去表皮(表 面上皮)并将有入口和出口端的有机玻璃盒固定在泡基底上。在泡表面 之上灌注林格氏溶液并通过蠕动泵以4ml/小时维持以建立基线测量。 通过激光多普勒流量计经紧邻泡基底上方放置的探针来监测随时间的 相对血流量，并在图表记录仪上连续监测相对血流量(伏特)。

将赐诺杀在5％的林格氏溶液中的柠檬酸中稀释，并在泡基底上灌 注达30分钟。每只大鼠的一个脚垫用0.5％赐诺杀灌注，而每只大 鼠的另一个脚垫首先用拮抗剂或抑制剂灌注10分钟，之后用0.5％赐 诺杀共同灌注30分钟。CGRP8-37(CGRP拮抗剂；Auspep，VIC， Australia)以1μM的浓度灌注，N-硝基L-精氨酸甲酯(L-NAME，一 种内皮一氧化氮合酶抑制剂；Cayman Chemical Co.MI，USA)以100 μM的浓度灌注，spantide II(P物质拮抗剂II；Auspep，VIC， Australia)以10μM的浓度灌注。

表9.感觉神经肽拮抗剂和eNOS抑制剂对大鼠脚垫泡对灌注0.5％赐诺 杀的血管响应的影响，以及效应体对赐诺杀活性的相对贡献。   灌注物   效应体   曲线下面积表示的   血流量(cm2)均   值±SEM，n＝6   效应体对赐诺杀的   血管响应的贡献％   对照   无   113.6(±9.4)   100   L-NAME   eNOS   87.2(±5.2)   24   CGRP8-37   CGRP   83.2(±6.5)   27   Spantide   P物质   74.9(±3.6)   34

在存在CGRP和SP肽拮抗剂和NOS抑制剂的情况下响应于赐诺 杀刺激的血流量下降(表9)。这些数据表明赐诺杀对血管血流量的作 用通过CGRP、P物质和一氧化氮途径介导。CGRP、P物质和eNO 对赐诺杀的作用的贡献分别为27％、34％和24％(表9)。

在CGRP拮抗剂的存在下血管的响应曲线在整个灌注期间有相似 的高度，表明赐诺杀的作用通过CGRP的调节随时间是恒定的。在P 物质拮抗剂(spantide)或eNOS抑制剂(L-NAME)的存在下的血管响应 曲线显示响应随时间降低。这暗示P物质和eNOS与在响应的后期赐 诺杀作用的调节有较大的关联。

这些数据共同表明赐诺杀对血管流量的作用是通过感觉神经肽P 物质和CGRP并通过内皮一氧化氮来介导的。在该过程中eNO的介 入表明赐诺杀可能直接作用于血管的内皮，以及通过伤口中血管的感 觉神经的神经支配起作用。而且，赐诺杀的作用持续时间长并且在响 应的不同阶段通过不同效应体介导。这样的发现可以解释热损伤模型 中赐诺杀处理的大鼠和对照大鼠之间伤口愈合特性(实施例3)，特别是 愈合受损的(老年或糖尿病)大鼠伤口的早期消除的差异。神经肽抑制 剂和拮抗剂抑制赐诺杀对血管流量的作用的能力表明，赐诺杀的早期 伤口愈合性能是通过感觉神经途径起作用的，并与神经肽的联合有 关。这种活性将增强伤口愈合过程的早期炎症阶段(其很大程度上由 感觉神经活性引发)。(Steinhoff等人，Arch.Dermatol.139：1479-1488 (2003))。实际上，实施例3的数据表明：在正常的幼小大鼠和愈合受 损的大鼠中，赐诺杀对伤口收缩的作用在愈合的头5天期间是显著的。

c)在急性炎症的早期和晚期赐诺杀对血管响应的影响。

采用公认的方法评价神经性炎症反应(Khalil & Helme，Brain Res. 527：292-298(1990))。用戊巴比妥钠(60mg/kg皮下注射)在远系杂交雄 性Sprague-Dawley大鼠中诱导麻醉。通过追加注射15mg/kg维持全 身麻醉。已经证明这种麻醉方法不会改变外周微脉管系统中的基础血 管舒张反应(Khalil & Helme，Brain Res.500：256-262(1989))。左侧颈 静脉插入聚乙烯管导管用于肝素/盐水溶液或药物的静脉给药。体温维 持在37℃。在试验结束时，通过巴比妥酸盐的过量用药将动物处死。

采用-40kPa的真空压力经加热至40℃的金属排气罩壳施加30分 钟在麻醉的大鼠后爪中央部位诱导出泡。一旦泡形成，除去表皮(表面 上皮)并将有入口和出口端的有机玻璃盒固定在泡基底上。在泡表面之 上灌注林格氏溶液并通过蠕动泵以4ml/小时维持以建立基线测量。通 过激光多普勒流量计经紧邻泡基底上方放置的探针来监测随时间的相 对血流量，并在图表记录仪上连续监测相对血流量(伏特)。

将赐诺杀(0.5％)在5％的林格氏溶液中的柠檬酸中稀释，并在泡基 底上灌注达30分钟。在每只大鼠的一个脚垫上的泡立即用赐诺杀灌 注(早期)，而另一个脚垫上的泡在泡诱导5小时之后灌注(晚期)。

表10.在急性炎症的早期(在创伤之后立即)和晚期(创伤后5h)赐诺杀 0.5％对脚垫泡的血管响应的影响  炎症的阶段   早期   晚期  曲线下面积(cm2)  均值±SEM，n＝6   113.6(±9.4)   95.5(±9.3)

神经性效应体主要与炎症性响应的早期有关，而炎症响应的晚期 与免疫系统的成分如嗜中性白细胞和单核细胞有关。赐诺杀在炎症响 应的早期和晚期几乎有同等的效力(表10)表明：赐诺杀不仅作用于炎 症的神经性介质(还如实施例4b所示)，而且对炎症响应的免疫介质有 显著的作用。该结果明显是由于在伤口愈合的增生和重塑阶段(6-12 天)细胞的补充和激活中免疫介质的介入。如前面实施例3中所提到 的，赐诺杀对伤口愈合的影响可见于炎症、增生和重塑阶段中。本实 施例的数据提供了证据：赐诺杀刺激神经性和免疫学两种途径来调节 其伤口愈合效应。