紫茎泽兰提取物在杀灭猪蛔虫卵中的应用

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紫茎泽兰提取物在杀灭猪蛔虫卵中的应用
申请号	CN201310007596.3	申请日	2013-03-07	公开(公告)号	CN103098826A	公开(公告)日	2013-05-15
申请人	云南农业大学;			发明人	邹丰才; 段纲; 杨建发; 吕瑞青; 袁飞洲;
摘要	本发明公开了属于猪蛔虫卵的杀灭技术领域的一种紫茎泽兰提取物在杀灭猪蛔虫卵中的应用。本发明通过改良提取工艺，提取紫茎泽兰中具有杀虫活性的有效成分，将提取物作用于新鲜的猪蛔虫卵，通过显微镜观察，对虫卵的孵化率进行统计，结果发现，紫茎泽兰提取液对猪蛔虫卵具有很好的杀灭效果。
权利要求	1.紫茎泽兰提取物的应用，其特征在于：紫茎泽兰提取物用于杀灭猪蛔虫卵，其中，紫茎泽兰杀虫活性物质的提取工艺如下：第一步：称取一定量的紫茎泽兰粉末，按照每1g紫茎泽兰粉末需加入95%的乙醇10ml的比例关系加入95%的乙醇进行有效成分的浸提，在浸提过程中要适当搅拌并于40℃微热处理48h，以使有效成分充分溶解；第二步：依次使用60目、200目网筛将浸提液过滤到灭菌广口瓶中，再将得到的滤液经布氏漏斗过滤，滤渣用95%的乙醇再次浸提、过滤，如此重复3次，再将每次过滤后的滤液混合；第三步：将滤液采用旋转蒸发仪70℃减压旋蒸回收乙醇，直至提取物浓缩成黑褐色膏状物且质量不再变化为止；第四步：将得到的膏状浓缩物用电子天秤准确称重，然后用灭菌水将膏状浓缩物配成 1g/mL的母液，配好的母液密封、避光，于4℃保存备用；取紫茎泽兰提取物母液，用生理盐水，稀释成浓度在0.5%以上的溶液，用于杀灭猪蛔虫卵。 2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述紫茎泽兰粉末采用如下方法制备：将整株紫茎泽兰用清水洗净，凉去表面水分，再将整株紫茎泽兰剪短，放置于60℃恒温干燥箱中至恒重，用粉碎机粉碎后过40目筛，备用。 3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：用于杀灭猪蛔虫卵的紫茎泽兰提取液浓度在1%以上。 4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：滤渣浸提、过滤的工艺与处理紫茎泽兰粉末的工艺相同。
说明书全文	紫茎泽兰提取物在杀灭猪蛔虫卵中的应用技术领域 [0001] 本发明属于猪蛔虫卵的杀灭技术领域，特别涉及一种紫茎泽兰提取物在杀灭猪蛔虫卵中的应用。背景技术 [0002] 猪蛔虫病是由猪蛔虫引起的一种肠道线虫病，主要感染仔猪，分布广泛，感染普遍，对养猪业的危害极为严重；特别是在卫生条件不好的猪场或营养不良的猪群中，感染率很高，通常可达70％以上。感染蛔虫病的仔猪，发育停滞，甚至引起死亡。 [0003] 猪蛔虫病广泛流行的主要原因，是虫卵对不良的外界环境影响和化学药品作用的抵抗力非常强大，猪蛔虫卵有四层卵膜。常规的化学消毒剂，对虫卵几乎没有杀灭效果。至今为止还没有人进行用植物杀灭猪蛔虫虫卵的研究。 [0004] 紫茎泽兰又名破坏草、解放草，为菊科泽兰属植物，因其茎和叶柄呈紫色，故名紫茎泽兰。原产中美洲，现已蔓延到世界热带、亚热带30多个国家和地区。20世纪40年代，紫茎泽兰从缅甸、印度和越南等国边境首先传入我国云南，迅速遍及西藏、贵州、广西、四川、湖北等省区，特别是云南100多个县市都有生长。有统计表明，仅云南省的发生面积就达到2000多万公顷，其中在云南的腾冲、保山、弥渡、牟定、禄劝、富源一线以南地区最多，并仍在以每年几十公里的速度，随西南风向东和北传播扩散。对我国生态环境、畜牧业等造成了严重影响，综合整治并加以利用紫茎泽兰，可以达到变害为宝的目的。 [0005] 紫茎泽兰在自然生态环境中竞争能力极强，一旦侵入某地，便会消耗土壤大量的养分，抢占其它植物的生存空间，严重影响农作物、牧草及其它草本植物的生长，破坏生物的多样性。紫茎泽兰对人和家畜等有毒害作用，可以引起人皮肤的红肿，甚至出现接触性皮炎。紫茎泽兰的枝叶有毒，牛拒食该草，对马有明显的毒害性。用其垫羊圈，可引起羊蹄腐烂。家畜误食或吸入紫茎泽兰的花粉后，能引起腹泻、气喘、鼻腔糜烂流脓等病症，特别是在牧区，给养殖业带来了严重的危害。在国家环保局公布的首批入侵国内的16种外来物种黑名单中，紫茎泽兰名列第一，被称为“生物癌症”。 [0006] 正因为紫茎泽兰的极大危害，我国政府每年拿出不少的经费，采取各种方法对紫茎泽兰进行防治，并加以利用。其相关的研究报道，国外较少，我国对其的利用主要是将紫茎泽兰发酵产沼气作为燃料、压制成刨花板、作为有机肥料、脱毒后作为饲料等等。 [0007] 已有实验表明，紫茎泽兰提取物对植物性害虫具有较好的毒杀或抑制活性作用。研究表明，紫茎泽兰具杀虫生物活性的物质为一种三萜类化合物，化学名为3β,5α-3-羟基-雄甾-16-内型[16,17-b]-1’-甲基吲哚，分子式为C26H35NO，分子量为377，被命名为“紫茎泽兰素A”。 [0008] 紫茎泽兰素A对植物性害虫具有较好的毒杀或抑制活性作用，那么其对动物病原体是否也具有类似的效应？这正是本研究发明需要解决的问题。发明内容 [0009] 对于猪蛔虫病的防治，多是采用化学药物。从控制环境卫生角度入手，选用高效的环境杀虫剂替代现常用的化学药物防治猪蛔虫病，可避免因化药而带来的耐药性产生、肉产品药物残留等问题。 [0010] 本发明通过改良提取工艺，提取紫茎泽兰中具有杀虫活性的有效成分，将提取物作用于新鲜的猪蛔虫卵，通过显微镜观察，对虫卵的孵化率进行统计，结果发现，紫茎泽兰提取液对猪蛔虫卵具有很好的杀灭效果。 [0011] 本发明提供紫茎泽兰提取物在杀灭猪蛔虫卵中的应用。 [0012] 其中，紫茎泽兰杀虫活性物质的提取工艺如下： [0013] 第一步：称取一定量的紫茎泽兰粉末，按照每1g紫茎泽兰粉末需加入95%的乙醇10ml的比例关系加入95%的乙醇进行有效成分的浸提，在浸提过程中要适当搅拌并于40℃微热处理48h，以使有效成分充分溶解。 [0014] 第二步：依次使用60目、200目网筛将浸提液过滤到灭菌广口瓶中，再将得到的滤液经布氏漏斗过滤，滤渣用95%的乙醇再次浸提、过滤，如此重复3次，再将每次过滤后的滤液混合。 [0015] 第三步：将滤液采用旋转蒸发仪70℃减压旋蒸回收乙醇，直至提取物浓缩成黑褐色膏状物且质量不再变化为止。 [0016] 第四步：将得到的膏状浓缩物用电子天秤准确称重，然后用灭菌水将膏状浓缩物配成1g/mL的母液，配好的母液密封、避光，于4℃保存备用。 [0017] 取紫茎泽兰提取物母液，用生理盐水，稀释成浓度在0.5%以上的溶液，用于杀灭猪蛔虫卵。 [0018] 所述紫茎泽兰粉末采用如下方法制备：紫茎泽兰采自野外，将整株（包含根茎叶）紫茎泽兰用清水洗净，凉去表面水分，再将整株（包含根茎叶）紫茎泽兰剪短，放置于60℃恒温干燥箱中至恒重，用粉碎机粉碎后过40目筛，备用。 [0019] 上述紫茎泽兰杀虫活性物质的提取工艺中，滤渣浸提、过滤工艺与处理紫茎泽兰粉末的工艺相同。 [0020] 本发明的有益效果为： [0021] 由于紫茎泽兰的有效成分属脂溶性化合物，其具有明显的抑菌效果，本发明采用乙醇浸提，相比水溶液更容易获得有效成分，因此提取的紫茎泽兰液抑菌效果更佳。 [0022] 本发明采用的是紫茎泽兰根茎叶整株进行提取，能够获得较为全面的有效成分，将整株全部提取，以便能更好的将紫茎泽兰根除加以利用。 [0023] 本发明的价值在于，用紫茎泽兰作用于寄生虫发育（寄生虫生活史）的体外阶段，即作用于动物排出的虫卵阶段，这对未来把紫茎泽兰研发成为环境（圈舍）杀虫剂，具有重要的价值效益。 [0024] 本发明成果的应用前景较好，即可以将紫茎泽兰研发成为环境（圈舍）杀虫剂，能产生显著的经济效益和社会效益，同时，避免了因化学药物使用而造成的问题，这为猪蛔虫病的防治提供了新的思路。附图说明 [0025] 图1是猪蛔虫的发育示意图，本发明是针对“排出虫卵进入环境”阶段。 [0026] 图中标号代表的含义: [0027] 1-猪蛔虫卵随粪便排出； [0028] 2-排出的新鲜的蛔虫卵（不具有感染性）； [0029] 3-发育成感染性的蛔虫卵（卵内含有第二期幼虫）； [0030] 4-虫卵被蚯蚓吞食； [0031] 5-猪吞食了感染性虫卵/猪也可能吞食了含有虫卵的蚯蚓； [0032] 6-感染性虫卵进入消化道，在胃液等的作用下，卵壳破了，幼虫进入小肠，随着血液循环依次到达肝脏、肺脏； [0033] 7-进入肝脏的幼虫（已经发育成了第三期幼虫）； [0034] 8-进入肺脏的幼虫（已经发育成了第四期幼虫）； [0035] 9-幼虫再随着支气管、气管进入口腔，再次进入到小肠，发育成成虫，成虫（雌虫）产卵。具体实施方式 [0036] 下面的实施例可以使本专业技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。 [0037] 本实施例提供紫茎泽兰提取物在杀灭猪蛔虫卵中的应用。 [0038] 其中，紫茎泽兰杀虫活性物质的提取工艺如下： [0039] 第一步：称取一定量的紫茎泽兰粉末，按照每1g紫茎泽兰粉末需加入95%的乙醇10ml的比例关系加入95%的乙醇进行有效成分的浸提，在浸提过程中要适当搅拌并于40℃微热处理48h，以使有效成分充分溶解。 [0040] 第二步：依次使用60目、200目网筛将浸提液过滤到灭菌广口瓶中，再将得到的滤液经布氏漏斗过滤，滤渣用95%的乙醇再次浸提、过滤，且浸提、过滤工艺与处理紫茎泽兰粉末的工艺相同，即按照每1g滤渣需加入95%的乙醇10ml的比例关系加入95%的乙醇进行有效成分的浸提，在浸提过程中要适当搅拌并于40℃微热处理48h，以使有效成分充分溶解，如此重复3次，再将每次过滤后的滤液混合。 [0041] 第三步：将滤液采用旋转蒸发仪70℃减压旋蒸回收乙醇，直至提取物浓缩成黑褐色膏状物且质量不再变化为止。 [0042] 第四步：将得到的膏状浓缩物用电子天秤准确称重，然后用灭菌水将膏状浓缩物配成1g/mL的母液，配好的母液密封、避光，于4℃保存备用。 [0043] 取紫茎泽兰提取物母液，用生理盐水，稀释，用于杀灭猪蛔虫卵。 [0044] 所述紫茎泽兰粉末采用如下方法制备：紫茎泽兰采自野外，将整株（包含根茎叶）紫茎泽兰用清水洗净，凉去表面水分，再将整株（包含根茎叶）紫茎泽兰剪短，放置于60℃恒温干燥箱中至恒重，用粉碎机粉碎后过40目筛，备用。 [0045] 效果验证： [0046] 猪虫卵：从屠宰厂采集猪蛔虫30余条，鉴别雌雄后，对雌虫进行剖解，取出其子宫，剪碎，加入适量生理盐水，4℃保存，备用。 [0047] 紫茎泽兰活性物质对蛔虫卵的杀灭 [0048] 第一步：取紫茎泽兰提取物母液，用生理盐水，分别稀释成终浓度0.1%，0.3%，0.5%，1%和1.5%，分别将不同浓度的稀释液2mL移入不同的培养皿中，每个培养皿中再加入约10万个新鲜的蛔虫卵囊。对照组的培养皿中不加紫茎泽兰提取物母液，空白对照加入适量的蒸馏水，阳性对照加入适量3%的NaOH。每个浓度的实验组和对照组均做三个平行（共 53+3+3=21个培养皿）。 [0049] 第二步：将上述21个培养皿放入28℃温箱中孵化，并分别在孵化的第10、12、14、16、18天（猪蛔虫卵在28℃中孵化，一般在第13天就能孵成感染性虫卵，即此时虫卵中含有一卷曲的幼虫），从每个培养皿中取摇匀后的孵化液10μL，置于载玻片上，在16×10倍显微镜下观察，看虫卵是否孵化，若卵内无幼虫，则表示虫卵没有孵化（其发育受到了抑制或被杀灭），若卵内有幼虫，则表示虫卵已孵化。计数所取的10μL孵化液内的全部虫卵，分别统计没有孵化和已孵化的虫卵数量。 [0050] 孵化率=（所计数孵化的虫卵数/所计数虫卵的总数）100% [0051] 结果与分析 [0052] 采用不同紫茎泽兰浓度作用猪蛔虫卵后，其孵化率与对照组比，均有不同程度的减少，即紫茎泽兰液浓度越高，虫卵孵化率则越低。记录结果如下： [0053] [0054] 按照上述实验结果，0.5%及以上浓度均可以作为喷洒浓度，根据猪场实际的感染情况，喷洒次数（频率）有所差别，一般建议在猪入圈舍前，或该圈舍的猪出栏/转栏后进行喷洒，可以考虑喷洒2-3，每次间隔2-3天，喷洒后需要对圈舍进行冲洗。 [0055] 可以起到较好的杀虫效果的紫茎泽兰提取液浓度范围在1%及以上。 [0056] 以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。