2-辛酮在制备抑制线虫活性药物中的应用

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2-辛酮在制备抑制线虫活性药物中的应用
申请号	CN201710699543.0	申请日	2017-08-16	公开(公告)号	CN107467019B	公开(公告)日	2020-06-02
申请人	华中农业大学; 国家海洋局第三海洋研究所;			发明人	张吉斌; 邵宗泽; 翟义乐; 李光玉; 程万里; 黄典; 蔡珉敏; 郑龙玉; 孙风芹; 喻子牛;
摘要	本发明公开了2‑辛酮在制备抑制线虫活性药物中的应用。2‑辛酮对南方根结线虫J2幼虫具有直接触杀作用，其LC50=23.714 mg/L，具有较高的直接触杀活性。此外，200mg/L的2辛酮在第10天对根结线虫卵孵化的直接相对抑制率在28.03%，1000mg/L的2‑辛酮对根结线虫卵孵化的熏蒸相对抑制率在26.19%，表现出一定的卵孵化抑制作用。同时2‑辛酮对根结线虫具有较强的趋避作用。2‑辛酮对根结线虫的活性应用对于作物根结线虫病的防治以及线虫新型防治策略的发展具有重大意义和应用前景。
权利要求	1.2-辛酮在制备线虫卵触杀剂或熏蒸剂中的应用，所述的线虫为南方根结线虫，北方根结线虫或松材线虫。
说明书全文	2-辛酮在制备抑制线虫活性药物中的应用技术领域 [0001] 本发明属于农业微生物学技术领域，具体涉及2-辛酮在制备抑制线虫活性药物中的应用。背景技术 [0002] 线虫能够寄生于包括农作物和林业在内的许多植物，全世界因线虫危害和因此引起的复合病害给农业生产造成的损失据估计每年高达1500亿美元。其中以根结线虫的危害最为严重，在世界范围内广泛分布，根结线虫可造成植物根系的伤口，有利病菌侵染而加重病害，使得线虫与真菌病害同时发生。植物根结线虫每年引起粮食与纤维作物的损失约为12％，根结线虫病一般造成蔬菜减产20％～30％，严重的甚至绝收。 [0003] 对根结线虫的防治，目前主要有以下几种方法：(1)农业防治：包括水旱轮作、嫁接、改良土壤、调节播种期、种植抗病品种等；(2)物理防治：主要有夏季进行土壤热处理和种子汰选，另外还包括水淹两周以上、射线或超声波处理等；(3)化学防治：施用杀线虫剂仍然是目前防治根结线虫病的主要方法，比如溴甲烷、滴滴混剂、二溴甲烷和灭线磷、涕灭威等。化学药剂虽然效果好，但是带来的负面影响极大，表现在成本高昂，对人畜剧毒，破坏土壤微生态环境，国家逐步会禁止化学药剂的使用；(4)生物防治：生物防治是近年来发展较迅速的一种防治方法。根结线虫的天敌主要有真菌、细菌、病毒、立克氏体、放线菌、捕食性线虫、涡虫和原生动物等，其中对细菌和真菌的生物防治作用研究较多。 [0004] 本发明所述的挥发性物质2-辛酮，是第一次报道对南方根结线虫幼虫具有直接触杀活性，对卵具有直接接触和熏蒸抑制活性以及对J2幼虫具有趋避活性。本发明所使用的挥发性物质2-辛酮对根结线虫的活性研究对于作物根结线虫病的防治以及线虫新型防治策略的发展具有重大意义和应用前景。发明内容 [0005] 本发明的目的是提供2-辛酮在制备抑制线虫活性药物中的应用，包括利用2-辛酮制备成线虫触杀剂或线虫趋避剂，或是线虫卵触杀剂或熏蒸剂。 [0006] 为了达到以上目的，本发明采用以下技术措施： [0007] 2-辛酮在制备抑制线虫活性药物中的应用： [0008] 1)2-辛酮对线虫J2幼虫的作用 [0009] 利用2-辛酮检测其对线虫J2幼虫的直接触杀活性，发现2-辛酮对线虫J2具有显著的直接触杀作用；利用不可拆卸96孔板检测其对线虫J2幼虫的熏杀活性，发现2-辛酮对线虫J2没有熏蒸杀虫活性。 [0010] 2)2-辛酮对线虫卵孵化的作用 [0011] 利用2-辛酮检测其对线虫卵孵化的直接接触抑制活性和在可拆卸96孔板中检测其对线虫卵的熏蒸抑制活性，发现这挥发性物质2-辛酮从直接接触和熏蒸方面均对线虫的卵表现出一定的抑制能力。 [0012] 3)2-辛酮对线虫的趋化性 [0013] 利用2-辛酮检测线虫的趋化性，发现线虫对2-辛酮的各个浓度均表现出趋避作用。 [0014] 所述的线虫为：南方根结线虫(Meloidogyne incognita)，秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans，C.elegans)，北方根结线虫(Meloidogyne hapla)或松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)。 [0015] 与现有技术相比，本发明具有以下特点： [0016] 1.挥发性物质2-辛酮可以通过直接接触方式对线虫J2幼虫进行毒杀和抑制作用，对线虫卵孵化的直接接触抑制活性和熏蒸抑制活性。 [0017] 2.挥发性物质2-辛酮可以趋避线虫J2幼虫。 [0018] 3.挥发性物质2-辛酮对线虫的活性作用方式多样，同时具有对线虫J2幼虫触杀，对卵接触和熏蒸孵化抑制，对J2幼虫趋避的活性。附图说明 [0019] 图1为测定南方根结线虫对挥发性物质趋化性的设计图。 [0020] 图2为南方根结线虫对挥发性物质2-辛酮的趋化性结果。具体实施方式 [0021] 下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为报道的微生物学常规操作方法。本发明实施例以2-辛酮对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)的抑制效果为例进行说明，秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans，C.elegans)，北方根结线虫(M.hapla)或松材线虫(B.xylophilus)均能达到与本发明实施例相同的抑制效果，因篇幅问题，不再赘述。 [0022] 实施例1： [0023] 挥发性物质2-辛酮对根结线虫J2幼虫的作用 [0024] 在可拆卸96孔板中加入200μL不同浓度的2-辛酮，测定对根结线虫J2幼虫的直接触杀活性，每孔加入50头根结线虫J2幼虫，然后用封口膜密封，结果如表1所示，发现挥发性物质2-辛酮的LC50/2d为22.712mg/L，对根结线虫J2展现出了显著的直接触杀作用；在不可拆卸96孔板中加入200μL不同浓度的2-辛酮，测定对根结线虫J2幼虫的熏杀活性，在药剂添加孔的周围四角各加入50头根结线虫J2幼虫和200μL无菌水，然后用封口膜密封，每个96孔板加入一个挥发性物质，结果如表2所示，发现即使2000mg/L的挥发性物质2-辛酮对根结线虫J2也没有熏蒸杀虫活性。 [0025] 表1挥发性物质2-辛酮对根结线虫J2的直接触杀活性 [0026] [0027] 表2挥发性物质2-辛酮对根结线虫J2的熏蒸杀虫活性 [0028] [0029] 注：“—”表示不能计算 [0030] 实施例2： [0031] 挥发性物质2-辛酮对根结线虫卵孵化的作用 [0032] 在可拆卸96孔板中加入孔板中加入200μL浓度为1000mg/L的2-辛酮，测定对根结线虫卵的熏蒸抑制活性，在200μL浓度分别为50和200mg/L的2-辛酮，测定对根结线虫卵的直接接触抑制活性，每孔中加入150个根结线虫的卵，然后用封口膜密封，根据结果(表3)发现挥发性物质2-辛酮在测定的浓度条件下对根结线虫的卵孵化有抑制作用，其中从第4天开始，200mg/L的2-辛酮对根结线虫卵孵化具有较为显著的抑制作用，在第10天的相对抑制率为28.03％。在不可拆卸96药剂添加孔的周围四角各加入150个根结线虫的卵和200μL无菌水，然后用封口膜密封，每个96孔板加入一个挥发性物质，结果如表4所示，发现挥发性物质2-辛酮对根结线虫的卵孵化表现出一定的熏蒸抑制能力，从第8天开始表现出一定的显著性，在第十天的相对抑制率为26.19％。 [0033] 表3挥发性物质2-辛酮对根结线虫直接接触卵孵化抑制活性 [0034] [0035] [0036] 表4 1000mg/L的挥发性物质2-辛酮对根结线虫卵孵化熏蒸抑制活性[0037] [0038] 实施例3： [0039] 挥发性物质2-辛酮对根结线虫的趋化性 [0040] 1)向35mm的平板(图1)倒入2％的琼脂，冷却后在D区加入150头根结线虫； [0041] 2)在Test区域放入提前浸泡10000、1000、100、10、1mg/L的各个处理液的5mm滤纸圆片，在对照区域放入浸泡相应吐温-20和甲醇浓度的5mm滤纸圆片对照组； [0042] 3)立即用封口膜密封好，放在20℃保温箱中，在8小时候在解剖显微镜下计数A区和B区的线虫数目； [0043] 4)根据A区和B区的线虫数目，计算该物质对线虫的趋化指数(C.I.)。 [0044] 公式如下： [0045] 如果C.I.∈(0,1]，说明被检测物质对线虫具有吸引作用；如果if C.I.∈[-1,0)，说明线虫对被检测物质具有趋避作用；如果C.I.＝0，说明被检测物质对线虫没有趋避性。 [0046] 根据结果(表5)所示，挥发性物质2-辛酮对根结线虫在各个浓度范围内的C.I.值均小于0，说明2-辛酮对南方根结线虫具有趋避活性，1-1000mg/L各个浓度间2-辛酮趋避能力差异不显著，1-1000mg/L各个浓度与10000mg/L 2-辛酮趋避能力差异显著，而且随着2-辛酮浓度的提高，C.I.值逐渐降低，趋避活性逐渐增强(图2)。 [0047] 表5根结线虫对挥发性物质2-辛酮的趋化性 [0048]