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首页 / 专利库 / 杀卵活性 / 前沟藻属的一种或多种微藻的细胞提取物用于对植物和培养种子的真菌、卵菌和/或致病细菌的杀真菌和/或杀细菌活性的用途

前沟藻属的一种或多种微藻的细胞提取物用于对植物和培养种子的真菌、卵菌和/或致病细菌的杀真菌和/或杀细菌活性的用途

申请号 CN201780048285.8 申请日 2017-06-08 公开(公告)号 CN109843068B 公开(公告)日 2022-11-15
申请人 免疫生物防治法国公司; 发明人 O.西鲍尔德德拉克劳埃; Y.托马斯;
摘要 本发明涉及前沟藻属(Amphidinium)的一种或多种微藻的细胞提取物及其用于对植物和培养种子的真菌、卵菌和/或致病细菌的杀真菌和/或杀细菌活性的用途。
权利要求

1.一种用于控制作物和种子的致病真菌的方法,所述方法包括将强壮前沟藻(Amphidinium carterae)的细胞提取物应用于作物和/或使用其涂覆所述种子,其中所述作物和种子的致病真菌是镰刀菌属(Fusarium)、轴霜霉属(Plasmopara)、葡萄孢属(Botrytis)、色二孢菌属(Diplodia)、葡萄座腔菌属(Neofusicoccum)、Zymoseptoria、丝核菌属(Rhizoctonia)、微座孢属(Microdochium)、疫霉属(Phytophthora)、黑星菌属(Venturia)和炭疽菌属(Colletotrichum)的对作物和种子致病性的真菌。

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述对作物和种子致病性的真菌选自下组:禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、葡萄霜霉菌(Plasmopara viticola)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、Diplodia seriata、平截色二孢(Diplodia mutila)、小新壳梭孢(Neofusicoccum parvum)、Zymoseptoria tritici、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、Microdochium majus、马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)、香蕉尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)、苹果黑星菌(Venturia inaequalis)、果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)和西瓜炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)。

3.一种用于控制作物和种子的致病真菌的方法,所述方法包括将强壮前沟藻(Amphidinium carterae)的细胞提取物应用于作物和/或使用其涂覆所述种子,其中所述对作物和种子的致病性的真菌选自葡萄顶枯病菌(Eutypa lata)、Phaeomoniella chlamydospora和Phaeoacremonium aleophylum。

4.一种控制作物和种子的致病真菌的方法,所述方法包括下述步骤:

‑临用时,将强壮前沟藻的细胞提取物与水以1:4至1:800的比例混合,

‑将这种混合物应用于作物和/或使用这种混合物涂覆所述种子,

其中所述作物和种子的致病真菌是镰刀菌属(Fusarium)、轴霜霉属(Plasmopara)、葡萄孢属(Botrytis)、色二孢菌属(Diplodia)、葡萄座腔菌属(Neofusicoccum)、Zymoseptoria、丝核菌属(Rhizoctonia)、微座孢属(Microdochium)、疫霉属(Phytophthora)、黑星菌属(Venturia)和炭疽菌属(Colletotrichum)的对作物和种子致病性的真菌。

5.根据权利要求4所述的方法,其中所述对作物和种子致病性的真菌选自下组:禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、葡萄霜霉菌(Plasmopara viticola)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、Diplodia seriata、平截色二孢(Diplodia mutila)、小新壳梭孢(Neofusicoccum parvum)、Zymoseptoria tritici、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、Microdochium majus、马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)、香蕉尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)、苹果黑星菌(Venturia inaequalis)、果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)和西瓜炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)。

6.一种控制作物和种子的致病真菌的方法,所述方法包括下述步骤:

‑临用时,将强壮前沟藻的细胞提取物与水以1:4至1:800的比例混合,

‑将这种混合物应用于作物和/或使用这种混合物涂覆所述种子,

其中所述对作物和种子的致病性的真菌选自葡萄顶枯病菌(Eutypa  lata)、Phaeomoniella chlamydospora和Phaeoacremonium aleophylum。

7.一种控制作物和种子的致病真菌的方法,所述方法包括下述步骤:

‑以5至500g/L之间的质量浓度用有机或无机溶剂以1:200至1:2的重量比将强壮前沟藻的细胞培养物的冻干物重悬,

‑临用时,与水以1:4至1:800的比例混合,

‑将所获得的所述混合物应用于作物和/或使用这种混合物涂覆所述种子,其中所述作物和种子的致病真菌是镰刀菌属(Fusarium)、轴霜霉属(Plasmopara)、葡萄孢属(Botrytis)、色二孢菌属(Diplodia)、葡萄座腔菌属(Neofusicoccum)、Zymoseptoria、丝核菌属(Rhizoctonia)、微座孢属(Microdochium)、疫霉属(Phytophthora)、黑星菌属(Venturia)和炭疽菌属(Colletotrichum)的对作物和种子致病性的真菌。

8.根据权利要求7所述的方法,其中所述对作物和种子致病性的真菌选自下组:禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、葡萄霜霉菌(Plasmopara viticola)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、Diplodia seriata、平截色二孢(Diplodia mutila)、小新壳梭孢(Neofusicoccum parvum)、Zymoseptoria tritici、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、Microdochium majus、马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)、香蕉尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)、苹果黑星菌(Venturia inaequalis)、果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)和西瓜炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)。

9.一种控制作物和种子的致病真菌的方法,所述方法包括下述步骤:

‑以5至500g/L之间的质量浓度用有机或无机溶剂以1:200至1:2的重量比将强壮前沟藻的细胞培养物的冻干物重悬,

‑临用时,与水以1:4至1:800的比例混合,

‑将所获得的所述混合物应用于作物和/或使用这种混合物涂覆所述种子,其中所述对作物和种子的致病性的真菌选自葡萄顶枯病菌(Eutypa  lata)、Phaeomoniella chlamydospora和Phaeoacremonium aleophylum。

10.根据权利要求7或9所述的方法,其中所述质量浓度为50至400g/L之间。

11.根据权利要求7或9所述的方法,其中所述质量浓度为100至200g/L之间。

说明书全文

前沟藻属的一种或多种微藻的细胞提取物用于对植物和培养

种子的真菌、卵菌和/或致病细菌的杀真菌和/或杀细菌活性

的用途

[0001] 本发明涉及种子的抗真菌和抗细菌剂领域。
[0002] 为了应对世界人口增长,第二次世界大战后的时期出现了“绿色革命”,这是一套关于品种选择、灌溉、肥料和合成农药的现代计划,其目的是控制土壤肥力和病原微生物。因此,这些不同的要素使得在大约四十年的时间内全球食品生产几乎增加了三倍。今天,农业面临的挑战是到2050年养活90亿人口,并在资源越来越有限和限制越来越多的情况下继续增加单位面积产量。例如,由于生物胁迫和缺乏作物保护方法造成的潜在损失可能超过谷物产量的一半。因此,为了限制损失,传统的植物保护产品是世界范围内作物保护的组成部分。然而,这些化学物质对人类健康和环境产生了较强的负面影响,导致需要使用其他控制感染性疾病的方法,如生物防治(使用天然机制的所有植物保护方法)。本专利的目的是利用源自浮游植物的单细胞藻类作为新的天然分子的来源,其能够通过直接影响感染具有主要农艺重要作物的植物病原体(如小麦和葡萄藤)的存活而起到“有机农药”的作用。
[0003] 镰刀菌病
[0004] 在欧洲,影响小麦(Triticum aestivum)的几种疾病是造成产量损失和降低谷物健康质量的原因。最重要的一种是壳针孢叶斑病(Septoria spp.)。枯萎病与由两个属的植物致病真菌镰刀菌属和球腔菌属构成的一种复合种群相关(1)。这两个属包括能够在小麦中诱导镰刀菌枯萎病的约19个种。在欧洲最常见的种是F.graminearum、F.culmorum、F.avenaceum、F.poae、M.nivale和M.majus。镰刀菌属属于子囊菌门(Ascomycota)和丛赤壳科(Nectriaceae)。球腔菌属属于瘤座孢科(Tuberculariaceae)并且包括两个种M.nivale和M.majus,其在穗和叶片上引起与镰刀菌相同的症状。几个镰刀菌种,其中禾谷镰刀菌最具代表性,能够在给定区域或地块或穗上一起发现,从而形成镰刀菌复合物。每个种的严重程度、发病率和流行程度随地理位置、气候变化和文化习俗的变化而改变。在同一个穗上存在几个这些物种可能会改变其平衡及其毒素产生的动力学。
[0005] 小麦镰刀菌枯萎病可在收获前几周对作物造成破坏。其可能与高产量丧失(谷粒败育和重量减轻)、发芽质量降低或由于在谷物中存在毒素引起的质量下降相关。实际上,镰刀菌属,但不是微座孢属(Microdochium)的真菌能够产生有毒的次级代谢产物霉菌毒素,其存在增加了这种疾病在农业生产中的发生率并且构成了主要的经济和公共卫生问题。控制枯萎病的主要手段包括栽培方法、品种抗性和化学控制。目前,很少有小麦品种对枯萎病具有抗性。然而,有抗性品种所具有的部分抗性水平,限制了产量损失和收获中的毒素累积。一旦作物建立,化学控制是可能的,但是效果有限。病原体的多样性以及其对活性物质的不同敏感性使得这种控制复杂化。例如,镰刀菌属的真菌对三唑类敏感,而微座孢属真菌对甲氧基丙烯酸酯类敏感。
[0006] 斑枯病
[0007] 斑枯病是一种小麦病,其导致显着的产量损失并导致全球范围内最大的经济损失,特别是在潮湿的温带地区。可以具有不同的两种主要形式的斑枯病:颖枯病(颖枯壳针孢(Phaeosphaeria nodorum))和叶斑病(禾生球腔菌)。在法国,颖枯病主要存在于大陆地区,而叶斑病主要存在于西北和沿海地区,在这里具有有利于真菌发展的气候条件。由M.graminicola导致的症状依次以萎黄、浅绿色斑点的形式出现,然后形成称为坏死病变的褐色斑点。坏死病变最终合并(融合)。接下来,在这些坏死病灶上出现肉眼几乎不可见的黑色子实体分生孢子器。几个研究团队已经研究了斑枯病对光合作用、生长或产量损失的危害。因此可以建立表示该疾病对收获的谷物的蛋白质含量影响情况的定性有害性。
[0008] M.graminicola是一种半活体营养真菌,其建立第一个活体营养阶段,其中感染发生在活组织上,随后是坏死阶段,在此期间真菌表达毒素,导致定植组织死亡。根据所处的环境条件,M.graminicola是有性(子囊孢子产生)或无性(器孢子产生)繁殖。由风进行长距离传播的子囊孢子在没有宿主植物的情况下有助于真菌存活,并且被认为是引发该疾病的原代接种物的主要来源。然而,器孢子主要在疾病流行阶段在几个连续的感染周期中产生。这些孢子通过雨滴的作用在短距离内飞溅分散。潜在的产量降低均更大,因为参与谷物灌浆的穗下面的最后一个叶片受到该疾病的严重影响。由于斑枯病导致的产量损失估计平均–1 –1
为1‑2t.ha ,可达3‑3.5t.ha ,产量降低40%。
[0009] 控制M.graminicola的方法基于使用杀真菌剂和抗性品种。然而,近年来,由于对具有例如甲氧基丙烯酸酯家族抗性的病原体的较强选择以及最近三唑类田间功效的损失,因而杀真菌剂的效能显著降低。
[0010] 葡萄病害
[0011] 今天,葡萄藤在世界范围内种植,并在许多国家的经济中发挥着核心作用。其作为鲜食葡萄和果汁消费,但是对其的主要开发依赖于葡萄酒产业。欧盟是世界上最大的葡萄酒生产国,也是世界上最大的葡萄酒产品出口国。因此,该部门每年为欧盟经济贡献约150亿欧元(www.ceev.be)。2010年,法国葡萄园覆盖了近865 000公顷土地,占耕地面积的近3%,使法国成为世界领先的葡萄酒生产国,产量为5110亿升。葡萄藤必须应对许多致病性攻击,包括隐花病。当其影响植物的木质部时,将其称为“木材病”,值得注意的例子是埃斯卡真菌病、枝条黑死病和eutypiosis。感染葡萄的浆果和草本部分(叶、茎等)的真菌诱导“叶片的隐花植物病害”,包括灰腐病、黑腐病、霜霉病和白粉病。
[0012] 埃斯卡真菌病(Esca)
[0013] 虽然霜霉病、白粉病和灰腐病是影响全球葡萄园的三种主要的隐花植物病害,但由真菌剂引起的木材病害正成为葡萄生产的限制因素。葡萄种植者目前面临着与这些木材病害有关的两个主要问题:缺乏控制方法和缺乏对各种生物和非生物因素的深入了解。
[0014] 世界范围内针对埃斯卡真菌病最常见的真菌病种是子囊菌Diplodia seriata、平截色二孢(Diplodia mutila)、小新壳梭孢(Neofusicoccum parvum)和Neofusicoccum luteum。在法国,最多的分离种是Diplodia seriata和葡萄球座菌(Botryosphaeria dothidea)。很多其他真菌,包括一些病原体,通常从患有埃斯卡真菌病的植物的坏死木材中分离得到。其例子是葡萄顶枯病菌(Eutypa lata),一种导致eutypiosis的病菌。这种疾病有两种形式:缓慢形式和爆发形式。叶面症状是缓慢形式的特征,即使其可能存在于爆发形式中。缓慢形式的特征是具有特定的叶面着色:白葡萄品种具有黄色间隙斑点和黑葡萄品种具有红色边界斑点,叶脉保持绿色。这些斑点逐渐变成褐色并变干。缓慢形式的叶面症状可以在葡萄藤上出现一年并且于次年消失。爆发形式的特征是葡萄藤部分或全部的气生器官、树枝、叶片和枝条迅速干燥。这种症状通常发生在夏季天气炎热时,导致葡萄藤毫无征兆地在几天内死亡。接种源的多样性以及真菌在葡萄木中非常缓慢且不可见的发展使得实施控制方法变得非常困难。此外,由于对人类的致癌作用以及这些产品对环境的高毒性,因而使得欧洲植物保护产品的法规发生变化,导致禁止使用基于亚砷酸钠的化学品。在世界范围内进行大量的研究,以检测能够用于苗圃或葡萄园的新型分子。
[0015] 灰霉病
[0016] 灰霉病是由称为灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的真菌引起的隐花植物病害。其属于锤舌菌纲,柔膜菌目和核盘菌科。B.cinerea是一种能够定殖在健康的、已感染植物组织以及死亡组织(腐生)的死体营养真菌。在叶片上,症状表现为棕色斑点,底部(真菌的子实)的浅灰色毡化层趋向于增加并侵入整个叶片。在开花和干燥之前枝条受到影响。其在转色期特别敏感,此时白葡萄品种的浆果出现棕色着色以及厚厚的灰色毛毡外观。分生孢子通过风传播并且直接或由伤口进入草本器官。这就是为什么由于霜霉病导致的浆果破裂有助于B.cinerea感染。这种疾病不仅导致产率损失高达40%(Viniflhor,2006年的数据),还降低了葡萄酒的感官品质。然而,灰葡萄孢也是获得某些甜葡萄酒所必需的“贵腐”的原因。
[0017] 霜霉病
[0018] 目前影响葡萄园的两种最严重的疾病是霜霉病和白粉病。导致霜霉病的病菌,是属于霜霉目的卵菌葡萄霜霉病菌(Plasmospora viticola),这是一种专性寄生物;为了生存和繁殖,其有义务在存活的葡萄叶上繁殖。P.viticola攻击葡萄藤以及枝条的所有草本组织。其导致浆果和茎脱落、褐变和干燥。在未进行处理以及气候适宜的条件下,霜霉病能够破坏高达75%的季节性收获。
[0019] P.viticola的生命周期包括有性和无性阶段。无性阶段导致产生继发感染和病原体在短距离内传播所必需的孢子,而有性阶段产生静止和抗寒的卵孢子,从而能够进行越冬和原发感染。葡萄园中霜霉病的第一个宏观证据是在叶子的上部或正面表面上出现浅黄色不规则斑点(油斑)。随着菌丝体内部定殖的进展,与油斑相对应的下侧白色棉状生长的进展变得更加明显。在晚期感染中,这些症状伴随着死的褐色组织。霜霉病主要通过使用杀真菌喷雾的预防措施进行控制。虽然有可能阻止攻击,但是一旦在花序和簇上造成伤害是无法弥补的。
[0020] 白粉病
[0021] 葡萄白粉病(白粉菌(Erysiphe necator))是属于白粉菌目的一种专性生物营养子囊菌。该真菌定殖在葡萄的所有绿色器官表面,特别是叶子的上表面,并扩散到浆果中。以产生含有子囊孢子的闭囊壳为特征的有性阶段可以与无性阶段交替,导致形成带有分生孢子的分生孢子梗。在葡萄藤的冬季休眠阶段,真菌在休眠芽中作为菌丝存活或在植物表面上作为闭囊壳存活。包含在闭囊壳中的孢子将在春天释放,以在芽和幼叶的表面上萌发。
在叶子表面上形成初生菌丝,然后越来越复杂和分支的菌丝网络覆盖叶子表面。随后,分生孢子在孢子形成阶段开始时从菌丝体分化,并且定殖在植物的其他绿色组织上,导致继发感染。
[0022] 在受感染的宿主组织表面上携带分生孢子的菌丝体和分生孢子梗的存在产生了灰白色粉末状外观。白色毡合在花蕾上发展,使其干枯。只有糖含量<8%的未成熟浆果才容易受到白粉病的影响。无论其年龄如何,所有叶子表面均易于受到感染。年轻的感染叶片首先变成深绿色,然后变形并变得发育不良。叶子的上表面可以具有与霜霉病的油斑相似的较浅的萎黄斑点。目前,控制最严重影响葡萄园的这种疾病的主要方法是使用大量农药和杀真菌剂。因此,在葡萄栽培中卫生压力特别大。
[0023] 以精确的时间表应用旨在主要控制霜霉病和白粉病的杀真菌处理,以防止由于疾病的出现而造成的损害。欧盟(EU)每年使用约68 000吨杀菌剂来控制葡萄病,占农业用杀菌剂的65%,而欧盟有用农业区仅有3.3%被葡萄藤占用(Eurostat,2007)。为了限制化学品对环境和健康造成的巨大压力,有必要从天然来源分离分子,这些分子将在保护作物免受传染病方面发挥作用,以便最终取代迄今为止使用的化学植物保护产品。
[0024] 苹果黑星病
[0025] 黑星病以及褐腐病和白粉病,是苹果树(苹果属)的主要真菌病之一。其是由称为苹果黑星菌(Venturia inaequelis)的子囊菌真菌引起,其中包括几千个菌株,在叶子、芽或果实的表面上有时甚至在木材上产生黑色或棕色的病变。果实和叶子下部对其特别敏感。
[0026] 子囊壳形式的真菌在从被感染的树上落下的叶子上过冬。春天,当发芽时,子囊壳充满子囊孢子。在潮湿的日子里,子囊孢子被喷射到果园的空气中,并通过空气运动到达树木。这种子囊孢子的排出从萌芽开始并持续6至10周,通常直到6月底结束。当子囊孢子到达叶片并且叶片湿润一段时间后,其出芽并穿透叶片,导致原发感染。根据湿度和温度条件,在树的不同部分可以在一到三周内可见真菌感染。叶子上出现约5毫米的深橄榄色或褐色斑点,有时可覆盖整个叶子。被感染的花可能会脱落。首先可以从茎上的黑斑识别出感染的水果。
[0027] 在初次感染后和夏季的其余时间,真菌发展并产生分生孢子,这是生殖结构的另一种形式。当分生孢子逸出时,产生继发感染。分生孢子可以感染树的任何部分,夏季末期产生的那些甚至能够在储存的水果上生长。大雨可以使得分生孢子散布。
[0028] 这种疾病很少杀死宿主,但是在缺乏杀真菌剂处理的情况下,能够导致果实品质和产量的显著降低(可达100%)。在秋季收集落叶的预防措施之后,控制策略需要在春季采取有效行动以防止释放的孢子在树上感染或发展。传统的保护方法是在发芽期开始施用杀真菌剂,并且每7天左右重复施用一次,直至6月下旬以保护新梢。苹果园最常使用杀真菌剂和杀虫剂进行处理,每年平均进行28.8次杀真菌处理,其中19次用于黑星病(INRA数据)。
[0029] 微藻
[0030] 具有新作用机制并且能够避免由病原体产生的抗性的天然来源的分子是开发新型环境友好的植物保护产品的未来主要发展方向。海洋中具有多种多样的生物体(细菌、微藻、藻类、脊椎动物和无脊椎动物),其是新型生物活性分子的来源并且仍未被开发利用(2)。例如,海洋微生物积累了具有生物活性的次生代谢产物,其独特的结构是在陆地生物中没有发现。因此,这些代谢产物可能代表了新的目标分子。一些来自海洋生物的物质被描述为具有抗真菌活性或天然防御物质活性,但对这些分子的研究仍是非常不发达的(3)。
[0031] 微藻是在水生生态系统中起关键作用的单细胞生物。在产生有机物质方面,其起着重要的生态作用,因为其代表了海洋食物链的底层。然而,其在全世界海洋中令人难以置信的定殖能力表明其很可能已经进化出了控制病原体的有效策略,特别是通过产生天然杀虫剂。例如,沿海地区产生生物毒素的微藻的大量增殖是造成有害藻华(HABs)形成的原因,对营养级联产生重大影响。沿海地区产生生物毒素微藻的大量增殖是造成有害的藻华(HAB)形成的原因,其对营养级联产生重大影响。
[0032] 在微藻中,属于裸甲藻目和裸甲藻科的鞭毛藻类以自由形式或与无脊椎动物(例如,珊瑚)共生的形式存在于温带和热带的海水中。鞭毛藻类合成大量称为聚酮化合物的次生代谢产物(具有生物学或药理学活性的化合物,可能具有使其具有生存优势的毒性),已对其中的一些进行了表征,包括负责HAB的那些化合物(4)。例如,鞭毛藻类的模型物种(强壮前沟藻(Amphidiniumcarterae))产生大量不同的生物活性化合物,其中很多有可能被开发为治疗剂(5)。由前沟藻属物种产生的聚酮在结构上极其多样化并且形成三类:大环内酯类、线性聚酮化合物和长链聚酮化合物。例如,前沟藻属是具有较强抗真菌和溶血活性的多羟基‑多烯(长链聚酮化合物)。因此,其通过与膜脂质结合而增加膜渗透性(6)。在不同的前沟藻属菌株中,已分离出具有长多羟基链的amphidinol样化合物,如lingshuiol、karatungiol、carteraol E、luteophanol、colopsinol和amphezonol A(5)。
[0033] 为了限制化学品对环境和健康的强大压力,有必要分离天然来源的分子,这些分子将在保护作物免受传染病方面发挥作用,以便最终取代迄今为止使用的化学植物保护产品。因此,这些“有机农药”可直接影响对主要农艺作物(如,小麦和葡糖)具有重要影响的植物病原体的存活。
[0034] 令人吃惊的是,发明人观察到强壮前沟藻的细胞提取物对很多植物致病真菌具有杀真菌作用。

发明内容

[0035] 本发明的第一个目的涉及前沟藻属的一种或多种微藻的细胞提取物用于其对作物植物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的杀真菌和/或杀细菌活性的用途。
[0036] 本发明的另一个目的涉及用于制备前沟藻属的一种或多种微藻的细胞提取物的方法,其特征在于所述方法具有下述步骤:
[0037] ‑从前沟藻属的一种或多种微藻收集新鲜细胞
[0038] ‑任选地,冷冻和/或冷冻干燥所述细胞
[0039] ‑以1:200至1:2的重量比将所述新鲜的或冷冻的细胞或所述冻干物重悬在无机或有机溶剂中
[0040] ‑任选地,冷冻干燥所获得的所述提取物。
[0041] 本发明的另一个目的涉及通过上述方法获得的前沟藻属细胞的细胞提取物或冻干物。
[0042] 本发明的另一个目的涉及用于控制作物植物和种子的致病真菌、卵菌和/或细胞的方法,所述方法包括将前沟藻属的一种或多种微藻的细胞提取物或根据本发明的提取物应用于作物植物和/或涂覆所述种子。
[0043] 本发明的另一个目的涉及用于控制作物植物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的方法,所述方法包括下述步骤:
[0044] ‑临用时,将根据本发明的细胞提取物与水以1:4至1:800的比例混合
[0045] ‑将这种混合物应用于作物植物和/或使用所述混合物涂覆所述种子。
[0046] 本发明的另一个目的涉及用于控制作物植物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的方法,所述方法包括下述步骤:
[0047] ‑以5至500g/L之间的质量浓度,优选地50至400g/L之间的质量浓度,优选地100至200g/L之间的质量浓度用水或用有机或无机溶剂以1:200至1:2的重量比将前沟藻属的一种或多种微藻的细胞培养物的冻干物重悬,
[0048] ‑临用时,与水以1:4至1:800的比例混合,
[0049] ‑将所获得的所述提取物应用于作物植物和/或使用所述混合物涂覆所述种子。

附图说明

[0050] 图1:强壮前沟藻的提取物对合谷镰刀菌具有抗真菌活性。
[0051] A.在存在来自不同微藻培养物的提取物的条件下孵育合谷镰刀菌的孢子,然后将其置于体外培养基中。72小时后拍照。
[0052] B.在存在一定浓度范围的来自强壮前沟藻的提取物(从0g/L至2.0g/L)的条件下孵育合谷镰刀菌,然后将其置于体外培养基中。72小时后拍照。
[0053] C.与B类似,但是在孵育6小时后计数发芽的孢子。
[0054] D.在存在此前已冰冻(图1D上面一行)或冷冻干燥(图1D下面一行)的A.carterae提取物的条件下孵育合谷镰刀菌的孢子。
[0055] 图2:强壮前沟藻的提取物在体外和植物中抑制小麦致病真菌的生长。
[0056] A.使用合谷镰刀菌的孢子接种小麦花并在处理其24小时后,使用含有或不含(模拟)强壮前沟藻提取物的溶液对其进行处理。
[0057] B.监测症状的出现和进展情况并且在400°D和450°D下记录发病率和严重程度水平(评分从0至9)。
[0058] 图3:强壮前沟藻的提取物在体外和植物中抑制葡萄致病真菌的生长。
[0059] A.将强壮前沟藻提取物(1g/L)或无菌水(模拟)喷洒在保持在体外条件下的分离的葡萄叶上,然后将葡萄霜霉病菌的孢子囊或白粉菌的分生孢子沉积在这些叶片上。在第7天和第12天分别读取症状。
[0060] B.与A类似,但是将灰葡萄孢的菌丝体植入物沉积在经处理的叶片上。在第7天时,通过测量坏死损伤的尺寸读取症状。
[0061] C.将涉及葡萄藤埃斯卡真菌病的不同真菌的菌丝体植入物沉积在培养基上,并且在处理24小时后使用水(模拟)或不同浓度的A.carterae提取物对其进行处理。在第4天时,通过测量菌丝体的表面积读取症状。
[0062] 图4:在反相C18柱上对提取物D进行分级分离并对通过HPLC获得的提取物D的不同级分进行活性检测
[0063] A.甲醇提取后得到的5g/L的提取物D对F.graminearum生长抑制作用的体外检测[0064] B.提取物D进样后获得的液相色谱图。根据虚线合并样品以形成5个级分,将其称为F1至F5。
[0065] C.浓度为5g/L的级分F1至F5对F.graminearum生长抑制作用的体外检测
[0066] D.浓度为0.5g/L、0.75g/L、1g/L、1.5g/L、2.5g/L和5g/L的级分F1对F.graminearum生长抑制作用的体外检测
[0067] ‑:阴性对照:在仅存在缓冲液的条件下孵育孢子
[0068] 图5:在反相C18柱上对级分F1的分级分离对通过HPLC获得的不同级分进行活性检测
[0069] A.级分F1进样后获得的液相色谱图。根据虚线合并样品以形成5个级分,将其称为F1‑1至F1‑5。
[0070] B.浓度为5g/L的级分F1至F5对F.graminearum生长抑制作用的体外检测
[0071] C.浓度范围从0.0005g/L至1g/L的级分F1‑2对F.graminearum生长抑制作用的体外检测
[0072] ‑:阴性对照:在仅存在缓冲液的条件下孵育孢子
[0073] 图6:级分F1‑2的质谱分析。
[0074] A.对所收集的F1‑2的目标分子进行正模式电喷雾电离获得的质谱。
[0075] B.在A中检测到的1381.8276Da离子的串联质谱。圈出的峰与由Nuzzo等,2014表征的在AM18中发现的那些一致(7)。
[0076] 图7:对级分F1‑2的NMR分析。
[0077] A.从来自提取物D的级分F1‑2的分子获得的1H NMR谱图(MeOD4溶剂)。
[0078] B.从来自提取物D的级分F1‑2的分子获得的13C DEPT135 NMR谱图(MeOD4溶剂)。
[0079] 图8:来自提取物D的级分F1‑2的amphidinol 18分子的结构式
[0080] 每个质子之间的所有COSY和TOCSY相关性以粗体显示。

具体实施方式

[0081] 本发明的第一个目的涉及前沟藻属的一种或多种微藻的细胞提取物用于其对作物植物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的杀真菌和/或杀细菌活性的用途。
[0082] 前沟藻属物种
[0083] 适宜的前沟藻属物种选自下组:Amphidinium achromaticum、Amphidinium aculeatum、Amphidinium acutissimum、Amphidinium acutum、Amphidinium alinii、Amphidinium aloxalocium、Amphidinium amphidinioides、Amphidinium asymmetricum、Amphidinium aureum、皮蓝前沟藻(Amphidinium belauense)、Amphidinium bidentatum、双角前沟藻(Amphidinium bipes)、Amphidinium boekhoutensis、Amphidinium boggayum、Amphidinium caerulescens、Amphidinium carbunculus、强壮前沟藻(Amphidinium carterae)、Amphidinium celestinum、Amphidinium chattonii、Amphidinium coeruleum、Amphidinium conradii、Amphidinium conus、Amphidinium coprosum、Amphidinium corallinum、Amphidinium corpulentum、厚前沟藻(Amphidinium crassum)、Amphidinium cristatum、Amphidinium cucurbita、Amphidinium cucurbitella、Amphidinium cupulatisquama、Amphidinium curvatum、Amphidinium cyaneoturbo、Amphidinium dentatum、Amphidinium discoidale、Amphidinium dubium、Amphidinium eilatiensis、Amphidinium emarginatum、Amphidinium fastigium、Amphidinium filumAmphidinium flagellans、Amphidinium flexum、Amphidinium galbanum、Amphidinium gibbosum、Amphidinium glaucovirescens、Amphidinium glaucum、Amphidinium globosum、Amphidinium hadai、Amphidinium herdmanii、Amphidinium incoloratum、Amphidinium inflatum、Amphidinium kesselitzii、Amphidinium kesslitzii、南海克氏前沟藻(Amphidinium klebsii)、Amphidinium lacunarum、Amphidinium lanceolatum、Amphidinium lefevrei、Amphidinium lilloense、Amphidinium lissae、Amphidinium longum、Amphidinium luteum、Amphidinium machapungarum、Amphidinium 
macrocephalum、Amphidinium mammillatum、Amphidinium manannini、Amphidinium mananninii、Amphidinium massartii,Amphidinium mootonorum、Amphidinium mucicola、Amphidinium nasutum、Amphidinium obliquum、Amphidinium obrae、Amphidinium oceanicum、Amphidinium oculatum、Amphidinium operculatum,Amphidinium operculatum var.steinii、Amphidinium ornithocephalum、Amphidinium ovoideum、Amphidinium ovum、Amphidinium pacificum、Amphidinium pelagicum、Amphidinium phthartum、Amphidinium psammophila、Amphidinium psittacus、Amphidinium purpureum、Amphidinium pusillum、Amphidinium rhynchocephalum、Amphidinium roseolum、Amphidinium ruttneri、Amphidinium salinum、Amphidinium schilleri、Amphidinium schroederi、Amphidinium scissum、Amphidinium sphagnicola、Amphidinium sphenoides、Amphidinium steinii、Amphidinium stellatum、Amphidinium stigmatum、Amphidinium  sulcatum、Amphidinium  tortum、Amphidinium 
trochodinioides、Amphidinium trochodinoides、Amphidinium trulla、Amphidinium truncatum、Amphidinium turbo、Amphidinium vernal、Amphidinium vigrense、Amphidinium vitreum、Amphidinium vittatum、Amphidinium wigrense、Amphidinium yoorugurrum、Amphidinium yuroogurrum。
[0084] 优选地,根据本发明使用的前沟藻属的一种或多种微藻是强壮前沟藻。采集了几种强壮前沟藻菌株如菌株CCMP 124、1314、3177(CCMP=海洋浮游植物的培养物保藏)、AC 208、792(AC=Algobank Cean)、BEA 01198(BEA=Banco de Algas)。
[0085] 有利地,根据本发明使用的强壮前沟藻菌株是CCMP 1314、AC208或AC792。
[0086] 提取
[0087] 可以采用本领域技术人员公知的任何细胞提取方法制备所述提取物,例如在无机或有机溶剂中进行固‑液或液‑液提取,所述无机或有机溶剂可以选自下组:水、水溶液、酮、酯、酸、醚、醇以及这些溶剂以任意混溶比例的混合物。
[0088] 有利地,优选的溶剂将是水或含氧溶剂,优选醇,特别优选C1至C4醇,如甲醇或乙醇。
[0089] 特别优选地,优选C1至C4醇。
[0090] 优选地,所述提取物是水溶性级分。
[0091] 优选地,所述提取物包含amphidinol 18或amphidinol 19,特别优选地amphidinol 18,有利地基于提取物的总重量其量大于1%w/w,优选地基于提取物的总重量包含2和10%w/w之间,特别优选地基于提取物的总重量包含3至5%w/w之间。
[0092]
[0093] 作用模式
[0094] 通过抑制孢子萌发或通过抑制真菌和/或卵菌生长,可以特别地发挥对作物植物和种子的致病真菌和/或卵菌的所述杀真菌活性。
[0095] 通过细胞壁和膜裂解活性导致的细胞裂解发挥活性。
[0096] 作物植物
[0097] 所述作物植物特别地选自下组:谷物,如小麦、玉米、大麦、水稻、大豆,水果和蔬菜,如马铃薯、胡萝卜、苹果树、桃树、杏树、番茄、萝卜、豆类、葡萄以及观赏植物。
[0098] 所述作物植物特别地选自下组:秋葵属、金合欢属、人心果属、龙舌兰属、石栗属、葱属、腰果属、凤梨属、番荔枝属、芹属、落花生属、槟榔属、辣根属、秘鲁胡萝卜属、桂木属、芦笋属、白坚木属、燕麦属、巴西栗属、菾属、苎麻属、糖棕属、芸苔属、木豆属、山茶属、大麻属、辣椒属、番木瓜属、红花属、葛缕子属、山核桃属、栗属、木棉属、长角豆属、藜属、菊属、鹰嘴豆属、菊苣属、金鸡纳属、樟属、西瓜属、柑橘属、椰子属、咖啡属、可乐树属、芋属、黄麻属、榛属、野百合属、甜瓜属、南瓜属、木梨属、香茅属、菜蓟属、鸭茅属、胡萝卜属、薯蓣属、柿属、稗属、油棕属、小豆蔻属、椮属、画眉草属、枇杷属、番樱桃属、荞麦属、榕属、茴香属、草莓属、万年兰属、大豆属、甘草属、棉花属、小葵子属、向日葵属、橡胶树属、木槿属、大麦属、葎草属、冬青属、槐蓝属、番薯属、素馨属、胡桃属、莴苣属、葫芦属、熏衣草属、指甲花属、兵豆属、独行菜属、胡枝子属、亚麻属、荔枝属、毒麦属、番薯属、百脉根属、羽扇豆属、番茄属、路边青属、澳洲坚果属、苹果属、芒果属、木薯属、竹芋属、苜蓿属、薄荷属、欧楂属、西谷椰子属、辣木属、芭蕉属、肉豆蔻属、烟草属、木犀榄属、驴食草属、稻属、黍属、罂粟属、欧防风属、天竺葵属、狼尾草属、鳄梨属、菜豆属、梯牧草属、刺葵属、新西兰麻属、茴芹属、胡椒属、黄连木属、豌豆属、李属、番石榴属、石榴属、梨属、萝卜属、大黄属、茶藨子属、蓖麻属、蔷薇属、悬钩子属、甘蔗属、鸦葱属、黑麦属、佛手瓜属、胡麻属、狗尾草属、茄属、高粱属、菠菜属、可可属、婆罗门参属、三叶草属、胡卢巴属、小麦属、梵天花属、越橘属、新缬草属、香草属、蚕豆属、豇豆属、牛油果属、葡萄属、千年芋属、玉蜀黍属、姜属。
[0099] 病原体
[0100] 所述作物植物和种子的致病真菌是子囊菌纲或担子菌纲,优选子囊菌纲。
[0101] 所述作物植物和种子的致病真菌是对下述属的作物植物和种子的致病真菌:
[0102] Acrocalymma,Acrocalymma medicaginis,
[0103] 镰刀菌属,瓣状镰刀菌(Fusarium  affine)、分节孢子镰刀菌(Fusarium arthrosporioides)、克地镰刀菌(Fusarium crookwellense)、黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)、变红镰刀菌(Fusarium incarnatum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、Fusarium langsethiae、芒果镰刀菌(Fusarium mangiferae)、尖孢镰刀菌专化型(Fusarium oxysporum f.sp.albedinis)、尖孢镰刀菌芦笋专化型(Fusarium oxysporum f.sp.Asparagi)、尖孢镰刀菌甘薯专化型(Fusarium oxysporum f.sp.batatas)、尖孢镰刀菌甜菜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.betae)、尖孢镰刀菌大麻专化型(Fusarium oxysporum  f.sp.cannabis)、尖孢镰刀菌红花专化型(Fusarium oxysporum 
f.sp.carthami)、尖孢镰刀菌洋兰专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cattleyae)、尖孢镰刀菌鹰嘴豆专化型(Fusarium oxysporum f.sp.ciceris)、尖孢镰刀菌咖啡专化型(Fusarium oxysporum f.sp.coffea)、尖孢镰刀菌咖啡专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)、尖孢镰刀菌荔枝专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cyclaminis)、尖孢镰刀菌康乃馨专化型(Fusarium oxysporum f.sp.dianthi)、尖孢镰刀菌扁豆专化型(Fusarium oxysporum f.sp.lentis)、尖孢镰刀菌亚麻专化型(Fusarium oxysporum f.sp.lini)、尖孢镰刀菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici)、尖孢镰刀菌苜蓿专化型(Fusarium oxysporum f.sp.medicaginis)、尖孢镰刀菌豌豆专化型(Fusarium oxysporum f.sp.pisi)、尖孢镰刀菌玉蜀番茄根专化型(Fusarium oxysporum f.sp.radicis‑lycopersici)、尖孢镰刀菌菠菜专化型(Fusarium oxysporum 
f.sp.spinacia)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、半裸镰刀菌(Fusarium 
pallidoroseum)、Fusarium patch、层生镰刀菌(Fusarium proliferatum)、芳香镰刀菌(Fusarium redolens)、甘蔗镰刀菌(Fusarium sacchari)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、亚黏团镰刀菌(Fusarium subglutinans)、硫色镰刀菌(Fusarium sulphureum)、三隔镰刀菌(Fusarium tricinctum)、枯萎病镰刀菌(Fusarium wilt),
[0104] 葡萄孢属,葱腐葡萄孢(Botrytis allii)、喜花葡萄孢(Botrytis anthophila)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、蚕豆葡萄孢(Botrytis fabae)、Botrytis narcissicola,[0105] 链格孢属,烟草链格孢(Alternaria alternata)、芸苔链格孢(Alternaria brassicae)、甘蓝链格孢(Alternaria brassicicola)、红花链格孢(Alternaria carthami)、瓜叶菊链格孢(Alternaria cinerariae)、胡萝卜链格孢(Alternaria dauci)、石竹链格孢(Alternaria dianthi)、石竹生链格孢(Alternaria dianthicola)、大戟生链格孢(Alternaria euphorbiicola)、向日葵链格孢(Alternaria helianthi)、向日葵生链格孢(Alternaria helianthicola)、粳稻链格孢(Alternaria japonica)、白花菊链格孢(Alternaria leucanthemi)、泥生链格孢(Alternaria limicola)、亚麻生链格孢(Alternaria linicola)、稻毛锥孢(Alternaria padwickii)、人参链格孢(Alternaria panax)、根生链格孢(Alternaria radicina)、萝卜链格孢(Alternaria raphani)、皂草链格孢(Alternaria saponariae)、千里光链格孢(Alternaria senecionis)、茄链格孢(Alternaria solani)、细极链格孢(Alternaria tenuissima)、小麦链格孢(Alternaria triticina)、百日草链格孢(Alternaria zinniae),
[0106] 白粉菌属,板口线虫病白粉菌(Erysiphe necator)、甜菜白粉菌(Erysiphe betae)、褐斑白粉菌(Erysiphe  brunneopunctata)、菊科白粉菌(Erysiphe cichoracearum)、十字花科白粉菌(Erysiphe cruciferarum)、白粉菌燕麦专化型(Erysiphe graminis  f.sp.Avenae)、白粉菌小麦专化型(Erysiphe graminis f.sp.tritici)、独活白粉菌(Erysiphe heraclei)、豌豆白粉菌(Erysiphe pisi),[0107] 麦角菌属,纺锤麦角菌(Claviceps fusiformis)、紫色麦角菌(Claviceps purpurea)、高粱麦角菌(Claviceps sorghi)、菰属麦角菌(Claviceps zizaniae),[0108] 顶囊壳属,禾顶囊壳(Gaeumannomyces graminis),
[0109] 小球腔菌属,颖枯壳小球腔菌(Leptosphaeria nodorum)、尖孢小球腔菌(Leptosphaeria acuta)、大麻小球腔菌(Leptosphaeria cannabina)、盾壳霉小球腔菌(Leptosphaeria coniothyrium)、胡萝卜褐腐病菌(Leptosphaeria libanotis)、向日葵黑茎病菌(Leptosphaeria lindquistii)、茎基溃疡病菌(Leptosphaeria maculans)、香蕉小球腔菌(Leptosphaeria musarum)、Leptosphaeria pratensis、甘蔗小球腔菌(Leptosphaeria sacchari)、向日葵小球腔菌(Leptosphaeria woroninii),
[0110] 微座孢属,微座孢属(Microdochium spp.)、博利微座孢(Microdochium bolleyi)、二聚微座孢(Microdochium dimerum)、潘氏微座孢(Microdochium panattonianum)、双孔微座孢(Microdochium phragmitis),
[0111] 球腔菌属,花生球腔菌(Mycosphaerella  arachidis)、网孢球腔菌(Mycosphaerella areola)、伯克利球腔菌(Mycosphaerella berkeleyi)、布伦球腔菌(Mycosphaerella bolleana)、芸苔生球腔菌(Mycosphaerella brassicicola)、番木瓜球腔菌(Mycosphaerella caricae)、卡塔球腔菌(Mycosphaerella caryigena)、樱桃球腔菌(Mycosphaerella cerasella)、咖啡生球腔菌(Mycosphaerella coffeicola)、杂木球腔菌(Mycosphaerella confusa)、菜豆球腔菌(Mycosphaerella cruenta)、山核桃球腔菌(Mycosphaerella dendroides)、芭蕉球腔菌(Mycosphaerella eumusae)、棉球腔菌(Mycosphaerella gossypina)、禾生球腔菌(Mycosphaerella graminicola)、木薯球腔菌(Mycosphaerella henningsii)、保利球腔菌(Mycosphaerella horii)、核桃球腔菌(Mycosphaerella juglandis)、Mycosphaerella lageniformis、亚麻球腔菌
(Mycosphaerella linicola)、路易斯安那球腔菌(Mycosphaerella louisianae)、香蕉球腔菌(Mycosphaerella musae)、香蕉生球腔菌(Mycosphaerella musicola)、棕榈生球腔菌(Mycosphaerella palmicola)、豆类球腔菌(Mycosphaerella pinodes)、黄连木球腔菌(Mycosphaerella pistaciarum)、开心果球腔菌(Mycosphaerella pistacina)、梧桐球腔菌(Mycosphaerella platanifolia)、多态球腔菌(Mycosphaerella polymorpha)、苹果球腔菌(Mycosphaerella pomi)、斑叶球腔菌(Mycosphaerella punctiformis)、梨叶球腔菌(Mycosphaerella pyri),
[0112] Oculimacula,Oculimacula acuformis、Oculimacula yallundae,
[0113] 白粉菌属,小麦白粉菌(Blumeria graminis),
[0114] 核腔菌属,燕麦核腔菌(Pyrenophora avenae)、毛壳核腔菌(Pyrenophora chaetomioides)、大麦核腔菌(Pyrenophora graminea)、小麦核腔菌(Pyrenophora seminiperda)、圆核腔菌(Pyrenophora teres)、Pyrenophora teres f.maculata、Pyrenophora teres f.teres、小麦‑褐斑核腔菌(Pyrenophora tritici–repentis),[0115] 柱隔孢属,Ramularia collo–cygni、甜菜灰白斑长隔孢(Ramularia beticola)、榛树柱隔孢(Ramularia coryli)、仙客来生柱隔孢(Ramularia cyclaminicola)、大孢柱隔孢(Ramularia macrospora)、薄荷生柱隔孢(Ramularia menthicola)、板口线虫柱隔孢(Ramularia necator)、报春花生柱隔孢(Ramularia primulae)、菠菜柱隔孢(Ramularia spinaciae)、细小柱隔孢(Ramularia subtilis)、柔嫩柱隔孢(Ramularia tenella)、水仙生柱隔孢(Ramularia vallisumbrosae),
[0116] 喙孢属,黑麦喙孢(Rhynchosporium secalis),
[0117] 旋孢腔菌属,旋孢腔菌(Cochliobolus)、炭色孢腔菌(Cochliobolus carbonum)、芸香草孢腔菌(Cochliobolus cymbopogonis)、夏威夷旋孢腔菌(Cochliobolus hawaiiensis)、异旋孢腔菌(Cochliobolus heterostrophus)、月状旋孢腔菌(Cochliobolus lunatus)、宫部旋孢腔菌(Cochliobolus miyabeanus)、黄粉旋孢腔菌(Cochliobolus ravenelii)、禾旋孢腔菌(Cochliobolus sativus)、狗尾草旋孢腔菌(Cochliobolus setariae)、穗状旋孢腔菌(Cochliobolus spicifer)、甘蔗旋孢腔菌(Cochliobolus stenospilus)、圆疣旋孢腔菌(Cochliobolus tuberculatus)、维多利亚旋孢腔菌(Cochliobolus victoriae),
[0118] 微座孢属,稻微座孢(Microdochium oryzae),
[0119] 梨孢属,稻梨孢(Pyricularia oryzae),
[0120] 帚枝霉属,稻帚枝霉(Sarocladium oryzae),
[0121] 稻绿核菌属,稻绿核菌(Ustilaginoides virens),
[0122] 尾孢菌属,尾孢菌(Cercospora)、芹菜尾孢菌(Cercospora apii)、芹菜尾孢梧桐尾孢菌专化型(Cercospora apii f.sp.Clerodendri)、变灰尾孢菌(Cercospora apiicola)、花生尾孢菌(Cercospora arachidicola)、天门冬尾孢菌(Cercospora asparagi)、黑线尾孢菌(Cercospora atrofiliformis)、甜菜尾孢菌(Cercospora beticola)、细窄尾孢菌(Cercospora  brachypus)、芥生尾孢菌(Cercospora brassicicola)、天竺葵尾孢菌(Cercospora brunkii)、大麻尾孢菌(Cercospora cannabis)、坎地尾孢菌(Cercospora cantuariensis)、辣椒尾孢菌(Cercospora capsici)、胡萝卜尾孢菌(Cercospora carotae)、榛尾孢菌(Cercospora corylina)、豇豆尾孢菌(Cercospora fuchsiae)、蒲公英尾孢菌Cercospora fusca、梭斑尾孢菌(Cercospora fusimaculans)、非洲菊尾孢菌(Cercospora gerberae)、变灰尾孢菌(Cercospora halstedii)、杜鹃花假尾孢菌(Cercospora handelii)、干草尾孢菌(Cercospora hayi)、绣球花尾孢菌(Cercospora hydrangeae)、菊池尾孢菌(Cercospora kikuchii)、扁豆尾孢菌(Cercospora lentis)、枫香尾孢菌(Cercospora liquidambaris)、Cercospora longipes、莴苣褐斑尾孢菌(Cercospora longissima)、番木瓜尾孢菌(Cercospora mamaonis)、芒果尾孢菌(Cercospora mangiferae)、常随苜蓿尾孢(Cercospora medicaginis)、茄尾孢菌(Cercospora melongenae)、微小尾孢菌(Cercospora minuta)、烟草尾孢菌(Cercospora nicotianae)、兰花尾孢菌(Cercospora odontoglossi)、木瓜尾孢菌(Cercospora papayae)、狼尾草尾孢菌(Cercospora penniseti)、豌豆尾孢菌(Cercospora pisa–sativae)、车前草尾孢菌(Cercospora platanicola)、普德瑞尾孢菌(Cercospora puderii)、一品红尾孢菌(Cercospora pulcherrima)、观音棕竹生尾孢菌(Cercospora rhapidicola)、蔷薇生尾孢菌(Cercospora rosicola)、大豆尾孢菌(Cercospora sojina)、茄尾孢菌(Cercospora solani)、茄‑韭菜尾孢菌(Cercospora solani–tuberosi)、高粱尾孢菌(Cercospora sorghi)、茶茎尾孢菌(Cercospora theae)、结节尾孢菌(Cercospora tuberculans)、钟器尾孢菌(Cercospora vexans)、维科斯尾孢菌(Cercospora vicosae)、玉蜀尾孢菌(Cercospora zeae–maydis)、吊竹尾孢菌(Cercospora zebrina)、轮纹尾孢菌(Cercospora zonata),
[0123] 棒孢属,多主棒孢菌(Corynespora cassiicola),
[0124] 层锈菌属,豆属层锈菌(Phakospora pachyrhizi)、棉花层锈菌(Phakopsora gossypii),
[0125] 炭疽菌属,尖孢炭疽菌(Colletotrichum  acutatum)、花生炭疽菌(Colletotrichum arachidis)、辣椒炭疽菌(Colletotrichum capsici)、谷类炭疽菌(Colletotrichum cereale)、咖啡炭疽菌(Colletotrichum coffeanum)、北方炭疽菌(Colletotrichum crassipes)、黑线炭疽菌(Colletotrichum dematium)、黑线炭疽菌菠菜专化型(Colletotrichum dematium f.spinaciae)、南洋杉炭疽菌(Colletotrichum derridis)、毁灭炭疽菌(Colletotrichum destructivum)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、大豆炭疽菌(Colletotrichum glycines)、棉花炭疽菌
(Colletotrichum gossypii)、禾生炭疽菌(Colletotrichum graminicola)、萝菔炭疽菌(Colletotrichum higginsianum)、卡哈瓦炭疽菌(Colletotrichum kahawae)、菜豆炭疽菌(Colletotrichum lindemuthianum)、亚麻炭疽菌(Colletotrichum lini)、曼根炭疽菌(Colletotrichum mangenotii)、香蕉炭疽菌(Colletotrichum musae)、龙葵炭疽菌(Colletotrichum nigrum)、西瓜炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)、豌豆炭疽菌(Colletotrichum pisi)、高粱炭疽菌(Colletotrichum sublineolum)、常春藤炭疽菌(Colletotrichum trichellum)、三叶草炭疽菌(Colletotrichum trifolii)、截短炭疽菌(Colletotrichum truncatum),
[0126] 腐霉属,
[0127] 色二孢菌属,Diplodia allocellula、兰属洋兰色二孢(Diplodia laelio–cattleyae)、木薯色二孢(Diplodia manihoti)、拟酸浆色二孢(Diplodia paraphysaria)、Diplodia seriata、茶茎‑茶树色二孢(Diplodia theae–sinensis),
[0128] 链核盘菌属,杜鹃花链核盘菌(Monilinia azaleae)、果生链核盘菌(Monilinia fructicola)、桃链核盘菌(Monilinia fructigena)、核果链核盘菌(Monilinia laxa)、Monilinia oxycocci,
[0129] Pezzicula,Pezzicula alba、Pezzicula malicorticis,
[0130] Zymoseptoria,Zymoseptoria tritici,
[0131] 疫霉属,马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans),
[0132] 球座菌属,葡萄球座菌(Guignardia  bidwelli)、山茶球座菌(Guignardia camelliae)、佛里达球座菌(Guignardia  fulvida)、芒果球座菌(Guignardia mangiferae)、香蕉球座菌(Guignardia musae)、虫状球座菌(Guignardia philoprina),[0133] 轴霜霉属,葡萄霜霉菌(Plasmopara viticola),
[0134] 柄锈菌属,狭窄柄锈菌(Puccinia  angustata)、花生柄锈菌(Puccinia arachidis)、三芒草柄锈菌(Puccinia aristidae)、芦笋柄锈菌(Puccinia asparagi)、卡卡巴塔柄锈菌(Puccinia cacabata)、风铃草柄锈菌(Puccinia campanulae)、红花柄锈菌(Puccinia carthami)、冠状柄锈菌(Puccinia coronata)、异株柄锈菌(Puccinia dioicae)、蔗茅柄锈菌(Puccinia erianthi)、莴苣柄锈菌(Puccinia extensicola)、向日葵柄锈菌(Puccinia helianthi)、大麦柄锈菌(Puccinia hordei)、杰卡柄锈菌(Puccinia jaceae)、屈恩柄锈菌(Puccinia kuehnii)、Puccinia malvacearum、玛丽‑威尔柄锈菌(Puccinia mariae–wilsoniae)、黑顶柄锈菌(Puccinia melanocephala)、薄荷柄锈菌(Puccinia menthae)、酢浆草柄锈菌(Puccinia oxalidis)、天竺葵‑带状柄锈菌(Puccinia pelargonii–zonalis)、皮氏柄锈菌(Puccinia pittieriana)、早熟禾柄锈菌(Puccinia poarum)、紫柄锈菌(Puccinia purpurea)、小麦叶柄锈菌(Puccinia recondita)、谢尔登柄锈菌(Puccinia schedonnardii)、无柄柄锈菌(Puccinia sessilis)、多形柄锈菌(Puccinia striiformis)、多形柄锈菌(Puccinia striiformis)、细小柄锈菌(Puccinia subnitens)、亚纹柄锈菌(Puccinia substriata)、毛瘤柄锈菌(Puccinia verruca)、苍耳子柄锈菌(Puccinia xanthii),
[0135] 丝核菌属,立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、稻枯斑丝核菌(Rhizoctonia oryzae)、禾谷丝核菌(Rhizoctonia  cerealis)、豆类丝核菌(Rhizoctonia leguminicola)、玉蜀黍丝核菌(Rhizoctonia rubi),
[0136] 核盘菌属,北方贝核盘菌(Sclerotinia borealis)、球茎核盘菌(Sclerotinia bulborum)、小核盘菌(Sclerotinia minor)、蓖麻子核盘菌(Sclerotinia ricini)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、思博菲亚核盘菌(Sclerotinia spermophila)、车轴草核盘菌(Sclerotinia trifoliorum),
[0137] 壳针孢属,葡萄壳针孢(Septoria ampelina)、杜鹃花壳针孢(Septoria azaleae)、甘薯壳针孢(Septoria bataticola)、风铃草壳针孢(Septoria campanulae)、大麻壳针孢(Septoria cannabis)、葫芦科壳针孢(Septoria cucurbitacearum)、达罗壳针孢(Septoria darrowii)、石竹壳针孢(Septoria dianthi)、芭蕉壳针孢(Septoria eumusae)、大豆壳针孢(Septoria glycines)、向日葵壳针孢(Septoria helianthi)、矮小壳针孢(Septoria humuli)、绣球花壳针孢(Septoria hydrangeae)、莴苣壳针孢(Septoria lactucae)、番茄壳针孢(Septoria lycopersici)、番茄壳针孢(Septoria lycopersici)、薄荷壳针孢(Septoria menthae)、大麦壳针孢(Septoria passerinii)、豌豆壳针孢(Septoria pisi)、杜鹃花壳针孢(Septoria rhododendri)、黑麦壳针孢(Septoria secalis)、兰花壳针孢(Septoria selenophomoides),
[0138] 黑星菌属,苹果黑星菌(Venturia  inaequalis)、嗜果黑星菌(Venturia carpophila),
[0139] 支顶孢属,单纯支顶孢(Acrodontium simplex),
[0140] 端梗孢属,梭孢端梗孢(Acrophialophora fusispora),
[0141] 白粉菌属,白粉病菌(Acrosporium tingitaninum),
[0142] 孢锈菌属,尖蕊花孢锈菌(Aecidium aechmantherae)、石蒜孢锈菌(Aecidium amaryllidis)、山漆孢锈菌(Aecidium breyniae)、风铃草孢锈菌(Aecidium campanulastri)、大麻孢锈菌(Aecidium cannabis)、芋类孢锈菌(Aecidium cantensis)、辣椒孢锈菌(Aecidium caspicum)、小茴香孢锈菌(Aecidium foeniculi)、水仙孢锈菌(Aecidium narcissi),
[0143] Ahmadiago,
[0144] 白壳属,可可花瘿病菌(Albonectria rigidiuscula),
[0145] Allodus,Allodus podophylli,
[0146] Amphobotrys,Amphobotrys ricini,
[0147] Anguillosporella,Anguillosporella vermiformis,
[0148] 小花口壳属,Anthostomella pullulans,
[0149] 薄孔菌属,白薄孔菌(Antrodia  albida)、层状薄孔菌(Antrodia serialiformis)、连续薄孔菌(Antrodia serialis),
[0150] 梨孢假壳属,蒙塔涅梨孢假壳(Apiospora montagnei),
[0151] 附丝壳属,
[0152] 蜜环菌属,赫氏蜜环菌(Armillaria heimii)、芥黄蜜环菌(Armillaria sinapina)、苏氏蜜环菌(Armillaria socialis)、发光假蜜环菌(Armillaria tabescens),[0153] 节丝壳属,
[0154] 阿氏锈菌属,Arthuriomyces peckianus,
[0155] 壳二孢属,天冬酰胺壳二孢(Ascochyta asparagina)、波西米亚壳二孢(Ascochyta bohemica)、木瓜球壳二孢(Ascochyta caricae)、多孔壳二孢(Ascochyta doronici)、蚕豆叶壳二孢乳香专化型(Ascochyta fabae f.sp.lentis)、禾壳二孢(Ascochyta graminea)、麦芽壳二孢(Ascochyta hordei)、葎草壳二孢(Ascochyta humuli)、豌豆壳二孢(Ascochyta pisi)、丝孢壳二孢(Ascochyta prasadii)、高粱壳二孢(Ascochyta sorghi)、菠菜壳二孢(Ascochyta spinaciae)、塔尔达壳二孢(Ascochyta tarda)、小麦壳二孢(Ascochyta tritici),
[0156] 子囊孢属,红核子囊孢(Ascospora ruborum),
[0157] 曲霉属,棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、灰绿曲霉(Aspergillus fischerianus)、黑曲霉(Aspergillus niger),
[0158] 座糙孢菌属,番木瓜座糙孢菌(Asperisporium caricae),
[0159] 小光壳炱属,
[0160] 小星盾炱属,山核桃小星盾炱(Asteroma caryae),
[0161] 阿太菌属,蛛形纲阿太菌(Athelia arachnoidea)、罗耳阿太菌(Athelia rolfsii),
[0162] 深黄孔菌属,裂皮深黄孔菌(Aurantiporus fissilis),
[0163] 短梗霉属,普鲁兰短梗霉(Aureobasidium pullulans),
[0164] Bambusiomyces,
[0165] 香蕉黑星病,
[0166] Bayoud病,
[0167] 球孢属,扁圆球孢(Beniowskia sphaeroidea),
[0168] 生赤壳属,淡色生赤壳(Bionectria ochroleuca),
[0169] 平脐蠕孢属,仙人掌平脐蠕孢(Bipolaris cactivora)、曲奇平脐蠕孢(Bipolaris cookei)、内弯平脐蠕孢(Bipolaris incurvata)、甘蔗平脐蠕孢(Bipolaris sacchari),[0170] 炭角菌属,烟色炭角菌(Biscogniauxia capnodes)、棒茎炭角菌(Biscogniauxia marginata),
[0171] 烟管菌属,烟管菌(Bjerkandera adusta),
[0172] 黑叶斑病,
[0173] 布拉氏霉属,三孢布拉氏霉(Blakeslea trispora),
[0174] 球二孢属,兰花球二孢(Botryodiplodia  oncidii)、榆白生球二孢(Botryodiplodia ulmicola),
[0175] 葡萄座腔菌属,可可颊葡萄座腔菌(Botryosphaeria cocogena)、杨树葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、马氏葡萄座腔菌(Botryosphaeria marconii)、钝形葡萄座腔菌(Botryosphaeria obtusa)、罗地亚葡萄座腔菌(Botryosphaeria rhodina)、醋栗葡萄座腔菌(Botryosphaeria ribis)、史蒂文森葡萄座腔菌(Botryosphaeria stevensii),[0176] 葡孢霉属,绚丽葡孢霉(Botryosporium pulchrum),
[0177] 孢盘菌属,富克孢盘菌(Botryotinia fuckeliana)、Botryotinia polyblastis,[0178] 黄杨枯萎病,
[0179] Brachybasidiaceae,
[0180] 巴西壳属,Brasiliomyces malachrae,
[0181] Briosia,Briosia ampelophaga,
[0182] 褐环斑病,
[0183] 番茄牛眼腐病,
[0184] 球叉丝壳属,
[0185] 球壳孢属,仁果球壳孢(Cadophora malorum),
[0186] 白粉菌(Caespitotheca),
[0187] 丽赤壳属,Calonectria ilicicola、竹荪丽赤壳(Calonectria indusiata)、京都丽赤壳(Calonectria kyotensis)、Calonectria pyrochroa、奎斯塔丽赤壳(Calonectria quinqueseptata),
[0188] Camarotella,Camarotella acrocomiae、Camarotella costaricensis,[0189] 美人蕉锈病,
[0190] 子囊菌属,叶子子囊菌(Capitorostrum cocoes),
[0191] 煤炱属,富特煤炱(Capnodium footii)、芒果煤炱(Capnodiummangiferum)、分枝煤炱(Capnodium ramosum)、茶茎煤炱(Capnodium theae),
[0192] 头孢霉属,麦类头孢霉(Cephalosporium gramineum),
[0193] 角担菌属,谷类角担菌(Ceratobasidium cereale)、小麦角担菌(Ceratobasidium cornigerum)、有毒角担菌(Ceratobasidium noxium)、苎麻生角担菌(Ceratobasidium ramicola)、粟米须角担菌(Ceratobasidium setariae)、史蒂文森(Ceratobasidium stevensii),
[0194] 长喙壳属,多脂长喙壳(Ceratocystis adiposa)、小蓝长喙壳(Ceratocystis coerulescens)、甘薯长喙壳(Ceratocystis fimbriata)、串珠长喙壳(Ceratocystis moniliformis)、Ceratocystis oblonga、芦荟长喙壳(Ceratocystis obpyriformis)、奇异长喙壳(Ceratocystis paradoxa)、毛长喙壳(Ceratocystis pilifera)、普兰塔塔长喙壳(Ceratocystis  pluriannulata)、Ceratocystis polyconidia、Ceratocystis tanganyicensis、Ceratocystis zombamontana,
[0195] 角菌根菌属,嗜水气角菌根菌(Ceratorhiza hydrophila),
[0196] 小煤炱属(Ceratospermopsis),
[0197] 盘尾孢属,眼斑盘尾孢(Cercoseptoria ocellata),
[0198] 小尾孢属,覆盆子小尾孢(Cercosporella rubi),
[0199] 蜡孔菌属,紧密蜡孔菌(Ceriporia spissa)、根皮子座蜡孔菌(Ceriporia xylostromatoides),
[0200] 齿毛菌属,一色齿毛菌(Cerrena unicolor),
[0201] 脉孢菌属,劳氏脉孢菌(Ceuthospora lauri),
[0202] 笄霉属,瓜笄霉(Choanephora  cucurbitarum)、漏斗笄霉(Choanephora infundibulifera),
[0203] 菊属,菊花白锈病(Chrysanthemum white rust),
[0204] 金锈菌属,Chrysomyxa cassandrae,
[0205] 金锈菌属,喜马拉雅金锈菌(Chrysomyxa himalensis)、云杉金锈菌(Chrysomyxa ledi)、云山金锈菌杜鹃花变种(Chrysomyxa ledi var.rhododendri)、乐迪克拉金锈菌(Chrysomyxa ledicola)、Chrysomyxa nagodhii、Chrysomyxa neoglandulosi、胡椒碱金锈菌(Chrysomyxa piperiana)、Chrysomyxa pirolata、鹿蹄草膨痂金锈菌(Chrysomyxa pyrolae)、Chrysomyxa reticulata、罗尼金锈菌(Chrysomyxa roanensis)、琥珀金锈菌(Chrysomyxa succinea),
[0206] 枝 孢菌 属 ,Cla d os po ri um  a rt hr o pod ii 、枝状 枝孢 菌(Cladosporiumcladosporioides)、枝状枝孢菌豌豆生专化型(Cladosporium cladosporioides f.sp.pisicola)、黄瓜枝孢菌(Cladosporium cucumerinum)、草本枝孢菌(Cladosporium herbarum)、香蕉枝孢菌(Cladosporium musae)、鼻烟盒树枝孢菌(Cladosporium oncobae),
[0207] 肉齿菌属,丽极肉齿菌(Climacodon pulcherrimus)、大肉肉齿菌(Climacodon septentrionalis),
[0208] 杯伞菌属,寄生杯伞菌(Clitocybe parasitica),
[0209] 粉红螺旋聚孢霉(Clonostachys rosea f.rosea),
[0210] 盾壳菌属,甘蔗盾壳菌(Clypeoporthe iliau),
[0211] 鞘锈菌属,向日葵鞘锈菌(Coleosporium helianthi)、番薯鞘锈菌(Coleosporium ipomoeae)、中间鞘锈菌(Coleosporium madiae)、太平洋鞘锈菌(Coleosporium pacificum)、款冬鞘锈菌(Coleosporium tussilaginis),
[0212] Conidiosporomyces,
[0213] 垫壳孢属,栗生垫壳孢(Coniella castaneicola)、白腐垫壳孢(Coniella diplodiella)、草莓垫壳孢(Coniella fragariae),
[0214] 镶孢属,冢镶孢(Coniothecium chomatosporum),
[0215] 盾壳霉属,朴丽‑南方盾壳霉(Coniothyrium celtidis–australis)、何氏盾壳霉(Coniothyrium henriquesii)、蔷薇盾壳霉(Coniothyrium rosarum)、威氏盾壳霉(Coniothyrium wernsdorffiae),
[0216] 鬼伞属,鬼伞(Coprinopsis psychromorbida),
[0217] 双孢属,约氏双孢菌(Cordana johnstonii)、暗双孢菌(Cordana musae)、从卷毛革孔菌(Coriolopsis floccosa),
[0218] 玉米灰叶斑病,
[0219] 伏革菌属,菌核伏革菌(Corticium invisum)、潘氏伏革菌(Corticium penicillatum)、茶茎伏革菌(Corticium theae),
[0220] Coryneopsis,Coryneopsis rubi,
[0221] 棒盘孢属,杜鹃花棒盘孢(Coryneum rhododendri),
[0222] 坚黑穗病,
[0223] 毛皮伞属,Crinipellis sarmentosa,
[0224] 柱锈菌属,茶藨生柱锈菌(Cronartium ribicola),
[0225] 隐丛壳科,
[0226] Cryptobasidiaceae,
[0227] 黑脂病菌属,荔枝黑脂病菌(Cryptocline cyclaminis),
[0228] Cryptomeliola,
[0229] 小隐孢壳属,掩荫小隐孢壳(Cryptosporella umbrina),
[0230] 拟隐孢壳属,塔拉科拟隐孢壳(Cryptosporiopsis tarraconensis),
[0231] Cryptosporium,Cryptosporium minimum,
[0232] 弯孢属,新月弯孢(Curvularia lunata)、番木瓜生弯孢(Curvularia caricae–papayae)、狼尾草弯孢(Curvularia  penniseti)、塞纳加尔弯孢(Curvularia senegalensis)、车轴草弯孢(Curvularia trifolii),
[0233] Cyclaneusma needle cast,
[0234] 柱孢属,依瑟里柱孢依瑟里变种(Cylindrocarpon  ianthothele var.ianthothele)、卷钩丝壳柱孢(Cylindrocarpon  magnusianum)、香蕉柱孢(Cylindrocarpon musae),
[0235] 小帚梗柱孢属,山茶小帚梗柱孢(Cylindrocladiella camelliae),姬小帚梗柱孢(Cylindrocladiella parva),
[0236] 帚梗柱孢属,石松帚梗柱孢(Cylindrocladium clavatum)、矛尖帚梗柱孢(Cylindrocladium lanceolatum)、秘鲁帚梗柱孢(Cylindrocladium peruvianum)、凤尾草帚梗柱孢(Cylindrocladium pteridis),
[0237] 柱盘孢属,大麻柱盘孢(Cylindrosporium  cannabinum)、核桃柱盘孢(Cylindrosporium juglandis)、覆盆子柱盘孢(Cylindrosporium rubi),
[0238] 黑斑座囊菌属,三叶草黑斑座囊菌(Cymadothea trifolii),
[0239] 壳囊孢属,棕榈壳囊孢(Cytospora palmarum)、球座壳囊孢(Cytospora personata)、甘蔗壳囊孢(Cytospora sacchari)、球状囊壳囊孢(Cytospora sacculus)、松节油壳囊孢(Cytospora terebinthi),
[0240] 环孢菌属,鲁氏环孢菌(Cytosporina ludibunda),
[0241] 毛核菌属,长疏毛核菌(Dactuliophora elongata),
[0242] Davidiella,Davidiella dianthi、Davidiella tassiana,
[0243] 小窦氏霉属,巴布亚小窦氏霉(Deightoniella papuana)、香蕉叶斑小窦氏霉(Deightoniella torulosa),
[0244] 茎点霉属,马可尼茎点霉(Dendrophora marconii)、粉点茎点霉(Dendrophora erumpens),
[0245] Denticularia,Denticularia mangiferae,
[0246] Dermea pseudotsugae,
[0247] 间座壳科,
[0248] 间座壳属,牛蒡子间座壳(Diaporthe arctii)、欧白英间座壳(Diaporthe dulcamarae)、甜樱间座壳(Diaporthe eres)、向日葵间座壳(Diaporthe helianthi)、朗氏间座壳(Diaporthe lagunensis)、洛科间座壳(Diaporthe lokoyae)、瓜间座壳(Diaporthe melonis)、直角间座壳(Diaporthe orthoceras)、有毒间座壳(Diaporthe perniciosa)、菜豆间座壳(Diaporthe phaseolorum)、菜豆间座壳菜花变种(Diaporthe phaseolorum var.caulivora)、菜豆间座壳菜豆变种(Diaporthe phaseolorum var.phaseolorum)、菜豆间座壳大豆变种(Diaporthe phaseolorum var.soja)、野生间座壳(Diaporthe rudis)、田中间座壳(Diaporthe tanakae)、毒性间座壳(Diaporthe toxica),
[0249] Dicarpella,Dicarpella dryina,
[0250] 亚隔孢壳属,悬钩子亚隔孢壳(Didymella applanata)、瓜类亚隔孢壳(Didymella bryoniae)、蚕豆亚隔孢壳(Didymella fabae)、番茄亚隔孢壳(Didymella lycopersici),[0251] 隔孢球壳属,花生生隔孢球壳(Didymosphaeria arachidicola)、台湾隔孢球壳(Didymosphaeria taiwanensis),
[0252] 双极毛孢属,看麦娘双极毛孢(Dilophospora alopecuri),
[0253] 盘菌属,甘蔗盘菌(Dimeriella sacchari),
[0254] 双壳菌属,梨双壳菌(Diplocarpon mespili)、玫瑰双壳菌(Diplocarpon rosae),[0255] 双毛壳孢属,双毛壳孢(Discosia artocreas),
[0256] Discostroma,Discostroma corticola,
[0257] Distocercospora,Distocercospora livistonae,
[0258] 小穴壳菌属,Dothiorella brevicollis、多米尼加小穴壳菌(Dothiorella dominicana)、Dothiorella dulcispinae、杨树小穴壳菌(Dothiorella gregaria),[0259] 内脐蠕孢属,燕麦内脐蠕孢(Drechslera avenacea)、钟状内脐蠕孢(Drechslera campanulata)、德蒙托内脐蠕孢(Drechslera dematioidea)、巨内脐蠕孢(Drechslera gigantea)、大豆内脐蠕孢(Drechslera glycines)、香蕉内脐蠕孢(Drechslera musae–sapientium)、大麦网斑内脐蠕孢斑点专化型(Drechslera teres f.maculata)、威格斯内脐蠕孢(Drechslera wirreganensis),
[0260] Eballistra,Eballistra lineata、Eballistra oryzae,
[0261] 埃巴利黑粉菌科,
[0262] 木齿菌属,Echinodontium  ryvardenii、有色木齿菌(Echinodontium tinctorium),
[0263] 透毛小煤炱,
[0264] 痂囊腔菌属,葡萄痂囊腔菌( ampelina)、甘薯痂囊腔菌( batatas)、橡胶痂囊腔菌( brasiliensis)、白纹痂囊腔菌( leucospila)、兰迪痂囊腔
菌( randii)、蔷薇痂囊腔菌( rosarum)、甘蔗( sacchari)、茶茎痂
囊腔菌( theae)、韦尼塔痂囊腔菌( veneta),
[0265] Endomeliola,
[0266] 内座壳属,根内座壳(Endothia radicalis),
[0267] Endothiella,Endothiella gyrosa,
[0268] 根肿黑粉菌纲,
[0269] 叶黑粉菌属,泽兰叶黑粉菌(Entyloma ageratinae)、大丽花叶黑粉菌(Entyloma dahliae)、椭圆叶黑粉菌(Entyloma ellisii),
[0270] 附球菌属,黑附球菌(Epicoccum nigrum),
[0271] 假囊酵母属,榛树(Eremothecium coryli)、棉假囊酵母(Eremothecium gossypii),
[0272] 白粉菌目,
[0273] 外担菌科,蜜粉外担菌(Exobasidium burtii)、茶网外担菌(Exobasidium reticulatum)、乌饭树外担菌日本变种(Exobasidium vaccinii var.japonicum)、乌饭树‑鼠曲草外担菌(Exobasidium vaccinii–uliginosi)、茶饼外担菌(Exobasidium vexans)、xxophiala alcalophila,
[0274] 外瓶霉属,Exophiala angulospora、Exophiala attenuata、Exophiala calicioides、Exophiala castellanii、皮炎外瓶霉(Exophiala dermatitidis)、Exophiala dopicola、Exophiala exophialae、Exophiala heteromorpha、香港型外瓶霉(Exophiala hongkongensis)、甄氏外瓶霉(Exophiala jeanselmei)、Exophiala lecanii–corni、曼森外瓶霉(Exophiala mansonii)、Exophiala mesophila、Exophiala moniliae、Exophiala negronii、Exophiala  phaeomuriformis、嗜鱼外瓶霉(Exophiala pisciphila)、Exophiala psychrophila、沙门外瓶霉(Exophiala salmonis)、棘状外瓶霉(Exophiala spinifera),
[0275] 层孔菌属,拉曼斯层孔菌(Fomes ),
[0276] 拟层孔菌属,红玫瑰拟层孔菌(Fomitopsis rosea),
[0277] 黑星孢属,pisicola,
[0278] 壳梭孢属,七叶树壳梭孢(Fusicoccum aesculi)、扁桃壳梭孢(Fusicoccum amygdali)、栎树壳梭孢(Fusicoccum quercus),
[0279] 耐碱酵母属,白地霉菌(Galactomyces candidum),
[0280] 灵芝属,褐灵芝(Ganoderma brownii)、迭生灵芝(Ganoderma lobatum)、Ganoderma megaloma、Ganoderma meredithiae、盘旋灵芝(Ganoderma orbiforme)、菲力灵芝(Ganoderma philippii)、无柄灵芝(Ganoderma sessile)、硬皮灵芝(Ganoderma tornatum)、环纹灵芝(Ganoderma zonatum),
[0281] Geastrumia,煤污病菌(Geastrumia polystigmatis),
[0282] 费歇黑粉菌科,
[0283] 费歇黑粉菌目,
[0284] Geosmithia,Geosmithia pallida,
[0285] 白地霉属,白地霉(Geotrichum candidum)、克氏地霉(Geotrichum klebahnii),[0286] 赤霉属,尖突赤霉菌(Gibberella acuminata)、燕麦赤霉菌(Gibberella avenacea)、桑生浆果赤霉菌(Gibberella baccata)、氰赤霉菌(Gibberella cyanogena)、藤仓赤霉菌(Gibberella fujikuroi)、缠结赤霉菌(Gibberella intricans)、虱状赤霉菌(Gibberella pulicaris)、斯帝博赤霉菌(Gibberella stilboides)、Gibberella tricincta、木糖赤霉菌(Gibberella xylarioides)、玉米赤霉菌(Gibberella zeae),[0287] Gibellina,禾谷赤霉菌(Gibellina cerealis),
[0288] 吉尔霉属,Gilbertella persicaria,
[0289] Gjaerumiaceae,
[0290] Gliocladiopsis,Gliocladiopsis tenuis,
[0291] 粘帚霉属,威蒙粘帚霉(Gliocladium vermoeseni),
[0292] 胶尾孢属,高粱胶尾孢(Gloeocercospora sorghi),
[0293] 伏格菌属,茧皮伏格菌(Gloeocystidiellum porosum),
[0294] 粘褶菌属,墨西哥粘褶菌(Gloeophyllum mexicanum)、密粘褶菌(Gloeophyllum trabeum),
[0295] 盘长孢属,双色盘长孢(Gloeoporus dichrous),
[0296] 盘长孢属,洋兰盘长孢(Gloeosporium cattleyae)、茶茎‑茶树盘长孢(Gloeosporium theae–sinensis),
[0297] 小丛壳属,色带小丛壳(Glomerella cingulata)、禾生小丛壳(Glomerella graminicola)、毛盘孢菌(Glomerella tucumanensis),
[0298] 日规壳属,山核桃日规壳(Gnomonia caryae)、Gnomonia comari、Gnomonia dispora、Gnomonia iliau、覆盆子日规壳(Gnomonia rubi),
[0299] 高氏白粉菌属,二孢高氏白粉菌(Golovinomyces cichoracearum),
[0300] 海枣拟黑粉病菌(Graphiola phoenicis),
[0301] 粉座科,
[0302] 硬粘束梗菌属,结实硬粘束梗菌(Graphium rigidum)、红粘囊孢(Graphium rubrum),
[0303] Graphyllium,Graphyllium pentamerum,
[0304] Grovesinia,Grovesinia pyramidalis,
[0305] 裸子属,光亮裸子(Gymnoconia nitens),
[0306] 裸伞属,绒柄裸伞(Gymnopus dryophilus),
[0307] 胶锈菌属,坎氏胶锈菌(Gymnosporangium kernianum)、Gymnosporangium libocedri、尼森胶锈菌(Gymnosporangium nelsonii)、山田胶锈菌(Gymnosporangium yamadae),
[0308] 白赤壳属,Haematonectria haematococca,
[0309] 汉逊酵母属,亚膜汉逊酵母(Hansenula subpelliculosa),
[0310] Hapalosphaeria,Hapalosphaeria deformans,
[0311] 担担孢菌属,香蕉担担孢菌(Haplobasidion musae),
[0312] 卷担菌属,紧凑卷担菌(Helicobasidium  compactum)、长孢卷担菌(Helicobasidium longisporum)、紫卷担菌(Helicobasidium purpureum),
[0313] 螺旋孢属,穆氏螺旋孢(Helicoma muelleri),
[0314] 长蠕孢属,库氏长蠕孢(Helminthosporium  cookei)、茄长蠕孢(Helminthosporium solani),
[0315] 拟腔座孢属,科瑞博拟腔座孢(Hendersonia  creberrima)、茶生拟腔座孢(Hendersonia theicola),
[0316] 猴头菌属,玉髯(Hericium coralloides),
[0317] 担孔菌属,畸担孔菌(Heterobasidion  irregulare)、Heterobasidion occidentale,
[0318] 蜂窝菌属,藓状蜂窝菌(Hexagonia hydnoides),
[0319] 膜座霉属,近缘膜座霉(Hymenula affinis),
[0320] Hyphodermella,Hyphodermella corrugata,
[0321] 丝齿菌属,阿斯帕拉丝齿菌(Hyphodontia aspera)、接骨木丝齿菌(Hyphodontia sambuci),
[0322] 炭团菌属,着色炭团菌(Hypoxylon tinctor),
[0323] 纤孔菌属,阿佐尼纤孔菌(Inonotus arizonicus)、稀有纤孔菌(Inonotus cuticularis)、栎纤孔菌(Inonotus dryophilus)、粗毛纤孔菌(Inonotus hispidus)、路易斯安纳纤孔菌(Inonotus ludovicianus),
[0324] 耙齿菌属,Irpex destruens、乳白耙齿菌(Irpex lacteus),
[0325] 球梗孢属,菜花球梗孢(Kabatiella caulivora),
[0326] 黑穗病,
[0327] 苦瓜枯萎病,
[0328] 炭墩菌属,Kretzschmaria zonata,
[0329] Kuehneola,Kuehneola uredinis,
[0330] Kutilakesa,Kutilakesa pironii,
[0331] 硫色绚孔菌属,哀牢山硫色绚孔菌(Laetiporus ailaoshanensis)、白东尼硫色绚孔菌(Laetiporus baudonii)、Laetiporus caribensis、Laetiporus conifericola、奶油硫色绚孔菌(Laetiporus cremeiporus)、Laetiporus gilbertsonii、Laetiporus huroniensis、Laetiporus montanus、Laetiporus portentosus、Laetiporus zonatus,[0332] Laxitextum,Laxitextum bicolor,
[0333] Leandria,Leandria momordicae,
[0334] 香菇属,虎皮香菇(Lentinus tigrinus),
[0335] 粘褶菌属,篱边粘褶菌(Lenzites betulina)、优美多孔菌(Lenzites elegans),[0336] Leohumicola,Leohumicola atra、Leohumicola incrustata、Leohumicola levissima,
[0337] Leptodontidium,Leptodontidium elatius,
[0338] 半帚孢属,小孢半帚孢(Leptographium microsporum),
[0339] 小光壳属,花生(Leptosphaerulina crassiasca)、三叶草(Leptosphaerulina trifolii),
[0340] 细盾壳属,雷瓦顿细盾壳(Leptothyrium nervisedum),
[0341] 黄斑病菌,苜蓿黄斑病菌(Leptotrochila medicaginis),
[0342] 腐烂病菌,Leucocytospora leucostoma,
[0343] 白壳菌属,澳氏白壳菌(Leucostoma auerswaldii)、Leucostoma canker、昆氏白壳菌(Leucostoma kunzei)、珀松白壳菌(Leucostoma persoonii),
[0344] 内丝白粉菌属,菊科内丝白粉菌(Leveillula compositarum)、豆科内丝白粉菌(Leveillula leguminosarum)、鞑靼内丝白粉菌(Leveillula taurica),
[0345] Limacinula,Limacinula tenuis,
[0346] 壳线孢属,Linochora graminis,
[0347] 散黑穗病,
[0348] 齿脉菌属,淡紫厚齿脉菌(Lopharia crassa),
[0349] 散斑壳属,花楸散斑壳(Lophodermium aucupariae)、施魏散斑壳(Lophodermium schweinitzii),
[0350] 大茎点霉属,芒果大茎点霉(Macrophoma mangiferae)、茶生大茎点霉(Macrophoma theicola),
[0351] 格孢属,科库斯格孢(Macrosporium cocos),
[0352] 稻瘟病菌属,水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、萨氏稻瘟病菌(Magnaporthe salvinii)、
[0353] 斑枯病菌,
[0354] Mamianiella,Mamianiella coryli,
[0355] 微皮伞属,椰子微皮伞(Marasmiellus cocophilus)、狭叶微皮伞(Marasmiellus stenophyllus),
[0356] 皮伞属,毛等皮伞(Marasmius crinis–equi)、甘蔗皮伞(Marasmius sacchari)、小棘带皮伞(Marasmius semiustus)、狭叶皮伞(Marasmius stenophyllus)、坦尼斯皮伞(Marasmius tenuissimus),
[0357] 透孢黑团壳属,沃氏透孢黑团壳(Massarina walkeri),
[0358] Mauginiella,Mauginiella scaettae,
[0359] 栅锈菌属,亚麻栅锈菌(Melampsora  lini)、西方栅锈菌(Melampsora occidentalis),
[0360] 黑盘壳属,刺叶黑盘壳(Melanconis carthusiana),
[0361] 黑盘孢属,胡桃黑盘孢(Melanconium juglandinum),
[0362] 小煤炱属,芒果小煤炱(Meliola mangiferae)、Meliola zangii,
[0363] Meruliopsis,Meruliopsis ambigua,
[0364] 小囊菌属,短柄小囊菌(Microascus brevicaulis),
[0365] 黑粉菌属,Microbotryum silenes–dioicae、花药黑粉菌(Microbotryum violaceum),
[0366] 叉丝壳属,榛树叉丝壳(Microsphaera coryli)、扩散叉丝壳(Microsphaera diffusa)、椭圆叉丝壳(Microsphaera ellisii)、千金子叉丝壳(Microsphaera euphorbiae)、本间叉丝壳(Microsphaera  hommae)、细毛叉丝壳(Microsphaera penicillata)、乌饭树叉丝壳(Microsphaera vaccinii)、小疣叉丝壳(Microsphaera verruculosa),
[0367] 微座孢菌属,核桃微座孢菌(Microstroma juglandis),
[0368] 莫氏黑粉菌属,泡状莫氏黑粉菌(Moesziomyces bullatus),
[0369] Moniliophthora,Moniliophthora roreri,
[0370] 毛链孢属,甘薯毛链孢(Monilochaetes infuscans),
[0371] 盘单毛孢属,榛树盘单毛孢(Monochaetia coryli)、苹果盘单毛孢(Monochaetia mali),
[0372] 明梭孢属,微白明梭孢(Monographella albescens)、瓜明梭孢(Monographella cucumerina)、雪腐明梭孢(Monographella nivalis),
[0373] 单孢霉属,黑点单孢霉(Monosporascus cannonballus)、Monosporascus eutypoides,
[0374] 拟小球壳孢属,榛树拟小球壳孢(Monostichella coryli),
[0375] 毛霉菌属,卷枝毛霉(Mucor circinelloides)、冻土毛霉(Mucor hiemalis)、美杜毛霉(Mucor mucedo)、甲沟毛霉(Mucor paronychius)、梨状毛霉(Mucor piriformis)、总状毛霉(Mucor racemosus),
[0376] 小菇属,秋花小菇(Mycena citricolor),
[0377] 菌刺孢属,槭菌刺孢(Mycocentrospora acerina),
[0378] 根腐病菌属,根腐病菌(Mycoleptodiscus terrestris),
[0379] 亚隔孢壳属,狂犬亚隔孢壳(Didymella rabiei),
[0380] 球腔菌属,洋甘菊球腔菌(Mycosphaerella  recutita)、蔷薇生球腔菌(Mycosphaerella rosicola)、覆盆子球腔菌(Mycosphaerella rubi)、小点霉属‑车前草球腔菌(Mycosphaerella stigmina–platani)、层生球腔菌(Mycosphaerella striatiformans),
[0381] 菌绒孢属,马铃薯菌绒孢(Mycovellosiella concors),
[0382] 钉孢属,黄褐钉孢(Passalora fulva),
[0383] 菌绒孢属,德克普菌绒孢(Mycovellosiella  koepkei)、鞘菌绒孢(Mycovellosiella vaginae),
[0384] Myriogenospora,Myriogenospora aciculispora,
[0385] 漆斑菌属,露湿漆斑菌(Myrothecium roridum)、疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria),
[0386] Naevala,Naevala perexigua,
[0387] Naohidemyces,Naohidemyces vaccinii,
[0388] 丛赤壳属,米红丛赤壳(Nectria cinnabarina)、鲜红丛赤壳(Nectria ditissima)、Nectria foliicola、马姆丛赤壳(Nectria mammoidea)、茂丽丛赤壳(Nectria mauritiicola)、Nectria peziza、Nectria pseudotrichia、根状丛赤壳(Nectria radicicola)、Nectria ramulariae,
[0389] 小赤壳属,皮氏小赤壳(Nectriella pironii),
[0390] 炭垫菌属,扩散炭垫菌(Nemania diffusa)、Nemania serpens,
[0391] 新赤壳属,新赤壳针孢酵母(Neocosmospora vasinfecta),
[0392] Neodeightonia,Neodeightonia phoenicum,
[0393] 新白粉菌属,Neoerysiphe galeopsidis,
[0394] 牛眼果腐病菌属,苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea perennans),
[0395] 葡萄座腔菌属,Neofusicoccum mangiferae,
[0396] 拟粉孢霉属,棉拟粉孢霉(Oidiopsis gossypii),
[0397] 粉孢属,花生粉孢(Oidium arachidis)、番木瓜‑木瓜粉孢(Oidiumcaricae–papayae)、野菊粉孢(Oidium indicum)、芒果粉孢(Oidium mangiferae)、木薯粉孢(Oidium manihotis),
[0398] 油壶菌属,芸苔油壶菌(Olpidium brassicae),
[0399] 脐菇属,Omphalia tralucida,
[0400] 蛇孢腔菌属,鳗鲡蛇孢腔菌(Ophiobolus anguillides)、大麻蛇孢腔菌(Ophiobolus cannabinus),
[0401] 蛇孢炱属,
[0402] 卵孢核盘菌属,杜鹃花卵孢核盘菌(Ovulinia azaleae),
[0403] 锐孔菌属,树皮生锐孔菌(Oxyporus corticola),
[0404] 束丝菌属,德氏束丝菌(Ozonium texanum),
[0405] 月盾霉属,果生月盾霉(Peltaster fructicola),
[0406] 青霉菌属,扩展青霉菌(Penicillium expansum)、绳状青霉菌(Penicillium funiculosum),
[0407] 隔孢伏革属,
[0408] 黑团孢属,拳须黑团孢(Periconia circinata),
[0409] 亚黑团孢属,椰子亚黑团孢(Periconiella cocoes),
[0410] 被孢锈菌属,加州被孢锈菌(Peridermium californicum),
[0411] 多毛壳属,同心多毛壳(Pestalosphaeria concentrica),
[0412] 盘多毛孢属,长刚毛盘多毛孢(Pestalotia longiseta)、杜鹃花盘多毛孢(Pestalotia rhododendri),
[0413] 拟盘多毛孢属,烟色拟盘多毛孢(Pestalotiopsis adusta)、花生拟盘多毛孢(Pestalotiopsis arachidis)、广布拟盘多毛孢(Pestalotiopsis disseminata)、茶褐斑拟盘多毛孢(Pestalotiopsis guepini)、里谱哥那拟盘多毛孢(Pestalotiopsis leprogena)、长刚毛拟盘多毛孢(Pestalotiopsis longiseta)、芒果拟盘多毛孢(Pestalotiopsis mangiferae)、棕榈拟盘多毛孢(Pestalotiopsis palmarum)、聚多拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sydowiana)、茶茎拟盘多毛孢(Pestalotiopsis theae),[0414] 派伦霉属,Peyronellaea curtisii,
[0415] 果腐病菌属,Phacidiopycnis padwickii,
[0416] Phaeochoropsis,Phaeochoropsis mucosa,
[0417] 暗色座腔孢属,Phaeocytostroma iliau、甘蔗暗色座腔孢(Phaeocytostroma sacchari),
[0418] 褐柱丝霉属,甘薯生褐柱丝霉(Phaeoisariopsis bataticola),
[0419] 色链隔孢属,异孢色链隔孢(Phaeoramularia heterospora)、籼稻色链隔孢(Phaeoramularia indica)、木薯色链隔孢(Phaeoramularia manihotis),
[0420] Phaeoseptoria,Phaeoseptoria musae,
[0421] 褐斑病菌属,芒果褐斑病菌(Phaeosphaerella mangiferae)、Phaeosphaerella theae,
[0422] 暗球腔菌属,燕麦暗球腔菌(Phaeosphaeria avenaria)、铺毛暗球腔菌(Phaeosphaeria herpotrichoides)、微观暗球腔菌(Phaeosphaeria microscopica)、颖枯壳针孢(Phaeosphaeria nodorum),
[0423] 拟暗球腔菌属,Phaeosphaeriopsis obtusispora,
[0424] Phaeotrichoconis,Phaeotrichoconis crotalariae,
[0425] 瓶霉菌属,星瓶霉菌(Phialophora asteris)、香石竹瓶霉菌(Phialophora cinerescens)、大豆茎瓶霉菌(Phialophora gregata)、嗜管瓶霉菌(Phialophora tracheiphila),
[0426] 茎点霉属,马兜铃素茎点霉(Phoma clematidina)、哥斯达黎加茎点霉(Phoma costaricensis)、葫芦茎点霉(Phoma  cucurbitacearum)、毁灭性茎点霉(Phoma destructiva)、Phoma draconis、细小茎点霉(Phoma exigua)、细小茎点霉(Phoma exigua)、细小茎点霉小窝变种(Phoma exigua var.foveata)、细小茎点霉(Phoma exigua)、头状茎点霉(Phoma glomerata)、大豆生茎点霉(Phoma glycinicola)、草本茎点霉(Phoma herbarum)、猪茎点霉(Phoma insidiosa)、苜蓿茎点霉(Phoma medicaginis)、微孢子茎点霉(Phoma microspora)、水仙花茎点霉(Phoma narcissi)、云斑茎点霉(Phoma nebulosa)、Phoma oncidii–sphacelati、旋节茎点霉(Phoma pinodella)、菌核茎点霉(Phoma sclerotioides)、斯特色茎点霉(Phoma strasseri),
[0427] 拟茎点霉属,芦笋拟茎点霉(Phomopsis asparagi)、芦笋生拟茎点霉(Phomopsis asparagicola)、麻叶拟茎点霉(Phomopsis cannabina)、咖啡拟茎点霉(Phomopsis coffeae)、大麻拟茎点霉(Phomopsis ganjae)、草莓拟茎点霉(Phomopsis javanica)、大豆拟茎点霉(Phomopsis longicolla)、芒果拟茎点霉(Phomopsis mangiferae)、普鲁诺拟茎点霉(Phomopsis prunorum)、菌核拟茎点霉(Phomopsis sclerotioides)、茶茎拟茎点霉(Phomopsis theae),
[0428] 多胞锈菌属,短尖多胞锈菌(Phragmidium mucronatum)、玫瑰‑芹叶多胞锈菌(Phragmidium rosae–pimpinellifoliae)、覆盆子‑叶多胞锈菌(Phragmidium rubi–idaei)、紫色多胞锈菌(Phragmidium violaceum),
[0429] 黑痣菌属,七里香黑痣菌(Phyllachora banksiae)、大麻黑痣菌(Phyllachora cannabis)、谷类黑痣菌(Phyllachora graminis)、酪梨油黑痣菌(Phyllachora gratissima)、香蕉生黑痣菌(Phyllachora musicola)、仁果黑痣菌(Phyllachora pomigena)、甘蔗黑痣菌(Phyllachora sacchari),
[0430] 球针壳属,
[0431] 叶点霉属,葱芥叶叶点霉(Phyllosticta alliariaefoliae)、花生‑落花生叶点霉(Phyllosticta arachidis–hypogaeae)、甘薯(Phyllosticta batatas)、柑橘叶点霉(Phyllosticta capitalensis)、卡朋叶点霉(Phyllosticta carpogena)、咖啡生叶点霉(Phyllosticta coffeicola)、同心叶点霉(Phyllosticta concentrica)、榛树叶点霉(Phyllosticta coryli)、葫芦叶点霉(Phyllosticta cucurbitacearum)、仙客来叶点霉(Phyllosticta cyclaminella)、游散叶点霉(Phyllosticta erratica)、夏威夷叶点霉(Phyllosticta hawaiiensis)、乳香叶点霉(Phyllosticta lentisci)、木薯叶点霉(Phyllosticta manihotis)、微叶点霉(Phyllosticta micropuncta)、Phyllosticta mortonii、烟草叶点霉(Phyllosticta nicotianae)、棕榈叶点霉(Phyllosticta palmetto)、粟褶孢叶点霉(Phyllosticta penicillariae)、鳄梨叶点霉(Phyllosticta perseae)、伪辣椒叶点霉(Phyllosticta pseudocapsici)、大豆生叶点霉(Phyllosticta sojaecola)、茶茎叶点霉(Phyllosticta theae)、茶生叶点霉(Phyllosticta theicola),[0432] 根腐病菌属,棉根腐病菌(Phymatotrichopsis omnivora),
[0433] 囊孢壳属,破坏性囊孢壳(Physalospora disrupta)、鳄梨囊孢壳(Physalospora perseae),
[0434] 节壶菌属,苜蓿节壶菌(Physoderma alfalfae)、麻风节壶菌(Physoderma leproides)、三叶草节壶菌(Physoderma trifolii),
[0435] 壳锈菌属,白蔹壳锈菌(Physopella ampelopsidis),
[0436] 帽孢锈菌属,笃耨香帽孢锈菌(Pileolaria terebinthi),
[0437] 扇孢属,石榴扇子孢(Piricaudiopsis punicae)、爬树龙扇子孢(Piricaudiopsis rhaphidophorae)、月季扇子孢(Piricaudiopsis rosae),
[0438] 基腐菌属,甘薯基腐菌(Plenodomus destruens)、草木樨基腐菌(Plenodomus meliloti),
[0439] 格孢球壳属,大豆生格孢球壳(Pleosphaerulina sojicola),
[0440] 格孢腔菌属,苜蓿格孢腔菌(Pleospora alfalfae)、甜菜格孢腔菌(Pleospora betae)、草本格孢腔菌(Pleospora herbarum)、番茄格孢腔菌(Pleospora lycopersici)、塔尔达格孢腔菌(Pleospora tarda)、茶茎格孢腔菌(Pleospora theae),
[0441] 肋菊石属,
[0442] 叉丝单囊壳属,苍耳子叉丝单囊壳(Podosphaera fuliginea)、蒲公英叉丝单囊壳(Podosphaera fusca)、白叉丝单囊壳(Podosphaera leucotricha)、斑状叉丝单囊壳(Podosphaera macularis)、斑点叉丝单囊壳(Podosphaera pannosa),
[0443] 蛇孢霉属,石耳素蛇孢霉(Polyscytalum pustulans),
[0444] 卧孔菌属,褐卧孔菌(Poria hypobrunnea),
[0445] 泊氏孔菌属,特佛乐泊氏孔菌(Postia tephroleuca),
[0446] 白粉霉病,
[0447] 假尾孢菌属,棕榈假尾孢菌(Pseudocercospora arecacearum)、麻叶假尾孢菌(Pseudocercospora cannabina)、煤污假尾孢菌(Pseudocercospora fuligena)、铺毛假尾孢菌(Pseudocercosporella herpotrichoides)、根乃拉草假尾孢菌(Pseudocercospora gunnerae)、粉花凌霄属假尾孢菌(Pseudocercospora pandoreae)、蒲德瑞假尾孢菌(Pseudocercospora puderi)、棕竹生假尾孢菌(Pseudocercospora rhapisicola)、茶茎假尾孢菌(Pseudocercospora theae)、葡萄假尾孢菌(Pseudocercospora vitis)、荠属假尾孢菌(Pseudocercosporella capsellae),
[0448] 假旋孢腔菌属,画眉草假旋孢腔菌(Pseudocochliobolus eragrostidis),[0449] Pseudoepicoccum,Pseudoepicoccum cocos,
[0450] 假盘菌属,琼斯假盘菌(Pseudopeziza jonesii)、苜蓿假盘菌(Pseudopeziza medicaginis)、三叶草假盘菌(Pseudopeziza trifolii),
[0451] Pseudoseptoria,Pseudoseptoria donacis,
[0452] 柄锈菌科,
[0453] 膨痂锈菌属,美洲膨痂锈菌(Pucciniastrum americanum)、北极膨痂锈菌(Pucciniastrum arcticum)、柳叶菜膨痂锈菌(Pucciniastrum epilobii)、绣球花膨痂锈菌(Pucciniastrum hydrangeae),
[0454] 束梗孢属,杜鹃花束梗孢(Pycnostysanus azaleae),
[0455] 棘壳孢属,番茄棘壳孢(Pyrenochaeta lycopersici)、洋葱棘壳孢(Pyrenochaeta terrestris),
[0456] 埋核盘菌属,芸苔埋核盘菌(Pyrenopeziza brassicae),
[0457] 枝氯霉属,香蕉枝氯霉(Ramichloridium musae),
[0458] 座枝孢属,高粱座枝孢(Ramulispora sorghi)、高粱生座枝孢(Ramulispora sorghicola),
[0459] 鼻毛癣菌属,树皮生鼻毛癣菌(Rhinocladium corticola),
[0460] 根生壶菌属,禾本根生壶菌(Rhizophydium graminis),
[0461] 根霉属,少根根霉(Rhizopus arrhizus)、甘蓝根霉(Rhizopus circinans)、微孢根霉(Rhizopus microsporus)、米根霉(Rhizopus oryzae),
[0462] 斑痣盘菌属,老虎刺斑痣盘菌(Rhytisma punctatum)、葡萄斑痣盘菌(Rhytisma vitis),
[0463] 硬孔菌属,维科特硬孔菌(Rigidoporus vinctus),
[0464] 座坚壳属,弧曲座坚壳(Rosellinia arcuata)、锥孢座坚壳(Rosellinia bunodes)、褐座坚壳(Rosellinia necatrix)、梭孢座坚壳(Rosellinia pepo),[0465] Saccharicola,Saccharicola taiwanensis,
[0466] 无柄胶炱属,大麻无柄胶炱(Schiffnerula cannabis),
[0467] 裂褶菌属,发酵裂褶菌(Schizophyllum commune),
[0468] 裂孔菌属,淡黄裂孔菌(Schizopora flavipora),
[0469] 裂盾菌属,仁果裂盾菌(Schizothyrium pomi),
[0470] 指疫霉属,大孢指疫霉(Sclerophthora macrospora),
[0471] 核菌属,桂枝核菌(Sclerotium  cinnamomi)、飞燕草核菌(Sclerotium delphinii),
[0472] Scytinostroma,Scytinostroma galactinum,
[0473] 端毛孢属,玛丽端毛孢(Seimatosporium  mariae)、杜鹃花端毛孢(Seimatosporium rhododendri),
[0474] 壳月孢属,亚麻生壳月孢(Selenophoma linicola),
[0475] 隔担菌属,茂物隔担菌(Septobasidium bogoriense)、Septobasidium euryae–groffii、高黎贡山隔担菌(Septobasidium gaoligongense)、多毛隔担菌(Septobasidium pilosum)、多角隔担菌(Septobasidium polygoni)、假花梗隔担菌(Septobasidium pseudopedicellatum)、茶茎隔担菌(Septobasidium theae),Septocyta,Septocyta ruborum,
[0476] 干朽菌属,伏果圆炷菌(Serpula lacrymans),
[0477] 毛球腔菌属,吻状毛球腔菌(Setosphaeria rostrata)、玉米毛球腔菌(Setosphaeria turcica),
[0478] Spencermartinsia,Spencermartinsia pretoriensis,
[0479] 痂圆孢属,花生痂圆孢(Sphaceloma arachidis)、薄荷痂圆孢(Sphaceloma menthae)、鳄梨痂圆孢(Sphaceloma perseae)、一品红痂圆孢(Sphaceloma poinsettiae)、甘蔗痂圆孢(Sphaceloma sacchari)、茶茎痂圆孢(Sphaceloma theae),
[0480] 轴黑粉菌属,玉米丝轴黑粉菌(Sphacelotheca reiliana)、棕丝轴黑粉菌(Sphaerotheca castagnei),
[0481] 亚球壳属,黄草亚球壳(Sphaerulina oryzina)、地黄亚球壳(Sphaerulina rehmiana)、覆盆子亚球壳(Sphaerulina rubi),
[0482] 孢锈菌属,兰花孢锈菌(Sphenospora kevorkianii),
[0483] 环梗孢属,埃塞锯环梗孢(Spilocaea oleaginea),
[0484] 孢堆黑粉菌属,血红石斛孢堆黑粉菌(Sporisorium cruentum)、拟石灰藓孢堆黑粉菌(Sporisorium ehrenbergii)、甘蔗孢堆黑粉菌(Sporisorium scitamineum)、高粱孢堆黑粉菌(Sporisorium sorghi),
[0485] 黄斑病菌属,苜蓿黄斑菌病(Sporonema phacidioides),
[0486] 壳多孢属,燕麦壳多孢(Stagonospora avenae)、草木樨壳多孢(Stagonospora meliloti)、阔边壳多孢(Stagonospora recedens)、甘蔗壳多孢(Stagonospora sacchari)、台南壳多孢(Stagonospora tainanensis),
[0487] Stagonosporopsis,
[0488] 赭黄齿耳属,灯心草赭黄齿耳(Stegocintractia junci),
[0489] 匍柄霉属,苜蓿匍柄霉(Stemphylium alfalfae)、伯乐科匍柄霉(Stemphylium bolickii)、大麻叶匍柄霉(Stemphylium cannabinum)、小球匍柄霉(Stemphylium globuliferum)、番茄匍柄霉(Stemphylium lycopersici)、束状匍柄霉(Stemphylium sarciniforme)、茄匍柄霉(Stemphylium solani)、膨胀匍柄霉(Stemphylium vesicarium),
[0490] 疣丝孢属,花烛生疣丝孢(Stenella anthuriicola),
[0491] 柱头真菌病,
[0492] 小点霉属,嗜果小点霉(Stigmina  carpophila)、棕榈小点霉(Stigmina palmivora)、车前草‑鸡子木小点霉(Stigmina platani–racemosae),
[0493] 座盘菌属,Stromatinia cepivora,
[0494] Sydowiella,Sydowiella depressula,
[0495] 间座壳属,
[0496] 集壶菌属,癌肿集壶菌(Synchytrium endobioticum),
[0497] Tapesia,Tapesia acuformis、Tapesia yallundae,
[0498] 外囊菌属,榛树外囊菌(Taphrina  coryli)、翻白草外囊菌(Taphrina potentillae),
[0499] 亡革菌属,水稻亡革菌(Thanatephorus cucumeris),
[0500] 黑粉菌属,马铃薯黑粉菌(Thecaphora solani),
[0501] 根黑腐霉属,烟草根黑腐霉(Thielaviopsis basicola)、塞西米亚根黑腐霉(Thielaviopsis ceramica),
[0502] 门座孢属,紧凑门座孢(Thyrostroma compactum),
[0503] Tiarosporella,Tiarosporella urbis–rosarum,
[0504] 腥黑粉菌属,狼尾草腥黑粉菌(Tilletia barclayana)、小麦网腥黑粉菌(Tilletia caries)、小麦矮腥黑粉菌(Tilletia controversa)、光滑腥黑粉菌(Tilletia laevis)、小麦腥黑粉菌(Tilletia tritici)、黑麦腥黑粉菌(Tilletia walkeri),[0505] 茁叁腥黑粉菌属,
[0506] 间座壳属,
[0507] 疣双胞锈菌属,桃李多刺疣双胞锈菌(Tranzschelia pruni–spinosae),[0508] 木霉属,康氏木霉(Trichoderma koningii)、Trichoderma paucisporum、松茸木霉(Trichoderma songyi)、Trichoderma theobromicola、黄绿木霉(Trichoderma viride),
[0509] 瘤座孢属,砖红瘤座孢(Tubercularia lateritia),
[0510] Tunstallia,Tunstallia aculeata,
[0511] 核瑚菌属,枯萎核瑚菌(Typhula blight)、易达核瑚菌(Typhula idahoensis)、肉孢核瑚菌(Typhula incarnata)、雪腐病核瑚菌(Typhula ishikariensis)、变体核瑚菌(Typhula variabilis),
[0512] 细基格孢属,群生细基格孢(Ulocladium consortiale),
[0513] 钩丝壳属,
[0514] 夏孢锈菌属,腓尼基夏孢锈菌(Uredo behnickiana)、克氏夏孢锈菌(Uredo kriegeriana)、香蕉夏孢锈菌(Uredo musae)、Uredo nigropuncta、Uredo rangelii,[0515] 条黑粉菌属,冰草条黑粉菌(Urocystis agropyri)、芸苔条黑粉菌(Urocystis brassicae)、隐条黑粉菌(Urocystis occulta),
[0516] 单胞锈菌属,Uromyces apiosporus、Uromyces appendiculatus、甜菜生单胞锈菌(Uromyces beticola)、新疆鹰嘴豆单胞锈菌(Uromyces ciceris–arietini)、石竹单胞锈菌(Uromyces dianthi)、百脉根单胞锈菌(Uromyces euphorbiae)、禾谷单胞锈菌(Uromyces graminis)、钩单胞锈菌(Uromyces inconspicuus)、线纹单胞锈菌(Uromyces lineolatus)、香蕉单胞锈菌(Uromyces musae)、长椭圆单胞锈菌(Uromyces oblongus)、豌豆单胞锈菌(Uromyces pisi–sativi)、Uromyces  苜蓿单胞锈菌(Uromyces medicaginis)、白车轴草单胞锈菌(Uromyces trifolii–repentis)、蚕豆单胞锈菌(Uromyces viciae–fabae),
[0517] 尾囊壶菌属,麻风尾囊壶菌(Urophlyctis  leproides)、三叶草尾囊壶菌(Urophlyctis trifolii),
[0518] 黑粉菌目,
[0519] 黑粉菌属,燕麦黑粉菌(Ustilago avenae)、茭白黑粉菌(Ustilago esculenta)、大麦坚黑粉菌(Ustilago hordei)、玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)、黑质黑粉菌(Ustilago nigra)、裸黑粉菌(Ustilago nuda)、甘蔗黑粉菌(Ustilago scitaminea)、小麦黑粉菌(Ustilago tritici),
[0520] Vankya,Vankya ornithogali,
[0521] 膏药病,
[0522] 维罗纳霉菌属,香蕉维罗纳霉菌(Veronaea musae),
[0523] 轮枝孢属,黑白轮枝孢(Verticillium albo–atrum)、苜蓿轮枝孢(Verticillium alfalfae)、大丽轮枝孢(Verticillium dahliae)、爱克萨轮枝孢(Verticillium isaacii)、克氏轮枝孢(Verticillium klebahnii)、长孢轮枝孢(Verticillium longisporum)、Verticillium nonalfalfae、鳄梨轮枝孢(Verticillium theobromae)、枯萎病轮枝孢(Verticillium wilt)、Verticillium zaregamsianum,
[0524] Waitea,Waitea circinata,
[0525] Westea,
[0526] 小麦叶锈病,
[0527] 小麦霉病,
[0528] Wuestneiopsis,Wuestneiopsis georgiana,
[0529] 干脐菇属,Xeromphalina fraxinophila,
[0530] Zopfia,Zopfia rhizophila,
[0531] 接合酵母属,拜氏接合酵母(Zygosaccharomyces bailii)、罗伦丁接合酵母(Zygosaccharomyces florentinus),
[0532] Zythiostroma。
[0533] 优选地,本发明所涵盖的真菌、卵菌或细菌与作物植物对如下所示:
[0534] 小麦(Triticum sativum)
[0535] 麦角菌(Claviceps purpurea)、白粉病菌(Erysiphe graminis)、燕麦镰刀菌(Fusarium avenaceum)、黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、Fusarium langsethiae、梨孢镰刀菌(Fusarium poae)、假禾谷镰刀菌(Fusarium pseudograminearum)、小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis)、颖枯壳小球腔菌(Leptosphaeria nodorum)、微座孢属(Microdochium spp.)、禾生球腔菌(Mycosphaerella graminicola)、Oculimacula acuformis、Oculimacula yallundae、隐匿柄锈菌(Puccinia )、条形柄锈菌(Puccinia striiformis)、偃麦草核腔菌
(Pyrenophora tritici–repentis)、禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)、微座孢属(Microdochium)和Zymoseptoria tritici。
[0536] 玉米(Zea mays)
[0537] 禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、层生镰刀菌(Fusarium proliferatum)、亚黏团镰刀菌(Fusarium subglutinans)、轮状镰刀菌(Fusarium verticillioides)[0538] 大麦(Hordeum vulgare)
[0539] 小麦白粉病菌(Blumeria graminis)、镰刀菌属(Fusarium spp.)、网斑病菌(Pyrenophora teres)、Ramularia collo–cygni、大麦云纹病菌(Rhynchosporium secalis)
[0540] 水稻(Oryza sativa)
[0541] 宫部旋孢腔菌(Cochliobolus miyabeanus)、Fusarium 稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、Microdochium oryzae、稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)、稻枯斑丝核菌(Rhizoctonia oryzae)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、鞘腐败病菌(Sarocladium oryzae)、稻曲病菌(Ustilaginoides virens)
[0542] 马铃薯(Solanum tuberosum)
[0543] Alternia alternata、茄链格孢菌(Alternaria solani)、晚疫病菌(Phytophtora infestans)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)
[0544] 葡萄(Vinis vitifera)
[0545] 灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、板口线虫白粉菌(Erysiphe necator)、葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)、葡萄球座菌(Guignardia bidwelli)、板口线虫白粉菌(Erisyphe necator)、Diplodia seriata
[0546] 大豆(Glycine max)
[0547] Cercopora kikuchii、黑线炭疽菌(Colletotrichum dematium)、多主棒孢霉(Corynespora cassiicola)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、腐霉属(Pythium spp.)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、大豆壳针孢(Septoria glycines)
[0548] 苹果树(Malus domestica)
[0549] 苹果褐腐病菌(Monilia fructigena)、桃褐腐丛梗孢(Monilia laxa)、Pezzicula alba、Pezzicula malicorticis、苹果黑星病菌(Venturia inaequalis)
[0550] 番茄(Lycopersicon esculentum)
[0551] 晚疫病菌(Phytophtora infestans)
[0552] 豆类(Phaseolus vulgaris)
[0553] 菜豆锈病菌(Uromyces appendiculatus)
[0554] 萝卜(Raphanus sativus)
[0555] 链格孢菌(Alternaria brassicae)
[0556] 所有水果和蔬菜
[0557] 灰葡萄孢(Botrytis cinerea)
[0558] 草莓(Fragaria sp.)
[0559] 炭疽病菌(Colletotrichum acutatum)
[0560] 胡萝卜(Daucus carota)
[0561] 链格孢菌(Aternaria alternata)、黑斑病菌(Alternaria dauci)、根生链格孢菌(Alternaria radicina)
[0562] 桃(Prunus persica)和杏(Prunus armeniaca)
[0563] 美澳核果褐腐串珠霉(Monilia fructicola)、桃褐腐病菌(Monilia fructigena)、桃褐腐丛梗孢(Monilia laxa)
[0564] 特别优选地,本发明所涵盖的真菌或细菌与作物植物对如下文所示:
[0565] 小麦:禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、微座孢属(Microdochium)和Zymoseptoria tritici
[0566] 葡萄:灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、板口线虫病白粉菌(Erysiphe necator)、葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)、葡萄球座菌(Guignardia bidwelli)、板口线虫病白粉菌(Erysiphe necator)、Diplodia seriata
[0567] 马铃薯:Alternia alternata、茄链格孢菌(Alternaria solani)、晚疫病菌(Phytophtora infestans)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)
[0568] 番茄:晚疫病菌(Phytophtora infestans)
[0569] 制备方法
[0570] 本发明还涉及用于制备前沟藻属的一种或多种微藻的细胞提取物的方法,其特征在于所述方法具有下述步骤:
[0571] ‑从前沟藻属的一种或多种微藻收集新鲜细胞
[0572] ‑任选地,冷冻和/或冷冻干燥所述细胞
[0573] ‑以1:200至1:2的冻干物或生物质/溶剂重量比将所述新鲜的或冷冻的细胞或所述冻干物重悬在无机或有机溶剂中
[0574] ‑任选地,冷冻干燥所获得的所述提取物。
[0575] “无机溶剂”指水和水性(水)溶液和“有机溶剂”指烃类溶剂(脂肪族、芳香族)、含氧溶剂(醇、酮、酸、酯和醚)、含卤素溶剂(二氯甲烷、氯仿)以及这些溶剂以任意混溶比例的混合物。
[0576] 优选地,将使用水或含氧溶剂,优选C1‑C4醇,如甲醇或乙醇。
[0577] 在有机溶剂的情况下,可以在4至60℃之间的温度下,优选地在18至60℃之间的温度下,特别优选地在室温下进行混悬。
[0578] 优选地,在60℃以上,优选地80℃以上,特别优选地90℃以上的温度下使用无机溶剂对所述新鲜的或冷冻的细胞或者冻干物进行混悬。优选地,使用无机溶剂对所述新鲜的或冷冻的细胞或者冻干物的混悬持续少于5分钟,优选地少于3分钟,优选地少于1分钟。优选地,然后将温度迅速复温至室温。优选地,通过将混合物置于冷的环境中(例如,接近0℃的温度下)或者在接近0℃的温度下向混合物中加入无机溶剂使混合物的温度返回至接近室温。
[0579] 通过向所述新鲜的或冷冻的细胞或者所述冻干物中加入在处理前预热至所需温度的溶剂进行混悬,或者加入溶剂并将重悬的混合物调整至所需温度。
[0580] 优选地,以冻干物或生物质/溶剂1:100至1:50之间的重量比,使用无机或有机溶剂对所述新鲜的或冷冻的细胞或所述冻干物进行重悬。
[0581] 使得温度“迅速”返回至室温指在小于5分钟内,优选地小于3分钟内,优选地小于1分钟内。
[0582] 本发明还涉及通过用于制备本发明的细胞提取物的方法获得的前沟藻属的一种或多种微藻的细胞提取物或冻干物。
[0583] 有利地,所收集和提取的新鲜细胞来自适于所关注的细胞株的温度、光照期和盐4 6
度条件下的细胞培养物,细胞浓度可达5·10个细胞/ml至5·10个细胞/ml之间,优选地细
5 6
胞浓度为5·10个细胞/ml至1·10个细胞/ml之间。
[0584] 将细胞培养5至20天。
[0585] 光强度为40μE至200μE之间,优选地70μE至100μE之间。
[0586] 培养温度通常为17℃至25℃之间。
[0587] 日/夜光照期优选地在8h/16h至16h/8h之间。
[0588] 最低盐度是15ppt。
[0589] 根据特定的实施方式,强壮前沟藻(Amphidinium carterae)的培养条件如下:在天然或人工海水培养基中培养细胞,温度为17至25℃之间,日/夜循环为8h/16h至16h/8h之间,优选16h/8h。
[0590] 控制方法
[0591] 本发明还涉及用于控制作物植物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的方法,所述方法包括向作物植物营养前沟藻属的一种或多种微藻的细胞提取物或者根据本发明的提取物。
[0592] 这种控制可以是治愈性的或预防性的,优选治愈性的。
[0593] 本发明还涉及用于控制作物植物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的方法,所述方法包括下述步骤:
[0594] ‑临用时,将根据本发明的细胞提取物与水以1:4至1:800的比例混合
[0595] ‑将这种混合物应用于作物植物和/或使用所述混合物涂覆所述种子。
[0596] 本发明还涉及用于控制作物植物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的方法,所述方法包括下述步骤:
[0597] ‑以5至500g/L之间的质量浓度,优选地50至400g/L之间的质量浓度,优选地100至200g/L之间的质量浓度用水或用有机或无机溶剂以1:200至1:2的重量比将前沟藻属的一种或多种微藻的细胞培养物的冻干物重悬,
[0598] ‑临用时,与水以1:4至1:800的比例混合,
[0599] ‑将所获得的所述提取物应用于作物植物和/或使用所述混合物涂覆所述种子。
[0600] 在水中或在无机溶剂中混悬的情况下,优选在60℃以上的温度下进行混悬,然后通过在水中以1:2至1:50的比例稀释将温度迅速返回至接近室温。
[0601] 可以通过本领域技术人员公知的任何方法实现应用于作物植物,以达到受到真菌和/或细菌影响的植物部分。
[0602] 以0.005g/L至20g/L之间,优选0.5g/L至10g/L之间,特别优选1g/L至5g/L之间的剂量应用提取物。
[0603] 可以采用能够使得活性药剂与种子保持接触的本领域公知的任何技术进行种子的涂覆。
[0604] 例如,可以通过粉化或喷雾进行涂覆。
[0605] 例如,涂层可以包含配方和添加剂。
[0606] 配方用于使活性物质以非常低的剂量在整个产品施用过程中以相等且恒定的比例施用于种子并保持在种子上。
[0607] 配方包括:有机溶剂或水、分散剂、乳化剂、表面活性剂或润湿剂、染料等。
[0608] 表面活性剂和乳化剂具有将两种不相容的液体结合并使其保持稳定的性质。
[0609] 可以将各种助剂应用在种子上。薄膜涂层对应于微孔薄膜在种子表面上的应用。其不改变种子的形状或尺寸。其改善了处理的覆盖范围和均匀性。当农民使用种子时,通过抑制灰尘和促进种子进入播种机,使其在播种期间更易于处理。其改善培养条件下活性物质的作用。涂层改变了种子的形状、尺寸和重量。其改善了播种的准确度。
[0610] 根据本发明的用于控制作物植物和种子的致病真菌和/或细菌的方法特别适于镰刀菌病,特别是表1中列出的镰刀菌病。
[0611]
[0612]
[0613]
[0614]
[0615] 表1:镰刀菌病的总结
[0616] 根据本发明的用于控制作物植物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的处理方法特别适于下述真菌或细菌和作物植物对:
[0617] 小麦:禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、雪霉微座孢(Microdochium nivale)和Zymoseptoria tritici
[0618] 葡萄:灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)、葡萄球座菌(Guignardia bidwelli)、板口线虫病白粉菌(Erysiphe necator)、Diplodia seriata
[0619] 苹果树:苹果黑星病菌(Venturia inaequalis)
[0620] 香蕉树:尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和香蕉黑条叶斑病菌(Mycosphaerella fijiensis)
[0621] 实施例
[0622] 材料和方法
[0623] 实施例1:微藻的培养
[0624] 微藻强壮前沟藻(Amphidinium carterae)AC208株来自Algobank(Caen),以及微藻小三毛金藻(Prymnesium  parvum)RCC 1436株和三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum)CCMP 632株来自Roscoffmarine微生物库(RCC:Roscoff培养物保藏)。在L1人工海水(https://ncma.bigelow.org/algal–recipes)中培养这些微藻,19℃,12h/12h日/夜循环。使用的光强度为100μE。在指数生长期结束时通过离心(3000RPM,15min)收集生物质。冷冻所得到的细胞球团,然后使用实验室冷冻干燥机(Alpha 1‑2Ldplus,Labconco)对其进行冷冻干燥,以长期稳定保存活性物质。冷冻干燥后,将干物质称重。
[0625] 实施例2:提取物的制备
[0626] 为了从实施例1的干物质中提取活性物质,将20mg干物质重悬于100℃的1mL蒸馏水中。在室温(20‑25℃)下孵育2分钟后,将提取物储存在冰上,然后在室温下10 000RPM离心5min。将含有活性物质的上清液在液氮中冷冻,以长期保存其抗真菌性质。
[0627] 实施例3:禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)出芽测试
[0628] 在“绿豆”耗竭培养基中培养禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)的孢子。通过在6
Miracloth(Calbiochem)上过滤将孢子与菌丝体分离,离心,然后以1.6·10个孢子/mL重悬。在存在对照溶液或不同浓度的A.carterae提取物的条件下孵育约16 000个孢子。在室温下孵育10min后,将孢子置于载玻片上6小时后进行出芽计数或者置于有盖培养皿中72小时后观察菌丝体的生长情况。
[0629] 测试
[0630] 对属于三个主要浮游植物门甲藻、定鞭金藻和硅藻的多种海洋微生物物种的提取物进行了对隐花植物真菌的潜在抗真菌活性测试。这些微藻具有产生毒素的能力,使其能够通过与其他物种竞争而强烈增殖,因此是可能表现出抗真菌活性的潜在分子来源。根据实施例2获得每种微藻的提取物。为检测这些提取物对植物致病真菌存活的作用,将冷冻‑干燥的提取物重悬在水中并与给定数量的禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)的孢子接触。
[0631] 实施例4:禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)孢子的生长和发芽的抑制[0632] 72小时后检测F.graminearum在存在这些提取物的琼脂培养基上形成菌丝体的能力。在所测试的三种提取物中(小三毛金藻(Prymnesium parvum)、强壮前沟藻(Amphidinium carterae)和三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum)),仅根据实施2的强壮前沟藻(Amphidinium carterae)提取物具有对菌丝体形成的抑制作用(图1A)。
[0633] 为了证实该结果,通过将孢子与稀释成不同浓度的根据实施2的A.carterae提取物孵育进行剂量‑应答检测(图1B)。证明了该提取物具有剂量依赖性的抗真菌活性,其最小抑制浓度(MIC)为0.4g/L(图1B)。
[0634] 最后,测试了根据实施例2的A.carterae提取物对F.graminearum孢子发芽的抑制作用。与提取物孵育6小时后获得的体外结果表明2g/L的浓度完全抑制了孢子发芽(图1C),提示提取物抑制了F.graminearum孢子发芽和菌丝体生长。
[0635] 实施例5:冷冻‑干燥A.carterae提取物对提取物抗真菌活性的影响
[0636] 发明人确定了冷冻‑干燥A.carterae提取物是否抑制了其抗真菌活性。为此,根据实施例2提取了A.carterae培养物,然后将一半提取物在–80℃下冷冻,将另一半提取物冷冻‑干燥,然后在蒸馏水中重悬。根据实施例3,在不同浓度下测试这些提取物抑制F.graminearum生长的能力。结果表明在冷冻提取物或冷冻干燥提取物这两种情况下,在1g/L的浓度下就获得了F.graminearum生长的完全抑制并且持续高达5g/L(图1D)。总之,冷冻‑干燥A.carterae提取物不会以任何方式影响其抗真菌活性。
[0637] 实施例6:对在受控条件下感染的小麦植物的测试
[0638] 在受控条件下使用F.graminearum孢子接种小麦麦穗,然后在24小时后应用实施例2的A.carterae提取物。在感染后20天(400°D)和22天(450°D)读取症状(图2A)。在下述两种情况下,报告有症状穗的数量(疾病发生率)和症状评分(疾病严重程度,0‑9分):不存在(对照)和存在实施例2的提取物的条件下。与对照处理相比,存在提取物显著减少受疾病攻击的穗的数量(减少约30%)。此外,这些穗显示出的症状具有降低的严重程度(降低约50%)(图2B)。这些结果表明,实施例2的A.carterae提取物在体外和在植物中的条件下均对小麦致病真菌的生长具有显著的抗真菌活性。
[0639] 实施例7:对几个科的葡萄植物病原体的检测:导致灰霉病的子囊菌灰葡萄孢(Botrytis cinerea),导致霜霉病的卵菌葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola),导致白粉病的子囊菌板口线虫病白粉菌(Erysiphe necator)和木材病esca的致病因子之一的Diplodia seriata。
[0640] 在1g/L的浓度下,实施例2的A.carterae提取物完全抑制了分离的叶片上生长的P.viticola(图3A,作图),而在相同条件下,提取物对E.necator的生长没有影响(图3A,右图)。对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)进行了体外检测,结果表明5g/L浓度的提取物完全抑制了B.cinerea的生长(图3B)。在分离的葡萄叶片上确认了提取物对B.cinerea的抗真菌活性(图3B)。此外,对导致葡萄藤esca的不同科的真菌进行了体外测试。结果表明浓度为2g/L的提取物强烈抑制了这些真菌的生长(图3C)。
[0641] 实施例8:对Microdochium majus、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、Zymoseptoria tritici、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)的体外测试
[0642] 为了确定根据实施例2的A.carterae提取物是否对广谱植物真菌均具有抗真菌活性,在导致镰刀菌病的其他真菌:尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)(香蕉树枯萎病)和微座孢属(小麦镰刀菌枯萎病)以及导致其他重要的小麦疾病(由Zymoseptoria tritici引起的Septoria斑枯病)的真菌上进行了测试。还在两个马铃薯病原体上进行了测试:担子菌立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和卵菌马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)。在所有情况下,根据实施例2的A.carterae提取物在体外条件下均能够强烈限制真菌和卵菌的生长(表2和6)。
[0643] 表2:微藻提取物在体外对在25℃下在PDB培养基上培养并在24和72小时期间避光孵育的F.graminearum大分生孢子的功效
[0644]
[0645] a通过测量96孔微量培养板的每个孔中在590nm下的光密度确定在25℃下在PDB培养基上避光孵育24和72小时后微藻提取物的杀真菌功效。每个值对应于每个测试条件的3次重复的平均值。
[0646] 表3:微藻提取物在体外对Zymoseptoria tritici Mg  StA株、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)Rsol AG3株、Microdochium majus Mmaj E11株以及禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)Fg 1株的功效。
[0647]
[0648] a通过测量96孔微量培养板的每个孔中在590nm下的光密度确定在25℃下在PDB培养基上避光的条件下针对M.majus和F.graminearum孵育72小时后或者针对Z.tritici和R.solani孵育5天后微藻提取物的杀真菌功效。每个值对应于每个测试条件的3次重复的平均值。
[0649] 表4:微藻提取物针对Zymoseptoria tritici Mg  StA株、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)Rsol AG3株、Microdochium majus Mmaj E11株以及禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)Fg 1株的ED50和MIC(mg活性物质/ml)
[0650]
[0651] aED50:将所检测病原体的发育减少50%的微藻提取物的有效剂量;MIC(最小抑制浓度):100%抑制所检测病原体的发育的最低浓度。每个值对应于每个测试条件的3次重复的平均值±标准偏差。
[0652] 表5:微藻提取物在体外对马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)PiF14株,香蕉尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)CBS 102013株的疗效。
[0653]
[0654] a通过测量96孔微量培养板的每个孔中在590nm下的光密度确定3种病原体在20℃下避光孵育72小时后的微藻提取物的杀真菌功效。每个值对应于每个测试条件的3次重复的平均值。
[0655] 表6:微藻提取物针对马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)PiF14株,香蕉尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)CBS 102013株的ED50和MIC(mg活性物质/ml)
[0656]
[0657] aED50:将所检测病原体的发育减少50%的微藻提取物的有效剂量;MIC(最小抑制浓度):100%抑制所检测病原体的发育的最低浓度。每个值对应于每个测试条件的3次重复的平均值±标准偏差。
[0658] Bn.i.:无抑制,即使在所检测的最高浓度5mg/ml下。
[0659] 实施例9:针对苹果黑星病(苹果黑星菌(Venturia inaequalis))在体外和植物(苹果植株)中的检测
[0660] 在有盖平皿中加入苹果黑星菌(Venturia inaequalis)的孢子2小时前或3小时后加入提取物D,检测5g/L提取物D的抗真菌活性。孵育48小时后,评价孢子出芽的百分率。与加入水不同的是,在接种2小时前或3小时后加入提取物D完全抑制了V.inaequalis孢子出芽。
[0661] 根据下述方案实施在苹果植株上进行的在植物中的检测:
[0662] 2个检测模式:在接种2小时前喷洒5g/L的提取物D(之前加入提取物)和在接种3小时后喷洒5g/L的提取物D(之后加入提取物)
[0663] 3个对照模式:
[0664] ο2个未经处理的对照模式(在喷洒产品的同日喷洒水)(之前加入水和之后加入水)
[0665] o1个使用参照杀真菌剂的模式(克菌丹)
[0666] 使用100 000个孢子/ml的苹果黑星菌(Venturia inaequalis)菌株人工接种植物。
[0667] 在接种后4天记录疤痕症状(目测评价疤痕面积%)
[0668] 生物材料:
[0669] ‑从土球中大约3周大的苹果幼苗中获得的小植株‑来自嘎拉品种的果实(在种植嘎啦和伊思达的果园中收获的苹果)
[0670] ‑在玻璃纸上的苹果黑星菌(Venturia inaequalis)孢子‑EUB04菌株每种模式有置于3个箱子中的12个植株
[0671] D+9、D+14、D+17、D+21:记录受影响叶面积的百分率(从0至100%,以10%递增)[0672] 由于不满足残差方差的正态性和同质性条件,因此进行了非参数Kruskal‑Wallis检验。这项检验是显著的,施用基于Tukey距离的Nemenyi检验对不同模式的中位数进行配对比较。使用R软件进行这些分析(3.1.2版)。
[0673] 应用实施例2的提取物不会导致植物的植物毒性:无坏死,未观察到萎黄或水疱反应。
[0674] 在D9的观察结果:5种模式均无疤痕症状。
[0675] 在未经处理的对照上(之前加入水和之后加入水),在D21时,出现的疤痕达的中位数达到50至60%。无论日期如何,在两个水模式之间无显著性差异。
[0676] 在使用克菌丹处理的对照上,未观察到出现疤痕。
[0677] 在治疗模式上(之前加入提取物和之后加入提取物),无论观察日期如何,出现的疤痕均显著少于未经处理的对照。无论观察日期如何,在之前加入提取物的模式和克菌丹模式之间不存在显著性差异。接种14天后,在之后加入提取物的模式和克菌丹模式之间也不存在显著性差异,但是在接种后17和21天,与克菌丹模式相比,之后加入提取物的模式具有明显更多的疤痕。之前加入提取物和之后加入提取物之间不存在显著性差异。
[0678] 当在接种前2小时或在接种后3小时应用时,A.carterae提取物对疤痕具有非常好的功效。
[0679] 实施例10:在不同炭疽菌属菌种上进行的在植物中的检测
[0680] 为确定A.carterae提取物是否对子囊菌炭疽菌属具有生物学作用,对两个不同的炭疽菌属菌种进行了检测:果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)和西瓜炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)。对于这两个菌种进行了相同的程序:将给定浓度的(从1至6
10g/L)一定体积的提取物或一定体积的水与含有2·10 个果生炭疽菌(Colletotrichum 
6
fructicola)孢子或2·10个西瓜炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)孢子的体积混合,然后分别在分离的草莓或黄瓜叶片上加入10μl的斑点。将叶片置于在潮湿氛围中的有盖平皿中,在培养室中在24℃下培养6天(日/夜;14h/12h)。结果表明浓度为1g/L的A.carterae提取物完全抑制这两种炭疽菌属菌种的生长。
[0681] 实施例11:禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)分生孢子的壁和质膜的完整性检测
[0682] 在存在根据实施例2的提取物(5g/L)或在60℃以上的温度下灭活的相同提取物(5g/L)的条件下将F.graminearum分生孢子孵育1小时。加入碘化丙啶以确定孢子的膜完整性。
[0683] 照片显示了在存在根据实施例2的提取物(5g/L)的条件下具有分生孢子的碘化丙啶染色,在存在相同的灭活提取物(5g/L)的条件下不具有染色。
[0684] 这些结果表明根据实施例2的提取物通过显著增加禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)分生孢子的壁和质膜的多孔性发挥作用。
[0685] 所有这些结果表明无论是在体外还是在植物中的条件下来自A.carterae的提取物对广谱的植物致病真菌均具有强大的抗真菌活性。
[0686] 实施例12:提取物D的HPLC级分以及检测所获得的不同级分的抗真菌活性[0687] 为了尝试表征在A.carterae的提取物中存在的哪些分子负责抗真菌活性,选择了生物导向的分级分离策略:在HPLC柱上分级分离A.carterae提取物,并对每种级分检测针对F.graminearum孢子的杀生物活性,以确定哪些级分中含有负责抗真菌活性的分子。
[0688] 将200mg冷冻‑干燥的细胞溶解在1mL甲醇中。在4400rpm下离心10min后,回收上清液并将回收的总醇液相在纸上过滤,然后在旋转蒸发仪中在低温下蒸发溶液,收集48.5mg的提取产物。在F.graminearum孢子上进行活性测试以确认A.carterae提取物的活性(图4A)。
[0689] 根据以下方案,使用Thermo Scientific Ultimate 3000高效液相色谱在反相C18柱上进行提取物的活性、半制备分级分离实验:
[0690] 以5g/L将A.carterae提取物溶解在甲醇中。对提取物应用下述条件:
[0691] 流速:2.5mL/min。
[0692] 柱:反相C18:L=250mm;I.D.=10mm;P.D.=5μm。
[0693] 进样体积:150μL。
[0694] 进样温度:24℃。
[0695] 检测波长:280nm。
[0696] 梯度程序如下表7中所述。
[0697] 表7:最佳半制备溶剂梯度程序
[0698] 溶剂A:Milli–Q水+0.1%甲酸;溶剂B:甲醇。
[0699]
[0700] 在这些条件下获得的色谱图如图4B中所示。如图4B中所示,形成了5个级分F1至F5,每个主峰对应于一个级分。使用5mg/ml的每个级分对F.graminearum的生长进行活性检测。结果表明仅级分F1仍具有杀生物活性(图4C);对于该级分确定得到的MIC为0.75mg/ml(图4D)。
[0701] 根据下述方案对级分F1进行新的分级分离:
[0702] 以5g/L将提取物F1溶解在甲醇中。对提取物D应用下述条件:
[0703] ‑流速:2.5mL/min。
[0704] ‑柱:反相C18:L=250mm;I.D.=10mm;P.D.=5μm。
[0705] ‑进样体积:150μL。
[0706] ‑进样温度:24℃。
[0707] ‑检测波长:280nm。
[0708] ‑梯度程序如下表8中所述。
[0709] 表8:最佳半制备溶剂梯度程序
[0710] 溶剂A:Milli–Q水+0.1%甲酸;溶剂B:甲醇。
[0711]
[0712] 在这些条件下获得的色谱图如图5A中所示。如图5A中所示,形成了5个级分F1‑1至F1‑5,主峰对应于级分F1‑2。使用5mg/ml的每个级分对F.graminearum的生长进行活性检测。结果表明仅级分F1‑2和F1‑3具有杀生物活性(图5B);针对级分F1‑2确定的MIC为0.75mg/ml(图5C)。
[0713] 实施例13:对级分F1‑2的质谱分析
[0714] 为了更好地表征级分F1‑2中存在的分子,在下述条件下进行质谱分析:
[0715] 在QStar Elite质谱仪(Applied Biosystems)的喷入模式下进行实验。
[0716] 离子化模式:正离子模式电喷雾(ESI)
[0717] 电喷雾针电压:室温下4500V
[0718] 进样条件:将20μL样品溶解在甲醇中,使用甲醇的流速为400μL/min
[0719] 扫描范围:100至2000道尔顿
[0720] 图6A显示了对收集的F1‑2中的目标分子进行正离子模式电喷雾离子化获得的质谱图。
[0721] 所确定的准确质量为1381.8276道尔顿。其对应于离子化过程中形成的钠加合物+([M+Na])。在减去钠的质量23道尔顿后,化合物分子峰的质量为1358.8Da。
[0722] 对准确质量的全面分析使得可以确定与该质量相关的一个或多个经验式,误差为5ppm。排除不切实际的建议后,选择的经验式为C71H122O24。
[0723] 通过串联质谱法对在1381.8276Da的峰进行了全面分析。质谱图如图6B中所示。有几个峰(圈出的峰‑图6B)与amphidinol 18片段化产生的峰相似(7)。
[0724] 实施例14:级分F1‑2的核磁共振(NMR)分析
[0725] 为确定分子量为1358.8Da的分子的结构,根据下述程序进行了NMR分析:
[0726] 收集对应于峰F1‑2的样品,然后将其完全溶解在约350μL的氘代甲醇(MeOD4)中。
[0727] 使用配有多核探针的Bruker Avance 14.1T光谱仪进行实验。使用可以从Bruker序列文库中获得的脉冲序列获取一维和二维氢谱和碳谱。
[0728] 采集条件如下所示:
[0729] –1H:扫描次数:512;脉冲:8μs;采集:5.0s;释放:1.0s
[0730] –13C DEPT135:扫描次数:44666;脉冲:12μs;采集:1.0s;释放:3.0s[0731] –HSQC:扫描次数:64;512增量
[0732] –HMBC:扫描次数:48;512增量
[0733] –COSY:扫描次数:56;256增量
[0734] –TOCSY:扫描次数:48;256增量
[0735] 13C DEPT135序列是根据直接结合质子的数量分选碳的实验:CH3和CH>0和CH2<0。
[0736] 相关光谱(COSY)序列是用于识别在间隔2个或3个键的标量相互作用中的质子的2D同核实验。
[0737] 总相关光谱(TOCSY)序列是用于识别在间隔3个或更多个键的标量相互作用中的质子的2D同核实验。
[0738] 异核单量子相关(HSQC)序列是显示碳与直接连接的质子之间的直接相互作用的2D异核实验。
[0739] 异核多键相关(HMBC)序列是显示质子与由2或3个键间隔分开的碳之间的相关性的2D异核实验。
[0740] 通过傅里叶变换处理1D光谱。通过在这两个维度的傅里叶变换处理光谱。
[0741] 基于所得到的结果,采集的1H光谱如图7A中所示,显示了在1至6ppm之间的大光谱窗口上分布的一系列峰。这确证了所研究的化合物含有脂肪族和烯属质子。这些迁移还提示存在诸如氧的杂原子。
[0742] 13C DEPT135光谱(图7B)显示了在13至211ppm之间的光谱窗口中的一系列峰。HMBC和HSQC 2D序列显示了碳是如何链接在一起的。COSY和TOCSY 2D序列基于质子迁移和相关性确证了结构序列。
[0743] 所观察到的不饱和度和环的数量与基于其经验式的分子计算的数量一致(=11):
[0744] Ni=(2nC+2‑nH+nN‑nX)/2
[0745] 其中:nC:碳原子数,nH:氢原子数;nN:氮原子数,nX:卤原子数。
[0746] 11个不饱和度的分布如下:
[0747] –1个酮官能团
[0748] –8个双键,包括2个链端
[0749] –2个环
[0750] COSY和TOCSY序列使得重构该结构的整合碳骨架成为可能。这些相关性由图8中加粗的连接表示。这些结果显示了与amphidinol 18对应的分子的二级结构。通过将在本研究中获得的结果与文献(7)中发现的结果进行比较证实了总体的解释。
[0751] 总之,通过核磁共振和质谱法获得的所有结果确证了提取物D经分级分离后获得的并且对F.graminearum具有抗真菌活性的级分F1‑2中存在的分子是amphidinol 18分子,其具体的化学数据如下所示:
[0752] ‑经验式:C71H122O24
[0753] ‑摩尔质量:1358.83g.mol–1
[0754] 参考文献
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