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前沟藻醇对作物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的杀真菌和/或杀细菌活性的用途

申请号 CN201880052003.6 申请日 2018-06-08 公开(公告)号 CN111315216A 公开(公告)日 2020-06-19
申请人 免疫生物防治法国公司; 发明人 雅恩·托马斯; 奥东·希伯德;
摘要 具有下式(I)的分子对作物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的杀真菌和/或杀细菌活性的用途。
权利要求

1.具有下式(I)的分子对作物和种子中的致病真菌、卵菌和/或细菌的杀真菌和/或杀细菌活性的用途:其中:

■R1选自由以下组成的组,

其中:

-R3代表H或SO3Na,

-R4为H或OH,

- 代表单键或双键,

-n等于0或1且

-m为0或1;并且

■R2选自由以下组成的组,

2.根据权利要求1所述的用途,其中R1为:其中R3为H或SO3Na。

3.根据权利要求1或2所述的用途,其中R2为:

4.根据前述权利要求中的任一项所述的用途,其中所述式(I)的分子为前沟藻醇18:

5.根据前述权利要求中的任一项所述的用途,其中所述式(I)的分子提取自一种或多种前沟藻属微藻的细胞。

6.根据权利要求5所述的用途,其中所述式(I)的分子提取自强壮前沟藻的细胞。

7.根据前述权利要求中的任一项所述的用途,其中所述作物和种子的致病真菌是以下属的作物和种子的致病真菌:镰刀菌属、刺盘孢属、球腔菌属、根腐菌属和链格孢属,优选地,真菌与作物的配对为小麦/禾生球腔菌-小麦/禾谷镰刀菌-马铃薯/晚疫病菌-葡萄/葡萄霜霉病菌-葡萄/葡萄钩丝壳-番茄/晚疫病菌。

8.根据权利要求7所述的用途,其中镰刀菌属、刺盘孢属、球腔菌属、根腐菌属和链格孢属的作物和种子的所述致病真菌选自由以下组成的组:尖孢鐮刀菌、茄镰刀菌、燕麦镰刀菌、黄色镰刀菌、禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌、早熟禾镰刀菌、层出镰刀菌、Fusarium sporotrichioides、Fusarium subglutinans、Fusarium tricinctum、Colletotrichum acutatum、Colletotrichum graminicola、Colletotrichum coffeanum、Colletotrichum gloeosporioides、Mycosphaerella graminicola、Phytophthora infestans、Alternaria solani和Alternaria brassisicola。

9.根据前述权利要求中的任一项所述的式(I)的分子的用途,其用量为0.1至5mg/mL,优选0.5至3mg/mL,特别优选0.75至1mg/mL。

10.防治作物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的方法,其包括向作物施用下列物质和/或用下列物质包被所述种子:其中:

■R1选自由以下组成的组,

其中:

-R3代表H或SO3Na,

-R4为H或OH,

- 代表单键或双键,

-n等于0或1且

-m为0或1;并且

■R2选自由以下组成的组,

11.根据权利要求10所述的防治方法,其是治疗性的或预防性的。

12.根据权利要求10或11所述的防治方法,所述式(I)的分子以0.1至5mg/mL,优选0.5至3mg/mL,特别优选0.75至1mg/mL的量使用。

说明书全文

前沟藻醇对作物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的杀真菌

和/或杀细菌活性的用途

技术领域

[0001] 本发明涉及用于种子的抗真菌和抗细菌剂领域。

背景技术

[0002] 为了应对世界人口的增长,第二次世界大战之后的“绿色革命”到来了,这是一系列有关品种选择、灌溉、化肥和合成农药的现代计划,其目的是防治土壤生产力和致病菌。因此,这些多种因素使得在大约四十年的时间内全球粮食产量几乎翻了三倍。今天,农业挑战是到2050年要养活90亿人口,并在资源日益有限和限制日益增加的情况下继续提高单位面积的产量。例如,由于生物应力和缺乏作物保护方法而引起的潜在损失可达到谷物产量的一半以上。为了限制损失,传统的植物保护产品因此是全世界作物保护的组成部分。然而,这些化学品对人类健康和环境具有强烈的负面影响,从而导致使用防治传染病的其他手段,例如生物防治(使用自然机制的所有植物保护方法)。本专利的目的是利用源自浮游植物的单细胞藻类作为新的天然分子的来源,所述新的天然分子能够通过直接影响感染主要农艺重要性的作物(例如小麦和葡萄藤)的植物病原体的存活而充当“有机农药”。
[0003] 镰刀菌病
[0004] 在欧洲,影响小麦(Triticum aestivum)的几种疾病造成产量损失和谷物健康质量下降。最重要的之一是壳针孢属叶斑病(壳针孢属物种(Septoria spp.))。镰刀菌枯萎病与一种物种复合体有关,该复合体由两个属的植物病原真菌:镰刀菌(Fusarium)和微座孢属(Microdochium)组成(1)。这两个属包括能够诱导小麦赤霉病的大约19种物种。在欧洲最常见的物种是禾谷镰刀菌(F.graminearum)、枯萎镰刀菌(F.culmorum)、燕麦镰刀菌(F.avenaceum)、早熟禾镰刀菌(F.poae)、雪腐微座孢(M.nivale)和M.majus。镰刀菌属属于子囊菌门和丛赤壳科。微座孢属属于瘤座孢科并且包括两个物种:雪腐微座孢和M.majus,其在穗和叶上引起与镰刀菌相同的症状。以禾谷镰刀菌为最具代表性的几种镰刀菌物种可以在给定的区域或地块或穗中同时存在,从而形成镰刀菌复合体。每种物种的严重程度、发病率和流行程度因地理位置、气候变化和栽培技术而异。这些物种中的几种出现在相同的穗上似乎会调整它们的平衡和毒素产生的作用方式。
[0005] 小麦的小麦赤霉病会在收获之前几周摧毁作物。它可能与高产损失(谷物败育和低重量)、发芽质量下降或由于谷物中毒素的存在而导致质量下降有关。事实上,镰刀菌但不是微座孢属的真菌能够产生有毒的次生代谢物,即真菌毒素,真菌毒素的存在增加了农业生产中疾病的发病率,并构成主要的经济和公共健康问题。防治镰刀菌枯萎病的主要手段包括栽培技术、品种抗性和化学防治。目前,很少有小麦品种对镰刀菌枯萎病有抗性。然而,存在具有部分抗性水平的耐受品种,其在收获时限制了产量损失和毒素的积累。一旦作物成熟,化学防治是可能的,但效果有限。病原体的多样性及其对活性物质的不同敏感性使这种防治复杂化。例如,镰刀菌属真菌对三唑类敏感,而微座孢属真菌对嗜球果伞素敏感。
[0006] 壳针孢属病
[0007] 壳针孢属斑是一种小麦病害,其造成了重大的产量损失,并造成了世界范围内最大的经济损失,特别是在湿润的温带地区。壳针孢属斑有两种主要的类型:稃枯病(小麦叶枯病菌(Phaeosphaeria  nodorum)和叶斑病(禾生球腔菌(Mycosphaerella graminicola))。在法国,稃枯病主要存在于大陆地区,而叶斑病主要出现在西北和沿海地区,在这些地区,真菌找到了有利于其生长的气候条件。由禾生球腔菌引起的症状先后以萎黄病、亮绿色斑点的形式出现,然后演变为称为坏死斑的褐色斑点。这些坏死斑最终融合(聚结)。接下来,分生孢子器,肉眼几乎看不到的黑色子实体,出现在这些坏死病灶上。几个研究团队已经研究了壳针孢属斑在光合作用、生长或产量损失方面的危害。因此,可以确定表达疾病对收获的谷物蛋白质含量影响的定性危害。
[0008] 禾生球腔菌是一种半活体营养真菌,它先形成活组织发生感染的第一个活体营养阶段,接着是腐植营养阶段,在此阶段,真菌表达导致定植组织死亡的毒素。根据环境条件的不同,禾生球腔菌的繁殖可以是有性的(子囊孢子生产)或无性的(器孢子生产)。子囊孢子通过风长距离传播,有助于真菌在没有宿主植物的情况下存活,被认为是引发疾病的主要接种源。反过来,器孢子主要是在疾病的流行阶段通过几个连续的传染周期产生的。这些孢子在雨滴的作用下飞溅分散在很短的距离内。潜在产量的下降幅度更大,因为籽粒灌浆过程中穗下的最后一片叶子受到这种疾病的严重影响。壳针孢属斑导致的产量损失估计平均为1–2t.ha-1,某些情况最高可达3–3.5t.ha-1,这表示产量下降40%。
[0009] 防治禾生球腔菌的方法基于杀真菌剂和抗性品种的使用。但是,近年来,由于具有例如对嗜球果伞菌素家族的抗性的病原菌的强选择性,以及三唑最近在田间功效的丧失,杀真菌剂的功效已大大降低。
[0010] 葡萄藤病害
[0011] 如今,葡萄藤生长在世界各地,并在许多国家的经济中发挥着核心作用。它以鲜食葡萄和果汁的形式消费,但其主要开发仍在葡萄酒行业。欧盟是世界上最大的葡萄酒生产者和世界上最大的葡萄酒产品出口者。因此,该行业每年为欧盟经济贡献约150亿欧元(www.ceev.be)。2010年,法国葡萄园占地近865000公顷,占可耕地的近3%,使法国成为世界领先的葡萄酒生产国,产量达5110万升。葡萄藤必须应对许多病原性攻击,包括隐花病。当它们影响植物木质化的部分时,它们被称为“木质疾病”,值得注意的例子是埃斯卡病(esca)、枝条黑死病和eutypiosis。感染浆果和葡萄藤草本部分(叶子、茎等)的真菌会诱发“叶子的隐花病”,其包括灰腐病、黑腐病、霜霉病和白粉病。
[0012] 埃斯卡病
[0013] 霜霉病、白粉病和灰腐病是影响全球葡萄园的三种主要隐花病,真菌引起的木质疾病正成为葡萄生产的限制因素。葡萄酒酿造者目前面临着与这些木质疾病有关的两个主要问题:缺乏防治方法和对各种生物和非生物因素的深刻了解。
[0014] 全世界最常见的埃斯卡病疾病真菌物种是子囊菌、Diplodia seriata、Diplodia mutila、Neofusicoccum parvum和Neofusicoccum luteum。在法国,分离的最多的物种是Diplodia seriata和葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)。许多其他真菌,包括一些病原体,经常从患有埃斯卡病的植物的木质坏死中被分离出来。侧弯孢壳属(Eutypa lata)(Eutypiosis的病原)就是这种情况。这种疾病有两种形式:慢形式和急性形式。叶面症状是慢形式的特征,即使它们可能以中风形式存在。慢形式的特征在于特定的叶色:白葡萄品种上的黄色中间点和黑葡萄品种上的红色边缘中间点,叶脉保持绿色。这些斑点逐渐演变成褐色和干燥。这种慢形式的叶面症状一年后在葡萄藤上可以看到,并且第二年就消失了。急性形式的特征是葡萄藤树干的部分或全部的气生器官、小枝、叶子和束(bunches)迅速干燥。这种症状通常发生在夏季炎热的时候,导致葡萄藤在几天内死亡而没有任何症状。接种物来源的多样性和葡萄藤木材中真菌的非常缓慢和不可见的发展使得实施防治方法非常困难。此外,欧洲植物保护产品法规的变化导致禁止基于亚砷酸钠的化学品,因为这些产品对人类有致癌作用,而且对环境有很高的毒性。全世界正在进行大量的研究来测试可用于苗圃或葡萄园的新分子。
[0015] 灰腐病
[0016] 灰腐病是由一种叫做灰色葡萄孢菌(Botrytis cinerea)的子囊菌真菌引起的隐花病。它属于锤舌菌纲、柔膜菌目和核盘菌科。灰色葡萄孢菌是一种腐植营养真菌,能够定殖于健康的、已经感染的植物组织以及死亡组织(腐生现象)。在叶子上,症状表现为褐色斑点,下面有灰色毡化(真菌结实),这种毡化倾向于增加并侵入整个叶片。束可在开花和变干之前受到影响。它们在转化期阶段特别敏感,其中,白葡萄品种的浆果出现棕色着色,并出现厚的灰色毡。分生孢子通过风传播,直接或通过伤口进入草本器官。这就是为什么霜霉病导致的浆果爆裂更容易被灰色葡萄孢菌感染这种疾病不仅会导致产量损失高达40%(Viniflor,2006年数据),还会降低葡萄酒的感官质量。然而,灰色葡萄孢菌也是获得某些甜葡萄酒所必需的“高贵腐烂”的原因。
[0017] 霜霉病
[0018] 目前对葡萄园影响最严重的两种疾病是霜霉病和白粉病。霜霉病的病原,即卵菌葡萄霜霉病菌(Plasmospora viticola),其属于霜霉目,是专性寄生物;为了生存和繁殖,它必须在幸存的葡萄藤叶子上繁殖。葡萄霜霉病菌攻击葡萄藤的所有草本组织以及葡萄束。它会导致浆果和茎的落叶、褐变和干燥。在缺乏治疗和有利的气候条件下,霜霉病会摧毁该季节高达75%的收成。
[0019] 葡萄霜霉病菌的生命周期包括有性阶段和无性阶段。无性阶段产生二次感染和病原体短距离传播所必需的孢子,而有性阶段产生休眠和耐寒的卵孢子,从而能够越冬和进行初次感染。葡萄园中的霜霉病的第一个宏观证据是出现淡黄色的不规则斑点(油斑),其在叶子的上表面或近轴的表面扩展。随着菌丝体内部定殖的进行,下面与油斑相对应的白色棉状生长物的发育变得更加明显。在晚期感染中,这些症状伴随着死的褐色组织。霜霉病主要通过使用杀真菌剂喷雾的预防措施来防治。虽然有可能阻止攻击,但一旦发生在花序和簇上,则损害是无法挽救的。
[0020] 白粉病
[0021] 葡萄藤白粉病(葡萄钩丝壳(Erysiphe necator))是一种专性活体营养子囊菌,属于白粉菌目。所述真菌在葡萄藤所有绿色器官的表面定殖,尤其是叶子的上表面,并传播到浆果上。以产生含子囊孢子的闭囊壳为特征的有性阶段可与无性阶段交替出现,导致形成带有分生孢子的分生孢子梗。在葡萄藤的冬季休眠期间,所述真菌以休眠芽中的菌丝或植物表面的闭囊壳形式存活。闭囊壳所含的孢子会在春天被释放出来,在芽和幼叶表面发芽。初生菌丝在叶表面生长,然后一个逐渐复杂和分枝的菌丝体网络覆盖在叶表面。随后,分生孢子梗在孢子形成阶段开始时从菌丝体中分化出来,并在植物的其他绿色组织中定殖,导致二次感染。
[0022] 在受感染的宿主组织表面存在菌丝体和携带分生孢子的分生孢子梗,呈现灰白色粉末状外观。花蕾上长出白色毛毡,花蕾会干枯。只有含糖量小于8%的幼浆果才容易发生白粉病。不管年龄大小,所有的叶子表面都容易受到感染。被感染的幼叶首先变成深绿色,然后变形并发育不良。叶子的上表面可能有类似霜霉病油斑的较浅的萎黄病斑点。目前,防治该影响葡萄园最严重的疾病的主要手段是使用大量农药和杀真菌剂。因此,在葡萄栽培中,卫生压力特别大。
[0023] 旨在主要防治霜霉病和白粉病的杀真菌处理按照精确的时间表进行,以防止由于疾病的出现而造成的损害。欧洲联盟(欧盟)每年使用约68000吨杀真菌剂防治葡萄藤疾病,占农业使用杀真菌剂的65%,而欧盟有用的农业面积只有3.3%被葡萄藤占据(欧盟统计局,2007年)。为了限制化学品对环境和健康的强大压力,有必要分离天然来源的分子,这些分子将在保护作物免受传染病侵害方面发挥作用,以便最终取代迄今为止使用的化学植物保护产品。
[0024] 苹果黑星病
[0025] 黑星病、褐腐病和白粉病是苹果树(苹果(Malus)属)的主要真菌病之一。它是由一种被称为Venturia inaequelis的子囊真菌引起的,其中有数千种菌株,在叶子、芽或果实的表面甚至有时在木材上造成黑色或棕色的病变。水果和叶子下部对它特别敏感。
[0026] 真菌以子囊壳的形式在从被感染的树木掉落的叶子上越冬。在春季,当芽开放时,子囊壳中充满了子囊孢子。在潮湿的日子,子囊孢子被喷入果园的空气中,并通过空气运动到达树木。这种子囊孢子的排出开始于芽的迸裂,并持续6至10周,最经常持续到六月底。当子囊孢子到达叶子并且叶片湿润一段时间后,它们发芽并穿透叶子,导致初次感染。根据湿度和温度条件,在树木的不同部分上,真菌感染会在一到三周内可见。叶子上出现约5毫米的深橄榄色或棕色斑点,有时可能会覆盖整个叶子。感染的花朵可脱落。果实感染首先通过茎上的灰色斑点来识别。
[0027] 在初次感染后的剩余的夏季,真菌会发育并产生分生孢子,这是另一种生殖结构的形式。当分生孢子逸出时,存在二次感染。分生孢子可以感染树的任何部分,并且夏末产生的分生孢子甚至可以在储存的果实上生长。大雨驱散了分生孢子。
[0028] 该病很少杀死其宿主,但如果不使用杀真菌剂,则可显著降低(最多100%)果实品质和产量。在秋天采取预防措施以收集落叶后,控制策略要求在春季采取有效措施,以防止释放的孢子感染或生长在树木上。传统的保护方法是在芽迸裂时开始施用杀真菌剂,并每隔7天左右重复施用一次,直到6月下旬以保护新芽。苹果园使用杀真菌剂和杀虫剂处理的次数最多,每年平均进行28.8种杀真菌剂处理,其中19种专门用于黑星病(INRA数据)。
[0029] 微藻
[0030] 具有新的作用机理并且能够规避病原体产生的抗性的天然来源的分子对于开发新的环保植物保护产品具有重要的前景。海洋呈现各种各样的生物(细菌、微藻、藻类、脊椎动物和无脊椎动物),这些生物是新的生物活性分子的来源,但仍未被充分利用(2)。例如,海洋微生物会积累具有生物活性的次级代谢产物,其独特的结构不存在于陆地生物中。因此,这些代谢物潜在地代表了新的目标分子。一些源自海洋生物的物质被描述为具有抗真菌活性或自然防御物质活性,但对这些分子的研究仍很不深入(3)。
[0031] 微藻是在水生生态系统中发挥关键作用的单细胞生物。它们生产有机材料,发挥重要的生态作用,因为它们代表海洋环境食物链的底部。但是,它们难以置信的在全世界海洋中定殖的能力表明,其可能已经发展了有效的策略来防治病原体,特别是通过产生天然农药。例如,产生生物毒素的微藻在沿海地区的大量增殖是对营养级联有重大影响的有害藻华(HAB)形成的原因。
[0032] 在微藻中,属于裸甲藻(Gymnodiniales)目和裸甲藻(Gymnodiniacae)科的双鞭藻存在于以自由形式或与无脊椎动物(例如珊瑚虫)共生的温带和热带海水中。双鞭藻类合成大量称为聚酮化合物的次生代谢物(具有生物或药理活性的化合物,可能具有毒性以赋予生存优势),其中一些已被表征,包括负责HAB的那些(4)。例如,双鞭藻的模型物种,强壮前沟藻(Amphidinium carterae)会产生大量不同的生物活性化合物,其中许多具有被开发为治疗剂的潜力(5)。前沟藻物种生产的聚酮化合物在结构上极为不同,并分为三类:大环内酯类、线性聚酮类和长链聚酮类。例如,前沟藻醇是具有强的抗真菌和溶血活性的聚羟基多烯(长链聚酮化合物)。因此,它们通过与膜脂质缔合来增加膜通透性(6)。在不同的前沟藻菌株中,已分离出具有长多羟基链的前沟藻醇样化合物,例如lingshuiols、karatungiols、carteraol E、lutophophols、colopsinols和amphezonol A(5)。
[0033] 为了限制化学品对环境和健康的强大压力,有必要分离天然来源的分子,这些分子将在保护作物免受传染病侵害方面发挥作用,以便最终取代至今使用的化学植物保护产品。因此,这些“有机农药”可能直接影响具有重要农学意义的农作物(例如小麦和葡萄藤)的植物病原体的存活。
[0034] 出人意料的是,发明人发现,强壮前沟藻的细胞提取物起着对许多植物病原性真菌进行杀真菌作用的分子之一是前沟藻醇18。

发明内容

[0035] 本发明的第一个目的涉及下式(I)的分子对沟藻醇对作物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的杀真菌和/或杀细菌活性的用途:
[0036]
[0037] 其中:
[0038] R1选自由以下组成的组,
[0039]
[0040] 其中:
[0041] R3代表H或SO3Na,
[0042] R4为H或OH,
[0043] 代表单键或双键,
[0044] n等于0或1且
[0045] m为0或1;并且
[0046] R2选自由以下组成的组,
[0047]
[0048] 本发明的另一个目的涉及防治作物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的方法,该方法包括向农作物施用式(I)的分子和/或用式(I)的分子包被所述种子。

附图说明

[0049] 图1:反相C18柱上的提取物D的分级分离以及通过HPLC获得的提取物D的不同级分的活性测试
[0050] A.通过甲醇提取后获得的提取物D(5g/L)抑制禾谷镰刀菌生长抑制的体外测试[0051] B.注射提取物D后获得的液相色谱图。根据虚线组装样品以形成5个部分,表示为F1至F5。
[0052] C.浓度为5g/L的F1至F5级分对禾谷镰刀菌生长抑制的体外测试
[0053] D.浓度为0.5g/L、0.75g/L、1g/L、1.5g/L、2.5g/L和5g/L的F1部分对禾谷镰刀菌生长抑制的体外测试。
[0054] -:阴性对照:单独在缓冲液中孵育孢子。
[0055] 图2:反相C18柱上的F1级分的分级分离以及通过HPLC获得的提取物D的不同级分的活性测试
[0056] A.注射F1级分后获得的液相色谱图。根据虚线组装样品以形成5个级分,表示为F1-1至F1-5。
[0057] B.浓度为5g/L的F1至F5级分对禾谷镰刀菌生长抑制的体外测试
[0058] C.浓度为0.0005g/L至1g/L的F1-2级分对禾谷镰刀菌生长抑制的体外测试[0059] -:阴性对照:单独在缓冲液中孵育孢子。
[0060] 图3:F1-2级分的质谱分析。
[0061] A.通过正离子模式电喷雾对收集的F1-2的目标分子离子化获得的质谱图[0062] B.在A中检测到1381.8276Da离子的串联质谱。带圆圈的峰与由Nuzzo等人,2014(7)表征的AM18中发现的峰一致。
[0063] 图4:F1-2级分的NMR分析。
[0064] A.来自提取物D的F1-2级分的分子的1H NMR谱(MeOD4溶剂)。
[0065] B.来自提取物D的F1-2级分的分子的13C DEPT135 NMR谱(MeOD4溶剂)。
[0066] 图5:来自提取物D的F1-2级分的前沟藻醇18分子的结构式
[0067] 每个质子之间的所有COZY和TOCSY相关性均以粗体显示。

具体实施方式

[0068] 本发明的第一个目的涉及下式(I)的分子对沟藻醇对作物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的杀真菌和/或杀细菌活性的用途:
[0069]
[0070] 其中:
[0071] R1选自由以下组成的组,
[0072]
[0073]
[0074] 其中:
[0075] R3代表H或SO3Na,
[0076] R4为H或OH,
[0077] 代表单键或双键,
[0078] n等于0或1且
[0079] m为0或1;并且
[0080] R2选自由以下组成的组,
[0081]
[0082] 优选地,R1为:
[0083]
[0084] 其中R3为H或SO3Na,
[0085] 优选地,R2为:
[0086] 优选地,式(I)的分子是前沟藻醇18或前沟藻醇19:
[0087]
[0088] 式(I)的分子是前沟藻醇。
[0089] 式(I)的分子可以是合成的或从前沟藻属的一种或多种微藻的细胞中提取的。
[0090] 前沟藻物种
[0091] 合适的前沟藻物种选自由以下组成的组:Amphidinium achromaticum、Amphidinium aculeatum、Amphidinium acutissimum、Amphidinium acutum、Amphidinium alinii、Amphidinium aloxalocium、Amphidinium amphidinioides、Amphidinium asymmetricum、Amphidinium aureum、Amphidinium belauense、Amphidinium bidentatum、Amphidinium bipes、Amphidinium boekhoutensis、Amphidinium boggayum、Amphidinium caerulescens、Amphidinium carbunculus、强壮前沟藻(Amphidinium carterae)、Amphidinium celestinum、Amphidinium chattonii、Amphidinium coeruleum、Amphidinium conradii、Amphidinium conus、Amphidinium coprosum、Amphidinium corallinum、Amphidinium corpulentum、Amphidinium crassum、Amphidinium cristatum、Amphidinium cucurbita、Amphidinium cucurbitella、Amphidinium cupulatisquama、Amphidinium curvatum、Amphidinium cyaneoturbo、Amphidinium dentatum、Amphidinium discoidale、Amphidinium dubium、Amphidinium eilatiensis、Amphidinium emarginatum、Amphidinium fastigium、Amphidinium filum Amphidinium flagellans、Amphidinium flexum、Amphidinium galbanum、Amphidinium gibbosum、Amphidinium glaucovirescens、Amphidinium glaucum、Amphidinium globosum、Amphidinium hadai、Amphidinium herdmanii、Amphidinium incoloratum、Amphidinium inflatum、Amphidinium kesselitzii、Amphidinium kesslitzii、Amphidinium klebsii、Amphidinium lacunarum、Amphidinium lanceolatum、Amphidinium lefevrei、Amphidinium lilloense、Amphidinium lissae、Amphidinium longum、Amphidinium luteum、Amphidinium machapungarum、Amphidinium macrocephalum、Amphidinium mammillatum、Amphidinium manannini、Amphidinium mananninii、Amphidinium massartii、Amphidinium mootonorum、Amphidinium mucicola、Amphidinium nasutum、Amphidinium obliquum、Amphidinium obrae、Amphidinium oceanicum、Amphidinium oculatum、Amphidinium operculatum、Amphidinium operculatum var.steinii、Amphidinium ornithocephalum、Amphidinium ovoideum、Amphidinium ovum、Amphidinium pacificum、Amphidinium  pelagicum、Amphidinium phthartum、Amphidinium psammophila、Amphidinium psittacus、Amphidinium purpureum、Amphidinium pusillum、Amphidinium rhynchocephalum、Amphidinium roseolum、Amphidinium ruttneri、Amphidinium salinum、Amphidinium schilleri、Amphidinium schroederi、Amphidinium scissum、Amphidinium sphagnicola、Amphidinium sphenoides、Amphidinium steinii、Amphidinium stellatum、Amphidinium stigmatum、Amphidinium sulcatum、Amphidinium tortum、Amphidinium trochodinioides、Amphidinium trochodinoides、Amphidinium trulla、Amphidinium truncatum、Amphidinium turbo、Amphidinium vernal、Amphidinium vigrense、Amphidinium vitreum、Amphidinium vittatum、Amphidinium wigrense、Amphidinium yoorugurrum、Amphidinium yuroogurrum。
[0092] 优选地,式(I)的分子提取自强壮前沟藻。中有数种保藏中的强壮前沟藻菌株,例如菌株CCMP 124、1314、3177(CCMP=海洋浮游植物培养物保藏所);AC 208、792(AC=藻类库Cean);BEA 01198(BEA=西班牙海藻数据库)。
[0093] 有利地,根据本发明使用的强壮前沟藻菌株为CCMP 1314、AC208或AC792。
[0094] 提取
[0095] 所述提取物可以通过本领域技术人员已知的任何细胞提取方法,固-液或液-液制备,例如在无机或有机溶剂中提取,所述溶剂可以选自由以下组成的组:水、水溶液,烃类溶剂(脂族的、芳族的)、含氧溶剂(醇、酮、酸、酯和醚)、卤化溶剂(二氯甲烷、氯仿)及其任意可混溶比例的混合物。
[0096] 有利地,优选的溶剂是水或含氧溶剂,优选醇,特别优选C1-C4醇,例如甲醇或乙醇。
[0097] 特别优选地,C1-C4醇是优选的。
[0098] 优选地,所述提取物是水溶性级分。
[0099] 浓度
[0100] 优选地,式(I)的分子以0.1至5mg/mL,优选0.5至3mg/mL,特别优选0.75至1mg/mL的量使用。
[0101] 作用模式
[0102] 通过抑制孢子萌发或通过抑制真菌和/或卵菌的生长,可以特别地发挥所述对作物和种子的致病真菌和/或卵菌的杀真菌活性。
[0103] 该活性是由导致细胞裂解的细胞壁和膜的裂解活性产生的。
[0104] 农作物
[0105] 所述农作物尤其选自由以下组成的组:谷物,例如小麦、玉米、大麦、稻、大豆;水果和蔬菜,例如马铃薯、胡萝卜、苹果树、桃树、杏树、西红柿、萝卜、豆类、葡萄藤和观赏植物。
[0106] 所述农作物尤其选自由以下属组成的组:秋葵属(Abelmoschus)、金合欢属(Acacia)、人心果属(Achras)、龙舌兰属(Agave)、翦股颖属(Agrostis)、石栗属(Aleurites)、葱属(Allium)、槚如树属(Anacardium)、凤梨属(Ananas)、番荔枝属(Annona)、芹属(Apium)、落花生属(Arachis)、槟榔属(Areca)、辣根属(Armoracia)、伞形科属(Arracacia)、桂木属(Artocarpus)、天门冬属(Asparagus)、白坚木属(Aspidosperma)、燕麦属(Avena)、巴西栗属(Bertholletia)、甜菜属(Beta)、苎麻属(Boehmeria)、糖棕属(Borassus)、芸薹属(Brassica)、木豆属(Cajanus)、山茶属(Camellia)、大麻属(Cannabis)、辣椒属(Capsicum)、番木瓜属(Carica)、红花属(Carthamus)、葛缕子属(Carum)、山核桃属(Carya)、栗属(Castanea)、爪哇木棉属(Ceiba)、长角豆属(Ceratonia)、藜属(Chenopodium)、菊属(Chrysanthemum)、鹰咀豆属(Cicer)、菊苣属(Cichorium)、金鸡纳树属(Cinchona)、樟属(Cinnamomum)、西瓜属(Citrullus)、柑橘属(Citrus)、椰子属(Cocos)、咖啡属(Coffea)、可乐树属(Cola)、芋属(Colocasia)、黄麻属(Corchorus)、榛属(Corylus)、野百合属(Crotalaria)、甜瓜属(Cucumis)、南瓜属(Cucurbita)、榅桲属(Cydonia)、香茅属(Cymbopogon)、菜蓟属(Cynara)、鸭茅属(Dactylis)、胡萝卜属(Daucus)、薯蓣属(Dioscorea)、柿树属(Diospyros)、稗属(Echinochloa)、油棕属(Elaeis)、豆蔻属(Elettaria)、穇属(Eleusine)、画眉草属(Eragrostis)、枇杷属(Eriobotrya)、番樱桃属(Eugenia)、荞麦属(Fagopyrum)、榕属(Ficus)、茴香属(Foeniculum)、草莓属(Fragaria)、巨麻属(Furcraea)、大豆属(Glycine)、甘草属(Glycyrrhiza)、棉花属(Gossypium)、小葵子属(Guizotia)、向日葵属(Helianthus)、橡胶树属(Hevea)、木槿属(Hibiscus)、大麦属(Hordeum)、葎草属(Humulus)、冬青属(Ilex)、槐蓝属(Indigofera)、番薯属(Ipomoea)、素馨属(Jasminum)、胡桃属(Juglans)、莴苣属(Lactuca)、葫芦属(Lagenaria)、薰衣草属(Lavandula)、散沫花属(Lawsonia)、兵豆属(Lens)、独行菜属(Lepidium)、胡枝子属(Lespedeza)、亚麻属(Linum)、荔枝属(Litchi)、黑麦草属(Lolium)、牵牛属(Lopmoea)、莲属(Lotus)、羽扇豆属(Lupinus)、茄属(Lycopersicon)、针茅属(Lygeum)、澳洲坚果属(Macadamia)、苹果属(Malus)、芒果属(Mangifera)、木薯属(Manihot)、竹芋属(Maranta)、苜蓿属(Medicago)、薄荷属(Mentha)、欧楂属(Mespilus)、西谷椰子属(Metroxylon)、辣木属(Moringa)、芭蕉属(Musa)、肉豆蔻属(Myristica)、烟草属(Nicotiana)、木犀榄属(Olea)、驴食草属(Onobrychis)、稻属(Oryza)、黍属(Panicum)、罂粟属(Papaver)、欧防风属(Pastinaca)、天竺葵属(Pelargonium)、狼尾草属(Pennisetum)、鳄梨属(Persea)、菜豆属(Phaseolus)、梯牧草属(Phleum)、刺葵属(Phoenix)、新西兰麻属(Phormium)、茴芹属(Pimpinella)、胡椒属(Piper)、黄连木属(Pistacia)、豌豆属(Pisum)、李属(Prunus)、番石榴属(Psidium)、石榴属(Punica)、梨属(Pyrus)、萝卜属(Raphanus)、大黄属(Rheum)、醋栗属(Ribes)、蓖麻属(Ricinus)、蔷薇属(Rose)、悬钩子属(Rubus)、甘蔗属(Saccharum)、鸦葱属(Scorzonera)、黑麦属(ecale)、佛手瓜属(Sechium)、胡麻属(Sesamum)、狗尾草属(Setaria)、茄属(Solanum)、高粱属(Sorghum)、菠菜属(Spinacia)、可可属(Theobroma)、婆罗门参属(Tragopogon)、三叶草属(Trifolium)、胡卢巴属(Trigonella)、小麦属(Triticum)、梵天花属(Urena)、越橘属(Vaccinium)、新缬草属(Valerianella)、香荚兰属(Vanilla)、蚕豆属(Vicia)、豇豆属(Vigna)、牛油果属(Vitellaria)、葡萄属(Vitis)、千年芋属(Xanthosoma)、玉蜀黍属(Zea)、姜属(Zingiber)。
[0107] 病原体
[0108] 所述作物和种子的致病真菌是子囊菌或担子菌,优选子囊菌。
[0109] 所述作物和种子的致病真菌是以下属的对作物和种子致病的真菌:
[0110] Acrocalymma属:Acrocalymma medicaginis,
[0111] 镰刀菌属(Fusarium):Fusarium affine、Fusarium arthrosporioides、Fusarium crookwellense、Fusarium culmorum、Fusarium graminearum、Fusarium moniliforme、Fusarium incarnatum、Fusarium solani、Fusarium langsethiae、Fusarium mangiferae、Fusarium oxysporum f.sp.albedinis、Fusarium oxysporum f.sp.asparagi、Fusarium oxysporum f.sp.batatas、Fusarium oxysporum f.sp.betae、Fusarium oxysporum f.sp.cannabis、Fusarium  oxysporum f.sp.carthami、Fusarium oxysporum f.sp.cattleyae、Fusarium oxysporum f.sp.ciceris、Fusarium oxysporum f.sp.coffea、Fusarium  oxysporum  f.sp.cubense、Fusarium oxysporum f.sp.cyclaminis、Fusarium oxysporum f.sp.dianthi、Fusarium oxysporum f.sp.lentis、Fusarium oxysporum f.sp.lini、Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici、Fusarium oxysporum f.sp.medicaginis、Fusarium oxysporum f.sp.pisi、Fusarium oxysporum f.sp.radicis-lycopersici、Fusarium oxysporum f.sp.spinacia、Fusarium oxysporum、Fusarium pallidoroseum、Fusarium patch、Fusarium proliferatum、Fusarium redolens、Fusarium sacchari、Fusarium solani、Fusarium subglutinans、Fusarium sulphureum、Fusarium tricinctum、Fusarium wilt,
[0112] 孢盘菌属(Botrytis):Botrytis allii、Botrytis anthophila、灰色葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、Botrytis fabae、Botrytis narcissicola,
[0113] 链格孢属(Alternaria):Alternaria alternata、Alternaria brassicae、Alternaria brassicicola、Alternaria carthami、Alternaria cinerariae、Alternaria dauci、Alternaria dianthi、Alternaria dianthicola、Alternaria euphorbiicola、Alternaria helianthi、Alternaria helianthicola、Alternaria japonica、Alternaria leucanthemi、Alternaria limicola、Alternaria linicola、Alternaria padwickii、Alternaria panax、Alternaria radicina、Alternaria raphani、Alternaria saponariae、Alternaria senecionis、Alternaria solani、Alternaria tenuissima、Alternaria triticina、Alternaria zinniae,
[0114] 白粉菌属(Erisyphe):葡萄白粉菌(Erisyphe necator)、甜菜白粉菌(Erysiphe betae)、褐斑白粉菌(Erysiphe  brunneopunctata)、菊科白粉菌(Erysiphe cichoracearum)、十字花科白粉菌(Erysiphe cruciferarum)、Erysiphe graminis f.sp.Avenae、Erysiphe graminis f.sp.tritici、独活白粉菌(Erysiphe heraclei)、豌豆白粉菌(Erysiphe pisi),
[0115] 麦角菌属(Claviceps):纺锤麦角菌(Claviceps fusiformis)、麦角菌(Claviceps purpurea)、高粱麦角菌(Claviceps sorghi)、菰属麦角菌(Claviceps zizaniae),[0116] 顶囊壳属(Gaeumannomyces)、禾顶囊壳菌(Gaeumannomyces graminis),[0117] 小球腔菌属(Leptosphaeria)、颖枯球腔菌(Leptosphaeria nodorum)、Leptosphaeria acuta、Leptosphaeria cannabina、Leptosphaeria coniothyrium、Leptosphaeria libanotis、Leptosphaeria lindquistii、Leptosphaeria maculans、Leptosphaeria musarum、Leptosphaeria pratensis、Leptosphaeria sacchari、Leptosphaeria woroninii,
[0118] 微座孢属(Microdochium):Microdochium spp.Microdochium bolleyi、Microdochium dimerum、Microdochium panattonianum、Microdochium phragmitis,[0119] 球腔菌属(Mycosphaerella)、落花生球腔菌(Mycosphaerella arachidis)、网孢球腔菌(Mycosphaerella areola)、伯克利球腔菌(Mycosphaerella berkeleyi)、布伦球腔菌(Mycosphaerella bolleana)、芸苔生球腔菌(Mycosphaerella brassicicola)、番木瓜球腔菌(Mycosphaerella caricae)、Mycosphaerella caryigena、Mycosphaerella cerasella、Mycosphaerella coffeicola、Mycosphaerella confusa、Mycosphaerella cruenta、Mycosphaerella dendroides、Mycosphaerella eumusae、Mycosphaerella gossypina、Mycosphaerella graminicola、Mycosphaerella henningsii、Mycosphaerella horii、Mycosphaerella juglandis、Mycosphaerella lageniformis、Mycosphaerella linicola、Mycosphaerella louisianae、Mycosphaerella musae、Mycosphaerella musicola、Mycosphaerella palmicola、豌豆球腔菌(Mycosphaerella pinodes)、Mycosphaerella pistaciarum、Mycosphaerella pistacina、Mycosphaerella platanifolia、Mycosphaerella polymorpha、Mycosphaerella pomi、Mycosphaerella punctiformis、Mycosphaerella pyri,
[0120] 眼斑病菌属(Oculimacula):Oculimacula acuformis、Oculimacula yallundae,[0121] 布氏白粉菌属(Blumeria):禾本科布氏白粉菌(Blumeria graminis),[0122] 麦类核腔菌属(Pyrenophora):燕麦核腔菌(Pyrenophora avenae)、Pyrenophora chaetomioides、大麦条纹病菌(Pyrenophora graminea)、Pyrenophoraseminiperda、Pyrenophora teres、Pyrenophora teres f.maculata、Pyrenophora teres f.teres、Pyrenophora tritici-repentis,
[0123] 柱隔孢菌属(Ramularia):Ramularia collo-cygni、Ramularia beticola、Ramularia coryli、Ramularia cyclaminicola、Ramularia macrospora、Ramularia menthicola、Ramularia necator、Ramularia primulae、Ramularia spinaciae、Ramularia subtilis、Ramularia tenella、Ramularia vallisumbrosae,
[0124] 嗪抱属(Rhynchosporium):黑麦嗪抱(Rhynchosporium secalis),
[0125] 旋孢腔菌属(Cochliobolus):Cochliobolus、Cochliobolus carbonum、Cochliobolus cymbopogonis、Cochliobolus hawaiiensis、Cochliobolus heterostrophus、Cochliobolus lunatus、Cochliobolus miyabeanus、Cochliobolus ravenelii、Cochliobolus sativus、Cochliobolus setariae、Cochliobolus spicifer、Cochliobolus stenospilus、Cochliobolus tuberculatus、Cochliobolus victoriae,[0126] 微座孢属(Microdochium):Microdochium oryzae,
[0127] 梨孢属(Pyricularia):稻瘟病菌(Pyricularia oryzae),
[0128] 帚枝霉属(Sarocladium):稻叶鞘腐败病菌(Sarocladium oryzae),
[0129] 稻麹病菌属(Ustilaginoides):稻麹病菌(Ustilaginoides virens),[0130] 尾孢菌属(Cercospora):尾孢菌(Cercospora)、Cercospora apii、Cercospora apii f.sp.clerodendri、Cercospora apiicola、Cercospora arachidicola、Cercospora asparagi、Cercospora atrofiliformis、Cercospora beticola、Cercospora brachypus、Cercospora brassicicola、Cercospora brunkii、Cercospora cannabis、Cercospora cantuariensis、Cercospora capsici、Cercospora carotae、Cercospora corylina、Cercospora fuchsiae、Cercospora fusca、Cercospora fusimaculans、Cercospora gerberae、Cercospora halstedii、Cercospora handelii、Cercospora hayi、Cercospora hydrangeae、Cercospora kikuchii、Cercospora lentis、Cercospora liquidambaris、Cercospora longipes、Cercospora longissima、Cercospora mamaonis、Cercospora mangiferae、Cercospora medicaginis、Cercospora melongenae、Cercospora minuta、Cercospora nicotianae、Cercospora odontoglossi、Cercospora papayae、Cercospora penniseti、Cercospora pisa-sativae、Cercospora platanicola、Cercospora puderii、Cercospora pulcherrima、Cercospora rhapidicola、Cercospora rosicola、Cercospora sojina、Cercospora solani、Cercospora solani-tuberosi、Cercospora sorghi、Cercospora theae、Cercospora tuberculans、Cercospora vexans、Cercospora vicosae、Cercospora zeae-maydis、Cercospora zebrina、Cercospora zonata,
[0131] 棒状杆孢菌属(Corynespora):Corynespora cassiicola,
[0132] 锈菌属(Phakospora):大豆锈菌(Phakospora pachyrhizi)、Phakopsora gossypii、Colletotrichum、Colletotrichum acutatum、Colletotrichum arachidis、Colletotrichum capsici、Colletotrichum cereale、Colletotrichum coffeanum、Colletotrichum crassipes、Colletotrichum dematium、Colletotrichum dematium f.spinaciae、Colletotrichum derridis、Colletotrichum destructivum、Colletotrichum gloeosporioides、Colletotrichum glycines、Colletotrichum gossypii、Colletotrichum graminicola、Colletotrichum higginsianum、Colletotrichum kahawae、Colletotrichum lindemuthianum、Colletotrichum lini、Colletotrichum mangenotii、Colletotrichummusae、Colletotrichum nigrum、Colletotrichum orbiculare、Colletotrichum pisi、Colletotrichum sublineolum、Colletotrichum trichellum、Colletotrichum trifolii、Colletotrichum truncatum,[0133] 腐霉菌(Pythium spp),
[0134] Diplodia属:Diplodia allocellula、Diplodia laelio-cattleyae、Diplodia manihoti、Diplodia paraphysaria、Diplodia seriata、Diplodia theae-sinensis,[0135] 链核盘菌属(Monilia):Monilinia azaleae、Monilinia fructicola、Monilinia fructigena、Monilinia laxa、Monilinia oxycocci,
[0136] Pezzicula属:Pezzicula alba、Pezzicula malicorticis,
[0137] Zymoseptoria属:Zymoseptoria tritici
[0138] Phytophthora属:Phytophthora infestans
[0139] 球座菌属(Guignardia):Guignardia bidwelli、Guignardia camelliae、Guignardia fulvida、Guignardia mangiferae、Guignardia musae、Guignardia philoprina,
[0140] 轴霜霉属(Plasmopara):葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola),
[0141] 柄锈菌属(Puccinia):Puccinia angustata、Puccinia arachidis、Puccinia aristidae、Puccinia asparagi、Puccinia cacabata、Puccinia campanulae、Puccinia carthami、Puccinia coronata、Puccinia dioicae、Puccinia erianthi、Puccinia extensicola、Puccinia helianthi、Puccinia hordei、Puccinia jaceae、Puccinia kuehnii、Puccinia malvacearum、Puccinia mariae-wilsoniae、Puccinia melanocephala、Puccinia menthae、Puccinia oxalidis、Puccinia pelargonii-zonalis、Puccinia pittieriana、Puccinia poarum、Puccinia purpurea、Puccinia recondita、Puccinia schedonnardii、Puccinia sessilis、Puccinia striiformis、Puccinia striiformis、Puccinia subnitens、Puccinia substriata、Puccinia verruca、Puccinia xanthii,
[0142] 丝核菌属(Rhizoctonia):立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、赤色菌核病菌(Rhizoctonia oryzae)、Rhizoctonia cerealis、Rhizoctonia leguminicola、Rhizoctonia rubi,
[0143] 核盘菌属(Sclerotinia):Sclerotinia borealis、Sclerotinia bulborum、Sclerotinia minor、Sclerotinia ricini、Sclerotinia sclerotiorum、Sclerotinia spermophila、Sclerotinia trifoliorum,
[0144] 壳针孢菌属(Septoria):Septoria ampelina、Septoria azaleae、Septoria bataticola、Septoria campanulae、Septoria cannabis、Septoria cucurbitacearum、Septoria darrowii、Septoria dianthi、Septoria eumusae、Septoria glycines、Septoria helianthi、Septoria humuli、Septoria hydrangeae、Septoria lactucae、Septoria lycopersici、Septoria lycopersici、Septoria menthae、Septoria passerinii、Septoria pisi、Septoria rhododendri、Septoria secalis、Septoria selenophomoides,
[0145] 黑星菌属(Venturia):苹果黑星菌(Venturia inaequalis).Venturia carpophila,
[0146] 白僵菌属(Acrodontium):Acrodontium simplex,
[0147] 端梗孢属(Acrophialophora):梭孢端梗霉(Acrophialophora fusispora),[0148] Acrosporium属:Acrosporium tingitaninum,
[0149] Aecidium属:Aecidium aechmantherae、Aecidium amaryllidis、Aecidium breyniae、Aecidium campanulastri、Aecidium cannabis、Aecidium cantensis、Aecidium caspicum、Aecidium foeniculi、Aecidium narcissi,
[0150] 黑粉菌属(Ahmadiago),
[0151] 多隔镰刀菌属(Albonectria):Albonectria rigidiuscula,
[0152] Allodus属:Allodus podophylli,
[0153] Amphobotrys属:Amphobotrys ricini,
[0154] Anguillosporella属:Anguillosporella vermiformis,
[0155] 小花口壳属(Anthostomella):Anthostomella pullulans,
[0156] 薄孔菌属(Antrodia):Antrodia albida、Antrodia serialiformis、Antrodia serialis,
[0157] Apiospora属:Apiospora montagnei,
[0158] Appendiculella属,
[0159] 蜜环菌属(Armillaria):Armillaria heimii、Armillaria sinapina、Armillaria socialis、Armillaria tabescens,
[0160] 节丝壳属(Arthrocladiella),
[0161] 阿氏锈菌属(Arthuriomyces):Arthuriomyces peckianus,
[0162] 囊二孢菌属(Ascochyta):Ascochyta asparagina、Ascochyta bohemica、Ascochyta caricae、Ascochyta doronici、Ascochyta fabae f.sp.lentis、Ascochyta graminea、Ascochyta hordei、Ascochyta humuli、Ascochyta pisi、Ascochyta prasadii、Ascochyta sorghi、Ascochyta spinaciae、Ascochyta tarda、Ascochyta tritici,[0163] 子囊孢子菌属(Ascospora):Ascospora ruborum,
[0164] 麹菌属(Aspergillus):棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、黄曲霉菌(Aspergillus fischerianus)、黑曲霉菌(Aspergillus niger),
[0165] Asperisporium属:Asperisporium caricae,
[0166] 星盾炱属(Asteridiella),
[0167] 小星盾炱属(Asteroma):Asteroma caryae,
[0168] 阿太菌属(Athelia):Athelia arachnoidea、Athelia rolfsii,
[0169] 深黄孔菌属(Aurantiporus):Aurantiporus fissilis,
[0170] 短柄霉属(Aureobasidium):Aureobasidium pullulans,
[0171] Bambusiomyces属,
[0172] 香蕉黑星病菌(Banana freckle),
[0173] 贝尤德病菌(Bayoud disease),
[0174] Beniowskia属:Beniowskia sphaeroidea,
[0175] Bionectria属:Bionectria ochroleuca,
[0176] Bipolaris属:Bipolaris cactivora、Bipolaris cookei、Bipolaris incurvata、Bipolaris sacchari,
[0177] 炭皮菌属(Biscogniauxia):Biscogniauxia capnodes、Biscogniauxia marginata,
[0178] 烟管菌属(Bjerkandera):Bjerkandera adusta,
[0179] 香蕉黑条叶斑病菌(Black sigatoka),
[0180] 布拉氏霉菌属(Blakeslea):三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora),[0181] 球二孢菌属(Botryodiplodia):Botryodiplodia oncidii、Botryodiplodia ulmicola,
[0182] 葡萄座腔菌属(Botryosphaeria):Botryosphaeria cocogena、Botryosphaeria dothidea、Botryosphaeria marconii、Botryosphaeria obtusa、Botryosphaeria rhodina、Botryosphaeria ribis、Botryosphaeria stevensii,
[0183] 葡孢霉属(Botryosporium):Botryosporium pulchrum,
[0184] 葡萄孢盘菌属(Botryotinia):Botryotinia fuckeliana、Botryotinia polyblastis,
[0185] Boxwood blight,
[0186] 座担子菌(Brachybasidiaceae),
[0187] 巴西壳属(Brasiliomyces):Brasiliomyces malachrae,
[0188] Briosia属:Briosia ampelophaga,
[0189] 褐斑病菌(Brown ring patch),
[0190] 番茄牛眼腐病菌(Buckeye rot of tomato),
[0191] 球叉丝壳属(Bulbomicrosphaera),
[0192] Cadophora属:Cadophora malorum,
[0193] 簇丝壳属(Caespitotheca),
[0194] Calonectria属:Calonectria ilicicola、Calonectria indusiata、Calonectria kyotensis、Calonectria pyrochroa、Calonectria quinqueseptata,
[0195] Camarotella属:Camarotella acrocomiae、Camarotella costaricensis,[0196] 美人蕉锈病菌(Canna rust),
[0197] Capitorostrum属:Capitorostrum cocoes,
[0198] 煤炱菌属(Capnodium)、Capnodium footii、Capnodium mangiferum、Capnodium ramosum、Capnodium theae,
[0199] 顶头孢霉属(Cephalosporium):Cephalosporium gramineum,
[0200] 角担子菌属(Ceratobasidium):Ceratobasidium  cereale、Ceratobasidiumcornigerum、Ceratobasidium noxium、Ceratobasidium ramicola、Ceratobasidium setariae、Ceratobasidium stevensii,
[0201] 长喙壳菌属(Ceratocystis):Ceratocystis adiposa、Ceratocystis coerulescens、Ceratocystis fimbriata、Ceratocystis moniliformis、Ceratocystis oblonga、Ceratocystis obpyriformis、Ceratocystis paradoxa、Ceratocystis pilifera、Ceratocystis pluriannulata、Ceratocystis polyconidia、Ceratocystis tanganyicensis、Ceratocystis zombamontana,
[0202] 角菌根菌属(Ceratorhiza):Ceratorhiza hydrophila,
[0203] Ceratospermopsis属,
[0204] 针尾孢属(Cercoseptoria):Cercoseptoria ocellata,
[0205] 小尾孢菌属(Cercosporella):Cercosporella rubi,
[0206] 蜡孔菌属(Ceriporia):Ceriporia spissa、Ceriporia xylostromatoides,[0207] Cerrena属、Cerrena unicolor,
[0208] 楔孢菌属(Ceuthospora):Ceuthospora lauri,
[0209] 笄霉属(Choanephora):Choanephora  cucurbitarum、Choanephora infundibulifera,
[0210] Chrysanthemum属:Chrysanthemum white rust,
[0211] 金孢霉属(Chrysomyxa):Chrysomyxa cassandrae,
[0212] 金孢霉属(Chrysomyxa):Chrysomyxa himalensis、Chrysomyxa ledi、Chrysomyxa ledi var.rhododendri、Chrysomyxa ledicola、Chrysomyxa nagodhii、Chrysomyxa neoglandulosi、Chrysomyxa piperiana、Chrysomyxa pirolata、Chrysomyxa pyrolae、Chrysomyxa reticulata、Chrysomyxa roanensis、Chrysomyxa succinea,
[0213] 枝孢菌属(Cladosporium):Cladosporium arthropodii、Cladosporium cladosporioides、Cladosporium cladosporioides f.sp.pisicola、Cladosporium cucumerinum、Cladosporium herbarum、Cladosporium musae、Cladosporium oncobae,[0214] 小肉齿菌属(Climacodon):Climacodon  pulcherrimus、Climacodon septentrionalis,
[0215] 杯伞属(Clitocybe):Clitocybe parasitica,
[0216] Clonostachys rosea f.rosea,
[0217] Clypeoporthe属:Clypeoporthe iliau,
[0218] 鞘锈菌属(Coleosporium)、Coleosporium helianthi、Coleosporium ipomoeae、Coleosporium madiae、Coleosporium pacificum、Coleosporium tussilaginis,[0219] Conidiosporomyces,
[0220] 小圆锥孢菌属(Coniella):Coniella castaneicola、Coniella diplodiella、Coniella fragariae,
[0221] 链孢霉属(Coniothecium):Coniothecium chomatosporum,
[0222] 盾壳霉属(Coniothyrium):Coniothyrium celtidis-australis、Coniothyrium henriquesii、Coniothyrium rosarum、Coniothyrium wernsdorffiae,
[0223] 鬼伞属(Coprinopsis):Coprinopsis psychromorbida,
[0224] 暗双孢属(Cordana):Cordana johnstonii、Cordana musae、Coriolopsis floccosa,
[0225] 玉米灰斑病菌(Corn grey leaf spot),
[0226] 伏革菌属(Corticium)、Corticium invisum、Corticium penicillatum、Corticium theae,
[0227] Coryneopsis属:Coryneopsis rubi,
[0228] 棒盘孢属(Coryneum):Coryneum rhododendri,
[0229] 坚黑穗病菌(Covered smut),
[0230] 毛皮伞菌属(Crinipellis):Crinipellis sarmentosa,
[0231] 柱锈属(Cronartium):Cronartium ribicola,
[0232] 隐丛赤壳属(Cryphonectriaceae),
[0233] Cryptobasidiaceae,
[0234] 脂病菌属(Cryptocline):Cryptocline cyclaminis,
[0235] Cryptomeliola,
[0236] 小隐孢壳属(Cryptosporella):Cryptosporella umbrina,
[0237] 拟隐孢壳属(Cryptosporiopsis):Cryptosporiopsis tarraconensis,[0238] 隐孢子虫(Cryptosporium)、Cryptosporium minimum,
[0239] 弯孢菌属(Curvularia):Curvularia lunata、Curvularia caricae-papayae、Curvularia penniseti、Curvularia senegalensis、Curvularia trifolii,[0240] 松落针病菌(Cyclaneusma needle cast),
[0241] 柱孢属(Cylindrocarpon):Cylindrocarpon ianthothele var.ianthothele、Cylindrocarpon magnusianum、Cylindrocarpon musae,
[0242] Cylindrocladiella属:Cylindrocladiella camelliae、Cylindrocladiella parva,
[0243] Cylindrocladium属:Cylindrocladium clavatum、Cylindrocladium lanceolatum、Cylindrocladium peruvianum、Cylindrocladium pteridis,
[0244] Cylindrosporium属:Cylindrosporium cannabinum、Cylindrosporium juglandis、Cylindrosporium rubi,
[0245] 座囊属(Cymadothea):Cymadothea trifolii,
[0246] 囊孢属(Cytospora):Cytospora palmarum、Cytospora personata、Cytospora sacchari、Cytospora sacculus、Cytospora terebinthi,
[0247] 座线孢属(Cytosporina):Cytosporina ludibunda,
[0248] Dactuliophora属:Dactuliophora elongata,
[0249] Davidiella属:Davidiella dianthi、Davidiella tassiana,
[0250] Deightoniella属:Deightoniella papuana、Deightoniella torulosa,[0251] Dendrophora属:Dendrophora marconii、Dendrophora erumpens,
[0252] Denticularia属:Denticularia mangiferae,
[0253] Dermea pseudotsugae,
[0254] 间座壳科(Diaporthaceae),
[0255] 间座壳属(Diaporthe):Diaporthe arctii、Diaporthe dulcamarae、Diaporthe eres、Diaporthe helianthi、Diaporthe lagunensis、Diaporthe lokoyae、Diaporthe melonis、Diaporthe orthoceras、Diaporthe perniciosa、Diaporthe phaseolorum、Diaporthe phaseolorum var.caulivora、Diaporthe phaseolorum var.phaseolorum、Diaporthe phaseolorum var.soja、Diaporthe rudis、Diaporthe tanakae、Diaporthe toxica,
[0256] Dicarpella属:Dicarpella dryina,
[0257] Didymella属:Didymella applanata、Didymella bryoniae、Didymella fabae、Didymella lycopersici
[0258] Didymosphaeria属:Didymosphaeria arachidicola、Didymosphaeria taiwanensis,
[0259] Dilophospora属:Dilophospora alopecuri,
[0260] 小隔孢煤菌属(Dimeriella):甘蔗小隔孢煤菌(Dimeriella sacchari),[0261] Diplocarpon属:Diplocarpon mespili、Diplocarpon rosae,
[0262] Discosia属、Discosia artocreas,
[0263] Discostroma属:Discostroma corticola,
[0264] Distocercospora属:Distocercospora livistonae,
[0265] 小穴壳菌属(Dothiorella):Dothiorella brevicollis、Dothiorella dominicana、Dothiorella dulcispinae、Dothiorella gregaria,
[0266] Drechslera属:Drechslera avenacea、Drechslera campanulata、Drechslera dematioidea、Drechslera gigantea、Drechslera glycines、Drechslera musae-sapientium、Drechslera teres f.maculata、Drechslera wirreganensis,
[0267] Eballistra属:Eballistra lineata、Eballistra oryzae,
[0268] Eballistraceae,
[0269] 白腐菌属(Echinodontium):Echinodontium ryvardenii、Echinodontium tinctorium,
[0270] Ectendomeliola,
[0271] 痂囊腔菌属 ampelina、 batatas、brasiliensis、 leucospila、 randii、 rosarum、
sacchari、 theae、 veneta,
[0272] Endomeliola,
[0273] 栗疫菌属(Endothia):Endothia radicalis,
[0274] Endothiella属:Endothiella gyrosa,
[0275] 黑粉菌纲(Entorrhizomycetes),
[0276] Entyloma属:Entyloma ageratinae、Entyloma dahliae、Entyloma ellisii,[0277] Epicoccum属:Epicoccum nigrum,
[0278] 假囊酵母属(Eremothecium):Eremothecium coryli、Eremothecium gossypii,[0279] 白粉菌(Erysiphales),
[0280] 外担菌科(Exobasidiaceae):Exobasidium burtii、Exobasidium reticulatum、Exobasidium vaccinii var.japonicum、Exobasidium vaccinii-uliginosi、Exobasidium vexans,xxophiala alcalophila,
[0281] 外瓶霉属(Exophiala):Exophiala angulospora、Exophiala attenuata、Exophiala calicioides、Exophiala castellanii、Exophiala dermatitidis、Exophiala dopicola、Exophiala exophialae、Exophiala heteromorpha、Exophiala hongkongensis、Exophiala jeanselmei、Exophiala lecanii-corni、Exophiala mansonii、Exophiala mesophila、Exophiala moniliae、Exophiala negronii、Exophiala phaeomuriformis、Exophiala pisciphila、Exophiala psychrophila、Exophiala salmonis、Exophiala spinifera,
[0282] 层孔菌属(Fomes):Fomes
[0283] 拟层孔菌属(Fomitopsis):Fomitopsis rosea,
[0284] Fusicladium属:Fusicladium pisicola,
[0285] 壳梭孢属(Fusicoccum):Fusicoccum aesculi、Fusicoccum amygdali、Fusicoccum quercus,
[0286] 半乳糖酵母属(Galactomyces):Galactomyces candidum,
[0287] 灵芝属(Ganoderma):Ganoderma brownii、Ganoderma lobatum、Ganoderma megaloma、Ganoderma meredithiae、Ganoderma orbiforme、Ganoderma philippii、Ganoderma sessile、Ganoderma tornatum、Ganoderma zonatum,
[0288] Geastrumia属:Geastrumia polystigmatis,
[0289] Georgefischeriaceae,
[0290] Georgefischeriales,
[0291] 肉座菌属(Geosmithia):Geosmithia pallida、
[0292] 土毛菌属(Geotrichum):Geotrichum candidum、Geotrichum klebahnii,[0293] 赤霉菌属(Gibberella):Gibberella acuminata、Gibberella avenacea、Gibberella baccata、Gibberella cyanogena、Gibberella fujikuroi、Gibberella intricans、Gibberella pulicaris、Gibberella stilboides、Gibberella tricincta、Gibberella xylarioides、Gibberella zeae,
[0294] 绒座壳属(Gibellina):Gibellina cerealis,
[0295] 吉尔霉属(Gilbertella):Gilbertella persicaria,
[0296] Gjaerumiaceae,
[0297] Gliocladiopsis属:Gliocladiopsis tenuis,
[0298] 粘帚霉属(Gliocladium):Gliocladium vermoeseni,
[0299] 胶尾孢属(Gloeocercospora):Gloeocercospora sorghi,
[0300] 黏囊菌属(Gloeocystidiellum):Gloeocystidiellum porosum,
[0301] 粘褶菌属(Gloeophyllum):Gloeophyllum mexicanum、Gloeophyllum trabeum,[0302] 半胶菌属(Gloeoporus):Gloeoporus dichrous,
[0303] 茶盘长孢属(Gloeosporium):Gloeosporium cattleyae、Gloeosporium theae-sinensis,
[0304] Glomerella属:Glomerella cingulata、Glomerella graminicola、Glomerella tucumanensis,
[0305] 日规壳属(Gnomonia):Gnomonia caryae、Gnomonia comari、Gnomonia dispora、Gnomonia iliau、Gnomonia rubi,
[0306] Golovinomyces属:Golovinomyces cichoracearum,
[0307] Graphiola phoenicis,
[0308] 果黑粉菌(Graphiolaceae),
[0309] 粘束梗霉属(Graphium):Graphium rigidum、Graphium rubrum,
[0310] Graphyllium属:Graphyllium pentamerum,
[0311] Grovesinia属:Grovesinia pyramidalis,
[0312] Gymnoconia属:Gymnoconia nitens,
[0313] 金钱菌属(Gymnopus):Gymnopus dryophilus,
[0314] 胶锈菌属(Gymnosporangium):Gymnosporangium kernianum、Gymnosporangium libocedri、Gymnosporangium nelsonii、Gymnosporangium yamadae,
[0315] Haematonectria属:Haematonectria haematococca,
[0316] 汉逊酵母属(Hansenula):Hansenula subpelliculosa,
[0317] Hapalosphaeria属:Hapalosphaeria deformans,
[0318] Haplobasidion属:Haplobasidion musae,
[0319] 卷担菌属(Helicobasidium):Helicobasidium compactum、Helicobasidium longisporum、Helicobasidium purpureum,
[0320] Helicoma属:Helicoma muelleri,
[0321] Helminthosporium属:Helminthosporium cookei、Helminthosporium solani,[0322] 壳蠕孢属(Hendersonia):Hendersonia creberrima、Hendersonia theicola,[0323] 猴头菌属(Hericium):Hericium coralloides,
[0324] 异担子菌属(Heterobasidion):Heterobasidion irregulare、Heterobasidion occidentale,
[0325] 蜂窝菌属(Hexagonia):Hexagonia hydnoides,
[0326] Hymenula属:Hymenula affinis,
[0327] Hyphodermella属:Hyphodermella corrugata,
[0328] Hyphodontia属:Hyphodontia aspera、Hyphodontia sambuci,
[0329] 炭团菌属(Hypoxylon):Hypoxylon tinctor,
[0330] 纤孔菌属(Inonotus):Inonotus arizonicus、Inonotus cuticularis、Inonotus dryophilus、Inonotus hispidus、Inonotus ludovicianus,
[0331] 耙菌属(Irpex):Irpex destruens、Irpex lacteus,
[0332] 球梗孢属(Kabatiella):Kabatiella caulivora,
[0333] 卡纳尔腥黑粉病菌(Karnal bunt),
[0334] 黄萎病菌(Koa wilt),
[0335] 炭墩菌属(Kretzschmaria):Kretzschmaria zonata,
[0336] Kuehneola属:Kuehneola uredinis,
[0337] Kutilakesa属:Kutilakesa pironii,
[0338] 硫磺菌属(Laetiporus):Laetiporus ailaoshanensis、Laetiporus baudonii、Laetiporus caribensis、Laetiporus conifericola、Laetiporus cremeiporus、Laetiporus gilbertsonii、Laetiporus huroniensis、Laetiporus montanus、Laetiporus portentosus、Laetiporus zonatus,
[0339] 松肉菇属(Laxitextum):Laxitextum bicolor,
[0340] Leandria属:Leandria momordicae,
[0341] 香菇属(Lentinus):Lentinus tigrinus,
[0342] 革褶菌属(Lenzites):Lenzites betulina、Lenzites elegans,
[0343] Leohumicola属:Leohumicola atra、Leohumicola incrustata、Leohumicola levissima,
[0344] Leptodontidium属:Leptodontidium elatius,
[0345] Leptographium属:Leptographium microsporum,
[0346] 小光腔菌属(Leptosphaerulina):Leptosphaerulina  crassiasca、Leptosphaerulina trifolii,
[0347] Leptothyrium属:Leptothyrium nervisedum,
[0348] 黄斑病菌属(Leptotrochila):Leptotrochila medicaginis,
[0349] Leucocytospora属:Leucocytospora leucostoma,
[0350] Leucostoma属:Leucostoma auerswaldii、Leucostoma canker、Leucostoma kunzei、Leucostoma persoonii,
[0351] Leveillula属:Leveillula compositarum、Leveillula leguminosarum、Leveillula taurica,
[0352] Limacinula属:Limacinula tenuis,
[0353] 壳线孢属(Linochora):Linochora graminis,
[0354] 散黑穗病菌(Loose smut),
[0355] 齿脉菌属(Lopharia):Lopharia crassa,
[0356] 散斑壳菌属(Lophodermium):Lophodermium aucupariae、Lophodermium schweinitzii,
[0357] 柱孢大茎点菌(Macrophoma):Macrophoma mangiferae、Macrophoma theicola,[0358] 小孢癣菌属(Macrosporium):Macrosporium cocos,
[0359] 巨座壳属(Magnaporthe):Magnaporthe grisea、Magnaporthe salvinii,Magnaporthiopsis,
[0360] Mamianiella属:Mamianiella coryli,
[0361] 微皮伞属(Marasmiellus):Marasmiellus  cocophilus、Marasmiellus stenophyllus,
[0362] 小皮伞属(Marasmius):Marasmius crinis-equi、Marasmius sacchari、Marasmius semiustus、Marasmius stenophyllus、Marasmius tenuissimus,[0363] 透孢黑团壳属(Massarina):Massarina walkeri,
[0364] Mauginiella属:Mauginiella scaettae,
[0365] 栅锈菌属(Melampsora):Melampsora lini、Melampsora occidentalis,[0366] 黑盘壳菌属(Melanconis):Melanconis carthusiana,
[0367] 大黑盘孢属(Melanconium):Melanconium juglandinum,
[0368] Meliola属:Meliola mangiferae、Meliola zangii,
[0369] Meruliopsis属:Meruliopsis ambigua,
[0370] 小囊菌属(Microascus):Microascus brevicaulis,
[0371] Microbotryum属:Microbotryum silenes-dioicae、Microbotryum violaceum,[0372] 叉丝壳属(Microsphaera):Microsphaera coryli、Microsphaera diffusa、Microsphaera ellisii、Microsphaera euphorbiae、Microsphaera hommae、Microsphaera penicillata、Microsphaera vaccinii、Microsphaera verruculosa,
[0373] 微座孢属(Microstroma):Microstroma juglandis,
[0374] Moesziomyces属:Moesziomyces bullatus,
[0375] 链疫孢属(Moniliophthora):Moniliophthora roreri,
[0376] 毛链孢属(Monilochaetes):Monilochaetes infuscans,
[0377] 盘单毛孢属(Monochaetia):Monochaetia coryli、Monochaetia mali,[0378] Monographella属、Monographella albescens、Monographella cucumerina、Monographella nivalis,
[0379] Monosporascus属:Monosporascus cannonballus、Monosporascus eutypoides,[0380] Monostichella属:Monostichella coryli,
[0381] 毛霉属(Mucor):卷枝毛霉(Mucor  circinelloides)、冻土毛霉(Mucor hiemalis)、大毛霉(Mucor mucedo)、Mucor paronychius、梨形毛霉(Mucor piriformis)、总状毛霉(Mucor racemosus),
[0382] 小菇属(Mycena):Mycena citricolor,
[0383] Mycocentrospora属:Mycocentrospora acerina,
[0384] Mycoleptodiscus属:Mycoleptodiscus terrestris,
[0385] Didymella属:Didymella rabiei,
[0386] 球腔菌属(Mycosphaerella):Mycosphaerella recutita、Mycosphaerella rosicola、Mycosphaerella rubi、Mycosphaerella stigmina-platani、Mycosphaerella striatiformans,
[0387] Mycovellosiella属:Mycovellosiella concors,
[0388] 钉孢菌属(Passalora):Passalora fulva,
[0389] Mycovellosiella属:Mycovellosiella koepkei、Mycovellosiella vaginae,[0390] Myriogenospora属:Myriogenospora aciculispora,
[0391] 漆斑菌属(Myrothecium):Myrothecium roridum、Myrothecium verrucaria,[0392] Naevala属:Naevala perexigua,
[0393] 膨痂锈菌属(Naohidemyces):Naohidemyces vaccinii,
[0394] 丛赤壳属(Nectria):朱红丛赤壳(Nectria cinnabarina)、Nectria ditissima、Nectria foliicola、Nectria mammoidea、Nectria mauritiicola、碗形丛赤壳(Nectria peziza)、假毛丛赤壳(Nectria pseudotrichia)、Nectria radicicola、Nectria ramulariae,
[0395] Nectriella属:Nectriella pironii,
[0396] Nemania属:Nemania diffusa、Nemania serpens,
[0397] 新赤壳菌(Neocosmospora):Neocosmospora vasinfecta,
[0398] Neodeightonia属:Neodeightonia phoenicum,
[0399] 新白粉菌属(Neoerysiphe):Neoerysiphe galeopsidis,
[0400] Neofabraea属:Neofabraea perennans,
[0401] Neofusicoccum属:Neofusicoccum mangiferae,
[0402] Oidiopsis属:Oidiopsis gossypii,
[0403] Oidium属:Oidium arachidis、Oidium caricae-papayae、Oidium indicum、Oidium mangiferae、Oidium manihotis,
[0404] 油壶菌属(Olpidium):Olpidium brassicae,
[0405] Omphalia属:Omphalia tralucida,
[0406] Ophiobolus属:Ophiobolus anguillides、Ophiobolus cannabinus,[0407] 蛇孢炱属(Ophioirenina),
[0408] Ovulinia属:Ovulinia azaleae,
[0409] 酸味菌属(Oxyporus):Oxyporus corticola,
[0410] 束丝菌属(Ozonium):Ozonium texanum,
[0411] 月盾霉属(Peltaster):Peltaster fructicola,
[0412] 青霉菌属(Penicillium):扩展青霉(Penicillium expansum)、绳状青霉菌(Penicillium funiculosum),
[0413] 隔孢伏革菌属(Peniophora),
[0414] 黑团孢属(Periconia)、Periconia circinata,
[0415] Periconiella属:Periconiella cocoes,
[0416] Peridermium属:Peridermium californicum,
[0417] Pestalosphaeria属:Pestalosphaeria concentrica,
[0418] Pestalotia属:Pestalotia longiseta、Pestalotia rhododendri,
[0419] 拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis):Pestalotiopsis adusta、Pestalotiopsis arachidis、Pestalotiopsis disseminata、Pestalotiopsis guepini、Pestalotiopsis leprogena、Pestalotiopsis longiseta、Pestalotiopsis mangiferae、Pestalotiopsis palmarum、Pestalotiopsis sydowiana、Pestalotiopsis theae,
[0420] 派伦霉属(Peyronellaea):Peyronellaea curtisii,
[0421] Phacidiopycnis属:Phacidiopycnis padwickii,
[0422] Phaeochoropsis属:Phaeochoropsis mucosa,
[0423] Phaeocytostroma属:Phaeocytostroma iliau、Phaeocytostroma sacchari,[0424] Phaeoisariopsis属:Phaeoisariopsis bataticola,
[0425] 色链隔孢属(Phaeoramularia):Phaeoramularia heterospora、Phaeoramularia indica、Phaeoramularia manihotis,
[0426] Phaeoseptoria属:Phaeoseptoria musae,
[0427] Phaeosphaerella属:Phaeosphaerella mangiferae、Phaeosphaerella theae,[0428] 暗球腔菌属(Phaeosphaeria):Phaeosphaeria avenaria、Phaeosphaeria herpotrichoides、Phaeosphaeria microscopica、Phaeosphaeria nodorum,[0429] Phaeosphaeriopsis属:Phaeosphaeriopsis obtusispora,
[0430] Phaeotrichoconis属:Phaeotrichoconis crotalariae,
[0431] 瓶霉菌属(Phialophora):Phialophora asteris、Phialophora cinerescens、Phialophora gregata、Phialophora tracheiphila,
[0432] 茎点菌属(Phoma):Phoma clematidina、Phoma costaricensis、Phoma cucurbitacearum、Phoma destructiva、Phoma draconis、Phoma exigua、Phoma exigua、Phoma exigua var.foveata、Phoma exigua、Phoma glomerata、Phoma glycinicola、Phoma herbarum、Phoma insidiosa、Phoma medicaginis、Phoma microspora、Phoma narcissi、Phoma nebulosa、Phoma oncidii-sphacelati、Phoma pinodella、Phoma sclerotioides、Phoma strasseri,
[0433] 拟茎点霉属(Phomopsis):Phomopsis asparagi、Phomopsis asparagicola、Phomopsis cannabina、Phomopsis coffeae、Phomopsis ganjae、Phomopsis javanica、Phomopsis longicolla、Phomopsis mangiferae、Phomopsis prunorum、Phomopsis sclerotioides、Phomopsis theae,
[0434] 多胞锈菌属(Phragmidium):Phragmidium mucronatum、Phragmidium rosae-pimpinellifoliae、Phragmidium rubi-idaei、Phragmidium violaceum,
[0435] 黑痣菌属(Phyllachora):Phyllachora banksiae、Phyllachora cannabis、Phyllachora graminis、Phyllachora gratissima、Phyllachora musicola、Phyllachora pomigena、Phyllachora sacchari,
[0436] 球针壳属(Phyllactinia),
[0437] 叶点霉属(Phyllosticta):Phyllosticta alliariaefoliae Phyllosticta arachidis-hypogaeae、Phyllosticta batatas、意大利果壳叶点霉(Phyllosticta capitalensis)、Phyllosticta carpogena、Phyllosticta coffeicola、Phyllosticta concentrica、Phyllosticta coryli、Phyllosticta cucurbitacearum、Phyllosticta cyclaminella、Phyllosticta erratica、Phyllosticta hawaiiensis、Phyllosticta lentisci、Phyllosticta manihotis、Phyllosticta micropuncta、Phyllosticta mortonii、Phyllosticta nicotianae、Phyllosticta palmetto、Phyllosticta penicillariae、Phyllosticta perseae、Phyllosticta pseudocapsici、Phyllosticta sojaecola、Phyllosticta theae、Phyllosticta theicola,
[0438] Phymatotrichopsis属:Phymatotrichopsis omnivora,
[0439] 囊孢菌属(Physalospora):Physalospora disrupta、Physalospora perseae,[0440] 节壶菌属(Physoderma):Physoderma alfalfae、Physoderma leproides、Physoderma trifolii,
[0441] Physopella属:Physopella ampelopsidis,
[0442] Pileolaria属:Pileolaria terebinthi,
[0443] 扇孢属(Piricaudiopsis):Piricaudiopsis punicae、Piricaudiopsis rhaphidophorae、Piricaudiopsis rosae,
[0444] 甘薯基腐菌(Plenodomus):Plenodomus destruens、Plenodomus meliloti,[0445] Pleosphaerulina属:Pleosphaerulina sojicola,
[0446] 格孢菌属(Pleospora):Pleospora alfalfae、Pleospora betae、Pleospora herbarum、Pleospora lycopersici、Pleospora tarda、Pleospora theae,
[0447] Pleuroceras,
[0448] Podosphaera属:Podosphaera fuliginea、Podosphaera fusca、Podosphaera leucotricha、Podosphaera macularis、Podosphaera pannosa,
[0449] Polyscytalum属:Polyscytalum pustulans,
[0450] 茯苓属(Poria):Poria hypobrunnea,
[0451] 波斯特孔菌属(Postia):Postia tephroleuca,
[0452] 白粉菌(Powdery mildew),
[0453] 假尾孢菌属(Pseudocercospora):Pseudocercospora arecacearum、Pseudocercospora cannabina、Pseudocercospora fuligena、Pseudocercosporella herpotrichoides、Pseudocercospora gunnerae、Pseudocercospora pandoreae、Pseudocercospora puderi、Pseudocercospora rhapisicola、Pseudocercospora theae、Pseudocercospora vitis、Pseudocercosporella capsellae,
[0454] Pseudocochliobolus属:Pseudocochliobolus eragrostidis,
[0455] Pseudoepicoccum属:Pseudoepicoccum cocos,
[0456] 假盘菌属(Pseudopeziza):Pseudopeziza jonesii、苜蓿假盘菌(Pseudopeziza medicaginis)、Pseudopeziza trifolii,
[0457] Pseudoseptorias属:Pseudoseptoria donacis,
[0458] Pucciniaceae,
[0459] Pucciniastrum属:Pucciniastrum americanum、Pucciniastrum arcticum、Pucciniastrum epilobii、Pucciniastrum hydrangeae,
[0460] Pycnostysanus属:Pycnostysanus azaleae,
[0461] 棘壳孢属(Pyrenochaeta):Pyrenochaeta lycopersici、Pyrenochaeta terrestris,
[0462] Pyrenopeziza属:Pyrenopeziza brassicae,
[0463] Ramichloridium属:Ramichloridium musae,
[0464] Ramulispora属:Ramulispora sorghi、Ramulispora sorghicola,
[0465] Rhinocladium属:Rhinocladium corticola,
[0466] Rhizophydium属:Rhizophydium graminis,
[0467] 根霉属(Rhizopus):少根根霉(Rhizopus arrhizus)、环状根霉(Rhizopus circinans)、少孢根霉(Rhizopus microsporus)、米根霉(Rhizopus oryzae),[0468] 斑痣盘菌属(Rhytisma):Rhytisma punctatum、Rhytisma vitis,
[0469] Rigidoporus属:Rigidoporus vinctus,
[0470] 炭豆菌属(Rosellinia):Rosellinia arcuata、Rosellinia bunodes、Rosellinia necatrix、Rosellinia pepo,
[0471] Saccharicola属:Saccharicola taiwanensis,
[0472] Schiffnerula属:Schiffnerula cannabis,
[0473] Schizophyllum属:Schizophyllum commune,
[0474] Schizopora属:Schizopora flavipora,
[0475] Schizothyrium属:Schizothyrium pomi,
[0476] Sclerophthora属:Sclerophthora macrospora,
[0477] 白绢小菌核菌(Sclerotium):Sclerotium cinnamomi、Sclerotium delphinii,[0478] Scytinostroma属:Scytinostroma galactinum,
[0479] Seimatosporium属:Seimatosporium mariae、Seimatosporium rhododendri,[0480] Selenophoma属:Selenophoma linicola,
[0481] 隔担子菌属(Septobasidium):Septobasidium bogoriense、Septobasidium euryae-groffii、Septobasidium gaoligongense、Septobasidium  pilosum、Septobasidium polygoni、Septobasidium pseudopedicellatum、Septobasidium theae,[0482] Septocyta属:Septocyta ruborum,
[0483] Serpula属:Serpula lacrymans,
[0484] Setosphaeria属:Setosphaeria rostrata、Setosphaeria turcica,[0485] Spencermartinsia属:Spencermartinsia pretoriensis,
[0486] Sphaceloma属:Sphaceloma arachidis、Sphaceloma menthae、Sphaceloma perseae、Sphaceloma poinsettiae、Sphaceloma sacchari、Sphaceloma theae,[0487] Sphacelotheca属:Sphacelotheca reiliana、Sphaerotheca castagnei,[0488] Sphaerulina属:Sphaerulina oryzina、Sphaerulina rehmiana、Sphaerulina rubi,
[0489] 孢锈菌属(Sphenospora):Sphenospora kevorkianii,
[0490] Spilocaea属:Spilocaea oleaginea,
[0491] Sporisorium属:Sporisorium cruentum、Sporisorium ehrenbergii、Sporisorium scitamineum、Sporisorium sorghi,
[0492] Sporonema属:Sporonema phacidioides,
[0493] Stagonospora属:Stagonospora avenae、Stagonospora meliloti、Stagonospora recedens、Stagonospora sacchari、Stagonospora tainanensis,
[0494] Stagonosporopsis,
[0495] Stegocintractia属:Stegocintractia junci,
[0496] Stemphylium属:Stemphylium  alfalfae、Stemphylium  bolickii、Stemphyliumcannabinum、Stemphylium globuliferum、Stemphylium lycopersici、Stemphylium sarciniforme、Stemphylium solani、Stemphylium vesicarium,[0497] Stenella属:Stenella anthuriicola,
[0498] 柱头真菌病菌(Stigmatomycosis),
[0499] Stigmina属:Stigmina carpophila、Stigmina palmivora、Stigmina platani-racemosae,
[0500] Stromatinia属:Stromatinia cepivora,
[0501] Sydowiella属:Sydowiella depressula,
[0502] Sydowiellaceae,
[0503] Synchytrium属:Synchytrium endobioticum,
[0504] Tapesia属:Tapesia acuformis、Tapesia yallundae,
[0505] Taphrina属:Taphrina coryli、Taphrina potentillae,
[0506] Thanatephorus属:Thanatephorus cucumeris,
[0507] Thecaphora属:Thecaphora solani,
[0508] Thielaviopsis属:Thielaviopsis basicola、Thielaviopsis ceramica,[0509] Thyrostroma属:Thyrostroma compactum,
[0510] Tiarosporella属:Tiarosporella urbis-rosarum,
[0511] Tilletia属:Tilletia barclayana、Tilletia caries、Tilletia controversa、Tilletia laevis、Tilletia tritici、Tilletia walkeri,
[0512] Tilletiariaceae,
[0513] Togniniaceae,
[0514] Tranzschelia属:Tranzschelia pruni-spinosae,
[0515] 木霉菌属(Trichoderma):Trichoderma koningii、Trichoderma paucisporum、Trichoderma songyi、Trichoderma theobromicola、Trichoderma viride,
[0516] Tubercularia属:Tubercularia lateritia,
[0517] Tunstallia属:Tunstallia aculeata,
[0518] 核瑚菌属(Typhula):Typhula blight、Typhula  idahoensis、Typhula incarnata、Typhula ishikariensis、Typhula variabilis,
[0519] Ulocladium属:Ulocladium consortiale,
[0520] 钩丝壳属(Uncinula),
[0521] Uredo属:Uredo  behnickiana、Uredo kriegeriana、Uredo musae、Uredo nigropuncta、Uredo rangelii,
[0522] Urocystis属:Urocystis agropyri、Urocystis brassicae、Urocystis occulta,[0523] 单胞锈菌属(Uromyces):Uromyces apiosporus、Uromyces appendiculatus、Uromyces beticola、Uromyces ciceris-arietini、Uromyces dianthi、Uromyces euphorbiae、Uromyces graminis、Uromyces inconspicuus、Uromyces lineolatus、Uromyces musae、Uromyces oblongus、Uromyces pisi-sativi、UromycesUromyces medicaginis、Uromyces trifolii-repentis、Uromyces viciae-fabae,[0524] Urophlyctis属:Urophlyctis leproides、Urophlyctis trifolii,
[0525] 黑粉菌(Ustilaginales),
[0526] 黑粉菌属(Ustilago):Ustilago avenae、Ustilago esculenta、Ustilago hordei、Ustilago maydis、Ustilago nigra、Ustilago nuda、Ustilago scitaminea、Ustilago tritici,
[0527] Vankya属:Vankya ornithogali,
[0528] 膏药病菌(Velvet blight),
[0529] Veronaea属:Veronaea musae,
[0530] 轮枝菌属(Verticillium):Verticillium albo-atrum、Verticillium alfalfae、Verticillium dahliae、Verticillium isaacii、Verticillium klebahnii、Verticillium longisporum、Verticillium nonalfalfae、Verticillium theobromae、Verticillium wilt、Verticillium zaregamsianum,
[0531] Waitea属:Waitea circinata,
[0532] Westea,
[0533] 小麦叶锈病菌(Wheat leaf rust),
[0534] 小麦霉病菌(Wheat mildew),
[0535] Wuestneiopsis属:Wuestneiopsis georgiana,
[0536] Xeromphalina属:Xeromphalina fraxinophila,
[0537] Zopfia属:Zopfia rhizophila,
[0538] Zygosaccharomyces属:Zygosaccharomyces bailii、Zygosaccharomyces florentinus,
[0539] Zythiostroma。
[0540] 优选地,本发明涵盖的真菌、卵菌或细菌与农作物配对如下:
[0541] 小麦(普通小麦(Triticum sativum))
[0542] Claviceps purpurea、Erysiphe graminis、燕麦镰刀菌(Fusarium avenaceum)、枯萎镰刀菌(Fusarium culmorum)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、Fusarium langsethiae、梨孢镰刀菌(Fusarium  poae)、假禾谷镰刀菌(Fusarium pseudograminearum)、Gaeumannomyces graminis、Leptosphaeria nodorum、微座孢属物种、小麦壳针孢叶枯菌(Mycosphaerella graminicola)、Oculimacula acuformis、Oculimacula yallundae、Puccinia Puccinia striiformis、Pyrenophora tritici-repentis、Rhizoctonia cerealis、Microdochium和Zymoseptoria tritici[0543] 玉米(玉蜀黍属(Zea mays))
[0544] 禾谷镰刀菌、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、Fusarium subglutinans、串珠镰刀菌(Fusarium verticillioides)
[0545] 大麦(大麦(Hordeum vulgare))
[0546] 禾本科布氏白粉菌(Blumeria graminis)、镰刀菌物种、Pyrenophora teres、Ramularia collo-cygni、Rhynchosporium secalis
[0547] 稻(水稻(Oryza sativa))
[0548] Cochliobolus miyabeanus、Fusarium  Magnaporthe oryzae、Microdochium oryzae、稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)、Rhizoctonia oryzae、立枯丝核病原菌(Rhizoctonia solani)、稻叶鞘腐败病菌(Sarocladium oryzae)、稻麹病菌(Ustilaginoides virens)
[0549] 马铃薯(Solanum tuberosum)
[0550] 链格孢菌(Alternia alternata)、茄链格孢菌(Alternaria solani)、Phytophtora infestans、立枯丝核病原菌
[0551] 葡萄藤(釀酒葡萄(Vinis vitifera))
[0552] 灰色葡萄孢菌、葡萄钩丝壳、葡萄霜霉病菌、Guignardia bidwelli、Erisyphe necator、Diplodia seriata
[0553] 大豆(Glycine max)
[0554] Cercopora kikuchii、Colletotrichum dematium、Corynespora cassiicola、禾谷镰刀菌、腐霉属物种、Rhizoctonia solani、Sclerotinia sclerotiorum、Septoria glycines苹果树(Malus domestica)
[0555] 桃褐腐病菌(Monilia fructigena)、褐腐病菌(Monilia laxa)、Pezzicula alba、Pezzicula malicorticis、苹果黑星菌(Venturia inaequalis)
[0556] 番茄(Lycopersicon esculentum)
[0557] 晚疫病菌(Phytophtora infestans)
[0558] 豆类(Phaseolus vulgaris)
[0559] 疣顶单胞锈(Uromyces appendiculatus)
[0560] 萝卜(Raphanus sativus)
[0561] Alternaria brassicae
[0562] 所有水果和蔬菜
[0563] 灰色葡萄孢菌
[0564] 草莓植物(Fragaria sp.)
[0565] Colletotrichum acutatum
[0566] 胡萝卜(Daucus carota)
[0567] 互生链隔孢菌(Aternaria alternata)、Alternaria dauci、Alternaria radicina
[0568] 桃(Prunus persica)和杏(Prunus armeniaca)
[0569] 链核盘菌(Monilia fructicola)、桃褐腐病菌(Monilia fructigena)、褐腐病菌(Monilia laxa)
[0570] 特别优选地,本发明涉及的真菌或细菌与农作物的对如下:
[0571] 小麦:禾谷镰刀菌、Microdochium and Zymoseptoria tritici
[0572] 葡萄藤:灰色葡萄孢菌、葡萄钩丝壳、葡萄霜霉病菌、Guignardia bidwelli、Erisyphe necator、Diplodia seriata
[0573] 马铃薯:链格孢菌(Alternia alternata)、茄链格孢菌(Alternaria solani)、Phytophtora infestans、立枯丝核病原菌
[0574] 番茄:晚疫病菌(Phytophtora infestans)
[0575] 防治方法
[0576] 本发明还涉及防治作物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的方法,其包括将式(I)的分子施用于农作物:
[0577]
[0578] 其中:
[0579] R1选自由以下组成的组,
[0580]
[0581] 其中:
[0582] R3代表H或SO3Na,
[0583] R4为H或OH,
[0584] 代表单键或双键,
[0585] n等于0或1且
[0586] m为0或1;并且
[0587] R2选自由以下组成的组,
[0588]
[0589] 优选地,R1为:
[0590]
[0591] 其中R3为H或SO3Na,
[0592] 优选地,R2为:
[0593] 该防治可以是治疗性或预防性的,优选是治疗性的。
[0594] 可以通过技术人员已知的任何手段来施用于农作物,以达到受真菌和/或细菌影响的植物部分。
[0595] 式(I)的分子以0.1至5mg/mL,优选0.5至3mg/mL,特别优选0.75至1mg/mL的量使用。
[0596] 种子包衣可以通过技术人员已知的任何技术进行,以使活性剂保持与种子接触。
[0597] 例如,可以通过涂粉或喷涂进行涂覆。
[0598] 例如,涂层可以包含助剂和添加剂。
[0599] 助剂用于允许活性物质在整个产品施用过程中以非常低的剂量以相等和恒定的比例施用到种子上并保留在种子上。
[0600] 助剂包括:有机溶剂或水、分散剂、乳化剂、表面活性剂或湿润剂、染料等。
[0601] 表面活性剂和乳化剂具有将两种不相容的液体结合并稳定地保持在一起的性质。
[0602] 可以将各种佐剂应用于种子。膜包衣对应于将微孔膜施加至种子表面。它们不会改变种子的形状或大小。它们提高了处理的覆盖率和均一性。当农民使用种子时,在通过抑制灰尘并促进种子流入播种机以进行播种期间,它们更易于处理。它们在培养条件下改善了活性物质的作用。包衣改变种子的形状、大小和重量。它们提高了播种精度。
[0603] 根据本发明的用于防治作物和种子的致病真菌和/或细菌的处理方法特别适合于对抗镰刀菌病,优选表1中列出的镰刀菌病。
[0604]
[0605]
[0606]
[0607]
[0608]
[0609] 表1:镰刀菌病概要
[0610] 根据本发明的用于防治作物和种子的致病真菌、卵菌和/或细菌的处理方法特别适用于以下农作物与真菌或细菌的配对:
[0611] 小麦:禾谷镰刀菌,Microdochium nivale和Zymoseptoria tritici
[0612] 葡萄藤:灰色葡萄孢菌,葡萄霜霉病菌,Guignardia bidwelli,Erisyphe necator,Diplodia seriata
[0613] 苹果树:苹果黑星菌
[0614] 香蕉树:Fusarium oxysporum和ycosphaerella fijiensis
[0615] 实施例
[0616] 材料和方法
[0617] 实施例1:微藻培养
[0618] 来自Algobank(Caen)的微藻强壮前沟藻(Amphidinium carterae)AC208株和来自Roscoff海洋微生物库(RCC:Roscoff Culture Collection)的微藻Prymnesium parvum,RCC1436株,以及三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum),CCMP632株。这些微藻在19℃下,以12h/12h的昼/夜周期,在L1人工海水(https://ncma.bigelow.org/algal-recipes)中进行培养。使用的光强度为100μE。在指数生长阶段结束时,通过离心(在3000RPM下15min)回收生物质。将得到的细胞沉淀物冷冻,然后使用实验室冷冻干燥机(Alpha 1-
2LDplus,Labconco)进行冷冻干燥,以稳定地长期保存活性物质。冷冻干燥后,称重干物质。
[0619] 实施例2:制备提取物
[0620] 为了从实施例1的干物质中提取活性物质,将20mg的干物质重悬于1mL100℃的蒸馏水中。在室温(20-25℃)下孵育2分钟后,将提取物储存在冰中,然后在室温下以10000RPM离心5分钟。将含有活性物质的上清液在液氮中冷冻,以长期保留其抗真菌特性。
[0621] 实施例3:禾谷镰刀菌发芽测试
[0622] 禾谷镰刀菌的孢子在贫化了“绿豆”的培养基中生长。通过在Miracloth(Calbiochem)上过滤将孢子与菌丝体分离,离心,然后以1.6.106个孢子/mL的浓度重悬。在对照溶液或不同浓度的强壮前沟藻提取物的存在下孵育大约16000个孢子。在室温下孵育10分钟后,将孢子放置在载玻片上用于6小时后发芽计数,或放置在培养皿上用于72小时后观察菌丝体生长。
[0623] 测试
[0624] 实施例4:提取物D的HPLC分级分离和测试所获得的不同部分的抗真菌活性。
[0625] 为了表征强壮前沟藻提取物中存在的哪些分子产生抗真菌活性,选择了生物引导的分级分离策略:将强壮前沟藻提取物在HPLC柱上分级分离并对每个级分进行针对禾谷镰刀菌孢子的杀生物活性测试,以确定哪个级分包含负责抗真菌活性的分子。
[0626] 将200mg冻干细胞溶于1mL甲醇中。在4400rpm下离心10分钟后,回收上清液并将回收的全部醇的液相在纸上过滤,然后将溶液在旋转蒸发仪中于低温蒸发以收集48.5mg提取的产物。对禾谷镰刀菌孢子进行了活性测试,以确认强壮前沟藻提取物的活性(图1A)。
[0627] 提取物是活性的,根据以下方案,使用Thermo Scientific Ultimate 3000高效液相色谱仪在反相C18色谱柱上进行半制备分级分离实验:
[0628] 将强壮前沟藻提取物以5g/L的浓度溶于甲醇中。以下条件用于提取物:
[0629] 流速:2.5mL/min。
[0630] 柱:反相C18:L=250mm;I.D.=10mm;P.D.=5μm。
[0631] 注射体积:150μL。
[0632] 注射温度:24℃。
[0633] 检测波长:280nm。
[0634] 梯度程序描述于下表7中。
[0635] 表2:优化的半制备溶剂梯度程序。
[0636] 溶剂A:Milli-Q水+0.1%甲酸;溶剂B:甲醇。
[0637]
[0638] 在这些条件下获得的色谱图如图1B所示。如图1B中所示,形成了五个级分F1至F5,因此每个主峰对应于一个级分。用5mg/ml的每个级分进行禾谷镰刀菌生长的活性测试。结果表明,只有F1级分仍然具有杀菌活性(图1C);该级分的MIC为0.75mg/ml(图1D)。
[0639] 根据以下方案,对F1级分进行新的分级分离:
[0640] 将提取物F1以5g/L的浓度溶于甲醇中。以下条件适用于提取物D:
[0641] 流速:2.5mL/min。
[0642] 柱:反相C18:L=250mm;I.D.=10mm;P.D.=5μm。
[0643] 注射体积:150μL。
[0644] 注射温度:24℃。
[0645] 检测波长:280nm。
[0646] 梯度程序描述于下表8中
[0647] 表3:优化的半制备溶剂梯度程序。溶剂A:Milli-Q水+0.1%甲酸;溶剂B:甲醇。
[0648]
[0649] 在这些条件下获得的色谱图如图2A所示。如图2A中所示,形成了五个级分F1至F5,主峰对应于级分F1-2。用5mg/ml的每个级分进行禾谷镰刀菌生长的活性测试。结果表明,只有F1-2和F1-3级分仍然具有杀菌活性(图2B);F1-2级分的MIC为0.75mg/ml(图2C)。
[0650] 实施例5:F1-2级分的质谱分析。
[0651] 为了更好地表征存在于F1-2级分中的分子,在以下条件下进行了质谱分析:
[0652] 实验是在QStar Elite光谱仪(Applied Biosystems)上以注入模式进行的。
[0653] 离子化模式:正离子模式电喷雾(ESI)
[0654] 电喷雾针电压:室温下4500V
[0655] 注射条件:20μL样品溶于甲醇,甲醇流速为400μL/min
[0656] 扫描范围:100-2000道尔顿
[0657] 图3A显示了通过正离子模式电喷雾对收集的F1-2的目标分子离子化获得的质谱图
[0658] 确定的精确质量为1381.8276道尔顿。它对应于电离过程中形成的钠加合物([M++Na])。减去23道尔顿的钠质量后,该化合物的分子峰质量为1358.8Da。
[0659] 对精确质量的彻底分析使得可以确定一个或多个与此质量有关的经验式,误差为5ppm。去掉不现实的方案后,选择的经验式为C71H122O24。
[0660] 通过串联质谱对1381.8276Da处的峰进行了全面分析。质谱示于图3B中。几个峰(圈出的峰–图3B)类似于由前沟藻醇18裂解产生的峰(7)。
[0661] 实施例6:F1-2级分的核磁共振(NMR)分析
[0662] 为了确定分子量为1358.8Da的分子的结构,根据以下方案进行了NMR分析:
[0663] 收集对应于峰F1-2的样品,然后将其完全溶解在约350μL氘化甲醇(MeOD4)中。
[0664] 实验在装备有多核探针的Bruker Avance 14.1T光谱仪上进行。使用可从Bruker序列库获得的脉冲序列来获取一维和二维质子和碳谱。
[0665] 采集条件如下:
[0666] -1H:扫描数:512;脉冲:8μs;采集:5.0秒;弛豫:1.0s
[0667] -13C DEPT135:扫描次数:44666;脉冲:12μs;采集:1.0秒;弛豫:3.0秒[0668] -HSQC:扫描数:64;512增量
[0669] -HMBC:扫描数:48;512增量
[0670] -COSY:扫描数:56;256增量
[0671] -TOCSY:扫描数:64;256增量
[0672] 13C DEPT135序列是根据直接结合的质子数对碳进行分选的实验:CH3和CH>0且CH2<0.
[0673] 相关光谱学(COSY)序列是一个2D同核实验,用于识别间隔2或3个键的标量相互作用中的质子。
[0674] 全相关光谱(TOCSY)序列是一个2D同核实验,用于识别间隔3个或更多键的标量相互作用中的质子。
[0675] 异核单量子关联(HSQC)序列是一个2D异核实验,其显示了碳和直接相连的质子之间的直接相互作用。
[0676] 异核多键关联(HMBC)序列是一个2D异核实验,其显示了由2或3个键间隔分开的质子和碳之间的关联。
[0677] 1D光谱经过傅里叶变换处理。光谱通过两个维度上的傅立叶变换进行处理。
[0678] 基于所获得的结果,所获得的1H谱,如图4A所示,显示了分布在1至6ppm之间的大光谱窗口上的一系列峰值。这证实了所研究的化合物含有脂肪族和烯烃族质子。这些变化也表明杂原子如氧的存在。
[0679] 13C DEPT135光谱(图4B)显示了包括在13和211ppm之间的光谱窗口中的一系列峰值。HMBC和HSQC·2D序列展示了碳是如何连锁在一起的。COSY和TOCSY 2D序列证实了基于质子位移和相关性的结构序列。
[0680] 观察到的不饱和及环的数量与根据其分子经验式计算的数量一致(=11):
[0681] Nt=(2nC+2-nH+nN-nX)/3
[0682] 其中:nC:碳原子数,nH:氢原子数,nN:氮原子数,nX:卤素原子数。
[0683] 11个不饱和分布如下:
[0684] -1酮官能团
[0685] -8个双键,包括2个链端
[0686] -2个环
[0687] COSY和TOCSY序列使得重建整个结构的碳骨架成为可能。这些相关性在图5中用粗体链接表示。这些结果表明,分子的二级结构对应于前沟藻醇18的二级结构。通过将本研究获得的结果与文献(7)中发现的结果进行比较,证实了全部的解释。
[0688] 总之,通过核磁共振和质谱分析获得的所有结果证实,在提取物D分级分离后获得的F1-2级分中存在的分子,其具有抗禾谷镰刀菌的抗真菌活性,是前沟藻醇18分子,其具体化学数据如下:
[0689] 经验式:C71H122O24
[0690] 分子量:1358.83g.mol-1
[0691] 参考文献
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