(i)发明领域
Bt或苏云金芽孢杆菌因其对昆虫害虫的特异毒性而广为所知，并被用 于控制植物的昆虫害虫几乎达一个世纪之久。最近几年，已经有了表达Bt 蛋白的转基因植物，其已被发现能成功控制昆虫对植物的损害(如Vaeck 等，1987)。
尽管许多Bt晶体蛋白基因已经得到分离，但是对于编码杀虫蛋白的新 基因的搜索仍在继续。实际上，与化学杀虫剂相比，Bt杀虫晶体蛋白的靶 标昆虫范围公知为相对较窄。而且，对相同靶标昆虫种类具有多重毒性活 性使得可使用具有不同作用方式的蛋白成为可能，从而可以防止或延缓昆 虫抗性的发展。
(ii)相关技术描述
先前，Cry1B-、Cry1J-和Cry9蛋白的几种类型已得到鉴定(见 Crickmore等，1998，全部详情并入此文以作参考)。
新的Cry1Bf蛋白与Cry1Be蛋白的序列同一性最为接近(Payne等， 1998，美国专利5,723,758)，但前者毒性蛋白片段的氨基酸序列与Cry1Be 蛋白毒性片段的氨基酸序列相比，仍有约14％的差异。
与Cry1Jd的毒性片段序列同一性最接近的为Cry1Jc1蛋白的毒性片 段(美国专利5,723,758)，但这两个蛋白毒性片段的氨基酸序列仍有约18％ 的差异。
如Midoh等人(PCT专利公开WO 98/26073)和Narva等人(PCT 专利公开WO 98/00546)所述，与Cry9Fa的毒性片段序列同一性最接近 的为Cry9Ea1蛋白的毒性片段，但Cry9Fa和Cry9Ea蛋白的毒性片段仍 有约21％的氨基酸序列差异。
发明概述
本发明提供了DNA序列，其编码的蛋白包含选自下列的氨基酸序列： a)由保藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3986的cry1Bf基因所编码 蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片段的氨基酸序列，b)由保藏在 BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3983的cry1Jd基因所编码蛋白的杀虫的 胰蛋白酶消化片段的氨基酸序列，以及c)由保藏在BCCM-LMBP，保藏 号为LMBP 3984的cry9Fa基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片段的 氨基酸序列。
本发明特别优选编码含有下列氨基酸序列的蛋白的DNA序列：SEQ ID No.2蛋白的杀虫片段的氨基酸序列、SEQ ID No.4蛋白的杀虫片段的 氨基酸序列和SEQ ID No.6蛋白的杀虫片段的氨基酸序列；或者可选编码 含有下列氨基酸序列的蛋白的DNA序列：SEQ ID No.2的氨基酸序列、 SEQ ID No.4的氨基酸序列、SEQ ID No.6的氨基酸序列；或者含有SEQ ID No.1、SEQ ID No.3、或SEQ ID No.5DNA序列的DNA序列。
此外，本发明提供了这样的DNA序列，其至少编码新分离蛋白的下 列部分：SEQ ID No.2从第1位氨基酸到第640位氨基酸的氨基酸序列、 SEQ ID No.4从第1位氨基酸到第596位氨基酸的氨基酸序列、SEQ ID No. 6从第1位氨基酸到第652位氨基酸的氨基酸序列。
此外，本发明提供了含有人工DNA序列的上述DNA序列，该人工 DNA序列具有不同于天然存在的DNA序列中的密码子使用，但却编码相 同的蛋白或其杀虫片段。
更进一步地，本发明提供了包含选自下列氨基酸序列的蛋白：a)由保 藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3986的cry1Bf基因所编码蛋白的杀 虫的胰蛋白酶消化片段的氨基酸序列，b)由保藏在BCCM-LMBP，保藏 号为LMBP 3983的cry1Jd基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片段的 氨基酸序列，c)由保藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3984的cry9Fa 基因所编码蛋白的杀虫的胰蛋白酶消化片段的氨基酸序列。
此处尤其优选包含选自下列氨基酸序列的蛋白：SEQ ID No.2蛋白的 杀虫片段的氨基酸序列、SEQ ID No.4蛋白的杀虫片段的氨基酸序列和 SEQ ID No.6蛋白的杀虫片段的氨基酸序列；或者包含选自下列氨基酸序 列的蛋白：SEQ ID No.2从第1位氨基酸到第640位氨基酸的氨基酸序列、 SEQ ID No.4从第1位氨基酸到第596位氨基酸的氨基酸序列、SEQ ID No. 6从第1位氨基酸到第652位氨基酸的氨基酸序列；或者含有SEQ ID No.2、 SEQ ID No.4、或SEQ ID No.6氨基酸序列的蛋白。
此处，本发明也提供了含有在植物表达启动子控制下的上述DNA的 嵌合基因和由转化而含有那些嵌合基因的植物细胞、植株或种子，其中所 述植物细胞、植株或种子尤其选自：玉米、棉花、水稻、油菜籽、芸苔、 茄子、大豆、土豆、向日葵、西红柿、甘蔗、茶叶、豌豆、烟草、草莓、 苜蓿、黄瓜、西瓜、胡椒、燕麦、大麦、小麦、天竺牡丹、剑兰、菊花、 甜菜、高粱、紫花苜蓿和花生。按本发明所述，该嵌合基因整合入植物细 胞的染色体DNA或叶绿体DNA。
另外，本发明也提供了由转化而含有任何上述DNA序列的、尤其是 选自土壤杆菌属(Agrobacterium)、埃希氏菌属(Escherichia)或芽孢杆 菌属(Bacillus)的微生物。
此处也提供了一种控制昆虫的方法和使植物抗昆虫的方法，其中所述 控制昆虫的方法包括在宿主细胞、尤其是植物细胞中表达任何上述DNA 序列，并使昆虫和所述宿主细胞相接触；其中所述使植物抗昆虫的方法包 括用任何上述DNA序列或嵌合基因转化植物细胞，并从此类抗昆虫细胞 再生出转化植株。
优选实施方案详述
按本发明所述，编码新Bt毒素的DNA序列已被分离得到并得以描述。 这些新基因被命名为cry1Bf、cry1Jd和cry9Fa，其编码的蛋白为Cry1Bf、 Cry1Jd和Cry9Fa.。
按本发明所述，“Cry1Bf蛋白”指含有SEQ ID No.2氨基酸序列的、 保留杀虫活性的最小蛋白片段的任何蛋白，尤其是含有SEQ ID No.2中第 1位氨基酸到第640位氨基酸的氨基酸序列的任何蛋白，包括但不限于具 有SEQ ID No.2氨基酸序列的完整蛋白。这包括含有该最小毒性蛋白片段 的杂合或嵌合蛋白，也包括至少含有SEQ ID No.2毒性片段三个功能结构 域中之一的蛋白。
此处所用术语“含有序列X的DNA/蛋白”是指至少包括或含有此序 列X的DNA或蛋白，从而在5’(或N-末端)和/或3’(或C-末端)末端 可包括其它核苷酸或氨基酸序列，如EP 0 193 259公开的可选择性标记蛋 白(的核苷酸序列)。
按本发明所述，“Cry9Fa蛋白”或“Cry9F蛋白”是指含有SEQ ID No. 6氨基酸序列的、保留杀虫活性的最小蛋白片段的任何蛋白，尤其是含有 SEQ ID No.6中第1位氨基酸到第652位氨基酸的氨基酸序列的任何蛋白， 包括但不限于具有SEQ ID No.6氨基酸序列的完整蛋白。这包括含有该最 小毒性蛋白片段的杂合或嵌合蛋白，也包括至少含有SEQ ID No.6毒性片 段三个功能结构域中一个的蛋白。
按本发明所述，“Cry1Jd蛋白”是指含有SEQ ID No.4氨基酸序列 的、保留杀虫活性的最小蛋白片段的任何蛋白，尤其是含有SEQ ID No.4 中第1位氨基酸到第596位氨基酸的氨基酸序列的任何蛋白，包括但不限 于具有SEQ ID No.4氨基酸序列的完整蛋白。这包括含有该最小毒性蛋白 片段的杂合或嵌合蛋白，也包括至少含有SEQ ID No.4毒性片段三个功能 结构域中一个的蛋白。
此处所用术语“cry1Bf DNA”、“cry9Fa DNA”或“cry1Jd DNA” 分别是指编码如上所述的Cry1Bf、Cry9Fa或Cry1Jd蛋白的任何DNA序 列。这包括编码如上所述的新分离蛋白或其杀虫片段的天然存在的、人工 的或合成的DNA序列。此处也包括与所保藏的基因组DNA序列或序列列 表中所提供序列的编码区足够相似的、编码杀虫蛋白的DNA序列，从而 使它们可以(即有能力)与这些DNA序列在严格杂交条件下进行杂交。 此处所用的严格杂交条件具体是指下列条件：将相关基因组DNA序列固 定在滤膜上，并将该滤膜在42℃、50％甲酰胺、5％ SSPE、2x Denhardt’s试剂和0.1％SDS中预杂交1到2小时，或在68℃、6x SSC、 2x Denhardt’s试剂和0.1％SDS中预杂交1到2小时。然后直接向预杂交 液中加入变性的标记探针并在上述适当的温度下温育16到24小时。温育 之后，于室温在1x SSC、0.1％SDS中洗涤滤膜20分钟，然后于68℃在 0.2x SSC和0.1％ SDS中洗涤三次，每次20分钟。使用增感屏于-70℃ 将此滤膜曝光于X-射线胶片(Kodak XAR-2或等同物)24到48小时，以 进行放射自显影。当然，在此步中可以使用等同的条件和参数而仍保持所 需的严格杂交条件。这样的等同条件之一包括：将相关基因组DNA序列 固定在滤膜上，并将该滤膜在42℃、50％甲酰胺、5％SSPE、2x Denhardt’s试剂和0.1％SDS中预杂交1到2小时，或在68℃、6x SSC、 2x Denhardt’s试剂和0.1％SDS中预杂交1到2小时。然后直接向预杂交 液中加入变性的(地高辛或放射性)标记探针，并在上述适当的温度下温 育16到24小时。温育之后，于室温在2x SSC、0.1％SDS中洗涤滤膜30 分钟，然后于68℃在0.5x SSC和0.1％SDS中洗涤两次，每次30分钟。 使用增感屏于-70℃将此滤膜曝光于X-射线胶片(Kodak XAR-2或等同 物)24到48小时，以进行放射自显影。
此处所用的蛋白的“杀虫活性”是指当用蛋白喂饲昆虫时，该蛋白有 杀死昆虫的能力，其中所述蛋白优选通过在重组宿主(如植物)中进行表 达。此处所用的蛋白的“昆虫控制量”是指在植物上喂饲昆虫时，足以将 昆虫对植物的损害限制在可商业用水平的蛋白量，其例如通过杀死昆虫或 通过抑制昆虫的发育或成长从而使它们对植物有较少的损害且对植物产量 不产生明显的副作用。
按本发明所述，将昆虫控制量、优选杀虫量的本发明的新Cry蛋白与 易受该蛋白影响的昆虫接触。
此处所用的“Cry蛋白”或“本发明的Cry蛋白”是指按本发明所述 所分离的并被鉴定为Cry1Bf、Cry9Fa或Cry1Jd蛋白的任何一个新的蛋 白。此处所用的Cry蛋白可以是全长蛋白(也叫做原毒素)，或是稍微或 完全(如N端和C端截短)截短了的形式，只要其保留了杀虫活性，或者 可以是杂合或融合蛋白形式的不同蛋白或蛋白部分的组合物。“Cry原毒 素”是指如同由天然存在的Bt DNA序列编码的全长晶体蛋白，“Cry毒 素”是指其杀虫片段，尤其指其最小的毒性片段，用SDS-PAGE电泳测定 的一般分子量范围为约60到约80kD。此处所用的“cry基因”或“cryDNA” 是指编码本发明所述的Cry蛋白的DNA序列，指上述cry1Bf、cry9Fa和 cry1Jd DNA序列的任何一个。
此处所用的Cry蛋白的“最小毒性片段”是指可以通过胰蛋白酶或糜 蛋白酶消化溶解了的全长晶体蛋白获得的保留有毒性的片段，或由Cry蛋 白的DNA片段编码的毒性蛋白片段。与原毒素相比，该蛋白通常有一个 短的N末端和长的C末端截短。虽然对于重组表达来说，开始于或大约开 始于原始的第1位氨基酸的毒性片段是本发明所述的优选实施方案，但是 我们也应该注意到除了C末端截短以外，一些N末端氨基酸也可以缺失而 保留该蛋白的杀虫特点。最小毒性片段的N末端可以以本领域的常规技术， 通过胰蛋白酶或糜蛋白酶处理的可溶性晶体蛋白的N末端氨基酸序列测定 方便地进行测定。
编码本发明Cry蛋白的DNA可以以传统方法从1999年11月25日保 藏在BCCM-LMBP，保藏号为LMBP 3983、LMBP 3984、LMBP 3985和 LMBP 3986的大肠杆菌(E.coli)菌株中分离得到。所编码的Cry蛋白可 以用来以传统方法制备特异性单克隆或多克隆抗体(等，1988)。 其毒素形式可以通过Cry原毒素的蛋白酶(如胰蛋白酶)水解获得。
编码该Cry蛋白的DNA序列可以以常规方法从各自菌株中分离得到 或者可以基于被编码的氨基酸序列进行合成。
通过用限制酶消化分离自Bt菌株的总DNA对编码本发明Cry蛋白的 DNA序列进行了鉴定；使DNA片段化，从而产生5到10Kb的DNA片 段；将这些片段连入克隆载体；用克隆载体转化大肠杆菌，再用从已知的 Bt晶体蛋白基因构建的DNA探针或用基于特异性PCR片段(使用与已知 的Bt晶体蛋白基因相对应的引物，由Bt DNA产生)的DNA探针筛选克 隆载体转化的大肠杆菌。
而且，在本发明中使用的DNA序列可以通过合成制得。实际上，由 于遗传密码的简并性，一些氨基酸密码子可以用其它的密码子进行替换而 不改变该蛋白的氨基酸序列。此外，一些氨基酸可以用其它的等同氨基酸 代替而对该蛋白的杀虫活性没有明显的改变。而且，与那些负责结合和毒 性的区域的改变不同，在此分子区内氨基酸序列或组成的改变很少有可能 引起该蛋白杀虫活性的差异。该基因的这些等同物包括在严格条件下与 Cry毒素或SEQ ID.No.2、4或6的原毒素的DNA序列杂交并编码与本 发明(蛋白)毒素具有相同杀虫特性的蛋白的DNA序列，或者编码与该 蛋白毒素形式(如在Schnepf等人、1998中所述的，从N端到保守序列框 5以外2个氨基酸处)或与本发明Cry1Bf、Cry9FA或Cry1Jd蛋白的原 毒素形式具有至少85％、优选90％、最优选95％氨基酸序列同一性蛋白 的DNA序列，序列同一性测定使用成斯康星GCG软件包的GAP程序(美 国威斯康星州麦迪逊，10.0版；在GAP程序中使用GCG的默认值；为进 行氨基酸序列比较，使用了blosum62记分模型)。
当然，根据具体目的的不同，可以构建出任何其它的密码子使用不同 而编码基本上有着相同杀虫活性的相同蛋白或相似蛋白的DNA序列。这 已经在原核和真核表达系统中有述，其中将密码子使用变成在外源宿主中 进行基因表达时宿主细胞所偏好的密码子(Bennetzen & Hall，1982； Itakura，1977)。此外，已知Bt晶体蛋白基因对真核密码子没有偏好，并 非常富含AT(Adang等，1985，Schnepf等，1985)。密码子使用表可在 文献(Wada等，1990；Murray等，1989)中以及在主要的DNA序列数 据库(如德国海德堡的EMBL)中找到。因此，可以构建合成的DNA序 列从而产生相同的或基本上相同的蛋白。很明显，一旦知道了本发明Cry 蛋白的氨基酸序列就可以设计出几种不同的DNA序列。这些其它的DNA 序列包括合成的或半合成的DNA序列，它们为了使基因中的某些位点失 活已经发生了改变，例如在PCT公开WO 91/16432和WO 93/09218中描 述的，选择性地失活存在于天然序列中的某些隐性调节或加工元件，或使 总体密码子使用适合更相关宿主生物体的密码子使用，优选可在宿主生物 体表达的密码子使用。在构建这些基因时，虽然只要该蛋白的毒性不受到 负面的影响就可以对氨基酸进行截短或次要的替换或添加，但是还是应该 最大程度的保持所编码的氨基酸序列。
通常可以通过PCR介导的突变对DNA序列进行上述的小的修饰(Ho 等，1989，White等，1989)。
在提到蛋白时的术语“基本上相同”是指包括有些氨基酸不同或有一 些氨基酸添加(如融合蛋白，参见Vaeck等，1987)或缺失(如N端或C 端截短)的蛋白，只要该蛋白在其杀虫活性上没有明显的差异就行。
此处所用的术语Cry毒素的“功能结构域”是指具有特定结构的、该 毒素的任何部分或结构域，其可被转移到另一种(Cry)蛋白上，以产生 一种新的、具有本发明Cry毒素至少一种功能特性(如结合和/或毒性特性) 的杂合蛋白(Ge等，1991)。这些部分以本发明Cry蛋白的结合和/或毒 性特性构成该杂合Bt蛋白的基本特征。这样的杂合蛋白可以有较大的宿主 范围，改良的毒性和/或可用于防止昆虫抗性发展的策略中(欧洲专利公开 (“EP”)408 403；Visser等，1993)。
可将由本发明Bt菌株的总DNA制备的5到10Kb的片段连入适当的 表达载体并转化大肠杆菌，然后可以通过常规的菌落免疫探测法(French 等，1986)用抗Cry蛋白的单克隆或多克隆抗体筛选表达该毒素的克隆， 或通过与DNA探针杂交筛选克隆。
而且，可将由本发明Bt菌株的总DNA制备的5到10Kb的片段或其 被克隆和/或亚克隆到大肠杆菌中的片段，连入适当的Bt穿梭载体 (Lereclus等，1992)并转化进入晶体缺失的Bt突变体。然后筛选产生晶 体(镜检)或晶体蛋白(SDS-PAGE检测)的克隆。
编码本发明Cry蛋白的基因可以以常规方法测序(Maxam和Gilbert， 1980；Sanger，1977)以得到其DNA序列。序列比较表明这些基因与以 前描述的、编码具有抗鳞翅类活性的原毒素和毒素(和Whiteley， 1989；Crickmore等，1998)不同；而且可在
http://epunix.biols.susx.ac.uk/Home/Neil Crickmore/Bt/index.html
上找到1999年11月15日和2000年10月16日Bt命名网站的升级与 Crickmore等(1998)的公开相对应。
编码新鉴定的Cry蛋白原毒素形式的有效杀虫区段的这些DNA序列 的有效杀虫部分，在对该基因进行序列分析之后，可以按常规方法制得。 在这些片段中，优选保留至少到达Bt蛋白保守序列框5的C端末端(Hofte & Whiteley，1989；Schnepf等1998)，优选到达保守序列框5C端2个 氨基酸的序列。这些Cry蛋白的氨基酸序列可由分离的DNA序列得以确 定。编码该Cry蛋白的DNA序列的“有效杀虫部分”，在此也指“截短 基因”或“截短DNA”，是指编码一段多肽的DNA序列，该多肽比Cry 蛋白原毒素形式的氨基酸要少但可以杀虫。
为了在大肠杆菌中、在其它Bt菌株中或在植物中表达编码本发明Cry 蛋白的全长DNA序列或其有效杀虫部分，在该DNA序列两侧可以引入适 当的限制酶切位点。这可以使用已知工艺，通过定点突变来进行(Stanssens 等，1989；White等，1989)。为在植物中提高表达，可以对本发明cry 基因或cry基因的有效杀虫部分的密码子使用进行修饰以形成与PCT公开 WO 91/16432和WO 93/09218；EP 0 358 962和EP 0 359 472等同的、修 饰的或人工基因或部分基因；或将Bt基因或部分基因插入叶绿体基因组中 并使用叶绿体活性启动子进行表达(如Mc Bride等，1995)。为在单子叶 植物例如玉米中获得增强表达，也可以将单子叶内含子加到嵌合基因中， 并且可以以翻译中性方式，通过内含子定点插入和/或通过引入密码子使用 的改变(例如将密码子使用调整至特定植物的最优密码子使用(Murray 等，1989)而不明显改变所编码的氨基酸序列)，进一步改变本发明cry 基因或其杀虫部分的DNA序列，以对可能出现在部分基因中的DNA抑制 序列进行修饰。
此外，本发明Cry蛋白的结合特性可通过本领域已知方法进行评价 (Van Rie等，1990)，以确定是否本发明的Cry蛋白结合至昆虫的中肠 位点，这与由其它已知的Cry蛋白或Bt蛋白所识别的位点不同。在相关 易感昆虫中，有着不同结合位点的Bt毒素对于取代已知的、昆虫可能已经 对其产生抗性的Bt毒性是非常有价值的，或者对于与具有不同的、防止或 延缓昆虫对Bt毒素抗性作用模式的Bt毒素的联合使用是非常有价值的， 尤其是在植物中进行表达的时候。由于此新分离得到的Bt毒素的这些特 点，使其在改造植物(例如单子叶植物如玉米或水稻及蔬菜如芸苔种植物) 以保护这些植物免受昆虫侵害方面十分有用。
编码Cry原毒素有效杀虫区段的cry基因的有效杀虫部分或其等同 物(优选cry嵌合基因)可以以常规方法稳定插入单一植物细胞的核基因 组，并且这样转化的植物细胞可以以常规方法用于生产昆虫抗性的转化植 株。在这点上，可用在根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)中的 含有cry基因有效杀虫部分的卸甲Ti质粒转化植物细胞，然后使用例如在 EP 0 116 718、EP 0 270 822、PCT公开WO 84/02913和公开的欧洲专利申 请(“EP”)0 242 246和在Gould等(1991)中描述的方法，由该转化的植 物细胞再生出转化植株。每种优选的Ti质粒载体都在Ti质粒T-DNA的边 界序列之间含有cry基因有效杀虫部分，或至少位于其边界序列的左边或 右边。当然，也可以用其它类型的载体转化植物细胞，所用转化方法例如 使用直接的基因转移(例如在EP 0 233 247中所述)、花粉介导的转化(例 如在EP 0 270 356、PCT公开WO 85/01856和美国专利4,684,611中所述)、 植物RNA病毒介导的转化(例如在EP 0 067 553和美国专利4,407,956中 所述)、脂质体介导的转化(例如在美国专利4,536,475中所述)和其它方 法例如最近所述的转化玉米的某些特定品系(Fromm等，1990； Gordon-Kamm等，1990)和水稻的某些特定品系(Shimamoto等，1989； Datta等，1990)的方法和最近所述的通常转化单子叶植物的方法(PCT 公开WO 92/09696)。
所得的转化植株可用于常规的植物育种方法，用于生产更多的具有同 样特性的植株或用于将该cry基因有效杀虫部分导入其它相同或相关植物 品种中。从转化植株获得的种子含有作为稳定的基因组插入物的cry基因 有效杀虫部分。转化植株的细胞可以以常规方法进行培养以生产Cry原毒 素(优选Cry毒素)的有效杀虫区段，可以对其进行回收以用于常规的抗 鳞翅类杀虫组合物中(美国专利5,254,799)。按本发明所述，本发明的植 物或种子可通过例如在一块通常有虫害的地里播种或种植，以获得对昆虫 的抗性。因此，按照本发明，通过在一块地里，优选在通常存在或预期存 在吃该类植物的害虫(其水平为对植物造成了经济上的损害)出现的地里 播种或种植产生本发明Cry蛋白的本发明的种子植物，提供了获得昆虫抗 性的方法和获得提高的产量或减少虫害的方法。
将cry基因有效杀虫部分，优选截短cry基因，插入植物细胞基因组， 使插入的基因位于可指导该基因部分在此植物细胞中进行表达的启动子的 下游(即3’)及其控制之下。优选通过在植物细胞基因组中，具体说来就 是在核基因组或叶绿体基因组中，插入cry嵌合基因来完成。优选的启动 子包括：分离物CM 1841(Gardner等，1981)、CabbB-S(Franck等， 1980)和CabbB-JI(Hull和Howell，1987)的花椰菜花叶病毒(CaMV) 的35S组成型强启动子(即“35S启动子”)；遍在蛋白家族的启动子(例 如Christensen等，1992的玉米遍在蛋白启动子，也可参见Cornejo等， 1993)，gos2启动子(de Pater等，1992)，emu启动子(Last等，1990)， 水稻的肌动蛋白启动子例如Zhang等(1991)描述的启动子；和分别驱动 1’和2’基因表达的、T-DNA的TR1′启动子和TR2′启动子(即分别的 “TR1启动子”和“TR2启动子”)(Velten等，1984)。另外，启动子 可以为非组成型的、但其对植物的一种或多种组织或器官(如叶和/或根) 具特异性，从而使插入的cry基因部分仅在特定组织或器官的细胞中进行 表达。例如，通过将有效杀虫基因部分置于光诱导启动子(例如在美国专 利5,254,799中公开的，植株本身的或另一植株例如豌豆的核酮糖-1，5-二磷 酸羧化酶小亚基基因的启动子)的控制之下，使该cry基因有效杀虫部分 可选择性地在植物(例如玉米、棉花)的叶子中进行表达。再一种选择为 使用诱导表达启动子(例如通过温度、愈伤或化学因子诱导)。
将cry基因的有效杀虫部分插入植物基因组中，使插入的基因部分处 于适合的3’末端转录调节信号(即转录本形成和多聚腺苷酸化信号)的上 游。优选通过在植物细胞基因组中插入该cry嵌合基因来进行。优选的多 聚腺苷酸化和转录本形成信号包括章鱼碱合成酶基因的那些信号(Gielen 等，1984)和T-DNA基因7(Velten和Schell，1985)的那些信号，它们 在被转化的植物细胞中作为3’非翻译DNA序列存在。
可任选地将cry基因有效杀虫部分插入到植物基因组中作为与选择标 记基因(例如编码卡那霉素抗性的neo基因(EP 0 242 236))处于同一启 动子控制之下的杂合基因(美国专利5,254,799；Vaeck等，1987)，从而 使该植物表达融合蛋白。
编码抗鳞翅类蛋白的全部cry基因的或部分cry基因也可用来转化其 它细菌，例如具有抗鳞翅类或鞘翅类杀虫活性的苏云金芽孢杆菌。因此， 可以生产转化的Bt菌株，其在同广谱鳞翅类或鞘翅类昆虫害虫斗争或同其 它鳞翅类昆虫害虫斗争方面是十分有用的。用已掺入合适克隆载体的本发 明全部或部分cry基因转化细菌，例如土壤杆菌属、芽孢杆菌属或埃希氏 菌属的细菌，可以按常规方法进行，优选使用如Mahillon等(1989)和 PCT专利公开WO 90/06999中所述的常规电穿孔技术。
含有本发明cry基因的芽孢杆菌转化菌株可通过常规方法(Dulmage， 1981；Bernhard和Utz，1993)进行发酵，以提供高产量的细胞。以提供 高产量的细胞。在公知的合适条件下(Dulmage，1981)，这些菌株的每 一种都形成孢子以产生高产量的含有Cry原毒素的晶体蛋白。
杀虫的，尤其是抗鳞翅类的本发明组合物可以使用用cry基因转化的 微生物，或优选其各自的Cry蛋白或Cry原毒素、毒素或有效杀虫原毒素 区段作为活性成分，与适当的载体、稀释剂、乳化剂和/或分散剂(例如由 Bernhard和Utz，1993所描述的)一起以常规方法进行配制。可以将该杀 虫组合物制剂为吸湿粉末、丸粒、颗粒或喷粉，或与水性的或非水性的溶剂 以泡沫、凝胶、悬液、浓缩物等等制备为液体制剂。
本发明所述的控制昆虫，尤其是鳞翅类昆虫的方法可以包括将本发明 杀虫量的Cry蛋白或用cry基因转化的宿主细胞应用(例如喷洒)到要保 护的地点(区域)。被保护的地点包括，例如昆虫害虫的栖息地或种植蔬 菜或长有蔬菜的区域。
为获得Cry原毒素或毒素，表达Cry蛋白的重组宿主细胞可以以常 规方式在适当的培养基上进行生长，然后使用常规的方法，例如酶解或去 污剂等等裂解之。然后，可以用标准技术例如色谱、萃取、电泳等等，将 该原毒素分离并纯化。然后可以通过该原毒素的胰蛋白酶消化获得毒素。
下列实施例例证了本发明，而并非是对本发明或保护的目标进行限制。 在实施例、权利要求和叙述中所涉及的序列表如下：
序列表：
SEQ ID No.1-Cry1Bf蛋白和DNA的氨基酸序列和DNA序列。
SEQ ID No.2-Cry1Bf蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID No.3-Cry1Jd蛋白和DNA的氨基酸序列和DNA序列。
SEQ ID No.4-Cry1Jd蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID No.5-Cry9Fa蛋白和DNA的氨基酸序列和DNA序列。
SEQ ID No.6-Cry9Fa蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID No.7-引物Cry1B.fw的DNA序列。
SEQ ID No.8-引物B.R的DNA序列。
SEQ ID No.9-引物B.F的DNA序列。
SEQ ID No.10-引物JFW的DNA序列。
SEQ ID No.11-引物JRV的DNA序列。
SEQ ID No.12-引物9FW的DNA序列。
SEQ ID No.13-引物9RV的DNA序列。
如果在实施例中没有其它的说明，所有制备和操作重组DNA的方法 都按照在Sambrook等，分子克隆-实验室手册，第二版(Molecular Cloning-A Laboratory Manual，Second Edition)，冷泉港实验室出版社， 纽约(1989)一书和在Ausubel等(1994)现代分子生物学技术，现代技 术(Current Protocols in Molecular Biology，Current Protocols)，美国的第 一卷和第二卷中所述的标准方法进行。植物分子生物学工作的标准材料和 方法在由R.R.D.Croy所著的植物分子生物学Labfax(Plant Molecular Biology Labfax)(1993)(由BIOS Scientific Publications Ltd(UK)和 Blackwell Scientific Publications(UK))一书中有述。PCR技术方法可在 M.A.Innis、D.H.Gelfand、J.J.Sninsky和T.J.White编辑的“PCR技术： 方法与应用指南”(“PCR protocols：a guide to methods and applications”) (Academic Press，Inc.，1990)一书中找到。
实施例
实施例1：菌株特征
由菲律宾Ilocos的Santo Tomas la Union收集的尘土颗粒样品中分离 到菌株BtS02072BG。菌株BtS02739C分离自由菲律宾，South Tagalog的 Lucena市收集的尘土颗粒样品中。
每个菌株均可在常规标准培养基上进行培养，优选T3培养基(胰蛋白 胨3g/l、胰蛋白2g/l、酵母抽提物1.5g/l、5mg MnCl2、0.05M Na2HPO4·2H2O、0.05M NaH2PO4·H2O，pH 6.8及1.5％琼脂)，优 选在28℃进行培养。为长期保存，优选将等体积的孢晶悬浮物与等体积 的50％甘油混合并于-70℃保存或将孢晶悬浮物冻干。为使孢子形成，优 选在T3培养基上28℃生长72小时，然后于4℃保存。由菌株在成孢期 间产生的晶体蛋白被包裹成晶体状。
实施例2：抗所选鳞翅类昆虫种的BtS02072BG和BtS02739C菌株的杀虫 活性
在人工喂养的美洲棉铃虫(Helicoverpa zea)、烟芽夜蛾(Heliothis virescens)、玉米螟(Ostrinia nubilalis)、草地夜蛾(Spodoptera frugiperda) 和Sesamia nonagrioides的初生幼虫上用由BtS02072BG或BtS02739C得 到的孢晶混合物(约109孢晶/ml)进行毒性分析。
于Costar 24孔板按孔分发人工饲料(Vanderzant，1962)，以对美洲 棉铃虫、烟芽夜蛾和玉米螟进行实验。将50微升孢晶混合物施于饲料表面 并在层化气流中干燥。为对美洲棉铃虫、烟芽夜蛾进行实验，在每个孔里 放1条幼虫，每个样品用20条幼虫。为对玉米螟进行实验，在每个孔里放 2条幼虫，每个样品用24条幼虫。于Costar 48孔板按孔分发人工饲料，以 对草地夜蛾进行实验。将25微升孢晶混合物施于饲料表面并在层化气流中 干燥。在每个孔里放1条幼虫，每个样品用18条幼虫。在第7天计算死亡 幼虫和活幼虫。死亡幼虫的百分比如表I所示。
表I：晶孢混合物施用于昆虫后死亡幼虫百分比：
  BTS02072BG   BTS02739C   美洲棉铃虫   70   15   烟芽夜蛾   85-50   80-60   玉米螟   92   72   草地夜蛾   6   未测   S.nonagroides   100   未测
实施例3：新cry基因的特性
使用靶向已知的cry基因中保守区的简并引物进行PCR以对 BtS02739C基因进行检测。用Wizard PCR preps(Promega)纯化系统对所 得的扩增产物进行纯化并将其连入pGEM-T载体(Promega)。将连接混合 物以电穿孔法转入大肠杆菌JM 101。一次小规模制备物中至少由40个含 有插入片段的转化子组成，并用所选的限制酶进行消化。对所消化的小规 模制备DNA进行电泳，然后可以观察到不同的DNA片段类型。对每种类 型至少选择一个菌落。制备适当的DNA制备物以对每个所选菌落中质粒 的插入片段序列进行测定。所测定的扩增产物序列与公开的cry序列的排 列表明菌株BtS02739C含有一个新的cry1J-型基因和新的cry9-型基因。
BtS02072BG基因的检测如下。首先，使用菌株BtS02419J的简并晶 体蛋白基因引物进行PCR。使用简并晶体蛋白引物，以所得的扩增产物为 模板进行二次PCR。
用Wizard PCR preps(Promega)纯化系统对所得的扩增产物进行纯 化并将其连入pGEM-T载体(Promega)。将连接产物以电穿孔法转入大肠 杆菌XL1Blue。一次小规模制备至少由40个含有插入片段的转化子组成， 并用所选的限制酶进行消化。对所消化的小规模制备DNA进行电泳，然 后可以观察到不同的DNA片段类型。对每种类型至少选择一个菌落。制 备适当的DNA制备物以对每个所选菌落中质粒插入片段的序列进行测定。
由菌株BtS02419J的克隆扩增产物中，我们发现了一段与cry1Be1相 应片段一致的序列，二者只相差一个核苷酸。然后，选择引物对大量Bt 菌株(其中一个是BtS02072BG菌株)中是否存在与已测序的BtS02419J 菌株的cry基因片段相似的cry序列进行评测。这些引物序列如下(5′to 3′)：
正向引物：cry1B.fw：CAG TCC AAA CGG GTA TAA AC
反向引物：B.R：     CTG CTT CGA AGG TTG CAG TA
所测定的扩增产物的序列与公开的cry序列的排列表明菌株 BtS02072BG含有一个新的cry1B-型基因。
实施例4：cry基因的克隆与表达
为了从菌株BtS02739C中分离出全长的cry1J-型和cry9-型基因，以 及从菌株BtS02072BG中分离出cry1B-型基因，制备了这些菌株的总DNA， 并以Sau3A进行部分消化。以蔗糖梯度对所消化的DNA依大小分开，并 将5Kb到10Kb片段连入以BamH1消化并以TsAP(温敏碱性磷酸酶)处 理过的克隆载体pUC19(Yannisch-Perron等，1985)中。将连接混合物以 电穿孔法转入大肠杆菌XL1-Blue或大肠杆菌JM109细胞。将转化子铺于 含Xgal和IPTG的LB-triacillin平板上并挑取白色菌落进行滤膜杂交实验。 然后用合适的DIG标记探针筛选含载体的重组大肠杆菌克隆。这些探针按 以下方法制得。首先，用来自重组大肠杆菌克隆作为模板细胞(其包含具 有特定cry基因片段的质粒)进行PCR，预先使用表II所示的恰当引物进 行扩增。
表II：用于分离新Bt DNA序列(Y＝C或T，S＝G或C)的引物：

将所得的扩增产物进行凝胶纯化，并以它为模板用DIG标记的dNTP 进行二次PCR反应。将适当量的该扩增产物用于杂交反应。
用cry1J-型探针和cry9-型探针的混合物进行菌株BtS02739C的菌落 杂交。然后将阳性克隆与每个探针分别杂交。菌株BtS02072BG的菌落杂 交用cry1B-型探针进行。在鉴定出一个含全长cry基因质粒的阳性克隆后， 使用染料终止子标记法及Perkin Elmer ABI Prism-377DNA测序仪对该 cry基因两条链的序列进行测定。根据DNA测序的结果对这些基因命名如 下：BtS02739C的cry1J-型和cry9-型基因被分别命名为cry1Jd和cry9Fa， BtS02072BG的cry1B-型基因被命名为cry1Bf。
所分离的cry1Jd、cry9Fa和cry1Bf基因的基因组序列及其编码的蛋 白的序列也在本发明序列表中列出。这些序列与已知的Cry DNA或蛋白序 列的比较表明，这些序列是新的并有相当多的核苷酸和氨基酸与已知的Bt 基因及蛋白不同。使用10.0版的Wisconsin GCG软件包(美国，威斯康 星麦迪逊)的GAP程序确定最相似基因和蛋白编码区(原毒素和毒素两 种形式)的序列同一性，表III-V为其概述。在GAP程序中使用GCG的 默认值。对核苷酸序列比较而言，使用的是nwsgapdna计分模型，对氨基 酸序列比较而言，使用blosum62计分模型。在表III-V中使用的毒素形式 是指起始于Schnepf等(1998)等所定义的保守序列框5的第一个氨基酸 并结束于最后一个氨基酸(通常为脯氨酸)后两个氨基酸处的蛋白。原毒 素形式是指Bt蛋白/基因的整个蛋白或其编码区。
表III：cry1Bf/Cry1Bf的序列同一性：
  DNA   cry1Ba1   cry1Bb1   cry1Bc1   cry1Bd1   cry1Be1   原毒素   91.912   83.890   77.207   83.565   93.774   毒素   86.562   74.922   74.922   75.342   89.220   蛋白   Cry1Ba1   Cry1Bb1   Cry1Bc1   Cry1Bd1   Cry1Be1   原毒素   89.869   80.193   75.795   80.933   92.170   毒素   82.520   67.868   67.868   70.142   86.499
表IV：cry9Fa/Cry9Fa的序列同一性：
  DNA   cry9Aa1   cry9Ba1   cry9Ca1   cry9Da1   cry9Ea1   原毒素   71.592   78.212   76.614   81.197   84.043   毒素   51.782   62.720   68.215   75.593   81.618   蛋白   Cry9Aa1   Cry9Ba1   Cry9Ca1   Cry9Da1   Cry9Ea1   原毒素   62.445   72.064   71.553   76.963   82.578   毒素   35.828   52.167   59.133   68.372   78.858
表V：cry1Jd/Cry1Jd的序列同一性：
  DNA   cry1Ja1   cry1Jb1   cry1Jc1   原毒素   83.233   83.176   86.323   毒素   79.526   81.162   88.143   蛋白   Cry1Ja1   Cry1Jb1   Cry1Jc1   原毒素   79.759   78.830   82.489   毒素   71.574   74.746   81.711
这些新分离基因的基因组克隆已保藏于BCCMTM-LMBP(比利时微 生物协调保藏中心分子生物学实验室质粒保藏中心，根特大学K.L.莱德 汉克大街35B-9000，根特，比利时(Belgian Coordinated Collections of Microorganisms-Laboratorium voor Moleculaire Biologie- Plasmidencollectie，University of Gent，K.L.Ledeganckstraat 35，B-9000 Gent，Belgium))，保藏号为：
LMBP 3983-含pUC2739C/1Jd1质粒(其中含有cry1Jd基因)的大 肠杆菌JM109，1999年11月25日保藏(该基因可以通过用XhoI和SmaI 消化该质粒，分离得到约8.4kb的DNA片段)；
LMBP 3984-含pUC2739C/9Fa1质粒(其中含有cry9Fa基因)的大 肠杆菌JM109，1999年11月25日保藏(该基因可以通过用SacI和PstI 消化该质粒，分离得到约8kb的DNA片段)；
以及LMBP 3986-含pUC2072BG/1Bf1质粒(其中含有cry1Bf基因) 的大肠杆菌XL1Blue，1999年11月25日保藏(该基因可以通过用SacI 和SalI消化该质粒，分离得到约7kb的DNA片段)。
实施例5：cry基因的杀虫活性：
将含cry9Fa基因的插入片段亚克隆于适当的穿梭载体中并通过常规 方法将所得的质粒pSL2739C/9Fa1转入晶体缺陷的Bt菌株中。将由该重 组Bt菌株结孢培养物所产生的晶体蛋白在烟芽夜蛾和玉米螟的新生幼虫 上以约109滴度/ml的浓度进行检测。对玉米螟幼虫，观察到100％死亡率， 而对烟芽夜蛾幼虫，死亡率为72％，而用晶体缺陷的对照菌株进行处理以 后，幼虫全都存活。
将含cry1Bf基因的插入片段亚克隆于适当的穿梭载体中并通过常规 方法将所得的质粒pSL2072BG/1Bf转入晶体缺陷的Bt菌株中。将由该重 组Bt菌株结孢培养物所产生的晶体蛋白在Sesamia nonagrioides、烟芽夜 蛾、美洲棉铃虫和玉米螟幼虫上以不同浓度进行检测。在烟芽夜蛾、玉米 螟和Sesamia nonagrioides幼虫上观察到了Cry1Bf毒素有相当高的死亡 率，而对美洲棉铃虫的毒性较低。用晶体缺陷的对照菌株进行处理以后， 幼虫全部存活。
将含cry1Jd基因的插入片段亚克隆于适当的穿梭载体中并通过常规 方法将所得的质粒pGI2739C/1Jd转入晶体缺陷的Bt菌株中。将由该重组 Bt菌株结孢培养物所产生的晶体蛋白在烟芽夜蛾幼虫上以不同浓度进行 检测，观察到了Cry1Bf毒素明显的致死性。用晶体缺陷的对照菌株进行 处理以后，幼虫全部存活。
实施例6：在转化植物中生产新的Cry蛋白。
使用CaMV 35S(Hull和Howell，1987)和遍在蛋白(Christensen 等，1992)启动子，按EP 0 193 259和公开的PCT专利申请WO 94/12264 中所描述的方法制得编码Cry1Bf、Cry1Jd和Cry9Fa蛋白截短形式的嵌 合基因。如在公开的PCT专利申请WO 94/12264中所述，开放阅读框架 的密码子使用与宿主植物的相适应为优选，以使表达效率最佳。
用所得的嵌合基因转化水稻、棉花和玉米细胞。
如在WO 92/09696或美国专利5,641,664中所述(并入本文以作参考)， 使用愈伤的和酶降解的胚芽愈伤组织，通过土壤杆菌介导的转化(Ishida 等，1996，和美国专利5,591,616)或通过电穿孔法都可以对玉米细胞进行 稳定转化。
通过土壤杆菌介导的转化(Umbeck等，1987，生物/技术 (Bio/Technology)5，263-266；美国专利；5,004,863，并入本文以作参考)可 以对玉米细胞进行稳定转化。
用公开的PCT专利申请WO 92/09696中所描述的方法可对水稻细胞 进行稳定转化。
通过ELISA、Northern和Southern印迹及杀虫效果选择再生的转化 玉米、棉花和水稻植株。与未转化的对照植株相比，含嵌合基因的后代植 株表现出增强的昆虫抵抗力，其具有适当的昆虫抵抗力分离和转化表型。 蛋白与RNA测定表明增强的昆虫抵抗力与新Cry蛋白在植株中的较高表 达相关。
本申请是中国专利申请00817997.2的分案申请，原申请的申请日是 2000年12月19日，发明名称是“苏云金芽孢杆菌(BACILLUS THURINGIENSIS)的杀虫蛋白”。
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序列表
<110>拜尔作物科学公司
<120>苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白
<130>NEWBTSWO
<150>60/173387
<151>1999-12-28
<160>13
<170>PatentIn Ver.2.0
<210)>1
<211>3687
<212>DNA
<213>苏云金芽孢杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(3687)
<400>1
ttg act tca aat agg aaa aat gag aat gaa att ata aat gct tta tcg  48
Leu Thr Ser Asn Arg Lys Asn Glu Asn Glu Ile Ile Asn Ala Leu Ser
  1               5                   10                 15
att cca gct gta tcg aat cat tcc aca caa atg gat cta tca cca gat  96
Ile Pro Ala Val Ser Asn His Ser Thr Gln Met Asp Leu Ser Pro Asp
             20                  25                  30
gct cgt att gag gat tct ttg tgt ata gcc gag ggg aat aat atc aat  144
Ala Arg Ile Glu Asp Ser Leu Cys Ile Ala Glu Gly Asn Asn Ile Asn
         35                  40                  45
cca ctt gtt agc gca tca aca gtc caa acg ggt att aac ata gct ggt  192
Pro Leu Val Ser Ala Ser Thr Val Gln Thr Gly Ile Asn Ile Ala Gly
     50                  55                  60
aga ata cta ggt gta tta ggc gta ccg ttt gct gga caa ata gct agt  240
Arg Ile Leu Gly Val Leu Gly Val Pro Phe Ala Gly Gln Ile Ala Ser
65                  70                  75                  80
ttt tat agt ttt ctt gtt ggt gaa tta tgg ccc cgc ggc aga gat cag  288
Phe Tyr Ser Phe Leu Val Gly Glu Leu Trp Pro Arg Gly Arg Asp Gln
                 85                  90                  95
tgg gaa att ttc cta gaa cat gtc gaa caa ctt ata aat caa caa ata  336
Trp Glu Ile Phe Leu Glu His Val Glu Gln Leu Ile Asn Gln Gln Ile
            100                 105                 110
aca gaa aat gct agg aat acg gca ctt gct cga tta caa ggt tta gga  384
Thr Glu Asn Ala Arg Asn Thr Ala Leu Ala Arg Leu Gln Gly Leu Gly
        115                 120                 125
gat tcc ttt aga gcc tat caa cag tca ctt gaa gat tgg cta gaa aac    432
Asp Ser Phe Arg Ala Tyr Gln Gln Ser Leu Glu Asp Trp Leu Glu Asn
    130                 135                 140
cgt gat gat gca aga acg aga agt gtt ctt tat acc caa tat ata gcc    480
Arg Asp Asp Ala Arg Thr Arg Ser Val Leu Tyr Thr Gln Tyr Ile Ala
145                 150                 155                 160
tta gaa ctt gat ttt ctt aat gcg atg ccg ctt ttc gca att aga aac    528
Leu Glu Leu Asp Phe Leu Asn Ala Met Pro Leu Phe Ala Ile Arg Asn
                165                 170                 175
caa gaa gtt cca tta tta atg gta tat gct caa gct gca aat tta cac    576
Gln Glu Val Pro Leu Leu Met Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn Leu His
            180                 185                 190
cta tta tta ttg aga gat gcc tct ctt ttt ggt agt gaa ttt ggg ctt    624
Leu Leu Leu Leu Arg Asp Ala Ser Leu Phe Gly Ser Glu Phe Gly Leu
        195                 200                 205
aca tcg cag gaa att caa cgt tat tat gag cgc caa gtg gaa caa acg    672
Thr Ser Gln Glu Ile Gln Arg Tyr Tyr Glu Arg Gln Val Glu Gln Thr
    210                 215                 220
aga gat tat tcc gac tat tgc gta gaa tgg tat aat aca ggt cta aat    720
Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Cys Val Glu Trp Tyr Asn Thr Gly Leu Asn
225                 230                 235                 240
agc ttg aga ggg aca aat gcc gca agt tgg gtg cgt tat aat caa ttc    768
Ser Leu Arg Gly Thr Asn Ala Ala Ser Trp Val Arg Tyr Asn Gln Phe
                245                 250                 255
cgt aga gat cta acg tta ggg gta tta gat cta gtg gca cta ttc cca    816
Arg Arg Asp Leu Thr Leu Gly Val Leu Asp Leu Val Ala Leu Phe Pro
            260                 265                 270
agc tat gac act cgc act tat cca ata aat acg agt gct cag tta aca    864
Ser Tyr Asp Thr Arg Thr Tyr Pro Ile Asn Thr Ser Ala Gln Leu Thr
        275                 280                 285
agg gaa gtt tat aca gac gca att gga gca aca ggg gta aat atg gca    912
Arg Glu Val Tyr Thr Asp Ala Ile Gly Ala Thr Gly Val Asn Met Ala
    290                 295                 300
agt atg aat tgg tat aat aat aat gca cct tcg ttt tcc gct ata gag    960
Ser Met Asn Trp Tyr Asn Asn Asn Ala Pro Ser Phe Ser Ala Ile Glu
305                 310                 315                 320
act gcg gtt atc cga agc ccg cat cta ctt gat ttt cta gaa caa ctt    1008
Thr Ala Val Ile Arg Ser Pro His Leu Leu Asp Phe Leu Glu Gln Leu
                325                 330                 335
aca att ttt agc act tca tca cga tgg agt gct act agg cat atg act    1056
Thr Ile Phe Ser Thr Ser Ser Arg Trp Ser Ala Thr Arg His Met Thr
            340                 345                 350
tac tgg cgg ggg cac aca att caa tct cgg cca ata gga ggc gga tta    1104
Tyr Trp Arg Gly His Thr Ile Gln Ser Arg Pro Ile Gly Gly Gly Leu
        355                 360                 365
aat acc tca acg cat ggg tct acc aat act tct att aat cct gta aga    1152
Asn Thr Ser Thr His Gly Ser Thr Asn Thr Ser Ile Asn Pro Val Arg
    370                 375                 380
tta tca ttc ttc tct cga gac gta tat tgg act gaa tca tat gca gga    1200
Leu Ser Phe Phe Ser Arg Asp Val Tyr Trp Thr Glu Ser Tyr Ala Gly
385                 390                 395                 400
gtg ctt cta tgg gga att tac ctt gaa cct att cat ggt gtc cct act    1248
Val Leu Leu Trp Gly Ile Tyr Leu Glu Pro Ile His Gly Val Pro Thr
                405                 410                 415
gtt aga ttt aat ttt agg aac cct cag aat act ttt gaa aga ggt act    1296
Val Arg Phe Asn Phe Arg Asn Pro Gln Asn Thr Phe Glu Arg Gly Thr
            420                 425                 430
gct aac tat agt caa ccc tat gag tca cct ggg ctt caa tta aaa gat    1344
Ala Asn Tyr Ser Gln Pro Tyr Glu Ser Pro Gly Leu Gln Leu Lys Asp
        435                 440                 445
tca gaa act gaa tta cca cca gaa aca aca gaa cga cca aat tat gaa    1392
Ser Glu Thr Glu Leu Pro Pro Glu Thr Thr Glu Arg Pro Asn Tyr Glu
    450                 455                 460
tca tat agt cat agg tta tct cac ata ggg ctc att tca caa tct agg    1440
Ser Tyr Ser His Arg Leu Ser His Ile Gly Leu Ile Ser Gln Ser Arg
465                 470                 475                 480
gtg cat gta cca gta tat tct tgg acg cac cgt agt gca gat cgt aca    1488
Val His Val Pro Val Tyr Ser Trp Thr His Arg Ser Ala Asp Arg Thr
                485                 490                 495
aat acc att agt tca gat agc ata aca caa ata cca ttg gta aaa tca    1536
Asn Thr Ile Ser Ser Asp Ser Ile Thr Gln Ile Pro Leu Val Lys Ser
            500                 505                 510
ttc aac ctt aat tca ggt acc tct gta gtc agt ggc cca gga ttt aca    1584
Phe Asn Leu Asn Ser Gly Thr Ser Val Val Ser Gly Pro Gly Phe Thr
        515                 520                 525
gga ggg gat ata atc cga act aac gtt aat ggt agt gta cta agt atg    1632
Gly Gly Asp Ile Ile Arg Thr Asn Val Asn Gly Ser Val Leu Ser Met
    530                 535                 540
ggt ctt aat ttt aat aat aca tca tta cag cgg tat cgc gtg aga gtt    1680
Gly Leu Asn Phe Asn Asn Thr Ser Leu Gln Arg Tyr Arg Val Arg Val
545                 550                 555                 560
cgt tat gct gct tct caa aca atg gtc ctg agg gta act gtc gga ggg    1728
Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Thr Met Val Leu Arg Val Thr Val Gly Gly
                565                 570                 575
agt act act ttt gat caa gga ttc cct agt act atg agt gca aat gag    1776
Ser Thr Thr Phe Asp Gln Gly Phe Pro Ser Thr Met Ser Ala Asn Glu
            580                 585                 590
tct ttg aca tct caa tca ttt aga ttt gca gaa ttt cct gta ggt att    1824
Ser Leu Thr Ser Gln Ser Phe Arg Phe Ala Glu Phe Pro Val Gly Ile
        595                 600                 605
agt gca tct ggc agt caa act gct gga ata agt ata agt aat aat gca    1872
Ser Ala Ser Gly Ser Gln Thr Ala Gly Ile Ser Ile Ser Asn Asn Ala
    610                 615                 620
ggt aga caa acg ttt cac ttt gat aaa att gaa ttc att cca att act    1920
Gly Arg Gln Thr Phe His Phe Asp Lys Ile Glu Phe Ile Pro Ile Thr
625                 630                 635                 640
gca acc ttc gaa gca gaa tac gat tta gaa agg gcg caa gag gcg gtg    1968
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Glu Ala Val
                645                 650                 655
aat gct ctg ttt act aat acg aat cca aga aga ttg aaa aca gat gtg    2016
Asn Ala Leu Phe Thr Asn Thr Asn Pro Arg Arg Leu Lys Thr Asp Val
            660                 665                 670
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Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
        675                 680                 685
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Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Leu Glu Lys Val Lys
    690                 695                 700
tat gcg aaa cga ctc agt gat gaa aga aac tta ctc caa gat cca aac    2160
Tyr Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
705                 710                 715                 720
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Phe Thr Ser Ile Asn Lys Gln Pro Asp Phe Ile Ser Thr Asn Glu Gln
                725                 730                 735
tcg aat ttc aca tct atc cat gaa caa tct gaa cat gga tgg tgg gga    2256
Ser Asn Phe Thr Ser Ile His Glu Gln Ser Glu His Gly Trp Trp Gly
            740                 745                 750
agt gag aac att aca atc cag gaa gga aat gac gta ttt aaa gag aat    2304
Ser Glu Asn Ile Thr Ile Gln Glu Gly Asn Asp Val Phe Lys Glu Asn
        755                 760                 765
tac gtc aca cta ccg ggg act ttt aat gag tgt tat ccg acg tat tta    2352
Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asn Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu
    770                 775                 780
tat caa aaa ata gga gag tcg gaa tta aaa gct tat act cgc tac caa    2400
Tyr Gln Lys Ile Gly Glu Ser Glu Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln
785                 790                 795                 800
tta aga ggg tat att gaa gat agt caa gat tta gag ata tat ttg att    2448
Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile
                805                 810                 815
cgt tat aat gcg aaa cat gaa aca ttg gat gtt cca ggt acc gag tcc    2496
Arg Tyr Asn Ala Lys His Glu Thr Leu Asp Val Pro Gly Thr Glu Ser
            820                 825                 830
gta tgg ccg ctt tca gtt gaa agc cca atc gga agg tgc gga gaa ccg    2544
Val Trp Pro Leu Ser Val Glu Ser Pro Ile Gly Arg Cys Gly Glu Pro
        835                 840                 845
aat cga tgc gca cca cat ttt gaa tgg aat cct gat cta gat tgt tcc    2592
Asn Arg Cys Ala Pro His Phe Glu Trp Asn Pro Asp Leu Asp Cys Ser
    850                 855                 860
tgc aga gat gga gaa aaa tgt gcg cat cat tcc cat cat ttc tct ttg    2640
Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu
865                 870                 875                 880
gat att gat att gga tgc aca gac ttg cat gag aat cta ggc gtg tgg    2688
Asp Ile Asp Ile Gly Cys Thr Asp Leu His Glu Asn Leu Gly Val Trp
                885                 890                 895
gtg gta ttc aag att aag acg cag gaa ggt cat gca aga cta ggg aat    2736
Val Val Phe Lys Ile Lys Thr Gln Glu Gly His Ala Arg Leu Gly Asn
            900                 905                 910
ctg gaa ttt att gaa gag aaa cca tta tta gga gaa gca ctg tct cgt    2784
Leu Glu Phe Ile Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ser Arg
        915                 920                 925
gtg aag aga gca gag aaa aaa tgg aga gac aaa cgt gaa aaa cta caa    2832
Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Lys Leu Gln
    930                 935                 940
ttg gaa aca aaa cga gta tat aca gag gca aaa gaa gct gtg gat gct    2880
Leu Glu Thr Lys Arg Val Tyr Thr Glu Ala Lys Glu Ala Val Asp Ala
945                 950                 955                 960
tta ttt gta gat tct caa tat aat aga tta caa gcg gat aca aac att    2928
Leu Phe Val Asp Ser Gln Tyr Asn Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile
                965                 970                 975
ggc atg att cat gcg gca gat aaa ctt gtt cat cga att cga gag gct    2976
Gly Met Ile His Ala Ala Asp Lys Leu Val His Arg Ile Arg Glu Ala
            980                 985                 990
tat ctg tca gaa tta tct gtt atc ccg ggt gta aat gcg gaa att ttt    3024
Tyr Leu Ser Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Glu Ile Phe
        995                1000                1005
gaa gaa tta gaa ggt cgc att atc act gca atc tcc cta tac gat gcg    3072
Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Ile Thr Ala Ile Ser Leu Tyr Asp Ala
   1010                1015                1020
aga aat gtc gtt aaa aat ggt gat ttt aat aat gga tta gca tgc tgg    3120
Arg Asn Val Val Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Ala Cys Trp
1025               1030                1035                1040
aat gta aaa ggg cat gta gat gta caa cag agc cat cac cgt tct gtc    3168
Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Gln Gln Ser His His Arg Ser Val
               1045                1050                1055
ctt gtt atc cca gaa tgg gaa gca gaa gtg tca caa gca gtt cgc gtc    3216
Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Ala Val Arg Val
           1060                1065                1070
tgt ccg ggg cgt ggc tat atc ctc cgt gtc aca gcg tac aaa gag gga    3264
Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
       1075                1080                1085
tat gga gag ggt tgt gta acg atc cat gaa atc gag aac aat aca gac    3312
Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr Asp
   1090                1095                1100
gaa cta aaa ttt aaa aac tgt gaa gaa gag gaa gtg tat cca acg gat    3360
Glu Leu Lys Phe Lys Asn Cys Glu Glu Glu Glu Val Tyr Pro Thr Asp
1105               1110                1115                1120
aca gga acg tgt aat gat tat act gca cac caa ggt aca gca gta tgt    3408
Thr Gly Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala His Gln Gly Thr Ala Val Cys
               1125                1130                1135
aat tcc cgt aat gct gga tat gag gat gca tat gaa gtt gat act aca    3456
Asn Ser Arg Asn Ala Gly Tyr Glu Asp Ala Tyr Glu Val Asp Thr Thr
           1140                1145                1150
gca tct gtt aat tac aaa ccg act tat gaa gaa gaa acg tat aca gat    3504
Ala Ser Val Asn Tyr Lys Pro Thr Tyr Glu Glu Glu Thr Tyr Thr Asp
       1155                1160                1165
gta cga aga gat aat cat tgt gaa tat gac aga ggg tat gtg aat tat    3552
Val Arg Arg Asp Asn His Cys Glu Tyr Asp Arg Gly Tyr Val Asn Tyr
   11701               175                 1180
cca cca cta cca gct ggt tat atg aca aaa gaa tta gaa tac ttc cca    3600
Pro Pro Leu Pro Ala Gly Tyr Met Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro
1185               1190                1195                1200
gaa acc gat aag gta tgg att gag att gga gaa acg gaa ggg aag ttt    3648
Glu Thr Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Lys Phe
               1205                1210                1215
att gta gac agc gtg gaa tta ctc ctt atg gag gaa tag                3687
Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu
           1220                1225
<210>2
<211>1228
<212>PRT
<213>苏云金芽孢杆菌
<400>2
Leu Thr Ser Asn Arg Lys Asn Glu Asn Glu Ile Ile Asn Ala Leu Ser
  1               5                  10                  15
Ile Pro Ala Val Ser Asn His Ser Thr Gln Met Asp Leu Ser Pro Asp
             20                  25                  30
Ala Arg Ile Glu Asp Ser Leu Cys Ile Ala Glu Gly Asn Asn Ile Asn
         35                  40                  45
Pro Leu Val Ser Ala Ser Thr Val Gln Thr Gly Ile Asn Ile Ala Gly
     50                  55                  60
Arg Ile Leu Gly Val Leu Gly Val Pro Phe Ala Gly Gln Ile Ala Ser
65                  70                  75                  80
Phe Tyr Ser Phe Leu Val Gly Glu Leu Trp Pro Arg Gly Arg Asp Gln
                 85                  90                  95
Trp Glu Ile Phe Leu Glu His Val Glu Gln Leu Ile Asn Gln Gln Ile
            100                 105                 110
Thr Glu Asn Ala Arg Asn Thr Ala Leu Ala Arg Leu Gln Gly Leu Gly
        115                 120                 125
Asp Ser Phe Arg Ala Tyr Gln Gln Ser Leu Glu Asp Trp Leu Glu Asn
    130                 135                 140
Arg Asp Asp Ala Arg Thr Arg Ser Val Leu Tyr Thr Gln Tyr Ile Ala
145                 150                 155                 160
Leu Glu Leu Asp Phe Leu Asn Ala Met Pro Leu Phe Ala Ile Arg Asn
                165                 170                 175
Gln Glu Val Pro Leu Leu Met Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn Leu His
            180                 185                 190
Leu Leu Leu Leu Arg Asp Ala Ser Leu Phe Gly Ser Glu Phe Gly Leu
        195                 200                 205
Thr Ser Gln Glu Ile Gln Arg Tyr Tyr Glu Arg Gln Val Glu Gln Thr
    210                 215                 220
Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Cys Val Glu Trp Tyr Asn Thr Gly Leu Asn
225                 230                 235                 240
Ser Leu Arg Gly Thr Asn Ala Ala Ser Trp Val Arg Tyr Asn Gln Phe
                245                 2502                 55
Arg Arg Asp Leu Thr Leu Gly Val Leu Asp Leu Val Ala Leu Phe Pro
            260                 265                 270
Ser Tyr Asp Thr Arg Thr Tyr Pro Ile Asn Thr Ser Ala Gln Leu Thr
    275                 280                 285
Arg Glu Val Tyr Thr Asp Ala Ile Gly Ala Thr Gly Val Asn Met Ala
290                 295                 300
Ser Met Asn Trp Tyr Asn Asn Asn Ala Pro Ser Phe Ser Ala Ile Glu
305                 310                 315                 320
Thr Ala Val Ile Arg Ser Pro His Leu Leu Asp Phe Leu Glu Gln Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Phe Ser Thr Ser Ser Arg Trp Ser Ala Thr Arg His Met Thr
            340                 345                 350
Tyr Trp Arg Gly His Thr Ile Gln Ser Arg Pro Ile Gly Gly Gly Leu
        355                 360                 365
Asn Thr Ser Thr His Gly Ser Thr Asn Thr Ser Ile Asn Pro Val Arg
    370                 375                 380
Leu Ser Phe Phe Ser Arg Asp Val Tyr Trp Thr Glu Ser Tyr Ala Gly
385                 390                 395                 400
Val Leu Leu Trp Gly Ile Tyr Leu Glu Pro Ile His Gly Val Pro Thr
                405                 410                 415
Val Arg Phe Asn Phe Arg Asn Pro Gln Asn Thr Phe Glu Arg Gly Thr
            420                 425                 430
Ala Asn Tyr Ser Gln Pro Tyr Glu Ser Pro Gly Leu Gln Leu Lys Asp
        435                 440                 445
Ser Glu Thr Glu Leu Pro Pro Glu Thr Thr Glu Arg Pro Asn Tyr Glu
    450                 455                 460
Ser Tyr Ser His Arg Leu Ser His Ile Gly Leu Ile Ser Gln Ser Arg
465                 470                 475                 480
Val His Val Pro Val Tyr Ser Trp Thr His Arg Ser Ala Asp Arg Thr
                485                 490                 495
Asn Thr Ile Ser Ser Asp Ser Ile Thr Gln Ile Pro Leu Val Lys Ser
            500                 505                 510
Phe Asn Leu Asn Ser Gly Thr Ser Val Val Ser Gly Pro Gly Phe Thr
        515                 520                 525
Gly Gly Asp Ile Ile Arg Thr Asn Val Asn Gly Ser Val Leu Ser Met
    530                 535                 540
Gly Leu Asn Phe Asn Asn Thr Ser Leu Gln Arg Tyr Arg Val Arg Val
545                 550                 555                 560
Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Thr Met Val Leu Arg Val Thr Val Gly Gly
                565                 570                 575
Ser Thr Thr Phe Asp Gln Gly Phe Pro Ser Thr Met Ser Ala Asn Glu
            580                 585                 590
Ser Leu Thr Ser Gln Ser Phe Arg Phe Ala Glu Phe Pro Val Gly Ile
    595                 600                 605
Ser Ala Ser Gly Ser Gln Thr Ala Gly Ile Ser Ile Ser Asn Asn Ala
    610                 615                 620
Gly Arg Gln Thr Phe His Phe Asp Lys Ile Glu Phe Ile Pro Ile Thr
625                 630                 635                 640
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Glu Ala Val
                645                 650                 655
Asn Ala Leu Phe Thr Asn Thr Asn Pro Arg Arg Leu Lys Thr Asp Val
    660                 665                 670
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
675                 680                 685
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Leu Glu Lys Val Lys
                690                 695                 700
Tyr Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
705                 710                 715                 720
Phe Thr Ser Ile Asn Lys Gln Pro Asp Phe Ile Ser Thr Asn Glu Gln
                725                 730                 735
Ser Asn Phe Thr Ser Ile His Glu Gln Ser Glu His Gly Trp Trp Gly
            740                 745                 750
Ser Glu Asn Ile Thr Ile Gln Glu Gly Asn Asp Val Phe Lys Glu Asn
        755                 760                 765
Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asn Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu
    770                 775                 780
Tyr Gln Lys Ile Gly Glu Ser Glu Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln
785                 790                 795                 800
Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile
                805                 810                 815
Arg Tyr Asn Ala Lys His Glu Thr Leu Asp Val Pro Gly Thr Glu Ser
            820                 825                 830
Val Trp Pro Leu Ser Val Glu Ser Pro Ile Gly Arg Cys Gly Glu Pro
        835                 840                 845
Asn Arg Cys Ala Pro His Phe Glu Trp Asn Pro Asp Leu Asp Cys Ser
    850                 855                 860
Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu
865                 870                 875                 880
Asp Ile Asp Ile Gly Cys Thr Asp Leu His Glu Asn Leu Gly Val Trp
                885                 890                 895
Val Val Phe Lys Ile Lys Thr Gln Glu Gly His Ala Arg Leu Gly Asn
            900                 905                 910
Leu Glu Phe Ile Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ser Arg
        915                 920                 925
Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Lys Leu Gln
    930                 935                 940
Leu Glu Thr Lys Arg Val Tyr Thr Glu Ala Lys Glu Ala Val Asp Ala
945                 950                 955                 960
Leu Phe Val Asp Ser Gln Tyr Asn Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile
                965                 970                 975
Gly Met Ile His Ala Ala Asp Lys Leu Val His Arg Ile Arg Glu Ala
            980                 985                 990
Tyr Leu Ser Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Glu Ile Phe
        995                1000                1005
Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Ile Thr Ala Ile Ser Leu Tyr Asp Ala
   1010                1015                1020
Arg Asn Val Val Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Ala Cys Trp
025                1030                1035                1040
Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Gln Gln Ser His His Arg Ser Val
               1045                1050                1055
Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Ala Val Arg Val
           1060                1065                1070
Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
       1075                1080                1085
Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr Asp
   1090                1095                1100
Glu Leu Lys Phe Lys Asn Cys Glu Glu Glu Glu Val Tyr Pro Thr Asp
105                1110                1115                1120
Thr Gly Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala His Gln Gly Thr Ala Val Cys
               1125                1130                1135
Asn Ser Arg Asn Ala Gly Tyr Glu Asp Ala Tyr Glu Val Asp Thr Thr
           1140                1145                1150
Ala Ser Val Asn Tyr Lys Pro Thr Tyr Glu Glu Glu Thr Tyr Thr Asp
       1155                1160                1165
Val Arg Arg Asp Asn His Cys Glu Tyr Asp Arg Gly Tyr Val Asn Tyr
   1170                1175                1180
Pro Pro Leu Pro Ala Gly Tyr Met Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro
185                1190                1195                1200
Glu Thr Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Lys Phe
               1205                1210                1215
Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu
           1220                1225
<210>3
<211>3507
<212>DNA
<213>苏云金芽孢杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(3507)
<400>3
atg gag ata aat aat cag aac caa tgc ara cca tat aat tgc tta agt  48
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Ile Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
  1               5                  10                  15
aag cct gag gaa gta ttt ttg gat ggg gag agg ata tta cct gat atc  96
Lys Pro Glu Glu Val Phe Leu Asp Gly Glu Arg Ile Leu Pro Asp Ile
             20                  25                  30
gat cca ctc gaa gtt tct ttg tcg ctt ttg caa ttt ctt ttg aat aac  144
Asp Pro Leu Glu Val Ser Leu Ser Leu Leu Gln Phe Leu Leu Asn Asn
         35                  40                  45
ttt gtt ccg ggg ggg ggg ttt att tca gga tta att gac aaa ata tgg  192
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Ser Gly Leu Ile Asp Lys Ile Trp
     50                  55                  60
ggg gct ttg aga cca tct gaa tgg gaa tta ttt ctt gca cag att gaa  240
Gly Ala Leu Arg Pro Ser Glu Trp Glu Leu Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65                  70                  75                  80
cag ttg att gat cga aga ata gaa gca aca gta aga gca aaa gca atc  288
Gln Leu Ile Asp Arg Arg Ile Glu Ala Thr Val Arg Ala Lys Ala Ile
                 85                  90                  95
gct gaa tta gaa ggt tta ggg aga agt tat caa cta tat gga gag gca    336
Ala Glu Leu Glu Gly Leu Gly Arg Ser Tyr Gln Leu Tyr Gly Glu Ala
            100                 105                 110
ttt aaa gag tgg gaa aaa act cca gat aac aca gcg gct cgg tct aga    384
Phe Lys Glu Trp Glu Lys Thr Pro Asp Asn Thr Ala Ala Arg Ser Arg
        115                 120                 125
gta act gag aga ttt cgt ata att gat gct caa att gaa gca aat atc    432
Val Thr Glu Arg Phe Arg Ile Ile Asp Ala Gln Ile Glu Ala Asn Ile
    130                 135                 140
cct tcg ttt cgg gtt tcc gga ttt gaa gtg cca ctt cta tcg gtt tat    480
Pro Ser Phe Arg Val Ser Gly Phe Glu Val Pro Leu Leu Ser Val Tyr
145                 150                 155                 160
acc caa gca gct aat ttg cat ctc gct cta tta aga gat tct gtt att    528
Thr Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ala Leu Leu Arg Asp Ser Val Ile
                165                 170                 175
ttt gga gag aga tgg gga ttg tcg act aca aat gtc aat gat atc tat    576
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Leu Ser Thr Thr Asn Val Asn Asp Ile Tyr
            180                 185                 190
aat aga caa gtt aag aga att cat gaa tat agc gat cat tgt gta gat    624
Asn Arg Gln Val Lys Arg Ile His Glu Tyr Ser Asp His Cys Val Asp
        195                 200                 205
acg tat aaa aca gaa tta gaa cgt cta gag ttt aga tct ata gcg caa    672
Thr Tyr Lys Thr Glu Leu Glu Arg Leu Glu Phe Arg Ser Ile Ala Gln
    210                 215                 220
tgg aga ata tat aat cag ttt aga agg gaa ttg aca cta acg gta tta    720
Trp Arg Ile Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu Thr Leu Thr Val Leu
225                 230                 235                 240
gat att gtc gct ctt ttc ccg aac tat gat ggt aga ctg tat ccg att    768
Asp Ile Val Ala Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Gly Arg Leu Tyr Pro Ile
                245                 250                 255
cga aca att tct caa ttg aca aga gaa att tat aca tcc cca gta agc    816
Arg Thr Ile Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr Thr Ser Pro Val Ser
            260                 265                 270
gaa ttt tat tat ggt ccc att tat aat cat aat atg att ggt acc ttt    864
Glu Phe Tyr Tyr Gly Pro Ile Tyr Asn His Asn Met Ile Gly Thr Phe
        275                 280                 285
att gaa cgg cag cta agg cga cca cat ctt atg gac ttc ttt aac tcc    912
Ile Glu Arg Gln Leu Arg Arg Pro His Leu Met Asp Phe Phe Asn Ser
    290                 295                 300
atg acc atg tat aca tca gat aat aga cgg gaa tat tat tgg tca gga    960
Met Thr Met Tyr Thr Ser Asp Asn Arg Arg Glu Tyr Tyr Trp Ser Gly
305                 310                 315                 320
ctt gaa atg acg gct act ctt act tca gga aat caa gtg tca ttc cct    1008
Leu Glu Met Thr Ala Thr Leu Thr Ser Gly Asn Gln Val Ser Phe Pro
                325                 330                 335
tta gcc ggg act aga ggg aat tca gct cca cca gta tct gtt aga aag    1056
Leu Ala Gly Thr Arg Gly Asn Ser Ala Pro Pro Val Ser Val Arg Lys
            340                 345                 350
act ggt gag gga att tat aga ata tta tcg gaa cca ttt tat tca gca    1104
Thr Gly Glu Gly Ile Tyr Arg Ile Leu Ser Glu Pro Phe Tyr Ser Ala
        355                 360                 365
cct ttt cta ggc acc agt gtg cta gga agt cgc ggg gaa gaa ttt gct    1152
Pro Phe Leu Gly Thr Ser Val Leu Gly Ser Arg Gly Glu Glu Phe Ala
    370                 375                 380
ttt gca tct aat act act aca agt ctg cca tct aca ata tat aga aat    1200
Phe Ala Ser Asn Thr Thr Thr Ser Leu Pro Ser Thr Ile Tyr Arg Asn
385                 390                 395                 400
cgt gga aca gta gat tca tta gtc agc ata ccg cca caa gat tat agc    1248
Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Val Ser Ile Pro Pro Gln Asp Tyr Ser
                405                 410                 415
gta cca ccg cac agg ggg tat agt cat tta tta agt cac gtt acg atg    1296
Val Pro Pro His Arg Gly Tyr Ser His Leu Leu Ser His Val Thr Met
            420                 425                 430
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His Asn Ser Ser Pro Ile Phe His Trp Thr His Arg Ser Ala Thr Pro
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Arg Asn Ile Ile Tyr Pro Asp Ser Ile Thr Gln Ile Pro Val Val Lys
    450                 455                 460
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Ala Ser His Leu Ser Gly Gly Ser Val Ile Lys Gly Pro Gly His Thr
465                 470                 475                 480
ggt gga gat tta ata agc cta cct gta aat aac ttt act cat ttc cga    1488
Gly Gly Asp Leu Ile Ser Leu Pro Val Asn Asn Phe Thr His Phe Arg
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Ile Pro Phe Gln Ala Asn Thr Pro Gln Arg Tyr Arg Ile Arg Ile Cys
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tat gcg gca gac tca gat ggg act ttg gat agt gga gtt ttc tta agt    1584
Tyr Ala Ala Asp Ser Asp Gly Thr Leu Asp Ser Gly Val Phe Leu Ser
        515                 520                 525
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Ala Ala Ala Gly Asp Gly Phe Asn Thr Thr Ser Tyr Arg Ala Thr Met
    530                 535                 540
agc cct gaa ggt tcc tta aca tct cgt gat ttt caa ttt tta gat tta    1680
Ser Pro Glu Gly Ser Leu Thr Ser Arg Asp Phe Gln Phe Leu Asp Leu
545                 550                 555                 560
aac aca tcg ttt acc tcc gat gta gca tct aac tta tgg tta cat ttt    1728
Asn Thr Ser Phe Thr Ser Asp Val Ala Ser Asn Leu Trp Leu His Phe
                565                 570                 575
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Ile Arg Tyr Ile Arg Pro Gly Asn Leu Tyr Ile Asp Arg Ala Glu Phe
            580                 585                 590
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Ile Pro Val Asp Ala Thr Phe Glu Ala Gly Tyr Asn Leu Glu Arg Ala
        595                 600                 605
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Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Lys Gly Leu
    610                 615                 620
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Gln Thr Asp Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val
625                 630                 635                 640
gat tgt tta tct gat gag ttt tgc tta gat gaa aag cga aaa ttg tcc    1968
Asp Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Lys Leu Ser
    645                 650                 655
gag aaa gtc aaa cag gcg aag cga ctc agt gat gag cgg aat tta ctt    2016
Glu Lys Val Lys Gln Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu
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cag gat tca aat ttc aga ggc atc aat agg gaa caa gac cgt gga tgg    2064
Gln Asp Ser Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Glu Gln Asp Arg Gly Trp
                675                 680                 685
aga gga agt acg gat att act atc caa gga gga aac gat gtt ttc aaa    2112
Arg Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asn Asp Val Phe Lys
            690                 695                 700
gag aat tac gtt aca cta cca ggt acc ttt gat gcg tgt tat cca aca    2160
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705                 710                 715                 720
tat ttg tat caa aaa gtc gat gaa tca aaa tta aaa gcc tat acc cgt    2208
Tyr Leu Tyr Gln Lys Val Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg
                725                 730                 735
tat caa tta aga ggc tat atc gaa gat agt caa gat tta gaa gtc tat    2256
Tyr Gln Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Val Tyr
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ttg atc cgt tat aat gca aaa tat gaa acg tta aat gtg cca ggt atg    2304
Leu Ile Arg Tyr Asn Ala Lys Tyr Glu Thr Leu Asn Val Pro Gly Met
        755                 760                 765
ggt tct tta tgg cca ctt tca gtc gaa agt cca att gga aag tgt gga    2352
Gly Ser Leu Trp Pro Leu Ser Val Glu Ser Pro Ile Gly Lys Cys Gly
    770                 775                 780
gaa ccg aat cga tgt gtg cca caa ctt gaa tgg aat ccc gat ttc gat    2400
Glu Pro Asn Arg Cys Val Pro Gln Leu Glu Trp Asn Pro Asp Phe Asp
785                 790                 795                 800
tgt tcc tgc aga gac gga gaa aaa tgt gcg cat cat tcg cat cat ttc    2448
Cys Ser Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe
                805                 810                 815
tcc ttg gac att gat gtt gga tgt aca gac ttg aat gag aac cta ggt    2496
Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asn Leu Gly
            820                 825                 830
ata tgg gtg ata ttc aag att aag aca cag gat ggt cat gca aga cta    2544
Ile Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu
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gga aat cta gaa ttt ctc gaa gag aaa ccg tta tta gga gaa gcg tta    2592
Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu
    850                 855                 860
gcc cgt gtg aag aga gcg gag aaa aaa tgg aga gac aaa cgt gaa ata    2640
Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Ile
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ttg caa tca gaa act aat att gtt tat aaa gaa gca aaa gaa gct gta    2688
Leu Gln Ser Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ala Val
                885                 890                 895
gat ggt tta ttc gta gat tcc caa tat gag aga tta caa tct gat acg    2736
Asp Gly Leu Phe Val Asp Ser Gln Tyr Glu Arg Leu Gln Ser Asp Thr
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aat atc gcc atg att cat gcg gca gat aaa cgc gtt cac cga atc cga    2784
Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg
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Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Ser
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tgc tgg aat gtg aaa ggg cat gta gat ata aaa cag aat ggt cat cgt    2976
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tct gtt ctt gtt atc cca gaa tgg gaa gca caa gtt tca caa gaa gtt    3024
Ser Val Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Gln Val Ser Gln Glu Val
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cgt gta tgt cca ggt cgt ggc tac atc ctt cgt gtt aca gcg aac aaa    3072
Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Asn Lys
   1010                1015                1020
gaa gga tat gga gaa ggc tgc gta acg att cat gag att gag aat cat    3120
Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn His
1025               1030                1035                1040
act gaa aaa ctg aag ttt aga aac tgc gaa gaa gag gaa gta tat cca    3168
Thr Glu Lys Leu Lys Phe Arg Asn Cys Glu Glu Glu Glu Val Tyr Pro
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aac aat aca gga acg tgt aat gat tat act gca cac caa caa ggt aca    3216
Asn Asn Thr Gly Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala His Gln Gln Gly Thr
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Ala Gly Cys Ala Asp Ala Cys Asn Thr Arg Asn Val Gly Tyr Glu Asp
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gca tat gaa atg aat act aca aca tct gtt aat tac aaa ccg act tac    3312
Ala Tyr Glu Met Asn Thr Thr Thr Ser Val Asn Tyr Lys Pro Thr Tyr
   1090                1095                1100
gag gaa gaa gta tat aca gat gga cga aga gat aat cct tgt gaa atg    3360
Glu Glu Glu Val Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp Asn Pro Cys Glu Met
1105               1110                1115                1120
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Glu Arg Gly Tyr Thr Pro Leu Pro Val Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu
               1125                1130                1135
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Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asn Thr Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr
           1140                1145                1150
gaa ggg aag ttt att gta gac agt gtc gaa tta ctc ctt atg gaa gaa    3504
Glu Gly Lys Phe Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu
       1155                1160                1165
tag                                                                3507
<210>4
<211>1168
<212>PRT
<213>苏云金芽孢杆菌
<400>4
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Ile Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
  1               5                  10                  15
Lys Pro Glu Glu Val Phe Leu Asp Gly Glu Arg Ile Leu Pro Asp Ile
             20                  25                  30
Asp Pro Leu Glu Val Ser Leu Ser Leu Leu Gln Phe Leu Leu Asn Asn
         35                  40                  45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Ser Gly Leu Ile Asp Lys Ile Trp
     50                  55                  60
Gly Ala Leu Arg Pro Ser Glu Trp Glu Leu Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65                  70                  75                  80
Gln Leu Ile Asp Arg Arg Ile Glu Ala Thr Val Arg Ala Lys Ala Ile
                 85                  90                  95
Ala Glu Leu Glu Gly Leu Gly Arg Ser Tyr Gln Leu Tyr Gly Glu Ala
            100                 105                 110
Phe Lys Glu Trp Glu Lys Thr Pro Asp Asn Thr Ala Ala Arg Ser Arg
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Val Thr Glu Arg Phe Arg Ile Ile Asp Ala Gln Ile Glu Ala Asn Ile
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Pro Ser Phe Arg Val Ser Gly Phe Glu Val Pro Leu Leu Ser Val Tyr
145                 150                 155                 160
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Phe Gly Glu Arg Trp Gly Leu Ser Thr Thr Asn Val Asn Asp Ile Tyr
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Asn Arg Gln Val Lys Arg Ile His Glu Tyr Ser Asp His Cys Val Asp
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Thr Tyr Lys Thr Glu Leu Glu Arg Leu Glu Phe Arg Ser Ile Ala Gln
    210                 215                 220
Trp Arg Ile Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu Thr Leu Thr Val Leu
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Asp Ile Val Ala Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Gly Arg Leu Tyr Pro Ile
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Ile Glu Arg Gln Leu Arg Arg Pro His Leu Met Asp Phe Phe Asn Ser
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Met Thr Met Tyr Thr Ser Asp Asn Arg Arg Glu Tyr Tyr Trp Ser Gly
305                 310                 315                 320
Leu Glu Met Thr Ala Thr Leu Thr Ser Gly Asn Gln Val Ser Phe Pro
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Leu Ala Gly Thr Arg Gly Asn Ser Ala Pro Pro Val Ser Val Arg Lys
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Thr Gly Glu Gly Ile Tyr Arg Ile Leu Ser Glu Pro Phe Tyr Ser Ala
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Pro Phe Leu Gly Thr Ser Val Leu Gly Ser Arg Gly Glu Glu Phe Ala
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Phe Ala Ser Asn Thr Thr Thr Ser Leu Pro Ser Thr Ile Tyr Arg Asn
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Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Val Ser Ile Pro Pro Gln Asp Tyr Ser
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Val Pro Pro His Arg Gly Tyr Ser His Leu Leu Ser His Val Thr Met
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Gln Thr Asp Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val
625                 630                 635                 640
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        755                 760                 765
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    770                 775                 780
Glu Pro Asn Arg Cys Val Pro Gln Leu Glu Trp Asn Pro Asp Phe Asp
785                 790                 795                 800
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                805                 810                 815
Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asn Leu Gly
            820                 825                 830
Ile Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu
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Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Ile
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<210>5
<211>3459
<212>DNA
<213>苏云金芽孢杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(3459)
<400>5
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ccg aat gct gta ttc caa aat atg cat tat aaa gat tat ttg caa acg  144
Pro Asn Ala Val Phe Gln Asn Met His Tyr Lys Asp Tyr Leu Gln Thr
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Leu Gly Phe Leu Gly Val Pro Phe Ala Gly Gln Leu Val Thr Phe Tyr
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Thr Phe Leu Leu Asn Gln Leu Trp Pro Thr Asn Asp Asn Ala Val Trp
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gaa gct ttt atg gca caa ata gaa gag ctt att aat caa aga ata tcc  384
Glu Ala Phe Met Ala Gln Ile Glu Glu Leu Ile Asn Gln Arg Ile Ser
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gaa gca gta gta ggg aca gca gcg gat cat tta acg gga tta cac gat  432
Glu Ala Val Val Gly Thr Ala Ala Asp His Leu Thr Gly Leu His Asp
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aat tat gag tta tat gta gag gca ttg gaa gaa tgg ctg gaa aga ccg  480
Asn Tyr Glu Leu Tyr Val Glu Ala Leu Glu Glu Trp Leu Glu Arg Pro
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Asn Ala Ala Arg Thr Asn Leu Leu Phe Asn Arg Phe Thr Thr Leu Asp
                165                 170                 175
agt ctt ttt aca caa ttt atg cca agc ttt ggt act gga cct gga agt    576
Ser Leu Phe Thr Gln Phe Met Pro Ser Phe Gly Thr Gly Pro Gly Ser
            180                 185                 190
caa aac tac gca gtt cca tta ctt aca gta tac gca caa gca gcg aac    624
Gln Asn Tyr Ala Val Pro Leu Leu Thr Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn
        195                 200                 205
ctt cat ttg tta tta tta aag gat gct gaa ata tat gga gca aga tgg    672
Leu His Leu Leu Leu Leu Lys Asp Ala Glu Ile Tyr Gly Ala Arg Trp
    210                 215                 220
gga ctg aac caa aat cag att aac tca ttc cat acg cgc caa caa gag    720
Gly Leu Asn Gln Asn Gln Ile Asn Ser Phe His Thr Arg Gln Gln Glu
225                 230                 235                 240
cgt act caa tat tat aca aat cat tgc gta acg acg tat aat acc ggt    768
Arg Thr Gln Tyr Tyr Thr Asn His Cys Val Thr Thr Tyr Asn Thr Gly
                245                 250                 255
tta gat aga tta aga ggc aca aat act gaa agt tgg tta aat tat cat    816
Leu Asp Arg Leu Arg Gly Thr Asn Thr Glu Ser Trp Leu Asn Tyr His
            260                 265                 270
cga ttc cgt aga gag atg aca tta atg gca atg gat tta gtg gcc tta    864
Arg Phe Arg Arg Glu Met Thr Leu Met Ala Met Asp Leu Val Ala Leu
        275                 280                 285
ttc cca tac tat aat gtg cga caa tat cca aat ggg gca aat cca cag    912
Phe Pro Tyr Tyr Asn Val Arg Gln Tyr Pro Asn Gly Ala Asn Pro Gln
    290                 295                 300
ctt aca cgt gaa ata tat acg gat cca atc gta tat aat cca cca gct    960
Leu Thr Arg Glu Ile Tyr Thr Asp Pro Ile Val Tyr Asn Pro Pro Ala
305                 310                 315                 320
aat cag gga atc tgc cga cgt tgg ggg aat aat cct tat aat aca ttt    1008
Asn Gln Gly Ile Cys Arg Arg Trp Gly Asn Asn Pro Tyr Asn Thr Phe
                325                 330                 335
tct gaa ctt gaa aat gct ttt att cgc ccg cca cat ctt ttt gat agg    1056
Ser Glu Leu Glu Asn Ala Phe Ile Arg Pro Pro His Leu Phe Asp Arg
            340                 345                 350
ttg aat aga tta act att tct aga aac cga tat aca gct cca aca act    1104
Leu Asn Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asn Arg Tyr Thr Ala Pro Thr Thr
        355                 360                 365
aat agc tac cta gac tat tgg tca ggt cat act tta caa agc cag tat    1152
Asn Ser Tyr Leu Asp Tyr Trp Ser Gly His Thr Leu Gln Ser Gln Tyr
    370                 375                 380
gca aat aac ccg acg aca tat gaa act agt tac ggt cag att acc tct    1200
Ala Asn Asn Pro Thr Thr Tyr Glu Thr Ser Tyr Gly Gln Ile Thr Ser
385                 390                 395                 400
aac aca cgt tta ttc aat acg act aat gga gcc aat gca ata gat tca    1248
Asn Thr Arg Leu Phe Asn Thr Thr Asn Gly Ala Asn Ala Ile Asp Ser
                405                 410                 415
agg gca aga aat ttt ggt aac tta tac gct aat ttg tat ggt gtt agc    1296
Arg Ala Arg Asn Phe Gly Asn Leu Tyr Ala Asn Leu Tyr Gly Val Ser
            420                 425                 430
tat ttg aat att ttc cca aca ggt gtg atg agt gaa atc acc tca gcc    1344
Tyr Leu Asn Ile Phe Pro Thr Gly Val Met Ser Glu Ile Thr Ser Ala
        435                 440                 445
cct aat acg tgt tgg caa gac ctt act aca act gag gaa cta cca cta    1392
Pro Asn Thr Cys Trp Gln Asp Leu Thr Thr Thr Glu Glu Leu Pro Leu
    450                 455                 460
gtg aat aat aat ttt aat ctt tta tct cat gtt act ttc tta cgc ttc    1440
Val Asn Asn Asn Phe Asn Leu Leu Ser His Val Thr Phe Leu Arg Phe
465                 470                 475                 480
aat act act cag ggt ggc ccc ctt gca act gta ggg ttt gta ccc aca    1488
Asn Thr Thr Gln Gly Gly Pro Leu Ala Thr Val Gly Phe Val Pro Thr
                485                 490                 495
tat gtg tgg aca cgt caa gat gta gat ttt aat aat ata att act ccc    1536
Tyr Val Trp Thr Arg Gln Asp Val Asp Phe Asn Asn Ile Ile Thr Pro
            500                 505                 510
aat aga att act caa ata cca gtg gta aag gca tat gag cta agt agt    1584
Asn Arg Ile Thr Gln Ile Pro Val Val Lys Ala Tyr Glu Leu Ser Ser
        515                 520                 525
ggt gct act gtc gtg aaa ggt cca gga ttc aca gga gga gat gta atc    1632
Gly Ala Thr Val Val Lys Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Val Ile
    530                 535                 540
cga aga aca aat act ggt gga ttc gga gca ata agg gtg tcg gtc act    1680
Arg Arg Thr Asn Thr Gly Gly Phe Gly Ala Ile Arg Val Ser Val Thr
545                 550                 555                 560
gga ccg cta aca caa cga tat cgc ata agg ttc cgt tat gct tcg aca    1728
Gly Pro Leu Thr Gln Arg Tyr Arg Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Thr
                565                 570                 575
ata gat ttt gat ttc ttt gta aca cgt gga gga act act ata aat aat    1776
Ile Asp Phe Asp Phe Phe Val Thr Arg Gly Gly Thr Thr Ile Asn Asn
            580                 585                 590
ttt aga ttt aca cgt aca atg aac agg gga cag gaa tca aga tat gaa    1824
Phe Arg Phe Thr Arg Thr Met Asn Arg Gly Gln Glu Ser Arg Tyr Glu
        595                 600                 605
tcc tat cgt act gta gag ttt aca act cct ttt aac ttt aca caa agt    1872
Ser Tyr Arg Thr Val Glu Phe Thr Thr Pro Phe Asn Phe Thr Gln Ser
    610                 615                 620
caa gat ata att cga aca tct atc cag gga ctt agt gga aat ggg gaa    1920
Gln Asp Ile Ile Arg Thr Ser Ile Gln Gly Leu Ser Gly Asn Gly Glu
625                 630                 635                 640
gta tac ctt gat aga att gaa atc atc cct gta aat cca aca cga gaa    1968
Val Tyr Leu Asp Arg Ile Glu Ile Ile Pro Val Asn Pro Thr Arg Glu
                645                 650                 655
gcg gaa gag gat tta gaa gcg gcg aag aaa gcg gtg gcg agc ttg ttt    2016
Ala Glu Glu Asp Leu Glu Ala Ala Lys Lys Ala Val Ala Ser Leu Phe
            660                 665                 670
aca cgc aca agg gac gga tta caa gta aat gtg aca gat tat caa gtc    2064
Thr Arg Thr Arg Asp Gly Leu Gln Val Asn Val Thr Asp Tyr Gln Val
        675                 680                 685
gat caa gcg gca aat tta gtg tca tgc tta tca gat gaa caa tat gcg    2112
Asp Gln Ala Ala Asn Leu Val Ser Cys Leu Ser Asp Glu Gln Tyr Ala
    690                 695                 700
cat gat aaa aag atg tta ttg gaa gcg gta cgc gcg gca aaa cgc ctc    2160
His Asp Lys Lys Met Leu Leu Glu Ala Val Arg Ala Ala Lys Arg Leu
705                 710                 715                 720
agc cga gaa cgt aac tta ctt cag gat cca gat ttt aat aca atc aat    2208
Ser Arg Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asp Phe Asn Thr Ile Asn
                725                 730                 735
agt aca gaa gaa aat gga tgg aaa gca agt aac ggc gtt act att agt    2256
Ser Thr Glu Glu Asn Gly Trp Lys Ala Ser Asn Gly Val Thr Ile Ser
            740                 745                 750
gag ggc ggt cca ttc tat aaa ggc cgt gca ctt cag cta gca agt gca    2304
Glu Gly Gly Pro Phe Tyr Lys Gly Arg Ala Leu Gln Leu Ala Ser Ala
        755                 760                 765
cga gaa aat tac cca aca tac atc tat caa aaa gta gat gca tcg gag    2352
Arg Glu Asn Tyr Pro Thr Tyr Ile Tyr Gln Lys Val Asp Ala Ser Glu
    770                 775                 780
tta aaa cct tat aca cga tat aga ctg gat ggg ttc gtg aag agt agt    2400
Leu Lys Pro Tyr Thr Arg Tyr Arg Leu Asp Gly Phe Val Lys Ser Ser
785                 790                 795                 800
caa gat tta gaa att gat ctc att cac cat cat aaa gtc cat ctt gtg    2448
Gln Asp Leu Glu Ile Asp Leu Ile His His His Lys Val His Leu Val
                805                 810                 815
aaa aat gta cta gat aat tta gta tct gat act tac cca gat gat tct    2496
Lys Asn Val Leu Asp Asn Leu Val Ser Asp Thr Tyr Pro Asp Asp Ser
            820                 825                 830
tgt agt gga atc aat cga tgt gag gaa caa cag atg gta aat gcg caa    2544
Cys Ser Gly Ile Asn Arg Cys Glu Glu Gln Gln Met Val Asn Ala Gln
        835                 840                 845
ctg gaa aca gaa cat cat cat ccg atg gat tgc tgt gaa gca gct caa    2592
Leu Glu Thr Glu His His His Pro Met Asp Cys Cys Glu Ala Ala Gln
    850                 855                 860
aca cat gag ttt tct tcc tat att gat aca ggg gat tta aat tcg act    2640
Thr His Glu Phe Ser Ser Tyr Ile Asp Thr Gly Asp Leu Asn Ser Thr
865                 870                 875                 880
gta gac cag gga atc tgg gtg atc ttt aaa gtt cga aca aca gat ggt    2688
Val Asp Gln Gly Ile Trp Val Ile Phe Lys Val Arg Thr Thr Asp Gly
                885                 890                 895
tat gcg acg cta gga aat ctt gaa ttg gta gag gtc gga ccg tta ttg    2736
Tyr Ala Thr Leu Gly Asn Leu Glu Leu Val Glu Val Gly Pro Leu Leu
            900                 905                 910
ggt gaa cct cta gaa cgt gaa caa aga gaa aat gcg aaa tgg aat gca    2784
Gly Glu Pro Leu Glu Arg Glu Gln Arg Glu Asn Ala Lys Trp Asn Ala
        915                 920                 925
gag tta gga aga aaa cgt gca gaa aca gat cgc gtg tat caa gat gcc    2832
Glu Leu Gly Arg Lys Arg Ala Glu Thr Asp Arg Val Tyr Gln Asp Ala
    930                 935                 940
aaa caa tcc atc aat cat tta ttt gtg gat tat caa gat caa caa tta    2880
Lys Gln Ser Ile Asn His Leu Phe Val Asp Tyr Gln Asp Gln Gln Leu
945                 950                 955                 960
aat cca caa ata ggg atg gca gat att atg gac gct caa aat ctt gtc    2928
Asn Pro Gln Ile Gly Met Ala Asp Ile Met Asp Ala Gln Asn Leu Val
                965                 970                 975
gca tca att tca gat gta tat agc gat gca gta ctg caa atc cct gga    2976
Ala Ser Ile Ser Asp Val Tyr Ser Asp Ala Val Leu Gln Ile Pro Gly
            980                 985                 990
att aac tat gag att tac aca gag ctg tcc aat cgc tta caa caa gca    3024
Ile Asn Tyr Glu Ile Tyr Thr Glu Leu Ser Asn Arg Leu Gln Gln Ala
        995                1000                1005
tcg tat ctg tat acg tct cga aat gcg gtg caa aat ggg gac ttt aac    3072
Ser Tyr Leu Tyr Thr Ser Arg Asn Ala Val Gln Asn Gly Asp Phe Asn
   1010                1015                1020
aac ggg cta gat agc tgg aat gca aca gcg ggt gca tcg gta caa cag    3120
Asn Gly Leu Asp Ser Trp Asn Ala Thr Ala Gly Ala Ser Val Gln Gln
1025               1030                1035                1040
gat ggc aat acg cat ttc tta gtt ctt tct cat tgg gat gca caa gtt    3168
Asp Gly Asn Thr His Phe Leu Val Leu Ser His Trp Asp Ala Gln Val
               1045                1050                1055
tcc caa caa ttt aga gtg cag ccg aat tgt aaa tat gta tta cgt gta  3216
Ser Gln Gln Phe Arg Val Gln Pro Asn Cys Lys Tyr Val Leu Arg Val
           1060                1065                1070
aca gca gag aaa gta ggc ggc gga gac gga tac gtg act atc cgg gat  3264
Thr Ala Glu Lys Val Gly Gly Gly Asp Gly Tyr Val Thr Ile Arg Asp
       1075                1080                1085
ggt gct cat cat aca gaa acg ctt aca ttt aat gca tgt gat tat gat  3312
Gly Ala His His Thr Glu Thr Leu Thr Phe Asn Ala Cys Asp Tyr Asp
   1090                1095                1100
ata aat ggc acg tac gtg act gat aat acg tat cta aca aaa gaa gtg  3360
Ile Asn Gly Thr Tyr Val Thr Asp Asn Thr Tyr Leu Thr Lys Glu Val
1105               1110                1115                1120
ata ttc tat tca cat aca gaa cac atg tgg gta gag gta aat gaa aca  3408
Ile Phe Tyr Ser His Thr Glu His Met Trp Val Glu Val Asn Glu Thr
               1125                1130                1135
gaa ggt gca ttt cat ata gat agt att gaa ttc gtt gaa aca gaa aag  3456
Glu Gly Ala Phe His Ile Asp Ser Ile Glu Phe Val Glu Thr Glu Lys
           1140                1145                1150
taa                                                              3459
<210>6
<211>1152
<212>PRT
<213>苏云金芽孢杆菌
<400>6
Met Asn Arg Asn Asn Gln Asn Asp Tyr Glu Val Ile Asp Ala Ser Asn
  1               5                  10                  15
Cys Gly Cys Ala Ser Asp Asp Val Val Gln Tyr Pro Leu Ala Arg Asp
             20                  25                  30
Pro Asn Ala Val Phe Gln Asn Met His Tyr Lys Asp Tyr Leu Gln Thr
         35                  40                  45
Tyr Asp Gly Asp Tyr Thr Gly Ser Phe Ile Asn Pro Asn Leu Ser Ile
     50                  55                  60
Asn Pro Arg Asp Val Leu Gln Thr Gly Ile Asn Ile Val Gly Arg Leu
65                  70                  75                  80
Leu Gly Phe Leu Gly Val Pro Phe Ala Gly Gln Leu Val Thr Phe Tyr
                 85                  90                  95
Thr Phe Leu Leu Asn Gln Leu Trp Pro Thr Asn Asp Asn Ala Val Trp
            100                 105                 110
Glu Ala Phe Met Ala Gln Ile Glu Glu Leu Ile Asn Gln Arg Ile Ser
        115                 120                 125
Glu Ala Val Val Gly Thr Ala Ala Asp His Leu Thr Gly Leu His Asp
    130                 135                 140
Asn Tyr Glu Leu Tyr Val Glu Ala Leu Glu Glu Trp Leu Glu Arg Pro
145                 150                 155                 160
Asn Ala Ala Arg Thr Asn Leu Leu Phe Asn Arg Phe Thr Thr Leu Asp
                165                 170                 175
Ser Leu Phe Thr Gln Phe Met Pro Ser Phe Gly Thr Gly Pro Gly Ser
            180                 185                 190
Gln Asn Tyr Ala Val Pro Leu Leu Thr Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn
        195                 200                 205
Leu His Leu Leu Leu Leu Lys Asp Ala Glu Ile Tyr Gly Ala Arg Trp
    210                 215                 220
Gly Leu Asn Gln Asn Gln Ile Asn Ser Phe His Thr Arg Gln Gln Glu
225                 230                 235                 240
Arg Thr Gln Tyr Tyr Thr Asn His Cys Val Thr Thr Tyr Asn Thr Gly
                245                 250                 255
Leu Asp Arg Leu Arg Gly Thr Asn Thr Glu Ser Trp Leu Asn Tyr His
            260                 265                 270
Arg Phe Arg Arg Glu Met Thr Leu Met Ala Met Asp Leu Val Ala Leu
        275                 280                 285
Phe Pro Tyr Tyr Asn Val Arg Gln Tyr Pro Asn Gly Ala Asn Pro Gln
    290                 295                 300
Leu Thr Arg Glu Ile Tyr Thr Asp Pro Ile Val Tyr Asn Pro Pro Ala
305                 310                 315                 320
Asn Gln Gly Ile Cys Arg Arg Trp Gly Asn Asn Pro Tyr Asn Thr Phe
                325                 330                 335
Ser Glu Leu Glu Asn Ala Phe Ile Arg Pro Pro His Leu Phe Asp Arg
            340                 345                 350
Leu Asn Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asn Arg Tyr Thr Ala Pro Thr Thr
        355                 360                 365
Asn Ser Tyr Leu Asp Tyr Trp Ser Gly His Thr Leu Gln Ser Gln Tyr
    370                 375                 380
Ala Asn Asn Pro Thr Thr Tyr Glu Thr Ser Tyr Gly Gln Ile Thr Ser
385                 390                 395                 400
Asn Thr Arg Leu Phe Asn Thr Thr Asn Gly Ala Asn Ala Ile Asp Ser
                405                 410                 415
Arg Ala Arg Asn Phe Gly Asn Leu Tyr Ala Asn Leu Tyr Gly Val Ser
            420                 425                 430
Tyr Leu Asn Ile Phe Pro Thr Gly Val Met Ser Glu Ile Thr Ser Ala
        435                 440                 445
Pro Asn Thr Cys Trp Gln Asp Leu Thr Thr Thr Glu Glu Leu Pro Leu
    450                 455                 460
Val Asn Asn Asn Phe Asn Leu Leu Ser His Val Thr Phe Leu Arg Phe
465                 470                 475                 480
Asn Thr Thr Gln Gly Gly Pro Leu Ala Thr Val Gly Phe Val Pro Thr
                485                 490                 495
Tyr Val Trp Thr Arg Gln Asp Val Asp Phe Asn Asn Ile Ile Thr Pro
            500                 505                 510
Asn Arg Ile Thr Gln Ile Pro Val Val Lys Ala Tyr Glu Leu Ser Ser
        515                 520                 525
Gly Ala Thr Val Val Lys Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Val Ile
    530                 535                 540
Arg Arg Thr Asn Thr Gly Gly Phe Gly Ala Ile Arg Val Ser Val Thr
545                 550                 555                 560
Gly Pro Leu Thr Gln Arg Tyr Arg Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Thr
                565                 570                 575
Ile Asp Phe Asp Phe Phe Val Thr Arg Gly Gly Thr Thr Ile Asn Asn
            580                 585                 590
Phe Arg Phe Thr Arg Thr Met Asn Arg Gly Gln Glu Ser Arg Tyr Glu
        595                 600                 605
Ser Tyr Arg Thr Val Glu Phe Thr Thr Pro Phe Asn Phe Thr Gln Ser
    610                 615                 620
Gln Asp Ile Ile Arg Thr Ser Ile Gln Gly Leu Ser Gly Asn Gly Glu
625                 630                 635                 640
Val Tyr Leu Asp Arg Ile Glu Ile Ile Pro Val Asn Pro Thr Arg Glu
                645                 650                 655
Ala Glu Glu Asp Leu Glu Ala Ala Lys Lys Ala Val Ala Ser Leu Phe
            660                 665                 670
Thr Arg Thr Arg Asp Gly Leu Gln Val Asn Val Thr Asp Tyr Gln Val
        675                 680                 685
Asp Gln Ala Ala Asn Leu Val Ser Cys Leu Ser Asp Glu Gln Tyr Ala
    690                 695                 700
His Asp Lys Lys Met Leu Leu Glu Ala Val Arg Ala Ala Lys Arg Leu
705                 710                 715                 720
Ser Arg Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asp Phe Asn Thr Ile Asn
                725                 730                 735
Ser Thr Glu Glu Asn Gly Trp Lys Ala Ser Asn Gly Val Thr Ile Ser
            740                 745                 750
Glu Gly Gly Pro Phe Tyr Lys Gly Arg Ala Leu Gln Leu Ala Ser Ala
        755                 760                 765
Arg Glu Asn Tyr Pro Thr Tyr Ile Tyr Gln Lys Val Asp Ala Ser Glu
    770                 775                 780
Leu Lys Pro Tyr Thr Arg Tyr Arg Leu Asp Gly Phe Val Lys Ser Ser
785                 790                 795                 800
Gln Asp Leu Glu Ile Asp Leu Ile His His His Lys Val His Leu Val
                805                 810                 815
Lys Asn Val Leu Asp Asn Leu Val Ser Asp Thr Tyr Pro Asp Asp Ser
            820                 825                 830
Cys Ser Gly Ile Asn Arg Cys Glu Glu Gln Gln Met Val Asn Ala Gln
        835                 840                 845
Leu Glu Thr Glu His His His Pro Met Asp Cys Cys Glu Ala Ala Gln
    850                 855                 860
Thr His Glu Phe Ser Ser Tyr Ile Asp Thr Gly Asp Leu Asn Ser Thr
865                 870                 875                 880
Val Asp Gln Gly Ile Trp Val Ile Phe Lys Val Arg Thr Thr Asp Gly
                885                 890                 895
Tyr Ala Thr Leu Gly Asn Leu Glu Leu Val Glu Val Gly Pro Leu Leu
            900                 905                 910
Gly Glu Pro Leu Glu Arg Glu Gln Arg Glu Asn Ala Lys Trp Asn Ala
        915                 920                 925
Glu Leu Gly Arg Lys Arg Ala Glu Thr Asp Arg Val Tyr Gln Asp Ala
    930                 935                 940
Lys Gln Ser Ile Asn His Leu Phe Val Asp Tyr Gln Asp Gln Gln Leu
945                 950                 955                 960
Asn Pro Gln Ile Gly Met Ala Asp Ile Met Asp Ala Gln Asn Leu Val
                965                 970                 975
Ala Ser Ile Ser Asp Val Tyr Ser Asp Ala Val Leu Gln Ile Pro Gly
            980                 985                 990
Ile Asn Tyr Glu Ile Tyr Thr Glu Leu Ser Asn Arg Leu Gln Gln Ala
        995                1000                1005
Ser Tyr Leu Tyr Thr Ser Arg Asn Ala Val Gln Asn Gly Asp Phe Asn
   1010                1015                1020
Asn Gly Leu Asp Ser Trp Asn Ala Thr Ala Gly Ala Ser Val Gln Gln
025                1030                1035                1040
Asp Gly Asn Thr His Phe Leu Val Leu Ser His Trp Asp Ala Gln Val
              1045                 1050                1055
Ser Gln Gln Phe Arg Val Gln Pro Asn Cys Lys Tyr Val Leu Arg Val
           1060                1065                1070
Thr Ala Glu Lys Val Gly Gly Gly Asp Gly Tyr Val Thr Ile Arg Asp
       1075                1080                1085
Gly Ala His His Thr Glu Thr Leu Thr Phe Asn Ala Cys Asp Tyr Asp
   1090                1095                1100
Ile Asn Gly Thr Tyr Val Thr Asp Asn Thr Tyr Leu Thr Lys Glu Val
105                1110                1115                1120
Ile Phe Tyr Ser His Thr Glu His Met Trp Val Glu Val Asn Glu Thr
               1125                1130                1135
Glu Gly Ala Phe His Ile Asp Ser Ile Glu Phe Val Glu Thr Glu Lys
           1140                1145                1150
<210>7
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：引物cry1B.fw
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cagtccaaac gggtataaac                                 20
<210>8
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：引物B.R
<400>8
ctgcttcgaa ggttgcagta    20
<210>9
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：引物B.F
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cagcgtatta agtcgatgga    20
<210>10
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：引物JFW
<400>10
gcagctaatg ctaccacatc    20
<210>11
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：引物JRV
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gtggcggtatgc tgactaat    20
<210>12
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：引物9FW
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gyttttattc gcccgccaca    20
<210>13
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列描述：引物9RV
<400>13
cgacagtags acccactact    20