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首页 / 专利库 / 苏云金芽孢杆菌 / 苏云金芽孢杆菌杀虫剂调配物

苏云金芽孢杆菌杀虫剂调配物

申请号 CN202180017968.3 申请日 2021-01-28 公开(公告)号 CN115209739A 公开(公告)日 2022-10-18
申请人 陶氏环球技术有限责任公司; 罗门哈斯公司; 发明人 S·阿鲁穆加姆; C·沃尔福-古普塔; 余旺林;
摘要 本发明的杀虫剂调配物包含苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)、聚乙二醇和多酚,该聚乙二醇具有1,000g/mol至12,000g/mol的重均分子量,如根据凝胶渗透色谱法测量的。
权利要求

1.一种杀虫剂调配物,所述杀虫剂调配物包含:

苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis);

聚乙二醇,其中所述聚乙二醇具有1,000g/mol至12,000g/mol的重均分子量,如根据凝胶渗透色谱法测量的;以及多酚。

2.根据权利要求1所述的杀虫剂调配物,其中所述聚乙二醇具有5,000/mol至7,000g/mol的重均分子量,如根据凝胶渗透色谱法测量的。

3.根据权利要求2所述的杀虫剂调配物,其中所述聚乙二醇具有6,000g/mol的重均分子量,如根据凝胶渗透色谱法测量的。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的杀虫剂调配物,其中基于所述杀虫剂调配物的总重量,所述杀虫剂调配物包含0.2wt%至10wt%的聚乙二醇。

5.根据权利要求4所述的杀虫剂调配物,其中基于所述杀虫剂调配物的总重量,所述杀虫剂调配物包含0.2wt%至5wt%的聚乙二醇。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的杀虫剂调配物,其中所述苏云金芽孢杆菌包括库斯塔克亚种(kurstaki subspecies)苏云金芽孢杆菌。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的杀虫剂调配物,其中所述多酚包括富里酸。

8.根据权利要求7所述的杀虫剂调配物,其中所述多酚包括腐殖酸,并且其中所述富里酸与所述腐殖酸之间的重量比为2∶100至20∶100。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的杀虫剂调配物,其中所述多酚包括富里酸和腐殖酸,进一步地其中富里酸与腐殖酸之间的wt%比率为2∶100至20∶100。

9.根据权利要求8所述的杀虫剂调配物,其中富里酸与腐殖酸之间的wt%比率为8∶100至14∶100。

说明书全文

苏云金芽孢杆菌杀虫剂调配物

背景技术

技术领域

[0001] 本公开总体上涉及杀虫剂调配物,并且更具体地涉及包含苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)的杀虫剂调配物。
[0002] 背景技术
[0003] 用于作物防御应用的杀虫剂调配物传统上作为作物防御调配物的一部分喷洒在作物组织上。传统杀虫剂调配物可包含被感知为对人有毒的杀虫剂,并且在收获后可保留在作物上并转移到此类作物的最终消费者。进一步地,雨水和灌溉形式的水可将传统杀虫剂从作物组织中冲走,从而污染水路,同时也使作物无法免受害虫侵害。
[0004] 传统杀虫剂的常规替代品包括使用天然微生物和细菌来阻止和杀死害虫的生物基杀虫剂。已经用于生物基杀虫剂的一种细菌是苏云金芽孢杆菌。苏云金芽孢杆菌以杀虫剂调配物中孢子和结晶蛋白形式应用于作物。在苏云金芽孢杆菌的孢子形成过程期间,苏云金芽孢杆菌产生对某些害虫有毒的结晶蛋白。当昆虫摄入具有苏云金芽孢杆菌孢子和蛋白质的作物组织时,蛋白质会在昆虫消化道内打开毛孔。苏云金芽孢杆菌孢子然后穿过毛孔,在昆虫的血流内变得活跃并繁殖。昆虫血流内的快速细菌生长导致败血症和昆虫死亡。
[0005] 由于其操作机制,苏云金芽孢杆菌在用于作物防御环境时存在许多缺点。例如,CA2184019A1详细说明,当苏云金芽孢杆菌暴露于紫外线辐射时,该作用可以是结晶蛋白质失活和孢子DNA受损。CN103160449A公开了使用腐殖酸来保护苏云金芽孢杆菌免受紫外线辐射的影响。进一步地,蛋白质和孢子易于通过雨水和灌溉形式的水从作物组织中去除。由于苏云金芽孢杆菌依靠蛋白质和孢子的活力两者来获得最大效力,因此作物防御应用的环境对苏云金芽孢杆菌具有挑战性。
[0006] 杀虫剂调配物通常包含保湿剂(例如聚乙二醇)、涂抹剂和粘着剂、流变改性剂、营养素以及导致复杂调配物的多种其它助剂。相互作用和副反应通常发生在存在于杀虫剂调配物中的不同佐剂之间,这可降低杀虫剂调配物的一种或多种特性的功效。如苏云金芽孢杆菌等杀虫剂的使用通常需要添加具有潜在的副反应的更多的佐剂,以解决使用杀虫剂的已知挑战。
[0007] 几十年来,药物科学一直在研究调配物中苯酚和非离子聚合物的相互作用。例如,B.N.Kabadi的“非离子疏水性聚合物与苯酚的相互作用I(Interaction of Nonionic Hydrophobic Polymers with Phenols I)”检查苯酚和聚乙二醇的相互作用。Kabadi解释,苯酚通过在苯酚的OH基团与聚乙二醇的醚桥之间形成氢键,优先干扰聚乙二醇的稳定特性和增溶特性。氢键往往会导致形成疏水性大分子结构,该疏水性大分子结构将苯和聚乙二醇聚集并分离在一起。因此,向调配物赋予的聚乙二醇和苯酚中的每一者的单独特性降低或消除。
[0008] 因此,令人惊讶的是发现包含多酚和聚乙二醇两者的杀虫剂调配物,同时还解决了苏云金芽孢杆菌的传统缺点中的一个或多个传统缺点。

发明内容

[0009] 本发明提供了用于提供包含多酚和聚乙二醇两者的杀虫剂调配物,同时还解决了苏云金芽孢杆菌的传统缺点中的一个或多个传统缺点的解决方案。
[0010] 本发明是以下发现的结果:尽管在现有技术中证明了聚乙二醇和苯酚的优先相互作用,但包含聚乙二醇和多酚两者的调配物可解决在作物防御应用中使用苏云金芽孢杆菌的传统困难。此发现令人惊讶,因为预计聚乙二醇和多酚的优先相互作用会导致这些组分的聚集,从而导致这些组分中的每个组分对苏云金芽孢杆菌的影响降低或没有影响。令人惊讶的是,已经发现,暴露于雨后组合的聚乙二醇、多酚和苏云金芽孢杆菌调配物的苏云金芽孢杆菌活力大约是每个独立组分的总和。此类结果是出乎意料的,因为预测聚乙二醇和多酚的聚集导致苏云金芽孢杆菌的活力低于单个组分的总和。
[0011] 另外,已经发现,使用组合的聚乙二醇、多酚和苏云金芽孢杆菌调配物,在使用模拟阳光暴露于紫外线后,可实现90%以上的苏云金芽孢杆菌活力。类似于耐雨性,由于多酚的聚集,预期的苏云金芽孢杆菌活力降低出乎意料地本身没有表现出来。
[0012] 本发明的聚乙二醇、多酚和苏云金芽孢杆菌调配物特别用作杀虫剂调配物。
[0013] 根据本公开的至少一个特征,杀虫剂调配物包含苏云金芽孢杆菌、聚乙二醇和多酚,该聚乙二醇具有1,000g/mol至12,000g/mol的重均分子量,如根据凝胶渗透色谱法测量的。

具体实施方式

[0014] 如本文所用,术语“和/或”当用于两个或更多个项目的列表中时,意指所列项目中的任一个可单独使用,或可使用所列项目中的两个或更多个的任何组合。例如,如果组合物被描述为包含组分A、B和/或C,则组合物可单独含有A;单独含有B;单独含有C;以组合含有A和B;以组合含有A和C;以组合含有B和C;或以组合含有A、B和C。
[0015] 除非另有说明,否则所有范围包括端点。聚合物式中的下标值是指聚合物指定组分的摩尔平均值。
[0016] 测试方法是指截至本文件优先权日的最新测试方法,除非日期用测试方法编号表示为带连字符的两位数。对测试方法的引用包括对测试协会和测试方法编号两者的引用。测试方法组织通过以下缩写之一来引用:ASTM是指ASTM国际(以前称为美国试验与材料协会);EN是指欧洲标准;DIN是指德国标准化学会;并且ISO是指国际标准化组织。
[0017] 如本文所用,术语“平均分子量”是数量平均分子量并且使用如ASTM标准D4274所描述的羟基数分析进行测试。
[0018] 如本文所用,除非特别陈述相反,否则组分的“wt%”或“重量百分比”或“重量%”都是基于包括所述组分的组合物或制品的总重量。除非另有说明,否则所有百分比都按重量计。
[0019] 杀虫剂调配物
[0020] 本发明包括杀虫剂调配物,该杀虫剂调配物包含苏云金芽孢杆菌、聚乙二醇和多酚。根据各个实施方案,杀虫剂调配物由水、苏云金芽孢杆菌、聚乙二醇和多酚组成。杀虫剂调配物可用于作物防御调配物中,其中杀虫剂调配物是50wt%或更少的作物防御调配物。
[0021] 聚乙二醇
[0022] 杀虫剂调配物包含聚乙二醇。聚乙二醇是指由式H‑(O‑CH2‑CH2)q‑OH表示的环氧乙烷的低聚物或聚合物,其中q是指聚乙二醇聚合物中重复单元的数量。聚乙二醇的q值可以在20至250的范围内。
[0023] 聚乙二醇的重均分子量可以是1,000g/mol或更大、或2,000g/mol或更大、或3,000g/mol或更大、或3,500g/mol或更大、或4,000g/mol或更大、或4,500g/mol或更大、或5,
000g/mol或更大、或5,500g/mol或更大、或6,000g/mol或更大、或6,500g/mol或更大、或7,
000g/mol或更大、或7,500g/mol或更大、或8,000g/mol或更大、或8,500g/mol或更大、或9,
000g/mol或更大、或9,500g/mol或更大、或10,000g/mol或更大、或10,500g/mol或更大、或
11,000g/mol或更大,而同时12,000g/mol或更小、或10,500g/mol或更小、或10,000g/mol或更小、或9,500g/mol或更小、或9,000g/mol或更小、或8,500g/mol或更小、或8,000g/mol或更小、或7,500g/mol或更小、或7,000g/mol或更小、或6,500g/mol或更小、或6,000g/mol或更小、或5,500g/mol或更小、或5,000g/mol或更小、或4,500g/mol或更小、或4,000g/mol或更小、或3,500g/mol或更小、或3,000g/mol或更小、或2,000g/mol或更小,如通过凝胶渗透色谱法测量的。例如,聚乙二醇的重均分子量可以是3,000g/mol至9,000g/mol、或4,000g/mol至8,000g/mol、或5,000g/mol至7,000g/mol、或6,000g/mol。在杀虫剂调配物中可使用相同或不同重量百分比的不同平均分子量聚乙二醇的共混物。
[0024] 聚乙二醇可以是0.2wt%至10wt%的杀虫剂调配物。杀虫剂调配物可包含0.2wt%或更大、或0.5wt%或更大、或1.0wt%或更大、或1.5wt%或更大、或2.0wt%或更大、或2.5wt%或更大、或3.0wt%或更大、或3.5wt%或更大、或4.0wt%或更大、或4.5wt%或更大、或5.0wt%或更大、或5.5wt%或更大、或6.0wt%或更大、或6.5wt%或更大、或7.0wt%或更大、或7.5wt%或更大、或8.0wt%或更大、或8.5wt%或更大、或9.0wt%或更大、或
9.5wt%或更大,而同时10wt%或更小、或9.5wt%或更小、或9.0wt%或更小、或8.5wt%或更小、或8.0wt%或更小、或7.5wt%或更小、或7.0wt%或更小、或6.5wt%或更小、或
6.0wt%或更小、或5.5wt%或更小、或5.0wt%或更小、或4.5wt%或更小、或4.0wt%或更小、或3.5wt%或更小、或3.0wt%或更小、或2.5wt%或更小、或2.0wt%或更小、或1.5wt%或更小、或1.0wt%或更小、或0.5wt%或更小的聚乙二醇。
[0025] 苏云金芽孢杆菌
[0026] 杀虫剂调配物包含苏云金芽孢杆菌。如本文所定义的,“苏云金芽孢杆菌”定义为苏云金芽孢杆菌物种的孢子和/或结晶蛋白,并且包括所有展现杀虫特性的苏云金芽孢杆菌亚种。此类亚种的示例包括库斯塔克(kurstaki)、以色列(israelensis)和鲇泽(aizawa)。苏云金芽孢杆菌可作为固体或作为液体调配物的一部分添加到杀虫剂调配物中。苏云金芽孢杆菌的存在和亚种通过随机扩增多态性DNA分析来确定。苏云金芽孢杆菌的能够商购获得的液体调配物是能够从马里兰州哥伦比亚的CERTIS美国公司(CERTIS USA)TM获得的THURICIDE 杀虫剂。
[0027] 多酚
[0028] 杀虫剂调配物包含一种或多种多酚。如本文所使用的,术语“多酚”被定义为意指由腐殖酸、富里酸和单宁酸中的一种或多种组成的液体。腐殖酸、富里酸和单宁酸各自包括多个苯酚官能团,从而使各自成为多酚。腐殖酸是酸性有机聚合物,该酸性有机聚合物可从土壤、沉积物或水生环境中的腐殖质中提取。腐殖酸由化学文摘服务社(CAS)编号1415‑93‑6标识并且具有平均化学式C187H186O89N9S1。富里酸是具有479‑66‑3的CAS号和C14H12O8的化学式的有机酸。单宁酸是具有1401‑55‑4的CAS号和C76H52O46的化学式的有机酸。腐殖酸和富里TM
酸的共混物作为FLORIS 土壤养分能够从肯塔基州路易斯维尔的ORGANOCAT公司
(ORGANOCAT,Louisville,Kentucky)商购获得。单宁酸能够从西格玛奥德里奇公司(SIGMA ALDRICH)商购获得。杀虫剂调配物中多酚的存在由高效液相色谱法测定。调配物可包含
0.2wt%或更大、或0.5wt%或更大、或1.0wt%或更大、或1.5wt%或更大、或2.0wt%或更大、或2.5wt%或更大、或3.0wt%或更大、或3.5wt%或更大、或4.0wt%或更大、或4.5wt%或更大,而同时5.0wt%或更小、或4.5wt%或更小、或4.0wt%或更小、或3.5wt%或更小、或
3.0wt%或更小、或2.5wt%或更小、或2.0wt%或更小、或1.5wt%或更小、或1.0wt%或更小、或0.5wt%或更小的浓度的多酚。杀虫剂调配物内多酚的wt%基于添加到杀虫剂调配物中的包括多酚的材料的量和多酚浓度来测定。多酚可单独或以任何组合包括腐殖酸、富里酸或单宁酸以达到杀虫剂调配物内的上述多酚浓度。
[0029] 多酚可具有2∶100或更大、或4∶100或更大、或6∶100或更大、或8∶100或更大、或10∶100或更大、12∶100或更大、或14∶100或更大、或16∶100或更大、或18∶100或更大,而同时20∶
100或更小、或18∶100或更小、或16∶100或更小、或14∶100或更小、或12∶100或更小、或10∶
100或更小、或8∶100或更小、或6∶100或更小、或4∶100或更小、或2∶100或更小的富里酸与腐殖酸重量比。
[0030] 佐剂
[0031] 杀虫剂调配物可包含一种或添加剂或佐剂。在不背离本文提供的教导的情况下,添加剂的示例包括粘度调节剂、pH调节剂、除草剂、杀真菌剂和它们的组合等。
[0032] 作物防御调配物
[0033] 杀虫剂调配物可用于作物防御调配物内。作物防御调配物可包含1wt%或更大、或5wt%或更大、或10wt%或更大、或15wt%或更大、或20wt%或更大、或25wt%或更大、或
30wt%或更大、或35wt%或更大、或40wt%或更大、或45wt%或更大,而同时50wt%或更小、或45wt%或更小、或40wt%或更小、或35wt%或更小、或30wt%或更小、或25wt%或更小、或
20wt%或更小、或15wt%或更小、或10wt%或更小的浓度的杀虫剂调配物。在不脱离本文提供的教导的情况下,可将杀虫剂调配物的单独组分单独添加到作物防御调配物中。
[0034] 实施例
[0035] 材料
[0036] 用于以下样品的苏云金芽孢杆菌调配物是包括98.35wt%的库斯塔克亚种苏云金TM芽孢杆菌溶液(“BT溶液”)的液体杀虫剂,该液体杀虫剂作为THURICIDE HPC‑O生物杀虫剂能够从马里兰州哥伦比亚的CERTIS美国公司商购获得。
[0037] 用于以下样品的多酚是5.2wt%腐殖酸、0.5wt%富里酸和平衡水的共混物,其示TM例作为FLORIS 土壤养分能够从肯塔基州路易斯维尔的ORGANOCAT公司商购获得。
[0038] 用于以下样品的PEG是具有6000g/mol的重均分子量的聚乙二醇,能够从西格玛奥德里奇公司商购获得。
[0039] 样品制备
[0040] 根据以下程序制备比较实施例(“CE”)CE1‑CE3和发明实施例(“IE”)IE1‑IE6。
[0041] 通过对苏云金芽孢杆菌调配物进行整齐采样来制备CE1。
[0042] 基于CE2的重量,通过组合2克苏云金芽孢杆菌调配物和5wt%的PEG,并且用磁力搅拌棒进行混合来制备CE2。
[0043] 基于CE3的重量,通过组合2克苏云金芽孢杆菌调配物和5wt%的多酚,并且用磁力搅拌棒进行混合来制备CE3。
[0044] 基于初步调配物的重量,通过制备包含2.5wt%的PEG、2.5wt%的多酚和平衡水的初步调配物来制备IE1。组合初步调配物(1mL)、苏云金芽孢杆菌调配物(2克)和水(17克),并且用磁力搅拌棒进行混合以提供IE1。
[0045] 基于初步调配物的重量,通过制备包含5wt%的PEG、5wt%的多酚和平衡水的初步调配物来制备IE2。组合初步调配物(1mL)、苏云金芽孢杆菌调配物(2克)和水(17克),并且用磁力搅拌棒进行混合以提供IE2。
[0046] 基于初步调配物的重量,通过制备包含1.5wt%的PEG和3.5wt%的多酚和平衡水的初步调配物来制备IE3。组合初步调配物(1mL)、苏云金芽孢杆菌调配物(2克)和水(17克),并且用磁力搅拌棒进行混合以提供IE3。
[0047] 基于初步调配物的重量,通过制备包含3.5wt%的PEG和1.5wt%的多酚和平衡水的初步调配物来制备IE4。组合初步调配物(1mL)、苏云金芽孢杆菌调配物(2克)和水(17克),并且用磁力搅拌棒进行混合以提供IE4。
[0048] 基于初步调配物的重量,通过制备包含7.0wt%的PEG和3.0wt%的多酚和平衡水的初步调配物来制备IE5。组合初步调配物(1mL)、苏云金芽孢杆菌调配物(2克)和水(17克),并且用磁力搅拌棒进行混合以提供IE5。
[0049] 基于初步调配物的重量,通过制备包含10.5wt%的PEG和4.5wt%的多酚和平衡水的初步调配物来制备IE6。组合初步调配物(1mL)、苏云金芽孢杆菌调配物(2克)和水(17克),并且用磁力搅拌棒进行混合以提供IE6。
[0050] 表1提供了基于所使用的材料和样品制备方法的比较实施例和发明实施例的各种组分的重量百分比的总结。
[0051] 表1:
[0052]   BT溶液 PEG 腐殖酸 富里酸 多酚 水CE1 98.35 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
CE2 79.33 2.02 0.00 0.00 0.00 17.20
CE3 79.21 0.00 2.02 0.24 2.26 17.20
1E1 79.33 1.01 1.01 0.12 1.13 17.20
IE2 66.47 1.69 1.69 0.20 1.89 28.83
IE3 74.25 0.47 1.32 0.16 1.48 22.55
IE4 85.24 1.52 0.65 0.08 0.73 11.09
IE5 75.21 2.68 1.15 0.14 1.29 19.57
IE6 74.21 3.96 1.7 0.2 1.9 18.68
[0053] 测试方法
[0054] 耐雨性测试
[0055] 通过切割5.08厘米(“cm”)×10.16cm的PARAFILM MTM(来自毕玛时公司(BEMIS TMCOMPANY))实验室薄膜样本并且将样本放在黑色LENETA 图表(来自LENETA公司(LENETA TM
COMPANY))上来进行耐雨性测试。用KIMWIPE 擦拭器(来自金佰利公司(KIMBERLY CLARK))TM
擦拭PARAFILM M 实验室薄膜样本。在用于耐雨性测试之前,将CE1‑CE3和IE1‑IE6稀释至每升水71g每个样品。使用自动移液器将15滴(15微升至30微升)稀释的CE1‑CE3和稀释的IE1‑IE6随机放置在相应样本上的阵列中,每个IE和CE一个样本。涡旋混合稀释的IE和每组5滴之间稀释的CE,以维持组合物稠度。用稀释的IE1‑IE6和稀释的CE1‑CE3在大约28℃下在温育箱中干燥样本大约1小时。
[0056] 使用配备有2个EXO TERRATM标准喷嘴的EXO TERRA MONSOON RS400 RAINFALL TMSYSTEM 使干燥的样本中的每个样本经受模拟雨水,而无需任何扩展。将样本放置在距离喷嘴33cm处。以1.5升/小时的流速在样本处喷水,在样本界面处测量5分钟。使样本空气干燥。
[0057] 通过切割每个样本来提取样品,使得表示每个样本一个IE或CE的15个干滴中的每个干滴以大约0.63平方cm为中心。将每个样本获得的十五个0.63平方cm放入玻璃小瓶中。向每个小瓶中添加十二烷基硫酸钠溶液(1毫升,2wt%十二烷基硫酸钠水溶液)。将每个小瓶超声处理三次,并且使其浸泡8小时。
[0058] 如下通过二辛可宁酸(BCA)测定残余蛋白质浓度。PIERCETMBCA蛋白测定试剂A和TMPIERCE BCA蛋白测定试剂B(两者从赛默科技公司获得(THERMO SCIENTIFIC)获得)是组合试剂A(2毫升)和试剂B(40微升)以形成试剂混合物。将一百(100)微升的每种提取样品放入相应的比色皿中;然后将试剂混合物(2毫升)添加到每个比色皿中;并且然后将比色皿在30TM
℃下温育大约2小时。使用来自安捷伦公司(AGILENT)的CARY 100 UV‑可见分光光度计在
562nm处测量的吸收值来测定残余蛋白质浓度。
[0059] 通过使用1wt%的TWEENTM20聚山梨醇酯非离子表面活性剂溶液从样本中提取样品TM来测定孢子活力。通过使用0.1wt%的TWEEN 20聚山梨醇酯非离子表面活性剂溶液稀释样品,然后以合适的浓度连续稀释,将提取的CE1和IE1进行铺板。将提取和稀释的CE1和IE1样品均匀地铺板在琼脂样品生长板上的10μL液滴中。将板在30℃下在温育箱中放置12小时。
对表示为对数菌落形成单位/毫升的菌落数进行计数,同时考虑稀释因子。
[0060] 紫外线(“UV”)测试
[0061] 如下在CE1和IE1暴露于光之前和之后测定苏云金芽孢杆菌活性。
[0062] 使用自动移液器将30μL的CE1和IE1的液滴放在单独的塑料培养皿上并干燥大约1TM小时。使用来自哈勃公司(HAPRO)的模拟自然阳光的SUMMER GLOW HB175灯,将CE1和IE1暴TM
露在35毫瓦/平方厘米的光下2小时。使用1wt%的TWEEN 20聚山梨醇酯非离子表面活性剂TM
溶液从培养皿中提取CE1和IE1。通过使用0.1wt%的TWEEN 20聚山梨醇酯非离子表面活性剂溶液稀释样品,然后然后以合适的浓度连续稀释,将提取的CE1和IE1进行铺板。将提取和稀释的CE1和IE1样品均匀地铺板在琼脂样品生长板中的10μL液滴中。将板在30℃下在温育箱中放置12小时。对表示为对数菌落形成单位/毫升的菌落数进行计数,同时考虑稀释因子。
[0063] 结果
[0064] 表2提供了CE1‑CE3和IE1‑IE6在模拟降雨水条件下给定暴露时间的蛋白质保留率。
[0065] 表2:
[0066]   暴露时间(分钟) 蛋白质保留率(%)CE1 5 0.00
CE1 10 0.00
CE2 5 61.00
CE3 5 33.00
IE1 5 73.80
IE1 10 65.25
IE2 5 88.89
IE2 10 64.89
IE3 5 93.20
IE3 10 88.14
IE4 5 80.79
IE4 10 56.34
IE5 5 85.08
IE5 10 54.43
IE6 5 92.53
IE6 10 62.53
[0067] 如结果所示,仅表示苏云金芽孢杆菌对作物的应用的CE1,无论暴露时间如何,展现了0保留蛋白,表明苏云金芽孢杆菌的晶体蛋白质几乎没有耐雨性。CE2和CE3表明,将聚乙二醇和多酚单独添加到苏云金芽孢杆菌调配物中增加了晶体蛋白质的耐雨性。如上所述,对苯酚和非离子聚合物系统的传统理解表明,苯酚和非离子聚合物会通过氢键聚集,导致两种组分在整个系统中的分散度降低。预期耐雨性将对应地小于由于预期的聚集和分离而引起的两种组分的累积添加。如令人惊讶地发现的,IE1‑IE6的耐雨性表明了多酚和聚乙二醇的累积特性。因此,IE1‑IE6表明,苏云金芽孢杆菌、聚乙二醇和多酚的调配物可通过保留比CE1‑CE3中任何一种更高百分比的晶体蛋白质来展现出有效的耐雨性。
[0068] 表3提供了苏云金芽孢杆菌孢子在暴露于模拟降雨水条件一段时间后的活力。
[0069] 表3:
[0070]
[0071] 如结果所示,在耐雨性测试之后,仅表示苏云金芽孢杆菌对作物的应用的CE1展现苏云金芽孢杆菌孢子的活力为68%。IE1表明,在暴露于水之后,将聚乙二醇和多酚两者添加到苏云金芽孢杆菌中令人惊讶地增加了苏云金芽孢杆菌孢子的活力。此结果表明,组合的多酚和聚乙二醇系统不仅有效增加结晶蛋白质的耐雨性,而且还有效维持苏云金芽孢杆菌孢子的活力。
[0072] 表4提供了苏云金芽孢杆菌孢子在暴露于模拟降光条件一段时间后的活力。
[0073] 表4:
[0074]   Bt活性(log CFU/mL)‑暗 Bt活性(log CFU/mL)‑暴露 活力%CE1 8.53±0.13 5.78±0.10 0
IE1 8.28±0.11 8.04±0.13 94
[0075] 如结果所示,在暴露于模拟阳光之后,仅表示苏云金芽孢杆菌对作物的应用的CE1展现孢子活力为0%。如上所述,对苯酚和非离子聚合物系统的传统理解表明,苯酚和非离子聚合物会通过氢键聚集,导致两种组分在整个系统中的分散度降低。预期由于与聚乙二醇的聚集和分离,多酚提供的紫外线防护将被最小化或消除。如令人惊讶地发现的,IE1‑IE6的活力表明多酚仍在积极保护苏云金芽孢杆菌。因此,IE1‑IE6表明苏云金芽孢杆菌、聚乙二醇的调配物并且可展现出有效的紫外线防护。