[0001] 本发明属于农药技术领域，涉及植物源抑真菌剂或杀菌剂，具体涉及一种植物源真菌毒素抑制剂。本发明还给出这种植物源真菌毒素抑制剂在农产品和/或饲料贮运过程中的用途。

[0002] 随着人们环保、社会可持续发展意识的增强，将农药的副作用降至最小，开发生物合理农药已成为全世界的共识。植物源农药具有低毒、低残留、对非靶标生物基本无害，对环境无污染等优点，发展和应用植物源农药已逐渐成为一种趋势。而且随着公众对绿色食品、无公害食品的需求量越来越大，市场对植物源农药的需求量也与日俱增。发展植物源农药成为社会和科学发展的必然趋势。

[0003] 真菌毒素是真菌在食品或饲料中生长所产生的对人类和动物有害的代谢产物，粮食、饲料在收获时未经充分干燥，或贮运过程中温度或湿度过高，就会使带染在粮食、饲料上的真菌迅速生长。据有关报道，几乎所有在粮食仓库中生长的真菌(又称为仓贮真菌)都不同程度的侵染种胚造成谷物萌发率下降，同时产生毒素。据联合国粮农组织(FAO)统计，全球每年有25％的农产品受到真菌毒素污染。在我国，由于农户个体种植、贮藏方式，以及长江流域和华南地区高温高湿天气的影响、消费习惯的影响，农产品受真菌毒素污染危害更为严重。根据中国农科院农产品加工研究所统计，2001至2011年十年间，受真菌毒素污染的影响，我国出口欧盟食品违例事件达2559起，其中真菌毒素超标占28.6％，高于公众熟知的重金属、食品添加剂、农业残留等因素，在单一事件中比例最高。真菌毒素超标已成为我国农产品出口欧盟的最大阻碍，给我国粮油加工和出口企业造成了巨大经济损失。真菌毒素主要包括黄曲霉毒素、镰刀菌毒素、玉米赤霉烯酮等，其中由禾谷镰刀菌侵染玉米、小麦等谷类所产生的真菌毒素尤为严重。据文献资料，对华南、华北和华中地区的饲料厂的饲料和原料取样检测，结果显示，玉米中玉米赤霉烯酮检出率高达100％，超标率为30.8％。由此可见，真菌毒素已成为危害食品安全的重大威胁之一。

[0004] 目前，抑制农产品中真菌毒素的产生主要依赖物理处理方法，如干燥脱水，真空保藏等，但这些物理处理方法对硬件均有较高要求，成本高且不符合我国农户个体种植、贮藏方式。另一方面，粮食、饲料是人类和动物的主要食物来源，而粮食和饲料贮运期间又不宜采用化学杀菌剂，以免造成人类和动物的急性或慢性中毒。因此，采用安全、低毒的植物源真菌毒素抑制剂，则为农产品和/或饲料的贮运中抑制真菌毒素的产生提供了一种非常理想的措施。

[0005] 鉴于此，为了提供了一种安全、低毒的真菌毒素抑制剂，本发明以毛茛科植物天葵为原料，获得其提取物，这种植物源提取物可以有效地抑制粮食和饲料贮运期间真菌毒素的产生。具体而言，本发明所述的植物源真菌毒素抑制剂，其抑菌活性成分包括毛茛科植物天葵植株的提取物。需要指出的是，所述的植物源真菌毒素抑制剂可以是单一地含有所述天葵提取物；或是所述天葵提取物与助剂、载体等的混合物或组合物；或是所述天葵提取物与另外其它活性成分的组合物。

[0006] 天葵，别称紫背天葵、雷丸草、夏无踪、小乌头、老鼠屎草、旱铜钱草，拉丁学名Semiaquilegia adoxoides(DC.)Makino，是毛茛科天葵属多年生小草本植物。天葵块根，又称为天葵子，可入药，具有清热解毒、消肿止痛、利尿等作用，用于治乳腺炎、扁桃体炎、痈肿、瘰疬、小便不利等症。在本发明中，所述提取物为毛茛科植物天葵全植株的提取物。在另外的实施方式中，优选地，所述提取物以中药天葵子(毛茛科植物天葵的根)为原料的提取物。

[0007] 关于所述天葵提取物的制备方法，本发明对天葵提取物的制备方法并不做特别的限定，可以选用水浸提、有机溶剂浸提、超临界二氧化碳提取或是其它常规的方式。有机溶剂浸提可以作为获取所述天葵提取物的优选方式之一，其操作过程大致如下：粉碎干燥后的天葵植株或天葵的根，用有机溶剂浸提所得粉碎物，回收浸提液中的有机溶剂，得到所述天葵提取物的浓缩液，将所述浓缩液喷雾干燥，即得所述天葵提取物。本发明所述有机溶剂优选为甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯中的一种或是其混合物，或其它可以获得所述天葵提取物的有机溶剂。

[0008] 为了有效地抑制真菌在农产品和/或饲料的贮运中产生真菌毒素，所述植物源真菌毒素抑制剂应能与农产品和/或饲料尽可能的混合均匀，或是所述植物源真菌毒素抑制剂通过适应的实施方式均匀的分布在农产品和/或饲料中。这种适应的实施方式可以是将所述植物源真菌毒素抑制剂均匀地喷洒至农产品和/或饲料中，或是通过搅拌或翻动的方式使得农产品和/或饲料与所述植物源真菌毒素抑制剂有效地混合。鉴于此，所述天葵提取物制备成易与农产品和/或饲料混合的存在形态。这样确保天葵提取物与农产品和/或饲料充分混合，防治浸染真菌的农产品和/或饲料产生真菌毒素。还需要指出的是，本发明所述真菌毒素包括但不限于本发明提及的黄曲霉毒素、镰刀菌毒素、玉米赤霉烯酮。所述植物源真菌毒素抑制剂应理解为能够作用于(比如抑制或杀死)产生所述真菌毒素的真菌，例如本发明提及的禾谷镰刀菌。

[0009] 本发明所述农产品应具有较为广泛的含义，可以理解为来源于农业的初级产品，即在农业活动中获得的植物、动物、微生物及其产品，比如包括小麦、玉米、水稻、谷子、高粱等；或是马铃薯的块茎、红薯的块根等，或是甘蔗的种茎等。同样地，发明所述饲料也应具有较为广泛的含义，是指所有人饲养的动物的食物的总称，也可简单地理解为农业或牧业饲养的动物的食物。

[0010] 另一方面，本发明还给出了所述的植物源真菌毒素抑制剂，在抑制真菌毒素产生中的应用。具体地，所述的植物源真菌毒素抑制剂用于抑制真菌在农产品和/或饲料贮运过程中产生真菌毒素。

[0011] 作为本发明应用的一种优选方式，在所述农产品和/或饲料中混合所述天葵提取物。进一步地，以重量计，每100份所述农产品和/或饲料中，所述天葵提取物的投加量不少于0.01份。在确保人类和动物安全的前提下，本发明并不限定所述天葵提取物用量的上限。优选地，以重量计，所述天葵提取物与农产品和/或饲料的混合比例为(0.01～1):100。

[0012] 作为本发明应用的一种优选方式，所述天葵提取物用于抑制禾谷镰刀菌产生真菌毒素。所述天葵提取物与小麦、玉米、水稻、谷子、高粱等以一定比例混合后可以有效地抑制真菌毒素玉米赤霉烯酮的产生。

[0013] 本发明所述植物源真菌毒素抑制剂及其应用，至少具有下述的有益效果或优点。

[0014] (1)从抑制真菌毒素产生的方式或处理方式而言，所述植物源真菌毒素抑制剂施用于农产品和/或饲料中，即可有效地抑制浸染真菌的农产品和/或饲料产生真菌毒素，易于实施，克服了干燥脱水、真空保藏等物理处理方式对硬件均有较高要求的技术缺陷，降低了防止农产品和/或饲料中产生真菌毒素的处理成本。再者，所述植物源真菌毒素抑制剂，其抑菌活性成分包括毛茛科植物天葵植株的提取物。天葵作为抑制真菌毒素产生的植物材料，对人畜安全、环境友好，天葵子全株为自然界中的植物，因此其提取物在自然条件下易于分解，对环境和周围的生态系统安全，没有环境污染问题，具有化学杀菌剂不可比拟的优势。

[0015] (2)天葵在我国西南、华东、东北等地均有分布或栽培种植，原料来源丰富，天葵提取物获取条件温和，具有很好的市场化开发前景。

[0016] 在以下实施例中进一步描述本发明，而不以任何形式旨在限制如权利要求所表明的本发明的保护范围。

[0017] 实施例1

[0018] 本实施例以毛茛科植物天葵植株或毛茛科植物天葵的根(天葵子)为原料，制备所述天葵提取物。

[0019] (1)天葵提取物制备方式一

[0020] 称取100g晾干粉碎的天葵植株(或天葵子)置于5L提取釜，加入1.0公斤无水乙醇，浸泡提取8小时，滤出提取液，重新加入0.6公斤无水乙醇，滤出提取液，合并两次提取液，减压蒸去乙醇至浓缩液比重为0.95～1.10g/L，将浓缩液喷雾干燥，即得所述天葵提取物。

[0021] (2)天葵提取物制备方式二

[0022] 称取100g晾干粉碎的天葵植株(或天葵子)置于萃取釜中，调节压力至15～30MPa，温度40～60℃，时间2～6h。萃取完成后减压回收二氧化碳，即得所述天葵提取物。

[0023] (3)天葵提取物制备方式三

[0024] 取晾干粉碎后的天葵植株(或天葵子)于搅拌容器中，加入4～8重量倍的有机溶剂，在40～80℃恒温水浴锅中搅拌浸提2～4次，每次12～36h；分离过滤得浸提液，浸提液在真空度0.05Mpa～0.09Mpa下蒸发浓缩，回收浸提液中的有机溶剂，得到所述天葵提取物。

[0025] 实施例2

[0026] 本实施例选取小麦籽粒为供试对象，测定天葵提取物对受真菌感染的小麦籽粒产生玉米赤霉烯酮毒素的影响。

[0027] 称取小麦籽粒100g，装入克氏瓶中，高压灭菌后备用。将禾谷镰刀菌接种于4％绿豆汤，振荡培养4天。将培养液等量接入克氏瓶，再分别加入0.5g、1.0g和2.0g天葵提取物混合均匀。每处理设3个重复，另设不加药处理为空白对照。先置25℃恒温培养14天，再移至13℃恒温培养12天。取出晒干、粉碎备用。

[0028] 称取40g粉碎好的小麦，5g氯化钠，置于250mL具塞锥形瓶中，加入100mL乙腈/水(9+1，体积比)。以均质器高速匀浆提取2min，6000rpm离心10min，取上清液10mL，用纯水稀释至50mL，再取10mL稀释液转移至玉米赤霉烯酮亲合柱，用10mL纯水以1～2滴/秒的流速淋洗亲合柱2次，洗脱液弃去。再用1.5mL色谱甲醇以1滴/秒的流速淋洗亲合柱，收集淋洗液，用纯水定容至2mL，混合均匀后进液相色谱检测。

[0029] 液相色谱条件：

[0030] 色谱柱：Kromasil C18，4.6×250mm，5μm；

[0031] 流动相：乙腈+甲醇+水＝46+8+46；

[0032] 流速：0.8mL/min；

[0033] 检测器：荧光检测器，激发波长274nm，发射波长440nm；

[0034] 进样体积：25μL。

[0035] 各处理中玉米赤霉烯酮含量见表1。

[0036] 表1天葵提取物处理小麦籽粒对玉米赤霉烯酮含量的影响

[0037]

[0038] 从表1结果可以看出，在添加量为1.0g和2.0g时，小麦中玉米赤霉烯酮的含量均未检测到，说明该毒素的产生完全受到抑制，产毒抑制率为100％；在添加量为0.5g时，小麦中玉米赤霉烯酮的平均含量为0.010μg/g，产毒抑制率为98.6％。

[0039] 实施例3

[0040] 本实施例选取玉米籽粒为供试对象，测定天葵提取物对受真菌感染的玉米籽粒产生玉米赤霉烯酮毒素的影响。试验设计及玉米赤霉烯酮毒素的测定参见实施例2，各处理中玉米赤霉烯酮含量见表2。

[0041] 表2天葵提取物处理小麦籽粒对玉米赤霉烯酮含量的影响

[0042]

[0043] 从表2结果可以看出，在添加量为0.8g和1.0g时，玉米中玉米赤霉烯酮的含量均未检测到，说明该毒素的产生完全受到抑制，产毒抑制率为100％；在添加量为0.5g时，玉米中玉米赤霉烯酮的平均含量为0.018μg/g，产毒抑制率为97.8％；在添加量为0.1g时，玉米中玉米赤霉烯酮的平均含量为0.046μg/g，产毒抑制率为94.5％；在添加量为0.05g时，玉米中玉米赤霉烯酮的平均含量为0.115μg/g，产毒抑制率为86.2％；在添加量为0.01g时，玉米中玉米赤霉烯酮的平均含量为0.205μg/g，产毒抑制率为75.4％。

[0044] 实施例4

[0045] 本实施例选取饲料(豆饼)为供试对象，测定天葵提取物对受真菌感染的饲料产生玉米赤霉烯酮毒素的影响。

[0046] 称取饲料样品100g，装入克氏瓶中，高压灭菌后备用。将禾谷镰刀菌接种于4％绿豆汤，振荡培养4天。将培养液等量接入克氏瓶，再分别加入0.5g，1.0g和2.0g天葵子提取物混合均匀。每处理设3个重复，另设不加药处理为空白对照。先置25℃恒温培养14天，再移至13℃恒温培养12天。取出晒干粉碎备用。

[0047] 称取40g粉碎好的饲料，5g氯化钠，置于250mL具塞锥形瓶中，加入100mL乙腈/水(8+2，体积比)。以均质器高速匀浆提取2min，6000rpm离心10min，取上清液10mL，用pH 7.0磷酸缓冲液稀释至50mL，再取10mL稀释液转移至玉米赤霉烯酮亲合柱，用10mL纯水以1～2滴/秒的流速淋洗亲合柱2次，洗脱液弃去。再用1.5mL色谱甲醇以1滴/秒的流速淋洗亲合柱，收集淋洗液，用纯水定容至2mL，混合均匀后进液相色谱检测。

[0048] 液相色谱条件：

[0049] 色谱柱：Kromasil C18，4.6×250mm，5μm；

[0050] 流动相：乙腈+甲醇+水＝46+8+46；

[0051] 流速：0.8mL/min；

[0052] 检测器：荧光检测器，激发波长274nm，发射波长440nm；

[0053] 进样体积：25μL。

[0054] 各处理中玉米赤霉烯酮含量见表3。

[0055] 表3天葵子提取物处理饲料样品对玉米赤霉烯酮含量的影响

[0056]

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[0058] 从表2的结果可以看出，在添加量为0.5g，1.0g和2.0g时，饲料中玉米赤霉烯酮的含量均未检测到，说明该毒素的产生完全受到抑制。

[0059] 上面结合实施例对本发明做了进一步的叙述，但本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化。