海蛰毒素源杀虫剂

(一)技术领域

本发明涉及海洋生物技术领域，具体讲是一种海蜇毒素源杀虫剂，是利用 海蜇毒素作高效、低毒的生物源杀虫剂。

(二)背景技术

目前多数农药毒性高、残留高、污染重，已严重影响了农业的可持续发展， 甚至影响到人体健康。吃蔬菜农药中毒的现象时有发生，例如北京市技术监督 局曾经对蔬菜残留农药进行过检测，结果令人吃惊，合格率只有60％-80％，以 至于有人感叹，“吃蔬菜等于吃污染”。因此，开发活性高、毒性低、选择性强、 环境相容性好的生物源农药，已是迫在眉睫。另一方面，就是抗药性问题，近 几年来，由于农药的大量连续使用，许多害虫的抗药性发展迅速，如小菜蛾， 许多国家和地区已报道了小菜蛾对各种杀虫剂产生了抗药性。如DDT、有机磷、 氨基甲酸酯和拟除虫菊酯都发生了抗药性，此外，过去认为不容易产生抗药性 的微生物杀虫剂Bt，现在亦产生了抗药性。再一方面，我国海蜇资源丰富，在 海蜇大量存在时，它将干扰人们在海上的几乎所有活动，如娱乐，游泳，养渔 业，更重要的是它伤及人的身体，如果被它刺到，能产生多种症状，包括疼痛、 皮肤蛰痕、水肿、神经抑制、心跳停止、麻痹和死亡等，给人类的生活带来很 大的威胁。所以利用海蜇资源制备生物杀虫剂，利国利民。现有的海蜇毒素分 离提取技术，产率低、速度慢且生物活性极易丧失。

(三)技术内容

本发明的目的就是利用丰富的海蜇资源，提取具有生物活性的海蜇毒素蛋 白，同时制备活性高、毒性低、选择性强、环境相容性好、抗药性强的海蜇毒 素源杀虫剂。

本发明的任务是由以下技术方案完成的，研制了一种海蜇毒素源杀虫剂。从 活体海蜇触角中提取的海蜇毒素，按下列组分的重量/体积比制配：

海蜇毒素                        1-5体积份，

稳定剂                          1.5-20重量份，

磷酸缓冲液                      500-1000体积份； 将上述组分混合均匀，制配成杀虫剂。

本海蜇毒素源杀虫剂所说的海蜇毒素，其浓度为5-150mg/ml的海蜇毒素。

本海蜇毒素源杀虫剂所说的海蜇毒素，其提取工艺步骤是，

(1)将海蜇触角从活体海蜇上切除，并置于-80---20℃的低温下保存；

(2)将称量的海蜇触角均匀绞碎，细胞破碎，加入1.0--5倍的重量/体积比 的磷酸缓冲溶液中，放入4℃下，浸泡0.5-2h；

(3)在4℃下，转速13000rpm，离心20min，取上清液；残渣用1.5--3倍的 重量/体积比的磷酸缓冲溶液二次浸取，在4℃下，浸泡0.5-2h；再在4℃下， 转速13000rpm，离心20min；合并两次离心的上清液；

(4)用考马斯亮蓝法，以牛血清白蛋白为标准，测定合并的上清液中海蜇毒 素浓度；

(5)用渗透浓缩法，将(3)中的合并的上清液浓缩至所需浓度。

本海蜇毒素源杀虫剂所说的稳定剂是苯甲酸，和/或抗坏血酸(Vc)，和/或 乙二胺四乙酸二钠(EDTA)。

本海蜇毒素源杀虫剂，还可再加入表面活性剂是0.1-0.5重量份的C7-C19 醇聚氧乙烯醚。

本海蜇毒素源杀虫剂，还可再加入叶面附着增强剂是1-10体积份的壳聚 糖。

本发明的优点在于：

(1)本产品对十字花科植物的主要害虫，如小菜蛾，菜青虫等具有较强的防 治杀伤作用；

(2)本产品对人、畜无毒害；

(3)本产品对环境无污染；

(4)海蜇的剩余部分，可加工成食用海蜇；生产本产品的残渣可用来作肥料；

(5)本产品充分利用了海蜇这种丰富的海洋生物资源，使海蜇这种低值资源 获得高值化发展；

(6)在本杀虫剂的配制过程中，使用C7-C19醇聚氧乙烯醚作为表面活性剂， 它是非离子型的，泡沫少，具有降低液体表面张力的功能，使药液能均匀的施展 在页面上，且能够抑制杀虫剂主要成分蛋白质的变性。

(7)在本杀虫剂的配制过程中首次加入叶面附着增强剂壳聚糖，它能够在叶 面形成一层薄膜，有利于杀虫剂在叶面分布均匀，并能够提高杀虫剂的稳定性， 此外，壳聚糖还能够促进植物的生长发育；

(8)在本杀虫剂的配制过程中，添加了抗坏血酸，苯甲酸和EDTA，抗坏血酸 具有抗氧化性，能够防止毒素中的二硫键被氧化，与常用的抗氧化剂二巯基乙 醇相比，在实验操作过程中，它对人体无毒，苯甲酸具有防腐性，能够抑制细 菌的生长，且比较廉价，EDTA为螯合剂，海蜇毒素中含有金属蛋白酶，金属蛋 白酶会使所需的蛋白质发生降解，甚至改变蛋白质的活性，金属蛋白酶需要金 属阳离子，如Ca2+，Mg2+，Mn2+等，才能充分发挥作用，用EDTA与二价金属阳离子螯 合，可以封阻金属蛋白酶与海蜇毒素的作用，从而提高了速度、稳定性和产率。

(四)实施例

本发明的保护范围不仅局限于下列实施例中。

一、海蜇毒素提取的实施例：

(1)将一定量活体海蜇的海蜇触角用超声波破碎仪破碎，加入3.5倍的 10mM，PH6的磷酸缓冲溶液(PB)中，放入4℃下，浸泡0.5h；

(2)在4℃下，转速13000rpm，离心20min，取上清液；残渣用2.5倍的重量/ 体积比的10mM，PH6的磷酸缓冲溶液(PB)二次浸取，在4℃下，浸泡0.5h；再 在4℃下，转速13000rpm，离心20min；合并两次离心的上清液；

(3)用考马斯亮兰染色法(该法选自《蛋白质分子基础》，陶慰孙等编，高等 教育出版社)，以牛血清白蛋白为标准，测海蜇毒素在595nm处的吸光度(A595)， 根据朗伯比尔定律，进而算出上清液中海蜇毒素的浓度(Cmg/ml)。

(4)用渗透浓缩法(该法选自《蛋白质分子基础》，陶慰孙等编，高等教育出 版社)，将合并的上清液浓缩至5-150mg/ml。

表1：海蜇毒素提取的实施例  实  例  号  海蜇重  量(g)  PB的体积  (ml)  吸光度  A595 浓度 Cmg/ml 浓缩浓度 Cmg/ml 提取率 ％  1  1.666  5.79  1.05  1.20  10.80  0.41  2  1.5483  5.80  0.53  0.60  6.98  0.23  3  1.5647  5.80  0.86  0.98  9.86  0.36  4  1.5837  5.99  0.09  0.10  5.21  0.04  5  1.4796  5.79  0.51  0.58  5.89  0.23  6  1.5035  5.80  0.72  0.83  9.01  0.32  7  1.5267  5.80  0.92  1.0  10.23  0.40  8  1.6694  6.00  0.36  0.46  6.45  0.15  9  1.4898  5.81  0.65  0.74  7.84  0.29  10  1.6815  6.00  0.79  0.90  9.02  0.32  11  1.5159  5.40  1.62  1.80  18.01  0.66

二、海蜇毒素源杀虫剂的制备实施例：

将100mg/ml的海蜇毒素，壳聚糖为30％的酸溶液按表2配方制备海蜇毒素 杀虫剂。 表2：海蜇毒素源杀虫剂的配方实施例

将上述实施例中的海蜇毒素源杀虫剂，稀释500倍，进行田间药效试验，以清 水为对照，取得良好的防治效果，见表3。 表3：海蜇毒素源杀虫剂防治菜青虫田间效果调查结果