一种活蜂蜂毒采集和蜂毒重量检测的方法及装置

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一种活蜂蜂毒采集和蜂毒重量检测的方法及装置
申请号	CN201911362611.X	申请日	2019-12-26	公开(公告)号	CN110915726B	公开(公告)日	2021-09-10
申请人	杨威;			发明人	杨威;
摘要	本发明公开了一种活蜂蜂毒采集方法，包括步骤：S1制备pH值为4.5～7.0的凝胶板，所述凝胶板内的凝胶表面设有疏水弹性膜；S2利用活蜂蛰刺凝胶板，通过疏水弹性膜将蜂针留在凝胶中，持续注入蜂毒；S3蜂毒注入完成后，取下疏水弹性膜及其上的蜂针，将凝胶板密封保存。本发明还公开了活蜂蜂毒重量检测方法及装置。与现有技术相比，本发明利用凝胶封存活蜂蛰刺后的蜂毒，一方面可以用于蜂毒重量检测，另一方面可直接连同凝胶一起作为相应的蜂毒产品加工原料使用，且使用时凝胶内的蜂毒重量已经通过重量检测方法被检测获得。利用在凝胶表面设有疏水弹性膜，能够主动将活蜂蜂针留在凝胶板中并持续注入其中的蜂毒，不仅操作方便，而且蜂毒的采集更完整。
权利要求	1.一种活蜂蜂毒采集方法，其特征在于，包括以下步骤：制备pH值为4.5 7.0的凝胶板，~ 所述凝胶板内的凝胶表面设有疏水弹性膜, 疏水弹性膜经双蒸水或去离子水湿润；利用活蜂蛰刺凝胶板，通过疏水弹性膜将蜂针留在凝胶中，蜂针持续注入蜂毒；蜂毒注入完成后，取下疏水弹性膜及其上的蜂针，将凝胶板密封保存；所述凝胶板选用琼脂板、医用明胶板或固态胶原蛋白板；所述凝胶板内的固态的凝胶选用在加热到42 60℃时转变为液态的凝胶。 ~ 2.如权利要求1所述的活蜂蜂毒采集方法，其特征在于，在同一块凝胶板中用多只蜜蜂分别蛰刺。 3.如权利要求1所述的活蜂蜂毒采集方法，其特征在于，蜂针持续注入蜂毒的时间为15 35min。 ~ 4.一种活蜂蜂毒重量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：制备pH值为4.5 7.0的凝~ 胶板，称量此时凝胶板的重量为m0，在凝胶板内的凝胶表面设有疏水弹性膜，所述疏水弹性膜经双蒸水或去离子水湿润，所述凝胶板内的固态的凝胶选用在加热到42 60℃时转变为~ 液态的凝胶；利用活蜂蛰刺凝胶板，通过疏水弹性膜将蜂针留在凝胶中，持续注入蜂毒；蜂毒注入完成后，取下疏水弹性膜及其上的蜂针，称量此时凝胶板的重量为m1，将凝胶板密封保存；计算得到蜂毒重量m2为m1‑m0。 5.如权利要求4所述的活蜂蜂毒重量检测方法，其特征在于，在同一块凝胶板中用多只蜜蜂分别蛰刺。 6.如权利要求5所述的活蜂蜂毒重量检测方法，其特征在于，还包括以下步骤，在同一块凝胶板中用多个蜜蜂分别蛰刺时，得到多个蜜蜂蜂毒的总量，采用蜜蜂个数为n，则每只蜜蜂蜂毒的平均重量为m2/n。 7.一种可实现权利要求4‑6任一权利要求所述的活蜂蜂毒重量检测方法的蜂毒采集装置，其特征在于，包括凝胶板，所述凝胶板的pH值为4.5 7.0，所述凝胶表面设有疏水弹性~ 膜，所述疏水弹性膜经双蒸水或去离子水湿润，所述凝胶板内的固态的凝胶选用在加热到 42 60℃时转变为液态的凝胶。 ~ 8.如权利要求7所述的蜂毒采集装置，其特征在于，所述凝胶板为琼脂板、医用明胶板或固态胶原蛋白板。
说明书全文	一种活蜂蜂毒采集和蜂毒重量检测的方法及装置技术领域 [0001] 本发明属于蜂毒采集和检测领域，具体涉及一种蜂毒采集和蜂毒重量检测的方法及装置。背景技术 [0002] 临床上应用蜜蜂蜂毒治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎、萎缩性关节炎及畸形关节炎等多发性关节炎，有一定的疗效，且疗效随着治疗时间的推移而逐步显著。蜜蜂蜂毒还被应用于眼科、口腔科、皮肤科等许多炎症的治疗，还能有效抑制肿瘤的生长，效果明显。 [0003] 蜜蜂蜂毒是存在于蜜蜂毒囊内的毒液，蜜蜂蛰刺时蜂毒通过螯针排出体外。目前研究的蜜蜂主要包括中华蜜蜂、意大利蜜蜂、卡尼鄂拉蜜蜂及欧洲黑蜂等，其蜂毒是一种成分极为复杂的混合物，主要包括活性酶类、多肽类、胺类、糖类、酯类、氨基酸类及少量的胆碱和挥发性化合物(信息素)。 [0004] 现有的蜂毒采集方法是将蛰刺后的蜂毒留置在玻璃板上，经阴干后收集粉末。然而，蜂毒成分极为复杂，在阴干过程中，蜂毒中的部分物质会挥发和降解，导致部分有效物质丧失，因此目前药厂生产的蜂毒产品使用后临床效果并不理想，远不及直接使用活蜂蛰刺。目前国内外尚无较好的活蜂蜂毒采集方式和蜜蜂蜂毒重量检测的方法，严重制约着蜂毒应用，限制了活蜂蜂疗、蜂毒的分析研究及相关衍生物的生产等行业的发展。 [0005] 对于活体蜜蜂来说，不同的蜜蜂品种，不同的饲养环境，不同的喂饲方法，甚至通过喂饲含药物成分(比如中草药汤剂)的糖水，均能对活体蜜蜂的毒量及蜂毒活性产生影响，以致于不同种群的活体蜜蜂之间，相同日龄的平均个体的蜂毒重量存在差异。 [0006] 现有蜂毒产品的生产方法，尤其是由粉末状蜂毒原料进行生产药液或栓剂的方法，在粉末制备过程中失去了部分有效物质，且产品的组分配比是以此种粉末计算的，结果会使得蜂毒产品效果不好。不同批次生产的产品稳定性受到一定的影响即使是相同的配方，但在不同的生产工艺或生产厂家，不同的质控或出厂检测标准，均能对最终蜂毒产品的效果产生影响。现有厂家制备的一些液态的蜂毒产品，哪怕是相同容积的蜂毒液，不同厂家生产的产品在蜂毒的含量及活性上也是存在很大差异的。厂家生产的蜂毒液产品，使用注射器抽取时虽然能够知道它的容积，但因为蜂毒液中的水分极易挥发，难以对其重量进行客观的测量。 [0007] 活蜂蜂毒完整采集及通过重量检测筛选稳定质量蜂毒的蜜蜂，有利于蜂毒产品行业内相关产品效果和产品稳定性的提升。然而现有技术中并无有效的解决方式。发明内容 [0008] 为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种保存蜜蜂蜂毒物质全面、成本低、操作简单，并可在此方法基础上直接对蜂毒重量进行检测，且结果准确率高的活蜂蜂毒采集方法，具体通过以下技术方案实现： [0009] 一种活蜂蜂毒采集方法，包括以下步骤： [0010] S1制备pH值为4.5～7.0的凝胶板，所述凝胶板内的凝胶表面设有疏水弹性膜； [0011] S2利用活蜂蛰刺凝胶板，通过疏水弹性膜将蜂针留在凝胶中，持续注入蜂毒； [0012] S3蜂毒注入完成后，取下疏水弹性膜及其上的蜂针，将凝胶板密封保存。 [0013] 可选的，所述步骤S1中，凝胶板可选用琼脂板、医用明胶板或固态胶原蛋白板。采集的蜂毒可直接保存用于生产相关产品中，无需将蜂毒剥离出来即可使用。如固态胶原蛋白板可直接用于蜂毒面膜的配方中，或者固态胶原蛋白板中选用人体可吸收胶原蛋白制作，如羊肠线材质的固态胶原蛋白。此外所述凝胶使用时可连同蜂毒研磨后制成栓剂。 [0014] 可选的，所述步骤S1中，凝胶板内的固态的凝胶选用在加热到42～60℃时转变为液态的凝胶。 [0015] 可选的，所述活蜂蜂毒采集方法还包括步骤S4将凝胶板内的凝胶加热到42～60℃，凝胶由固态转变为液态后密封保存。液态的含蜂毒的凝胶可以直接作为原料使用或经加工成栓剂等类型的产品使用。 [0016] 可选的，所述步骤S1中，疏水弹性膜经双蒸水或去离子水湿润，能紧密贴合凝胶板表面。 [0017] 可选的，所述步骤S2中，可一次在同一块凝胶板中利用多只蜜蜂分别蛰刺，获得更多量的蜂毒。 [0018] 可选的，所述步骤S2中，蜂针持续注入蜂毒的时间为15～35min。由于蜜蜂蛰刺后的蜂针尾端的毒囊腺会持续运动一定时间，将蜂毒囊中的蜂毒持续注入到凝胶板中，因此将蜂针在凝胶板中停留15～35min后拔出，得到的蜂毒量更多更完整。 [0019] 可选的，所述步骤S2中，蜂针持续注入蜂毒的时间为20～30min。20min时蜂毒基本注入完毕，30分钟以后注入的蜂毒量较少，对整个蜂毒重量影响较少，且蜂针活性基本丧失，无法继续将毒囊中的蜂毒注入。 [0020] 与现有技术相比，本发明提供的活蜂蜂毒采集方法，利用凝胶封存活蜂蛰刺后的蜂毒，一方面可以用于蜂毒重量检测，另一方面可直接连同凝胶一起作为相应的蜂毒产品加工原料使用，且使用时凝胶内的蜂毒重量已经通过重量检测方法被检测获得。利用在凝胶表面设有疏水弹性膜，能够主动将活蜂蜂针留在凝胶板中并持续注入其中的蜂毒，不仅操作方便，而且蜂毒的采集更完整。凝胶板的pH值与蜂毒的pH值处于同一范围，降低蜂毒内部物质降解速率，延长蜂毒中活性物质的保存时间。 [0021] 本发明还提供了一种保留蜜蜂蜂毒物质全面、方便快捷且重量检测过后可直接作为蜂毒产品生产原料使用的活蜂蜂毒重量的检测方法，具体通过以下技术方案实现： [0022] 一种活蜂蜂毒重量检测方法，包括以下步骤： [0023] S10制备pH值为4.5～7.0的凝胶板，称量此时凝胶板的重量为m0，在凝胶板内的凝胶表面设有疏水弹性膜； [0024] S20利用活蜂蛰刺凝胶板，通过疏水弹性膜将蜂针留在凝胶中，持续注入蜂毒； [0025] S30蜂毒注入完成后，取下疏水弹性膜及其上的蜂针，称量此时凝胶板的重量为m1，将凝胶板密封保存； [0026] S40计算得到蜂毒重量m2为m1‑m0。 [0027] 可选的，所述步骤S20中，可一次在同一块凝胶板中利用多个蜜蜂分别蛰刺，获得更多量的蜂毒。多个蜜蜂蜂毒的累加，增大蜂毒相对于凝胶板的比重，降低对称量天平的要求，扩大使用范围。 [0028] 可选的，所述步骤S20中，所述多个在同一凝胶板中蛰刺的选用的蜜蜂种群、工龄、喂饲条件和喂饲药物中的一种或多种条件相同或相似。便于统计出在此限定条件下的蜜蜂蜂毒总重量，根据蜜蜂数量计算出平均每只蜜蜂蜂毒重量。 [0029] 可选的，所述步骤S10中，凝胶板可选用琼脂板、医用明胶板或固态胶原蛋白板。采集的蜂毒在称重结束后可直接保存用于生产相关产品中，无需将蜂毒剥离出来即可使用。如固态胶原蛋白板可直接用于蜂毒面膜的配方中。 [0030] 可选的，所述步骤S10中，凝胶板内的固态的凝胶选用在加热到42～60℃时转变为液态的凝胶。 [0031] 可选的，所述步骤S30中，密封保存的凝胶板经加热为液态凝胶时密封保存。 [0032] 可选的，所述步骤S10中，疏水弹性膜经双蒸水或去离子水湿润，能紧密贴合凝胶板表面。 [0033] 可选的，所述步骤S20中，可一次在同一块凝胶板中利用多只蜜蜂分别蛰刺，获得更多量的蜂毒。 [0034] 可选的，所述步骤S20中，蜂针持续注入蜂毒的时间为15～35min。 [0035] 可选的，所述步骤S20中，蜂针持续注入蜂毒的时间为20～30min。 [0036] 可选的，还包括步骤S50，当步骤S20中在同一块凝胶板中用多个蜜蜂分别蛰刺，获得更多量的蜂毒时，得到步骤S40中得到的是多个蜜蜂蜂毒的总量，采用蜜蜂个数为n，则每只蜜蜂蜂毒的平均重量为m2/n。 [0037] 与现有技术相比，本发明提供的一种活蜂蜂毒重量检测方法，利用凝胶封存活蜂蛰刺后的蜂毒，能够将蜂毒保存更完整，且可以利用蜂毒保存在凝胶板中，称量凝胶板前后质量变化获得蜂毒重量数据。此外，利用凝胶封存活蜂蛰刺后的蜂毒，在称量完成后可直接作为蜂毒产品的生产原料使用。 [0038] 本发明还公开了一种采集蜜蜂蜂毒物质全面、成本低、操作简单，并可在此方法基础上直接对蜂毒重量进行检测，且结果准确率高的装置，具体通过以下技术方案实现： [0039] 一种蜂毒采集和重量检测装置，包括凝胶板，所述凝胶板的pH值为4.5～7.0，所述凝胶表面设有疏水弹性膜。 [0040] 可选的，所述疏水弹性膜为橡胶薄膜或乳胶薄膜，其它能够实现密封凝胶表面且将蜜蜂蜂针与本体分离的薄膜均可替换。 [0041] 可选的，所述疏水弹性膜为单层或多层。 [0042] 可选的，所述疏水弹性膜经双蒸水或去离子水湿润，贴合在凝胶表面。充分利用水的界面张力，使得活蜂蛰刺时，弹性疏水膜会卡住蜂针表面的倒勾结构，使得蜂针与密封本体分离，留在琼脂板中。 [0043] 可选的，所述凝胶板为琼脂板、医用明胶板或固态胶原蛋白板中的一种。 [0044] 可选的，所述凝胶板的pH值为4.5～7.0。 [0045] 可选的，所述凝胶板中含有氯霉素，一方面有效抑制微生物的生长，延长凝胶板使用期和注有蜂毒的凝胶板的保质期，另一方面，扩大凝胶板的使用范围，可在非严格的实验室环境中使用和保存。 [0046] 可选的，所述凝胶板的直径为2～8cm。凝胶板直径的大小不同，适合的检测对象不同。如：2cm直径的凝胶板，适合测量1只活体蜜蜂或1针蜂毒液样本的重量；8cm直径的凝胶板，适合同时检测10只活体蜜蜂或10针蜂毒液样本的重量。 [0047] 使用时，将蜂毒通过微量注射器或活蜂蛰刺注入凝胶板的凝胶内即可。可根据需要检测蜂毒重量或对凝胶板内物质进行具体化或替换，以实现其他功能，如凝胶板为含红细胞的琼脂板，蜂毒注入后，产生溶血圈，孵育一段时间后可观察和比较溶血圈尺寸反映蜂毒溶血活性。 [0048] 与现有技术相比，上述蜂毒检测装置，利用凝胶板可以完全收集活蜂蜂毒，而避免在蜂毒成分挥发或降解的情况出现；可利用此装置检测蜂毒产品重量和活性，在半定量检测蜂毒产品活性时，凝胶板选用带红细胞的琼脂板即可。疏水弹性膜的设计能够保障凝胶板的湿度及酸碱度的相对恒定，并可以将蜂针留于凝胶板上。附图说明 [0049] 图1为蜜蜂蜂针的微观结构示意图； [0050] 图2为实施例所述活蜂蜂毒采集方法的流程框图； [0051] 图3为实施例所述活蜂蜂毒重量检测方法的流程框图； [0052] 图4为实施例中所述的蜂毒采集和重量检测装置的结构示意图。 [0053] 图中，附图标记为：1‑蜜蜂蜂针，2‑倒勾结构，3‑琼脂板，31‑琼脂，4‑橡胶薄膜，7‑密封盖。具体实施方式 [0054] 下面通过实施例对本发明的具体实施方式进行阐述，而本发明并不局限于以下实施例。 [0055] 实施例 [0056] 如图4所示的蜂毒采集装置，包括琼脂板3，其内设置的琼脂31，琼脂31表面设置的橡胶薄膜4，还包括用于密封琼脂板3的密封盖7。所述橡胶薄膜4经浸润去离子水或双蒸水后贴紧在琼脂31表面。所述琼脂板3采用琼脂制备，且制备过程中加入氯霉素。 [0057] 其中，琼脂板3的直径为2～8cm，琼脂的厚度为2～6mm。 [0058] 如图2、图3所示，所述或蜂蜂毒采集和重量检测装置采集蜂毒时，包括以下步骤： [0059] S1制备pH值为4.5～7.0的琼脂板3，利用电子天平称量此时琼脂板3的重量，记为m0，所述琼脂板3内的琼脂31表面设有橡胶薄膜4； [0060] S2利用活蜂蛰刺琼脂板3，通过橡胶薄膜4将蜜蜂蜂针1留在琼脂板3中，持续注入蜂毒； [0061] S3蜂毒注入完成后，称量此时琼脂板3的重量为m1，取下橡胶薄膜4及其上的蜜蜂蜂针1，将琼脂板3密封保存。 [0062] 在检测蜂毒重量过程中，还包括步骤S4计算得到蜂毒重量m2为m1‑m0。 [0063] 其中，步骤S2中，当选用活蜂的蜂毒入琼脂板3的琼脂31中时，控制活蜂尾部透过橡胶薄膜4蛰刺琼脂31，由于蜜蜂蜂针1上具有的倒勾结构2如图1所示，橡胶薄膜4会卡住蜜蜂蜂针1，使得蜜蜂蜂针1和蜜蜂本体分离，此时蜜蜂蜂针1会持续活动15～30min将毒囊中的蜂毒持续注入到琼脂31中，继续步骤S3，在蜂毒注入完成后，将橡胶薄膜4连同蜜蜂蜂针1 一同取下，将琼脂板3密封保存。采集的蜂毒可直接保存用于生产相关产品中，无需将蜂毒剥离出来即可使用。 [0064] 其中，所述步骤S1中，琼脂板3选用在加热到42～60℃时转变为液态的琼脂31配方。所述活蜂蜂毒采集方法还包括步骤S4将琼脂板3内的琼脂31加热到42～60℃，琼脂31由固态转变为液态后密封保存。液态的含蜂毒的琼脂可以直接作为原料使用或经加工成栓剂等类型的产品使用。 [0065] 在检测蜂毒重量过程中，还包括步骤S5，当步骤S2中在同一块琼脂板3中用多只蜜蜂分别蛰刺，获得更多量的蜂毒时，得到步骤S4中得到的是多只蜜蜂蜂毒的总量，采用蜜蜂个数为n，则每只蜜蜂蜂毒的平均重量为m2/n。 [0066] 由于采集方法和重量检测方法部分步骤相似，因此合并在同一个实施例中描述。 [0067] 需要说明的是，本发明所述实施例仅是本发明核心思想的体现方式之一，凡在本发明所述方法的基础上所做的等效替换或简单改进等实质相同的方案皆属于本发明保护范围。