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一种蜂毒的精制方法、注射用蜂毒制剂及其制备方法
申请号 CN202111115519.0 申请日 2021-09-23 公开(公告)号 CN113768957B 公开(公告)日 2023-07-21
申请人 华北制药华坤河北生物技术有限公司; 华北制药股份有限公司; 发明人 胡卫国; 任风芝; 赵倩; 刘建芬; 李丽红; 张雪霞; 李彦朴; 张向彬; 梁凤林; 魏松波; 王彩肖; 李美琳; 马永水; 代振冀;
摘要 本发明涉及药物制剂技术领域，具体公开一种蜂毒的精制方法、注射用蜂毒制剂及其制备方法。蜂毒粗品的精制方法包括：将蜂毒粗品加入纯化水中，分散均匀，离心，调节离心液的pH为3.0～4.0，静置1h～2h，过滤；然后调节滤液pH为4.5～5.5，过滤，得蜂毒滤液；将蜂毒滤液用截留分子量大于500Da的超滤膜进行恒容超滤，加水量为所述蜂毒滤液体积的8～10倍时，开始浓缩，待滤余液体积为所述蜂毒滤液体积的50％～60％时，停止浓缩，收集滤余液，得蜂毒超滤液；将蜂毒超滤液过滤除菌、冻干、粉碎，得精制蜂毒。将制备所得的精制蜂毒直接用于制备临床注射用冻干制剂，可显著提高蜂毒制剂的稳定性，具有广阔的应用前景。
权利要求

1.一种蜂毒的精制方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤a，将蜂毒粗品加入纯化水中，分散均匀，离心，得蜂毒离心液；所述蜂毒粗品与纯化水的质量比为1:(8 10)；

~

步骤b，调节所述蜂毒离心液的pH为3.0 4.0，静置1h 2h，过滤，得第一滤液；然后调节~ ~所述第一滤液的pH为4.5 5.5，过滤，得第二滤液；

~

步骤c，将所述第二滤液用截留分子量大于500Da的超滤膜进行恒容超滤，加水量为所述第二滤液体积的8 10倍时，开始浓缩，待滤余液体积为所述第二滤液体积的50% 60%时，~ ~停止浓缩，收集滤余液，得蜂毒超滤液；

步骤d，将所述蜂毒超滤液过滤除菌、冻干、粉碎，得精制蜂毒。

2.如权利要求1所述的蜂毒的精制方法，其特征在于，步骤c中，超滤的压力为0.4MPa~

0.8MPa。

3.如权利要求1所述的蜂毒的精制方法，其特征在于，步骤d中，所述冻干包括如下步骤：预冻阶段：将所述蜂毒超滤液降温至‑40℃ ‑45℃，保温2h 4h，抽真空至真空度为100μ~ ~bar 300μbar，进入干燥阶段；

~

干燥阶段：维持真空度为100μbar 300μbar，升温至‑20℃ ‑14℃，保温10h 16h；升温~ ~ ~至‑8℃ ‑12℃，保温4h 8h；升温至‑7℃ ‑3℃，保温3h 5h；升温至0℃ 5℃，保温3h 6h；升温~ ~ ~ ~ ~ ~至8℃ 12℃，保温3h 6h；升温至18℃ 22℃，保温3h 6h；最后升温至32℃ 38℃，保温3h 6h。

~ ~ ~ ~ ~ ~

4.如权利要求3所述的蜂毒的精制方法，其特征在于，所述干燥阶段，升温速率均为2 8~℃/30min。

5.一种注射用蜂毒制剂，其特征在于，包括权利要求1 4任一项所述的蜂毒的精制方法~制备得到的精制蜂毒。

6.如权利要求5所述的注射用蜂毒制剂，其特征在于，包括如下质量份数的原料组分：精制蜂毒1份，柠檬酸5 15份和磷酸二氢钾10 30份。

~ ~

7.权利要求6所述的注射用蜂毒制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、按照配比称取各组分，将称取的柠檬酸、磷酸二氢钾溶于注射用水中，调节pH为5 6，得柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液；

~

步骤二、将称取的精制蜂毒溶于柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液中，混合均匀，过滤除菌，冻干，得注射用蜂毒制剂。

8.如权利要求7所述的注射用蜂毒制剂的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述冻干的具体工艺包括如下步骤：预冻阶段：将过滤除菌后的溶液降温至‑40℃ ‑45℃，保温2h 4h，抽真空至真空度为50~ ~μbar 150μbar，进入干燥阶段；

~

干燥阶段：升温至‑7℃ ‑13℃，调整真空度为200μbar 300μbar，保温2h 5h；然后升温~ ~ ~至‑3℃ 3℃，保温3h 6h；升温至8℃ 12℃，保温2h 5h；最后升温至35℃ 40℃，调整真空度~ ~ ~ ~ ~为20μbar 80μbar，保温2h 5h。

~ ~

9.如权利要求8所述的注射用蜂毒制剂的制备方法，其特征在于，所述干燥阶段，升温速率均为5 15℃/30min。

~
说明书全文

一种蜂毒的精制方法、注射用蜂毒制剂及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及药物制剂技术领域，尤其涉及一种蜂毒的精制方法、注射用蜂毒制剂及其制备方法。

背景技术

[0002] 蜂毒是蜜蜂毒腺和副腺分泌的一种微黄色透明液体，由多肽类、酶类和生物胺等物质组成。蜂毒在民间用于医疗保健历史悠久，现代医学研究证实，蜂毒具有抗炎和镇痛作用，用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊椎炎等风湿性疾病、周围神经炎肌神经痛等疾病有确切的疗效。然而，蜂毒中含有的大分子量的酶类物质以及小分子量的胺类物质，容易造成过敏和刺激性疼痛等不良反应，极大地限制了蜂毒制剂在临床上的应用。注射用精制蜂毒是将全蜂毒纯化精制、冻干而制成的一种新型抗风湿药物，其优点是降低了注射用全蜂毒的过敏性、刺激性等不良反应。
[0003] 目前，常用的蜂毒精制方法主要为：将蜂毒溶于水后离心分离，向离心液中加入丙酮静置沉淀，将沉淀物用醋酸溶液溶解后采用葡聚糖凝胶层析柱进行分离纯化，向洗脱液中加入活性炭过滤，滤液冷冻干燥，即得精制蜂毒。该方法存在操作繁琐、精制蜂毒纯度较低的缺点，且由于蜂毒不稳定，由其制备成蜂毒制剂容易造成澄清度与含量不稳定、产品贮存期短等问题。因此，研发一种蜂毒的精制方法以提高蜂毒的纯度，以及研发一种贮存期长、质量稳定的蜂毒制剂，对于扩大蜂毒的临床应用具有十分重要的意义。

发明内容

[0004] 针对现有精制方法得到的蜂毒纯度较低，以及蜂毒制剂存在的稳定性较差的问题，本发明提供一种蜂毒的精制方法、注射用蜂毒制剂及其制备方法。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：
[0006] 一种蜂毒的精制方法，包括如下步骤：
[0007] 步骤a，将蜂毒粗品加入纯化水中，分散均匀，离心，得蜂毒离心液；
[0008] 步骤b，调节所述蜂毒离心液的pH为3.0～4.0，静置1h～2h，过滤，得第一滤液；然后调节所述第一滤液的pH为4.5～5.5，过滤，得第二滤液；
[0009] 步骤c，将所述第二滤液用截留分子量大于500Da的超滤膜进行恒容超滤，加水量为所述第二滤液体积的8～10倍时，开始浓缩，待滤余液体积为所述第二滤液体积的50％～60％时，停止浓缩，收集滤余液，得蜂毒超滤液；
[0010] 步骤d，将所述蜂毒超滤液过滤除菌、冻干、粉碎，得精制蜂毒。
[0011] 相对于现有技术，本发明提供的蜂毒的精制方法，通过将蜂毒粗品溶于纯化水后离心去除水不溶杂质，然后调节离心液的pH为3.0～4.0，可使蜂毒粗品中的部分杂质在此pH条件下沉淀除去，同时此pH条件还可使病毒灭活，再将pH调节为4.5～5.5，有利于提高蜂毒的稳定性；最后采用恒容超滤的方法除去离子以及组胺等小分子杂质，最终得到含量可达96％以上的精制蜂毒。
[0012] 本发明仅通过离心、调节pH以及超滤等简单工艺就可将蜂毒粗品中的致敏物质和无效杂质分离除去，实现快速、大量生产精制蜂毒产品的目的，产品纯度可达到96％以上，且制备得到的精制蜂毒产品稳定性较高，可直接用于制备临床注射用冻干制剂；除此之外，本发明提供的蜂毒的精制方法，无需丙酮静置沉淀，也无需采用葡聚糖凝胶层析柱进行分离纯化，避免了大量有机溶剂的使用，提高了精制蜂毒临床用药的安全性，且避免了有机废水的产生，更加绿色环保，生产成本低，具有极高的推广应用价值。
[0013] 优选的，步骤a中，所述蜂毒粗品与纯化水的质量比为1：8～10。
[0014] 优选的蜂毒粗品于纯化水的比例，可使蜂毒充分溶解，并尽可能多地除去水不溶性杂质，提高蜂毒的纯度。
[0015] 优选的，步骤c中，超滤的压力为0.4MPa～0.8MPa。
[0016] 优选的操作压力，既可使杂质具有较高的透过率又具有较高的膜通量，同时还可避免压力过大导致的膜污染，提高超滤效率。
[0017] 优选的，步骤d中，所述冻干的具体包括如下步骤：
[0018] 预冻阶段：将所述蜂毒超滤液降温至‑40℃～‑45℃，保温2h～4h，抽真空至真空度为100μbar～300μbar，进入干燥阶段；
[0019] 干燥阶段：维持真空度为100μbar～300μbar，升温至‑20℃～‑14℃，保温10h～16h；升温至‑8℃～‑12℃，保温4h～8h；升温至‑7℃～‑3℃，保温3h～5h；升温至0℃～5℃，保温3h～6h；升温至8℃～12℃，保温3h～6h；升温至18℃～22℃，保温3h～6h；最后升温至
32℃～38℃，保温3h～6h。
[0020] 优选的，所述干燥阶段，升温速率均为2～8℃/30min。
[0021] 将蜂毒滤液的pH调节为4.5～5.5，并配合优选的冻干工艺，可提高蜂毒在冻干过程中的稳定性，得到质量稳定的精制蜂毒。
[0022] 可选的，步骤a中，离心的转速为4000r/min～6000r/min，离心时间为15min～30min。
[0023] 优选的离心转速和离心时间，可尽量多地除去水不溶性杂质。
[0024] 可选的，步骤b中，选择1.0mol/L盐酸溶液调节所述蜂毒离心液的pH为3.0～4.0。
[0025] 优选的酸性条件，可以使病毒灭活，同时可尽可能多地使蜂毒粗品中的杂质沉淀析出。
[0026] 可选的，步骤b中，选择1.0mol/L氢氧化钠溶液溶液调节pH为4.5～5.5。
[0027] 优选的pH值有利于提高蜂毒在纯化过程的稳定性保证精制蜂毒产品的质量稳定。
[0028] 可选的，步骤b中，所述过滤采用0.45μm的滤膜。
[0029] 可选的，步骤c中，超滤于室温条件下进行。
[0030] 可选的，步骤d中，过滤除菌采用0.22μm的滤膜。
[0031] 本发明还提供了一种注射用蜂毒制剂，包括上述任一项所述的蜂毒的精制方法制备得到的精制蜂毒。
[0032] 优选的，所述注射用蜂毒制剂包括如下质量份数的原料组分：精制蜂毒1份，柠檬酸5～15份和磷酸二氢钾10～30份。
[0033] 进一步优选的，所述注射用蜂毒制剂包括如下质量份数的原料组分：精制蜂毒1份，柠檬酸10份和磷酸二氢钾25份。
[0034] 优选的配方可提高蜂毒在制备工艺中的稳定性，并有效改善了蜂毒制剂在存储过程澄清度与含量不稳定的问题，提高了蜂毒制剂产品的质量稳定性。
[0035] 本发明还提供了一种注射用蜂毒制剂的制备方法，包括如下步骤：
[0036] 按照配比称取各组分，将称取的柠檬酸、磷酸二氢钾溶于注射用水中，调节pH为5～6，得柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液；
[0037] 步骤二、将称取的精制蜂毒溶于柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液中，混合均匀，过滤除菌，冻干，得注射用蜂毒制剂。
[0038] 优选的，步骤一中，所述柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液中柠檬酸的浓度为5g/L～15g/L、磷酸二氢钾的浓度为10g/L～30g/L。
[0039] 优选的，步骤二中，所述冻干的具体工艺包括如下步骤：
[0040] 预冻阶段：将过滤除菌后的溶液降温至‑40℃～‑45℃，保温2h～4h，抽真空至真空度为50μbar～150μbar，进入干燥阶段；
[0041] 干燥阶段：升温至‑7℃～‑13℃，调整真空度为200μbar～300μbar，保温2h～5h；然后升温至‑3℃～3℃，保温3h～6h；升温至8℃～12℃，保温2h～5h；最后升温至35℃～40℃，调整真空度为20μbar～80μbar，保温2h～5h。
[0042] 优选的，所述干燥阶段，升温速率均为5～15℃/30min。
[0043] 优选的冻干工艺，有利于得到物理形态良好、表面平整、内部疏松多孔、水分含量符合要求的蜂毒冻干制剂，且可使产品复水迅速而完全，长期稳定性较好，有效提高了蜂毒制剂产品的质量稳定性。
[0044] 可选的，步骤一中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为5～6。
[0045] 可选的，选择5mL规格西林瓶进行灌装后冻干。
[0046] 可选的，所述注射用蜂毒制剂的规格为0.5mg/瓶。
[0047] 本发明制备的0.5mg小规格蜂毒冻干制剂，方便患者携带，用量控制准确，具有临床使用方便、贮存期长、质量稳定的优点。
[0048] 本发明提供的注射用蜂毒制剂的制备方法，配合特定的处方，有效改善了蜂毒制剂澄清度与含量的稳定性，提高了临床应用的安全性，适合工业化规模生产，具有广阔的应用前景。

具体实施方式

[0049] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0050] 为了更好的说明本发明，下面通过实施例做进一步的举例说明。
[0051] 本发明实施例所使用的蜂毒粗品中的蛋白含量为65.7％。
[0052] 实施例1
[0053] 本实施例提供一种蜂毒的精制方法，包括如下步骤：
[0054] 步骤a，将25g蜂毒粗品加入200g纯化水中，分散均匀，以4000r/min的转速离心30min，离心结束后取上清液，得蜂毒离心液；
[0055] 步骤b，用0.1mol/L盐酸溶液调节所述蜂毒离心液的pH为4.0，室温静置2h，过滤，得第一滤液；然后用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节所述第一滤液的pH为5.5，经0.45μm滤膜过滤，得第二滤液；
[0056] 步骤c，将所述第二滤液用分子量为1000Da的超滤膜进行恒容超滤，超滤压力为0.4MPa，加水量为所述第二滤液体积的8倍时，开始浓缩，待滤余液体积为所述第二滤液体积的50％时，停止浓缩，收集滤余液，得蜂毒超滤液；
[0057] 步骤d，将所述蜂毒超滤液经0.22μm的滤膜过滤除菌、冻干、粉碎，得精制蜂毒16.8g。
[0058] 其中，步骤d中，所述冻干的具体包括如下步骤：
[0059] 预冻阶段：将所述蜂毒超滤液降温至‑40℃，保温2.5h，抽真空至真空度为250μbar，进入干燥阶段；
[0060] 干燥阶段：维持真空度为250μbar，升温至‑15℃，保温14h；升温至‑10℃，保温5h；升温至‑5℃，保温3.5h；升温至0℃，保温4h；升温至10℃，保温4h；升温至20℃，保温4h；升温至35℃，保温4h。整个干燥阶段的升温速率均为3℃/30min。
[0061] 将本实施例制备的精制蜂毒按照国家药品标准(WS1‑XG‑016‑2001)进行质量检测，检测结果如表1所示。
[0062] 表1加速稳定性试验结果1
[0063]时间 性状 pH值 干燥失重(％) 活性(％) 含量(％)
0月 淡黄色粉末 5.4 1.3 45.9 96.5
加速3月 淡黄色粉末 5.4 1.5 44.3 94.0
加速6月 淡黄色粉末 5.5 1.6 47.6 93.9
[0064] 实施例2
[0065] 本实施例提供一种蜂毒的精制方法，包括如下步骤：
[0066] 步骤a，将25g蜂毒粗品加入225g纯化水中，分散均匀，以5000r/min的转速离心20min，离心结束后取上清液，得蜂毒离心液；
[0067] 步骤b，用0.1mol/L盐酸溶液调节所述蜂毒离心液的pH为3.5，室温静置1.5h，过滤，得第一滤液；然后用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节所述第一滤液pH的为5.0，经0.45μm滤膜过滤，得第二滤液；
[0068] 步骤c，将所述第二滤液用分子量为1000Da的超滤膜进行恒容超滤，超滤压力为0.6MPa，加水量为所述第二滤液体积的9倍时，开始浓缩，待滤余液体积为所述第二滤液体积的55％时，停止浓缩，收集滤余液，得蜂毒超滤液；
[0069] 步骤d，将所述蜂毒超滤液经0.22μm的滤膜过滤除菌、冻干、粉碎，得精制蜂毒16.7g。
[0070] 其中，步骤d中，所述冻干的具体包括如下步骤：
[0071] 预冻阶段：将所述蜂毒超滤液降温至‑42℃，保温3h，抽真空至真空度为200μbar，进入干燥阶段；
[0072] 干燥阶段：维持真空度为100μbar，升温至‑20℃，保温15h；升温至‑8℃，保温6h；升温至‑3℃，保温4h；升温至3℃，保温3h；升温至10℃，保温4h；升温至22℃，保温3h；升温至32℃，保温5h。整个干燥阶段的升温速率均为5℃/30min。
[0073] 将本实施例制备的精制蜂毒按照国家药品标准(WS1‑XG‑016‑2001)进行质量检测，检测结果如表2所示。
[0074] 表2加速稳定性试验结果2
[0075]时间 性状 pH值 干燥失重(％) 活性(％) 含量(％)
0月 淡黄色粉末 5.1 1.5 46.7 97.7
加速3月 淡黄色粉末 5.0 1.9 49.1 94.1
加速6月 淡黄色粉末 5.1 1.9 45.9 94.7
[0076] 实施例3
[0077] 本实施例提供一种蜂毒的精制方法，包括如下步骤：
[0078] 步骤a，将25g蜂毒粗品加入250g纯化水中，分散均匀，以6000r/min的转速离心15min，离心结束后取上清液，得蜂毒离心液；
[0079] 步骤b，用0.1mol/L盐酸溶液调节所述蜂毒离心液的pH为3.0，室温静置1h，过滤，得第一滤液；然后用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节所述第一滤液的pH为4.6，经0.45μm滤膜过滤，得第二滤液；
[0080] 步骤c，将所述第二滤液用分子量为500Da的超滤膜进行恒容超滤，超滤压力为0.8MPa，加水量为所述第二滤液体积的10倍时，开始浓缩，待滤余液体积为所述第二滤液体积的60％时，停止浓缩，收集滤余液，得蜂毒超滤液；
[0081] 步骤d，将所述蜂毒超滤液经0.22μm的滤膜过滤除菌、冻干、粉碎，得精制蜂毒16.1g。
[0082] 其中，步骤d中，所述冻干的具体包括如下步骤：
[0083] 预冻阶段：将所述蜂毒超滤液降温至‑45℃，保温4h，抽真空至真空度为100μbar，进入干燥阶段；
[0084] 干燥阶段：维持真空度为100μbar，升温至‑17℃，保温10h；升温至‑12℃，保温7h；升温至‑5℃，保温5h；升温至0℃，保温4h；升温至12℃，保温3h；升温至18℃，保温5h；升温至
38℃，保温3h。整个干燥阶段的升温速率均为8℃/30min。
[0085] 将本实施例制备的精制蜂毒按照国家药品标准(WS1‑XG‑016‑2001)进行质量检测，检测结果如表3所示。
[0086] 表3加速稳定性试验结果3
[0087] 时间 性状 pH值 干燥失重(％) 活性(％) 含量(％)0月 淡黄色粉末 4.6 1.8 47.9 98.5
加速3月 淡黄色粉末 4.6 2.1 50.6 96.4
加速6月 淡黄色粉末 4.7 2.2 50.1 95.9
[0088] 实施例4
[0089] 本实施例提供一种注射用蜂毒制剂，规格为0.5mg/瓶，处方如下：
[0090] 实施例1制备的精制蜂毒1g，柠檬酸9g，磷酸二氢钾18g和注射用水1000mL。
[0091] 上述注射用蜂毒制剂的制备方法如下：
[0092] 步骤一、按照配比称取各组分，将称取的柠檬酸、磷酸二氢钾溶于1000mL注射用水中，用0.1mol/L NaOH溶液调节pH为6.0，得柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液；
[0093] 步骤二、将称取的精制蜂毒溶于柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液中，混合均匀，过滤除菌，取样检测中间体，料液合格后压滤至储液罐中；
[0094] 步骤三、灌装至5mL西林瓶内，每只灌装0.5mL，冻干，得注射用蜂毒制剂。
[0095] 其中，步骤三中，冻干的具体工艺包括如下步骤：
[0096] 预冻阶段：将过滤除菌后的溶液降温至‑45℃，保温2h，抽真空至真空度为100μbar，进入干燥阶段；
[0097] 干燥阶段：升温至‑10℃，调整真空度为250μbar，保温3h；然后升温至‑1℃，保温4h；升温至10℃，保温2h；升温至40℃，保温2h，调整真空度为25μbar，维持2h。整个干燥阶段，升温速率均为8℃/30min。
[0098] 将本实施例制备的注射用蜂毒制剂按照国家药品标准(WS‑10001‑(HD‑1463)‑2003)进行质量检测，检测结果如表4所示。
[0099] 表4加速稳定性试验结果4
[0100] 时间 性状 pH值 干燥失重(％) 澄清度 标示量(％)0月 白色冻干块状物 5.9 1.4 ＜0.5 99.8
加速3月 白色冻干块状物 5.9 1.6 ＜0.5 98.9
加速6月 白色冻干块状物 5.9 1.7 ＜0.5 101.2
[0101] 实施例5
[0102] 本实施例提供一种注射用蜂毒制剂，规格为0.5mg/瓶，处方如下：
[0103] 实施例1制备的精制蜂毒1g，柠檬酸5g，磷酸二氢钾30g和注射用水1000mL。
[0104] 上述注射用蜂毒制剂的制备方法如下：
[0105] 步骤一、按照配比称取各组分，将称取的柠檬酸、磷酸二氢钾溶于1000mL注射用水中，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH为5.5，得柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液；
[0106] 步骤二、将称取的精制蜂毒溶于柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液中，混合均匀，过滤除菌，取样检测中间体，料液合格后压滤至储液罐中；
[0107] 步骤三、灌装至5mL西林瓶内，每只灌装0.5mL，冻干，得注射用蜂毒制剂。
[0108] 其中，步骤三中，冻干的具体工艺包括如下步骤：
[0109] 预冻阶段：将过滤除菌后的溶液降温至‑42℃，保温3h，抽真空至真空度为80μbar，进入干燥阶段；
[0110] 干燥阶段：升温至‑7℃，调整真空度为200μbar，保温2h；然后升温至0℃，保温5h；升温至8℃，保温3h；升温至35℃，保温3h，调整真空度为50μbar，维持3h。整个干燥阶段，升温速率均为10℃/30min。
[0111] 将本实施例制备的注射用蜂毒制剂按照国家药品标准(WS‑10001‑(HD‑1463)‑2003)进行质量检测，检测结果如表5所示。
[0112] 表5加速稳定性试验结果5
[0113]时间 性状 pH值 干燥失重(％) 澄清度 标示量(％)
0月 白色冻干块状物 5.5 1.7 ＜0.5 100.2
加速3月 白色冻干块状物 5.6 2.1 ＜0.5 100.6
加速6月 白色冻干块状物 5.5 2.2 ＜0.5 102.4
[0114] 实施例6
[0115] 本实施例提供一种注射用蜂毒制剂，规格为0.5mg/瓶，处方如下：
[0116] 实施例1制备的精制蜂毒1g，柠檬酸15g，磷酸二氢钾11g和注射用水1000mL。
[0117] 上述注射用蜂毒制剂的制备方法如下：
[0118] 步骤一、按照配比称取各组分，将称取的柠檬酸、磷酸二氢钾溶于1000mL注射用水中，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH为5.0，得柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液；
[0119] 步骤二、将称取的精制蜂毒溶于柠檬酸‑磷酸二氢钾溶液中，混合均匀，过滤除菌，取样检测中间体，料液合格后压滤至储液罐中；
[0120] 步骤三、灌装至5mL西林瓶内，每只灌装0.5mL，冻干，得注射用蜂毒制剂。
[0121] 其中，步骤三中，冻干的具体工艺包括如下步骤：
[0122] 预冻阶段：将过滤除菌后的溶液降温至‑40℃，保温4h，抽真空至真空度为150μbar，进入干燥阶段；
[0123] 干燥阶段：升温至‑12℃，调整真空度为300μbar，保温4h；然后升温至3℃，保温4h；升温至12℃，保温2h；升温至38℃，保温2h，调整真空度为40μbar，维持2h。整个干燥阶段，升温速率均为12℃/30min。
[0124] 将本实施例制备的注射用蜂毒制剂按照国家药品标准(WS‑10001‑(HD‑1463)‑2003)进行质量检测，检测结果如表6所示。
[0125] 表6加速稳定性试验结果6
[0126]时间 性状 pH值 干燥失重(％) 澄清度 标示量(％)
0月 白色冻干块状物 5.0 1.8 ＜0.5 101.5
加速3月 白色冻干块状物 4.9 1.9 ＜0.5 99.8
加速6月 白色冻干块状物 5.0 2.0 ＜0.5 102.9
[0127] 对比例1
[0128] 本对比例提供一种蜂毒的精制方法，精制步骤与实施例3完全相同，不同的仅是步骤b中，所述蜂毒离心液不调整pH，蜂毒离心液的原溶液pH为4.95，直接将蜂毒离心液进行步骤c中的超滤操作。
[0129] 将对比例1制备的精制蜂毒进行稳定性考察，按照国家药品标准(WS1‑XG‑016‑2001)进行检测，检测结果如表7所示。
[0130] 表7加速稳定性试验结果7
[0131] 时间 性状 pH值 干燥失重％) 活性(％) 含量(％)0月 淡黄色粉末 4.6 2.1 45.2 93.5
加速3月 淡黄色粉末 4.6 2.2 46.4 91.4
加速6月 淡黄色粉末 4.7 2.4 50.3 90.9
[0132] 对比例2
[0133] 本对比例提供一种注射用蜂毒制剂，其处方以及制备方法均与实施例5完全相同，不同的是将柠檬酸、磷酸二氢钾替换均为等量的甘露醇。
[0134] 将对比例2制备的注射用蜂毒制剂按照国家药品标准(WS‑10001‑(HD‑1463)‑2003)进行质量检测，检测结果如表8所示。
[0135] 表8加速稳定性试验结果8
[0136] 时间 性状 pH值 干燥失重(％) 澄清度 标示量(％)0月 白色冻干块状物 5.5 1.9 ＜0.5 99.5
加速3月 白色冻干块状物 5.6 2.2 0.5～1号 105.2
加速6月 白色冻干块状物 5.6 2.4 1～2号 108.1
[0137] 实施例4‑6采用本发明实施例2和实施例3制备的精制蜂毒，均可取得与实施例4‑6基本相当的效果。
[0138] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

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