一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法

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一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法
申请号	CN201610129419.6	申请日	2016-03-08	公开(公告)号	CN105669797B	公开(公告)日	2018-05-04
申请人	重庆科瑞制药(集团)有限公司;			发明人	刘睿斌; 刘俊敏; 周在富; 张起辉; 宋少辉; 苏其果; 蒋蒨; 林泉松; 吴华; 孙宗良; 张育珍; 郑阳;
摘要	本发明提供一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，所述方法先通过CO2超临界流体萃取对牛蒡子进行脱脂，分离得到牛蒡子油和脱脂牛蒡子粉，对脱脂牛蒡子粉进行水醇提取并浓缩得到提取浸膏，对提取浸膏进行CH2Cl2萃取并上硅胶柱色谱层析，采用二氯甲烷‑甲醇梯度洗脱，并经过薄层色谱分析、纯化得到牛蒡苷元、牛蒡酚E、牛蒡苷和牛蒡酚H。本发明采用连续式的一条路线即可完成多种产物的分离，充分利用了原料，节约了资源，脱脂过程不会污染环境，得到的牛蒡子油营养价值高，牛蒡苷元、牛蒡苷、牛蒡酚E和牛蒡酚H纯度高，可单独或与其他物质混合作为原料应用于药食领域。
权利要求	1.一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，包括如下步骤： 1）将牛蒡子粉碎后进行CO2超临界萃取脱脂5 7小时，得到牛蒡子油和脱脂牛蒡子粉； ~ CO2超临界萃取的工艺条件为，萃取压力30 MPa、萃取温度40℃、分离压力10 MPa、分离温度 40℃、二氧化碳流量500 L/h； 2）对步骤1）得到的脱脂牛蒡子粉回流提取3 4次，采用150 300目筛过滤每次提取的提~ ~取液，合并滤液并进行浓缩，得到提取浸膏；其中，提取液为质量浓度为50 95%的水醇溶液，~每次提取时所述提取液的使用质量为所述脱脂牛蒡子粉质量的5 10倍，每次提取时间为~ 0.5 2小时； ~ 3）采用CH2Cl2萃取步骤2）得到的提取浸膏2~3次，合并萃取液，得到待分离样品；其中，所述CH2Cl2与所述提取浸膏的体积质量比为2 3 mL:1 g； ~ 4）将步骤3）得到的待分离样品浓缩，加入拌样硅胶拌样，进行硅胶柱色谱层析，采用梯度洗脱模式，所述梯度洗脱使用的洗脱液依次为体积比100:0、100: 2、100: 5、100: 8、 100: 10和0:100的二氯甲烷-甲醇溶液，每个梯度洗脱5 8个保留体积，每1/3保留体积收集~为一个馏分；其中，所述硅胶柱色谱层析中拌样硅胶与待分离样品的质量比为1 2:1，填料~硅胶与拌样硅胶的质量比为5 15:1； ~ 5）对步骤4）收集得到的每一个馏分进行薄层色谱分析，用体积比为100:5的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡苷元、体积比为100:8的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡酚E、体积比为 100:10的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡苷、体积比为100:15的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡酚H，合并薄层分析结果相似的馏分，分别得到牛蒡苷元馏分、牛蒡酚E馏分、牛蒡苷馏分和牛蒡酚H馏分； 6）分别对步骤5）得到的牛蒡苷元馏分和牛蒡苷馏分进行浓缩干燥，得到牛蒡苷元纯品和牛蒡苷纯品； 7）用醇溶解步骤5）得到的牛蒡酚E馏分，并加入拌样硅胶拌样，采用中低压正相硅胶色谱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱使用的洗脱液依次为体积比100:8、100:12和0:100的石油醚-乙酸乙酯溶液，每个梯度洗脱5 8个保留体积，对每个梯度的洗脱液用体积比为100:8~的二氯甲烷-甲醇溶液作为展开剂进行薄层色谱分析，合并分析结果相似的馏分并浓缩，得到牛蒡酚E纯品；其中，所述拌样硅胶与牛蒡酚E馏分的质量比为1 2:1，所述中低压正相硅~胶色谱中填料硅胶与拌样硅胶的质量比为6 10:1； ~ 8）用醇溶解步骤5）得到的牛蒡酚H馏分，并加入拌样硅胶拌样，采用中低压正相硅胶色谱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱使用的洗脱液依次为体积比100:3、100:5和0:100的乙酸乙酯-甲醇溶液，每个梯度洗脱5 8个保留体积，对每个梯度的洗脱液用体积比为100:15的二~氯甲烷-甲醇溶液作为展开剂进行薄层色谱分析，合并分析结果相似的馏分并浓缩，得到牛蒡酚H纯品；其中，所述拌样硅胶与牛蒡酚E馏分的质量比为1 2:1，所述中低压正相硅胶色~谱中填料硅胶与拌样硅胶的质量比为10 20:1。 ~ 2.根据权利要求1所述从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，步骤1）中将牛蒡子粉碎至10目。 3.根据权利要求1所述从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，步骤4）中所述硅胶柱的径高比为1:8。 4.根据权利要求1所述从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，分别对步骤6）得到的牛蒡苷元纯品和牛蒡苷纯品进行甲醇重结晶3次，得到牛蒡苷元高纯品和牛蒡苷高纯品。 5.根据权利要求1所述从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，将步骤7）所述牛蒡酚E纯品上样高效液相色谱，采用体积比为61:39的甲醇-水溶液作为流动相，流速3.0 ml/min，检测波长280 nm，收集出峰的洗脱液，并对洗脱液进行醇重结晶，得到牛蒡酚E高纯品。 6.根据权利要求1所述从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，将步骤8）所述牛蒡酚H纯品上样高效液相色谱，以甲醇:水比40:60为流动相，流速为3.0 ml/min，检测波长280 nm，收集出峰的洗脱液，并对洗脱液进行醇重结晶，得到牛蒡酚H高纯品。
说明书全文	一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法技术领域 [0001] 本发明属于分离提取技术领域，涉及一种从牛蒡子中分离牛蒡子油及木脂类化合物的方法，具体涉及一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法。背景技术 [0002] 牛蒡子是菊科牛蒡属（Arctium lappa L.）二年生草本植物牛蒡的干燥成熟果实，其广泛分布于东亚国家，属解表药中发散风热药，具有疏散风热、宣肺透疹、消肿解毒之功效，为历版《中国药典》所收录。现代药理研究证明牛蒡子具有抗炎、抗肿瘤、降血压和调节免疫等活性，其化学成分主要含挥发油类和木脂素类，其中木脂素类成分主要包括牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E、牛蒡酚H。牛蒡子中牛蒡油、牛蒡苷元、牛蒡苷这些化学成分在治疗适应症方面有一定的区别，需要根据治疗作用选择相应的目标成分，牛蒡油主要为萜类和倍半萜类挥发油以及脂肪酸类化合物，具有较好的抗菌效果；牛蒡苷和牛蒡苷元均具有抗炎镇痛、治疗糖尿病并发症等方面的作用，但牛蒡苷和牛蒡苷元疗效上也存在略微的差异性，牛蒡苷具有良好的抗肿瘤、抗炎、镇痛的作用，牛蒡苷元具有良好的抗糖尿病血管性病变的作用。由此可见，牛蒡子提取物具有良好的药理效果，但怎么能够充分利用牛蒡子药材资源，将其中的成分逐一获得是目前牛蒡子提取分离工艺的难点。 [0003] 专利CN101278940A提供了用牛蒡苷和牛蒡苷元组成不同组合物比例治疗糖尿病性心血管病变的作用，确定了最佳的比例，但该制备方法复杂，需先用牛蒡子药材经大孔树脂获得牛蒡子苷，再又用牛蒡子药材经硅胶柱层析获得牛蒡子苷元，随后将牛蒡苷和牛蒡苷元组成不同比例的混合物进行筛选，太过于繁琐。专利 CN1323674C提供了一种用于治疗糖尿病肾病或糖尿病的牛蒡子总木脂素苷类提取物的制备方法，获得了牛蒡子总木脂素苷类物质50-90%（紫外分光光度法测定）的提取物原料，用于治疗糖尿病肾病和糖尿病，解决了糖尿病肾病或糖尿病的专用药物，但该方法中原料为总木脂素，且未有进一步提纯，未获得主要活性成分牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H，提取物中多糖等杂质也未进行分离，存在一定的不足。专利CN1000443493C提供了一种制备牛蒡苷和牛蒡苷元的制备方法，该专利采用有机溶剂脱脂、聚酰胺柱层析的方法获得了牛蒡子油，同时也获得了牛蒡苷及其苷元的混合物，但该工艺使用有机溶剂提取牛蒡子药材，有机溶剂用量大、对环境的影响也大，并且所获得的牛蒡苷、牛蒡苷元为混合物，不能根据治疗特点选用相应的化学成分组成混合物。 [0004] 因此，为进一步使中药现代化，提高木脂素类成分应用范围及应用效果，有必要对牛蒡子木脂素类成分进行单独分离，获得其主要活性成分，根据食品药品领域的需要，单独应用或分别按需求以不同比例应用，但目前并没有充分利用牛蒡子药材同时取得牛蒡油、牛蒡苷、牛蒡苷元及其它木脂素类化学成分的方法。发明内容 [0005] 针对现有技术存在的上述不足，本发明所要解决的技术问题是：如何提供一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，使其能够通过一条路线同时从牛蒡子中分离出牛蒡子油、牛蒡苷元、牛蒡苷、牛蒡酚E和牛蒡酚H，并且具有充分利用原料、分离方法简单高效、实用性好、环境污染小的特点。 [0006] 为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种从牛蒡子中分离牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，包括如下步骤： [0007] 1）将牛蒡子粉碎后进行CO2超临界萃取脱脂5~7小时，得到牛蒡子油和脱脂牛蒡子粉； [0008] 2）对步骤1）得到的脱脂牛蒡子粉回流提取3 4次，过滤每次提取的提取液，合并滤~液并进行浓缩，得到提取浸膏；其中，提取液为质量浓度为50 95%的水醇溶液，每次提取时~ 所述提取液的使用质量为所述脱脂牛蒡子粉质量的5 10倍，每次提取时间为0.5 2小时； ~ ~ [0009] 3）采用CH2Cl2萃取步骤2）得到的提取浸膏2~3次，合并萃取液，得到待分离样品；其中，所述CH2Cl2与所述提取浸膏的质量体积比为2 3 mL:1 g；~ [0010] 4）将步骤3）得到的待分离样品浓缩，加入拌样硅胶拌样，进行硅胶柱色谱层析，采用梯度洗脱模式，所述梯度洗脱使用的洗脱液依次为体积比100:0、100: 2、100: 5、100: 8、100: 10和0:100的二氯甲烷-甲醇溶液，每个梯度洗脱5 8个保留体积，每1/3保留体积收~ 集为一个馏分；其中，所述硅胶柱色谱层析中拌样硅胶与待分离样品的质量比为1 2:1，填~ 料硅胶与拌样硅胶的质量比为5 15:1； ~ [0011] 5）对步骤4）收集得到的每一个馏分进行薄层色谱分析，用体积比为100:5的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡苷元、体积比为100:8的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡酚E、体积比为100:10的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡苷、体积比为100:15的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡酚H，合并薄层分析结果相似的馏分，分别得到牛蒡苷元馏分、牛蒡酚E馏分、牛蒡苷馏分和牛蒡酚H馏分； [0012] 6）分别对步骤5）得到的牛蒡苷元馏分和牛蒡苷馏分进行浓缩干燥，得到牛蒡苷元纯品和牛蒡苷纯品； [0013] 7）用醇溶解步骤5）得到的牛蒡酚E馏分，并加入拌样硅胶拌样，采用中低压正相硅胶色谱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱使用的洗脱液依次为体积比100:8、100:12和0:100的石油醚-乙酸乙酯溶液，每个梯度洗脱5 8个保留体积，对每个梯度的洗脱液用体积比为~100:8的二氯甲烷-甲醇溶液作为展开剂进行薄层色谱分析，合并分析结果相似的馏分并浓缩，得到牛蒡酚E纯品；其中，所述拌样硅胶与牛蒡酚E馏分的质量比为1 2:1，所述中低压正~ 相硅胶色谱中填料硅胶与拌样硅胶的质量比为6 10:1； ~ [0014] 8）用醇溶解步骤5）得到的牛蒡酚H馏分，并加入拌样硅胶拌样，采用中低压正相硅胶色谱进行梯度洗脱，所述梯度洗脱使用的洗脱液依次为体积比100:3、100:5和0:100的乙酸乙酯-甲醇溶液，每个梯度洗脱5 8个保留体积，对每个梯度的洗脱液用体积比为100:15~的二氯甲烷-甲醇溶液作为展开剂进行薄层色谱分析，合并分析结果相似的馏分并浓缩，得到牛蒡酚H纯品；其中，所述拌样硅胶与牛蒡酚E馏分的质量比为1 2:1，所述中低压正相硅~ 胶色谱中填料硅胶与拌样硅胶的质量比为10 20:1。 ~ [0015] 相比现有技术，本发明具有如下有益效果： [0016] 1、本发明方法采用CO2超临界萃取法对牛蒡子进行脱脂，得到牛蒡子油，相比于现有技术来说避免了有机试剂脱脂带来的环境污染问题，更具有环境友好性，且采用CO2超临界萃取方法对牛蒡子油的萃取率更高（能够得到牛蒡子原料重量12 18%的牛蒡子油），避免~因含牛蒡子油对后续牛蒡苷、牛蒡苷元等活性成分的制备存在干扰和影响的问题，同时制得的牛蒡子油营养价值更高。 [0017] 2、本发明首次提出了采用一种连续式分离路线完成牛蒡子中多种产物的分离，结合牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的性质，通过创新性的研究得到了各产物的分离条件，分离出了品质优良的牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的高纯品，纯度均在95%以上，充分利用了原料，节约了资源，实用性强。 [0018] 3、本发明分离方法相比于现有技术分离效率更高，制得的各产品纯度高，无需进行额外的处理即可用作为相关疾病治疗药物的原料药，可以单独或与其他物质混合作为原料应用于药品食品领域，尤其是在糖尿病和糖尿病肾病领域的应用，具有更好的市场前景，产品价值高。具体实施方式 [0019] 下面结合具体实施例对本发明方法作进一步说明，但这些实施例不得理解为任何意义上的对本发明权利要求的限制。 [0020] 实施例1 牛蒡子脱脂制备牛蒡子油 [0021] 将牛蒡子粉碎成能过10目筛的粗粉，用CO2超临界萃取设备进行脱脂6小时，得到牛蒡子油和脱脂牛蒡子粉。CO2超临界萃取的工艺条件为，萃取压力30 MPa、萃取温度40℃、分离压力10 MPa、分离温度40℃、二氧化碳流量500 L/h。 [0022] 实施例2 牛蒡子油的化学成分分析 [0023] （1）牛蒡子油中挥发油成分的提取 [0024] 利用水蒸气蒸馏法提取牛蒡子油中挥发性组分，准确称取牛蒡子油35.0 g，以料液比1:5加入5%氯化钠溶液165 mL于圆底烧瓶中，加热，从冷凝管下端管口处滴下第一滴液体时开始计时，控制温度，保持微沸状态，蒸馏5 h。充分冷却后，吸取上层油状物，40 ℃水浴吹干，称重，以备GC-MS分析。 [0025] （2）牛蒡子油中脂肪酸成分的甲酯化 [0026] 由于脂肪酸成分沸点较高，现将其进行甲酯衍生化，以降低其沸点，适应GC-MS检测要求。步骤（1）牛蒡挥发油提取完成后，向烧瓶中加入25 mL正己烷，使用分液漏斗分离脂肪酸成分，准确吸取0.5 mL分离的脂肪酸成分于25 mL容量瓶中，加入2.5 mL乙醚/正己烷混合溶剂（体积比2:1）、2.5 mL甲醇溶液和2.5 mL氢氧化钾溶液（0.8 mol/L），摇匀后静置5 min，使充分反应。5 min后，加蒸馏水至容量瓶刻度，终止反应。吸取上层脂肪酸甲酯产物，45 ℃水浴吹干，称重，以备GC-MS分析。 [0027] （3）牛蒡子油成分分析 [0028] 分别对牛蒡油挥发性成分以及甲酯化衍生后的脂肪酸类化合物进行GC-MS分析。使用仪器为: Agilent 7890A/5975C型色谱-质谱联用仪。气相色谱条件: HP-Chiral 20β（25mm×0.25mm）石英毛细管柱，初始柱温设定为100 ℃，3 min 内程序升温至260 ℃，压力设定为50 kPa，He作载气，汽化室温度280℃，流量1.0 ml/min，分流比为10:1。质谱条件：加热双曲面四级杆分析器，离子源采用EI ，电子轰击能量为70 eV，加速电压3kV，分辨率500，灵敏度S/N≥400，离子源温度240 ℃，进样量0.2μl，质谱库采用NIST11。 [0029] GC-MS试验共鉴定出16种挥发油类成分，其分子式、相对丰度等信息见附录表1。由表1可知，牛蒡子挥发油成分主要包括酯、酸、醛和烯等四类成分。其中，亚油酸甲酯和油酸甲酯为主要挥发油，分别占36.02 %、21.10 %，其次是甲基环己烷，相对含量为17.57 %。另外还含有少量醇、酮、倍半萜和直链烷烃等。 [0030] [0031] 脂肪酸部分共鉴定出44种化合物，其中脂肪酸成分有19种，并用面积归一法进行了定量测定，结果见附录表2。从表2可知，牛蒡油中含有多种脂肪酸，其中亚油酸的含量最高，相对丰度高达57.25 %，其次为油酸23.96 %，棕榈酸5.24 %，硬脂酸2.39 %，其他2.49 %。不饱和脂肪酸占绝大部分，是总脂肪酸含量的86.45%。 [0032] [0033] 实施例3 牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的制备方法 [0034] （1）对实施例1得到的脱脂牛蒡子粉进行回流提取3 4次，采用150 300目筛过滤每~ ~次提取的提取液，合并滤液并进行浓缩，得到提取浸膏；其中，提取液为质量浓度为95%的水醇溶液，每次提取时所述水醇溶液的使用质量为所述脱脂牛蒡子粉的10倍，每次提取时间为2小时； [0035] （2）向1 kg步骤（1）得到的牛蒡子醇浓缩液提取浸膏中加入CH2Cl（2 2.0 L）萃取3次，收集萃取液，减压浓缩，得CH2Cl2粗提物浸膏（450.0 g）。 [0036] （3）向CH2Cl2粗提物浸膏中加入拌样硅胶拌样，进行硅胶柱色谱层析，利用二氯甲烷-甲醇系统对牛蒡子CH2Cl2粗提物进行硅胶柱层析（硅胶柱的径高比为1:8）分离，用二氯甲烷:甲醇（100:0, 100:2, 100:5, 100:8, 100:10, 0:100）梯度洗脱，每个梯度洗脱5 8~个保留体积，每1/3保留体积收集为一个馏分；其中，所述硅胶柱色谱层析中拌样硅胶与待分离样品的质量比为1:1，填料硅胶与拌样硅胶的质量比为5:1； [0037] 对收集得到的每一个馏分进行薄层色谱分析，用体积比为100:5的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡苷元、体积比为100:8的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡酚E、体积比为100:10的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡苷、体积比为100:15的二氯甲烷-甲醇展开剂检测牛蒡酚H，合并薄层分析结果相似的馏分，结果显示牛蒡苷元集中在二氯甲烷:甲醇=100:2梯度、牛蒡酚E集中在二氯甲烷:甲醇=100:5梯度、牛蒡苷集中在二氯甲烷:甲醇=100:8梯度、牛蒡酚H集中在二氯甲烷:甲醇=100:10梯度，分别得到牛蒡苷元馏分、牛蒡酚E馏分、牛蒡苷馏分和牛蒡酚H馏分； [0038] （4）在100:2洗脱梯度获得牛蒡苷元馏分，将牛蒡苷元馏分浓缩至40g放置10h后，有白色无定型粉末析出，得到牛蒡苷元纯品，纯度68.5%，收率63%（实际制备量和理论计算量之比，下同）；再用甲醇重结晶牛蒡苷元纯品3次，得白色粉末状晶体，为牛蒡苷元高纯品，收率38.5%，纯度97.5%； [0039] （5）在100:5洗脱梯度获得牛蒡酚E粗品76.5 g，用甲醇溶解至形成真溶液，1倍硅胶拌样，采用中低压正相硅胶制备色谱进行分离，填料硅胶600 g。使用石油醚:乙酸乙酯（100:8, 100:12, 0:100）梯度洗脱，每个梯度洗脱5～8个保留体积，对每个梯度的洗脱液用体积比为100:8的二氯甲烷-甲醇溶液作为展开剂进行薄层色谱分析，合并分析结果相似的馏分并浓缩，得到牛蒡酚E纯品，经分析，牛蒡酚E主要集中在石油醚:乙酸乙酯=100:12梯度，纯度55.1%，收率60.3%，得牛蒡酚E纯品；进一步对上述牛蒡酚E纯品进行高效液相制备，以甲醇:水（61:39）为流动相，流速3.0 ml/min，检测波长280 nm，收集出峰的洗脱液，并对洗脱液进行甲醇重结晶，最后分得牛蒡酚E高纯品，纯度98.5%，收率45.5%； [0040] （6）在100:8洗脱梯度获得牛蒡苷馏分，放置4 h后，有白色针晶析出，静置12-24h，得到牛蒡苷纯品，纯度为82.5%，收率74.5%；进一步对牛蒡苷纯品进行甲醇重结晶3次，得白色粉末状晶体，牛蒡苷高纯品，纯度98.3%，收率58.5%； [0041] （7）在100:10洗脱梯度获得牛蒡酚H粗品5.3 g，用甲醇溶解至形成真溶液后，1倍硅胶拌样，采用中低压正相硅胶制备色谱进行分离，填料硅胶110.0 g，乙酸乙酯:甲醇（100:3, 100:5, 0:100）梯度洗脱，每个梯度洗脱5～8个保留体积，对每个梯度的洗脱液用体积比为100:15的二氯甲烷-甲醇溶液作为展开剂进行薄层色谱分析，合并分析结果相似的馏分并浓缩，得到牛蒡酚H纯品，牛蒡酚H主要富集在乙酸乙酯:甲醇=100:5梯度，纯度51.2%，收率55.3%。进一步对牛蒡酚H纯品再进行高效液相色制备，以甲醇:水（40:60）为流动相，流速为3.0 ml/min，检测波长280 nm，并进行甲醇重结晶，最后分离得牛蒡酚H高纯品，纯度98.6%，收率43.5%。 [0042] 实施例4 牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的结构鉴定 [0043] 用UV、IR、NMR、MS等波谱分析方法对实施例3中制备得到的木脂素类成分进行结构鉴定。 [0044] （1）牛蒡苷的结构鉴定 [0045] 白色无定型粉末，C27H34O11，ESI-MS m/z: 557 [ M + Na]+。易溶于二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯等有机溶剂，难溶于水。UV光谱显示在210 nm和280 nm处有强吸收，表明此化合物含有芳香环。IR图谱中存在3350 cm-1（νOH峰）、3000 cm-1（苯环ν=CH峰）、1750 cm-1（酯羰基νC=O峰）、1650-1450 cm-1（苯环骨架振动νC=C峰）等特征峰，表明该化合物结构中存在芳环和羰基。分析1H-NMR（400MHz，CD3OD）和13C-NMR（100MHz，CD3OD）数据，参比文献报道，同时与标品共薄层比对，鉴定该化合物为牛蒡苷（arctiin）。 [0046] （2）牛蒡苷元的结构鉴定 [0047] 白色无定型粉末，C21H24O6，ESI-MS m/z: 395 [ M + Na]+。易溶于二氯甲烷、乙酸乙酯等有机溶剂，难溶于水。UV光谱显示在210 nm和280 nm处有强吸收，表明此化合物含有-1 -1 -1芳香环。IR图谱中存在3350 cm（νOH峰）、3000 cm （苯环ν=CH峰）、1750 cm（酯羰基νC=O峰）、1650-1450 cm-1（苯环骨架振动νC=C峰）等特征峰，表明该化合物结构中存在芳环和羰基。分析1H-NMR（400MHz，CD3OD）和13C-NMR（100MHz，CD3OD）数据，参比文献报道，同时与标品共薄层比对，鉴定该化合物为牛蒡苷元（Arctigenin）。 [0048] （3）牛蒡酚E的结构鉴定 [0049] 白色无定型粉末，C30H34O10，ESI-MS m/z: 577[ M+Na]+。易溶于甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯等有机溶剂，难溶于水。UV光谱显示在210 nm和280 nm处有强吸收，表明其含有芳香环。且IR图谱中存在3350cm-1（νOH峰）、3000cm-1（苯环ν=CH峰）1750cm-1（酯羰基νC=O峰）、~1650-1450cm-1（苯环骨架振动νC=C峰）等特征峰，表明该化合物结构中存在芳环和羰基。该化合物的1H-NMR（400MHz， CDCl3）、13C-NMR（100MHz，CDCl3）结果也鉴定此化合物为牛蒡酚E（lappaol E）。 [0050] （4）牛蒡酚H的结构鉴定 [0051] 白色无定型粉末，C40H46O14，ESI-MS: m/z: 773 [ M+Na]+。易溶于甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯等有机溶剂，难溶于水。UV光谱显示在210 nm和280 nm处有强吸收，表明其含有芳-1 -1 -1香环。且IR图谱中存在3350 cm（νOH峰）、3000 cm（苯环ν=CH峰）1750 cm（酯羰基νC=O~ 峰）、1650-1450 cm-1（苯环骨架振动νC=C峰）等特征峰，表明这个化合物结构中存在芳环和羰基。该化合物的1H-NMR（400MHz，CD3OD）、13C-NMR（100MHz，CD3OD）结果也鉴定此化合物为牛蒡酚H（lappaol H）。 [0052] 本发明的上述实施例仅仅是为说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化和变动。凡是属于本发明的技术方案所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。