用于刺激公牛生殖能力的方法和用于刺激公牛生殖能力的组合物

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用于刺激公牛生殖能力的方法和用于刺激公牛生殖能力的组合物
申请号	CN201180017464.8	申请日	2011-03-28	公开(公告)号	CN102939057A	公开(公告)日	2013-02-20
申请人	国家农艺研究院; 动物繁殖和人工授精农业合作社全国联盟;			发明人	帕特里夏·勒梅卢尔; 克里斯特勒·勒当维克; 帕特里斯·安布洛; 菲利普·舍米诺; 克里斯蒂娜·布里昂; 奥利维尔·热拉尔;
摘要	本发明涉及包含至少一种母牛发情特异性挥发性分子的组合物用以改善公牛生殖功能的用途。特别地，根据本发明的组合物使得不仅能够作用于公牛的性欲，还能够作用于公牛的精液产生。优选地，所使用的组合物包含至少一种选自以下的分子：香豆素、角鲨烯、6-氨基十一烷、2-丁酮、9-十八烯酸和1，2-二氯乙烯。
权利要求	1.包含至少一种母牛发情特异性挥发性分子的组合物用以改善公牛生殖功能的用途，其特征在于所述分子选自：香豆素、角鲨烯、6-氨基十一烷、2-丁酮、9-十八烯酸和1，2-二氯乙烯。 2.根据权利要求1所述的组合物用途，其用以改善公牛的性欲。 3.根据权利要求1所述的组合物用途，其用以改善公牛的精液产生。 4.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其特征在于所述组合物以至少包含作为挥发性分子溶剂之甘油的溶液形式提供。 5.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其特征在于所述组合物中发情特异性挥发性分子的总浓度为5pg/mL至100pg/mL。 6.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其特征在于所述组合物中发情特异性挥发性分子的总浓度为2.5pg/mL至5pg/mL。 7.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其特征在于所述组合物中发情特异性挥发性分子的总浓度为100pg/mL至500pg/mL。 8.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其特征在于所述组合物中发情特异性挥发性分子的浓度至少等于25pg/mL，+/-5％。 9.根据权利要求1至8中任一项所述的用途，其特征在于使所述组合物保持在公牛鼻孔的周围从而使所述公牛能吸入所述组合物。 10.根据权利要求1至9中任一项所述的用途，其特征在于所述组合物以喷雾的形式提供从而能被喷至公牛的鼻孔中。 11.根据权利要求1至10中任一项所述的用途，其特征在于将所述组合物提供给公牛后直接进行与雌性交配或采集精液。 12.根据权利要求1至11中任一项所述的用途，其特征在于每次精液采集之前或每次交配之前将所述组合物提供给公牛。 13.设计用于公牛以改善其生殖功能的组合物，其特征在于所述组合物包含至少一种选自以下的母牛发情特异性挥发性分子：香豆素、角鲨烯、6-氨基十一烷、2-丁酮、9-十八烯酸和1，2-二氯乙烯。 14.根据权利要求13所述的组合物，其特征在于所述组合物包含甘油作为所述挥发性分子的溶剂。 15.根据权利要求13或14中任一项所述的组合物，其特征在于所述组合物包含使所述组合物能够喷雾所需的赋形剂。 16.根据权利要求13至15中任一项所述的组合物，其特征在于所述母牛发情特异性挥发性分子的总浓度为5pg/mL至100pg/mL。 17.根据权利要求13至15中任一项所述的组合物，其特征在于所述母牛发情特异性挥发性分子的总浓度为2.5pg/mL至5pg/mL。 18.根据权利要求13至15中任一项所述的组合物，其特征在于所述母牛发情特异性挥发性分子的总浓度为100pg/mL至500pg/mL。 19.根据权利要求13至16中任一项所述的组合物，其特征在于所述母牛发情特异性挥发性分子的浓度至少等于25pg/mL，+/-5％。
说明书全文	用于刺激公牛生殖能力的方法和用于刺激公牛生殖能力的组合物技术领域 [0001] 本发明涉及用于刺激公牛生殖能力的方法。更特别地，本发明的方法使得能够刺激公牛的性功能(尤其是性欲)，还能够改善精液的质量。本发明还涉及为了在刺激生殖能力方面用于公牛的组合物。 [0002] 本发明可用于牛饲养领域，特别是用于从公牛中采集精液以及直接或人工使母牛受精。背景技术 [0003] 现有研究表明，母牛的发情期(对应于雌性接受雄性并可受精的时期)特别短，只有约6至12小时。在发情期，母牛分泌挥发性的性信息素告知能够与其交配的雄性。因此，已对牛进行了数个研究以确认这个假说。这些研究已使得能够确认在数种分泌物中(尤其在阴道分泌物和尿液中)存在此类分子并且它们作用于雄性的裂唇嗅表现(Flehmen)。这些分子被雄性察觉到并使它们能在发情期中辨认雌性。 [0004] 目前，最经常根据与繁育目的相关的特定特征对牛进行选择。因此，根据其哺乳能力选择乳用品种的母牛，以确保在质量和数量方面恒定的牛奶生产。类似地，根据其肉的数量、营养、味道等性质选择肉用品种；根据与后代最终使用目的有关的特定标准来选择公牛和母牛二者。 [0005] 在精液生产中心采集公牛精液是一项精细的操作，其必须严格进行，这不仅对于采集本身(尤其是防止污染)而言，而且在采集前后处理公牛时亦如此。 [0006] 目前，不可能开发出一种对所有畜牧场的公牛来说通用的方案，从而确保在所有畜牧场的个体中几乎一致的采集。实际上，对于不同个体之间，以及对于单个个体不同时刻之间，同一畜牧场的个体可具有不同的性欲。 [0007] 迄今为止，还没有有效的方法来刺激在受精中心或畜牧场中所用公牛的性功能以及更特别地促进其性欲。然而，性欲问题在公牛中极其常见并且对于精液选择中心而言是不利的。它们可导致一定程度的经济损失(药剂损失、显著的时间损失、牲畜商人的风险)。因此，对于牲畜商人而言预测采集的时间和条件是很困难的。 [0008] 类似地，对于不同个体之间，以及对于单个个体不同时刻之间，精液的质量和数量都有波动。迄今为止，考虑到每个个体的行为，除了个体化的采集管理，还没有有效的方法来改善公牛的精液产生。发明内容 [0009] 本发明的目的在于克服上述全部或部分问题。特别地，本发明的一个目的是改善公牛的生殖能力以采集其精液用于随后的受精和/或在发情期与雌性交配。“生殖能力”意指行为能力，尤其是性欲；和/或生理能力，尤其是精液的质量和/或数量。 [0010] 为了实现该目的，本发明提出在采集公牛的精液前或将公牛提供给母牛进行繁殖前使用某些分子(最初分离自发情期母牛的某些分泌物，尤其是尿液)给予公牛。特别地，本发明人鉴定了对公牛生殖能力具有影响的6种发情期特异性分子，即香豆素、角鲨烯、6-氨基十一烷、2-丁酮、9-十八烯酸和1，2-二氯乙烯。这些分子可分离自发情期母牛的分泌物或通过任何其他方法获得(尤其是化学合成)。另外，这些分子中的一些已经在市场上销售。 [0011] 本发明的分子既是触发信息素(releaser pheromone，即作用于行为的信息素)也是启动信息素(primer pheromone，即作用于生理的信息素)。更特别地，吸入这些分子能够使得减少爬跨前和射精前的时间和/或增加精液中精子的浓度。 [0012] 由这些构成的用途使得在等同的采集环境管理中增加所有个体的精液产生并且对处理/个体相互作用的影响可忽略。尤其对于具有高遗传价值的个体而言，这一精液产生的改善在经济方面非常诱人。另外，在幼畜中获得类似效果非常吸引人，特别是在基因组选择的背景中(其中寻找具有最佳繁殖表现的此类个体以加快遗传进程)。 [0013] 更特别地，本发明提出使用在溶液中的这些分子，其能够向待处理的公牛的鼻孔中进行喷雾。实际上，用这种方法使该分子直接与靶标接触并且降低了这些非常具有挥发性的分子消散在空气中的风险。另外，通过这种施用方法模式使得每个个体吸入的信息素的数量可以是精确的剂量。附图说明 [0014] 图1显示了发情周期中母牛尿液的化学组成的比较色谱图谱； [0015] 图2A至2F显示了与NIST数据库的光谱(b)相比的在母牛尿液和阴道粘液中根据本发明鉴定之6种发情前和发情期特异性化合物的实验离子光谱(a)； [0016] 图3A至3C显示了根据本发明处理之第一实施例对性欲(图3A)、精液的精子浓度(十亿个精子/mL)(图3B)和每次射精的精子总数(十亿个)(图3C)的影响； [0017] 图4A和4B显示了根据本发明处理之第一实施例对具有标准性欲的公牛组精液的影响(精子浓度：图4A；精子总数：图4B)； [0018] 图5显示了根据本发明处理之第一实施例对具有低初始性欲的公牛组性欲的影响； [0019] 图6A和6B显示了，根据公牛的初始性欲，根据本发明处理之第二实施例对其性欲(图6A)和精液(图6B)影响。 [0020] 发明详述 [0021] 本发明人鉴定出对公牛的生殖功能具有有益作用的挥发性分子，特别是在发情期母牛的一些分泌物中所存在的挥发性分子，这是因为它们能够改善和/或引起公牛的性欲，和/或改善所产生精液的质量和/或数量。 [0022] 根据本发明，公牛的性行为或性欲涉及反应时间、性准备时间和射精时间。根据本发明，反应时间被定义为将公牛带至离试情畜(teaser)约1.5m处的时间与第一次假爬跨之间的间隔。性准备时间对应于由Amann(1976)提出的准备，即假爬跨，然后积极等待2分钟，之后以公牛的节律假爬跨两次，最后在没有进一步等待的情况下爬跨从而导致射精。积极等待被定义为公牛保持与试情畜接触，两只动物并排。射精时间等于反应时间和性准备时间之和。 [0023] 因此，本发明的目的是包含至少一种母牛发情特异性挥发性分子的组合物用于改善公牛生殖功能的用途。 [0024] “母牛”意指生殖年龄的雌性牛物种，即通常来说超过18月龄。类似地，“公牛”意指生殖年龄的非阉割雄性牛物种。 [0025] 发情期对应于发情周期的时间段，也称作“动情”，在其过程中雌性发生排卵并接受交配。发情期之前是发情前期，之后是发情后期。 [0026] “生殖功能”意指导致产生精液的行为和生理过程。根据本发明，改善生殖功能可由改善性欲(即改善导致精液产生的行为)、改善精液本身或其两者组成。 [0027] “改善”意指无论通过减少公牛产生精液所需的时间和/或通过提高精液本身内在质量，所述公牛的生殖能力提高。特别地，可通过增加所产生的体积、增加在所述体积中的精子浓度、增加有活力精子的数目等来改善精液的质量。 [0028] 根据本发明，这个组合物的用途使得能够改善经处理公牛的精液采集的表现或者在经处理公牛与发情母牛交配后增加获得受精的机会。 [0029] 优选地，在所使用的组合物中，至少一种母牛发情期特异性挥发性分子选自香豆素、角鲨烯、6-氨基十一烷、2-丁酮、9-十八烯酸和1，2-二氯乙烯。有利地，所述组合物包含至少香豆素和角鲨烯的混合物。 [0030] 在施用本发明的另一些优选模式中，所述组合物包含至少角鲨烯和1，2-二氯乙烯的混合物。两种或更多种上述母牛发情期特异性挥发性分子的任何组合也在本发明的范围内。 [0031] 有利地，本发明的组合物以包含甘油作为挥发性分子溶剂的溶液形式存在。 [0032] 优选地，发情期特异性的挥发性分子的总浓度为2.5pg/mL至500pg/mL。特别地，5pg/mL至100pg/mL或2.5pg/mL至5pg/mL或100pg/mL至500pg/mL。“总浓度”意指用以产生该组合物的每种发情期特异性挥发性分子的浓度之和。甚至更优选地，组合物中发情特异性挥发性分子的浓度至少等于25pg/mL，+/-5％。 [0033] 在本发明的另一些优选实施方案中，组合物中所包含的每种母牛发情期特异性挥发性分子的浓度大于或等于2.5pg/mL。 [0034] 根据本发明组合物用途的实施例，可将所述组合物保持在公牛鼻孔周围，从而使所述公牛可吸入所述组合物。 [0035] 优选地，所述组合物以喷雾形式存在，因此其可被直接喷在公牛的鼻孔中。 [0036] 根据本发明，有利地，可使用的组合物立即生效。换言之，组合物作用没有延迟期，以及与雌性交配或采集精液可在将所述组合物给予公牛后直接进行。 [0037] 有利地，在每次精液采集之前或每次与母牛交配之前将所述组合物给予公牛。 [0038] 本发明还涉及设计用于公牛以改善其生殖功能的组合物，其特征在于该组合物包含至少一种母牛发情特异性的挥发性分子。 [0039] 有利地，在组合物中至少一种母牛发情特异性挥发性分子选自香豆素、角鲨烯、6-氨基十一烷、2-丁酮、9-十八烯酸和1，2-二氯乙烯。 [0040] 在本发明的另一些优选实施方案中，所述组合物包含至少角鲨烯和1，2-二氯乙烯的混合物。两种或更多种上述母牛发情期特异性挥发性分子的任何组合也在本发明的范围内。 [0041] 所述组合物可以以优选地包含甘油作为挥发性分子溶剂的溶液形式存在。实际上，甘油对动物无害并且不会对公牛的生殖功能产生作用。当然，可使用能够稀释本发明分子并且在对公牛没有风险的情况下能够使用的任何其他溶剂或赋形剂。 [0042] 优选地，所述溶液包含使其能够喷雾所必需的赋形剂。 [0043] 根据本发明，有利地，所述溶液具有发情期特异性挥发性分子的总浓度为2.5pg/mL至500pg/mL。特别地，5pg/mL至100pg/mL或2.5pg/mL至5pg/mL或100pg/mL至500pg/mL。甚至更优选地，所述组合物中发情特异性挥发性分子的浓度至少等于25pg/mL，+/-5％。 [0044] 在本发明的另一些优选实施方案中，组合物中所包含的每种母牛发情期特异性挥发性分子的浓度大于或等于2.5pg/mL。 [0045] 实验 [0046] I- 材料与方法 [0047] 1- 生物样品的采集(尿液和阴道粘液) [0048] 为了鉴定公牛察觉发情中所涉及的化合物，对改良的母牛或小母牛进行数次尿液和阴道粘液采集。 [0049] 在第一步骤中，对Prim′荷斯坦(Holstein)品种的改良母牛进行两个系列的采集。 [0050] 在周期中的三个阶段，即发情前期(PGF2α后，D+1)、发情(PGF2α后，D+2)和黄体期(PGF2α后，D+7)，在自然排尿的时候，从通过用前列腺素(PGF2α)处理而同步的动物采集尿液。通过每日观察动物和测量血浆黄体酮水平，从而在这些采集期间监测该周期，以便较好地确定发情的时间。 [0051] 当出现阴道粘液时，在阴道周围区域通过用纱布擦拭来采集阴道粘液。 [0052] 另外对处于第一发情周期中的18个月小母牛进行采集。在自然周期期间，在发情前期(发情前D-3至D-1)、发情和黄体(D+10)期中采集尿液样品。通过在超过36个月的时间里每天5次15分钟目视观察来仔细监测行为，从而确定阶段。这些与超声扫描相结合(一周3次)以监测卵泡成熟。 [0053] 如下所述进行3种其他的采集过程： [0054] 在它们的周期中通过间隔10天两次注射前列腺素(PGF2a)并且第二次注射是在第一次采集当天(D0)来使6至8头母牛(荷斯坦牛和蒙贝利亚牛(Montbeliard))同步。除了目视和行为观察之外，测量血浆激素水平以确定排卵时间。因此，在第二次注射前列腺素之后的一周里，每6小时取血液样品以测量促黄体生成激素(LH)和雌二醇(E2)的水平。每24小时测量黄体酮(P4)水平。将来自每个血液样品的血清贮存在-80℃直到测量黄体酮(ovucheck plasma试剂盒，Biovet)、促黄体生成激素(LH DETECT试剂盒，INRA，Nouzilly)和雌二醇的水平。此外，在所述一次采集期间，通过每天2次超声扫描监测卵泡发育。 [0055] 一天2至3次(取决于动物)在自发排尿期间采集尿液。在采集时，将尿液分装在4个用特氟龙塞子(Supelco)密封的4ml玻璃管中。 [0056] 宫颈粘液(发情状态特异性的生物流体)也被采集在由特氟龙塞子(Supelco)密封的20ml玻璃瓶中。 [0057] 在所有情形中，在采集后将所采集的样品贮存在4℃，在4小时内将该样品贮存在-80℃直到进行分析。 [0058] 2- 取样的生物流体的化学组成分析 [0059] 2-1- 用有机溶剂提取 [0060] 用有机溶剂对在冰上解冻的4mL尿液或阴道粘液进行化学提取(体积-体积)。 [0061] 测试了数种溶剂(二氯甲烷(DCM)、戊烷、己烷)。选择DCM，其显示出对所分析的第一样品具有提取大量化合物的能力。提取在用特氟龙螺帽(Supelco)密封的玻璃管中进行，以尽可能减少塑料残余物(邻苯二甲酸盐/酯)的污染。 [0062] 快速涡旋混匀后，样品在环境温度下沉降10分钟，然后以2500rpm离心20分钟。离心后，有机相经硫酸钠柱(FLUKA)进行干燥，然后在氮气流下浓缩100倍，之后在-20℃下贮存直到分析(提取后2周内)。 [0063] 2-2- 通过GC/MS鉴定化合物 [0064] 利用由与四极杆质谱仪(DSQII，Thermo Scientific)偶联之Focus GC组成的FOCUS/DSQII(Thermo Scientific)设备，通过气相色谱法和质谱法联用(GC-MS)，对化学提取物进行分析。 [0065] 在分析期间(在3年内进行)，使用5种不同的柱以分离所提取的化合物：CP-sil5 CB low Bleed/MS 60m×0.25μm ID×0.25μm(SUPELCO)；a TR-1MS 30m×0.25mm ID×0.25μm(Thermo)； [0066] 1MS-SolGel 30m×0.25μm ID×0.25μm(SGE) ；TR-1MS30m×0.25ID×0.25m(Thermo)；TR-1MS 30m×0.25ID×0.25m(Thermo)；和 Equity5 30m×0.25μm ID×0.25μm(SUPELCO)。 [0067] 以不分流模式(30秒)将2μl等份提取物在260℃下注入注射器中。 [0068] 所使用的分析程序如下：30℃进行4分钟，然后以5℃/分钟升至280℃并且在280℃恒温进行10分钟。 [0069] 在70eV和源温度为180℃下通过电子轰击获得进入质谱仪的分子的离子化。 [0070] 通过将所获得的实验离子光谱与NIST光谱数据库比较来鉴定目的化合物。 [0071] 所述分析关注动物发情周期期间以及更特别地发情前期阶段和发情阶段期间发生变化的分子。 [0072] 图1示出如何鉴定目的分子。通过时间标度在色谱图的右侧显示了周期的不同阶段。五角星表明排卵时间。其上有星号的峰对应于对该阶段非特异性的化合物，这是因为它们在其他动物发情后期阶段也有发现；因此不选择这些。其上有箭头的峰对应于大多数动物的发情前期/发情期阶段特异性化合物，无沦化合物被鉴定出(例如，图1中的香豆素)还是未被鉴定出(例如，图1中其上标有“NI”的峰)。 [0073] II- 结果 [0074] 1- 分子的鉴定 [0075] 约10种分子被鉴定为潜在的发情标志物，这是由于它们存在于大多数母牛的发情前期和/或发情期阶段。 [0076] 通过将这些分子的离子光谱(实验的)与NIST光谱数据库中的那些进行比较，鉴定出其中的6种：香豆素、6-氨基十一烷、1，2-二氯乙烯、角鲨烯、2-丁酮和9-十八烯酸。图2A、2B、2C、2D、2E和2F将这些分子的实验离子光谱(a)与NIST数据库的光谱(b)进行了比较。 [0077] 因此，在6头母牛中的5头中，在发情前期和/或发情期阶段中，香豆素存在于第二次采集的母牛尿液中。在该采集物中，它与其他分子被一起鉴定，但是目前未鉴定出所有的分子。然而，可在所分析的6头母牛中5头的发情前期中以及它们中2头的发情期中鉴定出6-氨基十一烷。香豆素还在第一次采集中一头母牛的发情期被发现。 [0078] 在所研究的母牛中一半的发情前期和8头母牛中3头的发情期中进行的第三次采集的分析中鉴定出了1，2-二氯乙烯。还在第一发情期间的小母牛尿液中检测到了该化合物的存在。 [0079] 不论是哪一次采集，角鲨烯是经鉴定的在发情前期/发情期阶段中最常发现的分子。令人感兴趣的是，在如上定义的阶段中的尿液中以及在阴道粘液(母牛发情特异性生物流体)中都观测到该分子。 [0080] 9-十八烯酸是脂肪酸，其在期望阶段的一些尿液(尽管频率少于角鲨烯)中和阴道粘液中也都有所发现。 [0081] 在所采集的母牛阴道粘液中也几乎都鉴定出了2-丁酮。 [0082] 2- 组合物的制备及提供 [0083] 使用在市场上可购得的3种分子(香豆素、角鲨烯和1，2-二氯乙烯)制备在下述实施例中所使用的组合物。 [0084] 为了生产组合物，所使用的赋形剂为甘油/水溶液(50/50，体积/体积)。同样的赋形剂被用作对照溶液(溶液T)。 [0085] 2-1- 溶液A [0086] 溶液A包含终浓度为25pg/ml的香豆素。一开始，将市售香豆素在乙醇中稀释至终浓度为12.5mg/ml，之后在乙醇溶液中连续进行2次100倍稀释以使获得12.5ng/ml浓度的母溶液A。将1毫升该最后稀释物在499ml的赋形剂中稀释以获得最终溶液A。 [0087] 2-2- 溶液B [0088] 溶液B包含总浓度为25pg/ml的角鲨烯和1，2-二氯乙烯的混合物。以如上相同的方法，在1ml乙醇中溶解12.5mg市售化合物以得到12.5mg/ml的母溶液B。将这些母溶液在乙醇中连续23次稀释1000倍以达到浓度为12.5ng/ml，最后在赋形剂中稀释以得到最终溶液B。 [0089] 2-3- 溶液A+B [0090] 通过在498ml赋形剂中稀释1ml母溶液A和B(12.5ng/ml)得到溶液A+B。 [0091] 2-4- 提供 [0092] 所述溶液以喷雾的形式(用于美容的喷雾器中)提供，该喷雾器由铝制得，铝的两侧是中性涂层，该涂层用于农业食品行业以避免干扰物质的释放。这样的提供使得能够对公牛提供组合物同时限制性质上非常易挥发的活性分子(即目的信息素)的损失。实际上，其可直接沉积进入动物的鼻孔，从而接近靶标(即神经系统)。因此，通过非侵入性方法，使用喷雾器使得能够限制活性分子的损失，以控制递送至动物的剂量并且尽可能接近靶标。 [0093] 或者，还可以将溶液以在动物会嗅和/或舔的杯子中的形式提供。在采集公牛精液的情形下，还可使用溶液涂抹至须与其交配的母牛或所用试情畜的生殖器。 [0094] 实施例I [0095] I- 材料与方法 [0096] 1- 动物 [0097] 第一研究涉及一组10头Prim荷斯坦或诺曼底(Normande)公牛，4至5.5岁。这些动物从2至3月龄的“动物受精”部门募集，并且之后从未与母牛接触。它们一直被关在单独的栏中(测试前期或生产期)或者为同一年龄和性别的4至6只动物的组(结束期)。在测试之前和期间，测试动物的食物和圈养条件总是相同的。 [0098] 测试之前，根据其性欲(基于测试前在配种室中所观察的其行为定义)，将公牛分为2组。组1对应于具有“标准”性欲的动物，即其反应和射精时间与所有种公牛的那些一致。具有“低性欲”的组2由以下种畜组成：在对试情畜显示出兴趣并射精之前被视为“很慢”或“非常慢”。 [0099] 2- 所使用的溶液 [0100] 在本实施例I中，测试溶液B。 [0101] 包含所选分子的溶液(表1中的溶液B)以喷雾器中的实验喷雾的形式提供。 [0102] 仅使用用于配制溶液B中活性分子溶液的赋形剂得到对照版本(表1中的溶液T)。 [0103] 除了在采集开始时对实施处理负责的人之外，喷雾器孔代号(1，2)的含义对养牛人来说是未知的。 [0104] 3- 测试的一般安排：溶液的分配 [0105] 下表1列出了每组公牛所进行的实验。 [0106] 测试共持续6周。仅同一人被授权在公牛的鼻孔中喷洒溶液。 [0107] 在采集时间表中，第一个2周被用于训练公牛，稳定精子储量和评估个体的生产潜力。它们使得能够确保2组之间分配的针对性：在由反应和射精时间评估的性欲方面有显著差异以及生产参数之间没有差异。 [0108] 接下来的4周构成实际实验阶段，使用拉丁方编制程序：每组以对照和处理交替提供，并且每头公牛也是自己的对照。 [0109] 在2周的适应期间，公牛仅接受包含赋形剂的对照喷雾以每个鼻孔一次喷雾的比率进行。之后，根据实验方案中它们的任务，使动物接受对照喷雾或实验喷雾。 [0110] 由于所使用的分子非常具有挥发性，为了使采集室的气氛不会充满活性分子，采集总是从“对照”组开始。当所有动物到达配种室时，它们接受处理，其在每个组内随机进行。 [0111] 表1：成年公牛测试的一般安排 [0112] [0113] 溶液T：仅包含溶剂的对照溶液 [0114] 溶液B：包含根据本发明信息素和溶剂的溶液 [0115] 4- 记录行为参数 [0116] 在整个测试中，测试的公牛接受每周3次精液采集：周一、周三和周五。 [0117] 根据Amann(参见文所述)所描述的概要，对公牛进行系统性准备。 [0118] 为了评估性欲，因此需要在采集每次射精之前用秒表测量并记录这三次的时间(反应时间和射精时间)。 [0119] 在单次采集过程期间，保持同一试情畜。然而，如果公牛10分钟后仍没有显示出反应，则更换试情畜。 [0120] 团队队长是唯一被授权基于每组动物的任务进行喷雾处理和测量不同时间的人。 [0121] 性欲参数：在每头公牛每次爬跨时，测量上述反应时间(Treact)和射精时间(Tejac)(秒)。记录裂唇嗅表现、抽插和精子前流体的排放。 [0122] 在整个测试中，三名人员测量各时间。 [0123] 类似地，记下爬跨的质量：无、弱、中、强、很强。 [0124] 对于其他方面，按常规条件在种兽中有效地进行采集。 [0125] 5- 评估生物学参数 [0126] 一旦使用人工阴道进行采集，精液被直接送到实验室，在标准工作条件下进行处理。 [0127] 对于每次采集的射精，记录生物学参数：定量参数，即每次射精的体积(mL)、浓度(十亿个精子/ml)和精子总数(十亿个)；以及定性参数，即活精子的百分比(％)和运动或游动性的质量。 [0128] 6- 统计分析 [0129] 在适应期对每组公牛(即组1和组2)进行比较，以确保仅在动物的性欲方面有差异。 [0130] 之后，使用SAS软件对整个群体进行第一Proc GLM方差分析(有或没有适应周)，包括： [0131] ——性欲参数，即反应时间和射精时间， [0132] ——生物学参数，即体积、浓度、精子总数、活精子百分比、运动质量。 [0133] 在模型中考虑以下变化因素：时长、周数、公牛、处理、2对2相互作用(2-by-2 interation)。 [0134] 在没有适应周的情况下，进行第二组内Proc GLM分析，以观察公牛初始性欲对处理影响是否相似。最后，单独地，分析所述混合物对雄性的影响。 [0135] II- 结果 [0136] 1- 公牛组的初始比较(处理前) [0137] 基于在适应期所记录的所有参数，比较2组公牛(G1：标准性欲，G2：低性欲)的表现。观察涉及6次采集，即每组共30次射精。所得结果列于下表2中。 [0138] 表2：在适应期观察2组公牛之间性欲和生产参数的平均值和标准偏差的比较。 [0139]Treact Tejac Vol C° Nbrspz Mob G1 89±180 323±280 6.7±1.4 1.44±0.3 9.4±2.3 63±3.1 G2 320±302 780±478 7±1.6 1.45±0.32 10.3±3.4 64±3.1 p ＜0.0008 ＜0.0001 NS NS NS 0.07 [0140] Vol：体积(mL) [0141] C°：浓度(十亿个精子/mL) [0142] Nbrspz：精子数目(十亿个) [0143] Mob：游动性 [0144] NS：不显著 [0145] 从两组公牛的观察结果能够发现它们在性欲方面显著不同。 [0146] 因此，相比于组1的89秒和323秒，组2的反应和射精时间平均为320秒和780秒，这与预期一致。 [0147] 与此相反，两组之间的生产参数(尤其是定量数据)是相当的。 [0148] 2- 分析处理所产生的影响 [0149] 2-1- 针对所有的公牛 [0150] 无论最初被分配到哪一组，首先针对所有公牛分析所述处理产生的影响。 [0151] 分析涉及4周的实验时间。将60个“对照”射精与60个“信息素”射精的性欲和生产参数进行比较。结果列于下表3中，其显示了针对所有公牛的、在处理或未处理的情况下的性欲和所采集射精的生产参数。 [0152] 表3：实验期间性欲和所采集射精之生产参数的比较 [0153] [0154] N：射精次数 [0155] Δ：两个变量之间的差异 [0156] p：由于偶然因素导致的所观察事件的概率 [0157] 将测试的10头公牛作为整体来考虑，使用所述分子反映出反应时间(Treact)和射精时间(Tejac)分别减少了25％和13％(图3A)。 [0158] 平行地，浓度(C°)和每次射精所采集的精子总数(精子数目)分别增加了6％(p＝0.008)和9％(p＝0.02)(图3B和3C)，而体积变化不显著(+2％)。 [0159] 对于所分析的所有参数，个体“公牛”影响是显著的。“个体‘公牛’影响”意指特异性针对每个动物的行为并且可能影响所测量的参数。 [0160] 没有鉴定出“公牛＊处理”相互作用。经处理的所有公牛或多或少表现出明显的改善，所述改善仅由于处理所导致。 [0161] 2-2- 针对“标准”性欲的公牛(G1) [0162] 为了比较所述分子对标准性欲公牛的影响，对实验期组内进行统计分析(Pro GLM，SAS)。 [0163] 所考虑的变化因素为个体“公牛”影响、处理及其2对2相互作用。 [0164] 结果列于下表4中。 [0165] 表4：对于组1公牛实验期中性欲和所采集射精之生产参数的比较。 [0166]N Treact Tejac 体积 C° 精子数目游动性溶液T 30 45±36 271±140 7.07±1.3 1.42±0.21 10±2.2 63±3.6 溶液B 30 38±32 255±64 7.13±1.1 1.56±0.23 11.1±2.3 64±3.8 p P＜ NS NS P＜0,004 P＝0,07 [0167] 可看出，“公牛”作用对反应时间具有显著地影响，但是对射精时间没有影响。对于浓度来说，这也是明显的。 [0168] 使用信息素使反应时间减少了15％，使得精液浓度(图4A)增加了10％(p＜0.004)，精子总数(图4B)增加了11％(p＝0.07)。 [0169] 2-2- 针对“低”性欲公牛(G2) [0170] 然后，将用于G1组的模型用于另一公牛组G2。全部结果列于下表5中。 [0171] 表5：对于组2公牛在实验期中性欲和所采集射精之生产参数的比较。 [0172] [0173] 个体“公牛”影响对所有参数都表现出显著性。 [0174] 所述处理仅对性欲参数具有影响(图5)：Treact改善了26％(p＝0.1)，Tejac改善了14％(p＝0.07)。 [0175] 对于浓度而言，“公牛＊处理”相互作用趋于显著(p＝0.09)。这一观察结果得自因处理导致的在该组5头公牛中有一头的精子浓度明显下降(对照为17.6亿个精子/ml，用信息素处理的为15.5亿个精子/ml)，而对于其他个体，所述处理导致该数据增加，只是比例较低。 [0176] 其他参数似乎没有受到影响。 [0177] 2-4- 针对个体“公牛”影响 [0178] 针对每个个体和每个参数分析“公牛”影响作为处理的函数，并显示于下表6和7中。 [0179] 表6：对于组1中每头公牛的处理对性欲和生产参数的影响 [0180] [0181] a：p＝0,07；b：p＝0,06；c：p＝0,03；d：p＝0,005；e：p＝0,05；f：p＝0,003[0182] 组1中，观察到，5头公牛中的2头的反应时间由于处理而增加。然而，作为处理的结果，相比于对照，5只动物累积的反应时间减少(经处理的为189.2秒，未处理的为224.3秒，时间减少了15.6％)。 [0183] 改善了2只动物的射精时间，显著改善了1只(p＝0.03)，其他2只没有变化，最后一只趋于增加。累积来说，所述处理使得5头公牛总的射精时间减少了6.1％(未处理的为1356秒，经处理的为1272秒)。 [0184] 表7：针对组2中每头公牛的处理对性欲和生产参数的影响 [0185] [0186] 组2中，所述处理使得反应时间累积改善了25.7％，射精时间累积改善了14.5％，即针对5头公牛来说分别为738秒和829秒。 [0187] 这意味着，当5头公牛处于同样的爬跨过程部分时，所述处理使得在配种室中花费的总时间节约了13分48秒。 [0188] 实施例II [0189] I- 材料与方法 [0190] 1- 动物 [0191] 第二研究涉及20头幼年蒙贝利亚公牛，15～18月龄，其为用于性功能(CFS)测试的动物组的一部分。这些公牛在2～3月龄时募集自畜牧场，之后在同样的条件下饲养并且不接触雌性。 [0192] 在缺乏先前性欲数据的情况下，它们被随机地分为两组——J和K，每组10个个体。 [0193] 2- 所使用的溶液 [0194] 使用溶液A+B，并以喷雾器中的实验喷雾的形式提供。 [0195] 仅使用还用于配制溶液A+B中活性分子之溶液的溶剂产生对照版本(表8中的溶液T)。 [0196] 除了在采集开始时负责实施处理的人之外，喷雾器孔代号(1，2)的含义对养牛人来说是未知的。 [0197] 3- 测试的一般安排：溶液的分配 [0198] 下表8列出了每个公牛组进行的实验。 [0199] 测试持续5周，包括适应的一周，其间所有动物接受对照溶液并且仅进行一次采集。所述溶液以喷雾形式提供，如上文实施例1所述。 [0200] 在采集开始时，以每个鼻孔喷雾混合物两次的形式对所有公牛系统性地施用溶液。 [0201] 由于所使用的分子非常具有挥发性，为了使采集室的气氛不会充满活性分子，采集总是从“对照”组开始。当它们到达配种室时，所有动物均接受处理，其在每个组内随机进行。 [0202] 表8：针对成年公牛之测试的一般安排 [0203] [0204] [0205] 4- 记录行为和生产参数 [0206] 在整个测试的实验期(即4周)中，所有公牛均接受每周一次射精的2次采集(2＊1)。 [0207] 公牛和试情畜的准备以及施用溶液和采集射精的方法与实施例I中相同。 [0208] 性欲和生产参数的观察和记录与实施例I中相同。 [0209] II- 结果 [0210] 1- 分析所述处理、所述组、组内公牛及其相互作用的影响 [0211] 针对总共全部20头公牛测量的每个参数获得的平均值以及作为所述处理的函数列于下表9中。它们涉及4周的实验期。 [0212] 表9：针对所有公牛所测量的参数的平均值，作为所述处理的函数[0213]处理数目 Treact Tejac 体积 C° 精子数目游动性溶液T 80 33,5 347 3,36 1,01 3,39 56,34 溶液A+B 80 31,1 297 3,23 1,09 3,45 56,02 p NS P＜0,08 NS P＝0,11 NS NS [0214] 关于测试中20头公牛的整个组，显示了使用信息素混合物使射精时间趋于减少(对照为347秒，经处理的那些为297秒，即时间减少了14％)，并且使精液的平均浓度趋于增加(对照组为10.1亿个/ml，处理组为10.9亿个/ml，即增加了9％(p＜0.11))。 [0215] 其他参数似乎没有被所述处理改变。 [0216] 对于每组公牛及全部公牛来说，所述处理对射精时间和浓度的影响显示于图6A和6B中。 [0217] 因此，观察到，对于所测量的所有参数来说，个体“公牛”影响表现非常显著(p＜0.0001)。与之相反，未观察到“公牛＊处理”相互作用。 [0218] 看来，当公牛的初始性欲较低以及对照射精时间较长时，所述处理的效力更高。 [0219] 测试的20头公牛中，只有一头(T15)具有非典型的行为并且在处理后射精时间增加。 [0220] 类似地，对于具有小于200秒的对照射精时间(对应于良好的初始性欲)的个体而言，所述处理似乎没有显著地改善性欲。 [0221] 实施例III [0222] I- 材料与方法 [0223] 1- 动物 [0224] 第一研究涉及一组10头Prim荷斯坦或诺曼底成年公牛，4～5.5岁。这些动物从2至3月龄的“动物受精”部门募集，并且之后从未接触母牛。它们一直被关在单独的栏中(测试前期或生产期)或者为同一年龄和性别的4至6只动物的组(结束期)。在测试之前和期间，测试动物的食物和圈养条件总是相同的。 [0225] 如实施例I所述，根据其性欲，公牛被分为两组——组N(“标准性欲”)和组L(“低性欲”)。 [0226] 2- 所使用的溶液 [0227] 使用溶液A，并以喷雾器中的实验喷雾形式提供。 [0228] 仅使用还用于配制溶液A中活性分子之溶液的溶剂产生对照版本(表10中的溶液T)。 [0229] 除了在采集开始时负责实施处理的人之外，喷雾器孔代号(1，2)的含义对养牛人来说是未知的。 [0230] 3- 测试的一般安排：溶液的分配 [0231] 下表10列出了针对每组公牛进行的实验。 [0232] 测试共持续6周。 [0233] 所述周的安排如实施例1所述。 [0234] 表10：针对成年公牛之测试的一般安排 [0235] [0236] [0237] 如上文实施例I所述，所述溶液以喷雾形式提供。 [0238] 在采集开始时，以每个鼻孔喷雾混合物两次的形式对所有公牛系统性地施用溶液。 [0239] 由于所使用的分子非常具有挥发性，为了使采集室的气氛不会充满活性分子，采集总是从“对照”组开始。当所有动物到达配种室时，它们均接受处理，其在每个组内随机进行。 [0240] 4- 记录行为参数 [0241] 在与实施例I同样的条件下实施采集时间表、准备公牛和记录行为参数。 [0242] 5- 评估生物学参数 [0243] 在与实施例I中所述的相同条件下进行精液采集。 [0244] 如实施例1所述记录定量的和定性的生物学参数。 [0245] II- 结果 [0246] 1- 公牛的初始比较 [0247] 1-1- 各公牛组之间的比较 [0248] 基于适应期中记录的所有参数，比较两组公牛(组N和组L)的表现。 [0249] 由于存在交配拒绝和丢失数据，因此观察值涉及2次射精(次序1和次序2)的5次采集，即组N的42次射精和组L的47次射精。 [0250] 无论采集次序为何，结果示于下表11中，其对应于采集的所有射精。表11：适应期中所观察的2组公牛之间性欲和生产参数的平均值和标准偏差的比较。 [0251]Treact Tejac 体积 C° 精子数目游动性组N 139±357 378±361 5.2±1.6 1.21±0.48 6.3±3.4 84.5±3.3 组L 895±1041 1368±1176 6,4±3 1.37±0.5 8.9±5.3 84.5±3.6 p ＜0.0001 ＜0.0001 0.03 NS 0.012 NS [0252] 观察到，两组中公牛的分配是一致的，这是因为组L中的动物兴奋(组L的Treact＝895秒，组N的仅为139秒)和产生精子(组L的Tejac＝1368秒，组N的为378秒)的时间显著更长。 [0253] 还观察到，组L中公牛的精子定量参数显著更高(对于体积而言p＝0.03，对于精子总数而言p＝0.012，并且组L的浓度为13.7亿个/ml，组N的为12.1亿个/ml)。 [0254] 由于组之间存在差异，因此针对2组公牛单独进行其余的统计分析，除非定性参数不存在差异。 [0255] 2-2 公牛的射精排序之间的比较 [0256] 然后，整合“射精排序”因素进行分析。 [0257] 2-2-1- 2组公牛排序第1的(rank 1)射精之间的比较 [0258] 每组公牛得到的结果列于下表12中。 [0259] 表12：针对排序第1的射精，2组公牛之间的性欲和生产参数的比较[0260] [0261] 对于所采集的所有射精，2组之间所观察到的差异对于排序第1的射精来说更为显著。 [0262] 由于组N的平均反应时间从1分8秒到“慢”动物的20分48秒，而组L公牛的平均射精时间从“标准”性欲公牛的5分39秒到平均为28分44秒，因此，性欲参数具有非常显著的不同。 [0263] 各组之间精子定量参数也显著不同，有利于组L，而定性参数(游动性％)相同。 [0264] 2-2-2- 两组公牛的排序第2的射精之间的比较 [0265] 每组公牛得到的结果列于下表13中。 [0266] 表13：针对排序第2的射精，2组公牛之间的性欲和生产参数的比较[0267] [0268] 对于排序第2的射精而言，各组之间的差异消失了，只有性欲参数趋于显著不同(Treact，p＜0.1，以及Tejac，p＜0.02)。因此，组N的平均射精时间6分55秒增加至组L的16分16秒。令人感兴趣的是，观察到在第二次爬跨期间，组L的性欲参数改善了，而组N的却降低了。 [0269] 关于第二次射精，2组之间精子的定量和定性参数非常相似。 [0270] 3- 所述处理的影响 [0271] 3-1- 各组处理对排序第1之射精的影响 [0272] 3-1-1- 组N(具有标准性欲的公牛) [0273] 在该组中，所述处理对生产参数具有积极作用，而性欲参数则没有显著变化。 [0274] 对于精子的定量特征，仅“公牛”影响很明显，未显示出“公牛＊处理”相互作用(表14中的公牛＊处理)。 [0275] 结果列于表14中。 [0276] 表14：实验期中性欲和生产参数的平均值和方差因子分析。组N。(每个处理n＝30个观察值) [0277]Treact Tejac 体积 C° 精子数目游动性公牛 NS NS P＜0,0001 P＜0,0001 P＜0,0001NS 处理 NS NS NS P＜0,05 P＜0,05 P＜0,02 公牛＊处理 NS NS NS NS NS NS 溶液T 84,7 316 5,03 1,35 6,73 84,5 溶液A 94,4 340 5,15 1,50 7,75 86,3 Δ(A-T) +9,7s +24s 0,12 0,15 +1,02 +1,8 [0278] 3-1-2- 组L(具有低性欲的公牛) [0279] 在该组(每个处理n＝30个观察值)中，无论所分析的参数为何，个体“公牛”影响都很明显，而所述处理对游动精子的百分比、精液体积和采集精子的总数而言具有显著性(p＜0.07)。 [0280] 因此，所述处理使每头公牛的射精时间降低了393秒，即6分33秒。这些数据归纳于表15中。 [0281] 表15：实验期中性欲和生产参数的平均值和方差因子分析。 [0282]Treact Tejac 体积 C° 精子数目游动性公牛 P＜0,0001P＜0,0001P＜0,0001P＜0,0001 P＜0,0001P＜0,07 处理 NS NS P＜0,06 NS P＜0,07 P＜0,05 公牛＊处理 NS P＜0,07 NS NS NS NS 溶液T 1078 2179 6,6 1,51 9,89 86,2 溶液A 846 1786 5,88 1,47 8,18 84,3 Δ(A-T) -232s -393s -0,72 -0,04 -1,71 -1,9 [0283] 3-2- 各组处理对排序第2之射精的影响 [0284] 3-2-1 组N(具有标准性欲的公牛) [0285] 在“标准”性欲公牛(每个处理n＝30个观察值)中，所使用的分子趋于降低射精时间(p＜0.07)以及精子浓度和数目(p＜0.01)。 [0286] 它们对游动精子的百分比具有积极影响(p＜0.02)。 [0287] 公牛的影响仅在精子的定量参数中是显著的，而“公牛＊处理”相互作用则不显著(表16)。 [0288] 表16：实验期中性欲和生产参数的平均值以及方差因子分析，第2次射精。 [0289]Treact Tejac 体积 C° 精子数目游动性公牛 NS NS P＜0,0001 P＜0,0006 P＜0,0001NS 处理 NS P＜0,07NS P＜0,01 P＜0,01 P＜0,02 公牛＊处理 NS NS NS NS NS NS 溶液T 180 415 4,65 1,22 5,76 82,2 溶液A 71 258 4,31 0,99 4,25 84,5 Δ(A-T) -109s -157s -0,34 -0,23 -1,51 +2,3 [0290] 3-2-2- 组L(具有低性欲的公牛) [0291] 在该批动物(每次处理n＝30个观察值)中，除了游动精子的百分比(所述处理仅对其具有影响)以外，对于研究的所有参数来说，仅个体“公牛”影响是明显的。然而矛盾的是，所述处理趋于增性欲参数但是不显著。这些数据归纳于表17中。 [0292] 表17：实验期中性欲和生产参数的平均值以及方差因子分析，第2次射精。 [0293]Treact Tejac 体积 C° 精子数目游动性公牛 P＜0,01P＜0,0001 P＜0,0001P＜0,01 P＜0,0001 NS 处理 NS NS NS NS NS P＜0,01 公牛＊处理 NS NS NS NS NS NS 溶液T 312 868 5,74 0,91 5,07 84,6 溶液A 494 1137 5,28 0,88 4,84 81,9 Δ(A-T) +182 +269 -0,46 -0,03 -0,23 -2,7 [0294] 实施例IV [0295] I- 材料与方法 [0296] 1- 动物 [0297] 在数个测试地点测试不同品种的10头成年公牛的组。每组分成两类：对照动物和经处理动物。在每个地点，考虑到年龄和品种数据，将公牛均分成两组，使得仅性欲差异有区别。 [0298] 如实施例III所述，根据其性欲将公牛分为：组N(“标准性欲”)和组L(“低性欲”)。 [0299] 针对每个地点，所处理的品种和采集时间表在表18中示出。 [0300] 表18：每个地点的品种和采集时间表 [0301]其中，x＊y表示每周x次采集的y次先后射精 [0302] 2- 所使用的溶液 [0303] 使用包含甘油和水(按体积计各自比例为50/50)的对照溶液(表19中的溶液T)。 [0304] 用该对照溶液中稀释包含本发明一种或更多种分子的其他溶液。 [0305] 测试不同浓度的活性分子或活性分子混合物。 [0306] 测试的组合物描述于表19中。 [0307] 表19：所测试的组合物 [0308] [0309] [0310] 所有这些组合物均以喷雾形式(喷雾器中)提供，所述喷雾器由铝制成，铝的两侧是中性涂层以避免干扰物质的释放。 [0311] 在每个地点，种牛团队有两个编码的喷雾器。一个仅包含对照溶液，另一个具有包含本发明一种分子或本发明分子混合物的组合物。仅团队队长可区分这两钟喷雾器，但不知道其内容物。 [0312] 3- 测试的一般安排：溶液的分配 [0313] 下表20列出了针对每组公牛(N和L)进行的实验。 [0314] 测试共持续6周。前两周被用于训练采集时间表中的公牛，稳定精子储量和评估个体的生产潜力。它们使得能够确保2组之间分配的针对性：在由反应和射精时间评估的性欲方面有显著差异以及生产参数之间没有差异。接下来的4周构成实际的实验阶段，使用拉丁方编制程序：每组以对照喷雾和处理交替提供，并且每头公牛也是自己的对照。 [0315] 表20：每周测试的一般安排 [0316]其中，Comp.Cx表示组合物C1至C5中的一种，其取决于测试地点。 [0317] 为了不使配种室的气氛中充满活性分子以及避免干扰结果，在使用组合物Cx之前系统地使用对照溶液。 [0318] 4- 记录行为参数 [0319] 如上文表18所示确定采集时间表。在与实施例1中类似的条件下记录行为参数。 [0320] 对于地点2来说，要考虑与第一次和第二次射精有关的参数。 [0321] 5- 统计分析 [0322] 对于性欲参数，根据上文实施例I所述的方法进行统计分析。 [0323] II- 结果 [0324] 1- 所述处理对性欲参数的影响 [0325] 1-1- 对反应时间(Treact)的影响 [0326] 所述处理针对每个地点和所测试之全部10头公牛的影响列于表21中。 [0327] 表21：所测试的每种组合物对反应时间(秒)的影响 [0328]其中Comp.意为组合物，Ejac.意为射精，Moy.意为平均值，Diff.Moy.意为平均差，NS意为不显著。 [0329] 除了组合物C2之外，对于测试的所有组合物，观察到所述处理能够显著地减少反应时间(与对照相比平均减少了27％至36％)。 [0330] 这些结果显示，根据本发明的C1、C3、C4和C5组合物并未改变公牛的最小反应时间。相反地，可看出它们导致最大反应时间显著降低。另外，它们趋于降低射精之间的变化性并且使观察到的反应时间均一。 [0331] 因此，这些结果表明，即使浓度低至2.5pg/ml(组合物C1)，本发明的分子也能够有效地促进公牛的性欲。 [0332] 对于组合物C2，其中分子以250pg/ml的浓度存在，仍观察到改善了排序第2之射精的反应时间。 [0333] 1-2- 对射精时间(Tejac)的影响 [0334] 所述处理对每个地点和所测试之全部10头公牛的影响列于下表22中。 [0335] 表22：所测试的每种组合物对射精时间(秒)的影响 [0336]其中，Comp.意为组合物，Ejac.意为射精，Moy.意为平均值，Diff.Moy.意为平均差。 [0337] 上述结果显示，除了组合物C2以外，本发明的测试组合物使射精时间显著减少了13％至28％(其取决于组合物)。对于组合物C1而言也是如此，其中分子的浓度低至2.5pg/ml。 [0338] 对于组合物C2，在排序第2的射精中也显著地观察到该影响。 [0339] 关于反应时间，观察到本发明组合物主要引起最大射精时间以及测试公牛之间变异性的减少。 [0340] 这些结果支持了这样的结论：处于测试浓度的所测试分子对公牛的性欲具有显著的生物学作用。 [0341] 在发情特异性分子的总浓度高至500pg/mL(组合物C2)时，在与排序第1之射精同一天采集的排序第2之射精中也观察到了对反应和射精时间的有益影响。该有益影响取决于组合物的施用会在时间上发生延迟，但是并不显著。 [0342] 2- 个体“公牛”影响和“公牛-处理”相互作用的分析 [0343] 无论所考虑的地点和参数为何，从所得结果可见，个体“公牛”影响总是表现得非常显著。当所述处理具有积极作用时，包括对于性欲参数、反应时间和射精时间而言，“公牛/处理”相互作用未表现为显著。不论所使用的分子或其混合物为何，这些数据均相一致，它们支持这样的结论：本发明的分子对几乎所有公牛均具有相同的作用，但取决于动物初始性欲，其比例有所不同。 [0344] 为了示例这些数据，下面作为实例给出了所述处理影响了在地点3所观察到的针对性欲参数的“公牛”影响，因为它们代表了在所有其他地点所获得的。 [0345] 根据存在或不存在所述处理，下表23显示了针对每头公牛的反应时间方面所获得的结果。在4周的实验期中，每个平均值从所采集的4次射精(时间表2＊1)计算得到。 [0346] 表23：举例说明地点3的个体“公牛”影响以及不存在“公牛/处理”相互作用对反应时间(Treact)(以秒计)的影响(组合物C3) [0347] [0348] 其中，Moy.意为平均值，Diff.Moy.意为平均差。 [0349] 即使动物8和9之间的差异很小，但是从表23所示的结果分析可以看出公牛之间在行为上的巨大差异并且能够重新进行分类：具有良好性欲的公牛组N(公牛1、2、3、5和9)和具有低性欲的公牛组L(公牛4、6、7、8和10)。 [0350] 除了公牛6，对于所有的公牛，施用本发明组合物C3使反应时间在比例上减少了11％(针对公牛1)至79％(针对公牛5)。只有公牛6(其属于低性欲的个体组)通过所述处理增加了15％。 [0351] 对于这些公牛，还观察到最小和最大反应时间也经所述处理而降低了。 [0352] 根据存在或不存在所述处理，下表24显示了针对每头公牛的射精时间方面所获得的结果。在4周的实验期中，每个平均值从所采集的4次射精(时间表2＊1)计算得到。 [0353] 表24：举例说明地点3的个体“公牛”影响以及不存在“公牛/处理”相互作用对射精时间(Tejac)(以秒计)的影响(组合物C3) [0354] [0355] 其中，Moy.意为平均值，Diff.Moy.意为平均差。 [0356] 将所测试的10头公牛作为整体，用本发明组合物C3处理引起的平均时间减少是154秒/公牛，即对照的平均射精时间的14％。 [0357] 对于6头公牛(公牛2、3、4、5、8和9)而言，所述处理使它们的射精时间减少28％至37％。2头公牛(公牛7和10)未显示明显改善，而另两头(公牛1和6)的射精时间降低。然而，这些行为差异不足以鉴定“公牛/处理”相互作用。 [0358] 对于10个个体中的8个，组合物C3导致最大射精时间降低。公牛10未受到所述处理的影响，而对于公牛6来说，该参数有所增加。然而，将10头公牛作为整体，观察到所述处理引起了最大平均射精时间减少262秒，即与对照相比减少了18％。 [0359] 上述结果清楚地显示出高度显著的个体“公牛”影响以及不存在“公牛/处理”相互作用。对于测试的所有组合物，在所有其他测试地点均获得了同样的结果。这倾向于证实所述处理对反应时间和射精时间的有利影响完全是由于本发明的测试分子所导致的。 [0360] 以上描述清楚地示例了：通过其各种特征及其优势，本发明实现了其自身所设定的目的。特别地，本发明提供了引起公牛生殖能力显著改善的组合物。特别地，所进行的实验证明显著改善了公牛的性欲；使用本发明的组合物能够使反应时间减少约30％以及使射精时间减少约20％。这样的时间减少对于安排精液采集、生产成本以及与动物接触之养牛人的安全将具有显著的积极作用。 [0361] 参考文献 [0362] Kumar KR，Archunan G，Jeyaraman R & Narasimhan S (2000)Chemicalcharacterization of bovine urine with special reference to cestrus，Vet ResCommun，24(7)，445-454. 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