用于在转基因生物中产生多不饱和脂肪酸的方法

本发明涉及通过将编码具有Δ5延伸酶活性的多肽的核酸导入生物体， 在生物中产生多不饱和脂肪酸的方法。这些核酸序列，根据需要与编码脂 肪酸生物合成或脂代谢的多肽的其它核酸序列一起可有利地在生物中表 达。特别有利的核酸序列是编码Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶、 Δ12去饱和酶和/或Δ6延伸酶活性的核酸序列。这些去饱和酶和延伸酶有 利地来源于海链藻属(Thalassiosira)、裸藻属(Euglena)或Ostreococcus。 本发明还涉及产生具有含量升高的长链多不饱和脂肪酸的油类和/或三酰 甘油酯的方法。

在优选的实施方案中，本发明进一步涉及产生不饱和ω3脂肪酸的方 法和产生具有含量升高的不饱和脂肪酸尤其具有超过三个双键的ω3脂肪 酸的甘油三酯的方法。本发明涉及转基因生物的产生，优选地为转基因植 物或转基因微生物的产生，所述的转基因生物由于本发明方法中使用的延 伸酶和去饱和酶，有利地与ω3去饱和酶类共同的表达，具有含量升高的 不饱和ω3脂肪酸、具有ω3双键的油类或脂类，其中所述的ω3去饱和酶 例如来自真菌腐霉科(Pythiaceae)如疫霉属(Phytophthora)，例如致病 疫霉(Phytophthora infestans)属和种的真菌，或来自藻类如草绿藻科 (Prasinophyceae)，例如Ostreococcus属，特别是Ostreococcus tauri 属和种的藻类，或来自硅藻如海链藻属，特别是假矮海链藻(Thalassiosira pseudonana)属和种的硅藻。

本发明进一步涉及核酸序列、包含本发明核酸序列的核酸构建体、载 体和生物、包含核酸序列和/或核酸构建体的载体并且涉及含有以上提及的 核酸序列、核酸构建体和/或载体的转基因生物。

本发明的一部分还涉及根据本发明方法产生的油、脂类和/或脂肪酸和 它们的用途。本发明还涉及不饱和脂肪酸和具有含量升高的不饱和脂肪酸 的甘油三酯以及它们的用途。

脂肪酸和三酰甘油酯在食品工业、动物营养、化妆品和药学领域内具 有多种应用。根据它们是否为游离饱和或不饱和脂肪酸或为具有含量升高 的饱和或不饱和脂肪酸的三酰甘油酯，这些脂肪酸和三酰甘油酯适合迥然 不同的应用。因为哺乳动物不能产生多不饱和脂肪酸，所以多不饱和脂肪 酸例如亚油酸和亚麻酸为哺乳动物必需。故多不饱和ω3脂肪酸和ω6脂 肪酸是动物和人类营养的重要构成要素。

鉴于多不饱和长链ω3脂肪酸在健康领域包括儿童脑发育、眼的功能 性、激素和其它信号物质的合成以及心血管疾病、癌症和糖尿病的预防的 多种作用，多不饱和长链ω3脂肪酸例如二十碳五烯酸(EPA， C20:5Δ5，8，11，14，17)或二十二碳六烯酸(DHA，C22:6Δ4，7，10，13，16，19)是人类营 养的重要成分(Poulos，A，Lipids 30：1-14，1995；Horrocks，LA和Yeo YK，Pharmacol Res 40：211-225，1999)。这是为什么需要产生多不饱和 长链脂肪酸的的原因。

鉴于目前人类食物的组成，向食物中添加优先地发现于鱼油中的多不 饱和ω3脂肪酸极为重要。因此例如将多不饱和脂肪酸如二十二碳六烯酸 (DHA，C22:6Δ4，7，10，13，16，19)或二十碳五烯酸(EPA，C20:5Δ5，8，11，14，17)添 加至婴儿配制方中以改善营养价值。据称不饱和脂肪酸DHA对脑功能的 发育和维持有积极影响。

下文中多不饱和脂肪酸称作PUFA、PUFAs、LCPUFA或 LCPUFAs( poly  unsaturated  fatty  acids， PUFA， long  chain  poly unsaturated  fatty  acids， LCPUFA)。

多种脂肪酸和甘油三酯主要从微生物如被孢霉属(Mortierella)和 Schizochytrium中获得或从产油植物如大豆、油菜籽、藻类如隐甲藻属 (Crypthecodinium)或褐指藻属(Phaeodactylum)和其它生物中获得， 其中所述多种脂肪酸和甘油三酯通常以其三酰甘油酯(＝甘油三酯＝三酰 甘油)形式获得。然而这些脂肪酸和甘油三酯也能从动物如鱼中获得。游 离脂肪酸有利地通过水解制备。极长链多不饱和脂肪酸例如DHA、EPA、 花生四烯酸(ARA，C20:4Δ5，8，11，14)、二高γ-亚麻酸(C20:3Δ8，11，14)或二 十二碳五烯酸(DPA，C22:5Δ7，10，13，16，19)不能在油料作物例如油菜籽、大 豆、向日葵或红花中合成。这些脂肪酸的常规天然来源是鱼如鲱鱼、鲑鱼、 沙丁鱼、雄鲑、鳗鲡、鲤鱼、鳟鱼、大比目鱼、鲭鱼、梭鲈或金枪鱼或藻 类。

根据目的用途，具有饱和或不饱和脂肪酸的油为优选。例如在人类营 养中，具有不饱和脂肪酸尤其具有多不饱和脂肪酸的脂类为优选。据称多 不饱和ω3脂肪酸对血液中胆固醇水平具有正面影响并且因此正面地影响 心脏病的预防可能性。通过向食物中添加这些ω3脂肪酸可显著降低心脏 病、中风或高血压的风险。ω3脂肪酸也正面影响与免疫性疾病如类风湿性 关节炎有关的炎性过程，尤其是慢性炎性过程。因此将它们添加至食品， 尤其食用性食品中或应用于药品。由于我们日常的饮食摄入，ω6脂肪酸如 花生四烯酸往往不利地影响与这些风湿性疾病相关的这类功能紊乱。

ω3和ω6脂肪酸是称作类二十烷酸的组织激素如前列腺素的前体，其 中这类组织激素自二高γ亚麻酸、花生四烯酸和二十碳五烯酸衍生，同时 ω3和ω6脂肪酸也是凝血烷和白三烯的前体，而凝血烷和白三烯衍生 自花生四烯酸和二十碳五烯酸。形成自ω6脂肪酸的类二十烷酸(称作PG2 系列)通常促进了炎性反应，而ω3脂肪酸来源的类二十烷酸(称作PG3 系列)具有很少或没有促炎效应。

鉴于多不饱和脂肪酸的积极特征，过去从未停止尝试获得参与合成这 些脂肪酸或甘油三酯的基因以便在不饱和脂肪酸的含量经改变的多种生物 中产生油。因而WO 91/13972和它的美国等同公开描述了Δ9去饱和酶。 WO 93/11245要求了Δ15去饱和酶的权利并且WO 94/11516要求了Δ12 去饱和酶的权利。而且其它去饱和酶在例如EP-A-0550162、 WO 94/18337、WO 97/30582、WO 97/21340、WO 95/18222、EP-A- 0794250、Stukey等，J.Biol.Chem.，265，1990：20144-20149、Wada 等，Nature 347，1990：200-203或Huang等，Lipids 34，1999：649- 659中得到了描述。然而迄今多种去饱和酶的生物化学特征描述得仍不充 分，因为这些酶作为膜结合蛋白严重阻碍了对它们的分离和特征描述 (McKeon等，Methods in Enzymol.71，1981：12141-12147，Wang等， Plant Physiol.Biochem.，26，1988：777-792)。原则上将膜结合的去饱 和酶通过导入合适的生物并随后通过分析起始物质和产物而分析酶活性来 表征。Δ6去饱和酶在WO 93/06712、US 5614393、US5614393、 WO 96/21022、WO 00/21557和WO 99/27111中描述并且这种酶用于转基 因生物中产生脂肪酸的申请在WO 98/46763、WO 98/46764和WO 98/46765中描述。在本上下文中，多种去饱和酶的表达和多不饱和脂肪酸 的形成也在WO 99/64616或WO 98/46776中进行了描述和要求权利。就 去饱和酶的表达效率和这种表达效率对多不饱和脂肪酸形成的影响而言， 必须指出单一去饱和酶的表达如迄今所述仅仅获得了低含量的不饱和脂肪 酸/脂类如γ-亚麻酸和硬脂艾杜糖酸(stearidonic acid)。此外通常获得的是 ω3和ω6脂肪酸的混合物。

尤其适合用于产生PUFA的微生物是微藻如三角褐指藻 (Phaeodactylum tricornutum)、Porphiridium某些种、破囊壶菌属 (Thraustochytrium)某些种、Schizochytrium种或隐甲藻属某些种、纤 毛虫例如棘尾虫属(Stylonychia)或豆形虫属(Colpidium)、真菌如被孢 霉、虫霉菌属(Entomophthora)和毛霉属(Mucor)和/或藓类如剑叶藓 属(Physcomitrella)、角齿藓属(Ceratodon)和地钱属(Marchantia) (R.Vazhappilly和F.Chen(1998)Botanica Marina 41：553-558；K. Totani和K.Oba(1987)Lipids 22：1060-1062；M.Akimoto等，(1998) Appl.Biochemistry and Biotechnology 73：269-278)。株系的选择已经导 致了所讨论的多种微生物突变株系的开发，这些突变株系产生了包括 PUFA在内的一系列目标化合物。然而对株系进行突变并选择具有改善特 定分子如多不饱和脂肪酸产生的株系是一个费时且困难的过程。这就是为 什么只要可能就优选如上所述的重组方法的原因。

然而目的多不饱和脂肪酸如DPA、EPA或ARA在以上提到的微生物 的协助下仅仅可有限量地产生并且通常根据所用的微生物，这些脂肪酸作 为如EPA、DPA或ARA的脂肪酸混合物获得。

讨论了花生四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA) (图1)合成的多种合成途径。因此，EPA或DHA通过聚酮化合物途径 在海生细菌如弧菌(Vibrio sp.)或希瓦菌(Shewanella sp.)中产生(Yu， R.等，Lipids 35：1061-1064，2000；Takeyama，H.等，Microbiology 143： 2725-2731，1997)。

另一个备选策略是改变去饱和酶和延伸酶的活性(Zank，T.K.等，Plant Journal 31：255-268，2002；Sakuradani，E.等，Gene 238：445-453，1999)。 经Δ6去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和Δ4去饱和酶修饰 的上述途径是哺乳动物中的Sprecher途径(Sprecher 2000，Biochim. Biophys.Acta 1486：219-231)。实施进一步的延伸步骤而非Δ4去饱和过 程以产生C24，随后通过进一步Δ6-去饱和作用和最终的β-氧化作用产生了 C22的链长度。由于调节机制未知，故称作Sprecher的途径(见图1)并 不适于植物和微生物中的生产。

这类多不饱和脂肪酸可根据它们的去饱和形式分为两个大类，即ω6 或ω3脂肪酸，其中这些脂肪酸在代谢和功能性活性方面有差异(图1)。

ω6代谢途径的起始物质是脂肪酸亚油酸(18:2Δ9，12)而ω3途径经亚 麻酸(18:3Δ9，12，15)进行。亚麻酸通过ω3去饱和酶的活性形成(Tocher等， 1998，Prog.Lipid Res.37，73-117；Domergue等，2002，Eur.J. Biochem.269，4105-4113)。

哺乳动物及人类没有相应的去饱和酶活性(Δ12和ω3去饱和酶)并 且必须通过食物摄入这类脂肪酸(必需脂肪酸)。生理上重要的多不饱和 脂肪酸花生四烯酸(ARA，20:4Δ5，8，11，14)，一种ω6脂肪酸及两种ω3脂肪 酸二十碳五烯酸(EPA，20:5Δ5，8，11，14，17)和二十二碳六烯酸(DHA， 22:6Δ4，7，10，13，17，19)从这类前体开始通过依次的去饱和酶以及延伸酶反应合 成。ω3脂肪酸在心血管疾病(Shimikawa 2001，World Rev.Nutr.Diet. 88，100-108)、Entzündungen(Calder 2002，Proc.Nutr.Soc.61， 345-358)和关节炎(Cleland和James 2000，J.Rheumatol.27，2305-2307) 的治疗应用中表现了如上所述的治疗活性、

因此就营养生理而言在合成多不饱和脂肪酸时，成功实现ω6合成途 径和ω3合成途径间的转化(见图1)以产生更多ω3脂肪酸是重要的。多 种使C18:2、C22:4或C22:5脂肪酸去饱和的ω3去饱和酶的酶活性已在文献中 描述(见图1)。然而已经由生物化学所描述的去饱和酶无一能使ω6合成 途径中广泛类型的底物转化为ω3合成途径中相应的脂肪酸。

因而对适于产生ω3多不饱和脂肪酸的ω3去饱和酶的需求一直十分迫 切。所有已知的植物和蓝细菌ω3去饱和酶可用亚油酸为底物使C18脂肪酸 去饱和，但是不能使任何C20或C22脂肪酸去饱和。

已知真菌Saprolegnia dicilina具有使C20多不饱和脂肪酸去饱和的ω3 去饱和酶[Pereira等2004，Biochem.J.378(Pt2)：665-71]。然而，这 种ω3去饱和酶的缺点是不能使任何C18或C22 PUFA如ω6合成途径中重 要脂肪酸C18:2、C22:4或C22:5脂肪酸去饱和。更为不利的是这种酶不能使 任何结合至磷脂的脂肪酸去饱和。这种酶仅仅转化辅酶A-脂肪酸酯。

脂肪酸按照2或4个C原子通过延伸酶加以延伸对于分别产生C20和 C22 PUFA极其重要。这个过程经历4个步骤。第一步是通过酮酰基辅酶A 合成酶(KCS，此处以下称为延伸酶)使丙二酸单酰辅酶A和脂肪酸酰基 辅酶A缩合。随后是一个还原步骤(酮酰基辅酶A还原酶，KCR)、一 个脱水步骤(脱水酶)和一个最后的还原步骤(烯酰辅酶A还原酶)。据 推测延伸酶的活性影响了这个过程整体的特异性和速率(Millar和Kunst， 1997 Plant Journal 12：121-131)。

过去已进行了获取延伸酶基因的多次尝试。Millar和Kunst，1997 (Plant Journal 12：121-131)并且Millar等1999，(Plant Cell 11： 825-838)描述了用于合成单不饱和长链脂肪酸(C22:1)的植物延伸酶的 特征和用于合成在植物中形成蜡的极长链脂肪酸(C28～C32)的植物延伸 酶的特征。关于花生四烯酸和EPA合成的描述可在例如WO0159128、 WO0012720、WO02077213和WO0208401中找到。多不饱和C24脂肪 酸的合成在例如Tvrdik等，2000，JCB 149：707-717或WO0244320中得 到描述。

迄今仍未描述在天然不产生DHA(C22:6 n-3)的生物中用于产生DHA 的特异性延伸酶。目前只描述了可提供C20或C24脂肪酸的延伸酶。迄今 没有Δ5延伸酶活性的描述。

高等植物包含多不饱和脂肪酸如亚油酸(C18:2)和亚麻酸(C18:3)。 但ARA、EPA和DHA在所有高等植物的种子油中完全找不到或仅少量发 现(E.Ucciani：Nouveau Dictionnaire des Huiles Végétales[New Dictionary of Vegetable oils].Technique & Documentation-Lavoisier， 1995.ISBN：2-7430-0009-0)。然而在高等植物，优选在油料作物例如油 菜籽、亚麻子、向日葵和大豆产生LCPUFA将是有利的因为有可能经济地 获得大量高质量的LCPUFA用于食品工业、动物营养和药用目的。为实现 此目标，编码LCPUFA生物合成酶基因通过重组方法向油料作物中导入并 且在其中表达这些基因是有利的。例如这些基因编码例如Δ6去饱和酶、Δ6 延伸酶、Δ5去饱和酶或Δ4去饱和酶。这些基因可有利地从产生LCPUFA 并且使LCPUFA掺入膜或三酰甘油酯的微生物和低等植物中分离。因此已 有可能从藓类植物展叶剑叶藓(Physcomitrella patens)中分离Δ6去饱和 酶基因并且从展叶剑叶藓和秀丽线虫(C.elegans)中分离Δ6延伸酶基因。

包含并表达编码LCPUFA生物合成酶的基因并且由此产生LCPUFA 的第一个转基因植物例如在DE-A-10219203(用于在植物中产生多不饱和 脂肪酸的方法)中得到首次描述。然而这些植物仅以需要进一步优化而用 于目前工厂中油料加工的量产生了LCPUFA。

为实现以这类多不饱和脂肪酸强化食物和/或饲料，用于产生尤其是在 真核细胞系统内产生这类多不饱和脂肪酸的简单、廉价的方法极为需要。

因此本发明的一个目标是提供适于合成LCPUFA的其他基因或酶，尤 其提供具有Δ5-延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ12去饱和酶或Δ6去 饱和酶活性的基因以产生多不饱和脂肪酸。本发明的又一个目标是提供有 可能自ω6脂肪酸转化为ω3脂肪酸的基因或酶。本发明的另一个目标是开 发在生物中，有利地在真核生物中，优选地在植物或微生物中产生多不饱 和脂肪酸的方法。这个目标通过本发明的用于转基因生物中产生式I化合 物的方法实现，其中以所述转基因生物的总脂类含量为基础，这种转基因 生物具有至少1％重量含量的式I化合物，其中式I化合物为：

所述的方法包括如下步骤：

a)将至少一个编码Δ9延伸酶和/或Δ6去饱和酶活性的核酸序列导入生 物体，以及

b)将至少一个编码Δ8去饱和酶和/或Δ6延伸酶活性的核酸序列导入生 物体，以及

c)将至少一个编码Δ5去饱和酶活性的核酸序列导入生物体，以及

d)将至少一个编码Δ5延伸酶活性的核酸序列导入生物体，以及

e)将至少一个编码Δ4去饱和酶活性的核酸序列导入生物体，并且在 此方法中式I的变量和取代基的含义如下：

R1＝羟基、辅酶A(硫酯)、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、 溶血磷脂酰甘油、溶血二磷脂酰甘油、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌 醇、鞘碱(sphingo base)或式II的基团，

其中在所述的式II中

R2＝氢、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶 血二磷脂酰甘油、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇或饱和或不饱和的 C2～C24烷基羰基，

R3＝氢、饱和或不饱和的C2～C24烷基羰基，或R2和R3彼此独立地是 式Ia的基团：

其中所述的式Ia中

n＝2、3、4、5、6、7或9，m＝2、3、4、5或6并且p＝0或3。

式I中的R1为羟基、辅酶A(硫酯)、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰 乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血二磷脂酰甘油、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血 磷脂酰肌醇、鞘碱或式II的基团。

以上提及的基团R1总是与式I的硫酯形式化合物结合。

式II中的R2为氢、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰 甘油、溶血二磷脂酰甘油、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇或饱和或 不饱和C2～C24烷基羰基。

可提及的烷基是包含一个或多个双键的取代或未取代、饱和或不饱和 的C2～C24烷基羰基链如乙基羰基、正丙基羰基、正丁基羰基、正戊基羰基、 正己基羰基、正庚基羰基、正辛基羰基、正壬基羰基、正癸基羰基、正十 一烷基羰基、正十二烷基羰基、正十三烷基羰基、正十四烷基羰基、正十 五烷基羰基、正十六烷基羰基、正十七烷基羰基、正十八烷基羰基、正十 九烷基羰基、正二十烷基羰基、正二十二烷基羰基或正二十四烷基羰基。 包含一个或多个双键的饱和或不饱和C10～C22烷基羰基如正癸基羰基、正 十一烷基羰基、正十二烷基羰基、正十三烷基羰基、正十四烷基羰基、正 十五烷基羰基、正十六烷基羰基、正十七烷基羰基、正十八烷基羰基、正 十九烷基羰基、正二十烷基羰基、正二十二烷基羰基或正二十四烷基羰基 为优选的。尤其优选包含一个或多个双键的饱和和/或不饱和C10～C22烷基 羰基如C10烷基羰基、C11烷基羰基、C12烷基羰基、C13烷基羰基、C14烷 基羰基、C16烷基羰基、C18烷基羰基、C20烷基羰基或C22烷基羰基。非常 尤其优选包含一个或多个双键的饱和或不饱和C16～C22烷基羰基如C16烷 基羰基、C18烷基羰基、C20烷基羰基或C22烷基羰基。这些有利的基团可 以包含二、三、四、五或六个双键。脂肪酸链中具有20或22个碳原子的 尤其优选的基团包含多达六个双键，有利地包含三、四、五或六个双键， 尤其优选地包含五或六个双键。以上提到的所有基团均衍生自相应的脂肪 酸。

式II中的R3为氢、饱和或不饱和的C2～C24烷基羰基。

可提及的烷基是包含一个或多个双键的取代或未取代、饱和或不饱和 的C2～C24烷基羰基链例如乙基羰基、正丙基羰基、正丁基羰基、正戊基羰 基、正己基羰基、正庚基羰基、正辛基羰基、正壬基羰基、正癸基羰基、 正十一烷基羰基、正十二烷基羰基、正十三烷基羰基、正十四烷基羰基、 正十五烷基羰基、正十六烷基羰基、正十七烷基羰基、正十八烷基羰基、 正十九烷基羰基、正二十烷基羰基、正二十二烷基羰基或正二十四烷基羰 基。优选包含一个或多个双键的饱和或不饱和C10～C22烷基羰基例如正癸 基羰基、正十一烷基羰基、正十二烷基羰基、正十三烷基羰基、正十四烷 基羰基、正十五烷基羰基、正十六烷基羰基、正十七烷基羰基、正十八烷 基羰基、正十九烷基羰基、正二十烷基羰基、正二十二烷基羰基或正二十 四烷基羰基。尤其优选包含一个或多个双键的饱和和/或不饱和C10～C22烷 基羰基例如C10烷基羰基、C11烷基羰基、C12烷基羰基、C13烷基羰基、 C14烷基羰基、C16烷基羰基、C18烷基羰基、C20烷基羰基或C22烷基羰基。 非常尤其优选包含一个或多个双键的饱和或不饱和C16～C22烷基羰基如 C16烷基羰基、C18烷基羰基、C20烷基羰基或C22烷基羰基。这些有利的基 团可包含二、三、四、五或六个双键。在脂肪酸链中具有20或22个碳原 子的尤其优选的基团包含多达六个双键，有利地包含三、四、五或六个双 键，尤其优选地包含五或六个双键。以上提到的所有基团均衍生自相应的 脂肪酸。

以上提及的R1、R2和R3基团可以被羟基和/或环氧基取代和/或可以 包含三键。

本发明的方法中所产生的多不饱和脂肪酸有利地包含至少两个，有利 地包含三、四、五或六个双键。这些脂肪酸尤其有利地包含四、五或六个 双键。方法中所产生的脂肪酸在脂肪酸链中有利地具有18、20或22个C原子；这些脂肪酸在脂肪酸链中优选地包含20或22个碳原子。饱和的脂 肪酸通过方法中所用核酸有利地得以小程度地反应至或者完全未得到反 应。小程度应当理解为与多不饱和脂肪酸相比，饱和脂肪酸以低于5％的 活性、有利地以低于3％、尤其有利地以低于2％、非常尤其有利地以低于 1、0.5、0.25或0.125％的活性反应。这些已经产生的脂肪酸可以在方法中 作为单个产物产生或在脂肪酸混合物中出现。

本发明方法中所用的核酸序列是编码具有Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、 Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶活性 的多肽的经分离的核酸序列。

本发明方法中有利使用的核酸序列是那些编码具有Δ9延伸酶、Δ6去 饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和 酶活性的多肽的核酸序列，这些核酸序列选自：

a)具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO： 7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、 SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、 SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、 SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、 SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、 SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、 SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、 SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、 SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、 SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、 SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、 SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO： 117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO： 135、SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183中所示序列的核酸序列，或

b)作为遗传密码简并结果可由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO： 6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、 SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、 SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、 SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、 SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、 SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、 SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、 SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、 SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、 SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：92、 SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、 SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO： 114、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132或SEQ ID NO： 134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138或SEQ ID NO：184中所示 氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、 SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、 SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、 SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、 SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、 SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、 SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、 SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、 SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、 SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、 SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、 SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、 SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO： 117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO： 135、SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183中所示核酸序列的衍生物，其 编码与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO： 8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、、SEQ ID NO： 16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO： 24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO： 32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO： 40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO： 48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO： 60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO： 68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO： 76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO： 84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO： 94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO： 102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO： 118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132 or SEQ ID NO：134、SEQ ID NO： 136、SEQ ID NO：138或SEQ ID NO：184在氨基酸水平具有至少40％ 同一性的多肽或者/并且具有Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6 延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶活性。

式I和II中的取代基R2或R3有利地并彼此独立地是饱和或不饱和的 C18～C22烷基羰基，这些取代基尤其有利地彼此独立地是具有至少两个双键 的不饱和的C18、C20或C22烷基羰基。

方法中一个优选实施方案的特征在于将这样的核酸序列额外地导入生 物体，其中所述核酸序列编码具有ω3去饱和酶活性的多肽，选自：

a)具有SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：105中所示序列的核酸序列，或

b)作为遗传密码简并结果可由SEQ ID NO：88或SEQ ID NO：106中所示 的氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：105中所示核酸序列的衍生物，其编码 与SEQ ID NO：88或SEQ ID NO：106在氨基酸水平具有至少60％同一性 的多肽并且具有ω3去饱和酶活性。

在另一个优选实施方案中，方法包括向生物体中额外地导入这样的核 酸序列，其中所述核酸序列编码具有Δ12去饱和酶活性的多肽，选自：

a)具有SEQ ID NO：107或SEQ ID NO：109中所示序列的核酸序列，或

b)作为遗传密码简并结果可由SEQ ID NO：108或SEQ ID NO：110中所 示的氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：107或SEQ ID NO：109中所示核酸序列的衍生物，其编 码与SEQ ID NO：108或SEQ ID NO：110在氨基酸水平具有至少60％同 一性的多肽并且具有Δ12去饱和酶活性。

以上提及的Δ12去饱和酶序列可与方法中所用的并且编码Δ9延伸酶、 Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4 去饱和酶的核酸序列共同使用，单独或与ω3去饱和酶序列联合使用。

表1显示了核酸序列、来源生物和序列ID号  No. 生物体 活性 序列号  1. 细小裸藻(Euglena gracilis) Δ8-去饱和酶 SEQ ID NO：1  2. 绿光等鞭金藻(Isochrysis galbana) Δ9-延伸酶 SEQ ID NO：3  3. 三角褐指藻(Phaedodactylum tricornutum) Δ5-去饱和酶 SEQ ID NO：5  4. 角齿藓(Ceratodon pupureus) Δ5-去饱和酶 SEQ ID NO：7  5. 展叶剑叶藓(Physcomitrella patens) Δ5-去饱和酶 SEQ ID NO：9  6. 破囊壶菌属中的种(Thraustrochytrium sp.) Δ5-去饱和酶 SEQ ID NO：11  7. 高山被孢霉(Mortierella alpina) Δ5-去饱和酶 SEQ ID NO：13  8. 秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans) Δ5-去饱和酶 SEQ ID NO：15  9. 琉璃苣(Borago officinalis) Δ6-去饱和酶 SEQ ID NO：17  10. 角齿藓 Δ6-去饱和酶 SEQ ID NO：19  11. 三角褐指藻 Δ6-去饱和酶 SEQ ID NO：21  12. 展叶剑叶藓 Δ6-去饱和酶 SEQ ID NO：23  13. 秀丽隐杆线虫 Δ6-去饱和酶 SEQ ID NO：25  14. 展叶剑叶藓 Δ6-延伸酶 SEQ ID NO：27  15. 破囊壶菌属中的种 Δ6-延伸酶 SEQ ID NO：29  16. 致病疫霉(Phytopthera infestans) Δ6-延伸酶 SEQ ID NO：31  17. 高山被孢霉 Δ6-延伸酶 SEQ ID NO：33  18. 高山被孢霉 Δ6-延伸酶 SEQ ID NO：35   19.   秀丽隐杆线虫   Δ6-延伸酶   SEQ ID NO：37   20.   细小裸藻   Δ4-去饱和酶   SEQ ID NO：39   21.   破囊壶菌属中的种   Δ4-去饱和酶   SEQ ID NO：41   22.   假矮海链藻(Thalassiosira pseudonana)   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：43   23.   假矮海链藻   Δ6-延伸酶   SEQ ID NO：45   24.   寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：47   25.   寇氏隐甲藻   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：49   26.   虹鳟(Oncorhynchus mykiss)   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：51   27.   虹鳟   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：53   28.   假矮海链藻   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：59   29.   假矮海链藻   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：61   30.   假矮海链藻   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：63   31.   鲜黄破囊壶菌(Thraustrochytrium aureum)   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：65   32.   Ostreococcus tauri   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：67   33.   Ostreococcus tauri   Δ6-延伸酶   SEQ ID NO：69   34.   有粉报春(Primula farinosa)   Δ6-去饱和酶   SEQ ID NO：71   35.   高穗花报春(Primula vialii)   Δ6-去饱和酶   SEQ ID NO：73   36.   Ostreococcus tauri   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：75   37.   Ostreococcus tauri   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：77   38.   Ostreococcus tauri   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：79   39.   Ostreococcus tauri   Δ6-延伸酶   SEQ ID NO：81   40.   破囊壶菌属中的种   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：83   41.   假矮海链藻   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：85   42.   致病疫霉   ω3-去饱和酶   SEQ ID NO：87   43.   Ostreococcus tauri   Δ6-去饱和酶   SEQ ID NO：89   44.   Ostreococcus tauri   Δ5-去饱和酶   SEQ ID NO：91   45.   Ostreococcus tauri   Δ5-去饱和酶   SEQ ID NO：93   46.   Ostreococcus tauri   Δ4-去饱和酶   SEQ ID NO：95   47.   假矮海链藻   Δ6-去饱和酶   SEQ ID NO：97   48.   假矮海链藻   Δ5-去饱和酶   SEQ ID NO：99   49.   假矮海链藻   Δ5-去饱和酶   SEQ ID NO：101   50.   假矮海链藻   Δ4-去饱和酶   SEQ ID NO：103   51.   假矮海链藻   ω3-去饱和酶   SEQ ID NO：105   52.   Ostreococcus tauri   Δ12-去饱和酶   SEQ ID NO：107   53.   假矮海链藻   Δ12-去饱和酶   SEQ ID NO：109   54.   Ostreococcus tauri   Δ6-延伸酶   SEQ ID NO：111   55.   Ostreococcus tauri   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：113   56.   非洲爪蟾(Xenopus laevis)(BC044967)   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：117   57.   玻璃海鞘(Ciona intestinalis)(AK112719)   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：119   58.   细小裸藻   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：131   59.   细小裸藻   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：133   60.   拟南芥菜(Arabidopsis thaliana)   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：135   61.   拟南芥菜   Δ5-延伸酶   SEQ ID NO：137   62.   三角褐指藻   Δ6-延伸酶   SEQ ID NO：183

方法中所产生的多不饱和脂肪酸有利地结合膜脂类和/或三酰甘油酯， 但是也可以在生物中以游离脂肪酸或与其它脂肪酸酯的结合形式出现。在 本上下文中，它们可作为“纯的产物”或者有利地以多种脂肪酸的混合物或 不同甘油酯的混合物的形式出现。三酰甘油酯中所结合的多种脂肪酸可由 具有4至6个C原子的短链脂肪酸、具有8至12个C原子的中等链脂肪 酸或14至24个C原子的长链脂肪酸衍生，优选从长链脂肪酸衍生，更为 优选地从具有18、20和/或22个C原子的长链多不饱和脂肪酸衍生。

本发明的方法有利地产生了在脂肪酸酯中具有至少两个双键，有利地 在脂肪酸酯中具有至少三个、四个、五个或六个双键，尤其有利地在脂肪 酸酯中具有至少五个或六个双键的多不饱和C18、C20和/或C22脂肪酸分子 的脂肪酸酯并且有利地导致亚油酸(LA，C18:2Δ9，12)、γ亚麻酸(GLA， C18:3Δ6，9，12)、硬脂艾杜糖酸(SDA，C18:4Δ6，9，12，15)、二高γ亚麻酸(DGLA， 20:3Δ8，11，14)、ω3花生四烯酸(ETA，C20:4Δ5，8，11，14)、花生四烯酸(ARA， C20:4Δ5，8，11，14)、二十碳五烯酸(EPA，C20:5Δ5，8，11，14，17)、ω6二十二碳五 烯酸(C22:5Δ4，7，10，13，16)、ω6二十二碳四烯酸(C22:4Δ7，10，13，16)、ω3二十 二碳五烯酸(DPA，C22:5Δ7，10，13，16，19)、二十二碳六烯酸(DHA， C22:6Δ4，7，10，13，16，19)或这些脂肪酸混合物的合成，优选导致ARA、EPA和/ 或DHA的合成。非常尤其优选产生了ω3脂肪酸如EPA和/或DHA。

具有多不饱和的C18、C20和/或C22脂肪酸分子的脂肪酸酯可以油或脂 的形式，例如以化合物如鞘脂类、磷酸甘油酯、脂、糖脂例如糖鞘脂类、 磷脂例如磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂 酰肌醇或二磷脂酰甘油、单酰甘油酯、二酰甘油酯、三酰甘油酯或者其它 脂肪酸酯例如乙酰基辅酶A酯的形式分离，其中所述的脂肪酸酯包含源于 已用来制备脂肪酸酯的生物体的具有至少两个、三个、四个、五个或六个 双键，优选地具有五个或六个双键的多不饱和脂肪酸；这些脂肪酸酯优选 地以其二酰甘油酯、三酰甘油酯和/或以磷脂酰胆碱的形式，尤其优选地以 三酰甘油酯的形式分离。除了这些酯以外，多不饱和脂肪酸也可以作为游 离的或结合于其它化合物中的脂肪酸在生物，有利地在植物中存在。通常 以上提到的多种化合物(脂肪酸酯和游离脂肪酸)在生物体中以如下的大 致分布出现，即以多种化合物的总体计为100％重量，甘油三酯占80至90％ 重量、二酰甘油占2至5％重量、单酰甘油占5至10％重量、游离脂肪酸 占1至5％重量、磷脂占2至8％重量。

本发明的方法产生了LCPUFA，其中所产生的LCPUFA的含量以转 基因生物，优选地以转基因植物中的总脂肪酸为基础占至少3％重量、有 利地占至少5％重量，优选地占至少8％重量，尤其优选地占至少10％重 量、最为优选地占至少15％重量。在本上下文中仅仅提到两个例子，将宿 主生物中的C18和/或C20脂肪酸转化了至少10％、优选地至少20％、尤其 优选地至少30％、最优选地至少40％以产生相应的产物如DPA或DHA 是有利的。这些脂肪酸有利地以结合的形式产生。在本发明方法中所用的 核酸的辅助下，这些不饱和脂肪酸可以在已经有利地产生的甘油三酯的 sn1、sn2和/或sn3位置处定位。由于多个反应步骤在本发明的方法中通过 起始化合物亚油酸(C18:2)和亚麻酸(C18:3)实施，故方法的终产物例 如花生四烯酸(ARA)，二十碳五烯酸(EPA)、ω6二十二碳五烯酸或 DHA不能作为绝对纯的产物获得；在终产物中总是出现微小痕量的前体。 例如假设亚油酸和亚麻酸两者均在起始生物和起始植物中出现，则终产物 如ARA、EPA或DHA作为混合物出现。以所讨论终产物的量为基础，前 体应当有利地不超过20％重量、优选地不超过15％重量、尤其优选地不超 过10％重量，最优选地不超过5％重量。有利地，根据本发明的方法，仅 仅结合的或作为游离酸的ARA、EPA或仅DHA作为转基因植物中的终产 物得到产生。如果同时产生化合物ARA、EPA和DHA，它们有利地以至 少1∶1∶2(EPA∶ARA∶DHA)、有利地以至少1∶1∶3、优选地以至少1∶1∶4、 尤其优选地以1∶1∶5的比率得到产生。

由本发明的方法所产生的脂肪酸酯或脂肪酸混合物有利地包含6至 15％的棕榈酸、1至6％的硬脂酸、7-85％的油酸、0.5至8％的11-十八碳 烯酸、0.1至1％的花生酸、7至25％的饱和脂肪酸、8至85％的单不饱和 脂肪酸和60至85％的多不饱和脂肪酸，每种情况均以100％为基础并且以 生物中总脂肪酸含量为基础。以总脂肪酸含量为基础，在脂肪酸酯或脂肪 酸混合物出现的有利多不饱和脂肪酸优选地是至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、 0.6、0.7、0.8、0.9或1％的花生四烯酸。而且通过本发明方法所产生的 脂肪酸酯或脂肪酸混合物有利地包含选自芥酸(13-二十二碳烯酸)、苹婆 酸(9，10-亚甲基十八碳-9-烯酸)、锦葵酸(8，9-亚甲基十七碳-8-烯酸)、 大风子油酸(环戊烯十二烷酸)、呋喃脂肪酸(9，12-环氧十八碳-9，11-二烯 酸)、斑鸠菊酸(9，10-环氧十八碳-12-烯酸)、果脂酸(6-十八碳炔酸)、 6-十九碳炔酸、santalbic acid(反11-十八碳烯-9-炔酸)、6，9-十八碳烯炔 酸、pyrulic acid(反10-十七烯-8-炔酸)、crepenyninic acid(9-十八烯-12- 炔酸)、13，14-二氢oropheic acid、十八碳-13-烯-9，11-二炔酸、伞形花子 油酸(顺-6-十八烯酸)、9顺，12反-十八碳二烯酸、金盏花素酸(calendulic acid)(8反10反12顺-十八碳三烯酸)、梓甙酸(catalpic acid)(9反11反 13顺-十八碳三烯酸)、桐酸(9顺11反13反-十八碳三烯酸)、iacaric acid (8顺10反12顺-十八碳三烯酸)、石榴酸(9顺11反13顺-十八碳三烯 酸)、麦饼树酸(9顺11反13反15顺-十八碳四烯酸)、皮诺敛酸(pinolenic acid)(全-顺-5，9，12-十八碳三烯酸)、laballenic acid(5，6-十八碳二烯丙 二烯酸)、蓖麻油酸(12-羟油酸)和/或革盖菌素酸(coriolic acid)(13- 羟-9顺，11反-十八碳二烯酸)的脂肪酸。上述脂肪酸通常有利地仅在本发 明方法所产生的脂肪酸酯或脂肪酸的混合物中痕量地存在，这就是说，以 总脂肪酸为基础，它们的存在小于30％、优选地小于25％、24％、23％、 22％或21％、尤其优选地低于20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％或 5％，非常尤其优选地小于4％、3％、2％或1％。在本发明更为优选的形 式中，以总脂肪酸为基础，这些上述脂肪酸的存在小于0.9％、0.8％、0.7％、 0.6％或0.5％，尤其优选地小于0.4％、0.3％、0.2％、0.1％。以总脂肪酸 为基础，由本发明方法所产生的脂肪酸酯或脂肪酸混合物有利地包含小于 0.1％和/或无丁酸、无胆固醇、无鰶鱼酸(二十二碳五烯酸，C22:5Δ4，8，12，15，21) 以及无尼生酸(二十四碳六烯酸，C23:6Δ3，8，12，15，18，21)。

当脂肪酸以GC分析检测时，与非转基因的起始生物如酵母、藻类、 真菌或植物如拟南芥(arabidopsis)或亚麻子相比较，由于核酸序列或在 方法中所用的核酸序列，多不饱和脂肪酸的产量可获得至少50％、有利地 为至少80％、尤其有利地为至少100％、极其有利地为至少150％的提高 (见实施例)。

化学纯的多不饱和脂肪酸或脂肪酸组合物也能通过以上描述的方法合 成。为达此目的，脂肪酸或脂肪酸组合物按照已知的方法如通过提取、蒸 馏、结晶、层析或这些方法的组合从生物如微生物或植物，或从其中生物 已经在其内或其上生长的培养基，或从生物和培养基中分离。这些化学纯 的脂肪酸或脂肪酸组合物有利地在食品工业、化妆品应用并且尤其在药学 领域内应用。

原则上在本发明方法中用于产生的合适生物可以是任何生物如微生 物、非人类动物或植物。

合适的植物原则上是能合成脂肪酸的所有植物如所有双子叶或单子叶 植物、藻类或藓类。有利的植物选自Adelotheciaceae、漆树科 (Anacardiaceae)、菊科(Asteraceae)、伞形科(Apiaceae)、桦木科 (Betulaceae)、紫草科(Boraginaceae)、十字花科(Brassicaceae)、 凤梨科(Bromeliaceae)、番木瓜科(Caricaceae)、大麻科(Cannabaceae)、 旋花科(Convolvulaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、隐甲藻科 (Crypthecodiniaceae)、葫芦科(Cucurbitaceae)、牛毛藓科(Ditrichaceae)、 胡颓子科(Elaeagnaceae)、杜鹃花科(Ericaceae)、大戟科(Euphorbiaceae)、 豆科(Fabaceae)、牻牛儿苗科(Geraniaceae)、禾本科(Gramineae)、 核桃科(Juglandaceae)、樟科(Lauraceae)、豆科(Leguminosae)、 亚麻科(Linaceae)、裸藻科(Euglenaceae)、草绿藻科或蔬菜植物或装 饰性植物如万寿菊属(Tagetes)。

可提到的例子是选自以下的植物：Adelotheciaceae如剑叶藓属，例如 展叶剑叶藓的属和种、漆树科如黄连木属(Pistacia)、芒果属 (Mangifera)、腰果属(Anacardium)例如阿月混子(Pistacia vera[阿 月混子实])、芒果(Mangifer indica[芒果])或腰果(Anacardium oceidentale[腰果])的属和种、菊科如金盏花属(Calendula)、红蓝花属 (Carthamus)、矢车菊属(Centaurea)、菊苣属(Cichorium)、菜蓟 属(Cynara)、向日葵属(Helianthus)、莴苣属(Lactuca)、Locusta、 万寿菊属、缬草属(Valeriana)例如金盏花(Calendula officinalis[普通 金盏花])、红花(Carthamus tinctorius[红花])、矢车菊(Centaurea cyanus [矢车菊])、菊苣(Cichorium intybus[菊苣])、洋蓟(Cynara scolymus[朝 鲜蓟])、向日葵(Helianthus annus [向日葵])、莴苣(Lactuca sativa)、 皱叶莴苣(Lactuca crispa)、芋(Lactuca esculenta)、毒莴苣的某些种 (Lactuca scariola L.ssp.Sativa)、Lactuca scariola L.var.integrata、 Lactuca scariola L.var.integrifolia、莴苣romana亚种(Lactuca sativa subsp.Romana)、Locusta communis、莴苣缬草(Valeriana locusta[沙 拉蔬菜])、香叶万寿菊(Tagetes lucida)、万寿菊(Tagetes erecta)或 细叶万寿菊(Tagetes tenuifolia)[非洲或法国金盏花]的属和种、伞形科如 胡萝卜属(Daucus)例如胡萝卜(Daucus carota[胡萝卜])的属和种、桦 木科如榛属(Corylus)例如欧洲榛(Corylus avellana)或榛子(Corylus colurna[榛子])的属和种、紫草科如琉璃苣属(Borago)例如琉璃苣 (Borago officinalis[琉璃苣])的属和种、十字花科如芸苔属(Brassica)、 亚麻荠属(Camelina)、Melanosinapis、白芥属(Sinapis)、拟南芥属 (Arabadopsis)例如欧洲油菜(Brassica napus)、芜青属某些种(Brassica rapa ssp.[油菜籽])、野生欧白芥(Sinapis arvensis)、芥菜(Brassica juncea)、Brassica juncea var.juncea、皱叶芥菜(Brassica juncea var. crispifolia)、大叶芥菜(Brassica juncea var.foliosa)、黑芥(Brassica nigra)、Brassica sinapioides、亚麻荠(Camelina sativa)、芥菜 (Melanosinapis communis[芥菜])、甘蓝(Brassica oleracea[饲用甜菜]) 或拟南芥菜(Arabidopsis thaliana)的属和种、凤梨科如凤梨属(Anana)、 Bromelia(菠萝)例如菠萝(Anana comosus)、Ananas ananas或Bromelia comosa[菠萝]的属和种、番木瓜科如番木瓜属(Carica)例如番木瓜 (Carica papaya[番木瓜])的属和种、大麻科如大麻属(Cannabis)例如 大麻(Cannabis sativa[大麻])的属和种、旋花科如番薯属(Ipomea)、 旋花属(Convolvulus)例如甘薯(Ipomoea batatus)、提琴叶牵牛花 (Ipomoea pandurata)、Convolvulus batatas、Convolvulus tiliaceus、 Ipomoea fastigiata、Ipomoea tiliacea、三裂叶薯(Ipomoea triloba)或 Convolvulus panduratus[甜薯、番薯]的属和种、藜科如甜菜属(Beta vulgaris)例如甜菜(Beta vulgaris)、Beta vulgaris var.altissima、甜菜 普通变种(Beta vulgaris var.vulgaris)、Beta maritima、甜菜宿根变种 Beta vulgaris var.perennis、Beta vulgaris var.Conditiva或Beta vulgaris var.esculenta[甜菜]的属和种、隐甲藻科如隐甲藻属例如寇氏隐甲藻 (Cryptecodinium cohnii)的属和种、葫芦科如南瓜属(Cucurbita)例如 笋瓜(Cucurbita maxima)、灰子南瓜(Cucurbita mixta)、西葫芦 (Cucurbita pepo)或南瓜(Cucurbita moschata[西葫芦/南瓜])的属和种、 桥弯藻科(Cymbellaceae)如Amphora、桥弯藻属(Cymbella)、 Okedenia、褐指藻属(Phaeodactylum)、仰叶藓属(Reimeria)例如三 角褐指藻的属和种、牛毛藓科(Ditrichaceae)如牛毛藓属、高地藓属 (Astomiopsis)、角齿藓属(Ceratodon)、Chrysoblastella、牛毛藓属 (Ditrichum)、对叶藓属(Distichium)、Eccremidium、Lophidion、 Philibertiella、丛毛藓属(Pleuridium)、石缝藓属(Saelania)、毛齿藓 属(Trichodon)、Skottsbergia，例如以下的属和种：Ceratodon antarcticus、Ceratodon columbiae、Ceratodon heterophyllus、角齿藓 (Ceratodon purpurascens)、Ceratodon purpureus、Ceratodon purpureus ssp.convolutus、Ceratodon purpureus ssp.Stenocarpus、角齿 藓圆叶变种(Ceratodon purpureus var.Rotundifolius)、Ceratodon ratodon、疣蒴角齿藓(Ceratodon stenocarpus)、Chrysoblastella chilensis、Ditrichum ambiguum、Ditrichum brevisetum、皱波牛毛藓 (Ditrichum crispatissimum)、卷叶牛毛藓(Ditrichum difficile)、 Ditrichum falcifolium、扭叶牛毛藓(Ditrichum flexicaule)、Ditrichum giganteum、牛毛藓(Ditrichum heteromallum)、Ditrichum lineare、 Ditrichum lineare、Ditrichum montanum、Ditrichum montanum、黄牛 毛藓(Ditrichum pallidum)、Ditrichum punctulatum、细叶牛毛藓 (Ditrichum pusillum)、细叶牛毛藓扭叶变种(Ditrichum pusillum var. tortile、Ditrichum rhynchostegium)、Ditrichum schimperi、Ditrichum tortile、对叶藓(Distichium capillaceum)、小对叶藓(Distichium hagenii)、斜蒴对叶藓(Distichium inclinatum)、Distichium macounii、 Eccremidium floridanum、Eccremidium whiteleggei、Lophidion strictus、尖叶丛毛藓(Pleuridium acuminatum)、Pleuridium alternifolium、Pleuridium holdridgei、Pleuridium mexicanum、 Pleuridium ravenelii、丛毛藓(Pleuridium subulatum)、石缝藓(Saelania glaucescens)、Trichodon borealis、毛齿藓(Trichodon cylindricus)或 Trichodon cylindricus var.oblongus、胡颓子科如胡颓子属(Elaeagnus) 例如油橄榄(Olea europaea[橄榄])的属和种、杜鹃花科如山月桂属 (Kalmia)例如阔叶山月桂(Kalmia latifolia)、狭叶山月桂(Kalmia angustifolia)、小叶山月桂(Kalmia microphylla)、沼泽山月桂(Kalmia polifolia)、西洋山月桂(Kalmia occidentalis)、Cistus chamaerhodendros 或山月桂(Kalmia lucida[山月桂])的属和种、裸藻科如囊胞藻属 (Ascoglena)、变胞藻属(Astasia)、胶柄藻属(Colacium)、 Cyclidiopsis、裸藻属、拟裸藻属(Euglenopsis)、Hyalaphacus、克氏藻 属(Khawkinea)、鳞孔藻属(Lepocinclis)、扁裸藻属(Phacus)、陀 螺藻属(Strombomonas)、囊裸藻属(Trachelomonas)例如细小裸藻的 属和种；大戟科如木薯属(Manihot)、Janipha、麻风树属(Jatropha)、 蓖麻属(Ricinus)例如木薯(Manihot utilissima)、Janipha manihot、 Jatropha manihot、Manihot aipil、甜木薯(Manihot dulcis)、Manihot manihot、Manihot melanobasis、木薯(Manihot esculenta[木薯])或蓖麻 (Ricinus communis[蓖麻])的属和种、豆科如豌豆属(Pisum)、合欢属 (Albizia)、Cathormion、Feuillea、Inga、Pithecolobium、金合欢属 (Acacia)、含羞草属(Mimosa)、Medicajo、大豆属(Glycine)、扁 豆属(Dolichos)、菜豆属Phaseolus、大豆属(Soybean)例如豌豆(Pisum sativum)、饲料豌豆(Pisum arvense)、Pisum humile[豌豆]、Albizia berteriana、合欢(Albizia julibrissin)、阔荚合欢(Albizia lebbeck)、 Acacia berteriana、Acacia littoralis、Albizia berteriana、Albizzia berteriana、Cathormion berteriana、Feuillea berteriana、Inga fragrans、Pithecellobium berterianum、Pithecellobium fragrans、 Pithecolobium berterianum、Pseudalbizzia berteriana、Acacia julibrissin、Acacia nemu、Albizia nemu、Feuilleea julibrissin、Mimosa julibrissin、Mimosa speciosa、Sericanrda julibrissin、阔荚金合欢 (Acacia lebbeck)、Acacia macrophylla、大叶合欢(Albizia lebbeck)、 Feuilleea lebbeck、大叶含羞草(Mimosa lebbeck)、Mimosa speciosa、紫 苜蓿(Medicago sativa)、野苜蓿(Medicago falcata)、杂交苜蓿(Medicago varia)[紫花苜蓿]、大豆(Glycine max)、镰扁豆(Dolichos soja)、宽 叶蔓豆(Glycine gracilis)、大豆(Glycine hispida)、大菜豆(Phaseolus max)、Soja hispida或Soja max[大豆]的属和种、葫芦藓科 (Funariaceae)如Aphanorrhegma、Entosthodon、葫芦藓属(Funaria)、 剑叶藓属(Physcomitrella)、立碗藓属(Physcomitrium)例如 Aphanorrhegma serratum、Entosthodon attenuatus、Entosthodon bolanderi、Entosthodon bonplandii、Entosthodon californicus、 Entosthodon drummondii、Entosthodon jamesonii、Entosthodon leibergii、Entosthodon neoscoticus、Entosthodon rubrisetus、 Entosthodon spathulifolius、Entosthodon tucsoni、美国葫芦藓(Funaria americana)、Funaria bolanderi、齿叶葫芦藓(Funaria calcarea)、加利 福尼亚葫芦藓(Funaria californica)、Funaria calvescens、皱叶葫芦藓 (Funaria convoluta)、Funaria flavicans、Funaria groutiana、葫芦藓 (Funaria hygrometrica)、葫芦藓北极变种(Funaria hygrometrica var. Arctica)、葫芦藓暖地变种(Funaria hygrometrica var.Calvescens)、葫 芦藓皱叶变种(Funaria hygrometrica var.Convoluta)、Funaria hygrometrica var.muralis、Funaria hygrometrica var.utahensis、小口葫 芦藓(Funaria microstoma)、Funaria microstoma var.obtusifolia、刺边 葫芦藓(Funaria muhlenbergii)、Funaria orcuttii、Funaria plano-convexa、Funaria polaris、Funaria ravenelii、Funaria rubriseta、 Funaria serrata、Funaria sonorae、Funaria sublimbatus、Funaria tucsoni、加利福尼亚剑叶藓(Physcomitrella californica)、展叶剑叶藓、 Physcomitrella readeri、Physcomitrium australe、加利福尼亚立碗藓 (Physcomitrium californicum)、Physcomitrium collenchymatum、 Physcomitrium coloradense、Physcomitrium cupuliferum、 Physcomitrium drummondii、红蒴立碗藓(Physcomitrium eurystomum)、Physcomitrium flexifolium、Physcomitrium hookeri、 Physcomitrium hookeri var.serratum、隐蒴立碗藓(Physcomitrium immersum)、Physcomitrium kellermanii、Physcomitrium megalocarpum、梨蒴立碗藓(Physcomitrium pyriforme)、Physcomitrium pyriforme var.serratum、Physcomitrium rufipes、Physcomitrium sandbergii、Physcomitrium subsp haericum、华盛顿立碗藓 (Physcomitrium washingtoniense)的属和种、牻牛儿苗科(Geraniaceae) 如天竺葵属(Pelargonium)、椰子属(Cocos)、Oleum例如椰子(Cocos nucifera)、茶麋子天竺葵(Pelargonium grossularioides)或椰子油(Oleum cocois[椰子])的属和种、禾本科如甘蔗属(Saccharum)例如甘蔗 (Saccharum officinarum)的属和种、胡桃科如胡桃属(Juglans)、Wallia 例如胡桃(Juglans regia)、Juglans ailanthifolia、山核桃(Juglans sieboldiana)、灰核桃(Juglans cinerea)、Wallia cinerea、Juglans bixbyi、加州黑核桃(Juglans californica)、印度黑核桃(Juglans hindsii)、Juglans intermedia、Juglans jamaicensis、大核桃(Juglans major)、Juglans microcarpa、黑核桃(Juglans nigra)或胡桃(Wallia nigra)[胡桃]的属和种、樟科如鳄梨属(Persea)、月桂属(Laurus)例 如月桂(Laurus nobilis[bay])、鳄梨(Persea americana)、鳄梨油(Persea gratissima)或Persea persea[avocado]的属和种、豆科如落花生属 (Arachis)例如落花生(Arachis hypogaea[花生])的属和种、亚麻科如 Adenolinum属例如亚麻(Linum usitatissimum)、Linum humile、奥地 利亚麻(Linum austriacum)、Linum bienne、窄叶亚麻(Linum angustifolium)、泻亚麻(Linum catharticum)、金黄亚麻(Linum flavum)、大花亚麻(Linum grandiflorum)、Adenolinum grandiflorum、 刘易斯亚麻(Linum lewisii)、那旁亚麻(Linum narbonense)、宿根亚 麻(Linum perenne)、宿根亚麻刘易斯变种(Linum perenne var.lewisii)、 Linum pratense或亚麻子(Linum trigynum[亚麻子])的属和种、 Lythrarieae如石榴属(Punica)例如石榴(Punica granatum [pomegranate])的属和种、锦葵科(Malvaceae)如棉属(Gossypium)例 如陆地棉(Gossypium hirsutum)、树棉(Gossypium arboreum)、海岛 棉(Gossypium barbadense)、草棉(Gossypium herbaceum)或瑟伯棉 (Gossypium thurberi[棉])的属和种、地钱科(Marchantiaceae)如地钱 属(Marchantia)例如Marchantia berteroana、Marchantia foliacea、大 孢地钱(Marchantia macropora)的属和种、芭蕉科(Musaceae)如芭蕉 属(Musa)例如香蕉(Musa nana)、小果野蕉(Musa acuminata)、大 蕉(Musa paradisiaca)、芭蕉属的某些种(Musa spp.[banana])的属和 种、柳叶菜科(Onagraceae)如Camissonia属、月见草属(Oenothera) 例如月见草(Oenothera biennis)或夜来香(Camissonia brevipes[月见草]) 的属和种、棕榈科(Palmae)如油棕属(Elaeis)，例如以下的属和种： 油棕(Elaeis guineensis[油棕榈])、罂粟科(Papaveraceae)如罂粟属 (Papaver)，例如以下的属和种：东方罂粟(Papaver orientale)、虞美 人(Papaver rhoeas)、长荚罂粟(Papaver dubium[罂粟])、胡麻科 (Pedaliaceae)如胡麻属(Sesamum)例如胡麻(Sesamum indicum [sesame])的属和种、胡椒科(Piperaceae)如胡椒属(Piper)、Artanthe、 草胡椒属(Peperomia)、Steffensia例如树胡椒(Piper aduncum)、Piper amalago、狭叶胡椒(Piper angustifolium)、大胡椒(Piper auritum)、 萎叶(Piper betel)、荜澄茄(Piper cubeba)、荜菝(Piper longum)、 胡椒(Piper nigrum)、假荜拔(Piper retrofractum)、Artanthe adunca、 Artanthe elongata、长胡椒(Peperomia elongata)、Piper elongatum、 Steffensia elongata[cayenne pepper]的属和种、禾本科(Poaceae)如大麦 属(Hordeum)、黑麦属(Secale)、燕麦属(Avena)、高梁属(Sorghum)、 须芒草属(Andropogon)、绒毛草属(Holcus)、黍属(Panicum)、稻 属(Oryza)、玉蜀黍属(Zea(maize))、小麦属(Triticum)例如大 麦(Hordeum vulgare)、芒颖大麦草(Hordeum jubatum)、鼠大麦草 (Hordeum murinum)、短芒大麦草(Hordeum secalinum)、栽培二棱 大麦(Hordeum distichon)、Hordeum aegiceras、六列大麦(Hordeum hexastichon)、六棱大麦(Hordeum hexastichum)、不规则大麦(Hordeum irregulare)、大麦(Hordeum sativum)、短芒大麦草(Hordeum secalinum)[大麦]、黑麦(Secale cereale[黑麦])、燕麦(Avena sativa)、 野燕麦(Avena fatua)、地中海红燕麦(Avena byzantina)、Avena fatua var.sativa、杂种燕麦(Avena hybrida[燕麦])、二色高梁(Sorghum bicolor)、石茅高梁(Sorghum halepense)、甜高梁(Sorghum saccharatum)、高梁(Sorghum vulgare)、Andropogon drummondii、 二色绒毛草(Holcus bicolor)、Holcus sorghum、Sorghum aethiopicum、 Sorghum arundinaceum、Sorghum caffrorum、垂穗高梁草(Sorghum cernuum)、工艺高梁(Sorghum dochna)、Sorghum drummondii、硬 高粱草(Sorghum durra)、Sorghum guineense、Sorghum lanceolatum、 多脉高粱草(Sorghum nervosum)、甜高梁(Sorghum saccharatum)、 Sorghum subglabrescens、垂叶高梁草(Sorghum verticilliflorum)、高梁 (Sorghum vulgare)、石茅高梁(Holcus halepensis)、Sorghum miliaceum、黍粟(Panicum militaceum[millet])、稻(Oryza sativa)、 Oryza latifolia[稻]、玉米(Zea mays[maize])、小麦(Triticum aestivum)、 硬粒小麦(Triticum durum)、圆柱小麦(Triticum turgidum)、Triticum hybernum、马卡小麦(Triticum macha)、普通小麦(Triticum sativum 或Triticum vulgare)[小麦]、紫球藻科(Porphyridiaceae)如Chroothece 属、Flintiella属、Petrovanella属、紫球藻属(Porphyridium)、 Rhodella、Rhodosorus、Vanhoeffenia例如紫球藻(Porphyridium cruentum)的属和种、山龙眼科(Proteaceae)如澳洲坚果属(Macadamia) 例如全缘叶澳洲坚果(Macadamia intergrifolia[macadamia])的属和种、 草绿藻科如肾藻属(Nephroselmis)、Prasinococcus、Scherffelia、扁藻属 (Tetraselmis)、Mantoniella、Ostreococcus例如绿肾藻(Nephroselmis olivacea)、Prasinococcus capsulatus、Scherffelia dubia、周氏扁藻 (Tetraselmis chui)、四鞭毛藻(Tetraselmis suecica)、Mantoniella squamata、Ostreococcus tauri属和种、茜草科(Rubiaceae)如咖啡属 (Coffea)例如咖啡属(Coffea)某些种、小果咖啡(Coffea arabica)、 中果咖啡(Coffea canephora)或大果咖啡(Coffea liberica[coffee])、玄 参科(Scrophulariaceae)如毛蕊花属(Verbascum)例如以下的属和种： 毛瓣毛蕊花(Verbascum blattaria)、东方毛蕊花(Verbascum chaixii)、 密叶毛蕊花(Verbascum densiflorum)、Verbascum lagurus、长叶毛蕊 花(Verbascum longifolium)、Verbascum lychnitis、Verbascum nigrum、 奥林匹克毛蕊花(Verbascum olympicum)、Verbascum phlomoides、紫 毛蕊花(Verbascum phoenicum)、Verbascum pulverulentum或毛蕊花 (Verbascum thapsus[毛蕊花])、茄科(Solanaceae)如辣椒属 (Capsicum)、烟草属(Nicotiana)、茄属(Solanum)、番茄属 (Lycopersicon)例如以下的属和种：辣椒(Capsicum annuum)、Capsicum annuum var.glabriusculum、五色椒(Capsicum frutescens [pepper])、 红椒(Capsicum annuum[paprika])、烟草(Nicotiana tabacum)、花烟 草(Nicotiana alata)、长头烟草(Nicotiana attenuata)、光烟草(Nicotiana glauca)、Nicotiana langsdorffii、Nicotiana obtusifolia、Nicotiana quadrivalvis、Nicotiana repanda、黄花烟草(Nicotiana rustica)、 Nicotiana sylvestris[烟草]、马铃薯(Solanum tuberosum[番茄])、茄 (Solanum melongena[eggplant])、番茄(Lycopersicon esculentum)、 Lycopersicon lycopersicum、梨形番茄(Lycopersicon pyriforme)、红茄 (Solanum integrifolium)或番茄(Solanum lycopersicum)[番茄]、梧桐 科(Sterculiaceae)如可可树属(Theobroma)例如可可树(Theobroma cacao [可可])的属和种或山茶科(Theaceae)如山茶属(Camellia)例如大叶茶 (Camellia sinensis[茶])的属和种。

有利的微生物例如选自毛壳菌科(Chaetomiaceae)、笄霉科 (Choanephoraceae)、隐球酵母科(Cryptococcaceae)、小克银汉霉科 (Cunninghamellaceae)、暗梗胞科(Demetiaceae)、从梗胞科 (Moniliaceae)、被孢霉科、毛霉科(Mucoraceae)、腐霉科 (Pythiaceae)、酵母菌科(Saccharomycetaceae)、水霉科 (Saprolegniaceae)、裂殖酵母科(Schizosacharomycetaceae)、粪壳科 (Sodariaceae)或瘤座孢科(Tuberculariaceae)科的真菌。

可提到的微生物的例子为选自如下的微生物组：笄霉科如布拉霉属 (Blakeslea)、笄霉属(Choanephora)例如三孢布拉霉(Blakeslea trispora)、瓜笄霉(Choanephora cucurbitarum)、漏斗笄霉瓜变种 (Choanephora infundibulifera var.Cucurbitarum)的属和种、被孢霉科 如被孢霉属例如深黄被孢霉(Mortierella isabellina)、多头被孢霉 (Mortierella polycephala)、拉曼被孢霉(Mortierella ramanniana)、葡 酒色被孢霉(Mortierella vinacea)、环带被孢霉(Mortierella zonata)的 属和种、腐霉科如腐霉属(Phytium)、疫霉属(Phytophthora)例如德 巴利腐霉(Pythium debaryanum)、间型腐霉(Pythium intermedium)、 畸雌腐霉(Pythium irregulare)、大雄腐霉(Pythium megalacanthum)、 侧雄腐霉(Pythium paroecandrum)、Pythium sylvaticum、终极腐霉 (Pythium ultimum)、恶疫霉(Phytophthora cactorum)、樟疫霉 (Phytophthora cinnamomi)、柑桔生疫霉(Phytophthora citricola)、 柑桔褐腐疫霉(Phytophthora citrophthora)、隐地疫霉(Phytophthora cryptogea)、德雷疫霉(Phytophthora drechsleri)、红瘤疫霉 (Phytophthora erythroseptica)、侧生疫霉(Phytophthora lateralis)、 大雄疫霉(Phytophthora megasperma)、烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)、烟草疫霉寄生变种(Phytophthora nicotianae var. parasitica)、棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)、寄生疫霉 (Phytophthora parasitica)、丁香疫霉(Phytophthora syringae)的属和 种、酵母菌科如汉逊属(Hansenula)、毕赤属(Pichia)、酵母属 (Saccharomyces)、类酵母属(Saccharomycodes)、亚罗酵母属 (Yarrowia)例如异常汉逊酵母(Hansenula anomala)、加利福尼亚汉逊 酵母(Hansenula californica)、加拿大汉逊酵母(Hansenula canadensis)、 碎囊汉逊酵母(Hansenula capsulata)、西弗汉逊酵母(Hansenula ciferrii)、葡糖酶汉逊酵母(Hansenula glucozyma)、亨利汉逊酵母 (Hansenula henricii)、Hansenula holstii、小汉逊酵母(Hansenula minuta)、不发酵汉逊酵母(Hansenula nonfermentans)、Hansenula philodendri、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、土星汉逊酵母 (Hansenula saturnus)、亚膜汉逊酵母(Hansenula subpelliculosa)、魏 氏汉逊酵母(Hansenula wickerhamii)、温奇汉逊酵母(Hansenula wingei)、嗜酒毕赤酵母(Pichia alcoholophila)、Pichia angusta、异常 毕赤酵母(Pichia anomala)、二孢毕赤酵母(Pichia bispora)、伯顿毕 赤酵母(Pichia burtonii)、加拿大毕赤酵母(Pichia canadensis)、荚膜 毕赤酵母(Pichia capsulata)、卡氏毕赤酵母(Pichia carsonii)、聚纤维 二糖毕赤酵母(Pichia cellobiosa)、西弗毕赤酵母(Pichia ciferrii)、粉 状毕赤酵母(Pichia farinosa)、发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)、芬 兰毕赤酵母(Pichia finlandica)、葡糖酶毕赤酵母(Pichia glucozyma)、 季氏毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、甲虫毕赤酵母(Pichia haplophila)、Pichia henricii、Pichia holstii、Pichia jadinii、Pichia lindnerii、膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)、甲醇毕赤酵母 (Pichia methanolica)、微小毕赤酵母微小变种(Pichia minuta var. minuta)、微小毕赤酵母不发酵变种(Pichia minuta var. nonfermentans)、挪威毕赤酵母(Pichia norvegensis)、奥默毕赤酵母 (Pichia ohmer)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、Pichia philodendri、Pichia pini、多形毕赤酵母(Pichia polymorpha)、栎毕赤 酵母(Pichia quercuum)、罗丹毕赤酵母(Pichia rhodanensis)、Pichia sargentensis、树干毕赤酵母(Pichia stipitis)、斯地毕赤酶母(Pichia strasburgensis)、亚膜毕赤酵母(Pichia subpelliculosa)、帽孢毕赤酵母 (Pichia toletana)、喜海藻糖毕赤酵母(Pichia trehalophila)、Pichia vini、木糖毕赤酵母(Pichia xylosa)、酸酒酵母(Saccharomyces aceti)、 拜耳酵母(Saccharomyces bailii)、贝酵母(Saccharomyces bayanus)、 二孢酵母(Saccharomyces bisporus)、好望角酵母(Saccharomyces capensis)、卡尔酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)、椭圆酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae var.ellipsoideus)、薛瓦酵母(Saccharomyces chevalieri)、德布尔酵母 (Saccharomyces delbrueckii)、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、 Saccharomyces drosophilarum、雅致酵母(Saccharomyces elegans)、椭 圆酵母(Saccharomyces ellipsoideus)、发酵性酵母(Saccharomyces fermentati)、Saccharomyces florentinus、脆壁酵母(Saccharomyces fragilis)、异质酵母(Saccharomyces heterogenicus)、橄榄油酵母 (Saccharomyces hienipiensis)、荷兰啤酒酵母(Saccharomyces inusitatus)、意大利酵母(Saccharomyces italicus)、克鲁弗酵母 (Saccharomyces kluyveri)、克鲁斯酵母(Saccharomyces krusei)、乳 酸酵母(Saccharomyces lactis)、马克斯酵母(Saccharomyces marxianus)、小椭圆酵母(Saccharomyces microellipsoides)、山地酵母 (Saccharomyces montanus)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、 橄榄酵母(Saccharomyces oleaceus)、奇异酵母(Saccharomyces paradoxus)、Saccharomyces pastorianus、普地酵母(Saccharomyces pretoriensis)、罗斯酵母(Saccharomyces rosei)、鲁氏酵母 (Saccharomyces rouxii)、葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)、路德 类酵母(Saccharomycodes ludwigii)、解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)、裂殖酵母科(Schizosacharomycetaceae)如裂殖酵母属 (Schizosaccharomyces)例如日本裂殖酵母日本变种 (Schizosaccharomyces japonicus var.japonicus)、日本裂殖酵母多变变 种(Schizosaccharomyces japonicus var.versatilis)、解苹果酸裂殖酵母 (Schizosaccharomyces malidevorans)、八孢裂殖酵母 (Schizosaccharomyces octosporus)、粟酒裂殖酵母解苹果酸变种 (Schizosaccharomyces pombe var.malidevorans)、粟酒裂殖酵母粟酒变 种(Schizosaccharomyces pombe var.pombe)、破囊壶菌科 (Thraustochytriaceae)如Althornia、Aplanochytrium、 Japonochytrium、裂殖壶菌(Schizochytrium)、破囊壶菌属(破囊壶菌) 例如聚集裂殖壶菌(Schizochytrium aggregatum)，Schizochytrium limacinum，红树林裂殖壶菌(Schizochytrium mangrovei)，小裂殖壶菌 (Schizochytrium minutum)，八孢裂殖壶菌(Schizochytrium octosporum)，聚集破囊壶菌(Thraustochytrium aggregatum)， Thraustochytrium amoeboideum，南极破囊壶菌(Thraustochytrium antacticum)，Thraustochytrium arudimentale，鲜黄破囊壶菌 (Thraustochytrium aureum)，Thraustochytrium benthicola，球形破囊壶菌 (Thraustochytrium globosum)，Thraustochytrium indicum， Thraustochytrium kerguelense，Thraustochytrium kinnei，运动破囊壶菌 (Thraustochytrium motivum)，多初级破囊壶菌(Thraustochytrium multirudimentale)，厚皮破囊壶菌(Thraustochytrium pachydermum)， 增殖破囊壶菌(Thraustochytrium proliferum)，粉红破囊壶菌 (Thraustochytrium roseum)，罗氏破囊壶菌(Thraustochytrium rossii)， Thraustochytrium striatum或Thraustochytrium visurgense的属和种。

更有利的微生物是例如选自芽孢杆菌科(Bacillaceae)、肠杆菌科 (Enterobacteriacae)或根瘤菌科(Rhizobiaceae)的细菌。

可能提到的例子为选自如下的微生物：芽孢杆菌科如芽孢杆菌属例如酸热 芽孢杆菌(bacillus acidocaldarius)、酸土环脂芽孢杆菌(bacillus acidoterrestris)、嗜碱芽孢杆菌(bacillus alcalophilus)、解淀粉芽孢杆 菌(bacillus amyloliquefaciens)、溶淀粉芽孢杆菌(bacillus amylolyticus)、 短芽孢杆菌(bacillus brevis)、蜡样芽孢杆菌(bacillus cereus)、环状芽 孢杆菌(bacillus circulans)、凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)、球形 芽孢杆菌梭形亚种(bacillus sphaericus subsp.fusiformis)、嗜乳糖芽孢 杆菌(bacillus galactophilus)、园孢芽孢杆菌(bacillus globisporus)、 园孢芽孢杆菌海生亚种(bacillus globisporus subsp.marinus)、嗜盐芽孢 杆菌(bacillus halophilus)、缓病芽孢杆菌(bacillus lentimorbus)、迟 缓芽孢杆菌(bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)、 巨大芽孢杆菌(bacillus megaterium)、多粘芽孢杆菌(bacillus polymyxa)、 冷解糖芽孢杆菌(bacillus psychrosaccharolyticus)、短小芽孢杆菌(bacillus pumilus)、球形芽孢杆菌(bacillus sphaericus)、枯草芽孢杆菌斯氏亚种 (bacillus subtilis subsp.spizizenii)、枯草芽孢杆菌枯草亚种(bacillus subtilis subsp.subtilis)或苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)的属和 种；肠杆菌科例如柠檬酸细菌属(Citrobacter)、爱德华氏菌属 (Edwardsiella)、肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、 埃希氏菌属(Escherichia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、沙门氏菌属 (Salmonella)或沙雷氏菌属(Serratia)例如无丙二酸柠檬酸菌 (Citrobacter amalonaticus)、异型柠檬酸菌(Citrobacter diversus)、 弗氏柠檬酸菌(Citrobacter freundii)、Citrobacter genomospecies、 Citrobacter gillenii、中间型柠檬酸菌(Citrobacter intermedium)、柯氏 柠檬酸菌(Citrobacter koseri)、Citrobacter murliniae、柠檬酸菌种 (Citrobacter sp.)、保科爱德华菌(Edwardsiella hoshinae)、Edwardsiell aictaluri、迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)、Erwinia alni、解淀粉欧 文氏菌(Erwinia amylovora)、Erwinia ananatis、Erwinia aphidicola、 Erwinia billingiae、灭仙人掌欧文氏菌(Erwinia cacticida)、生癌欧文氏 菌(Erwinia cancerogena)、大仙人掌欧文氏菌(Erwinia carnegieana)、 胡萝卜软腐欧文氏菌黑腐亚种(Erwinia carotovora subsp.atroseptica)、 胡萝卜软腐欧文氏菌亚种(Erwinia carotovora subsp.betavasculorum)、 胡萝卜软腐欧文氏菌气味亚种(Erwinia carotovora subsp.odorifera)、胡 萝卜软腐欧文氏菌wasabiae亚种(Erwinia carotovora subsp.wasabiae)、 菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi)、杓兰欧文氏菌(Erwinia cypripedii)、 融解欧文氏菌(Erwinia dissolvens)、草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)、 野梧桐欧文氏菌(Erwinia mallotivora)、鸡血藤欧文氏菌(Erwinia milletiae)、流黑欧文氏菌(Erwinia nigrifluens)、超压欧文氏菌(Erwinia nimipressuralis)、粉红欧文氏菌(Erwinia persicina)、Erwinia psidii、 Erwinia pyrifoliae、栎欧文氏菌(Erwinia quercina)、大黄欧文氏菌 (Erwinia rhapontici)、生红欧文氏菌(Erwinia rubrifaciens)、柳欧文 氏菌(Erwinia salicis)、斯氏欧文氏菌(Erwinia stewartii)、嗜管欧文 氏菌(Erwinia tracheiphila)、噬夏孢欧文氏菌(Erwinia uredovora)、 非脱羧埃希氏菌(Escherichia adecarboxylata)、Escherichia anindolica、 金色埃希氏菌(Escherichia aurescens)、螳螂埃希氏菌(Escherichia blattae)、大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、大肠埃希氏菌共生变种 (Escherichia coli var.Communior)、大肠可变埃希氏菌(Escherichia coli-mutabile)、福氏埃希氏菌(Escherichia fergusonii)、黑氏埃希氏菌 (Escherichia hermannii)、埃希氏菌种(Escherichia sp.)、伤口埃希氏 菌(Escherichia vulneris)、产气克雷伯氏菌(Klebsiella aerogenes)、贾 氏克雷伯氏菌亚特兰大亚种(Klebsiella edwardsii subsp.Atlantae)、解鸟 氨酸克雷伯氏菌(Klebsiella ornithinolytica)、催产克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、植物克雷伯氏菌(Klebsiella planticola)、肺炎克雷伯氏菌 (Klebsiella pneumoniae)、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae)、克雷伯氏菌种(Klebsiella sp.)、土生 克雷伯氏菌(Klebsiella terrigena)、特氏克雷伯氏菌(Klebsiella trevisanii)、 奥博尼沙门氏菌(Salmonella abony)、亚利桑那沙门氏菌(Salmonella arizonae)、邦戈尔沙门氏菌(Salmonella bongori)、猪霍乱沙门氏菌亚 利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.arizonae)、猪霍乱沙门氏菌 邦戈尔亚种(Salmonella choleraesuis subsp.bongori)、猪霍乱沙门氏菌 猪霍乱亚种(Salmonella choleraesuis subsp.cholereasuis)、猪霍乱沙门氏 菌双亚利桑那亚种(Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae)、猪霍乱 沙门氏菌豪斯顿亚种(Salmonella choleraesuis subsp.houtenae)、猪霍乱 沙门氏菌英迪加亚种(Salmonella choleraesuis subsp.indica)、猪霍乱沙 门氏菌萨拉姆亚种(Salmonella choleraesuis subsp.salamae)、达累斯萨 拉姆沙门氏菌(Salmonella daressalaam)、肠道沙门氏菌豪斯顿亚种 (Salmonella enterica subsp.houtenae)、肠道沙门氏菌萨拉姆亚种 (Salmonella enterica subsp.salamae)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、鸡沙门氏菌(Salmonella gallinarum)、海德堡沙门氏菌 (Salmonella heidelberg)、巴拿马沙门氏菌(Salmonella panama)、森 夫顿堡沙门氏菌(Salmonella senftenberg)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、嗜虫沙雷菌(Serratia entomophila)、无花果沙雷菌 (Serratia ficaria)、居泉沙雷菌(Serratia fonticola)、格式沙雷菌(Serratia grimesii)、液化沙雷菌(Serratia liquefaciens)、粘质沙雷菌(Serratia marcescens)、粘质沙雷菌粘质亚种(Serratia marcescens subsp. marcescens)、海红氏沙雷菌(Serratia marinorubra)、气味沙雷菌(Serratia odorifera)、普利茅斯沙雷菌(Serratia plymouthensis)、普城沙雷菌 (Serratia plymuthica)、变形斑沙雷菌(Serratia proteamaculans)、变 形斑沙雷菌解奎宁亚种(Serratia proteamaculans subsp.quinovora)、解 奎宁沙雷菌(Serratia quinivorans)或悬钩子沙雷菌(Serratia rubidaea) 的属和种；根瘤菌科(Rhizobiaceae)例如农杆菌属(Agrobacterium)、 嗜碳杆菌属(Carbophilus)、Chelatobacter、剑菌属(Ensifer)、根瘤菌 属(Rhizobium)、中华根瘤菌属(Sinorhizobium)例如亚特兰农杆菌属 (Agrobacterium atlanticum)、Agrobacterium ferrugineum、解明胶农杆 菌属(Agrobacterium gelatinovorum)、Agrobacterium larrymoorei、 Agrobacterium meteori、放射形农杆菌属(Agrobacterium radiobacter)、 发根农杆菌属(Agrobacterium rhizogenes)、悬钩子农杆菌(Agrobacterium rubi)、星斑农杆菌(Agrobacterium stellulatum)、根癌农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens)、Agrobacterium vitis、Carbophilus carboxidus、Chelatobacter heintzii、剑菌(Ensifer adhaerens)、Ensifer arboris、费氏剑菌属(Ensifer fredii)、Ensifer kostiensis、鸡眼草剑菌属 (Ensifer kummerowiae)、Ensifer medicae、苜蓿剑菌属(Ensifer meliloti)、 萨赫尔剑菌属(Ensifer saheli)、Ensifer terangae、新疆剑菌属(Ensifer xinjiangensis)、鹰嘴豆根瘤菌(Rhizobium ciceri)、埃特里根瘤菌 (Rhizobium etli)、费氏根瘤菌(Rhizobium fredii)、山羊豆根瘤菌 (Rhizobium galegae)、Rhizobium gallicum、Rhizobium giardinii、海南 根瘤菌(Rhizobium hainanense)、华癸根瘤菌(Rhizobium huakuii)、 胡特根瘤菌(Rhizobium huautlense)、木兰根瘤菌(Rhizobium indigoferae)、日本根瘤菌属(Rhizobium japonicum)、豌豆根瘤菌 (Rhizobium leguminosarum)、黄土根瘤菌(Rhizobium loessense)、百 脉根根瘤菌(Rhizobium loti)、羽扇豆根瘤菌(Rhizobium lupini)、地 中海根瘤菌属(Rhizobium mediterraneum)、苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)、蒙古根瘤菌(Rhizobium mongolense)、菜豆根瘤菌(Rhizobium phaseoli)、放射形根瘤菌(Rhizobium radiobacter)、发根根瘤菌 (Rhizobium rhizogenes)、Rhizobium rubi、Rhizobium sullae、天山根 瘤菌(Rhizobium tianshanense)、三叶草根瘤菌(Rhizobium trifolii)、 热带根瘤菌(Rhizobium tropici)、Rhizobium undicola、Rhizobium vitis、 粘附中华根瘤菌(Sinorhizobium adhaerens)、Sinorhizobium arboris、 费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)、Sinorhizobium kostiense、鸡眼 草中华根瘤菌(Sinorhizobium kummerowiae)、Sinorhizobium medicae、 苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)、莫雷兰中华根瘤菌 (Sinorhizobium morelense)、萨赫尔中华根瘤菌(Sinorhizobium saheli) 或新疆中华根瘤菌(Sinorhizobium xinjiangense)的微生物。

用于本发明方法的有利微生物的其它例子是原生动物或硅藻，选自： 甲藻科(Dinophyceae)、Turaniellidae或Oxytrichidae科，如寇氏隐甲 藻(Crypthecodinium cohnii)如三角褐指藻、贻贝棘尾虫 (Stylonychiaamytilus)、鬃棘尾虫(Stylonychia pustulata)、Stylonychia putrina、背状棘尾虫(Stylonychia notophora)、棘尾虫种(Stylonychia sp.)、 弯豆形虫(Colpidium campylum)或豆形虫种(Colpidium sp.)的属和种 的。

那些有利地在本发明方法中应用的生物是转基因生物如真菌类如被孢 霉属或破囊壶菌属、酵母属如酵母或裂殖酵母、藓类如剑叶藓属或角齿藓 属、非人动物如隐杆线虫(Caenorhabditis)、藻类如肾藻属、 Pseudoscourfielda、Prasinococcus、Scherffelia、扁藻属、Mantoniella、 Ostreococcus、隐甲藻属或褐指藻属或植物类如双子叶植物或单子叶植 物。尤其有利地在本发明方法中应用的生物属于产油的生物，也即用于产 生油的生物、如真菌例如被孢霉属或破囊壶菌属、藻类例如肾藻属、 Pseudoscourfielda、Prasinococcus、Scherffelia、扁藻属、Mantoniella、 Ostreococcus、隐甲藻属、褐指藻属或者植物，尤其优选包含大量脂类化 合物的油籽或油料作物植物，如花生、油菜籽、芸苔、向日葵、红花 (Carthamus tinctoria)、罂粟、芥菜、大麻、蓖麻、橄榄、芝麻、金盏 花、石榴、月见草、毛蕊花、大蓟、野玫瑰、榛子、杏仁、澳洲坚果、鳄 梨、月桂、西葫芦/南瓜、亚麻籽、大豆、阿月混子、琉璃苣、树(油棕榈 树、椰子树或胡桃树)或可耕种的作物例如玉米、小麦、黑麦、燕麦、小 黑麦、稻、大麦、棉、木薯、胡椒、万寿菊、茄科植物例如马铃薯、烟 草、茄子和番茄、蚕豆属的种、豌豆、紫花苜蓿或灌木(咖啡、可可、 茶)、柳属的种和宿生牧草及饲料作物。优选的植物根据本发明是油料作 物植物如花生、油菜籽、芸苔、向日葵、红花、罂粟、芥菜、大麻、蓖 麻、橄榄、金盏花、石榴、月见草、西葫芦/南瓜、亚麻子、大豆、琉璃 苣、树(油棕榈树、可可树)。尤其优选的植物是含有高C18:2和/或C18:3 脂肪酸的植物，如向日葵、红花、烟草、毛蕊花、芝麻、棉、西葫芦/南 瓜、罂粟、月见草、胡桃、亚麻子、大麻或大蓟。非常尤其优选的植物是 例如红花、向日葵、罂粟、月见草、胡桃、亚麻子或大麻。

因此对于本发明的上述方法而言，除了在方法步骤(a)至(d)中所 导入的核酸以及任选地所导入的编码ω3去饱和酶的核酸序列以外，额外 地向生物中导入其它编码脂肪酸或脂类代谢的酶的核酸是有利的。

脂肪酸或脂类代谢中的所有基因原则上均可在产生多不饱和脂肪酸的 方法中使用，有利地与Δ5延伸酶，Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶组合使用[为 了本发明目的，将复数形式理解为包含单数，并且反之亦然]。选自酰基辅 酶A脱氢酶、酰基ACP[酰基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、脂 肪酸酰基转移酶、酰基-辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合成酶、脂 肪酸羟化酶、乙酰基-辅酶A羧化酶、酰辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和酶、 脂肪酸炔属酶(acetylenase)、脂加氧酶、三酰甘油酯脂肪酶、环丙烯合 成酶、氢过氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶的脂肪酸和脂类代谢中的基因有 利地与Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶组合使用。选自Δ4去饱和 酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ12去饱和 酶、Δ6延伸酶或Δ9延伸酶的基因尤其优选地与上述Δ5延伸酶、Δ6延伸酶 和/或ω3去饱和酶的基因组合使用，可与单种基因或多种基因组合使用。

与人类延伸酶或来自非人类动物的延伸酶如那些来自大马哈鱼属 (Oncorhynchus)、爪蟾(Xenopus)或海鞘(Ciona)的延伸酶比较，本发 明的Δ5延伸酶具备有利特性，即它们不使C22脂肪酸延伸为相应的C24脂 肪酸。而且它们有利地不转化具有Δ6位置双键的脂肪酸，而上述脂肪酸则 由人类延伸酶或来自非人类动物的延伸酶所转化。尤其有利的Δ5延伸酶优 选地只转化不饱和C20脂肪酸。这些有利的Δ5延伸酶具有数个推定的跨膜 螺旋(5-7个)。有利地，所述Δ5延伸酶仅转化在Δ5位置上具有一个双 键的C20脂肪酸，其中优选转化ω3-C20脂肪酸(EPA)。在本发明的一个 优选实施方案中，上述Δ5延伸酶具有如此特性即除了Δ5延伸酶活性外， 这类酶还有利地没有或仅有较小的Δ6延伸酶活性。相反，人类的延伸酶或 来自非人类动物的延伸酶对具有Δ6或Δ5双键的脂肪酸表现了大致相同的 活性。将这类有利的延伸酶称作公知的单功能延伸酶。相反，将人类的延 伸酶或来自非人类动物的延伸酶称作多功能延伸酶，所述多功能延伸酶除 了以上提到的底物之外，还可使例如具有Δ9或Δ11双键的单不饱和C16和 C18脂肪酸转化。在酵母喂饲实验中，其中已向酵母中喂饲EPA作为底物， 单功能延伸酶有利地使所喂饲的EPA至少15％重量，有利地至少20％重 量，尤其有利地至少25％重量转化为二十二碳五烯酸(DPA， C22:5Δ7，10，13，16，19)。若喂饲作为底物的γ-亚麻酸(GLA，C18:3Δ6，9，12)，γ- 亚麻酸有利地根本未得到延伸。同样C18:3Δ5，9，12也未得到延伸。在另一个 有利的实施方案中，单功能延伸酶将所喂饲GLA以小于60％重量、有利 地小于55％重量、尤其优选地小于50％重量，尤其有利地小于45％重量、 非常尤其有利地小于40％重量转化为二高γ亚麻酸(C20:3Δ8，11，14)。根据 本发明在又一个非常尤其优选的Δ5延伸酶活性实施方案中，GLA未得到 转化。

图27和28显示了不同延伸酶经测定的底物特异性、图27显示了非洲 爪蛙(Xenopus laevis)(图27A)、玻璃海鞘(Ciona intestinalis)(图 27B)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)(图27C)的多功能延伸酶的特 异性。所有这些延伸酶均转化了广泛类型的底物。在本发明的方法中，这 可能产生了必须由其它酶活性来转化的副产物。这就是为什么这些酶在本 发明的方法中较次优选的原因。优选的单功能延伸酶和它们的底物特异性 在图28中显示。图28A显示了Ostreococcus tauri Δ5延伸酶特异性。这 种酶仅转化在Δ5位置上具有双键的脂肪酸。有利地仅使C20-脂肪酸转化。 假矮海链藻Δ5延伸酶显示了相似的高底物特异性(图28C)。Ostreococcus tauriΔ6延伸酶(图28B)和假矮海链藻Δ6延伸酶(图28D)均有利地仅 转化在Δ6位置上具有双键的脂肪酸。有利地仅使C18脂肪酸转化。来自拟 南芥菜和细小裸藻的Δ5延伸酶也根据它们的特异性进行了区分。

本发明有利的Δ6延伸酶，也即优选地延伸C18脂肪酸的延伸酶同样根 据高特异性进行区分。这类Δ6延伸酶有利地转化在Δ6-位置上具有双键的 脂肪酸。尤其有利的Δ6延伸酶有利地转化在分子中具有三个或四个双键的 C18脂肪酸，其中所述的脂肪酸必须在Δ6位置上包含一个双键。在本发明 的优选实施方案中，这些Δ6延伸酶还具有如下特征：即除了Δ6延伸酶活 性外，这些Δ6延伸酶还有利地没有或仅有相对较小的Δ5延伸酶活性。相 反，人类的延伸酶或来自非人类动物的延伸酶对具有Δ6或Δ5双键的脂肪 酸表现了大致相同的活性。将所述有利的延伸酶称作公知的单功能延伸酶。 相反，如以上描述，将人类延伸酶或来自非人类动物的延伸酶称作多功能 延伸酶，其中这类酶除了以上提到的底物以外，还可使具有例如Δ9或Δ11 双键的单不饱和的C16和C18脂肪酸转化。在酵母喂饲实验中，其中已经 向酵母中喂饲EPA作为底物，所述单功能延伸酶有利地转化了所喂饲的 α-亚麻酸(ALA，C18:3Δ9，12，15)至少10％重量或转化了所喂饲的γ-亚麻酸 (GLA，C18:3Δ6，9，12)至少40％重量，有利地至少20％重量或50％重量， 尤其有利地至少25％重量或60％重量。C18:4Δ6，9，12，15(硬脂艾杜糖酸)也 尤其有利地得到延伸。在本文中，SDA至少40％重量，有利地至少50％ 重量，尤其有利地至少60％重量、非常尤其有利地至少70％重量得到转化。 尤其有利的Δ6延伸酶对如下底物：C18:1Δ6、C18:1Δ9、C18:1Δ11、C20:2Δ11，14、 C20:3Δ11，14，17、C20:3Δ8，11，14、C20:4Δ5，8，11，14、C20:5Δ5，8，11，14，17或C22:4Δ7，10，13，16 表现出没有活性或仅表现出极小的活性(转化率小于0.1％重量)

图29和30及表18列出了多种延伸酶经测量的底物特异性。

与已知的ω3去饱和酶相反，本发明的ω3去饱和酶具有有利的特征即 它能够使广泛类型的ω6脂肪酸去饱和；可优选地使C20和C22脂肪酸如 C20:2、C20:3、C20:4、C22:4或C22:5脂肪酸去饱和。然而也能有利地使更短的 C18脂肪酸如C18:2或C18:3脂肪酸去饱和。根据ω3去饱和酶的这些特点， 将在生物中有利地将在植物或真菌中的脂肪酸类型由ω6脂肪酸转化至ω3 脂肪酸有利地成为可能。本发明的ω3去饱和酶优选地使C20脂肪酸去饱和。 这些来自当前脂肪酸库中的脂肪酸至少10％、15％、20％、25％或30％于 生物内转化为对应的ω3脂肪酸。ω3去饱和酶对C18-脂肪酸的活性小10 倍，即仅仅约1.5至3％的存在于脂肪酸库中的C18-脂肪酸转化为相应的ω3 脂肪酸。本发明ω3去饱和酶的优选底物是结合于磷脂中的ω6脂肪酸。以 去饱和二高γ-亚麻酸[C20:4Δ8，11，14]为参考，图19清晰显示在去饱和期间，ω3 去饱和酶有利地不区别在sn1位置结合或在sn2位置结合的脂肪酸。在磷 脂sn1位置结合的脂肪酸和sn2位置结合的脂肪酸均得以去饱和。而且ω3 去饱和酶对广泛类型的磷脂如磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PIS)或 磷脂酰乙醇胺(PE)的转化是有利的。最后，去饱和产物也可在中性脂类 (NL)中，也即在甘油三酯中找到。

与已知的Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶和Δ6去饱和酶比较，本发明的Δ4 去饱和酶、Δ5去饱和酶和Δ6去饱和酶的优点是它们能够转化结合至磷脂 或辅酶A脂肪酸酯的脂肪酸，有利地转化结合至辅酶A脂肪酸酯的脂肪酸。

本发明方法中所用的Δ12去饱和酶有利地将油酸(C18:1Δ9)转化为亚 油酸(C18:2Δ9，12)或有利地将C18:2Δ6，9转化为C18:3Δ6，9，12(GLA)。所用 Δ12去饱和酶有利地转化结合至磷脂或辅酶A脂肪酸酯的脂肪酸，有利地 转化结合至辅酶A脂肪酸酯的那些脂肪酸。

由于本发明方法中所用的核酸的酶活性。其中所述核酸编码具有Δ5延 伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶活性的多肽，有利地与编码脂肪酸或脂 类代谢的多肽如具有Δ4、Δ5、Δ6、Δ8、Δ12去饱和酶或者Δ5、Δ6或Δ9 延伸酶活性的其它多肽的核酸序列联合使用，种类广泛的多不饱和脂肪酸 可在本发明的方法中产生。根据所选择的生物如本发明方法中所用的有利 的植物，多种的多不饱和脂肪酸混合物或单种的多不饱和脂肪酸如EPA或 ARA可以以游离或结合形式产生。根据起始植物中优势的脂肪酸组成 (C18:2或C18:3脂肪酸)，由C18:2脂肪酸衍生的脂肪酸如GLA、DGLA 或ARA；或由C18:3脂肪酸衍生的脂肪酸如SDA、ETA或EPA因此获得。 若仅仅亚油酸(LA，C18:2Δ9，12)作为不饱和脂肪酸在方法所用的植物中出 现，方法仅能提供作为产物的GLA、DGLA和ARA，所有产物均能以游 离的脂肪酸或以结合的形式出现。若仅仅α-亚麻酸(ALA，C18:3Δ9，12，15) 作为不饱和脂肪酸在方法所用的植物中如在亚麻籽中存在，方法仅能提供 作为产物的SDA、ETA或EPA和/或DHA，如上所述的所有产物均能以 游离脂肪酸或以结合形式存在。由于对Δ5延伸酶酶活性的修饰，其有利 地与在合成中起作用的Δ4、Δ5、Δ6、Δ12去饱和酶和/或Δ6延伸酶、或 Δ4、Δ5、Δ8、Δ12去饱和酶和/或Δ9延伸酶联合使用，可以在以上提及的 生物，有利地在以上提及的植物中以定向的方式只产生单个的产物。由于 Δ6去饱和酶和Δ6延伸酶的活性，依据起始的植物和不饱和脂肪酸，形成 了例如GLA和DGLA或SDA和ETA。DGLA或ETA或这些脂肪酸的混 合物优选地形成。若向生物，有利地向植物中额外地导入Δ5去饱和酶、Δ5 延伸酶和Δ4去饱和酶，ARA、EPA和/或DHA额外地形成。这也适用于 事先已导入Δ8去饱和酶和Δ9延伸酶的生物。根据在生物或在植物中作为 合成起始物质而存在的脂肪酸，仅ARA、EPA或DHA或这些脂肪酸的混 合物有利地得到合成。因为涉及生物合成的级联，所讨论的终产物未能在 生物中以纯的形态出现。小量的前体化合物总是额外地在终产物中存在。 基于终产物DGLA、ETA或其混合物，或者ARA、EPA、DHA或其混合 物，有利地以EPA或DHA或其混合物，这些前体化合物小量占小于20％ 重量、有利地占小于15％重量、尤其有利地占小于10％重量、最有利地占 小于5、4、3、2或1％重量。

本发明的核酸所编码的蛋白质对用于DHA合成的两种前体 C18:4Δ6，9，12，15和C20:5Δ5，8，11，14，17脂肪酸表现了高度的特异性(前体和DHA 的合成见图1)。因此SEQ NO：53编码的蛋白质对带有一个额外ω3双 键的Δ6和Δ5脂肪酸表现了特异性(图2)。Δ5延伸酶具备有利地使酰基 辅酶A酯的脂肪酸残基延伸2个碳原子的酮酰基辅酶A合成酶活性。

在Δ5延伸酶基因、褐指藻Δ5去饱和酶和裸藻Δ4去饱和酶的辅助下， DHA的合成有可能在酵母(酿酒酵母)中展示(图3)。

用于本发明的Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶的起始脂肪酸 除了直接在生物中产生以外，所述脂肪酸还能自外部添加。因为经济原因 在生物中生产为优选。ω3去饱和酶的优选底物是亚油酸(C18:2Δ9，12)、γ- 亚麻酸(C18:3Δ6，9，12)、二十碳二烯酸(C20:2Δ11，14)、二高γ-亚麻酸 (C20:3Δ8，11，14)、花生四烯酸(C20:4Δ5，8，11，14)、二十二碳四烯酸 (C22:4Δ7，10，13，16)和二十二碳五烯酸(C22:5Δ4，7，10，13，15)。

为了在上述用于产生多不饱和脂肪酸含量有利地得到升高的油和/或 甘油三酯的方法中提高产量，增加合成脂肪酸的起始产物的量是有利的； 这可以例如通过向生物中导入编码Δ12去饱和酶多肽的核酸实现。在产油 生物如那些来自十字花科如芸苔属，例如油菜籽；胡颓子科如胡颓子属， 例如油橄榄的属和种或豆科如大豆属，例如具有较高油酸的大豆的属和种 中这种方法尤其有利。因为这些生物仅有较低的亚油酸(Mikoklajczak等， Journal of the American oils Chemical Society，38，1961，678-681)，以 上提到的Δ12去饱和酶用于产生起始物质亚油酸是有利的。

本发明方法中所用的核酸有利地来自植物如藻类，例如草绿藻科的藻 类如异毛藻属(Heteromastix)、Mammella、Mantoniella、微单藻属 (Micromonas)、肾藻属、Ostreococcus、绿枝藻属(Prasinocladus)、 Prasinococcus、Pseudoscourfielda、Pycnococcus、塔胞藻属 (Pyramimonas)、Scherffelia、扁藻属例如Heteromastix longifillis、 Mamiella gilva、Mantoniella squamata、Micromonas pusilla、绿肾藻 (Nephroselmis olivacea)、Nephroselmis pyriformis、圆形肾藻 (Nephroselmis rotunda)、Ostreococcus tauri、Ostreococcus sp.、 Prasinocladus ascus、Prasinocladus lubricus、Pycnococcus provasolii、 Pyramimonas amylifera、Pyramimonas disomata、Pyramimonas obovata、Pyramimonas orientalis、Pyramimonas parkeae、 Pyramimonas spinifera、Pyramimonas sp.、Tetraselmis apiculata、 Tetraselmis carteriaformis、周氏扁藻(Tetraselmis chui)、皱叶扁藻 (Tetraselmis convolutae)、Tetraselmis desikacharyi、纤细扁藻 (Tetraselmis gracilis)、Tetraselmis hazeni、Tetraselmis impellucida、 Tetraselmis inconspicua、Tetraselmis levis、有斑扁藻(Tetraselmis maculata)、Tetraselmis marina、Tetraselmis striata、Tetraselmis subcordiformis、Tetraselmis suecica、Tetraselmis tetrabrachia、 Tetraselmis tetrathele、Tetraselmis verrucosa、Tetraselmis verrucosa fo. Rubens或Tetraselmis sp.的属和种或选自裸藻科的藻类如囊胞藻属 (Ascoglena)、变胞藻属(Astasia)、胶柄藻属、Cyclidiopsis、裸藻属、 拟裸藻属(Euglenopsis)、Hyalophacus、克氏藻属(Khawkinea)、鳞孔 藻属、扁裸藻属、陀螺藻属(Strombomonas)或囊裸藻属例如梭形裸藻 (Euglena acus)、膝曲裸藻(Euglena geniculata)、细小裸藻、Euglena mixocylindracea、喙状裸藻(Euglena rostrifera)、绿色裸藻(Euglena viridis)、Colacium stentorium、圆柱囊裸藻(Trachelomonas cylindrica) 或旋转囊裸藻(Trachelomonas volvocina)的属和种。所用核酸有利地衍 生自裸藻属、Mantoniella或Ostreococcus属的藻类。

更有利的植物是藻类如等鞭金藻属(Isochrysis)或隐甲藻属、藻类/ 硅藻如海链藻属或褐指藻属、藓类如剑叶藓属或角齿藓属、或者高等植物 如报春花科(Primulaceae)例如Aleuritia、Calendula stellata、刺状骨籽 菊(Osteospermum spinescens)或Osteospermum hyoseroides、微生物如 真菌例如曲霉属(Aspergillus)、破囊壶菌属、疫霉属、虫霉属、毛霉属 或被孢霉属，细菌如希瓦氏菌，酵母或动物如线虫例如隐杆线虫、昆虫、 蛙、鲍鱼或鱼。本发明经分离的核酸序列有利地源自脊椎动物目的动物。 所述核酸序列优选地源自脊椎动物纲；Euteleostomi，辐鳍鱼纲 (Actinopterygii)；新鳍鱼亚纲(Neopterygii)；硬骨鱼类(Teleostei)； Euteleostei、原鳍鱼总目(Protacanthopterygii)、鲑形目(Salmoniformes)； 鲑科(Salmonidae)或大马哈鱼属(Oncorhynchus)或脊椎动物 (Vertebrata)、两栖纲(Amphibia)、无尾两栖目(Anura)、负子蟾 科(Pipidae)、非洲爪蟾属或无脊椎动物(Evertebrata)例如原索动物门 (Protochordata)、被囊亚门(Tunicata)、海参纲(Holothuroidea)、 海鞘科(Cionidae)例如Amaroucium constellatum、Botryllus schlosseri、 玻璃海鞘、Molgula citrina、Molgula manhattensis、Perophora viridis或 Styela partita。所述核酸尤其有利地源自真菌、动物、或源自植物如藻类 或藓类，优选地源自鲑形目如鲑科如鲑属例如来自虹鳟、Trutta trutta或 亚东鲑(Salmo trutta fario)的属和种，源自藻类如Mantoniella或 Ostreococcus，或源自硅藻如海链藻属或褐指藻属或者源自藻类如隐甲藻 属。

本发明的方法有利地包含以上提及的核酸序列或它们的衍生物或同系 物，其编码这样的多肽，所述多肽保留了由以上提及的核酸序列所编码的 蛋白质的酶活性。这些序列单独地或与编码Δ12去饱和酶、Δ4去饱和酶、 Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶的核 酸序列组合而克隆于表达构建体内并用于向生物中导入和在生物中表达。 由于它们的构建，这些表达构建体使得可有利地优化合成本发明方法中所 产生的多不饱和脂肪酸。

在一个优选的实施方案中，所述方法进一步包括获得细胞或完整生物 的步骤，其中所述的细胞或完整生物包含方法中所用的核酸序列，这些细 胞和/或生物在所述的方法中由本发明编码Δ12去饱和酶、Δ4去饱和酶， Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶的核 酸序列、如上所述的基因构建体或载体，单独地或与编码脂肪酸或脂类代 谢的蛋白质的核酸序列组合而转化。在一个更优选的实施方案中，所述方 法进一步包括从生物或培养物中获得油、脂类或游离脂肪酸的步骤。培养 物可采用例如发酵培养物的形式例如在培养微生物如被孢霉、海链藻、 Mantoniella、Ostreococcus、酵母或破囊壶菌的情况下或采用植物的温室 培养物或田间生长培养物形式。由此所产生的细胞或微生物有利地是产油 生物的细胞如油料作物例如花生、油菜籽、卡诺拉油菜(Canola)、亚麻籽、 大麻、花生、大豆、红花、大麻、向日葵或琉璃苣的细胞。

在为植物细胞、植物组织或植物器官的情况下，“生长”理解为意指 例如在营养培养基内或培养基上培养、或完整植物在基底物上或基底物内 的培养例如在水培、盆载培养料内或在可耕地上的培养。

为了本发明目的，“转基因的”或“重组的”意指例如核酸序列、表达盒 (基因构建体)或包含核酸序列的载体或由本发明的核酸序列、表达盒或 载体所转化的生物，所有通过重组方法产生的构建体中的

a)本发明的核酸序列，或

b)有效地连接于本发明核酸序列的遗传控制序列，例如启动子，或

c)a)和b)

均不处于它们天然的遗传环境中或均已经通过重组方法修饰，对这种修饰 而言可采取例如一个或多个核苷酸残基的替代、添加、删除、倒位或插入 的形式。将天然遗传环境理解为意指原始生物中的天然基因组位点或染色 体位点或在基因组文库中的存在。在为基因组文库的情况下，优选地保留， 至少部分保留所述核酸序列的天然遗传环境。所述环境位于所述核酸序列 的至少一侧并且具有至少50bp、优选地至少500bp、尤其优选地至少 1000bp、最为优选地至少5000bp的序列长度。天然存在的表达盒-例如 所述核酸序列的天然启动子与相应的Δ12去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去 饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6延伸 酶和/或Δ5延伸酶基因的天然存在的组合-当经过非天然、合成的(“人工 的”)方法例如通过诱变处理修饰后变成了转基因的表达盒。合适的方法在 美国5.565.350或WO001/15815中进行了描述。

用于本发明目的的转基因生物或转基因植物因此理解为意指上述方法 中所用的核酸不处于它们在生物的基因组中的天然基因座处，对这类核酸 而言可同源或异源性地表达。然而如所提及，转基因也意指即便本发明的 核酸处于生物基因组中它们的天然位置上，这种序列相对于天然序列已经 过了修饰，和/或天然序列的调节序列已经过了修饰。转基因优选地理解 为意指本发明的核酸在基因组内非天然基因座处的表达，即发生了这种核 酸的同源表达，或优选地异源表达。优选的转基因生物是真菌如被孢霉或 疫霉、藓类如剑叶藓、藻类如Mantoniella、裸藻、隐甲藻或Ostreococcus、 硅藻如海链藻或褐指藻或者植物如油料作物。

生物或宿主生物对于本发明方法中所用的核酸、表达盒或载体而言原 则上是能够有利地合成脂肪酸尤其不饱和脂肪酸和/或适用于表达重组基 因的所有生物。可提到例子是植物如拟南芥、菊科植物例如金盏花或作物 植物如大豆、花生、蓖麻油植物、向日葵、玉米、棉、亚麻、油菜籽、椰 子、油棕榈、红花(Carthamus tinctorius)或可可豆；微生物如真菌例如 被孢霉属、破囊壶菌属、水霉属、疫霉属或腐霉属；细菌如埃希氏菌属或 希瓦氏菌属；酵母如酵母属、蓝细菌属、纤毛虫属，藻类如Mantoniella、 裸藻属、海链藻属如Ostreococcus；或原生动物如甲藻例如隐甲藻。优选 的生物是那些能够天然合成大量油的生物如真菌如高山被孢霉 (Mortierella alpina)、Pythium insidiosum、致病疫霉或植物如大豆、油菜 籽、椰子、油棕榈、红花、亚麻、大麻、金盏花、蓖麻油植物、花生、可 可豆或向日葵，或者酵母如酿酒酵母，并且尤其优选大豆、亚麻、油菜籽、 红花、向日葵、金盏花、被孢霉或酿酒酵母。除了以上提到的转基因生物 以外，宿主生物原则上还可以是转基因动物，有利地为非人类的动物例如 秀丽线虫、玻璃海鞘或非洲爪蟾。

可利用的宿主细胞进一步在Goeddel，Gene Expression Technology： Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)中 详述。

可使用的表达株系如那些具有较低蛋白酶活性的株系在Gottesman， S.，Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185， Academic Press，San Diego，California(1990)119-128中描述。

这些株系包括植物细胞和某些组织、器官和植物的所有表型形式中的 部分如花药、纤维、根毛、茎、胚、愈伤组织、cotelydon、叶柄、所收获 的材料、植物组织、可繁殖的组织和来自实际的转基因植物的和/或可用 于产生转基因植物的细胞培养物。

包含本发明方法中所合成的多不饱和脂肪酸的转基因植物能够有利地 直接销售而无需分离所合成的油、脂类或脂肪酸。本发明方法的植物罗列 如下：完整植物和植物的所有部分、植物器官或植物部分如叶、茎、种子、 根、块茎、花药、纤维、根毛、茎、胚、愈伤组织、cotelydons、叶柄、所 收获的材料、植物组织、可繁殖的组织和来自实际转基因植物的细胞培养 物和/或可用于产生转基因植物的细胞培养物。在本上下文中，种子包含 种子的所有部分如种皮、表皮细胞、种子细胞、胚乳或胚组织。本发明方 法中所产生的化合物也可以油、脂肪、脂类和/或游离脂肪酸的形式从生物， 有利地从植物中分离。由所述方法产生的多不饱和脂肪酸可通过从所生长 的作物中或从田野中收获这类生物获得。这可通过对植物部分优选对植物 种子的压榨或提取实现。在本上下文中，油、脂肪、脂类和/或游离脂肪酸 通过公知的冷敲打(cold-beating)或冷榨可获得而无需加热。为了更容易 地破裂植物部分尤其种子，它们事先经过粉碎、蒸热或烘烤。随后经如此 方式预处理的种子可用溶剂如温己烷压榨或提取。然后去除溶剂。在为微 生物时，微生物在收获后例如可直接提取而无需进一步的加工步骤或在破 裂后经技术人员所熟悉的多种方法提取。按照这种方式，可分离所述方法 产生的超过96％的化合物。此后所得到的产物经过进一步加工即精制。在 该方法中，例如植物黏液和悬浮物首先去除。众知的所谓除去矿泥可通过 酶或例如通过加入酸如磷酸而化学-物理性地完成。此后游离脂肪酸用碱 例如氢氧化钠溶液处理去除。得到的产物用水彻底洗涤以去除产物中残留 的碱，然后干燥。为了除去产物中残留的色素，利用滤土或活性碳漂白产 物。最后例如利用蒸汽使产物脱嗅。

通过该方法所产生的PUFA或LCPUFA有利地是C18、C20或C22脂 肪酸分子，有利地是C20或C22脂肪酸分子，这些脂肪酸分子具有至少两 个双键，优选地具有三、四、五或六个双键。这些C18、C20或C22脂肪酸 分子可以以油、脂类或游离脂肪酸的形式从生物中分离。合适的生物是例 如以上提到的那些生物。优选的生物是转基因植物。

因此本发明的一个实施方案是通过以上描述的方法产生的油、脂类或 脂肪酸或它们的级分，尤其优选含有PUFA并且来自转基因植物的油、脂 类或脂肪酸组合物。

如以上所描述，在每一情况下，以100％为基础并且以生物的总脂肪 酸含量为基础，这些油、脂类或脂肪酸有利地包含6至15％的棕榈酸、1 至6％的硬脂酸、7-85％的油酸、0.5至8％的11-十八碳烯酸、0.1至1％ 的花生酸、7至25％的饱和脂肪酸、8至85％的单不饱和脂肪酸和60至 85％的多不饱和脂肪酸。以总脂肪酸含量为基础，这些脂肪酸酯或脂肪酸 混合物中存在的有利的多不饱和脂肪酸优选地为至少0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1％的花生四烯酸。而且通过本发明方法产生 的脂肪酸酯或脂肪酸混合物有利地包含选自如下的脂肪酸：芥酸(二十二 碳烯-13酸)、苹婆酸(9，10-亚甲基十八碳-9-烯酸)、锦葵酸(8，9-亚 甲基十七碳-8-烯酸)、大风子油酸(环戊烯十二烷酸)、呋喃脂肪酸(9， 12-环氧十八碳-9，11-二烯酸)、斑鸠菊酸(9，10-环氧十八碳-12-烯酸)、 果脂酸(6-十八碳炔酸)、6-十九碳炔酸、santalbic acid(反11-十八碳烯 -9-炔酸)、6，9-十八碳烯炔酸、pyrulic acid(反10-十七烯-8-炔酸)、 crepenyninic acid(9-十八烯-12-炔酸)、13，14-二氢oropheic acid、十八 碳-13-烯-9，11-二炔酸、伞形花子油酸(顺-6-十八烯酸)、9顺，12反- 十八碳二烯酸、金盏花素酸(8反10反12顺-十八碳三烯酸)、梓甙酸(9 反11反13顺-十八碳三烯酸)、桐酸(9顺11反13反-十八碳三烯酸)、 iacaric acid(8顺10反12顺-十八碳三烯酸)，石榴酸(9顺11反13顺- 十八碳三烯酸)、麦饼树酸(9顺11反13反15顺-十八碳四烯酸)、皮诺 敛酸(全-顺-5，9，12-十八碳三烯酸)、laballenic acid(5，6-十八碳二烯 丙二烯酸)、蓖麻油酸(12-羟油酸)和/或革盖菌素酸(13-羟-9顺，11反 -十八碳二烯酸)。通常上面提到的脂肪酸有利地仅在本发明方法产生的脂 肪酸酯或脂肪酸的混合物中痕量地存在，也就是说以总脂肪酸为基础，它 们的含量小于30％，优选地小于25％、24％、23％、22％或21％，尤 其优选地小于20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％或5％、非常尤 其优选地小于4％、3％、2％或1％。在本发明更优选的实施方案中，以 总脂肪酸为基础，以上这些提到的脂肪酸的含量小于0-9％、0.8％、0.7％、 0.6％或0.5％，尤其优选地小于小于0.4％、0.3％、0.2％、0.1％。以总脂 肪酸为基础，由本发明方法所产生的脂肪酸酯或脂肪酸混合物有利地包含 小于0.1％和/或无丁酸、无胆固醇、无鰶鱼酸(二十二碳五烯酸， C22:5Δ4，8，12，15，21)以及无尼生酸(二十四碳六烯酸，C23:6Δ3，8，12，15，18，21)。

以生产生物，有利地是植物，尤其优选地是油料作物植物如大豆、油 菜籽、椰子、油棕榈、红花、亚麻、大麻、蓖麻、金盏花、花生、可可 豆、向日葵或以上提到的其它单子叶或双子叶油料作物植物的总脂肪酸含 量为基础，本发明的油、脂类或脂肪酸包含至少0.5％、1％、2％、3％、 4％或5％，有利地至少6％、7％、8％、9％或10％，尤其有利地至少 11％、12％、13％、14％或15％的ARA或至少0.5％、1％、2％、 3％、4％或5％，有利地至少6％或7％，尤其有利地至少8％、9％或 10％的EPA和/或DHA。

本发明的又一个实施方案是油、脂、脂肪酸和/或脂肪酸组合物在饲料、 食品、化妆品或药品中的用途。本发明的油、脂、脂肪酸或脂肪酸混合物 可按照技术人员熟悉的方式与动物来源的其它油、脂类、脂肪酸或脂肪酸 混合物例如鱼油混合使用。这些由植物或动物组分所组成的油、脂类、脂 肪酸或脂肪酸混合物也可用于制备饲料、食品、化妆品或药品。

术语“油”、“脂类”或“脂肪”理解为意指包含不饱和的、饱和的，优选 地已酯化的脂肪酸的脂肪酸混合物。油、脂类或脂肪优选地具有较高多不 饱和的游离脂肪酸或有利地具有较高酯化的脂肪酸，特别是亚油酸、γ-亚 麻酸、二高γ-亚麻酸、花生四烯酸、α-亚麻酸、硬脂艾杜糖酸、二十二碳 四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸或二十二碳六烯酸。

酯化的不饱和脂肪酸的量优选地占约30％含量，50％的含量更为优 选，60％、70％、80％或更高的含量尤其优选。为了分析，脂肪酸的含量 例如可在脂肪酸经酯转换转化为甲酯后通过气相层析测定。油、脂类或脂 肪可包含多种其它饱和或不饱和的脂肪酸例如金盏花素酸、棕榈酸、棕榈 油酸、硬脂酸、油酸等。在油或脂肪中的多种脂肪酸含量可变化，这尤其 取决于起始生物。

如上所述，在方法中所产生的有利地具有至少两个双键的多不饱和脂 肪酸如上所述是例如鞘脂类、磷酸甘油酯、脂类、糖脂、磷脂、单酰甘油 酯、二酰甘油酯、三酰甘油酯或其它脂肪酸酯。

从通过本发明方法制备的有利地具有至少五个或六个双键的多不饱和 脂肪酸开始，所存在的多不饱和脂肪酸经碱例如KOH或NaOH水溶液处 理，或者有利地于存在醇例如甲醇或乙醇时经酸水解，或者经酶切割释放 并且通过例如相分离及随后例如H2SO4的酸化作用而分离。这类脂肪酸也 可无需以上描述的加工步骤直接释放。

方法中所用的核酸在导入生物体，有利地导入植物细胞或植物后，可 以在单独的质粒中存在或者有利地可以整合入宿主细胞的基因组内。在整 合入基因组内的情况下，整合可以是随机的或可通过重组实现，从而所导 入的拷贝替代了原来的基因，由此细胞产生的目的化合物是被调节的，或 整合可通过运用基因反式而实现，从而这种基因有效地与功能性表达单元 连接，其中这个表达单元包含至少一段确保基因表达的序列和至少一段确 保功能性转录的基因多聚腺苷酸化的序列。这类核酸通过多重表达盒或构 建体有利地向生物中导入以便多重平行表达，有利地向植物中导入以便基 因的多重平行种子特异性的表达。

藓类和藻类是唯一已知的产生大量多不饱和脂肪酸如花生四烯酸 (ARA)和/或二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)的植 物系统。藓类在膜脂中包含PUFA；而藻类、与藻类有关的生物及少数真 菌也在三酰甘油酯的级分中聚集了大量的PUFA。这是为什么从三酰甘油 酯级分中聚集PUFA的株系所分离的核酸分子尤其有利地用于本发明方法 并且因此用于修饰宿主中脂类和PUFA产生系统的原因，特别是修饰植物 中如油料作物例如油菜籽、卡诺拉油菜、亚麻籽、大麻、大豆、向日葵和 琉璃苣中的脂类和PUFA产生系统。因此这类核酸分子可有利地用于本发 明的方法。

有利地适于本发明方法中所用的核酸的底物，其中所述核酸编码Δ12 去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9 延伸酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶活性和/或适于所用的 其它核酸的底物有利地是C16、C18、或C20脂肪酸，其中所述其它的核酸 是编码选自酰基-辅酶A脱氢酶、酰基ACP[酰基载体蛋白]去饱和酶、酰 基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基转移酶、酰基-辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶 (酶)、脂肪酸合成酶、脂肪酸羟化酶、乙酰基辅酶A羧化酶、酰基辅酶A 氧化酶、脂肪酸去饱和酶、脂肪酸炔属酶、脂加氧酶、三酰甘油酯脂肪酶、 环丙烯合酶、氢过氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶的核酸。方法中作为底物 转化的脂肪酸优选地以它们酰基辅酶A酯形式和/或它们的磷脂形式的酯 转化的脂肪酸或脂代谢中的多肽。

为产生本发明的长链PUFA，多不饱和C18脂肪酸首先必须通过去饱 和酶的酶活性去饱和并且接下来通过延伸酶延伸至少两个碳原子。在一次 延伸循环后，延伸酶的酶活性产生了C20脂肪酸并且经过两轮延伸循环后， 产生了C22脂肪酸。本发明方法中所用的去饱和酶和延伸酶的活性优选地 产生C18、C20和/或C22脂肪酸，在脂肪酸分子中有利地具有至少两个双键， 优选地具有三、四、五或六个双键，尤其优选地产生C20和/或C22脂肪酸， 在脂肪酸分子中具有至少两个双键，优选地具有三、四、五或六个双键， 非常尤其优选地在分子中具有五或六个双键。在第一次去饱和和延伸发生 后，可发生进一步的去饱和和延伸步骤例如在Δ5和Δ4位置处的去饱和。 尤其优选的本发明方法的产物是二高γ-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯 酸、二十二碳五烯酸和/或二十二碳六烯酸。在脂肪酸分子中具有至少两个 双键的C20脂肪酸可以以游离脂肪酸的形式或以酯的形式如磷脂类、糖脂 类、鞘脂类、磷酸甘油酯、单酰甘油酯、二酰甘油酯或三酰甘油酯通过本 发明的酶活性加以延伸。

脂肪酸、油、脂类或脂肪在有利使用的植物中优选的生物合成部位例 如通常是种子或种子的细胞层，因此对方法中所用的核酸进行种子特异性 表达是有意义的。然而显然脂肪酸、油或脂类的生物合成并非限定于种子 组织中，同时也可在植物的所有其它部分例如在表皮细胞或在块茎中以组 织特异性方式进行。

若微生物如酵母例如酵母属或裂殖酵母属、真菌如被孢霉属、曲霉属、 疫霉属、虫霉属、毛霉属或破囊壶菌属、藻类如等鞭金藻属、Mantoniella、 裸藻属、Ostreococcus、褐指藻属或隐甲藻属作为本发明方法中的生物使 用，这些生物有利地在发酵培养物内生长。

由于本发明编码Δ5延伸酶的核酸的利用，与未重组的不含有这种核酸 的生物的野生型比较，方法中产生的多不饱和脂肪酸可增加至少5％，优 选地至少10％，尤其优选地至少20％，非常尤其优选地至少50％。

原则上，可以两种不同方式增加在方法所用的生物中由本发明方法产 生的多不饱和脂肪酸。游离的多不饱和脂肪酸库和/或由方法产生的酯化多 不饱和脂肪酸含量可有利地扩大。转基因生物中酯化的多不饱和脂肪酸库 通过本发明方法有利地扩大。

若微生物作为本发明方法中的生物使用，根据宿主生物，将它们按技 术人员熟悉的方式生长或培养。微生物一般在液体培养基中生长，其中所 述培养基通常含有糖形式的碳源、有机氮源形式的氮源如酵母提取物或盐 如硫酸铵、微量元素如铁、锰和镁盐和根据需要含有维生素，该培养基的 温度在0℃和100℃之间，优选地在10℃和60℃之间，同时通氧。液体 培养基的pH可保持恒定即在培养期间受到调节，或不保持恒定。培养物 可以分批式、半分批式或连续地生长。营养物可在发酵开始时提供或半连 续或连续性地输入。所产生的多不饱和脂肪酸可从如上描述的生物中通过 技术人员所知的方法例如提取、蒸馏、结晶、根据需要以盐沉淀和/或层析 分离。为此目的，可有利地事先破裂生物体。

若宿主生物为微生物，本发明的方法有利地在0℃和95℃之间，优 选地在10℃和85℃间，尤其优选地在15℃和75℃间，非常尤其优选 地在15℃和45℃间实施。

将本发明方法中pH值优选地维持在pH 4和12之间、优选地维持在 pH 6和9之间、尤其优选地维持在pH 7和8之间。

本发明的方法可分批式、半分批式或连续地操作。对已知培养方法的 综述可在Chmiel的教材(Bioprozeβtechnik 1.Einführung in die Bioverfahrenstechnik[Bioprocess technology 1.Introduction to Bioprocess technology](Gustav Fischer Verlag，Stuttgart，1991))中或在Storhas 的教材(Bioreaktoren und periphere Einrichtungen[Bioreactors and peripheral equipment](Vieweg Verlag，Braunschweig/Wiesbaden， 1994))中找到。

预备使用的培养基必须符合所讨论的株系的需要。用于各种微生物的 培养基的描述可在教材″Manual of Methods für Genaeral Bacteriology″of the American Society for Bacteriology(Washington D.C.，USA，1981) 中找到。

如以上描述，根据本发明的可使用的这些培养基通常包含一种或多种 碳源、氮源、无机盐、维生素和/或微量元素。

优选的碳源是糖如单糖、双糖或多糖。极好碳源的例子是葡萄糖、果 糖、甘露糖、半乳糖、核糖、山梨糖、核酮糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、棉 子糖、淀粉或纤维素。糖还可以复杂的化合物如糖蜜或其它来自糖蜜三糖 化(raffination)的副产物加入培养基。添加多种碳源的混合物也是有利 的。其它可能的碳源是油和脂肪例如大豆油、向日葵油、花生油和/或可可 脂、脂肪酸如棕榈酸、硬脂酸和/或亚油酸、醇和/或多元醇例如甘油、甲醇 和/或乙醇和/或有机酸例如乙酸和/或乳酸。

氮源通常是有机或无机氮化合物或含有这些化合物的物质。氮源的例 子包括液体或气体形式的氨或者铵盐如硫酸铵、氯化铵、磷酸铵、碳酸铵 或硝酸铵、硝酸盐、尿素、氨基酸或者复杂氮源例如玉米浆、大豆粕、大 豆蛋白质、酵母提取物、肉膏和其它等。氮源可单独地或作为混合物使用。

可在培养基中存在的无机盐化合物包括钙、镁、钠、钴、钼、钾、锰、 锌、铜和铁的氯化物、磷酸盐和硫酸盐。

含无机硫的化合物例如硫酸盐、亚硫酸盐、连二亚硫酸盐、连四硫酸 盐、硫代硫酸盐、硫化物或有机硫化合物如硫醇和硫醇类可以用作硫源以 产生含硫的精细化学品，特别是甲硫氨酸。

磷酸、磷酸二氢钾或磷酸氢二钾或相应的钠盐可用作磷源。

鳌合剂可加入培养基以维持溶液中的金属离子。尤其合适的鳌合剂包 括二羟基酚如邻苯二酚或原儿茶酸盐和有机酸如柠檬酸。

本发明使用的用于培养微生物的发酵培养基通常也含有其它生长因子 如维生素或生长促进剂，包括例如生物素、核黄素、维生素B1、叶酸、烟 酸、泛酸盐和吡哆醇。生长因子和盐经常来自复杂的培养基成分如酵母提 取物、糖蜜、玉米浆等。更有可能向培养基中加入合适的前体。培养基化 合物的明确组分很大程度取决于特定的实验并且单独取决于每个特定的情 况。优化培养基的信息可在教材″Applied Microbiol.Physiology，A Practical Approach″(Editors P.M.Rhodes，P.F.Stanbury，IRL Press (1997)pp.53-73，ISBN 0 19 963577 3)中找到。生长培养基例如标准1 (Merck)或BHI(脑心浸液，DIFCO)等也可从商业供应商处获得。

所有培养基的成分均经加热(1.5巴，121℃20分钟)或过滤灭菌法 灭菌。各成分可共同或根据需要分别灭菌。培养基的所有成分可在培养开 始时存在或根据需要连续或分批式加入。

培养温度通常在15℃和45℃之间，优选地从25℃至40℃，并且可 维持恒定或可在实验期间变动。培养基的pH应该处于5至8.5之间，优选 地在7.0附近。用于培养的pH在培养期间可通过加入碱性化合物如氢氧化 钠、氢氧化钾、氨和液氨或酸性化合物如磷酸或硫酸控制。起泡可使用消 泡剂例如脂肪酸聚乙二醇脂控制。为维持质粒的稳定性，可向培养基中加 入合适的具有选择效应的物质如抗生素。需氧条件通过向培养基中导入氧 或含氧的气体混合物例如环境空气维持。培养基的温度通常为20℃至 40℃并且优选地为25℃至40℃。持续培养直至最大限度地形成目的产物。 这个目标通常在10至160小时内达到。

以如此方式所获的发酵培养液，尤其那些含有多不饱和脂肪酸的培养 液通常含有7.5至25％重量的干物质。

这种发酵培养液随后可经过进一步加工。生物质根据需要可通过分离 法例如离心、过滤、倾析或这些方法的组合从发酵培养基中完全或部分地 移出或完全滞留在所述的培养基中。生物质有利地在分离后进行加工。

然而，发酵液也可使用已知的方法例如在旋转蒸发器、薄膜蒸发器、 降膜蒸发器的辅助下通过反向渗透或通过纳米过滤加以增稠或浓缩而无需 分离细胞。最终这种浓缩的发酵液可经加工以获得存在其中的脂肪酸。

所述方法中所获的脂肪酸也适用于化学合成其它目的的产物。例如它 们可单独或彼此联合地用于制备药物、食品、动物饲料或化妆品。

本发明还涉及经分离的编码具有Δ5延伸酶的多肽的核酸序列，其中 由所述核酸序列编码的Δ5延伸酶转化在脂肪酸分子中具有至少四个双键 的C20脂肪酸，这种C20脂肪酸有利地最终掺入二酰甘油酯和/或三酰甘油 酯内。

有利的经分离的核酸序列是编码具有Δ5延伸酶活性的多肽并且编码 包含选自具有SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：139、 SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：141或SEQ ID NO：142中所示氨基酸序 列的氨基酸的核酸序列。

进一步有利的经分离的核酸序列是编码具有Δ5延伸酶活性的多肽并 且编码包含选自以下氨基酸序列的联合的核酸序列：

a)SEQ ID NO：115和SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：115和SEQ ID NO：140或SEQ ID NO：139和SEQ ID NO：140；或

b)SEQ ID NO：116和SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：116和SEQ ID NO：142或SEQ ID NO：141和SEQ ID NO：142；或

c)SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：139和SEQ ID NO：140或SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：141和SEQ ID NO：142。

序列SEQ ID NO：115(NXXXHXXMYXYYX)、SEQ ID NO：116 (HHXXXXWAWW)、SEQ ID NO：139(LHXXHH)、SEQ ID NO： 140(TXXQXXQF)、SEQ ID NO：141(DTXFMV)和SEQ ID NO：142 (TQAQXXQF)中所示的序列组成了多种延伸酶的保守性区域。上述核 酸序列中出现的标注为X的氨基酸的含义在表2中显示(列3)。在多个位 置处所优选的氨基酸也可以在该表中(列3)找到。列1指示SEQ ID NO， 列2指示序列中的位置。

表2 共有序列中标注为X的氨基酸的含义  SEQ ID NO：  在序列中  X的位置  氨基酸  优选的氨基酸  115  (NXXXHXXMYXYYX)  2  Ser，Cys，Leu，  Gly  Cys，Leu  115  3  Thr，Phe，Ile，  Ser，Val，Trp，  Gly  Phe，Trp  115  4  Val，Ile  Val，Ile  115  6  Val，Ile，Thr  Val，Ile  115  7  Ile，Phe，Val，  Leu，Cys  Cys，Val  115  10  Ser，Gly，Tyr，  Thr，Ala  Thr，Ser  115  13  Phe，Met，Thr，  Leu，Ala，Gly  Leu  116  (HHXXXXWAWW)  3  Ala，Ser，Thr  Ala，Ser，尤其优选  Ala  116  4  Thr，Met，Val，  Leu，Ile，Ser  Leu，Thr，尤其优选  Leu  116  5  Val，Thr，Met，  Leu，Ile  Ile，Ser，尤其优选Ile  SEQ ID NO：  在序列中  X的位置 氨基酸  优选的氨基酸  116  6 Val，Met，Leu， Ile，Ala，Pro， Ser，Phe  Ile，Ser，尤其优选Ile  139  LHXXHH  3 Val，Tyr，Ile  Val，Thr  139  4 Tyr，Phe  Tyr  140  TXXQXXQF  2 Asn，Asp，Thr， Gln，Met，Ser， Ala  Gln  140  3 Thr，Cys，Leu， Met，Ala，Ile， Val，Phe  Ala，Met  140  5 Met，Ile，Leu  Met  140  6 Val，Ile，Leu， Thr，Phe  Leu  141  DTXFMV  3 Leu，Ile，Val， Tyr，Phe，Ala  Phe  142  TQAQXXQF  5 Met，Ile，Leu  Met，Leu，尤其优选  Met  142  6 Val，Ile，Leu， Thr，Phe  Leu

尤其有利的Δ5延伸酶包含序列SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：141和 /或SEQ ID NO：142中的至少一个序列。

尤其有利的经分离的核酸序列选自以下序列：

a)具有SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63； SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO： 77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：131或SEQ ID NO：133中所示序列的核酸序列；

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：44，SEQ ID NO： 46，SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：60，SEQ ID NO：62，SEQ ID NO：64，SEQ ID NO：66，SEQ ID NO：68，SEQ ID NO：76，SEQ ID NO：78，SEQ ID NO：80，SEQ ID NO：84， SEQ ID NO：86，SEQ ID NO：114，SEQ ID NO：132或SEQ ID NO： 134中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63；SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、 SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO： 113、SEQ ID NO：131或SEQ ID NO：133中所示核酸序列的衍生物，其 编码与SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、 SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO： 113、SEQ ID NO：131或SEQ ID NO：133在氨基酸水平具有至少40％ 同源性的多肽并且具有Δ5延伸酶活性。

本发明还涉及编码具有Δ6延伸酶活性的多肽的经分离核酸序列，其选 自：

a)具有SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：111或 SEQ ID NO：183中所示序列的核酸序列，

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：70、SEQ ID NO： 82、SEQ ID NO：112或SEQ ID NO：184中所示氨基酸序列衍生的核酸 序列，或

c)SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：111或 SEQ ID NO：183中所示核酸序列的衍生物，其编码与SEQ ID NO：70、 SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：112或SEQ ID NO：184在氨基酸水平具 有至少40％同源性的多肽并且具有Δ6延伸酶活性。

本发明还涉及编码具有ω3去饱和酶活性的多肽的经分离核酸序列，其 选自：

a)具有SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：105中所示序列的核酸序列，

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：88或SEQ ID NO： 106中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：105中所示核酸序列的衍生物，其 编码与SEQ ID NO：88或SEQ ID NO：106在氨基酸水平具有至少60％同 一性的多肽并且具有ω3去饱和酶活性。

本发明还涉及编码具有Δ6去饱和酶活性的多肽的经分离核酸序列，其 选自：

a)具有SEQ ID NO：89或SEQ ID NO：97中所示序列的核酸序列， 或

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：90或SEQ ID NO： 98中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：89或SEQ ID NO：97中所示核酸序列的衍生物，其 编码与SEQ ID NO：90或SEQ ID NO：98在氨基酸水平具有至少40％同 源性的多肽并且具有Δ6去饱和酶活性。

本发明还涉及编码具有Δ5去饱和酶活性的多肽的经分离核酸序列，其 选自：

a)具有SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：99或 SEQ ID NO：101中所示序列的核酸序列，或

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、 SEQ ID NO：100或SEQ ID NO：102中所示氨基酸序列衍生的核酸 序列，或

c)SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：99或SEQ ID NO： 101中所示核酸序列的衍生物，其编码与SEQ ID NO：92、SEQ ID NO： 94、SEQ ID NO：100或SEQ ID NO：102在氨基酸水平具有至少40％ 同源性的多肽并且具有Δ5去饱和酶活性。

本发明还涉及编码具有Δ4去饱和酶活性的多肽的经分离核酸序列，其 选自：

a)具有SEQ ID NO：95或SEQ ID NO：103中所示序列的核酸序列， 或

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：96或SEQ ID NO： 104中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：95或SEQ ID NO：103中所示核酸序列的衍生物，其编 码与SEQ ID NO：96或SEQ ID NO：104在氨基酸水平具有至少40％ 同源性的多肽并且具有Δ4去饱和酶活性。

本发明还涉及编码具有Δ12去饱和酶活性的多肽的经分离核酸序列， 其选自：

a)具有SEQ ID NO：107或SEQ ID NO：109中所示序列的核酸序列， 或

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：108或SEQ ID NO： 110中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：107或SEQ ID NO：109中所示核酸序列的衍生物，其 编码与SEQ ID NO：108或SEQ ID NO：110在氨基酸水平具有至少 50％同源性的多肽并且具有Δ12去饱和酶活性。

本发明还涉及包含SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、 SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO： 81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、 SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO： 111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或 SEQ ID NO：183的核酸序列的基因构建体，其中根据本发明，所述核酸 有效地与一个或多个调节信号连接。此外，脂肪酸或脂类代谢的其它生物 合成基因可在基因构建体中存在，其中所述其他生物合成基因选自酰基辅 酶A脱氢酶、酰基ACP[酰基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、 脂肪酸酰基转移酶、酰基辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合成酶、 脂肪酸羟化酶、乙酰辅酶A羧化酶、酰基辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和 酶、脂肪酸炔属酶、脂加氧酶、三酰甘油酯脂肪酶、环丙烯合酶、氢过氧 化物裂合酶或脂肪酸延伸酶。选自Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和 酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ12去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ9延伸酶或 ω3去饱和酶的脂肪酸或脂类代谢中的生物合成基因有利地额外存在。

本发明方法中所用的全部核酸序列有利地衍生自真核生物如植物、微 生物或动物。核酸序列优选地衍生自鳟形目、藻类如Mantoniella，隐甲藻 属，裸藻属或Ostreococcus、真菌如疫霉属或者硅藻如海链藻属或褐指藻 属。

方法中所用的编码具有ω3去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6 去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ12去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延 伸酶或Δ9延伸酶活性的蛋白的核酸序列有利地单独导入，或优选地与有 可能使所述核酸在生物中，有利地在植物或微生物中表达的表达盒(核酸 构建体)组合导入。所述核酸构建体可以包含具有酶活性如Δ12去饱和酶、 Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3 去饱和酶活性的多于一种的核酸序列。

为了导入方法中所用的核酸，所述核酸有利地通过众知的方式扩增和 连接。优选地遵循用于Pfu DNA聚合酶或Pfu/TaqDNA聚合酶混合物的符 合规程的程序。引物在考虑所要扩增的序列后选择。引物应当以如此方式 有利地选择以便扩增物包含从起始密码子至终止密码子的完整编码序列。 扩增物在扩增后便利地加以分析。例如凝胶电泳分离可以实施，然后进行 定量和定性分析。此后扩增物可按照标准规程纯化(如Qiagen)。而后一 份经纯化的扩增物在随后的克隆步骤中使用。合适的克隆载体通常为技术 人员所知。这类载体特别包括那些能够在微生物系统中复制的载体，即那 些确保在酵母或真菌中有效克隆和那些有可能稳定转化植物的主要载体。 那些特别可提及的载体是适用于T-DNA介导的转化的多种二元和共整合 的载体系统。这类载体系统通常以其包含至少为农杆菌介导的转染所需的 vir基因和T-DNA分界序列(T-DNA边界)为特征。这类载体系统还有利 地包含其它顺式调节区域，如启动子和终止子序列和/或选择标记，其中已 合适转化的生物通过选择标记可以鉴定。在共整合载体系统的情况下，vir 基因和T-DNA序列在相同载体中排列，而二元系统至少以两个载体为基 础，其中一个载体携带了vir基因但没有T-DNA，同时第二个载体携带了 T-DNA而无vir基因。因此所提及的后一种载体相对较小，容易在大肠杆 菌(E.coli)中和农杆菌中操作和复制。这类二元载体包括来自pBIB-HYG、 pPZP、pBecks、pGreen系列的载体。根据本发明，Bin19、pBI101、pBinAR、 pGPTV和pCAMBIA优选使用。二元载体和它们的用途的综述可在 Hellens等，Trends in Plant Science(2000)5，446-451中找到。为了制 备载体，载体首先以限制性核酸内切酶线性化并且然后按照合适的方式进 行酶修饰。此后纯化载体并且将一份纯化的载体用于克隆步骤。在克隆步 骤中，使用连接酶将已经酶切割并且根据需要已纯化的扩增物与已按类似 方式制备的载体片段克隆。在本上下文中，具体的核酸构建体、或载体或 质粒构建体可具有一个或超过一个的编码性基因片段。将编码性基因片段 在这些构建体中优选地与调节性序列有效连接。调节性序列尤其包括植物 序列，如以上提到的启动子和终止子序列。这类构建体可在微生物，特别 在大肠杆菌和根癌农杆菌中于选择性条件下稳定增殖并且有可能向植物或 微生物中转移异源DNA。

方法中所用的核酸、发明性核酸和核酸构建体可有利地使用克隆载体 向生物如微生物中或有利地向植物中导入，并且因此用于转化植物，如那 些在《Plant Molecular Biology and Biotechnology》(1993年佛罗里达CRC Press出版社Boca Raton)第6/7章第71-119页；1993年Academic Press出版 社Kung和R.Wu编辑的《Transgenic plants》第1卷《Engineering and Utilization》第15-38页F.F.White的Vectors for Gene Transfer in Higher Plants；1993年Academic Press出版社Kung和R.Wu编辑的 《Transgenic plants》第1卷《Engineering and Utilization》第128-143中 B.Jen es等，Techniques for Gene Transfer；Potrykus，Annu.Rev. Plant Physiol.Plant Molec.Biol.42(1991)，205-225中发表和引用的植物。 因此方法中所用的核酸、创新的核酸和核酸构建体和/或载体可用于重组性 修饰广泛类型的生物，有利地修饰植物，因此经重组性修饰的植物成为更 好和/或更高效的PUFA生产者。

存在一系列可修饰Δ12去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和 酶、Δ4去饱和酶、Δ6去饱和酶和/或ω3去饱和酶蛋白质和方法中所用的其 它蛋白质如Δ12去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸 酶、Δ5去饱和酶或Δ4去饱和酶蛋白质的机制，因此有利的多不饱和脂肪酸 在植物、优选在油料作物植物或微生物中的产量、产生和/或产生效率由于 经修饰的蛋白质可直接受到影响。Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸 酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4 去饱和酶蛋白质或基因的量或活性可以得到增加，因此产生了更大量的基 因产物并且最终产生了更大量的通式I化合物。在向缺乏该化合物生物合 成活性和能力的生物中导入相应基因之前，从头(de novo)合成也为可 能。这类似地适用于脂肪酸和脂类代谢中的其它去饱和酶或延伸酶或其它 酶的组合。利用多种趋异的序列即在DNA水平不同的序列在本上下文中也 是有利的，或者利用基因表达的启动子也是有利的，其中所述的启动子可 使不同基因的表达随时间过程不同，例如与种子或贮油组织成熟程度相关。

由于向生物中单独导入Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6 去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去 饱和酶基因或与细胞中其它基因组合导入，不但有可能增加指向终产物的 生物合成流，而且还有可能增加或产生全新的相应三酰甘油酯的组合物。

同样，可增加其它基因的数量或活性，其中所述的其它基因参与为一 种或多种脂肪酸、油、极性和/或中性脂类的生物合成所需的营养素的输入， 由此增加这些前体、辅因子或中间体在细胞中或贮存区室中的浓度，从而 如以下描述可进一步增强细胞产生PUFA的能力。通过优化参与这类化合 物生物合成的一种或多种Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去 饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和 酶的活性或增加其量，或通过破坏参与这些化合物降解的一种或多种基因 的活性，有可能在生物中强化脂肪酸和脂类分子的产量、生产和/或生产效 率。

本发明方法中所用的经分离的核酸分子编码这样的蛋白质或其部分， 其中所述蛋白质或单个蛋白质或其部分包含这样的氨基酸序列，所述氨基 酸序列与序列SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、 SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、 SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO： 24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、 SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO： 38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、 SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO： 52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、 SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO： 70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76、 SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO： 84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、 SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO： 98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、 SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO： 112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、 SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO： 138或SEQ ID NO：184中所示的氨基酸序列具有足够的同源性，因此所 述蛋白质或其部分保留了Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去 饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和 酶的活性。由所述核酸分子编码的蛋白质或其部分优选地在生物中，有利 地在植物中保留了它们的基本酶活性以及参与代谢细胞膜或脂肪体合成所 需的化合物的能力，或参与跨越这类膜的分子运输的能力。所述核酸分子 编码的蛋白质有利地具有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、 SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO： 28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、 SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO： 42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、 SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO： 60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、 SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO： 74、SEQ ID NO：76、SEQ lD NO：78、SEQ ID NO：80、 SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO： 88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、 SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO： 102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、 SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO： 118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、 SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138或SEQ ID NO：184中所示氨基酸 序列至少约50％、优选地至少约60％并且更优选地至少约70％、80％ 和90％并且最为优选地至少约85％、86％、87％、88％、89％、 90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更 高的同一性。为了本发明目的，将同源性或同源的分别理解为意指同一性 或同一的。

可计算涵盖整个氨基酸或核酸序列区域的同源性。技术人员可获得基 于多种序列比较的多种算法的一系列程序。这里Needleman和Wunsch或 Smith和Waterman的算法产生了尤其可靠的结果。作为GCG软件包 [Genetics Computer Group，575 Science Drive，Madison，Wisconsin， USA 5371l(1991)]的部分的PileUp程序(J.Mol.Evolution.，25， 351-360，1987，Higgins等，CABIOS，5 1989：151-153)或Gap和 BestFit程序[Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48；443-453(1970)和 Smith及Waterman(Adv.Appl.Math.2；482-489(1981))用于序列比 对。使用GAP程序和如下设置：缺口权重：50，长度权重：3，平均匹配： 10.000和平均错配：0.000确定如以上以百分率所示的涵盖全长序列的序 列同源性值。除非说明，这些设置总是作为标准设置用于序列比对。

本发明方法中所用的Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去 饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和 酶的基本酶活性理解为意指与序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、 SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、 SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO： 19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、 SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO： 33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、 SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO： 47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、 SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO： 65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、 SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO： 79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、 SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO： 93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、 SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO： 107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、 SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO： 133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183和它们的 衍生物所编码的蛋白质/酶比较，它们保留了至少10％，优选地为20％， 尤其优选地为30％和非常尤其地为40％的酶活性并且因此可参与在生物 中，有利地为在植物或在植物细胞中，或在分子跨膜运输中合成脂肪酸、 脂肪酸酯如二酰甘油酯和/或三酰甘油酯所需的化合物的代谢，这意味着脂 肪酸分子中C18，C20或C22碳链在至少两处，有利地在三、四、五或六处 位置具有双键。

有利地用于方法的核酸可源自细菌、真菌、硅藻、动物如隐杆线虫或 大马哈鱼属或者植物如藻类或者藓类如希瓦氏菌属、剑叶藓属、破囊壶菌 属、镰孢属(Fusarium)、疫霉属、角齿藓属、Mantoniella、 Ostreococcus、等鞭金藻属、Aleurita、Muscarioides、被孢霉属、琉璃苣 属、褐指藻属、隐甲藻属，尤其来自虹鳟、非洲爪蟾、玻璃海鞘、假矮海 链藻、Mantoniella squamata、Ostreococcus sp.、Ostreococcus tauri、细 小裸藻、展叶剑叶藓、致病疫霉、Fusarium graminaeum、寇氏隐甲藻、 角齿藓(Ceratodon purpureus)、球等鞭金藻(Isocrydid galbana)、 Aleurita farinosa、破囊壶菌属的种、Muscarioides viallii、高山被孢霉、 玻璃莴苣、三角褐指藻、秀丽线虫的属和种或尤其有利地来自虹鳟、细小 裸藻、假矮海链藻或寇氏隐甲藻。

可在本发明方法中备选地使用编码Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9 延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸 酶或Δ4去饱和酶并且与SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO： 5，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO： 13，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：19， SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO： 27，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：31，SEQ ID NO：33， SEQ ID NO：35，SEQ ID NO：37，SEQ ID NO：39，SEQ ID NO： 41，SEQ ID NO：43，SEQ ID NO：45，SEQ ID NO：47， SEQ ID NO：49，SEQ ID NO：51，SEQ ID NO：53，SEQ ID NO： 59，SEQ ID NO：61，SEQ ID NO：63，SEQ ID NO：65， SEQ ID NO：67，SEQ ID NO：69，SEQ ID NO：71，SEQ ID NO： 73，SEQ ID NO：75，SEQ ID NO：77，SEQ ID NO：79， SEQ ID NO：81，SEQ ID NO：83，SEQ ID NO：85，SEQ ID NO： 87，SEQ ID NO：89，SEQ ID NO：91，SEQ ID NO：93， SEQ ID NO：95，SEQ ID NO：97，SEQ ID NO：99，SEQ ID NO： 101，SEQ ID NO：103，SEQ ID NO：105，SEQ ID NO：107， SEQ ID NO：109，SEQ ID NO：111，SEQ ID NO：113，SEQ ID NO： 117，SEQ ID NO：119，SEQ ID NO：131，SEQ ID NO：133， SEQ ID NO：135，SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183中所示核酸序 列在严格条件下有利杂交的核酸序列。

方法中所用的核酸序列有利地向表达盒导入，其中所述的表达盒有可 能在生物如微生物或植物中表达这种核酸。

为达到此目的，将编码Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6 去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和 酶的核酸序列与有利地用于增强基因表达的一个或多个调节信号有效地 连接。这类调节序列用于使基因和蛋白质特异性表达。根据宿主生物，这 可以意味例如仅在导入已经发生后才表达和/或过表达这种基因，或立即 表达和/或过表达这种基因。例如这些调节序列采取了诱导物和阻抑物结 合的序列形式，因此控制这种核酸的表达。除了这些新的调节序列以外或 作为这些序列的替代，这些序列的天然调节元件仍可在实际的结构基因之 前存在并且根据需要可以如此方式加以遗传性修饰从而消除了它们的天 然调节能力而且增强这些基因的表达。然而这种表达盒(表达构建体＝基 因构建体)也可以更为简单地构建，也就是说在核酸序列或其衍生物的前 面未插入额外的调节信号而且并不除去天然启动子和其调节功能。作为替 代，天然调节序列已经以如此方式突变从而调节不再发生和/或增强了基 因的表达。这些经修饰的启动子也可本身以部分序列的形式位于天然基因 前(用于本发明核酸序列的一部分的启动子)以增强活性。而且这种基因 构建体也可有利地包含与启动子有效连接的一个或多个称作增强子的序 列，而这有可能增强核酸序列的表达。额外有利的序列如其它调节元件或 终止子序列也可在DNA序列的3′端插入。Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、 Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6 延伸酶和/或Δ9延伸酶基因可在表达盒(基因构建体)中存在单个或多个 拷贝。优选地，仅仅这些基因的单个拷贝存在于每种表达盒中。这种基因 构建体或这类基因构建体可在宿主生物中共同表达。在本上下文中，基因 构建体可插入在一种或多种载体中并且在细胞中以游离的形式存在，或插 入基因组中。当待表达的基因共同存在于一个基因构建体中时，其他基因 在基因组中的插入有利的。

在本上下文中，调节序列或调节因子如上所述可优选地积极影响所导 入基因的基因表达，从而增强基因表达。因此调节元件的增强过程可通过 使用强转录信号如启动子和/或增强子有利地在转录水平上发生。此外例如 通过改善mRNA的稳定性，经增强的翻译同样是可能的。

本发明的另一个实施方案是一种或多种这样的基因构建体，其中所述 基因构建体包含一个或多个如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、 SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO： 27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、 SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO： 41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、 SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO： 59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、 SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO： 73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、 SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO： 87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、 SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO： 101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、 SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO： 117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、 SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183所示的序列或其 衍生物并且编码如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、 SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、 SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO： 22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、 SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO： 36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、 SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO： 50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、 SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO： 68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、 SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO： 82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、 SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO： 96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、 SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO： 110、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：118、 SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO： 136、SEQ ID NO：138或SEQ ID NO：184中所示的多肽。以上提到的Δ12 去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸 酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶蛋白质有利地使脂肪酸分子中 有利地具有一个、二个、三个、四个、五个或六个双键并且有利地具有18、 20或22个碳原子的底物去饱和或延伸。这同样适用于它们的同源物、衍生 物或类似物，其与有利地增强基因表达的一个或多个调节信号有效连接。

用于新方法的有利的调节序列在例如cos、tac、trp、tet、trp-tet、 lpp、lac、lpp-lac、lacIq、T7、T5、T3、gal、trc、ara、SP6、λ-PR或 λ-PL的启动子中存在并且有利地在革兰氏阴性菌中应用。其它有利的调节 序列是例如革兰氏阳性启动子amy和SPO2、酵母或真菌启动子ADC1、 MFα、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28、ADH或者植物启动子 CaMV/35S[Franck等，Cell 21(1980)285-294]、PRP1[ward等，Plant. Mol.Biol.22(1993)]、SSU、OCS、lib4、usp、STLS1、B33、nos或者 泛蛋白或菜豆蛋白启动子中存在。可诱导启动子在本上下文中同样是有利 的如在EP-A-0 388 186(苯磺酰胺可诱导)、Plant J.2，1992：397-404 (Gatz等，四环素可诱导)、EP-A-0 335 528(脱落酸可诱导)或 WO 93/21334(乙醇或环己醇可诱导)中的启动子。其它合适的植物启动 子是马铃薯胞质FBP酶启动子或ST-LSI启动子(Stockhaus等，EMBO J. 8，1989，2445)、大豆磷酸核糖焦磷酸酰氨基转移酶启动子(Genbank Accession No.U87999)或在EP-A-0 249 676中所描述的结节特异性启动 子。

尤其有利的启动子是有可能使得在参与脂肪酸生物合成的组织中表达 的启动子。种子特异性的启动子如所描述的USP启动子非常尤其有利并且 其它启动子如LeB4、DC3、菜豆蛋白或油菜籽蛋白启动子同样如此。进一 步更有利的启动子是种子特异性启动子，这种启动子能用于单子叶或双子 叶植物并且在US 5,608,152(油菜籽的油菜籽蛋白启动子)、WO 98/45461 (拟南芥的油质蛋白启动子)、US 5,504,200(菜豆的菜豆蛋白启动子) WO 91/13980(芸苔的Bce4启动子)、Baeumlein等，Plant J.，2，2，1992： 233-239(来自豆科植物的LeB4启动子)中描述。适于单子叶植物的启动 子是例如大麦lpt-2或lpt-1启动子(WO 95/15389和WO 95/23230)、 大麦醇溶蛋白启动子和WO 99/16890中所描述的其它合适启动子。

原则上，对于新方法可使用所有天然启动子及其调节序列，如那些如 上提及的天然启动子及其调节序列。也可有利地使用合成启动子，可组合 或者单独地使用，尤其当这类合成启动子介导了种子特异性表达时，如那 些WO 99/16890中所描述的启动子。

为了取得特别高的PUFA含量，尤其在转基因植物中，PUFA生物合 成基因应当有利地在油料作物中以种子特异性的方式表达。为实现此目的， 可使用种子特异性启动子或在胚和/或在胚乳中活跃的那些启动子。原则 上，种子特异性启动子既可从双子叶植物也可从单子叶植物中分离。如下 列出了优选的启动子：USP(未知种子蛋白质)和豌豆球蛋白(豌豆((Vicia faba))[Bumlein等，Mol.Gen Genet.，1991，225(3)]，油菜籽蛋白 (油菜籽)[US 5,608,152]、酰基载体蛋白(油菜籽)[US 5,315,001和WO 92/18634]、油质蛋白(拟南芥)[WO 98/45461和WO 93/20216]、菜豆蛋 白(菜豆)[US 5,504,200]、Bce4[WO 91/13980]、豆球蛋白B4(LegB4启 动子)[Bumlein等，Plant J.，2，2，1992]，Lpt2和lpt1(大麦)[WO 95/15389和WO95/23230]、来自稻、玉米和小麦的种子特异性启动子[WO 99/16890 ]、Amy32b、Amy 6-6和aleurain[US 5,677,474]、Bce4(油菜籽) [US 5,530,149]、大豆球蛋白(大豆)[EP 571 741]、磷酸烯醇丙酮酸羧化 酶(大豆)[JP 06/62870]、ADR12-2(大豆)[WO 98/08962]、异柠檬酸裂 合酶(油菜籽)[US 5,689,040]或α淀粉酶(大麦)[EP 781 849]。

植物的基因表达也可通过化学可诱导启动子促进(见于综述Gatz 1997，Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.，48：89-108)。在需要 以时间特异性方式进行基因表达时，这种化学可诱导启动子尤其合适。此 类启动子的例子是水杨酸可诱导启动子(WO 95/19443)、四环素可诱导 启动子(Gatz等(1992)Plant J.2，397-404)和乙醇可诱导启动子。

为确保这类生物合成基因经多个世代后仍然稳定地在转基因植物中整 合，编码Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去 饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶并且用于 方法中的每种核酸应当在一个独立的启动子，优选地在不同于其它启动子 的启动子控制下表达，因为重复序列基序可导致T-DNA不稳定或导致重 组事件。在本上下文中，表达盒有利地按如此方式构建从而启动子后是适 宜的切割位点，这个切割位点有利地位于多位点接头中以便插入将要表达 的核酸，并且根据需要使终止子序列位于这个多位点接头的后面。上述的 这种序列重复多次，优选地重复三、四或五次，由此多达五个基因可在一 个构建体中组合并导入转基因植物中以便表达。这种序列有利地重复了多 至三次。为了表达核酸序列，核酸序列通过例如多位点接头中的合适切割 位点在启动子后面插入。每种核酸序列有利地具有自身的启动子并且根据 需要具有自身的终止子序列。这类有利的构建体在例如DE 101 02 337或 DE 101 02 338中公开。然而仍然可在启动子后面并且根据需要在终止子序 列前插入多个核酸序列。这里表达盒中所插入核酸的插入位点或其序列并 不特别重要，也就是说核酸序列可在表达盒中最先的位置或最末的位置插 入而不显著地影响这种核酸序列的表达。不同的启动子例如USP、LegB4 或DC3启动子和不同的终止子序列可有利地在表达盒中使用。然而也可在 表达盒中只使用一种类型的启动子。但是这可能导致不为所需的重组事件。

如以上所述，已导入基因的转录应当通过位于已导入的生物合成基因 3’端的合适终止子序列有利地终止(在终止密码子之后)。在本上下文中， 可使用序列的例子是OCS1终止子序列。如同启动子的情况，对每个基因 应该使用不同的终止子序列。

如以上所述，基因构建体还可包含欲导入生物体的其它基因。向宿主 生物中导入并且因此表达调节基因如诱导物、阻抑物或酶基因是可能并且 有利的，其中这些诱导物、阻抑物或酶因其活性参与了生物合成途径中一 种或多种基因的调节。这类调节基因可为异源或同源。而且脂肪酸或脂类 代谢中的其它生物合成基因可在核酸构建体或基因构建体中有利地存在； 然而这些基因还可以位于一种或多种其它核酸构建体中。优选使用的脂肪 酸或脂类代谢中的生物合成基因是选自酰基辅酶A脱氢酶、酰基ACP[酰 基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基转移酶、酰基辅 酶A：溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合成酶、脂肪酸羟化酶、乙酰基辅酶 A羧化酶、酰基辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和酶、脂肪酸炔属酶、脂加氧 酶、三酰甘油酯脂肪酶、环丙烯合酶、氢过氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶 或它们组合的基因。尤其有利的核酸序列是脂肪酸或脂类代谢中的生物合 成基因，这些生物合成基因选自酰基辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、ω3去 饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去 饱和酶、Δ12去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或Δ9延伸酶。

在本上下文中，以上提到的核酸或基因可与其它延伸酶和去饱和酶组 合在以上提及的表达盒中克隆并在农杆菌属协助下转化植物。

这里调节序列或调节因子可如以上所述优选地积极影响已导入基因的 表达，并且因此增强了已导入基因的表达。因此，调节元件的增强可通过 使用强转录信号例如启动子和/或增强子有利地在转录水平发生。然而例如 通过改善mRNA稳定性同样可增强翻译。原则上，这类表达盒可直接用于 导入植物或导入载体。

这些有利的载体优选地表达载体包含编码Δ12去饱和酶、ω3去饱和 酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、 Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶并且用于方法中的核酸，或包含核酸构建体，其 中所述核酸单独使用或者与脂肪酸或脂类代谢中的其它生物合成基因如酰 基辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、ω3去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和 酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ12去饱和酶、ω3去饱和 酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或Δ9延伸酶组合。如在本上下文中所用， 术语“载体”指这样的核酸分子，其能够运输与这种核酸分子所结合的其 它核酸。载体的一个类型是“质粒”，即额外的DNA片段可加以连入的环 状双链DNA环。载体的另一个类型是病毒载体，对额外的DNA片段而言 有可能向这种病毒的基因组内连接。某些载体能够在已导入这些载体的宿 主细胞中自主复制(例如具有细菌复制原点的细菌载体)。其它载体当向 宿主细胞导入时有利地在宿主细胞的基因组内整合并且因此随宿主基因组 一起复制。而且某些载体能够控制与这些载体有效连接的基因的表达。这 些载体在本上下文中称为“表达载体”。通常适用于DNA重组技术的表达 载体采用了质粒的形式。在本说明书中由于质粒是最常用的载体形式，故 “质粒”和“载体”可交互使用。然而本发明还将覆盖具有类似功能的其它 形式的表达载体如病毒载体。而且术语“载体”还将包含技术人员熟知的 其它载体如噬菌体、病毒如SV40、CMV、TMV、转座子、IS元件、噬 粒、噬菌粒、粘粒、线形或环形DNA。

有利地在方法中使用的重组表达载体包含具有宿主细胞中适于所用核 酸表达的形式的如下所述核酸或以上提及的基因构建体，即所述重组表达 载体包含基于用于表达的宿主细胞所选择的一种或多种调节序列，其中这 种(类)调节序列有效地与将要表达的核酸序列连接。在重组表达载体中， “有效连接的”意指将目的核苷酸序列与调节序列以如此方式连接即有可 能使这种核苷酸序列表达并且它们彼此连接而使这两类序列(例如在体外 转录/翻译系统中，或如果载体导入了宿主细胞，在宿主细胞中)都执行了 属于各序列的预期功能。术语“调节序列”旨在包含启动子、增强子和其它 表达控制元件(例如多聚腺苷酸化信号)。这些调节序列在例如Goeddel： Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)一书中描述或参见：Gruber和Crosby， Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnolgy，CRC Press，Boca Raton，Florida，Glick和Thompson编著，Chapter 7，89-108，包括其中 引用的参考文献。调节序列包含那些在多种类型的宿主细胞中控制核苷酸 序列组成型表达的调节序列和那些控制核苷酸序列仅仅在特定的宿主细胞 中于特定条件下直接表达的调节序列。技术人员知道表达载体的设计可依 赖多种因素如待转化的宿主细胞的选择、蛋白质的目的表达水平及其它因 素。

所用的重组表达载体可设计用于在原核或真核细胞中表达Δ12去饱和 酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、 Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶。为方便起见，载体构建的中 间步骤常在微生物中实施，因此这样设计是有利的。例如Δ12去饱和酶、 ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去 饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶基因可使用载体按照如WO 98/01572 中所描述的转化方法在细菌细胞、昆虫细胞(使用杆状病毒表达载体)、 酵母和其它真菌细胞(见Romanos，M.A.等(1992)“Foreign gene expression in yeast：a review”，Yeast 8：423-488：van den Hondel、 C.A.M.J.J.等.(1991)“Heterologous gene expression in filamentous fungi”， in：More Gene Manipulations in Fungi，J.W.Bennet和L.L.Lasure编 辑，第396-428页：Academic Press：San Diego：和van den Hondel、 C.A.M.J.J.& Punt，P.J.(1991)”Gene transfer systems and vector development for filamentous fungi，in：Applied Molecular Genetics of Fungi，Peberdy，J.F.等编辑，第1-28页Cambridge University Press： Cambridge)、藻类(Falciatore等，1999，Marine Biotechnology.1，3： 239-251)、多种类型的纤毛虫：Holotrichia，缘毛亚纲(Peritrichia)， 旋毛亚纲(Spirotrichia)，吸管亚纲(Suctoria)，四膜虫(Tetrahymena)， 草履虫(Paramecium)，豆形虫(colpidium)，瞬目虫(Glaucoma)， 匙口虫(Platyophrya)，Potomacus，Desaturaseudocohnilembus，游仆 虫(Euplotes)，Engelmaniella和stylonychia(Stylonychia)，尤其是 Stylonychia lemnae并且优选地在多细胞植物的细胞中(见Schmidt，R.和 Willmitzer，L.(1988)“High efficiency Agrobacterium tumefaciens- mediated transformation of Arabidopsis thaliana leaf and cotyledon explants”Plant Cell Rep.：583-586；Plant Molecular Biology and Biotechnology，C Press，Boca Raton，Florida，Chapter 6/7，pp.71-119 (1993)；F.F.White，B.Jenes等，Techniques for Gene Transfer，in： Transgenic Plants，第一卷，Engineering and Utilization，Ed.：Kung和 R.Wu，Academic Press(1993)，128-43；Potrykus，Annu.Rev.Plant Physiol. Plant Molec.Biol.42(1991)，205-225(并且其中所应用的参考文献))表达。 合适的宿主细胞在Goeddel，Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)中详细讨论。作为 备选，重组表达载体可例如使用T7-启动子调节序列和T7-聚合酶体外转录 和翻译。

在大多数情况下，原核生物中蛋白质的表达涉及使用包含控制融合或 非融合蛋白质表达的组成型或可诱导启动子的载体。典型的融合表达载体 尤其为pGEX(Pharmacia Biotech Inc；Smith，D.B.和Johnson，K.S.(1988) Gene 67：31-40)、pMAL(New England Biolabs，Beverly，MA)和pRIT5 (Pharmacia，Piscataway，NJ)，其中谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦 芽糖E结合蛋白和蛋白A分别与重组靶蛋白融合。

合适的可诱导的非融合大肠杆菌表达载体的例子尤其为pTrc(Amann 等(1988)Gene 69：301-315)和pET 11d(1990年加利福尼亚圣迭哥 Academic Press出版社《Methods in Enzymology》185的Studier等《Gene Expression Technology》第60-89页)。靶基因自pTrc载体的表达是基 于宿主RNA聚合酶自杂合trp-lac融合启动子的转录。靶基因自pET 11d 载体的表达是基于经共表达的病毒RNA聚合酶(T7-gn1)所介导的 T7-gn10-lac融合启动子的转录，这种病毒RNA聚合酶由宿主菌株BL21 (DE3)或HMS174(DE3)的定居λ-原噬菌体提供，其中所述定居λ-原 噬菌体携带了受lacUV 5启动子转录控制的T7 gn1基因。

其它适用于原核生物的载体为技术人员所知，这类载体是例如大肠杆 菌的pLG338、pACYC184、pBR系列如pBR322、pUC系列如pUC18 或pUC19、M113mp系列、pKC30、pRep4、pHS1、pHS2、pPLc236、 pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-III113-B1、λgt11或pBdCI，链霉菌 中的pIJ101、pIJ364、pIJ702或pIJ361，芽孢杆菌属中的pUB110、 pC194或pBD214，棒杆菌属中的pSA77或pAJ667。

在另一个实施方案中，表达载体是酵母表达载体。用于酿酒酵母中表 达的载体的例子包含pYeDesaturasec1(Baldari等.(1987)Embo J.6： 229-234)、pMFa(Kurjan和Herskowitz(1982)Cell 30：933-943)、 pJRY88(Schultz等(1987)Gene 54：113-123)和pYES2(Invitrogen Corporation，San Diego，CA)。用于构建适用于其它真菌如丝状真菌的 载体和构建方法包含在1991年剑桥大学的剑桥大学出版社J.F.Peberdy等 编辑的《Applied Molecular Genetics of fungi》第1-28页，van den Hondel、 C.A.M.J.J；和Pun，P.J.的“Gene transfer systems and vector development for filamentous fungi”中或在《More Gene Manipulations in Fungi》[圣迭 哥Academic Press出版社J.W.Bennet和L.L.Lasure编辑，第396-428页] 中所详细描述的那些载体和方法。其它合适的酵母载体为例如pAG-1、 YEp6、YEp13和pEMBLYe23。

作为备选，Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、 Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶可在 昆虫细胞中用杆状病毒载体表达。可用于在培养的昆虫细胞(例如Sf9细 胞)中表达蛋白质的杆状病毒表达载体包含pAc系列(Smith等(1983) Mol.Cell Biol.3：2156-2165)和pVL系列(Lucklow和Summers(1989) Virology 170：31-39)。

以上提到的载体仅概略回顾了可能适合的载体。其它的质粒为技术人 员所知并且在例如《Cloning vector》(1985年阿姆斯特旦-纽约-牛津 Elsevier出版社，Pouwels，P.H.等编辑，ISBN 0 444 904018)中描述。对 于其它合适用于原核及真核细胞的表达系统，见1989年纽约冷泉港Cold Spring Harbor Laboratory出版社，Sambrook，J.、Fritsch，E.F.和Maniatis，T. 的《Molecular Cloning：A Laboratory Manual》第二版第16和第17章中 的描述。

在方法的又一个实施方案中，Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸 酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/ 或Δ4去饱和酶可在单细胞植物细胞(如藻类)中表达，参见Falciatore等， 1999，Marine Biotechnology 1(3)：239-251及其中引用的参考文献，并 且可在高等植物的植物细胞中表达(如种子植物例如耕作作物)。植物表 达载体的例子包括在1992年Becker，D.、Kemper，E.、Schell，J.和 Masterson，R.“New plant binary vectors with selectable markers located proximal to the left border”，Plant Mol.Biol.20：1195-1197；和1984年 Bevan，M.W.“Binary Agrobacterium vectors for plant transformation”， Nucl.Acids Res.12：8711-8721；在1993年Academic Press出版社Kung 和R.Wu编辑的《Transgenic Plants：第1卷Engineering and Utilization》 第15-38页的Vectors for Gene Transfer in Higher Plants中所详细描述的 那些植物表达载体。

植物表达盒优选地包含能够在植物细胞中控制基因表达并且有效连接 的调节序列，如此使每一种序列能够实现它的功能，例如多聚腺苷酸化信 号的转录终止功能。优选的多聚腺苷酸化信号是衍生自根癌农杆菌T-DNA 如Ti质粒pTiACH5(1984年Gielen等，EMBO J.3期，835等)的基 因3的那些多聚腺苷酸化信号，其中已知基因3是章鱼氨酸合酶，或者是 那些多聚腺苷酸化信号的等同物，但是所有其它在植物中具有功能性活性 的终止子序列同样合适。

由于植物基因表达通常不限于在转录水平，植物表达盒优选地包含其 它有效连接的序列如翻译增强子例如超驱动序列，所述的超驱动序列增强 烟草花叶病毒5’-非翻译前导序列，这种前导序列提高了蛋白质/RNA比 (Gallie等，1987，Nucl.Acids Research 15：8693-8711)。

如以上所述，植物基因表达必须有效地与合适启动子连接，其中这种 启动子引发基因以正确的时间过程或以细胞或组织特异性方式表达。可使 用的启动子是组成型启动子(Benfey等，EMBO J.8(1989)2195-2202)， 例如那些衍生自植物病毒如35S CaMV(Franck等，Cell 21(1980) 285-294)、19S CaMV(也见US 5352605和WO 84/02913)的启动子或植 物启动子如在US 4,962,028中所描述Rubisco亚单位的启动子。

用于在植物基因表达盒中有效连接的其它优选的序列是靶向序列，其 中这种靶向序列为基因产物向该基因产物对应的细胞区室中(见 Kermode，Crit.Rev.Plant Sci.15，4(1996)285-423的综述及其引用的 参考文献)例如向液泡、细胞核、所有类型质体如造粉体、叶绿体、色质 体、胞外空间、线粒体、内质网、油质体、过氧化物酶体和植物细胞的其 它区室中导入所需。

如以上所述，植物基因表达还可以通过化学可诱导启动子(见Gatz 1997，Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.，48：89-108的综述)实 现。当希望基因表达需以时间特异性发生时，化学可诱导启动子尤其适合。 这类启动子的例子是水杨酸可诱导启动子(WO 95/19443)、四环素可诱 导启动子(Gatz等(1992)Plant J.2，397-404)和乙醇可诱导启动子。

对生物性或非生物应激条件反应的启动子如病原诱导的PRP1基因启 动子(Ward等，Plant.Mol.Biol.22(1993)361-366)、热诱导的番茄 hsp80启动子(US 5,187,267)、冷冻诱导的马铃薯α淀粉酶启动子(WO 96/12814)或外伤诱导的pinII启动子(EP-A-0 375 091)同样适合。

那些在进行脂肪酸、脂类和油生物合成的组织和器官中，在种子细胞 如胚乳细胞和发育胚的细胞中引起基因表达的启动子尤其有利。这类合适 的启动子是油菜籽的油菜籽蛋白启动子(US 5,608,152)、蚕豆的USP启 动子(Baeumlein等，Mol Gengenet，1991，225(3)：459-67)、拟南 芥的油质蛋白启动子(WO 98/45461)、菜豆的菜豆蛋白启动子 (US 5,504,200)、芸苔属的Bce4启动子(WO 91/13980)或豆球蛋白B4 启动子(LeB4；Baeumlein等，1992，Plant Journal，2(2)：233-9)及 在单子叶植物如玉米、大麦、小麦、黑麦、稻等中引起种子特异性表达的 启动子。重要的合适启动子是大麦的lpt2或lpt1基因启动子(WO 95/15389 和WO 95/23230)或WO 99/16890中所描述来自大麦的大麦醇溶蛋白基因、 稻的谷蛋白基因、稻的水稻素基因、稻的谷醇溶蛋白基因、小麦的麦醇溶 蛋白基因、小麦的谷蛋白基因、玉米的玉米醇溶蛋白基因、燕麦的谷蛋白 基因、高梁的kasirin基因或黑麦的裸麦醇溶蛋白基因的启动子。

引起方法中所用的Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱 和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和 酶的多重平行表达可能尤为所需。这类表达盒可通过同时转化多种单独的 表达构建体，或优选地通过在一个载体构建体上组合多种表达盒而产生。 同样在每一情况下多种载体可以用多重表达盒转化然后向宿主细胞转移。

因为质体是合成脂类生物合成的前体和某些终产物的区室，同样尤其 适合的其它启动子是那些引起质体特异性表达的启动子。这类合适的启动 子如病毒RNA聚合酶启动子在WO 95/16783和WO 97/06250中描述以及 来自拟南芥的clpP启动子在WO 99/46394中描述。

载体DNA可通过常规的转化或转染技术向原核和真核细胞内导入。 术语“转化”和“转染”、接合和转导如在本上下文中所用，旨在包含本 领域众知的用于向宿主细胞内导入外源核酸(如DNA)的多种方法，包括 磷酸钙或氯化钙共沉淀、DEAE葡聚糖介导的转染、脂质体转染、天然感 受态、化学介导的转移、电穿孔或粒子轰击。适用于转化或转染包括植物 细胞在内的宿主细胞的方法可在Sambrook等(1989年纽约冷泉港Cold Spring Harbor Laboratory出版社《Molecular Cloning：A Laboratory Manual》第二版)和其它的实验室教材如1995年新泽西Totowa的Humana Press出版社《Methods in Molecular Biology》第44卷Gartland和Davey 编辑的《Agrobacterium protocols》中找到。

适于摄入本发明的核酸、本发明的基因产物或本发明的载体的宿主细 胞是所有原核或真核生物。有利使用的宿主生物是微生物如真菌或酵母或 者植物细胞，优选植物或其部分。优选使用真菌、酵母或植物，尤其优选 使用植物，非常尤其优选使用具有高脂类化合物的植物如油料作物，例如 油菜籽、月见草、大麻、大蓟、花生、卡诺拉油菜、亚麻子、大豆、红 花、向日葵、琉璃苣，或植物如玉米、小麦、黑麦、燕麦、小黑麦、稻、 大麦、棉、木薯、胡椒、万寿菊，茄科植物如马铃薯、烟草、茄和番茄、 豌豆属的种、豌豆、紫花苜蓿，灌木植物(咖啡、可可、茶)，柳属的种、 树(油棕榈，椰子)和宿生牧草及饲料作物。本发明尤其优选的植物是油 料作物如大豆、花生、油菜籽、卡诺拉油菜、亚麻子、大麻、月见草、向 日葵、红花、树(油棕榈、椰子)。

本发明还涉及编码具有Δ5延伸酶活性的多肽的上述经分离核酸序列， 其中由这种核酸序列所编码的延伸酶转化具有一个双键的C16和C18脂肪 酸并且有利地转化具有一个Δ6双键的多不饱和C18脂肪酸以及具有一个 Δ5双键的多不饱和C20脂肪酸。这种延伸酶不延伸C22脂肪酸。

有利的经分离的核酸序列是编码具有Δ5延伸酶活性并且包含选自具 有序列SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：141或SEQ ID NO：142中所示氨基酸序列的多 肽的核酸序列。

其它有利的经分离的核酸序列是编码具有Δ5延伸酶活性并且包含选 自如下的氨基酸序列组合的多肽的核酸序列：

a)SEQ ID NO：115和SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：115和SEQ ID NO：140或者SEQ ID NO：139和SEQ ID NO：140；或

b)SEQ ID NO：116和SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：116和SEQ ID NO：142或者SEQ ID NO：141和SEQ ID NO：142；或

c)SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：139和SEQ ID NO：140或者SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：141和SEQ ID NO：142。

编码具有Δ5延伸酶活性的多肽的优选核酸序列有利地包含以上提及 的氨基酸序列。以上提及的氨基酸序列在表2中较详细地描述。

尤其有利的经分离的核酸序列是选自如下的核酸序列：

a)具有SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63； SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO： 77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：131或SEQ ID NO：133中所示序列的核酸序 列，

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：44、SEQ ID NO： 46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：84、 SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132或SEQ ID NO： 134中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63；SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、 SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO： 113、SEQ ID NO：131或SEQ ID NO：133中所示核酸序列的衍生物，其 中这种核酸序列的衍生物编码与SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、 SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO： 62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132或SEQ ID NO：134在 氨基酸水平具有至少40％同源性的多肽并且具有Δ5延伸酶活性。

本发明还涉及如以下所编号并且编码Δ6延伸酶、ω3去饱和酶、Δ6去饱 和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶或Δ12去饱和酶的核酸序列。

其它有利的经分离的核酸序列是选自如下的核酸序列：

a)具有SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：111或 SEQ ID NO：183中所示序列的核酸序列，

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：70、SEQ ID NO： 82、SEQ ID NO：112或SEQ ID NO：184中所示氨基酸序列衍生的核酸序 列，或

c)SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：111或 SEQ ID NO：183中所示核酸序列的衍生物，其中这种核酸序列的衍生物 编码与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：112或SEQ ID NO：184在氨基酸水平具有至少40％同源性的多肽并且具有Δ6延伸酶活 性。

编码具有ω3去饱和酶活性的经分离的核酸序列，其选自：

a)具有SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：105中所示序列的核酸序列，

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：88或SEQ ID NO： 106中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：105中所示核酸序列的衍生物，其 中这种核酸序列的衍生物编码与SEQ ID NO：88或SEQ ID NO：106在氨 基酸水平具有至少60％同源性的多肽并且具有ω3去饱和酶活性.

编码具有Δ6去饱和酶活性的经分离的核酸序列，其选自：

a)具有SEQ ID NO：89或SEQ ID NO：97中所示序列的核酸序列， 或

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：90或SEQ ID NO： 98中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：89或SEQ ID NO：97中所示核酸序列的衍生物，其 中这种核酸序列的衍生物编码与SEQ ID NO：90或SEQ ID NO：98在氨 基酸水平具有至少40％同源性的多肽并且具有Δ6去饱和酶活性。

编码具有Δ5去饱和酶活性的经分离的核酸序列，其选自：

a)具有SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：99或SEQ ID NO：101中所示序列的核酸序列，或

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：92、SEQ ID NO： 94、SEQ ID NO：100或自SEQ ID NO：102中所示氨基酸序列衍生的核 酸序列，或

c)SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：99或SEQ ID NO： 101中所示核酸序列的衍生物，其中这种核酸序列的衍生物编码与SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：100或SEQ ID NO：102在氨基 酸水平具有至少40％同源性的多肽并且具有Δ5去饱和酶活性。

编码具有Δ12去饱和酶活性的经分离的核酸序列，其选自：

a)具有SEQ ID NO：95或SEQ ID NO：103中所示序列的核酸序列， 或

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：96或SEQ ID NO： 104中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：95或SEQ ID NO：103中所示核酸序列的衍生物， 其中这种核酸序列的衍生物编码与SEQ ID NO：96或SEQ ID NO：104 在氨基酸水平具有至少40％同源性的多肽并且具有Δ6去饱和酶活性。

编码具有Δ12去饱和酶活性的经分离的核酸序列，其选自：

a)具有SEQ ID NO：107或SEQ ID NO：109中所示序列的核酸序 列，或

b)作为遗传密码简并性的结果，可从SEQ ID NO：108或SEQ ID NO： 110中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或

c)SEQ ID NO：107或SEQ ID NO：109中所示核酸序列的衍生物， 其中所述的衍生物编码与SEQ ID NO：108或SEQ ID NO：110在氨基酸 水平具有至少50％同源性的多肽并且具有Δ12去饱和酶活性。

本发明以上提及的核酸序源自能合成PUFA的生物如非人类动物、纤 毛虫、真菌、植物如藻类或腰鞭毛虫(dinofalgellates)。

以上提及的经分离的核酸序列有利地源自鲑形目、爪蟾科或海鞘科、 硅藻的海链藻属或隐甲藻属，或者源自草绿藻科例如Ostreococcus属、或 裸藻科如裸藻属、或疫霉科例如疫霉属。

本发明还涉及如以上所述编码具有ω3去饱和酶活性的多肽的经分离 核酸序列，其中这种核酸序列所编码的ω3去饱和酶转化具有二、三、四 或五个双键的C18、C20和C22脂肪酸并且有利地转化具有二或三个双键的 多不饱和C18-脂肪酸和具有二、三或四个双键的C20-脂肪酸。这种ω3去 饱和酶也可使具有四个或五个双键的C22-脂肪酸去饱和。

如以上所述，本发明还涉及编码具有Δ12去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5 去饱和酶和Δ6去饱和酶活性的多肽的经分离核酸序列，其中由这些核酸 序列所编码的Δ12去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶和Δ6去饱和酶转 化具有一、二、三、四或五个双键的C18、C20和C22脂肪酸并且有利地转 化具有一、二或三个双键的多不饱和C18脂肪酸如C18:1Δ9、C18:2Δ9，12或 C18:3Δ9，12，15，有利地转化具有三或四个双键的多不饱和C20脂肪酸如 C20:3Δ8，11，14或C20:4Δ8，11，14，17或有利地转化具有四或五个双键的多不饱和 C22脂肪酸如C22:4Δ7，10，13，16或C22:5Δ7，10，13，16，19。这些脂肪酸有利地在磷脂 或者辅酶A脂肪酸酯中去饱和，有利地在辅酶A脂肪酸酯中去饱和。

在一个有利的实施方案中，术语“核酸(分子)”如在本上下文中所用 还包含位于编码区的3’端和5’端的非翻译序列：位于编码区5’端上游序 列的至少500个，优选200个，尤其优选100个核苷酸序列和位于编码区 的3’端下游序列的至少100个，优选50个，特别优选20个核苷酸的序列。 “经分离的”核酸分子独立于在这种核酸的天然来源中存在的其它核酸分 子。“经分离的”核酸优选地不具备这种核酸所来源的生物的基因组DNA 中天然分布于这种核酸两侧的序列(例如位于这种核酸序列的5’端和3’端 的序列)。在不同的实施方案中，经分离的Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、 Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延 伸酶或Δ4去饱和酶的核酸分子可包含例如小于约5kb、4kb、3kb、 2kb、1kb、0.5kb或0.1kb的核苷酸序列，而这些核苷酸序列在来源于 这类核酸分子所来源的细胞的基因组DNA中天然地分布在这类核酸分子 的两侧。

方法中所用的核酸分子，例如具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、 SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、 SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO： 19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、 SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO： 33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、 SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO： 47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、 SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO： 65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、 SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO： 79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、 SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO： 93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、 SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO： 107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、 SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO： 133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183的核苷酸 序列或者其部分的核酸分子可使用分子生物学标准技术和这里提供的序列 信息分离。DNA或氨基酸水平的同源序列或同源的保守序列区域例如还可 在比较性算法的协助下鉴定。它们可用作杂交探针和用于标准杂交技术(例 如在1989年纽约冷泉港Cold Spring Harbor Laboratory出版社 《Molecular Cloning：A Laboratory Manual》第二版所描述的那些探针和 标准杂交技术)以分离可用于方法的其它核酸序列。而且包含 SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、 SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、 SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO： 23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、 SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO： 37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、 SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO： 51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、 SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO： 69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、 SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO： 83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、 SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO： 97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、 SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO： 111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、 SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO： 137或SEQ ID NO：183的完整序列或其部分的核酸分子可通过聚合酶链 反应分离，其中寡核苷酸引物以这种序列或其部分为基础使用(例如包含 完整序列或其部分的核酸分子通过以相同的序列为基础所产生的寡核苷酸 引物进行的聚合酶链反应分离)。例如mRNA可从细胞中分离(如通过 Chirgwin等(1979)Biochemistry 18：5294-5299的硫氰酸胍提取方法)和 通过逆转录酶获得cDNA(例如可以用从Gibco/BRL、Bethesda、MD获 得的莫洛尼MLV逆转录酶或可以用从Seikagaku America，Inc.， St.Petersburg，FL获得的AMV逆转录酶)。用于聚合酶链反应扩增的合 成寡核苷酸引物可基于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO： 5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO： 13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、 SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO： 27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、 SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO： 41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、 SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO： 59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、 SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO： 73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、 SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO： 87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、 SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO： 101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、 SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO： 117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、 SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183中所示的一种 序列产生或在SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、 SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、 SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO： 22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、 SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO： 36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、 SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO： 50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、 SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO： 68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、 SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO： 82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、 SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO： 96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、 SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO： 110、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：118、 SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO： 136、SEQ ID NO：138或SEQ ID NO：184中详述的氨基酸序列协助下产 生。本发明的核酸可使用cDNA或备选地使用基因组DNA作为模板并且 使用合适的寡核苷酸引物通过标准PCR扩增技术扩增。所扩增的核酸因此 可向合适的载体克隆并且通过DNA序列分析描述特征。与去饱和酶核苷 酸序列对应的寡核苷酸可通过标准合成方法如使用自动DNA合成仪产生。

与具有序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、 SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、 SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO： 21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、 SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO： 35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、 SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO： 49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、 SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO： 67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、 SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO： 81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、 SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO： 95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、 SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO： 109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、 SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO： 135、SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183的Δ12去饱和酶、ω3去饱和 酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、 Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶的核酸序列的同源物意指例如与SEQ ID NO：1、 SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、 SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO： 17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、 SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO： 31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、 SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO： 45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、 SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO： 63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、 SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO： 77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、 SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO： 91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、 SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO： 105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、 SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO： 131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或 SEQ ID NO：183中所示的核苷酸序列或其同源物、衍生物或类似物或者 它们的部分具有至少约50或60％，优选地具有至少约60或70％，更为优 选地具有至少约70或80％、90％或95％并且甚至更为优选地具有至少约 85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、 95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性或同源性的等位基因变体。 具有与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO： 7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO： 15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、 SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO： 29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、 SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO： 43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、 SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO： 61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、 SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO： 75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、 SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO： 89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、 SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO： 103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、 SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO： 119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、 SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183中所示诸核苷酸序列之一或其部分 杂交的核苷酸序列的经分离核酸分子可在例如严格条件下进行杂交。根据 本发明，将其部分理解为意指至少25个碱基对(bp)、50bp、75bp、100 bp、125bp或150bp，优选至少175bp、200bp、225bp、250bp、275bp 或300bp，尤其优选350bp、400bp、450bp、500bp或更多的碱基对为 杂交所用。全长序列的使用同样是可能并且有利的。等位基因变体尤其包 含功能性变体，这种功能性变体可自/向SEQ ID NO：1、SEQ ID NO： 3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO： 11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、 SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO： 25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、 SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO： 39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、 SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO： 53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、 SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO： 71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、 SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO： 85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、 SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO： 99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、 SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO： 113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、 SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或 SEQ ID NO：183中所详述序列通过核苷酸的删除、插入或替代而获得， 然而即便由于插入了一个或多个核苷酸，预计所合成的最终蛋白质的酶活 性仍然有利地得以保留。保留了Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、 Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4 去饱和酶的酶活性的蛋白质，即蛋白质的酶活性基本上未减少意指与 SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、 SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、 SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO： 23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、 SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO： 37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、 SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO： 51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、 SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO： 69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、 SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO： 83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、 SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO： 97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、 SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO： 111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、 SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO： 137或SEQ ID NO：183所编码的蛋白质比较，这类蛋白质具有至少 10％，优选地具有20％，尤其优选地具有30％，非常尤其优选地具有 40％的原初酶活性。计算了涵盖整个氨基酸或核酸序列区域的同源性。技 术人员可获得基于多种序列比较的多种算法的一系列程序。这里 Needleman和Wunsch或Smith和Waterman的算法产生了尤其可靠的结 果。这里作为GCG软件包[Genetics Computer Group，575 Science Drive，Madison，Wisconsin，USA 53711(1991)]的部分的PileUp程序 (J.Mol.Evolution.，25，351-360，1987，Higgins等，CABIOS，5 1989：151-153)或Gap和BestFit程序[Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol. 48；443-453(1970)和Smith及Waterman(Adv.Appl.Math.2；482-489 (1981))用于序列比对。使用GAP程序并如下设置：缺口权重：50， 长度权重：3，平均匹配：10.000和平均错配：0.000测定了如以上以百分 率所示的涵盖全长序列的序列同源性值。除非另有说明，这些设置总是作 为标准设置用于序列比对。

SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO： 7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO： 15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、 SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO： 29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、 SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO： 43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、 SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO： 61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、 SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO： 75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、 SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO： 89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、 SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO： 103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、 SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO： 119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、 SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183的同源物同样意指例如细菌、真菌 和植物的同源物、经截短的序列、编码和非编码的DNA序列的单链DNA 或单链RNA。

SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO： 7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO： 15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、 SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO： 29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、 SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO： 43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、 SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO： 61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、 SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO： 75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、 SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO： 89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、 SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO： 103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、 SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO： 119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、 SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：183的同源物还意指衍生物例如启动子 变体。通过交换一个或多个核苷酸、通过(多次)插入和/或(多次)删除 可修饰位于所详述的核苷酸序列上游的启动子同时并未不利地影响这种启 动子的功能或活性。进一步有可能通过修饰启动子序列增强启动子的活性 或者有可能以包括来自异源生物的启动子在内的更为活跃的启动子完全取 代这类启动子。

将具有Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8 去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶活性并 且参与脂类和脂肪酸、PUFA辅因子和酶的代谢或参与亲脂化合物跨膜运 输的以上提及的核酸和蛋白质分子在本发明的方法中使用，以便在转基因 植物有利地在植物如玉米、小麦、黑麦、燕麦、小黑麦、稻、大麦、大 豆、花生、棉花、亚麻属的种例如亚麻子或亚麻，芸苔属的种例如油菜籽、 卡诺拉油菜和芜箐、胡椒、向日葵、琉璃苣、月见草和万寿菊，茄科的植 物例如马铃薯、烟草、茄和番茄，豌豆属的种，豌豆，木薯，紫花苜蓿， 灌木植物(咖啡、可可、茶)，柳属的种，树(油棕榈、椰子)和宿生牧 草和饲料作物中调节PUFA的产生，所述的调节为直接调节(例如当脂肪 酸生物合成中的蛋白质过表达或优化表达对经修饰的生物中脂肪酸的产 量、生产和/或生产效率有直接影响时)和/或具有间接影响，然而这种间 接效果无论如何总是引起了PUFA产量、生产和/或生产效率的增强或所不 需的化合物的减少(例如当调节细胞中脂类和脂肪酸、辅因子和酶的代谢 引起了所需化合物的产量、生产和/或生产效率的改变或细胞中目的化合物 组分的改变，而这反过来又可影响一种或多种脂肪酸时)。

多种前体分子和生物合成酶的组合导致了多种脂肪酸分子的产生，这 决定性地影响了脂类组成，因为多不饱和脂肪酸(PUFA)不仅掺入三酰 甘油酯而且也掺入膜脂类。

芸苔科、紫草科、报春花科或亚麻科特别适于产生PUFA如硬脂艾杜 糖酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。亚麻籽(linum usitatissimum) 尤其有利地适合以本发明所述的核酸序列组合其它去饱和酶和延伸酶用于 产生PUFA。

脂类合成可划分为两个阶段：脂肪酸的合成和它们与sn-甘油-3-磷酸 的结合及极性首基的添加或修饰。通常用于膜中的脂类包含磷脂类、糖脂 类、鞘脂类和磷酸甘油酯。脂肪酸的合成始于通过乙酰基辅酶A羧化酶将 乙酰基辅酶A转化为丙二酸单酰辅酶A或通过乙酰基转酰基酶将乙酰基 辅酶A转化为乙酰基ACP。这两种产物分子在缩合反应后共同形成了乙酰 乙酰基ACP，这种分子经一系列缩合、还原和脱水反应转化，因而获得了 具有所需链长度的饱和脂肪酸分子。从这些分子产生不饱和脂肪酸的过程 由特异性去饱和酶通过分子氧有氧性地催化，或者无氧性地催化(关于在 微生物中合成脂肪酸，见F.C.Neidhardt等(1996)E.coli and Salmonella. ASM Press：Washington，D.C.第612-636页和其中所引用的参考文献； Lengeler等(Ed.)(1999)Biology of Procaryotes.Thieme：Stuttgart， New York和其中的参考文献及Magnuson，K.，等(1993)Microbiological Reviews 57：522-542和其中的参考文献)。为进一步实施延伸步骤，所得 的与磷脂结合的脂肪酸必须返回至脂肪酸辅酶A酯库。酰基辅酶A：溶血 磷脂酰基转移酶实施此步骤。而且这些酶能够将已延伸的脂肪酸从辅酶A 酯再次转移至磷脂。根据需要可以重复这种反应顺序。

用于生物合成PUFA的前体的例子是油酸、亚油酸和亚麻酸。必须将 C18碳的脂肪酸延伸至C20和C22以获得二十和二十二链型的脂肪酸。在方 法中所用的去饱和酶如Δ12、ω3、Δ4、Δ5、Δ6和Δ8去饱和酶和/或Δ5、 Δ6、Δ9延伸酶的协助下，可以获得花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳 五烯酸或二十二碳六烯酸，有利地获得二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯 酸并且可在涉及食品、饲料、化妆品或药品方面的多种用途中应用。以上 提到的酶可用于制备脂肪酸分子中具有至少两个双键，有利地具有至少三、 四、五或六个双键的C20和/或C22脂肪酸，优选地制备在脂肪酸分子中有 利地具有四个、五个或六个双键的C20或C22脂肪酸。去饱和可在延伸所 讨论的脂肪酸之前或之后发生。这是为什么去饱和酶活性的产物和其它可 能的去饱和延伸步骤的产物产生了具有更高去饱和程度的优选PUFA的原 因，包括将C20至C22脂肪酸进一步延伸为如γ-亚麻酸、二高γ-亚麻酸、花 生四烯酸、硬脂艾杜糖酸、二十碳四烯酸或二十碳五烯酸的脂肪酸。本发 明方法中所用的去饱和酶和延伸酶的底物是C16、C18或C20脂肪酸例如亚 油酸、γ-亚麻酸、α-亚麻酸、二高γ-亚麻酸、二十碳四烯酸或硬脂艾杜糖 酸。优选的底物是亚油酸、γ-亚麻酸和/或α-亚麻酸、二高γ-亚麻酸、花生 四烯酸、二十碳四烯酸或二十碳五烯酸。脂肪酸中具有至少两、三、四、 五或六个双键的所合成的C20或C22脂肪酸在本发明的方法中以游离脂肪 酸形式或以其酯形式如以其甘油酯形式获得。

将术语“甘油酯”理解为意指用一、二或三个羧基所酯化的甘油(单 酰甘油、二酰甘油或三酰甘油)。将“甘油酯”理解为意指多种甘油酯的混 合物。甘油酯或甘油酯的混合物可以包含其它添加物例如游离脂肪酸、抗 氧化剂、蛋白质、糖类、维生素和/或其它物质。

为了本发明的目的，也将“甘油酯”理解为意指甘油衍生物。除以上所 描述的脂肪酸甘油酯以外，这些甘油衍生物还包括甘油磷脂和甘油糖脂。 可在本上下文中提到的优选的例子为甘油磷脂如卵磷脂(磷脂酰胆碱)、 心磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸和烷基酰基甘油磷脂。

而且随后脂肪酸必须易位至不同的修饰位点并且掺入三酰甘油酯贮藏 脂。脂类合成的又一个重要步骤是例如通过甘油脂肪酸酰基转移酶将脂肪 酸转移至极性首基(见Frentzen，1998，Lipid，100(4-5)：161-166)。

关于植物脂肪酸生物合成、去饱和、脂类新陈代谢和脂类化合物的膜 运输、β氧化、脂肪酸修饰和辅因子、三酰甘油酯贮藏和三酰甘油酯组装 的发表物，包括其中的参考文献参见如下文章：1997年JK Setlow编辑 的《Genetic Engeneering》19第149-166页Kinney；Ohlrogge和Browse， 1995，Plant Cell 7：957-970；Shanklin和Cahoon，1998，Annu.Rev. Plant Physiol.Plant Mol.Biol.49：611-641；1996年JK Setlow编辑的 《Genetic Engeneering》18第111-13页Voelker；Gerhardt，1992，Prog. Lipid R.31：397-417；Gühnemann-Schfer和Kindl，1995，Biochim. Biophys Acta 1256：181-186；Kunau等，1995，Prog.Lipid Res. 34：267-342；Rockville美国植物生理学学会1993年Murata和Somerville 编辑的《Biochemistry and Molecular Biology of Membrane and Storage Lipids of Plants》第150-158页Stymne等；Murphy和Ross 1998，Plant Journal.13(1)：1-16。

方法中所产生的PUFA包含高等动物不再能合成并且因此必须摄入的 一组分子或者高等动物不再能自行足量地合成并且因此必须摄入额外量的 一组分子，虽然这类PUFA易于由其它生物例如细菌合成，但是猫不再能 合成花生四烯酸。

为了本发明目的将磷脂理解为意指磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷 脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和/或磷脂酰肌醇，有利地为磷脂酰胆碱。术语 “产生”或“生产量(productivity)”在本领域内为公知并且包含在特定时间 段内和在特定发酵体积内形成的发酵产物(式I化合物)的浓度(例如kg 产物每小时每升)。这个术语还包含在植物细胞或植物中的生产量，也即 相对于这种细胞或植物中所有脂肪酸含量，方法中所产生的目的脂肪酸的 含量。术语“产生效率”包含为获得特定产量所需的时间(如细胞需要用于 建立精细化学品的某种流通量速率的时间)。术语产量或产物/碳产量为本 领域公知并且包含将碳源转化为产物(即精细化学品)的效率。例如通常 将产量表述为每公斤碳源kg产物。通过增加化合物的产量或产生，增加了 在特定培养基中经特定时间段所获得这种化合物的分子的量或所获得的该 化合物的合适分子的量。术语“生物合成”或“生物合成途径”为本领域所知 并且包含例如在多步骤且受强烈调控的过程中通过细胞从中间体合成化合 物，优选地合成有机化合物。术语“分解代谢或分解代谢的途径”为本领域 所知并且包含例如在多步骤且受强烈调控的过程中由细胞切割化合物，优 选地切割有机化合物以产生分解代谢产物(以更为通俗的术语描述，较小 的或复杂度较低的分子)。术语代谢为本领域所知并且包含生物中发生的 全部生物化学反应。某种化合物的代谢(例如脂肪酸的代谢)因此包含与 这种化合物有关的细胞中该化合物全部的生物合成途径、修饰途径和分解 途径。

在又一个实施方案中，SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、 SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO： 61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、 SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO： 79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、 SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO： 93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、 SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO： 107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、 SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133或SEQ ID NO：183中所代表的本 发明的核酸分子衍生物编码与SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、 SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO： 62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、 SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO： 80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、 SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO： 94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、 SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO： 108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、 SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134或SEQ ID NO：184的全长氨基酸 序列具有至少40％，有利地具有约50或60％，有利地具有至少约60或 70％和更优选地具有至少约70或80％、80至90％、90至95％以及最为 优选地具有至少约96％、97％、98％、99％或更高同源性(同一性)的蛋 白质。计算了涵盖整个氨基酸或核酸序列区域的同源性。作为GCG软件 包[Genetics Computer Group，575 Science Drive，Madison， Wisconsin，USA 53711(1991)]的部分的PileUp程序(J.Mol.Evolution.， 25，351-360，1987，Higgins等，CABIOS，5 1989：151-153)或Gap和 BestFit程序[Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48；443-453(1970) 和Smith及Waterman(Adv.Appl.Math.2；482-489(1981))用于序列 比对。使用BestFit程序和如下设置：缺口权重：50，长度权重：3，平均 匹配：10.000和平均错配：0.000确定了如以上以百分率所显示的覆盖全 序列的序列同源性值。除非另外说明，这些设置总是用作标准设置用于序 列比对。

本发明进一步包含由于遗传密码子简并而不同于SEQ ID NO：43、 SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO： 59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、 SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO： 77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、 SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO： 91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、 SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO： 105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、 SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133  或 SEQ ID NO：183中所示诸核苷酸序列之一并且因此编码与SEQ ID NO： 43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、 SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO： 65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：75、 SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO： 83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、 SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO： 97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、 SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO： 113、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133或SEQ ID NO：183中所示那 些核苷酸序列编码相同的Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6去 饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶或Δ6延伸酶的核酸分子(和其部分)。

除了在SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、 SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、 SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：75、 SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、 SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、 SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、 SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、 SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：113、 SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133或SEQ ID NO：183中所示的Δ12去饱 和酶、ω3去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和 酶或Δ6延伸酶以外，技术人员将认识到引起Δ12去饱和酶、ω3去饱和 酶、Δ5延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶和/或Δ6延伸酶 的氨基酸序列改变的DNA序列多态性可在群体中存在。Δ12去饱和酶、ω3 去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶和/或Δ6 延伸酶基因中的这类遗传多态性可因为天然变异在群体中的个体之间存 在。这些天然变体通常在Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6去 饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶和/或Δ6延伸酶的核苷酸序列中产生1 至5％的变异。本发明将包含这些Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ5延伸 酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶和/或Δ6延伸酶中的每一种 和每一个核苷酸变异以及所导致的氨基酸多态性，它们是天然变异的结果 并且不改变这些酶的功能活性。

有利于本发明方法的核酸分子由于与Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、 Δ5延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶和/或Δ6延伸酶核酸 序列的同源性可以遵循标准杂交技术，使用这些酶的核酸序列或其部分为 探针在严格杂交条件下分离。例如本上下文中可使用这样的经分离的核酸 分子，其中所述核酸分子长至少15个核苷酸并且与包含SEQ ID NO：43、 SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO： 59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、 SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO： 77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、 SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO： 91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、 SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO： 105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：113、 SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133或SEQ ID NO：183的核苷酸序列 的核酸分子在严格条件下杂交。具有至少25、50、100、200或更多个核苷 酸的核酸也可以使用。如本上下文中所用的“在严格条件下杂交”用以描述 杂交和洗涤条件，通常彼此具有至少60％同源性的核苷酸序列在这样的条 件下可保持相互杂交。优选的杂交条件是这样：彼此具有至少约65％，优 选至少约70％和尤其优选至少75％或更高同源性的序列间通常保持相互 杂交。这些严格条件为技术人员所知并且在例如1989年N.Y.的John Wiley & Sons出版社的《Current Protocols in Molecular Biology》第6.3.1-6.3.6 中描述。一个优选的非限制性严格杂交条件的例子是在6×氯化钠/柠檬酸 钠(SSC)中约45℃时杂交，然后是一个或多个于0.2x SSC、0.1％SDS 中50至65℃的洗涤步骤。技术人员知道根据核酸类型和例如当存在有机 溶剂时，温度和缓冲剂浓度在杂交条件中是不同的。在“标准杂交条件” 下，例如根据核酸类型，杂交温度在0.1至5×SSC(pH 7.2)浓度的缓 冲水溶液中处于42℃和58℃之间。如果在以上提到的缓冲液中存在有机 溶剂例如50％甲酰胺，标准条件下的杂交温度是大约42℃。对于DNA： DNA杂交体的杂交条件例如是0.1×SSC和20℃至45℃，优选地为30℃ 至45℃。例如DNA：RNA杂交体的杂交条件是0.1×SSC和30℃至 55℃，优选地为45℃至55℃杂交。以上提到的杂交条件通过长约100bp (碱基对)并且G+C含量为50％的核酸在无甲酰胺的情况下测定。技术 人员以上面提到的教材或基于如1989年Cold Spring Harbor Laboratory 出版社Sambrook等的《Molecular Cloning》；1985年牛津的牛津大学出 版社中IRL Press出版社Hames和Higgins编辑《Nucliec Acid Hybridization：A Practical Approach》；1991年牛津的牛津大学出版社中 IRL Press出版社Brown编辑的《Essential Molecular Biology：A Practical Approach》所述知道如何确定所需的杂交条件。

为了确定两个氨基酸序列(如SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、 SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO： 62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、 SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO： 80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、 SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO： 94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、 SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO： 108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132、 SEQ ID NO：134或SEQ ID NO：184序列中的一个序列)或两种核酸(例 如SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO： 49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、 SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO： 75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、 SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO： 89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、 SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO： 103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、 SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133或 SEQ ID NO：183)的同源性(同源性)百分数，将序列书写为使一个序 列处于另一个序列下以便优化比较(例如可向一个蛋白质序列或一个核酸 序列中导入缺口以便产生与另一个蛋白质或另一个核酸的优化比对)。然 后比较相应氨基酸位置上或相应核苷酸位置上的氨基酸残基或核苷酸。如 果一个序列的某个位置由另一个序列相应位置的相同氨基酸残基或相同核 苷酸占据，则在此位置上这些分子同源(即氨基酸或核酸“同源性”如在本 发明中所用对应于氨基酸或核酸“同源性”)。两个序列间的同源性百分数 是两个序列间所共有的位置数目的函数(即同源性％＝相同的位置数目/ 总位置数目×100)。因此将术语“同源性”和“同源性”视为同义。

编码与SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、 SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO： 64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、 SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO： 82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、 SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO： 96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、 SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO： 110、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134或 SEQ ID NO：184的蛋白质序列同源的Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ6 去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ6延伸酶的经分 离核酸分子可通过在/向SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、 SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO： 61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、 SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO： 79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、 SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO： 93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、 SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO： 107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：131、 SEQ ID NO：133或SEQ ID NO：183的核苷酸序列中导入一个或多个核 苷酸的替代、添加或删除而产生，从而将一个或多个氨基酸的替代、添加 或删除导入/到所编码的蛋白质中。序列SEQ ID NO：43、SEQ ID NO： 45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59、 SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO： 67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、 SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO： 85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、 SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO： 99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、 SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO： 131、SEQ ID NO：133或SEQ ID NO：183之一中的突变可通过标准技术 如定点诱变和PCR介导的诱变导入。优选对所预测的一个或多个非关键氨 基酸残基进行保守性氨基酸替代。在“保守性氨基酸替代”中，氨基酸残基 由具有类似侧链的另一种氨基酸残基替代。本领域中具有类似侧链的氨基 酸残基家族已经得到定义。这些家族包含具有碱性侧链(如赖氨酸、精氨 酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧 链(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨 酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、 苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异 亮氨酸)和芳香侧链(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。 因此Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱 和酶、Δ5延伸酶或Δ6延伸酶中所预测的非关键氨基酸残基由来自相同侧 链家族的另一种氨基酸残基优选地替换。在另一个实施方案中，这种突变 可备选地在编码Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和 酶、Δ4去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ6延伸酶的完整序列或其部分中随机导 入，如通过饱和诱变导入，并且将由此所得的突变体可通过重组表达此处 所描述的Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4 去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ6延伸酶活性而筛选以鉴定保持了Δ12去饱和 酶、ω3去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5延伸酶 或Δ6延伸酶活性的突变体。在SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、 SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO： 61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、 SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO： 79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、 SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO： 93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、 SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO： 107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：131、 SEQ ID NO：133或SEQ ID NO：183中的序列之一经过诱变后，这种诱 变后序列所编码的蛋白质可重组表达，并且所编码蛋白质的活性可经例如 本文中所描述的试验测定。

本发明还涉及这样的非人类的转基因生物，其包含本发明的核酸 SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO： 49、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、 SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO： 75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、 SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO： 89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、 SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO： 103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、 SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133或 SEQ ID NO：183或者包含含有本发明这些核酸序列的基因构建体或载 体。有利的非人类生物是微生物、非人类动物或植物，尤其优选为植物。

本发明通过以下实施例更详细地说明，这不得解释为作为限制性的说 明。本专利申请中所引用的参考文献、专利申请、专利和已公开的专利申 请的全部内容此处引用作为参考。

实施例

实施例1：通用的克隆方法

克隆方法例如限制性切割、琼脂糖凝胶电泳、纯化DNA片段、核酸 转移至硝酸纤维素膜和尼龙膜、连接DNA片段、转化大肠杆菌细胞、细 菌培养和重组DNA的序列分析按照Sambrook等(1989)(Cold Spring Harbor Laboratory Press：ISBN 0-87969-309-6)所描述实施。

实施例2：重组DNA的序列分析

重组DNA分子以ABI激光荧光DNA测序仪按照Sanger(Sanger等 (1977)Proc.Natl.Acad.Sci.USA74，5463-5467)的方法测序。通过聚 合酶链反应获得的片段经过测序和核对以避免待表达的构建体中的聚合酶 偏差。

实施例3：虹鳟基因的克隆

在对应于本申请所详述的延伸酶基因的蛋白质序列中对保守区域的搜 索鉴定了两个在Genebank序列数据库中具有相应基序的序列。 基因名称  Genbank No.  氨基酸 OmELO2  CA385234，CA364848，CA366480  264 OmELO3  CA360014，CA350786  295

虹鳟的总RNA用来自Qiagen的RNAeasy试剂盒(Valencia，CA， 美国)分离。聚腺苷酸化RNA(mRNA)以寡聚-dT-纤维素从这种总RNA 中分离(Sambrook等，1989)。这种RNA使用来自Promega的逆转录 系统试剂盒进行逆转录并且将所合成的cDNA克隆至载体λZAP(lambda ZAP Gold，Stratagene)。然后根据制造商的说明将所述cDNA去包装以 产生质粒DNA。然后将这种cDNA质粒文库用于克隆表达质粒的PCR。

实施例4：用于酵母中异源表达的表达载体的克隆

以下寡核苷酸用于克隆两个在酵母中异源表达的序列的PCR反应：

引物         核苷酸序列

5’f*OmELO2  5’aagcttacataatggcttcaacatggcaa(SEQ ID NO：179)

3’r*OmELO2  5’ggatccttatgtcttcttgctcttcctgtt(SEQ ID NO：180)

5’fOmELO3   5’aagcttacataatggagacttttaat(SEQ ID NO：181)

3’rOmELO3   5’ggatccttcagtcccccctcactttcc(SEQ ID NO：182)

f：正向引物，r：反向引物

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10×缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶HindIII和BamHI 37℃温育2小时。酵母表达 载体pYES3(Invitrogen)以同样方式温育。此后经琼脂糖凝胶电泳分离 812bp的PCR产物、905bp的PCR产物和载体并且切下相应的DNA片 段。然后这些DNA以Qiagen凝胶纯化试剂盒遵循制造商的说明纯化。此 后连接载体和延伸酶的cDNA。为此目的，使用了来自Roche的快速连接 试剂盒。得到的质粒pYES3-OmELO2和pYES3-OmELO3经测序证实并 且通过电穿孔(1500V)转化入酵母株INVSc1(Invitrogen)。pYES3作 为对照进行平行转化。此后将酵母在补加了2％葡萄糖的撤除色氨酸的基 本培养基上铺板。能在无色氨酸的培养基内生长的细胞包含相应的质粒 pYES3、pYES3-OmELO2(SEQ ID NO：51)和pYES3-OmELO3(SEQ ID NO：53)。在选择后，对每种情况挑选了两个转化体用于进一步的功 能性表达。

实施例5：植物中种子特异性表达的表达载体的克隆

生成基于pSUN-USP的另一个转化载体以转化植物。使用以下引物对 将NotI切割位点导入编码序列的5′和3′端以实现此目的：

PSUN-OmELO2

正向引物：5′-GCGGCCGCATAATGGCTTCAACATGGCAA(SEQ ID NO：175)

反向引物：3′-GCGGCCGCTTATGTCTTCTTGCTCTTCCTGTT (SEQ ID NO：176)

PSUN-OMELO3

正向引物：5′-GCGGCCGCataatggagacttttaat(SEQ ID NO：177)

反向引物：3′-GCGGCCGCtcagtcccccctcactttcc(SEQ ID NO：178)

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM的dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体 pSUN300-USP以向样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产 物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过 Qiagen凝胶纯化试剂盒遵循制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。 为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒 pSUN-OmELO2和pSUN-OmELO3经测序证实。

pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P、Svab，Z、Maliga， P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向 pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了 pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼氨酸合酶基因的 加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H、 Dhaese，P.、Seurinck，J.、Lemmers，M、Van Montagu，M.和Schell， J.Nucleotide sequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684 位的核苷酸(Genbank Accession X56240)，其中USP基因非编码区的一 部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可 获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列：

5′-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATCC GGATCTGCTGGCTATGAA-3′，SEQ ID NO：174)通过遵循标准方法 的PCR反应扩增。将PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且导入带OCS终 止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体 用于转化拟南芥菜、油菜籽、烟草和亚麻子。

实施例6：从酵母和种子中提取脂类

遗传性修饰对植物、真菌、藻类、纤毛虫的影响或对产生目的产物(例 如脂肪酸)的影响可通过将经修饰的微生物或经修饰的植物在合适条件下 (例如那些以上所描述的条件下)生长并且分析用于产生升高的目的产物 (即脂类或脂肪酸)的培养基和/或细胞性成分而测定。这些分析的技术为技 术人员所知并包含光谱学、薄层层析、多种染色方法、酶和微生物学方法 以及分析性层析如高效液相层析(例如参见：Ullman，Encyclopedia of Industrial Chemistry，Vol.A2，p.89-90和p.443-613，VCH：Weinheim (1985)；FaHon，A.等人，(1987)“Applications of HPLC in Biochemistry“， 在：Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology，Vol.17 一书中；Rehm等人(1 993)Biotechnology，Vol.3，Chapter III：“Product recovery and purification“，p.469-714，VCH：Weinheim；Belter，P.A.等人 (1988)Bioseparations：downstream processing for Biotechnology，John Wiley and Sons；Kennedy，J.F.和Cabral，J.M.S.(1992)Recovery processes for biological Materials，John Wiley and Sons；Shaeiwitz，J.A.和Henry， J.D.(1988)Biochemical Separations，在：Ullmann’s Encyclopedia of Industrial Chemistry，Vol.B3；Chapter 11，p.1-27，VCH：Weinheim一书 中；以及Dechow，F.J.(1989)Separation and purification techniques in biotechnology，Noyes Publications)。

除以上提到的方法，植物脂类可如Cahoon等(1999)Proc.Natl.Acad. Sci.USA 96(22)：12935-12940和Browse等(1986)Analytic Biochemistry 152：141-145所描述从植物材料中提取。脂类或脂肪酸的定性和定量分析 由Christie，William W.，Advances in Lipid Methodology，Ayr/Scotland： Oily Press(Oily Press Lipid Library；2)；Christie，William W.，Gas Chromatography and Lipids.A Practical Guide-Ayr，Scotland：Oily Press， 1989，Repr.1992，IX，307 pp.(Oily Press Lipid Library；1)；“Progress in Lipid Research，Oxford：Pergamon Press，1(1952)-16(1977)在题为 Progress in the Chemistry of Fats and Other Lipids CODEN的文章中描 述。

除了测量发酵的终产物以外，还可分析用于产生目的化合物的代谢途 径中的其它成分例如中间体和副产物以测定该化合物的总生产效率。分析 方法包括测量培养基中营养物的量(例如糖、碳水化合物、氮源、磷酸盐 和其它离子)，测量生物量的组成和增长，分析生物合成途径中的常规代 谢物的产生并且测量发酵期间所产生的气体。用于这些测量的标准方法在 IRL Press出版社P.M.Rhodes和P.F.Stanbury编辑的《Applied Microbial Physiology；A Practical Approach》(ISBN：0199635773)的第103-129 页、第131-163页和第165-192页以及其中所引用的参考文献中描述。

一个分析的例子是脂肪酸的分析(缩略语：FAME，脂肪酸甲酯； GC-MS，气液色谱/质谱；TAG，三酰甘油酯；TLC，薄层层析)。

可如Christie及其中的参考文献(1997年Dundee的Oily Press出版 社Christie的《Advances on Lipid Methodology》第四版中第119-169页； 1998年Gaschromatographie-Massenspektrometrie-Verfahren[Gas Chromatography/mass spectrometric methodsl，Lipide 33：343-353)所数 次描述的那样使用分析性标准方法：GC、GC-MS或TLC清楚无误地检 测脂肪酸产物的存在。

欲分析的材料可通过超声处理、玻璃磨中研磨、液氮和研磨或者通过 其它可利用的方法加以破碎。这种材料在破碎后必须离心。在蒸馏水中重 悬沉淀，100℃加热10分钟，冰上冷却并且再次离心，然后在含0.5M硫 酸和2％二甲氧丙烷的甲醇溶液中90℃提取1小时，由此产生了已水解的 油和脂类化合物，产生了已转甲基化的脂类。这些脂肪酸甲酯在石油醚中 提取并且最后通过使用毛细管柱(Chrompack，WCOT Fused Silica， CP-Wax-52 CB，25μm，0.32mm)经20分钟的170℃至240℃之间的 温度梯度并且在240℃维持5分钟加以GC分析。得到的脂肪酸甲酯的身 份必须使用可从商业来源获得的标准品(即Sigma)确定。

首先通过往返于研杵和研钵之间机械地均化植物材料以使其更便于提 取。随后100℃加热10分钟并且在冰上冷却后再次离心。细胞沉淀以1M 甲醇硫酸和2％二甲氧丙烷90℃水解一小时并且将脂类转甲基化。得到的 脂肪酸甲酯(FAME)在石油醚中抽提。所提取的FAME通过使用毛细管 柱(Chrompack，WCOT Fused Silica，CP-Wax-52 CB，25μm，0.32mm) 的气液色谱经20分钟的170℃至240℃之间的温度梯度并且在240℃维 持5分钟加以分析。脂肪酸甲酯的身份通过与相应FAME标准品(Sigma) 的比较确认。双键的身份和位置通过使FAME混合物适当地化学性衍生以 产生例如4，4-二甲氧唑啉衍生物(Christie，1998)经GC-MS进一步 分析。

对如实施例4中所描述的质粒pYES3、pYES3-OmELO2和 pYES3-OmELO3转化了的酵母进行如下分析：

来自主培养的酵母细胞经离心(100×g、10分钟、20℃)收获并用 pH 8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲 酯(FAME)由酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞 沉淀与2ml的1N甲醇硫酸和2％(v/v)二甲氧丙烷80℃温育1小时。 FAME通过石油醚(PE)提取两次。为了除去未衍生的脂肪酸，在每种情 况下，有机相以2ml pH 8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤。此 后PE相用Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并置于100μl PE中。样品在 Hewlett-Packard 6850气相色谱火焰电离探测器内的DB-23毛细管柱(30 m，0.25mm，0.25μm，Agilent)内分离。GLC分析的条件如下：将炉腔 温度设置为以每分钟5℃的速率从50℃升至250℃并且最后250℃维持 10分钟(保持)。

通过与相应脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间比较鉴定信号。

例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766； Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)： 1581-1585；Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298 和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种 方法。

实施例7：OmELO2和OmELO3的功能特征

OmELO2未表现延伸酶活性，而OmELO3表现了对不同底物的明显 活性。OmElo3的底物特异性在表达后并且喂饲了多种脂肪酸(图2)后加 以测定。所喂饲的底物可大量在所有转基因酵母中检测到。所有转基因酵 母均显示合成了作为OmElo3反应产物的新脂肪酸。这意味基因OmElo3 的功能性表达已为可能。

图2显示OmElo3具有高度特异地导致带有一个ω3双键的Δ5和Δ6 脂肪酸延伸的底物特异性。而且ω6脂肪酸(C18和C20)也可以较低的 特异性延伸。OmElo3的最佳底物(高达66％的延伸)是硬脂艾杜糖酸 (C18:4ω3)和二十碳五烯酸(C20:5ω3)。

实施例8：酵母中DHA合成的重建。

通过共表达OmElo3与细小裸藻Δ4去饱和酶或通过共表达OmElo3 与三角褐指藻Δ5去饱和酶和细小裸藻Δ4去饱和酶由EPA(20:5ω3)或 硬脂艾杜糖酸(18:4ω3)开始实施DHA(22:6ω3)生物合成的重建。为 达此目的，还构建了表达载体pYes2-EgD4和pESCLeu-PtD5。上述已由 pYes3-OtElo3(SEQ ID NO：55)转化的酵母株以pYes2-EgD4或同时以 pYes2-EgD4和pESCLeu-PtD5进一步转化。在pYes3-OmELO/ pYes2-EgD4株的情况下，经转化的酵母以补加了2％葡萄糖的无色氨酸和 尿嘧啶的完全基本培养基琼脂平板选择；在 pYes3-OmELO/pYes2-EgD4+pESCLeu-PtD5株的情况下，经转化的酵母 以无色氨酸、尿嘧啶和亮氨酸的完全基本培养基琼脂平板选择。如上所示， 酶的表达通过加入2％(w/v)半乳糖诱导。培养物进一步15℃温育120 小时。

图3显示了已经喂饲了20:5ω3的转基因酵母中的脂肪酸曲线。在已 由pYes3-OmElo3载体和空白载体pYes2转化的对照酵母(A)中，20:5ω3 经过极高效地延伸以产生22:5ω3(65％延伸)。额外导入的EgΔ4去饱 和酶导致22:5ω3转化为22:6ω3(DHA)。转基因酵母中的脂肪酸组成在 图5中显示。在共表达OmElo3和EgD4后，酵母中检测到了高达3％的 DHA。

在又一个共表达实验中，将OmElo3、EgD4和三角褐指藻Δ5去饱和 酶(PtD5)共表达。所述转基因酵母喂饲了硬脂艾杜糖酸(18:4ω3)并且 进行了分析(图4)。这些酵母的脂肪酸组成在图5中显示。所喂饲的脂 肪酸18:4ω3通过OmElo3延伸以产生20:4ω3(60％延伸)。20:4ω3 经过PtD5去饱和以产生20:5ω3。PtD5的活性是15％。而且有可能通过 OmElo3将20:5ω3延伸以产生22:5ω3。此后新近合成的22:5ω3经去饱 和成为22:6ω3(DHA)。高达0.7％的DHA在这些实验中获得。

从这些实验中可看出本发明中所用的序列OmElo3、EgD4和PtD5适 于真核细胞中DHA的产生。

实施例9：转基因植物的产生

a)转基因油菜籽植物的产生(Moloney等，1992，Plant Cell Reports，8：238-242的改良方法)

根癌农杆菌C58C1:pGV2260或大肠杆菌中的二元载体(Deblaere 等，1984，Nucl.Acids.Res.13，4777-4788)可用于产生转基因油菜籽植 物。为了转化油菜籽植物(Var.Drakkar，NPZ Nordeutsche Pflanzenzucht，Hohenlieth，Germany)，将阳性转化的农杆菌菌落在补 加3％蔗糖(3MS培养基)的Murashige-Skoog培养基(Murashige和 Skoog 1962 Physiol.Plant.15，473)中的过夜培养物1∶50稀释而使用。 将新近发芽的无菌油菜籽植物的叶柄或下胚轴(在每一情况下约1cm2) 与1∶50的农杆菌稀释物在培养皿中共同温育5-10分钟。然后这些叶柄或 下胚轴在补加了0.8％Bacto琼脂的3MS培养基上黑暗中25℃共温育3 天。然后将这些培养物在16小时光照/8小时黑暗中生长3天并且这种培养 按照每周周期继续在补加了1.6g/L葡萄糖的500mg/L Claforan(头孢噻 肟钠)、50mg/L卡那霉素、20μM苄氨基嘌呤(BAP)的MS培养基上 生长。生长的芽转移至补加了2％蔗糖、250mg/L Claforan和0.8％Bacto 琼脂的MS培养基中。若三周后根未发育，向培养基中加入作为生长激素 用于生根的2-吲哚基丁酸。

已再生的苗在补加了卡那霉素和Claforan的2 MS培养基上获得；生 根之后，将这些苗转移至培养料并且在受控的环境箱或温室中生长两周后， 以便开花，并且收获成熟的种子及通过脂类分析法分析延伸酶的表达如Δ5 延伸酶或Δ6延伸酶活性或ω3去饱和酶活性。具有含量已升高的多不饱和 C20和C22脂肪酸的株系可经如此方式鉴定。

b)转基因亚麻子植物的产生

转基因亚麻子植物可通过例如Bell等，1999，In Vitro Cell.Dev. Biol.Plant.35(6)：456-465的方法经粒子轰击产生。亚麻籽通常以例如 Mlynarova等(1994)，Plant Cell Report 13：282-285的方法经农杆菌介 导的转化作用而转化。

实施例10：从鲜黄破囊壶菌ATCC34304和破囊壶菌属某些种中克隆 Δ5延伸酶基因

通过比较本发明中所发现的多种延伸酶的蛋白质序列，有可能确定保 守的核酸区域(组氨酸盒：His-Val-X-His-His、色氨酸盒： Met-Tyr-X-Tyr-Tyr)。在这些序列的辅助下筛选了鲜黄破囊壶菌 ATCC34304和破囊壶菌属某些种的EST数据库以发现其它的Δ5延伸酶。 发现了如下所列的新序列：     基因名称     核苷酸     氨基酸     BioTaurELO1     828bp     275     TL16y2     831     276

用来自Qiagen的RNAeasy试剂盒(Valencia，CA，美国)分离了鲜 黄破囊壶菌ATCC34304和破囊壶菌属某些种的总RNA。以PolyATract 分离系统(Promega)从这些总RNA中分离mRNA。这些RNA使用 Marathon cDNA扩增试剂盒(BD Biosciences)遵循制造商的说明逆转录 并且连接了人工接头。然后将这种cDNA文库用于通过5’和3’RACE (cDNA末端快速扩增)方法PCR克隆表达质粒。

实施例11：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆

以下的寡核苷酸用于PCR反应以克隆酵母中异源表达的序列：

引物                核苷酸序列

5’f*BioTaurELO1    5’gacataatgacgagcaacatgag(SEQ ID NO：170)

3’r*BioTaurELO1    5’cggcttaggccgacttggccttggg(SEQ ID NO：171)

5’f*TL16y2         5’agacataatggacgtcgtcgagcagcaatg(SEQ ID NO：172)

3’r*TL16y2         5’ttagatggtcttctgcttcttgggcgcc(SEQ ID NO：173)

*f：正向引物，r：反向引物

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10×缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR混合物的组成(50μl)：

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物BioTaurELO1(见SEQ ID NO：65)和TL16y2(见SEQ ID NO：83)与酵母表达载体pYES2.1-TOPO(Invitrogen)根据制造商说明 21℃温育30分钟。这里通过T突出端和拓扑异构酶(Invitrogen)的活性 向载体中连接PCR产物。在温育后转化大肠杆菌DH5α细胞。合适的克隆 通过PCR鉴定，质粒DNA通过Qiagen DNAeasy试剂盒分离并且经测序 证实。正确的序列随后经电穿孔(1500V)转化入酵母株INVSc1 (Invitrogen)。以空白载体pYES2.1平行转化作为对照。此后将酵母在 补加了2％葡萄糖的无尿嘧啶基本培养基上铺板。能在无尿嘧啶的培养基 内生长的细胞包含相应的质粒pYES2.1、pYES2.1-BioTaurELO1和 pYES2.1-TL16y2。在选择后，对每种情况挑选两个转化体用于进一步的功 能性表达。

实施例12：植物中种子特异性表达的表达载体的克隆

产生了另一个基于pSUN-USP的转化载体以转化植物。为达此目的， 利用以下引物对将NotI切割位点导入编码序列的5′和3′端：

PSUN-BioTaurELO1

正向引物：5‘-GCGGCCGCATAATGACGAGCAACATGAGC(SEQ ID NO：166)

反向引物：3‘-GCGGCCGCTTAGGCCGACTTGGCCTTGGG(SEQ ID NO：167)

PSUN-TL16y2

正向引物：

5’-GCGGCCGCACCATGGACGTCGTCGAGCAGCAATG(SEQ ID NO：168)

反向引物：

5’-GCGGCCGCTTAGATGGTCTTCTGCTTCTTGGGCGCC(SEQ ID NO：169)

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM的dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体 pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产 物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后通过Qiagen凝胶纯 化试剂盒遵循制造商说明将DNA纯化。此后将载体和PCR产物连接。为 此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒 pSUN-BioTaurELO1和pSUN-TL16Y2经测序证实。

pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P、Svab，Z、Maliga， P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向 pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了 pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼氨酸合酶基因的 加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H、 Dhaese，P.、Seurinck，J.、Lemmers，M、Van Montagu，M.和Schell， J.Nucleotide sequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。DerUSP启动子对应于第1-684 位的核苷酸(Genbank Accession X56240)，其中USP基因非编码区的一 部分存在于USP启动子中。以商业上可获得的T7标准引物(Stratagene) 和经合成的引物(引物序列： 5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATC CGGATCTGCTGGCTATGAA-3’，SEQ ID NO：165)通过遵循标准方 法的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且导入带OCS 终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建 体用于转化拟南芥菜、油菜籽、烟草和亚麻子。

如实施例6中所描述从酵母和种子中提取脂类。

实施例13：BioTaurELO1和TL16y2的功能特征

BioTaurELO1的底物特异性在表达和喂饲多种脂肪酸后加以测定 (图6)。图6显示了以包含pYes2.1载体(对照)或包含Δ5延伸酶的载 体pYes2.1-BioTaurELO1(BioTaur)的酵母株测定功能性和底物特异性 的喂饲实验。在两个批量中，将200μM的γ-亚麻酸和二十碳五烯酸喂饲酵 母温育培养基并且温育24小时。脂肪酸从酵母中提取之后经转甲基化并且 以气相层析分离。从所喂饲的两种脂肪酸获得的延伸产物如箭头所示。

所喂饲的底物可大量地在所有转基因酵母中检测到。全部转基因酵母 均显示合成了作为BioTaurELO1反应产物的新脂肪酸。这意味基因 BioTaurELO1的功能性表达已为可能。

图6表明BioTaurELO1具有高度特异性地引起带有一个ω3双键的Δ5 和Δ6脂肪酸延伸的底物特异性。而且ω6脂肪酸(C18和C20)也进一步 地加以延伸。γ-亚麻酸(C18:3ω6)以65.28％的速率转化，硬脂艾杜糖酸 (C18:4ω3)以65.66％的速率转化并且二十碳五烯酸(C20:5ω3)以 22.01％的速率转化。多个饲喂实验的底物特异性在表3中显示(见本描述 的末尾)。

当喂饲GLA和EPA时，GLA的转化率为65.28％。当喂饲等量的 GLA和EPA时，EPA的转化率为9.99％。如果仅喂饲EPA，EPA的转 化率为22.01％。当喂饲花生四烯酸(ARA)时，花生四烯酸也被转化。 花生四烯酸的转化率为14.47％。硬脂艾杜糖酸(SDA)也被转化。在此 情况下，硬脂艾杜糖酸转化率为65.66％。

TL16y2的功能性和底物特异性在表达后和喂饲多种脂肪酸后进行了 测定了。表4显示了喂饲实验。这个喂饲实验按照例对BioTaurELO1描 述的同样方式进行。喂饲的底物可在所有转基因酵母大量地检测到。全部 转基因酵母均显示合成了作为TL16y2反应产物的新脂肪酸(图11)。这 意味基因TL16y2的功能性表达已为可能。

表4：TL16y2在酵母中的表达 气相色谱分析的面积(以％表示) 质粒  脂肪酸 C18:3 (n-6) C18:4 (n-3) C20:3 (n-6) C20:4 (n-6) C20:4 (n-3) C20:5 (n-3) C22:4 (n-6) C22:5 (n-3) pYES  250uM EPA 13.79 TL16y2  250uM EPA 25.81 2.25 pYES  50uM EPA 5.07 TL16y2  50uM EPA 2.48 1.73  pYES  250uM GLA   8.31  TL16y2  250uM GLA   3.59   10.71  pYES  250uM ARA  16.03  TL16y2  250uM ARA  15.2  3.87  pYES  250uM SDA   26.79  0.35  TL16y2  250uM SDA   7.74  29.17

将TL16y2的结果与对照比较，如表4所示，显示出以百分率表示的 以下转化率：a)％转化率EPA(250μM)：8％，b)％转化率EPA(50μM)： 41％，c)％转化率ARA：20.3％，d)％转化率SDA：79.4％，以及e)％转化 率GLA：74.9％。

因此，TL16y2显示Δ5-、Δ6-和Δ8-延伸酶活性。其中对具有Δ6-双键的 C18-脂肪酸具有最高活性。根据所喂饲的脂肪酸浓度，接下来延伸具有一 个Δ5-或Δ8-双键的C20-脂肪酸。

实施例14：从Ostreococcus tauri中克隆基因

在本申请中所列具有Δ5延伸酶活性或Δ6延伸酶活性的延伸酶基因的 辅助下通过搜索蛋白质序列中的保守序列，在Ostreococcus tauri序列数据 库(基因组序列)中鉴定了两个具有相应基序的序列。如下是这两个序列： 基因名称 SEQ ID 氨基酸 OtELO1，(Δ5-延伸酶) SEQ ID NO：67  300 OtELO2，(Δ6-延伸酶) SEQ ID NO：69  292

OtElo1与斑马鱼(Danio rerio)延伸酶(GenBank AAN77156；约26％ 同源性)具有最高的相似性，同时OtElo与剑叶藓Elo(PSE)[约36％同 源性]具有最大的相似性(用tBLASTn算法进行比较(Altschul等，J.Mol. Biol.1990，215：403-410)。

克隆程序按如下方式进行：

将稳定期的40ml Ostreococcus tauri培养物离心并且将沉淀在100μl 双蒸水中重悬并且-20℃保存。基于PCR法扩增了相关的基因组DNA。 相应的引物对以这样的方式选择即引物包含紧接起始密码子的用于高效翻 译的酵母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。在每种情况下， 使用1μl解冻的细胞、200μM dNTP、2.5U Taq聚合酶和每种引物100 pmol于总计50μl体积中进行OtElo-DNA的扩增。PCR的条件如下：首 先95℃变性5分钟，其后为94℃ 30秒、55℃ 1分钟和72℃ 2分钟的30 个循环，并且终末延伸步骤为72℃ 10分钟。

实施例15：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆

为描述Ostreococcus tauri延伸酶的功能特征，将所讨论的诸DNA的 可读框克隆至pYE2.1/V5-His-TOPO(Invitrogen)的半乳糖可诱导GAL1 启动子的下游，产生了pOTE1和pOTE2。

酿酒酵母334株分别以载体pOTE1和pOTE2经电穿孔(1500V)转 化。空白载体pYES2转化的酵母用作对照。在补加了2％葡萄糖的无尿嘧 啶完全基本培养基(CMdum)琼脂平板上选择已转化的酵母。选择后， 在每种情况下挑选三个转化体用于进一步的功能性表达。

在每种情况下，为表达Ot延伸酶，以所选择的转化体首先接种由5ml 补加了2％(w/v)棉子糖但缺乏尿嘧啶的CMdum培养基组成的预培养基 并且以每分钟200转30℃温育2天。然后以预培养物接种5ml补加了2％ 棉子糖和300μM多种脂肪酸的CMdum(尿嘧啶撤除)液体培养基至OD600 0.05。酶的表达通过加入2％(w/v)的半乳糖诱导。培养物进一步20℃温 育96小时。

实施例16：用于植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆

产生了基于pSUN-USP的另一个转化载体用于转化植物。为达此目的， 使用以下引物对向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点。对应的引物序 列从OtElo1和OtElo2的5′和3′区域衍生。

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM的dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体 pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产 物和载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过Qiagen凝胶纯 化试剂盒遵循制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。为此目的， 使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒pSUN-OtELO1和 pSUN-OtELO2经测序证实。

pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P、Svab，Z、Maliga， P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant trahsformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向 pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了 pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼氨酸合酶基因的 加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H、 Dhaese，P.、Seurinck，J.、Lemmers，M、Van Montagu，M.和Schell， J.Nucleotide sequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684 位的核苷酸(Genbank Accession X56240)，其中USP基因非编码区的一 部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可 获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列： 5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATC CGGATCTGCTGGCTATGAA-3’，SEQ ID NO：164)通过遵循标准方 法的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且导入带OCS 终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建 体用于转化拟南芥菜、油菜籽、烟草和亚麻子。

实施例17：OtELO1和OtELO2在酵母中的表达

用如实施例15中所述质粒pYES3、pYES3-OtELO1和 pYES3-OtELO2转化的酵母按如下方式分析：

来自主培养的酵母细胞经离心(100xg，5分钟，20℃)收获并以pH 8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯 (FAME)从酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉 淀与2ml的1N甲醇硫酸和2％(v/v)二甲氧丙烷80℃温育1小时。FAME 以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机 相以2ml的pH 8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤。随后PE相 以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并置于100μl PE中。样品在装备有火焰电 离探测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m， 0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设 置为以每分钟5℃的速率从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟 (保持)。

通过与相应的脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间比较而鉴定信号。 例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova 等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585， Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和 Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方 法。

实施例18：OtELO1和OtELO2的功能特征

OtElo1底物特异性在表达后和在喂饲多种脂肪酸后测定(表5)。所 喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了 作为OtElo1反应产物的新脂肪酸。这意味基因OtElo1的功能性表达已为 可能。

表4表明OtElo1具有窄范围的底物特异性。OtElo1只能延伸C20脂 肪酸二十碳五烯酸(图7)和花生四烯酸(图8)，但优选地延伸ω3去饱 和的二十碳五烯酸。

表5： 脂肪酸底物   转化率(％) 16:0   - 16:1Δ9   - 18:0   - 18:1Δ9   - 18:1Δ11   - 18:2Δ9，12   - 18:3Δ6，9，12   - 18:3Δ5，9，12   - 20:3Δ8，11，14   - 20:4Δ5，8，11，14   10.8±0.6 20:5Δ5，8，11，14，17   46.8±3.6 22:4Δ7，10，13，16   - 22:6Δ4，7，10，13，16，19 -

表5显示了与多种脂肪酸比较，延伸酶OtElo1对于在Δ5位置具有 双键的C20-多不饱和脂肪酸的底物特异性。

经载体pOTE1转化的酵母在所述脂肪酸存在的基本培养基中生长。 脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过 GLC分析。每个值显示为平均值(n＝3)±标准差。

OtElo2(SEQ IN NO：81)的底物特异性在表达后和喂饲多种脂肪酸 后测定(表6)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转 基因酵母显示合成了作为OtElo2反应产物的新脂肪酸。这意味基因OtElo2 的功能性表达已为可能。

表6： 脂肪酸底物   转化率(％) 16:0   - 16:1Δ9   - 16:3Δ7，10，13   - 18:0   - 18:1Δ6   - 18:1Δ9   - 18:1Δ11   - 18:2Δ9，12   - 18:3Δ6，9，12   15.3± 18:3Δ5，9，12   - 18:4Δ6，9，12，15   21.1± 20:2Δ11，14   - 20:3Δ8，11，14   - 20:4Δ5，8，11，14   - 20:5Δ5，8，11，14，17   - 22:4Δ7，10，13，16   - 22:5Δ7，10，13，16，19   - 22:6Δ4，7，10，13，16，19 -

表6显示了延伸酶OtElo2相对于多种脂肪酸的底物特异性。

经载体pOTE2转化的酵母在所述脂肪酸存在的基本培养基中生长。 脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过 GLC分析。每个值显示为平均值(n＝3)±标准差。

表3中所示的酶活性清楚表明OtElo2为Δ6-延伸酶。

实施例19：从假矮海链藻中克隆基因

在如本申请中所详述的具有Δ5-延伸酶活性或Δ6-延伸酶活性的延伸 酶基因的辅助下通过搜索蛋白质序列中的保守区域，可在假矮海链藻序列 数据库(基因组序列)中鉴定到两个具有相应基序的序列。这两个序列如 下： 基因名称     SEQ ID     氨基酸 TpELO1(Δ5-延伸酶)     43     358 TpELO2(Δ5-延伸酶)     59     358 TpELO3(Δ6-延伸酶)     45     272

2L假矮海链藻培养物在f/2培养基中(《Culture of Marine Invertebrate Animals》中(纽约Plenum Press出版Smith，W.L.和Chanley M.H编辑)中第29-60页Guillard，R.R.L.1975.Culture of phytoplankton for feeding marine invertebrates)于80E/cm2光密度下经14天长成。在细 胞离心后，RNA用来自Qiagen的RNAeasy试剂盒(Valencia，CA，美 国)遵循制造商说明分离。mRNA遵循制造商的说明使用Marathon cDNA 扩增试剂盒(BD Biosciences)逆转录并且连接了人工接头。然后此cDNA 文库用于通过5’和3’RACE(cDNA末端快速扩增)方法PCR克隆表达 质粒。

实施例20：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆

所讨论的引物对以这样方式选择即所述引物具有毗邻起始密码子的用 于高效翻译的酵母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。在每种 情况下使用1μl cDNA、200μM dNTP、2.5U Advantage聚合酶和每种引物 100pmol于总计50μl体积中实施TpElo DNA的扩增。PCR的条件如下： 首先95℃变性5分钟，其后为94℃30秒、55℃ 1分钟和72℃ 2分钟的 30个循环，并且终末延伸步骤为72℃ 10分钟。

用于PCR反应的以下寡核苷酸用于克隆在酵母中异源表达的序列 基因名称和SEQ ID NO： 引物序列 TpELO1(Δ5-延伸酶)，SEQ ID NO：59 F：5’-accatgtgctcaccaccgccgtc (SEQ ID NO：158) R：5’-ctacatggcaccagtaac(SEQ ID NO：159) TpELO2(Δ5-延伸酶)，SEQ ID NO：85 F：5’-accatgtgctcatcaccgccgtc (SEQ ID NO：160) R：5’-ctacatggcaccagtaac(SEQ ID NO：161) TpELO3(Δ6-延伸酶)，SEQ ID NO：45 F：5’-accatggacgcctacaacgctgc (SEQ ID NO：162) R：5’-ctaagcactcttcttcttt(SEQ ID NO：163)

*F＝正向引物，R＝反向引物

PCR产物与酵母表达载体pYES2.1-TOPO(Invitrogen)根据制造商 说明21℃温育30分钟。这里通过T突出端和拓扑异构酶(Invitrogen) 活性向载体连接PCR产物。温育后转化大肠杆菌DH5α细胞。合适的克 隆通过PCR鉴定，质粒DNA通过Qiagen DNAeasy试剂盒分离并且经测 序证实。然后将正确的序列经电穿孔(1500V)转化入酵母株INVSc1 (Invitrogen)。平行转化空白载体pYES2.1作为对照。此后酵母在补加 了2％葡萄糖的无尿嘧啶的基本培养基上铺板。因此能够在无尿嘧啶的培 养基中生长的细胞包含相应的质粒pYES2.1、pYES2.1-TpELO1、 pYES2.1-ELO2和pYES2.1-TpELO3。选择后，在每种情况下挑选了两个 转化体用于进一步的功能性表达。

实施例21：克隆用于植物中种子特异性表达的表达质粒

产生了基于pSUN-USP的另一个转化载体用于转化植物。为达此目的， 使用以下引物对向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点：

PSUN-TPELO1

正向引物：5‘-GCGGCCGCACCATGTGCTCACCACCGCCGTC (SEQ ID NO：152)

反向引物：3‘-GCGGCCGCCTACATGGCACCAGTAAC(SEQ ID NO：153)

PSUN-TPELO2

正向引物：5‘-GCGGCCGCACCATGTGCTCATCACCGCCGTC (SEQ ID NO：154)

反向引物：3‘-GCGGCCGCCTACATGGCACCAGTAAC(SEQ ID NO：155)

PSUN-TPELO3

正向引物：5‘-GCGGCCGCaccatggacgcctacaacgctgc(SEQ ID NO： 156)

反向：3‘-GCGGCCGCCTAAGCACTCTTCTTCTTT(SEQ ID NO： 157)

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM的dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体 pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产 物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过 Qiagen凝胶纯化试剂盒遵循制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产 物。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒 pSUN-TPELO1、pSUN-TPELO2和pSUN-TPELO3经测序证实。

pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P、Svab，Z、Maliga， P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向 pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了 pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼氨酸合酶基因的 加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H、 Dhaese，P.、Seurinck，J.、Lemmers，M、Van Montagu，M.和Schell， J.Nucleotide sequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684 位的核苷酸(Genbank Accession X56240)，其中USP基因非编码区的一 部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可 获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列： 5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATC CGGATCTGCTGGCTATGAA-3’；SEQ ID NO：151)通过遵循标准方 法的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且导入带OCS 终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建 体用于转化拟南芥菜、油菜籽、烟草和亚麻子。

如实施例6中所描述从酵母和种子中提取脂类。

实施例22：TpELO1、TpELO2和TpELO3在酵母中的表达

用如实施例4中所描述的质粒pYES2、pYES2-TpELO1、 pYES2-TpELO2和pYES2-TpELO3转化的酵母按如下方式分析：

来自主培养的酵母细胞经离心(100xg、5分钟、20℃)收获并以pH 8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯 (FAME)从酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉 淀与2ml的1N甲醇硫酸和2％(v/v)二甲氧丙烷80℃温育1小时。FAME 以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机 相以2ml的pH 8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤。随后PE相 以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并置于100μl PE中。样品在装备有火焰电 离探测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m， 0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设 置为以每分钟5℃的速率从50℃升至250并且最后在250℃维持10分钟 (保持)。

信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间加以鉴定。 例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova 等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585， Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和 Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方 法。

实施例23：TpELO1和TpELO3的功能特征

TpElo1的底物特异性在表达后和喂饲多种脂肪酸之后测定(图9)。 所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成 了作为TpElo1反应产物的新脂肪酸。这意味基因TpElo1的功能性表达已 为可能。

表7表明TpElo1具有窄范围的底物特异性。TpElo1只能延伸C20脂 肪酸二十碳五烯酸(图7)和花生四烯酸，但优选地延伸ω3去饱和的二十 碳五烯酸。

已由载体pYES2-TpElo1转化的酵母于所述脂肪酸存在的基本培养基 中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随后这些 FAME通过GLC分析。

表7：TpElo1在酵母中的表达。列1和列3是列2(喂饲250μM  20:4Δ5，8，11，14)和列4(喂饲250μM 20:5Δ5，8，11，14，17)的对照反应。 表达   表达   表达   表达 脂肪酸 1   2   3   4 16:0 18.8   17.8   25.4   25.2 16:1Δ9 28.0   29.8   36.6   36.6 18:0 5.2   5.0   6.8   6.9 18:1Δ9 25.5   23.6   24.6   23.9 20:4Δ5，8，11，14 22.5   23.4   -   -  22:4Δ7，10，13，16 -   0.4  -   -  20:5Δ5，8，11，14，17 -   -  6.6   6.5  22:5Δ7，10，13，16，19 -   -  -   0.9  ％转化率 0   1.7  0   12.2

TpElo3的底物特异性在表达后和在喂饲多种脂肪酸之后测定(图10)。 所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成 了作为TpElo3反应产物的新脂肪酸。这意味基因TpElo3的功能性表达已 为可能。

表8表明TpElo3具有较窄范围的底物特异性。TpElo3只能延伸C18 脂肪酸γ-亚麻酸和硬脂艾杜糖酸，但优选地延伸ω3去饱和的硬脂艾杜糖 酸。

已由载体pYES2-TpElo3转化的酵母于所述脂肪酸存在的基本培养基 中生长。然后，脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随后 这些FAME通过GLC分析。

表8：TpElo3在酵母中的表达。列1显示了未饲入的酵母的脂肪酸曲 线。列2显示了对照反应。在列3至列6饲入了γ-亚麻酸、硬脂艾杜糖酸、 花生四烯酸和二十碳五烯酸(每种脂肪酸各250μM)。 脂肪酸  1  2  3  4  5  6 16:0  17.9  20.6  17.8  16.7  18.8  18.8 16:1Δ9  41.7  18.7  27.0  33.2  24.0  31.3 18:0  7.0  7.7  6.4  6.6  5.2  6.0 18:1Δ9  33.3  16.8  24.2  31.8  25.5  26.4 18:2Δ9，12  -  36.1  -  -  -  - 18:3Δ6，9，12  -  -  6.1  -  - 18:4Δ6，9，12，15  -  -  -  1.7  - 20:2Δ11，14  -  0  -  -  - 20:3Δ8，11，14  -  -  18.5  -  - 20:4Δ8，11，14，17  -  -  -  10.0  - 20:4Δ5，8，11，14  -  -  -  -  22.5 22:4Δ7，10，13，16 -  -  -  -  0 20:5Δ5，8，11，14，17 -  -  -  -  -  17.4 22:5Δ7，10，13，16，19 -  -  -  -  -  0 ％转化率 0  0  75  85  0  0

实施例24：用于酵母中Pi-ω3Des异源表达的表达质粒的克隆

为了在酵母中异源表达，将Pi-ω3Des的克隆以合适的特异性Pi-ω3Des 引物通过PCR克隆至酵母表达载体pYES3。仅仅扩增了这个编码Pi-ω3Des 蛋白质的基因的可读框；提供了具备两个向表达载体pYES3中克隆的切割 位点的Pi-ω3Des基因可读框。

正向引物：5’-TAAGCTTACATGGCGACGAAGGAGG(SEQ ID NO：149)

反向引物：5’-TGGATCCACTTACGTGGACTTGGT(SEQ ID NO：150)

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10×缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶HindIII和BamHI 37℃温育2小时。酵母表达 载体pYES3(Invitrogen)以同样方式温育。此后经琼脂糖凝胶电泳分离 了1104bp的PCR产物和载体并且切下了相应的DNA片段。然后DNA通 过Qiagen凝胶纯化试剂盒遵循制造商说明纯化。此后连接载体和去饱和酶 的cDNA。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒 pYES3-Pi-ω3Des经测序证实并且通过电穿孔(1500V)转化入酵母株 INVSc1(Invitrogen)。平行转化pYES3作为对照。此后酵母在补加了2％ 葡萄糖的无色氨酸基本培养基上铺板。能够在无色氨酸的培养基内生长的 细胞包含相应的质粒pYES3、pYES3-Pi-ω3Des。选择后，在每种情况下挑 选了两个转化体用于进一步的功能表达。

实施例25：用于植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆

产生了基于pSUN-USP的另一个转化载体用于转化植物。为达此目的， 使用以下引物对向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点：

PSUN-Pi-ω3Des

反向引物：3‘-GCGGCCGCTTACGTGGACTTGGTC(SEQ ID NO： 147)

正向引物：5‘-GCGGCCGCatGGCGACGAAGGAGG(SEQ ID NO： 148)

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM的dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育4小时。植物表达载体 pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产 物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过 Qiagen凝胶纯化试剂盒遵循制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产 物。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒 pSUN-Piω3Des经测序证实。

实施例26：Pi-ω3Des在酵母中表达

将如实施例24中所描述的质粒pYES3或pYES3-Pi-ω3Des转化的酵 母按如下方式分析：

来自主培养的酵母细胞经离心(100xg，5分钟，20℃)收获并以pH 8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯 (FAME)从酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉 淀与2ml的1N甲醇硫酸和2％(v/v)二甲氧丙烷80℃温育1小时。FAME 以石油醚(PE)提取两次。在每种情况下为除去未衍生的脂肪酸，有机相 以2ml的pH 8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤。随后PE相以 Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并置于100μl PE中。样品在装备有火焰电离 探测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25 mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为 以每分钟5℃的速率从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟(保 持)。

信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间加以鉴定。 例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova 等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585， Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和 Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方 法。

实施例27：Pi-ω3Des的功能特征

在表达和喂饲多种脂肪酸后测定Pi-ω3Des的底物特异性(图12至 18)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到，证明酵母摄取 了这些脂肪酸。转基因酵母显示合成了作为Pi-ω3Des反应产物的新脂肪 酸。这意味基因Pi-ω3Des的功能性表达已为可能。

图12表明Pi-ω3Des将亚油酸(18:2ω-6脂肪酸)去饱和为α亚麻酸 (18:3ω-3脂肪酸)。脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图12A) 或载体pYes3-Pi-ω3Des(图12 B)转化的完整细胞经酸甲醇分解作用合成。 酵母于存在C18:2Δ9，12-脂肪酸(300μM)的基本培养基中生长。随后这些 FAME通过GLC分析。

图13表明Pi-ω3Des使γ-亚麻酸(18:3ω-6脂肪酸)去饱和为硬脂艾 杜糖酸(18:4ω-3脂肪酸)。脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图 13A)或载体pYes3-Pi-ω3De(图13B)转化的完整细胞经酸甲醇分解作 用合成。酵母于存在γ-C18:3Δ6，9，12-脂肪酸(300μM)的基本培养基中生长。 随后这些FAME通过GLC分析。

图14表明Pi-ω3Des使C20:2-ω-6脂肪酸去饱和为C20:3-ω-3脂肪酸。 脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图14A)或载体pYes3-Pi-ω3De (图14B)转化的完整细胞经酸甲醇分解作用合成。酵母于存在C20:2Δ11，14- 脂肪酸(300μM)的基本培养基中生长。随后这些FAME通过GLC分析。

图15表明Pi-ω3Des使C20:3-ω-6脂肪酸去饱和为C20:4-ω-3脂肪酸。 脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图15A)或载体pYes3-Pi-ω3De (图15B)转化的完整细胞经酸甲醇分解作用合成。酵母于存在 C20:3Δ8，11，14-脂肪酸(300μM)的基本培养基中生长。随后这些FAME通过 GLC分析。

图16表明Pi-ω3Des将花生四烯酸(C20:4-ω-6脂肪酸)去饱和为二 十碳五烯酸(C20:4-ω-3脂肪酸)。

脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图16A)或载体 pYes3-Pi-ω3De(图16B)转化的完整细胞经酸甲醇分解作用合成这些酵 母于存在C20:4Δ5，8，11，14脂肪酸(300μM)的基本培养基中生长。随后 这些FAME通过GLC分析。

图17表明Pi-ω3Des使二十二碳四烯酸(C22:4-ω-6脂肪酸)去饱和 为二十二碳五烯酸(C22:5-ω-3脂肪酸)。脂肪酸甲酯通过对已由空白载 体pYES2(图17A)或载体pYes3-Pi-ω3De(图17B)转化的完整细胞经 酸甲醇分解作用合成。将酵母在C22:4Δ7，10，13，16脂肪酸(300μM)存在时于 基本培养基中生长。随后这些FAME通过GLC分析。

Pi-ω3Des对多种脂肪酸的底物特异性可从图18中发现。已由载体 pYes3-Pi-ω3Des转化的酵母于存在所述脂肪酸的基本培养基中生长。脂肪 酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC 分析。每个值代表为三个测量的平均值。使用下式：[产物]/[产物]+[底 物]×100计算转化率(％去饱和)。

如实施例9中所描述，Pi-ω3Des还可用于产生转基因植物。然后可从 这些植物的种子中如实施例6中所描述提取脂类。

实施例28：从Ostreococcus tauri克隆去饱和酶基因

在保守基序(His盒，Domergue等人，2002，Eur.J.Biochem.269， 4105-4113)的辅助下搜索蛋白质序列中的保守区域可在Ostreococcus tauri 序列数据库(基因组序列)中鉴定五个具有相应基序的序列。这些序列如 下显示： 基因名称  SEQ ID  氨基酸  同源性 OtD4  SEQ ID NO：95  536  Δ4-去饱和酶 OtD5.1  SEQ ID NO：91  201  Δ5-去饱和酶 OtD5.2  SEQ ID NO：93  237  Δ5-去饱和酶 OtD6.1  SEQ ID NO：89  457  Δ6-去饱和酶 OtFad2  SEQ ID NO：107  361  Δ12-去饱和酶

使用tBLASTn算法(Altschul等，J.Mol.Biol.1990，215：403-410) 实施了发现单个基因间同源性的比对。

按如下方式进行克隆：

将稳定期的40ml Ostreococcus tauri培养物经离心并且沉淀在100μl 双蒸水中重悬并-20℃保存。相关的基因组DNA基于PCR法扩增。相应 的引物对以如此方式选择即引物包含紧接起始密码子的用于高效翻译的酵 母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。在每一情况下使用1μl 解冻的细胞、200μM dNTP、2.5 U Taq聚合酶和每种引物100pmol于总 计50μl体积中实施了OtDes-DNA的扩增。PCR的条件如下：首先95℃ 变性5分钟，其后为94℃ 30秒、55℃ 1分钟和72℃ 2分钟的30个循环， 并且终末延伸步骤为72℃ 10分钟。

以下的引物用于PCR：

OtDes6.1正向引物：5’ggtaccacataatgtgcgtggagacggaaaataacg3’ (SEQ ID NO：145)

OtDes6.1反向引物：5’ctcgagttacgccgtctttccggagtgttggcc3’ (SEQ ID NO：146)

实施例29：酵母中异源表达的表达质粒的克隆

为描述来自Ostreococcus tauri的去饱和酶OtDes6.1(＝Δ6-去饱和酶) 的功能特征，将位于pYES2.1/V5-His-TOPO(Invitrogen)的半乳糖可诱 导启动子GAL1上游的DNA可读框克隆，产生了相应的pYES2.1-OtDes6.1 克隆，以类似方式可克隆其它Ostreococcus去饱和酶基因。

酿酒酵母334株以载体pYES2.1-OtDes6.1经电穿孔(1500V)转化。 由空白载体pYES2转化的酵母用作对照。已转化的酵母在补加了2％葡萄 糖的无尿嘧啶的完全基本培养基(CMdum)琼脂平板上选择。选择后， 在每一情况下挑选三个转化体用于进一步的功能性表达。

在每一情况下，为表达OtDes6.1去饱和酶，由5ml补加了2％(w/v) 棉子糖的尿嘧啶撤除的CMdum培养基组成的预培养基首先以所选择的转 化体接种并且每分钟200转30℃温育2天。然后对5ml补加了2％棉子糖 和300μM多种脂肪酸的CMdum(尿嘧啶撤除)液体培养基接种预培养 物至OD600 0.05。酶的表达通过加入2％(w/v)半乳糖诱导。培养物进一 步20℃温育96小时。

实施例30：克隆用于植物中种子特异性表达的表达质粒

产生了基于pSUN-USP的另一个转化载体用于转化植物。为达此目的， 使用PCR向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点。对应的引物序列从 去饱和酶的5′和3′区域衍生。

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM的dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体 pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物 和载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过Qiagen凝胶纯化 试剂盒遵循制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。为此目的，使 用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒经测序证实。

pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P、Svab，Z、Maliga， P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向 pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了 pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼氨酸合酶基因的 加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H、 Dhaese，P.、Seurinck，J.、Lemmers，M、Van Montagu，M.和Schell， J.Nucleotide sequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684 位的核苷酸(Genbank Accession X56240)，其中USP基因非编码区的一 部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可 获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列： 5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATC C GGATCTGCTGGCTATGAA-3’，SEQ ID NO：144)通过遵循标准方 法的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且导入带OCS 终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建 体用于转化拟南芥菜、油菜籽、烟草和亚麻子。

实施例31：OtDes6.1在酵母中的表达

经质粒pYES2和pYES2-OtDes6.1如实施例4中所描述转化的酵母按 如下方式分析：

来自主培养的酵母细胞经离心(100xg，5分钟，20℃)收获并以pH 8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯 (FAME)从酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉 淀与2ml的1N甲醇硫酸和2％(v/v)二甲氧丙烷80℃温育1小时。FAME 以石油醚(PE)提取两次。在每种情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机 相以2ml的pH 8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤。随后PE相 以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并置于100μl PE中。样品在装备有火焰电 离探测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m， 0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设 置为以每分钟5℃的速率从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟 (保持)。

信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间加以鉴定。 例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova 等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585， Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和 Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方 法。

实施例32：Ostreococcus去饱和酶的功能特征

去饱和酶的底物特异性可在酵母中表达酶后通过喂饲、使用多种酵母 (见克隆去饱和酶基因、酵母表达的实施例)测定。对单种活性测定的描 述可在WO 93/11245中对Δ15去饱和酶的描述；WO 94/11516中对Δ12 去饱和酶的描述；WO 93/06712、US 5,614,393、US 5,614,393、 WO 96/21022、WO 0021557和WO 99/27111中对Δ6去饱和酶的描述； Qiu等，2001，J.Biol.Chem.276，31561-31566对Δ4去饱和酶的描述；Hong 等，2002，Lipids 37，863-868对Δ5去饱和酶的描述中找到。

表9显示了OtDes6.1去饱和酶对多种脂肪酸的底物特异性。OtDes6.1 的底物特异性在表达后和喂饲多种脂肪酸后测定。所喂饲的底物在全部转 基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为OtDes6.1反应产 物的新脂肪酸(图20)。这意味着功能性表达了基因OtDes6.1。

用载体pYes2-OtDes6.1转化的酵母于所述脂肪酸存在的基本培养基 中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随后这些 FAME通过GLC分析。每个值表示为平均值(n＝3)±标准差。活性是使 用公式底物/(底物+产物)*100]计算的转化率。

表9表明OtDes6.1去饱和酶对油酸和亚油酸(18:2和18:3)具有底物 特异性，原因在于这些脂肪酸引起了最高的活性。相反，对油酸(18:1) 和棕榈油酸(16:1)的活性基本不显著。优选转化亚油酸和亚麻酸表明这 种去饱和酶适合于产生多不饱和脂肪酸。

表9 底物  活性(％) 16:1Δ9  5.6 18:1Δ9  13.1 18:2Δ9，12  68.7 18:3Δ9，12，15  64.6

图20表明OtDes6.1转化了亚油酸。FAME通过气相色谱分析。所喂 饲的底物(C18:2)转化为γ-C18:3。箭头指示起始材料和形成的产物。

图21表明当存在OtDes6.1时分别使亚油酸(LA)和α-亚麻酸(ALA) 转化以产生γ-亚麻酸(GLA)和硬脂艾杜糖酸(STA)(图21A和C)。 图21还显示当Δ6去饱和酶OtDes6.1与来自展叶剑叶藓的Δ6延伸酶PSE1 (Zank等2002，Plant J.31：255-268)和来自三角褐指藻的Δ5去饱和酶 PtD5(Domergue等2002，Eur.J.Biochem.269，4105-4113)共同存在时 分别使亚油酸(LA)和α-亚麻酸(ALA)转化以产生二高γ-亚麻酸 (DHGLA)和花生四烯酸(ARA，图21B)以及产生二高硬脂艾杜糖酸 (DHSTA)和二十碳五烯酸(EPA，图21D)。图21清晰地表明当存在 Δ6延伸酶PSE1时几乎定量地使Δ6去饱和酶OtDes6.1的反应产物GLA 和STA分别延伸以产生DHGLA和DHSTA。接下来由Δ5去饱和酶PtD5 进行去饱和以分别产生ARA和EPA同样是毫无困难的。大约25％-30％ 的延伸酶产物被去饱和(图21B和D)。

此处的表10为已克隆的Ostreococcus去饱和酶的概览。 Ostreococcus tauri去饱和酶 名称 bp aa 同源性 Cyt.B5 His盒1 His盒2 His盒3 OtD4 1611 536 Δ4-去饱和酶 HPGG HCANH WRYHHQVSHH QVEHHLFP OtD5.1 606 201 Δ5-去饱和酶 - - - QVVHHLFP OtD5.2 714 237 Δ5-去饱和酶 - - WRYHHMVSHH QIEHHLPF OtD6.1 1443 480 Δ6-去饱和酶 HPGG HEGGH WNSMHNKHH QVIHHLFP OtFAD2 1086 361 Δ12-去饱和酶 - HECGH WQRSHAVHH HVAHH

实施例33：从假矮海链藻中克隆去饱和酶基因

在保守基序(His盒，参见基序)的辅助下搜索蛋白质序列中的保守 区域可在假矮海链藻序列数据库(基因组序列)中鉴定六个具有相应基序 的序列。序列如下：     基因名称  SEQ ID   氨基酸  同源性     TpD4  SEQ ID NO：103   503  Δ-4-去饱和酶     TpD5-1  SEQ ID NO：99   476  Δ-5-去饱和酶     TpD5-2  SEQ ID NO：101   482  Δ-5-去饱和酶     TpD6  SEQ ID NO：97   484  Δ-6-去饱和酶     TpFAD2  SEQ ID NO：109   434  Δ-12-去饱和酶     TpO3  SEQ ID NO：105   418  ω-3-去饱和酶

克隆程序按如下方式进行：

稳定期的40ml假矮海链藻培养物经过离心并且沉淀在100μl双蒸水中 重悬并且-20℃保存。相关的基因组DNA基于PCR法扩增。以如此方式 选择相应的引物对即引物包含紧接起始密码子的用于高效翻译的酵母共有 序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。在每一情况下使用1μl解冻的 细胞、200μM dNTP、2.5U Taq聚合酶和每种引物100pmol于总计50μl 体积中实施了TpDes-DNA的扩增。PCR的条件如下：首先95℃变性5 分钟，其后为94℃30秒、55℃ 1分钟和在72℃ 2分钟的30个循环，并 且终末延伸步骤为72℃ 10分钟。

实施例34：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆

为描述假矮海链藻去饱和酶的功能特征，将所讨论的DNA的可读框 克隆于pYES2.1/V5-His-TOPO(Invitrogen)的半乳糖可诱导启动子GAL1 的下游，产生了相应的pYES2.1克隆。

酿酒酵母334株以载体pYES2.1-TpDesatauresen经电穿孔(1500V) 转化。经空白载体pYES2转化的酵母作为对照使用。已转化的酵母在补加 了2％葡萄糖但缺乏尿嘧啶的完全基本培养基(CMdum)琼脂平板上选择。 选择后，每种情况挑选三个转化体用于进一步的功能性表达。

在每一情况下，为了表达Tp去饱和酶，5ml由补加了2％(w/v)棉 子糖但缺乏尿嘧啶的CMdum培养基组成的预培养基首先以所选择的转化 体接种并且每分钟200转30℃温育2天。然后将5ml补加了2％棉子糖和 300μM多种脂肪酸的CMdum(尿嘧啶撤除)液体培养基接种预培养物至 OD600 0.05。酶的表达通过加入2％(w/v)半乳糖诱导。培养物在20℃下 进一步温育96小时。

实施例35：植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆

产生了基于pSUN-USP的另一个转化载体用于转化植物。为达此目的， 使用PCR向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点。对应的引物序列从 去饱和酶的5′和3′区域衍生。

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM的dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体 pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物 和载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过Qiagen凝胶纯化 试剂盒遵循制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。使用了来自Roche 的快速连接试剂盒以便连接。得到的质粒经测序证实。

pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P、Svab，Z、Maliga， P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向 pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了 pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼氨酸合酶基因的 加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H、 Dhaese，P.、Seurinck，J.、Lemmers，M、Van Montagu，M.和Schell， J.Nucleotide sequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684 位的核苷酸(Genbank Accession X56240)，其中USP基因非编码区的一 部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可 获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列： 5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATC C GGATCTGCTGGCTATGAA-3’；SEQ ID NO：143)通过遵循标准方 法的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且导入带OCS 终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建 体用于转化拟南芥菜、油菜籽、烟草和亚麻子。

实施例36：Tp去饱和酶在酵母中的表达

如实施例4中所描述由质粒pYES2和pYES2-Tp转化的酵母以如下 方式分析：

来自主培养的酵母细胞经离心(100xg，5分钟，20℃)收获并以pH 8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯 (FAME)从酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉 淀与2ml的1N甲醇硫酸和2％(v/v)二甲氧丙烷80℃温育1小时。FAME 以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下为除去未衍生的脂肪酸，有机相 以2ml的pH 8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤。随后PE相以 Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并置于100μl PE中。样品在装备有火焰电离 探测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25 mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为 以每分钟5℃的速率从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟(保 持)。

信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间加以鉴定。 例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova 等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585， Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和 Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方 法。

实施例37：假矮海链藻去饱和酶的功能特征

去饱和酶的底物特异性可在酵母中表达后通过使用多种酵母的喂饲 (见克隆去饱和酶基因、酵母表达的实施例)测定。对单种活性测定的描 述可在WO 93/11245中对Δ15去饱和酶的描述；WO 94/11516中对Δ12 去饱和酶的描述；WO 93/06712、US 5,614,393、US 5,614,393、 WO 96/21022、WO 0021557和WO 99/27111中对Δ6去饱和酶的描述； Qiu等，2001，J.Biol.Chem.276，31561-31566对Δ4去饱和酶的描述；Hong 等，2002，Lipids 37，863-868对Δ5去饱和酶的描述中找到。

单种去饱和酶的活性使用公式：底物/(底物+产物)*100]从转化率计 算。

以下表11和12为经克隆的假矮海链藻去饱和酶的概览。

表11：经克隆的海链藻去饱和酶的长度和特征 去饱和酶 cDNA (bp) 蛋白质(aa) Cyt.B5  His盒1  His盒2  His盒3 TpD4 1512 503 HPGG  HDGNH  WELQHMLGHH  QIEHHLFP TpD5-1 1431 476 HPGG  HDANH  WMAQHWTHH  QVEHHLFP TpD5-2 1443 482 HPGG  HDANH  WLAQHWTHH  QVEHHLFP TpD6 1449 484 HPGG  HDFLH  WKNKHNGHH  QVDHHLFP TpFAD2 (d12) 1305 434 -  HECGH  HAKHH  HVAHHLFH TpO3 1257 419 -  HDAGH  WLFMVTYLQHH  HVVHHLF

表12：经克隆的去饱和酶的长度、外显子、同源性和同源性 Des. GDNA(bp)  外显子1  外显子2 第一BlastHit  Hom./Iden. TpD4 2633  496-1314  1571-2260 破囊壶菌D4-des  56％/43％ TpD5-1 2630  490-800  900-2019 褐指藻D5-des  74％/62％ TpD5-2 2643  532-765  854-2068 褐指藻D5-des  72％/61％ TpD6 2371  379-480  630-1982 褐指藻D6-des  83％/69％ TpFAD2 2667  728-2032  - 褐指藻FAD2  76％/61％ TpO3 2402  403-988  1073-1743 隐杆线虫Fad2  49％/28％

来自Ostreococcus和海链藻的Δ12去饱和酶基因也可按以上提及的实 施例类似地克隆。

实施例38：从非洲爪蟾和玻璃海鞘中克隆延伸酶基因

在本申请中所详述的具有Δ5-延伸酶活性或Δ6-延伸酶活性的延伸酶 基因的辅助下，通过在基因数据库(Genebank)中搜索蛋白质序列内的保 守区域(见共有序列SEQ ID NO：115和SEQ ID NO：116)，可鉴定和 分离其它生物来源的其它延伸酶。可使用合适的基序分别鉴定非洲爪蟾和 玻璃海鞘来源的其它序列。这些序列如下显示： 基因名称 生物 Genbank No.  SEQ  ID  NO：  氨基酸 ELO(XI) 非洲爪蟾 BC044967  117  303 ELO(Ci) 玻璃海鞘 AK112719  119  290

非洲爪蟾cDNA克隆从NIH(国立健康研究所)[genetic and genomic tools for Xenopus research：The NIH Xenopus initiative，Dev.Dyn.225 (4)，384-391(2002)]获得。

玻璃海鞘cDNA克隆从Kyoto大学[Satou，Y.，Yamada，L.， Mochizuki，Y.，Takatori，N.，Kawashima，T.，Sasaki，A.， Hamaguchi，M.，Awazu，S.，Yagi，K.，Sasakura，Y.，Nakayama， A.，Ishikawa，H.，Inaba，K.and Satoh，N.“A cDNA resource from the basal chordate Ciona intestinalis”JOURNAL Genesis 33(4)， 153-154(2002)]获得。

实施例39：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆

延伸酶DNA在每一情况下以1μl cDNA、200μM dNTP、2.5U Advantage聚合酶和每种引物100pmol于总计50μl体积中扩增。PCR的 条件如下：首先95℃变性5分钟，其后为94℃ 30秒、55℃ 1分钟和72℃ 2分钟的30个循环，并且终末延伸步骤为72℃ 10分钟。

以下寡核苷酸用于克隆酵母中异源表达的序列的PCR反应： 基因名称和SEQ ID NO：  引物序列 ELO(XI)SEQ ID NO：121        SEQ ID NO：122  F：5’-AGGATCC ATGGCCTTCAAGGAGCTCACATC  R：5’-  CCTCGAGTCAATGGTTTTTGCTTTTCAATGCACCG ELO(Ci)，SEQ ID NO：123          SEQ ID NO：124  F：5’-TAAGCTT ATGGACGTACTTCATCGT  R：5’-TCAGATCT TTAATCGGTTTTACCATT

*F＝正向引物，R＝反向引物

PCR产物与酵母表达载体pYES2.1-TOPO(Invitrogen)根据制造商 说明21℃温育30分钟。这里通过T突出端和拓扑异构酶(Invitrogen) 活性向载体连入PCR产物。在温育后转化大肠杆菌DH5α细胞。合适的克 隆通过PCR鉴定，质粒DNA通过Qiagen DNAeasy试剂盒分离并且经测 序证实。然后将正确的序列经电穿孔(1500V)转化入酵母株INVSc1 (Invitrogen)。平行转化空白载体pYES2.1作为对照。此后将酵母在补 加了2％葡萄糖的尿嘧啶撤除基本培养基上铺板。能够在无尿嘧啶的培养 基中生长的细胞包含相应的质粒pYES2.1、pYES2.1-ELO(XI)和 pYES2.1-ELO(Ci)。选择后，在每种情况下挑选了两个转化体用于进一 步的功能性表达。

实施例40：植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆

产生了基于pSUN-USP的另一个转化载体用于转化植物。为达此目的， 使用以下引物对向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点：

pSUN-ELO(XI)

正向引物：

5‘-GCGGCCGCACC ATGGCCTTCAAGGAGCTCACATC

                      (SEQ ID NO：125)

反向引物：

3‘-GCGGCCGCCT TCAATGGTTTTTGCTTTTCAATGCACCG

                      (SEQ ID NO：126)

pSUN-ELO(Ci)

正向引物：5‘-GCGGCCGCACC ATGGACGTACTTCATCGT

                       (SEQ ID NO：127)

反向引物：3‘-GCGGCCGCT TTAATCGGTTTTACCATT

                       (SEQ ID NO：128)

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM的dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体 pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产 物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过 Qiagen凝胶纯化试剂盒遵循制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产 物。使用了来自Roche的快速连接试剂盒以便连接。得到的质粒pSUN-ELO (XI)和pSUN-ELO(Ci)经测序证实。

pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P、Svab，Z、Maliga， P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向 pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了 pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼氨酸合酶基因的 加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H、 Dhaese，P.、Seurinck，J.、Lemmers，M、Van Montagu，M.和Schell， J.Nucleotide sequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684 位的核苷酸(Genbank Accession X56240)，其中USP基因非编码区的一 部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可 获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列： 5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATC C GGATCTGCTGGCTATGAA-3’；SEQ ID NO：129))通过遵循标准 方法的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且导入带 OCS终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种 构建体用于转化拟南芥菜、油菜籽、烟草和亚麻子。

如实施例6所述自酵母和种子提取脂类。

实施例41：ELO(XI)和ELO(Ci)在酵母中的表达

如实施例4中所描述的由质粒pYES2，pYES2-ELO(XI)和 pYES2-ELO(Ci)转化的酵母按如下方式分析：

来自主培养的酵母细胞经离心(100xg，5分钟，20℃)收获并以pH 8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯 (FAME)从酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉 淀与2ml的1N甲醇硫酸和2％(v/v)二甲氧丙烷80℃温育1小时。FAME 以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机 相以2ml的pH 8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤。随后PE相 以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并置于100μl PE中。样品在装备有火焰电 离探测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m， 0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设 置为以每分钟5℃的速率从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟 (保持)。

信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间加以鉴定。 例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova 等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585， Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和 Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方 法。

实施例42：ELO(XI)和ELO(Ci)的功能特征

ELO(XI)的底物特异性在表达和在喂饲多种脂肪酸后测定(图22)。 所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成 了作为ELO(XI)反应产物的新脂肪酸。这意味基因ELO(XI)功能性 地得以表达。

表13表明ELO(XI)具有宽泛的底物特异性。C18脂肪酸和C20脂 肪酸均得到延伸，优选地观察到了经Δ5和Δ6去饱和的脂肪酸。

经载体pYES2-ELO(XI)所转化的酵母于存在所述脂肪酸的基本培 养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随后这 些FAME通过GLC分析。

表13：ELO(XI)在酵母中的表达。显示了不同起始物质(在每一情 况下以250μM喂饲)的转化率。 起始物质 ELO(XI)对起始物质的转化(％) 16:0 3 16:1Δ9 0 18:0 2 18:1Δ9 0 18:2Δ9，12 3 18:3Δ6，9，12 12 18:3Δ5，9，12 13 18:3Δ9，12，15 3 起始物质 ELO(XI)对起始物质的转化(％) 18:4Δ6，9，12，15 20 20:3Δ8，11，14 5 20:3Δ11，14，17 13 20:4Δ5，8，11，14 15 20:5Δ5，8，11，14，17 10 22:4Δ7，10，13，16 0 22:6Δ4，7，10，13，16，19 0

ELO(Ci)的底物特异性在表达和在喂饲多种脂肪酸后测定(图23)。 所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成 了作为ELO(Ci)反应产物的新脂肪酸。这意味基因ELO(Ci)得到功 能性表达。

表14：ELO(Ci)在酵母中的表达。显示了不同起始物质(在每一情 况下以250μM喂饲)的转化率。 起始物质 ELO(Ci)对起始物质的转化(％) 16:0 0 16:1Δ9 0 18:0 0 18:1Δ9 0 18:2Δ9，12 23 18:3Δ6，9，12 10 起始物质 ELO(Ci)对起始物质的转化(％) 18:3Δ5，9，12 38 18:3Δ9，12，15 25 18:4Δ6，9，12，15 3 20:3Δ8，11，14 10 20:3Δ11，14，17 8 20:4Δ5，8，11，14 10 20:5Δ5，8，11，14，17 15 22:4Δ7，10，13，16 0 22:6Δ4，7，10，13，16，19 0

表14表明ELO(Ci)具有宽泛的底物特异性。C18脂肪酸和C20脂 肪酸均得到了延伸，优选地观察到了经Δ5和Δ6去饱和的脂肪酸。

经载体pYES2-ELO(Ci)所转化的酵母于存在所述脂肪酸的基本培 养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随后这 些FAME通过GLC分析。

实施例43：从Ostreococcus tauri克隆基因

在此处所描述的具有Δ5-延伸酶活性或Δ6-延伸酶活性的延伸酶基因 的辅助下，通过搜索蛋白质序列中的保守区域，在每种情况下可在 Ostreococcus tauri序列数据库(基因组序列)中鉴定2个具有相应基序的 序列。序列如下： 基因名称 SEQ ID  氨基酸 OtELO1，(Δ5-延伸酶) SEQ ID NO：67  300 OtELO1.2，(Δ5-延伸酶) SEQ ID NO：113  300  OtELO2，(Δ6-延伸酶) SEQ ID NO：69  292  OtELO2.1，(Δ6-延伸酶) SEQ ID NO：111  292

OtElo1和OtElo1.2表现了与斑马鱼来源(GenBank AAN77156；约 26％同源性)的延伸酶最高程度的相似性，而OtElo2和OtElo2.1表现了 与剑叶藓Elo(PSE)最高程度的相似性[约36％同源性](用tBLASTn 算法进行比对(Altschul等，J.Mol.Biol.1990，215：403-410))。

延伸酶按如下方式克隆：

稳定期的40ml Ostreococcus tauri培养物经过离心并且沉淀在100μl 双蒸水中重悬并-20℃保存。相关的基因组DNA基于PCR法扩增。以如 此方式选择了相应的引物对即引物携有紧邻起始密码子的用于高效翻译的 酵母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。在每一情况下使用1μl 解冻的细胞、200μM dNTP、2.5U Taq聚合酶和每种引物100pmol于总 计50μl体积中实施了OtElo-DNA的扩增。PCR的条件如下：首先95℃ 变性5分钟，其后为94℃ 30秒、55℃ 1分钟和72℃ 2分钟的30个循环， 并且终末延伸步骤为72℃ 10分钟。

实施例44：酵母中异源表达的表达质粒的克隆

为描述Ostreococcus tauri延伸酶的功能特征，将所讨论的DNA的可 读框克隆于pYES2.1/V5-His-TOPO(Invitrogen)的半乳糖可诱导启动子 GAL1下游，产生了相应的pOTE1、pOTE1.2、pOTE2和pOTE2.1克隆。

酿酒酵母334株分别以载体pOTE1，pOTE1.2，pOTE2和pOTE2.1 经电穿孔(1500V)转化。经空白载体pYES2转化的酵母用作对照。已转 化的酵母在补加了2％葡萄糖但缺乏尿嘧啶的完全基本培养基(CMdum) 琼脂平板上选择。选择后，在每种情况下挑选三个转化体用于进一步的功 能性表达。

为表达Ot延伸酶，在每种情况下对5ml由补加了2％(w/v)棉子糖 但缺乏尿嘧啶的CMdum培养基组成的预培养基首先以经选择的转化体接 种并且每分钟200转30℃温育2天。然后将5ml补加了2％棉子糖和300μM 多种脂肪酸的CMdum(尿嘧啶撤除)液体培养基以预培养物接种至OD600 0.05。酶的表达通过加入2％(w/v)半乳糖诱导。培养物进一步20℃温育 96小时。

实施例45：植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆

产生了基于pSUN-USP的另一个转化载体用于转化植物。为达此目的， 使用PCR向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点。对应的引物序列从 OtElo1、OtElo1.2、OtElo2和OtElo2.1的5′和3′区域衍生。

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM的dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体 pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物 和载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过Qiagen凝胶纯化 试剂盒遵循制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。使用了来自 Roche的快速连接试剂盒以便连接。得到的质粒pSUN-OtElIO1、 pSUN-OtELO1.2、pSUN-OtELO2和pSUN-OtELO2.2经测序证实。

pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P、Svab，Z、 Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通 过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了 pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼氨酸合酶基因的 加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H、 Dhaese，P.、Seurinck，J.、Lemmers，M、Van Montagu，M.和Schell， J.Nucleotide sequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684 位的核苷酸(Genbank Accession X56240)，其中USP基因非编码区的一 部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可 获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列： 5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATC C GGATCTGCTGGCTATGAA-3’.SEQ ID NO：130)通过遵循标准方法 的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且插入带OCS终 止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体 用于转化拟南芥菜、油菜籽、烟草和亚麻子。

实施例46：OtElo1、OtElo1.2、OtElo2和OtELO2.2在酵母中的表达

如实施例15中所描述的由质粒pYES3，pYES3-OtELO1， pYES3-OtELO1.2，pYES3-OtELO2和pYES3-OtELO2.2转化的酵母按 如下方式分析：

来自主培养的酵母细胞经离心(100xg，5分钟，20℃)收获并以pH 8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯 (FAME)从酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉 淀与2ml的1N甲醇硫酸和2％(v/v)二甲氧丙烷80℃温育1小时。FAME 以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机 相以2ml的pH 8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤。随后PE相 以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并置于100μl PE中。样品在装备有火焰电 离探测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m， 0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设 置为以每分钟5℃的速率从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟 (保持)。

信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间加以鉴定。 例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova 等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585， Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和 Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方 法。

实施例47：OtElo1、OtElo1.2、OtElo2和OtELO2.1的功能特征

OtElo1的底物特异性在表达和在喂饲多种脂肪酸后测定(表15)。所 喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了 作为OtElo1反应产物的新脂肪酸。这意味基因OtElo1得到功能性地表达。

表15表明OtElo1和OtElo1.2具有窄的底物特异性。OtElo1和 OtElo1.2只能延伸C20脂肪酸二十碳五烯酸(图24A、24B)和花生四烯 酸(图25A、25B)，但是优选延伸ω-3去饱和的二十碳五烯酸。

表15表明同多种脂肪酸比较，延伸酶OtElo1和OtElo1.2对Δ5位置 具备双键的C20多不饱和脂肪酸具有底物特异性。

分别由载体pOtElo1和pOtElo1.2转化的酵母在存在所述脂肪酸的基 本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随 后这些FAME通过GLC分析。

OtElo1(SEQ ID NO：81)和OtElo2.1(SEQ ID NO：111)的底物 特异性在表达和在喂饲多种脂肪酸后测定(表16)。所喂饲的底物在全部 转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为OtElo2反应产 物的新脂肪酸。这意味着功能性表达了基因OtElo2和OtElo2.1。

表15 脂肪酸底物 转化率(％) OtElo1 转化率(％) OtElo1.2 16:0 - -  脂肪酸底物 转化率(％) OtElo1 转化率(％) OtElo1.2  16:1Δ9 - -  18:0 - -  18:1Δ9 - -  18:1Δ11 - - 18:2Δ9，12 - - 18:3Δ6，9，12 - - 18:3Δ5，9，12 - - 20:3Δ8，11，14 - - 20:4Δ5，8，11，14 10.8±0.6 38.0 20:5Δ5，8，11，14，17 46.8±3.6 68.6 22:4Δ7，10，13，16 - - 22:6Δ4，7，10，13，16，19 - -

表16显示了延伸酶OtElo2和OtElo2.1对多种脂肪酸的底物特异性。 OtElo2.1的活性明显较高。

已分别由载体pOtElo2和pOtElo2.1转化的酵母在存在所述脂肪酸的 基本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。 随后这些FAME通过GLC分析。

在表16中显示的酶活性清楚地表明OtElo2或OtElo2.1是Δ6延伸酶。

表16： 脂肪酸底物 转化率(％) OtElo2 转化率(％) OtELO2.2 16:0 - - 16:1Δ9 - - 16:3Δ7，10，13 - - 18:0 - - 18:1Δ6 - - 18:1Δ9 - - 18:1Δ11 - - 18:2Δ9，12 - - 18:3Δ6，9，12 15.3 55.7 18:3Δ5，9，12 - - 18:4Δ6，9，12，15 21.1 70.4 20:2Δ11，14 - - 20:3Δ8，11，14 - - 20:4Δ5，8，11，14 - - 20:5Δ5，8，11，14，17 - - 22:4Δ7，10，13，16 - - 22:5Δ7，10，13，16，19 - - 22:6Δ4，7，10，13，16，19 - -

图24A-D分别显示了OtElo1(B)和OtElo1.2(D)对二十碳五烯酸 的延伸。对照(A、C)未显示延伸产物(22:5ω3)。

图25A-D分别显示了OtElo1(B)和OtElo1.2(D)对花生四烯酸的 延伸。对照(A、C)未显示延伸产物(22:4ω6)。

实施例48：从细小裸藻和拟南芥菜中克隆基因

在本申请中所详述的具有Δ5延伸酶活性或Δ6延伸酶活性的延伸酶基 因的辅助下，通过搜索蛋白质序列中的保守区域，可在序列数据库 (Genbank，裸藻EST文库)中鉴定分别来自拟南芥菜和细小裸藻的具有 相应基序的序列。序列如下： 基因名称 SEQ ID  氨基酸 EGY1019(细小裸藻) SEQ ID NO：131  262 EGY2019(细小裸藻) SEQ ID NO：133  262 At3g06460(拟南芥菜) SEQ ID NO：135  298 At3g06470(拟南芥菜) SEQ ID NO：137  278

将细小裸藻延伸酶按如下方式克隆：

细小裸藻1224-5/25株从Sammlung für Algenkulturen Gttingen [Gttingen collection of algal cultures](SAG)获得。该株在培养基II (Calvayrac R和Douce R，FEBS Letters 7：259-262，1970)中于23℃ 以8小时/16小时光照/黑暗(光照密度35mol s-1 m-2)周期生长4天。

用来自Qiagen的RNAeasy试剂盒(Valencia，CA，美国)分离了四 日龄的裸藻培养物的总RNA。聚腺苷酸化RNA(mRNA)以寡聚-dT-纤 维素从这种总RNA中分离(Sambrook等，1989)。这种RNA使用来自 Promega的逆转录系统试剂盒进行逆转录并且将已合成的cDNA克隆入载 体λZAP(lambda ZAP Gold，Stratagene)。然后这种cDNA根据制造商 的说明去包装以产生质粒DNA，并且对克隆以随机测序方式进行部分测 序。mRNA以PolyATract分离系统(Promega)从总RNA中分离。这种 mRNA使用Marathon cDNA扩增试剂盒(BD Biosciences)遵循制造商的 说明进行逆转录并且连接了人工接头。然后这种cDNA文库用于通过5’和 3’RACE(cDNA末端快速扩增)方法的PCR克隆表达质粒。

将拟南芥菜延伸酶按如下方式克隆：

从基因组DNA开始，在每种情况下用于这两个基因的引物衍生自可 读框5’和3’端。

将Chrigwin等(1979)的方法用于从拟南芥菜中分离总RNA。21日 龄的植物的叶片于液氮中经研杵和研钵捣碎、以破碎缓冲液处理并于37℃ 温育15分钟。离心后(10分钟、4℃，12000×g)将上清中的RNA以0.02 体积3M pH 5.0的乙酸钠和0.75体积乙醇-20℃沉淀5小时。然后经再次 离心后，将RNA置于每克起始材料1ml的TES中，并且以1倍体积的酚 /氯仿提取一次并且以1倍体积的氯仿再提取一次，以及RNA以2.5M LiCI沉淀。RNA经再次离心并且经80％乙醇洗涤后重悬于水中。cDNA如 Sambrook等所描述合成，并且RT-PCR以衍生的引物实施。将PCR产物 遵循制造商说明克隆入载体pYES2.1-TOPO(Invitrogen)。

实施例49：酵母中异源表达的表达质粒的克隆

为描述来自拟南芥菜去饱和酶的功能特征，将所讨论的DNA的可读 框克隆至pYES2.1/V5-His-TOPO(Invitrogen)的半乳糖可诱导启动子 GAL1下游，产生了相应的pAt60和pAt70克隆。

酿酒酵母334株分别以载体pAt60和pAt70经电穿孔(1500V)转化。 经空白载体pYES2.1转化的酵母用作对照。已转化的酵母在补加了2％葡 萄糖但缺乏尿嘧啶的完全基本培养基(CMdum)琼脂平板上选择。选择 后，在每种情况下挑选三个转化体用于进一步的功能性表达。

为表达At延伸酶，在每种情况下对5ml由补加了2％(w/v)棉子糖 但缺乏尿嘧啶的CMdum液体培养基组成的预培养基首先以经选择的转化 体接种并且每分钟200转30℃温育2天。

然后5ml补加了2％棉子糖和300μM多种脂肪酸的CMdum(尿嘧啶 撤除)液体培养基以预培养物接种至OD600 0.05。酶的表达通过加入2％ (w/v)半乳糖诱导。培养物进一步20℃温育96小时。

实施例50：pAt60和pAt70在酵母中的表达

如实施例5中所描述的由质粒pYES2.1、pAt60和pAt70分别转化的 酵母按如下方式分析：

来自主培养的酵母细胞经离心(100xg，5分钟，20℃)收获并以pH 8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯 (FAME)从酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉 淀与2ml的1N甲醇硫酸和2％(v/v)二甲氧丙烷80℃温育1小时。FAME 以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机 相以2ml的pH 8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤。随后PE相 以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并置于100μl PE中。样品在装备有火焰电 离探测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m， 0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设 置为以每分钟5℃的速率从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟 (保持)。

信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间加以鉴定。 例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova 等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585， Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和 Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方 法。

实施例51：pAt60和pAt70的功能特征

延伸酶At3g06460和At3g06470的底物特异性在表达和在喂饲多种脂 肪酸后分别测定(表17、图26)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可检 测到，转基因酵母显示分别合成了作为At3g06460和At3g06470基因产物 的新脂肪酸。这意味这些基因得到了功能性表达。

表17：EPA分别经延伸酶At3g06460和At3g06470延伸。在喂饲250 μM EPA之后，分析酵母提取物。 基因 喂饲的脂肪酸 C20:5n-3含量 C22:5n-3含量 At3g06460 EPA (C20:5n-3) 20.8 0.6 At3g06460 EPA (C20:5n-3) 25.4 1.1 EPA的转化率 At3g06460：3.0％ At3g06470：4.1％

图26显示20:5n-3经延伸酶At3g06470得到了延伸。

实施例52：从三角褐指藻中克隆延伸酶

在本申请中所详述的具有Δ6-延伸酶活性的延伸酶基因的辅助下从蛋 白质序列中的保守区域开始，产生了简并引物并且这些引物通过PCR方法 用于筛选褐指藻属的cDNA文库： 引物名 序列 5’-3’方向 相应的氨基酸 Phaelo正向引物1 AA(C/T)CTUCTUTGGCTUTT (C/T)TA(SEQ ID NO.185) NLLWLFY Phaelo反向引物1 GA(C/T)TGUAC(A/G)AA(A/G) FAQFFVQS AA(C/T)TGUG C(A/G)AA (SEQ ID NO.186)

括号中的核苷酸碱基意指在每种情况下存在的一种或另一种核苷酸碱 基的寡核苷酸混合物。

褐指藻属cDNA文库的制备：

2L三角褐指藻UTEX 646培养物在f/2培养基中(1975年纽约Plenum Press出版社(Smith，W.L.和Chanley，M.H.编辑)《Culture of Marine Invertebrate Animals》中第29-60页的Guillard，R.R.L.Culture of phytoplankton for feeding marine invertebrates)经14天长成35E/cm2光 密度。离心后，冷冻的细胞在液氮存在时研成细粉并且在2ml均化作用缓 冲液(在0.2M Tris-Cl pH 8.5中的0.33M山梨糖醇、0.3M NaCl、10mM EDTA、10mM EGTA、2％SDS、2％巯基乙醇)中重悬。在加入4ml酚和 2ml氯仿后，将混合物45-50℃剧烈振摇15分钟。随后离心该混合物(10 分钟×10000g)，并且使用氯仿逐步抽提水相。然后通过加入1/20体积的4 M碳酸氢钠沉淀核酸并且加以离心。将沉淀置于80mM Tris硼酸pH 7.0 和1mM EDTA中，以8M氯化锂沉淀RNA。RNA沉淀经离心和用70％ 乙醇洗涤后置于无RNA酶的水中。Poly(A)-RNA以Dynabeads(Dynal， Oslo，Norway)遵循制造商的说明分离，并且第一链cDNA的合成使用来 自Roche(Mannheim)的MLV逆转录酶实施。第二链的合成随后以DNA 聚合酶I和Klenow片段实施，然后以RNA酶H消化。所述cDNA经过 T4 DNA聚合酶处理并且随后通过T4连接酶增加了EcoRI/XhoI接头 (Pharmacia，Freiburg)。在经过XhoI消化、磷酸化作用和凝胶分离之 后，大于300bp的片段遵循制造商说明连接进入噬菌体λZAP Express(荷 兰阿姆斯特丹Stratagene)内。在cDNA文库的大量切割和质粒回收后， 将质粒文库转化入大肠杆菌DH10B细胞并且用于PCR筛选。

可使用以上提到的简并引物产生具有SEQ ID NO：187的PCR片段。

所述片段以洋地黄毒苷(Roche，Mannheim)标记并且用作筛选噬菌 体文库的探针。

使用序列SEQ ID NO：187可获得基因序列SEQ ID NO：183，其构 成褐指藻属Δ6-延伸酶的全长RNA分子。

实施例53：酵母中异源表达的表达质粒的克隆

所讨论的引物对以如此方式选择即它们具有紧邻起始密码子的用于高 效翻译的酵母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。PtELO6 DNA 的扩增在每一情况下使用1μl cDNA、200μM dNTP、2.5U Advantage聚合 酶和每种引物100pmol于总计50μl体积中实施。PCR的条件如下：首先 95℃变性5分钟，其后为94℃ 30秒、55℃ 1分钟和72℃ 2分钟的30 个循环，并且终末延伸步骤为72℃ 10分钟。

以下寡核苷酸用于克隆在酵母中异源表达的序列的PCR反应 基因名称和 SEQ ID NO： 引物序列 PtELO6 (SEQ ID NO：183) F：5’-GCGGCCGCACATAATGATGGTACCTTCAAG (SEQ ID NO：188) R：3’-GAAGACAGCTTAATAGACTAGT (SEQ ID NO：189)

*F＝正向引物，R＝反向引物

PCR产物与酵母表达载体pYES2.1-TOPO(Invitrogen)根据制造商 说明21℃温育30分钟。通过T突出端和拓扑异构酶(Invitrogen)活性 向载体连入PCR产物(见SEQ ID NO：192)。在温育后转化大肠杆菌 DH5α细胞。合适的克隆通过PCR鉴定，质粒DNA通过Qiagen DNAeasy 试剂盒分离并且经测序证实。然后正确的序列经电穿孔(1500V)转化入 酵母株INVSc1(Invitrogen)。平行转化空白载体pYES2.1作为对照。此 后酵母在补加了2％葡萄糖的无尿嘧啶基本培养基上铺板。能够在无尿嘧 啶的培养基中生长的细胞包含相应的质粒pYES2.1和pYES2.1-PtELO6。 选择后，在每种情况下挑选了两个转化体用于进一步的功能表达。

实施例54：植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆

产生了基于pSUN-USP的另一个转化载体用于转化植物。为达此目的， 使用以下引物对向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点：

PSUN-PtELO6

正向引物：5‘-GCGGCCGCACCATGATGGTACCTTCAAGTTA (SEQ ID NO：190)

反向引物：3‘-GAAGACAGCTTAATAGGCGGCCGC(SEQ ID NO：191)

PCR混合物的组成(50μl)：

5.00μl模板cDNA

5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2

5.00μl 2mM的dNTP

1.25μl每种引物(10pmol/μl)

0.50μl Advantage聚合酶

使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。

PCR反应条件：

复性温度：55℃ 1分钟

变性温度：94℃ 1分钟

延伸温度：72℃ 2分钟

循环次数：35

PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体 pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产 物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过 Qiagen凝胶纯化试剂盒遵循制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产 物。使用了来自Roche的快速连接试剂盒以便连接。得到的质粒 pSUN-PtELO经测序证实。

pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P、Svab，Z、 Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通 过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了 pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼氨酸合酶基因的 加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H、 Dhaese，P.、Seurinck，J.、Lemmers，M、Van Montagu，M.和Schell， J.Nucleotide sequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。DerUSP启动子对应于第1-684 位的核苷酸(Genbank Accession X56240)，其中USP基因非编码区的一 部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可 获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列： 5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATC C GGATCTGCTGGCTATGAA-3’；SEQ ID NO：151)通过遵循标准方 法的PCR反应扩增。所述PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且导入带OCS 终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建 体用于转化拟南芥菜、油菜籽、烟草和亚麻子。

实施例55：PtElo在酵母中的表达

如实施例4中所描述的由质粒pYES2和pYES2-PtELO6转化的酵母 按如下方式分析：

来自主培养的酵母细胞经离心(100xg，5分钟，20℃)收获并以pH 8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯 (FAME)从酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉 淀与2ml的1N甲醇硫酸和2％(v/v)二甲氧丙烷80℃温育1小时。FAME 以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下为除去未衍生的脂肪酸，有机相 以2ml的pH 8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤。随后PE相以 Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并置于100μl PE中。样品在装备有火焰电离 探测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25 mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为 以每分钟5℃的速率从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟(保 持)。

信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间加以鉴定。 例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova 等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585， Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和 Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方 法。

实施例56：PtELO6的功能特征

图29显示了C18:3Δ6，9，12和C18:4Δ6，9，12，15的转化。在每一情况下底物 延伸了两个碳原子，分别形成了脂肪酸C20:3Δ8，11，14和C20:4Δ8，11，14，17。 PtELO6的底物特异性在表达和在喂饲多种脂肪酸后测定(图30)。所喂 饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作 为PtELO6反应产物的新脂肪酸。这意味PtELO6基因得到功能性的表达。

表18表明PtELO6具有窄的底物特异性。PtELO6只能延伸C18脂肪 酸亚油酸、亚麻酸、γ-亚麻酸和硬脂艾杜糖酸，但是优选地延伸ω3去饱和 的硬脂艾杜糖酸(见图30)。

喂饲实验：每一情况下喂饲250μM的脂肪酸(粗体)。下划线的脂肪 酸为新形成。

表18：PtELO6的底物特异性 喂饲的脂肪酸： +18:2 +18:3 +18:3 +18:4 16:0 16.2 18.2 15.2 20 04:48 16:1 50.6 20.5 22.8 33.5 34.2 18:0 5.4 6.3 6.2 5.2 12.4 18:1 27.7 14.6 19.6 19.3 16.7 18:2 40 18:3 32.9 18:3 12.3 18:4 4.5 20:2 0.4 20:3 3.4 20:3 9.7 20:4 14.5 ％延伸 0.0 0.99 9.37 44.09 76.32

喂饲了以下脂肪酸，但是未得到转化。

●18:1Δ6，18:1Δ9，18:1Δ11

●20:2Δ11，14，20:3Δ11，14，17，20:3Δ8，11，14，20:4Δ5，8，11，14，20:5Δ5，8，11，14，17

●22:4Δ7，10，13，16

经载体pYES2-PtELO6转化的酵母在存在所述脂肪酸的基本培养基 中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随后这些 FAME通过GLC分析。通过这种方法，获得了在图29和30及表16中所 示的结果。

等同物：

文中描述的本发明的特定实施方案的许多等同物可由技术人员仅借助 常规实验确定或找到。这些等同物落入本专利权利要求的范围内。

表3 喂饲的脂肪酸的转化率。使用下式计算转化率：[转化率]＝[产物]/[底物]+[产物]*100. GC分析中以％表示的BioTaur克隆面积 克隆 脂肪酸 C16:0 C16:1 (n-7) C18:0 C18:1 (n-9) C18:3 (n-6) C18:4 (n-3) C20:3 (n-6) C20:4 (n-6) C20:4 (n-3) C20:5 (n-3) C22:4 (n-6) C22:4 (n-3) C22:5 (n-3) 载体 无 21.261 41.576 4.670 25.330 BioTaur 无 20.831 37.374 4.215 26.475 载体 GLA+ EPA 22.053 23.632 5.487 17.289 11.574 13.792 BioTaur GLA+ EPA 20.439 25.554 6.129 19.587 3.521 6.620 10.149 1.127 载体 EPA 20.669 28.985 6.292 21.712 16.225 BioTaur EPA 20.472 26.913 6.570 23.131 11.519 3.251 载体 ARA 23.169 23.332 6.587 12.735 27.069 BioTaur ARA 20.969 31.281 5.367 21.351 9.648 1.632 载体 SDA 18.519 12.626 6.642 6.344 47.911 BioTaur SDA 19.683 15.878 7.246 8.403 13.569 25.946 0.876

                             序列表

<110>巴斯福植物科学有限公司

<120>用于在转基因生物中产生多不饱和脂肪酸的方法

<130>PF54756

<140>20030601

<141>2003-08-01

<160>192

<170>PatentIn版本3.1

<210>1

<211>1266

<212>DNA

<213>细小裸藻(Euglena gracilis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1266)

<223>Δ8-去饱和酶

<400>1

atg aag tca aag cgc caa gcg ctt ccc ctt aca att gat gga aca aca     48

Met Lys Ser Lys Arg Gln Ala Leu Pro Leu Thr Ile Asp Gly Thr Thr

1               5                   10                  15

tat gat gtg tct gcc tgg gtc aat ttc cac cct ggt ggt gcg gaa att     96

Tyr Asp Val Ser Ala Trp Val Asn Phe His Pro Gly Gly Ala Glu Ile

            20                  25                  30

ata gag aat tac caa gga agg gat gcc act gat gcc ttc atg gtt atg    144

lle Glu Asn Tyr Gln Gly Arg Asp Ala Thr Asp Ala Phe Met Val Met

        35                  40                  45

cac tct caa gaa gcc ttc gac aag ctc aag cgc atg ccc aaa atc aat    192

His Ser Gln Glu Ala Phe Asp Lys Leu Lys Arg Met Pro Lys Ile Asn

    50                  55                  60

ccc agt tct gag ttg cca ccc cag gct gca gtg aat gaa gct caa gag    240

Pro Ser Ser Glu Leu Pro Pro Gln Ala Ala Val Asn Glu Ala Gln Glu

65                  70                  75                  80

gat ttc cgg aag ctc cga gaa gag ttg atc gca act ggc atg ttt gat    288

Asp Phe Arg Lys Leu Arg Glu Glu Leu Ile Ala Thr Gly Met Phe Asp

                85                  90                  95

gcc tcc ccc ctc tgg tac tca tac aaa atc agc acc aca ctg ggc ctt    336

Ala Ser Pro Leu Trp Tyr Ser Tyr Lys Ile Ser Thr Thr Leu Gly Leu

            100                 105                 110

gga gtg ctg ggt tat ttc ctg atg gtt cag tat cag atg tat ttc att    384

Gly Val Leu Gly Tyr Phe Leu Met Val Gln Tyr Gln Met Tyr Phe Ile

        115                 120                 125

ggg gca gtg ttg ctt ggg atg cac tat caa cag atg ggc tgg ctt tct    432

Gly Ala Val Leu Leu Gly Met His Tyr Gln Gln Met Gly Trp Leu Ser

    130                 135                 140

cat gac att tgc cac cac cag act ttc aag aac cgg aac tgg aac aac    480

His Asp Ile Cys His His Gln Thr Phe Lys Asn Arg Asn Trp Asn Asn

145                 150                 155                 160

ctc gtg gga ctg gta ttt ggc aat ggt ctg caa ggt ttt tcc gtg aca    528

Leu Val Gly Leu Val Phe Gly Asn Gly Leu Gln Gly Phe Ser Val Thr

                165                 170                 175

tgc tgg aag gac aga cac aat gca cat cat tcg gca acc aat gtt caa    576

Cys Trp Lys Asp Arg His Asn Ala His His Ser Ala Thr Asn Val Gln

            180                 185                 190

ggg cac gac cct gat att gac aac ctc ccc ctc tta gcc tgg tct gag    624

Gly His Asp Pro Asp Ile Asp Asn Leu Pro Leu Leu Ala Trp Scr Glu

        195                 200                 205

gat gac gtc aca cgg gcg tca ccg att tcc cgc aag ctc att cag ttc    672

Asp Asp Val Thr Arg Ala Ser Pro Ile Ser Arg Lys Leu Ile Gln Phe

    210                 215                 220

cag cag tat tat ttc ttg gtc atc tgt atc ttg ttg cgg ttc att tgg    720

Gln Gln Tyr Tyr Phe Leu Val Ile Cys Ile Leu Leu Arg Phe Ile Trp

225                 230                 235                 240

tgt ttc cag agc gtg ttg acc gtg cgc agt ctg aag gac aga gat aac    768

Cys Phe Gln Ser Val Leu Thr Val Arg Ser Leu Lys Asp Arg Asp Asn

                245                 250                 255

caa ttc tat cgc tct cag tat aag aag gag gcc att ggc ctc gcc ctg    816

Gln Phe Tyr Arg Ser Gln Tyr Lys Lys Glu Ala Ile Gly Leu Ala Leu

            260                 265                 270

cat tgg aca ttg aag gcc ctg ttc cac tta ttc ttt atg ccc agc atc    864

His Trp Thr Leu Lys Ala Leu Phe His Leu Phe Phe Met Pro Ser Ile

        275                 280                 285

ctc aca tcg ctg ttg gta ttt ttc gtt tcg gag ctg gtt ggc ggc ttc    912

Leu Thr Ser Leu Leu Val Phe Phe Val Ser Glu Leu Val Gly Gly Phe

    290                 295                 300

ggc att gcg atc gtg gtg ttc atg aac cac tac cca ctg gag aag atc    960

Gly Ile Ala Ile Val Val Phe Met Asn His Tyr Pro Leu Glu Lys Ile

305                 310                 315                 320

ggg gac tcg gtc tgg gat ggc cat gga ttc tcg gtt ggc cag atc cat   1008

Gly Asp Ser Val Trp Asp Gly His Gly Phe Ser Val Gly Gln Ile His

                325                 330                 335

gag acc atg aac att cgg cga ggg att atc aca gat tgg ttt ttc gga    1056

Glu Thr Met Asn Ile Arg Arg Gly Ile Ile Thr Asp Trp Phe Phe Gly

            340                 345                 350

ggc ttg aac tac cag atc gag cac cat ttg tgg ccg acc ctc cct cgc    1104

Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu Trp Pro Thr Leu Pro Arg

        355                 360                 365

cac aac ctg aca gcg gtt agc tac cag gtg gaa cag ctg tgc cag aag    1152

His Asn Leu Thr Ala Val Ser Tyr Gln Val Glu Gln Leu Cys Gln Lys

    370                 375                 380

cac aac ctg ccg tat cgg aac ccg ctg ccc cat gaa ggg ttg gtc atc    1200

His Asn Leu Pro Tyr Arg Asn Pro Leu Pro His Glu Gly Leu Val Ile

385                 390                 395                 400

ctg ctg cgc tat ctg gcg gtg ttc gcc cgg atg gcg gag aag caa ccc    1248

Leu Leu Arg Tyr Leu Ala Val Phe Ala Arg Met Ala Glu Lys Gln Pro

                405                 410                 415

gcg ggg aag gct cta taa                                            1266

Ala Gly Lys Ala Leu

            420

<210>2

<21l>42l

<212>PRT

<213>细小裸藻

<400>2

Met Lys Ser Lys Arg Gln Ala Leu Pro Leu Thr Ile Asp Gly Thr Thr

1               5                   10                  15

Tyr Asp Val Ser Ala Trp Val Asn Phe His Pro Gly Gly Ala Glu Ile

            20                  25                  30

Ile Glu Asn Tyr Gln Gly Arg Asp Ala Thr Asp Ala Phe Met Val Met

        35                  40                  45

His Ser Gln Glu Ala Phe Asp Lys Leu Lys Arg Met Pro Lys Ile Asn

    50                  55                  60

Pro Ser Ser Glu Leu Pro Pro Gln Ala Ala Val Asn Glu Ala Gln Glu

65                  70                  75                  80

Asp Phe Arg Lys Leu Arg Glu Glu Leu Ile Ala Thr Gly Met Phe Asp

                85                  90                  95

Ala Ser Pro Leu Trp Tyr Ser Tyr Lys Ile Ser Thr Thr Leu Gly Leu

            100                 105                 110

Gly Val Leu Gly Tyr Phe Leu Met Val Gln Tyr Gln Met Tyr Phe Ile

        115                 120                 125

Gly Ala Val Leu Leu Gly Met His Tyr Gln Gln Met Gly Trp Leu Ser

    130                 135                 140

His Asp Ile Cys His His Gln Thr Phe Lys Asn Arg Asn Trp Asn Asn

145                 150                 155                 160

Leu Val Gly Leu Val Phe Gly Asn Gly Leu Gln Gly Phe Ser Val Thr

                165                 170                 175

Cys Trp Lys Asp Arg His Asn Ala His His Ser Ala Thr Asn Val Gln

            180                 185                 190

Gly His Asp Pro Asp Ile Asp Asn Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ser Glu

        195                 200                 205

Asp Asp Val Thr Arg Ala Ser Pro Ile Ser Arg Lys Leu Ile Gln Phe

    210                 215                 220

Gln Gln Tyr Tyr Phe Leu Val Ile Cys Ile Leu Leu Arg Phe Ile Trp

225                 230                 235                 240

Cys Phe Gln Ser Val Leu Thr Val Arg Ser Leu Lys Asp Arg Asp Asn

                245                 250                 255

Gln Phe Tyr Arg Ser Gln Tyr Lys Lys Glu Ala Ile Gly Leu Ala Leu

            260                 265                 270

His Trp Thr Leu Lys Ala Leu Phe His Leu Phe Phe Met Pro Ser Ile

        275                 280                 285

Leu Thr Ser Leu Leu Val Phe Phe Val Ser Glu Leu Val Gly Gly Phe

    290                 295                 300

Gly Ile Ala Ile Val Val Phe Met Asn His Tyr Pro Leu Glu Lys Ile

305                 310                 315                 320

Gly Asp Ser Val Trp Asp Gly His Gly Phe Ser Val Gly Gln Ile His

                325                 330                 335

Glu Thr Met Asn Ile Arg Arg Gly Ile Ile Thr Asp Trp Phe Phe Gly

            340                 345                 350

Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu Trp Pro Thr Leu Pro Arg

        355                 360                 365

His Asn Leu Thr Ala Val Ser Tyr Gln Val Glu Gln Leu Cys Gln Lys

    370                 375                 380

His Asn Leu Pro Tyr Arg Asn Pro Leu Pro His Glu Gly Leu Val Ile

385                 390                 395                 400

Leu Leu Arg Tyr Leu Ala Val Phe Ala Arg Met Ala Glu Lys Gln Pro

                405                 410                 415

Ala Gly Lys Ala Leu

            420

<210>3

<211>777

<212>DNA

<213>绿光等鞭金藻(Isochrysis galbana)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(777)

<223>Δ9-延伸酶

<400>3

atg gcc ctc gca aac gac gcg gga gag cgc atc tgg gcg gct gtg acc     48

Met Ala Leu Ala Asn Asp Ala Gly Glu Arg Ile Trp Ala Ala Val Thr

1               5                   10                  15

gac ccg gaa atc ctc att ggc acc ttc tcg tac ttg cta ctc aaa ccg     96

Asp Pro Glu Ile Leu Ile Gly Thr Phe Ser Tyr Leu Leu Leu Lys Pro

            20                  25                  30

ctg ctc cgc aat tcc ggg ctg gtg gat gag aag aag ggc gca tac agg    144

Leu Leu Arg Asn Ser Gly Leu Val Asp Glu Lys Lys Gly Ala Tyr Arg

        35                  40                  45

acg tcc atg atc tgg tac aac gtt ctg ctg gcg ctc ttc tct gcg ctg    192

Thr Ser Met Ile Trp Tyr Asn Val Leu Leu Ala Leu Phe Ser Ala Leu

    50                  55                  60

agc ttc tac gtg acg gcg acc gcc ctc ggc tgg gac tat ggt acg ggc    240

Ser Phe Tyr Val Thr Ala Thr Ala Leu Gly Trp Asp Tyr Gly Thr Gly

65                  70                  75                  80

gcg tgg ctg cgc agg caa acc ggc gac aca ccg cag ccg ctc ttc cag    288

Ala Trp Leu Arg Arg Gln Thr Gly Asp Thr Pro Gln Pro Leu Phe Gln

                85                  90                  95

tgc ccg tcc ccg gtt tgg gac tcg aag ctc ttc aca tgg acc gcc aag    336

Cys Pro Ser Pro Val Trp Asp Ser Lys Leu Phe Thr Trp Thr Ala Lys

            100                 105                 110

gca ttc tat tac tcc aag tac gtg gag tac ctc gac acg gcc tgg ctg    384

Ala Phe Tyr Tyr Ser Lys Tyr Val Glu Tyr Leu Asp Thr Ala Trp Leu

        115                 120                 125

agg gtc tcc ttt ctc cag gcc ttc cac cac ttt ggc gcg ccg tgg gat    432

Arg Val Ser Phe Leu Gln Ala Phe His His Phe Gly Ala Pro Trp Asp

    130                 135                 140

gtg tac ctc ggc att cgg ctg cac aac gag ggc gta tgg atc ttc atg    480

Val Tyr Leu Gly Ile Arg Leu His Asn Glu Gly Val Trp Ile Phe Met

145                 150                 155                 160

ttt ttc aac tcg ttc att cac acc atc atg tac acc tac tac ggc ctc    528

Phe Phe Asn Ser Phe Ile His Thr Ile Met Tyr Thr Tyr Tyr Gly Leu

                165                 170                 175

acc gcc gcc ggg tat aag ttc aag gcc aag ccg ctc atc acc gcg atg    576

Thr Ala Ala Gly Tyr Lys Phe Lys Ala Lys Pro Leu Ile Thr Ala Met

            180                 l85                 190

cag atc tgc cag ttc gtg ggc ggc ttc ctg ttg gtc tgg gac tac atc    624

Gln Ile Cys Gln Phe Val Gly Gly Phe Leu Leu Val Trp Asp Tyr Ile

        195                 200                 205

aac gtc ccc tgc ttc aac tcg gac aaa ggg aag ttg ttc agc tgg gct    672

Asn Val Pro Cys Phe Asn Ser Asp Lys Gly Lys Leu Phe Ser Trp Ala

    210                 215                 220

ttc aac tat gca tac gtc ggc tcg gtc ttc ttg ctc ttc tgc cac ttt    720

Phe Asn Tyr Ala Tyr Val Gly Ser Val Phe Leu Leu Phe Cys His Phe

225                 230                 235                 240

ttc tac cag gac aac ttg gca acg aag aaa tcg gcc aag gcg ggc aag    768

Phe Tyr Gln Asp Asn Leu Ala Thr Lys Lys Ser Ala Lys Ala Gly Lys

                245                 250                 255

cag ctc tag                                                        777

Gln Leu

<210>4

<211>258

<212>PRT

<213>绿光等鞭金藻

<400>4

Met Ala Leu Ala Asn Asp Ala Gly Glu Arg Ile Trp Ala Ala Val Thr

1               5                   10                  15

Asp Pro Glu Ile Leu Ile Gly Thr Phe Ser Tyr Leu Leu Leu Lys Pro

            20                  25                  30

Leu Leu Arg Asn Ser Gly Leu Val Asp Glu Lys Lys Gly Ala Tyr Arg

        35                  40                  45

Thr Ser Met Ile Trp Tyr Asn Val Leu Leu Ala Leu Phe Ser Ala Leu

    50                  55                  60

Ser Phe Tyr Val Thr Ala Thr Ala Leu Gly Trp Asp Tyr Gly Thr Gly

65                  70                  75                  80

Ala Trp Leu Arg Arg Gln Thr Gly Asp Thr Pro Gln Pro Leu Phe Gln

                85                  90                  95

Cys Pro Ser Pro Val Trp Asp Ser Lys Leu Phe Thr Trp Thr Ala Lys

            100                 105                 110

Ala Phe Tyr Tyr Ser Lys Tyr Val Glu Tyr Leu Asp Thr Ala Trp Leu

        115                 120                 125

Arg Val Ser Phe Leu Gln Ala Phe His His Phe Gly Ala Pro Trp Asp

    130                 135                 140

Val Tyr Leu Gly Ile Arg Leu His Asn Glu Gly Val Trp Ile Phe Met

145                 150                 155                 160

Phe Phe Asn Ser Phe Ile His Thr Ile Met Tyr Thr Tyr Tyr Gly Leu

                165                 170                 175

Thr Ala Ala Gly Tyr Lys Phe Lys Ala Lys Pro Leu Ile Thr Ala Met

            180                 185                 190

Gln Ile Cys Gln Phe Val Gly Gly Phe Leu Leu Val Trp Asp Tyr Ile

        195                 200                 205

Asn Val Pro Cys Phe Asn Ser Asp Lys Gly Lys Leu Phe Ser Trp Ala

    210                 215                 220

Phe Asn Tyr Ala Tyr Val Gly Ser Val Phe Leu Leu Phe Cys His Phe

225                 230                 235                 240

Phe Tyr Gln Asp Asn Leu Ala Thr Lys Lys Ser Ala Lys Ala Gly Lys

                245                 250                 255

Gln Leu

<210>5

<211>1410

<212>DNA

<213>三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1410)

<223>Δ5-去饱和酶

<400>5

atg gct ccg gat gcg gat aag ctt cga caa cgc cag acg act gcg gta    48

Met Ala Pro Asp Ala Asp Lys Leu Arg Gln Arg Gln Thr Thr Ala Val

1               5                   10                  15

gcg aag cac aat gct gct acc ata tcg acg cag gaa cgc ctt tgc agt    96

Ala Lys H1s Asn Ala Ala Thr Ile Ser Thr Gln Glu Arg Leu Cys Ser

            20                  25                  30

ctg tct tcg ctc aaa ggc gaa gaa gtc tgc atc gac gga atc atc tat    144

Leu Ser Ser Leu Lys Gly Glu Glu Val Cys Ile Asp Gly Ile Ile Tyr

        35                  40                  45

gac ctc caa tca ttc gat cat ccc ggg ggt gaa acg atc aaa atg ttt    192

Asp Leu Gln Ser Phe Asp His Pro Gly Gly Glu Thr Ile Lys Met Phe

    50                  55                  60

ggt ggc aac gat gtc act gta cag tac aag atg att cac ccg tac cat    240

Gly Gly Asn Asp Val Thr Val Gln Tyr Lys Met Ile His Pro Tyr His

65                  70                  75                  80

acc gag aag cat ttg gaa aag atg aag cgt gtc ggc aag gtg acg gat    288

Thr Glu Lys His Leu Glu Lys Met Lys Arg Val Gly Lys Val Thr Asp

                85                  90                  95

ttc gtc tgc gag tac aag ttc gat acc gaa ttt gaa cgc gaa atc aaa    336

Phe Val Cys Glu Tyr Lys Phe Asp Thr Glu Phe Glu Arg Glu Ile Lys

            100                 105                 110

cga gaa gtc ttc aag att gtg cga cga ggc aag gat ttc ggt act ttg    384

Arg Glu Val Phe Lys Ile Val Arg Arg Gly Lys Asp Phe Gly Thr Leu

        115                 120                 125

gga tgg ttc ttc cgt gcg ttt tgc tac att gcc att ttc ttc tac ctg    432

Gly Trp Phe Phe Arg Ala Phe Cys Tyr Ile Ala Ile Phe Phe Tyr Leu

    130                 135                 140

cag tac cat tgg gtc acc acg gga acc tct tgg ctg ctg gcc gtg gcc    480

Gln Tyr His Trp Val Thr Thr Gly Thr Ser Trp Leu Leu Ala Val Ala

145                 150                 155                 160

tac gga atc tcc caa gcg atg att ggc atg aat gtc cag cac gat gcc    528

Tyr Gly Ile Ser Gln Ala Met Ile Gly Met Asn Val Gln His Asp Ala

                165                 170                 175

aac cac ggg gcc acc tcc aag cgt ccc tgg gtc aac gac atg cta ggc    576

Asn His Gly Ala Thr Ser Lys Arg Pro Trp Val Asn Asp Met Leu Gly

            180                 185                 190

ctc ggt gcg gat ttt att ggt ggt tcc aag tgg ctc tgg cag gaa caa    624

Leu Gly Ala Asp Phe Ile Gly Gly Ser Lys Trp Leu Trp Gln Glu Gln

        195                 200                 205

cac tgg acc cac cac gct tac acc aat cac gcc gag atg gat ccc gat    672

His Trp Thr His His Ala Tyr Thr Asn His Ala Glu Met Asp Pro Asp

    210                 215                 220

agc ttt ggt gcc gaa cca atg ctc cta ttc aac gac tat ccc ttg gat    720

Ser Phe Gly Ala Glu Pro Met Leu Leu Phe Asn Asp Tyr Pro Leu Asp

225                 230                 235                 240

cat ccc gct cgt acc tgg cta cat cgc ttt caa gca ttc ttt tac atg    768

His Pro Ala Arg Thr Trp Leu His Arg Phe Gln Ala Phe Phe Tyr Met

                245                 250                 255

ccc gtc ttg gct gga tac tgg ttg tcc gct gtc ttc aat cca caa att    816

Pro Val Leu Ala Gly Tyr Trp Leu Ser Ala Val Phe Asn Pro Gln Ile

            260                 265                 270

ctt gac ctc cag caa cgc ggc gca ctt tcc gtc ggt atc cgt ctc gac    864

Leu Asp Leu Gln Gln Arg Gly Ala Leu Ser Val Gly Ile Arg Leu Asp

        275                 280                 285

aac gct ttc att cac tcg cga cgc aag tat gcg gtt ttc tgg cgg gct     912

Asn Ala Phe Ile His Ser Arg Arg Lys Tyr Ala Val Phe Trp Arg Ala

    290                 295                 300

gtg tac att gcg gtg aac gtg att gct ccg ttt tac aca aac tcc ggc     960

Val Tyr Ile Ala Val Asn Val Ile Ala Pro Phe Tyr Thr Asn Ser Gly

305                 310                 315                 320

ctc gaa tgg tcc tgg cgt gtc ttt gga aac atc atg ctc atg ggt gtg    1008

Leu Glu Trp Ser Trp Arg Val Phe Gly Asn Ile Met Leu Met Gly Val

                325                 330                 335

gcg gaa tcg ctc gcg ctg gcg gtc ctg ttt tcg ttg tcg cac aat ttc    1056

Ala Glu Ser Leu Ala Leu Ala Val Leu Phe Ser Leu Ser His Asn Phe

            340                 345                 350

gaa tcc gcg gat cgc gat ccg acc gcc cca ctg aaa aag acg gga gaa    1104

Glu Ser Ala Asp Arg Asp Pro Thr Ala Pro Leu Lys Lys Thr Gly Glu

        355                 360                 365

cca gtc gac tgg ttc aag aca cag gtc gaa act tcc tgc act tac ggt    1152

Pro Val Asp Trp Phe Lys Thr Gln Val Glu Thr Ser Cys Thr Tyr Gly

    370                 375                 380

gga ttc ctt tcc ggt tgc ttc acg gga ggt ctc aac ttt cag gtt gaa    1200

Gly Phe Leu Ser Gly Cys Phe Thr Gly Gly Leu Asn Phe Gln Val Glu

385                 390                 395                 400

cac cac ttg ttc cca cgc atg agc agc gct tgg tat ccc tac att gcc    1248

His His Leu Phe Pro Arg Met Ser Ser Ala Trp Tyr Pro Tyr Ile Ala

                405                 410                 415

ccc aag gtc cgc gaa att tgc gcc aaa cac ggc gtc cac tac gcc tac    1296

Pro Lys Val Arg Glu Ile Cys Ala Lys His Gly Val His Tyr Ala Tyr

            420                 425                 430

tac ccg tgg atc cac caa aac ttt ctc tcc acc gtc cgc tac atg cac    1344

Tyr Pro Trp Ile His Gln Asn Phe Leu Ser Thr Val Arg Tyr Met His

        435                 440                 445

gcg gcc ggg acc ggt gcc aac tgg cgc cag atg gcc aga gaa aat ccc    1392

Ala Ala Gly Thr Gly Ala Asn Trp Arg Gln Met Ala Arg Glu Asn Pro

    450                 455                 460

ttg acc gga cgg gcg taa                                            1410

Leu Thr Gly Arg Ala

465

<210>6

<211>469

<212>PRT

<213>三角褐指藻

<400>6

Met Ala Pro Asp Ala Asp Lys Leu Arg Gln Arg Gln Thr Thr Ala Val

1               5                   10                  15

Ala Lys His Asn Ala Ala Thr Ile Ser Thr Gln Glu Arg Leu Cys Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Lys Gly Glu Glu Val Cys Ile Asp Gly Ile Ile Tyr

        35                  40                  45

Asp Leu Gln Ser Phe Asp His Pro Gly Gly Glu Thr Ile Lys Met Phe

    50                  55                  60

Gly Gly Asn Asp Val Thr Val Gln Tyr Lys Met Ile His Pro Tyr Hls

65                  70                  75                  80

Thr Glu Lys His Leu Glu Lys Met Lys Arg Val Gly Lys Val Thr Asp

                85                  90                  95

Phe Val Cys Glu Tyr Lys Phe Asp Thr Glu Phe Glu Arg Glu Ile Lys

            100                 105                 110

Arg Glu Val Phe Lys Ile Val Arg Arg Gly Lys Asp Phe Gly Thr Leu

        115                 120                 125

Gly Trp Phe Phe Arg Ala Phe Cys Tyr Ile Ala Ile Phe Phe Tyr Leu

    130                 135                 140

Gln Tyr His Trp Val Thr Thr Gly Thr Ser Trp Leu Leu Ala Val Ala

145                 150                 155                 160

Tyr Gly Ile Ser Gln Ala Met Ile Gly Met Asn Val Gln His Asp Ala

                165                 170                 175

Asn His Gly Ala Thr Ser Lys Arg Pro Trp Val Asn Asp Met Leu Gly

            180                 185                 190

Leu Gly Ala Asp Phe Ile Gly Gly Ser Lys Trp Leu Trp Gln Glu Gln

        195                 200                 205

His Trp Thr His His Ala Tyr Thr Asn His Ala Glu Met Asp Pro Asp

    210                 215                 220

Ser Phe Gly Ala Glu Pro Met Leu Leu Phe Asn Asp Tyr Pro Leu Asp

225                 230                 235                 240

His Pro Ala Arg Thr Trp Leu His Arg Phe Gln Ala Phe Phe Tyr Met

                245                 250                 255

Pro Val Leu Ala Gly Tyr Trp Leu Ser Ala Val Phe Asn Pro Gln Ile

            260                 265                 270

Leu Asp Leu Gln Gln Arg Gly Ala Leu Ser Val Gly Ile Arg Leu Asp

        275                 280                 285

Asn Ala Phe Ile His Ser Arg Arg Lys Tyr Ala Val Phe Trp Arg Ala

    290                 295                 300

Val Tyr Ile Ala Val Asn Val Ile Ala Pro Phe Tyr Thr Asn Ser Gly

305                 310                 315                 320

Leu Glu Trp Ser Trp Arg Val Phe Gly Asn Ile Met Leu Met Gly Val

                325                 330                 335

Ala Glu Ser Leu Ala Leu Ala Val Leu Phe Ser Leu Ser His Asn Phe

            340                 345                 350

Glu Ser Ala Asp Arg Asp Pro Thr Ala Pro Leu Lys Lys Thr Gly Glu

        355                 360                 365

Pro Val Asp Trp Phe Lys Thr Gln Val Glu Thr Ser Cys Thr Tyr Gly

    370                 375                 380

Gly Phe Leu Ser Gly Cys Phe Thr Gly Gly Leu Asn Phe Gln Val Glu

385                 390                 395                 400

His His Leu Phe Pro Arg Met Ser Ser Ala Trp Tyr Pro Tyr Ile Ala

                405                 410                 415

Pro Lys Val Arg Glu Ile Cys Ala Lys His Gly Val His Tyr Ala Tyr

            420                 425                 430

Tyr Pro Trp Ile His Gln Asn Phe Leu Ser Thr Val Arg Tyr Met His

        435                 440                 445

Ala Ala Gly Thr Gly Ala Asn Trp Arg Gln Met Ala Arg Glu Asn Pro

    450                 455                 460

Leu Thr Gly Arg Ala

465

<210>7

<211>1344

<212>DNA

<213>角齿藓(ceratodon purpureus)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1344)

<223>Δ5-去饱和酶

<400>7

atg gta tta cga gag caa gag cat gag cca ttc ttc att aaa att gat    48

Met Val Leu Arg Glu Gln Glu His Glu Pro Phe Phe Ile Lys Ile Asp

1               5                   10                  15

gga aaa tgg tgt caa att gac gat gct gtc ctg aga tca cat cca ggt     96

Gly Lys Trp Cys Gln Ile Asp Asp Ala Val Leu Arg Ser His Pro Gly

            20                  25                  30

ggt agt gca att act acc tat aaa aat atg gat gcc act acc gta ttc    144

Gly Ser Ala Ile Thr Thr Tyr Lys Asn Met Asp Ala Thr Thr Val Phe

        35                  40                  45

cac aca ttc cat act ggt tct aaa gaa gcg tat caa tgg ctg aca gaa    192

His Thr Phe His Thr Gly Ser Lys Glu Ala Tyr Gln Trp Leu Thr Glu

    50                  55                  60

ttg aaa aaa gag tgc cct aca caa gaa cca gag atc cca gat att aag    240

Leu Lys Lys Glu Cys Pro Thr Gln Glu Pro Glu Ile Pro Asp Ile Lys

65                  70                  75                  80

gat gac cca atc aaa gga att gat gat gtg aac atg gga act ttc aat    288

Asp Asp Pro Ile Lys Gly Ile Asp Asp Val Asn Met Gly Thr Phe Asn

                85                  90                  95

att tct gag aaa cga tct gcc caa ata aat aaa agt ttc act gat cta    336

Ile Ser Glu Lys Arg Ser Ala Gln Ile Asn Lys Ser Phe Thr Asp Leu

            100                 105                 110

cgt atg cga gtt cgt gca gaa gga ctt atg gat gga tct cct ttg ttc    384

Arg Met Arg Val Arg Ala Glu Gly Leu Met Asp Gly Ser Pro Leu Phe

        115                 120                 125

tac att aga aaa att ctt gaa aca atc ttc aca att ctt ttt gca ttc    432

Tyr Ile Arg Lys Ile Leu Glu Thr Ile Phe Thr Ile Leu Phe Ala Phe

    130                 135                 140

tac ctt caa tac cac aca tat tat ctt cca tca gct att cta atg gga    480

Tyr Leu Gln Tyr His Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Leu Met Gly

145                 150                 155                 160

gtt gcg tgg caa caa ttg gga tgg tta atc cat gaa ttc gca cat cat    528

Val Ala Trp Gln Gln Leu Gly Trp Leu Ile His Glu Phe Ala His His

                165                 170                 175

cag ttg ttc aaa aac aga tac tac aat gat ttg gcc agc tat ttc gtt    576

Gln Leu Phe Lys Asn Arg Tyr Tyr Asn Asp Leu Ala Ser Tyr Phe Val

            180                 185                 190

gga aac ttt tta caa gga ttc tca tct ggt ggt tgg aaa gag cag cac    624

Gly Asn Phe Leu Gln Gly Phe Ser Ser Gly Gly Trp Lys Glu Gln His

        195                 200                 205

aat gtg cat cac gca gcc aca aat gtt gtt gga cga gac gga gat ctt    672

Asn Val His His Ala Ala Thr Asn Val Val Gly Arg Asp Gly Asp Leu

    210                 215                 220

gat tta gtc cca ttc tat gct aca gtg gca gaa cat ctc aac aat tat    720

Asp Leu Val Pro Phe Tyr Ala Thr Val Ala Glu His Leu Asn Asn Tyr

225                 230                 235                 240

tct cag gat tca tgg gtt atg act cta ttc aga tgg caa cat gtt cat    768

Ser Gln Asp Ser Trp Val Met Thr Leu Phe Arg Trp Gln His Val His

                245                 250                 255

tgg aca ttc atg tta cca ttc ctc cgt ctc tcg tgg ctt ctt cag tca    816

Trp Thr Phe Met Leu Pro Phe Leu Arg Leu Ser Trp Leu Leu Gln Ser

            260                 265                 270

atc att ttt gtt agt cag atg cca act cat tat tat gac tat tac aga    864

Ile Ile Phe Val Ser Gln Met Pro Thr His Tyr Tyr Asp Tyr Tyr Arg

        275                 280                 285

aat act gcg att tat gaa cag gtt ggt ctc tct ttg cac tgg gct tgg     912

Asn Thr Ala Ile Tyr Glu Gln Val Gly Leu Ser Leu His Trp Ala Trp

    290                 295                 300

tca ttg ggt caa ttg tat ttc cta ccc gat tgg tca act aga ata atg     960

Ser Leu Gly Gln Leu Tyr Phe Leu Pro Asp Trp Ser Thr Arg Ile Met

305                 310                 315                 320

ttc ttc ctt gtt tct cat ctt gtt gga ggt ttc ctg ctc tct cat gta    1008

Phe Phe Leu Val Ser His Leu Val Gly Gly Phe Leu Leu Ser His Val

                325                 330                 335

gtt act ttc aat cat tat tca gtg gag aag ttt gca ttg agc tcg aac    1056

Val Thr Phe Asn His Tyr Ser Val Glu Lys Phe Ala Leu Ser Ser Asn

            340                 345                 350

atc atg tca aat tac gct tgt ctt caa atc atg acc aca aga aat atg    1104

Ile Met Ser Asn Tyr Ala Cys Leu Gln Ile Met Thr Thr Arg Asn Met

        355                 360                 365

aga cct gga aga ttc att gac tgg ctt tgg gga ggt ctt aac tat cag    1152

Arg Pro Gly Arg Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln

    370                 375                 380

att gag cac cat ctt ttc cca acg atg cca cga cac aac ttg aac act    1200

Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Thr

385                 390                 395                 400

gtt atg cca ctt gtt aag gag ttt gca gca gca aat ggt tta cca tac    1248

Val Met Pro Leu Val Lys Glu Phe Ala Ala Ala Asn Gly Leu Pro Tyr

                405                 410                 415

atg gtc gac gat tat ttc aca gga ttc tgg ctt gaa att gag caa ttc    1296

Met Val Asp Asp Tyr Phe Thr Gly Phe Trp Leu Glu Ile Glu Gln Phe

            420                 425                 430

cga aat att gca aat gtt gct gct aaa ttg act aaa aag att gcc tag    1344

Arg Asn Ile Ala Asn Val Ala Ala Lys Leu Thr Lys Lys Ile Ala

        435                 440                 445

<210>8

<211>447

<212>PRT

<213>角齿藓

<400>8

Met Val Leu Arg Glu Gln Glu His Glu Pro Phe Phe Ile Lys Ile Asp

1               5                   10                  15

Gly Lys Trp Cys Gln Ile Asp Asp Ala Val Leu Arg Ser His Pro Gly

            20                  25                  30

Gly Ser Ala Ile Thr Thr Tyr Lys Asn Met Asp Ala Thr Thr Val Phe

        35                  40                  45

His Thr Phe His Thr Gly Ser Lys Glu Ala Tyr Gln Trp Leu Thr Glu

    50                  55                  60

Leu Lys Lys Glu Cys Pro Thr Gln Glu Pro Glu Ile Pro Asp Ile Lys

65                  70                  75                  80

Asp Asp Pro Ile Lys Gly Ile Asp Asp Val Asn Met Gly Thr Phe Asn

                85                  90                  95

Ile Ser Glu Lys Arg Ser Ala Gln Ile Asn Lys Ser Phe Thr Asp Leu

            100                 105                 110

Arg Met Arg Val Arg Ala Glu Gly Leu Met Asp Gly Ser Pro Leu Phe

        115                 120                 125

Tyr Ile Arg Lys Ile Leu Glu Thr Ile Phe Thr Ile Leu Phe Ala Phe

    130                 135                 140

Tyr Leu Gln Tyr His Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Leu Met Gly

145                 150                 155                 160

Val Ala Trp Gln Gln Leu Gly Trp Leu Ile His Glu Phe Ala His His

                165                 170                 175

Gln Leu Phe Lys Asn Arg Tyr Tyr Asn Asp Leu Ala Ser Tyr Phe Val

            180                 185                 190

Gly Asn Phe Leu Gln Gly Phe Ser Ser Gly Gly Trp Lys Glu Gln His

        195                 200                 205

Asn Val His His Ala Ala Thr Asn Val Val Gly Arg Asp Gly Asp Leu

    210                 215                 220

Asp Leu Val Pro Phe Tyr Ala Thr Val Ala Glu His Leu Asn Asn Tyr

225                 230                 235                 240

Ser Gln Asp Ser Trp Val Met Thr Leu Phe Arg Trp Gln His Val His

                245                 250                 255

Trp Thr Phe Met Leu Pro Phe Leu Arg Leu Ser Trp Leu Leu Gln Ser

            260                 265                 270

Ile Ile Phe Val Ser Gln Met Pro Thr His Tyr Tyr Asp Tyr Tyr Arg

        275                 280                 285

Asn Thr Ala Ile Tyr Glu Gln Val Gly Leu Ser Leu His Trp Ala Trp

    290                 295                 300

Ser Leu Gly Gln Leu Tyr Phe Leu Pro Asp Trp Ser Thr Arg Ile Met

305                 310                 315                 320

Phe Phe Leu Val Ser His Leu Val Gly Gly Phe Leu Leu Ser His Val

                325                 330                 335

Val Thr Phe Asn His Tyr Ser Val Glu Lys Phe Ala Leu Ser Ser Asn

            340                 345                 350

Ile Met Ser Asn Tyr Ala Cys Leu Gln Ile Met Thr Thr Arg Asn Met

        355                 360                 365

Arg Pro Gly Arg Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln

    370                 375                 380

Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Thr

385                 390                 395                 400

Val Met Pro Leu Val Lys Glu Phe Ala Ala Ala Asn Gly Leu Pro Tyr

                405                 410                 415

Met Val Asp Asp Tyr Phe Thr Gly Phe Trp Leu Glu Ile Glu Gln Phe

            420                 425                 430

Arg Asn Ile Ala Asn Val Ala Ala Lys Leu Thr Lys Lys Ile Ala

        435                 440                 445

<210>9

<211>1443

<212>DNA

<213>展叶剑叶藓(Physcomitrella patens)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1443)

<223>Δ5-去饱和酶

<400>9

atg gcg ccc cac tct gcg gat act gct ggg ctc gtg cct tct gac gaa     48

Met Ala Pro His Ser Ala Asp Thr Ala Gly Leu Val Pro Ser Asp Glu

1               5                   10                  15

ttg agg cta cga acg tcg aat tca aag ggt ccc gaa caa gag caa act     96

Leu Arg Leu Arg Thr Ser Asn Ser Lys Gly Pro Glu Gln Glu Gln Thr

            20                  25                  30

ttg aag aag tac acc ctt gaa gat gtc agc cgc cac aac acc cca gca    144

Leu Lys Lys Tyr Thr Leu Glu Asp Val Ser Arg His Asn Thr Pro Ala

        35                  40                  45

gat tgt tgg ttg gtg ata tgg ggc aaa gtc tac gat gtc aca agc tgg    192

Asp Cys Trp Leu Val Ile Trp Gly Lys Val Tyr Asp Val Thr Ser Trp

    50                  55                  60

att ccc aat cat ccg ggg ggc agt ctc atc cac gta aaa gca ggg cag    240

Ile Pro Asn His Pro Gly Gly Ser Leu Ile His Val Lys Ala Gly Gln

65                  70                  75                  80

gat tcc act cag ctt ttc gat tcc tat cac ccc ctt tat gtc agg aaa    288

Asp Ser Thr Gln Leu Phe Asp Ser Tyr His Pro Leu Tyr Val Arg Lys

                85                  90                  95

atg ctc gcg aag tac tgt att ggg gaa tta gta ccg tct gct ggt gat    336

Met Leu Ala Lys Tyr Cys Ile Gly Glu Leu Val Pro Ser Ala Gly Asp

            100                 105                 110

gac aag ttt aag aaa gca act ctg gag tat gca gat gcc gaa aat gaa    384

Asp Lys Phe Lys Lys Ala Thr Leu Glu Tyr Ala Asp Ala Glu Asn Glu

        115                 120                 125

gat ttc tat ttg gtt gtg aag caa cga gtt gaa tct tat ttc aag agt    432

A5p Phe Tyr Leu Val Val Lys Gln Arg Val Glu Ser Tyr Phe Lys Ser

    130                 135                 140

aac aag ata aac ccc caa att cat cca cat atg atc ctg aag tca ttg    480

Asn Lys Ile Asn Pro Gln Ile His Pro His Met Ile Leu Lys Ser Leu

145                 150                 155                 160

ttc att ctt ggg gga tat ttc gcc agt tac tat tta gcg ttc ttc tgg    528

Phe Ile Leu Gly Gly Tyr Phe Ala Ser Tyr Tyr Leu Ala Phe Phe Trp

                165                 170                 175

tct tca agt gtc ctt gtt tct ttg ttt ttc gca ttg tgg atg ggg ttc    576

Ser Ser Ser Val Leu Val Ser Leu Phe Phe Ala Leu Trp Met Gly Phe

            180                 185                 190

ttc gca gcg gaa gtc ggc gtg tcg att caa cat gat gga aat cat ggt    624

Phe Ala Ala Glu Val Gly Val Ser Ile Gln His Asp Gly Asn His Gly

        195                 200                 205

tca tac act aaa tgg cgt ggc ttt gga tat atc atg gga gcc tcc cta    672

Ser Tyr Thr Lys Trp Arg Gly Phe Gly Tyr Ile Met Gly Ala Ser Leu

    210                 215                 220

gat cta gtc gga gcc agt agc ttc atg tgg aga cag caa cac gtt gtg    720

Asp Leu Val Gly Ala Ser Ser Phe Met Trp Arg Gln Gln His Val Val

225                 230                 235                 240

gga cat cac tcg ttt aca aat gtg gac aac tac gat cct gat att cgt    768

Gly His His Ser Phe Thr Asn Val Asp Asn Tyr Asp Pro Asp Ile Arg

                245                 250                 255

gtg aaa gat cca gat gtc agg agg gtt gcg acc aca caa cca aga caa    816

Val Lys Asp Pro Asp Val Arg Arg Val Ala Thr Thr Gln Pro Arg Gln

            260                 265                 270

tgg tat cat gcg tat cag cat atc tac ctg gca gta tta tat gga act    864

Trp Tyr His Ala Tyr Gln His Ile Tyr Leu Ala Val Leu Tyr Gly Thr

        275                 280                 285

cta gct ctt aag agt att ttt cta gat gat ttc ctt gcg tac ttc aca    912

Leu Ala Leu Lys Ser Ile Phe Leu Asp Asp Phe Leu Ala Tyr Phe Thr

    290                 295                 300

gga tca att ggc cct gtc aag gtg gcg aaa atg acc ccc ctg gag ttc    960

Gly Ser Ile Gly Pro Val Lys Val Ala Lys Met Thr Pro Leu Glu Phe

305                 310                 315                 320

aac atc ttc ttt cag gga aag ctg cta tat gcg ttc tac atg ttc gtg   1008

Asn Ile Phe Phe Gln Gly Lys Leu Leu Tyr Ala Phe Tyr Met Phe Val

                325                 330                 335

ttg cca tct gtg tac ggt gtt cac tcc gga gga act ttc ttg gca cta    1056

Leu Pro Ser Val Tyr Gly Val His Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ala Leu

            340                 345                 350

tat gtg gct tct cag ctc att aca ggt tgg atg tta gct ttt ctt ttt    1104

Tyr Val Ala Ser Gln Leu Ile Thr Gly Trp Met Leu Ala Phe Leu Phe

        355                 360                 365

caa gta gca cat gtc gtg gat gat gtt gca ttt cct aca cca gaa ggt    1152

Gln Val Ala His Val Val Asp Asp Val Ala Phe Pro Thr Pro Glu Gly

    370                 375                 380

ggg aag gtg aag gga gga tgg gct gca atg cag gtt gca aca act acg    1200

Gly Lys Val Lys Gly Gly Trp Ala Ala Met Gln Val Ala Thr Thr Thr

385                 390                 395                 400

gat ttc agt cca cgc tca tgg ttc tgg ggt cat gtc tct gga gga tta    1248

Asp Phe Ser Pro Arg Ser Trp Phe Trp Gly His Val Ser Gly Gly Leu

                405                 410                 415

aac aac caa att gag cat cat ctg ttt cca gga gtg tgc cat gtt cat    1296

Asn Asn Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Gly Val Cys His Val His

            420                 425                 430

tat cca gcc att cag cct att gtc gag aag acg tgc aag gaa ttc gat    1344

Tyr Pro Ala Ile Gln Pro Ile Val Glu Lys Thr Cys Lys Glu Phe Asp

        435                 440                 445

gtg cct tat gta gcc tac cca act ttt tgg act gcg ttg aga gcc cac    1392

Val Pro Tyr Val Ala Tyr Pro Thr Phe Trp Thr Ala Leu Arg Ala His

    450                 455                 460

ttt gcg cat ttg aaa aag gtt gga ttg aca gag ttt cgg ctc gat ggc    1440

Phe Ala His Leu Lys Lys Val Gly Leu Thr Glu Phe Arg Leu Asp Gly

465                 470                 475                 480

tga                                                                1443

<210>10

<211>480

<212>PRT

<213>展叶剑叶藓

<400>10

Met Ala Pro His Ser Ala Asp Thr Ala Gly Leu Val Pro Ser Asp Glu

1               5                   10                  15

Leu Arg Leu Arg Thr Ser Asn Ser Lys Gly Pro Glu Gln Glu Gln Thr

            20                  25                  30

Leu Lys Lys Tyr Thr Leu Glu Asp Val Ser Arg His Asn Thr Pro Ala

        35                  40                  45

Asp Cys Trp Leu Val Ile Trp Gly Lys Val Tyr Asp Val Thr Ser Trp

    50                  55                  60

Ile Pro Asn His Pro Gly Gly Ser Leu Ile His Val Lys Ala Gly Gln

65                  70                  75                  80

Asp Ser Thr Gln Leu Phe Asp Ser Tyr His Pro Leu Tyr Val Arg Lys

                85                  90                  95

Met Leu Ala Lys Tyr Cys Ile Gly Glu Leu Val Pro Ser Ala Gly Asp

            100                 105                 110

Asp Lys Phe Lys Lys Ala Thr Leu Glu Tyr Ala Asp Ala Glu Asn Glu

        115                 120                 125

Asp Phe Tyr Leu Val Val Lys Gln Arg Val Glu Ser Tyr Phe Lys Ser

    130                 135                 140

Asn Lys Ile Asn Pro Gln Ile His Pro His Met Ile Leu Lys Ser Leu

145                 150                 155                 160

Phe Ile Leu Gly Gly Tyr Phe Ala Ser Tyr Tyr Leu Ala Phe Phe Trp

                165                 170                 175

Ser Ser Ser Val Leu Val Ser Leu Phe Phe Ala Leu Trp Met Gly Phe

            180                 185                 190

Phe Ala Ala Glu Val Gly Val Ser Ile Gln His Asp Gly Asn His Gly

        195                 200                 205

Ser Tyr Thr Lys Trp Arg Gly Phe Gly Tyr Ile Met Gly Ala Ser Leu

    2l0                 215                 220

Asp Leu Val Gly Ala Ser Ser Phe Met Trp Arg Gln Gln His Val Val

225                 230                 235                 240

Gly His His Ser Phe Thr Asn Val Asp Asn Tyr Asp Pro Asp Ile Arg

                245                 250                 255

Val Lys Asp Pro Asp Val Arg Arg Val Ala Thr Thr Gln Pro Arg Gln

            260                 265                 270

Trp Tyr His Ala Tyr Gln His Ile Tyr Leu Ala Val Leu Tyr Gly Thr

        275                 280                 285

Leu Ala Leu Lys Ser Ile Phe Leu Asp Asp Phe Leu Ala Tyr Phe Thr

    290                 295                 300

Gly Ser Ile Gly Pro Val Lys Val Ala Lys Met Thr Pro Leu Glu Phe

305                 310                 315                 320

Asn Ile Phe Phe Gln Gly Lys Leu Leu Tyr Ala Phe Tyr Met Phe Val

                325                 330                 335

Leu Pro Ser Val Tyr Gly Val His Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ala Leu

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Ser Gln Leu Ile Thr Gly Trp Met Leu Ala Phe Leu Phe

        355                 360                 365

Gln Val Ala His Val Val Asp Asp Val Ala Phe Pro Thr Pro Glu Gly

    370                 375                 380

Gly Lys Val Lys Gly Gly Trp Ala Ala Met Gln Val Ala Thr Thr Thr

385                 390                 395                 400

Asp Phe Ser Pro Arg Ser Trp Phe Trp Gly His Val Ser Gly Gly Leu

                405                 410                 415

Asn Asn Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Gly Val Cys His Val His

            420                 425                 430

Tyr Pro Ala Ile Gln Pro Ile Val Glu Lys Thr Cys Lys Glu Phe Asp

        435                 440                 445

Val Pro Tyr Val Ala Tyr Pro Thr Phe Trp Thr Ala Leu Arg Ala His

    450                 455                 460

Phe Ala His Leu Lys Lys Val Gly Leu Thr Glu Phe Arg Leu Asp Gly

465                 470                 475                 480

<210>11

<211>1320

<212>DNA

<213>破囊壶菌属(Thraustrochytrium)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1320)

<223>

<400>11

atg ggc aag ggc agc gag ggc cgc agc gcg gcg cgc gag atg acg gcc    48

Met Gly Lys Gly Ser Glu Gly Arg Ser Ala Ala Arg Glu Met Thr Ala

1               5                   10                  15

gag gcg aac ggc gac aag cgg aaa acg att ctg atc gag ggc gtc ctg    96

Glu Ala Asn Gly Asp Lys Arg Lys Thr Ile Leu Ile Glu Gly Val Leu

            20                  25                  30

tac gac gcg acg aac ttt aag cac ccg ggc ggt tcg atc atc aac ttc   144

Tyr Asp Ala Thr Asn Phe Lys His Pro Gly Gly Ser Ile Ile Asn Phe

        35                  40                  45

ttg acc gag ggc gag gcc ggc gtg gac gcg acg cag gcg tac cgc gag    192

Leu Thr Glu Gly Glu Ala Gly Val Asp Ala Thr Gln Ala Tyr Arg Glu

    50                  55                  60

ttt cat cag cgg tcc ggc aag gcc gac aag tac ctc aag tcg ctg ccg    240

Phe His Gln Arg Ser Gly Lys Ala Asp Lys Tyr Leu Lys Ser Leu Pro

65                  70                  75                  80

aag ctg gat gcg tcc aag gtg gag tcg cgg ttc tcg gcc aaa gag cag    288

Lys Leu Asp Ala Ser Lys Val Glu Ser Arg Phe Ser Ala Lys Glu Gln

                85                  90                  95

gcg cgg cgc gac gcc atg acg cgc gac tac gcg gcc ttt cgc gag gag    336

Ala Arg Arg Asp Ala Met Thr Arg Asp Tyr Ala Ala Phe Arg Glu Glu

            100                 105                 110

ctc gtc gcc gag ggg tac ttt gac ccg tcg atc ccg cac atg att tac    384

Leu Val Ala Glu Gly Tyr Phe Asp Pro Ser Ile Pro His Met Ile Tyr

        115                 120                 125

cgc gtc gtg gag atc gtg gcg ctc ttc gcg ctc tcg ttc tgg ctc atg    432

Arg Val Val Glu Ile Val Ala Leu Phe Ala Leu Ser Phe Trp Leu Met

    130                 135                 140

tcc aag gcc tcg ccc acc tcg ctc gtg ctg ggc gtg gtg atg aac ggc    480

Ser Lys Ala Ser Pro Thr Ser Leu Val Leu Gly Val Val Met Asn Gly

145                 150                 155                 160

att gcg cag ggc cgc tgc ggc tgg gtc atg cac gag atg ggc cac ggg    528

Ile Ala Gln Gly Arg Cys Gly Trp Val Met His Glu Met Gly His Gly

                165                 170                 175

tcg ttc acg ggc gtc atc tgg ctc gac gac cgg atg tgc gag ttc ttc    576

Ser Phe Thr Gly Val Ile Trp Leu Asp Asp Arg Met Cys Glu Phe Phe

            180                 185                 190

tac ggc gtc ggc tgc ggc atg agc ggg cac tac tgg aag aac cag cac    624

Tyr Gly Val Gly Cys Gly Met Ser Gly His Tyr Trp Lys Asn Gln His

        195                 200                 205

agc aag cac cac gcc gcg ccc aac cgc ctc gag cac gat gtc gat ctc    672

Ser Lys His His Ala Ala Pro Asn Arg Leu Glu His Asp Val Asp Leu

    210                 215                 220

aac acg ctg ccc ctg gtc gcc ttt aac gag cgc gtc gtg cgc aag gtc    720

Asn Thr Leu Pro Leu Val Ala Phe Asn Glu Arg Val Val Arg Lys Val

225                 230                 235                 240

aag ccg gga tcg ctg ctg gcg ctc tgg ctg cgc gtg cag gcg tac ctc    768

Lys Pro Gly Ser Leu Leu Ala Leu Trp Leu Arg Val Gln Ala Tyr Leu

                245                 250                 255

ttt gcg ccc gtc tcg tgc ctg ctc atc ggc ctt ggc tgg acg ctc tac    816

Phe Ala Pro Val Ser Cys Leu Leu Ile Gly Leu Gly Trp Thr Leu Tyr

            260                 265                 270

ctg cac ccg cgc tac atg ctg cgc acc aag cgg cac atg gag ttc gtc    864

Leu His Pro Arg Tyr Met Leu Arg Thr Lys Arg His Met Glu Phe Val

        275                 280                 285

tgg atc ttc gcg cgc tac att ggc tgg ttc tcg ctc atg ggc gct ctc    912

Trp Ile Phe Ala Arg Tyr Ile Gly Trp Phe Ser Leu Met Gly Ala Leu

    290                 295                 300

ggc tac tcg ccg ggc acc tcg gtc ggg atg tac ctg tgc tcg ttc ggc    960

Gly Tyr Ser Pro Gly Thr Ser Val Gly Met Tyr Leu Cys Ser Phe Gly

305                 310                 315                 320

ctc ggc tgc att tac att ttc ctg cag ttc gcc gtc agc cac acg cac    1008

Leu Gly Cys Ile Tyr Ile Phe Leu Gln Phe Ala Val Ser His Thr His

                325                 330                 335

ctg ccg gtg acc aac ccg gag gac cag ctg cac tgg ctc gag tac gcg    1056

Leu Pro Val Thr Asn Pro Glu Asp Gln Leu His Trp Leu Glu Tyr Ala

            340                 345                 350

gcc gac cac acg gtg aac att agc acc aag tcc tgg ctc gtc acg tgg    1104

Ala Asp His Thr Val Asn Ile Ser Thr Lys Ser Trp Leu Val Thr Trp

        355                 360                 365

tgg atg tcg aac ctg aac ttt cag atc gag cac cac ctc ttc ccc acg    1152

Trp Met Ser Asn Leu Asn Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr

    370                 375                 380

gcg ccg cag ttc cgc ttc aag gaa atc agt cct cgc gtc gag gcc ctc    1200

Ala Pro Gln Phe Arg Phe Lys Glu Ile Ser Pro Arg Val Glu Ala Leu

385                 390                 395                 400

ttc aag cgc cac aac ctc ccg tac tac gac ctg ccc tac acg agc gcg    1248

Phe Lys Arg His Asn Leu Pro Tyr Tyr Asp Leu Pro Tyr Thr Ser Ala

                405                 410                 415

gtc tcg acc acc ttt gcc aat ctt tat tcc gtc ggc cac tcg gtc ggc    1296

Val Ser Thr Thr Phe Ala Asn Leu Tyr Ser Val Gly His Ser Val Gly

            420                 425                 430

gcc gac acc aag aag cag gac tga                                    1320

Ala Asp Thr Lys Lys Gln Asp

        435

<210>12

<211>439

<212>PRT

<213>破囊壶菌属

<400>12

Met Gly Lys Gly Ser Glu Gly Arg Ser Ala Ala Arg Glu Met Thr Ala

1               5                   10                  15

Glu Ala Asn Gly Asp Lys Arg Lys Thr Ile Leu Ile Glu Gly Val Leu

            20                  25                  30

Tyr Asp Ala Thr Asn Phe Lys His Pro Gly Gly Ser Ile Ile Asn Phe

        35                  40                  45

Leu Thr Glu Gly Glu Ala Gly Val Asp Ala Thr Gln Ala Tyr Arg Glu

    50                  55                  60

Phe His Gln Arg Ser Gly Lys Ala Asp Lys Tyr Leu Lys Ser Leu Pro

65                  70                  75                  80

Lys Leu Asp Ala Ser Lys Val Glu Ser Arg Phe Ser Ala Lys Glu Gln

                85                  90                  95

Ala Arg Arg Asp Ala Met Thr Arg Asp Tyr Ala Ala Phe Arg Glu Glu

            100                 105                 110

Leu Val Ala Glu Gly Tyr Phe Asp Pro Ser Ile Pro His Met Ile Tyr

        115                 120                 125

Arg Val Val Glu Ile Val Ala Leu Phe Ala Leu Ser Phe Trp Leu Met

    130                 135                 140

Ser Lys Ala Ser Pro Thr Ser Leu Val Leu Gly Val Val Met Asn Gly

145                 150                 155                 160

Ile Ala Gln Gly Arg Cys Gly Trp Val Met His Glu Met Gly His Gly

                165                 170                 175

Ser Phe Thr Gly Val Ile Trp Leu Asp Asp Arg Met Cys Glu Phe Phe

            180                 185                 190

Tyr Gly Val Gly Cys Gly Met Ser Gly His Tyr Trp Lys Asn Gln His

        195                 200                 205

Ser Lys His His Ala Ala Pro Asn Arg Leu Glu His Asp Val Asp Leu

    210                 215                 220

Asn Thr Leu Pro Leu Val Ala Phe Asn Glu Arg Val Val Arg Lys Val

225                 230                 235                 240

Lys Pro Gly Ser Leu Leu Ala Leu Trp Leu Arg Val Gln Ala Tyr Leu

                245                 250                 255

Phe Ala Pro Val Ser Cys Leu Leu Ile Gly Leu Gly Trp Tnr Leu Tyr

            260                 265                 270

Leu His Pro Arg Tyr Met Leu Arg Thr Lys Arg His Met Glu Phe Val

        275                 280                 285

Trp Ile Phe Ala Arg Tyr Ile Gly Trp Phe Ser Leu Met Gly Ala Leu

    290                 295                 300

Gly Tyr Ser Pro Gly Thr Ser Val Gly Met Tyr Leu Cys Ser Phe Gly

305                 310                 315                 320

Leu Gly Cys Ile Tyr Ile Phe Leu Gln Phe Ala Val Ser His Thr His

                325                 330                 335

Leu Pro Val Thr Asn Pro Glu Asp Gln Leu His Trp Leu Glu Tyr Ala

            340                 345                 350

Ala Asp His Thr Val Asn Ile Ser Thr Lys Ser Trp Leu Val Thr Trp

        355                 360                 365

Trp Met Ser Asn Leu Asn Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr

    370                 375                 380

Ala Pro Gln Phe Arg Phe Lys Glu Ile Ser Pro Arg Val Glu Ala Leu

385                 390                 395                 400

Phe Lys Arg His Asn Leu Pro Tyr Tyr Asp Leu Pro Tyr Thr Ser Ala

                405                 410                 415

Val Ser Thr Thr Phe Ala Asn Leu Tyr Ser Val Gly His Ser Val Gly

            420                 425                 430

Ala Asp Thr Lys Lys Gln AsP

        435

<210>13

<211>1341

<212>DNA

<213>高山被孢霉(Mortierella alpina)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1341)

<223>Δ5-去饱和酶

<400>13

atg gga acg gac caa gga aaa acc ttc acc tgg gaa gag ctg gcg gcc     48

Met Gly Thr Asp Gln Gly Lys Thr Phe Thr Trp Glu Glu Leu Ala Ala

1               5                   10                  15

cat aac acc aag gac gac cta ctc ttg gcc atc cgc ggc agg gtg tac     96

His Asn Thr Lys Asp Asp Leu Leu Leu Ala Ile Arg Gly Arg Val Tyr

            20                  25                  30

gat gtc aca aag ttc ttg agc cgc cat cct ggt gga gtg gac act ctc    144

Asp Val Thr Lys Phe Leu Ser Arg His Pro Gly Gly Val Asp Thr Leu

        35                  40                  45

ctg ctc gga gct ggc cga gat gtt act ccg gtc ttt gag atg tat cac    192

Leu Leu Gly Ala Gly Arg Asp Val Thr Pro Val Phe Glu Met Tyr His

    50                  55                  60

gcg ttt ggg gct gca gat gcc att atg aag aag tac tat gtc ggt aca    240

Ala Phe Gly Ala Ala Asp Ala Ile Met Lys Lys Tyr Tyr Val Gly Thr

65                  70                  75                  80

ctg gtc tcg aat gag ctg ccc atc ttc ccg gag cca acg gtg ttc cac    288

Leu Val Ser Ash Glu Leu Pro Ile Phe Pro Glu Pro Thr Val Phe His

                85                  90                  95

aaa acc atc aag acg aga gtc gag ggc tac ttt acg gat cgg aac att    336

Lys Thr Ile Lys Thr Arg Val Glu Gly Tyr Phe Thr Asp Arg Asn Ile

            100                 105                 110

gat ccc aag aat aga cca gag atc tgg gga cga tac gct ctt atc ttt    384

Asp Pro Lys Asn Arg Pro Glu Ile Trp Gly Arg Tyr Ala Leu Ile Phe

        115                 120                 125

gga tcc ttg atc gct tcc tac tac gcg cag ctc ttt gtg cct ttc gtt    432

Gly Ser Leu Ile Ala Ser Tyr Tyr Ala Gln Leu Phe Val Pro Phe Val

    130                 135                 140

gtc gaa cgc aca tgg ctt cag gtg gtg ttt gca atc atc atg gga ttt    480

Val Glu Arg Thr Trp Leu Gln Val Val Phe Ala Ile Ile Met Gly Phe

145                 150                 155                 160

gcg tgc gca caa gtc gga ctc aac cct ctt cat gat gcg tct cac ttt    528

Ala Cys Ala Gln Val Gly Leu Asn Pro Leu His Asp Ala Ser His Phe

                165                 170                 175

tca gtg acc cac aac ccc act gtc tgg aag att ctg gga gcc acg cac    576

Ser Val Thr His Asn Pro Thr Val Trp Lys Ile Leu Gly Ala Thr His

            180                 185                 190

gac ttt ttc aac gga gca tcg tac ctg gtg tgg atg tac caa cat atg    624

Asp Phe Phe Asn Gly Ala Ser Tyr Leu Val Trp Met Tyr Gln His Met

        195                 200                 205

ctc ggc cat cac ccc tac acc aac att gct gga gca gat ccc gac gtg    672

Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn Ile Ala Gly Ala Asp Pro Asp Val

    210                 215                 220

tcg acg tct gag ccc gat gtt cgt cgt atc aag ccc aac caa aag tgg    720

Ser Thr Ser Glu Pro Asp Val Arg Arg Ile Lys Pro Asn Gln Lys Trp

225                 230                 235                 240

ttt gtc aac cac atc aac cag cac atg ttt gtt cct ttc ctg tac gga    768

Phe Val Asn His Ile Asn Gln His Met Phe Val Pro Phe Leu Tyr Gly

                245                 250                 255

ctg ctg gcg ttc aag gtg cgc att cag gac atc aac att ttg tac ttt    816

Leu Leu Ala Phe Lys Val Arg Ile Gln Asp Ile Asn Ile Leu Tyr Phe

            260                 265                 270

gtc aag acc aat gac gct att cgt gtc aat ccc atc tcg aca tgg cac    864

Val Lys Thr Asn Asp Ala Ile Arg Val Asn Pro Ile Ser Thr Trp His

        275                 280                 285

act gtg atg ttc tgg ggc ggc aag gct ttc ttt gtc tgg tat cgc ctg    912

Thr Val Met Phe Trp Gly Gly Lys Ala Phe Phe Val Trp Tyr Arg Leu

    290                 295                 300

att gtt ccc ctg cag tat ctg ccc ctg ggc aag gtg ctg ctc ttg ttc    960

Ile Val Pro Leu Gln Tyr Leu Pro Leu Gly Lys Val Leu Leu Leu Phe

305                 310                 315                 320

acg gtc gcg gac atg gtg tcg tct tac tgg ctg gcg ctg acc ttc cag   1008

Thr Val Ala Asp Met Val Ser Ser Tyr Trp Leu Ala Lau Thr Phe Gln

                325                 330                 335

gcg aac cac gtt gtt gag gaa gtt cag tgg ccg ttg cct gac gag aac   1056

Ala Asn His Val Val Glu Glu Val Gln Trp Pro Leu Pro Asp Glu Asn

            340                 345                 350

ggg atc atc caa aag gac tgg gca gct atg cag gtc gag act acg cag   1104

Gly Ile Ile Gln Lys Asp Trp Ala Ala Met Gln Val Glu Thr Thr Gln

        355                 360                 365

gat tac gca cac gat tcg cac ctc tgg acc agc atc act ggc agc ttg   1152

Asp Tyr Ala His Asp Ser His Leu Trp Thr Ser Ile Thr Gly Ser Leu

    370                 375                 380

aac tac cag gct gtg cac cat ctg ttc ccc aac gtg tcg cag cac cat    1200

Asn Tyr Gln Ala Val His His Leu Phe Pro Asn Val Ser Gln His His

385                 390                 395                 400

tat ccc gat att ctg gcc atc atc aag aac acc tgc agc gag tac aag    1248

Tyr Pro Asp Ile Leu Ala Ile Ile Lys Asn Thr Cys Ser Glu Tyr Lys

                405                 410                 415

gtt cca tac ctt gtc aag gat acg ttt tgg caa gca ttt gct tca cat    1296

Val Pro Tyr Leu Val Lys Asp Thr Phe Trp Gln Ala Phe Ala Ser His

            420                 425                 430

ttg gag cac ttg cgt gtt ctt gga ctc cgt ccc aag gaa gag tag        1341

Leu Glu His Leu Arg Val Leu Gly Leu Arg Pro Lys Glu Glu

        435                 440                 445

<210>14

<211>446

<212>PRT

<213>高山被孢霉

<400>14

Met Gly Thr Asp Gln Gly Lys Thr Phe Thr Trp Glu Glu Leu Ala Ala

1               5                   10                  15

His Asn Thr Lys Asp Asp Leu Leu Leu Ala Ile Arg Gly Arg Val Tyr

            20                  25                  30

Asp Val Thr Lys Phe Leu Ser Arg His Pro Gly Gly Val Asp Thr Leu

        35                  40                  45

Leu Leu Gly Ala Gly Arg Asp Val Thr Pro Val Phe Glu Met Tyr His

    50                  55                  60

Ala Phe Gly Ala Ala Asp Ala Ile Met Lys Lys Tyr Tyr Val Gly Thr

65                  70                  75                  80

Leu Val Ser Asn Glu Leu Pro Ile Phe Pro Glu Pro Thr Val Phe His

                85                  90                  95

Lys Thr Ile Lys Thr Arg Val Glu Gly Tyr Phe Thr Asp Arg Asn Ile

            100                 105                 110

Asp Pro Lys Asn Arg Pro Glu Ile Trp Gly Arg Tyr Ala Leu Ile Phe

        115                 120                 125

Gly Ser Leu Ile Ala Ser Tyr Tyr Ala Gln Leu Phe Val Pro Phe Val

    130                 135                 140

Val Glu Arg Thr Trp Leu Gln Val Val Phe Ala Ile Ile Met Gly Phe

145                 150                 155                 160

Ala Cys Ala Gln Val Gly Leu Asn Pro Leu His Asp Ala Ser His Phe

                165                 170                 175

Ser Val Thr His Asn Pro Thr Val Trp Lys Ile Leu Gly Ala Thr His

            180                 185                 190

Asp Phe Phe Asn Gly Ala Ser Tyr Leu Val Trp Met Tyr Gln His Met

        195                 200                 205

Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn Ile Ala Gly Ala Asp Pro Asp Val

    210                 215                 220

Ser Thr Ser Glu Pro Asp Val Arg Arg Ile Lys Pro Asn Gln Lys Trp

225                 230                 235                 240

Phe Val Asn His Ile Asn Gln His Met Phe Val Pro Phe Leu Tyr Gly

                245                 250                 255

Leu Leu Ala Phe Lys Val Arg Ile Gln Asp Ile Asn Ile Leu Tyr Phe

            260                 265                 270

Val Lys Thr Asn Asp A1a Ile Arg Val Asn Pro Ile Ser Thr Trp His

        275                 280                 285

Thr Val Met Phe Trp Gly Gly Lys Ala Phe Phe Val Trp Tyr Arg Leu

    290                 295                 300

Ile Val Pro Leu Gln Tyr Leu Pro Leu Gly Lys Val Leu Leu Leu Phe

305                 3l0                 315                 320

Thr Val Ala Asp Met Val Ser Ser Tyr Trp Leu Ala Leu Thr Phe Gln

                325                 330                 335

Ala Asn His Val Val Glu Glu Val Gln Trp Pro Leu Pro Asp Glu Asn

            340                 345                 350

Gly Ile Ile Gln Lys Asp Trp Ala Ala Met Gln Val Glu Thr Thr Gln

        355                 360                 365

Asp Tyr Ala His Asp Ser His Leu Trp Thr Ser Ile Thr Gly Ser Leu

    370                 375                 380

Asn Tyr Gln Ala Val His His Leu Phe Pro Asn Val Ser Gln His His

385                 390                 395                 400

Tyr Pro Asp Ile Leu Ala Ile Ile Lys Asn Thr Cys Ser Glu Tyr Lys

                405                 410                 415

Val Pro Tyr Leu Val Lys Asp Thr Phe Trp Gln Ala Phe Ala Ser His

            420                 425                 430

Leu Glu His Leu Arg Val Leu Gly Leu Arg Pro Lys Glu Glu

        435                 440                 445

<210>15

<211>1344

<212>DNA

<213>秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1344)

<223>Δ5-去饱和酶

<400>15

atg gta tta cga gag caa gag cat gag cca ttc ttc att aaa att gat     48

Met Val Leu Arg Glu Gln Glu His Glu Pro Phe Phe Ile Lys Ile Asp

1               5                   10                  15

gga aaa tgg tgt caa att gac gat gct gtc ctg aga tca cat cca ggt     96

Gly Lys Trp Cys Gln Ile Asp Asp Ala Val Leu Arg Ser His Pro Gly

            20                  25                  30

ggt agt gca att act acc tat aaa aat atg gat gcc act acc gta ttc    144

Gly Ser Ala Ile Thr Thr Tyr Lys Asn Met Asp Ala Thr Thr Val Phe

        35                  40                  45

cac aca ttc cat act ggt tct aaa gaa gcg tat caa tgg ctg aca gaa    192

His Thr Phe His Thr Gly Ser Lys Glu Ala Tyr Gln Trp Leu Thr Glu

    50                  55                  60

ttg aaa aaa gag tgc cct aca caa gaa cca gag atc cca gat att aag    240

Leu Lys Lys Glu Cys Pro Thr Gln Glu Pro Glu Ile Pro Asp Ile Lys

65                  70                  75                  80

gat gac cca atc aaa gga att gat gat gtg aac atg gga act ttc aat    288

Asp Asp Pro I1e Lys Gly Ile Asp Asp Val Asn Met Gly Thr Phe Asn

                85                  90                  95

att tct gag aaa cga tct gcc caa ata aat aaa agt ttc act gat cta    336

Ile Ser Glu Lys Arg Ser Ala Gln Ile Asn Lys Ser Phe Thr Asp Leu

            100                 105                 110

cgt atg cga gtt cgt gca gaa gga ctt atg gat gga tct cct ttg ttc    384

Arg Met Arg Val Arg Ala Glu Gly Leu Met Asp Gly Ser Pro Leu Phe

        115                 120                 125

tac att aga aaa att ctt gaa aca atc ttc aca att ctt ttt gca ttc    432

Tyr Ile Arg Lys Ile Leu Glu Thr Ile Phe Thr Ile Leu Phe Ala Phe

    130                 135                 140

tac ctt caa tac cac aca tat tat ctt cca tca gct att cta atg gga    480

Tyr Leu Gln Tyr His Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Leu Met Gly

l45                 150                 155                 160

gtt gcg tgg caa caa ttg gga tgg tta atc cat gaa ttc gca cat cat    528

Val Ala Trp Gln Gln Leu Gly Trp Leu Ile His Glu Phe Ala His His

                165                 170                 175

cag ttg ttc aaa aac aga tac tac aat gat ttg gcc agc tat ttc gtt    576

Gln Leu Phe Lys Asn Arg Tyr Tyr Asn Asp Leu Ala Ser Tyr Phe Val

            180                 185                 190

gga aac ttt tta caa gga ttc tca tct ggt ggt tgg aaa gag cag cac    624

Gly Asn Phe Leu Gln Gly Phe Ser Ser Gly Gly Trp Lys Glu Gln His

        195                 200                 205

aat gtg cat cac gca gcc aca aat gtt gtt gga cga gac gga gat ctt    672

Asn Val His His Ala Ala Thr Asn Val Val Gly Arg Asp Gly Asp Leu

    210                 215                 220

gat tta gtc cca ttc tat gct aca gtg gca gaa cat ctc aac aat tat    720

Asp Leu Val Pro Phe Tyr Ala Thr Val Ala Glu His Leu Asn Asn Tyr

225                 230                 235                 240

tct cag gat tca tgg gtt atg act cta ttc aga tgg caa cat gtt cat    768

Ser Gln Asp Ser Trp Val Met Thr Leu Phe Arg Trp Gln His Val His

                245                 250                 255

tgg aca ttc atg tta cca ttc ctc cgt ctc tcg tgg ctt ctt cag tca    816

Trp Thr Phe Met Leu Pro Phe Leu Arg Leu Ser Trp Leu Leu Gln Ser

            260                 265                 270

atc att ttt gtt agt cag atg cca act cat tat tat gac tat tac aga    864

Ile Ile Phe Val Ser Gln Met Pro Thr His Tyr Tyr Asp Tyr Tyr Arg

        275                 280                 285

aat act gcg att tat gaa cag gtt ggt ctc tct ttg cac tgg gct tgg    912

Asn Thr Ala Ile Tyr Glu Gln Val Gly Leu Ser Leu His Trp Ala Trp

    290                 295                 300

tca ttg ggt caa ttg tat ttc cta ccc gat tgg tca act aga ata atg    960

Ser Leu Gly Gln Leu Tyr Phe Leu Pro Asp Trp Ser Thr Arg Ile Met

305                 3l0                 315                 320

ttc ttc ctt gtt tct cat ctt gtt gga ggt ttc ctg ctc tct cat gta   1008

Phe Phe Leu Val Ser His Leu Val Gly Gly Phe Leu Leu Ser His Val

                325                 330                 335

gtt act ttc aat cat tat tca gtg gag aag ttt gca ttg agc tcg aac   1056

Val Thr Phe Asn His Tyr Ser Val Glu Lys Phe Ala Leu Ser Ser Asn

            340                 345                 350

atc atg tca aat tac gct tgt ctt caa atc atg acc aca aga aat atg   1104

Ile Met Ser Asn Tyr Ala Cys Leu Gln Ile Met Thr Thr Arg Asn Met

        355                 360                 365

aga cct gga aga ttc att gac tgg ctt tgg gga ggt ctt aac tat cag   1152

Arg Pro Gly Arg Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln

    370                 375                 380

att gag cac cat ctt ttc cca acg atg cca cga cac aac ttg aac act   1200

Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Thr

385                 390                 395                 400

gtt atg cca ctt gtt aag gag ttt gca gca gca aat ggt tta cca tac   1248

Val Met Pro Leu Val Lys Glu Phe Ala Ala Ala Asn Gly Leu Pro Tyr

                405                 410                 415

atg gtc gac gat tat ttc aca gga ttc tgg ctt gaa att gag caa ttc   1296

Met Val Asp Asp Tyr Phe Thr Gly Phe Trp Leu Glu Ile Glu Gln Phe

            420                 425                 430

cga aat att gca aat gtt gct gct aaa ttg act aaa aag att gcc tag    1344

Arg Asn Ile Ala Asn Val Ala Ala Lys Leu Thr Lys Lys Ile Ala

        435                 440                 445

<210>16

<211>447

<212>PRT

<213>秀丽隐杆线虫

<400>16

Met Val Leu Arg Glu Gln Glu His Glu Pro Phe Phe Ile Lys Ile Asp

1               5                   10                  15

Gly Lys Trp Cys Gln Ile Asp Asp Ala Val Leu Arg Ser His Pro Gly

            20                  25                  30

Gly Ser Ala Ile Thr Thr Tyr Lys Asn Met Asp Ala Thr Thr Val Phe

        35                  40                  45

His Thr Phe His Thr Gly Ser Lys Glu Ala Tyr Gln Trp Leu Thr Glu

    50                  55                  60

Leu Lys Lys Glu Cys Pro Thr Gln Glu Pro Glu Ile Pro Asp Ile Lys

65                  70                  75                  80

Asp Asp Pro Ile Lys Gly Ile Asp Asp Val Asn Met Gly Thr Phe Asn

                85                  90                  95

Ile Ser Glu Lys Arg Ser Ala Gln Ile Asn Lys Ser Phe Thr Asp Leu

            100                 105                 110

Arg Met Arg Val Arg Ala Glu Gly Leu Met Asp Gly Ser Pro Leu Phe

        115                 120                 125

Tyr Ile Arg Lys Ile Leu Glu Thr Ile Phe Thr Ile Leu Phe Ala Phe

    130                 135                 140

Tyr Leu Gln Tyr His Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Leu Met Gly

145                 150                 155                 160

Val Ala Trp Gln Gln Leu Gly Trp Leu Ile His Glu Phe Ala His His

                165                 170                 175

Gln Leu Phe Lys Asn Arg Tyr Tyr Asn Asp Leu Ala Ser Tyr Phe Val

            180                 185                 190

Gly Asn Phe Leu Gln Gly Phe Ser Ser Gly Gly Trp Lys Glu Gln His

        195                 200                 205

Asn Val His His Ala Ala Thr Asn Val Val Gly Arg Asp Gly Asp Leu

    210                 215                 220

Asp Leu Val Pro Phe Tyr Ala Thr Val Ala Glu His Leu Asn Asn Tyr

225                 230                 235                 240

Ser Gln Asp Ser Trp Val Met Thr Leu Phe Arg Trp Gln His Val His

                245                 250                 255

Trp Thr Phe Met Leu Pro Phe Leu Arg Leu Ser Trp Leu Leu Gln Ser

            260                 265                 270

Ile Ile Phe Val Ser Gln Met Pro Thr His Tyr Tyr Asp Tyr Tyr Arg

        275                 280                 285

Asn Thr Ala Ile Tyr Glu Gln Val Gly Leu Ser Leu His Trp Ala Trp

    290                 295                 300

Ser Leu Gly Gln Leu Tyr Phe Leu Pro Asp Trp Ser Thr Arg Ile Met

305                 310                 315                 320

Phe Phe Leu Val Ser His Leu Val Gly Gly Phe Leu Leu Ser His Val

                325                 330                 335

Val Thr Phe Asn His Tyr Ser Val Glu Lys Phe Ala Leu Ser Ser Asn

            340                 345                 350

Ile Met Ser Asn Tyr Ala Cys Leu Gln Ile Met Thr Thr Arg Asn Met

        355                 360                 365

Arg Pro Gly Arg Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln

    370                 375                 380

Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Thr

385                 390                 395                 400

Val Met Pro Leu Val Lys Glu Phe Ala Ala Ala Asn Gly Leu Pro Tyr

                405                 410                 415

Met Val Asp Asp Tyr Phe Thr Gly Phe Trp Leu Glu Ile Glu Gln Phe

            420                 425                 430

Arg Asn Ile Ala Asn Val Ala Ala Lys Leu Thr Lys Lys Ile Ala

        435                 440                 445

<210>17

<211>1683

<212>DNA

<213>琉璃苣(Borago officinalis)

<220>

<221>CDS

<222>(42)..(1388)

<223>Δ6-去饱和酶

<400>17

tatctgccta ccctcccaaa gagagtagtc atttttcatc a atg gct gct caa atc   56

                                              Met Ala Ala Gln Ile

                                              1               5

aag aaa tac att acc tca gat gaa ctc aag aac cac gat aaa ccc gga    104

Lys Lys Tyr Ile Thr Ser Asp Glu Leu Lys Asn His Asp Lys Pro Gly

                10                  15                  20

gat cta tgg atc tcg att caa ggg aaa gcc tat gat gtt tcg gat tgg    152

Asp Leu Trp Ile Ser Ile Gln Gly Lys Ala Tyr Asp Val Ser Asp Trp

            25                  30                  35

gtg aaa gac cat cca ggt ggc agc ttt ccc ttg aag agt ctt gct ggt    200

Val Lys Asp His Pro Gly Gly Ser Phe Pro Leu Lys Ser Leu Ala Gly

        40                  45                  50

caa gag gta act gat gca ttt gtt gca ttc cat cct gcc tct aca tgg    248

Gln Glu Val Thr Asp Ala Phe Val Ala Phe His Pro Ala Ser Thr Trp

    55                  60                  65

aag aat ctt gat aag ttt ttc act ggg tat tat ctt aaa gat tac tct    296

Lys Asn Leu Asp Lys Phe Phe Thr Gly Tyr Tyr Leu Lys Asp Tyr Ser

70                  75                  80                  85

gtt tct gag gtt tct aaa gat tat agg aag ctt gtg ttt gag ttt tct    344

Val Ser Glu Val Ser Lys Asp Tyr Arg Lys Leu Val Phe Glu Phe Ser

                90                  95                  100

aaa atg ggt ttg tat gac aaa aaa ggt cat att atg ttt gca act ttg    392

Lys Met Gly Leu Tyr Asp Lys Lys Gly His Ile Met Phe Ala Thr Leu

            105                 110                 115

tgc ttt ata gca atg ctg ttt gct atg agt gtt tat ggg gtt ttg ttt    440

Cys Phe Ile Ala Met Leu Phe Ala Met Ser Val Tyr Gly Val Leu Phe

        120                 125                 130

tgt gag ggt gtt ttg gta cat ttg ttt tct ggg tgt ttg atg ggg ttt    488

Cys Glu Gly Val Leu Val His Leu Phe Ser Gly Cys Leu Met Gly Phe

    135                 140                 145

ctt tgg att cag agt ggt tgg att gga cat gat gct ggg cat tat atg    536

Leu Trp Ile Gln Ser Gly Trp Ile Gly His Asp Ala Gly His Tyr Met

150                 155                 160                 165

gta gtg tct gat tca agg ctt aat aag ttt atg ggt att ttt gct gca    584

Val Val Ser Asp Ser Arg Leu Asn Lys Phe Met Gly Ile Phe Ala Ala

                170                 175                 180

aat tgt ctt tca gga ata agt att ggt tgg tgg aaa tgg aac cat aat    632

Asn Cys Leu Ser Gly Ile Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn

            185                 190                 195

gca cat cac att gcc tgt aat agc ctt gaa tat gac cct gat tta caa    680

Ala His His Ile Ala Cys Asn Ser Leu Glu Tyr Asp Pro Asp Leu Gln

        200                 205                 210

tat ata cca ttc ctt gtt gtg tct tcc aag ttt ttt ggt tca ctc acc     728

Tyr Ile Pro Phe Leu Val Val Ser Ser Lys Phe Phe Gly Ser Leu Thr

    215                 220                 225

tct cat ttc tat gag aaa agg ttg act ttt gac tct tta tca aga ttc     776

Ser His Phe Tyr Glu Lys Arg Leu Thr Phe Asp Ser Leu Ser Arg Phe

230                 235                 240                 245

ttt gta agt tat caa cat tgg aca ttt tac cct att atg tgt gct gct     824

Phe Val Ser Tyr Gln His Trp Thr Phe Tyr Pro Ile Met Cys Ala Ala

                250                 255                 260

agg ctc aat atg tat gta caa tct ctc ata atg ttg ttg acc aag aga     872

Arg Leu Asn Met Tyr Val Gln Ser Leu Ile Met Leu Leu Thr Lys Arg

            265                 270                 275

aat gtg tcc tat cga gct cag gaa ctc ttg gga tgc cta gtg ttc tcg     920

Asn Val Ser Tyr Arg Ala Gln Glu Leu Leu Gly Cys Leu Val Phe Ser

        280                 285                 290

att tgg tac ccg ttg ctt gtt tct tgt ttg cct aat tgg ggt gaa aga     968

Ile Trp Tyr Pro Leu Leu Val Ser Cys Leu Pro Asn Trp Gly Glu Arg

    295                 300                 305

att atg ttt gtt att gca agt tta tca gtg act gga atg caa caa gtt    1016

Ile Met Phe Val Ile Ala Ser Leu Ser Val Thr Gly Met Gln Gln Val

3l0                 315                 320                 325

cag ttc tcc ttg aac cac ttc tct tca agt gtt tat gtt gga aag cct    1064

Gln Phe Ser Leu Asn His Phe Ser Ser Ser Val Tyr Val Gly Lys Pro

                330                 335                 340

aaa ggg aat aat tgg ttt gag aaa caa acg gat ggg aca ctt gac att    1112

Lys Gly Asn Asn Trp Phe Glu Lys Gln Thr Asp Gly Thr Leu Asp Ile

            345                 350                 355

tct tgt cct cct tgg atg gat tgg ttt cat ggt gga ttg caa ttc caa    1160

Ser Cys Pro Pro Trp Met Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln

        360                 365                 370

att gag cat cat ttg ttt ccc aag atg cct aga tgc aac ctt agg aaa    1208

Ile Glu His His Leu Phe Pro Lys Met Pro Arg Cys Asn Leu Arg Lys

    375                 380                 385

atc tcg ccc tac gtg atc gag tta tgc aag aaa cat aat ttg cct tac    1256

Ile Ser Pro Tyr Val Ile Glu Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr

390                 395                 400                 405

aat tat gca tct ttc tcc aag gcc aat gaa atg aca ctc aga aca ttg    1304

Asn Tyr Ala Ser Phe Ser Lys Ala Asn Glu Met Thr Leu Arg Thr Leu

                410                 415                 420

agg aac aca gca ttg cag gct agg gat ata acc aag ccg ctc ccg aag    1352

Arg Asn Thr Ala Leu Gln Ala Arg Asp Ile Thr Lys Pro Leu Pro Lys

            425                 430                 435

aat ttg gta tgg gaa gct ctt cac act cat ggt taa aattaccctt         1398

Asn Leu Val Trp Glu Ala Leu His Thr His Gly

        440                 445

agttcatgta ataatttgag attatgtatc tcctatgttt gtgtcttgtc ttggttctac  1458

ttgttggagt cattgcaact tgtcttttat ggtttattag atgtttttta atatatttta  1518

gaggttttgc tttcatctcc attattgatg aataaggagt tgcatattgt caattgttgt  1578

gctcaatatc tgatattttg gaatgtactt tgtaccactg tgttttcagt tgaagctcat  1638

gtgtacttct atagactttg tttaaatggt tatgtcatgt tattt                  1683

<210>18

<211>448

<212>PRT

<213>琉璃苣

<400>18

Met Ala Ala Gln Ile Lys Lys Tyr Ile Thr Ser Asp Glu Leu Lys Asn

1               5                   10                  15

His Asp Lys Pro Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile Gln Gly Lys Ala Tyr

            20                  25                  30

Asp Val Ser Asp Trp Val Lys Asp His Pro Gly Gly Ser Phe Pro Leu

        35                  40                  45

Lys Ser Leu Ala Gly Gln Glu Val Thr Asp Ala Phe Val Ala Phe His

    50                  55                  60

Pro Ala Ser Thr Trp Lys Asn Leu Asp Lys Phe Phe Thr Gly Tyr Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Lys Asp Tyr Ser Val Ser Glu Val Ser Lys Asp Tyr Arg Lys Leu

                85                  90                  95

Val Phe Glu Phe Ser Lys Met Gly Leu Tyr Asp Lys Lys Gly His Ile

            100                 105                 110

Met Phe Ala Thr Leu Cys Phe Ile Ala Met Leu Phe Ala Met Ser Val

        115                 120                 125

Tyr Gly Val Leu Phe Cys Glu Gly Val Leu Val His Leu Phe Ser Gly

    130                 135                 140

Cys Leu Met Gly Phe Leu Trp Ile Gln Ser Gly Trp Ile Gly His Asp

145                 150                 155                 160

Ala Gly His Tyr Met Val Val Ser Asp Ser Arg Leu Asn Lys Phe Met

                165                 170                 175

Gly Ile Phe Ala Ala Asn Cys Leu Ser Gly Ile Ser Ile Gly Trp Trp

            180                 185                 190

Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys Asn Ser Leu Glu Tyr

        195                 200                 205

Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Phe Leu Val Val Ser Ser Lys Phe

    210                 215                 220

Phe Gly Ser Leu Thr Ser His Phe Tyr Glu Lys Arg Leu Thr Phe Asp

225                 230                 235                 240

Ser Leu Ser Arg Phe Phe Val Ser Tyr Gln His Trp Thr Phe Tyr Pro

                245                 250                 255

Ile Met Cys Ala Ala Arg Leu Asn Met Tyr Val Gln Ser Leu Ile Met

            260                 265                 270

Leu Leu Thr Lys Arg Asn Val Ser Tyr Arg Ala Gln Glu Leu Leu Gly

        275                 280                 285

Cys Leu Val Phe Ser Ile Trp Tyr Pro Leu Leu Val Ser Cys Leu Pro

    290                 295                 300

Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Val Ile Ala Ser Leu Ser Val Thr

305                 310                 315                 320

Gly Met Gln Gln Val Gln Phe Ser Leu Asn His Phe Ser Ser Ser Val

                325                 330                 335

Tyr Val Gly Lys Pro Lys Gly Asn Asn Trp Phe Glu Lys Gln Thr Asp

            340                 345                 350

Gly Thr Leu Asp Ile Ser Cys Pro Pro Trp Met Asp Trp Phe His Gly

        355                 360                 365

Gly Leu Gln Phe Gln Ile Glu His His Leu Pne Pro Lys Met Pro Arg

    370                 375                 380

Cys Asn Leu Arg Lys Ile Ser Pro Tyr Val Ile Glu Leu Cys Lys Lys

385                 390                 395                 400

His Asn Leu Pro Tyr Asn Tyr Ala Ser Phe Ser Lys Ala Asn Glu Met

                405                 410                 415

Thr Leu Arg Thr Leu Arg Asn Thr Ala Leu Gln Ala Arg Asp Ile Thr

            420                 425                 430

Lys Pro Leu Pro Lys Asn Leu Val Trp Glu Ala Leu His Thr His Gly

        435                 440                 445

<210>19

<211>1563

<212>DNA

<213>角齿藓

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1563)

<223>Δ6-去饱和酶

<400>19

atg gtg tcc cag ggc ggc ggt ctc tcg cag ggt tcc att gaa gaa aac        48

Met Val Ser Gln Gly Gly Gly Leu Ser Gln Gly Ser Ile Glu Glu Asn

1               5                   10                  15

att gac gtt gag cac ttg gca acg atg ccc ctc gtc agt gac ttc cta        96

Ile Asp Val Glu His Leu Ala Thr Met Pro Leu Val Ser Asp Phe Leu

            20                  25                  30

aat gtc ctg gga acg act ttg ggc cag tgg agt ctt tcc act aca ttc        144

Asn Val Leu Gly Thr Thr Leu Gly Gln Trp Ser Leu Ser Thr Thr Phe

        35                  40                  45

gct ttc aag agg ctc acg act aag aaa cac agt tcg gac atc tcg gtg        192

Ala Phe Lys Arg Leu Thr Thr Lys Lys His Ser Ser Asp Ile Ser Val

    50                  55                  60

gag gca caa aaa gaa tcg gtt gcg cgg ggg cca gtt gag aat att tct        240

Glu Ala Gln Lys Glu Ser Val Ala Arg Gly Pro Val Glu Asn Ile Ser

65                  70                  75                  80

caa tcg gtt gcg cag ccc atc agg cgg agg tgg gtg cag gat aaa aag        288

Gln Ser Val Ala Gln Pro Ile Arg Arg Arg Trp Val Gln Asp Lys Lys

                85                  90                  95

ccg gtt act tac agc ctg aag gat gta gct tcg cac gat atg ccc cag        336

Pro Val Thr Tyr Ser Leu Lys Asp Val Ala Ser His Asp Met Pro Gln

            100                 105                 110

gac tgc tgg att ata atc aaa gag aag gtg tat gat gtg agc acc ttc        384

Asp Cys Trp Ile Ile Ile Lys Glu Lys Val Tyr Asp Val Ser Thr Phe

        115                 120                 125

gct gag cag cac cct gga ggc acg gtt atc aac acc tac ttc gga cga        432

Ala Glu Gln His Pro Gly Gly Thr Val Ile Asn Thr Tyr Phe Gly Arg

    130                 135                 140

gac gcc aca gat gtt ttc tct act ttc cac gca tcc acc tca tgg aag        480

Asp Ala Thr Asp Val Phe Ser Thr Phe His Ala Ser Thr Ser Trp Lys

145                 150                 155                 160

att ctt cag aat ttc tac atc ggg aac ctt gtt agg gag gag ccg act        528

Ile Leu Gln Asn Phe Tyr Ile Gly Asn Leu Val Arg Glu Glu Pro Thr

                165                 170                 175

ttg gag ctg ctg aag gag tac aga gag ttg aga gcc ctt ttc ttg aga        576

Leu Glu Leu Leu Lys Glu Tyr Arg Glu Leu Arg Ala Leu Phe Leu Arg

            180                 185                 190

gaa cag ctt ttc aag agt tcc aaa tcc tac tac ctt ttc aag act ctc        624

Glu Gln Leu Phe Lys Ser Ser Lys Ser Tyr Tyr Leu Phe Lys Thr Leu

        195                 200                 205

ata aat gtt tcc att gtt gcc aca agc att gcg ata atc agt ctg tac        672

Ile Asn Val Ser Ile Val Ala Thr Ser Ile Ala Ile Ile Ser Leu Tyr

    210                 215                 220

aag tct tac cgg gcg gtt ctg tta tca gcc agt ttg atg ggc ttg ttt      720

Lys Ser Tyr Arg Ala Val Leu Leu Ser Ala Ser Leu Met Gly Leu Phe

225                 230                 235                 240

att caa cag tgc gga tgg ttg tct cac gat ttt cta cac cat cag gta      768

Ile Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ser His Asp Phe Leu His His Gln Val

                245                 250                 255

ttt gag aca cgc tgg ctc aat gac gtt gtt ggc tat gtg gtc ggc aac      816

Phe Glu Thr Arg Trp Leu Asn Asp Val Val Gly Tyr Val Val Gly Asn

            260                 265                 270

gtt gtt ctg gga ttc agt gtc tcg tgg tgg aag acc aag cac aac ctg      864

Val Val Leu Gly Phe Ser Val Ser Trp Trp Lys Thr Lys His Asn Leu

        275                 280                 285

cat cat gct gct ccg aat gaa tgc gac caa aag tac aca ccg att gat      912

His His Ala Ala Pro Asn Glu Cys Asp Gln Lys Tyr Thr Pro Ile Asp

    290                 295                 300

gag gat att gat act ctc ccc atc att gct tgg agt aaa gat ctc ttg      960

Glu Asp Ile Asp Thr Leu Pro Ile Ile Ala Trp Ser Lys Asp Leu Leu

305                 310                 315                 320

gcc act gtt gag agc aag acc atg ttg cga gtt ctt cag tac cag cac      1008

Ala Thr Val Glu Set Lys Thr Met Leu Arg Val Leu Gln Tyr Gln His

                325                 330                 335

cta ttc ttt ttg gtt ctt ttg acg ttt gcc cgg gcg agt tgg cta ttt      1056

Leu Phe Phe Leu Val Leu Leu Thr Phe Ala Arg Ala Ser Trp Leu Phe

            340                 345                 350

tgg agc gcg gcc ttc act ctc agg ccc gag ttg acc ctt ggc gag aag      1104

Trp Ser Ala Ala Phe Thr Leu Arg Pro Glu Leu Thr Leu Gly Glu Lys

        355                 360                 365

ctt ttg gag agg gga acg atg gct ttg cac tac att tgg ttt aat agt      1152

Leu Leu Glu Arg Gly Thr Met Ala Leu His Tyr Ile Trp Phe Asn Ser

    370                 375                 380

gtt gcg ttt tat ctg ctc ccc gga tgg aaa cca gtt gta tgg atg gtg      1200

Val Ala Phe Tyr Leu Leu Pro Gly Trp Lys Pro Val Val Trp Met Val

385                 390                 395                 400

gtc agc gag ctc atg tct ggt ttc ctg ctg gga tac gta ttt gta ctc      1248

Val Ser Glu Leu Met Ser Gly Phe Leu Leu Gly Tyr Val Phe Val Leu

                405                 410                 415

agt cac aat gga atg gag gtg tac aat acg tca aag gac ttc gtg aat      1296

Ser His Asn Gly Met Glu Val Tyr Asn Thr Ser Lys Asp Phe Val Asn

            420                 425                 430

gcc cag att gca tcg act cgc gac arc aaa gca ggg gtg ttt aat gat      1344

Ala Gln Ile Ala Ser Thr Arg Asp Ile Lys Ala Gly Val Phe Asn Asp

        435                 440                 445

tgg ttc acc gga ggt ctc aac aga cag att gag cat cat cta ttt cca      1392

Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Arg Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro

    450                 455                 460

acg atg ccc agg cac aac ctt aat aaa att tct cct cac gtg gag act      1440

Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Lys Ile Ser Pro His Val Glu Thr

465                 470                 475                 480

ttg tgc aag aag cat gga ctg gtc tac gaa gac gtg agc atg gct tcg      1488

Leu Cys Lys Lys His Gly Leu Val Tyr Glu Asp Val Ser Met Ala Ser

                485                 490                 495

ggc act tac cgg gtt ttg aaa aca ctt aag gac gtt gcc gat gct gct    1536

Gly Thr Tyr Arg Val Leu Lys Thr Leu Lys Asp Val Ala Asp Ala Ala

            500                 505                 510

tca cac cag cag ctt gct gcg agt tga                                1563

Ser His Gln Gln Leu Ala Ala Ser

        515                 520

<210>20

<211>520

<212>PRT

<213>角齿藓

<400>20

Met Val Ser Gln Gly Gly Gly Leu Ser Gln Gly Ser Ile Glu Glu Asn

1               5                   10                  15

Ile Asp Val Glu His Leu Ala Thr Met Pro Leu Val Ser Asp Phe Leu

            20                  25                  30

Asn Val Leu Gly Thr Thr Leu Gly Gln Trp Ser Leu Ser Thr Thr Phe

        35                  40                  45

Ala Phe Lys Arg Leu Thr Thr Lys Lys His Ser Ser Asp Ile Ser Val

    50                  55                  60

Glu Ala Gln Lys Glu Ser Val Ala Arg Gly Pro Val Glu Asn Ile Ser

65                  70                  75                  80

Gln Ser Val Ala Gln Pro Ile Arg Arg Arg Trp Val Gln Asp Lys Lys

                85                  90                  95

Pro Val Thr Tyr Ser Leu Lys Asp Val Ala Ser His Asp Met Pro Gln

            100                 105                 110

Asp Cys Trp Ile Ile Ile Lys Glu Lys Val Tyr Asp Val Ser Thr Phe

        115                 120                 125

Ala Glu Gln His Pro Gly Gly Thr Val Ile Asn Thr Tyr Phe Gly Arg

    130                 135                 140

Asp Ala Thr Asp Val Phe Ser Thr Phe His Ala Ser Thr Ser Trp Lys

145                 150                 155                 160

Ile Leu Gln Asn Phe Tyr Ile Gly Asn Leu Val Arg Glu Glu Pro Thr

                165                 170                 175

Leu Glu Leu Leu Lys Glu Tyr Arg Glu Leu Arg Ala Leu Phe Leu Arg

            180                 185                 190

Glu Gln Leu Phe Lys Ser Ser Lys Ser Tyr Tyr Leu Phe Lys Thr Leu

        195                 200                 205

Ile Asn Val Ser Ile Val Ala Thr Ser Ile Ala Ile Ile Ser Leu Tyr

    210                 215                 220

Lys Ser Tyr Arg Ala Val Leu Leu Ser Ala Ser Leu Met Gly Leu Phe

225                 230                 235                 240

Ile Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ser His Asp Phe Leu His His Gln Val

                245                 250                 255

Phe Glu Thr Arg Trp Leu Asn Asp Val Val Gly Tyr Val Val Gly Asn

            260                 265                 270

Val Val Leu Gly Phe Ser Val Ser Trp Trp Lys Thr Lys His Asn Leu

        275                 280                 285

His His Ala Ala Pro Asn Glu Cys Asp Gln Lys Tyr Thr Pro Ile Asp

    290                 295                 300

Glu Asp Ile Asp Thr Leu Pro Ile Ile Ala Trp Ser Lys Asp Leu Leu

305                 310                 315                 320

Ala Thr Val Glu Ser Lys Thr Met Leu Arg Val Leu Gln Tyr Gln His

                325                 330                 335

Leu Phe Phe Leu Val Leu Leu Thr Phe Ala Arg Ala Ser Trp Leu Phe

            340                 345                 350

Trp Ser Ala Ala Phe Thr Leu Arg Pro Glu Leu Thr Leu Gly Glu Lys

        355                 360                 365

Leu Leu Glu Arg Gly Thr Met Ala Leu His Tyr Ile Trp Phe Asn Ser

    370                 375                 380

Val Ala Phe Tyr Leu Leu Pro Gly Trp Lys Pro Val Val Trp Met Val

385                 390                 395                 400

Val Ser Glu Leu Met Ser Gly Phe Leu Leu Gly Tyr Val Phe Val Leu

                405                 410                 415

Ser His Asn Gly Met Glu Val Tyr Asn Thr Ser Lys Asp Phe Val Asn

            420                 425                 430

Ala Gln Ile Ala Ser Thr Arg Asp Ile Lys Ala Gly Val Phe Asn Asp

        435                 440                 445

Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Arg Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro

    450                 455                 460

Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Lys Ile Ser Pro His Val Glu Thr

465                 470                 475                 480

Leu Cys Lys Lys His Gly Leu Val Tyr Glu Asp Val Ser Met Ala Ser

                485                 490                 495

Gly Thr Tyr Arg Val Leu Lys Thr Leu Lys Asp Val Ala Asp Ala Ala

            500                 505                 510

Ser His Gln Gln Leu Ala Ala Ser

        515                 520

<210>21

<211>1434

<212>DNA

<213>三角褐指藻

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1434)

<223>Δ6-去饱和酶

<400>21

atg ggc aaa gga ggg gac gct cgg gcc tcg aag ggc tca acg gcg gct        48

Met Gly Lys Gly Gly Asp Ala Arg Ala Ser Lys Gly Ser Thr Ala Ala

1               5                   10                  15

cgc aag atc agt tgg cag gaa gtc aag acc cac gcg tct ccg gag gac        96

Arg Lys Ile Ser Trp Gln Glu Val Lys Thr His Ala Ser Pro Glu Asp

            20                  25                  30

gcc tgg atc att cac tcc aat aag gtc tac gac gtg tcc aac tgg cac        144

Ala Trp Ile Ile His Ser Asn Lys Val Tyr Asp Val Ser Asn Trp His

        35                  40                  45

gaa cat ccc gga ggc gcc gtc att ttc acg cac gcc ggt gac gac atg        192

Glu His Pro Gly Gly Ala Val Ile Phe Thr His Ala Gly Asp Asp Met

    50                  55                  60

acg gac att ttc gct gcc ttt cac gca ccc gga tcg cag tcg ctc atg        240

Thr Asp Ile Phe Ala Ala Phe His Ala Pro Gly Ser Gln Ser Leu Met

65                  70                  75                  80

aag aag ttc tac att ggc gaa ttg ctc ccg gaa acc acc ggc aag gag        288

Lys Lys Phe Tyr Ile Gly Glu Leu Leu Pro Glu Thr Thr Gly Lys Glu

                85                  90                  95

ccg cag caa atc gcc ttt gaa aag ggc tac cgc gat ctg cgc tcc aaa        336

Pro Gln Gln Ile Ala Phe Glu Lys Gly Tyr Arg Asp Leu Arg Ser Lys

            100                 105                 110

ctc atc atg atg ggc atg ttc aag tcc aac aag tgg ttc tac gtc tac    384

Leu Ile Met Met Gly Met Phe Lys Ser Asn Lys Trp Phe Tyr Val Tyr

        115                 120                 125

aag tgc ctc agc aac atg gcc att tgg gcc gcc gcc tgt gct ctc gtc    432

Lys Cys Leu Ser Asn Met Ala Ile Trp Ala Ala Ala Cys Ala Leu Val

    130                 135                 140

ttt tac tcg gac cgc ttc tgg gta cac ctg gcc agc gcc gtc atg ctg    480

Phe Tyr Ser Asp Arg Phe Trp Val His Leu Ala Ser Ala Val Met Leu

145                 150                 155                 160

gga aca ttc ttt cag cag tcg gga tgg ttg gca cac gac ttt ctg csc    528

Gly Thr Phe Phe Gln Gln Ser Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His

                165                 170                 175

cac cag gtc ttc acc aag cgc aag cac ggg gat ctc gga gga ctc ttt    576

His Gln Val Phe Thr Lys Arg Lys His Gly Asp Leu Gly Gly Leu Phe

            180                 185                 190

tgg ggg aac ctc atg cag ggt tac tcc gta cag tgg tgg aaa aac aag    624

Trp Gly Asn Leu Met Gln Gly Tyr Ser Val Gln Trp Trp Lys Asn Lys

        195                 200                 205

cac aac gga cac cac gcc gtc ccc aac ctc cac tgc tcc tcc gca gtc    672

His Asn Gly His His Ala Val Pro Asn Leu His Cys Ser Ser Ala Val

    210                 215                 220

gcg caa gat ggg gac ccg gac atc gat acc atg ccc ctt ctc gcc tgg    720

Ala Gln Asp Gly Asp Pro Asp Ile Asp Thr Met Pro Leu Leu Ala Trp

225                 230                 235                 240

tcc gtc cag caa gcc cag tct tac cgg gaa ctc caa gcc gac gga aag    768

Ser Val Gln Gln Ala Gln Ser Tyr Arg Glu Leu Gln Ala Asp Gly Lys

                245                 250                 255

gat tcg ggt ttg gtc aag ttc atg atc cgt aac caa tcc tac ttt tac    816

Asp Ser Gly Leu Val Lys Phe Met Ile Arg Asn Gln Ser Tyr Phe Tyr

            260                 265                 270

ttt ccc atc ttg ttg ctc gcc cgc ctg tcg tgg ttg aac gag tcc ttc    864

Phe Pro Ile Leu Leu Leu Ala Arg Leu Ser Trp Leu Asn Glu Ser Phe

        275                 280                 285

aag tgc gcc ttt ggg ctt gga gct gcg tcg gag aac gct gct ctc gaa    912

Lys Cys Ala Phe Gly Leu Gly Ala Ala Ser Glu Asn Ala Ala Leu Glu

    290                 295                 300

ctc aag gcc aag ggt ctt cag tac ccc ctt ttg gaa aag gct ggc atc    960

Leu Lys Ala Lys Gly Leu Gln Tyr Pro Leu Leu Glu Lys Ala Gly Ile

305                 310                 315                 320

ctg ctg cac tac gct tgg atg ctt aca gtt tcg tcc ggc ttt gga cgc    1008

Leu Leu His Tyr Ala Trp Met Leu Thr Val Ser Ser Gly Phe Gly Arg

                325                 330                 335

ttc tcg ttc gcg tac acc gca ttt tac ttt cta acc gcg acc gcg tcc    1056

Phe Ser Phe Ala Tyr Thr Ala Phe Tyr Phe Leu Thr Ala Thr Ala Ser

            340                 345                 350

tgt gga ttc ttg ctc gcc att gtc ttt ggc ctc ggc cac aac ggc atg    1104

Cys Gly Phe Leu Leu Ala Ile Val Phe Gly Leu Gly His Asn Gly Met

        355                 360                 365

gcc acc tac aat gcc gac gcc cgt ccg gac ttc tgg aag ctc caa gtc    1152

Ala Thr Tyr Asn Ala Asp Ala Arg Pro Asp Phe Trp Lys Leu Gln Val

    370                 375                 380

acc acg act cgc aac gtc acg ggc gga cac ggt ttc ccc caa gcc ttt    1200

Thr Thr Thr Arg Asn Val Thr Gly Gly His Gly Phe Pro Gln Ala Phe

385                 390                 395                 400

gtc gac tgg ttc tgt ggt ggc ctc cag tac caa gtc gac cac cac tta    1248

Val Asp Trp Phe Cys Gly Gly Leu Gln Tyr Gln Val Asp His His Leu

                405                 410                 415

ttc ccc agc ctg ccc cga cac aat ctg gcc aag aca cac gca ctg gtc    1296

Phe Pro Ser Leu Pro Arg His Asn Leu Ala Lys Thr His Ala Leu Val

            420                 425                 430

gaa tcg ttc tgc aag gag tgg ggt gtc cag tac cac gaa gcc gac ctt    1344

Glu Ser Phe Cys Lys Glu Trp Gly Val Gln Tyr His Glu Ala Asp Leu

        435                 440                 445

gtg gac ggg acc atg gaa gtc ttg cac cat ttg ggc agc gtg gcc ggc    1392

Val Asp Gly Thr Met Glu Val Leu His His Leu Gly Ser Val Ala Gly

    450                 455                 460

gaa ttc gtc gtg gat ttt gta cgc gat gga ccc gcc atg taa            1434

Glu Phe Val Val Asp Phe Val Arg Asp Gly Pro Ala Met

465                 470                 475

<210>22

<211>477

<212>PRT

<213>三角褐指藻

<400>22

Met Gly Lys Gly Gly Asp Ala Arg Ala Ser Lys Gly Ser Thr Ala Ala

1               5                   10                  15

Arg Lys Ile Ser Trp Gln Glu Val Lys Thr His Ala Ser Pro Glu Asp

            20                  25                  30

Ala Trp Ile Ile His Ser Asn Lys Val Tyr Asp Val Ser Asn Trp His

        35                  40                  45

Glu His Pro Gly Gly Ala Val Ile Phe Thr His Ala Gly Asp Asp Met

    50                  55                  60

Thr Asp Ile Phe Ala Ala Phe His Ala Pro Gly Ser Gln Ser Leu Met

65                  70                  75                  80

Lys Lys Phe Tyr Ile Gly Glu Leu Leu Pro Glu Thr Thr Gly Lys Glu

                85                  90                  95

Pro Gln Gln Ile Ala Phe Glu Lys Gly Tyr Arg Asp Leu Arg Ser Lys

            100                 105                 110

Leu Ile Met Met Gly Met Phe Lys Ser Asn Lys Trp Phe Tyr Val Tyr

        115                 120                 125

Lys Cys Leu Ser Asn Met Ala Ile Trp Ala Ala Ala Cys Ala Leu Val

    130                 135                 140

Phe Tyr Ser Asp Arg Phe Trp Val His Leu Ala Ser Ala Val Met Leu

145                 150                 155                 160

Gly Thr Phe Phe Gln Gln Ser Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His

                165                 170                 175

His Gln Val Phe Thr Lys Arg Lys His Gly Asp Leu Gly Gly Leu Phe

            180                 185                 190

Trp Gly Asn Leu Met Gln Gly Tyr Ser Val Gln Trp Trp Lys Asn Lys

        195                 200                 205

His Asn Gly His His Ala Val Pro Asn Leu His Cys Ser Ser Ala Val

    210                 215                 220

Ala Gln Asp Gly Asp Pro Asp Ile Asp Thr Met Pro Leu Leu Ala Trp

225                 230                 235                 240

Ser Val Gln Gln Ala Gln Ser Tyr Arg Glu Leu Gln Ala Asp Gly Lys

                245                 250                 255

Asp Ser Gly Leu Val Lys Phe Met Ile Arg Asn Gln Ser Tyr Phe Tyr

            260                 265                 270

Phe Pro Ile Leu Leu Leu Ala Arg Leu Ser Trp Leu Asn Glu Ser Phe

        275                 280                 285

Lys Cys Ala Phe Gly Leu Gly Ala Ala Ser Glu Asn Ala Ala Leu Glu

    290                 295                 300

Leu Lys Ala Lys Gly Leu Gln Tyr Pro Leu Leu Glu Lys Ala Gly Ile

305                 310                 315                 320

Leu Leu His Tyr Ala Trp Met Leu Thr Val Ser Ser Gly Phe Gly Arg

                325                 330                 335

Phe Ser Phe Ala Tyr Thr Ala Phe Tyr Phe Leu Thr Ala Thr Ala Ser

            340                 345                 350

Cys Gly Phe Leu Leu Ala Ile Val Phe Gly Leu Gly His Asn Gly Met

        355                 360                 365

Ala Thr Tyr Asn Ala Asp Ala Arg Pro Asp Phe Trp Lys Leu Gln Val

    370                 375                 380

Thr Thr Thr Arg Asn Val Thr Gly Gly His Gly Phe Pro Gln Ala Phe

385                 390                 395                 400

Val Asp Trp Phe Cys Gly Gly Leu Gln Tyr Gln Val Asp His His Leu

                405                 410                 415

Phe Pro Ser Leu Pro Arg His Asn Leu Ala Lys Thr His Ala Leu Val

            420                 425                 430

Glu Ser Phe Cys Lys Glu Trp Gly Val Gln Tyr His Glu Ala Asp Leu

        435                 440                 445

Val Asp Gly Thr Met Glu Val Leu His His Leu Gly Ser Val Ala Gly

    450                 455                 460

Glu Phe Val Val Asp Phe Val Arg Asp Gly Pro Ala Met

465                 470                 475

<210>23

<211>1578

<212>DNA

<213>展叶剑叶藓

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1578)

<223>Δ6-去饱和酶

<400>23

atg gta ttc gcg ggc ggt gga ctt cag cag ggc tct ctc gaa gaa aac    48

Met Val Phe Ala Gly Gly Gly Leu Gln Gln Gly Ser Leu Glu Glu Asn

1               5                   10                  15

atc gac gtc gag cac att gcc agt atg tct ctc ttc agc gac ttc ttc    96

Ile Asp Val Glu His Ile Ala Ser Met Ser Leu Phe Ser Asp Phe Phe

            20                  25                  30

agt tat gtg tct tca act gtt ggt tcg tgg agc gta cac agt ata caa    144

Ser Tyr Val Ser Ser Thr Val Gly Ser Trp Ser Val His Ser Ile Gln

        35                  40                  45

cct ttg aag cgc ctg acg agt aag aag cgt gtt tcg gaa agc gct gcc    192

Pro Leu Lys Arg Leu Thr Ser Lys Lys Arg Val Ser Glu Ser Ala Ala

    50                  55                  60

gtg caa tgt ata tca gct gaa gtt cag aga aat tcg agt acc cag gga    240

Val Gln Cys Ile Ser Ala Glu Val Gln Arg Asn Ser Ser Thr Gln Gly

65                  70                  75                  80

act gcg gag gca ctc gca gaa tca gtc gtg aag ccc acg aga cga agg    288

Thr Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ser Val Val Lys Pro Thr Arg Arg Arg

                85                  90                  95

tca tct cag tgg aag aag tcg aca cac ccc cta tca gaa gta gca gta    336

Ser Ser Gln Trp Lys Lys Ser Thr His Pro Leu Ser Glu Val Ala Val

            100                 105                 110

cac aac aag cca agc gat tgc tgg att gtt gta aaa aac aag gtg tat    384

His Asn Lys Pro Ser Asp Cys Trp Ile Val Val Lys Asn Lys Val Tyr

        115                 120                 125

gat gtt tcc aat ttt gcg gac gag cat ccc gga gga tca gtt att agt    432

Asp Val Ser Asn Phe Ala Asp Glu His Pro Gly Gly Ser Val Ile Ser

    130                 135                 140

act tat ttt gga cga gac ggc aca gat gtt ttc tct agt ttt cat gca    480

Thr Tyr Phe Gly Arg Asp Gly Thr Asp Val Phe Ser Ser Phe His Ala

145                 150                 155                 160

gct tct aca tgg aaa att ctt caa gac ttt tac att ggt gac gtg gag    528

Ala Ser Thr Trp Lys Ile Leu Gln Asp Phe Tyr Ile Gly Asp Val Glu

                165                 170                 175

agg gtg gag ccg act cca gag ctg ctg aaa gat ttc cga gaa atg aga    576

Arg Val Glu Pro Thr Pro Glu Leu Leu Lys Asp Phe Arg Glu Met Arg

            180                 185                 190

gct ctt ttc ctg agg gag caa ctt ttc aaa agt tcg aaa ttg tac tat    624

Ala Leu Phe Leu Arg Glu Gln Leu Phe Lys Ser Ser Lys Leu Tyr Tyr

       195                 200                 205

gtt atg aag ctg ctc acg aat gtt gct att ttt gct gcg agc att gca    672

Val Met Lys Leu Leu Thr Asn Val Ala Ile Phe Ala Ala Ser Ile Ala

    210                 215                 220

ata ata tgt tgg agc aag act att tca gcg gtt ttg gct tca gct tgt    720

Ile Ile Cys Trp Ser Lys Thr Ile Ser Ala Val Leu Ala Ser Ala Cys

225                 230                 235                 240

atg atg gct ctg tgt ttc caa cag tgc gga tgg cta tcc cat gat ttt    768

Met Met Ala Leu Cys Phe Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ser His Asp Phe

                245                 250                 255

ctc cac aat cag gtg ttt gag aca cgc tgg ctt aat gaa gtt gtc ggg    816

Leu His Asn Gln Val Phe Glu Thr Arg Trp Leu Asn Glu Val Val Gly

            260                 265                 270

tat gtg atc ggc aac gcc gtt ctg ggg ttt agt aca ggg tgg tgg aag    864

Tyr Val Ile Gly Asn Ala Val Leu Gly Phe Ser Thr Gly Trp Trp Lys

        275                 280                 285

gag aag cat aac ctt cat cat gct gct cca aat gaa tgc gat cag act    912

Glu Lys His Asn Leu His His Ala Ala Pro Asn Glu Cys Asp Gln Thr

    290                 295                 300

tac caa cca att gat gaa gat att gat act ctc ccc ctc att gcc tgg    960

Tyr Gln Pro Ile Asp Glu Asp Ile Asp Thr Leu Pro Leu Ile Ala Trp

305                 310                 315                 320

agc aag gac ata ctg gcc aca gtt gag aat aag aca ttc ttg cga atc    1008

Ser Lys Asp Ile Leu Ala Thr Val Glu Asn Lys Thr Phe Leu Arg Ile

                325                 330                 335

ctc caa tac cag cat ctg ttc ttc atg ggt ctg tta ttt ttc gcc cgt    1056

Leu Gln Tyr Gln His Leu Phe Phe Met Gly Leu Leu Phe Phe Ala Arg

            340                 345                 350

ggt agt tgg ctc ttt tgg agc tgg aga tat acc tct aca gca gtg ctc    1104

Gly Ser Trp Leu Phe Trp Ser Trp Arg Tyr Thr Ser Thr Ala Val Leu

        355                 360                 365

tca cct gtc gac agg ttg ttg gag aag gga act gtt ctg ttt cac tac    1152

Ser Pro Val Asp Arg Leu Leu Glu Lys Gly Thr Val Leu Phe His Tyr

    370                 375                 380

ttt tgg ttc gtc ggg aca gcg tgc tat ctt ctc cct ggt tgg aag cca    1200

Phe Trp Phe Val Gly Thr Ala Cys Tyr Leu Leu Pro Gly Trp Lys Pro

385                 390                 395                 400

tta gta tgg atg gcg gtg act gag ctc atg tcc ggc atg ctg ctg ggc    1248

Leu Val Trp Met Ala Val Thr Glu Leu Met Ser Gly Met Leu Leu Gly

                405                 410                 415

ttt gta ttt gta ctt agc cac aat ggg atg gag gtt tat aat tcg tct    1296

Phe Val Phe Val Leu Ser His Asn Gly Met Glu Val Tyr Asn Ser Ser

            420                 425                 430

aaa gaa ttc gtg agt gca cag atc gta tcc aca cgg gat atc aaa gga    1344

Lys Glu Phe Val Ser Ala Gln Ile Val Ser Thr Arg Asp Ile Lys Gly

        435                 440                 445

aac ata ttc aac gac tgg ttc act ggt ggc ctt aac agg caa ata gag    1392

Asn Ile Phe Asn Asp Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Asg Gln Ile Glu

    450                 455                 460

cat cat ctt ttc cca aca atg ccc agg cat aat tta aac aaa ata gca    1440

His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Lys Ile Ala

465                 470                 475                 480

cct aga gtg gag gtg ttc tgt aag aaa cac ggt ctg gtg tac gaa gac    1488

Pso Asg Val Glu Val Phe Cys Lys Lys His Gly Leu Val Tys Glu Asp

                485                 490                 495

gta tct att gct acc ggc act tgc aag gtt ttg aaa gca ttg aag gaa    1536

Val Ser Ile Ala Thr Gly Thr Cys Lys Val Leu Lys Ala Leu Lys Glu

            500                 505                 510

gtc gcg gag gct gcg gca gag cag cat gct acc acc agt taa            1578

Val Ala Glu Ala Ala Ala Glu Gln His Ala Thr Thr Ser

        515                 520                 525

<210>24

<211>525

<212>PRT

<213>展叶剑叶藓

<400>24

Met Val Phe Ala Gly Gly Gly Leu Gln Gln Gly Ser Leu Glu Glu Asn

1               5                   10                  15

Ile Asp Val Glu His Ile Ala Ser Met Ser Leu Phe Ser Asp Phe Phe

            20                  25                  30

Ser Tyr Val Ser Ser Thr Val Gly Ser Trp Ser Val His Ser Ile Gln

        35                  40                  45

Pro Leu Lys Arg Leu Thr Ser Lys Lys Arg Val Ser Glu Ser Ala Ala

    50                  55                  60

Val Gln Cys Ile Ser Ala Glu Val Gln Arg Asn Ser Ser Thr Gln Gly

65                  70                  75                  80

Thr Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ser Val Val Lys Pro Thr Arg Arg Arg

                85                  90                  95

Ser Ser Gln Trp Lys Lys Ser Thr His Pro Leu Ser Glu Val Ala Val

            100                 105                 110

His Asn Lys Pro Ser Asp Cys Trp Ile Val Val Lys Asn Lys Val Tyr

        115                 120                 125

Asp Val Ser Asn Phe Ala Asp Glu His Pro Gly Gly Ser Val Ile Ser

    130                 135                 140

Thr Tyr Phe Gly Arg Asp Gly Thr Asp Val Phe Ser Ser Phe His Ala

145                 150                 155                 160

Ala Ser Thr Trp Lys Ile Leu Gln Asp Phe Tyr Ile Gly Asp Val Glu

                165                 170                 175

Arg Val Glu Pro Thr Pro Glu Leu Leu Lys Asp Phe Arg Glu Met Arg

            180                 185                 190

Ala Leu Phe Leu Arg Glu Gln Leu Phe Lys Ser Ser Lys Leu Tyr Tyr

        195                 200                 205

Val Met Lys Leu Leu Thr Asn Val Ala Ile Phe Ala Ala Ser Ile Ala

    210                 215                 220

Ile Ile Cys Trp Ser Lys Thr Ile Ser Ala Val Leu Ala Ser Ala Cys

225                 230                 235                 240

Met Met Ala Leu Cys Phe Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ser His Asp Phe

                245                 250                 255

Leu His Asn Gln Val Phe Glu Thr Arg Trp Leu Asn Glu Val Val Gly

            260                 265                 270

Tyr Val Ile Gly Asn Ala Val Leu Gly Phe Ser Thr Gly Trp Trp Lys

        275                 280                 285

Glu Lys His Asn Leu His His Ala Ala Pro Asn Glu Cys Asp Gln Thr

    290                 295                 300

Tyr Gln Pro Ile Asp Glu Asp Ile Asp Thr Leu Pro Leu Ile Ala Trp

305                 310                 315                 320

Ser Lys Asp Ile Leu Ala Thr Val Glu Asn Lys Thr Phe Leu Arg Ile

                325                 330                 335

Leu Gln Tyr Gln His Leu Phe Phe Met Gly Leu Leu Phe Phe Ala Arg

            340                 345                 350

Gly Ser Trp Leu Phe Trp Ser Trp Arg Tyr Thr Ser Thr Ala Val Leu

        355                 360                 365

Ser Pro Val Asp Arg Leu Leu Glu Lys Gly Thr Val Leu Phe His Tyr

    370                 375                 380

Phe Trp Phe Val Gly Thr Ala Cys Tyr Leu Leu Pro Gly Trp Lys Pro

385                 390                 395                 400

Leu Val Trp Met Ala Val Thr Glu Leu Met Ser Gly Met Leu Leu Gly

                405                 410                 415

Phe Val Phe Val Leu Ser His Asn Gly Met Glu Val Tyr Asn Ser Ser

            420                 425                 430

Lys Glu Phe Val Ser Ala Gln Ile Val Ser Thr Arg Asp Ile Lys Gly

        435                 440                 445

Asn Ile Phe Asn Asp Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Arg Gln Ile Glu

    450                 455                 460

His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Lys Ile Ala

465                 470                 475                 480

Pro Arg Val Glu Val Phe Cys Lys Lys His Gly Leu Val Tyr Glu Asp

                485                 490                 495

Val Ser Ile Ala Thr Gly Thr Cys Lys Val Leu Lys Ala Leu Lys Glu

            500                 505                 510

Val Ala Glu Ala Ala Ala Glu Gln His Ala Thr Thr Ser

        515                 520                 525

<210>25

<211>1332

<212>DNA

<213>秀丽隐杆线虫

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1332)

<223>Δ6-去饱和酶

<400>25

atg gtc gtc gac aag aat gcc tcc ggg ctt cga atg aag gtc gat ggc    48

Met Val Val Asp Lys Asn Ala Ser Gly Leu Arg Met Lys Val Asp Gly

1               5                   10                  15

aaa tgg ctc tac ctt agc gag gaa ttg gtg aag aaa cat cca gga gga    96

Lys Trp Leu Tyr Leu Ser Glu Glu Leu Val Lys Lys His Pro Gly Gly

            20                  25                  30

gct gtt att gaa caa tat aga aat tcg gat gct act cat att ttc cac    144

Ala Val Ile Glu Gln Tyr Arg Asn Ser Asp Ala Thr His Ile Phe His

        35                  40                  45

gct ttc cac gaa gga tct tct cag gct tat aag caa ctt gac ctt ctg    192

Ala Phe His Glu Gly Ser Ser Gln Ala Tyr Lys Gln Leu Asp Leu Leu

    50                  55                  60

aaa aag cac gga gag cac gat gaa ttc ctt gag aaa caa ttg gaa aag    240

Lys Lys His Gly Glu His Asp Glu Phe Leu Glu Lys Gln Leu Glu Lys

65                  70                  75                  80

aga ctt gac aaa gtt gat atc aat gta tca gca tat gat gtc agt gtt    288

Arg Leu Asp Lys Val Asp Ile Asn Val Ser Ala Tyr Asp Val Ser Val

                85                  90                  95

gca caa gaa aag aaa atg gtt gaa tca ttc gaa aaa cta cga cag aag    336

Ala Gln Glu Lys Lys Met Val Glu Ser Phe Glu Lys Leu Arg Gln Lys

            100                 105                 110

ctt cat gat gat gga tta atg aaa gca aat gaa aca tat ttc ctg ttt    384

Leu His Asp Asp Gly Leu Met Lys Ala Asn Glu Thr Tyr Phe Leu Phe

        115                 120                 125

aaa gcg att tca aca ctt tca att atg gca ttt gca ttt tat ctt cag    432

Lys Ala Ile Ser Thr Leu Ser Ile Met Ala Phe Ala Phe Tyr Leu Gln

    130                 135                 140

tat ctt gga tgg tat att act tct gca tgt tta tta gca ctt gca tgg    480

Tyr Leu Gly Trp Tyr Ile Thr Ser Ala Cys Leu Leu Ala Leu Ala Trp

145                 150                 155                 160

caa caa ttc gga tgg tta aca cat gag ttc tgc cat caa cag cca aca    528

Gln Gln Phe Gly Trp Leu Thr His Glu Phe Cys His Gln Gln Pro Thr

                165                 170                 175

aag aac aga cct ttg aat gat act att tct ttg ttc ttt ggt aat ttc    576

Lys Asn Arg Pro Leu Asn Asp Thr Ile Ser Leu Phe Phe Gly Asn Phe

            180                 185                 190

tta caa gga ttt tca aga gat tgg tgg aag gac aag cat aac act cat    624

Leu Gln Gly Phe Ser Arg Asp Trp Trp Lys Asp Lys His Asn Thr His

        195                 200                 205

cac gct gcc aca aat gta att gat cat gac ggt gat atc gac ttg gca    672

Hia Ala Ala Thr Asn Val Ile Asp His Asp Gly Asp Ile Asp Leu Ala

    210                 215                 220

cca ctt ttc gca ttt att cca gga gat ttg tgc aag tat aag gcc agc    720

Pro Leu Phe Ala Phe Ile Pro Gly Asp Leu Cys Lys Tyr Lys Ala Ser

225                 230                 235                 240

ttt gaa aaa gca att ctc aag att gta cca tat caa cat ctc tat ttc    768

Phe Glu Lys Ala Ile Leu Lys Ile Val Pro Tyr Gln His Leu Tyr Phe

                245                 250                 255

acc gca atg ctt cca atg ctc cgt ttc tca tgg act ggt cag tca gtt    816

Thr Ala Met Leu Pro Met Leu Arg Phe Ser Trp Thr Gly Gln Ser Val

            260                 265                 270

caa tgg gta ttc aaa gag aat caa atg gag tac aag gtc tat caa aga    864

Gln Trp Val Phe Lys Glu Asn Gln Met Glu Tyr Lys Val Tyr Gln Arg

        275                 280                 285

aat gca ttc tgg gag caa gca aca att gtt gga cat tgg gct tgg gta    912

Asn Ala Phe Trp Glu Gln Ala Thr Ile Val Gly His Trp Ala Trp Val

    290                 295                 300

ttc tat caa ttg ttc tta tta cca aca tgg cca ctt cgg gtt gct tat    960

Phe Tyr Gln Leu Phe Leu Leu Pro Thr Trp Pro Leu Arg Val Ala Tyr

305                 310                 315                 320

ttc att att tca caa atg gga gga ggc ctt ttg att gct cac gta gtc    1008

Phe Ile Ile Ser Gln Met Gly Gly Gly Leu Leu Ile Ala His Val Val

                325                 330                 335

act ttc aac cat aac tct gtt gat aag tat cca gcc aat tct cga att    1056

Thr Phe Asn His Asn Ser Val Asp Lys Tyr Pro Ala Asn Ser Arg Ile

            340                 345                 350

tta aac aac ttc gcc gct ctt caa att ttg acc aca cgc aac atg act    1104

Leu Asn Asn Phe Ala Ala Leu Gln Ile Leu Thr Thr Arg Asn Met Thr

        355                 360                 365

cca tct cca ttc att gat tgg ctt tgg ggt gga ctc aat tat cag atc    1152

Pro Ser Pro Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile

    370                 375                 380

gag cac cac ttg ttc cca aca atg cca cgt tgc aat ctg aat gct tgc    1200

Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg Cys Asn Leu Asn Ala Cys

385                 390                 395                 400

gtg aaa tat gtg aaa gaa tgg tgc aaa gag aat aat ctt cct tac ctc    1248

Val Lys Tyr Val Lys Glu Trp Cys Lys Glu Asn Asn Leu Pro Tyr Leu

                405                 410                 415

gtc gat gac tac ttt gac gga tat gca atg aat ttg caa caa ttg aaa    1296

Val Asp Asp Tyr Phe Asp Gly Tyr Ala Met Asn Leu Gln Gln Leu Lys

            420                 425                 430

aat atg gct gag cac att caa gct aaa gct gcc taa                    1332

Asn Met Ala Glu His Ile Gln Ala Lys Ala Ala

        435                 440

<210>26

<211>443

<212>PRT

<213>秀丽隐杆线虫

<400>26

Met Val Val Asp Lys Asn Ala Ser Gly Leu Arg Met Lys Val Asp Gly

1               5                   10                  15

Lys Trp Leu Tyr Leu Ser Glu Glu Leu Val Lys Lys His Pro Gly Gly

            20                  25                  30

Ala Val Ile Glu Gln Tyr Arg Asn Ser Asp Ala Thr His Ile Phe His

        35                  40                  45

Ala Phe His Glu Gly Ser Ser Gln Ala Tyr Lys Gln Leu Asp Leu Leu

    50                  55                  60

Lys Lys His Gly Glu His Asp Glu Phe Leu Glu Lys Gln Leu Glu Lys

65                  70                  75                  80

Arg Leu Asp Lys Val Asp Ile Asn Val Ser Ala Tyr Asp Val Ser Val

                85                  90                  95

Ala Gln Glu Lys Lys Met Val Glu Ser Phe Glu Lys Leu Arg Gln Lys

            100                 105                 110

Leu His Asp Asp Gly Leu Met Lys Ala Asn Glu Thr Tyr Phe Leu Phe

        115                 120                 125

Lys Ala Ile Ser Thr Leu Ser Ile Met Ala Phe Ala Phe Tyr Leu Gln

    130                 135                 140

Tyr Leu Gly Trp Tyr Ile Thr Ser Ala Cys Leu Leu Ala Leu Ala Trp

145                 150                 155                 160

Gln Gln Phe Gly Trp Leu Thr His Glu Phe Cys His Gln Gln Pro Thr

                165                 170                 175

Lys Asn Arg Pro Leu Asn Asp Thr Ile Ser Leu Phe Phe Gly Asn Phe

            180                 185                 190

Leu Gln Gly Phe Ser Arg Asp Trp Trp Lys Asp Lys His Asn Thr His

        195                 200                 205

His Ala Ala Thr Asn Val Ile Asp His Asp Gly Asp Ile Asp Leu Ala

    210                 215                 220

Pro Leu Phe Ala Phe Ile Pro Gly Asp Leu Cys Lys Tyr Lys Ala Ser

225                 230                 235                 240

Phe Glu Lys Ala Ile Leu Lys Ile Val Pro Tyr Gln His Leu Tyr Phe

                245                 250                 255

Thr Ala Met Leu Pro Met Leu Arg Phe Ser Trp Thr Gly Gln Ser Val

            260                 265                 270

Gln Trp Val Phe Lys Glu Asn Gln Met Glu Tyr Lys Val Tyr Gln Arg

        275                 280                 285

Asn Ala Phe Trp Glu Gln Ala Thr Ile Val Gly His Trp Ala Trp Val

    290                 295                 300

Phe Tyr Gln Leu Phe Leu Leu Pro Thr Trp Pro Leu Arg Val Ala Tyr

305                 310                 315                 320

Phe Ile Ile Ser Gln Met Gly Gly Gly Leu Leu Ile Ala His Val Val

                325                 330                 335

Thr Phe Asn His Asn Ser Val Asp Lys Tyr Pro Ala Asn Ser Arg Ile

            340                 345                 350

Leu Asn Asn Phe Ala Ala Leu Gln Ile Leu Thr Thr Arg Asn Met Thr

        355                 360                 365

Pro Ser Pro Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile

    370                 375                 380

Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg Cys Asn Leu Asn Ala Cys

385                 390                 395                 400

Val Lys Tyr Val Lys Glu Trp Cys Lys Glu Asn Asn Leu Pro Tyr Leu

                405                 410                 415

Val Asp Asp Tyr Phe Asp Gly Tyr Ala Met Asn Leu Gln Gln Leu Lys

            420                 425                 430

Asn Met Ala Glu His Ile Gln Ala Lys Ala Ala

        435                 440

<210>27

<211>873

<212>DNA

<213>展叶剑叶藓

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(873)

<223>Δ6-延伸酶

<400>27

atg gag gtc gtg gag aga ttc tac ggt gag ttg gat ggg aag gtc tcg    48

Met Glu Val Val Glu Arg Phe Tyr Gly Glu Leu Asp Gly Lys Val Ser

1               5                   10                  15

cag ggc gtg aat gca ttg ctg ggt agt ttt ggg gtg gag ttg acg gat    96

Gln Gly Val Asn Ala Leu Leu Gly Ser Phe Gly Val Glu Leu Thr Asp

            20                  25                  30

acg ccc act acc aaa ggc ttg ccc ctc gtt gac agt ccc aca ccc atc    144

Thr Pro Thr Thr Lys Gly Leu Pro Leu Val Asp Ser Pro Thr Pro Ile

        35                  40                  45

gtc ctc ggt gtt tct gta tac ttg act att gtc att gga ggg ctt ttg    192

Val Leu Gly Val Ser Val Tyr Leu Thr Ile Val Ile Gly Gly Leu Leu

    50                  55                  60

tgg ata aag gcc agg gat ctg aaa ccg cgc gcc tcg gag cca ttt ttg    240

Trp Ile Lys Ala Arg Asp Leu Lys Pro Arg Ala Ser Glu Pro Phe Leu

65                  70                  75                  80

ctc caa gct ttg gtg ctt gtg cac aac ctg ttc tgt ttt gcg ctc agt    288

Leu Gln Ala Leu Val Leu Val His Asn Leu Phe Cys Phe Ala Leu Ser

                85                  90                  95

ctg tat atg tgc gtg ggc atc gct tat cag gct att acc tgg cgg tac    336

Leu Tyr Met Cys Val Gly Ile Ala Tyr Gln Ala Ile Thr Trp Arg Tyr

            100                 105                 110

tct ctc tgg ggc aat gca tac aat cct aaa cat aaa gag atg gcg att    384

Ser Leu Trp Gly Asn Ala Tyr Asn Pro Lys His Lys Glu Met Ala Ile

        115                 120                 125

ctg gta tac ttg ttc tac atg tct aag tac gtg gaa ttc atg gat acc    432

Leu Val Tyr Leu Phe Tyr Met Ser Lys Tyr Val Glu Phe Met Asp Thr

    130                 135                 140

gtt atc atg ata ctg aag cgc agc acc agg caa ata agc ttc ctc cac    480

Val Ile Met Ile Leu Lys Arg Ser Thr Arg Gln Ile Ser Phe Leu His

145                 150                 155                 160

gtt tat cat cat tct tca att tcc ctc att tgg tgg gct att gct cat    528

Val Tyr His His Ser Ser Ile Ser Leu Ile Trp Trp Ala Ile Ala His

                165                 170                 175

cac gct cct ggc ggt gaa gca tat tgg tct gcg gct ctg aac tca gga    576

His Ala Pro Gly Gly Glu Ala Tyr Trp Ser Ala Ala Leu Asn Ser Gly

            180                 185                 190

gtg cat gtt ctc atg tat gcg tat tac ttc ttg gct gcc tgc ctt cga    624

Val His Val Leu Met Tyr Ala Tyr Tyr Phe Leu Ala Ala Cys Leu Arg

        195                 200                 205

agt agc cca aag tta aaa aat aag tac ctt ttt tgg ggc agg tac ttg    672

Ser Ser Pro Lys Leu Lys Asn Lys Tyr Leu Phe Trp Gly Arg Tyr Leu

    210                 215                 220

aca caa ttc caa atg ttc cag ttt atg ctg aac tta gtg cag gct tac    720

Thr Gln Phe Gln Met Phe Gln Phe Met Leu Asn Leu Val Gln Ala Tyr

225                 230                 235                 240

tac gac atg aaa acg aat gcg cca tat cca caa tgg ctg atc aag att    768

Tyr Asp Met Lys Thr Asn Ala Pro Tyr Pro Gln Trp Leu Ile Lys Ile

                245                 250                 255

ttg ttc tac tac atg atc tcg ttg ctg ttt ctt ttc ggc aat ttt tac    816

Leu Phe Tyr Tyr Met Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Gly Asn Phe Tyr

            260                 265                 270

gta caa aaa tac atc aaa ccc tct gac gga aag caa aag gga gct aaa    864

Val Gln Lys Tyr Ile Lys Pro Ser Asp Gly Lys Gln Lys Gly Ala Lys

        275                 280                 285

act gag tga                                                        873

Thr Glu

    290

<210>28

<211>290

<212>PRT

<213>展叶剑叶藓

<400>28

Met Glu Val Val Glu Arg Phe Tyr Gly Glu Leu Asp Gly Lys Val Ser

1               5                   10                  15

Gln Gly Val Asn Ala Leu Leu Gly Ser Phe Gly Val Glu Leu Thr Asp

            20                  25                  30

Thr Pro Thr Thr Lys Gly Leu Pro Leu Val Asp Ser Pro Thr Pro Ile

        35                  40                  45

Val Leu Gly Val Ser Val Tyr Leu Thr Ile Val Ile Gly Gly Leu Leu

    50                  55                  60

Trp Ile Lys Ala Arg Asp Leu Lys Pro Arg Ala Ser Glu Pro Phe Leu

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ala Leu Val Leu Val His Asn Leu Phe Cys Phe Ala Leu Ser

                85                  90                  95

Leu Tyr Met Cys Val Gly Ile Ala Tyr Gln Ala Ile Thr Trp Arg Tyr

            100                 105                 110

Ser Leu Trp Gly Asn Ala Tyr Asn Pro Lys His Lys Glu Met Ala Ile

        115                 120                 125

Leu Val Tyr Leu Phe Tyr Met Ser Lys Tyr Val Glu Phe Met Asp Thr

    130                 135                 140

Val Ile Met Ile Leu Lys Arg Ser Thr Arg Gln Ile Ser Phe Leu His

145                 150                 155                 160

Val Tyr His His Ser Ser Ile Ser Leu Ile Trp Trp Ala Ile Ala His

                165                 170                 175

His Ala Pro Gly Gly Glu Ala Tyr Trp Ser Ala Ala Leu Asn Ser Gly

            180                 185                 190

Val His Val Leu Met Tyr Ala Tyr Tyr Phe Leu Ala Ala Cys Leu Arg

        195                 200                 205

Ser Ser Pro Lys Leu Lys Asn Lys Tyr Leu Phe Trp Gly Arg Tyr Leu

    210                 215                 220

Thr Gln Phe Gln Met Phe Gln Phe Met Leu Asn Leu Val Gln Ala Tyr

225                 230                 235                 240

Tyr Asp Met Lys Thr Asn Ala Pro Tyr Pro Gln Trp Leu Ile Lys Ile

                245                 250                 255

Leu Phe Tyr Tyr Met Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Gly Asn Phe Tyr

            260                 265                 270

Val Gln Lys Tyr Ile Lys Pro Ser Asp Gly Lys Gln Lys Gly Ala Lys

        275                 280                 285

Thr Glu

    290

<210>29

<211>1049

<212>DNA

<213>破囊壶菌属(Thraustochytrium)

<220>

<221>CDS

<222>(43)..(858)

<223>Δ6-延伸酶

<400>29

gaattcggca cgagagcgcg cggagcggag acctcggccg cg atg atg gag ccg     54

                                               Met Met Glu Pro

                                               1

ctc gac agg tac agg gcg ctg gcg gag ctc gcc gcg agg tac gcc agc    102

Leu Asp Arg Tyr Arg Ala Leu Ala Glu Leu Ala Ala Arg Tyr Ala Ser

5                   10                  15                  20

tcg gcg gcc ttc aag tgg caa gtc acg tac gac gcc aag gac agc ttc    150

Ser Ala Ala Phe Lys Trp Gln Val Thr Tyr Asp Ala Lys Asp Ser Phe

                25                  30                  35

gtc ggg ccc ctg gga atc cgg gag ccg ctc ggg ctc ctg gtg ggc tcc    198

Val Gly Pro Leu Gly Ile Arg Glu Pro Leu Gly Leu Leu Val Gly Ser

            40                  45                  50

gtg gtc ctc tac ctg agc ctg ctg gcc gtg gtc tac gcg ctg cgg aac    246

Val Val Leu Tyr Leu Ser Leu Leu Ala Val Val Tyr Ala Leu Arg Asn

        55                  60                  65

tac ctt ggc ggc ctc atg gcg ctc cgc agc gtg cat aac ctc ggg ctc    294

Tyr Leu Gly Gly Leu Met Ala Leu Arg Ser Val His Asn Leu Gly Leu

    70                  75                  80

tgc ctc ttc tcg ggc gcc gtg tgg atc tac acg agc tac ctc atg atc    342

Cys Leu Phe Ser Gly Ala Val Trp Ile Tyr Thr Ser Tyr Leu Met Ile

85                  90                  95                  100

cag gat ggg cac ttt cgc agc ctc gag gcg gca acg tgc gag ccg ctc    390

Gln Asp Gly His Phe Arg Ser Leu Glu Ala Ala Thr Cys Glu Pro Leu

                105                 110                 115

aag cat ccg cac ttc cag ctc atc agc ttg ctc ttt gcg ctg tcc aag      438

Lys His Pro His Phe Gln Leu Ile Ser Leu Leu Phe Ala Leu Ser Lys

            120                 125                 130

atc tgg gag tgg ttc gac acg gtg ctc ctc atc gtc aag ggc aac aag      486

Ile Trp Glu Trp Phe Asp Thr Val Leu Leu Ile Val Lys Gly Asn Lys

        135                 140                 145

ctc cgc ttc ctg cac gtc ttg cac cac gcc acg acc ttt tgg ctc tac      534

Leu Arg Phe Leu His Val Leu His His Ala Thr Thr Phe Trp Leu Tyr

    150                 155                 160

gcc atc gac cac atc ttt ctc tcg tcc atc aag tac ggc gtc gcg gtc      582

Ala Ile Asp His Ile Phe Leu Ser Ser Ile Lys Tyr Gly Val Ala Val

165                 170                 175                 180

aat gct ttc atc cac acc gtc atg tac gcg cac tac ttc cgc cca ttc      630

Asn Ala Phe Ile His Thr Val Met Tyr Ala His Tyr Phe Arg Pro Phe

                185                 190                 195

ccg aag ggc ttg cgc ccg ctt att acg cag ttg cag atc gtc cag ttc      678

Pro Lys Gly Leu Arg Pro Leu Ile Thr Gln Leu Gln Ile Val Gln Phe

            200                 205                 210

att ttc agc atc ggc atc cat acc gcc att tac tgg cac tac gac tgc      726

Ile Phe Ser Ile Gly Ile His Thr Ala Ile Tyr Trp His Tyr Asp Cys

        215                 220                 225

gag ccg ctc gtg cat acc cac ttt tgg gaa tac gtc acg ccc tac ctt      774

Glu Pro Leu Val His Thr His Phe Trp Glu Tyr Val Thr Pro Tyr Leu

    230                 235                 240

ttc gtc gtg ccc ttc ctc atc ctc ttt ttc aat ttt tac ctg cag cag      822

Phe Val Val Pro Phe Leu Ile Leu Phe Phe Asn Phe Tyr Leu Gln Gln

245                 250                 255                 260

tac gtc ctc gcg ccc gca aaa acc aag aag gca tag ccacgtaaca           868

Tyr Val Leu Ala Pro Ala Lys Thr Lys Lys Ala

                265                 270

gtagaccagc agcgccgagg acgcgtgccg cgttatcgcg aagcacgaaa taaagaagat    928

catttgattc aacgaggcta cttgcggcca cgagaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa    988

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa    1048

c                                                                    1049

<210>30

<211>271

<212>PRT

<213>破囊壶菌属

<400>30

Met Met Glu Pro Leu Asp Arg Tyr Arg Ala Leu Ala Glu Leu Ala Ala

1               5                   10                  15

Arg Tyr Ala Ser Ser Ala Ala Phe Lys Trp Gln Val Thr Tyr Asp Ala

            20                  25                  30

Lys Asp Ser Phe Val Gly Pro Leu Gly Ile Arg Glu Pro Leu Gly Leu

        35                  40                  45

Leu Val Gly Ser Val Val Leu Tyr Leu Ser Leu Leu Ala Val Val Tyr

    50                  55                  60

Ala Leu Arg Asn Tyr Leu Gly Gly Leu Met Ala Leu Arg Ser Val His

65                  70                  75                  80

Asn Leu Gly Leu Cys Leu Phe Ser Gly Ala Val Trp Ile Tyr Thr Ser

                85                  90                  95

Tyr Leu Met Ile Gln Asp Gly His Phe Arg Ser Leu Glu Ala Ala Thr

            100                 105                 110

Cys Glu Pro Leu Lys His Pro His Phe Gln Leu Ile Ser Leu Leu Phe

        115                 120                 125

Ala Leu Ser Lys Ile Trp Glu Trp Phe Asp Thr Val Leu Leu Ile Val

    130                 135                 140

Lys Gly Asn Lys Leu Arg Phe Leu His Val Leu His His Ala Thr Thr

145                 150                 155                 160

Phe Trp Leu Tyr Ala Ile Asp His Ile Phe Leu Ser Ser Ile Lys Tyr

                165                 170                 175

Gly Val Ala Val Asn Ala Phe Ile His Thr Val Met Tyr Ala His Tyr

            180                 185                 190

Phe Arg Pro Phe Pro Lys Gly Leu Arg Pro Leu Ile Thr Gln Leu Gln

        195                 200                 205

Ile Val Gln Phe Ile Phe Ser Ile Gly Ile His Thr Ala Ile Tyr Trp

    210                 215                 220

His Tyr Asp Cys Glu Pro Leu Val His Thr His Phe Trp Glu Tyr Val

225                 230                 235                 240

Thr Pro Tyr Leu Phe Val Val Pro Phe Leu Ile Leu Phe Phe Asn Phe

                245                 250                 255

Tyr Leu Gln Gln Tyr Val Leu Ala Pro Ala Lys Thr Lys Lys Ala

            260                 265                 270

<210>31

<211>837

<212>DNA

<213>致病疫霉(Phytophthora infestans)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(837)

<223>Δ6-延伸酶

<400>31

atg tcg act gag cta ctg cag agc tac tac gcg tgg gcc aac gcc acg    48

Met Ser Thr Glu Leu Leu Gln Ser Tyr Tyr Ala Trp Ala Asn Ala Thr

1               5                   10                  15

gag gcc aag ctg ctg gac tgg gtc gac cct gag ggc ggc tgg aag gtg    96

Glu Ala Lys Leu Leu Asp Trp Val Asp Pro Glu Gly Gly Trp Lys Val

            20                  25                  30

cat cct atg gca gac tac ccc cta gcc aac ttc tcc agc gtc tac gcc    144

His Pro Met Ala Asp Tyr Pro Leu Ala Asn Phe Ser Ser Val Tyr Ala

        35                  40                  45

atc tgc gtc gga tac ttg ctc ttc gta atc ttc ggc acg gcc ctg atg    192

Ile Cys Val Gly Tyr Leu Leu Phe Val Ile Phe Gly Thr Ala Leu Met

    50                  55                  60

aaa atg gga gtc ccc gcc atc aag acc agt cca tta cag ttt gtg tac    240

Lys Met Gly Val Pro Ala Ile Lys Thr Ser Pro Leu Gln Phe Val Tyr

65                  70                  75                  80

aac ccc atc caa gtc att gcc tgc tct tat atg tgc gtg gag gcc gcc    288

Asn Pro Ile Gln Val Ile Ala Cys Ser Tyr Met Cys Val Glu Ala Ala

                85                  90                  95

atc cag gcc tac cgc aac ggc tac acc gcc gcc ccg tgc aac gcc ttt    336

Ile Gln Ala Tyr Arg Asn Gly Tyr Thr Ala Ala Pro Cys Asn Ala Phe

            100                 105                 110

aag tcc gac gac ccc gtc atg ggc aac gtt ctg tac ctc ttc tat ctc    384

Lys Ser Asp Asp Pro Val Met Gly Asn Val Leu Tyr Leu Phe Tyr Leu

        115                 120                 125

tcc aag atg ctc gac ctg tgc gac aca gtc ttc att atc cta gga aag    432

Ser Lys Met Leu Asp Leu Cys Asp Thr Val Phe Ile Ile Leu Gly Lys

    130                 135                 140

aag tgg aaa cag ctt tcc atc ttg cac gtg tac cac cac ctt acc gtg    480

Lys Trp Lys Gln Leu Ser Ile Leu His Val Tyr His His Leu Thr Val

145                 150                 155                 160

ctt ttc gtc tac tat gtg acg ttc cgc gcc gct cag gac ggg gac tca    528

Leu Phe Val Tyr Tyr Val Thr Phe Arg Ala Ala Gln Asp Gly Asp Ser

                165                 170                 175

tat gct acc atc gtg ctc aac ggc ttc gtg cac acc atc atg tac act    576

Tyr Ala Thr Ile Val Leu Asn Gly Phe Val His Thr Ile Met Tyr Thr

            180                 185                 190

tac tac ttc gtc agc gcc cac acg cgc aac att tgg tgg aag aag tac    624

Tyr Tyr Phe Val Ser Ala His Thr Arg Asn Ile Trp Trp Lys Lys Tyr

        195                 200                 205

ctc acg cgc att cag ctt atc cag ttc gtg acc atg aac gtg cag ggc    672

Leu Thr Arg Ile Gln Leu Ile Gln Phe Val Thr Met Asn Val Gln Gly

    210                 215                 220

tac ctg acc tac tct cga cag tgc cca ggc atg cct cct aag gtg ccg    720

Tyr Leu Thr Tyr Ser Arg Gln Cys Pro Gly Met Pro Pro Lys Val Pro

225                 230                 235                 240

ctc atg tac ctt gtg tac gtg cag tca ctc ttc tgg ctc ttc atg aat    768

Leu Met Tyr Leu Val Tyr Val Gln Ser Leu Phe Trp Leu Phe Met Asn

                245                 250                 255

ttc tac att cgc gcg tac gtg ttc ggc ccc aag aaa ccg gcc gtg gag    816

Phe Tyr Ile Arg Ala Tyr Val Phe Gly Pro Lys Lys Pro Ala Val Glu

            260                 265                 270

gaa tcg aag aag aag ttg taa                                        837

Glu Ser Lys Lys Lys Leu

        275

<210>32

<211>278

<212>PRT

<213>致病疫霉

<400>32

Met Ser Thr Glu Leu Leu Gln Ser Tyr Tyr Ala Trp Ala Asn Ala Thr

1               5                   10                  15

Glu Ala Lys Leu Leu Asp Trp Val Asp Pro Glu Gly Gly Trp Lys Val

            20                  25                  30

His Pro Met Ala Asp Tyr Pro Leu Ala Asn Phe Ser Ser Val Tyr Ala

        35                  40                  45

Ile Cys Val Gly Tyr Leu Leu Phe Val Ile Phe Gly Thr Ala Leu Met

    50                  55                  60

Lys Met Gly Val Pro Ala Ile Lys Thr Ser Pro Leu Gln Phe Val Tyr

65                  70                  75                  80

Asn Pro Ile Gln Val Ile Ala Cys Ser Tyr Met Cys Val Glu Ala Ala

                85                  90                  95

Ile Gln Ala Tyr Arg Asn Gly Tyr Thr Ala Ala Pro Cys Asn Ala Phe

            100                 105                 110

Lys Ser Asp Asp Pro Val Met Gly Asn Val Leu Tyr Leu Phe Tyr Leu

        115                 120                 125

Ser Lys Met Leu Asp Leu Cys Asp Thr Val Phe Ile Ile Leu Gly Lys

    130                 135                 140

Lys Trp Lys Gln Leu Ser Ile Leu His Val Tyr His His Leu Thr Val

145                 150                 155                 160

Leu Phe Val Tyr Tyr Val Thr Phe Arg Ala Ala Gln Asp Gly Asp Ser

                165                 170                 175

Tyr Ala Thr Ile Val Leu Asn Gly Phe Val His Thr Ile Met Tyr Thr

            180                 185                 190

Tyr Tyr Phe Val Ser Ala His Thr Arg Asn Ile Trp Trp Lys Lys Tyr

        195                 200                 205

Leu Thr Arg Ile Gln Leu Ile Gln Phe Val Thr Met Asn Val Gln Gly

    210                 215                 220

Tyr Leu Thr Tyr Ser Arg Gln Cys Pro Gly Met Pro Pro Lys Val Pro

225                 230                 235                 240

Leu Met Tyr Leu Val Tyr Val Gln Ser Leu Phe Trp Leu Phe Met Asn

                245                 250                 255

Phe Tyr Ile Arg Ala Tyr Val Phe Gly Pro Lys Lys Pro Ala Val Glu

            260                 265                 270

Glu Ser Lys Lys Lys Leu

        275

<210>33

<211>954

<212>DNA

<213>高山被孢霉

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(954)

<223>Δ6-延伸酶

<400>33

atg gcc gcc gca atc ttg gac aag gtc aac ttc ggc att gat cag ccc    48

Met Ala Ala Ala Ile Leu Asp Lys Val Asn Phe Gly Ile Asp Gln Pro

1               5                   10                  15

ttc gga atc aag ctc gac acc tac ttt gct cag gcc tat gaa ctc gtc    96

Phe Gly Ile Lys Leu Asp Thr Tyr Phe Ala Gln Ala Tyr Glu Leu Val

            20                  25                  30

acc gga aag tcc atc gac tcc ttc gtc ttc cag gag ggc gtc acg cct    144

Thr Gly Lys Ser Ile Asp Ser Phe Val Phe Gln Glu Gly Val Thr Pro

        35                  40                  45

ctc tcg acc cag aga gag gtc gcc atg tgg act atc act tac ttc gtc    192

Leu Ser Thr Gln Arg Glu Val Ala Met Trp Thr Ile Thr Tyr Phe Val

    50                  55                  60

gtc atc ttt ggt ggt cgc cag atc atg aag agc cag gac gcc ttc aag    240

Val Ile Phe Gly Gly Arg Gln Ile Met Lys Ser Gln Asp Ala Phe Lys

65                  70                  75                  80

ctc aag ccc ctc ttc atc ctc cac aac ttc ctc ctg acg atc gcg tcc    288

Leu Lys Pro Leu Phe Ile Leu His Asn Phe Leu Leu Thr Ile Ala Ser

                85                  90                  95

gga tcg ctg ttg ctc ctg ttc atc gag aac ctg gtc ccc atc ctc gcc    336

Gly Ser Leu Leu Leu Leu Phe Ile Glu Asn Leu Val Pro Ile Leu Ala

            100                 105                 110

aga aac gga ctt ttc tac gcc atc tgc gac gac ggt gcc tgg acc cag    384

Arg Asn Gly Leu Phe Tyr Ala Ile Cys Asp Asp Gly Ala Trp Thr Gln

        115                 120                 125

cgc ctc gag ctc ctc tac tac ctc aac tac ctg gtc aag tac tgg gag    432

Arg Leu Glu Leu Leu Tyr Tyr Leu Asn Tyr Leu Val Lys Tyr Trp Glu

    130                 135                 140

ttg gcc gac acc gtc ttt ttg gtc ctc aag aag aag cct ctt gag ttc    480

Leu Ala Asp Thr Val Phe Leu Val Leu Lys Lys Lys Pro Leu Glu Phe

145                 150                 155                 160

ctg cac tac ttc cac cac tcg atg acc atg gtt ctc tgc ttt gtc cag    528

Leu His Tyr Phe His His Ser Met Thr Met Val Leu Cys Phe Val Gln

                165                 170                 175

ctt gga gga tac act tca gtg tcc tgg gtc cct att acc ctc aac ttg    576

Leu Gly Gly Tyr Thr Ser Val Ser Trp Val Pro Ile Thr Leu Asn Leu

            180                 185                 190

act gtc cac gtc ttc atg tac tac tac tac atg cgc tcc gct gcc ggt    624

Thr Val His Val Phe Met Tyr Tyr Tyr Tyr Met Arg Ser Ala Ala Gly

        195                 200                 205

gtt cgc atc tgg tgg aag cag tac ttg acc act ctc cag atc gtc cag    672

Val Arg Ile Trp Trp Lys Gln Tyr Leu Thr Thr Leu Gln Ile Val Gln

    210                 215                 220

ttc gtt ctt gac ctc gga ttc atc tac ttc tgc gcc tac acc tac ttc    720

Phe Val Leu Asp Leu Gly Phe Ile Tyr Phe Cys Ala Tyr Thr Tyr Phe

225                 230                 235                 240

gcc ttc acc tac ttc ccc tgg gct ccc aac gtc ggc aag tgc gcc ggt    768

Ala Phe Thr Tyr Phe Pro Trp Ala Pro Asn Val Gly Lys Cys Ala Gly

                245                 250                 255

acc gag ggt gct gct ctc ttt ggc tgc gga ctc ctc tcc agc tat ctc    816

Thr Glu Gly Ala Ala Leu Phe Gly Cys Gly Leu Leu Ser Ser Tyr Lau

            260                 265                 270

ttg ctc ttt atc aac ttc tac cgc att acc tac aat gcc aag gcc aag    864

Leu Leu Phe Ile Asn Phe Tyr Arg Ile Thr Tyr Asn Ala Lys Ala Lys

        275                 280                 285

gca gcc aag gag cgt gga agc aac ttt acc ccc aag act gtc aag tcc    912

Ala Ala Lys Glu Arg Gly Ser Asn Phe Thr Pro Lys Thr Val Lys Ser

    290                 295                 300

ggc gga tcg ccc aag aag ccc tcc aag agc aag cac atc taa            954

Gly Gly Ser Pro Lys Lys Pro Ser Lys Ser Lys His Ile

305                 310                 315

<210>34

<211>317

<212>PRT

<213>高山被孢霉

<400>34

Met Ala Ala Ala Ile Leu Asp Lys Val Asn Phe Gly Ile Asp Gln Pro

1               5                   10                  15

Phe Gly Ile Lys Leu Asp Thr Tyr Phe Ala Gln Ala Tyr Glu Leu Val

            20                  25                  30

Thr Gly Lys Ser Ile Asp Ser Phe Val Phe Gln Glu Gly Val Thr Pro

        35                  40                  45

Leu Ser Thr Gln Arg Glu Val Ala Met Trp Thr Ile Thr Tyr Phe Val

    50                  55                  60

Val Ile Phe Gly Gly Arg Gln Ile Met Lys Ser Gln Asp Ala Phe Lys

65                  70                  75                  80

Leu Lys Pro Leu Phe Ile Leu His Asg Phe Leu Leu Thr Ile Ala Ser

                85                  90                  95

Gly Ser Leu Leu Leu Leu Phe Ile Glu Asn Leu Val Pro Ile Leu Ala

            100                 105                 110

Arg Asn Gly Leu Phe Tyr Ala Ile Cys Asp Asp Gly Ala Trp Thr Gln

        115                 120                 125

Arg Leu Glu Leu Leu Tyr Tyr Leu Asn Tyr Leu Val Lys Tyr Trp Glu

    130                 135                 140

Leu Ala Asp Thr Val Phe Leu Val Leu Lys Lys Lys Pro Leu Glu Phe

145                 150                 155                 160

Leu His Tyr Phe His His Ser Met Thr Met Val Leu Cys Phe Val Gln

                165                 170                 175

Leu Gly Gly Tyr Thr Ser Val Ser Trp Val Pro Ile Thr Leu Asn Leu

            180                 185                 190

Thr Val His Val Phe Met Tyr Tyr Tyr Tyr Met Arg Ser Ala Ala Gly

        195                 200                 205

Val Arg Ile Trp Trp Lys Gln Tyr Leu Thr Thr Leu Gln Ile Val Gln

    210                 215                 220

Phe Val Leu Asp Leu Gly Phe Ile Tyr Phe Cys Ala Tyr Thr Tyr Phe

225                 230                 235                 240

Ala Phe Thr Tyr Phe Pro Trp Ala Pro Asn Val Gly Lys Cys Ala Gly

                245                 250                 255

Thr Glu Gly Ala Ala Leu Phe Gly Cys Gly Leu Leu Ser Ser Tyr Leu

            260                 265                 270

Leu Leu Phe Ile Asn Phe Tyr Arg Ile Thr Tyr Asn Ala Lys Ala Lys

        275                 280                 285

Ala Ala Lys Glu Arg Gly Ser Asn Phe Thr Pro Lys Thr Val Lys Ser

    290                 295                 300

Gly Gly Ser Pro Lys Lys Pro Ser Lys Ser Lys His Ile

305                 310                 315

<210>35

<211>957

<212>DNA

<213>高山被孢霉

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(957)

<113>Δ6-延伸酶

<400>35

atg gag tcg att gcg cca ttc ctc cca tca aag atg ccg caa gat ctg    48

Met Glu Ser Ile Ala Pro Phe Leu Pro Ser Lys Met Pro Gln Asp Leu

1               5                   10                  15

ttt atg gac ctt gcc acc gct atc ggt gtc cgg gcc gcg ccc tat gtc    96

Phe Met Asp Leu Ala Thr Ala Ile Gly Val Arg Ala Ala Pro Tyr Val

            20                  25                  30

gat cct ctc gag gcc gcg ctg gtg gcc cag gcc gag aag tac atc ccc    144

Asp Pro Leu Glu Ala Ala Leu Val Ala Gln Ala Glu Lys Tyr Ile Pro

        35                  40                  45

acg att gtc cat cac acg cgt ggg ttc ctg gtc gcg gtg gag tcg cct    192

Thr Ile Val His His Thr Arg Gly Phe Leu Val Ala Val Glu Ser Pro

    50                  55                  60

ttg gcc cgt gag ctg ccg ttg atg aac ccg ttc cac gtg ctg ttg atc    240

Leu Ala Arg Glu Leu Pro Leu Met Asn Pro Phe His Val Leu Leu Ile

65                  70                  75                  80

gtg ctc gct tat ttg gtc acg gtc ttt gtg ggc atg cag atc atg aag    288

Val Leu Ala Tyr Leu Val Thr Val Phe Val Gly Met Gln Ile Met Lys

                85                  90                  95

aac ttt gag cgg ttc gag gtc aag acg ttt tcg ctc ctg cac aac ttt    336

Asn Phe Glu Arg Phe Glu Val Lys Thr Phe Ser Leu Leu His Asn Phe

            100                 105                 110

tgt ctg gtc tcg atc agc gcc tac atg tgc ggt ggg atc ctg tac gag    384

Cys Leu Val Ser Ile Ser Ala Tyr Met Cys Gly Gly Ile Leu Tyr Glu

        115                 120                 125

gct tat cag gcc aac tat gga ctg ttt gag aac gct gct gat cat acc    432

Ala Tyr Gln Ala Asn Tyr Gly Leu Phe Glu Asn Ala Ala Asp His Thr

    130                 135                 140

ttc aag ggt ctt cct atg gcc aag atg atc tgg ctc ttc tac ttc tcc    480

Phe Lys Gly Leu Pro Met Ala Lys Met Ile Trp Leu Phe Tyr Phe Ser

145                 150                 155                 160

aag atc atg gag ttt gtc gac acc atg atc atg gtc ctc aag aag aac    528

Lys Ile Met Glu Phe Val Asp Thr Met Ile Met Val Leu Lys Lys Asn

                165                 170                 175

aac cgc cag atc tcc ttc ttg cac gtt tac cac cac agc tcc atc ttc    576

Asn Arg Gln Ile Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ser Ser Ile Phe

            180                 185                 190

acc atc tgg tgg ttg gtc acc ttt gtt gca ccc aac ggt gaa gcc tac    624

Thr Ile Trp Trp Leu Val Thr Phe Val Ala Pro Asn Gly Glu Ala Tyr

        195                 200                 205

ttc tct gct gcg ttg aac tcg ttc atc cat gtg atc atg tac ggc tac    672

Phe Ser Ala Ala Leu Asn Ser Phe Ile His Val Ile Met Tyr Gly Tyr

    210                 215                 220

tac ttc ttg tcg gcc ttg ggc ttc aag cag gtg tcg ttc atc aag ttc    720

Tyr Phe Leu Ser Ala Leu Gly Phe Lys Gln Val Ser Phe Ile Lys Phe

225                 230                 235                 240

tac atc acg cgc tcg cag atg aca cag ttc tgc atg atg tcg gtc cag    768

Tyr Ile Thr Arg Ser Gln Met Thr Gln Phe Cys Met Met Ser Val Gln

                245                 250                 255

tct tcc tgg gac atg tac gcc atg aag gtc ctt ggc cgc ccc gga tac    816

Ser Ser Trp Asp Met Tyr Ala Met Lys Val Leu Gly Arg Pro Gly Tyr

            260                 265                 270

ccc ttc ttc atc acg gct ctg ctt tgg ttc tac atg tgg acc atg ctc    864

Pro Phe Phe Ile Thr Ala Leu Leu Trp Phe Tyr Met Trp Thr Met Leu

        275                 280                 285

ggt ctc ttc tac aac ttt tac aga aag aac gcc aag ttg gcc aag cag    912

Gly Leu Phe Tyr Asn Phe Tyr Arg Lys Asn Ala Lys Leu Ala Lys Gln

    290                 295                 300

gcc aag gcc gac gct gcc aag gag aag gca agg aag ttg cag taa        957

Ala Lys Ala Asp Ala Ala Lys Glu Lys Ala Arg Lys Leu Gln

305                 310                 315

<210>36

<211>318

<212>PRT

<213>高山被孢霉

<400>36

Met Glu Ser Ile Ala Pro Phe Leu Pro Ser Lys Met Pro Gln Asp Leu

1               5                   10                  15

Phe Met Asp Leu Ala Thr Ala Ile Gly Val Arg Ala Ala Pro Tyr Val

            20                  25                  30

Asp Pro Leu Glu Ala Ala Leu Val Ala Gln Ala Glu Lys Tyr Ile Pro

        35                  40                  45

Thr Ile Val His His Thr Arg Gly Phe Leu Val Ala Val Glu Ser Pro

    50                  55                  60

Leu Ala Arg Glu Leu Pro Leu Met Asn Pro Phe His Val Leu Leu Ile

65                  70                  75                  80

Val Leu Ala Tyr Leu Val Thr Val Phe Val Gly Met Gln Ile Met Lys

                85                  90                  95

Asn Phe Glu Arg Phe Glu Val Lys Thr Phe Ser Leu Leu His Asn Phe

            100                 105                 110

Cys Leu Val Ser Ile Ser Ala Tyr Met Cys Gly Gly Ile Leu Tyr Glu

        115                 120                 125

Ala Tyr Gln Ala Asn Tyr Gly Leu Phe Glu Asn Ala Ala Asp His Thr

    130                 135                 140

Phe Lys Gly Leu Pro Met Ala Lys Met Ile Trp Leu Phe Tyr Phe Ser

145                 150                 155                 160

Lys Ile Met Glu Phe Val Asp Thr Met Ile Met Val Leu Lys Lys Asn

                165                 170                 175

Asn Arg Gln Ile Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ser Ser Ile Phe

            180                 185                 190

Thr Ile Trp Trp Leu Val Thr Phe Val Ala Pro Asn Gly Glu Ala Tyr

        195                 200                 205

Phe Ser Ala Ala Leu Asn Ser Phe Ile His Val Ile Met Tyr Gly Tyr

    210                 215                 220

Tyr Phe Leu Ser Ala Leu Gly Phe Lys Gln Val Ser Phe Ile Lys Phe

225                 230                 235                 240

Tyr Ile Thr Arg Ser Gln Met Thr Gln Phe Cys Met Met Ser Val Gln

                245                 250                 255

Ser Ser Trp Asp Met Tyr Ala Met Lys Val Leu Gly Arg Pro Gly Tyr

            260                 265                 270

Pro Phe Phe Ile Thr Ala Leu Leu Trp Phe Tyr Met Trp Thr Met Leu

        275                 280                 285

Gly Leu Phe Tyr Asn Phe Tyr Arg Lys Asn Ala Lys Leu Ala Lys Gln

    290                 295                 300

Ala Lys Ala Asp Ala Ala Lys Glu Lys Ala Arg Lys Leu Gln

305                 310                 315

<210>37

<211>867

<212>DNA

<213>秀丽隐杆线虫

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(867)

<223>Δ6-延伸酶

<400>37

atg gct cag cat ccg ctc gtt caa cgg ctt ctc gat gtc aaa ttc gac    48

Met Ala Gln His Pro Leu Val Gln Arg Leu Leu Asp Val Lys Phe Asp

1               5                   10                  15

acg aaa cga ttt gtg gct att gct act cat ggg cca aag aat ttc cct    96

Thr Lys Arg Phe Val Ala Ile Ala Thr His Gly Pro Lys Asn Phe Pro

            20                  25                  30

gac gca gaa ggt cgc aag ttc ttt gct gat cac ttt gat gtt act att    144

Asp Ala Glu Gly Arg Lys Phe Phe Ala Asp His Phe Asp Val Thr Ile

        35                  40                  45

cag gct tca atc ctg tac atg gtc gtt gtg ttc gga aca aaa tgg ttc    192

Gln Ala Ser Ile Leu Tyr Met Val Val Val Phe Gly Thr Lys Trp Phe

    50                  55                  60

atg cgt aat cgt caa cca ttc caa ttg act att cca ctc aac atc tgg    240

Met Arg Asn Arg Gln Pro Phe Gln Leu Thr Ile Pro Leu Asn Ile Trp

65                  70                  75                  80

aat ttc atc ctc gcc gca ttt tcc atc gca gga gct gtc aaa atg acc    288

Asn Phe Ile Leu Ala Ala Phe Ser Ile Ala Gly Ala Val Lys Met Thr

                85                  90                  95

cca gag ttc ttt gga acc att gcc aac aaa gga att gtc gca tcc tac    336

Pro Glu Phe Phe Gly Thr Ile Ala Asn Lys Gly Ile Val Ala Ser Tyr

            100                 105                 110

tgc aaa gtg ttt gat ttc acg aaa gga gag aat gga tac tgg gtg tgg    384

Cys Lys Val Phe Asp Phe Thr Lys Gly Glu Asn Gly Tyr Trp Val Trp

        115                 120                 125

ctc ttc atg gct tcc aaa ctt ttc gaa ctt gtt gac acc atc ttc ttg    432

Leu Phe Met Ala Ser Lys Leu Phe Glu Leu Val Asp Thr Ile Phe Leu

    130                 135                 140

gtt ctc cgt aaa cgt cca ctc atg ttc ctt cac tgg tat cac cat att    480

Val Leu Arg Lys Arg Pro Leu Met Phe Leu His Trp Tyr His His Ile

145                 150                 155                 160

ctc acc atg atc tac gcc tgg tac tct cat cca ttg acc cca gga ttc    528

Leu Thr Met Ile Tyr Ala Trp Tyr Ser His Pro Leu Thr Pro Gly Phe

                165                 170                 175

aac aga tac gga att tat ctt aac ttt gtc gtc cac gcc ttc atg tac    576

Asn Arg Tyr Gly Ile Tyr Leu Asn Phe Val Val His Ala Phe Met Tyr

            180                 185                 190

tct tac tac ttc ctt cgc tcg atg aag att cgc gtg cca gga ttc atc    624

Ser Tyr Tyr Phe Leu Arg Ser Met Lys Ile Arg Val Pro Gly Phe Ile

        195                 200                 205

gcc caa gct atc aca tct ctt caa atc gtt caa ttc atc atc tct tgc    672

Ala Gln Ala Ile Thr Ser Leu Gln Ile Val Gln Phe Ile Ile Ser Cys

    210                 215                 220

gcc gtt ctt gct cat ctt ggt tat ctc atg cac ttc acc aat gcc aac    720

Ala Val Leu Ala His Leu Gly Tyr Leu Met His Phe Thr Asn Ala Asn

225                 230                 235                 240

tgt gat ttc gag cca tca gta ttc aag ctc gca gtt ttc atg gac aca    768

Cys Asp Phe Glu Pro Ser Val Phe Lys Leu Ala Val Phe Met Asp Thr

                245                 250                 255

aca tac ttg gct ctt ttc gtc aac ttc ttc ctc caa tca tat gtt ctc    816

Thr Tyr Leu Ala Leu Phe Val Asn Phe Phe Leu Gln Ser Tyr Val Leu

            260                 265                 270

cgc gga gga aaa gac aag tac aag gca gtg cca aag aag aag aac aac    864

Arg Gly Gly Lys Asp Lys Tyr Lys Ala Val Pro Lys Lys Lys Asn Asn

        275                 280                 285

taa                                                                867

<210>38

<211>288

<212>PRT

<213>秀丽隐杆线虫

<400>38

Met Ala Gln His Pro Leu Val Gln Arg Leu Leu Asp Val Lys Phe Asp

1               5                   10                  15

Thr Lys Arg Phe Val Ala Ile Ala Thr His Gly Pro Lys Asn Phe Pro

            20                  25                  30

Asp Ala Glu Gly Arg Lys Phe Phe Ala Asp His Phe Asp Val Thr Ile

        35                  40                  45

Gln Ala Ser Ile Leu Tyr Met Val Val Val Phe Gly Thr Lys Trp Phe

    50                  55                  60

Met Arg Asn Arg Gln Pro Phe Gln Leu Thr Ile Pro Leu Asn Ile Trp

65                  70                  75                  80

Asn Phe Ile Leu Ala Ala Phe Ser Ile Ala Gly Ala Val Lys Met Thr

                85                  90                  95

Pro Glu Phe Phe Gly Thr Ile Ala Asn Lys Gly Ile Val Ala Ser Tyr

            100                 105                 110

Cys Lys Val Phe Asp Phe Thr Lys Gly Glu Asn Gly Tyr Trp Val Trp

        115                 120                 125

Leu Phe Met Ala Ser Lys Leu Phe Glu Leu Val Asp Thr Ile Phe Leu

    130                 135                 140

Val Leu Arg Lys Arg Pro Leu Met Phe Leu His Trp Tyr His His Ile

145                 150                 155                 160

Leu Thr Met Ile Tyr Ala Trp Tyr Ser His Pro Leu Thr Pro Gly Phe

                165                 170                 175

Asn Arg Tyr Gly Ile Tyr Leu Asn Phe Val Val His Ala Phe Met Tyr

            180                 185                 190

Ser Tyr Tyr Phe Leu Arg Ser Met Lys Ile Arg Val Pro Gly Phe Ile

        195                 200                 205

Ala Gln Ala Ile Thr Ser Leu Gln Ile Val Gln Phe Ile Ile Ser Cys

    210                 215                 220

Ala Val Leu Ala His Leu Gly Tyr Leu Met His Phe Thr Asn Ala Asn

225                 230                 235                 240

Cys Asp Phe Glu Pro Ser Val Phe Lys Leu Ala Val Phe Met Asp Thr

                245                 250                 255

Thr Tyr Leu Ala Leu Phe Val Asn Phe Phe Leu Gln Ser Tyr Val Leu

            260                 265                 270

Arg Gly Gly Lys Asp Lys Tyr Lys Ala Val Pro Lys Lys Lys Asn Asn

        275                 280                 285

<210>39

<211>1626

<212>DNA

<213>细小裸藻

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1626)

<223>Δ4-去饱和酶

<400>39

atg ttg gtg ctg ttt ggc aat ttc tat gtc aag caa tac tcc caa aag    48

Met Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Val Lys Gln Tyr Ser Gln Lys

1               5                   10                  15

aac ggc aag ccg gag aac gga gcc acc cct gag aac gga gcg aag ccg    96

Asn Gly Lys Pro Glu Asn Gly Ala Thr Pro Glu Asn Gly Ala Lys Pro

            20                  25                  30

caa cct tgc gag aac ggc acg gtg gaa aag cga gag aat gac acc gcc    144

Gln Pro Cys Glu Asn Gly Thr Val Glu Lys Arg Glu Asn Asp Thr Ala

        35                  40                  45

aac gtt cgg ccc acc cgt cca gct gga ccc ccg ccg gcc acg tac tac    192

Asn Val Arg Pro Thr Arg Pro Ala Gly Pro Pro Pro Ala Thr Tyr Tyr

    50                  55                  60

gac tcc ctg gca gtg tcg ggg cag ggc aag gag cgg ctg ttc acc acc    240

Asp Ser Leu Ala Val Ser Gly Gln Gly Lys Glu Arg Leu Phe Thr Thr

65                  70                  75                  80

gat gag gtg agg cgg cac atc ctc ccc acc gat ggc tgg ctg acg tgc    288

Asp Glu Val Arg Arg His Ile Leu Pro Thr Asp Gly Trp Leu Thr Cys

                85                  90                  95

cac gaa gga gtc tac gat gtc act gat ttc ctt gcc aag cac cct ggt    336

His Glu Gly Val Tyr Asp Val Thr Asp Phe Leu Ala Lys His Pro Gly

            100                 105                 110

ggc ggt gtc atc acg ctg ggc ctt gga agg gac tgc aca atc ctc atc    384

Gly Gly Val Ile Thr Leu Gly Leu Gly Arg Asp Cys Thr Ile Leu Ile

        115                 120                 125

gag tca tac cac cct gct ggg cgc ccg gac aag gtg atg gag aag tac    432

Glu Ser Tyr His Pro Ala Gly Arg Pro Asp Lys Val Met Glu Lys Tyr

    130                 135                 140

cgc att ggt acg ctg cag gac ccc aag acg ttc tat gct tgg gga gag    480

Arg Ile Gly Thr Leu Gln Asp Pro Lys Thr Phe Tyr Ala Trp Gly Glu

145                 150                 155                 160

tcc gat ttc tac cct gag ttg aag cgc cgg gcc ctt gca agg ctg aag    528

Ser Asp Phe Tyr Pro Glu Leu Lys Arg Arg Ala Leu Ala Arg Leu Lys

                165                 170                 175

gag gct ggt cag gcg cgg cgc ggc ggc ctt ggg gtg aag gcc ctc ctg    576

Glu Ala Gly Gln Ala Arg Arg Gly Gly Leu Gly Val Lys Ala Leu Leu

            180                 185                 190

gtg ctc acc ctc ttc ttc gtg tcg tgg tac atg tgg gtg gcc cac aag    624

Val Leu Thr Leu Phe Phe Val Ser Trp Tyr Met Trp Val Ala His Lys

        195                 200                 205

tcc ttc ctc tgg gcc gcc gtc tgg ggc ttc gcc ggc tcc cac gtc ggg    672

Ser Phe Leu Trp Ala Ala Val Trp Gly Phe Ala Gly Ser His Val Gly

    210                 215                 220

ctg agc atc cag cac gat ggc aac cac ggc gcg ttc agc cgc aac aca    720

Leu Ser Ile Gln His Asp Gly Asn His Gly Ala Phe Ser Arg Asn Thr

225                 230                 235                 240

ctg gtg aac cgc ctg gcg ggg tgg ggc atg gac ttg atc ggc gcg tcg    768

Leu Val Asn Arg Leu Ala Gly Trp Gly Met Asp Leu Ile Gly Ala Ser

                245                 250                 255

tcc acg gtg tgg gag tac cag cac gtc atc ggc cac cac cag tac acc    816

Ser Thr Val Trp Glu Tyr Gln His Val Ile Gly His His Gln Tyr Thr

            260                 265                 270

aac ctc gtg tcg gac acg cta ttc agt ctg cct gag aac gat ccg gac    864

Asn Leu Val Ser Asp Thr Leu Phe Ser Leu Pro Glu Asn Asp Pro Asp

        275                 280                 285

gtc ttc tcc agc tac ccg ctg atg cgc atg cac ccg gat acg gcg tgg    912

Val Phe Ser Ser Tyr Pro Leu Met Arg Met His Pro Asp Thr Ala Trp

    290                 295                 300

cag ccg cac cac cgc ttc cag cac ctg ttc gcg ttc cca ctg ttc gcc    960

Gln Pro His His Arg Phe Gln His Leu Phe Ala Phe Pro Leu Phe Ala

305                 310                 315                 320

ctg atg aca atc agc aag gtg ctg acc agc gat ttc gct gtc tgc ctc    1008

Leu Met Thr Ile Ser Lys Val Leu Thr Ser Asp Phe Ala Val Cys Leu

                325                 330                 335

agc atg aag aag ggg tcc atc gac tgc tcc tcc agg ctc gtc cca ctg    1056

Ser Met Lys Lys Gly Ser Ile Asp Cys Ser Ser Arg Leu Val Pro Leu

            340                 345                 350

gag ggg cag ctg ctg ttc tgg ggg gcc aag ctg gcg aac ttc ctg ttg    1104

Glu Gly Gln Leu Leu Phe Trp Gly Ala Lys Leu Ala Asn Phe Leu Leu

        355                 360                 365

cag att gtg ttg cca tgc tac ctc cac ggg aca gct atg ggc ctg gcc    1152

Gln Ile Val Leu Pro Cys Tyr Leu His Gly Thr Ala Met Gly Leu Ala

    370                 375                 380

ctc ttc tct gtt gct cac ctt gtg tcg ggg gag tac ctc gcg atc tgc    1200

Leu Phe Ser Val Ala His Leu Val Ser Gly Glu Tyr Leu Ala Ile Cys

385                 390                 395                 400

ttc atc atc aac cac atc agc gag tct tgt gag ttt atg aat aca agc    1248

Phe Ile Ile Asn His Ile Ser Glu Ser Cys Glu Phe Met Asn Thr Ser

                405                 410                 415

ttt caa acc gcc gcc cgg agg aca gag atg ctt cag gca gca cat cag    1296

Phe Gln Thr Ala Ala Arg Arg Thr Glu Met Leu Gln Ala Ala His Gln

            420                 425                 430

gca gcg gag gcc aag aag gtg aag ccc acc cct cca ccg aac gat tgg    1344

Ala Ala Glu Ala Lys Lys Val Lys Pro Thr Pro Pro Pro Asn Asp Trp

        435                 440                 445

gct gtg aca cag gtc caa tgc tgc gtg aat tgg aga tca ggt ggc gtg    1392

Ala Val Thr Gln Val Gln Cys Cys Val Asn Trp Arg Ser Gly Gly Val

    450                 455                 460

ttg gcc aat cac ctc tct gga ggc ttg aac cac cag atc gag cat cat    1440

Leu Ala Asn His Leu Ser Gly Gly Leu Asn His Gln Ile Glu His His

465                 470                 475                 480

ctg ttc ccc agc atc tcg cat gcc aac tac ccc acc atc gcc cct gtt    1488

Leu Phe Pro Ser Ile Ser His Ala Asn Tyr Pro Thr Ile Ala Pro Val

                485                 490                 495

gtg aag gag gtg tgc gag gag tac ggg ttg ccg tac aag aat tac gtc    1536

Val Lys Glu Val Cys Glu Glu Tyr Gly Leu Pro Tyr Lys Asn Tyr Val

            500                 505                 510

acg ttc tgg gat gca gtc tgt ggc atg gtt cag cac ctc cgg ttg atg    1584

Thr Phe Trp Asp Ala Val Cys Gly Met Val Gln His Leu Arg Leu Met

        515                 520                 525

ggt gct cca ccg gtg cca acg aac ggg gac aaa aag tca taa            1626

Gly Ala Pro Pro Val Pro Thr Asn Gly Asp Lys Lys Ser

    530                 535                 540

<210>40

<211>541

<212>PRT

<213>细小裸藻

<400>40

Met Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Val Lys Gln Tyr Ser Gln Lys

1               5                   10                  15

Asn Gly Lys Pro Glu Asn Gly Ala Thr Pro Glu Asn Gly Ala Lys Pro

            20                  25                  30

Gln Pro Cys Glu Asn Gly Thr Val Glu Lys Arg Glu Asn Asp Thr Ala

        35                  40                  45

Asn Val Arg Pro Thr Arg Pro Ala Gly Pro Pro Pro Ala Thr Tyr Tyr

    50                  55                  60

Asp Ser Leu Ala Val Ser Gly Gln Gly Lys Glu Arg Leu Phe Thr Thr

65                  70                  75                  80

Asp Glu Val Arg Arg His Ile Leu Pro Thr Asp Gly Trp Leu Thr Cys

                85                  90                  95

His Glu Gly Val Tyr Asp Val Thr Asp Phe Leu Ala Lys His Pro Gly

            100                 105                 110

Gly Gly Val Ile Thr Leu Gly Leu Gly Arg Asp Cys Thr Ile Leu Ile

        115                 120                 125

Glu Ser Tyr His Pro Ala Gly Arg Pro Asp Lys Val Met Glu Lys Tyr

    130                 135                 140

Arg Ile Gly Thr Leu Gln Asp Pro Lys Thr Phe Tyr Ala Trp Gly Glu

145                 150                 155                 160

Ser Asp Phe Tyr Pro Glu Leu Lys Arg Arg Ala Leu Ala Arg Leu Lys

                165                 170                 175

Glu Ala Gly Gln Ala Arg Arg Gly Gly Leu Gly Val Lys Ala Leu Leu

            180                 185                 190

Val Leu Thr Leu Phe Phe Val Ser Trp Tyr Met Trp Val Ala His Lys

        195                 200                 205

Ser Phe Leu Trp Ala Ala Val Trp Gly Phe Ala Gly Ser His Val Gly

    210                 215                 220

Leu Ser Ile Gln His Asp Gly Asn His Gly Ala Phe Ser Arg Asn Thr

225                 230                 235                 240

Leu Val Asn Arg Leu Ala Gly Trp Gly Met Asp Leu Ile Gly Ala Ser

                245                 250                 255

Ser Thr Val Trp Glu Tyr Gln His Val Ile Gly His His Gln Tyr Thr

            260                 265                 270

Asn Leu Val Ser Asp Thr Leu Phe Ser Leu Pro Glu Asn Asp Pro Asp

        275                 280                 285

Val Phe Ser Ser Tyr Pro Leu Met Arg Met His Pro Asp Thr Ala Trp

    290                 295                 300

Gln Pro His His Arg Phe Gln His Leu Phe Ala Phe Pro Leu Phe Ala

305                 310                 315                 320

Leu Met Thr Ile Ser Lys Val Leu Thr Ser Asp Phe Ala Val Cys Leu

                325                 330                 335

Ser Met Lys Lys Gly Ser Ile Asp Cys Ser Ser Arg Leu Val Pro Leu

            340                 345                 350

Glu Gly Gln Leu Leu Phe Trp Gly Ala Lys Leu Ala Asn Phe Leu Leu

        355                 360                 365

Gln Ile Val Leu Pro Cys Tyr Leu His Gly Thr Ala Met Gly Leu Ala

    370                 375                 380

Leu Phe Ser Val Ala His Leu Val Ser Gly Glu Tyr Leu Ala Ile Cys

385                 390                 395                 400

Phe Ile Ile Asn His Ile Ser Glu Ser Cys Glu Phe Met Asn Thr Ser

                405                 410                 415

Phe Gln Thr Ala Ala Arg Arg Thr Glu Met Leu Gln Ala Ala His Gln

            420                 425                 430

Ala Ala Glu Ala Lys Lys Val Lys Pro Thr Pro Pro Pro Asn Asp Trp

        435                 440                 445

Ala Val Thr Gln Val Gln Cys Cys Val Asn Trp Arg Ser Gly Gly Val

    450                 455                 460

Leu Ala Asn His Leu Ser Gly Gly Leu Asn His Gln Ile Glu His His

465                 470                 475                 480

Leu Phe Pro Ser Ile Ser His Ala Asn Tyr Pro Thr Ile Ala Pro Val

                485                 490                 495

Val Lys Glu Val Cys Glu Glu Tyr Gly Leu Pro Tyr Lys Asn Tyr Val

            500                 505                 510

Thr Phe Trp Asp Ala Val Cys Gly Met Val Gln His Leu Arg Leu Met

        515                 520                 525

Gly Ala Pro Pro Val Pro Thr Asn Gly Asp Lys Lys Ser

    530                 535                 540

<210>41

<211>1548

<212>DNA

<213>破囊壶菌

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1548)

<223>Δ4-去饱和酶

<400>41

atg acg gtc ggg ttt gac gaa acg gtg act atg gac acg gtc cgc aac    48

Met Thr Val Gly Phe Asp Glu Thr Val Thr Met Asp Thr Val Arg Asn

1               5                   10                  15

cac aac atg ccg gac gac gcc tgg tgc gcg atc cac ggc acc gtg tac    96

His Asn Met Pro Asp Asp Ala Trp Cys Ala Ile His Gly Thr Val Tyr

            20                  25                  30

gac atc acc aag ttc agc aag gtg cac ccc ggc ggg gac atc atc atg    144

Asp Ile Thr Lys Phe Ser Lys Val His Pro Gly Gly Asp Ile Ile Met

        35                  40                  45

ctg gcc gct ggc aag gag gcc acc atc ctg ttc gag acc tac cac atc    192

Leu Ala Ala Gly Lys Glu Ala Thr Ile Leu Phe Glu Thr Tyr His Ile

    50                  55                  60

aag ggc gtc ccg gac gcg gtg ctg cgc aag tac aag gtc ggc aag ctc    240

Lys Gly Val Pro Asp Ala Val Leu Arg Lys Tyr Lys Val Gly Lys Leu

65                  70                  75                  80

ccc cag ggc aag aag ggc gaa acg agc cac atg ccc acc ggg ctc gac    288

Pro Gln Gly Lys Lys Gly Glu Thr Ser His Met Pro Thr Gly Leu Asp

                85                  90                  95

tcg gcc tcc tac tac tcg tgg gac agc gag ttt tac agg gtg ctc cgc    336

Ser Ala Ser Tyr Tyr Ser Trp Asp Ser Glu Phe Tyr Arg Val Leu Arg

            100                 105                 110

gag cgc gtc gcc aag aag ctg gcc gag ccc ggc ctc atg cag cgc gcg    384

Glu Arg Val Ala Lys Lys Leu Ala Glu Pro Gly Leu Met Gln Arg Ala

        115                 120                 125

cgc atg gag ctc tgg gcc aag gcg atc ttc ctc ctg gca ggt ttc tgg    432

Arg Met Glu Leu Trp Ala Lys Ala Ile Phe Leu Leu Ala GlV Phe Trp

    130                 135                 140

ggc tcc ctt tac gcc atg tgc gtg cta gac ccg cac ggc ggt gcc atg    480

Gly Ser Leu Tyr Ala Met Cys Val Leu Asp Pro His Gly Gly Ala Met

145                 150                 155                 160

gta gcc gcc gtt acg ctc ggc gtg ttc gct gcc ttt gtc gga act tgc    528

Val Ala Ala Val Thr Leu Gly Val Phe Ala Ala Phe Val Gly Thr Cys

                165                 170                 175

atc cag cac gac ggc agc cac ggc gcc ttc tcc aag tcg cga ttc atg    576

Ile Gln His Asp Gly Ser His Gly Ala Phe Ser Lys Ser Arg Phe Met

            180                 185                 190

aac aag gcg gcg ggc tgg acc ctc gac atg atc ggc gcg agt gcg atg    624

Asn Lys Ala Ala Gly Trp Thr Leu Asp Met Ile Gly Ala Ser Ala Met

        195                 200                 205

acc tgg gag atg cag cac gtt ctt ggc cac cac ccg tac acc aac ctc    672

Thr Trp Glu Met Gln His Val Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn Leu

    210                 215                 220

atc gag atg gag aac ggt ttg gcc aag gtc aag ggc gcc gac gtc gac    720

Ile Glu Met Glu Asn Gly Leu Ala Lys Val Lys Gly Ala Asp Val Asp

225                 230                 235                 240

ccg aag aag gtc gac cag gag agc gac ccg gac gtc ttc agt acg tac    768

Pro Lys Lys Val Asp Gln Glu Ser Asp Pro Asp Val Phe Ser Thr Tyr

                245                 250                 255

ccg atg ctt cgc ctg cac ccg tgg cac cgc cag cgg ttt tac cac aag    816

Pro Met Leu Arg Leu His Pro Trp His Arg Gln Arg Phe Tyr His Lys

            260                 265                 270

ttc cag cac ctg tac gcc ccg ttt atc ttt ggg tct atg acg att aac    864

Phe Gln His Leu Tyr Ala Pro Phe Ile Phe Gly Ser Met Thr Ile Asn

        275                 280                 285

aag gtg att tcc cag gat gtc ggg gtt gtg ctg cgc aag cgc ctg ttc    912

Lys Val Ile Ser Gln Asp Val Gly Val Val Leu Arg Lys Arg Leu Phe

    290                 295                 300

cag atc gac gcc aac tgc cgg tat ggc agc ccc tgg tac gtg gcc cgc    960

Gln Ile Asp Ala Asn Cys Arg Tyr Gly Ser Pro Trp Tyr Val Ala Arg

305                 310                 315                 320

ttc tgg atc atg aag ctc ctc acc acg ctc tac atg gtg gcg ctt ccc    1008

Phe Trp Ile Met Lys Leu Leu Thr Thr Leu Tyr Met Val Ala Leu Pro

                325                 330                 335

atg tac atg cag ggg cct gct cag ggc ttg aag ctt ttc ttc atg gcc    1056

Met Tyr Met Gln Gly Pro Ala Gln Gly Leu Lys Leu Phe Phe Met Ala

            340                 345                 350

cac ttc acc tgc gga gag gtc ctc gcc acc atg ttt att gtc aac cac    1104

His Phe Thr Cys Gly Glu Val Leu Ala Thr Met Phe Ile Val Asn His

        355                 360                 365

atc atc gag ggc gtc agc tac gct tcc aag gac gcg gtc aag ggc gtc    1152

Ile Ile Glu Gly Val Ser Tyr Ala Ser Lys Asp Ala Val Lys Gly Val

    370                 375                 380

atg gct ccg ccg cgc act gtg cac ggt gtc acc ccg atg cag gtg acg    1200

Met Ala Pro Pro Arg Thr Val His Gly Val Thr Pro Met Gln Val Thr

385                 390                 395                 400

caa aag gcg ctc agt gcg gcc gag tcg gcc aag tcg gac gcc gac aag    1248

Gln Lys Ala Leu Ser Ala Ala Glu Ser Ala Lys Ser Asp Ala Asp Lys

                405                 410                 415

acg acc atg atc ccc ctc aac gac tgg gcc gct gtg cag tgc cag acc    1296

Thr Thr Met Ile Pro Leu Asn Asp Trp Ala Ala Val Gln Cys Gln Thr

            420                 425                 430

tct gtg aac tgg gct gtc ggg tcg tgg ttt tgg aac cac ttt tcg ggc    1344

Ser Val Asn Trp Ala Val Gly Ser Trp Phe Trp Asn His Phe Ser Gly

        435                 440                 445

ggc ctc aac cac cag att gag cac cac tgc ttc ccc caa aac ccc cac    1392

Gly Leu Asn His Gln Ile Glu His His Cys Phe Pro Gln Asn Pro His

    450                 455                 460

acg gtc aac gtc tac atc tcg ggc atc gtc aag gag acc tgc gaa gaa    1440

Thr Val Asn Val Tyr Ile Ser Gly Ile Val Lys Glu Thr Cys Glu Glu

465                 470                 475                 480

tac ggc gtg ccg tac cag gct gag atc agc ctc ttc tct gcc tat ttc    1488

Tyr Gly Val Pro Tyr Gln Ala Glu Ile Ser Leu Phe Ser Ala Tyr Phe

                485                 490                 495

aag atg ctg tcg cac ctc cgc acg ctc ggc aac gag gac ctc acg gcc    1536

Lys Met Leu Ser His Leu Arg Thr Leu Gly Asn Glu Asp Leu Thr Ala

            500                 505                 510

tgg tcc acg tga                                                    1548

Trp Ser Thr

        515

<210>42

<211>515

<212>PRT

<213>破囊壶菌

<400>42

Met Thr Val Gly Phe Asp Glu Thr Val Thr Met Asp Thr Val Arg Asn

1               5                   10                  15

His Asn Met Pro Asp Asp Ala Trp Cys Ala Ile His Gly Thr Val Tyr

            20                  25                  30

Asp Ile Thr Lys Phe Ser Lys Val His Pro Gly Gly Asp Ile Ile Met

        35                  40                  45

Leu Ala Ala Gly Lys Glu Ala Thr Ile Leu Phe Glu Thr Tyr His Ile

    50                  55                  60

Lys Gly Val Pro Asp Ala Val Leu Arg Lys Tyr Lys Val Gly Lys Leu

65                  70                  75                  80

Pro Gln Gly Lys Lys Gly Glu Thr Ser His Met Pro Thr Gly Leu Asp

                85                  90                  95

Ser Ala Ser Tyr Tyr Ser Trp Asp Ser Glu Phe Tyr Arg Val Leu Arg

            100                 105                 110

Glu Arg Val Ala Lys Lys Leu Ala Glu Pro Gly Leu Met Gln Arg Ala

        115                 120                 125

Arg Met Glu Leu Trp Ala Lys Ala Ile Phe Leu Leu Ala Gly Phe Trp

    130                 135                 140

Gly Ser Leu Tyr Ala Met Cys Val Leu Asp Pro His Gly Gly Ala Met

145                 150                 155                 160

Val Ala Ala Val Thr Leu Gly Val Phe Ala Ala Phe Val Gly Thr Cys

                165                 170                 175

Ile Gln His Asp Gly Ser His Gly Ala Phe Ser Lys Ser Arg Phe Met

            180                 185                 190

Asn Lys Ala Ala Gly Trp Thr Leu Asp Met Ile Gly Ala Ser Ala Met

        195                 200                 205

Thr Trp Glu Met Gln His Val Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn Leu

    210                 215                 220

Ile Glu Met Glu Asn Gly Leu Ala Lys Val Lys Gly Ala Asp Val Asp

225                 230                 235                 240

Pro Lys Lys Val Asp Gln Glu Ser Asp Pro Asp Val Phe Ser Thr Tyr

                245                 250                 255

Pro Met Leu Arg Leu His Pro Trp His Arg Gln Arg Phe Tyr His Lys

            260                 265                 270

Phe Gln His Leu Tyr Ala Pro Phe Ile Phe Gly Ser Met Thr Ile Asn

        275                 280                 285

Lys Val Ile Ser Gln Asp Val Gly Val Val Leu Arg Lys Arg Leu Phe

    290                 295                 300

Gln Ile Asp Ala Asn Cys Arg Tyr Gly Ser Pro Trp Tyr Val Ala Arg

305                 310                 315                 320

Phe Trp Ile Met Lys Leu Leu Thr Thr Leu Tyr Met Val Ala Leu Pro

                325                 330                 335

Met Tyr Met Gln Gly Pro Ala Gln Gly Leu Lys Leu Phe Phe Met Ala

            340                 345                 350

His Phe Thr Cys Gly Glu Val Leu Ala Thr Met Phe Ile Val Asn His

        355                 360                 365

Ile Ile Glu Gly Val Ser Tyr Ala Ser Lys Asp Ala Val Lys Gly Val

    370                 375                 380

Met Ala Pro Pro Arg Thr Val His Gly Val Thr Pro Met Gln Val Thr

385                 390                 395                 400

Gln Lys Ala Leu Ser Ala Ala Glu Ser Ala Lys Ser Asp Ala Asp Lys

                405                 410                 415

Thr Thr Met Ile Pro Leu Asn Asp Trp Ala Ala Val Gln Cys Gln Thr

            420                 425                 430

Ser Val Asn Trp Ala Val Gly Ser Trp Phe Trp Asn His Phe Ser Gly

        435                 440                 445

Gly Leu Asn His Gln Ile Glu His His Cys Phe Pro Gln Asn Pro His

    450                 455                 460

Thr Val Asn Val Tyr Ile Ser Gly Ile Val Lys Glu Thr Cys Glu Glu

465                 470                 475                 480

Tyr Gly Val Pro Tyr Gln Ala Glu Ile Ser Leu Phe Ser Ala Tyr Phe

                485                 490                 495

Lys Met Leu Ser His Leu Arg Thr Leu Gly Asn Glu Asp Leu Thr Ala

            500                 505                 510

Trp Ser Thr

        515

<210>43

<211>960

<212>DNA

<213>假矮海链藻(Thalassiosira pseudonana)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(960)

<223>Δ5-延伸酶

<400>43

atg gtg ttg tac aat gtg gcg caa gtg ctg ctc aat ggg tgg acg gtg        48

Met Val Leu Tyr Asn Val Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val

1               5                   10                  15

tat gcg att gtg gat gcg gtg atg aat aga gac cat ccg ttt att gga        96

Tyr Ala Ile Val Asp Ala Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly

            20                  25                  30

agt aga agt ttg gtt ggg gcg gcg ttg cat agt ggg agc tcg tat gcg        144

Ser Arg Ser Leu Val Gly Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala

        35                  40                  45

gtg tgg gtt cat tat tgt gat aag tat ttg gag ttc ttt gat acg tat        192

Val Trp Val His Tyr Cys Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr

    50                  55                  60

ttt atg gtg ttg agg ggg aaa atg gac cag atg gta ctt ggt gaa gtt        240

Phe Met Val Leu Arg Gly Lys Met Asp Gin Met Val Leu Gly Glu Val

65                  70                  75                  80

ggt ggc agt gtg tgg tgt ggc gtt gga tat atg gat atg gag aag atg        288

Gly Gly Ser Val Trp Cys Gly Val Gly Tyr Met Asp Met Glu Lys Met

                85                  90                  95

ata cta ctc agc ttt gga gtg cat cgg tct gct cag gga acg ggg aag        336

Ile Leu Leu Ser Phe Gly Val His Arg Ser Ala Gln Gly Thr Gly Lys

            100                 105                 110

gct ttc acc aac aac gtt acc aat cca cat ctc acg ctt cca cct cat        384

Ala Phe Thr Asn Asn Val Thr Asn Pro His Leu Thr Leu Pro Pro His

        115                 120                 125

tct aca aaa aca aaa aaa cag gtc tcc ttc ctc cac atc tac cac cac        432

Ser Thr Lys Thr Lys Lys Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His

    130                 135                 140

acg acc ata gcg tgg gca tgg tgg atc gcc ctc cgc ttc tcc ccc ggt        480

Thr Thr Ile Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly

145                 150                 155                 160

gga gac att tac ttc ggg gca ctc ctc aac tcc atc atc cac gtc ctc        528

Gly Asp Ile Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu

                165                 170                 175

atg tat tcc tac tac gcc ctt gcc cta ctc aag gtc agt tgt cca tgg        576

Met Tyr Ser Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp

            180                 185                 190

aaa cga tac ctg act caa gct caa tta ttg caa ttc aca agt gtg gtg        624

Lys Arg Tyr Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val

        195                 200                 205

gtt tat acg ggg tgt acg ggt tat act cat tac tat cat acg aag cat        672

Val Tyr Thr Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His

    210                 215                 220

gga gcg gat gag aca cag cct agt tta gga acg tat tat ttc tgt tgt        720

Gly Ala Asp Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys

225                 230                 235                 240

gga gtg cag gtg ttt gag atg gtt agt ttg ttt gta ctc ttt tcc atc        768

Gly Val Gln Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile

                245                 250                 255

ttt tat aaa cga tcc tat tcg aag aag aac aag tca gga gga aag gat    816

Phe Tyr Lys Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp

            260                 265                 270

agc aag aag aat gat gat ggg aat aat gag gat caa tgt cac aag gct    864

Ser Lys Lys Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala

        275                 280                 285

atg aag gat ata tcg gag ggt gcg aag gag gtt gtg ggg cat gca gcg    912

Met Lys Asp Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala

    290                 295                 300

aag gat gct gga aag ttg gtg gct acg aga gta agg tgt aag gtg taa    960

Lys Asp Ala Gly Lys Leu Val Ala Thr Arg Val Arg Cys Lys Val

305                 310                 315

<210>44

<211>319

<212>PRT

<213>假矮海链藻

<400>44

Met Val Leu Tyr Asn Val Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val

l               5                   10                  15

Tyr Ala Ile Val Asp Ala Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly

            20                  25                  30

Ser Arg Ser Leu Val Gly Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala

        35                  40                  45

Val Trp Val His Tyr Cys Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr

    50                  55                  60

Phe Met Val Leu Arg Gly Lys Met Asp Gln Met Val Leu Gly Glu Val

65                  70                  75                  80

Gly Gly Ser Val Trp Cys Gly Val Gly Tyr Met Asp Met Glu Lys Met

                85                  90                  95

Ile Leu Leu Ser Phe Gly Val His Arg Ser Ala Gln Gly Thr Gly Lys

            100                 105                 110

Ala Phe Thr Asn Asn Val Thr Asn Pro His Leu Thr Leu Pro Pro His

        115                 120                 125

Ser Thr Lys Thr Lys Lys Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His

    130                 135                 140

Thr Thr Ile Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly

145                 150                 155                 160

Gly Asp Ile Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu

                165                 170                 175

Met Tyr Ser Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp

            180                 185                 190

Lys Arg Tyr Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val

        195                 200                 205

Val Tyr Thr Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His

    210                 215                 220

Gly Ala Asp Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys

225                 230                 235                 240

Gly Val Gln Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile

                245                 250                 255

Phe Tyr Lys Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp

            260                 265                 270

Ser Lys Lys Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala

        275                 280                 285

Met Lys Asp Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala

    290                 295                 300

Lys Asp Ala Gly Lys Leu Val Ala Thr Arg Val Arg Cys Lys Val

305                 310                 315

<210>45

<211>819

<212>DNA

<213>假矮海链藻

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(819)

<223>Δ5-延伸酶

<400>45

atg gac gcc tac aac gct gca atg gat aag atc ggt gcc gcc atc atc    48

Met Asp Ala Tyr Asn Ala Ala Met Asp Lys Ile Gly Ala Ala Ile Ile

1               5                   10                  15

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Asp Trp Ser Asp Pro Asp Gly Lys Phe Arg Ala Asp Arg Glu Asp Trp

            20                  25                  30

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        35                  40                  45

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Ala Phe Val Ile Leu Gly Ser Ala Val Met Gln Ser Leu Pro Ala Met

    50                  55                  60

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Asp Pro Tyr Pro Ile Lys Phe Leu Tyr Asn Val Ser Gln Ile Phe Leu

65                  70                  75                  80

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                85                  90                  95

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            100                 105                 110

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Ala Asn Leu Leu Trp Leu Phe Tyr Ile Ser Lys Val Trp Asp Phe Trp

        115                 120                 125

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Asp Thr Ile Phe Ile Val Leu Gly Lys Lys Trp Arg Gln Leu Ser Phe

    130                 135                 140

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Leu His Val Tyr His His Thr Thr Ile Phe Leu Phe Tyr Trp Leu Asn

145                 150                 155                 160

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Ala Asn Val Leu Tyr Asp Gly Asp Ile Phe Leu Thr Ile Leu Leu Asn

                165                 170                 175

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Gly Phe Ile His Thr Val Met Tyr Thr Tyr Tyr Phe Ile Cys Met His

            180                 185                 190

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    210                 215                 220

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Ala Thr Tyr Leu Val Phe His Gly Cys Asp Lys Val Ser Leu Arg Ile

225                 230                 235                 240

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Thr Ile Val Tyr Phe Val Ser Lau Leu Ser Leu Phe Phe Leu Phe Ala

                245                 250                 255

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Gln Phe Phe Val Gln Ser Tyr Met Ala Pro Lys Lys Lys Lys Ser Ala

            260                 265                 270

tag                                                                819

<210>46

<211>272

<212>PRT

<213>假矮海链藻

<400>46

Met Asp Ala Tyr Asn Ala Ala Met Asp Lys Ile Gly Ala Ala Ile Ile

1               5                   10                  15

Asp Trp Ser Asp Pro Asp Gly Lys Phe Arg Ala Asp Arg Glu Asp Trp

            20                  25                  30

Trp Leu Cys Asp Phe Arg Ser Ala Ile Thr Ile Ala Leu Ile Tyr Ile

        35                  40                  45

Ala Phe Val Ile Leu Gly Ser Ala Val Met Gln Ser Leu Pro Ala Met

    50                  55                  60

Asp Pro Tyr Pro Ile Lys Phe Leu Tyr Asn Val Ser Gln Ile Phe Leu

65                  70                  75                  80

Cys Ala Tyr Met Thr Val Glu Ala Gly Phe Leu Ala Tyr Arg Asn Gly

                85                  90                  95

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            100                 105                 110

Ala Asn Leu Leu Trp Leu Phe Tyr Ile Ser Lys Val Trp Asp Phe Trp

        115                 120                 125

Asp Thr Ile Phe Ile Val Leu Gly Lys Lys Trp Arg Gln Leu Ser Phe

    130                 135                 140

Leu His Val Tyr His His Thr Thr Ile Phe Leu Phe Tyr Trp Leu Asn

145                 150                 155                 160

Ala Asn Val Leu Tyr Asp Gly Asp Ile Phe Leu Thr Ile Leu Leu Asn

                165                 170                 175

Gly Phe Ile His Thr Val Met Tyr Thr Tyr Tyr Phe Ile Cys Met His

            180                 185                 190

Thr Lys Asp Ser Lys Thr Gly Lys Ser Leu Pro Ile Trp Trp Lys Ser

        195                 200                 205

Ser Leu Thr Ala Phe Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ile Met Met Ser Gln

    210                 215                 220

Ala Thr Tyr Leu Val Phe His Gly Cys Asp Lys Val Ser Leu Arg Ile

225                 230                 235                 240

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                245                 250                 255

Gln Phe Phe Val Gln Ser Tyr Met Ala Pro Lys Lys Lys Lys Ser Ala

            260                 265                 270

<210>47

<211>936

<212>DNA

<213>寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(936)

<223>Δ5-延伸酶

<400>47

atg tct gcc ttc atg act ctc cca cag gct ctc tcc gat gtg acc tcg    48

Met Ser Ala Phe Met Thr Leu Pro Gln Ala Leu Ser Asp Val Thr Ser

1               5                   10                  15

gcc ttg gtc acg ctg gga aag gat gtc tcc agc cct tca gct ttt caa    96

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            20                  25                  30

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Ala Val Thr Gly Phe Cys Arg Glu Gln Trp Gly Ile Pro Thr Val Phe

        35                  40                  45

tgc ctg ggc tac ttg gcc atg gtc tac gcg gcc aga aga ccc ctc ccg    192

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    50                  55                  60

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Gln His Gly Tyr Met Val Ala Val Asp Arg Cys Phe Ala Ala Trp Asn

65                  70                  75                  80

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Leu Ala Leu Ser Val Phe Ser Thr Trp Gly Phe Tyr His Met Ala Val

                85                  90                  95

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Thr Val Phe Leu Ile Leu Lys Ala Lys Lys Val Arg Phe Leu Gln Trp

145                 150                 155                 160

tac cac cat gcc aca gtc atg ctc ttc tgt tgg ctc gcc ctc gcg acg    528

Tyr His His Ala Thr Val Met Leu Phe Cys Trp Leu Ala Leu Ala Thr

                165                 170                 175

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Glu Tyr Thr Pro Gly Leu Trp Phe Ala Ala Thr Asn Tyr Phe Val His

            180                 185                 190

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Ser Ile Met Tyr Met Tyr Phe Phe Leu Met Thr Phe Lys Ser Ala Ala

        195                 200                 205

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Lys Val Val Lys Pro Ile Ala Pro Leu Ile Thr Val Ile Gln Ile Ala

    210                 215                 220

cag atg gtc tgg ggc ctc atc gtc aac ggc atc gcc atc acc acc ttc    720

Gln Met Val Trp Gly Leu Ile Val Asn Gly Ile Ala Ile Thr Thr Phe

225                 230                 235                 240

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Phe Thr Thr Gly Ala Cys Gln Ile Gln Ser Val Thr Val Tyr Ser Ala

                245                 250                 255

atc atc atg tac gct tcg tac ttc tac ctg ttc tcc cag ctc ttc ttc    816

Ile Ile Met Tyr Ala Ser Tyr Phe Tyr Leu Phe Ser Gln Leu Phe Phe

            260                 265                 270

gag gcc cat ggt gcc gct ggc aag aac aag aag aag ttg acc cgc gag    864

Glu Ala His Gly Ala Ala Gly Lys Asn Lys Lys Lys Leu Thr Arg Glu

        275                 280                 285

ctc tct cga aaa atc tcg gag gct ctc ctg aac acc ggt gac gag gtt    912

Leu Ser Arg Lys Ile Ser Glu Ala Leu Leu Asn Thr Gly Asp Glu Val

    290                 295                 300

tcc aag cac ctg aag gtg aat tga                                    936

Ser Lys His Leu Lys Val Asn

305                 310

<210>48

<211>311

<212>PRT

<213>寇氏隐甲藻

<400>48

Met Ser Ala Phe Met Thr Leu Pro Gln Ala Leu Ser Asp Val Thr Ser

1               5                   10                  15

Ala Leu Val Thr Leu Gly Lys Asp Val Ser Ser Pro Ser Ala Phe Gln

            20                  25                  30

Ala Val Thr Gly Phe Cys Arg Glu Gln Trp Gly Ile Pro Thr Val Phe

        35                  40                  45

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    50                  55                  60

Gln His Gly Tyr Met Val Ala Val Asp Arg Cys Phe Ala Ala Trp Asn

65                  70                  75                  80

Leu Ala Leu Ser Val Phe Ser Thr Trp Gly Phe Tyr His Met Ala Val

                85                  90                  95

Gly Leu Tyr Asn Met Thr Glu Thr Arg Gly Leu Gln Phe Thr Ile Cys

            100                 105                 110

Gly Ser Thr Gly Glu Leu Val Gln Asn Leu Gln Thr Gly Pro Thr Ala

        115                 120                 125

Leu Ala Leu Cys Leu Phe Cys Phe Ser Lys Ile Pro Glu Leu Met Asp

    130                 135                 140

Thr Val Phe Leu Ile Leu Lys Ala Lys Lys Val Arg Phe Leu Gln Trp

145                 150                 155                 160

Tyr His His Ala Thr Val Met Leu Phe Cys Trp Leu Ala Leu Ala Thr

                165                 170                 175

Glu Tyr Thr Pro Gly Leu Trp Phe Ala Ala Thr Asn Tyr Phe Val His

            180                 185                 190

Ser Ile Met Tyr Met Tyr Phe Phe Leu Met Thr Phe Lys Ser Ala Ala

        195                 200                 205

Lys Val Val Lys Pro Ile Ala Pro Leu Ile Thr Val Ile Gln Ile Ala

    210                 215                 220

Gln Met Val Trp Gly Leu Ile Val Asn Gly Ile Ala Ile Thr Thr Phe

225                 230                 235                 240

Phe Thr Thr Gly Ala Cys Gln Ile Gln Ser Val Thr Val Tyr Ser Ala

                245                 250                 255

Ile Ile Met Tyr Ala Ser Tyr Phe Tyr Leu Phe Ser Gln Leu Phe Phe

            260                 265                 270

Glu Ala His Gly Ala Ala Gly Lys Asn Lys Lys Lys Leu Thr Arg Glu

        275                 280                 285

Leu Ser Arg Lys Ile Ser Glu Ala Leu Leu Asn Thr Gly Asp Glu Val

    290                 295                 300

Ser Lys His Leu Lys Val Asn

305                 310

<210>49

<211>927

<212>DNA

<213>寇氏隐甲藻

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(927)

<223>Δ5-延伸酶

<400>49

atg gct tcc tac caa caa gca ttc tcc gaa ttg gct aga gct ttg tcc    48

Met Ala Ser Tyr Gln Gln Ala Phe Ser Glu Leu Ala Arg Ala Leu Ser

1               5                   10                  15

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Thr Leu Asn His Asp Phe Ser Ser Val Glu Pro Phe Lys Val Val Thr

            20                  25                  30

cag ttc tgc agg gac cag tgg gcg atc ccg aca gtc ttt tgc atc ggt    144

Gln Phe Cys Arg Asp Gln Trp Ala Ile Pro Thr Val Phe Cys Ile Gly

        35                  40                  45

tac ttg gca atg gtc tac gcc acg cga aga cct atc gcg aag cac ccc    192

Tyr Leu Ala Met Val Tyr Ala Thr Arg Arg Pro Ile Ala Lys His Pro

    50                  55                  60

tac atg tct ctc gtg gat cgc tgc ttt gcg gcc tgg aac ttg ggc ctc    240

Tyr Met Ser Leu Val Asp Arg Cys Phe Ala Ala Trp Asn Leu Gly Leu

65                  70                  75                  80

tcg ctc ttc agt tgc tgg ggc ttc tac cac atg gca gtg gga ctc tcc    288

Ser Leu Phe Ser Cys Trp Gly Phe Tyr His Met Ala Val Gly Leu Ser

                85                  90                  95

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            100                 105                 110

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Thr Glu Leu Val Asn Gly Phe Gln Lys Gly Pro Ala Ala Leu Ala Leu

        115                 120                 125

atc ctg ttc tgc ttc tcc aag atc ccg gag ttg ggc gac acc gtc ttc    432

Ile Leu Phe Cys Phe Ser Lys Ile Pro Glu Leu Gly Asp Thr Val Phe

    130                 135                 140

ttg atc ttg aag gga aag aag gtc cgc ttc ttg cag tgg tac cac cac    480

Leu Ile Leu Lys Gly Lys Lys Val Arg Phe Leu Gln Trp Tyr His His

145                 150                 155                 160

acg acc gtg atg ctc ttc tgt tgg atg gcc ttg gcg act gag tac act    528

Thr Thr Val Met Leu Phe Cys Trp Met Ala Leu Ala Thr Glu Tyr Thr

                165                 170                 175

cct gga ttg tgg ttc gcg gcc acg aac tac ttc gtg cac tcc atc atg    576

Pro Gly Leu Trp Phe Ala Ala Thr Asn Tyr Phe Val His Ser Ile Met

            180                 185                 190

tac atg tac ttc ttc ctc atg acc ttc aag acg gcc gcc ggc atc atc    624

Tyr Met Tyr Phe Phe Leu Met Thr Phe Lys Thr Ala Ala Gly Ile Ile

        195                 200                 205

aag ccc atc gcg cct ctc atc acc atc atc cag atc tcc cag atg gtc    672

Lys Pro Ile Ala Pro Leu Ile Thr Ile Ile Gln Ile Ser Gln Met Val

    210                 215                 220

tgg ggc ttg gtc gtg aac gcc atc gcc gtc ggc acc ttc ttc acc aca    720

Trp Gly Leu Val Val Asn Ala Ile Ala Val Gly Thr Phe Phe Thr Thr

225                 230                 235                 240

ggc aac tgc cag atc cag gca gtg aca gtc tac tcc gcc atc gtg atg    768

Gly Asn Cys Gln Ile Gln Ala Val Thr Val Tyr Ser Ala Ile Val Met

                245                 250                 255

tac gcc tcc tac ttc tac ctc ttc ggc cag ctc ttc ttc gag gcc cag    816

Tyr Ala Ser Tyr Phe Tyr Leu Phe Gly Gln Leu Phe Phe Glu Ala Gln

            260                 265                 270

ggt tcg gct gga aag gac aag aag aag ttg gcc cga gag ctg agc cga    864

Gly Ser Ala Gly Lys Asp Lys Lys Lys Leu Ala Arg Glu Leu Ser Arg

        275                 280                 285

aag gtc tcg cgg gct ctc aca gca acg ggc gaa gag gtg tcg aag cac    912

Lys Val Ser Arg Ala Leu Thr Ala Thr Gly Glu Glu Val Ser Lys His

    290                 295                 300

atg aag gtg aat tga                                                927

Met Lys Val Asn

305

<210>50

<211>308

<212>PRT

<213>寇氏隐甲藻

<400>50

Met Ala Ser Tyr Gln Gln Ala Phe Ser Glu Leu Ala Arg Ala Leu Ser

1               5                   10                  15

Thr Leu Asn His Asp Phe Ser Ser Val Glu Pro Phe Lys Val Val Thr

            20                  25                  30

Gln Phe Cys Arg Asp Gln Trp Ala Ile Pro Thr Val Phe Cys Ile Gly

        35                  40                  45

Tyr Leu Ala Met Val Tyr Ala Thr Arg Arg Pro Ile Ala Lys His Pro

    50                  55                  60

Tyr Met Ser Leu Val Asp Arg Cys Phe Ala Ala Trp Asn Leu Gly Leu

65                  70                  75                  80

Ser Leu Phe Ser Cys Trp Gly Phe Tyr His Met Ala Val Gly Leu Ser

                85                  90                  95

His Thr Thr Trp Asn Phe Gly Leu Gln Phe Thr Ile Cys Gly Ser Thr

            100                 105                 110

Thr Glu Leu Val Asn Gly Phe Gln Lys Gly Pro Ala Ala Leu Ala Leu

        115                 120                 125

Ile Leu Phe Cys Phe Ser Lys Ile Pro Glu Leu Gly Asp Thr Val Phe

    130                 135                 140

Leu Ile Leu Lys Gly Lys Lys Val Arg Phe Leu Gln Trp Tyr His His

145                 150                 155                 160

Thr Thr Val Met Leu Phe Cys Trp Met Ala Leu Ala Thr Glu Tyr Thr

                165                 170                 175

Pro Gly Leu Trp Phe Ala Ala Thr Asn Tyr Phe Val His Ser Ile Met

            180                 185                 190

Tyr Met Tyr Phe Phe Leu Met Thr Phe Lys Thr Ala Ala Gly Ile Ile

        195                 200                 205

Lys Pro Ile Ala Pro Leu Ile Thr Ile Ile Gln Ile Ser Gln Met Val

    210                 215                 220

Trp Gly Leu Val Val Asn Ala Ile Ala Val Gly Thr Phe Phe Thr Thr

225                 230                 235                 240

Gly Asn Cys Gln Ile Gln Ala Val Thr Val Tyr Ser Ala Ile Val Met

                245                 250                 255

Tyr Ala Ser Tyr Phe Tyr Leu Phe Gly Gln Leu Phe Phe Glu Ala Gln

            260                 265                 270

Gly Ser Ala Gly Lys Asp Lys Lys Lys Leu Ala Arg Glu Leu Ser Arg

        275                 280                 285

Lys Val Ser Arg Ala Leu Thr Ala Thr Gly Glu Glu Val Ser Lys His

    290                 295                 300

Met Lys Val Asn

305

<210>51

<211>795

<212>DNA

<213>虹鳟(Oncorhynchus mykiss)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(795)

<223>Δ5-延伸酶

<400>51

atg gct tca aca tgg caa agc gtt cag tcc atg cgc cag tgg att tta    48

Met Ala Ser Thr Trp Gln Ser Val Gln Ser Met Arg Gln Trp Ile Leu

1               5                   10                  15

gag aat gga gat aaa agg aca gac cca tgg cta ctg gtc tac tcc cct    96

Glu Asn Gly Asp Lys Arg Thr Asp Pro Trp Leu Leu Val Tyr Ser Pro

            20                  25                  30

atg cca gtg gcc att ata ttc ctc ctc tat ctt ggt gtg gtc tgg gct    144

Met Pro Val Ala Ile Ile Phe Leu Leu Tyr Leu Gly Val Val Trp Ala

        35                  40                  45

ggg ccc aag ctg atg aaa cgc agg gaa cca gtt gat ctc aag gct gta    192

Gly Pro Lys Leu Met Lys Arg Arg Glu Pro Val Asp Leu Lys Ala Val

    50                  55                  60

ctc att gtc tac aac ttc gcc atg gtc tgc ctg tct gtc tac atg ttc    240

Leu Ile Val Tyr Asn Phe Ala Met Val Cys Leu Ser Val Tyr Met Phe

65                  70                  75                  80

cat gag ttc ttg gtc acg tcc ttg ctg tct aac tac agt tac ctg tgt    288

His Glu Phe Leu Val Thr Ser Leu Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr Leu Cys

                85                  90                  95

caa cct gtg gat tac agc act agt cca ctg gcg atg agg atg gcc aaa    336

Gln Pro Val Asp Tyr Ser Thr Ser Pro Leu Ala Met Arg Met Ala Lys

            100                 105                 110

gta tgc tgg tgg ttt ttc ttc tcc aag gtc ata gaa ttg gct gac acg    384

Val Cys Trp Trp Phe Phe Phe Ser Lys Val Ile Glu Leu Ala Asp Thr

        115                 120                 125

gtg ttc ttc atc ctg agg aag aag aac agt cag ctg act ttc ctg cat    432

Val Phe Phe Ile Leu Arg Lys Lys Asn Ser Gln Leu Thr Phe Leu His

    130                 135                 140

gtc tat cac cat ggc acc atg atc ttc aac tgg tgg gca ggg gtc aag    480

Val Tyr His His Gly Thr Met Ile Phe Asn Trp Trp Ala Gly Val Lys

145                 150                 155                 160

tat ctg gct gga ggc caa tcg ttc ttc atc ggc ctg ctc aat acc ttt    528

Tyr Leu Ala Gly Gly Gln Ser Phe Phe Ile Gly Leu Leu Asn Thr Phe

                165                 170                 175

gtg cac atc gtg atg tac tct tac tac gga ctg gct gcc ctg ggg cct    576

Val His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ala Ala Leu Gly Pro

            180                 185                 190

cac acg cag aag tac tta tgg tgg aag cgc tat ctg acc tca ctg cag    624

His Thr Gln Lys Tyr Leu Trp Trp Lys Arg Tyr Leu Thr Ser Leu Gln

        195                 200                 205

ctg ctc cag ttt gtc ctg ttg acc act cac act ggc tac aac ctc ttc    672

Leu Leu Gln Phe Val Leu Leu Thr Thr His Thr Gly Tyr Asn Leu Phe

    210                 215                 220

act gag tgt gac ttc ccg gac tcc atg aac gct gtg gtg ttt gcc tac    720

Thr Glu Cys Asp Phe Pro Asp Ser Met Asn Ala Val Val Phe Ala Tyr

225                 230                 235                 240

tgt gtc agt ctc att gct ctc ttc agc aac ttc tac tat cag agc tac    768

Cys Val Ser Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Tyr Gln Ser Tyr

                245                 250                 255

ctc aac agg aag agc aag aag aca taa                                795

Leu Asn Arg Lys Ser Lys Lys Thr

            260

<210>52

<211>264

<212>PRT

<213>虹鳟

<400>52

Met Ala Ser Thr Trp Gln Ser Val Gln Ser Met Arg Gln Trp Ile Leu

1               5                   10                  15

Glu Asn Gly Asp Lys Arg Thr Asp Pro Trp Leu Leu Val Tyr Ser Pro

            20                  25                  30

Met Pro Val Ala Ile Ile Phe Leu Leu Tyr Leu Gly Val Val Trp Ala

        35                  40                  45

Gly Pro Lys Leu Met Lys Arg Arg Glu Pro Val Asp Leu Lys Ala Val

    50                  55                  60

Leu Ile Val Tyr Asn Phe Ala Met Val Cys Leu Ser Val Tyr Met Phe

65                  70                  75                  80

His Glu Phe Leu Val Thr Ser Leu Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr Leu Cys

                85                  90                  95

Gln Pro Val Asp Tyr Ser Thr Ser Pro Leu Ala Met Arg Met Ala Lys

            100                 105                 110

Val Cys Trp Trp Phe Phe Phe Ser Lys Val Ile Glu Leu Ala Asp Thr

        115                 120                 125

Val Phe Phe Ile Leu Arg Lys Lys Asn Ser Gln Leu Thr Phe Leu His

    130                 135                 140

Val Tyr His His Gly Thr Met Ile Phe Asn Trp Trp Ala Gly Val Lys

145                 150                 155                 160

Tyr Leu Ala Gly Gly Gln Ser Phe Phe Ile Gly Leu Leu Asn Thr Phe

                165                 170                 175

Val His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ala Ala Leu Gly Pro

            180                 185                 190

His Thr Gln Lys Tyr Leu Trp Trp Lys Arg Tyr Leu Thr Ser Leu Gln

        195                 200                 205

Leu Leu Gln Phe Val Leu Leu Thr Thr His Thr Gly Tyr Asn Leu Phe

    210                 215                 220

Thr Glu Cys Asp Phe Pro Asp Ser Met Asn Ala Val Val Phe Ala Tyr

225                 230                 235                 240

Cys Val Ser Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Tyr Gln Ser Tyr

                245                 250                 255

Leu Asn Arg Lys Ser Lys Lys Thr

            260

<210>53

<211>885

<212>DNA

<213>虹鳟

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(885)

<223>Δ5-延伸酶

<400>53

atg gag act ttt aat tat aaa cta aac atg tac ata gac tca tgg atg    48

Met Glu Thr Phe Asn Tyr Lys Leu Asn Met Tyr Ile Asp Ser Trp Met

1               5                   10                  15

ggt ccc aga gat gag cgg gta cag gga tgg ctg ctt ctg gac aac tac    96

Gly Pro Arg Asp Glu Arg Val Gln Gly Trp Leu Leu Leu Asp Asn Tyr

            20                  25                  30

cct cca acc ttt gca cta aca gtc atg tac ctg ctg atc gta tgg atg    144

Pro Pro Thr Phe Ala Leu Thr Val Met Tyr Leu Leu Ile Val Trp Met

        35                  40                  45

ggg ccc aag tac atg aga cac aga cag ccg gtg tct tgc cgg ggt ctc    192

Gly Pro Lys Tyr Met Arg His Arg Gln Pro Val Ser Cys Arg Gly Leu

    50                  55                  60

ctc ttg gtc tac aat ctg ggc ctc acg atc ttg tcc ttc tat atg ttc    240

Leu Leu Val Tyr Asn Leu Gly Leu Thr Ile Leu Ser Phe Tyr Met Phe

65                  70                  75                  80

tat gag atg gtg tct gct gtg tgg cac ggg gat tat aac ttc ttt tgc    288

Tyr Glu Met Val Ser Ala Val Trp His Gly Asp Tyr Asn Phe Phe Cys

                85                  90                  95

caa gac aca cac agt gca gga gaa acc gat acc aag atc ata aat gtg    336

Gln Asp Thr His Ser Ala Gly Glu Thr Asp Thr Lys Ile Ile Asn Val

            100                 105                 110

ctg tgg tgg tac tac ttc tcc aag ctc ata gag ttt atg gat acc ttc    384

Leu Trp Trp Tyr Tyr Phe Ser Lys Leu Ile Glu Phe Met Asp Thr Phe

        115                 120                 125

ttc ttc atc ctg cgg aag aac aac cat caa atc acg ttt ctg cac atc    432

Phe Phe Ile Leu Arg Lys Asn Asn His Gln Ile Thr Phe Leu His Ile

    130                 135                 140

tac cac cat gct agc atg ctc aac atc tgg tgg ttc gtc atg aac tgg    480

Tyr His His Ala Ser Met Leu Asn Ile Trp Trp Phe Val Met Asn Trp

145                 150                 155                 160

gtg ccc tgt ggt cac tcc tac ttt ggt gcc tcc ctg aac agc ttc atc    528

Val Pro Cys Gly His Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Asn Ser Phe Ile

                165                 170                 175

cat gtc ctg atg tac tct tac tat ggg ctc tct gct gtc ccg gcc ttg    576

His Val Leu Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ser Ala Val Pro Ala Leu

            180                 185                 190

cgg ccc tat cta tgg tgg aag aaa tac atc aca caa gta cag ctg att    624

Arg Pro Tyr Leu Trp Trp Lys Lys Tyr Ile Thr Gln Val Gln Leu Ile

        195                 200                 205

cag ttc ttt ttg acc atg tcc cag acg ata tgt gca gtc att tgg cca    672

Gln Phe Phe Leu Thr Met Ser Gln Thr Ile Cys Ala Val Ile Trp Pro

    210                 215                 220

tgt gat ttc ccc aga ggg tgg ctg tat ttc cag ata ttc tat gtc atc    720

Cys Asp Phe Pro Arg Gly Trp Leu Tyr Phe Gln Ile Phe Tyr Val Ile

225                 230                 235                 240

aca ctt att gcc ctt ttc tca aac ttc tac att cag act tac aag aaa    768

Thr Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Ile Gln Thr Tyr Lys Lys

                245                 250                 255

cac ctt gtt tca caa aag aag gag tat cat cag aat ggc tct gtt gct    816

His Leu Val Ser Gln Lys Lys Glu Tyr His Gln Asn Gly Ser Val Ala

            260                 265                 270

tca ttg aat ggc cat gtg aat ggg gtg aca ccc acg gaa acc att aca    864

Ser Leu Asn Gly His Val Asn Gly Val Thr Pro Thr Glu Thr Ile Thr

        275                 280                 285

cac agg aaa gtg agg ggg gac                                        885

His Arg Lys Val Arg Gly Asp

    290                 295

<210>54

<211>295

<212>PRT

<213>虹鳟

<400>54

Met Glu Thr Phe Asn Tyr Lys Leu Asn Met Tyr Ile Asp Ser Trp Met

1               5                   10                  15

Gly Pro Arg Asp Glu Arg Val Gln Gly Trp Leu Leu Leu Asp Asn Tyr

            20                  25                  30

Pro Pro Thr Phe Ala Leu Thr Val Met Tyr Leu Leu Ile Val Trp Met

        35                  40                  45

Gly Pro Lys Tyr Met Arg His Arg Gln Pro Val Ser Cys Arg Gly Leu

    50                  55                  60

Leu Leu Val Tyr Asn Leu Gly Leu Thr Ile Leu Ser Phe Tyr Met Phe

65                  70                  75                  80

Tyr Glu Met Val Ser Ala Val Trp His Gly Asp Tyr Asn Phe Phe Cys

                85                  90                  95

Gln Asp Thr His Ser Ala Gly Glu Thr Asp Thr Lys Ile Ile Asn Val

            100                 105                 110

Leu Trp Trp Tyr Tyr Phe Ser Lys Leu Ile Glu Phe Met Asp Thr Phe

        115                 120                 125

Phe Phe Ile Leu Arg Lys Asn Asn His Gln Ile Thr Phe Leu His Ile

    130                 135                 140

Tyr His His Ala Ser Met Leu Asn Ile Trp Trp Phe Val Met Asn Trp

145                 150                 155                 160

Val Pro Cys Gly His Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Asn Ser Phe Ile

                165                 170                 175

His Val Leu Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ser Ala Val Pro Ala Leu

            180                 185                 190

Arg Pro Tyr Leu Trp Trp Lys Lys Tyr Ile Thr Gln Val Gln Leu Ile

        195                 200                 205

Gln Phe Phe Leu Thr Met Ser Gln Thr Ile Cys Ala Val Ile Trp Pro

    210                 215                 220

Cys Asp Phe Pro Arg Gly Trp Leu Tyr Phe Gln Ile Phe Tyr Val Ile

225                 230                 235                 240

Thr Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Ile Gln Thr Tyr Lys Lys

                245                 250                 255

His Leu Val Ser Gln Lys Lys Glu Tyr His Gln Asn Gly Ser Val Ala

            260                 265                 270

Ser Leu Asn Gly His Val Asn Gly Val Thr Pro Thr Glu Thr Ile Thr

        275                 280                 285

His Arg Lys Val Arg Gly Asp

    290                 295

<210>55

<211>6753

<212>DNA

<213>虹鳟

<220>

<221>CDS

<222>(513)..(1397)

<223>Δ5-延伸酶

<400>55

acggattaga agccgccgag cgggtgacag ccctccgaag gaagactctc ctccgtgcgt      60

cctcgtcctc accggtcgcg ttcctgaaac gcagatgtgc ctcgcgccgc actgctccga      120

acaataaaga ttctacaata ctagctttta tggttatgaa gaggaaaaat tggcagtaac      180

ctggccccac aaaccttcaa atgaacgaat caaattaaca accataggat gataatgcga      240

ttagtttttt agccttattt ctggggtaat taatcagcga agcgatgatt tttgatctat      300

taacagatat ataaatgcaa aaactgcatt aaccacttta actaatactt tcaacatttt      360

cggtttgtat tacttcttat tcaaatgtaa taaaagtatc aacaaaaaat tgttaatata      420

cctctatact ttaacgtcaa ggagaaaaaa ccccggatcg gactactagc agctgtaata      480

cgactcacta tagggaatat taagcttaca ta atg gag act ttt aat tat aaa        533

                                    Met Glu Thr Phe Asn Tyr Lys

                                    1               5

cta aac atg tac ata gac tca tgg atg ggt ccc aga gat gag cgg gta        581

Leu Asn Met Tyr Ile Asp Set Trp Met Gly Pro Arg Asp Glu Arg Val

        10                  15                  20

cag gga tgg ctg ctt ctg gac aac tac cct cca acc ttt gca cta aca        629

Gln Gly Trp Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Pro Pro Thr Phe Ala Leu Thr

    25                  30                  35

gtc atg tac ctg ctg atc gta tgg atg ggg ccc aag tac atg aga cac        677

Val Met Tyr Leu Leu Ile Val Trp Met Gly Pro Lys Tyr Met Arg His

40                  45                  50                  55

aga cag ccg gtg tct tgc cgg ggt ctc ctc ttg gtc tac aat ctg ggc        725

Arg Gln Pro Val Ser Cys Arg Gly Leu Leu Leu Val Tyr Asn Leu Gly

                60                  65                  70

ctc acg atc ttg tcc ttc tat atg ttc tat gag atg gtg tct gct gtg        773

Leu Thr Ile Leu Ser Phe Tyr Met Phe Tyr Glu Met Val Ser Ala Val

            75                  80                  85

tgg cac ggg gat tat aac ttc ttt tgc caa gac aca cac agt gca gga        821

Trp His Gly Asp Tyr Asn Phe Phe Cys Gln Asp Thr His Ser Ala Gly

        90                  95                  100

gaa acc gat acc aag atc ata aat gtg ctg tgg tgg tac tac ttc tcc      869

Glu Thr Asp Thr Lys Ile Ile Asn Val Leu Trp Trp Tyr Tyr Phe Ser

    105                 110                 115

aag ctc ata gag ttt atg gat acc ttc ttc ttc atc ctg cgg aag aac      917

Lys Leu Ile Glu Phe Met Asp Thr Phe Phe Phe Ile Leu Arg Lys Asn

120                 125                 130                 135

aac cat caa atc acg ttt ctg cac atc tac cac cat gct agc atg ctc      965

Asn His Gln Ile Thr Phe Leu His Ile Tyr His His Ala Ser Met Leu

                140                 145                 150

aac atc tgg tgg ttc gtc atg aac tgg gtg ccc tgt ggt cac tcc tac      1013

Asn Ile Trp Trp Phe Val Met Asn Trp Val Pro Cys Gly His Ser Tyr

            155                 160                 165

ttt ggt gcc tcc ctg aac agc ttc atc cat gtc ctg atg tac tct tac      1061

Phe Gly Ala Ser Leu Asn Ser Phe Ile His Val Leu Met Tyr Ser Tyr

        170                 175                 180

tat ggg ctc tct gct gtc ccg gcc ttg cgg ccc tat cta tgg tgg aag      1109

Tyr Gly Leu Ser Ala Val Pro Ala Leu Arg Pro Tyr Leu Trp Trp Lys

    185                 190                 195

aaa tac arc aca caa gta cag ctg att cag ttc ttt ttg acc atg tcc      1157

Lys Tyr Ile Thr Gln Val Gln Leu Ile Gln Phe Phe Leu Thr Met Ser

200                 205                 210                 215

cag acg ata tgt gca gtc att tgg cca tgt gat ttc ccc aga ggg tgg      1205

Gln Thr Ile Cys Ala Val Ile Trp Pro Cys Asp Phe Pro Arg Gly Trp

                220                 225                 230

ctg tat ttc cag ata ttc tat gtc atc aca ctt att gcc ctt ttc tca      1253

Leu Tyr Phe Gln Ile Phe Tyr Val Ile Thr Leu Ile Ala Leu Phe Ser

            235                 240                 245

aac ttc tac att cag act tac aag aaa cac ctt gtt tca caa aag aag      1301

Asn Phe Tyr Ile Gln Thr Tyr Lys Lys His Leu Val Ser Gln Lys Lys

        250                 255                 260

gag tat cat cag aat ggc tct gtt gct tca ttg aat ggc cat gtg aat      1349

Glu Tyr His Gln Asn Gly Set Val Ala Ser Leu Asn Gly His Val Asn

    265                 270                 275

ggg gtg aca ccc acg gaa acc att aca cac agg aaa gtg agg ggg gac      1397

Gly Val Thr Pro Thr Glu Thr Ile Thr His Arg Lys Val Arg Gly Asp

280                 285                 290                 295

tgaaggatcc actagtaacg gccgccagtg tgctggaatt ctgcagatat ccagcacagt    1457

ggcggccgct cgagtctaga gggcccttcg aaggtaagcc tatccctaac cctctcctcg    1517

gtctcgattc tacgcgtacc ggtcatcatc accatcacca ttgagtttaa acccgctgat    1577

cctagagggc cgcatcatgt aattagttat gtcacgctta cattcacgcc ctccccccac    1637

atccgctcta accgaaaagg aaggagttag acaacctgaa gtctaggtcc ctatttattt    1697

ttttatagtt atgttagtat taagaacgtt atttatattt caaatttttc ttttttttct    1757

gtacagacgc gtgtacgcat gtaacattat actgaaaacc ttgcttgaga aggttttggg    1817

acgctcgaag gctttaattt gcaagctgcg gccctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg    1877

gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc    1937

tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc    1997

acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaagcccagg    2057

aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat    2117

cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag    2177

gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga    2237

tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg    2297

tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt    2357

cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac    2417

gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc    2477

ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt    2537

ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc    2597

ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc    2657

agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg    2717

aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag    2777

atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg    2837

tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt    2897

tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gcgcttacca    2957

tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca    3017

gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc    3077

tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt    3137

ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg    3197

gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc    3257

aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg    3317

ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga    3377

tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga    3437

ccgagttgct cttgcccggc gtcaacacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta    3497

aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg    3557

ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact    3617

ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata    3677

agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt    3737

tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa    3797

ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt    3857

atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct tcaagaaatt    3917

cggtcgaaaa aagaaaagga gagggccaag agggagggca ttggtgacta ttgagcacgt    3977

gagtatacgt gattaagcac acaaaggcag cttggagtat gtctgttatt aatttcacag    4037

gtagttctgg tccattggtg aaagtttgcg gcttgcagag cacagaggcc gcagaatgtg    4097

ctctagattc cgatgctgac ttgctgggta ttatatgtgt gcccaataga aagagaacaa    4157

ttgacccggt tattgcaagg aaaatttcaa gtcttgtaaa agcatataaa aatagttcag    4217

gcactccgaa atacttggtt ggcgtgtttc gtaatcaacc taaggaggat gttttggctc    4277

tggtcaatga ttacggcatt gatatcgtcc aactgcacgg agatgagtcg tggcaagaat    4337

accaagagtt cctcggtttg ccagttatta aaagactcgt atttccaaaa gactgcaaca    4397

tactactcag tgcagcttca cagaaacctc attcgtttat tcccttgttt gattcagaag    4457

caggtgggac aggtgaactt ttggattgga actcgatttc tgactgggtt ggaaggcaag    4517

agagccccga gagcttacat tttatgttag ctggtggact gacgccagaa aatgttggtg    4577

atgcgcttag attaaatggc gttattggtg ttgatgtaag cggaggtgtg gagacaaatg    4637

gtgtaaaaga ctctaacaaa atagcaaatt tcgtcaaaaa tgctaagaaa taggttatta    4697

ctgagtagta tttatttaag tattgtttgt gcacttgccc tagcttatcg atgataagct    4757

gtcaaagatg agaattaatt ccacggacta tagactatac tagatactcc gtctactgta    4817

cgatacactt ccgctcaggt ccttgtcctt taacgaggcc ttaccactct tttgttactc    4877

tattgatcca gctcagcaaa ggcagtgtga tctaagattc tatcttcgcg atgtagtaaa    4937

actagctaga ccgagaaaga gactagaaat gcaaaaggca cttctacaat ggctgccatc    4997

attattatcc gatgtgacgc tgcagcttct caatgatatt cgaatacgct ttgaggagat    5057

acagcctaat atccgacaaa ctgttttaca gatttacgat cgtacttgtt acccatcatt    5117

gaattttgaa catccgaacc tgggagtttt ccctgaaaca gatagtatat ttgaacctgt    5177

ataataatat atagtctagc gctttacgga agacaatgta tgtatttcgg ttcctggaga    5237

aactattgca tctattgcat aggtaatctt gcacgtcgca tccccggttc attttctgcg    5297

tttccatctt gcacttcaat agcatatctt tgttaacgaa gcatctgtgc ttcattttgt    5357

agaacaaaaa tgcaacgcga gagcgctaat ttttcaaaca aagaatctga gctgcatttt    5417

tacagaacag aaatgcaacg cgaaagcgct attttaccaa cgaagaatct gtgcttcatt    5477

tttgtaaaac aaaaatgcaa cgcgacgaga gcgctaattt ttcaaacaaa gaatctgagc    5537

tgcattttta cagaacagaa atgcaacgcg agagcgctat tttaccaaca aagaatctat    5597

acttcttttt tgttctacaa aaatgcatcc cgagagcgct atttttctaa caaagcatct    5657

tagattactt tttttctcct ttgtgcgctc tataatgcag tctcttgata actttttgca    5717

ctgtaggtcc gttaaggtta gaagaaggct actttggtgt ctattttctc ttccataaaa    5777

aaagcctgac tccacttccc gcgtttactg attactagcg aagctgcggg tgcatttttt    5837

caagataaag gcatccccga ttatattcta taccgatgtg gattgcgcat actttgtgaa    5897

cagaaagtga tagcgttgat gattcttcat tggtcagaaa attatgaacg gtttcttcta    5957

ttttgtctct atatactacg tataggaaat gtttacattt tcgtattgtt ttcgattcac    6017

tctatgaata gttcttacta caattttttt gtctaaagag taatactaga gataaacata    6077

aaaaatgtag aggtcgagtt tagatgcaag ttcaaggagc gaaaggtgga tgggtaggtt    6137

atatagggat atagcacaga gatatatagc aaagagatac ttttgagcaa tgtttgtgga    6197

agcggtattc gcaatgggaa gctccacccc ggttgataat cagaaaagcc ccaaaaacag    6257

gaagattgta taagcaaata tttaaattgt aaacgttaat attttgttaa aattcgcgtt    6317

aaatttttgt taaatcagct cattttttaa cgaatagccc gaaatcggca aaatccctta    6377

taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttcca acaagagtcc    6437

actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa agggtctatc agggcgatgg    6497

cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcagt    6557

aaatcggaag ggtaaacgga tgcccccatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt    6617

ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg agcgggggct agggcggtgg gaagtgtagg    6677

ggtcacgctg ggcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat ggggcgctac agggcgcgtg    6737

gggatgatcc actagt                                                    6753

<210>56

<2l1>295

<212>PRT

<213>虹鳟

<400>56

Met Glu Thr Phe Asn Tyr Lys Leu Asn Met Tyr Ile Asp Ser Trp Met

1               5                   10                  15

Gly Pro Arg Asp Glu Arg Val Gln Gly Trp Leu Leu Leu Asp Asn Tyr

            20                  25                  30

Pro Pro Thr Phe Ala Leu Thr Val Met Tyr Leu Leu Ile Val Trp Met

        35                  40                  45

Gly Pro Lys Tyr Met Arg His Arg Gln Pro Val Ser Cys Arg Gly Leu

    50                  55                  60

Leu Leu Val Tyr Asn Leu Gly Leu Thr Ile Leu Ser Phe Tyr Met Phe

65                  70                  75                  80

Tyr Glu Met Val Ser Ala Val Trp His Gly Asp Tyr Asn Phe Phe Cys

                85                  90                  95

Gln Asp Thr His Ser Ala Gly Glu Thr Asp Thr Lys Ile Ile Asn Val

            100                 105                 110

Leu Trp Trp Tyr Tyr Phe Ser Lys Leu Ile Glu Phe Met Asp Thr Phe

        115                 120                 125

Phe Phe Ile Leu Arg Lys Asn Asn His Gln Ile Thr Phe Leu His Ile

    130                 135                 140

Tyr His His Ala Ser Met Leu Asn Ile Trp Trp Phe Val Met Asn Trp

145                 150                 155                 160

Val Pro Cys Gly His Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Asn Ser Phe Ile

                165                 170                 175

His Val Leu Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ser Ala Val Pro Ala Leu

            180                 185                 190

Arg Pro Tyr Leu Trp Trp Lys Lys Tyr Ile Thr Gln Val Gln Leu Ile

        195                 200                 205

Gln Phe Phe Leu Thr Met Ser Gln Thr Ile Cys Ala Val Ile Trp Pro

    210                 215                 220

Cys Asp Phe Pro Arg Gly Trp Leu Tyr Phe Gln Ile Phe Tyr Val Ile

225                 230                 235                 240

Thr Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Ile Gln Thr Tyr Lys Lys

                245                 250                 255

His Leu Val Ser Gln Lys Lys Glu Tyr His Gln Asn Gly Ser Val Ala

            260                 265                 270

Ser Leu Asn Gly His Val Asn Gly Val Thr Pro Thr Glu Thr Ile Thr

        275                 280                 285

His Arg Lys Val Arg Gly Asp

    290                 295

<210>57

<211>6645

<212>DNA

<213>虹鳟

<220>

<221>CDS

<222>(513)..(1304)

<223>Δ5-延伸酶

<400>57

acggattaga agccgccgag cgggtgacag ccctccgaag gaagactctc ctccgtgcgt    60

cctcgtcctc accggtcgcg ttcctgaaac gcagatgtgc ctcgcgccgc actgctccga    120

acaataaaga ttctacaata ctagctttta tggttatgaa gaggaaaaat tggcagtaac    180

ctggccccac aaaccttcaa atgaacgaat caaattaaca accataggat gataatgcga    240

ttagtttttt agccttattt ctggggtaat taatcagcga agcgatgatt tttgatctat    300

taacagatat ataaatgcaa aaactgcatt aaccacttta actaatactt tcaacatttt    360

cggtttgtat tacttcttat tcaaatgtaa taaaagtatc aacaaaaaat tgttaatata    420

cctctatact ttaacgtcaa ggagaaaaaa ccccggatcg gactactagc agctgtaata    480

cgactcacta tagggaatat taagcttaca ta atg gct tca aca tgg caa agc      533

                                    Met Ala Ser Thr Trp Gln Ser

                                    1               5

gtt cag tcc atg cgc cag tgg att tta gag aat gga gat aaa agg aca      581

Val Gln Ser Met Arg Gln Trp Ile Leu Glu Asn Gly Asp Lys Arg Thr

        10                  15                  20

gac cca tgg cta ctg gtc tac tcc cct atg cca gtg gcc att ata ttc      629

Asp Pro Trp Leu Leu Val Tyr Ser Pro Met Pro Val Ala Ile Ile Phe

    25                  30                  35

ctc ctc tat ctt ggt gtg gtc tgg gct ggg ccc aag ctg atg aaa cgc      677

Leu Leu Tyr Leu Gly Val Val Trp Ala Gly Pro Lys Leu Met Lys Arg

40                  45                  50                  55

agg gaa cca gtt gat ctc aag gct gta ctc att gtc tac aac ttc gcc      725

Arg Glu Pro Val Asp Leu Lys Ala Val Leu Ile Val Tyr Asn Phe Ala

                60                  65                  70

atg gtc tgc ctg tct gtc tac atg ttc cat gag ttc ttg gtc acg tcc      773

Met Val Cys Leu Ser Val Tyr Met Phe His Glu Phe Leu Val Thr Ser

            75                  80                  85

ttg ctg tct aac tac agt tac ctg tgt caa cct gtg gat tac agc act      821

Leu Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr Leu Cys Glu Pro Val Asp Tyr Ser Thr

        90                  95                  100

agt cca ctg gcg atg agg atg gcc aaa gta tgc tgg tgg ttt ttc ttc      869

Ser Pro Leu Ala Met Arg Met Ala Lys Val Cys Trp Trp Phe Phe Phe

    105                 110                 115

tcc aag gtc ata gaa ttg gct gac acg gtg ttc ttc atc ctg agg aag      917

Ser Lys Val Ile Glu Leu Ala Asp Thr Val Phe Phe Ile Leu Arg Lys

120                 125                 130                 135

aag aac agt cag ctg act ttc ctg cat gtc tat cac cat ggc acc atg      965

Lys Asn Ser Gln Leu Thr Phe Leu His Val Tyr His His Gly Thr Met

                140                 145                 150

atc ttc aac tgg tgg gca ggg gtc aag tat ctg gct gga ggc caa tcg      1013

Ile Phe Asn Trp Trp Ala Gly Val Lys Tyr Leu Ala Gly Gly Gln Ser

            155                 160                 165

ttc ttc atc ggc ctg ctc aat acc ttt gtg cac atc gtg atg tac tct      1061

Phe Phe Ile Gly Leu Leu Asn Thr Phe Val His Ile Val Met Tyr Ser

        170                 175                 180

tac tac gga ctg gct gcc ctg ggg cct cac acg cag aag tac tta tgg      1109

Tyr Tyr Gly Leu Ala Ala Leu Gly Pro His Thr Gln Lys Tyr Leu Trp

    185                 190                 195

tgg aag cgc tat ctg acc tca ctg cag ctg ctc cag ttt gtc ctg ttg    1157

Trp Lys Arg Tyr Leu Thr Ser Leu Gln Leu Leu Gln Phe Val Leu Leu

200                 205                 210                 215

acc act cac act ggc tac aac ctc ttc act gag tgt gac ttc ccg gac    1205

Thr Thr His Thr Gly Tyr Asn Leu Phe Thr Glu Cys Asp Phe Pro Asp

                220                 225                 230

tcc atg aac gct gtg gtg ttt gcc tac tgt gtc agt ctc att gct ctc    1253

Ser Met Asn Ala Val Val Phe Ala Tyr Cys Val Ser Leu Ile Ala Leu

            235                 240                 245

ttc agc aac ttc tac tat cag agc tac ctc aac agg aag agc aag aag    1301

Phe Ser Asn Phe Tyr Tyr Gln Ser Tyr Leu Asn Arg Lys Ser Lys Lys

        250                 255                 260

aca taaggatcca ctagtaacgg ccgccagtgt gctggaattc tgcagatatc         1354

Thr

catcacactg gcggccgctc gagcatgcat ctagagggcc gcatcatgta attagttatg  1414

tcacgcttac attcacgccc tccccccaca tccgctctaa ccgaaaagga aggagttaga  1474

caacctgaag tctaggtccc tatttatttt tttatagtta tgttagtatt aagaacgtta  1534

tttatatttc aaatttttct tttttttctg tacagacgcg tgtacgcatg taacattata  1594

ctgaaaacct tgcttgagaa ggttttggga cgctcgaagg ctttaatttg cggccctgca  1654

ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc  1714

ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc  1774

aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc  1834

aaaaggccag caaaagccca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag  1894

gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc  1954

gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt  2014

tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct  2074

ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg  2134

ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatc9tct  2194

tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat  2254

tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg  2314

ctacactaga aggacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa  2374

aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt  2434

ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc  2494

tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt  2554

atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta  2614

aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat  2674

ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac  2734

tacgatacgg gagcgcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg  2794

ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag    2854

tggtcctgca actttatccg cctccattca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt    2914

aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttggc attgctacag gcatcgtggt    2974

gtcactctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt    3034

tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt    3094

cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct    3154

tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt    3214

ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatag    3274

tgtatcacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa    3334

actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa    3394

ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca    3454

aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct    3514

ttttcaatgg gtaataactg atataattaa attgaagctc taatttgtga gtttagtata    3574

catgcattta cttataatac agttttttag ttttgctggc cgcatcttct caaatatgct    3634

tcccagcctg cttttctgta acgttcaccc tctaccttag catcccttcc ctttgcaaat    3694

agtcctcttc caacaataat aatgtcagat cctgtagaga ccacatcatc cacggttcta    3754

tactgttgac ccaatgcgtc tcccttgtca tctaaaccca caccgggtgt cataatcaac    3814

caatcgtaac cttcatctct tccacccatg tctctttgag caataaagcc gataacaaaa    3874

tctttgtcgc tcttcgcaat gtcaacagta cccttagtat attctccagt agatagggag    3934

cccttgcatg acaattctgc taacatcaaa aggcctctag gttcctttgt tacttcttct    3994

gccgcctgct tcaaaccgct aacaatacct gggcccacca caccgtgtgc attcgtaatg    4054

tctgcccatt ctgctattct gtatacaccc gcagagtact gcaatttgac tgtattacca    4114

atgtcagcaa attttctgtc ttcgaagagt aaaaaattgt acttggcgga taatgccttt    4174

agcggcttaa ctgtgccctc catggaaaaa tcagtcaaga tatccacatg tgtttttagt    4234

aaacaaattt tgggacctaa tgcttcaact aactccagta attccttggt ggtacgaaca    4294

tccaatgaag cacacaagtt tgtttgcttt tcgtgcatga tattaaatag cttggcagca    4354

acaggactag gatgagtagc agcacgttcc ttatatgtag ctttcgacat gatttatctt    4414

cgtttcctgc aggtttttgt tctgtgcagt tgggttaaga atactgggca atttcatgtt    4474

tcttcaacac tacatatgcg tatatatacc aatctaagtc tgtgctcctt ccttcgttct    4534

tccttctgtt cggagattac cgaatcaaaa aaatttcaaa gaaaccgaaa tcaaaaaaaa    4594

gaataaaaaa aaaatgatga attgaattga aaagctagct tatcgatgat aagctgtcaa    4654

agatgagaat taattccacg gactatagac tatactagat actccgtcta ctgtacgata    4714

cacttccgct caggtccttg tcctttaacg aggccttacc actcttttgt tactctattg    4774

atccagctca gcaaaggcag tgtgatctaa gattctatct tcgcgatgta gtaaaactag    4834

ctagaccgag aaagagacta gaaatgcaaa aggcacttct acaatggctg ccatcattat    4894

tatccgatgt gacgctgcag cttctcaatg atattcgaat acgctttgag gagatacagc    4954

ctaatatccg acaaactgtt ttacagattt acgatcgtac ttgttaccca tcattgaatt    5014

ttgaacatcc gaacctggga gttttccctg aaacagatag tatatttgaa cctgtataat    5074

aatatatagt ctagcgcttt acggaagaca atgtatgtat ttcggttcct ggagaaacta    5134

ttgcatctat tgcataggta atcttgcacg tcgcatcccc ggttcatttt ctgcgtttcc    5194

atcttgcact tcaatagcat atctttgtta acgaagcatc tgtgcttcat tttgtagaac    5254

aaaaatgcaa cgcgagagcg ctaatttttc aaacaaagaa tctgagctgc atttttacag    5314

aacagaaatg caacgcgaaa gcgctatttt accaacgaag aatctgtgct tcatttttgt    5374

aaaacaaaaa tgcaacgcga cgagagcgct aatttttcaa acaaagaatc tgagctgcat    5434

ttttacagaa cagaaatgca acgcgagagc gctattttac caacaaagaa tctatacttc    5494

ttttttgttc tacaaaaatg catcccgaga gcgctatttt tctaacaaag catcttagat    5554

tacttttttt ctcctttgtg cgctctataa tgcagtctct tgataacttt ttgcactgta    5614

ggtccgttaa ggttagaaga aggctacttt ggtgtctatt ttctcttcca taaaaaaagc    5674

ctgactccac ttcccgcgtt tactgattac tagcgaagct gcgggtgcat tttttcaaga    5734

taaaggcatc cccgattata ttctataccg atgtggattg cgcatacttt gtgaacagaa    5794

agtgatagcg ttgatgattc ttcattggtc agaaaattat gaacggtttc ttctattttg    5854

tctctatata ctacgtatag gaaatgttta cattttcgta ttgttttcga ttcactctat    5914

gaatagttct tactacaatt tttttgtcta aagagtaata ctagagataa acataaaaaa    5974

tgtagaggtc gagtttagat gcaagttcaa ggagcgaaag gtggatgggt aggttatata    6034

gggatatagc acagagatat atagcaaaga gatacttttg agcaatgttt gtggaagcgg    6094

tattcgcaat gggaagctcc accccggttg ataatcagaa aagccccaaa aacaggaaga    6154

ttgtataagc aaatatttaa attgtaaacg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt    6214

tttgttaaat cagctcattt tttaacgaat agcccgaaat cggcaaaatc ccttataaat    6274

caaaagaata gaccgagata gggttgagtg ttgttccagt ttccaacaag agtccactat    6334

taaagaacgt ggactccaac gtcaaagggc gaaaaagggt ctatcagggc gatggcccac    6394

tacgtgaacc atcaccctaa tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcagtaaatc    6454

ggaagggtaa acggatgccc ccatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga    6514

gaaaggaagg gaagaaagcg aaaggagcgg gggctagggc ggtgggaagt gtaggggtca    6574

cgctgggcgt aaccaccaca cccgccgcgc ttaatggggc gctacagggc gcgtggggat    6634

gatccactag t                                                         6645

<210>58

<211>264

<212>PRT

<213>虹鳟

<400>58

Met Ala Ser Thr Trp Gln Ser Val Gln Ser Met Arg Gln Trp Ile Leu

1               5                   10                  15

Glu Asn Gly Asp Lys Arg Thr Asp Pro Trp Leu Leu Val Tyr Ser Pro

            20                  25                  30

Met Pro Val Ala Ile Ile Phe Leu Leu Tyr Leu Gly Val Val Trp Ala

        35                  40                  45

Gly Pro Lys Leu Met Lys Arg Arg Glu Pro Val Asp Leu Lys Ala Val

    50                  55                  60

Leu Ile Val Tyr Asn Phe Ala Met Val Cys Leu Ser Val Tyr Met Phe

65                  70                  75                  80

His Glu Phe Leu Val Thr Ser Leu Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr Leu Cys

                85                  90                  95

Gln Pro Val Asp Tyr Ser Thr Ser Pro Leu Ala Met Arg Met Ala Lys

            100                 105                 110

Val Cys Trp Trp Phe Phe Phe Ser Lys Val Ile Glu Leu Ala Asp Thr

        115                 120                 125

Val Phe Phe Ile Leu Arg Lys Lys Asn Ser Gln Leu Thr Phe Leu His

    130                 135                 140

Val Tyr His His Gly Thr Met Ile Phe Asn Trp Trp Ala Gly Val Lys

145                 150                 155                 160

Tyr Leu Ala Gly Gly Gln Ser Phe Phe Ile Gly Leu Leu Asn Thr Phe

                165                 170                 175

Val His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ala Ala Leu Gly Pro

            180                 185                 190

His Thr Gln Lys Tyr Leu Trp Trp Lys Arg Tyr Leu Thr Ser Leu Gln

        195                 200                 205

Leu Leu Gln Phe Val Leu Leu Thr Thr His Thr Gly Tyr Asn Leu Phe

    210                 215                 220

Thr Glu Cys Asp Phe Pro Asp Ser Met Asn Ala Val Val Phe Ala Tyr

225                 230                 235                 240

Cys Val Ser Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Tyr Gln Ser Tyr

                245                 250                 255

Leu Asn Arg Lys Ser Lys Lys Thr

            260

<210>59

<211>1077

<212>DNA

<213>假矮海链藻

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1077)

<223>Δ5-延伸酶

<400>59

atg tgc tca tca ccg ccg tca caa tcc aaa aca aca tcc ctc cta gca    48

Met Cys Ser Ser Pro Pro Ser Gln Ser Lys Thr Thr Ser Leu Leu Ala

1               5                   10                  15

cgg tac acc acc gcc gcc ctc ctc ctc ctc acc ctc aca aca tgg tgc    96

Arg Tyr Thr Thr Ala Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Thr Thr Trp Cys

            20                  25                  30

cac ttc gcc ttc cca gcc gcc acc gcc aca ccc ggc ctc acc gcc gaa    144

His Phe Ala Phe Pro Ala Ala Thr Ala Thr Pro Gly Leu Thr Ala Glu

        35                  40                  45

atg cac tcc tac aaa gtc cca ctc ggt ctc acc gta ttc tac ctg ctg    192

Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu

    50                  55                  60

agt cta ccg tca cta aag tac gtt acg gac aac tac ctt gcc aaa aag    240

Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys

65                  70                  75                  80

tat gat atg aag tca ctc cta acg gaa tca atg gtg ttg tac aat gtg    288

Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val

                85                  90                  95

gcg caa gtg ctg ctc aat ggg tgg acg gtg tat gcg att gtg gat gcg    336

Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala

            100                 105                 110

gtg atg aat aga gac cat ccg ttt att gga agt aga agt ttg gtt ggg    384

Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly

        115                 120                 125

gcg gcg ttg cat agt ggg agc tcg tat gcg gtg tgg gtt cat tat tgt    432

Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys

    130                 135                 140

gat aag tat ttg gag ttc ttt gat acg tat ttt atg gtg ttg agg ggg    480

Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly

145                 150                 155                 160

aaa atg gac cag gtc tcc ttc ctc cac atc tac cac cac acg acc ata    528

Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile

                165                 170                 175

gcg tgg gca tgg tgg atc gcc ctc cgc ttc tcc ccc ggt gga gac att    576

Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile

            180                 185                 190

tac ttc ggg gca ctc ctc aac tcc atc atc cac gtc ctc atg tat tcc    624

Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser

        195                 200                 205

tac tac gcc ctt gcc cta ctc aag gtc agt tgt cca tgg aaa cga tac    672

Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr

    210                 215                 220

ctg act caa gct caa tta ttg caa ttc aca agt gtg gtg gtt tat acg    720

Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr

225                 230                 235                 240

ggg tgt acg ggt tat act cat tac tat cat acg aag cat gga gcg gat    768

Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp

                245                 250                 255

gag aca cag cct agt tta gga acg tat tat ttc tgt tgt gga gtg cag    816

Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln

            260                 265                 270

gtg ttt gag atg gtt agt ttg ttt gta ctc ttt tcc atc ttt tat aaa    864

Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys

        275                 280                 285

cga tcc tat tcg aag aag aac aag tca gga gga aag gat agc aag aag    912

Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys

    290                 295                 300

aat gat gat ggg aat aat gag gat caa tgt cac aag gct atg aag gat    960

Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp

305                 310                 315                 320

ata tcg gag ggt gcg aag gag gtt gtg ggg cat gca gcg aag gat gct    1008

Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala

                325                 330                 335

gga aag ttg gtg gct acg gcg agt aag gct gta aag agg aag gga act    1056

Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr

            340                 345                 350

cgt gtt act ggt gcc atg tag                                        1077

Arg Val Thr Gly Ala Met

        355

<210>60

<211>358

<212>PRT

<213>假矮海链藻

<400>60

Met Cys Ser Ser Pro Pro Ser Gln Ser Lys Thr Thr Ser Leu Leu Ala

1               5                   10                  15

Arg Tyr Thr Thr Ala Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Thr Thr Trp Cys

            20                  25                  30

His Phe Ala Phe Pro Ala Ala Thr Ala Thr Pro Gly Leu Thr Ala Glu

        35                  40                  45

Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu

    50                  55                  60

Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys

65                  70                  75                  80

Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val

                85                  90                  95

Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala

            100                 105                 110

Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly

        115                 120                 125

Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys

    130                 135                 140

Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly

145                 150                 155                 160

Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile

                165                 170                 175

Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile

            180                 185                 190

Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser

        195                 200                 205

Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr

    210                 215                 220

Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr

225                 230                 235                 240

Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp

                245                 250                 255

Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln

            260                 265                 270

Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys

        275                 280                 285

Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys

    290                 295                 300

Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp

305                 310                 315                 320

Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala

                325                 330                 335

Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr

            340                 345                 350

Arg Val Thr Gly Ala Met

        355

<210>61

<211>933

<212>DNA

<213>假矮海链藻

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(933)

<223>Δ5-延伸酶

<400>61

atg cac tcc tac aaa gtc cca ctc ggt ctc acc gta ttc tac ctg ctg    48

Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu

1               5                   10                  15

agt cta ccg tca cta aag tac gtt acg gac aac tac ctt gcc aaa aag    96

Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys

            20                  25                  30

tat gat atg aag tca ctc cta acg gaa tca atg gtg ttg tac aat gtg    144

Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val

        35                  40                  45

gcg caa gtg ctg ctc aat ggg tgg acg gtg tat gcg att gtg gat gcg    192

Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala

    50                  55                  60

gtg atg aat aga gac cat ccg ttt att gga agt aga agt ttg gtt ggg    240

Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly

65                  70                  75                  80

gcg gcg ttg cat agt ggg agc tcg tat gcg gtg tgg gtt cat tat tgt    288

Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys

                85                  90                  95

gat aag tat ttg gag ttc ttt gat acg tat ttt atg gtg ttg agg ggg    336

Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly

            100                 105                 110

aaa atg gac cag gtc tcc ttc ctc cac atc tac cac cac acg acc ata    384

Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile

        115                 120                 125

gcg tgg gca tgg tgg atc gcc ctc cgc ttc tcc ccc ggt gga gac att    432

Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile

    130                 135                 140

tac ttc ggg gca ctc ctc aac tcc atc atc cac gtc ctc atg tat tcc    480

Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser

145                 150                 155                 160

tac tac gcc ctt gcc cta ctc aag gtc agt tgt cca tgg aaa cga tac    528

Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr

                165                 170                 175

ctg act caa gct caa tta ttg caa ttc aca agt gtg gtg gtt tat acg    576

Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr

            180                 185                 190

ggg tgt acg ggt tat act cat tac tat cat acg aag cat gga gcg gat    624

Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp

        195                 200                 205

gag aca cag cct agt tta gga acg tat tat ttc tgt tgt gga gtg cag    672

Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln

    210                 215                 220

gtg ttt gag atg gtt agt ttg ttt gta ctc ttt tcc atc ttt tat aaa    720

Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys

225                 230                 235                 240

cga tcc tat tcg aag aag aac aag tca gga gga aag gat agc aag aag    768

Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys

                245                 250                 255

aat gat gat ggg aat aat gag gat caa tgt cac aag gct atg aag gat    816

Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp

            260                 265                 270

ata tcg gag ggt gcg aag gag gtt gtg ggg cat gca gcg aag gat gct    864

Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala

        275                 280                 285

gga aag ttg gtg gct acg gcg agt aag gct gta aag agg aag gga act    912

Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr

    290                 295                 300

cgt gtt act ggt gcc atg tag                                        933

Arg Val Thr Gly Ala Met

305                 310

<210>62

<211>310

<212>PRT

<213>假矮海链藻

<400>62

Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu

1               5                   10                  15

Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys

            20                  25                  30

Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val

        35                  40                  45

Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala

    50                  55                  60

Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly

65                  70                  75                  80

Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys

                85                  90                  95

Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly

            100                 105                 110

Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile

        115                 120                 125

Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile

    130                 135                 140

Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser

145                 150                 155                 160

Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr

                165                 170                 175

Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr

           180                 185                 190

Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp

        195                 200                 205

Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln

    210                 215                 220

Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys

225                 230                 235                 240

Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys

                245                 250                 255

Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp

            260                 265                 270

Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala

        275                 280                 285

Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr

    290                 295                 300

Arg Val Thr Gly Ala Met

305                 310

<210>63

<211>933

<212>DNA

<213>假矮海链藻

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(933)

<223>Δ5-延伸酶

<400>63

atg cac tcc tac aaa gtc cca ctc ggt ctc acc gta ttc tac ctg ctg    48

Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu

1               5                   10                  15

agt cta ccg tca cta aag tac gtt acg gac aac tac ctt gcc aaa aag    96

Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys

            20                  25                  30

tat gat atg aag tca ctc cta acg gaa tca atg gtg ttg tac aat gtg    144

Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val

        35                  40                  45

gcg caa gtg ctg ctc aat ggg tgg acg gtg tat gcg att gtg gat gcg    192

Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala

    50                  55                  60

gtg atg aat aga gac cat ccg ttt att gga agt aga agt ttg gtt ggg    240

Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly

65                  70                  75                  80

gcg gcg ttg cat agt ggg agc tcg tat gcg gtg tgg gtt cat tat tgt    288

Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys

                85                  90                  95

gat aag tat ttg gag ttc ttt gat acg tat ttt atg gtg ttg agg ggg    336

Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly

            100                 105                 110

aaa atg gac cag gtc tcc ttc ctc cac atc tac cac cac acg acc ata    384

Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile

        115                 120                 125

gcg tgg gca tgg tgg atc gcc ctc cgc ttc tcc ccc ggt gga gac att    432

Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile

    130                 135                 140

tac ttc ggg gca ctc ctc aac tcc atc atc cac gtc ctc atg tat tcc    480

Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser

145                 150                 155                 160

tac tac gcc ctt gcc cta ctc aag gtc agt tgt cca tgg aaa cga tac    528

Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr

                165                 170                 175

ctg act caa gct caa tta ttg caa ttc aca agt gtg gtg gtt tat acg    576

Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr

            180                 185                 190

ggg tgt acg ggt tat act cat tac tat cat acg aag cat gga gcg gat    624

Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp

        195                 200                 205

gag aca cag cct agt tta gga acg tat tat ttc tgt tgt gga gtg cag    672

Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln

    210                 215                 220

gtg ttt gag atg gtt agt ttg ttt gta ctc ttt tcc atc ttt tat aaa    720

Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys

225                 230                 235                 240

cga tcc tat tcg aag aag aac aag tca gga gga aag gat agc aag aag    768

Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys

                245                 250                 255

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Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp

            260                 265                 270

ata tcg gag ggt gcg aag gag gtt gtg ggg cat gca gcg aag gat gct    864

Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala

        275                 280                 285

gga aag ttg gtg gct acg gcg agt aag gct gta aag agg aag gga act    912

Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr

    290                 295                 300

cgt gtt act ggt gcc atg tag                                        933

Arg Val Thr Gly Ala Met

305                 310

<210>64

<211>310

<212>PRT

<213>假矮海链藻

<400>64

Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu

1               5                   10                  15

Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys

            20                  25                  30

Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val

        35                  40                  45

Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala

    50                  55                  60

Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly

65                  70                  75                  80

Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys

                85                  90                  95

Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly

            100                 105                 110

Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile

        115                 120                 125

Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile

    130                 135                 140

Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser

145                 150                 155                 160

Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr

                165                 170                 175

Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr

            180                 185                 190

Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp

        195                 200                 205

Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln

    210                 215                 220

Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys

225                 230                 235                 240

Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys

                245                 250                 255

Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp

            260                 265                 270

Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala

        275                 280                 285

Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr

    290                 295                 300

Arg Val Thr Gly Ala Met

305                 310

<210>65

<2ll>825

<212>DNA

<213>鲜黄破囊壶菌(Thraustochytrium aureum)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(825)

<223>Δ5-延伸酶

<400>65

atg acg agc aac atg agc gcg tgg ggc gtc gcc gtc gac cag acg cag    48

Met Thr Ser Asn Met Ser Ala Trp Gly Val Ala Val Asp Gln Thr Gln

1               5                   10                  15

cag gtc gtc gac cag atc atg ggc ggc gcc gag ccg tac aag ctg aca    96

Gln Val Val Asp Gln Ile Met Gly Gly Ala Glu Pro Tyr Lys Leu Thr

            20                  25                  30

gaa ggg cgc atg acg aac gtc gag acg atg atg gcg atc gag tgc ggc    144

Glu Gly Arg Met Thr Asn Val Glu Thr Met Leu Ala Ile Glu Cys Gly

        35                  40                  45

tac gcc gcc atg ctg ctg ttc ctg acc ccg atc atg aag cag gcc gag    192

Tyr Ala Ala Met Leu Leu Phe Leu Thr Pro Ile Met Lys Gln Ala Glu

    50                  55                  60

aag ccc ttc gag ctc aag tcc ttc aag ctc gcc cac aac ctg ttc ctg    240

Lys Pro Phe Glu Leu Lys Ser Phe Lys Leu Ala His Asn Leu Phe Leu

65                  70                  75                  80

ttc gtc ctg tcc gcc tac atg tgc ctc gag acc gtc cgc cag gcc tac    288

Phe Val Leu Ser Ala Tyr Met Cys Leu Glu Thr Val Arg Gln Ala Tyr

                85                  90                  95

ctt gcg ggc tac tcg gtg ttc ggc aac gac atg gag aag ggc agc gag    336

Leu Ala Gly Tyr Ser Val Phe Gly Asn Asp Met Glu Lys Gly Ser Glu

            100                 105                 110

ccg cac gcg cac ggc atg gcc caa atc gtg tgg atc ttt tac gtg tcc    384

Pro His Ala His Gly Met Ala Gln Ile Val Trp Ile Phe Tyr Val Ser

        115                 120                 125

aag gcg tac gag ttc gtg gac acg ctg atc atg atc ctg tgc aaa aag    432

Lys Ala Tyr Glu Phe Val Asp Thr Leu Ile Met Ile Leu Cys Lys Lys

    130                 135                 140

ttc aac cag gtc tcc gtc ctg cac gtg tac cac cac gcc acc atc ttt    480

Phe Asn Gln Val Ser Val Leu His Val Tyr His His Ala Thr Ile Phe

145                 150                 155                 160

gct atc tgg ttt atg atc gcc aag tac gcc ccg ggc ggc gac gca tac    528

Ala Ile Trp Phe Met Ile Ala Lys Tyr Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr

                165                 170                 175

ttt agc gtc atc ctg aac tcg ttc gtg cac acc gtc atg tac gcg tac    576

Phe Ser Val Ile Leu Asn Ser Phe Val His Thr Val Met Tyr Ala Tyr

            180                 185                 190

tac ttc ttc tcg tcg cag ggc ttc ggg ttc gtc aag ccg atc aag ccg    624

Tyr Phe Phe Ser Ser Gln Gly Phe Gly Phe Val Lys Pro Ile Lys Pro

        195                 200                 205

tac atc acc tcg ctg cag atg acg cag ttc atg gcg atg ctc gtg cag    672

Tyr Ile Thr Ser Leu Gln Met Thr Gln Phe Met Ala Met Leu Val Gln

    210                 215                 220

tcg ctg tac gac tac ctt tac ccg tgc gac tac ccg cag ggg ctc gtc    720

Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Tyr Pro Cys Asp Tyr Pro Gln Gly Leu Val

225                 230                 235                 240

aag ctc ctc ggc gtg tac atg ctc acc ctg ctt gcg ctc ttc ggc aac    768

Lys Leu Leu Gly Val Tyr Met Leu Thr Leu Leu Ala Leu Phe Gly Asn

                245                 250                 255

ttt ttc gtg cag agc tac ctc aag aag tcg aac aag ccc aag gcc aag    816

Phe Phe Val Gln Ser Tyr Leu Lys Lys Ser Asn Lys Pro Lys Ala Lys

            260                 265                 270

tcg gcc taa                                                        825

Ser Ala

<210>66

<211>274

<212>PRT

<213>鲜黄破囊壶菌

<400>66

Met Thr Ser Asn Met Ser Ala Trp Gly Val Ala Val Asp Gln Thr Gln

1               5                   10                  15

Gln Val Val Asp Gln Ile Met Gly Gly Ala Glu Pro Tyr Lys Leu Thr

            20                  25                  30

Glu Gly Arg Met Thr Asn Val Glu Thr Met Leu Ala Ile Glu Cys Gly

        35                  40                  45

Tyr Ala Ala Met Leu Leu Phe Leu Thr Pro Ile Met Lys Gln Ala Glu

    50                  55                  60

Lys Pro Phe Glu Leu Lys Ser Phe Lys Leu Ala His Asn Leu Phe Leu

65                  70                  75                  80

Phe Val Leu Ser Ala Tyr Met Cys Leu Glu Thr Val Arg Gln Ala Tyr

                85                  90                  95

Leu Ala Gly Tyr Ser Val Phe Gly Asn Asp Met Glu Lys Gly Ser Glu

            100                 105                 110

Pro His Ala His Gly Met Ala Gln Ile Val Trp Ile Phe Tyr Val Ser

        115                 120                 125

Lys Ala Tyr Glu Phe Val Asp Thr Leu Ile Met Ile Leu Cys Lys Lys

    130                 135                 140

Phe Asn Gln Val Ser Val Leu His Val Tyr His His Ala Thr Ile Phe

145                 150                 155                 160

Ala Ile Trp Phe Met Ile Ala Lys Tyr Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr

                165                 170                 175

Phe Ser Val Ile Leu Asn Ser Phe Val His Thr Val Met Tyr Ala Tyr

            180                 185                 190

Tyr Phe Phe Ser Ser Gln Gly Phe Gly Phe Val Lys Pro Ile Lys Pro

        195                 200                 205

Tyr Ile Thr Ser Leu Gln Met Thr Gln Phe Met Ala Met Leu Val Gln

    210                 215                 220

Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Tyr Pro Cys Asp Tyr Pro Gln Gly Leu Val

225                 230                 235                 240

Lys Leu Leu Gly Val Tyr Met Leu Thr Leu Leu Ala Leu Phe Gly Asn

                245                 250                 255

Phe Phe Val Gln Ser Tyr Leu Lys Lys Ser Asn Lys Pro Lys Ala Lys

            260                 265                 270

Ser Ala

<210>67

<211>903

<212>DNA

<213>Ostreococcus tauri

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(903)

<223>Δ5-延伸酶

<400>67

atg agc gcc tcc ggt gcg ctg ctg ccc gcg atc gcg ttc gcc gcg tac    48

Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Phe Ala Ala Tyr

1               5                   10                  15

gcg tac gcg acg tac gcc tac gcc ttt gag tgg tcg cac gcg aat ggc    96

Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly

            20                  25                  30

atc gac aac gtc gac gcg cgc gag tgg atc ggt gcg ctg tcg ttg agg    144

Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg

        35                  40                  45

ctc ccg gcg atc gcg acg acg atg tac ctg ttg ttc tgc ctg gtc gga    192

Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly

    50                  55                  60

ccg agg ttg atg gcg aag cgc gag gcg ttc gac ccg aag ggg ttc atg    240

Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met

65                  70                  75                  80

ctg gcg tac aat gcg tat cag acg gcg ttc aac gtc gtc gtg ctc ggg    288

Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly

                85                  90                  95

atg ttc gcg cga gag atc tcg ggg ctg ggg cag ccc gtg tgg ggg tca    336

Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser

            100                 105                 110

acc atg ccg tgg agc gat aga aaa tcg ttt aag atc ctc ctc ggg gtg    384

Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val

        115                 120                 125

tgg ttg cac tac aac aac caa tat ttg gag cta ttg gac act gtg ttc    432

Trp Leu His Tyr Asn Asn Gln Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe

    130                 135                 140

atg gtt gcg cgc aag aag acg aag cag ttg agc ttc ttg cac gtt tat    480

Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr

145                 150                 155                 160

cat cac gcc ctg ttg atc tgg gcg tgg tgg ttg gtg tgt cac ttg atg    528

His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met

                165                 170                 175

gcc acg aac gat tgt atc gat gcc tac ttc ggc gcg gcg tgc aac tcg    576

Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser

            180                 185                 190

ttc att cac atc gtg atg tac tcg tat tat ctc atg tcg gcg ctc ggc    624

Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly

        195                 200                 205

att cga tgc ccg tgg aag cga tac atc acc cag gct caa atg ctc caa    672

Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln

    210                 215                 220

ttc gtc att gtc ttc gcg cac gcc gtg ttc gtg ctg cgt cag aag cac    720

Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His

225                 230                 235                 240

tgc ccg gtc acc ctt cct tgg gcg caa atg ttc gtc atg acg aac atg    768

Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met

                245                 250                 255

ctc gtg ctc ttc ggg aac ttc tac ctc aag gcg tac tcg aac aag tcg    816

Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser

            260                 265                 270

cgc ggc gac ggc gcg agt tcc gtg aaa cca gcc gag acc acg cgc gcg    864

Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala

        275                 280                 285

ccc agc gtg cga cgc acg cga tct cga aaa att gac taa                  903

Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp

    290                 295                 300

<210>68

<211>300

<212>PRT

<213>Ostreococcus tauri

<400>68

Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Phe Ala Ala Tyr

1               5                   10                  15

Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly

            20                  25                  30

Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg

        35                  40                  45

Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly

    50                  55                  60

Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met

65                  70                  75                  80

Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly

                85                  90                  95

Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser

            100                 105                 110

Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val

        115                 120                 125

Trp Leu His Tyr Asn Asn Gln Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe

    130                 135                 140

Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr

145                 150                 155                 160

His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met

                165                 170                 175

Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser

            180                 185                 190

Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly

        195                 200                 205

Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln

    210                 215                 220

Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His

225                 230                 235                 240

Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met

                245                 250                 255

Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser

            260                 265                 270

Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala

        275                 280                 285

Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp

    290                 295                 300

<210>69

<211>879

<212>DNA

<213>Ostreococcus tauri

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(879)

<223>Δ6-延伸酶

<400>69

atg agt ggc tta cgt gca ccc aac ttt tta cac aga ttc tgg aca aag    48

Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys

1               5                   10                  15

tgg gac tac gcg att tcc aaa gtc gtc ttc acg tgt gcc gac agt ttt    96

Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe

            20                  25                  30

cag tgg gac atc ggg cca gtg agt tcg agt acg gcg cat tta ccc gcc    144

Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala

        35                  40                  45

att gaa tcc cct acc cca ctg gtg act agc ctc ttg ttc tac tta gtc    192

Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val

    50                  55                  60

aca gtt ttc ttg tgg tat ggt cgt tta acc agg agt tca gac aag aaa    240

Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys

65                  70                  75                  80

att aga gag cct acg tgg tta aga aga ttc ata ata tgt cat aat gcg    288

Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala

                85                  90                  95

ttc ttg ata gtc ctc agt ctt tac atg tgc ctt ggt tgt gtg gcc caa    336

Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln

            100                 105                 110

gcg tat cag aat gga tat act tta tgg ggt aat gaa ttc aag gcc acg    384

Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr

        115                 120                 125

gaa act cag ctt gct ctc tac att tac att ttt tac gta agt aaa ata    432

Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile

    130                 135                 140

tac gag ttt gta gat act tac att atg ctt ctc aag aat aac ttg cgg    480

Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg

145                 150                 155                 160

caa gta agt ttc cta cac att tat cac cac agc acg att tcc ttt att    528

Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile

                165                 170                 175

tgg tgg atc att gct cgg agg gct ccg ggt ggt gat gct tac ttc agc    576

Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser

            180                 185                 190

gcg gcc ttg aac tca tgg gta cac gtg tgc atg tac acc tat tat cta    624

Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu

        195                 200                 205

tta tca acc ctt att gga aaa gaa gat cct aag cgt tcc aac tac ctt    672

Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu

    210                 215                 220

tgg tgg ggt cgc cac cta acg caa atg cag atg ctt cag ttt ttc ttc    720

Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe

225                 230                 235                 240

aac gta ctt caa gcg ttg tac tgc gct tcg ttc tct acg tat ccc aag    768

Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys

                245                 250                 255

ttt ttg tcc aaa att ctg ctc gtc tat atg atg agc ctt ctc ggc ttg    816

Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu

            260                 265                 270

ttt ggg cat ttc tac tat tcc aag cac ata gca gca gct aag ctc cag    864

Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln

        275                 280                 285

aaa aaa cag cag tga                                                879

Lys Lys Gln Gln

    290

<210>70

<211>292

<212>PRT

<213>Ostreococcus tauri

<400>70

Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys

1               5                   10                  15

Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe

            20                  25                  30

Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala

        35                  40                  45

Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val

    50                  55                  60

Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys

65                  70                  75                  80

Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala

                85                  90                  95

Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln

            100                 105                 110

Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr

        115                 120                 125

Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile

    130                 135                 140

Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg

145                 150                 155                 160

Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile

                165                 170                 175

Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser

            180                 185                 190

Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu

        195                 200                 205

Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu

    210                 215                 220

Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe

225                 230                 235                 240

Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys

                245                 250                 255

Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu

            260                 265                 270

Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln

        275                 280                 285

Lys Lys Gln Gln

    290

<210>7l

<211>1362

<212>DNA

<213>有粉报春(Primula farinosa)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1362)

<223>Δ6-去饱和酶

<400>71

atg gct aac aaa tct cca cca aac ccc aaa aca ggt tac ata acc agc    48

Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser

1               5                   10                  15

tca gac ctg aaa tcc cac aac aag gca ggt gac cta tgg ata tca atc    96

Ser Asp Leu Lys Ser His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile

            20                  25                  30

cac ggc caa gtc tac gac gtg tcc tct tgg gcc gcc ctt cat ccg ggg    144

His Gly Gln Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Ala Leu His Pro Gly

        35                  40                  45

ggc act gcc cct ctc atg gcc ctt gca gga cac gac gtg acc gat gct    192

Gly Thr Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala

    50                  55                  60

ttc ctc gcg tac cat ccc cct tcc act gcc cgt ctc ctc cct cct ctc    240

Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu

65                  70                  75                  80

tct acc aac ctc ctt ctt caa aac cac tcc gtc tcc ccc acc tcc tca    288

Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser

                85                  90                  95

gac tac cgc aaa ctc ctc gac aac ttc cat aaa cat ggc ctt ttc cgc    336

Asp Tyr Arg Lys Leu Leu Asp Asn Phe His Lys His Gly Leu Phe Arg

            100                 105                 110

gcc agg ggc cac act gct tac gcc acc ttc gtc ttc atg ata gcg atg    384

Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Phe Met Ile Ala Met

        115                 120                 125

ttt cta atg agc gtg act gga gtc ctt tgc agc gac agt gcg tgg gtc    432

Phe Leu Met Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val

    130                 135                 140

cat ttg gct agc ggc gga gca atg ggg ttc gcc tgg atc caa tgc gga    480

His Leu Ala Ser Gly Gly Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly

145                 150                 155                 160

tgg ata ggt cac gac tct ggg cat tac cgg att atg tct gac agg aaa    528

Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys

                165                 170                 175

tgg aac tgg ttc gcg caa atc cta agc aca aac tgc ctc cag ggg att    576

Trp Asn Trp Phe Ala Gln Ile Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile

            180                 185                 190

agt atc ggg tgg tgg aag tgg aac cat aat gcg cac cac atc gct tgc    624

Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys

        195                 200                 205

aat agc ctg gat tac gac ccc gac ctc cag tat atc cct ttg ctc gtc    672

Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val

    210                 215                 220

gtc tcc ccc aag ttc ttc aac tcc ctt act tct cgt ttc tac gac aag    720

Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys

225                 230                 235                 240

aag ctg aac ttc gac ggc gtg tcg agg ttt ctg gtt tgc tac cag cac    768

Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His

                245                 250                 255

tgg acg ttt tat ccg gtc atg tgt gtc gct agg ctg aac atg ctc gcg    816

Trp Thr Phe Tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Leu Ala

            260                 265                 270

cag tca ttt ata acg ctt ttc tcg agt agg gag gtg tgc cat agg gcg    864

Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Cys His Arg Ala

        275                 280                 285

caa gag gtt ttc gga ctt gcc gtg ttt tgg gtt tgg ttt ccg ctt tta    912

Gln Glu Val Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu

    290                 295                 300

ctt tct tgt tta cct aat tgg ggc gag agg att atg ttt ttg ctt gcg    960

Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala

305                 310                 315                 320

agc tat tcc gtt acg ggg ata caa cac gtg cag ttc agc ttg aac cat    1008

Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His

                325                 330                 335

ttt tct tcg gac gtc tat gtg ggc ccg cca gta ggt aat gac tgg ttc    1056

Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Gly Asn Asp Trp Phe

            340                 345                 350

aag aaa cag act gcc ggg aca ctt aac ata tcg tgc ccg gcg tgg atg    1104

Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met

        355                 360                 365

gat tgg ttc cat ggc ggg tta cag ttt cag gtc gag cac cac ttg ttt    1152

Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Lau Phe

    370                 375                 380

ccg cgg atg cct agg ggt cag ttt agg aag att tct cct ttt gtg agg    1200

Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg

385                 390                 395                 400

gat ttg tgt aag aaa cac aac ttg cct tac aat atc gcg tct ttt act    1248

Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr

                405                 410                 415

aaa gcg aat gtg ttt acg ctt aag acg ctg aga aat acg gcc att gag    1296

Lys Ala Asn Val Phe Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu

            420                 425                 430

gct cgg gac ctc tct aat ccg ctc cca aag aat atg gtg tgg gaa gct    1344

Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Leu Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala

        435                 440                 445

ctt aaa act ctc ggg tga                                            1362

Leu Lys Thr Leu Gly

    450

<210>72

<211>453

<212>PRT

<213>有粉报春

<400>72

Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser

1               5                   10                  15

Ser Asp Leu Lys Ser His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile

            20                  25                  30

His Gly Gln Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Ala Leu His Pro Gly

        35                  40                  45

Gly Thr Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala

    50                  55                  60

Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu

65                  70                  75                  80

Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser

                85                  90                  95

Asp Tyr Arg Lys Leu Leu Asp Asn Phe His Lys His Gly Leu Phe Arg

            100                 105                 110

Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Phe Met Ile Ala Met

        115                 120                 125

Phe Leu Met Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val

    130                 135                 140

His Leu Ala Ser Gly Gly Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly

145                 150                 155                 160

Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys

                165                 170                 175

Trp Asn Trp Phe Ala Gln Ile Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile

            180                 185                 190

Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys

        195                 200                 205

Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val

    210                 215                 220

Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys

225                 230                 235                 240

Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His

                245                 250                 255

Trp Thr Phe Tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Leu Ala

            260                 265                 270

Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Cys His Arg Ala

        275                 280                 285

Gln Glu Val Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu

    290                 295                 300

Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala

305                 310                 315                 320

Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His

                325                 330                 335

Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Gly Asn Asp Trp Phe

            340                 345                 350

Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met

        355                 360                 365

Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe

    370                 375                 380

Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg

385                 390                 395                 400

Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr

                405                 410                 415

Lys Ala Asn Val Phe Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu

            420                 425                 430

Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Leu Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala

        435                 440                 445

Leu Lys Thr Leu Gly

    450

<210>73

<211>1362

<212>DNA

<213>高穗花报春(Primula vialii)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1362)

<223>Δ6-去饱和酶

<400>73

atg gct aac aaa tct cca cca aac ccc aaa aca ggt tac att acc agc    48

Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser

1               5                   10                  15

tca gac ctg aaa ggg cac aac aaa gca gga gac cta tgg ata tca atc    96

Ser Asp Leu Lys Gly His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile

            20                  25                  30

cac ggg gag gta tac gac gtg tcc tcg tgg gcc ggc ctt cac ccg ggg    144

His Gly Glu Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Gly Leu His Pro Gly

        35                  40                  45

ggc agt gcc ccc ctc atg gcc ctc gca gga cac gac gta acc gac gct    192

Gly Ser Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala

    50                  55                  60

ttt cta gcg tat cat cct cct tct acc gcc cgc ctc ctc cct ccc ctc    240

Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu

65                  70                  75                  80

tcc acc aac ctc ctc ctt caa aac cac tcc gtc tcc ccc acc tcc tct    288

Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser

                85                  90                  95

gac tac cgc aaa ctc ctc cac aac ttc cat aaa att ggt atg ttc cgc    336

Asp Tyr Arg Lys Leu Leu His Asn Phe His Lys Ile Gly Met Phe Arg

            100                 105                 110

gcc agg ggc cac act gct tac gcc acc ttc gtc atc atg ata gtg atg    384

Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Ile Met Ile Val Met

        115                 120                 125

ttt cta acg agc gtg acc gga gtc ctt tgc agc gac agt gcg tgg gtc    432

Phe Leu Thr Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val

    130                 135                 140

cat ctg gct agc ggc gca gca atg ggg ttc gcc tgg atc cag tgc gga    480

His Leu Ala Ser Gly Ala Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly

145                 150                 155                 160

tgg ata ggt cac gac tct ggg cat tac cgg att atg tct gac agg aaa    528

Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys

                165                 170                 175

tgg aac tgg ttc gcg cag gtc ctg agc aca aac tgc ctc cag ggg atc    576

Trp Asn Trp Phe Ala Gln Val Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile

            180                 185                 190

agt atc ggg tgg tgg aag tgg aac cat aac gcc cac cac att gct tgc    624

Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys

        195                 200                 205

aat agc ctg gac tac gac ccc gac ctc cag tat atc cct ttg ctc gtg    672

Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val

    210                 215                 220

gtc tcc ccc aag ttc ttc aac tcc ctt act tct cgt ttc tac gac aag    720

Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys

225                 230                 235                 240

aag ctg aat ttc gac ggc gtg tca agg ttt ctg gtt tgc tac cag cac    768

Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His

                245                 250                 255

tgg acg ttt tat cca gtc atg tgt gtc gct agg cta aac atg atc gca    816

Trp Thr Phe Tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Ile Ala

            260                 265                 270

cag tcg ttt ata acg ctt ttc tcg agc agg gag gtg ggt cat agg gcg    864

Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Gly His Arg Ala

        275                 280                 285

caa gag att ttc gga ctt gct gtg ttt tgg gtt tgg ttt ccg ctc ctg    912

Gln Glu Ile Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu

    290                 295                 300

ctc tct tgc tta cct aat tgg agc gag agg att atg ttt ctg cta gcg    960

Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Ser Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala

305                 310                 315                 320

agc tat tcc gtt acg ggg ata cag cac gtg cag ttc agc ttg aac cat    1008

Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His

                325                 330                 335

ttt tct tcg gac gtc tac gtg ggc ccg cca gta gct aac gac tgg ttc    1056

Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Ala Asn Asp Trp Phe

            340                 345                 350

aag aaa cag act gct ggg aca ctt aac ata tcg tgc ccg gcg tgg atg    1104

Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met

        355                 360                 365

gac tgg ttc cat ggc ggg ttg cag ttt cag gtc gag cac cac ttg ttt    1152

Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe

    370                 375                 380

ccg cgg atg cct agg ggt cag ttt agg aag att tct cct ttt gtg agg    1200

Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg

385                 390                 395                 400

gat ttg tgt aag aaa cac aac ttg cct tac aat atc gcg tct ttt act    1248

Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr

                405                 410                 415

aaa gca aac gtg ttg acg ctt aag acg ctg aga aat acg gcc att gag    1296

Lye Ala Asn Val Leu Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu

            420                 425                 430

gct cgg gac ctc tct aat ccg acc cca aag aat atg gtg tgg gaa gcc    1344

Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Thr Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala

        435                 440                 445

gtc cac aca cac ggc tag                                              1362

Val His Thr His Gly

    450

<210>74

<211>453

<212>PRT

<213>高穗花报春

<400>74

Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser

1               5                   10                  15

Ser Asp Leu Lys Gly His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile

            20                  25                  30

His Gly Glu Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Gly Leu His Pro Gly

        35                  40                  45

Gly Ser Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala

    50                  55                  60

Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu

65                  70                  75                  80

Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser

                85                  90                  95

Asp Tyr Arg Lys Leu Leu His Asn Phe His Lys Ile Gly Met Phe Arg

            100                 105                 110

Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Ile Met Ile Val Met

        115                 120                 125

Phe Leu Thr Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val

    130                 135                 140

His Leu Ala Ser Gly Ala Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly

145                 150                 155                 160

Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys

                165                 170                 175

Trp Asn Trp Phe Ala Gln Val Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile

            180                 185                 190

Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys

        195                 200                 205

Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val

    210                 215                 220

Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys

225                 230                 235                 240

Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His

                245                 250                 255

Trp Thr Phe Tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Ile Ala

            260                 265                 270

Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Gly His Arg Ala

        275                 280                 285

Gln Glu Ile Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu

    290                 295                 300

Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Ser Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala

305                 310                 315                 320

Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His

                325                 330                 335

Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Ala Asn Asp Trp Phe

            340                 345                 350

Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met

        355                 360                 365

Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe

    370                 375                 380

Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg

385                 390                 395                 400

Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr

                405                 410                 415

Lys Ala Asn Val Leu Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu

            420                 425                 430

Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Thr Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala

        435                 440                 445

Val His Thr His Gly

    450

<210>75

<211>903

<212>DNA

<213>Ostreococcus tauri

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(903)

<223>Δ5-延伸酶

<400>75

atg agc gcc tcc ggt gcg ctg ctg ccc gcg atc gcg tcc gcc gcg tac    48

Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Ser Ala Ala Tyr

1               5                   10                  15

gcg tac gcg acg tac gcc tac gcc ttt gag tgg tcg cac gcg aat ggc    96

Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly

            20                  25                  30

atc gac aac gtc gac gcg cgc gag tgg atc ggt gcg ctg tcg ttg agg    144

Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg

        35                  40                  45

ctc ccg gcg atc gcg acg acg atg tac ctg ttg ttc tgc ctg gtc gga    192

Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly

    50                  55                  60

ccg agg ttg atg gcg aag cgc gag gcg ttc gac ccg aag ggg ttc atg    240

Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met

65                  70                  75                  80

ctg gcg tac aat gcg tat cag acg gcg ttc aac gtc gtc gtg ctc ggg    288

Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly

                85                  90                  95

atg ttc gcg cga gag atc tcg ggg ctg ggg cag ccc gtg tgg ggg tca    336

Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser

            100                 105                 110

acc atg ccg tgg agc gat aga aaa tcg ttt aag atc ctc ctc ggg gtg    384

Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val

        115                 120                 125

tgg ttg cac tac aac aac aaa tat ttg gag cta ttg gac act gtg ttc    432

Trp Leu His Tyr Asn Asn Lys Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe

    130                 135                 140

atg gtt gcg cgc aag aag acg aag cag ttg agc ttc ttg cac gtt tat    480

Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr

145                 150                 155                 160

cat cac gcc ctg ttg atc tgg gcg tgg tgg ttg gtg tgt cac ttg atg    528

His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met

                165                 170                 175

gcc acg aac gat tgt atc gat gcc tac ttc ggc gcg gcg tgc aac tcg    576

Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser

            180                 185                 190

ttc att cac atc gtg atg tac tcg tat tat ctc atg tcg gcg ctc ggc    624

Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly

        195                 200                 205

att cga tgc ccg tgg aag cga tac atc acc cag gct caa atg ctc caa    672

Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln

    210                 215                 220

ttc gtc att gtc ttc gcg cac gcc gtg ttc gtg ctg cgt cag aag cac    720

Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His

225                 230                 235                 240

tgc ccg gtc acc ctt cct tgg gcg caa atg ttc gtc atg acg aac atg    768

Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met

                245                 250                 255

ctc gtg ctc ttc ggg aac ttc tac ctc aag gcg tac tcg aac aag tcg    816

Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser

            260                 265                 270

cgc ggc gac ggc gcg agt tcc gtg aaa cca gcc gag acc acg cgc gcg    864

Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala

        275                 280                 285

ccc agc gtg cga cgc acg cga tct cga aaa att gac taa                903

Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp

    290                 295                 300

<210>76

<211>300

<212>PRT

<213>Ostreococcus tauri

<400>76

Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Ser Ala Ala Tyr

1               5                   10                  15

Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly

            20                  25                  30

Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg

        35                  40                  45

Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly

    50                  55                  60

Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met

65                  70                  75                  80

Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly

                85                  90                  95

Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser

            100                 105                 110

Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val

        115                 120                 125

Trp Leu His Tyr Asn Asn Lys Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe

    130                 135                 140

Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr

145                 150                 155                 160

His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met

                165                 170                 175

Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser

            180                 185                 190

Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly

        195                 200                 205

Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln

    210                 215                 220

Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His

225                 230                 235                 240

Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met

                245                 250                 255

Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser

            260                 265                 270

Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala

        275                 280                 285

Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp

    290                 295                 300

<210>77

<211>903

<212>DNA

<213>Ostreococcus tauri

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(903)

<223>Δ5-延伸酶

<400>77

atg agc gcc tcc ggt gcg ctg ctg ccc gcg atc gcg ttc gcc gcg tac    48

Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Phe Ala Ala Tyr

1               5                   10                  15

gcg tac gcg acg tac gcc tac gcc ttt gag tgg tcg cac gcg aat ggc    96

Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly

            20                  25                  30

atc gac aac gtc gac gcg cgc gag tgg atc ggt gcg ctg tcg ttg agg    144

Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg

        35                  40                  45

ctc ccg gcg atc gcg acg acg atg tac ctg ttg ttc tgc ctg gtc gga    192

Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly

    50                  55                  60

ccg agg ttg atg gcg aag cgc gag gcg ttc gac ccg aag ggg ttc atg    240

Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met

65                  70                  75                  80

ctg gcg tac aat gcg tat cag acg gcg ttc aac gtc gtc gtg ctc ggg    288

Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly

                85                  90                  95

atg ttc gcg cga gag atc tcg ggg ctg ggg cag ccc gtg tgg ggg tca    336

Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser

            100                 105                 110

acc atg ccg tgg agc gat aga aaa tcg ttt aag atc ctc ctc ggg gtg    384

Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val

        115                 120                 125

tgg ttg cac tac aac aac aaa tat ttg gag cta ttg gac act gtg ttc    432

Trp Ley His Tyr Asn Asn Lys Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe

    130                 135                 140

atg gtt gcg cgc aag aag acg aag cag ttg agc ttc ttg cac gtt tat    480

Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr

145                 150                 155                 160

cat cac gcc ctg ttg atc tgg gcg tgg tgg ttg gtg tgt cac ttg atg    528

His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met

                165                 170                 175

gcc acg aac gat tgt atc gat gcc tac ttc ggc gcg gcg tgc aac tcg    576

Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser

            180                 185                 190

ttc att cac atc gtg atg tac tcg tat tat ctc atg tcg gcg ctc ggc    624

Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly

        195                 200                 205

att cga tgc ccg tgg aag cga tac atc acc cag gct caa atg ctc caa    672

Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln

    210                 215                 220

ttc gtc att gtc ttc gcg cac gcc gtg ttc gtg ctg cgt cag aag cac    720

Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His

225                 230                 235                 240

tgc ccg gtc acc ctt cct tgg gcg caa atg ttc gtc atg acg aac atg    768

Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met

                245                 250                 255

ctc gtg ctc ttc ggg aac ttc tac ctc aag gcg tac tcg aac aag tcg    816

Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser

            260                 265                 270

cgc ggc gac ggc gcg agt tcc gtg aaa cca gcc gag acc acg cgc gcg    864

Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala

        275                 280                 285

ccc agc gtg cga cgc acg cga tct cga aaa att gac taa                903

Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp

    290                 295                 300

<210>78

<211>300

<212>PRT

<213>Ostreococcus tauri

<400>78

Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Phe Ala Ala Tyr

1               5                   10                  15

Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly

            20                  25                  30

Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg

        35                  40                  45

Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly

    50                  55                  60

Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met

65                  70                  75                  80

Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly

                85                  90                  95

Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser

            100                 105                 110

Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val

        115                 120                 125

Trp Leu His Tyr Asn Asn Lys Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe

    130                 135                 140

Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr

145                 150                 155                 160

His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met

                165                 170                 175

Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser

            180                 185                 190

Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly

        195                 200                 205

Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln

    210                 215                 220

Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His

225                 230                 235                 240

Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met

                245                 250                 255

Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser

            260                 265                 270

Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala

        275                 280                 285

Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp

    290                 295                 300

<210>79

<211>903

<212>DNA

<213>Ostreococcus tauri

<220>

<22l>CDS

<222>(1)..(903)

<223>Δ5-延伸酶

<400>79

atg agc gcc tcc ggt gcg ctg ctg ccc gcg atc gcg tcc gcc gcg tac    48

Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Ser Ala Ala Tyr

1               5                   10                  15

gcg tac gcg acg tac gcc tac gcc ttt gag tgg tcg cac gcg aat ggc    96

Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly

            20                  25                  30

atc gac aac gtc gac gcg cgc gag tgg atc ggt gcg ctg tcg ttg agg    144

Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg

        35                  40                  45

ctc ccg gcg atc gcg acg acg atg tac ctg ttg ttc tgc ctg gtc gga    192

Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly

    50                  55                  60

ccg agg ttg atg gcg aag cgc gag gcg ttc gac ccg aag ggg ttc atg    240

Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met

65                  70                  75                  80

ctg gcg tac aat gcg tat cag acg gcg ttc aac gtc gtc gtg ctc ggg    288

Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly

                85                  90                  95

atg ttc gcg cga gag atc tcg ggg ctg ggg cag ccc gtg tgg ggg tca    336

Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser

            100                 105                 110

acc atg ccg tgg agc gat aga aaa tcg ttt aag atc ctc ctc ggg gtg    384

Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val

        115                 120                 125

tgg ttg cac tac aac aac caa tat ttg gag cta ttg gac act gtg ttc    432

Trp Leu His Tyr Asn Asn Gln Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe

    130                 135                 140

atg gtt gcg cgc aag aag acg aag cag ttg agc ttc ttg cac gtt tat    480

Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr

145                 150                 155                 160

cat cac gcc ctg ttg atc tgg gcg tgg tgg ttg gtg tgt cac ttg atg    528

His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met

                165                 170                 175

gcc acg aac gat tgt atc gat gcc tac ttc ggc gcg gcg tgc aac tcg    576

Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser

            180                 185                 190

ttc att cac atc gtg atg tac tcg tat tat ctc atg tcg gcg ctc ggc    624

Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly

        195                 200                 205

att cga tgc ccg tgg aag cga tac atc acc cag gct caa atg ctc caa    672

Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln

    210                 215                 220

ttc gtc att gtc ttc gcg cac gcc gtg ttc gtg ctg cgt cag aag cac    720

Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His

225                 230                 235                 240

tgc ccg gtc acc ctt cct tgg gcg caa atg ttc gtc atg acg aac atg    768

Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met

                245                 250                 255

ctc gtg ctc ttc ggg aac ttc tac ctc aag gcg tac tcg aac aag tcg    816

Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser

            260                 265                 270

cgc ggc gac ggc gcg agt tcc gtg aaa cca gcc gag acc acg cgc gcg    864

Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala

        275                 280                 285

ccc agc gtg cga cgc acg cga tct cga aaa att gac taa                903

Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp

    290                 295                 300

<210>80

<211>300

<212>PRT

<213>Ostreococcus tauri

<400>80

Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Ser Ala Ala Tyr

1               5                   10                  15

Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly

            20                  25                  30

Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg

        35                  40                  45

Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly

    50                  55                  60

Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met

65                  70                  75                  80

Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly

                85                  90                  95

Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser

            100                 105                 110

Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val

        115                 120                 125

Trp Leu His Tyr Asn Asn Gln Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe

    130                 135                 140

Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr

145                 150                 155                 160

His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met

                165                 170                 175

Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser

            180                 185                 190

Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly

        195                 200                 205

Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln

    210                 215                 220

Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His

225                 230                 235                 240

Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met

                245                 250                 255

Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser

            260                 265                 270

Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala

        275                 280                 285

Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp

    290                 295                 300

<210>81

<211>879

<212>DNA

<213>Ostreococcus tauri

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(879)

<223>Δ6-延伸酶

<400>81

atg agt ggc tta cgt gca ccc aac ttt tta cac aga ttc tgg aca aag    48

Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys

1               5                   10                  15

tgg gac tac gcg att tcc aaa gtc gtc ttc acg tgt gcc gac agt ttt    96

Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe

            20                  25                  30

cag tgg gac atc ggg cca gtg agt tcg agt acg gcg cat tta ccc gcc    144

Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala

        35                  40                  45

att gaa tcc cct acc cca ctg gtg act agc ctc ttg ttc tac tta gtc    192

Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val

    50                  55                  60

aca gtt ttc ttg tgg tat ggt cgt tta acc agg agt tca gac aag aaa    240

Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys

65                  70                  75                  80

att aga gag cct acg tgg tta aga aga ttc ata ata tgt cat aat gcg    288

Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala

                85                  90                  95

ttc ttg ata gtc ctc agt ctt tac atg tgc ctt ggt tgt gtg gcc caa    336

Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln

            100                 105                 110

gcg tat cag aat gga tat act tta tgg ggt aat gaa ttc aag gcc acg    384

Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr

        115                 120                 125

gaa act cag ctt gct ctc tac att tac att ttt tac gta agt aaa ata    432

Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile

    130                 135                 140

tac gag ttt gta gat act tac att atg ctt ctc aag aat aac ttg cgg    480

Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Ann Leu Arg

145                 150                 155                 160

caa gta aga ttc cta cac act tat cac cac agc acg att tcc ttt att    528

Gln Val Arg Phe Leu His Thr Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile

                165                 170                 175

tgg tgg atc att gct cgg agg gct ccg ggt ggt gat gct tac ttc agc    576

Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser

            180                 185                 190

gcg gcc ttg aac tca tgg gta cac gtg tgc atg tac acc tat tat cta    624

Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu

        195                 200                 205

tta tca acc ctt att gga aaa gaa gat cct aag cgt tcc aac tac ctt    672

Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu

    210                 215                 220

tgg tgg ggt cgc cac cta acg caa atg cag atg ctt cag ttt ttc ttc    720

Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe

225                 230                 235                 240

aac gta ctt caa gcg ttg tac tgc gct tcg ttc tct acg tat ccc aag    768

Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys

                245                 250                 255

ttt ttg tcc aaa att ctg ctc gtc tat atg atg agc ctt ctc ggc ttg    816

Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu

            260                 265                 270

ttt ggg cat ttc tac tat tcc aag cac ata gca gca gct aag ctc cag    864

Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln

        275                 280                 285

aaa aaa cag cag tga                                                879

Lys Lys Gln Gln

    290

<210>82

<211>292

<212>PRT

<213>Ostreococcus tauri

<400>82

Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys

1               5                   10                  15

Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe

            20                  25                  30

Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala

        35                  40                  45

Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val

    50                  55                  60

Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys

65                  70                  75                  80

Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala

                85                  90                  95

Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln

            100                 105                 110

Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr

        115                 120                 125

Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile

    130                 135                 140

Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg

145                 150                 155                 160

Gln Val Arg Phe Leu His Thr Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile

                165                 170                 175

Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser

            180                 185                 190

Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu

        195                 200                 205

Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu

    210                 215                 220

Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe

225                 230                 235                 240

Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys

                245                 250                 255

Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu

            260                 265                 270

Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln

        275                 280                 285

Lys Lys Gln Gln

    290

<210>83

<211>831

<212>DNA

<213>破囊壶菌属中的种(Thraustochytrium sp.)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(831)

<223>Δ5-延伸酶

<400>83

atg gac gtc gtc gag cag caa tgg cgc cgc ttc gtg gac gcc gtg gac    48

Met Asp Val Val Glu Gln Gln Trp Arg Arg Phe Val Asp Ala Val Asp

1               5                   10                  15

aac gga atc gtg gag ttc atg gag cat gag aag ccc aac aag ctg aac    96

Asn Gly Ile Val Glu Phe Met Glu His Glu Lys Pro Asn Lys Leu Asn

            20                  25                  30

gag ggc aag ctc ttc acc tcg acc gag gag atg atg gcg ctt atc gtc    144

Glu Gly Lys Leu Phe Thr Ser Thr Glu Glu Met Met Ala Leu Ile Val

        35                  40                  45

ggc tac ctg gcg ttc gtg gtc ctc ggg tcc gcc ttc atg aag gcc ttt    192

Gly Tyr Leu Ala Phe Val Val Leu Gly Ser Ala Phe Met Lys Ala Phe

    50                  55                  60

gtc gat aag cct ttc gag ctc aag ttc ctc aag ctc gtg cac aac atc    240

Val Asp Lys Pro Phe Glu Leu Lys Phe Leu Lys Leu Val His Asn Ile

65                  70                  75                  80

ttc ctc acc ggt ctg tcc atg tac atg gcc acc gag tgc gcg cgc cag    288

Phe Leu Thr Gly Leu Ser Met Tyr Met Ala Thr Glu Cys Ala Arg Gln

                85                  90                  95

gca tac ctc ggc ggc tac aag ctc ttt ggc aac ccg atg gag aag ggc    336

Ala Tyr Leu Gly Gly Tyr Lys Leu Phe Gly Asn Pro Met Glu Lys Gly

            100                 105                 110

acc gag tcg cac gcc ccg ggc atg gcc aac atc atc tac atc ttc tac    384

Thr Glu Ser His Ala Pro Gly Met Ala Asn Ile Ile Tyr Ile Phe Tyr

        115                 120                 125

gtg agc aag ttc ctc gaa ttc ctc gac acc gtc ttc atg atc ctc ggc    432

Val Ser Lys Phe Leu Glu Phe Leu Asp Thr Val Phe Met Ile Leu Gly

    130                 135                 140

aag aag tgg aag cag ctc agc ttt ctc cac gtc tac cac cac gcg agc    480

Lys Lys Trp Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ala Ser

145                 150                 155                 160

atc agc ttc atc tgg ggc atc atc gcc cgc ttc gcg ccc ggt ggc gac    528

Ile Ser Phe Ile Trp Gly Ile Ile Ala Arg Phe Ala Pro Gly Gly Asp

                165                 170                 175

gcc tac ttc tct acc atc ctc aac agc agc gtg cat gtc gtg ctc tac    576

Ala Tyr Phe Ser Thr Ile Leu Asn Ser Ser Val His Val Val Leu Tyr

            180                 185                 190

ggc tac tac gcc tcg acc acc ctc ggc tac acc ttc atg cgc ccg ctg    624

Gly Tyr Tyr Ala Ser Thr Thr Leu Gly Tyr Thr Phe Met Arg Pro Leu

        195                 200                 205

cgc ccg tac att acc acc att cag ctc acg cag ttc atg gcc atg gtc    672

Arg Pro Tyr Ile Thr Thr Ile Gln Leu Thr Gln Phe Met Ala Met Val

    210                 215                 220

gtc cag tcc gtc tat gac tac tac aac ccc tgc gac tac ccg cag ccc    720

Val Gln Ser Val Tyr Asp Tyr Tyr Asn Pro Cys Asp Tyr Pro Gln Pro

225                 230                 235                 240

ctc gtc aag ctg ctc ttc tgg tac atg ctc acc atg ctc ggc ctc ttc    768

Leu Val Lys Leu Leu Phe Trp Tyr Met Leu Thr Met Leu Gly Leu Phe

                245                 250                 255

ggc aac ttc ttc gtg cag cag tac ctc aag ccc aag gcg ccc aag aag    816

Gly Asn Phe Phe Val Gln Gln Tyr Leu Lys Pro Lys Ala Pro Lys Lys

            260                 265                 270

cag aag acc atc taa                                                831

Gln Lys Thr Ile

        275

<210>84

<211>276

<212>PRT

<213>破囊壶菌属中的种

<400>84

Met Asp Val Val Glu Gln Gln Trp Arg Arg Phe Val Asp Ala Val Asp

1               5                   10                  15

Asn Gly Ile Val Glu Phe Met Glu His Glu Lys Pro Asn Lys Leu Asn

            20                  25                  30

Glu Gly Lys Leu Phe Thr Ser Thr Glu Glu Met Met Ala Leu Ile Val

        35                  40                  45

Gly Tyr Leu Ala Phe Val Val Leu Gly Ser Ala Phe Met Lys Ala Phe

    50                  55                  60

Val Asp Lys Pro Phe Glu Leu Lys Phe Leu Lys Leu Val His Asn Ile

65                  70                  75                  80

Phe Leu Thr Gly Leu Ser Met Tyr Met Ala Thr Glu Cys Ala Arg Gln

                85                  90                  95

Ala Tyr Leu Gly Gly Tyr Lys Leu Phe Gly Asn Pro Met Glu Lys Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Ser His Ala Pro Gly Met Ala Asn Ile Ile Tyr Ile Phe Tyr

        115                 120                 125

Val Ser Lys Phe Leu Glu Phe Leu Asp Thr Val Phe Met Ile Leu Gly

    130                 135                 140

Lys Lys Trp Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ala Ser

145                 150                 155                 160

Ile Ser Phe Ile Trp Gly Ile Ile Ala Arg Phe Ala Pro Gly Gly Asp

                165                 170                 175

Ala Tyr Phe Ser Thr Ile Leu Asn Ser Ser Val His Val Val Leu Tyr

            180                 185                 190

Gly Tyr Tyr Ala Ser Thr Thr Leu Gly Tyr Thr Phe Met Arg Pro Leu

        195                 200                 205

Arg Pro Tyr Ile Thr Thr Ile Gln Leu Thr Gln Phe Met Ala Met Val

    210                 215                 220

Val Gln Ser Val Tyr Asp Tyr Tyr Asn Pro Cys Asp Tyr Pro Gln Pro

225                 230                 235                 240

Leu Val Lys Leu Leu Phe Trp Tyr Met Leu Thr Met Leu Gly Leu Phe

                245                 250                 255

Gly Asn Phe Phe Val Gln Gln Tyr Leu Lys Pro Lys Ala Pro Lys Lys

            260                 265                 270

Gln Lys Thr Ile

        275

<210>85

<211>1077

<212>DNA

<213>假矮海链藻

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1077)

<223>Δ5-延伸酶

<400>85

atg tgc tca cca ccg ccg tca caa tcc aaa aca aca tcc ctc cta gca    48

Met Cys Ser Pro Pro Pro Ser Gln Ser Lys Thr Thr Ser Leu Leu Ala

1               5                   10                  15

cgg tac acc acc gcc gcc ctc ctc ctc ctc acc ctc aca acg tgg tgc    96

Arg Tyr Thr Thr Ala Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Thr Thr Trp Cys

            20                  25                  30

cac ttc gcc ttc cca gcc gcc acc gcc aca ccc ggc ctc acc gcc gaa    144

His Phe Ala Phe Pro Ala Ala Thr Ala Thr Pro Gly Leu Thr Ala Glu

        35                  40                  45

atg cac tcc tac aaa gtc cca ctc ggt ctc acc gta ttc tac ctg ctg    192

Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu

    50                  55                  60

agt cta ccg tca cta aag tac gtt acg gac aac tac ctt gcc aaa aag    240

Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys

65                  70                  75                  80

tat gat atg aag tca ctc ctg acg gaa tca atg gtg ttg tac aat gtg    288

Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val

                85                  90                  95

gcg caa gtg ctg ctc aat ggg tgg acg gtg tat gcg att gtg gat gcg    336

Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala

            100                 105                 110

gtg atg aat aga gac cat cct ttt att gga agt aga agt ttg gtt ggg    384

Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly

        115                 120                 125

gcg gcg ttg cat agt ggg agc tcg tat gcg gtg tgg gtt cat tat tgt    432

Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys

    130                 135                 140

gat aag tat ttg gag ttc ttt gat acg tat ttt atg gtg ttg agg ggg    480

Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly

145                 150                 155                 160

aaa atg gac cag gtc tcc ttc ctc cac atc tac cac cac acg acc ata    528

Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile

                165                 170                 175

gcg tgg gca tgg tgg atc gcc ctc cgc ttc tcc ccc ggc gga gac att    576

Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile

            180                 185                 190

tac ttc ggg gca ctc ctc aac tcc atc atc cac gtc ctc atg tat tcc    624

Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser

        195                 200                 205

tac tac gcc ctt gcc cta ctc aag gtc agt tgt cca tgg aaa cga tac    672

Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr

    210                 215                 220

ttg act caa gct caa tta ttg caa ttc aca agt gtg gtg gtt tat acg    720

Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr

225                 230                 235                 240

ggg tgt acg ggt tat act cat tac tat cat acg aag cat gga gcg gat    768

Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp

                245                 250                 255

gag aca cag cct agt tta gga acg tat tat ttc tgt tgt gga gtg cag    816

Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln

            260                 265                 270

gtg ttt gag atg gtt agt ttg ttt gta ctc ttt tcc atc ttt tat aaa    864

Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys

        275                 280                 285

cga tcc tat tcg aag aag aac aag tca gga gga aag gat agc aag aag    912

Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly GLy Lys Asp Ser Lys Lys

    290                 295                 300

aat gat gat ggg aat aat gag gat caa tgt cac aag gct atg aag gat    960

Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp

305                 310                 315                 320

ata tcg gag ggt gcg aag gag gtt gtg ggg cat gca gcg aag gat gct    1008

Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala

                325                 330                 335

gga aag ttg gtg gct acg gcg agt aag gct gta aag agg aag gga act    1056

Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr

            340                 345                 350

cgt gtt act ggt gcc atg tag                                        1077

Arg Val Thr Gly Ala Met

        355

<210>86

<211>358

<212>PRT

<213>假矮海链藻

<400>86

Met Cys Ser Pro Pro Pro Ser Gln Ser Lys Thr Thr Ser Leu Leu Ala

1               5                   10                  15

Arg Tyr Thr Thr Ala Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Thr Thr Trp Cys

            20                  25                  30

His Phe Ala Phe Pro Ala Ala Thr Ala Thr Pro Gly Leu Thr Ala Glu

        35                  40                  45

Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu

    50                  55                  60

Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys

65                  70                  75                  80

Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val

                85                  90                  95

Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala

            100                 105                 110

Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly

        115                 120                 125

Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys

    130                 135                 140

Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly

145                 150                 155                 160

Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile

                165                 170                 175

Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile

            180                 185                 190

Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser

        195                 200                 205

Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr

    210                 215                 220

Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr

225                 230                 235                 240

Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp

                245                 250                 255

Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln

            260                 265                 270

Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys

        275                 280                 285

Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys

    290                 295                 300

Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp

305                 310                 315                 320

Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala

                325                 330                 335

Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr

            340                 345                 350

Arg Val Thr Gly Ala Met

        355

<210>87

<211>1086

<212>DNA

<213>致病疫霉

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1086)

<223>ω3-去饱和酶

<400>87

atg gcg acg aag gag gcg tat gtg ttc ccc act ctg acg gag atc aag    48

Met Ala Thr Lys Glu Ala Tyr Val Phe Pro Thr Leu Thr Glu Ile Lys

1               5                   10                  15

cgg tcg cta cct aaa gac tgt ttc gag gct tcg gtg cct ctg tcg ctc    96

Arg Ser Leu Pro Lys Asp Cys Phe Glu Ala Ser Val Pro Leu Ser Leu

            20                  25                  30

tac tac acc gtg cgt tgt ctg gtg atc gcg gtg gct cta acc ttc ggt    144

Tyr Tyr Thr Val Arg Cys Leu Val Ile Ala Val Ala Leu Thr Phe Gly

        35                  40                  45

ctc aac tac gct cgc gct ctg ccc gag gtc gag agc ttc tgg gct ctg    192

Leu Asn Tyr Ala Arg Ala Leu Pro Glu Val Glu Ser Phe Trp Ala Leu

    50                  55                  60

gac gcc gca ctc tgc acg ggc tac atc ttg ctg cag ggc atc gtg ttc    240

Asp Ala Ala Leu Cys Thr Gly Tyr Ile Leu Leu Gln Gly Ile Val Phe

65                  70                  75                  80

tgg ggc ttc ttc acg gtg ggc cac gat gcc ggc cac ggc gcc ttc tcg    288

Trp Gly Phe Phe Thr Val Gly His Asp Ala Gly His Gly Ala Phe Ser

                85                  90                  95

cgc tac cac ctg ctt aac ttc gtg gtg ggc act ttc atg cac tcg ctc    336

Arg Tyr His Leu Leu Asn Phe Val Val Gly Thr Phe Met His Ser Leu

            100                 105                 110

atc ctc acg ccc ttc gag tcg tgg aag ctc acg cac cgt cac cac cac    384

Ile Leu Thr Pro Phe Glu Ser Trp Lys Leu Thr His Arg His His His

        115                 120                 125

aag aac acg ggc aac att gac cgt gac gag gtc ttc tac ccg caa cgc    432

Lys Asn Thr Gly Asn Ile Asp Arg Asp Glu Val Phe Tyr Pro Gln Arg

    130                 135                 140

aag gcc gac gac cac ccg ctg tct cgc aac ctg att ctg gcg ctc ggg    480

Lys Ala Asp Asp His Pro Leu Ser Arg Asn Leu Ile Leu Ala Leu Gly

145                 150                 155                 160

gca gcg tgg ctc gcc tat ttg gtc gag ggc ttc cct cct cgt aag gtc    528

Ala Ala Trp Leu Ala Tyr Leu Val Glu Gly Phe Pro Pro Arg Lys Val

                165                 170                 175

aac cac ttc aac ccg ttc gag cct ctg ttc gtg cgt cag gtg tca gct    576

Asn His Phe Asn Pro Phe Glu Pro Leu Phe Val Arg Gln Val Ser Ala

            180                 185                 190

gtg gta atc tct ctt ctc gcc cac ttc ttc gtg gcc gga ctc tcc atc    624

Val Val Ile Ser Leu Leu Ala His Phe Phe Val Ala Gly Leu Ser Ile

        195                 200                 205

tat ctg agc ctc cag ctg ggc ctt aag acg atg gca atc tac tac tat    672

Tyr Leu Ser Leu Gln Leu Gly Leu Lys Thr Met Ala Ile Tyr Tyr Tyr

    210                 215                 220

gga cct gtt ttt gtg ttc ggc agc atg ctg gtc att acc acc ttc cta    720

Gly Pro Val Phe Val Phe Gly Ser Met Leu Val Ile Thr Thr Phe Leu

225                 230                 235                 240

cac cac aat gat gag gag acc cca tgg tac gcc gac tcg gag tgg acg    768

His His Asn Asp Glu Glu Thr Pro Trp Tyr Ala Asp Ser Glu Trp Thr

                245                 250                 255

tac gtc aag ggc aac ctc tcg tcc gtg gac cga tcg tac ggc gcg ctc    816

Tyr Val Lys Gly Asn Leu Ser Ser Val Asp Arg Ser Tyr Gly Ala Leu

            260                 265                 270

att gac aac ctg agc cac aac atc ggc acg cac cag atc cac cac ctt    864

Ile Asp Asn Leu Ser His Asn Ile Gly Thr His Gln Ile His His Leu

        275                 280                 285

ttc cct atc att ccg cac tac aaa ctc aag aaa gcc act gcg gcc ttc    912

Phe Pro Ile Ile Pro His Tyr Lys Leu Lys Lys Ala Thr Ala Ala Phe

    290                 295                 300

cac cag gct ttc cct gag ctc gtg cgc aag agc gac gag cca att atc    960

His Gln Ala Phe Pro Glu Leu Val Arg Lys Ser Asp Glu Pro Ile Ile

305                 310                 315                 320

aag gct ttc ttc cgg gtt gga cgt ctc tac gca aac tac ggc gtt gtg    1008

Lys Ala Phe Phe Arg Val Gly Arg Leu Tyr Ala Asn Tyr Gly Val Val

                325                 330                 335

gac cag gag gcg aag ctc ttc acg cta aag gaa gcc aag gcg gcg acc    1056

Asp Gln Glu Ala Lys Leu Phe Thr Leu Lys Glu Ala Lys Ala Ala Thr

            340                 345                 350

gag gcg gcg gcc aag acc aag tcc acg taa                            1086

Glu Ala Ala Ala Lys Thr Lys Ser Thr

        355                 360

<210>88

<211>361

<212>PRT

<213>致病疫霉

<400>88

Met Ala Thr Lys Glu Ala Tyr Val Phe Pro Thr Leu Thr Glu Ile Lys

1               5                   10                  15

Arg Ser Leu Pro Lys Asp Cys Phe Glu Ala Ser Val Pro Leu Ser Leu

            20                  25                  30

Tyr Tyr Thr Val Arg Cys Leu Val Ile Ala Val Ala Leu Thr Phe Gly

        35                  40                  45

Leu Asn Tyr Ala Arg Ala Leu Pro Glu Val Glu Ser Phe Trp Ala Leu

    50                  55                  60

Asp Ala Ala Leu Cys Thr Gly Tyr Ile Leu Leu Gln Gly Ile Val Phe

65                  70                  75                  80

Trp Gly Phe Phe Thr Val Gly His Asp Ala Gly His Gly Ala Phe Ser

                85                  90                  95

Arg Tyr His Leu Leu Asn Phe Val Val Gly Thr Phe Met His Ser Leu

            100                 105                 110

Ile Leu Thr Pro Phe Glu Ser Trp Lys Leu Thr His Arg His His His

        115                 120                 125

Lys Asn Thr Gly Asn Ile Asp Arg Asp Glu Val Phe Tyr Pro Gln Arg

    130                 135                 140

Lys Ala Asp Asp His Pro Leu Ser Arg Asn Leu Ile Leu Ala Leu Gly

145                 150                 155                 160

Ala Ala Trp Leu Ala Tyr Leu Val Glu Gly Phe Pro Pro Arg Lys Val

                165                 170                 175

Asn His Phe Asn Pro Phe Glu Pro Leu Phe Val Arg Gln Val Ser Ala

            180                 185                 190

Val Val Ile Ser Leu Leu Ala His Phe Phe Val Ala Gly Leu Ser Ile

        195                 200                 205

Tyr Leu Ser Leu Gln Leu Gly Leu Lys Thr Met Ala Ile Tyr Tyr Tyr

    210                 215                 220

Gly Pro Val Phe Val Phe Gly Ser Met Leu Val Ile Thr Thr Phe Leu

225                 230                 235                 240

His His Asn Asp Glu Glu Thr Pro Trp Tyr Ala Asp Ser Glu Trp Thr

                245                 250                 255

Tyr Val Lys Gly Asn Leu Ser Ser Val Asp Arg Ser Tyr Gly Ala Leu

            260                 265                 270

Ile Asp Asn Leu Ser His Asn Ile Gly Thr His Gln Ile His His Leu

        275                 280                 285

Phe Pro Ile Ile Pro His Tyr Lys Leu Lys Lys Ala Thr Ala Ala Phe

    290                 295                 300

His Gln Ala Phe Pro Glu Leu Val Arg Lys Ser Asp Glu Pro Ile Ile

305                 310                 315                 320

Lys Ala Phe Phe Arg Val Gly Arg Leu Tyr Ala Asn Tyr Gly Val Val

                325                 330                 335

Asp Gln Glu Ala Lys Leu Phe Thr Leu Lys Glu Ala Lys Ala Ala Thr

            340                 345                 350

Glu Ala Ala Ala Lys Thr Lys Ser Thr

        355                 360

<210>89

<211>1371

<212>DNA

<213>Ostreococcus tauri

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1371)

<223>Δ6-去饱和酶

<400>89

atg tgc gtg gag acg gaa aat aac gat ggg atc ccc acg gtg gag atc    48

Met Cys Val Glu Thr Glu Asn Asn Asp Gly Ile Pro Thr Val Glu Ile

1               5                   10                  15

gcg ttc gac ggt gag cgc gag cgg gcg gag gca aac gtg aag ctg tcc    96

Ala Phe Asp Gly Glu Arg Glu Arg Ala Glu Ala Asn Val Lys Leu Ser

            20                  25                  30

gcg gag aag atg gag ccg gcg gcg ctg gcg aag acg ttc gcg agg cgg    144

Ala Glu Lys Met Glu Pro Ala Ala Leu Ala Lys Thr Phe Ala Arg Arg

        35                  40                  45

tac gtc gtg atc gag ggg gtg gag tac gat gtg acg gat ttt aag cac    192

Tyr Val Val Ile Glu Gly Val Glu Tyr Asp Val Thr Asp Phe Lys His

    50                  55                  60

ccg gga gga acg gtt att ttc tat gcg ttg tca aac acc ggg gcg gac    240

Pro Gly Gly Thr Val Ile Phe Tyr Ala Leu Ser Asn Thr Gly Ala Asp

65                  70                  75                  80

gcg acg gaa gcg ttc aag gag ttt cat cat cgg tcg aga aag gcg agg    288

Ala Thr Glu Ala Phe Lys Glu Phe His His Arg Ser Arg Lys Ala Arg

                85                  90                  95

aaa gcc ttg gcg gcg ctc ccg tct cga ccg gcc aag acg gcc aag gtg    336

Lys Ala Leu Ala Ala Leu Pro Ser Arg Pro Ala Lys Thr Ala Lys Val

            100                 105                 110

gac gac gcg gag atg ctc caa gat ttc gcc aag tgg cgg aaa gaa ttg    384

Asp Asp Ala Glu Met Leu Gln Asp Phe Ala Lys Trp Arg Lys Glu Leu

        115                 120                 125

gag aga gat gga ttc ttc aag ccc tct ccg gcg cac gtg gcg tat cgc    432

Glu Arg Asp Gly Phe Phe Lys Pro Ser Pro Ala His Val Ala Tyr Arg

    130                 135                 140

ttc gcc gag ctc gcg gcg atg tac gct ctc ggg acg tac ctg atg tac    480

Phe Ala Glu Leu Ala Ala Met Tyr Ala Leu Gly Thr Tyr Leu Met Tyr

145                 150                 155                 160

gct cga tac gtc gtc tcc tcg gtg ctc gtg tac gct tgc ttt ttc ggc    528

Ala Arg Tyr Val Val Ser Ser Val Leu Val Tyr Ala Cys Phe Phe Gly

                165                 170                 175

gcc cga tgc ggt tgg gtg cag cac gag ggc gga cac agc tcg ctg acg    576

Ala Arg Cys Gly Trp Val Gln His Glu Gly Gly His Ser Ser Leu Thr

            180                 185                 190

ggc aac att tgg tgg gac aag cgc atc cag gcc ttc aca gcc ggg ttc    624

Gly Asn Ile Trp Trp Asp Lys Arg Ile Gln Ala Phe Thr Ala Gly Phe

        195                 200                 205

ggt ctc gcc ggt agc ggc gac atg tgg aac tcg atg cac aac aag cat    672

Gly Leu Ala Gly Ser Gly Asp Met Trp Asn Ser Met His Asn Lys His

    210                 215                 220

cac gcg acg cct caa aag gtt cgt cac gac atg gat ctg gac acc acc    720

His Ala Thr Pro Gln Lys Val Arg His Asp Met Asp Leu Asp Thr Thr

225                 230                 235                 240

ccc gcg gtg gcg ttc ttc aac acc gcg gtg gaa gac aat cgt ccc cgt    768

Pro Ala Val Ala Phe Phe Asn Thr Ala Val Glu Asp Asn Arg Pro Arg

                245                 250                 255

ggc ttt agc aag tac tgg ttg cgc ctt cag gcg tgg acc ttc atc ccc    816

Gly Phe Ser Lys Tyr Trp Leu Arg Leu Gln Ala Trp Thr Phe Ile Pro

            260                 265                 270

gtg acg tcc ggc ttg gtg ctc ctt ttc tgg atg ttt ttc ctc cac ccc    864

Val Thr Ser Gly Leu Val Leu Leu Phe Trp Met Phe Phe Leu His Pro

        275                 280                 285

tcc aag gct ttg aag ggt ggc aag tac gaa gag ttg gtg tgg atg ctc    912

Ser Lys Ala Leu Lys Gly Gly Lys Tyr Glu Glu Leu Val Trp Met Leu

    290                 295                 300

gcc gcg cac gtc atc cgc acg tgg acg atc aag gcg gtg acc gga ttc    960

Ala Ala His Val Ile Arg Thr Trp Thr Ile Lys Ala Val Thr Gly Phe

305                 310                 315                 320

acc gcg atg cag tcc tac ggc tta ttt ttg gcg acg agc tgg gtg agc    1008

Thr Ala Met Gln Ser Tyr Gly Leu Phe Leu Ala Thr Ser Trp Val Ser

                325                 330                 335

ggc tgc tat ctg ttt gca cac ttc tcc acg tcg cac acg cac ctg gat    1056

Gly Cys Tyr Leu Phe Ala His Phe Ser Thr Ser His Thr His Leu Asp

            340                 345                 350

gtg gtg ccc gcg gac gag cat ctc tcc tgg gtt cga tac gcc gtc gat    1104

Val Val Pro Ala Asp Glu His Leu Ser Trp Val Arg Tyr Ala Val Asp

        355                 360                 365

cac acg atc gac atc gat ccg agt caa ggt tgg gtg aac tgg ttg atg    1152

His Thr Ile Asp Ile Asp Pro Ser Gln Gly Trp Val Asn Trp Leu Met

    370                 375                 380

ggc tac ctc aac tgc caa gtc atc cac cac ctc ttt ccg agc atg ccg    1200

Gly Tyr Leu Asn Cys Gln Val Ile His His Leu Phe Pro Ser Met Pro

385                 390                 395                 400

cag ttc cgc cag ccc gag gta tct cgc cgc ttc gtc gcc ttt gcg aaa    1248

Gln Phe Arg Gln Pro Glu Val Ser Arg Arg Phe Val Ala Phe Ala Lys

                405                 410                 415

aag tgg aac ctc aac tac aag gtc atg acc tac gcc ggt gcg tgg aag    1296

Lys Trp Asn Leu Asn Tyr Lys Val Met Thr Tyr Ala Gly Ala Trp Lys

            420                 425                 430

gca acg ctc gga aac ctc gac aac gtg ggt aag cac tac tac gtg cac    1344

Ala Thr Leu Gly Asn Leu Asp Asn Val Gly Lys His Tyr Tyr Val His

        435                 440                 445

ggc caa cac tcc gga aag acg gcg taa                                1371

Gly Gln His Ser Gly Lys Thr Ala

    450                 455

<210>90

<211>456

<212>PRT

<213>Ostreococcus tauri

<400>90

Met Cys Val Glu Thr Glu Asn Asn Asp Gly Ile Pro Thr Val Glu Ile

1               5                   10                  15

Ala Phe Asp Gly Glu Arg Glu Arg Ala Glu Ala Asn Val Lys Leu Ser

            20                  25                  30

Ala Glu Lys Met Glu Pro Ala Ala Leu Ala Lys Thr Phe Ala Arg Arg

        35                  40                  45

Tyr Val Val Ile Glu Gly Val Glu Tyr Asp Val Thr Asp Phe Lys His

    50                  55                  60

Pro Gly Gly Thr Val Ile Phe Tyr Ala Leu Ser Asn Thr Gly Ala Asp

65                  70                  75                  80

Ala Thr Glu Ala Phe Lys Glu Phe His His Arg Ser Arg Lys Ala Arg

                85                  90                  95

Lys Ala Leu Ala Ala Leu Pro Ser Arg Pro Ala Lys Thr Ala Lys Val

            100                 105                 110

Asp Asp Ala Glu Met Leu Gln Asp Phe Ala Lys Trp Arg Lys Glu Leu

        115                 120                 125

Glu Arg Asp Gly Phe Phe Lys Pro Ser Pro Ala His Val Ala Tyr Arg

    130                 135                 140

Phe Ala Glu Leu Ala Ala Met Tyr Ala Leu Gly Thr Tyr Leu Met Tyr

145                 150                 155                 160

Ala Arg Tyr Val Val Ser Ser Val Leu Val Tyr Ala Cys Phe Phe Gly

                165                 170                 175

Ala Arg Cys Gly Trp Val Gln His Glu Gly Gly His Ser Ser Leu Thr

            180                 185                 190

Gly Asn Ile Trp Trp Asp Lys Arg Ile Gln Ala Phe Thr Ala Gly Phe

        195                 200                 205

Gly Leu Ala Gly Ser Gly Asp Met Trp Asn Ser Met His Asn Lys His

    210                 215                 220

His Ala Thr Pro Gln Lys Val Arg His Asp Met Asp Leu Asp Thr Thr

225                 230                 235                 240

Pro Ala Val Ala Phe Phe Asn Thr Ala Val Glu Asp Asn Arg Pro Arg

                245                 250                 255

Gly Phe Ser Lys Tyr Trp Leu Arg Leu Gln Ala Trp Thr Phe Ile Pro

            260                 265                 270

Val Thr Ser Gly Leu Val Leu Leu Phe Trp Met Phe Phe Leu His Pro

        275                 280                 285

Ser Lys Ala Leu Lys Gly Gly Lys Tyr Glu Glu Leu Val Trp Met Leu

    290                 295                 300

Ala Ala His Val Ile Arg Thr Trp Thr Ile Lys Ala Val Thr Gly Phe

305                 310                 315                 320

Thr Ala Met Gln Ser Tyr Gly Leu Phe Leu Ala Thr Ser Trp Val Ser

                325                 330                 335

Gly Cys Tyr Leu Phe Ala His Phe Ser Thr Ser His Thr His Leu Asp

            340                 345                 350

Val Val Pro Ala Asp Glu His Leu Ser Trp Val Arg Tyr Ala Val Asp

        355                 360                 365

His Thr Ile Asp Ile Asp Pro Ser Gln Gly Trp Val Asn Trp Leu Met

    370                 375                 380

Gly Tyr Leu Asn Cys Gln Val Ile His His Leu Phe Pro Ser Met Pro

385                 390                 395                 400

Gln Phe Arg Gln Pro Clu Val Ser Arg Arg Phe Val Ala Phe Ala Lys

                405                 410                 415

Lys Trp Asn Leu Asn Tyr Lys Val Met Thr Tyr Ala Gly Ala Trp Lys

            420                 425                 430

Ala Thr Leu Gly Asn Leu Asp Asn Val Gly Lys His Tyr Tyr Val His

        435                 440                 445

Gly Gln His Ser Gly Lys Thr Ala

    450                 455

<210>91

<211>606

<212>DNA

<213>Ostreococcus tauri

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(606)

<223>Δ5-去饱和酶

<400>91

atg tac ggt ttg cta tcg ctc aag tcg tgc ttc gtc gac gat ttc aac    48

Met Tyr Gly Leu Leu Ser Leu Lys Ser Cys Phe Val Asp Asp Phe Asn

1               5                   10                  15

gcc tac ttc tcc gga cgc atc ggc tgg gtc aag gtg atg aag ttc acc    96

Ala Tyr Phe Ser Gly Arg Ile Gly Trp Val Lys Val Met Lys Phe Thr

            20                  25                  30

cgc ggc gag gcg atc gca ttt tgg ggc acc aag ctc ttg tgg gcc gcg    144

Arg Gly Glu Ala Ile Ala Phe Trp Gly Thr Lys Leu Leu Trp Ala Ala

        35                  40                  45

tat tac ctc gcg ttg ccg cta aag atg tcg cat cgg ccg ctc gga gaa    192

Tyr Tyr Leu Ala Leu Pro Leu Lys Met Ser His Arg Pro Leu Gly Glu

    50                  55                  60

ctc ctc gca ctc tgg gcc gtc acc gag ttc gtc acc gga tgg ctg ttg    240

Leu Leu Ala Leu Trp Ala Val Thr Glu Phe Val Thr Gly Trp Leu Leu

65                  70                  75                  80

gcg ttc atg ttc caa gtc gcc cac gtc gtc ggc gag gtt cac ttc ttc    288

Ala Phe Met Phe Gln Val Ala His Val Val Gly Glu Val His Phe Phe

                85                  90                  95

acc ctc gac gcg aag aac cgc gtg aac ttg gga tgg gga gag gca cag    336

Thr Leu Asp Ala Lys Asn Arg Val Asn Leu Gly Trp Gly Glu Ala Gln

            100                 105                 110

ctc atg tcg agc gcg gat ttc gcc cac gga tcc aag ttt tgg acg cac    384

Leu Met Ser Ser Ala Asp Phe Ala His Gly Ser Lys Phe Trp Thr His

        115                 120                 125

ttc tcc gga ggc tta aac tac caa gtc gtc cac cat ctc ttc ccg ggc    432

Phe Ser Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Val Val His His Leu Phe Pro Gly

    130                 135                 140

gtc tgc cac gtg cac tat ccc gcg ctc gcg cca att att aag gcg gca    480

Val Cys His Val His Tyr Pro Ala Leu Ala Pro Ile Ile Lys Ala Ala

145                 150                 155                 160

gct gag aag cac ggc ctc cac tac cag att tac ccc acg ttt tgg tcc    528

Ala Glu Lys His Gly Leu His Tyr Gln Ile Tyr Pro Thr Phe Trp Ser

                165                 170                 175

gcc ctg cgc gcg cac ttc cgg cac ctc gcc aac gtc ggc cgc gcc gcg    576

Ala Leu Arg Ala His Phe Arg His Leu Ala Asn Val Gly Arg Ala Ala

            180                 185                 190

tac gta ccg tcc ctc caa acc gtc gga tga                            606

Tyr Val Pro Ser Leu Gln Thr Val Gly

        195                 200

<210>92

<211>201

<212>PRT

<213>Ostreococcus tauri

<400>92

Met Tyr Gly Leu Leu Ser Leu Lys Ser Cys Phe Val Asp Asp Phe Asn

1               5                   10                  15

Ala Tyr Phe Ser Gly Arg Ile Gly Trp Val Lys Val Met Lys Phe Thr

            20                  25                  30

Arg Gly Glu Ala Ile Ala Phe Trp Gly Thr Lys Leu Leu Trp Ala Ala

        35                  40                  45

Tyr Tyr Leu Ala Leu Pro Leu Lys Met Ser His Arg Pro Leu Gly Glu

    50                  55                  60

Leu Leu Ala Leu Trp Ala Val Thr Glu Phe Val Thr Gly Trp Leu Leu

65                  70                  75                  80

Ala Phe Met Phe Gln Val Ala His Val Val Gly Glu Val His Phe Phe

                85                  90                  95

Thr Leu Asp Ala Lys Asn Arg Val Asn Leu Gly Trp Gly Glu Ala Gln

            100                 105                 110

Leu Met Ser Ser Ala Asp Phe Ala His Gly Ser Lys Phe Trp Thr His

        115                 120                 125

Phe Ser Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Val Val His His Leu Phe Pro Gly

    130                 135                 140

Val Cys His Val His Tyr Pro Ala Leu Ala Pro Ile Ile Lys Ala Ala

145                 150                 155                 160

Ala Glu Lys His Gly Leu His Tyr Gln Ile Tyr Pro Thr Phe Trp Ser

                165                 170                 175

Ala Leu Arg Ala His Phe Arg His Leu Ala Asn Val Gly Arg Ala Ala

            180                 185                 190

Tyr Val Pro Ser Leu Gln Thr Val Gly

        195                 200

<210>93

<211>714

<212>DNA

<213>Ostreococcus tauri

<220>

<22l>CDS

<222>(1)..(714)

<223>Δ5-去饱和酶

<400>93

atg gtg agc cat cac tcg tac tgt aac gac gcg gat ttg gat cag gat    48

Met Val Ser His His Ser Tyr Cys Asn Asp Ala Asp Leu Asp Gln Asp

1               5                   10                  15

gtg tac acc gca ctg ccg ctc ctg cgc ctg gac ccg tct cag gag ttg    96

Val Tyr Thr Ala Leu Pro Leu Leu Arg Leu Asp Pro Ser Gln Glu Leu

            20                  25                  30

aag tgg ttt cat cga tac cag gcg ttt tac gcc ccg ctc atg tgg ccg    144

Lys Trp Phe His Arg Tyr Gln Ala Phe Tyr Ala Pro Leu Met Trp Pro

        35                  40                  45

ttt ttg tgg ctc gcg gcg cag ttt ggc gac gcg cag aac atc ctg atc    192

Phe Leu Trp Leu Ala Ala Gln Phe Gly Asp Ala Gln Asn Ile Leu Ile

    50                  55                  60

gac cga gcg tcg ccg ggc gtc gcg tac aag gga ttg atg gcg aac gag    240

Asp Arg Ala Ser Pro Gly Val Ala Tyr Lys Gly Leu Met Ala Asn Glu

65                  70                  75                  80

gtc gcg ctg tac gtt ctc ggt aag gtt tta cac ttt ggt ctt ctc ctc    288

Val Ala Leu Tyr Val Leu Gly Lys Val Leu His Phe Gly Leu Leu Leu

                85                  90                  95

ggc gtt cct gcg tac ttg cac gga ttg tcc aac gcg atc gtt cca ttc    336

Gly Val Pro Ala Tyr Leu His Gly Leu Ser Asn Ala Ile Val Pro Phe

            100                 105                 110

ttg gcg tac ggc gca ttc ggc tcc ttc gtc ctg tgc tgg ttc ttc atc    384

Leu Ala Tyr Gly Ala Phe Gly Ser Phc Val Leu Cys Trp Phe Phe Ile

        115                 120                 125

gtc agc cat aac ctc gaa gcg ctg aca ccc gtt aac ctt aac aag tcc    432

Val Ser His Asn Leu Glu Ala Leu Thr Pro Val Asn Leu Asn Lys Ser

    130                 135                 140

acg aag aac gac tgg ggg gcg tgg cag atc gag aca tcg gcg tct tgg    480

Thr Lys Asn Asp Trp Gly Ala Trp Gln Ile Glu Thr Ser Ala Ser Trp

145                 150                 155                 160

ggc aac gcg ttc tgg agc ttc ttc tct gga ggt ctg aac ctg caa atc    528

Gly Asn Ala Phe Trp Ser Phe Phe Ser Gly Gly Leu Asn Leu Gln Ile

                165                 170                 175

gag cac cac ctc ttc ccg ggc atg gcg cac aac ctg tac ccg aag atg    576

Glu His His Leu Phe Pro Gly Met Ala His Asn Leu Tyr Pro Lys Met

            180                 185                 190

gtg ccg atc atc aag gac gag tgt gcg aaa gcg ggc gtt cgc tac acc    624

Val Pro Ile Ile Lys Asp Glu Cys Ala Lys Ala Gly Val Arg Tyr Thr

        195                 200                 205

ggt tac ggt ggc tac acc ggc ctg ctc ccg atc acc cgc gac atg ttc    672

Gly Tyr Gly Gly Tyr Thr Gly Leu Leu Pro Ile Thr Arg Asp Met Phe

    210                 215                 220

tcc tac ctc cat aag tgt ggc cga acg gcg aaa cta gcc taa              714

Ser Tyr Leu His Lys Cys Gly Arg Thr Ala Lys Leu Ala

225                 230                 235

<210>94

<211>237

<212>PRT

<213>Ostreococcus tauri

<400>94

Met Val Ser His His Ser Tyr Cys Asn Asp Ala Asp Leu Asp Gln Asp

1               5                   10                  15

Val Tyr Thr Ala Leu Pro Leu Leu Arg Leu Asp Pro Ser Gln Glu Leu

            20                  25                  30

Lys Trp Phe His Arg Tyr Gln Ala Phe Tyr Ala Pro Leu Met Trp Pro

        35                  40                  45

Phe Leu Trp Leu Ala Ala Gln Phe Gly Asp Ala Gln Asn Ile Leu Ile

    50                  55                  60

Asp Arg Ala Ser Pro Gly Val Ala Tyr Lys Gly Leu Met Ala Asn Glu

65                  70                  75                  80

Val Ala Leu Tyr Val Leu Gly Lys Val Leu His Phe Gly Leu Leu Leu

                85                  90                  95

Gly Val Pro Ala Tyr Leu His Gly Leu Ser Asn Ala Ile Val Pro Phe

            100                 105                 110

Leu Ala Tyr Gly Ala Phe Gly Ser Phe Val Leu Cys Trp Phe Phe Ile

        115                 120                 125

Val Ser His Asn Leu Glu Ala Leu Thr Pro Val Asn Leu Asn Lys Ser

    130                 135                 140

Thr Lys Asn Asp Trp Gly Ala Trp Gln Ile Glu Thr Ser Ala Ser Trp

145                 150                 155                 160

Gly Asn Ala Phe Trp Ser Phe Phe Ser Gly Gly Leu Asn Leu Gln Ile

                165                 170                 175

Glu His His Leu Phe Pro Gly Met Ala His Asn Leu Tyr Pro Lys Met

            180                 185                 190

Val Pro Ile Ile Lys Asp Glu Cys Ala Lys Ala Gly Val Arg Tyr Thr

        195                 200                 205

Gly Tyr Gly Gly Tyr Thr Gly Leu Leu Pro Ile Thr Arg Asp Met Phe

    210                 215                 220

Ser Tyr Leu His Lys Cys Gly Arg Thr Ala Lys Leu Ala

225                 230                 235

<210>95

<211>1611

<212>DNA

<213>Ostreococcus tauri

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1611)

<223>Δ4-去饱和酶

<400>95

atg tac ctc gga cgc ggc cgt ctc gag agc ggg acg acg cga ggg atg    48

Met Tyr Leu GIy Arg Gly Arg Leu Glu Ser Gly Thr Thr Arg Gly Met

1               5                   10                  15

atg cgg acg cac gcg cgg cga ccg tcg acg acg tcg aat ccg tgc gcg    96

Met Arg Thr His Ala Arg Arg Pro Ser Thr Thr Ser Asn Pro Cys Ala

            20                  25                  30

cgg tca cgc gtg cgt aag acg acg gag cga tcg ctc gcg cga gtg cga    144

Arg Ser Arg Val Arg Lys Thr Thr Glu Arg Ser Leu Ala Arg Val Arg

        35                  40                  45

cga tcg acg agt gag aag gga agc gcg ctc gtg ctc gag cga gag agc    192

Arg Ser Thr Ser Glu Lys Gly Ser Ala Leu Val Leu Glu Arg Glu Ser

    50                  55                  60

gaa cgg gag aag gag gag gga ggg aaa gcg cga gcg gag gga ttg cga    240

Glu Arg Glu Lys Glu Glu Gly Gly Lys Ala Arg Ala Glu Gly Leu Arg

65                  70                  75                  80

ttc caa cgc ccg gac gtc gcc gcg ccg ggg gga gcg gat cct tgg aac    288

Phe Gln Arg Pro Asp Val Ala Ala Pro Gly Gly Ala Asp Pro Trp Asn

                85                  90                  95

gac gag aag tgg aca aag acc aag tgg acg gta ttc aga gac gtc gcg    336

Asp Glu Lys Trp Thr Lys Thr Lys Trp Thr Val Phe Arg Asp Val Ala

            100                 105                 110

tac gat ctc gat cct ttc ttc gct cga cac ccc gga gga gac tgg ctc    384

Tyr Asp Leu Asp Pro Phe Phe Ala Arg His Pro Gly Gly Asp Trp Leu

        115                 120                 125

ctg aac ttg gcc gtg gga cga gac tgc acc gcg ctc atc gaa tcc tat    432

Leu Asn Leu Ala Val Gly Arg Asp Cys Thr Ala Leu Ile Glu Ser Tyr

    130                 135                 140

cac ttg cga cca gag gtg gcg acg gct cgt ttc aga atg ctg ccc aaa    480

His Leu Arg Pro Glu Val Ala Thr Ala Arg Phe Arg Met Leu Pro Lys

145                 150                 155                 160

ctc gag gat ttt ccc gtc gag gcc gtg ccc aag tcc ccg aga ccg aac    528

Leu Glu Asp Phe Pro Val Glu Ala Val Pro Lys Ser Pro Arg Pro Asn

                165                 170                 175

gat tcg ccg tta tac aac aac att cgc aac cga gtc cgc gaa gag ctc    576

Asp Ser Pro Leu Tyr Asn Asn Ile Arg Asn Arg Val Arg Glu Glu Leu

            180                 185                 190

ttc cca gag gag gga aag aat atg cac aga cag ggc ggc gac cac ggc    624

Phe Pro Glu Glu Gly Lys Asn Met His Arg Gln Gly Gly Asp His Gly

        195                 200                 205

gac ggt gac gat tct ggg ttt cgc cgc ctt ttg ctt atg ccg tgt acc    672

Asp Gly Asp Asp Ser Gly Phe Arg Arg Leu Leu Leu Met Pro Cys Thr

    210                 215                 220

tat tcc ctt ccg ggg gtt cct ttc cgg ctg cct cct cgg gtc tcg cgg    720

Tyr Ser Leu Pro Gly Val Pro Phe Arg Leu Pro Pro Arg Val Ser Arg

225                 230                 235                 240

ggg cgt gga ttg gtc tca cga ttc agg cac tgc gcc aac cac ggc gcg    768

Gly Arg Gly Leu Val Ser Arg Phe Arg His Cys Ala Asn His Gly Ala

                245                 250                 255

atg tct cct tcg ccg gcc gtt aac ggc gtc ctc ggt ttg acg aac gat    816

Met Ser Pro Ser Pro Ala Val Asn Gly Val Leu Gly Leu Thr Asn Asp

            260                 265                 270

ctc atc ggc ggc tcg tcc ttg atg tgg aga tat cac cac caa gtc agc    864

Leu Ile Gly Gly Ser Ser Leu Met Trp Arg Tyr His His Gln Val Ser

        275                 280                 285

cac cac att cat tgc aac gac aac gcc atg gat caa gac gtg tac acg    912

His His Ile His Cys Asn Asp Asn Ala Met Asp Gln Asp Val Tyr Thr

    290                 295                 300

gcg atg cca tta ttg cgt ttc gac gct cgc cgg ccc aag tcc tgg tac    960

Ala Met Pro Leu Leu Arg Phe Asp Ala Arg Arg Pro Lys Ser Trp Tyr

305                 310                 315                 320

cat cgc ttc cag cag tgg tac atg ttt tta gcg ttc ccg ttg ttg cag    1008

His Arg Phe Gln Gln Trp Tyr Met Phe Leu Ala Phe Pro Leu Leu Gln

                325                 330                 335

gtt gcc ttc caa gtc gga gac att gcc gca ctg ttc acg cgt gat acc    1056

Val Ala Phe Gln Val Gly Asp Ile Ala Ala Leu Phe Thr Arg Asp Thr

            340                 345                 350

gaa ggc gct aag ctt cac ggg gcg acg acg tgg gag ctt acc acg gtt    1104

Glu Gly Ala Lys Leu His Gly Ala Thr Thr Trp Glu Leu Thr Thr Val

        355                 360                 365

gtc ctc ggt aag att gtg cac ttc ggt ctt ttg ttg ggg ccg ttg atg    1152

Val Leu Gly Lys Ile Val His Phe Gly Leu Leu Leu Gly Pro Leu Met

    370                 375                 380

aac cac gcg gtg agt tct gtt ttg ctg ggg atc gtc ggt ttc atg gcg    1200

Asn His Ala Val Ser Ser Val Leu Leu Gly Ile Val Gly Phe Met Ala

385                 390                 395                 400

tgc caa ggt ata gtt ctg gcg tgc acg ttt gct gtg agt cac aat gtc    1248

Cys Gln Gly Ile Val Leu Ala Cys Thr Phe Ala Val Ser His Asn Val

                405                 410                 415

gcg gag gcg aag ata cct gag gac acc gga gga gaa gcc tgg gag aga    1296

Ala Glu Ala Lys Ile Pro Glu Asp Thr Gly Gly Glu Ala Trp Glu Arg

            420                 425                 430

gat tgg ggt gtc cag cag ttg gtg act agc gcc gac tgg ggt gga aag    1344

Asp Trp Gly Val Gln Gln Leu Val Thr Ser Ala Asp Trp Gly Gly Lys

        435                 440                 445

ata ggt aac ttc ttc acg ggt ggc ctc aac ttg caa gtt gag cac cac    1392

Ile Gly Asn Phe Phe Thr Gly Gly Leu Asn Leu Gln Val Glu His His

    450                 455                 460

ttg ttt ccg gcg att tgc ttc gtc cac tac ccg gac atc gcg aag atc    1440

Leu Phe Pro Ala Ile Cys Phe Val His Tyr Pro Asp Ile Ala Lys Ile

465                 470                 475                 480

gtg aag gaa gaa gcg gcc aag ctc aac atc cct tac gcg tct tac agg    1488

Val Lys Glu Glu Ala Ala Lys Leu Asn Ile Pro Tyr Ala Ser Tyr Arg

                485                 490                 495

act ctt cct ggt att ttc gtc caa ttc tgg aga ttt atg aag gac atg    1536

Thr Leu Pro Gly Ile Phe Val Gln Phe Trp Arg Phe Met Lys Asp Met

            500                 505                 510

ggc acg gct gag caa att ggt gaa gtt cca ttg ccg aag att ccc aac    1584

Gly Thr Ala Glu Gln Ile Gly Glu Val Pro Leu Pro Lys Ile Pro Asn

        515                 520                 525

ccg cag ctc gcg ccg aag ctc gct tag                                1611

Pro Gln Leu Ala Pro Lys Leu Ala

    530                 535

<210>96

<211>536

<212>PRT

<213>Ostreococcus tauri

<400>96

Met Tyr Leu Gly Arg Gly Arg Leu Glu Ser Gly Thr Thr Arg Gly Met

1               5                   10                  15

Met Arg Thr His Ala Arg Arg Pro Ser Thr Thr Ser Asn Pro Cys Ala

            20                  25                  30

Arg Ser Arg Val Arg Lys Thr Thr Glu Arg Ser Leu Ala Arg Val Arg

        35                  40                  45

Arg Ser Thr Ser Glu Lys Gly Ser Ala Leu Val Leu Glu Arg Glu Ser

    50                  55                  60

Glu Arg Glu Lys Glu Glu Gly Gly Lys Ala Arg Ala Glu Gly Leu Arg

65                  70                  75                  80

Phe Gln Arg Pro Asp Val Ala Ala Pro Gly Gly Ala Asp Pro Trp Asn

                85                  90                  95

Asp Glu Lys Trp Thr Lys Thr Lys Trp Thr Val Phe Arg Asp Val Ala

            100                 105                 110

Tyr Asp Leu Asp Pro Phe Phe Ala Arg His Pro Gly Gly Asp Trp Leu

        115                 120                 125

Leu Asn Leu Ala Val Gly Arg Asp Cys Thr Ala Leu Ile Glu Ser Tyr

    130                 135                 140

His Leu Arg Pro Glu Val Ala Thr Ala Arg Phe Arg Met Leu Pro Lys

145                 150                 155                 160

Leu Glu Asp Phe Pro Val Glu Ala Val Pro Lys Ser Pro Arg Pro Asn

                165                 170                 175

Asp Ser Pro Leu Tyr Asn Asn Ile Arg Asr Arg Val Arg Glu Glu Leu

            180                 185                 190

Phe Pro Glu Glu Gly Lys Asn Met His Arg Gln Gly Gly Asp His Gly

        195                 200                 205

Asp Gly Asp Asp Ser Gly Phe Arg Arg Leu Leu Leu Met Pro Cys Thr

    210                 215                 220

Tyr Ser Leu Pro Gly Val Pro Phe Arg Leu Pro Pro Arg Val Ser Arg

225                 230                 235                 240

Gly Arg Gly Leu Val Ser Arg Phe Arg His Cys Ala Asn His Gly Ala

                245                 250                 255

Met Ser Pro Ser Pro Ala Val Asn Gly Val Leu Gly Leu Thr Asn Asp

            260                 265                 270

Leu Ile Gly Gly Ser Ser Leu Met Trp Arg Tyr His His Gln Val Ser

        275                 280                 285

His His Ile His Cys Asn Asp Asn Ala Met Asp Gln Asp Val Tyr Thr

    290                 295                 300

Ala Met Pro Leu Leu Arg Phe Asp Ala Arg Arg Pro Lys Ser Trp Tyr

305                 310                 315                 320

His Arg Phe Gln Gln Trp Tyr Met Phe Leu Ala Phe Pro Leu Leu Gln

                325                 330                 335

Val Ala Phe Gln Val Gly Asp Ile Ala Ala Leu Phe Thr Arg Asp Thr

            340                 345                 350

Glu Gly Ala Lys Leu His Gly Ala Thr Thr Trp Glu Leu Thr Thr Val

        355                 360                 365

Val Leu Gly Lys Ile Val His Phe Gly Leu Leu Leu Gly Pro Leu Met

    370                 375                 380

Asn His Ala Val Ser Ser Val Leu Leu Gly Ile Val Gly Phe Met Ala

385                 390                 395                 400

Cys Gln Gly Ile Val Leu Ala Cys Thr Phe Ala Val Ser His Asn Val

                405                 410                 415

Ala Glu Ala Lys Ile Pro Glu Asp Thr Gly Gly Glu Ala Trp Glu Arg

            420                 425                 430

Asp Trp Gly Val Gln Gln Leu Val Thr Ser Ala Asp Trp Gly Gly Lys

         435                 440                 445

Ile Gly Asn Phe Phe Thr Gly Gly Leu Asn Leu Gln Val Glu His His

    450                 455                 460

Leu Phe Pro Ala Ile Cys Phe Val His Tyr Pro Asp Ile Ala Lys Ile

465                 470                 475                 480

Val Lys Glu Glu Ala Ala Lys Leu Asn Ile Pro Tyr Ala Ser Tyr Arg

                485                 490                 495

Thr Leu Pro Gly Ile Phe Val Gln Phe Trp Arg Phe Met Lys Asp Met

            500                 505                 510

Gly Thr Ala Glu Gln Ile Gly Glu Val Pro Leu Pro Lys Ile Pro Asn

        515                 520                 525

Pro Gln Leu Ala Pro Lys Leu Ala

    530                 535

<210>97

<211>1455

<212>DNA

<213>假矮海链藻

<220>

<22l>CDS

<222>(1)..(1455)

<223>Δ6-去饱和酶

<400>97

atg gga aaa gga gga gac gca gcc gca gct acc aag cgt agt gga gca    48

Met Gly Lys Gly Gly Asp Ala Ala Ala Ala Thr Lys Arg Ser Gly Ala

1               5                   10                  15

ttg aaa ttg gcg gag aag ccg cag aag tac act tgg cag gag gtg aag    96

Leu Lys Leu Ala Glu Lys Pro Gln Lys Tyr Thr Trp Gln Glu Val Lys

            20                  25                  30

aag cac atc acc ccc gac gat gcc tgg gta gtc cac caa aac aaa gtc    144

Lys His Ile Thr Pro Asp Asp Ala Trp Val Val His Gln Asn Lys Val

        35                  40                  45

tac gac gtc tcc aac tgg tac gac cac ccc ggt gga gcc gtg gtg ttc    192

Tyr Asp Val Ser Asn Trp Tyr Asp His Pro Gly Gly Ala Val Val Phe

    50                  55                  60

acc cac gcc gga gac gac atg acg gac atc ttc gcc gcc ttc cac gcc    240

Thr His Ala Gly Asp Asp Met Thr Asp Ile Phe Ala Ala Phe His Ala

65                  70                  75                  80

caa ggc tct cag gcc atg atg aag aag ttt tac att gga gat ttg att    288

Gln Gly Ser Gln Ala Met Met Lys Lys Phe Tyr Ile Gly Asp Leu Ile

                85                  90                  95

Ccg gag agt gtg gag cat aag gat caa aga cag ttg gat ttc gag aag    336

Pro Glu Ser Val Glu His Lys Asp Gln Arg Gln Leu Asp Phe Glu Lys

            100                 105                 110

gga tat cgt gat tta cgg gcc aag ctt gtc atg atg ggg atg ttc aag    384

Gly Tyr Arg Asp Leu Arg Ala Lys Leu Val Met Met Gly Met Phe Lys

        115                 120                 125

tcg agt aag atg tat tat gca tac aag tgc tcg ttc aat atg tgc atg    432

Ser Ser Lys Met Tyr Tyr Ala Tyr Lys Cys Ser Phe Asn Met Cys Met

    130                 135                 140

tgg ttg gtg gcg gtg gcc atg gtg tac tac tcg gac agt ttg gca atg    480

Trp Leu Val Ala Val Ala Met Val Tyr Tyr Ser Asp Ser Leu Ala Met

145                 150                 155                 160

cac att gga tcg gct ctc ttg ttg gga ttg ttc tgg cag cag tgt gga    528

His Ile Gly Ser Ala Leu Leu Leu Gly Leu Phe Trp Gln Gln Cys Gly

                165                 170                 175

tgg ctt gcg cac gac ttt ctt cac cac caa gtc ttt aag caa cga aag    576

Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His His Gln Val Phe Lys Gln Arg Lys

            180                 185                 190

tac gga gat ctc gtt ggc atc ttt tgg gga gat ctc atg cag ggg ttc    624

Tyr Gly Asp Leu Val Gly Ile Phe Trp Gly Asp Leu Met Gln Gly Phe

        195                 200                 205

tcg atg cag tgg tgg aag aac aag cac aat ggc cac cat gct gtt ccc    672

Ser Met Gln Trp Trp Lys Asn Lys His Asn Gly His His Ala Val Pro

    210                 215                 220

aac ttg cac aac tct tcc ttg gac agt cag gat ggt gat ccc gat att    720

Asn Leu His Asn Ser Ser Leu Asp Ser Gln Asp Gly Asp Pro Asp Ile

225                 230                 235                 240

gat acc atg cca ctc ctt gct tgg agt ctc aag cag gct cag agt ttc    768

Asp Thr Met Pro Leu Leu Ala Trp Ser Leu Lys Gln Ala Gln Ser Phe

                245                 250                 255

aga gag atc aat aag gga aag gac agt acc ttc gtc aag tac gct atc    816

Arg Glu Ile Asn Lys Gly Lys Asp Ser Thr Phe Val Lys Tyr Ala Ile

            260                 265                 270

aaa ttc cag gca ttc aca tac ttc ccc atc ctc ctc ttg gct cgc atc    864

Lys Phe Gln Ala Phe Thr Tyr Phe Pro Ile Leu Leu Leu Ala Arg Ile

        275                 280                 285

tct tgg ttg aat gaa tcc ttc aaa act gca ttc gga ctc gga gct gcc    912

Ser Trp Leu Asn Glu Ser Phe Lys Thr Ala Phe Gly Leu Gly Ala Ala

    290                 295                 300

tcg gag aat gcc aag ttg gag ttg gag aag cgt gga ctt cag tac cca    960

Ser Glu Asn Ala Lys Leu Glu Leu Glu Lys Arg Gly Leu Gln Tyr Pro

305                 310                 315                 320

ctt ttg gag aag ctt gga atc acc ctt cat tac act tgg atg ttc gtc    1008

Leu Leu Glu Lys Leu Gly Ile Thr Leu His Tyr Thr Trp Met Phe Val

                325                 330                 335

ctc tct tcc gga ttt gga agg tgg tct ctt cca tat tcc atc atg tat    1056

Leu Ser Ser Gly Phe Gly Arg Trp Ser Leu Pro Tyr Ser Ile Met Tyr

            340                 345                 350

ttc ttc act gcc aca tgc tcc tcg gga ctt ttc ctc gca ttg gtc ttt    1104

Phe Phe Thr Ala Thr Cys Ser Ser Gly Leu Phe Leu Ala Leu Val Phe

        355                 360                 365

gga ttg gga cac aac ggt atg tca gtg tac gat gcc acc acc cga cct    1152

Gly Leu Gly His Asn Gly Met Ser Val Tyr Asp Ala Thr Thr Arg Pro

    370                 375                 380

gac ttc tgg caa ctc caa gtc acc act aca cgt aac atc att ggt gga    1200

Asp Phe Trp Gln Leu Gln Val Thr Thr Thr Arg Asn Ile Ile Gly Gly

385                 390                 395                 400

cac ggc att ccc caa ttc ttt gtg gat tgg ttc tgc ggt gga ttg caa    1248

His Gly Ile Pro Gln Phe Phe Val Asp Trp Phe Cys Gly Gly Leu Gln

                405                 410                 415

tac caa gtg gat cac cac ctc ttc ccc atg atg cct aga aac aat atc    1296

Tyr Gln Val Asp His His Leu Phe Pro Met Met Pro Arg Asn Asn Ile

            420                 425                 430

gcg aaa tgc cac aag ctt gtg gag tca ttc tgt aag gag tgg ggt gtg    1344

Ala Lys Cys His Lys Leu Val Glu Ser Phe Cys Lys Glu Trp Gly Val

        435                 440                 445

aag tac cat gag gcc gat atg tgg gat ggt acc gtg gaa gtg ttg caa    1392

Lys Tyr His Glu Ala Asp Met Trp Asp Gly Thr Val Glu Val Leu Gln

    450                 455                 460

cat ctc tcc aag gtg tcg gat gat ttc ctt gtg gag atg gtg aag gat    1440

His Leu Ser Lys Val Ser Asp Asp Phe Leu Val Glu Met Val Lys Asp

465                 470                 475                 480

ttc cct gcc atg taa                                                1455

Phe Pro Ala Met

<210>98

<211>484

<212>PRT

<213>假矮海链藻

<400>98

Met Gly Lys Gly Gly Asp Ala Ala Ala Ala Thr Lys Arg Ser Gly Ala

1               5                   10                  15

Leu Lys Leu Ala Glu Lys Pro Gln Lys Tyr Thr Trp Gln Glu Val Lys

            20                  25                  30

Lys His Ile Thr Pro Asp Asp Ala Trp Val Val His Gln Asn Lys Val

        35                  40                  45

Tyr Asp Val Ser Asn Trp Tyr Asp His Pro Gly Gly Ala Val Val Phe

    50                  55                  60

Thr His Ala Gly Asp Asp Met Thr Asp Ile Phe Ala Ala Phe His Ala

65                  70                  75                  80

Gln Gly Ser Gln Ala Met Met Lys Lys Phe Tyr Ile Gly Asp Leu Ile

                85                  90                  95

Pro Glu Ser Val Glu His Lys Asp Gln Arg Gln Leu Asp Phe Glu Lys

            100                 105                 110

Gly Tyr Arg Asp Leu Arg Ala Lys Leu Val Met Met Gly Met Phe Lys

        115                 120                 125

Ser Ser Lys Met Tyr Tyr Ala Tyr Lys Cys Ser Phe Asn Met Cys Met

    130                 135                 140

Trp Leu Val Ala Val Ala Met Val Tyr Tyr Ser Asp Ser Leu Ala Met

145                 150                 155                 160

His Ile Gly Ser Ala Leu Leu Leu Gly Leu Phe Trp Gln Gln Cys Gly

                165                 170                 175

Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His His Gln Val Phe Lys Gln Arg Lys

            180                 185                 190

Tyr Gly Asp Leu Val Gly Ile Phe Trp Gly Asp Leu Met Gln Gly Phe

        195                 200                 205

Ser Met Gln Trp Trp Lys Asn Lys His Asn Gly His His Ala Val Pro

    210                 215                 220

Asn Leu His Asn Ser Ser Leu Asp Ser Gln Asp Gly Asp Pro Asp Ile

225                 230                 235                 240

Asp Thr Met Pro Leu Leu Ala Trp Ser Leu Lys Gln Ala Gln Ser Phe

                245                 250                 255

Arg Glu Ile Asn Lys Gly Lys Asp Ser Thr Phe Val Lys Tyr Ala Ile

            260                 265                 270

Lys Phe Gln Ala Phe Thr Tyr Phe Pro Ile Leu Leu Leu Ala Arg Ile

        275                 280                 285

Ser Trp Leu Asn Glu Ser Phe Lys Thr Ala Phe Gly Leu Gly Ala Ala

    290                 295                 300

Ser Glu Asn Ala Lys Leu Glu Leu Glu Lys Arg Gly Leu Gln Tyr Pro

305                 310                 315                 320

Leu Leu Glu Lys Leu Gly Ile Thr Leu His Tyr Thr Trp Met Phe Val

                325                 330                 335

Leu Ser Ser Gly Phe Gly Arg Trp Ser Leu Pro Tyr Ser Ile Met Tyr

            340                 345                 350

Phe Phe Thr Ala Thr Cys Ser Ser Gly Leu Phe Leu Ala Leu Val Phe

        355                 360                 365

Gly Leu Gly His Asn Gly Met Ser Val Tyr Asp Ala Thr Thr Arg Pro

    370                 375                 380

Asp Phe Trp Gln Leu Gln Val Thr Thr Thr Arg Asn Ile Ile Gly Gly

385                 390                 395                 400

His Gly Ile Pro Gln Phe Phe Val Asp Trp Phe Cys Gly Gly Leu Gln

                405                 410                 415

Tyr Gln Val Asp His His Leu Phe Pro Met Met Pro Arg Asn Asn Ile

            420                 425                 430

Ala Lys Cys His Lys Leu Val Glu Ser Phe Cys Lys Glu Trp Gly Val

        435                 440                 445

Lys Tyr His Glu Ala Asp Met Trp Asp Gly Thr Val Glu Val Leu Gln

    450                 455                 460

His Leu Ser Lys Val Ser Asp Asp Phe Leu Val Glu Met Val Lys Asp

465                 470                 475                 480

Phe Pro Ala Met

<210>99

<211>1431

<212>DNA

<213>假矮海链藻

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1431)

<223>Δ5-去饱和酶

<400>99

atg ccc ccc aac gcc gat atc tcc cgc atc cgc aac cgc atc ccc acc    48

Met Pro Pro Asn Ala Asp Ile Ser Arg Ile Arg Asn Arg Ile Pro Thr

1               5                   10                  15

aaa aca ggt acc gtt gcc tct gcc gac aac aac gac ccc gcc acc caa    96

Lys Thr Gly Thr Val Ala Ser Ala Asp Asn Asn Asp Pro Ala Thr Gln

            20                  25                  30

tcc gtc cga acc ctc aaa tct ctc aag ggc aac gag gtc gtc atc aac    144

Ser Val Arg Thr Leu Lys Ser Leu Lys Gly Asn Glu Val Val Ile Asn

        35                  40                  45

ggc aca att tat gac att gct gac ttt gtc cat cct gga gga gag gtt    192

Gly Thr Ile Tyr Asp Ile Ala Asp Phe Val His Pro Gly Gly Glu Val

    50                  55                  60

gtc aag ttc ttt ggt ggg aat gat gtt act att cag tat aat atg att    240

Val Lys Phe Phe Gly Gly Asn Asp Val Thr Ile Gln Tyr Asn Met Ile

65                  70                  75                  80

cat ccg tat cat acg ggg aaa cat ctg gag aag atg aag gct gtt gga    288

His Pro Tyr His Thr Gly Lys His Leu Glu Lys Met Lys Ala Val Gly

                85                  90                  95

aag gtt gta gat tgg cag tcg gac tac aag ttc gac acc ccc ttt gaa    336

Lys Val Val Asp Trp Gln Ser Asp Tyr Lys Phe Asp Thr Pro Phe Glu

            100                 105                 110

cga gag atc aaa tca gaa gtg ttc aag atc gta cgt cgc ggg cgt gag    384

Arg Glu Ile Lys Ser Glu Val Phe Lys Ile Val Arg Arg Gly Arg Glu

        115                 120                 125

ttc ggc aca aca ggc tac ttc ctc cgt gcc ttt ttc tac atc gct ctc    432

Phe Gly Thr Thr Gly Tyr Phe Leu Arg Ala Phe Phe Tyr Ile Ala Leu

    130                 135                 140

ttc ttc acc atg caa tac act ttc gcc aca tgc acc acc ttc acc acc    480

Phe Phe Thr Met Gln Tyr Thr Phe Ala Thr Cys Thr Thr Phe Thr Thr

145                 150                 155                 160

tac gat cac tgg tat cag agt ggt gta ttc atc gca att gtg ttt ggt    528

Tyr Asp His Trp Tyr Gln Ser Gly Val Phe Ile Ala Ile Val Phe Gly

                165                 170                 175

att tca cag gca ttc att ggg ttg aat gtc cag cac gat gcc aat cac    576

Ile Ser Gln Ala Phe Ile Gly Leu Asn Val Gln His Asp Ala Asn His

            180                 185                 190

gga gct gcc agt aag cgt ccc tgg gtg aat gac ttg ttg gga ttt gga    624

Gly Ala Ala Ser Lys Arg Pro Trp Val Asn Asp Leu Leu Gly Phe Gly

        195                 200                 205

acg gat ttg att gga tct aac aaa tgg aat tgg atg gca cag cat tgg    672

Thr Asp Leu Ile Gly Ser Asn Lys Trp Asn Trp Met Ala Gln His Trp

    210                 215                 220

act cat cac gct tac act aac cat agt gag aag gat ccc gat agc ttc    720

Thr His His Ala Tyr Thr Asn His Ser Glu Lys Asp Pro Asp Ser Phe

225                 230                 235                 240

agc tcg gaa cct atg ttt gca ttc aat gac tat ccc att gga cac ccg    768

Ser Ser Glu Pro Met Phe Ala Phe Asn Asp Tyr Pro Ile Gly His Pro

                245                 250                 255

aag aga aag tgg tgg cat agg ttc cag gga ggg tac ttc ctc ttc atg    816

Lys Arg Lys Trp Trp His Arg Phe Gln Gly Gly Tyr Phe Leu Phe Met

            260                 265                 270

ctt gga ctt tac tgg ctc tcg act gta ttc aat ccg caa ttc att gat    864

Leu Gly Leu Tyr Trp Leu Ser Thr Val Phe Asn Pro Gln Phe Ile Asp

        275                 280                 285

ctt cgt caa cgt ggg gct cag tac gtc gga att caa atg gag aat gat    912

Leu Arg Gln Arg Gly Ala Gln Tyr Val Gly Ile Gln Met Glu Asn Asp

    290                 295                 300

ttc att gtc aag agg agg aag tac gcc gtt gca ttg agg atg atg tac    960

Phe Ile Val Lys Arg Arg Lys Tyr Ala Val Ala Leu Arg Met Met Tyr

305                 310                 315                 320

att tac ttg aac att gtc agc ccc ttc atg aac aat ggt ttg agc tgg    1008

Ile Tyr Leu Asn Ile Val Ser Pro Phe Met Asn Asn Gly Leu Ser Trp

                325                 330                 335

tct acc ttt gga atc atc atg ttg atg gga atc agc gag agt ctc act    1056

Ser Thr Phe Gly Ile Ile Met Leu Met Gly Ile Ser Glu Ser Leu Thr

            340                 345                 350

ctc agt gtg ctc ttc tcg ttg tct cac aac ttc atc aat tcg gat cgt    1104

Leu Ser Val Leu Phe Ser Leu Ser His Asn Phe Ile Asn Ser Asp Arg

        355                 360                 365

gat cct acg gct gac ttc aaa aag acc gga gaa caa gtg tgc tgg ttc    1152

Asp Pro Thr Ala Asp Phe Lys Lys Thr Gly Glu Gln Val Cys Trp Phe

    370                 375                 380

aag tcg cag gtg gag act tcg tct acc tat ggg ggt ttt att tcc gga    1200

Lys Ser Gln Val Glu Thr Ser Ser Thr Tyr Gly Gly Phe Ile Ser Gly

385                 390                 395                 400

tgt ctt acg gga gga ctc aac ttt cag gtg gaa cat cat ctc ttt ccc    1248

Cys Leu Thr Gly Gly Leu Asn Phe Gln Val Glu His His Leu Phe Pro

                405                 410                 415

cgt atg agc agt gct tgg tat cct tac att gca cct acg gtt cgt gag    1296

Arg Met Ser Ser Ala Trp Tyr Pro Tyr Ile Ala Pro Thr Val Arg Glu

            420                 425                 430

gtt tgc aag aag cac ggg gtg aac tac gct tat tat cct tgg att ggg    1344

Val Cys Lys Lys His Gly Val Asn Tyr Ala Tyr Tyr Pro Trp Ile Gly

        435                 440                 445

cag aat ttg gta tca aca ttc aaa tac atg cat cgc gct ggt agt gga    1392

Gln Asn Leu Val Ser Thr Phe Lys Tyr Met His Arg Ala Gly Ser Gly

    450                 455                 460

gcc aac tgg gag ctc aag ccg ttg tct gga agt gcc taa                1431

Ala Asn Trp Glu Leu Lys Pro Leu Ser Gly Ser Ala

465                 470                 475

<210>100

<211>476

<212>PRT

<213>假矮海链藻

<400>100

Met Pro Pro Asn Ala Asp Ile Ser Arg Ile Arg Asn Arg Ile Pro Thr

1               5                   10                  15

Lys Thr Gly Thr Val Ala Ser Ala Asp Asn Asn Asp Pro Ala Thr Gln

            20                  25                  30

Ser Val Arg Thr Leu Lys Ser Leu Lys Gly Asn Glu Val Val Ile Asn

        35                  40                  45

Gly Thr Ile Tyr Asp Ile Ala Asp Phe Val His Pro Gly Gly Glu Val

    50                  55                  60

Val Lys Phe Phe Gly Gly Asn Asp Val Thr Ile Gln Tyr Asn Met Ile

65                  70                  75                  80

His Pro Tyr His Thr Gly Lys His Leu Glu Lys Met Lys Ala Val Gly

                85                  90                  95

Lys Val Val Asp Trp Gln Ser Asp Tyr Lys Phe Asp Thr Pro Phe Glu

            100                 105                 110

Arg Glu Ile Lys Ser Glu Val Phe Lys Ile Val Arg Arg Gly Arg Glu

        115                 120                 125

Phe Gly Thr Thr Gly Tyr Phe Leu Arg Ala Phe Phe Tyr Ile Ala Leu

    130                 135                 140

Phe Phe Thr Met Gln Tyr Thr Phe Ala Thr Cys Thr Thr Phe Thr Thr

145                 150                 155                 160

Tyr Asp His Trp Tyr Gln Ser Gly Val Phe Ile Ala Ile Val Phe Gly

                165                 170                 175

Ile Ser Gln Ala Phe Ile Gly Leu Asn Val Gln His Asp Ala Asn His

            180                 185                 190

Gly Ala Ala Ser Lys Arg Pro Trp Val Asn Asp Leu Leu Gly Phe Gly

        195                 200                 205

Thr Asp Leu Ile Gly Ser Asn Lys Trp Asn Trp Met Ala Gln His Trp

    210                 215                 220

Thr His His Ala Tyr Thr Asn His Ser Glu Lys Asp Pro Asp Ser Phe

225                 230                 235                 240

Ser Ser Glu Pro Met Phe Ala Phe Asn Asp Tyr Pro Ile Gly His Pro

                245                 250                 255

Lys Arg Lys Trp Trp His Arg Phe Gln Gly Gly Tyr Phe Leu Phe Met

            260                 265                 270

Leu Gly Leu Tyr Trp Leu Ser Thr Val Phe Asn Pro Gln Phe Ile Asp

        275                 280                 285

Leu Arg Gln Arg Gly Ala Gln Tyr Val Gly Ile Gln Met Glu Asn Asp

    290                 295                 300

Phe Ile Val Lys Arg Arg Lys Tyr Ala Val Ala Leu Arg Met Met Tyr

305                 310                 315                 320

Ile Tyr Leu Asn Ile Val Ser Pro Phe Met Asn Asn Gly Leu Ser Trp

                325                 330                 335

Ser Thr Phe Gly Ile Ile Met Leu Met Gly Ile Ser Glu Ser Leu Thr

            340                 345                 350

Leu Ser Val Leu Phe Ser Leu Ser His Asn Phe Ile Asn Ser Asp Arg

        355                 360                 365

Asp Pro Thr Ala Asp Phe Lys Lys Thr Gly Glu Gln Val Cys Trp Phe

    370                 375                 380

Lys Ser Gln Val Glu Thr Ser Ser Thr Tyr Gly Gly Phe Ile Ser Gly

385                 390                 395                 400

Cys Leu Thr Gly Gly Leu Asn Phe Gln Val Glu His His Leu Phe Pro

                405                 410                 415

Arg Met Ser Ser Ala Trp Tyr Pro Tyr Ile Ala Pro Thr Val Arg Glu

            420                 425                 430

Val Cys Lys Lys His Gly Val Asn Tyr Ala Tyr Tyr Pro Trp Ile Gly

        435                 440                 445

Gln Asn Leu Val Ser Thr Phe Lys Tyr Met His Arg Ala Gly Ser Gly

    450                 455                 460

Ala Asn Trp Glu Leu Lys Pro Leu Ser Gly Ser Ala

465                 470                 475

<210>101

<211>1449

<212>DNA

<213>假矮海链藻