印楝素的制备工艺

本发明属于天然杀虫剂领域，具体地，涉及从天然植物中制备提取杀虫剂的 工艺。

随着人们对于合成农药固有的一些特性，如污染环境、杀伤天然、残留物对 人畜毒性大的认识，人们对自我生存环境的保护意识的增强，天然杀虫剂已越来 越为人们所看好，世界各国都在积极从植物中寻找天然杀虫6活性物质，每年 世界上农业化学费用约有一半用于杀虫剂的研究，其重要性是显而易见的。印楝 (Azadirachta indica)植物是楝科植物中一种具有很强杀虫活性的长青植物， 而从中提取制备的印楝素是高活性的昆虫拒食剂，其杀虫活性大约在半个世纪之 前已为人们所认识。系统科学地研究印楝起始于60年代末期，迄今一直是天然杀 虫剂研究的一个热点。国外天然产物化学研究人员已以印楝各部分分离鉴定了一 百余个化合物，并且作了许多生物活性测定，其中以印楝素活性最强，常用来作 为天然杀虫活性的议价标准。从印楝植物中分离提取印楝素工艺已有报道，但存 在流程复杂、成本昂贵、得率较低、所得产品不稳定等缺点，如E.C.Vebel在 Journal of Liguid Chromatagraphy 2(6)875(1979)，R.BRYAN YAMASAKI在 Jouranal of Chromatography 356(1986)220-226，W.Kraus  在Tetrahedron VOL 43 No.12 2817(1987)中报道的工艺，均采用比较昂贵的分离试剂和材料， 如乙腈等试剂、制备性的HPLC等，得率均少于0.02％。

本发明的目的在于提供一种与现有技术不同的，流程简单、成本低廉、得率 较高、产品稳定的从印楝中制备印楝素的工艺。

本发明的目的是这样来实现的：以印楝植物的种仁为原料，依次用脱脂、提 取分配、上柱分离步骤制得印楝素，所说脱脂用石油醚冷浸1-3次；所说提取 分配先用甲醇∶水4∶1-9∶1浸泡或回流提取1-3次，滤液回收，在含水 甲醇层中用乙酸乙酯萃取；所说上柱分离用乙酸乙酯层上硅胶柱1-2次，然后 上中压柱MPLC，以氯仿∶丙酮9∶1洗脱，最后经过Rp18反相柱，以甲醇∶ 水1∶1洗脱即可得印楝素。

上述工艺中，提取分配可优选用甲醇∶水6∶1-9∶1浸泡3次。

上述工艺中，提取分配可优选用甲醇∶水6∶1-9∶1回流提取3次。

与现有技术相比，本发明存在的有益效果如下：

1、由于本发明在工艺的提取分配步骤采用乙酸乙酯萃取，取代了已有技术 用氯仿萃取、直接上HPLC的步骤，因而使用的溶剂成本低，为常用溶剂，同 时克服了用氯仿使产物不稳定的缺点；

2、本发明在上柱分离步骤增加了上中压柱MPLC步骤，使产物得率达到 0.18％，比现有技术得率均高，如比E.C.Vebel在Journal of Liguid Chromatagraphy 2(6)875(1979)报道的得率高十倍，比R.BRYAN YAMASAKI在 Jouranal of Chromatography 356(1986)220-226报道的得率高数十倍，比W .Kraus在Tetrahedron VOL 43 No.12 2817(1987)报道的得率也高数十倍；而且 产物不发生转变，稳定性大大增高，克服了现有技术产物得率低，同时产物不稳 定，易发生转变(如由印楝素(Azadirachtin)构型向印楝素异构体 (Azadirachtinin)转变)的缺点。

为了更好地理解本发明的实质，下面用实施例来详细说明本发明的技术内容， 但本发明的内容并不局限于此。

实施例一；

取印楝(Azadirachta indica)种仁10kg粉碎，用石油醚冷浸次，滤渣用甲 醇∶水4∶1浸泡3次，滤液回收，在含水甲醇层中用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯 层上硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯(1∶1)洗脱，以250ml/瓶收集，用21-29 瓶上硅胶柱，以石油醚-丙酮(2∶1)洗脱，以50ml/瓶收集，用23-42瓶上中 压柱MPLC，以氯仿∶丙酮9∶1洗脱，以50ml/瓶收集，用7-13瓶经过Rp18 反相柱，以甲醇：水1∶1洗脱即可得印楝素18克。

实施例二：

取印楝(Azadirachta indica)种仁20kg粉碎，用石油醚冷浸次，滤渣用甲 醇∶水9∶1浸泡2次，滤液回收，在含水甲醇层中用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯 层上硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯(1∶1)洗脱，以250ml/瓶收集，用21-29 瓶上硅胶柱，以石油醚-丙酮(2∶1)洗脱，以50ml/瓶收集，用23-42瓶上中 压柱MPLC，以氯仿∶丙酮9∶1洗脱，以50ml/瓶收集，用7-13瓶经过Rp18 反相柱，以甲醇∶水1∶1洗脱即可得印楝素36克。

实施例三：

取印楝(Azadirachta indica)种仁10kg粉碎，用石油醚冷浸次，滤渣用甲 醇∶水4∶1回流提取3次，滤液回收，在含水甲醇层中用乙酸乙酯萃取，乙酸 乙酯层上硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯(1∶1)洗脱，以250ml/瓶收集，用 21-29瓶上硅胶柱，以石油醚-丙酮(2∶1)洗脱，以50ml/瓶收集，用23-42 瓶上中压柱MPLC，以氯仿∶丙酮9∶1洗脱，以50ml/瓶收集，用7-13瓶经 过Rp18反相柱，以甲醇∶水1∶1洗脱即可得印楝素18克。

实施例四∶

取印楝(Azadirachta indica)种仁30kg粉碎，用石油醚冷浸次，滤渣用甲 醇∶水8∶1浸泡2次，滤液回收，在含水甲醇层中用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层上 硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯(1∶1)洗脱，以250ml/瓶收集，用21-29瓶上 硅胶柱，以石油醚-丙酮(2∶1)洗脱，以50ml/瓶收集，用23-42瓶上中压柱 MPLC，以氯仿∶丙酮9∶1洗脱，以50ml/瓶收集，用7-13瓶经过Rp18反相 柱，以甲醇∶水1∶1洗脱即可得印楝素52克。

实施例五：

取印楝(Azadirachta indica)种仁10kg粉碎，用石油醚冷浸次，滤渣用甲 醇∶水6∶1浸泡3次，滤液回收，在含水甲醇层中用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层 上硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯(1∶1)洗脱，以250ml/瓶收集，用21-29瓶 上硅胶柱，以石油醚-丙酮(2∶1)洗脱，以50ml/瓶收集，用23-42瓶上中压 柱MPLC，以氯仿∶丙酮9∶1洗脱，以50ml/瓶收集，用7-13瓶经过Rp18反 相柱，以甲醇∶水1∶1洗脱即可得印楝素19克。