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41. 发明授权

CN116121091B 一种高产熊果酸或齐墩果酸的酿酒酵母工程菌株及其应用有权
公开(公告)号：CN116121091B
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202211281300.2
申请日：2022-10-19
申请人：江南大学
发明人：刘龙 , 陈坚 , 吕雪芹 , 堵国成 , 李江华 , 刘延峰 , 金柯
IPC分类号： C12N1/19 , C12N9/90 , C12N9/10 , C12N9/04 , C12N9/02 , C12N15/61 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12P33/00 , C12R1/865

42. 发明公开

CN117530402A 一种利用大豆萌发降低豆腥味的植物肉基料及其制备方法审中-实审
公开(公告)号：CN117530402A
公开(公告)日：2024-02-09
申请号：CN202311751837.5
申请日：2023-12-19
申请人：江南大学 , 嘉兴未来食品研究院
发明人：刘潇 , 胡庆庆 , 陈坚 , 李江华
IPC分类号： A23L11/70 , A23P30/20
摘要：本发明涉及种利用大豆萌发降低豆腥味的植物肉基料及其制备方法，属于食品加工技术领域；本发明的植物肉基料包括以下步骤：(1)对大豆种子进行浸泡、清洗；(2)置于培养箱，在特定条件下培养；(3)种子萌发；(4)将萌发处理后的种子送入双螺杆挤出机进行加工，得到植物肉基料。本发明使用特定条件下的萌发处理抑制豆类各种小分子呈味物质的产生，从而掩蔽不良风味。本发明的植物肉基料生产工艺，通过种子萌发前处理降低豆腥味、矫正异味，提升营养品质，提高消费者接受度，对植物肉基料风味的改善具有一定的指导意义。

43. 发明授权

CN116254242B 一种ATP磷酸核苷转移酶突变体及产L-组氨酸的谷氨酸棒杆菌有权
公开(公告)号：CN116254242B
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202211652432.1
申请日：2022-12-21
申请人：江南大学
发明人：刘龙 , 陈坚 , 吕雪芹 , 堵国成 , 李江华 , 刘延峰 , 柴猛
IPC分类号： C12N9/10 , C12N15/54 , C12N1/21 , C12N15/77 , C12P13/24 , C12R1/15
摘要：本发明公开了一种ATP磷酸核苷转移酶突变体及产L‑组氨酸的谷氨酸棒杆菌，突变体由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ATP磷酸核苷转移酶的第56位酪氨酸突变为甲硫氨酸，且第235位苏氨酸突变为脯氨酸得到，谷氨酸棒杆菌由该突变体解除反馈抑制、并结合代谢工程策略和能量工程改造得到。本发明结合L‑组氨酸合成限速酶的半理性改造，模块化代谢工程，以及能量供应工程提高L‑组氨酸的合成，摇瓶发酵L‑组氨酸的产量达到3.10g/L，解决了目前缺少食品安全菌株高效合成组氨酸的问题。(56)对比文件张悦.增强ATP供应提高大肠杆菌合成L-组氨酸.中国优秀硕士学位论文数据库（电子期刊）工程科技I辑.2021,(第08期),第1-85页.Kulis-Horn RK 等.基于消除谷氨酸棒杆菌三磷酸腺苷磷酸核糖基转移酶的反馈抑制策略用于L-组氨酸的生产.中国医药工业杂志.2015,第46卷第933页.Robert K. Kulis-Horn等.Corynebacterium glutamicum ATP-phosphoribosyl transferases suitable forL-histidine production - Strategies forthe elimination of feedbackinhibition.Journal of Biotechnology.2015,第206卷第26-37页.Yun Zhang等.Genetic and biochemicalcharacterization of Corynebacteriumglutamicum ATP phosphoribosyltransferaseand its three mutants resistant tofeedback inhibition byhistidine.Biochimie.2011,第94卷第829-838页.Meng Chai等.Combinatorial proteinengineering and matabollic engineeringfor efficient synthesis of L-histidine inCorynebacterium glutamicum.ACS Synth.Biol.2023,第12卷第1275-1286页.Minhye Kim等.Biosynthesis of L-histidine from marine biomass-derivedgalactans in metabolically engineeredCorynebacterium glutamicum.BioresourceTechnology.2023,第391卷第1-11页.Heyun Wu等.Highly efficientproduction of L-histidine from glucose bymetabolically engineered escherichiacoli.ACS Synth. Biol.2020,第09卷第1813-1822页.

44. 发明授权

CN113186143B 一种产四氢嘧啶工程菌株的构建及优化的方法有权
公开(公告)号：CN113186143B
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202110400206.3
申请日：2021-04-14
申请人：江南大学
发明人：康振 , 王阳 , 陈坚 , 堵国成 , 王道安
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/70 , C12P17/12 , C12R1/19
摘要：本发明公开了一种产四氢嘧啶工程菌株的构建及优化的方法，属于生物工程技术领域。本发明提供了能够在低盐条件下生产四氢嘧啶的大肠杆菌工程菌ECT‑LA，该菌以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)为基础，包含由T7启动子控制的四氢C932T嘧啶合成基因簇ectABC及外源基因lysC 和asd，并优化了四氢嘧啶的制备方法。本发明构建的重组大肠杆菌以葡萄糖为底物，分批补料发酵56h后，四氢嘧啶产量可达60g/L。

45. 发明授权

CN116751799B 一种多位点双重碱基编辑器及其应用有权
公开(公告)号：CN116751799B
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202310702843.5
申请日：2023-06-14
申请人：江南大学
发明人：刘龙 , 陈坚 , 吕雪芹 , 堵国成 , 李江华 , 刘延峰 , 武耀康 , 李洋
IPC分类号： C12N15/70 , C12N15/75 , C12N15/10 , C12N15/63 , C12N9/22 , C12N9/78 , C12N1/21 , C12R1/19 , C12R1/125
摘要：辑，可以在单个crRNA阵列的引导下对基因组上本发明公开了一种多位点双重碱基编辑器多个位点同时进行编辑。及其应用，属于生物技术领域。首先，利用构建的单质粒编辑器骨架，通过胞嘧啶脱氨酶、UGI、腺嘌呤脱氨酶与dCas12a构成的融合蛋白的组成与结构优化，实现了单个crRNA阵列引导下多个位点的双重编辑；在此基础上，通过启动子替换、crRNA阵列中的人工间隔序列的引入与优化以及DR基序的改造，进一步提高了多位点编辑的效率；最后，通过多抗性菌株生成、核黄素合成菌株的从头产生以及表面活性素合成菌株的产量提升，验证了该多位点双重碱基编辑器的功能。本

46. 发明公开

CN117143944A 一种基于聚磷酸激酶构建体内ATP和PAPS再生系统的方法审中-实审
公开(公告)号：CN117143944A
公开(公告)日：2023-12-01
申请号：CN202311088855.X
申请日：2023-08-25
申请人：江南大学
发明人：康振 , 胥睿睿 , 王阳 , 孙晓源 , 堵国成 , 李江华 , 陈坚
IPC分类号： C12P19/40 , C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/54 , C12N15/55 , C12P19/32 , C12P11/00 , C12P19/26 , C12P17/06 , C12R1/19
摘要：本发明公开了一种基于聚磷酸激酶构建体内ATP和PAPS再生系统的方法，属于生物技术领域。本发明通过表达不同来源的聚磷酸激酶，提供体外添加磷酸供体polyPn，重新磷酸化ADP和AMP合成ATP，实现了体内ATP再生，并通过控制质粒的拷贝数，成功实现了体内不同强度ATP再生系统的构建。基于此，通过转入PAPS合成和再生模块，优化硫酸转运体系和弱化PAPS降解途径，成功构建出PAPS再生系统，并应用于大叶藻酸的合成，转化率达到91％。

47. 发明公开

CN117143861A 白酒大曲总RNA的快速提取方法审中-实审
公开(公告)号：CN117143861A
公开(公告)日：2023-12-01
申请号：CN202311259561.9
申请日：2023-09-27
申请人：宜宾五粮液股份有限公司 , 江南大学
发明人：赵鑫锐 , 罗青春 , 李江华 , 卢彦坪 , 陈坚 , 郑佳 , 赵东 , 文科雄 , 万兵 , 张清玫 , 刘芳
IPC分类号： C12N15/10 , C12Q1/6806
摘要：本发明公开了一种白酒大曲总RNA的快速提取方法，属于生物工程技术领域。白酒大曲总RNA的快速提取方法，通过液氮冷冻处理结合研制的RNA裂解液处理提取法，最后经过洗涤液洗涤，能在1小时内快速提取大曲微生物的总RNA。本发明从成分复杂的大曲中首次分离得到浓度高、纯度高的总RNA，并且提取速度快，可在1h内完成白酒大曲总RNA的提取，本发明可以为白酒大曲中微生物的转录信息分析提供技术支撑，对于白酒大曲发酵过程重要物质的产生机理的研究及提高大曲品质具有重要意义。

48. 发明公开

CN116978462A 一种基于扩散模型生成非天然启动子的方法审中-实审
公开(公告)号：CN116978462A
公开(公告)日：2023-10-31
申请号：CN202310954854.2
申请日：2023-07-31
申请人：江南大学
发明人：周景文 , 王兴隆 , 徐康杰 , 谭亚梦 , 赵欣怡 , 陈坚 , 曾伟主
IPC分类号： G16B40/00 , G16B5/00 , G06N3/0464 , G06N3/08
摘要：本发明公开了一种基于扩散模型生成非天然启动子的方法，属于生物信息技术领域。所述为实现生成启动子，建立了基于扩散模型的深度学习网络。同时，本申请对生成启动子进行了真假判定和功能性区间分析，结果显示，生成的启动子中超过40％为真启动子，且序列具有显著的‑35和‑10功能区，具有较高的可信度。

49. 发明授权

CN114561311B 一种胞外转运视黄醛和视黄醇的酿酒酵母菌株构建及其应用有权
公开(公告)号：CN114561311B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202210313654.4
申请日：2022-03-28
申请人：江南大学
发明人：刘龙 , 石训 , 陈坚 , 吕雪芹 , 石聚领 , 堵国成 , 李江华 , 刘延峰 , 刘家恒 , 金柯
IPC分类号： C12N1/19 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/61 , C12P23/00 , C12R1/865
摘要：本发明公开了一种胞外转运视黄醛和视黄醇的酿酒酵母菌株构建及其应用，属于发酵工程技术领域。本发明构建了一株强化视黄醛和视黄醇分泌能力的重组酿酒酵母菌株，所述重组酿酒酵母强化表达了3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶、异戊烯基焦磷酸异构酶、法尼基焦磷酸合酶、内质网大小调节因子INO2和ABC转运蛋白Pdr10；异源表达香叶基香叶基二磷酸合酶、八氢番茄红素脱氢酶、15‑顺式八氢番茄红素合酶、双功能番茄红素环化酶/八氢番茄红素合酶、15、15’‑加双氧酶；敲除酿酒酵母中的ROX1和GAL80基因；并且下调角鲨烯合酶ERG9的表达；对其进行摇瓶发酵时，该菌株胞外视黄醛、视黄醇含量分别达到43.50mg/L和16.84mg/L，视黄醛和视黄醇总含量为73.40mg/L，因此具有广阔的应用前景。

50. 发明授权

CN111850008B 促进蛋白胞外表达的信号肽有权
公开(公告)号：CN111850008B
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202010749128.3
申请日：2020-07-30
申请人：吉林中粮生化有限公司 , 江南大学
发明人：佟毅 , 李义 , 陶进 , 刘松 , 徐奎栋 , 李江华 , 陈坚
IPC分类号： C12N15/31 , C12N15/75 , C12N15/62 , C12N1/21 , C12N9/44 , C12R1/125
摘要：本发明公开了促进蛋白胞外表达的信号肽，属于基因工程及酶工程技术领域。本发明以枯草芽孢杆菌为宿主，通过对枯草芽孢杆菌内源信号肽Ggt、YweA、YolA进行同义突变，高通量筛选选择高和低荧光值的单克隆，经测序鉴定后，突变信号肽后，将变体接种到摇瓶发酵验证，得到能使胞外蛋白量显著提高的同义突变序列，在保证蛋白正常翻译的同时，又能提高蛋白的表达量。Ggt、YweA、YolA信号肽的同义突变序列分别能使胞外酶活较野生型提高1.45、0.59、1.04倍，从而为酶的胞外高效表达提供一种新策略。

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