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61. 发明公开

CN1500887A 引物伸长反应检测方法、碱基种类判别方法及其装置无效
公开(公告)号：CN1500887A
公开(公告)日：2004-06-02
申请号：CN03154499.1
申请日：2003-09-29
申请人：松下电器产业株式会社
发明人：夜久英信 , 行政哲男 , 冈弘章
IPC分类号： C12Q1/68 , C12Q1/25 , G01N33/00
CPC分类号： C12Q1/6858 , C12Q1/6869 , C12Q2565/301 , C12Q2521/543
摘要：本发明提供一种判别核酸碱基序列中的碱基种类的简便技术。包括：工序(a)，调制含有核酸、具备含有与上述核酸互补结合的互补结合区域的碱基序列引物、以及核苷酸的试料溶液；工序(b)，将该试料溶液置于发生伸长反应的条件下，在该条件下生成焦磷酸；工序(c)，使该试料溶液与具有贯穿H+难透性膜内外的、焦磷酸水解活性部位露出在表面的H+－焦磷酸酶的H+难透性膜表面接触的；工序(d)，在将上述H+－焦磷酸酶浸入溶液的状态下，测定上述H+难透性膜表面侧溶液或其内面侧溶液中至少任一侧的H+浓度；基于工序(d)的测定结果检测上述伸长反应的工序(e)；和基于工序(e)的检测结果判别上述核酸的碱基序列中的碱基种类的工序(f)。

62. 发明公开

CN109486929A 一种ALDH2的SNP位点的快速扩增检测试剂盒及检测方法无效
公开(公告)号：CN109486929A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201711267654.0
申请日：2017-12-05
申请人：湘潭智联技术转移促进有限责任公司
发明人：不公告发明人
IPC分类号： C12Q1/6883 , C12Q1/686 , C12Q1/6869
CPC分类号： C12Q1/6883 , C12Q1/686 , C12Q1/6869 , C12Q2600/156 , C12Q2531/107 , C12Q2527/107 , C12Q2565/301
摘要：本发明公开了一种ALDH2的SNP位点的快速扩增检测试剂盒及检测方法，所述试剂盒由高效扩增组和焦磷酸测序组组成，其中：高效扩增组包括测序引物和Taq DNA聚合酶，扩增引物序列如序列表SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示，扩增产物退火后经焦磷酸测序组测序，退火引物序列如序列表SEQ ID NO：4所示。本发明采用线性指数扩增的目标片段扩增方法，精准设计的扩增引物扩增效率高且错配少，不仅大大增加了扩增效率，且直接扩增出单链DNA可直接用于焦磷酸测序，无需对扩增产物进行标记和双链分离，避免了繁冗的实验步骤，也减少了强碱性试剂对扩增片段的损伤。

63. 发明公开

CN108949940A 一种焦磷酸测序法检测肠促胰素作用相关的单核苷酸多态性的试剂盒及方法无效
公开(公告)号：CN108949940A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201710598976.7
申请日：2017-07-20
申请人：苏州大学附属第二医院
发明人：施爱明 , 钱晨月 , 鲍君杰
IPC分类号： C12Q1/6869 , C12Q1/6883
CPC分类号： C12Q1/6876 , C12Q1/6869 , C12Q2600/106 , C12Q2600/156 , C12Q2565/301
摘要：本发明涉及一种焦磷酸测序法检测肠促胰素作用相关基因的单核苷酸多态性的试剂盒及方法，所述的试剂盒包括用于测定多态性位点rs3765467、多态性位点rs10423928、多态性位点rs7903146、多态性位点rs4664443、多态性位点rs12617656的上游引物、下游引物和测序引物，其具体序列参见SEQ ID NO.1～15。本发明通过选择与肠促胰素作用相关基因的特定的5个单核苷酸多态性位点并对该些多态性位点的引物设计以及PCR扩增体系和条件的优化，使得本发明具有很高的特异性，可以成功将5个多态性位点进行分型，对二肽基肽酶4(DPP‑4)抑制剂的临床个体化用药具有潜在指导意义。

64. 发明公开

CN108699592A 单核苷酸检测方法无效
公开(公告)号：CN108699592A
公开(公告)日：2018-10-23
申请号：CN201780012530.X
申请日：2017-02-24
申请人：贝斯4创新公司
发明人：巴纳比·巴姆福思
IPC分类号： C12Q1/6827 , C12Q1/6869
CPC分类号： C12Q1/6827 , C12Q1/6869 , C12Q2521/319 , C12Q2521/331 , C12Q2521/501 , C12Q2525/125 , C12Q2525/131 , C12Q2525/307 , C12Q2563/159 , C12Q2565/107 , C12Q2565/301 , C12Q2565/629 , C12Q2525/301
摘要：一种核酸测序方法，其特征在于以下步骤：(1)通过所述核酸的渐进的焦磷酸解产生单核苷酸流；(2)通过在聚合酶和连接酶存在下使所述单核苷酸之一与相应的探针系统反应产生至少一个基本上双链的寡核苷酸已用探针，所述探针系统包含(a)第一单链寡核苷酸，其标记有处于不可检测状态的特征性可检测元件类型的第一区和第二区，所述第一区和第二区分别位于第三区的X’和Y’端侧，所述第三区包含包括捕获位点的限制性酶识别位点元件和在其X’侧的外切核酸酶阻断位点(其中X’为3’并且Y’为5’或X’为5’并且Y是3’)，和(b)第二和第三单链寡核苷酸，其能够与第一寡核苷酸上捕获位点侧翼的互补区杂交；(2a)(i)当且仅当捕获的单核苷酸包含被取代的核碱基时，用常规或切口取代依赖性限制性内切核酸酶处理所述已用探针以在所述识别位点切割所述第一寡核苷酸链，或(ii)当且仅当捕获的单核苷酸包含未取代的核碱基时，用常规或切口取代敏感性限制性内切核酸酶处理所述已用探针以在所述识别位点切割所述第一寡核苷酸链；(3)用在对应于所述第一寡核苷酸的X’‑Y’方向上具有双链外切核酸活性的酶消化已用探针的所述第一寡核苷酸链，以产生处于可检测状态的来自所述第一区，所述第二区，或所述第一和第二区的可检测元件和单链第四寡核苷酸，所述单链第四寡核苷酸至少部分是所述第一寡核苷酸的互补序列；(4)使所述第四寡核苷酸与另一个第一寡核苷酸反应以产生对应于已用探针的基本上双链的寡核苷酸产物；(5)在循环中重复步骤(2a)，(3)和(4)，和(6)检测在步骤(3)的每次重复中释放的可检测元件，其中如果使用的内切核酸酶是常规类型，则所述第二或第三寡核苷酸分别在其X’或Y’端或其附近包括引导内切核酸降解的连接。还公开了相应的生物探针系统。

65. 发明公开

CN107893109A 一种基于移除野生型序列的低丰度基因突变富集方法有权
公开(公告)号：CN107893109A
公开(公告)日：2018-04-10
申请号：CN201711092555.3
申请日：2017-11-08
申请人：重庆邮电大学
发明人：浦丹 , 赵珊 , 舒坤贤
IPC分类号： C12Q1/6869 , C12Q1/6806
CPC分类号： C12Q1/6869 , C12Q1/6806 , C12Q2535/101 , C12Q2531/113 , C12Q2565/301 , C12Q2521/327
摘要：本发明公开了一种基于移除野生型序列的低丰度基因突变富集方法，本发明方法在PCR扩增前对用作DNA模板的样品DNA进行处理，使3'末端被封闭的含突变位点的核苷酸单链作为杂交链与野生型和突变型序列杂交，双链特异性核酸酶能特异性地移除杂交链与野生型序列形成的完全互补配对的同源双链DNA，但不能移除杂交链与突变型序列形成的非完全互补的异源双链DNA。移除后的产物经PCR扩增，PCR扩增所用的一条引物3'末端位于突变位点上且被封闭，在具有3'-5'校读活性的聚合酶作用下，使野生型序列不能扩增，但突变型序列得以指数扩增，由此有效富集低丰度基因突变序列，提高了富集灵敏度和准确度，同时本发明方法还可以同时富集多种突变型序列从而提高扩增效率。

66. 发明授权

CN104611423B 基因分型的方法有权
公开(公告)号：CN104611423B
公开(公告)日：2018-03-20
申请号：CN201510016264.0
申请日：2010-11-15
申请人：基因特力株式会社
发明人：安城皖 , 吴命锡
IPC分类号： C12Q1/6869 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
CPC分类号： C12Q1/6874 , C12Q1/68 , C12Q1/6869 , C12Q1/6886 , C12Q1/701 , C12Q1/708 , C12Q2525/185 , C12Q2535/122 , C12Q2537/143 , C12Q2563/179 , C12Q2565/301 , C12Q2600/156 , C12Q2600/16 , C12Q2525/155
摘要：本发明涉及基因分型的方法，特别涉及被分配给各基因型的ID序列，以及使用所述ID序列的多重基因分型方法。当使用所述ID序列进行焦磷酸测序时，对于每个基因型可以得到独特、简单的热裂解谱图。因此，使用所述的ID序列，使得通过简单而有效的方式对病毒基因、疾病基因、细菌基因进行基因分型及基因鉴定，成为可能。此外，本发明的基因分型引物，可用于在不同的使用分配顺序和测序方法进行的基因分型方法中。

67. 发明公开

CN107287299A 基于焦磷酸测序技术的用于CYP2C19基因多态性快速检测的方法无效
公开(公告)号：CN107287299A
公开(公告)日：2017-10-24
申请号：CN201710499943.7
申请日：2017-06-27
申请人：贵州省人民医院
发明人：黄盛文 , 徐琴 , 杨楠楠 , 韩媛媛 , 李頔
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6869 , C12Q2565/301 , C12Q2527/125
摘要：本发明公开的是基于焦磷酸测序技术的用于CYP2C19基因多态性快速检测的方法，包括以下步骤：S1：基因组DNA的提取；S2：CYP2C19多态性位点的引物设计；S3：PCR扩增反应；S4：焦磷酸测序；S5：基因型分析；S6：Sanger测序验证；上述CYP2C19多态性位点的引物包括CYP2C19*2(rs4244285)、CYP2C19*3(rs4986893)、CYP2C19*17(rs12248560)位点上下游各1kb范围的基因序列及焦磷酸测序引物，本发明所建立的焦磷酸测序检测方法可对CYP2C19基因进行快速、准确的分型，具有快速、准确、成本低的特点。

68. 发明授权

CN104379767B 用于分析核酸序列的组件和方法失效
公开(公告)号：CN104379767B
公开(公告)日：2017-09-08
申请号：CN201380032302.0
申请日：2013-06-13
申请人：西门子公司
发明人： W.冈布雷赫特 , O.海登
IPC分类号： C12Q1/68 , G01N27/414
CPC分类号： C12Q1/6874 , C12Q1/6869 , G01N27/4145 , C12Q2565/301 , C12Q2565/607
摘要：本发明涉及借助所谓的合成测序法分析核酸序列的组件和方法。根据本发明，检测在核苷酸与待测序的核酸序列结合的过程中释放的化学物质群。借助于喷雾装置将试剂施加至检测所释放的物质群的传感器。这样做的优势在于，不会发生横向流动。假阴性和假阳性结果的比例得以显著降低。此外，少量的试剂就足以浸润所述传感器。就流动室而言不必要充填输送管道和排放管道。

69. 发明授权

CN103937899B 用于基于AFLP的高通量多态性检测的方法有权
公开(公告)号：CN103937899B
公开(公告)日：2017-09-08
申请号：CN201410177894.1
申请日：2006-12-20
申请人：凯津公司
发明人： M·J·T·范艾克 , A·P·索伦森 , M·G·M·范施里克
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6874 , C12Q1/6827 , C12Q1/6855 , C12Q1/6869 , C12Q1/6876 , C12Q1/6883 , C12Q2600/156 , C12Q2600/16 , C12Q2565/301 , C12Q2535/138 , C12Q2535/122 , C12Q2527/107
摘要：本发明涉及用于基于AFLP的高通量多态性检测的方法，其用于高通量发现、检测和基因分型一个或多个样品中一个或多个遗传标记的方法，其包括步骤：限制性内切核酸酶消化DNA、接头‑连接、任选的预扩增、选择性扩增、混合集中扩增产物、测序具有足够冗余度的所述文库、聚簇分析，接着鉴定所述文库内和/或文库之间的遗传标记，并确定所述遗传标记的(共)显性的基因分型。本发明提供方法或策略，其组合AFLP的功效和一般适用性与某些高通量测序技术以建立一般可适用的多态性评分系统。在该策略中，也解决了抽样变异的问题，确保基因分型具有高精确度和最佳化数据集具有最少量的遗漏基因分型的概率。

70. 发明公开

CN106854678A 焦磷酸测序法检测TRIB3基因多态性的试剂盒及方法无效
公开(公告)号：CN106854678A
公开(公告)日：2017-06-16
申请号：CN201710050138.6
申请日：2017-01-23
申请人：张伟
发明人：张伟 , 何发忠 , 周杰灿
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6869 , C12Q1/6883 , C12Q2600/118 , C12Q2600/156 , C12Q2535/122 , C12Q2565/301
摘要：本发明公开了一种焦磷酸测序法检测TRIB3基因多态性试剂盒及方法。TRIB3基因多态性具体是指rs2295490单核苷酸多态性。试剂盒包含如SEQ ID NO.1—3所示的引物、2×Premix预液、DNA模板等。本发明的试剂盒，可以实现准确、快捷、高通量TRIB3(rs2295490)的检测，从而达到对2型糖尿病个体化治疗方案制定，心血管疾病获益预测及防范低血糖事件发生。

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