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81. 发明授权

CN101298604B 高温耐酸性α-淀粉酶的突变株及其构建方法有权许可
公开(公告)号：CN101298604B
公开(公告)日：2011-05-04
申请号：CN200810053625.9
申请日：2008-06-25
申请人：天津科技大学
发明人：路福平 , 杜连祥 , 刘逸寒 , 李玉 , 王建玲 , 王春霞
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/56 , C12N15/75 , C12N15/90 , C12R1/10
摘要：本发明涉及一种高温耐酸性α-淀粉酶的突变株及其构建方法，是将地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因经突变后(Leu134→Arg和Ser320→Ala)获得的高温耐酸性α-淀粉酶基因，通过构建打靶载体，利用同源重组的方法，将其整合到出发菌株地衣芽孢杆菌的基因组DNA中，得到了地衣芽孢杆菌突变株，实现高温耐酸性α-淀粉酶的同源高效表达。本发明中的突变株所产α-淀粉酶在本身耐高温的基础上，酸稳定性也有了明显地提高，为我国酒精、淀粉糖化等淀粉深加工行业提供了更好的工艺条件，降低了成本，节省了能源和工业用粮，满足了一些在酸性条件下进行淀粉原料液化工艺的要求。

82. 发明公开

CN101892253A 在大肠杆菌中无需包涵体复性制备溶栓药物瑞替普酶的方法无效
公开(公告)号：CN101892253A
公开(公告)日：2010-11-24
申请号：CN201010212836.X
申请日：2010-06-30
申请人：天津科技大学
发明人：张同存 , 罗学刚 , 田文静 , 姜勇 , 王楠 , 路福平
IPC分类号： C12N15/58 , C12N15/70 , C12N9/48
摘要：本发明涉及一种无需包涵体复性、直接通过大肠杆菌表达系统制备溶栓药物瑞替普酶(Reteplase，rPA)的方法。通过PCR扩增得到rPA的基因片断，将该基因片断克隆到载体pET40b中，构建得到pET40b-rPA重组质粒，且使rPA与载体pET40b中的二硫键异构酶DsbC融合表达。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，分别优化确立了IPTG及乳糖的诱导表达条件。所获得目的融合蛋白主要以可溶性成分表达，经镍柱亲和层析纯化后，用Xa因子(或甲酸、凝血酶)处理可获得高纯度的rPA目的蛋白。纤维蛋白平板法检测结果显示：本方法所获得的融合蛋白DsbC-rPA及去除标签纯化所得rPA蛋白均具有显著的溶栓活性。

83. 发明授权

CN1943388B 以华根霉为菌种发酵制备大豆肽固体食品的方法失效许可
公开(公告)号：CN1943388B
公开(公告)日：2010-05-12
申请号：CN200610016405.X
申请日：2006-10-31
申请人：天津科技大学
发明人：路福平 , 杜连祥 , 戚薇 , 王建玲 , 王海宽
IPC分类号： C12P21/00 , A23J1/14 , C12R1/845
摘要：以华根霉为菌种发酵制备大豆肽固体食品的方法涉及以大豆为原料、华根霉为菌种，发酵制备大豆肽固体食品的方法。本发明解决了发酵能力低及培养基成本高等问题。其方法是以能产纤溶酶的华根霉为菌种，以大豆为主要原料，经种子培养、发酵培养、打浆离心或过滤、干燥工艺得到含有大豆肽的固体食品。其中发酵培养基面粉与大豆按质量比为1∶8-10，加水量为0.6-0.8mL/g物料，于27-30℃培养50-70h。本发明提供了一种富含纤溶酶、营养丰富的保健食品。该产品可广泛用于医药、食品、饲料添加剂等诸多领域；且其制备工艺简单、周期短、成本低、适合工业化生产，为蛋白肽工业发展提供有效途径，具有较高的经济效益和社会效益。

84. 发明公开

CN101429520A 无选择标记真菌基因组整合质粒pUNFIN、其构建方法及应用无效
公开(公告)号：CN101429520A
公开(公告)日：2009-05-13
申请号：CN200810152913.X
申请日：2008-11-10
申请人：天津科技大学
发明人：黎明 , 路福平 , 王春霞 , 张俊环 , 牛涛
IPC分类号： C12N15/80 , C12N15/56 , C12N1/15 , C12N9/34 , C12R1/685
摘要：本发明涉及一种无选择标记真菌基因组整合质粒pUNFIN、其构建方法及其在黑曲霉转苷酶(糖化酶)基因的敲除糖化酶(转苷酶)高产工程菌构建中的应用，通过本方法所获得的基因工程菌株无抗性选择标记，糖化酶(转苷酶)基因的拷贝数增加，同时不需要去除转苷酶(糖化酶)，有效减少糖化酶的损失，降低生产成本，提高生产效率，增强并提升产品市场竞争力。

85. 发明公开

CN101225397A IL－24与EGF的融合基因原核载体的构建及其应用无效
公开(公告)号：CN101225397A
公开(公告)日：2008-07-23
申请号：CN200710060203.X
申请日：2007-12-25
申请人：天津科技大学
发明人：路福平 , 杜连祥 , 樊欣迎 , 包乐媛 , 王春霞 , 王建玲 , 王贺
IPC分类号： C12N15/62 , C12N15/70 , C12N15/74 , C07K19/00 , A61K38/20 , A61P35/00
摘要：本发明涉及一种IL－24与EGF的融合基因原核载体的构建及其应用，其中IL－24与EGF融合基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；IL－24与EGF融合基因原核表达载体，其中该融合基因具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；IL－24与EGF融合蛋白，其中该融合蛋白具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列编码。本发明证明IL－24与EGF融合蛋白在治疗肺癌细胞中的应用，能够明显提高IL－24抑制肺癌细胞生长的作用。本发明能使IL－24与EGF发挥各自的生物学功能，增强了对肿瘤细胞的靶向性，所采取的纯化工艺稳定可靠，效率高，适合工业化生产。

86. 发明授权

CN100376685C 微生物转化法制备雌酚酮的方法失效
公开(公告)号：CN100376685C
公开(公告)日：2008-03-26
申请号：CN200510013096.6
申请日：2005-01-14
申请人：天津科技大学
发明人：杜连祥 , 路福平 , 王敏 , 别松涛
IPC分类号： C12P33/00 , C12N1/20 , C12R1/06
摘要：微生物转化法制备雌酚酮的方法，属于微生物制备技术。涉及以简单节杆菌为菌种，甾体(I和II)为底物，制备雌酚酮技术。本发明解决了甾体A环芳构化的难题，为生物发酵法制备雌激素药物提供一种新的路线和方法。其技术方案是：采用简单节杆菌经菌种悬液的制备、一级种子培养、二级发酵培养、底物转化和产物的分离提取工序，其中底物投料量为12～20g/L发酵液，溶氧水平在30%～50%，转化36～60h；并采用丙酮-水法特异性的分离产物使获得的产物雌酚酮符合USP26版标准。本发明工艺简单、经济实用，提高了雌酚酮的活性和质量，缩短了生产周期，降低了生产成本，促进绿色化工业的发展，既有经济效益又有社会效益。

87. 发明公开

CN1995358A 植物种子转化技术失效
公开(公告)号：CN1995358A
公开(公告)日：2007-07-11
申请号：CN200610129492.X
申请日：2006-11-22
申请人：天津科技大学
发明人：李兴林 , 舒庆尧 , 路福平 , 夏英武 , 吴殿星 , 高年发 , 张健 , 崔海瑞 , 傅俊杰
IPC分类号： C12N15/82 , A01H4/00
摘要：本发明属于生物技术领域。外源DNA进入植物基因组，目前主要有愈伤组织的农杆菌介导和基因枪法等技术。但是，受再生体系难、遗传背景差异导致转化率低下等因素，它们仍然处在不断的完善之中。物理手段的使用(如超声波、负压法、脉冲电泳、重离子辐照和γ射线辐照等)也同样存在使用材料有限、转化率低等主要问题。其中与本发明相近的γ射线辐照，因为辐照材料为愈伤组织，要考虑到再生体系、辐照时期和污染等问题，实际操作受到了很大限制。因此面对许多类型植物的转化技术，还需要进一步的不断改进。本发明的主要内容与技术特征是：将在γ射线辐照后的植物种子(剂量为：0.01－10Gy，剂量率：为0.1－2Gy/h)，转入携带目的基因质粒的农杆菌或外源DNA(表达质粒)中悬浮液浸泡5－300min，然后，在选择性的基质中萌发；鉴定、筛选GUS基因瞬间表达的幼苗：利用阳性幼苗可以用作两种后续的处理：一是作为外植体，在选择培养基上进行组织培养获得转基因再生植株；二是将阳性幼苗直接移栽盆内或田间，但其后，要每各3－5天，在各株的所有茎尖处，点滴50－200μl的相关抗生素(浓度为50－250mg/l)，直至花芽的形成；收获种子进行外源基因鉴定，阳性材料进入下一代种植。

88. 发明授权

CN1273602C 适于在酵母中表达的重组甜蛋白及其制备方法失效许可
公开(公告)号：CN1273602C
公开(公告)日：2006-09-06
申请号：CN200410072327.6
申请日：2004-10-14
申请人：天津科技大学
发明人：路福平 , 陈忠军 , 杜连祥 , 戚薇 , 王敏 , 黎明 , 蔡恒
IPC分类号： C12N15/81 , C12N15/29 , C12N1/19 , C07K14/415
摘要：适于在酵母中表达的重组甜蛋白及其制备方法，属于用重组DNA技术表达植物甜蛋白，特别是用酿酒酵母表达重组甜蛋白的方法。本发明解决了基因工程表达重组甜蛋白Monellin效率不理想的问题。其技术方案是采用酵母偏爱密码子，用PCR方法合成甜蛋白基因，并在酿酒酵母中高效表达植物甜蛋白。包含该序列的重组表达载体以及携带该载体的重组体细胞。其中酵母可以是酿酒酵母、假丝酵母、克鲁维酵母、雅鲁瓦酵母等。选用酿酒酵母作为宿主，安全性好，更利于甜蛋白这种食用添加剂的大量生产，产量可达24g/L发酵液，为工业化大生产奠定了基础。

89. 发明公开

CN1680582A 微生物转化法制备雌酚酮的方法失效
公开(公告)号：CN1680582A
公开(公告)日：2005-10-12
申请号：CN200510013096.6
申请日：2005-01-14
申请人：天津科技大学
发明人：杜连祥 , 路福平 , 王敏 , 别松涛
IPC分类号： C12P33/00 , C12N1/20 , C12R1
摘要：微生物转化法制备雌酚酮的方法，属于微生物制备技术。涉及以简单节杆菌为菌种，甾体(I和II)为底物，制备雌酚酮技术。本发明解决了甾体A环芳构化的难题，为生物发酵法制备雌激素药物提供一种新的路线和方法。其技术方案是：采用简单节杆菌经菌种悬液的制备、一级种子培养、二级发酵培养、底物转化和产物的分离提取工序，其中底物投料量为12～20g/L发酵液，溶氧水平在30％～50％，转化36～60h；并采用丙酮－水法特异性的分离产物使获得的产物雌酚酮符合USP 26版标准。本发明工艺简单、经济实用，提高了雌酚酮的活性和质量，缩短了生产周期，降低了生产成本，促进绿色化工业的发展，既有经济效益又有社会效益。

90. 发明公开

CN1614000A 红枣全汁发酵果醋及其酿造方法失效许可
公开(公告)号：CN1614000A
公开(公告)日：2005-05-11
申请号：CN200410019983.X
申请日：2004-07-15
申请人：天津科技大学
发明人：杜连祥 , 路福平 , 王春霞 , 王敏 , 戚薇 , 王建玲
IPC分类号： C12J1/00
摘要：红枣全汁发酵果醋及其酿造方法，涉及以红枣为原料，通过发酵，制备红枣果醋及其酿造方法。它克服了调配型、勾兑型红枣果醋口味不醇和及红枣特有的营养成分，得不到充分利用的缺点。该发明是以药食同源的红枣或枣加工副产品为原料，葡萄酒活性干酵母菌、恶臭醋酸杆菌混浊变种为菌种，经打浆、分离、一次发酵、二次发酵、杀菌、无菌过滤、陈酿制得，一种澄清透明、酸度醇和、具有浓郁枣香的，发酵型红枣全汁果醋。该产品既保留了红枣特有的营养成分，又兼具食醋的特殊疗效，是集营养、保健、食疗功能为一体的新型饮品。本发明工艺控制简单、易推广、适合工业化生产。它为解决红枣深加工技术相对滞后、起到积极作用，社会效益和经济效益较大。

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