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用于治疗听力损失的基因疗法递送组合物和方法
申请号 CN202280049582.5 申请日 2022-05-09 公开(公告)号 CN117813101A 公开(公告)日 2024-04-02
申请人 阿库斯股份有限公司; 发明人 E·J·西蒙斯; R·吴; D·R·伦茨; 姜昊;
摘要 本公开提供包含可操作地连接于启动子的编码序列的构建体，其中所述编码序列编码多肽(例如 治疗 性多肽)。示例性的构建体包括AAV构建体。还提供了使用所公开的构建体用于治疗听 力 损失和/或 耳 聋的方法。
权利要求

1.包含与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列的多核苷酸。
2.权利要求1的多核苷酸，其包含与SEQ ID NO:90具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
3.权利要求1的多核苷酸，其包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
4.权利要求1的多核苷酸，其包含与SEQ ID NO:96具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
5.权利要求1的多核苷酸，其包含与SEQ ID NO:99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
6.权利要求1‑5中任何一项的多核苷酸，其中所述多核苷酸能够指导缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列的转录。
7.构建体，其包含权利要求1‑6中任何一项的多核苷酸和包含一种/所述缝隙连接蛋白
26多肽或其功能片段的编码序列的核酸序列。
8.权利要求7的构建体，其中所述构建体为表达盒。
9.权利要求1‑6中任何一项的多核苷酸或权利要求7‑8中任何一项的构建体，其中所述多核苷酸为启动子并且可操作地连接于一种/所述编码序列。
10.权利要求1‑6中任何一项的多核苷酸或权利要求7‑9中任何一项的构建体，其中所述多核苷酸能够在内耳支持细胞中指导所述编码序列的转录。
11.权利要求1‑6中任何一项的多核苷酸或权利要求7‑10中任何一项的构建体，其中所述多肽为缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段。
12.包含可操作地连接于启动子的缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，其中所述启动子能够指导所述编码序列的转录。
13.权利要求12的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:90具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
14.权利要求12的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
15.权利要求12的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
16.权利要求12的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
17.权利要求12‑16中任何一项的表达构建体，其中所述表达构建体进一步包含可操作地连接于所述编码序列的第二启动子，其中第二启动子与所述编码序列异源或同源。
18.权利要求12‑17中任何一项的表达构建体，其中所述启动子能够在内耳支持细胞中指导所述编码序列的转录。
19.权利要求1‑6中任何一项的多核苷酸、权利要求7‑11中任何一项的构建体或权利要求8‑12中任何一项的表达构建体，其中所述启动子包含与选自SEQ ID NO:90、40、96或99中一种或多种的序列具有至少95％同一性的核酸序列。
20.权利要求10‑11中任何一项的多核苷酸或构建体或者权利要求12‑19中任何一项的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
21.权利要求6的多核苷酸、权利要求7‑11中任何一项的构建体或任何权利要求12‑20的表达构建体，其进一步包含可操作地连接于所述缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列的最小GJB2启动子。
22.权利要求6的多核苷酸、权利要求7‑11中任何一项的构建体或任何权利要求12‑20的表达构建体，其包含与SEQ ID NO:117‑126中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的GJB2核酸序列。
23.表达构建体，其包含可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列，其中所述多核苷酸在内耳支持细胞中表达。
24.权利要求23的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子与所述缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列异源。
25.权利要求23或24的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子包含与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
26.权利要求25的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:90具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
27.权利要求25的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
28.权利要求25的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
29.权利要求25的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
30.权利要求23‑29中任何一项的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子包含与选自SEQ ID NO:90、40、96或99中一种或多种的序列具有至少95％同一性的核酸序列。
31.权利要求23‑30中任何一项的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
32.权利要求21‑31中任何一项的多核苷酸、构建体或表达构建体，其中所述最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
33.权利要求23‑32中任何一项的表达构建体，其包含与SEQ ID NO:117‑126中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的GJB2核酸序列。
34.病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列，所述编码序列可操作地连接于能够在内耳支持细胞中指导所述编码序列的转录的启动子，和(iii)3’ITR，其中所述启动子与所述编码序列异源。
35.权利要求34的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。
36.权利要求35的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:90具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
37.权利要求35的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:40具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
38.权利要求35的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
39.权利要求35的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
40.权利要求34‑39中任何一项的病毒载体构建体，其进一步包含5’非翻译区(UTR)。
41.权利要求34‑40中任何一项的病毒载体构建体，其进一步包含3’非翻译区(UTR)。
42.权利要求34‑39中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列，所述编码序列可操作地连接于在内耳支持细胞中表达所述多核苷酸的启动子，(iv)3’UTR，和(v)所述3’ITR。
43.权利要求34‑39中任何一项的病毒载体构建体，其包含与SEQ ID NO:117‑126中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的核酸序列。
44.病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列，所述编码序列可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，和(iii)3’ITR，其中所述内耳支持细胞选择性启动子与所述编码序列异源。
45.权利要求44的病毒载体构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子包含与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
46.权利要求45的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:90具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
47.权利要求45的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:40具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
48.权利要求45的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
49.权利要求45的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
50.权利要求44‑49的病毒载体构建体，其进一步包含5’非翻译区(UTR)。
51.权利要求44‑50的病毒载体构建体，其进一步包含3’非翻译区(UTR)。
52.权利要求44‑49的病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列，所述编码序列可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，(iv)3’UTR，和(v)所述3’ITR。
53.权利要求34‑52中任何一项的病毒载体构建体，其包含与SEQ ID NO:117‑126中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的GJB2核酸序列。
54.权利要求34‑53中任何一项的病毒载体构建体，其中所述启动子与所述缝隙连接蛋白26或其功能片段的编码序列异源。
55.权利要求34‑54中任何一项的病毒载体构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子选自与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列中的一种或多种。
56.权利要求55的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:90具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
57.权利要求56的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:40具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
58.权利要求56的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
59.权利要求56的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
60.权利要求44‑59中任何一项的病毒载体构建体，其中所述最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。
61.权利要求34‑60中任何一项的病毒载体构建体，其中所述启动子能够在选自以下中一种或多种的内耳支持细胞中表达所述缝隙连接蛋白26或其功能片段的编码序列：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
62.权利要求1‑6中任何一项的多核苷酸、权利要求7‑11中任何一项的构建体或权利要求12‑33中任何一项的表达构建体，其中所述构建体进一步包含5’UTR。
63.权利要求34‑61中任何一项的病毒载体构建体，其中所述5’UTR包含与SEQ ID NO:
20、21或66中任何一种的序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％同一性的核酸序列。
64.权利要求1‑6中任何一项的多核苷酸、权利要求7‑11中任何一项的构建体或权利要求12‑33中任何一项的表达构建体，其中所述构建体进一步包含3’UTR。
65.权利要求34‑63中任何一项的病毒载体构建体，其中所述3’UTR包含与SEQ ID NO:
22、67、68或69中任何一种的序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％同一性的核酸序列。
66.前述权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体，其进一步包含多聚A尾。
67.权利要求66的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体，其中所述多聚A尾为牛生长激素、小鼠‑β‑珠蛋白、小鼠‑α‑珠蛋白、人类胶原蛋白、多瘤病毒、单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV TK)、IgG重链基因、人类生长激素或SV40晚期和早期多聚(A)。
68.权利要求67的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体，其中所述多聚A尾为牛生长激素多聚A。
69.权利要求1‑6中任何一项的多核苷酸、权利要求7‑11中任何一项的构建体或权利要求12‑33中任何一项的表达构建体，其进一步包含5’和3’反向末端重复(ITR)。
70.权利要求34‑62中任何一项的病毒载体构建体，其中所述5’ITR和所述3’ITR侧接于所述启动子和所述多核苷酸。
71.权利要求70的多核苷酸、构建体或表达构建体或者权利要求70的病毒载体构建体，其中所述5’ITR和所述3’ITR为衍生于选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11和AAV Anc80 ITR的血清型的AAV ITR。
72.权利要求71的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体，其中所述AAV ITR衍生于血清型AAV2。
73.权利要求70‑72中任何一项的病毒载体构建体，其中所述5’AAV ITR包含SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:52的核酸序列。
74.权利要求69或71‑72的多核苷酸、构建体或表达构建体或者权利要求70‑72中任何一项的病毒载体构建体，其中所述3’AAV ITR包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:53的核酸序列。
75.权利要求73‑74的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体，其中
a.所述5’ITR包含根据SEQ ID NO:8的核酸序列和所述3’ITR包含根据SEQ ID NO:9的核酸序列；或
b.所述5’ITR包含根据SEQ ID NO:52的核酸序列和所述3’ITR包含根据SEQ ID NO:53的核酸序列。
76.权利要求73‑75的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体，其中(i)所述
5’ITR包含SEQ ID NO:8或52的核酸序列，(ii)所述5’UTR包含SEQ ID NO:20、21或66中任何一种的核酸，(iii)所述启动子包含10‑16、28、40、57、90‑99中任何一种的核酸序列，(iv)所述3’UTR包含SEQ ID NO:22、67、68或69的核酸序列，和(v)所述3’ITR包含SEQ ID NO:9或53的核酸序列。
77.权利要求73‑76的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体，其中(i)所述
5’ITR包含SEQ ID NO:8或52的核酸序列，(ii)所述5’UTR包含SEQ ID NO:20、21或66中任何一种的核酸，(iii)所述内耳支持细胞选择性启动子包含SEQ ID NO:10‑16、28、40、57、90‑
99中任何一种的核酸序列，所述最小GJB2启动子包含SEQ ID NO:86的序列，(v)所述3’UTR包含SEQ ID NO:22、67、68或69的核酸序列，和(vi)所述3’ITR包含SEQ ID NO:9或53的核酸序列。
78.前述权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体，其中所述构建体包含根据SEQ ID NO:7、17、38、45‑51、54、61、82‑84、87‑88和100‑107中任何一种的核酸序列。
79.前述权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体，其中所述构建体在内耳支持细胞中选择性地表达。
80.前述权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体，其中所述构建体包含SEQ ID NO:7的核苷酸12‑4557、SEQ ID NO:17的核苷酸12‑4338、SEQ ID NO:38的核苷酸12‑3976、SEQ ID NO:54的核苷酸12‑4754、SEQ ID NO:61的核苷酸12‑4429、SEQ ID NO:100的核苷酸12‑4645、SEQ ID NO:101的核苷酸12‑4708、SEQ ID NO:102的核苷酸12‑4993、SEQ ID NO:103的核苷酸12‑4496、SEQ ID NO:104的核苷酸12‑4253、SEQ ID NO:105的核苷酸12‑4320、SEQ ID NO:106的核苷酸12‑4464或SEQ ID NO:107的核苷酸12‑
4328。
81.病毒载体，其包含前述权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体。
82.权利要求81的载体，其中所述病毒载体选自腺相关病毒(AAV)、腺病毒或慢病毒载体。
83.权利要求82的载体，其中所述病毒载体为AAV载体。
84.AAV颗粒，其包含权利要求1‑80中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体。
85.权利要求83的病毒载体或权利要求84的AAV颗粒，其包含AAV衣壳，其中所述AAV衣壳为或衍生于AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV‑rh8、AAV‑rh10、AAV‑rh39、AAV‑rh43或AAV Anc80血清型衣壳。
86.权利要求85的AAV颗粒，其中所述AAV衣壳为AAV Anc80衣壳。
87.组合物，其包含权利要求1‑80中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体、权利要求81‑83中任何一项的载体或权利要求84‑86的AAV颗粒。
88.权利要求88的组合物，其中所述组合物为进一步包含药学上可接受的载剂的药用组合物。
89.权利要求88的组合物，其中所述药用组合物为合成的外淋巴溶液。
90.离体细胞，其包含先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体或AAV颗粒。
91.权利要求90的离体细胞，其中所述离体细胞为内耳细胞。
92.权利要求91的离体细胞，其中所述离体细胞为内耳支持细胞。
93.权利要求92的离体细胞，其中所述支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
94.方法，其包括用以下转导离体细胞：
a.先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体或AAV颗粒；和
b.一种或多种共同包含AAV Rep基因、AAV Cap基因、AAV VA基因、AAV E2a基因和AAV E4基因的辅助质粒。
95.权利要求94的方法，其中所述离体细胞为内耳细胞。
96.权利要求95的方法，其中所述离体细胞为内耳支持细胞。
97.权利要求96的方法，其中所述支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
98.在内耳支持细胞中表达缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的方法，其包括给予所述受试者先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞。
99.在内耳支持细胞中增加缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的表达的方法，其包括给予所述受试者先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞。
100.权利要求98或99的方法，其中所述缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段在所述内耳支持细胞中的表达相对于所述多肽在所述内耳支持细胞中的内源性表达增加。
101.在患有听力损失或处于其风险下的受试者中治疗听力损失的方法，其包括给予所述受试者先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞。
102.权利要求98‑101中任何一项的方法，其中(i)所述缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段主要在内耳支持细胞中表达，(ii)所述缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段在内耳支持细胞中以比在内耳毛细胞中更高的水平选择性地表达，(iii)所述缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段不以足以在内耳毛细胞中引起毒性的水平表达，或(iv)或其任何组合。
103.权利要求98‑102的方法，其中所述内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)和OC90+细胞(OC90)。
104.权利要求98‑103中任何一项的方法，其中所述给予为对所述受试者的内耳。
105.权利要求104的方法，其中所述给予为对所述受试者的耳蜗。
106.权利要求104‑105的方法，其中所述给予为经由圆窗膜注射。
107.先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞用于在患有听力损失或处于其风险下的受试者中治疗听力损失的用途。
108.先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞在制造用于治疗听力损失的药物中的用途。
109.先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞，其用作药物。
110.先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞，其用于治疗听力损失。
111.试剂盒，其包含先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞。
112.权利要求98‑106中任何一项的方法、权利要求99‑108中任何一项的用途或权利要求111的试剂盒，其中所述构建体、载体、AAV颗粒、组合物或离体细胞预被加载于装置中。
113.权利要求112的方法、用途或试剂盒，其中所述装置为微导管。
114.权利要求113的方法、用途或试剂盒，其中使所述微导管成形，以使得其可经由外耳道进入所述中耳腔并使所述微导管的末端与RWM接触。
115.权利要求111‑114中任何一项的方法、用途或试剂盒，其中所述微导管的远端包括至少一个直径在10‑1,000微米之间的微针。
116.权利要求111‑115中任何一项的试剂盒，其进一步包含装置。
117.权利要求116的试剂盒，其中所述装置为在图5‑8的任何一个中描述的装置。
118.权利要求116或117中任何一项的试剂盒，其中所述装置包含含有弯曲部分和成角尖端的针。
119.先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒，其包含与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。
120.先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体或AAV颗粒，其包含与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。
121.先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体或AAV颗粒，其包含与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少99％或100％同一性的序列。
122.多核苷酸，其包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。
123.构建体，其包含权利要求122的多核苷酸和编码多肽的核酸序列。
124.权利要求123的构建体，其中所述多核苷酸能够指导所述编码所述多肽的核酸序列的转录。
125.权利要求123‑124中任何一项的构建体，其中所述多核苷酸为启动子并且可操作地连接于所述编码所述多肽的核酸序列。
126.权利要求123‑125的构建体，其中所述构建体为表达盒。
127.权利要求123‑126中任何一项的构建体，其中所述多核苷酸能够在内耳支持细胞中指导所述编码多肽的核酸序列的转录。
128.权利要求123‑127中任何一项的构建体，其中所述多肽为治疗性多肽、报告多肽或内耳支持细胞多肽。
129.包含可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸的表达构建体，其中所述启动子选自以下中的一种或多种：GJB6启动子、GDF6启动子、IGFBP2启动子、RBP7启动子、PARM1启动子、GFAP启动子、BACE2启动子、DBI2启动子、FABP3启动子、KLHL14启动子、MMP15启动子、SPARC启动子、TSPAN8启动子、VIM启动子、其衍生物或其片段。
130.权利要求129的表达启动子，其中所述启动子与所述多核苷酸异源。
131.权利要求129‑130中任何一项的表达构建体，其中所述启动子能够在内耳支持细胞中指导所述多核苷酸的转录。
132.权利要求129‑131中任何一项的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:
16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
133.权利要求131‑132中任何一项的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
134.权利要求129‑133中任何一项的表达构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:
16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。
135.先前权利要求中任何一项的表达构建体，其进一步包含用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)。
136.权利要求135的表达构建体，其中所述微小RNA在内耳毛细胞中表达。
137.权利要求136的表达构建体，其中所述微小RNA为以下中的一种或多种：miR‑194、miR‑140、miR‑18a、miR‑99a、miR‑30b、miR‑15a、miR182或miR‑183。
138.权利要求129‑137中任何一项的表达构建体，其进一步包含可操作地连接于所述编码所述多肽的核酸序列的最小GJB2启动子。
139.表达构建体，其包含可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽的多核苷酸，其中所述多核苷酸在内耳支持细胞中表达。
140.权利要求139的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子与所述多核苷酸异源。
141.权利要求139‑140中任何一项的表达构建体，其中所述多肽为治疗性多肽、报告多肽或内耳支持细胞多肽。
142.权利要求139‑141中任何一项的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子选自以下中的一种或多种：GJB6启动子、GDF6启动子、IGFBP2启动子、RBP7启动子、PARM1启动子、GFAP启动子、BACE2启动子、DBI2启动子、FABP3启动子、KLHL14启动子、MMP15启动子、SPARC启动子、TSPAN8启动子或VIM启动子。
143.权利要求139‑142中任何一项的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
144.权利要求139‑143中任何一项的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
145.权利要求139‑144中任何一项的表达构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
146.权利要求139‑145中任何一项的表达构建体，其中所述最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的核酸序列。
147.权利要求139‑146中任何一项的表达构建体，其进一步包含用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)。
148.权利要求147的表达构建体，其中所述微小RNA在内耳毛细胞中表达。
149.权利要求148的表达构建体，其中所述微小RNA为以下中的一种或多种：miR‑194、miR‑140、miR‑18a、miR‑99a、miR‑30b、miR‑15a、miR182或miR‑183。
150.病毒载体构建体：其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于能够驱动所述多核苷酸在内耳支持细胞中转录的启动子，和(iii)3’ITR，其中所述启动子与所述多核苷酸异源。
151.权利要求150的病毒载体构建体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
152.权利要求150‑151中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于能够驱动所述多核苷酸在内耳支持细胞中转录的启动子，和(iv)所述3’ITR。
153.权利要求150‑152中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于能够驱动所述多核苷酸在内耳支持细胞中转录的启动子，(iii)3’非翻译区(UTR)和，和(iv)所述3’ITR。
154.权利要求150‑153中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于能够驱动所述多核苷酸在内耳支持细胞中转录的启动子，(iii)用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(iv)3’非翻译区(UTR)，和(v)所述3’ITR。
155.权利要求150‑154中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于能够驱动所述多核苷酸在内耳支持细胞中转录的启动子，(iv)3’UTR，和(v)所述3’ITR。
156.病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)编码多肽多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于能够驱动所述多核苷酸在内耳支持细胞中转录的内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，和(iii)3’ITR，其中所述内耳支持细胞选择性启动子与所述多核苷酸异源。
157.权利要求156的病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，和(iii)3’ITR，其中所述内耳支持细胞选择性启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或
90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
158.权利要求156‑157中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，和(iv)所述3’ITR。
159.权利要求156‑158中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，(iii)3’非翻译区(UTR)，和(iv)所述3’ITR。
160.权利要求156‑159中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，(iii)用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(iv)3’非翻译区(UTR)，和(iv)所述3’ITR。
161.权利要求156‑160中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于能够驱动所述多核苷酸在内耳支持细胞中转录的内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，(iv)3’UTR，和(v)所述3’ITR。
162.权利要求156‑161中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于能够驱动所述多核苷酸在内耳支持细胞中转录的启动子，(iii)用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)所述3’ITR。
163.权利要求156‑162中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)所述5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于能够驱动所述多核苷酸在内耳支持细胞中转录的内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，(iii)用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)所述3’ITR。
164.病毒载体构建体，其包含可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸，其中所述构建体包含用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)。
165.权利要求164的病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)所述可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸，(iii)所述用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，和(iv)3’ITR。
166.权利要求164‑165中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸，(iv)所述用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，和(v)3’ITR。
167.权利要求164‑166中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)所述可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸，(iii)所述用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(iv)3’非翻译区(UTR)和(v)3’ITR。
168.权利要求164‑167中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸，(iv)所述用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)
3’ITR。
169.病毒载体构建体，其包含可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽的多核苷酸，其中所述构建体包含用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)。
170.权利要求169的病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，(iii)所述用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，和(iv)
3’ITR。
171.权利要求169‑170中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，(iv)所述用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，和(v)3’ITR。
172.权利要求169‑171中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，(iii)所述用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(iv)3’非翻译区(UTR)和(v)3’ITR。
173.权利要求169‑172中任何一项的病毒载体构建体，其包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)所述编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子，(iv)所述用于在内耳细胞中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)3’ITR。
174.权利要求151‑173中任何一项的病毒载体构建体，其中所述多肽为治疗性多肽、报告多肽、内耳支持细胞多肽。
175.权利要求60和160‑174中任何一项的病毒载体构建体，其中所述微小RNA在以下中的一种或多种中表达：内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或内沟细胞。
176.权利要求175的病毒载体构建体，其中所述微小RNA在内耳毛细胞中表达。
177.权利要求76的病毒载体构建体，其中所述微小RNA为以下中的一种或多种：miR‑
194、miR‑140、miR‑18a、miR‑99a、miR‑30b、miR‑15a、miR182或miR‑183。
178.权利要求175的病毒载体构建体，其中所述微小RNA在螺旋神经节细胞中表达。
179.权利要求178的病毒载体构建体，其中所述微小RNA选自以下中的一种或多种：
miR‑194、miR‑18a、miR‑99a、miR‑30b、miR‑15a、miR182或miR‑183。
180.权利要求175的病毒载体构建体，其中所述微小RNA在外侧支持细胞中表达。
181.权利要求180的病毒载体构建体，其中所述微小RNA选自以下中的一种或多种：
miR‑99a、miR‑30b或miR‑15a。
182.权利要求175的病毒载体构建体，其中所述微小RNA在基底膜细胞中表达。
183.权利要求182的病毒载体构建体，其中所述微小RNA选自以下中的一种或多种：
miR‑99a、miR‑30b或miR‑15a。
184.权利要求175的病毒载体构建体，其中所述微小RNA在内侧支持细胞中表达。
185.权利要求184的病毒载体构建体，其中所述微小RNA选自以下中的一种或多种：
miR182和miR‑183。
186.权利要求175的病毒载体构建体，其中所述微小RNA在螺旋缘细胞中表达。
187.权利要求186的病毒载体构建体，其中所述微小RNA选自以下中的一种或多种：
miR182和miR‑183。
188.权利要求175的病毒载体构建体，其中所述微小RNA在内沟细胞中表达。
189.权利要求186中任何一项的病毒载体构建体，其中所述微小RNA选自以下中的一种或多种：miR182和miR‑183。
190.任何权利要求60和162‑189的病毒载体构建体，其中所述微小RNA调控靶位点包含与SEQ ID NO:1‑6、78或79中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
191.权利要求150‑190中任何一项的病毒载体构建体，其中所述启动子与所述多核苷酸异源。
192.权利要求191的病毒载体构建体，其中所述启动子为诱导型启动子、组成型启动子、组织特异性启动子或细胞选择性启动子。
193.权利要求192的病毒载体构建体，其中所述组成型启动子为CAG启动子、CBA启动子、CMV启动子或CB7启动子。
194.权利要求192‑193的病毒载体构建体，其中所述组成型启动子包含与SEQ ID NO:
10‑15中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％同一性的核酸序列。
195.权利要求192的病毒载体构建体，其中所述启动子为细胞选择性启动子。
196.权利要求195的病毒载体构建体，其中所述细胞选择性启动子为内耳支持细胞选择性启动子。
197.权利要求196的病毒载体构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子选自以下中的一种或多种：GJB6启动子、GDF6启动子、IGFBP2启动子、RBP7启动子、PARM1启动子、GFAP启动子、BACE2启动子、DBI2启动子、FABP3启动子、KLHL14启动子、MMP15启动子、SPARC启动子、TSPAN8启动子、VIM启动子、其衍生物或其片段。
198.权利要求196‑197中任何一项的病毒载体构建体，其中所述内耳支持细胞选择性启动子与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％同一性。
199.权利要求169‑198中任何一项的病毒载体构建体，其中所述最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。
200.权利要求150‑199中任何一项的病毒载体构建体，其中所述启动子能够在选自一种或多种以下的内耳支持细胞中表达所述多核苷酸：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
201.权利要求174的病毒载体构建体，其中所述多肽为治疗性多肽。
202.权利要求201的病毒载体构建体，其中所述治疗性多肽为跨膜蛋白。
203.权利要求201‑202的病毒载体构建体，其中所述编码治疗性多肽的多核苷酸包含选自以下的基因：ATP2B2、CHRNA9、CDH23、CCER2、CLRN1、CLRN2、COCH、DFNA9、DYTN、EPS8、EPS8L2、ESPN、ESPNL、GJB2、GJB6、GJB3、GSDME、DFNA5、INSM1、IKZF2、LHX3、MYO7A、MYO3A、NDP、PCDH15、PTPRQ、STRC、SLC26A5、USH1C、USH2A、SYNE4或其任何组合。
204.权利要求174的病毒载体构建体，其中所述多核苷酸编码内耳支持细胞多肽。
205.权利要求204的病毒载体构建体，其中所述编码内耳支持细胞多肽的多核苷酸包含选自以下的基因：ATP2B2、CHRNA9、CDH23、CCER2、CLRN1、CLRN2、COCH、DFNA9、DYTN、EPS8、EPS8L2、ESPN、ESPNL、GJB2、GJB6、GJB3、GSDME、DFNA5、INSM1、IKZF2、LHX3、MYO7A、MYO3A、NDP、PCDH15、PTPRQ、STRC、SLC26A5、USH1C、USH2A、SYNE4或其任何组合。
206.权利要求174的病毒载体构建体，其中所述多核苷酸编码报告多肽。
207.权利要求206的病毒载体构建体，其中所述报告多肽为以下中的一种或多种：β‑内酰胺酶、β‑半乳糖苷酶(LacZ)、碱性磷酸酶、胸苷激酶、绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白、mCherry荧光蛋白、黄色荧光蛋白、FLAG标签、氯霉素乙酰转移酶(CAT)和萤光素酶。
208.权利要求150‑207的病毒载体构建体，其中所述构建体进一步包含5’UTR。
209.权利要求150‑208中任何一项的病毒载体构建体，其中所述5’UTR包含与SEQ ID NO:20、21或66中任何一种的序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％同一性的核酸序列。
210.权利要求150‑209的病毒载体构建体，其中所述构建体进一步包含3’UTR。
211.权利要求210中任何一项的病毒载体构建体，其中所述3’UTR包含与SEQ ID NO:
22、67、68或69中任何一种的序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％同一性的核酸序列。
212.权利要求208‑211中任何一项的病毒载体构建体，其中所述3’UTR和/或所述5’UTR或包含所述miRTS。
213.前述权利要求中任何一项的病毒载体构建体，其进一步包含多聚A尾。
214.权利要求213的病毒载体构建体，其中所述多聚A尾为牛生长激素、小鼠‑β‑珠蛋白、小鼠‑α‑珠蛋白、人类胶原蛋白、多瘤病毒、单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV TK)、IgG重链基因、人类生长激素或SV40晚期和早期多聚(A)。
215.权利要求214的病毒载体构建体，其中所述多聚A尾为牛生长激素多聚A。
216.权利要求150‑215中任何一项的病毒载体构建体，其进一步包含5’和3’反向末端重复(ITR)。
217.权利要求216中任何一项的病毒载体构建体，其中所述5’ITR和所述3’ITR侧接于所述启动子和所述多核苷酸。
218.权利要求217的病毒载体构建体，其中所述5’ITR和所述3’ITR为衍生于选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11和AAV Anc80 ITR的血清型的AAV ITR。
219.权利要求218的病毒载体构建体，其中所述AAV ITR衍生于血清型AAV2。
220.权利要求216‑219中任何一项的病毒载体构建体，其中所述5’AAV ITR包含SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:52的核酸序列。
221.权利要求216‑220中任何一项的病毒载体构建体，其中所述3’AAV ITR包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:53的核酸序列。
222.权利要求229或221的病毒载体构建体，其中
c.所述5’ITR包含根据SEQ ID NO:8的核酸序列和所述3’ITR包含根据SEQ ID NO:9的核酸序列，或
d.所述5’ITR包含根据SEQ ID NO:52的核酸序列和所述3’ITR包含根据SEQ ID NO:53的核酸序列。
223.权利要求220‑222中任何一项的病毒载体构建体，其中(i)所述5’ITR包含SEQ ID NO:8或52的核酸序列，(ii)所述5’UTR包含SEQ ID NO:20、21或66中任何一种的核酸，(iii)所述启动子包含10‑16、28、40、57、90‑99中任何一种的核酸序列，(iv)所述3’UTR包含SEQ ID NO:22、67、68或69的核酸序列，和(v)所述3’ITR包含SEQ ID NO:9或53的核酸序列。
224.权利要求220‑223中任何一项的病毒载体构建体，其中(i)所述5’ITR包含SEQ ID NO:8或52的核酸序列，(ii)所述5’UTR包含SEQ ID NO:20、21或66中任何一种的核酸，(iii)所述内耳支持细胞选择性启动子包含10‑16、28、40、57、90‑99中任何一种的核酸序列，所述最小GJB2启动子包含SEQ ID NO:86的序列，(v)所述3’UTR包含SEQ ID NO:22、67、68或69的核酸序列，和(v)所述3’ITR包含SEQ ID NO:9或53的核酸序列。
225.权利要求150‑224中任何一项的病毒载体构建体，其中所述3’UTR和/或所述5’UTR包含所述miRTS。
226.前述权利要求中任何一项的病毒载体构建体，其中所述构建体包含SEQ ID NO:7、
17、38、45‑51、54、61、82‑84、87‑88和100‑107中任何一种的核酸序列。
227.前述权利要求中任何一项的病毒载体构建体，其中所述构建体在内耳支持细胞中选择性地表达。
228.前述权利要求中任何一项的病毒载体构建体，其中所述构建体包含SEQ ID NO:7的核苷酸12‑4557、SEQ ID NO:17的核苷酸12‑4338、SEQ ID NO:38的核苷酸12‑3976、SEQ ID NO:54的核苷酸12‑4754、SEQ ID NO:61的核苷酸12‑4429、SEQ ID NO:100的核苷酸12‑
4645、SEQ ID NO:101的核苷酸12‑4708、SEQ ID NO:102的核苷酸12‑4993、SEQ ID NO:103的核苷酸12‑4496、SEQ ID NO:104的核苷酸12‑4253、SEQ ID NO:105的核苷酸12‑4320、SEQ ID NO:106的核苷酸12‑4464或SEQ ID NO:107的核苷酸12‑4328。
229.前述权利要求中任何一项的病毒载体构建体，其中所述构建体为表达盒。
230.载体，其包含前述权利要求中任何一项的多核苷酸或构建体。
231.权利要求230的载体，其中所述载体为哺乳动物载体或病毒载体。
232.权利要求230或231的载体，其中所述载体为病毒载体。
233.权利要求232的载体，其中所述病毒载体选自腺相关病毒(AAV)、腺病毒或慢病毒载体。
234.权利要求233的载体，其中所述病毒载体为AAV载体。
235.AAV颗粒，其包含权利要求122‑235中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体。
236.权利要求235的AAV颗粒，其进一步包含AAV衣壳，其中所述AAV衣壳为或衍生于AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV‑rh8、AAV‑rh10、AAV‑rh39、AAV‑rh43或AAV Anc80衣壳。
237.权利要求236的AAV颗粒，其中所述AAV衣壳为AAV Anc80衣壳。
238.组合物，其包含权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒。
239.权利要求238的组合物，其中所述组合物为进一步包含药学上可接受的载剂的药用组合物。
240.权利要求238或239的组合物，其中所述药用组合物为合成的外淋巴溶液。
241.离体细胞，其包含权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒。
242.权利要求241的离体细胞，其中所述离体细胞为内耳细胞。
243.权利要求242的离体细胞，其中所述离体细胞为内耳支持细胞。
244.权利要求243的离体细胞，其中所述支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
245.方法，其包括用以下转导离体细胞：
c.权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体或者权利要求230‑234中任何一项的载体；和
d.一种或多种共同包含AAV Rep基因、AAV Cap基因、AAV VA基因、AAV E2a基因和AAV E4基因的辅助质粒。
246.权利要求245的方法，其中所述离体细胞为内耳细胞。
247.权利要求246的方法，其中所述离体细胞为内耳支持细胞。
248.权利要求247的方法，其中所述支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
249.在需要它的受试者的内耳支持细胞中表达所述治疗性多肽的方法，其包括给予所述受试者权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑
244中任何一项的离体细胞。
250.在内耳支持细胞中表达所述多肽的方法，其包括给予所述内耳支持细胞权利要求
122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑244中任何一项的离体细胞。
251.在需要它的受试者的内耳支持细胞中增加所述治疗性多肽表达的方法，其包括给予所述受试者权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求
241‑244中任何一项的离体细胞。
252.在内耳支持细胞中增加所述多肽表达的方法，其包括给予所述内耳支持细胞权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求
230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑244中任何一项的离体细胞。
253.权利要求249或251的方法，其中与所述多肽在非内耳支持细胞中的内源性表达相比较，所述治疗性多肽在非内耳支持细胞中的表达被减少、遏制或消除。
254.权利要求250或252的方法，其中与所述多肽在非内耳支持细胞中的内源性表达相比较，所述多肽在非内耳支持细胞中的表达被减少、遏制或消除。
255.权利要求252‑252的方法，其中所述多肽在所述内耳支持细胞中的表达相对于所述多肽在所述内耳支持细胞中的内源性表达增加。
256.减少所述治疗性多肽在非内耳支持细胞中的表达的方法，其包括给予所述受试者权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑244中任何一项的离体细胞。
257.减少所述多肽在非内耳支持细胞中的表达的方法，其包括给予所述受试者权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑
234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑244中任何一项的离体细胞。
258.权利要求256或257的方法，其中所述多肽在所述非内耳支持细胞中的表达相对于所述多肽在所述非内耳支持细胞中的内源性表达减少。
259.权利要求249‑258中任何一项的方法，其中所述内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)和OC90+细胞(OC90)。
260.在内耳细胞中减少与所述治疗性多肽表达相关的毒性的方法，其包括给予所述受试者权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑244中任何一项的离体细胞。
261.在内耳细胞中减少与所述多肽表达相关的毒性的方法，其包括给予所述受试者权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求
230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑244中任何一项的离体细胞。
262.权利要求260‑261的方法，其中所述内耳细胞选自内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞、内沟细胞或其任何组合。
263.在患有听力损失或处于其风险下的受试者中治疗听力损失的方法，其包括给予所述受试者权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑
244中任何一项的离体细胞。
264.权利要求260的方法，其中所述治疗性多肽在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞、内沟细胞或其任何组合中的表达被减少、遏制或消除。
265.权利要求261的方法，其中所述多肽在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞、内沟细胞或其任何组合中的表达被减少、遏制或消除。
266.权利要求260的方法，其中由所述治疗性多肽表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞、内沟细胞或其任何组合中被减少。
267.权利要求261的方法，其中由所述多肽表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞、内沟细胞或其任何组合中被减少。
268.权利要求249、251、256或260的方法，其中(i)所述治疗性多肽主要在内耳支持细胞中表达，(ii)所述治疗性多肽在内耳支持细胞中以比在内耳毛细胞中更高的水平选择性地表达，(iii)所述治疗性多肽不以足以在内耳毛细胞中引起毒性的水平表达，或(iv)或其任何组合。
269.权利要求250、252、257或261的方法，其中(i)所述多肽主要在内耳支持细胞中表达，(ii)所述多肽在内耳支持细胞中以比在内耳毛细胞中更高的水平选择性地表达，(iii)所述多肽不以足以在内耳毛细胞中引起毒性的水平表达，或(iv)或其任何组合。
270.权利要求250‑269的方法，其中所述内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)和OC90+细胞(OC90)。
271.权利要求250‑270中任何一项的方法，其中所述给予为对所述受试者的内耳。
272.权利要求271的方法，其中所述给予为对所述受试者的耳蜗。
273.权利要求271‑272的方法，其中所述给予为经由圆窗膜注射。
274.权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑
244中任何一项的离体细胞，用于在患有听力损失或处于其风险下的受试者中治疗听力损失的用途。
275.权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑
244中任何一项的离体细胞，在制造用于治疗听力损失的药物中的用途。
276.权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑
244中任何一项的离体细胞，其用作药物。
277.权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑
244中任何一项的离体细胞，其用于治疗听力损失。
278.试剂盒，其包含权利要求122‑229中任何一项的多核苷酸、构建体、构建体表达或病毒载体构建体，权利要求230‑234中任何一项的载体，或权利要求235‑237的AAV颗粒，或权利要求241‑244中任何一项的离体细胞。
279.权利要求278的试剂盒，其中所述多核苷酸、构建体、表达构建体、载体、AAV颗粒、组合物或离体细胞预被加载于装置中。
280.权利要求279的试剂盒，其中所述装置为微导管。
281.权利要求280的试剂盒，其中使所述微导管成形，以使得其可经由外耳道进入所述中耳腔并使所述微导管的末端与RWM接触。
282.权利要求278‑280中任何一项的试剂盒，其中所述微导管的远端包括至少一个直径在10‑1,000微米之间的微针。
283.权利要求278的试剂盒，其进一步包含装置。
284.权利要求283的试剂盒，其中所述装置为在图5‑8的任何一个中描述的装置。
285.权利要求283‑284中任何一项的试剂盒，其中所述装置包含含有弯曲部分和成角尖端的针。
286.先前权利要求中任何一项的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒、离体细胞、方法、用途或试剂盒，其中所述多核苷酸或启动子为细胞选择性启动子。
287.权利要求286的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒、离体细胞、方法、用途或试剂盒，其中所述细胞选择性启动子为主要在内耳的一种或多种支持细胞中具有活性的启动子。
说明书全文

用于治疗听力损失的基因疗法递送组合物和方法

[0001] 相关申请的交叉参考
[0002] 本申请要求2021年5月13日提交的美国临时申请号63/188,450、2021年9月30日提交的美国临时申请号63/251,025和2021年11月9日提交的美国临时申请号63/277,549的权
益，其特此通过参考以其全部结合。
[0003] 对以电子方式提交的序列表的参考
[0004] 与本申请一起提交的以ASCII文本文件电子提交的序列表的内容(名称：4833_008CP03_Seqlisting_ST25.TXT；大小：269,049字节；以及创建日期：2022年5月9日)，通过参考以其全部结合至本文中。
[0005] 背景
[0006] 听力损失可为传导性的(起因于耳道或中耳)、感觉神经性的(起因于内耳或听觉神经)或混合性的。大多数形式的非综合征性耳聋与由内耳结构损伤引起的永久性听力损
失(感觉神经性耳聋)相关联，尽管一些形式可能涉及中耳的变化(传导性听力损失)。绝大
多数人类感觉神经性听力损失为由耳蜗中柯蒂氏器(organ of Corti)的毛细胞异常(毛细
胞功不良)引起的。毛细胞可为在出生时异常，或者在个体的寿命期间受损(例如由于噪音
创伤或感染)。
[0007] 感觉神经性听力损失(SNHL)为最常见的先天性感觉损伤，伴随最常见的遗传原因为编码缝隙连接蛋白(connexin)26(Cx26)蛋白的间隙连接β2基因(GJB2)的突变。
[0008] 概述
[0009] 本公开的某些方面涉及启动子，例如细胞特异性启动子，其衍生于GDF6、PARM1、MMP15或VIM启动子的部分，并且能够在内耳支持细胞中指导编码序列(例如编码缝隙连接
蛋白26多肽或其功能片段)的转录。
[0010] 本公开的某些方面涉及包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列的多核苷酸。在一些方面，多核苷酸为启动子。
[0011] 本公开的某些方面涉及包含与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列的多核苷酸。
[0012] 在一些方面，多核苷酸包含与SEQ ID NO:90具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0013] 在一些方面，多核苷酸包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0014] 在一些方面，多核苷酸包含与SEQ ID NO:96具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0015] 在一些方面，多核苷酸包含与SEQ ID NO:99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0016] 在一些方面，多核苷酸能够指导缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列的转录。
[0017] 本公开的某些方面涉及包含本文公开的多核苷酸的构建体和包含一种/所述缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列的核酸序列。在一些方面，构建体为表达盒。
[0018] 在一些方面，构建体的多核苷酸为启动子并且可操作地连接于一种/所述编码序列。在一些方面，多核苷酸能够在内耳支持细胞中指导编码序列的转录。
[0019] 在一些方面，构建体的多肽为缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段。
[0020] 本公开的某些方面涉及包含含有多核苷酸的构建体的构建体。在一些方面，构建体进一步包含编码多肽的核酸序列。在一些方面，多核苷酸可操作地连接于编码多肽的核
酸序列。在一些方面，多核苷酸在内耳支持细胞中促进核酸表达。
[0021] 本公开的某些方面涉及包含可操作地连接于启动子的编码治疗性多肽的多核苷酸的构建体，所述启动子在内耳支持细胞中表达多核苷酸。在一些方面，多核苷酸编码治疗性多肽或报告多肽。在一些方面，启动子在内耳支持细胞中选择性地表达多核苷酸。
[0022] 本公开的某些方面涉及包含可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸的构建体，所述启动子在内耳支持细胞中表达多核苷酸，其中启动子与多核苷酸异源。
[0023] 本公开的某些方面涉及包含可操作地连接于启动子的缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列的表达构建体，其中启动子包含与SEQ ID NO:40、90、96或99具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，其中启动子能够指导编码序列的转录。
[0024] 在一些方面，表达构建体的启动子包含与SEQ ID NO:90具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0025] 在一些方面，表达构建体的启动子包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。
[0026] 在一些方面，表达构建体的启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0027] 在一些方面，表达构建体的启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0028] 在一些方面，表达构建体进一步包含可操作地连接于编码序列的第二启动子，其中第二启动子与编码序列异源或同源。
[0029] 在一些方面，表达构建体的启动子能够在内耳支持细胞中指导编码序列的转录。
[0030] 在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器( organ)细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮
嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[0031] 在一些方面，本文公开的多核苷酸、构建体或表达构建体进一步包含最小GJB2启动子，其可操作地连接于缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列。
[0032] 在一些方面，本文公开的构建体或表达构建体包含与SEQ ID NO:117‑126中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的GJB2核酸序列。
[0033] 本公开的某些方面涉及包含可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列的表达构建体，其中多核苷酸
在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子与缝隙连接蛋白26多肽
或其功能片段的编码序列异源。
[0034] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含与SEQ ID NO:40、90、96或99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0035] 在一些方面，启动子包含与SEQ ID NO:90具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0036] 在一些方面，启动子包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0037] 在一些方面，启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0038] 在一些方面，启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0039] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含与选自SEQ ID NO:90、40、96或99中一种或多种的序列具有至少95％同一性的核酸序列。
[0040] 在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和
OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[0041] 在一些方面，本公开的多核苷酸、构建体或表达构建体包含最小GJB2启动子，其包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0042] 在一些方面，表达构建体包含与SEQ ID NO:117‑126中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的GJB2核酸序列。
[0043] 本公开的某些方面涉及包含以下的病毒载体构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于能够在内耳支持细胞中指导编码顺序转录的启动子的缝隙连接蛋白
26多肽或其功能片段的编码序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与编码序列异源。在一些方面，病毒构建体启动子包含与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0044] 在一些方面，病毒构建体启动子包含与SEQ ID NO:90具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0045] 在一些方面，病毒构建体启动子包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0046] 在一些方面，病毒构建体启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0047] 在一些方面，病毒构建体启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0048] 在一些方面，病毒载体构建体进一步包含5’非翻译区(UTR)。
[0049] 在一些方面，病毒载体构建体进一步包含3’非翻译区(UTR)。
[0050] 在一些方面，病毒载体构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR。
[0051] 在一些方面，病毒载体构建体包含与SEQ ID NO:117‑126中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0052] 在一些方面，病毒载体构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列，和(iii)3’ITR，其中内耳支持细胞选择性启动子与编码序列异源。
[0053] 在一些方面，病毒载体构建体内耳支持细胞选择性启动子包含一种与SEQ ID NO:40、90、96或99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0054] 在一些方面，病毒载体构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列，(iv)3’UTR和(v)3’ITR。
[0055] 在一些方面，病毒载体构建体包含与SEQ ID NO:117‑126中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的GJB2核酸序列。
[0056] 在一些方面，病毒载体构建体包含最小GJB2启动子，其包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0057] 在一些方面，启动子能够在选自以下中一种或多种的内耳支持细胞中表达缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的编码序列：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞
(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维
细胞和其他侧壁细胞。
[0058] 在一些方面，5’UTR包含与SEQ ID NO:20、21或66中任何一种的序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％同一性的核酸序列。
[0059] 在一些方面，3’UTR包含与SEQ ID NO:22、67、68或69中任何一种的序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％同一性的核酸序列。
[0060] 在一些方面，本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体进一步包含多聚A尾。在一些方面，多聚A尾为牛生长激素、小鼠‑β‑珠蛋白、小鼠‑α‑珠蛋白、人类胶原蛋白、多瘤病毒、单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV TK)基因、IgG重链基因、人类生长激素或SV40晚期和早期多聚(A)。在一些方面，多聚A尾为牛生长激素多聚A。
[0061] 在一些方面，本文公开的病毒载体构建体进一步包含5’和3’反向末端重复(ITR)。在一些方面，5’ITR和3’ITR侧接于启动子和编码序列。在一些方面，5’ITR和3’ITR为衍生于选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11和AAV Anc80 ITR的血清型的AAV ITR。在一些方面，AAV ITR衍生于血清型AAV2。
[0062] 在一些方面，5’AAV ITR包含SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:52的核酸序列。
[0063] 在一些方面，3’AAV ITR包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:53的核酸序列。
[0064] 在一些方面，本文公开的病毒载体构建体包含：a)5’ITR包含根据SEQ ID NO:8的核酸序列和3’ITR包含根据SEQ ID NO:9的核酸序列；和/或b)5’ITR包含根据SEQ ID NO:52的核酸序列和3’ITR包含根据SEQ ID NO:53的核酸序列。
[0065] 在一些方面，病毒载体包含：(i)5’ITR包含SEQ ID NO:8或52的核酸序列，(ii)5’UTR包含SEQ ID NO:20、21或66中任何一种的核酸，(iii)启动子包含SEQ ID NO:10‑16、28、40、57、90‑99中任何一种的核酸序列，(iv)3’UTR包含SEQ ID NO:22、67、68或69的核酸序列，和(v)3’ITR包含SEQ ID NO:9或53的核酸序列。
[0066] 在一些方面，病毒载体包含：(i)5’ITR包含SEQ ID NO:8或52的核酸序列，(ii)5’UTR包含SEQ ID NO:20、21或66中任何一种的核酸，(iii)内耳支持细胞选择性启动子包含SEQ ID NO:10‑16、28、40、57、90‑99中任何一种的核酸序列，最小GJB2启动子包含SEQ ID NO:86的序列，(v)3’UTR包含SEQ ID NO:22、67、68或69的核酸序列，和(vi)3’ITR包含SEQ ID NO:9或53的核酸序列。
[0067] 在一些方面，本文公开的构建体、表达构建体或病毒载体构建体包含SEQ ID NO:7、17、38、45‑51、54、61、82‑84、87‑88和100‑107中任何一种的核酸序列。
[0068] 在一些方面，本文公开的构建体、表达构建体或病毒载体构建体在内耳支持细胞中选择性地表达。
[0069] 在一些方面，本文公开的构建体、表达构建体或病毒载体构建体包含SEQ ID NO:7的核苷酸12‑4557、SEQ ID NO:17的核苷酸12‑4338、SEQ ID NO:38的核苷酸12‑3976、SEQ ID NO:54的核苷酸12‑4754、SEQ ID NO:61的核苷酸12‑4429、SEQ ID NO:100的核苷酸12‑
4645、SEQ ID NO:101的核苷酸12‑4708、SEQ ID NO:102的核苷酸12‑4993、SEQ ID NO:103的核苷酸12‑4496、SEQ ID NO:104的核苷酸12‑4253、SEQ ID NO:105的核苷酸12‑4320、SEQ ID NO:106的核苷酸12‑4464、SEQ ID NO:107的核苷酸12‑4328。
[0070] 本公开的某些方面涉及包含本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体或病毒载体构建体的病毒载体或AAV颗粒。在一些方面，病毒载体选自腺相关病毒(AAV)、腺病毒或慢病毒载体。在一些方面，病毒载体为一种AAV载体。
[0071] 在一些方面，病毒载体或AAV颗粒包含AAV衣壳，其中AAV衣壳为或衍生于AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV‑rh8、AAV‑rh10、AAV‑rh39、AAV‑rh43或AAV Anc80血清型衣壳。在一些方面，AAV载体或AAV颗粒包含其为AAV Anc80衣壳的AAV衣
壳。
[0072] 本公开的某些方面涉及包含本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体或AAV颗粒的组合物。在一些方面，组合物为进一步包含药学上可接受的载剂的药用组合物。在一些方面，药用组合物为合成的外淋巴溶液。
[0073] 本公开的某些方面涉及包含本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体或AAV颗粒的离体细胞。
[0074] 在一些方面，离体细胞为内耳细胞。在一些方面，离体细胞为内耳支持细胞。在一些方面，支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、
成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[0075] 本公开的某些方面涉及包括用以下转导离体细胞的方法：a.本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体或AAV颗粒；和b.共同包含AAV Rep基因、AAV Cap基因、AAV VA基因、AAV E2a基因和AAV E4基因的一种或多种辅助质粒。
[0076] 本公开的某些方面涉及在内耳支持细胞中表达缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的方法，包括给予本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞。
[0077] 本公开的某些方面涉及在内耳支持细胞中增加缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段的表达的方法，包括给予受试者本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞。
[0078] 在一些方面，缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段在内耳支持细胞中的表达相对于多肽在内耳支持细胞中的内源性表达增加。
[0079] 本公开的某些方面涉及在患有听力损失或处于其风险下的受试者中治疗听力损失的方法，包括给予受试者本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞。
[0080] 在一些方面，(i)缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段主要在内耳支持细胞中表达，(ii)缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段在内耳支持细胞中以比在内耳毛细胞中更高的水
平选择性地表达，(iii)缝隙连接蛋白26多肽或其功能片段以不足以在内耳毛细胞中引起
毒性的水平表达，或(iv)或其任何组合。
[0081] 在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)和OC90+细胞(OC90)。
[0082] 在一些方面，给予为对受试者的内耳。
[0083] 在一些方面，给予为对受试者的耳蜗。
[0084] 在一些方面，给予为经由圆窗膜注射。
[0085] 某些方面涉及本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞用于在患有听力损失或处于其风险下的受试者中治疗听力损失的用途。
[0086] 某些方面涉及本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞在制造用于治疗听力损失的药物中的用途。
[0087] 在一些方面，本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞用作药物。
[0088] 在一些方面，本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞用于治疗听力损失。
[0089] 在一些方面，构建体、载体、AAV颗粒、组合物或离体细胞被预加载于用于给予的装置中。在一些方面，装置为微导管。在一些方面，使微导管成形，以使得其可经由外耳道进入中耳腔并使微导管的末端与RWM接触。在一些方面，微导管的远端包括至少一个直径在10‑1,000微米之间的微针。在一些方面，试剂盒进一步包含装置。在一些方面，装置为在图5‑8中的任何一个中描述的装置。在一些方面，装置包含含有弯曲部分和成角尖端的针。
[0090] 某些方面涉及包含本文公开的多核苷酸、构建体、表达构建体、病毒载体构建体、病毒载体、AAV颗粒或离体细胞的试剂盒。在一些方面，试剂盒进一步包含本文公开的装置。
[0091] 本公开的某些方面涉及包含可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸的构建体，其中启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57、90‑99中的任何一种具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，启动子与多核苷酸异源。
[0092] 本公开的某些方面涉及包含编码多肽的多核苷酸、内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的构建体，其中多核苷酸可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最
小GJB2启动，使得多核苷酸在内耳支持细胞中表达，其中内耳支持细胞选择性启动子与多
核苷酸异源。
[0093] 本公开的某些方面涉及包含编码多肽的多核苷酸、内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的构建体，其中多核苷酸可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最
小GJB2启动子，其中内耳支持细胞选择性启动包含与SEQ ID NO:16、28、40、57、90‑99中的任何一种具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子与多核苷酸异源。在一些方面，最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0094] 本公开的某些方面涉及包含以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的编码多肽的多核苷酸，和(iii)3’
ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
[0095] 本公开的某些方面涉及包含以下的构建体，：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体进一步包含最小GJB2启动子。在一些方面，最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0096] 在一些方面，启动子选自一种或多种GJB6启动子、GDF6启动子、IGFBP2启动子、RBP7启动子、PARM1启动子、GFAP启动子、BACE2启动子、DBI2启动子、FABP3启动子、KLHL14启动子、MMP15启动子、SPARC启动子、TSPAN8启动子、VIM启动子、其衍生物或其片段。
[0097] 在一些方面，启动子为GJB2启动子或最小GJB2启动子。
[0098] 在一些方面，构建体包含两种或更多种启动子。在一些方面，第一启动子选自GJB6启动子、GDF6启动子、IGFBP2启动子、RBP7启动子、PARM1启动子、GFAP启动子、BACE2启动子、DBI2启动子、FABP3启动子、KLHL14启动子、MMP15启动子、SPARC启动子、TSPAN8启动子、VIM启动子或其任何组合。在一些方面，第二启动子选自GJB2启动子或最小GJB2启动子。
[0099] 本公开的某些方面涉及包含以下的构建体，：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽的多核苷酸，其中多核苷酸在内耳支持细胞中表达，和(iii)3’ITR，其中内耳支持细胞选择性启动子与多核苷酸异源。
[0100] 本公开的某些方面涉及包含以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽的多核苷酸，和
(iii)3’ITR，其中内耳支持细胞选择性启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的核酸序列。
[0101] 在一些方面，内耳支持细胞包括但不限于内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、
成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[0102] 在一些方面，启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57、90‑99中的任何一种具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0103] 在一些方面，构建体包含用于在内耳细胞中表达微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)。在一些方面，微小RNA在内耳毛细胞中表达。在一些方面，微小RNA为miR‑194、miR‑
140、miR‑18a、miR‑99a、miR‑30b、miR‑15a、miR182、miR‑183中的一种或多种或其任何组合。
[0104] 本公开的某些方面涉及包含可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸的构建体，其中构建体包含用于在内耳细胞中表达微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)。
[0105] 在一些方面，多核苷酸编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)或报告多肽。
[0106] 在一些方面，微小RNA在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或内沟细胞中的一种或多种中表达。
[0107] 在一些方面，微小RNA在内耳毛细胞中表达。
[0108] 在一些方面，微小RNA为miR‑194、miR‑140、miR‑18a、miR‑99a、miR‑30b、miR‑15a、miR182或miR‑183中的一种或多种。
[0109] 在一些方面，构建体包含5’和3’反向末端重复(ITR)。在一些方面，构建体包含5’非翻译区(UTR)。在一些方面，构建体包含3’非翻译区(UTR)。
[0110] 本公开的某些方面涉及包含本文公开的构建体的载体、病毒颗粒(例如AAV)、离体细胞和组合物。
[0111] 本公开的某些方面涉及包含本文公开的构建体的腺相关病毒(AAV)颗粒。
[0112] 某些方面涉及包含含有以下的构建体的腺相关病毒(AAV)颗粒：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的编码多肽的多
核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体进一步包含最小GJB2启动子。在一些方面，最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0113] 某些方面涉及包含含有以下的构建体的腺相关病毒(AAV)颗粒：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的编码多肽的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
[0114] 本公开的某些方面涉及包含含有以下的构建体的腺相关病毒(AAV)颗粒：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽的多核苷酸，其中多核苷酸在内耳支持细胞中表达，(iv)
3’UTR，和(v)3’ITR，其中内耳支持细胞选择性启动子与多核苷酸异源。
[0115] 本公开的某些方面涉及包含含有以下的构建体的腺相关病毒(AAV)颗粒：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的核酸序列。
[0116] 包含含有以下的构建体的某些腺相关病毒(AAV)颗粒：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸，(iv)用于在内耳细胞中表达微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)3’ITR。
[0117] 本公开的某些方面涉及包含含有以下的构建体的腺相关病毒(AAV)颗粒：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中内耳支持细胞选择性启动子包含一种与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0118] 包含含有以下的构建体的某些腺相关病毒(AAV)颗粒：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽的多核苷酸，(iv)用于在内耳细胞中表达微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)3’ITR。
[0119] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子选自一种或多种GJB6启动子、GDF6启动子、IGFBP2启动子、RBP7启动子、PARM1启动子、GFAP启动子、BACE2启动子、DBI2启动子、FABP3启动子、KLHL14启动子、MMP15启动子、SPARC启动子、TSPAN8启动子、VIM启动子、其衍生物或其片段。
[0120] 在一些方面，最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0121] 本公开的某些方面涉及使用本文公开的构建体、载体、病毒颗粒(例如AAV)、离体细胞和组合物用于在内耳细胞(例如支持细胞)中表达多肽的方法。
[0122] 本公开的某些方面涉及使用本文公开的构建体、载体、病毒颗粒(例如AAV)、离体细胞和组合物用于增加多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)在内耳细胞(例如支
持细胞)中的表达的方法。在一些方面，增加表达为相对于相应的内源性多肽在内耳细胞
(例如支持细胞)中的表达。
[0123] 本公开的某些方面涉及使用本文公开的构建体、载体、病毒颗粒(例如AAV)、离体细胞和组合物用于减少多肽(例如治疗性多肽)在非内耳支持细胞(例如内耳毛细胞)中的
表达的方法。在一些方面，减少表达为相对于相应的内源性多肽在非内耳细胞支持细胞(例如内耳毛细胞)中的表达。
[0124] 本公开的某些方面涉及使用本文公开的构建体、载体、病毒颗粒(例如AAV)、离体细胞和组合物用于在内耳细胞中减少与多肽(例如治疗性多肽)表达相关的毒性。
[0125] 本公开的某些方面涉及使用本文公开的构建体、载体、病毒颗粒(例如AAV)、离体细胞和组合物用于在患有听力损失或处于其风险下的受试者中治疗听力损失的方法。
[0126] 附图简述
[0127] 图1A‑1B小图(1A)描绘简化的内源性AAV基因组；小图(1B)描绘能够表达治疗性多肽(例如GJB2基因)的简化的重组AAV(rAAV)构建体。
[0128] 图2A‑2H描绘包含治疗性多肽的备选示例性rAAV构建体。图2A描绘包含5’ITR、CAG启动子、编码治疗性多肽的核酸(hGJB2基因)、bGH多聚A和3’ITR的示例性rAAV构建体。图2B描绘包含5’ITR、CAG启动子、编码治疗性多肽的核酸(hGJB2基因)、3’UTR、bGH多聚A和3’ITR的示例性rAAV构建体。图2C描绘包含5’ITR、CAG启动子、5’UTR、编码治疗性多肽的核酸(hGJB2基因)、FLAG标签、3’UTR、bGH多聚A和3’ITR的示例性rAAV构建体。图2D描绘包含5’ITR、smCBA启动子、5’UTR、编码治疗性多肽的核酸(hGJB2基因)、FLAG标签、3’UTR、bGH多聚A和3’ITR的示例性rAAV构建体。图2E描绘包含5’ITR、包含CMV启动子和hGJB2启动子的启动子、5’UTR、编码hGJB2基因的核酸、FLAG标签、3’UTR、bGH多聚A和3’ITR的示例性rAAV构建体。图2F描绘包含5’ITR、CAG启动子、5’UTR、hGJB2启动子、FLAG标签、微小RNA调控靶位点、3’UTR、bGH多聚A和3’ITR的示例性rAAV构建体。图2G描绘包含5’ITR、包含内耳支持细胞选择性启动子和hGJB2最小启动子的启动子、编码治疗性多肽的核酸(hGJB2基因)、FLAG标签、
5’UTR、bGH多聚A和3’ITR的示例性rAAV构建体。图2H描绘包含5’ITR、CAG启动子、编码治疗性多肽的核酸(hGJB2基因)、FLAG标签、T2A元件、编码eGFP的核酸、bGH多聚A和3’ITR的示例性rAAV构建体。
[0129] 图3A‑3Q描绘在存在或不存在识别该位点的微小RNA的情况下，用具有微小RNA靶位点(miRTS)的构建体转染或转导的HEK293FT细胞中转基因的体外或离体表达。图3A为表
示包含感兴趣基因和miRTS的构建体的示意图。图3B为表示基于在不同内耳细胞类型中表
达的微小RNA的表达来选择miRTS的文氏图(Venn diagram)。图3C为显示用表达miRNA的质
粒(pITR.CAG.mScarlet.miRNA)和包含感兴趣基因和微小RNA靶位点的质粒
(pITR.CAG.GOI.miRTS)转染的细胞中GFP表达的图表。图3D为显示用包含GFP和微小RNA靶
位点的AAVAnc80载体(AAVAnc0‑CAG.GOI.miRTS)转导和用表达靶向miRTS的miRNA的质粒
(pITR.CAG.mScarlet.miRNA)转染的HEK293FT细胞中如通过流式细胞术测量的GFP表达的
图表。图3E为显示在用两种量中任一种的表达编码靶向miRTS的miRNA的质粒的质粒转染
(pITR.CAG.mScarlet.miRNA)后，在用表达具有微小RNA靶向位点感兴趣基因的AAVAnc80
(AAVAnc80‑CAG.GOI.miRTS)的转导的细胞中通过RT‑qPCR测量的感兴趣基因表达的图表。
图3F为显示在用两种量中任一种的表达靶向miRTS的miRNA的质粒
(pITR.CAG.mScarlet.miRNA)转染后，在用包含感兴趣基因和微小RNA靶向位点的AAVAnc80
(AAVAnc80‑CAG.GOI.miRTS)转导的细胞中感兴趣基因表达的蛋白蛋白印迹。图3G为显示从图3F中的蛋白印迹测定的蛋白水平量化的图表。图3H为由与用单独的感兴趣基因转导相比
较，感兴趣基因与微小RNA靶向位点的体外转导所致的基因表达的热图。图3I为显示样本之间差异基因表达的火山图。图3J显示感兴趣基因在未经处理的耳蜗外植体中(左小图)以及
在用编码FLAG标签化感兴趣基因的没有微小RNA靶位点的AAV转导之后(右小图)的表达。
FLAG标签的免疫染色显示为绿色。MYO7A的免疫染色被用于以红色标记毛细胞。白色箭头表示表达缝隙连接蛋白26‑FLAG的毛细胞。图3K显示用包含FLAG标签化感兴趣基因和用于在
毛细胞中表达的微小RNA的微小RNA靶向位点的AAVAnc80‑CAG‑GOI.miRTS1转导的耳蜗外植体。图3L显示用包含FLAG标签化感兴趣基因和用于在毛细胞中表达的微小RNA的微小RNA靶
向位点的AAVAnc80‑CAG‑GOI.miRTS1转导的耳蜗外植体。图3M显示用包含FLAG标签化感兴趣基因和由在毛细胞中表达的微小RNA识别的微小RNA靶向位点的AAVAnc80‑CAG‑
GOI.miRTS2转导的耳蜗外植体。图3N显示用包含FLAG标签化感兴趣基因和由在毛细胞中表
达的微小RNA识别的微小RNA靶向位点的AAVAnc80‑CAG‑GOI.miRTS3转导的耳蜗外植体。图
3O显示用包含FLAG标签化感兴趣基因和用于在毛细胞中表达的微小RNA的微小RNA靶向的
AAVAnc80‑CAG‑GOI.miRTS4转导的耳蜗外植体。图3P和3Q描绘GJB2蛋白在用
CAG.5UTR.hGJB2.FLAG.miRTS.3UTR(SEQ ID NO:87)、CAG.5UTR.hGJB2.FLAG.3UTR(SEQ ID 
NO:82)或CAG.5UTR.hGJB2.FLAG.GFP构建体转染的HEK293FT细胞中的体外表达。
CAG.5UTR.hGJB2.FLAG.miRTS.3UTR在3UTR中包含miR‑182和miR‑183的miRNA靶向位点
(miRTS)，以在存在调节性miR‑182和/或miR‑183的情况下允许外源性hGJB2敲低。为确认构建体的miRNA调控，用包含hGJB2的质粒转染HEK293FT细胞，并任选地用(+)或不用(‑)表达miR‑182和miR‑183的质粒共转染。转染后72h，收获细胞用于蛋白和RNA分析。图3P描绘使用蛋白印迹分析的示例性GJB2蛋白水平。图3Q描绘使用qPCR分析的示例性GJB2 mRNA水平。
[0130] 图4A‑4C描绘用示例性rAAVAnc80颗粒以P2转导的小鼠耳蜗外植体中的FLAG蛋白表达，所述颗粒包含由如前所述的CAG、CMVe‑GJB2p或smCBA启动子/增强子序列驱动的构建体，外植体在72h之后固定，FLAG的免疫染色被标注为绿色，毛细胞标志物Myo7a的免疫染色被标注为红色，并且核标志物DAPI被标注为蓝色。小图(4A)描绘用AAVAnc80‑
CAG.5UTR.hGJB2.3F.3UTR(SEQ ID NO:82)以5.8E9 vg/外植体转导的示例性外植体。小图
(4B)描绘用AAVAnc80‑smCBA.5UTR.hGJB2.3F.3UTR(SEQ ID NO:83)以1.4E10vg/外植体转
导的示例性外植体。小图(4C)描绘用AAVAnc80‑CMVeGJB2p.5UTR.hGJB2.3F.3UTR(SEQ ID 
NO:84)以1.8E10 vg/外植体转导的示例性外植体。
[0131] 图5说明根据本公开方面的用于将流体递送至内耳的装置的透视图。
[0132] 图6说明根据本公开方面的弯针子组件的侧视图。
[0133] 图7说明根据本公开方面的用于将流体递送至内耳的装置的透视图。
[0134] 图8说明根据本公开方面的耦合于装置远端的弯针子组件的透视图。
[0135] 图9A‑9O描绘野生型小鼠中缝隙连接蛋白26的体内表达。给予野生型小鼠(p20)包含CAG.hGJB2.FLAG.GFP(图2H中提供的示意图)的rAAVAnc80颗粒到耳蜗中(图9A)。给予之
后10天，检测支持细胞和内毛细胞中缝隙连接蛋白26的表达。通过鬼笔环肽对肌动蛋白丝
和毛细胞静纤毛束的免疫染色被标注为蓝色，GFP被标注为绿色，FLAG被标注为紫色，和内源性缝隙连接蛋白26被标注为红色。SC‑支持细胞；IHC‑内毛细胞；OHC‑外毛细胞。给予幼年小鼠包含以下的rAAVAnc80颗粒到耳蜗中：AAVAnc80‑CMVeGFAPp.mGJB2p.5UTR.hGJB2.FL
AG.3UTR(图9B)、AAVAnc80‑GDF6p.mGJB2p.5UTR.hGJB2.FLAG.3UTR(图9C和9I)(图2G中提供的示意图)、AAVAnc80‑IGFBP2p.mGJB2p.5UTR.hGJB2.FLAG.3UTR(图9D)(图2G中提供的示意图)、AAVAnc80‑PARM1p.mGJB2p.5UTR.hGJB2.FLAG.3UTR(图9E和9J)(图2G中提供的示意
图)、AAVAnc80‑GFAPp.mGJB2p.hGJB2(图9F)、AAVAnc80‑MMP15p.mGJB2p.hGJB2(图9G和9L)、AAVAnc80‑VIMp.mGJB2p‑hGJB2(图9H和9K)。(VIM在图9K中也被称为VIM1。)给予之后2周，检测到缝隙连接蛋白26的表达。通过鬼笔环肽对肌动蛋白丝和毛细胞静纤毛束进行的免疫染
色被标注为蓝色，FLAG被标注为绿色，和内源性缝隙连接蛋白26或Myo7a被标注为红色。图
9M描绘给予包含AAVAnc80.CMVe.GFAP.mGJB2p.hGJB2.FLAG的AAVAnc80颗粒的野生型小鼠
中缝隙连接蛋白26的体内表达。内源性缝隙连接蛋白26显示为白色，flag标签化缝隙连接
蛋白26显示为绿色，和毛细胞通过鬼笔环肽染色显示为蓝色。图9N‑9O)描绘给予包含AAVAnc80.CMVe.GDF6.mGJB2p.hGJB2.FLAG或AAVAnc80.CMVe.PARM1.mGJB2p.hGJB2.FLAG的
AAVAnc80颗粒的野生型小鼠中缝隙连接蛋白26的体内表达。Flag标签化缝隙连接蛋白26显
示为绿色，鬼笔环肽染色显示为蓝色，和Myo7a标记的毛细胞显示为红色。
[0136] 图10A‑10C描绘GJB2 mRNA的体外表达和来自包括支持细胞选择性启动子的构建体的缝隙连接蛋白26蛋白的检测。图10A显示用包含由GJB6、IGFBP2、RPB7、PARM1或GDF6启动子与最小GJB2启动子组合驱动的构建体的示例性rAAVAnc80颗粒转导的HEK293FT细胞中
的缝隙连接蛋白26‑FLAG蛋白水平(“GJB2‑FLAG”)。GAPDH显示为加载对照。图10B显示用包含由GFAP和最小GJB2启动子、CMV增强子/GGFP、GJB2增强子/GJB2、CMV增强子/GJB2或CAG启动子驱动的构建体的rAAVAnc80颗粒转导的HEK293FT细胞中的GJB2 mRNA水平。图10C显示
用包含由FABP3、KLHL14、DBI2、TSPAN8、MMP15、SPARC或VIM启动子与最小GJB2启动子组合驱动的构建体的质粒转染的HEK293FT细胞中的缝隙连接蛋白26‑FLAG蛋白水平(GJB2‑FLAG)。
FLAG被用于区分内源性和转导的缝隙连接蛋白26表达之间的蛋白水平。GAPDH显示为加载
对照。
[0137] 图11显示用包含由CAG启动子、CMV增强子/GFAP启动子或GFAP和最小GJB2启动子驱动的构建体的rAAVAnc80颗粒转导的小鼠耳蜗外植体中的GJB2 mRNA水平。通过qPCR测定
GJB2 mRNA水平。
[0138] 定义
[0139] 本公开的范围由附于此的权利要求限定且不受本文所述某些方面的限制。本领域的技术人员在阅读本说明书后将意识到可等效于此类所描述的方面或者在权利要求范围
内的各种修改。一般而言，除非另外明确地指明，否则本文所用术语与其在本领域中被理解的含义一致。以下提供某些术语的明确定义；贯穿本说明书，这些和其他术语在特定情况下的含义对于本领域技术人员从上下文中将为显而易见的。
[0140] 权利要求中使用改变权利要求元素的序数术语比如“第一”、“第二”、“第三”等本身并不意指任何优先权、优先级或一个权利要求元素优于另一个的顺序或者执行方法的动作的时间顺序，而是仅被用作区分具有某一名称的一个权利要求元素与具有相同名称(若
不使用序数术语)的另一元素以区分权利要求元素的标记。
[0141] 除非另外明确地指明相反，否则如本文使用的冠词“一个/种(a)”和“一个/种(an)”应被理解为包括复数指涉物。除非另外指明相反或者另外从上下文显而易见，否则如果一组成员的一个、多于一个或全部存在于、用于或者另外关于给定产物或方法，则认为在该组的一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或说明书被满足。在一些方面，一组的恰好一个成员存在于、用于或者另外关于给定产物或方法。在一些方面，多于一个或全部组成员存在于、用于或者另外关于给定产物或方法。应当理解，本公开涵盖所有变化、组合和排列，其中来自所列权利要求中一个或多个的一个或多个限制、元素、条款、描述性术语等被引入到从属于相同基础权利要求的另一权利要求中(或根据相关性引入到任何其他权利要
求)，除非另外指明或除非为本领域普通技术人员显而易见的会出现矛盾或不一致。在元素作为列表呈现(例如以Markush组或类似形式)的情况下，应当理解也公开了元素的各子组，且可从该组中去除任何一个或多个元素。应当理解，一般而言，在一个或多个方面(aspects or aspects)被称为“包含”特定元素、特征等的情况下，某一个或多个方面(aspects or aspects)“由此类元素、特征等组成”或“基本上由这种元素、特征等组成”。为简便起见，那些方面并未在每种情况下均在本文中以如此多词语具体地阐述。也应当理解，任何实施方
案或方面均可明确地从权利要求中排除，而不管是否在说明书中陈述具体排除。
[0142] 贯穿本说明书，每当多核苷酸或多肽由字母序列(例如A、C、G和T，在多核苷酸的情况下分别表示腺苷、胞苷、鸟苷和胸苷)表示时，此类多核苷酸或多肽从左到右以5’到3’或N‑末端到C‑末端的顺序呈现。
[0143] 给予：如本文使用的，术语“给予”一般是指给予受试者或系统构建体或组合物以实现将物质递送至受试者或系统。在一些方面，物质为组合物或被包括在其中；在一些方面，物质通过组合物或其一种或多种组分的代谢产生。本领域的普通技术人员将意识到可
在适当情况下用于给予受试者(例如人类)的各种途径。例如，在一些方面，给予可为全身或局部的。在一些方面，全身给予可为静脉内的。在一些方面，给予可为局部的。局部给予可涉及经由例如通过圆窗膜的注射来递送至耳蜗外淋巴，或者经由通过内淋巴、外淋巴和/或耳道造口术后内淋巴的注射递送到鼓阶、中阶中。在一些方面，给予可仅涉及单次剂量。在一些方面，给予可涉及应用固定数量的剂量。在一些方面，给予可涉及为间歇性(例如时间上分开的多个剂量)和/或周期性(例如由共同时间段分开的单个剂量)给药的给药。在一些方
面，给予可涉及持续至少选定时间段的连续给药(例如灌注)。
[0144] 等位基因：如本文使用的，术语“等位基因”是指特定多态性基因组基因座的两个或更多个现有遗传变体之一。
[0145] 改善：如本文使用的，术语“改善”是指受试者状态的预防、减轻或缓解，或者受试者状态的改善。改善可包括但不要求完全康复或完全预防疾病、障碍或病症。
[0146] 氨基酸：在其最广泛意义上，如本文使用的，术语“氨基酸”是指可例如通过形成一个或多个肽键而掺入到多肽链中的任何化合物和/或物质。在一些方面，氨基酸具有通用结构，例如H2N‑C(H)(R)‑COOH。在一些方面，氨基酸为天然存在的氨基酸。在一些方面，氨基酸为非天然氨基酸；在一些方面，氨基酸为D‑氨基酸；在一些方面，氨基酸为L‑氨基酸。“标准氨基酸”是指天然存在的肽中常见的二十种标准L‑氨基酸中的任何一种。“非标准氨基酸”是指除标准氨基酸以外的任何氨基酸，而不管其为合成制备还是从天然来源获得的。在一些方面，与如上所示的通用结构相比较，包括在多肽中的羧基‑和/或氨基‑末端氨基酸的氨基酸可含有结构修饰。例如，在一些方面，与通用结构相比较，氨基酸可通过甲基化、酰胺化、乙酰化、聚乙二醇化、糖基化、磷酸化和/或取代(例如氨基、羧酸基、一个或多个质子和/或羟基的)来修饰。在一些方面，与含有其他方面相同的未修饰氨基酸的多肽相比较，此类修饰可例如改变含有修饰氨基酸的多肽的循环半衰期。在一些方面，与含有其他方面相同
的未修饰氨基酸的多肽相比较，此类修饰不显著改变含有修饰氨基酸的多肽的相关活性。
[0147] 大约或约：如本文使用的，术语“大约(approximately)”或“约(about)”可被应用于一个或多个感兴趣的值，包括与所述参考值相似的值。在一些方面，除非另外说明或者从上下文显而易见，否则术语“大约”或“约”是指落于所述参考值的±10％内(大于或小于)的值范围(除其中此类数字将超过可能值的100％之外)。例如，在一些方面，术语“大约”或“约”可涵盖在参考值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小内的值范围。
[0148] 相关(associated)：如本文使用的，如果一个事件或实体的存在、水平和/或形式与另一个相关联，则术语“相关”描述两个事件或实体为彼此“相关”。例如，如果特定实体(例如多肽、遗传特征、代谢物、微生物等)的存在、水平和/或形式与特定疾病、障碍或病症的发生率和/或易感性相关联(例如在相关群体中)，则该特定实体被认为与该特定疾病、障碍或病症相关。在一些方面，如果两个或更多个实体直接或间接地相互作用，使得它们处于和/或保持彼此物理接近，则它们彼此物理上“缔合(associated)”。在一些方面，彼此物理上缔合的两个或更多个实体彼此共价连接；在一些方面，彼此物理上缔合的两个或更多个
实体彼此不共价连接而是例如通过氢键、范德华相互作用、疏水相互作用、磁性及其组合非共价缔合。
[0149] 生物活性的：如本文使用的，术语“生物活性的”是指通过感兴趣的物质或实体实现的可观察到的生物效应或结果。例如，在一些方面，特异性结合相互作用为生物活性。在一些方面，生物途径或事件的调节(例如诱导、增强或抑制)为生物活性。在一些方面，生物活性的存在或程度通过检测由感兴趣的生物途径或事件产生的直接或间接产物来评价。
[0150] 细胞选择性启动子：如本文使用的，术语“细胞选择性启动子”是指主要在某些细胞类型中具有活性的启动子(例如特定基因的转录仅发生在表达与组织特异性启动子结合的转录调控和/或控制蛋白的细胞内)。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为主要在
内耳的一种或多种支持细胞中具有活性的启动子。
[0151] 特征部分：如本文使用的，术语“特征部分”在最广泛意义上是指其存在(或不存在)与物质的特定特征、属性或活性的存在(或不存在)相关联的物质的一部分。在一些方
面，物质的特征部分为存在于给定物质和共具特定特征、属性或活性的相关物质中，而不存在于不共具特定特征、属性或活性的那些中的部分。在一些方面，特征部分与完整物质共具至少一个功能特征。例如，在一些方面，蛋白或多肽的“特征部分”为含有连续氨基酸段或连续氨基酸段的集合(其一起为蛋白或多肽的特征)的部分。在一些方面，每个此类连续段通
常含有至少2、5、10、15、20、50或更多个氨基酸。一般而言，物质的特征部分(例如蛋白、抗体等的)为除以上指定的序列和/或结构同一性之外，与相关完整物质共具至少一个功能特征
的部分。在一些方面，特征部分可具有生物活性。
[0152] 特征序列：如本文使用的，术语“特征序列”为存在于多肽或核酸家族的所有成员中，并且因此可由本领域的普通技术人员用于定义家族成员的序列。
[0153] 特征序列元件：如本文使用的，短语“特征序列元件”是指存在于聚合物中(例如在多肽或核酸中)的表示该聚合物特征部分的序列元件。在一些方面，特征序列元件的存在与聚合物的特定活性或特性的存在或水平相关联。在一些方面，特征序列元件的存在(或不存在)将特定聚合物定义为此类聚合物的特定家族或组的成员(或不是其成员)。特征序列元件一般包含至少两个单体(例如氨基酸或核苷酸)。在一些方面，特征序列元件包括至少2、
3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50个或更多个单体(例如连续连接的单体)。在一些方面，特征序列元件包括至少由一个或多个间隔区隔开的第一和第二连续单体段，间隔区的长度可随共具序列元件的聚合物而变化或不变化。
[0154] 组合疗法：如本文使用的，术语“组合疗法”是指其中受试者同时暴露于两种或更多种治疗方案(例如两种或更多种治疗剂)的那些情况。在一些方面，可同时给予两种或更多种试剂。在一些方面，可依序给予两种或更多种试剂。在一些方面，可以重叠给药方案给予两种或更多种试剂。
[0155] 可比较的：如本文使用的，术语“可比较的”是指两种或更多种试剂、实体、情况、条件集合、受试者、群体等，它们可能彼此不相同但足够相似以允许在其间进行比较，使得本领域技术人员将意识到可基于观察到的差异或相似性合理地得出结论。在一些方面，试剂、实体、情况、条件集合、受试者、群体等的可比较集合的特征为多个基本上相同的特征和一个或少量不同特征。本领域的普通技术人员将理解，在上下文中，在任何给定情况下两种或更多种此类试剂、实体、情况、条件集合、受试者、群体等需要何种程度的同一性才能被视为可比较的。例如，本领域的普通技术人员将意识到，试剂、实体、情况、条件集合、受试者、群体等的集合当特征为足够数量和类型的基本上相同的特征以保证以下合理结论时为彼此可比较的：在环境、刺激、试剂、实体、情况、条件集合、受试者、群体等的不同集合下或对于其获得的结果或观察到现象的差异由改变的那些特征的变化引起或指示。
[0156] 构建体：如本文使用的，术语“构建体”是指包含能够携带至少一种异源多核苷酸的多核苷酸的组合物。在一些方面，构建体可为质粒、转座子、粘粒、人工染色体(例如人类人工染色体(HAC)、酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1衍生性人工染色体(PAC))或病毒载体、衣壳、病毒颗粒以及任何 质粒。构建体可例如包括足以用于
表达的顺式作用元件；其他用于表达的元件可由宿主灵长类动物细胞或在体外表达系统中
提供。构建体可包括当与适当控制元件缔合时能够复制的任何遗传元件(例如质粒、转座
子、粘粒、人工染色体或病毒载体、衣壳、病毒颗粒等)。因此，在一些方面，“构建体”可包括克隆和/或表达构建体和/或病毒构建体(例如腺相关病毒(AAV)构建体、腺病毒构建体、慢
病毒构建体或逆转录病毒构建体)。
[0157] 保守性的：如本文使用的，术语“保守性的”是指描述保守性氨基酸取代的情况，包括一个氨基酸残基被另一个带有具有类似化学性质(例如电荷或疏水性)的侧链R基团的氨基酸残基取代。一般而言，保守性氨基酸取代基本上不会改变蛋白的感兴趣的功能特性，例如受体与配体结合的能力。带有具有类似化学性质的侧链的氨基酸组的实例包括：脂族侧
链，比如甘氨酸(Gly，G)、丙氨酸(Ala，A)、缬氨酸(Val，V)、亮氨酸(Leu，L)和异亮氨酸(Ile，I)；脂族羟基侧链，比如丝氨酸(Ser，S)和苏氨酸(Thr，T)；含有酰胺的侧链，比如天冬酰胺(Asn，N)和谷氨酰胺(Gln，Q)；芳族侧链，比如苯丙氨酸(Phe，F)、酪氨酸(Tyr，Y)和色氨酸(Trp，W)；碱性侧链，比如赖氨酸(Lys，K)、精氨酸(Arg，R)和组氨酸(His，H)；酸性侧链，比如天冬氨酸(Asp，D)和谷氨酸(Glu，E)；和含硫侧链，比如半胱氨酸(Cys，C)和甲硫氨酸(Met，M)。保守性氨基酸取代组包括例如缬氨酸/亮氨酸/异亮氨酸(Val/Leu/Ile，V/L/I)、苯丙氨酸/酪氨酸(Phe/Tyr，F/Y)、赖氨酸/精氨酸(Lys/Arg，K/R)、丙氨酸/缬氨酸(Ala/Val，A/V)、谷氨酸/天冬氨酸(Glu/Asp，E/D)和天冬酰胺/谷氨酰胺(Asn/Gln，N/Q)。在一些方面，保守性氨基酸取代可为蛋白中的任何天然残基用丙氨酸的取代，如在例如丙氨酸扫描诱变中使
用的。在一些方面，进行了在Gonnet等人，1992,Science256:1443‑1445中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的保守性取代，所述文献通过参考以其全部结合至本文中。在一些
方面，取代为适度保守性取代，其中取代在PAM250对数似然矩阵中具有非负值。本领域的技术人员应当意识到，在来自不同物种的相同蛋白之间不保守的氨基酸变化(例如取代、添
加、缺失等)不太可能对蛋白功能具有影响，并且因此，应选择这些氨基酸用于突变。在来自不同物种的相同蛋白之间保守的氨基酸不应被变化(例如缺失、添加、取代等)，因为这些突变更可能导致蛋白功能的变化。示例性的保守性氨基酸取代如表1所示。
[0158] 表1.保守性氨基酸取代
[0159]
[0160]
[0161] 对照：如本文使用的，术语“对照”是指“对照”作为针对比较结果的标准的领域理解的含义。一般地，对照被用于通过分离变量以得出关于此类变量的结论来增强实验的完整性。在一些方面，对照为与测试反应或测定同时进行以提供比较的反应或测定。例如，在一个实验中，应用“测试”(即正在测试的变量)。在第二实验中，不应用“对照”(正在测试的变量)。在一些方面，对照为历史对照(例如先前进行的测试或测定，或先前已知的量或结
果)。在一些方面，对照为或包括印刷或以其他方式保存的记录。在一些方面，对照为阳性对照。在一些方面，对照为阴性对照。
[0162] 确定、测量、评估、评价、测定和分析：如本文使用的，术语“确定”、“测量”、“评估”、“评价”、“测定”和“分析”可互换地用于指涉任何形式的测量，并且包括确定元素是否存在。这些术语包括定量和/或定性确定两者。测定可为相对或绝对的。例如，在一些方面，“测定...的存在”可为确定某物存在的量和/或确定其存在还是不存在。
[0163] 内源性的：如本文使用的，关于物质或过程，是指源于系统比如生物体、组织或细胞内的天然存在的物质或过程。
[0164] 设计改造的：一般而言，如本文使用的，术语“设计改造的”是指已被人工操纵的方面。例如，如果细胞或生物体被操纵使得改变其遗传信息(例如已例如通过转化、接合、体细胞杂交、转染、转导或其他机制引入了先前不存在的新遗传物质，或者例如通过取代或缺失突变或通过接合方案改变或去除先前存在的遗传物质)，则其认为是“设计改造的”。如通常实践和由本领域技术人员理解的，即使对先前实体进行实际操纵，设计改造的多核苷酸或细胞的后代一般仍然被称为“设计改造的”。
[0165] 赋形剂：如本文使用的，术语“赋形剂”是指可包含在药用组合物中例如以提供或助于期望的一致性或稳定作用的无活性(例如非治疗性)剂。在一些方面，合适的药用赋形剂可包括例如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。
[0166] 表达：如本文使用的，术语核酸序列的“表达”是指从核酸序列产生任何基因产物(例如转录本，例如mRNA，例如多肽等)。在一些方面，基因产物可为转录本。在一些方面，基因产物可为多肽。在一些方面，核酸序列的表达涉及以下一项或多项：(1)从DNA序列产生RNA模板(例如通过转录)；(2)RNA转录本的加工(例如通过剪接、编辑、5’帽形成和/或3’末端形成)；(3)RNA翻译成多肽或蛋白；和/或(4)多肽或蛋白的翻译后修饰。
[0167] 侧接：如本文使用的，术语“侧接”是指相对于参考品末端的位置。更具体地讲，在提及参考核酸序列时，“侧接”是指具有参考核酸序列上游和下游的序列。在一些方面，侧接参考核酸序列具有位于邻近参考核酸5’末端的第一序列或一系列核苷酸残基以及位于邻近参考核酸3’末端的核第二序列或一系列苷酸残基。在一些方面，上游和/或下游侧翼序列紧邻参考的核酸序列。在一些方面，在上游和/或下游侧翼序列与参考的核酸序列之间存在居间核酸。
[0168] 功能性的：如本文使用的，术语“功能性的”描述某物以展现表征其的特性和/或活性的形式存在。例如，在一些方面，“功能性的”生物分子为呈展现表征其的特性和/或活性的形式的生物分子。在一些这种方面，功能性的生物分子相对于另一种非功能性生物分子的特征在于“非功能性的”形式不展现与“功能性的”分子相同或等效的特性和/或活性。生物分子可具有一种功能、两种功能(即双功能性的)或许多功能(即多功能性的)。
[0169] 基因：如本文使用的，术语“基因”是指染色体中编码基因产物(例如RNA产物，例如多肽产物)的DNA序列。在一些方面，基因包括编码序列(即编码特定产物的序列)。在一些方面，基因包括非编码序列。在一些特定方面，基因可包括编码(例如外显)和非编码(例如内含)序列两者。在一些方面，基因可包括例如可控制或影响基因表达的一个或多个方面(例如细胞类型特异性表达、诱导型表达等)的一个或多个调控序列(例如启动子、增强子等)
和/或内含子序列。如本文使用的，术语“基因”通常是指编码多肽或其片段的核酸的一部分；如本领域普通技术人员从上下文将显而易见的，该术语可任选地涵盖调控序列。该定义不预期排除将术语“基因”应用于非蛋白编码表达单元，而是预期澄清在大多数情况下，如该文件中使用的术语是指多肽编码核酸。在一些方面，基因可编码多肽，但那种多肽可能不为功能性的，例如，基因变体可编码相对于野生型基因不以相同方式发挥功能或根本不发
挥功能的多肽。在一些方面，基因可编码转录本，在一些方面后者的毒性可能超过阈值水
平。在一些方面，基因可编码多肽，但那种多肽可能不为功能性的和/或毒性可能超过阈值水平。
[0170] 听力损失：如本文使用的，术语“听力损失”可被用于指活生物体部分或完全无法听到。在一些方面，听力损失可为获得性的。在一些方面，听力损失可为遗传性的。在一些方面，听力损失可为基因的。在一些方面，听力损失可为疾病或创伤(例如身体创伤、用一种或多种导致听力损失的试剂治疗等)的结果。在一些方面，听力损失可为由一种或多种已知遗传原因和/或综合征所致。在一些方面，听力损失可具有未知病因。在一些方面，听力损失可能或可能无法通过使用助听器或其他治疗而减轻。
[0171] 异源的：如本文使用的，术语“异源的”是指衍生于不同来源的两种或更多种核酸或蛋白序列之间的关系。在一些方面，可操作地连接于编码治疗性蛋白的核酸的启动子可衍生于编码治疗性蛋白的基因以外的不同基因。
[0172] 同一性：如本文使用的，术语“同一性”是指聚合物分子之间，例如核酸分子(例如DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间的总体相关性。在一些方面，如果聚合物分子的序列至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％相同，则将其视为“基本上相同”。两个核酸或多肽序列的百分比同一性的计算例如可通过出于最佳比较的目的比对两个序列来进行(例如可在第一和第二序列中的
一个或两者中引入空位以用于最佳比对，并且出于比较的目的可忽略不相同的序列)。在一些方面，出于比较目的比对的序列长度为参考序列长度的至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或基本上100％；然后比较相应位置处的核苷酸。当第一序列中的位置由与第二序列中相应位置的相同残基(例如核苷酸或氨基
酸)占据时，那么两个分子(即第一和第二)在该位置处相同。两个序列之间的百分比同一性为由所比较的两个序列共具的相同位置的数目的函数，考虑空位的数目和每个空位的长
度，所述空位需要被引入以用于两个序列的最佳比对。两个序列之间序列的比较和百分比
同一性的确定可使用数学算法来完成。例如，两个核苷酸序列之间的百分比同一性可使用
Meyers和Miller(CABIOS,1989,4:11‑17，其通过参考以其全部结合至本文中)的算法来确
定，所述算法已经结合到ALIGN程序(2.0版)中。在一些方面，用ALIGN程序做出的核酸序列比较使用PAM120权重残基表、空位长度罚分为12和空位罚分为4。
[0173] 改善、增加、增强、抑制或减少：如本文使用的，术语“改善”、“增加”、“增强”、“抑制”、“减少”或其语法等效词指示相对于基线或其他参考测量的值。在一些方面，值与基线或其他参考测量具有统计学显著差异。在一些方面，适当的参考测量可为或包括在特定系统中(例如在单个个体中)，在不存在特定试剂或治疗(例如之前和/或之后)的情况下，或在存在适当可比较的参考试剂的情况下，在其他方面可比较的条件下的测量。在一些方面，适当的参考测量可为或包括在已知或预期以特定方式响应的可比较系统中，在存在相关试剂
或治疗的情况下的测量。在一些方面，适当参考为阴性参考；在一些方面，适当参考为阳性参考。
[0174] 敲低：如本文使用的，术语“敲低”是指一种或多种基因产物表达的降低。在一些方面，抑制性核酸实现敲低。在一些方面，本文所述的基因组编辑系统实现敲低。
[0175] 敲除：如本文使用的，术语“敲除”是指一种或多种基因产物表达的消融。在一些方面，本文所述的基因组编辑系统实现敲除。
[0176] 最小启动子：如本文使用的，术语“最小启动子”，除非另外指明，否则是指包含少于完全天然存在的启动子序列的启动子，其仍然能够指导编码序列(例如异源或同源编码序列)的转录。
[0177] 在一些方面，最小启动子可包含可指导编码序列的转录的完全天然存在的启动子的一个或多个区域(包括所有区域)。
[0178] 在一些方面，最小启动子可包含可指导编码序列的转录的完全天然存在的启动子的区域的一个或多个部分。
[0179] 微小RNA：如本文使用的，术语“微小RNA(microRNA)”或“miRNA”是指参与控制基因表达的一类生物分子。成熟miRNA一般为18‑25个核苷酸的非编码RNA，其调控包括与该miRNA互补的序列的mRNA表达。已知这些小RNA分子通过调控mRNA的稳定性和/或翻译来控
制基因表达。例如，miRNA与靶mRNA的3’UTR结合并遏制翻译。miRNA还可与靶mRNA结合，并通过RNAi途径介导基因沉默。miRNA还可通过引起染色质凝聚来调控基因表达。
[0180] 在一些方面，微小RNA的长度在约10个核苷酸‑约30个核苷酸之间(例如约10个核苷酸‑约28个核苷酸、约10个核苷酸‑约26个核苷酸、约10个核苷酸‑约24个核苷酸、约10个核苷酸‑约22个核苷酸、约10个核苷酸‑约20个核苷酸、约10个核苷酸‑约18个核苷酸、约10个核苷酸‑约16个核苷酸、约10个核苷酸‑约14个核苷酸、约10个核苷酸‑约12个核苷酸、约
12个核苷酸‑约30个核苷酸、约12个核苷酸‑约28个核苷酸、约12个核苷酸‑约26个核苷酸、约12个核苷酸‑约24个核苷酸、约12个核苷酸‑约22个核苷酸、约12个核苷酸‑约20个核苷酸、约12个核苷酸‑约18个核苷酸、约12个核苷酸‑约16个核苷酸、约12个核苷酸‑约14个核苷酸、约16个核苷酸‑约30个核苷酸、约16个核苷酸‑约28个核苷酸、约16个核苷酸‑约26个核苷酸、约16个核苷酸‑约24个核苷酸、约16个核苷酸‑约22个核苷酸、约16个核苷酸‑约20个核苷酸、约16个核苷酸‑约18个核苷酸、约18个核苷酸‑约30个核苷酸、约18个核苷酸‑约
28个核苷酸、约18个核苷酸‑约26个核苷酸、约18个核苷酸‑约24个核苷酸、约18个核苷酸‑约22个核苷酸、约18个核苷酸‑约20个核苷酸、约20个核苷酸‑约30个核苷酸、约20个核苷酸‑约28个核苷酸、约20个核苷酸‑约26个核苷酸、约20个核苷酸‑约24个核苷酸、约20个核苷酸‑约22个核苷酸、约22个核苷酸‑约30个核苷酸、约22个核苷酸‑约28个核苷酸、约22个核苷酸‑约26个核苷酸、约22个核苷酸‑约24个核苷酸、约24个核苷酸‑约30个核苷酸、约24个核苷酸‑约28个核苷酸、约24个核苷酸‑约26个核苷酸、约26个核苷酸‑约30个核苷酸、约
26个核苷酸‑约28个核苷酸、约28个核苷酸‑约30个核苷酸，或者11、12、13、14、15、16、17、
18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸)。
[0181] 微小RNA调控靶位点：如本文使用的，术语“微小RNA调控靶位点”或“miRTS”是指直接与mRNA转录本上的miRNA相互作用的序列。miRTS经常存在于mRNA的3’非翻译区(UTR)，但其也可存在于编码序列中，或在5’UTR中。miRTS不一定与miRNA完美互补，通常仅具有少数与miRNA互补的碱基，并且经常含有一个或多个错配。miRTS可为能够由miRNA充分结合而使miRTS可操作地连接的基因的翻译由miRNA沉默机制比如RISC阻遏的任何序列。在一些方面，将miRTS包括在包含多核苷酸(例如治疗性多核苷酸)的核酸构建体中可导致治疗性多
核苷酸在转录之后降解。
[0182] 核酸：如本文使用的，术语“核酸”在其最广泛意义上是指为或可掺入到寡核苷酸链中的任何化合物和/或物质。在一些方面，核酸为其为或可经由磷酸二酯键掺入到寡核苷酸链中的化合物和/或物质。如从上下文将显而易见的，在一些方面，“核酸”是指单个核酸残基(例如核苷酸和/或核苷)；在一些方面，“核酸”是指包含单个核酸残基的寡核苷酸链。在一些方面，“核酸”为或包含RNA；在一些方面，“核酸”为或包含DNA。在一些方面，核酸为、包含或由一个或多个天然核酸残基组成。在一些方面，核酸为、包含或由一个或多个核酸类似物组成。在一些方面，核酸类似物与核酸的不同之处在于其不利用磷酸二酯主链。备选或另外地，在一些方面，核酸具有一个或多个硫代磷酸酯和/或5’‑N‑亚磷酰胺键而非磷酸二酯键。在一些方面，核酸为、包含或由一个或多个天然核苷(例如腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)组成。在一些方面，核酸为、包含或由一个或多个核苷类似物(例如2‑氨基腺苷、2‑硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3‑甲基腺苷、5‑甲基胞苷、C‑5丙炔基‑胞苷、C‑5丙炔基‑尿苷、2‑氨基腺苷、C5‑溴尿苷、C5‑氟尿苷、C5‑碘尿苷、C5‑丙炔基‑尿苷、C5‑丙炔基‑胞苷、C5‑甲基胞苷、2‑氨基腺苷、7‑脱氮腺苷、7‑脱氮鸟苷、8‑氧代腺苷、8‑氧代鸟苷、0(6)‑甲基鸟嘌呤、2‑硫代胞苷、甲基化碱基、嵌入(intercalated)碱基及其组合)组成。在一些方面，与天然核酸中的那些相比较，核酸包含一个或多个修饰的糖(例如2’‑氟核糖、核糖、2’‑脱氧核糖、阿拉伯糖和己糖)。在一些方面，核酸具有编码功能性基因产物比如RNA或蛋白的核苷酸序列。在一些方面，核酸包括一个或多个内含子。在一些方面，核酸通过从天然来源分离、经基于互补模板(体内或体外)聚合的酶促合成、在重组细胞或系统中繁殖以及化学合成中的一种或多种制备。在一些方面，核酸为至少3、4、5、6、
7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、
140、150、160、170、180、190、20、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、
600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000或更多个残基长。在一些方面，核酸为部分或完全单链的；在一些方面，核酸为部分或完全双链的。在一些方面，核酸具有包含至少一个编码多肽或与编码多肽的序列互补的元件的核苷酸序列。在一些方
面，核酸具有酶活性。
[0183] 可操作地连接：如本文使用的，是指并置，其中所述的组分处于允许它们以其预期方式发挥功能的关系。“可操作地连接”于功能元件的控制元件以在与控制元件相容的条件下实现功能元件的表达和/或活性的方式缔合。在一些方面，“可操作地连接”的控制元件与感兴趣的编码元件为连续的(例如共价连接)；在一些方面，控制元件反式作用或以其他方式作用于感兴趣的功能元件。在一些方面，“可操作地连接”是指调控序列与异源核酸序列之间的功能性连接导致后者的表达。例如，当第一核酸序列与第二核酸序列置于功能关系
时，第一核酸序列与第二核酸序列可操作地连接。在一些方面，例如，功能性连接可包括转录控制。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则启动子可操作地连接于编码序
列。可操作地连接的DNA序列可彼此为连续的，并且例如在必需连接两个蛋白编码区的情况下处于同一阅读框中。
[0184] 药用组合物：如本文使用的，术语“药用组合物”是指其中活性剂与一种或多种药学上可接受的载剂一起配制的组合物。在一些方面，活性剂以适合于在治疗方案中给予的单位剂量存在，所述治疗方案在被给予相关群体时显示出实现预定治疗作用的统计学显著
概率。在一些方面，药用组合物可被专门配制成以固体或液体形式给予，包括适于例如给予的那些，例如可注射制剂，例如水性或非水性溶液剂或混悬剂，或被设计为给予耳道内的液体滴剂。在一些方面，药用组合物可被配制成经由在特定器官或区室中注射，例如直接注射到耳内，或全身性注射，例如静脉内注射。在一些方面，制剂可为或包括顿服剂(drench)(水性或非水性溶液剂或混悬剂)、片剂、大丸剂、粉剂、颗粒剂、糊剂、胶囊剂、粉剂等。在一些方面，活性剂可为或包含分离的、纯化的或纯的化合物。
[0185] 药学上可接受的：如本文使用的，例如可关于被用于配制如本文公开的药用组合物的载剂、稀释剂或赋形剂而使用的术语“药学上可接受”意指载剂、稀释剂或赋形剂与组合物的其他成分相容并且对其接受者无害。
[0186] 药学上可接受的载剂：如本文使用的，术语“药学上可接受的载剂”意指参与将主题化合物从一个器官或身体部分携带或转运至另一个器官或身体部分的药学上可接受的材料、组成或媒介物，比如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂或溶剂包封材料。在与制剂的其他成分相容并且对患者无害的意义上，每种载剂必须为“可接受的”。可充当药学上可接受的载剂的材料的一些实例包括：糖，比如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，比如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，比如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状黄蓍胶；
麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂，比如可可脂和栓剂蜡；油，比如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，比如丙二醇；多元醇，比如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，比如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，比如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；pH缓冲溶液；聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；以及药用制剂中采用的其他非毒性相容的物质。
[0187] 多腺苷酸化：如本文使用的，“多腺苷酸化”是指多腺苷酰部分或其修饰变体与信使RNA分子的共价连接。在真核生物体中，大多数信使RNA(mRNA)分子在3’末端进行多腺苷酸化。在一些方面，3’多聚(A)尾为通过酶多腺苷酸聚合酶的作用添加至前体mRNA(pre‑mRNA)中的腺嘌呤核苷酸长序列(例如50、60、70、100、200、500、1000、2000、3000、4000或
5000)。在高等真核生物中，多聚(A)尾可被添加到含有特定序列多腺苷酸化信号或“多聚
(A)序列”的转录本上。多聚(A)尾和与其结合的蛋白助于保护mRNA免受核酸外切酶的降解。
多腺苷酸化可影响转录终止、mRNA从细胞核输出以及翻译。一般地，多腺苷酸化在DNA转录成RNA之后立即在细胞核中发生，但另外也可稍后在细胞质中发生。转录已经终止之后，可通过与RNA聚合酶缔合的核酸内切酶复合物的作用裂解mRNA链。裂解位点可通过裂解位点
附近的碱基序列AAUAAA的存在来表征。在mRNA已经被裂解之后，可将腺苷残基添加至裂解
位点的游离3’末端。如本文使用的，“多聚(A)序列”为触发mRNA的核酸内切酶裂解以及一系列腺苷添加至裂解mRNA的3’末端的序列。
[0188] 多肽：如本文使用的，术语“多肽”是指一般通过肽键连接的残基(例如氨基酸)的任何聚合物链。在一些方面，多肽具有自然界中存在的氨基酸序列。在一些方面，多肽具有自然界中不存在的氨基酸序列。在一些方面，多肽具有通过人工作用设计和/或产生的设计改造的氨基酸序列。在一些方面，多肽可包含或由天然氨基酸、非天然氨基酸或两者组成。在一些方面，多肽可包括例如在多肽的N‑末端、在多肽的C‑末端或其任何组合处修饰或附接于一个或多个氨基酸侧链的一个或多个侧基或其他修饰。在一些方面，此类侧基或修饰
可为乙酰化、酰胺化、脂化、甲基化、聚乙二醇化等，包括其组合。在一些方面，多肽可含有L‑氨基酸、D‑氨基酸或两者，并且可含有本领域已知的各种氨基酸修饰或类似物中的任何一种。在一些方面，有用的修饰可为或包括例如末端乙酰化、酰胺化、甲基化等。在一些方面，蛋白可包含天然氨基酸、非天然氨基酸、合成氨基酸及其组合。术语“肽”通常被用于指长度小于约100个氨基酸、小于约50个氨基酸、小于20个氨基酸或小于10个氨基酸的多肽。在一些方面，多肽可为治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)。在一些方面，多肽可为支持细胞多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)。在一些方面，多肽可为报告多肽。
[0189] 多核苷酸：如本文使用的，术语“多核苷酸”是指核酸的任何聚合物链。在一些方面，多核苷酸为或包含RNA；在一些方面，多核苷酸为或包含DNA。在一些方面，多核苷酸为、包含或由一个或多个天然核酸残基组成。在一些方面，多核苷酸为、包含或由一个或多个核酸类似物组成。在一些方面，多核苷酸类似物与核酸的不同之处在于其不利用磷酸二酯主链。备选或另外地，在一些方面，多核苷酸具有一个或多个硫代磷酸酯和/或5’‑N‑亚磷酰胺键而非磷酸二酯键。在一些方面，多核苷酸为、包含或由一个或多个天然核苷(例如腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)组成。在一些方面，多核苷酸为、包含或由一个或多个核苷类似物(例如2‑氨基腺苷、2‑硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、
3‑甲基腺苷、5‑甲基胞苷、C‑5丙炔基‑胞苷、C‑5丙炔基‑尿苷、2‑氨基腺苷、C5‑溴尿苷、C5‑氟尿苷、C5‑碘尿苷、C5‑丙炔基‑尿苷、C5‑丙炔基‑胞苷、C5‑甲基胞苷、2‑氨基腺苷、7‑脱氮腺苷、7‑脱氮鸟苷、8‑氧代腺苷、8‑氧代鸟苷、0(6)‑甲基鸟嘌呤、2‑硫代胞苷、甲基化碱基、嵌入碱基及其组合)组成。在一些方面，与天然核酸中的那些相比较，多核苷酸包含一个或多个修饰的糖(例如2’‑氟核糖、核糖、2’‑脱氧核糖、阿拉伯糖和己糖)。在一些方面，多核苷酸具有编码功能性基因产物，比如RNA或蛋白的核苷酸序列。在一些方面，多核苷酸包括一个或多个内含子。在一些方面，多核苷酸通过从天然来源分离、经基于互补模板(体内或体外)聚合的酶促合成、在重组细胞或系统中繁殖以及化学合成中的一种或多种制备。在一些方面，多核苷酸为至少3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、
80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、20、225、250、275、300、325、
350、375、400、425、450、475、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、
4000、4500、5000或更多个残基长。在一些方面，多核苷酸为部分或完全单链的；在一些方面，多核苷酸为部分或完全双链的。在一些方面，多核苷酸具有包含至少一个编码多肽或为编码多肽的序列互补物的元件的核苷酸序列。在一些方面，多核苷酸具有酶活性。
[0190] 启动子：如本文使用的，术语“启动子”是指发挥功能以控制一种或多种编码序列(例如基因或转基因)，关于编码序列转录起始位点转录方向位于上游的转录的核酸序列，所述编码序列例如编码多肽(例如治疗性多肽)。在一些方面，通过DNA依赖性RNA聚合酶的
结合位点、转录起始位点或其他DNA序列(例如转录因子结合位点、阻遏物和/或激活蛋白结合位点或者直接或间接地作用以调控从启动子转录的量的其他核苷酸序列)的存在对启动
子在结构上进行鉴定。在一些方面，启动子可包含天然存在的启动子序列、其功能片段或者天然存在的启动子序列或其功能片段的突变体。
[0191] 蛋白：如本文使用的，术语“蛋白”是指一种多肽(即一串通过肽键彼此连接的至少两个氨基酸)。蛋白可包括除氨基酸以外的部分(例如可为糖蛋白、蛋白聚糖等)和/或可以其他方式加工或修饰。本领域的普通技术人员将意识到，“蛋白”可为如由细胞产生的完整多肽链(带有或不带有信号序列)，或者可为其特征部分。普通技术人员将意识到，蛋白有时可包括多于一条多肽链，例如通过一个或多个二硫键连接或这通过其他方式缔合。
[0192] 重组：如本文使用的，术语“重组”预期指涉通过重组方式设计、设计改造、制备、表达、创建、制造和/或分离的多肽，比如使用转染到宿主细胞中的重组表达构建体表达的多肽；从重组、组合人类多肽文库分离的多肽；从动物(例如小鼠、兔、绵羊、鱼等)分离的多肽，所述动物为转基因的或者已经另外操纵以表达编码和/或指导多肽或其一个或多个组分、部分、元件或结构域的表达的一个或多个基因或基因组分；和/或通过任何其他方式制备、表达、创建或分离的多肽，所述方式涉及将所选核酸序列元件彼此剪接或连接，化学合成所选序列元件，和/或以其他方式产生编码和/或指导多肽或其一个或多个组分、部分、元件或结构域的表达的核酸。在一些方面，此类所选序列元件中的一个或多个存在于自然界中。在一些方面，此类所选序列元件中的一个或多个为计算机设计的。在一些方面，一个或多个此类所选序列元件由已知序列元件的诱变(例如体内或体外)产生，所述已知序列元件例如来
自天然或合成来源，比如在感兴趣源生物体(例如人类、小鼠等的)的种系中。
[0193] 参考：如本文使用的，术语“参考”描述进行比较所相对于的标准或对照。例如，在一些方面，将感兴趣的试剂、动物、个体、群体、样品、序列或值与参考或对照试剂、动物、个体、群体、样品、序列或值进行比较。在一些方面，与感兴趣的测试或确定基本上同时测试和/或确定参考或对照。在一些方面，参考或对照为历史参考或对照，任选地在有形介质中体现。一般地，如本领域技术人员将理解的，在与处于评价下的那些可比较的条件或环境下确定或表征参考或对照。本领域的技术人员将意识到何时存在足够的相似性来证明与特定可能的参考或对照的依赖性和/或比较。在一些方面，参考为阴性对照参考；在一些方面，参考为阳性对照参考。在一些方面，参考可为本公开中公开的化合物、蛋白、多肽或多核苷酸。
[0194] 调控元件：如本文使用的，术语“调控元件”或“调控序列”是指以某种方式调控一个或多个特定基因的表达的DNA非编码区。在一些方面，此类基因与给定调控元件并列或“邻近”。在一些方面，此类基因位于距给定调控元件相当远处。在一些方面，调控元件损害或增强一个或多个基因的转录。在一些方面，调控元件可位于顺式于所调控基因处。在一些方面，调控元件可位于反式于所调控基因处。例如，在一些方面，调控序列是指调控可操作地连接于调控序列的基因产物表达的核酸序列。在一些此类方面，该序列可为调控基因产
物表达的增强子序列和其他调控元件。
[0195] 样品：如本文使用的，术语“样品”一般是指获自或源于感兴趣来源的材料的等分试样。在一些方面，感兴趣的来源为生物或环境来源。在一些方面，感兴趣的来源可为或包含细胞或生物体，比如微生物(例如病毒)、植物或动物(例如人类)。在一些方面，感兴趣的来源为或包含生物组织或流体。在一些方面，生物组织或流体可为或包含羊水、房水、腹水、胆汁、骨髓、血液、乳汁、脑脊髓液、耵聍、乳糜、食糜、射精液、内淋巴、渗出液、粪便、胃酸、胃液、淋巴、粘液、心包液、外淋巴、腹膜液、胸膜液、脓液、稀粘液、唾液、皮脂、精液、血清、包皮垢、痰液、滑液、汗液、泪液、尿液、阴道分泌物、玻璃状液、呕吐物和/或其组合或组分。在一些方面，生物流体可为或包含细胞内液、细胞外液、血管内液(血浆)、间质液、淋巴液和/或跨细胞液。在一些方面，生物流体可为或包含植物渗出液。在一些方面，生物组织或样品可例如通过抽吸、活检(例如细针或组织活检)、拭子(例如口腔、鼻腔、皮肤或阴道拭子)、刮擦、手术、清洗或灌洗(例如支气管肺泡、导管、鼻腔、眼部、口腔、子宫、阴道或者其他清洗或灌洗)而获得。在一些方面，生物样品为或包含从个体获得的细胞。在一些方面，样品为通过任何适当方式直接从感兴趣来源获得的“初级样品”。在一些方面，如从上下文将显而易见的，术语“样品”是指通过处理初级样品(例如通过去除一种或多种组分和/或通过向其添加一种或多种物质)而获得的制剂。例如，使用半渗透膜过滤。此类“经处理的样品”可包含例如从样品中提取或通过使初级样品经受一种或多种技术而获得的核酸或蛋白，所述技术比如核酸的扩增或逆转录、某些组分的分离和/或纯化等。
[0196] 选择性表达：如本文使用的，术语“选择性表达”或“选择性地表达”是指主要在某些特定细胞类型(例如内耳细胞，例如内耳支持细胞)中表达感兴趣的基因或多肽。
[0197] 受试者：如本文使用的，术语“受试者”是指生物体，一般为哺乳动物(例如人类，在一些方面包括产前人类形态)。在一些方面，受试者患有相关疾病、障碍或病症。在一些方面，受试者易患疾病、障碍或病症。在一些方面，受试者显示疾病、障碍或病症的一种或多种症状或特征。在一些方面，受试者不显示疾病、障碍或病症的任何症状或特征。在一些方面，受试者为具有特征性的对疾病、障碍或病症的易感性或风险的一种或多种特征的人。在一些方面，受试者为患者。在一些方面，受试者为被给予和/或已经被给予诊断和/或疗法的个体。
[0198] 基本上：如本文使用的，术语“基本上”是指展现感兴趣的特征或特性的全部或接近全部范围或程度的定性条件。本领域的普通技术人员将了解，生物和化学现象很少(如果有的话)完成和/或进行至完成或者实现或避免绝对结果。因此，术语“基本上”在本文中被用于捕捉许多生物和化学现象中固有的潜在完整度缺乏。
[0199] 支持细胞：如本文使用的，术语“支持细胞(support cell)”、“支持细胞(supporting cell)”、“内耳支持细胞(inner ear support cell)”或“内耳支持细胞
(inner ear supporting cell)”是指保持内耳结构和保持内耳感觉上皮环境的内耳细胞。
在一些方面，内耳支持细胞包括但不限于内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞
(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维
细胞和其他侧壁细胞。
[0200] 支持细胞多肽：如本文使用的，术语“支持细胞多肽(supporting  cell polypeptide)”或“支持细胞多肽(support cell polypeptide)”是指在内耳的支持细胞中内源性地表达的多肽。
[0201] 报告多肽：如本文使用的，术语“报告多肽”是指赋予生物体或细胞可检测或可选择表型的多肽。例如，可检测表型可为比色、荧光或发光的。报告多肽可包括介导发光反应的酶(luxA、luxB、luxAB、luc、ruc、nluc)、介导比色反应的酶(lacZ、HRP)、荧光蛋白(GFP、eGFP、YFP、RFP、CFP、BFP、mCherry、近红外荧光蛋白)、亲和肽(His‑标签、3X‑FLAG)和可选标记(ampC、tet(M)、CAT、erm)。报告多肽可被用作将核酸分子或外源序列(质粒)成功摄取到细胞中的标记。报告多肽也可被用于指示如本文所述的靶基因、靶核酸分子、靶多肽、靶细胞内分子或细胞的存在。
[0202] 治疗性多肽：如本文使用的，术语“治疗性多肽”是指具有可被用于预防和/或治疗疾病(例如听力损失)的生物活性的多肽。治疗性多肽的实例包括能够预防、抑制、稳定或逆转代谢、免疫调节、激素调节、酶促或膜相关结构功能方面的遗传或非遗传性遗传缺陷的那些。例如，治疗性蛋白可替代缺失或缺陷型细胞蛋白或酶，或补充产生缺陷型或低表达的细胞蛋白或酶。
[0203] 治疗：如本文使用的，术语“治疗(treatment)”(以及“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)是指部分或完全地减轻，改善，消除，逆转，缓解，抑制特定疾病、障碍和/或病症的一种或多种症状、特征和/或病因，延缓其发作，降低其严重性，和/或减少其发生率的疗法的任何给予。在一些方面，此类治疗可用于不展现相关疾病、障碍和/或病症的体征的受试者和/或仅展现疾病、障碍和/或病症的早期体征的受试者。备选或另外地，此类治疗可用于展现相关疾病、障碍和/或病症的一种或多种既定体征的受试者。在一些方面，治疗可用于已经被诊断为患有相关疾病、障碍和/或病症的受试者。在一些方面，治疗可属于已知具有在统计学上与给定疾病、障碍和/或病症的发展风险增加相关联的一个或多个易感因
素的受试者。
[0204] 变体：如本文使用的，术语“变体”是指某物(例如基因序列)的形式，其在某种程度上不同于另一种形式。为确定某物是否为变体，一般选择参考形式并且变体相对于那种参考形式为不同的。在一些方面，变体可具有与野生型序列相同或不同(例如增加或减少)的
活性或功能性水平。例如，在一些方面，如果变体例如为密码子优化的以抵抗例如通过抑制性核酸(例如miRNA)的降解，则其与野生型序列相比较可具有改善的功能性。此类变体在本文中被称为功能获得变体。在一些方面，变体具有导致负向结果的活性或功能性的降低或
消除或者活性变化(例如增加的电活性引起慢性去极化，导致细胞死亡)。此类变体在本文
中被称为功能丧失变体。在一些方面，功能获得变体为密码子优化的序列，其编码的转录本或多肽可比其相应的野生型(例如非密码子优化的)形式具有改善的特性(例如对降解的易
感性较低，例如对miRNA介导的降解的易感性较低)。在一些方面，功能丧失变体具有一个或多个变化，所述变化导致转录本或多肽在某种程度上相对于野生型转录本和/或多肽为缺
陷型的(例如功能下降、无功能)。
[0205] 详述
[0206] 在某些方面，本公开涉及用于选择性转基因表达，例如在内耳支持细胞中的优先表达的启动子。
[0207] 在一些方面，本公开涉及包含编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸的构建体和包含它的组合物，其被设计用于选择性转基因表达，例如在内耳支持细胞
中的优先表达和/或在其他内耳细胞比如毛细胞中的减少表达。
[0208] 在一些方面，本公开还涉及包含编码多肽的多核苷酸的构建体和包含它的组合物，其被设计用于选择性转基因表达，例如在内耳支持细胞中的优先表达和/或在其他内耳细胞比如毛细胞中的减少表达。
[0209] 在一些方面，本公开涉及包含编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸的构建体和包含它的组合物，其被设计用于在内耳支持细胞中的转基因表达，例如在
内耳支持细胞中的优先表达和/或在其他内耳细胞比如毛细胞中的减少表达。在一些方面，优先表达和/或减少表达为相对于相应的内源性表达。
[0210] 在一些方面，本公开涉及包含本文公开的启动子或构建体的AAV颗粒。
[0211] 在一些方面，本公开涉及使用本文公开的启动子、构建体和AAV颗粒用于治疗听力损失的方法。
[0212] 听力损失
[0213] 通常，耳朵可被描述为包括：外耳、中耳、内耳、听力(听觉)神经和听觉系统(其在声音从耳朵传播至脑时处理声音)。除检测声音之外，耳朵还助于保持平衡。因此，在一些方面，内耳的障碍可引起听力损失、耳鸣、眩晕、失衡或其组合。
[0214] 听力损失可为遗传因素、环境因素或者遗传与环境因素组合的结果。患有耳鸣的所有人中约一半还对某些声音频率和音量范围具有过度敏感性/降低的耐受性，被称为听
觉过敏(hyperacusis，也拼写为hyperacousis)，所述耳鸣即他们听觉系统中的幻觉噪音
(鸣响声、嗡嗡声、唧唧声(chirping)、哼鸣声或敲击声)。各种非综合征和综合征相关听力损失将为本领域技术人员已知的(例如DFNB1和DFNA3，并且分别为巴特‑庞弗里综合征
(Bart‑Pumphrey syndrome)、豪猪样鱼鳞病伴耳聋(hystrix‑like ichthyosis with 
deafness，HID)、掌跖角化病伴耳聋(palmoplantar keratoderma with deafness)、角膜
炎‑鱼鳞病‑耳聋(keratitis‑ichthyosis‑deafness，KID)综合征和沃温克尔综合征
(Vohwinkel syndrome))。听力损伤或丧失的环境原因可能包括例如某些药物、出生前后的特定感染和/或在延长时间段内暴露于嘈杂的噪音。在一些方面，听力损失可由影响耳朵特定部位的噪音、耳毒性药物、老年性耳聋、疾病、感染或癌症引起。在一些方面，缺血性损伤可能经由病理生理机制引起听力损失。在一些方面，内在异常，如在耳蜗解剖学或生理学中起重要作用的基因的先天性突变，或支持细胞和/或毛细胞中的遗传或解剖学变化，可能造成或助于听力损失。
[0215] 听力损失和/或耳聋为最常见的人类感觉缺失之一，并且可能因许多原因而发生。在一些方面，受试者可为出生伴有听力损失或没有听力，而其他人可能随着时间的推移慢
慢丧失听力。约3600万美国成人报告一定程度的听力损失，并且其中三分之一60岁以上的
人和一半85岁以上的人经历听力损失。每1,000名儿童中约有1.5名为出生伴有极重度听力
损失，并且每1,000名儿童中另外两至三名为出生伴有部分听力损失(Smith等人，2005,
Lancet 365:879‑890，其通过参考以其全部结合至本文中)。这些病例中多于一半归因于遗传基础(Di Domenico,等人，2011,J.Cell.Physiol.226:2494‑2499，其通过参考以其全部结合至本文中)。
[0216] 目前，用于听力损失的治疗由用于轻度至重度丧失的听力放大和用于重度至极重度丧失的耳蜗植入组成(Kral和O’Donoghue,2010,N.Engl.J.Med.363:1438‑1450，其通过参考以其全部结合至本文中)。该领域中的新近研究已经集中于耳蜗毛细胞再生，适用于最常见的听力损失形式，包括老年性耳聋、噪音损伤、感染和耳毒性。仍然需要可修复和/或减轻听力问题根源的有效治疗，比如基因疗法(参见例如WO 2018/039375、WO 2019/165292和PCT提交申请US2019/060328，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中)。
[0217] 在一些方面，非综合征性听力损失和/或耳聋与其他体征和症状无关。在一些方面，综合征性听力损失和/或耳聋与身体其他部位的异常一起发生。约70％‑80％的遗传性听力损失和/或耳聋病例为非综合征性的；其余病例经常由特定遗传性综合征引起。非综合征性耳聋和/或听力损失可具有不同遗传模式，并且可在任何年龄发生。非综合征性耳聋
和/或听力损失的类型通常根据其遗传模式命名。例如，常染色体显性形式被指定为DFNA，常染色体隐性形式为DFNB，并且X‑连锁形式为DFN。每种类型还按照首次描述的顺序编号。
例如，DFNA1为第一个描述的常染色体显性类型的非综合征性耳聋。75％‑80％之间的遗传所致听力损失和/或耳聋病例以常染色体隐性模式遗传，这意味着每个细胞中基因的两个
拷贝均具有突变。通常，患有常染色体隐性听力损失和/或耳聋的个体的父母双方均为突变基因一个拷贝的携带者，但不受这种形式听力损失的影响。另外20％‑25％的非综合征性听力损失和/或耳聋病例为常染色体显性的，这意味着每个细胞中改变基因的一个拷贝足以
导致耳聋和/或听力损失。患有常染色体显性耳聋和/或听力损失的人最常从为耳聋和/或
患有听力损失的父亲或母亲继承基因的改变拷贝。1‑2％之间的耳聋和/或听力损失病例显示X‑连锁遗传模式，这意味着造成病症的突变基因位于X染色体(两条性染色体之一)上。患有X‑连锁非综合征性听力损失和/或耳聋的男性倾向于比遗传相同基因突变拷贝的女性在
一生中更早发展为更严重的听力损失。X‑连锁遗传的特征在于父亲不能将X‑连锁性状传给其儿子。在美国，由线粒体DNA变化引起的线粒体非综合征性耳聋发生在少于1％的病例中。
改变的线粒体DNA从母亲传给其所有儿子和女儿。这种类型的耳聋并不遗传自父亲。综合征性和非综合征性耳聋和/或听力损失的原因是复杂的。研究人员已经鉴定出多于30种当改
变时与综合征性和/或非综合征性耳聋和/或听力损失相关的基因；然而，这些基因中的一
些尚未被完全表征。同一基因的不同突变可能与不同类型的耳聋和/或听力损失相关，并且一些基因与综合征性和非综合征性耳聋和/或听力损失两者均相关。
[0218] 在一些方面，耳聋和/或听力损失可为传导性的(起因于耳道或中耳)、感觉神经性的(起因于内耳或听觉神经)或混合性的。在一些方面，非综合征性耳聋和/或听力损失与由内耳结构损伤引起的永久性听力损失(感觉神经性耳聋)相关联。在一些方面，感觉神经性
听力损失可为由不良的毛细胞功能所致。在一些方面，感觉神经性听力损伤涉及第八脑神
经(前庭耳蜗神经)或脑的听觉部分。在一些此类方面，仅脑的听觉中枢受影响。在此种情况下，可能发生皮质性耳聋，其中可能听到正常阈值下的声音，但所感知的声音质量较差以致无法理解言语。由中耳变化引起的听力损失被称为传导性听力损失。非综合征性耳聋和/或听力损失的一些形式涉及内耳和中耳两者的变化，被称为混合性听力损失。在儿童学会说
话之前存在的听力损失和/或耳聋可被归类为学语前性或先天性的。在言语发育之后发生
的听力损失和/或耳聋可被归类为学语后性的。大多数与综合征性或非综合征性听力损失
相关的常染色体隐性基因座引起学语前性重度至极重度听力损失。
[0219] 如本领域技术人员已知的，毛细胞为脊椎动物耳朵的听觉和前庭系统两者的感受器。毛细胞检测环境中的运动，并且在哺乳动物中，毛细胞位于耳朵耳蜗内的柯蒂氏器中。
已知哺乳动物的耳朵具有两种类型的毛细胞——内毛细胞和外毛细胞。外毛细胞可通过毛
细胞束的机械运动或电驱动的毛细胞胞体运动来放大低水平的声音频率。内毛细胞将耳蜗
液的振动转换成听觉神经传递至脑的电信号。在一些方面，毛细胞可为在出生时异常，或者在个体的寿命期间受损。在一些方面，外毛细胞可能能够再生。在一些方面，内毛细胞在患病或损伤之后不能再生。在一些方面，感觉神经性听力损失为由毛细胞异常所致。
[0220] 如本领域技术人员已知的，毛细胞并不孤立存在，并且其功能受到可被统称为支持细胞的广泛种类的细胞支持。支持细胞可实现众多功能，并且包括许多细胞类型，包括但不限于内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[0221] 在一些方面，感觉神经性听力损失为由支持细胞异常所致。在一些方面，支持细胞可为在出生时异常，或者在个体的寿命期间受损。在一些方面，支持细胞可能能够再生。在一些方面，某些支持细胞可能不能再生。
[0222] 多肽
[0223] 本公开的某些方面涉及编码多肽的多核苷酸。多核苷酸可编码能够在细胞(例如内耳细胞)中表达的多肽。多核苷酸可编码全长多肽或其功能片段。
[0224] 由多核苷酸编码的示例性多肽包括但不限于跨膜蛋白、酶、生长因子、细胞因子、受体、受体配体、激素、膜蛋白、膜相关蛋白、抗原和抗体。
[0225] 编码多肽的示例性多核苷酸包括但不限于ATP酶(ATPase)质膜Ca2+转运2(ATP2B2)、烟碱型胆碱能受体α9亚基(CHRNA9)、钙粘着蛋白23(CDH23)、卷曲螺旋谷氨酸酯富集蛋白2(CCER2)、Clarin 1(CLRN1)、Clarin 2(CLRN2)、cochlin(COCH或DFNA9)、
Dystrotelin(DYTN)、表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)、EPS8样2(EPS8L2)、Espin
(ESPN)、Espin样(ESPNL)、间隙连接蛋白β2(GJB2)、间隙连接蛋白β6(GJB6)、间隙连接蛋白β
3(GJB3)、消皮素E蛋白(GSDME或DFNA5)、胰岛素瘤相关1(INSM1)、Ikaros家族锌指2
(IKZF2)、LIM同源盒蛋白3(LHX3)、肌球蛋白7A(MYO7A)、肌球蛋白11(MYO3A)、诺林胱氨酸结生长因子(NDP)、原钙粘蛋白15(PCDH15)、蛋白酪氨酸磷酸酶Q型受体(PTPRQ)、硬纤毛蛋白(Stereocilin)(STRC)、蛋白网络组分和谐素(Harmonin)(USH1C)、Usherin(USH2A)和含血
影蛋白重复的核被膜家族成员4(SYNE4)。
[0226] 在一些方面，多核苷酸可包含GJB2基因。在一些方面，多核苷酸可包含编码缝隙连接蛋白26多肽的核酸。在一些方面，核酸包含缝隙连接蛋白26多肽的编码序列。
[0227] 在一些方面，多核苷酸或核酸包含间隙连接β‑2(GJB2)基因。GJB2基因在哺乳动物纲中高度保守，并且编码缝隙连接蛋白26(Cx26)(也被称为间隙连接β‑2(GJB2)蛋白)。缝隙连接蛋白26为间隙连接蛋白家族的成员，该家族也被称为缝隙连接蛋白家族。间隙连接蛋白为特化蛋白，参与细胞内通讯。人类GJB2基因的突变与听力损失和耳聋有关(Amorini等
人，Ann.Hum.Genet.79(5):341‑349,2015；Qing等人，Genet.Test Mol.Biomarkers 19(1):
52‑58,2015)。
[0228] 人类GJB2基因位于染色体13q12上。其含有从可变转录起始点开始的两种转录异构体，其两者均含有两个外显子和单个内含子，涵盖总共约5千碱基(kb)(分别为约5,469或
4,675个核苷酸)(NCBI Gene ID 2706，NCBI参考序列：NG_008358.1)。两种人类GJB2 mRNA异构体均包含第二外显子，其在外显子2中完全编码全长缝隙连接蛋白26。该编码序列为约
681个核苷酸，并且编码长度为226个氨基酸的缝隙连接蛋白26。
[0229] 缝隙连接蛋白26的单体包括由两个细胞外环和一个较短的细胞内环连接的四个跨膜螺旋，N‑和C‑末端位于质膜的胞浆侧。细胞之间的间隙连接可以同聚体和/或异聚体的方式形成。缝隙连接蛋白26已显示形成功能性同聚体通道，以及与至少缝隙连接蛋白30、缝隙连接蛋白32、缝隙连接蛋白46和缝隙连接蛋白50的功能性异聚体通道。在一些方面，GJB2基因相关的感觉神经性听力损失(例如非综合征性或综合征性的)可为由GJB2和可变缝隙
连接蛋白编码基因中的复合杂合突变所致。用缝隙连接蛋白26创建的间隙连接在细胞间转
运钾离子和某些其他小分子。缝隙连接蛋白26助于保持细胞内钾离子的正确水平，并且为
耳蜗中某些细胞成熟所需的。
[0230] 人类GJB2基因在许多组织中表达，但已知其参与表皮和内耳的重要细胞内稳态功能。在内耳内，缝隙连接蛋白26由柯蒂氏器内的所有支持细胞类型合成，所述支持细胞类型包括内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/
OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、根细胞、纤维细胞、成纤维细胞、来自血管纹的基底和中间细胞以及其他侧壁细胞。另外，已知缝隙连接蛋白26存在于侧壁的间充质
细胞和螺旋神经节的1型神经元中。
[0231] 人类的GJB2基因具有确定的128bp长的基础/最小启动子，恰在最丰富异构体中典型第一外显子的上游。该序列包括TATA盒和两个GC盒，已知它们通过Sp1和Sp3 TF结合。
[0232] 存在超过200个确定的GJB2的突变，其显示出某种程度的致病性，并且GJB2基因的各种突变与听力损失相关(例如非综合征性感觉神经性听力损失或综合征性感觉神经性听
力损失)。例如，在65.5％来自西西里岛东部的患者上发现c.35delG等位基因(Amorini等
人，Ann.Hum.Genet.79(5):341‑349,2015)。在患有非综合征性感觉神经性听力损失或综合征性感觉神经性听力损失的受试者中检测到的GJB2基因的另外示例性突变，以及将编码
GJB2的核酸进行测序的方法描述于例如Snoeckx等人，Am.J.Hum.Genet 77:945‑957,2005；
Welch等人，Am.J.Med.Genet A 143:1567‑1573,2007；Zelante等人，Hum.Mol.Genet.6:
1605‑1609,1997；和Tsukada等人，Annals of Otology,Rhinology&Laryngology.2015,
Vol.124(5S)61S‑76S中，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中。检测基因中突变的方法为本领域众所周知的。此类技术的非限制性实例包括：实时聚合酶链反应(RT‑PCR)、PCR、桑格测序、下一代测序、DNA印迹和蛋白质印迹。与感觉神经性听力损失伴有非综合征性或综合征性表现相关的多种疾病状态已与人类GJB2基因的特定突变相关(参见Nickel&
Forge,Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg.2008Oct；16(5):452‑7，其通过参考以其全部结合至本文中)。导致综合征性或非综合征性听力损失的人类GBJ2基因突变变化多样，从去除全部GJB2或GJB2基因调控区的大缺失，到数以百计的小规模改变，包括无义、错义、插入缺失(导致相移)和剪接位点的点突变。
[0233] 在一些方面，GJB2基因突变比如Gly59Ser和Asn52Lys与巴特‑庞弗里综合征相关。一种由皮肤增厚、疣样生长和通常为先天性中度至极重度感觉神经性听力损失的表现定义
的综合征。在其他方面，GJB2基因突变比如Aspn50Asn与豪猪样鱼鳞病伴耳聋和角膜炎‑鱼鳞病‑耳聋综合征相关。这些综合征与干燥鳞片状皮肤、通常为先天性极重度感觉神经性听力损失，以及在角膜炎‑鱼鳞病‑耳聋综合征中另外的角膜炎症相关。
[0234] 在一些方面，GJB2基因错义突变与掌跖角化病伴耳聋相关。一种与手掌和足底厚皮肤以及轻度至极重度感觉神经性听力损失相关的综合征，所述听力损失开始于儿童早期
并随着时间的推移而加重，受累个体可能特别难以听到高音调声音。而在其他方面，GJB2基因错义突变与沃温克尔综合征相关。一种与皮肤异常(例如其手指和脚趾周围的厚纤维组
织带，可能切断到手指脚趾的血液循环并导致自发性截肢)和感觉神经性听力损失相关的
综合征。
[0235] 在一些方面，GJB2基因突变与非综合征性听力损失相关，其可能以显性(例如DFNA3)或隐性(DFNB1)方式遗传。在一些方面，功能丧失GJB2基因突变与非综合征性DFNB1
相关，其以常染色体隐性方式遗传，并表现为轻度至极重度听力损失，通常为学语前性并且不随着时间的推移变为更加严重。据估计，在US和EU5，DFNB1存在于每100,000名活产儿的约14人中。据推测，DFNB1听力损伤的早期但并非总是先天性发作可能然后为听力损失的快速发展。一般而言，DFNB1专利的治疗选项包括教育、助听器和人工耳蜗。患者通常没有另外的症状，并且活到正常寿命。据估计，在许多第一世界国家(例如US、法国、英国和澳大利亚)，DFNB1占先天性重度至极重度常染色体隐性非综合征性听力损失的约50％。
[0236] 在一些方面，由GJB2基因突变所致的感觉神经性听力损失以常染色体显性方式遗传为非综合征性DFNA3。这些突变通常为显性阴性错义突变，阻止必要的功能性间隙连接的形成。这种疾病状态表现为听力损失，其可为学语前性或学语后性的，从轻度至极重度不
等，通常随着时间的推移变为更加严重。
[0237] 除其他事项之外，本公开提供多核苷酸，例如包含GJB2基因或其特征部分的多核苷酸，以及包括此类多核苷酸的组合物和利用此类多核苷酸和/或组合物的方法。
[0238] 在一些方面，包含GJB2基因或其特征部分的多核苷酸可为DNA或RNA。在一些方面，DNA可为基因组DNA或cDNA。在一些方面，RNA可为mRNA。在一些方面，多核苷酸包含GJB2基因的外显子和/或内含子。
[0239] 在一些方面，基因产物由包含GJB2基因或其特征部分的多核苷酸表达。在一些方面，此类多核苷酸的表达可利用一个或多个控制元件(例如启动子、增强子、剪接位点、多腺苷酸化位点、翻译起始位点等)。因此，在一些方面，本文提供的多核苷酸可包括一个或多个控制元件。
[0240] 在一些方面，GJB2基因为哺乳动物GJB2基因。在一些方面，GJB2基因为鼠GJB2基因。在一些方面，GJB2基因为灵长类动物GJB2基因。在一些方面，GJB2基因为人类GJB2基因。
在一些方面，GJB2基因为密码子优化的。编码cDNA序列的示例性的人类GJB2为或包括SEQ 
ID NO:117或SEQ ID NO:118的序列。具有非翻译区的示例性人类GJB2剪接cDNA序列为或包
括SEQ ID NO:119的序列。具有非翻译区的可变转录起始位点示例性人类GJB2剪接cDNA序
列为或包括SEQ ID NO:120的序列。示例性的人类GJB2基因组DNA序列可见于SEQ ID NO:
121。示例性密码子优化的GJB2 DNA序列可见于SEQ ID NO:123‑126。
[0241] 示例性的人类GJB2 cDNA编码序列(SEQ ID NO:117)
[0242] ATGGATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATTATGATCCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGC
CGACTTTGTCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACTTCCCCATCTCCCACATCC
GGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACAT
GAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAGGAGATCAAAACCCAGAAGGT
CCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGT
ACGTCTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCAACACT
GTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGAGAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCAT
CCTGCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTT
[0243] 示例性的人类GJB2 cDNA编码序列(SEQ ID NO:118)
[0244] ATGGATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATTATGATCCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAG
GCCG ACTTTGTCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACTTCCCCATCTCCCAC
ATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAG
ACATGAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAGGAGATCAAAACCCAGA
AGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTC
ATGTACGTCTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCAA
CACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGAGAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTT
GCATCCTGCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTTTAA
[0245] 包括非翻译区序列的示例性剪接人类GJB2异构体1cDNA(SEQ ID NO:119)
[0246] GTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTC
CTCCCGACGCAGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGATGGATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAAC
AAACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATTATGATCCTCGTTGTGGCTG
CAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTA
CGATCACTACTTCCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACGCCAGCGCTCCTA
GTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTA
AGGACATCGAGGAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAAGCAGCATCTT
CTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGTCTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTG
GTGAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGAGAAGACTGTCTTCA
CAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCCTGCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATA
TTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTTTAACGCATTGCCCAGTTGTTAGATTAAGAAATAGACAGCATGAGAGGG
ATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCA
ACCATTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCTGCTCCCCTAAAGCCTCAAA
ACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGG
GTTATTGGTGTAAGGTACTTTCATATTTTAAA CAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGAGGACAAGAGAA
AAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGT
TAAAGGTGAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGCCTTAA
ACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCAT
TATATGTTCCCCCTGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATGATTTAATTTGA
AATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACC
TAACAACATTGTAGCCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAATGGCCTCAT
GTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGGATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCC
TGTCCAACACATCTCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGGTCGCTTGGG
AATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAAC
AGATTTGGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTTGTTTGCTTACC
CCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTAATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAAT
ATTGAGCAGATCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAAAATGGTACTCCA
CATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAG
CTTTAATGATATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAAATATAATCTCTAT
AATAA
[0247] 包括非翻译区序列的示例性剪接人类GJB2异构体X1 cDNA(SEQ ID NO:120)
[0248] TTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCACCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGT
TCCGTGGCCATGCACCTGGGACTGCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGATGGATTGGGGCACGCT
GCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTC
GCATTATGATCCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTCTGCAACACCCTGCAG
CCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACTTCCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTT
CGTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAAGG
GGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAGGAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGG
ACCTACACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGTCTTCTATGTCATGTACGACGG
CTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCA
CGGAGAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCCTGCTGAATGTCACTGAATTGTGT
TATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTTTAACGCATTGCCCAGTTGTTAGATTAAGAAAT
AGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATT
CTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCTGCTCC
CCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCC
CAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGA
GGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAAC
TTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTAC
CAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTT
CTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATG
ATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTG
GTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCA
AATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGGATGTACCACCAACTACTACCTGT
AATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGA
GGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTG
TCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTT
GTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTAATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGG
TTTAGATAAATATTGAGCAGATCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAAA
ATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATA
ATAAAGAATAGCTTTAATGATATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAAAT
ATAATCTCTATAATAA
[0249] 示例性的人类GJB2基因组DNA序列(SEQ ID NO:121)
[0250] GTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCT
CCCGACGCAGGTGAGCCCGCCGGCCCCGGACTGCCCGGCCAGGAACCTGGCGCGGGGAGGGACCGCGAGACCCAGAG
CGGTTGCCCGGCCGCGTGGGTCTCGGGGAACCGGGGGGCTGGACCAACACACGTCCTTGGGCCGGGGGGCGGGGGCC
GCCTTCTGGAGCGGGCGTTTCTGCGGCCGAGCTCCGGAGCTGGAATGGGGCGGCCGGGGAAGTGGACGCGATGGCAC
CGCCCGGGGTGCGAGTGGGGCCGGGCGCGCGCGGGAGGGGAAAAAGGCGCGGGCGAGCCGCCAGCGCGAGGTTTGTG
GTGTCGCCGATGTCCCTTCGGGGTACTCTAGCGCAGCCGCCTGGCTACTTGACCCACTGCCACCAAACGTTTTAAAT
TCACCGAAAGCTTAGCTTCGAAGCAAAGCTCCGTTTCGCCGGTGAAGCAGGAAGCCTTCGCTGCAGGAACTGACCTT
TACCTCTTGGAGCGGCTTCTGCAGAAAAATCCCCGGGCAGAGATTTGGGCGGAGTTTGCCTAGAACTAACGCGGAGC
CAGCCGATCCCGGCCTACCCCGGGGCCAAGATTTCAGTGGCTTCCCTTTTTCCTAAACACTTCACGAGGGTCTGTTT
CCGGGCTGTGCTCCCCGCCTAGAAGGAAAATTTTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCG
CGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCACCTA
ACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTGGGACTGCCTTGAGAAGCGTGGTACGGCCGTGTCCC
CATGTGACCTTAGAGTCCCTTTCGAAACTGCTGTGCACAGTCGGTCACAATTTCAGACACTGGTGAGAAGGGTGGAG
GAACCCTCTGGGGACAGCCAGGCAAGGTCGACCACCCATCACCTAAGGGTGGAGAAATTTAAGGGGTGAAGAGTCCC
TTTTGCCTTTTCTGGATCCTGGTGATTCACCTAGTGTCTTCCCTAAGGAACTGAACCAACTCCTCCGCTGGCCTCTG
GCAGCCCTCCAGGCGGTGCAGGATGGCGTGGGCCCGGTAGGAAGCTGCATGTAACCGCCCAGGGTCGGGAGGCCAGG
AGGGCAGCTCCTCCTCTGACTTGAATATTGAAAACAACTTCGTCCTGCTTCTGAGCCCCTCTTAACCCATGACCCCC
TAGCCCATTGGGGAGTAAATCTTAATTTACTCCTCTTCCTGAAAAAGGATCTTTAAAACAGGTAGCTTCAACTCAAG
CTTTATAAAATAACAATATAGGGTTTCTCGGAACTGTATTTTTCTCAGCTGATGGTAACTGGACAGGTCTGTAGAAG
GGTGTATGACCTGGGTTTGGCAGGTGGAAGAGGGCAAAGGATAAACCCCTCCTCCTGCAGCCCCATATTCTTGGCCA
GGTGTATTGTTGTAAACCAGGAGAGAGTTTACTTCGGGGAGTATCCTGTTTTCCACTCAGTGAGGGCCAATGAAGAA
TGTCTAATTCCATAAGATGCTTTTGTTAAAATCGGAATGTTGCTGTCCTCGGTGGTTCTGCTGTTGGGACGGGACTG
GCCTGAGCTGTGGGTGCTGTAGCAGGACAACCAGCTCACCTAAGGGCCTCCCAGTCTGGATTATCAATGGGTCAGTG
CTGAACCTGGGCTAAAATATTGTTTTTTCCAAT
[0251] GATGTTGTCTTTCCCAAGCTCAGTGAAGCTAAATGTTTCACAGGCCTATGT
[0252] CAATCTGATGTAACTTTCGTGGCCACCTCTCTCCTGTTAGCCTCTGACCAAG
[0253] GTGGCACTGGATGGTTTCTGCCTGACCTTGGTGCCCCGTGGCAGCGACTGT
[0254] GGGTCATGAAAGACATTCACTACGAGCCTGCTTCTGGAGTCCATCAGAAAA
[0255] CGGGATGCAACTTGCCTAAAATGAGGAGAGGAGGATGCTTTTAAGAAAAA
[0256] GAAGAAGGAGGATTCACTACCAGCTCTGAAGGGTGGAAAAGAGATGATTC
[0257] ATCCGGATTGTGGAGAGGGTGGAATCTTGTTTAGGAGAGCGTTGGTTGTGG
[0258] CAGGCAGGGTGTAACTATGAATCAGTGAAGACAATTCACATCCTGGGATG
[0259] AAAAGAAGGCCATGGGCTCACAGGAGATTATCCACTGGCCTCTCCACATCC
[0260] GCTTGCAGTAAGGAGTGTGGGACTCTCCCAAGCTTCAGCGCTGAACTGCAA
[0261] TGCAGTGACGTCGCTTAGCTGGGCCAGTAACCGAGGGAGTTGAATTTTCTG
[0262] TCATTTTAAAATAATGTGTCTTTTAAGAAACACTTTGAAATTAAAACCACA
[0263] GCCCACAATTATAATGCACTGTTGCAGCACTTATCAAAACAGATATGCTAA
[0264] CTGAGCCATCAGTGCCAGCCTGACAGTGAGGCCACCAAGCCATCCACAAA
[0265] GCCTACACGAAAGTCTGTGCTCACAGTGGCTTTTCTCCATGAAGAGGGCAT
[0266] TCCTAACCTCTTCCTTTCACGTAGGAGGAAGCAAGGTCCTTTGTAAAATTTT
[0267] AACTCGGGGTGCCTCAAATGTAAACTTAACCACTGGTAACAACAGTTTCAC
[0268] TGCTACATGCCACGTCTGTGAAAATTCATTCAAGACATTAAGGAAAGTGGC
[0269] TCAGCAGAGAGACTAGACATCTTATCCTCACGGTTCTCCTGTACTTGGCCT
[0270] CTCAGCCTTTGAGCAAGGTTGGCCCAAGCTAGTATCGGCCCCAGTGGTACA
[0271] GCCAAAACTTGAGACTGCAAATGGATGCAGCTGTTGAACGCTGAGTAACTT
[0272] CTGCAGAGTCAGGAAGACCCAAGGAAGCTCTGCAGAGGATGCAGGGGTAC
[0273] GGTCAGAACCCCTGAGTGCCTTTCAGCTAACGAGGACTTTATGACACTCCC
[0274] CAGCACAGCAAATTTTTATGATGTGTTTAAAGATTGGGTGAATTACTCAGG
[0275] TGAACAAGCTACTTTTTATCAGAGAACACCTAAAAACACGTTCAAGAGGGT
[0276] TTGGGAACTATACATTTAATCCTATGACAAACTAAGTTGGTTCTGTCTTCAC
[0277] CTGTTTTGGTGAGGTTGTGTAAGAGTTGGTGTTTGCTCAGGAAGAGATTTA
[0278] AGCATGCTTGCTTACCCAGACTCAGAGAAGTCTCCCTGTTCTGTCCTAGCT
[0279] AGTGATTCCTGTGTTGTGTGCATTCGTCTTTTCCAGAGCAAACCGCCCAGA
[0280] GTAGAAGATGGATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACA
[0281] AACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCG
[0282] CATTATGATCCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGG
[0283] CCGACTTTGTCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACG
[0284] ATCACTACTTCCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTT
[0285] CGTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACA
[0286] TGAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAG
[0287] GACATCGAGGAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTG
[0288] GTGGACCTACACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTT
[0289] CATGTACGTCTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGT
[0290] GAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCG
[0291] GCCCACGGAGAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAAT
[0292] TTGCATCCTGCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGT
[0293] TCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTTTAACGCATTGCCCAGTTGTTAGATTAA
[0294] GAAATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGG
[0295] CTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCA
[0296] TTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCT
[0297] CTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAAT
[0298] TTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATT
[0299] GGTGTAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTT
[0300] CTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAG
[0301] GTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGT
[0302] GAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACA
[0303] AAGTTACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGT
[0304] AGTATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTC
[0305] CCCCTGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCT
[0306] ACTATGATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCAC
[0307] AGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACAT
[0308] TGTAGCCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATG
[0309] ATAGCAAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAAT
[0310] ACAGACTGGATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAAC
[0311] ACATCTCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGAT
[0312] TTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAG
[0313] GACAAAATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTT
[0314] GGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTT
[0315] CAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATAT
[0316] AGCTAATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGA
[0317] GCAGATCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGG
[0318] TTTCCAAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGT
[0319] TGTCAAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTA
[0320] ATGATATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAA
[0321] ACATTAAAATATAATCTCTATAATAA
[0322] 包括某些调控区的示例性扩展人类GJB2基因组DNA序列(SEQ ID NO:122)
[0323] GACTGTGAACTTAAGGCACAGCAGAGCTGGGGCTGCTCTTAAGGCCCTGCTGTCTCTCCTCTTAGTAACAACACCATTTCACATGAAGTGACAGTGGTATCTTTTGTTGCCCTGGAAATGGAATACAACAATGGCTTTCCAACTTT
TCTGTGGCAGAGACCTACAGACAGAAGTACATTTTACACTGGATCCAGGACACACATCAGTCTGAAAACACACACAT
GAACCAAACGTTTCCTAAAGCATTACTTATCCTTGCTAATAGCAACACATTCTCATATTCTTTTATACTTCATTTAA
TTTCATATAAAAAAGAAAAGGAAAGGAAAGAAATCTATTTCTCAGCCCATTAATAAGGTCAGGAGCAGCAACACCAG
ACTAGAAGAAAAGCTTACCTATAGATTTTTCTGCCACCTCTTGAGTGCGTCCAGCTTTCCGACAAGTCTCAGTGCCA
TCTACTGTGCGCTCTGGGTATTGCAATTGCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAGAATGAGACTAAGTCAGAG
AACACAAAGAACTTCTTTCCCCACAGTGGAGATGGCTCTGAAAGCGTTTAAGGAATAGCTTAGATGAGTGGCTAACA
CATTCTCCCGGTTCTGAATTCTAAGACCACAGACTCCATGTCCAGTCCCCAAAGAGAGGCTTTGCAAGCTACAGAAT
ACCCCTCTGACTGGGACCTCAGGAGCTAAACTGACCACGTAATTGGTTCTAGAAAGTGAAACGTTTTAATTTGAAAC
ATCCAAATGAGCATTTTGTGAAAAGCTACTGCCGTCCATCAAATACAACACAGCCAGGGAGTCATCGCTCTATTGCC
CTTGTCAATCCTACATCTATAGTTTTTTTTGCTACAGCAGTTCATGAGTGTTGACTCTATTCTAACTTGTTCCAGAA
GCCCTTCAAGATGATAGATAGCACAATATTTTTGTAGCCAGAGCTAGAATGTAGAGCTCTTTTTGGCTTCCTTGTGA
ATGATCCAGAATTTCCATGTTGGCAAGCCACCATAATTTACAGAATTTACTTTTTATATTCAATAGAAGTAAAAAAA
ATTTACCTATTTAAGGAGTTATAGCTCTGGATTCATTTCTGACCAAAATGTGCTTTTTGACACAAATACAATTGGAA
ATGTCTTTGTAATTTATCCACAGTCTGCCTAGATAATCATAAAAGAACTGCATGGATATATTTGTGAGTAAGAGCAC
GTGTCCATTCAGCAAAACCAAGGAGATCAACTAATTCTACCATTGCCTTGAAACGGAGACACATCTAGCAGTTTGAA
TTTCCCCCAAAAGATTGTATGTGTGAAAATAAGAATAGAATGAGGAAAATTTAAAAGCCTATATAATAATTTCAGTC
ACAACTTGGCAATTAGAATTTTATGAGATGTCTTTAATTTGGAAGCAAAGAACAATTAAATTATTGAAGGCTGGAAT
TTTTTTTTAACTCTTTGAATGGAACAACAGATTTTCCCCAAAAGATTTGACTTTAACAATTTTCAGAAAACATAAGT
CAGGGTGTGGTTCAATTACACAGAGAGAAATTGTAGTGAAATAGTGTTCCCTGTAATAATTACCCACAAAGGAGCAC
AGTGGAGCCACTCCTGCATTAAAATTACAGTATCATATGTAAGTTATTATTAATTAACCAGAGATGCCAGGAGCTTG
TCAGTTTCCAACTGCTATTTTGAGGAGAGCTAAAGTTTCTCTTTTTTTGCCAGTTATTATTATTATTAATATTTCAA
CAGCAAGGCAAGAAAAGGGAATGTGGTCCATTAACTAATGGCTCTTGAAAAGACACTCAATGAATCCAACTTGCCCT
AAAACTGCCAAGTGGTAGGACAGTCTCTTCGCGTCTTGCATCATTTTCTGC
[0324] CATCACCTACGTGTGATTCGTGAGTCGGAAATTCAACCAAGACATGTTTAA
[0325] TGTATATTTAGAGCATTCTTCCCGGCGGGAATTCACGGTGCCATTCCATCA
[0326] GGCAGTTGGCAAGCAGTCACTTGAAATATTAAGAAATATGATTTGTGTCAC
[0327] ACTGATTTATTGCAAAACAGCAACTTCTTTCTTTTTGGTTCATTTATAAAAC
[0328] AACTGTCAAATTAAAATGCCAAATAGCTTTAAACATTAGCATTTTCACCTT
[0329] ATAACCTTACAAGTGCATCACTTTAAACATCTGAGTAAAAGTTCAGCTCGA
[0330] TGACAATCACCTGGGATTTACCTGCATGGTACTAAGCATATATGTAAAAAT
[0331] ATTACTGATGGGTATCTCTGGCACTCTGAAGTGACAAAGTGTAGCCTTCAC
[0332] AGATCTTTGTCAGTTAATCATCAATAGTTACCTGAAAAGTGCCCACTTGCC
[0333] ATCATTCAAGATCAACCAGGCAGACACCACAGTGAGTTTTCCATCAAAAA
[0334] ACCTTCTCTATCTGGTCAGTCTCTGCACGTCAATGAGACAAAGGTGTATGC
[0335] TGCACGCAGCAGTACTATCCTAAGCTCCCTGTGTCCTCACCATGGGGCTGG
[0336] GTGGCTGGGGTGGAGGAACACAGGATTGGGCTTCAGCTTCTCTAGGGACT
[0337] GGTACATTAAGAGATGAAGACATAAAAGGTGAGAAAAACATGGTTTATTT
[0338] CCAATGTTTCCATTTCTGTTAAAAGTAATGCTTTCAACAGAAAAAAAATGC
[0339] AGCAATATAAGTGTGTAATTTACAAAATAATTTCAGGATTTCTTTAATCATT
[0340] AATTTGTGGTGTCATCTGTTAACTGGATTTACGTCTAAGCTCATTTGTAAAT
[0341] AACTTCAAATATCCAAGCCTTCCCTCACCCTTTTCCCACCTCACCTCTCCTC
[0342] CTTCTCCTCCCCTACACTGGAGGACACTATGTACATGCATATAATGTCCTGC
[0343] CCTAGAGGAGTCCTGAGCCTACTTGGGAAGAAAACACCAACTCACAGGAA
[0344] AACAGCAGAAATCACACAAAACAGAATAAAAGCAAGCGCTGATCTGTAAG
[0345] TGAAGACTTAAGTGCTATAGGACTTCCAGCTACAAATCCTGAAAACACGG
[0346] AGTGGCTGTGATAATACGACTAGCCAACATCACACAGTAATTTTGCACATA
[0347] AGGAGAACTAAATCAAAGAAAACAAGGAAAAGAAAGTTGAGCCTATAAT
[0348] CGTGATACAGGCACTAAAATCTCAGGTGACATTTTTCAATGGGGGAAAGTC
[0349] AGTCAACTTCCGATCTCCAAACCATCTTTACTAGCGAGCTTCCCACAATGG
[0350] TTCTAGAACCTTCCTTCATTCCAACCCAACCAGGATTCCAACAGACTCATA
[0351] AACACCACAGCCTTTGAGAAATTAAAGGGAGAACCCACCAACCGGCGCCC
[0352] CACTCCCCACCCCAAGTCACCTCTGGCTCAACCAAGATGCGCTCAGGCCAA
[0353] GAAAGCTGCCCCACCCCACAGGCTTTGCCTGTCATTTTTAACAAGCCGACT
[0354] CAGCACATCTCTCAGATGGGCCATGCAAGGCTTTTCGCAGCTCCTGGGGCT
[0355] TTGCCTCTTCATGAGCAGACACTCCCTCTTAGACTAAGACCTGGAGCTGGA
[0356] AAGTAGGTGGTAACCGCGGTACAAAACTCACGCTCGTCCCTGCAGAAACT
[0357] GCCTAGGTCGGCCCATGGCCACGGGGCGCCAATTTTTCAAGGAAAAGTCA
[0358] ATGCTAATAATGGTGGCAATCACGGGAAATCCATTCTGAGGCCAGATCTGA
[0359] CTTGTCAGGATTAATCATCATTTCCACTTAACTTCGAACTGACCTGGGTAA
[0360] AAACGTGAGCGCGAGGGGACCAGGCTGCACCTCTGACCTGGCTCCCCTCTG
[0361] CAAAAATCGCGAAGTGGGTGCCCGAGGTGGGGCGGGGGTTGGGGGAGACC
[0362] TCCCCGGGAGTCCCCACCCAGCCTGCTCTGCACATCTTAGTCCCTCATCCGC
[0363] TTGCGCTGTGCAAATCTGTCTTCTGTCATTTGTATCGCAAGACATCAAAATC
[0364] CCCAACCAAATGCAAATACTGAGACCTCATAATCTGAGACAAAGTTTCACG
[0365] GTATCCAGAAAGCCCCCAGCAGGTGTGCAGTGCAGAGCCAGCCCCCCAGC
[0366] GGTCTTCCGCAGAATCCTATCAGTTTCCCCCTTTCGTGCTGTGTGCATCGAG
[0367] CAGGAAGGGGCTTGGCAGGTTTTACCTGCCCTCTTTCCTTTCTGAAAAGTCT
[0368] GGGCCTCCTCACCCCGAAAGGAGTCACCTCCTTGCAGTTCCCCAGTTGCGA
[0369] AAAGAGGAGGAAGTTGGCTGGGCCGGGGGCCGCGGGGGGCACCCTCCGCA
[0370] GATGGCGGGACCCCCCTGCCGGCCATGGCAAAAACGAGGCTTGTCTCTCCC
[0371] ACCGCCCCCAACCTTAGTCCTTGGCACATTGTTGAAAGTAATTGAATAAAA
[0372] TCGGAAATTCGAGAAGGCGTTCGTTCGGATTGGTGAGATTTTGAGGGGAG
[0373] AAAGAAGCGGGGACTTCGCCGGCACCAGCGGCGCCCCCTCCTCGGCCACC
[0374] GTTAACCCCCATTCCAGAGGGCACTGCCCCGCCACCCAGCCTAGGTCCCCC
[0375] TGCGAGAGCCTCGCGGGCCCGCGCAGCCTCCGCGACTCGAACAGATCTTCA
[0376] GTCCTTGGAGGAATGCCTGTTTCTCTAACAATAAAAAATTAAAGAAGCGCT
[0377] CATAAATGCCAAGTCCTCTCGCACTATGCGGAGTACAGAGGACAACGACC
[0378] ACAGCCATCCCTGAACCCCGCCCACGGCACAGCGCCGGAGCCGGGGTCTG
[0379] GGGCGCCGCTTCCTGGGGGGTCCCGACTCTCAGCCGCCCCCGCTTCACCCG
[0380] GGCCGCCAAGGGGCTGGGGGAGGCGGCGCTCGGGGTAACCGGGGGAGAC
[0381] TCAGGGCGCTGGGGGCACTTGGGGAACTCATGGGGGCTCAAAGGAACTAG
[0382] GAGATCGGGACCTCGAAGGGGACTTGGGGGGTTCGGGGCTTTCGGGGGCG
[0383] GTCGGGGGTTCGCGGACCCGGGAAGCTCTGAGGACCCAGAGGCCGGGCGC
[0384] GCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTTTCCCAGTCTCCGAGGGAA
[0385] GAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGCCACGGCGGGAGACAGGT
[0386] GTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTC
[0387] GGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAG
[0388] AGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCTCCCGAC
[0389] GCAGGTGAGCCCGCCGGCCCCGGACTGCCCGGCCAGGAACCTGGCGCGGG
[0390] GAGGGACCGCGAGACCCAGAGCGGTTGCCCGGCCGCGTGGGTCTCGGGGA
[0391] ACCGGGGGGCTGGACCAACACACGTCCTTGGGCCGGGGGGCGGGGGCCGC
[0392] CTTCTGGAGCGGGCGTTTCTGCGGCCGAGCTCCGGAGCTGGAATGGGGCG
[0393] GCCGGGGAAGTGGACGCGATGGCACCGCCCGGGGTGCGAGTGGGGCCGGG
[0394] CGCGCGCGGGAGGGGAAAAAGGCGCGGGCGAGCCGCCAGCGCGAGGTTT
[0395] GTGGTGTCGCCGATGTCCCTTCGGGGTACTCTAGCGCAGCCGCCTGGCTAC
[0396] TTGACCCACTGCCACCAAACGTTTTAAATTCACCGAAAGCTTAGCTTCGAA
[0397] GCAAAGCTCCGTTTCGCCGGTGAAGCAGGAAGCCTTCGCTGCAGGAACTG
[0398] ACCTTTACCTCTTGGAGCGGCTTCTGCAGAAAAATCCCCGGGCAGAGATTT
[0399] GGGCGGAGTTTGCCTAGAACTAACGCGGAGCCAGCCGATCCCGGCCTACC
[0400] CCGGGGCCAAGATTTCAGTGGCTTCCCTTTTTCCTAAACACTTCACGAGGG
[0401] TCTGTTTCCGGGCTGTGCTCCCCGCCTAGAAGGAAAATTTTTAGGACCCTT
[0402] GTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCC
[0403] ATCAGTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGC
[0404] GCTCACCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTG
[0405] GGACTGCCTTGAGAAGCGTGGTACGGCCGTGTCCCCATGTGACCTTAGAGT
[0406] CCCTTTCGAAACTGCTGTGCACAGTCGGTCACAATTTCAGACACTGGTGAG
[0407] AAGGGTGGAGGAACCCTCTGGGGACAGCCAGGCAAGGTCGACCACCCATC
[0408] ACCTAAGGGTGGAGAAATTTAAGGGGTGAAGAGTCCCTTTTGCCTTTTCTG
[0409] GATCCTGGTGATTCACCTAGTGTCTTCCCTAAGGAACTGAACCAACTCCTC
[0410] CGCTGGCCTCTGGCAGCCCTCCAGGCGGTGCAGGATGGCGTGGGCCCGGT
[0411] AGGAAGCTGCATGTAACCGCCCAGGGTCGGGAGGCCAGGAGGGCAGCTCC
[0412] TCCTCTGACTTGAATATTGAAAACAACTTCGTCCTGCTTCTGAGCCCCTCTT
[0413] AACCCATGACCCCCTAGCCCATTGGGGAGTAAATCTTAATTTACTCCTCTTC
[0414] CTGAAAAAGGATCTTTAAAACAGGTAGCTTCAACTCAAGCTTTATAAAATA
[0415] ACAATATAGGGTTTCTCGGAACTGTATTTTTCTCAGCTGATGGTAACTGGA
[0416] CAGGTCTGTAGAAGGGTGTATGACCTGGGTTTGGCAGGTGGAAGAGGGCA
[0417] AAGGATAAACCCCTCCTCCTGCAGCCCCATATTCTTGGCCAGGTGTATTGT
[0418] TGTAAACCAGGAGAGAGTTTACTTCGGGGAGTATCCTGTTTTCCACTCAGT
[0419] GAGGGCCAATGAAGAATGTCTAATTCCATAAGATGCTTTTGTTAAAATCGG
[0420] AATGTTGCTGTCCTCGGTGGTTCTGCTGTTGGGACGGGACTGGCCTGAGCT
[0421] GTGGGTGCTGTAGCAGGACAACCAGCTCACCTAAGGGCCTCCCAGTCTGG
[0422] ATTATCAATGGGTCAGTGCTGAACCTGGGCTAAAATATTGTTTTTTCCAAT
[0423] GATGTTGTCTTTCCCAAGCTCAGTGAAGCTAAATGTTTCACAGGCCTATGT
[0424] CAATCTGATGTAACTTTCGTGGCCACCTCTCTCCTGTTAGCCTCTGACCAAG
[0425] GTGGCACTGGATGGTTTCTGCCTGACCTTGGTGCCCCGTGGCAGCGACTGT
[0426] GGGTCATGAAAGACATTCACTACGAGCCTGCTTCTGGAGTCCATCAGAAAA
[0427] CGGGATGCAACTTGCCTAAAATGAGGAGAGGAGGATGCTTTTAAGAAAAA
[0428] GAAGAAGGAGGATTCACTACCAGCTCTGAAGGGTGGAAAAGAGATGATTC
[0429] ATCCGGATTGTGGAGAGGGTGGAATCTTGTTTAGGAGAGCGTTGGTTGTGG
[0430] CAGGCAGGGTGTAACTATGAATCAGTGAAGACAATTCACATCCTGGGATG
[0431] AAAAGAAGGCCATGGGCTCACAGGAGATTATCCACTGGCCTCTCCACATCC
[0432] GCTTGCAGTAAGGAGTGTGGGACTCTCCCAAGCTTCAGCGCTGAACTGCAA
[0433] TGCAGTGACGTCGCTTAGCTGGGCCAGTAACCGAGGGAGTTGAATTTTCTG
[0434] TCATTTTAAAATAATGTGTCTTTTAAGAAACACTTTGAAATTAAAACCACA
[0435] GCCCACAATTATAATGCACTGTTGCAGCACTTATCAAAACAGATATGCTAA
[0436] CTGAGCCATCAGTGCCAGCCTGACAGTGAGGCCACCAAGCCATCCACAAA
[0437] GCCTACACGAAAGTCTGTGCTCACAGTGGCTTTTCTCCATGAAGAGGGCAT
[0438] TCCTAACCTCTTCCTTTCACGTAGGAGGAAGCAAGGTCCTTTGTAAAATTTT
[0439] AACTCGGGGTGCCTCAAATGTAAACTTAACCACTGGTAACAACAGTTTCAC
[0440] TGCTACATGCCACGTCTGTGAAAATTCATTCAAGACATTAAGGAAAGTGGC
[0441] TCAGCAGAGAGACTAGACATCTTATCCTCACGGTTCTCCTGTACTTGGCCT
[0442] CTCAGCCTTTGAGCAAGGTTGGCCCAAGCTAGTATCGGCCCCAGTGGTACA
[0443] GCCAAAACTTGAGACTGCAAATGGATGCAGCTGTTGAACGCTGAGTAACTT
[0444] CTGCAGAGTCAGGAAGACCCAAGGAAGCTCTGCAGAGGATGCAGGGGTAC
[0445] GGTCAGAACCCCTGAGTGCCTTTCAGCTAACGAGGACTTTATGACACTCCC
[0446] CAGCACAGCAAATTTTTATGATGTGTTTAAAGATTGGGTGAATTACTCAGG
[0447] TGAACAAGCTACTTTTTATCAGAGAACACCTAAAAACACGTTCAAGAGGGT
[0448] TTGGGAACTATACATTTAATCCTATGACAAACTAAGTTGGTTCTGTCTTCAC
[0449] CTGTTTTGGTGAGGTTGTGTAAGAGTTGGTGTTTGCTCAGGAAGAGATTTA
[0450] AGCATGCTTGCTTACCCAGACTCAGAGAAGTCTCCCTGTTCTGTCCTAGCT
[0451] AGTGATTCCTGTGTTGTGTGCATTCGTCTTTTCCAGAGCAAACCGCCCAGA
[0452] GTAGAAGATGGATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACA
[0453] AACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCG
[0454] CATTATGATCCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGG
[0455] CCGACTTTGTCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACG
[0456] ATCACTACTTCCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTT
[0457] CGTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACA
[0458] TGAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAG
[0459] GACATCGAGGAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTG
[0460] GTGGACCTACACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTT
[0461] CATGTACGTCTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGT
[0462] GAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCG
[0463] GCCCACGGAGAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAAT
[0464] TTGCATCCTGCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGT
[0465] TCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTTTAACGCATTGCCCAGTTGTTAGATTAA
[0466] GAAATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGG
[0467] CTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCA
[0468] TTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCT
[0469] CTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAAT
[0470] TTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATT
[0471] GGTGTAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTT
[0472] CTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAG
[0473] GTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGT
[0474] GAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACA
[0475] AAGTTACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGT
[0476] AGTATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTC
[0477] CCCCTGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCT
[0478] ACTATGATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCAC
[0479] AGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACAT
[0480] TGTAGCCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATG
[0481] ATAGCAAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAAT
[0482] ACAGACTGGATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAAC
[0483] ACATCTCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGAT
[0484] TTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAG
[0485] GACAAAATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTT
[0486] GGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTT
[0487] CAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATAT
[0488] AGCTAATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGA
[0489] GCAGATCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGG
[0490] TTTCCAAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGT
[0491] TGTCAAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTA
[0492] ATGATATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAA
[0493] ACATTAAAATATAATCTCTATAATAATTTAAAATCTAATATGGTTTTAATA
[0494] GAACAGCAAATTTTAATTTCATCTATCACTTTTTATATAAATACATTAATGT
[0495] TTTATATTTCATAACACCAATGGGTAAGTTGCCAGAGTGTCTGACCCCATT
[0496] CTGCCCCAGTTACAGAAAAGCTTCTGTCACCAGAAAGTTTGGTGGGGAAG
[0497] GAAGGGAGGAAGATGATTTCTACCTAACCCCGTGCCCACCTCTACCAGGTT
[0498] TTTGAGGCATATCAGTCTATGGACAATGTGGTGTTTGGTCTGGAAACGTAC
[0499] CTTGGTGAATGCTGAGTTGGCTGGACATGACCCGTTTAGCTCCTGGATGAA
[0500] TCCCAGAAGTGGACCTTCAAAATGTTACTCATAGCATGACCTTGGCTCACT
[0501] GCAACCTCTGCCTCCCAGGCTCAAGCGATCCTCCCACCTCAGCGTCCCAAG
[0502] TAGCTGGGACCACTGGAGTGTGCCACCACACTCCACTAATTTTTTCATTTTT
[0503] TGTAGAAACGAGGTCCCACTATATTGCCCAGTCTGGTCTCGAACTCCTGGG
[0504] CTGAAGGGATCCCCCTGCCTCAGTCTCCTAAAGTGCAAGGATTACAGGCAT
[0505] GGGCCACCGCACCTGGCCTGAAACTGCTTTTTATTCCTCAGTGCCCACTTCC
[0506] ATGGGAAATAAGCCTGCCAGGTCAGCCTGTCCCCATGGGAGTGACTGCCTG
[0507] CTACCCCCACAGGCTTGCCCGGCCCTCGTGAGCCTCTCCCAGAGACACCAC
[0508] CAACAGTTCTGTTCTTTCATGGTACAAGATTTCCATCCAAGGATTTCAAAGCATTTCACACATCAATAATTAGAAGTATTTTCATAGAGGACCATACACTTTTAAAATGGATTTCAAAGAACAAAAACCAGTCAACTATCACCCAG
GTAATAGAAAATGGGAAATGGTTTCTACCTGACTTCCAAAATGCTCTGCACATAGACTGTGAAAATAGGATTTTTTA
AGCTGGGTGCAGAGGCTTATACCTATAATCCCAACACTTTGGGAGGCTGAGACGAGAGGATCACTTGAGCCCAGGAG
TTCAAAACCAGCCTGGGCAATATAGGGAGACATTGTTTCTATAAAAAATAAAAATGTTAGCCAGGCAGGCGTGGTAA
CATGTGCCTGTAGTCTCAGCTACTCAGGAGGCTGAGGTGGGAAGATTGCTTGAACCTGGGAGGTCCATGCTGCAGTG
AGCTGAGATTGTGCCACTGCACTCCAGCCTAGGCGACAGCAAGATCCTGTCCCAAACAACAACAACATCAAAAAACA
CAGAACTTTTAAAATAAGTACATTCACTTCTACAAGCTATGTAGATTATTACTCTCAAGCTATTAAAAGACCAAGCC
AAAATAATTATGGGCTACTCTCGACCACTTGTAGGAATGGATAGAGAGGTCTGGTCACATGCCTGGAAATTAGAGCT
TGAGCTCTGAAAATGATAATCCTGACTATATCTCAAAGCATCAGTCTGCACTTTGTATGGAGCAAGAAAAAGCCTTG
TGGAAGCGGCCTCCCACCCAGCCGAGCCCTCGGCGTGGACAAGCTCTGCTTTTTATGAGCAGTGGGTGCAGCCTCGC
TGCTCCCTCCTCCTGTCAAAAGACAGTCACAGCTGGGGTGAGCAGATCGGGCCCACTTGGGAGGCCCCAAGGAATAT
GCTGCAGGGGTCGGGCCTGAGCCACCCCCACGGGTTGGTCTTTGACAACTAGAGAGCAGCTGAGAGGTGGGTAAAAG
CTCACTCACTTACCCTGACCTCAGTGTCCTCATCTTAAAATGGGTTTCCTGAATCTTTCCCCGGCTTAGTGGCAATG
AAATAAGATAATTTATGTAAACGTTCTCCACATAGTAAAGCACTAAGTAACATATGACTGTCATCTGTTTTCCACTA
GACAGATCCCAACCTGGAAGAGTGACAGATGGTATTTCAGATACAAGTGACTCAAGCAAAGCTTGATAAACTGGGGG
CTGGAAAAAAATGCACATTTACACAAAGCCTGGAGTAACTGC
[0509] 在一些方面，GJB2基因为密码子优化的。在一些方面，密码子优化的GJB2基因与SEQ ID NO:123‑126中的任何一种具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少
90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，密码子优化的GJB2基因具有SEQ ID NO:123‑126中任何一种的序列。
[0510] 示例性的密码子优化的人类GJB2 DNA序列(SEQ ID NO:123)
[0511] ATGGACTGGGGCACCCTGCAGACTATCCTGGGGGGCGTCAATAAGCATTCAACTAGCATCGGAAAGATTTGGCTGACTGTCCTGTTTATCTTTCGGATCATGATCCTGGTGGTGGCAGCAAAGGAAGTGTGGGGCGACGAGCAGGC
CGATTTCGTGTGCAACACACTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGACCACTATTTTCCCATCTCTCACATCA
GGCTGTGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGAGCACCCCTGCCCTGCTGGTGGCAATGCACGTGGCCTATCGGAGACAC
GAGAAGAAGCGCAAGTTTATCAAGGGCGAGATCAAGAGCGAGTTCAAGGATATCGAGGAGATCAAGACACAGAAGGT
GAGGATCGAGGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAAGCTCCATCTTCTTTCGCGTGATCTTCGAGGCCGCCTTTATGT
ACGTGTTCTATGTGATGTACGACGGCTTTTCTATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCCTGTCCTAATACA
GTGGATTGTTTCGTGTCCAGACCCACCGAGAAGACAGTGTTCACCGTGTTTATGATCGCCGTGTCTGGCATCTGCAT
CCTGCTGAACGTGACCGAGCTGTGCTATCTGCTGATCCGGTACTGTAGTGGAAAGAGCAAAAAACCCGTG
[0512] 示例性的密码子优化的人类GJB2 DNA序列(SEQ ID NO:124)
[0513] ATGGACTGGGGAACATTGCAAACTATTTTGGGAGGAGTCAACAAGCATTCAACTAGCATCGGGAAGATCTGGCTGACCGTGCTGTTCATCTTTCGCATCATGATTCTCGTGGTGGCCGCTAAGGAAGTCTGGGGCGATGAACAGGC
CGACTTCGTGTGTAACACGCTGCAGCCCGGTTGCAAAAACGTCTGCTACGATCACTACTTCCCCATCTCACACATTA
GACTGTGGGCGCTGCAGCTGATTTTCGTGTCCACCCCGGCACTTCTTGTGGCGATGCACGTGGCCTACCGGCGGCAC
GAGAAGAAAAGGAAGTTCATTAAGGGCGAAATCAAGTCCGAGTTCAAGGACATCGAAGAAATCAAGACCCAGAAGGT
CCGCATTGAGGGCTCCCTCTGGTGGACCTACACCTCGTCCATCTTCTTCCGGGTCATATTCGAGGCCGCCTTTATGT
ACGTGTTTTACGTGATGTACGACGGTTTCAGCATGCAAAGACTCGTCAAGTGCAACGCTTGGCCTTGCCCCAATACC
GTGGATTGCTTCGTGTCCCGCCCGACCGAGAAAACTGTGTTCACTGTGTTCATGATCGCCGTGTCCGGCATCTGCAT
CCTGCTGAACGTGACCGAGCTGTGCTATCTCCTGATCCGGTACTGTAGCGGAAAGTCGAAGAAGCCTGTG
[0514] 示例性的密码子优化的人类GJB2 DNA序列(SEQ ID NO:125)
[0515] ATGGATTGGGGGACGCTCCAGACTATACTTGGCGGGGTAAACAAACATTCCACCTCAATTGGCAAAATCTGGCTCACAGTCCTCTTCATCTTCAGAATAATGATACTCGTGGTTGCCGCTAAAGAAGTTTGGGGTGACGAGCAA
GCCGATTTCGTCTGTAACACCCTCCAACCAGGTTGCAAAAATGTCTGTTACGATCACTACTTTCCTATTAGCCATA
TTAGACTCTGGGCCCTGCAACTTATCTTCGTTTCCACTCCTGCTCTGCTCGTCGCTATGCACGTTGCCTATCGCCG
CCATGAAA AAAAACGGAAATTCATTAAGGGAGAGATTAAGAGTGAATTCAAGGATATTGAAGAGATTAAAACGCA
AAAAGTTAGAATTGAGGGATCACTGTGGTGGACTTATACCAGTAGCATCTTTTTTAGGGTCATTTTCGAAGCTGCTT
TCATGTATGTTTTCTATGTAATGTACGACGGTTTCTCCATGCAACGCTTGGTTAAATGTAACGCCTGGCCATGCCCT
AATACGGTTGATTGCTTTGTCTCCCGCCCTACTGAAAAGACAGTGTTTACCGTTTTCATGATCGCCGTAAGTGGAAT
TTGTATCCTTCTTAACGTGACCGAGTTGTGCTATCTCCTTATTCGCTACTGTTCAGGAAAAAGTAAAAAACCAGTA
[0516] 示例性的密码子优化的人类GJB2 DNA序列(SEQ ID NO:126)
[0517] ATGGACTGGGGCACGCTGCAGACTATCCTGGGGGGTGTCAACAAGCATTCAACTAGCATCGGAAAGATCTGGCTGACCGTCCTGTTCATCTTTCGCATCATGATCCTCGTGGTGGCCGCTAAGGAAGTGTGGGGCGACGAGCAGGC
CGATTTCGTGTGTAACACCCTGCAGCCAGGTTGCAAAAACGTCTGCTACGATCACTACTTTCCCATCTCCCACATTA
GACTGTGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACCCCTGCGCTGCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTATCGGCGACAC
GAGAAGAAACGGAAGTTCATTAAGGGCGAGATCAAGAGCGAGTTCAAGGATATCGAAGAGATCAAGACCCAGAAGGT
CCGCATTGAGGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACCAGCTCCATCTTCTTTCGGGTCATCTTCGAGGCCGCCTTTATGT
ACGTGTTCTATGTGATGTACGACGGTTTCTCCATGCAACGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCTTGCCCTAATACT
GTGGATTGCTTCGTGTCCCGCCCCACCGAGAAGACAGTGTTCACCGTGTTCATGATCGCCGTGTCTGGCATCTGCAT
CCTGCTGAACGTGACCGAGCTGTGCTATCTCCTGATCCGGTACTGTAGTGGAAAGTCAAAAAAACCAGTGTAA
[0518] 本公开认识到多核苷酸序列的某些变化不会影响其表达或由所述多核苷酸编码的蛋白。在一些方面，多核苷酸包含具有一个或多个沉默突变的GJB2基因。在一些方面，本公开提供包含具有一个或多个沉默突变的GJB2基因的多核苷酸，例如具有不同于SEQ ID 
NO:117‑126的序列但编码与功能性GJB2基因相同的氨基酸序列的GJB2基因。在一些方面，本公开提供包含编码包括一个或多个突变的氨基酸序列(例如当与由功能性GJB2基因产生
的相比较为不同的氨基酸序列)的具有不同于SEQ ID NO:117‑126的序列的GJB2基因的多
核苷酸，其中一个或更多个突变为保守性氨基酸取代。
[0519] 在一些方面，本公开提供包含编码包括一个或多个突变的氨基酸序列(例如当与由功能性GJB2基因产生的相比较为不同的氨基酸序列)的具有不同于SEQ ID NO:117‑126
的序列的GJB2基因的多核苷酸，其中一个或多个突变不在GJB2基因或编码的缝隙连接蛋白
26蛋白的特征部分内。在一些方面，根据本公开的多核苷酸包含与SEQ ID NO:117‑126的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少
93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的GJB2基因。
在一些方面，根据本公开的多核苷酸包含与SEQ ID NO:117‑126的序列具有同一性的GJB2
基因。如本领域所能意识到的，SEQ ID NO:117‑126可被优化(例如密码子优化)以在动物
(例如哺乳动物，例如人类)中实现增加或最佳的表达。
[0520] 除其他事项之外，本公开提供由GJB2基因或其特征部分编码的多肽。在一些方面，GJB2基因为哺乳动物GJB2基因。在一些方面，GJB2基因为鼠GJB2基因。在一些方面，GJB2基因为灵长类动物GJB2基因。在一些方面，GJB2基因为人类GJB2基因。
[0521] 在一些方面，多肽包含缝隙连接蛋白26蛋白或其特征部分。在一些方面，缝隙连接蛋白26蛋白或其特征部分为哺乳动物缝隙连接蛋白26蛋白或其特征部分，例如灵长类动物缝隙连接蛋白26蛋白或其特征部分。在一些方面，缝隙连接蛋白26蛋白或其特征部分为人
类缝隙连接蛋白26蛋白或其特征部分。
[0522] 在一些方面，本文提供的多肽包含翻译后修饰。在一些方面，本文提供的缝隙连接蛋白26蛋白或其特征部分包含翻译后修饰。在一些方面，翻译后修饰可包含但不限于糖基化(例如N‑连接的糖基化、O‑连接的糖基化)、磷酸化、乙酰化、酰胺化、羟基化、甲基化、泛素化、硫酸化和/或其组合。示例性的人类缝隙连接蛋白26蛋白序列为或包括SEQ ID NO:127
的序列。
[0523] 示例性的人类缝隙连接蛋白26蛋白序列(SEQ ID NO:127)
[0524] MDWGTLQTILGGVNKHSTSIGKIWLTVLFIFRIMILVVAAKEVWGDEQADFVCNTLQPGCKNVCYDHYFPISHIRLWALQLIFVSTPALLVAMHVAYRRHEKKRKFIKGEIKSEFKDIEEIKTQKVRIEGSLWWTYTSSIFFRVIF
EAAFMYVFYVMYDGFSMQRLVKCNAWPCPNTVDCFVSRPTEKTVFTVFMIAVSGICILLNVTELCYLLIRYCSGKSK
KPV
[0525] 本公开认识到本文所述多肽(例如包括缝隙连接蛋白26或其特征部分)的氨基酸序列中的某些突变不会影响多肽的表达、折叠或活性。在一些方面，多肽(例如包括缝隙连接蛋白26或其特征部分)包括一个或多个突变，其中一个或多个突变为保守性氨基酸取代。
在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的缝隙连接蛋白26或其特征部分。在一些方
面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有同一性的缝隙连接蛋白26或其特
征部分。在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有至少70％、至少
75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的缝隙连接蛋白26或其特征部分。在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有同一性的缝隙连接蛋白26蛋白
或其特征部分。
[0526] 在一些方面，多肽为治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)。在一些方面，多肽为支持细胞多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)。在一些方面，多肽为报告多肽。
[0527] 支持细胞多肽
[0528] 本公开的某些方面涉及编码支持细胞多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸。多核苷酸可编码能够在细胞(例如内耳细胞)中表达的多肽。在一些方面，支持细胞多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)为在内耳的支持细胞中内源性地表达的多肽。在一些方面，内
耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和
其他侧壁细胞。多核苷酸可编码全长多肽或其功能片段。
[0529] 由多核苷酸编码的示例性支持细胞多肽包括但不限于跨膜蛋白、酶、生长因子、细胞因子、受体、受体配体、激素、膜蛋白、膜相关蛋白、抗原和抗体。
[0530] 编码多肽的示例性支持细胞多核苷酸包括但不限于ATP酶质膜Ca2+转运2(ATP2B2)、烟碱型胆碱能受体α9亚基(CHRNA9)、钙粘着蛋白23(CDH23)、卷曲螺旋谷氨酸酯富集蛋白2(CCER2)、Clarin 1(CLRN1)、Clarin 2(CLRN2)、cochlin(COCH或DFNA9)、
Dystrotelin(DYTN)、表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)、EPS8样2(EPS8L2)、Espin
(ESPN)、Espin样(ESPNL)、间隙连接蛋白β2(GJB2)、间隙连接蛋白β6(GJB6)、间隙连接蛋白β
3(GJB3)、消皮素E蛋白(GSDME或DFNA5)、胰岛素瘤相关1(INSM1)、Ikaros家族锌指2
(IKZF2)、LIM同源盒蛋白3(LHX3)、肌球蛋白7A(MYO7A)、肌球蛋白11(MYO3A)、诺林胱氨酸结生长因子(NDP)、原钙粘蛋白15(PCDH15)、蛋白酪氨酸磷酸酶Q型受体(PTPRQ)、硬纤毛蛋白(STRC)、蛋白网络组分和谐素(USH1C)、Usherin(USH2A)和含血影蛋白重复的核被膜家族成员4(SYNE4)。在一些方面，多核苷酸包含间隙连接蛋白β2(GJB2)基因。在一些方面，多核苷酸编码间隙连接蛋白β2多肽。在一些方面，多核苷酸编码缝隙连接蛋白26多肽。在一些方面，支持细胞多肽为间隙连接蛋白β2多肽。在一些方面，支持细胞多肽为缝隙连接蛋白26多肽。
[0531] 在一些方面，根据本公开的多核苷酸包含与SEQ ID NO:117‑126的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的GJB2基因。在一些方面，本公开的多核苷酸包含与SEQ ID NO:117‑126的序列具有同一性的GJB2基因。如本领域所能意
识到的，SEQ ID NO:117‑126可被优化(例如密码子优化)以在动物(例如哺乳动物，例如人类)中实现增加或最佳的表达。
[0532] 在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的缝隙连接蛋白26或其特征部分。在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有同一性的缝隙连接蛋白26或其
特征部分。在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的缝隙连接蛋白26或其特征部分。
在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有同一性的缝隙连接蛋白
26或其特征部分。
[0533] 治疗性多肽
[0534] 本公开的某些方面涉及编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸。多核苷酸可编码能够在细胞(例如内耳细胞)中表达的多肽。多核苷酸可编码全长多
肽或其功能片段。
[0535] 由多核苷酸编码的示例性多肽包括但不限于跨膜蛋白、酶、生长因子、细胞因子、受体、受体配体、激素、膜蛋白、膜相关蛋白、抗原和抗体。
[0536] 编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的示例性多核苷酸包括但不限于ATP2+
酶质膜Ca 转运2(ATP2B2)、烟碱型胆碱能受体α9亚基(CHRNA9)、钙粘着蛋白23(CDH23)、卷曲螺旋谷氨酸酯富集蛋白2(CCER2)、Clarin 1(CLRN1)、Clarin 2(CLRN2)、cochlin(COCH或DFNA9)、Dystrotelin(DYTN)、表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)、EPS8样2(EPS8L2)、
Espin(ESPN)、Espin样(ESPNL)、间隙连接蛋白β2(GJB2)、间隙连接蛋白β6(GJB6)、间隙连接蛋白β3(GJB3)、消皮素E蛋白(GSDME或DFNA5)、胰岛素瘤相关1(INSM1)、Ikaros家族锌指2(IKZF2)、LIM同源盒蛋白3(LHX3)、肌球蛋白7A(MYO7A)、肌球蛋白11(MYO3A)、诺林胱氨酸结生长因子(NDP)、原钙粘蛋白15(PCDH15)、蛋白酪氨酸磷酸酶Q型受体(PTPRQ)、硬纤毛蛋白(STRC)、蛋白网络组分和谐素(USH1C)、Usherin(USH2A)和含血影蛋白重复的核被膜家族成员4(SYNE4)。在一些方面，多核苷酸包含间隙连接蛋白β2(GJB2)基因。在一些方面，多核苷酸编码间隙连接蛋白β2多肽。在一些方面，多核苷酸编码缝隙连接蛋白26多肽。在一些方面，治疗性多肽为间隙连接蛋白β2多肽。在一些方面，治疗性多肽为缝隙连接蛋白26多肽。
[0537] 在一些方面，根据本公开的多核苷酸包含与SEQ ID NO:117‑126的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的GJB2基因。在一些方面，根据本公开的多核苷酸包含与SEQ ID NO:117‑126的序列具有同一性的GJB2基因。如本领域所
能意识到的，SEQ ID NO:117‑126可被优化(例如密码子优化)以在动物(例如哺乳动物，例如人类)中实现增加或最佳的表达。
[0538] 在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的缝隙连接蛋白26或其特征部分。在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有同一性的缝隙连接蛋白26或其
特征部分。在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的缝隙连接蛋白26或其特征部分。
在一些方面，根据本公开的多肽包含与SEQ ID NO:127的序列具有同一性的缝隙连接蛋白
26或其特征部分。
[0539] 构建体
[0540] 除其他事项之外，本公开假设如本文所述的一些多核苷酸为多核苷酸构建体。根据本公开的多核苷酸构建体包括本领域已知的所有那些，包括粘粒、质粒(例如裸的或包含在脂质体中)和病毒构建体(例如慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒构建体)，其掺入了包含编码多肽(例如缝隙连接蛋白26)的核酸序列(例如GJB2基因)或其特征部分的多
核苷酸。本领域的技术人员将能够选择合适的构建体以及细胞，用于制备本文所述多核苷
酸中的任何一种。在一些方面，构建体为质粒(即可在细胞内自主复制的环状DNA分子)。在一些方面，构建体可为粘粒(例如pWE或sCos系列)。在一些方面，构建体为哺乳动物或病毒载体。
[0541] 在一些方面，构建体为病毒构建体。在一些方面，病毒构建体为慢病毒、逆转录病毒、腺病毒或腺相关病毒构建体。在一些方面，构建体为腺相关病毒(AAV)构建体(参见例如Asokan等人，Mol.Ther.20:699‑7080,2012，其通过参考以其全部结合至本文中)。在一些方面，构建体为病毒构建体。在一些方面，构建体为慢病毒、逆转录病毒、腺病毒或腺相关病毒构建体。构建体为AAV构建体。在一些方面，病毒构建体为腺病毒构建体。在一些方面，病毒构建体也可基于或衍生于甲病毒属。甲病毒属包括辛德比斯(Sindbis)(和VEEV)病毒、奥拉病毒(Aura virus)、巴班肯病毒(Babanki Virus)、巴马森林病毒(Barmah Forest virus)、贝巴鲁病毒(Bebaru virus)、卡巴索病毒(Cabassou virus)、基孔肯雅病毒(Chikungunya virus)、东方马脑炎病毒(Eastern equine  encephalitis virus)、沼泽地病毒(Everglades virus)、摩根堡病毒(Fort Morgan virus)、盖他病毒(Getah virus)、高地J病毒(Highlands  J  virus)、孜拉加奇病毒(Kyzylagach virus)、马雅罗病毒
(Mayarovirus)、米曲病毒(Me Tri virus)、米德尔堡病毒(Middelburg virus)、莫斯达斯佩德拉斯病毒(Mosso das Pedras virus)、穆坎博病毒(Mucambo virus)、恩杜穆病毒
(Ndumu virus)、奥尼昂‑尼昂病毒(O’nyong‑nyong virus)、皮克孙纳病毒(Pixuna 
virus)、里奥内格罗病毒(Rio Negro virus)、罗斯河病毒(Ross River virus)、鲑鱼胰腺病病毒(Salmon pancreas disease virus)、塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus)、南方象海豹病毒(Southern elephant seal virus)、托纳特病毒(Tonate virus)、特罗卡
拉病毒(Trocara virus)、乌纳病毒(Una virus)、委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan 
equine encephalitis virus)、西方马脑炎病毒(蛋白equine encephalitis virus)和怀
塔罗瓦病毒(Whataroa virus)。通常，此类病毒的基因组编码可在宿主细胞的细胞质中翻
译的非结构蛋白(例如复制子)和结构蛋白(例如衣壳和被膜)。罗斯河病毒、辛德比斯病毒、塞姆利基森林病毒(SFV)和委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)已经全部被用来开发用于编码序列
递送的病毒构建体。假型病毒可通过结合甲病毒被膜糖蛋白和逆转录病毒衣壳来形成。甲
病毒构建体的实例可见于美国公开号20150050243、20090305344和20060177819中；构建体及其制备方法通过参考每个公开以其全部结合至本文中。
[0542] 本文提供的构建体可具有不同大小。在一些方面，构建体为质粒并且可包括至高约1kb、至高约2kb、至高约3kb、至高约4kb、至高约5kb、至高约6kb、至高约7kb、至高约8kb、至高约9kb、至高约10kb、至高约11kb、至高约12kb、至高约13kb、至高约14kb或至高约15kb的总长度。在一些方面，构建体为质粒并且可具有在以下范围内的总长度：约1kb‑约2kb、约
1kb‑约3kb、约1kb‑约4kb、约1kb‑约5kb、约1kb‑约6kb、约1kb‑约7kb、约1kb‑约8kb、约1kb‑约9kb、约1kb‑约10kb、约1kb‑约11kb、约1kb‑约12kb、约1kb‑约13kb、约1kb‑约14kb或约
1kb‑约15kb。
[0543] 在一些方面，构建体为病毒构建体并且可具有至高10kb的核苷酸总数。在一些方面，病毒构建体可具有在以下范围内的核苷酸总数：约1kb‑约2kb、1kb‑约3kb、约1kb‑约
4kb、约1kb‑约5kb、约1kb‑约6kb、约1kb‑约7kb、约1kb‑约8kb、约1kb‑约9kb、约1kb‑约10kb、约2kb‑约3kb、约2kb‑约4kb、约2kb‑约5kb、约2kb‑约6kb、约2kb‑约7kb、约2kb‑约8kb、约
2kb‑约9kb、约2kb‑约10kb、约3kb‑约4kb、约3kb‑约5kb、约3kb‑约6kb、约3kb‑约7kb、约3kb‑约8kb、约3kb‑约9kb、约3kb‑约10kb、约4kb‑约5kb、约4kb‑约6kb、约4kb‑约7kb、约4kb‑约
8kb、约4kb‑约9kb、约4kb‑约10kb、约5kb‑约6kb、约5kb‑约7kb、约5kb‑约8kb、约5kb‑约9kb、约5kb‑约10kb、约6kb‑约7kb、约6kb‑约8kb、约6kb‑约9kb、约6kb‑约10kb、约7kb‑约8kb、约
7kb‑约9kb、约7kb‑约10kb、约8kb‑约9kb、约8kb‑约10kb或约9kb‑约10kb。
[0544] 在一些方面，构建体为慢病毒构建体并且可具有至高8kb的核苷酸总数。在一些实例中，慢病毒构建体可具有以下核苷酸总数：约1kb‑约2kb、1kb‑约3kb、约1kb‑约4kb、约
1kb‑约5kb、约1kb‑约6kb、约1kb‑约7kb、约1kb‑约8kb、约2kb‑约3kb、约2kb‑约4kb、约2kb‑约5kb、约2kb‑约6kb、约2kb‑约7kb、约2kb‑约8kb、约3kb‑约4kb、约3kb‑约5kb、约3kb‑约
6kb、约3kb‑约7kb、约3kb‑约8kb、约4kb‑约5kb、约4kb‑约6kb、约4kb‑约7kb、约4kb‑约8kb、约5kb‑约6kb、约5kb‑约7kb、约5kb‑约8kb、约6kb‑约8kb、约6kb‑约7kb或约7kb‑约8kb。
[0545] 在一些方面，构建体为腺相关病毒构建体并且可具有至高8kb的核苷酸总数。在一些方面，腺相关病毒构建体可具有在以下范围内的核苷酸总数：约1kb‑约2kb、约1kb‑约
3kb、约1kb‑约4kb、约1kb‑约5kb、约1kb‑约6kb、约1kb‑约7kb、约1kb‑约8kb、约2kb‑约3kb、约2kb‑约4kb、约2kb‑约5kb、约2kb‑约6kb、约2kb‑约7kb、约2kb‑约8kb、约3kb‑约4kb、约
3kb‑约5kb、约3kb‑约6kb、约3kb‑约7kb、约3kb‑约8kb、约4kb‑约5kb、约4kb‑约6kb、约4kb‑约7kb、约4kb‑约8kb、约5kb‑约6kb、约5kb‑约7kb、约5kb‑约8kb、约6kb‑约7kb、约6kb‑约8kb或约7kb‑约8kb。
[0546] 在一些方面，构建体为腺病毒构建体并且可具有至高8kb的核苷酸总数。在一些方面，腺病毒构建体可具有在以下范围内的核苷酸总数：约1kb‑约2kb、约1kb‑约3kb、约1kb‑约4kb、约1kb‑约5kb、约1kb‑约6kb、约1kb‑约7kb、约1kb‑约8kb、约2kb‑约3kb、约2kb‑约
4kb、约2kb‑约5kb、约2kb‑约6kb、约2kb‑约7kb、约2kb‑约8kb、约3kb‑约4kb、约3kb‑约5kb、约3kb‑约6kb、约3kb‑约7kb、约3kb‑约8kb、约4kb‑约5kb、约4kb‑约6kb、约4kb‑约7kb、约
4kb‑约8kb、约5kb‑约6kb、约5kb‑约7kb、约5kb‑约8kb、约6kb‑约7kb、约6kb‑约8kb或约7kb‑约8kb。
[0547] 本文所述构建体中的任何一种可进一步包括控制序列，例如选自以下的控制序列：转录起始序列、转录终止序列、启动子序列、增强子序列、RNA剪接序列、多腺苷酸化(多聚(A))序列、Kozak共有序列和/或可容纳转录前或转录后的调控和/或控制元件的另外非
翻译区。在一些方面，启动子可为天然启动子、组成型启动子、诱导型启动子和/或组织特异性启动子。控制序列的非限制性实例在本文中描述。
[0548] 在一些方面，构建体包含可操作地连接于在内耳支持细胞中选择性地表达多核苷酸的启动子的编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸。在一些方面，构建
体包含5’ITR(在内耳支持细胞中选择性地表达多核苷酸的启动子)、5’UTR(编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、3’UTR、多聚A和3’ITR。在一些方面，构建体包含5’ITR(在内耳支持细胞中选择性地表达多核苷酸的启动子)、5’UTR(编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、标签、3’UTR、多聚A和3’ITR。在一些方面，构建体包含5’ITR(在内耳支持细胞中选择性地表达多核苷酸的启动子)、5’UTR(编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、标签、3’UTR、微小RNA调控靶位点、多聚A和3’ITR。
[0549] 在一些方面，构建体包含可操作地连接于在内耳支持细胞中选择性地表达多核苷酸的启动子的编码多肽的多核苷酸。在一些方面，构建体包含5’ITR(在内耳支持细胞中选择性表达多核苷酸的启动子)、5’UTR(编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、
3’UTR、多聚A和3’ITR。在一些方面，构建体包含5’ITR(在内耳支持细胞中选择性表达多核苷酸的启动子)、5’UTR(编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、标签、3’UTR、多聚A和3’ITR。在一些方面，构建体包含5’ITR(在内耳支持细胞中选择性地表达多核苷酸的启动子)、5’UTR(编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、标签、3’UTR、微小RNA调控靶位点、多聚A和3’ITR。
[0550] 在一些方面，构建体包含可操作地连接于启动子的编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，其中构建体包含用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小
RNA的miRNA调控靶位点。在一些方面，构建体包含5’ITR(在内耳支持细胞中选择性地表达多核苷酸的启动子)、5’UTR(编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、3’UTR、微小RNA调控靶位点、多聚A和3’ITR。在一些方面，构建体包含5’ITR(在内耳支持细胞中选择性表达多核苷酸的启动子)、5’UTR(编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的
多核苷酸)、标签、3’UTR、微小RNA调控靶位点、多聚A和3’ITR。在一些方面，构建体包含5’ITR(组成型启动子)、5’UTR(编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、3’UTR、微小RNA调控靶位点、多聚A和3’ITR。在一些方面，构建体包含5’ITR(组成型启动子)、
5’UTR(编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、标签、3’UTR、微小RNA调控靶位点、多聚A和3’ITR。
[0551] 在一些方面，构建体包含可操作地连接于启动子的编码多肽的多核苷酸，其中构建体包含用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点。在一些方
面，构建体包含5’ITR(在内耳支持细胞中选择性地表达多核苷酸的启动子)、5’UTR(编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、3’UTR、微小RNA调控靶位点、多聚A和3’ITR。在一些方面，构建体包含5’ITR(在内耳支持细胞中选择性地表达多核苷酸的启动子)、5’UTR(编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、标签、3’UTR、微小RNA调控靶位点、多聚A和3’ITR。在一些方面，构建体包含5’ITR(组成型启动子)、5’UTR(编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、3’UTR、微小RNA调控靶位点、多聚A和3’ITR。在一些方面，构建体包含5’ITR(组成型启动子)、5’UTR(编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)、标签、3’UTR、微小RNA调控靶位点、多聚A和3’ITR。
[0552] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
[0553] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0554] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:40中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:90中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:96中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0555] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:16中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:28中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:57中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:91中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷
酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:92中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:93中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’
ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:94中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白
26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:95中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:97中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:98中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0556] 在一些方面，构建体进一步包含最小GJB2启动子。在一些方面，最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列的核酸序列。
[0557] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:40中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:90中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少
80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)
3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:96中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:
86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。
[0558] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:16中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:28中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少
80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)
3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:57中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:
86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:91中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多
核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:92中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：
(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26
多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:93中的任何一种具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:94中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:95中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:97中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:98中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。
[0559] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的编码多肽(例如缝隙连
接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iv)3’ITR。
[0560] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iv)
3’ITR。
[0561] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)3’非翻译区(UTR)，和(iv)3’ITR。
[0562] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)3’非翻译区(UTR)，和(iv)3’ITR。
[0563] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(iv)3’非翻译区(UTR)，和(v)3’ITR。
[0564] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(iv)3’非翻译区(UTR)，和(v)3’ITR。
[0565] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的编码多肽(例如缝隙连
接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’
[0566] UTR，和(v)3’ITR。
[0567] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’
UTR，和(v)3’ITR。
[0568] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的编码多肽(例如缝隙连
接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA
调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(v)3’ITR。
[0569] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)用
于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和
(vi)3’ITR。
[0570] 在一些方面，构建体包含可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，其中构建体包含用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的
miRNA调控靶位点(miRTS)。
[0571] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，和(iv)3’ITR。
[0572] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)用
于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，和(v)3’ITR。
[0573] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(iv)3’非翻译区(UTR)，和(v)3’ITR。
[0574] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)用
于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和
(vi)3’ITR。
[0575] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(ii)3’ITR，其中内耳支持细胞选择性启动子与多核苷酸异源。
[0576] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中内耳支持细胞选择性启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑
99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。
[0577] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:40中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:90中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:96中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0578] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:16中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:28中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:57中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:91中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷
酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:92中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:93中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’
ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:94中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白
26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:95中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:97中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:98中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例
如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iv)3’ITR。
[0579] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝
隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iv)3’ITR。
[0580] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)3’非翻译区(UTR)，和(iv)3’ITR。
[0581] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)3’非翻译区(UTR)，和(iv)3’ITR。
[0582] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小
RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(iv)3’非翻译区(UTR)，和(v)3’ITR。
[0583] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，
(iv)3’非翻译区(UTR)，和(v)3’ITR。
[0584] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的内耳支持细胞选择性启动子和最
小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’
ITR。
[0585] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝
隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR。
[0586] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的内耳支持细胞选择性启动子和最
小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)用于在内耳细胞
(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)3’ITR。
[0587] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝
隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的
miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)3’ITR。
[0588] 在一些方面，构建体包含可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，其中构建体包含用于在内耳细
胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)。
[0589] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，和
(vi)3’ITR。
[0590] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝
隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的
miRNA调控靶位点(miRTS)，和(v)3’ITR。
[0591] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iii)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，
(iv)3’非翻译区(UTR)，和(v)3’ITR。
[0592] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝
隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小RNA的
miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)3’ITR。
[0593] 在一些方面，最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0594] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:40中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:90中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少
80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)
3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:96中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:
86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。
[0595] 在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:16中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:28中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少
80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)
3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:57中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:
86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:91中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多
核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:92中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：
(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26
多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:93中的任何一种具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:94中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:95中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:97中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。在一些方面，构建体包含：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:98中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列和包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列的最小GJB2启动子。
[0596] AAV颗粒
[0597] 除其他事项之外，本公开提供包含编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的构建体以及本文所述衣壳的AAV颗粒。除其他事项之外，本公开提供包含含有编码多肽的核酸序列(例如基因)的构建体以及本文所述衣壳的AAV颗粒。在一些方面，AAV颗粒可被描述
为具有血清型，这是构建体株和衣壳株的描述。在一些方面，AAV颗粒具有AAV1、AAV2、AAV3(例如AAV3B)、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV2‑tYF、AAV2‑P2V2、AAV2‑P2V3、AAV2‑MeBtYFTV、AAV2‑MeB、AAV2‑P2V6、AAV2‑DGEDF或AAV Anc80血清型。在一些方面，AAV颗粒具有AAVAnc80血清型(包括例如AAVAnc80L65)。在一些方面，AAV颗粒可被描述为AAV2，其中颗粒具有AAV2衣壳和包含特征性AAV2反向末端重复(ITR)的构建体。在一些方面，AAV颗粒可被描述为假型，其中衣壳和构建体衍生于不同AAV株，例如，AAV2/9将指涉包含利用AAV2 ITR的构建体和AAV9衣壳的AAV颗粒。
[0598] AAV构建体
[0599] 本公开提供包含编码多肽或其特征部分的核酸序列(例如基因)的构建体。在本文所述的一些方面，包含编码多肽或其特征部分的核酸序列(例如基因)的构建体可被包括在
AAV颗粒中。
[0600] 本公开提供包含编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)或其特征部分的核酸序列(例如基因)的多核苷酸构建体。在本文所述的一些方面，包含编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)或其特征部分的核酸序列(例如基因)的多核苷酸可被包括在AAV颗
粒中。
[0601] 在一些方面，多核苷酸构建体包含或多种衍生于或修饰自天然存在的AAV基因组构建体的组分。在一些方面，衍生于AAV构建体的序列为AAV1构建体、AAV2构建体、AAV3构建体、AAV4构建体、AAV5构建体、AAV6构建体、AAV7构建体、AAV8构建体、AAV9构建体、AAV2.7m8构建体、AAV8BP2构建体、AAV293构建体、AAV2‑tYF构建体、AAV2‑P2V2构建体、AAV2‑P2V3构建体、AAV2‑MeBtYFTV构建体、AAV2‑MeB构建体、AAV2‑P2V6构建体、AAV2‑DGEDF构建体或AAV Anc80构建体。在一些方面，构建体衍生于AAV Anc80构建体(包括例如AAVAnc80L65)。可用于本文中的另外示例性AAV构建体为本领域已知的。参见例如Kanaan等人，
Mol.Ther.Nucleic Acids 8:184‑197,2017；Li等人，Mol.Ther.16(7):1252‑1260,2008；
Adachi等人，Nat.Commun.5:3075,2014；Isgrig等人，Nat.Commun.10(1):427,2019；和Gao等人，J.Virol.78(12):6381‑6388,2004；其每一个均通过参考以其全部结合至本文中。
[0602] 在一些方面，提供的构建体包含编码序列(例如编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的核酸)、一个或多个调控和/或控制序列以及任选地5’和3’AAV衍生的反向末端重复(ITR)。在其中利用5’和3’AAV衍生的ITR的一些方面，多核苷酸构建体可被称为重组AAV(rAAV)构建体。在一些方面，提供的rAAV构建体被封装到AAV衣壳中以形成AAV颗
粒。在一些方面，AAV衣壳为Anc80衣壳(例如Anc80L65衣壳)。
[0603] 在一些方面，AAV衍生的序列(其被包含于多核苷酸构建体中)一般包括顺式作用的5’和3’ITR序列(参见例如B.J.Carter,in“Handbook of Parvoviruses,”ed.,
P.Tijsser,CRC Press,pp.155 168,1990，其通过参考以其全部结合至本文中)。典型AAV2
衍生的ITR序列的长度为约145个核苷酸。在一些方面，典型ITR序列的至少75％(例如至少
80％、至少85％、至少90％或至少95％)被掺入到本文提供的构建体中。修饰这些ITR序列的能力处于本领域的技能范围内(参见例如文本比如Sambrook等人，“Molecular Cloning.A Laboratory Manual”,2d ed.,Cold Spring Harbor Laboratory,New York,1989；和
K.Fisher等人，J Virol.70:520 532,1996，其每一个均通过参考以其全部结合)。在一些方面，本文所述的编码序列和/或构建体中的任何一种侧接5’和3’AAV ITR序列。AAV ITR序列可获自任何已知的AAV，包括目前鉴定的AAV类型。
[0604] 在一些方面，根据本公开并且以本领域已知的模式描述的多核苷酸构建体(参见例如Asokan等人，Mol.Ther.20:699‑7080,2012，其通过参考以其全部结合至本文中)一般包含编码序列或其一部分、至少一个和/或控制序列以及任选地5’和3’AAV反向末端重复
(ITR)。在一些方面，提供的构建体可被包装到衣壳中以创建AAV颗粒。AAV颗粒可被递送至所选靶细胞。在一些方面，提供的构建体包含另外任选的编码序列，后者为与构建体序列异源的核酸序列(例如抑制性核酸序列)，其编码感兴趣的多肽、蛋白、功能性RNA分子(例如
miRNA、miRNA抑制剂)或其他基因产物。在一些方面，核酸编码序列以允许编码序列在靶组织的细胞中转录、翻译和/或表达的方式操作性地连接于和/或控制组分。
[0605] 如图1A中所示，未修饰的AAV内源性基因组包括侧接ITR的两种开放阅读框，“cap”和“rep”。如图1B中所示，示例性的rAAV构建体类似地包括侧接编码区例如编码序列(例如编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)的ITR。在一些方面，rAAV构建体还包含常规控制元件，其以允许其在用质粒构建体转染或用由本公开产生的病毒感染的细胞中转录、翻译和/或表达的方式可操作地连接于编码序列。在一些方面，rAAV构建体任选地包含启动子(图1小图(B)中所示)、增强子、非翻译区(例如5’UTR、3’UTR)、Kozak序列、内部核糖体进入位点(IRES)、剪接位点(例如受体位点、供体位点)、多腺苷酸化位点(图
1小图(B)中所示)或其任何组合。在一些方面，rAAV构建体包含启动子、5’UTR和多腺苷酸化位点。在一些方面，rAAV构建体包含启动子、5’UTR、3’UTR和多腺苷酸化位点。此类另外的元件在本文中进一步描述。
[0606] 在一些方面，构建体为rAAV构建体。在一些方面，rAAV构建体可包括至少500bp、至少1kb、至少1.5kb、至少2kb、至少2.5kb、至少3kb、至少3.5kb、至少4kb或至少4.5kb。在一些方面，AAV构建体可包括至多7.5kb、至多7kb、至多6.5kb、至多6kb、至多5.5kb、至多5kb、至多4.5kb、至多4kb、至多3.5kb、至多3kb或至多2.5kb。在一些方面，AAV构建体可包括约1kb‑约2kb、约1kb‑约3kb、约1kb‑约4kb、约1kb‑约5kb、约2kb‑约3kb、约2kb‑约4kb、约2kb‑约5kb、约3kb‑约4kb、约3kb‑约5kb或约4kb‑约5kb。
[0607] 本文所述构建体中的任何一种可进一步包括调控和/或控制序列，例如选自以下的控制序列：转录起始序列、转录终止序列、启动子序列、增强子序列、RNA剪接序列、多腺苷酸化(多聚(A))序列、Kozak共有序列和/或其任何组合。在一些方面，启动子可为天然启动子、组成型启动子、诱导型启动子和/或组织特异性启动子。控制序列的非限制性实例描述于本文中。
[0608] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的
编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0609] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:40中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:90中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:96中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:99中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
[0610] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:16中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:28中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:57中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:91中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:92中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:93中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:94中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:95中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:97中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:98中的任何一种具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
[0611] 在一些方面，构建体进一步包含最小GJB2启动子。在一些方面，最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0612] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:40中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:
86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，
(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:90中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:96中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷
酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含
有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2
启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
[0613] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:16中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:
86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，
(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:28中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:57中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷
酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含
有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:91中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2
启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)
5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:92中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:
86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，
(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:93中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:94中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷
酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含
有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:95中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2
启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)
5’反向末端重复(ITR)，(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:97中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:
86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，
(ii)可操作地连接于与SEQ ID NO:98中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，并且最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和(iii)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的启动子的编码多肽(例如缝隙连
接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子与多核苷酸异源。
[0614] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0615] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:40中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和
(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:90中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多
肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:96中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：
(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0616] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:16中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和
(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:28中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多
肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:57中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：
(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:91中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和
(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:92中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多
肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:93中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：
(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:94中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和
(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:96中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多
肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:97中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：
(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:98中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0617] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)用于在内耳细胞(例如毛细胞)中表达的微小
RNA的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)3’ITR。
[0618] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于在内耳支持细胞中表达多核苷酸的内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋
白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(vi)3’ITR，其中内耳支持细胞选择性启动子与多核苷酸异源。
[0619] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中内耳支持细胞选择性启动子包含与SEQ ID NO:16、28、40、57或90‑99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的序列的核酸序列。
[0620] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于内耳支持细胞选择性启动子和最小GJB2启动子的编码多肽的多核苷酸，(iv)用于在内耳细胞中表达的微小RNA
的miRNA调控靶位点(miRTS)，(v)3’UTR，和(vi)3’ITR。
[0621] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:40中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的
构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:90中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:96中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID 
NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:99中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0622] 在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:16中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的
构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:28中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:57中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID 
NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:91中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和
(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:92中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区
(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，
(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:93中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核
苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:94中的任何一种具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多
肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:96中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复
(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:97中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，腺相关病毒(AAV)颗粒(例如Anc80颗粒)包含含有以下的构建体：(i)5’反向末端重复(ITR)，(ii)5’非翻译区(UTR)，(iii)可操作地连接于启动子的编码多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸，(iv)3’UTR，和(v)3’ITR，其中启动子包含与SEQ ID NO:98中的任何一种具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性的核酸序列，和最小GJB2启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0623] 示例性的构建体组分
[0624] 反向末端重复序列(ITR)
[0625] 构建体的AAV衍生序列一般包含顺式作用的5’和3’ITR(参见例如B.J.Carter,in“Handbook of Parvoviruses”,ed.,P.Tijsser,CRC Press,pp.155 168(1990)，其通过参考以其全部结合至本文中)。通常，ITR能够形成发夹。形成发夹的能力可助于ITR自引发的能力，从而允许第二DNA链的引发酶非依赖性合成。ITR还在AAV构建体(例如编码序列，例如编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)整合到受试者细胞的基因
组内的方面发挥作用。ITR还可助于AAV构建体在AAV颗粒中的有效衣壳化。
[0626] 本公开的rAAV颗粒(例如AAV2/Anc80颗粒)可包含含有以下的rAAV构建体：编码序列(例如编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)和侧接5’和3’AAV ITR序列的相关元件。在一些方面，ITR为或包含约145个核酸。在一些方面，ITR为或包含约
119个核酸。在一些方面，ITR为或包含约130个核酸。在一些方面，使用全部或基本上全部的编码ITR的序列。AAV ITR序列可获自任何已知的AAV，包括目前鉴定的哺乳动物AAV类型。在一些方面，ITR为AAV2 ITR。
[0627] 本公开中采用的构建体分子的实例为含有转基因的“顺式作用”构建体，其中所选转基因序列和相关调控元件的侧接5’或“左”和3’或“右”AAV ITR序列。5’和左的命名是指ITR序列相对于在有义方向上从左至右阅读的整个构建体的位置。例如，在一些方面，当以有义方向上线性地描绘构建体时，5’或左ITR为最接近给定构建体的启动子(与多腺苷酸化序列相反)的ITR。同时，3’和右的命名是指ITR序列相对于在有义方向上从左至右阅读的整个构建体的位置。例如，在一些方面，当在有义方向上线性地描绘构建体时，3’或右ITR为最接近给定构建体的多腺苷酸化序列(与启动子序列相反)的ITR。以按照有义链的5’至3’顺序来描绘如本文提供的ITR。因此，本领域的技术人员将意识到，当从有义转变为反义方向时，5’或“左”方向的ITR也可被描绘为3’或“右”ITR。进一步地，将给定的有义ITR序列(例如5’/左AAV ITR)转化成反义序列(例如3’/右ITR序列)完全处于本领域技术人员的能力范围内。本领域的普通技术人员将理解如何修饰给定的ITR序列以用作5’/左或3’/右ITR或其反义形式。
[0628] 例如，在一些方面，ITR(例如5’ITR)可具有SEQ ID NO:8的序列。在一些方面，ITR(例如3’ITR)可具有SEQ ID NO:9的序列。在一些方面，ITR包括如本领域已知的一种或多种修饰，例如截短、缺失、取代或插入。在一些方面，ITR包含少于145个核苷酸，例如119、127、130、134或141个核苷酸。例如，在一些方面，ITR包含110、111、112、113、114、115、116、117、
118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、
137、138、139、140、141、142、143、144或145个核苷酸。在一些方面，ITR包含约119个核苷酸。
在一些方面，ITR包含约130个核苷酸。在一些方面，ITR(例如5’ITR)可具有根据SEQ ID NO:
52的序列。在一些方面，ITR(例如3’ITR)可具有根据SEQ ID NO:53的序列。
[0629] 5’AAV ITR序列的非限制性实例包括SEQ ID NO:8或52。3’AAV ITR序列的非限制性实例包括SEQ ID NO:9或53。在一些方面，5’和3’AAV ITR(例如SEQ ID NO:8和9，或SEQ ID NO:52和53)侧接于一部分编码序列，例如编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26
多肽)的所有或一部分多核苷酸。修饰这些ITR序列的能力处于本领域的技术范围内。(参见例如文本比如Sambrook等人，“Molecular Cloning.A Laboratory Manual”,2d ed.,Cold Spring Harbor Laboratory,New York(1989)；和K.Fisher等人，J Virol.,70:520 532
(1996)，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中)。在一些方面，5’ITR序列与由SEQ ID NO:8表示的5’ITR序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％、或100％同一性。在一些方面，3’ITR序列与由SEQ ID NO:9表示的3’ITR序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，5’ITR序列与由SEQ ID NO:52表示的5’ITR序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，3’ITR序列与由SEQ ID NO:53表示的3’ITR序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
[0630] 在一些方面，3’ITR序列与由SEQ ID NO:116表示的3’ITR序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，3’ITR序列与由SEQ ID NO:116表示的3’ITR序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
[0631] 示例性的5’AAV ITR(SEQ ID NO:8)
[0632] TTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCT
[0633] 示例性的3’AAV ITR(SEQ ID NO:9)
[0634] AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAA
[0635] 示例性的5’AAV ITR(SEQ ID NO:52)
[0636] CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCT
[0637] 示例性的3’AAV ITR(SEQ ID NO:53)
[0638] AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
[0639] 示例性的3’ITR(SEQ ID NO:116)
[0640] AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAA
[0641] 启动子
[0642] 在一些方面，本公开涉及包含可被用于调控(例如增加)编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸在细胞(例如内耳细胞，例如支持细胞)中表达的细胞选择
性启动子的构建体。在一些方面，构建体提供在一些细胞(例如内耳细胞，例如毛细胞)中与治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)表达相关的毒性减少。
[0643] 在一些方面，本公开涉及包含可被用于调控(例如增加)编码多肽的多核苷酸在细胞(例如内耳细胞，例如支持细胞)中表达的细胞选择性启动子的构建体。在一些方面，构建体提供在一些细胞(例如内耳细胞，例如毛细胞)中与多肽表达相关的毒性减少。
[0644] 在一些方面，构建体(例如rAAV构建体)包含启动子。术语“启动子”是指由酶/蛋白识别的DNA序列，其可促进和/或起始可操作地连接的基因(例如编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸)的转录。例如，启动子一般是指例如RNA聚合酶和/或任何相关因子所结合的并可由其起始转录的核苷酸序列。因此，在一些方面，构建体(例如rAAV构建体)包含可操作地连接于本文所述的非限制性实例启动子中一种的多核苷酸。
[0645] 在一些方面，启动子为诱导型启动子、组成型启动子、哺乳动物细胞启动子、病毒启动子、嵌合启动子、设计改造的启动子、组织特异性启动子、细胞选择性启动子或本领域已知的任何其他类型启动子。在一些方面，启动子为RNA聚合酶II启动子，比如哺乳动物RNA聚合酶II启动子。在一些方面，启动子为RNA聚合酶III启动子，包括但不限于HI启动子、人类U6启动子、小鼠U6启动子或猪U6启动子。启动子通常将为能够促进在内耳细胞中转录的启动子。在一些方面，启动子为耳蜗选择性启动子或耳蜗定向启动子。在一些方面，启动子为毛细胞选择性启动子或支持细胞选择性启动子。在一些方面，启动子为内耳支持细胞选
择性启动子。
[0646] 术语“组成型”启动子是指当与编码蛋白(例如多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽))的核酸可操作地连接时，在大多数或所有生理条件下使RNA在细胞中从核酸转录的核苷酸序列。
[0647] 组成型启动子的实例非限制性地包括逆转录病毒劳斯肉瘤病毒(RSV)LTR启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子(参见例如Boshart等人，Cell 41:521‑530,1985，其通过参考以其全部结合至本文中)、SV40启动子、二氢叶酸还原酶启动子，β‑肌动蛋白启动子、磷酸甘油激酶(PGK)启动子和EFl‑α启动子(Invitrogen)。在一些方面，启动子为组成型启动子。在一些方面，组成型启动子为CAG启动子、CBA启动子、CMV启动子、CMV/CBA增强子/启动子或CB7启动子。在一些方面，CMV/CBA增强子/启动子包含与SEQ ID NO:12或13具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸。在一些方面，CMV/CBA增强子/启动子包含SEQ ID NO:12的核酸。在一些方面，CMV/CBA增强子/启动子包含SEQ ID NO:13的核酸。在一些方面，CBA启动子包含与SEQ ID NO:10或11具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸。在一些方面，CBA启动子包含SEQ ID NO:10的核酸。在一些方面，CBA启动子包含SEQ ID NO:11的核酸。
[0648] 在一些方面，CAG启动子包含与SEQ ID NO:14或15具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸。在一些方面，CAG启动子包含SEQ ID NO:14的核酸。在一些方面，CBA启动子包含SEQ ID NO:15的核酸。
[0649] 在一些方面，调控和/或控制序列赋予细胞选择性基因表达能力。在一些情况下，细胞选择性调控和/或控制序列结合以细胞选择性方式诱导转录的细胞选择性转录因子。
[0650] 在一些方面，细胞选择性启动子为耳细胞选择性启动子。在一些方面，细胞选择性启动子为内耳细胞选择性启动子。在一些方面，启动子为细胞选择性启动子的特征片段。在一些方面，启动子为内耳支持细胞选择性启动子。
[0651] 在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和
OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[0652] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子选自以下中的一种或多种：GJB2、GJB6、IGFBP2、RBP7、GDF6、PARM1、GFAP、BACE2、DBI2、FABP3、KLHL14、MMP15、SPARC、TSPAN8、VIM、其衍生物或其片段。
[0653] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为GDF6启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为PARM1启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为MMP15启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为VIM启动子。
[0654] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为GJB2启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为GJB6启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为IGFBP2启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为RBP7启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为GFAP启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为BACE2启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为DBI2启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为FABP3启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为KLHL14启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为SPARC启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为TSPAN8启动子。
[0655] 在一些方面，其衍生物可包括修饰的亲本序列(例如天然存在的启动子序列)、亲本序列的一个或多个部分、亲本序列的片段等。
[0656] 在一些方面，启动子为内耳内侧支持细胞选择性启动子。在一些方面，内耳内侧支持细胞选自以下中的一种或多种：外侧大上皮嵴细胞和内沟细胞。在一些方面，内耳内侧支持细胞选择性启动子选自以下中的一种或多种：GJB6、IGFBP2、GDF6、PARM1、其衍生物或其片段。在一些方面，内耳内侧支持细胞选择性启动子为GDF6启动子。在一些方面，内耳内侧支持细胞选择性启动子为PARM1启动子。在一些方面，内耳内侧支持细胞选择性启动子为IGFBP2启动子。在一些方面，内耳内侧支持细胞选择性启动子为GJB6启动子。
[0657] 在一些方面，启动子为内耳感觉上皮支持细胞选择性启动子。在一些方面，感觉上皮支持细胞选自以下中的一种或多种：内柱细胞、外柱细胞、代特(dieter)细胞和内指状细胞。在一些方面，内耳感觉上皮支持细胞选择性启动子选自GJB6、IGFBP2、RBP7、GDF6、PARM1、FABP3、BACE2、其衍生物或其片段。
[0658] 在一些方面，内耳感觉上皮支持细胞选择性启动子为GDF6启动子。在一些方面，内耳感觉上皮支持细胞选择性启动子为PARM1启动子。在一些方面，内耳感觉上皮支持细胞选择性启动子为GJB6启动子。在一些方面，内耳感觉上皮支持细胞选择性启动子为IGFBP2启动子。在一些方面，内耳感觉上皮支持细胞选择性启动子为RBP7启动子。在一些方面，内耳感觉上皮支持细胞选择性启动子为FABP3启动子。在一些方面，内耳感觉上皮支持细胞选择性启动子为BACE2启动子。
[0659] 在一些方面，启动子为内指状细胞选择性启动子。在一些方面，内指状细胞选择性启动子选自以下中的一种或多种：IGFBP2、GDF6、FABP3、BACE2、其衍生物或其片段。在一些方面，内指状细胞选择性启动子为IGFBP2启动子。在一些方面，内指状细胞选择性启动子为GDF6启动子。在一些方面，内指状细胞选择性启动子为FABP3启动子。在一些方面，内指状细胞选择性启动子为BACE2启动子。
[0660] 在一些方面，启动子为齿间细胞选择性启动子。在一些方面，齿间细胞启动子为IGFBP2、其衍生物或其片段。
[0661] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为GJB2启动子。在一些方面，GJB2增强子包含与SEQ ID NO:65具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，GJB2增强子包含SEQ ID NO:65的核酸序列。在一些方面，GJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，GJB2最小启动子包含SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0662] 在一些方面，启动子衍生于GJB2启动子并且具有1000‑1050个核苷酸的长度。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为GJB6启动子。在一些方面，GJB6启动子包含与SEQ ID NO:16具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，GJB6启动子包含SEQ ID NO:16的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于GJB6启动子并且具有700‑750个核苷酸的长度。
[0663] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为IGFBP2启动子。在一些方面，IGFBP2启动子包含与SEQ ID NO:57具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，IGFBP2启动子包含SEQ ID NO:57的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于IGFBP2启动子并且具有1500‑1550个核苷酸的长
度。
[0664] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为RBP7启动子。在一些方面，RBP7启动子包含与SEQ ID NO:28具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，RBP7启动子包含SEQ ID NO:28的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于RBP7启动子并且具有1050‑1100个核苷酸的长度。
[0665] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为GDF6启动子。在一些方面，GDF6启动子包含与SEQ ID NO:90具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，GDF6启动子包含SEQ ID NO:90的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于GDF6启动子并且具有1150‑1200个核苷酸的长度。
[0666] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为PARM1启动子。在一些方面，PARM1启动子包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，PARM1启动子包含SEQ ID NO:40的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于PARM1启动子并且具有1300‑1350个核苷酸的长度。
[0667] 在一些方面，构建体包含两种或更多种启动子。在一些方面，第一启动子选自GJB6启动子、GDF6启动子、IGFBP2启动子、RBP7启动子、PARM1启动子、GFAP启动子、BACE2启动子、DBI2启动子、FABP3启动子、KLHL14启动子、MMP15启动子、SPARC启动子、TSPAN8启动子、VIM启动子及其任何组合。在一些方面，第二启动子选自GJB2启动子或最小GJB2启动子。
[0668] 在一些方面，第一启动子为GDF6启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，第一启动子为PARM1启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，第一启动子为MMP15启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，第一启动子为VIM启动子
和第二启动子为最小GJB2启动子。
[0669] 在一些方面，第一启动子为GJB6启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，第一启动子为IGFBP2启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，第一启动子为GDF6启动子和第二启动子为最小RBP7启动子。在一些方面，第一启动子为GFAP启动子
和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，第一启动子为BACE2启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，第一启动子为DBI2启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。
在一些方面，第一启动子为FABP3启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，第一启动子为KLHL14启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，第一启动子为
SPARC启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，第一启动子为TSPAN8启动子和第二启动子为最小GJB2启动子。在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含GJB6和hGJB2最小启动子。在一些方面，GJB6启动子包含与SEQ ID NO:16具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，并且hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％的核酸序列。在一些方面，GJB6具有SEQ ID NO:16的核酸序列和
hGJB2最小启动子具有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0670] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含IGFBP2启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，IGFBP2启动子包含与SEQ ID NO:57具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％的核酸序列。在一些方面，IGFBP2具有SEQ ID NO:57的核酸序列和hGJB2最小
启动子具有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0671] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含RBP7启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，RBP7启动子包含与SEQ ID NO:28具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％的核酸序列。在一些方面，RBP7具有SEQ ID NO:28的核酸序列和hGJB2最小启动子具
有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0672] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含GJB6启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，GJB6启动子包含与SEQ ID NO:16具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％的核酸序列。在一些方面，GJB6具有SEQ ID NO:16的核酸序列和hGJB2最小启动子具
有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0673] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含PARM1启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，PARM1启动子包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％的核酸序列。在一些方面，PARM1具有SEQ ID NO:40的核酸序列和hGJB2最小启动子具有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0674] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为BACE2启动子。在一些方面，BACE2启动子包含与SEQ ID NO:92具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，BACE2启动子包含SEQ ID NO:92的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于BACE2启动子并且具有1400‑1450个核苷酸的长度。
[0675] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为DBI2启动子。在一些方面，DBI2启动子包含与SEQ ID NO:93具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，DBI2启动子包含SEQ ID NO:93的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于DBI2启动子并且具有1450‑1500个核苷酸的长度。
[0676] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为FABP3启动子。在一些方面，FABP3启动子包含与SEQ ID NO:94具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，FABP3启动子包含SEQ ID NO:94的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于FABP3启动子并且具有1750‑1800个核苷酸的长度。
[0677] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为KLHL14启动子。在一些方面，KLHL14启动子包含与SEQ ID NO:95具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，KLHL14启动子包含SEQ ID NO:95的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于KLHL14启动子并且具有1250‑1300个核苷酸的长
度。
[0678] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为MMP15启动子。在一些方面，MMP15启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，MMP15启动子包含SEQ ID NO:96的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于MMP15启动子并且具有1000‑1050个核苷酸的长度。
[0679] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为SPARC启动子。在一些方面，SPARC启动子包含与SEQ ID NO:97具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，SPARC启动子包含SEQ ID NO:97的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于SPARC启动子并且具有1000‑1050个核苷酸的长度。
[0680] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为TSPAN8启动子。在一些方面，TSPAN8启动子包含与SEQ ID NO:98具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，TSPAN8启动子包含SEQ ID NO:98的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于TSPAN8启动子并且具有1200‑1250个核苷酸的长
度。
[0681] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为GFAP启动子。在一些方面，GFAP启动子包含与SEQ ID NO:91具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，GFAP启动子包含SEQ ID NO:91的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于GFAP启动子并且具有650‑700个核苷酸的长度。
[0682] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为VIM启动子。在一些方面，VIM启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，VIM启动子包含SEQ ID NO:99的核酸序列。在一些方面，启动子衍生于VIM启动子并且具有1050‑1100个核苷酸的长度。
[0683] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含BACE2启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，BACE2启动子包含与SEQ ID NO:92具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％的核酸序列。在一些方面，BACE2包含SEQ ID NO:92的核酸序列和hGJB2最小启动子具有
[0684] SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0685] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含DBI2启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，DBI2启动子包含与SEQ ID NO:93具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％的核酸序列。在一些方面，DBI2启动子包含SEQ ID NO:93的核酸序列和hGJB2最小启
动子具有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0686] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含FABP3启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，FABP3启动子包含与SEQ ID NO:94具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％的核酸序列。在一些方面，FABP3启动子包含SEQ ID NO:94的核酸序列和hGJB2最小启动子具有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0687] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含KLHL14启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，KLHL14启动子包含与SEQ ID NO:95具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％的核酸序列。在一些方面，KLHL14启动子包含SEQ ID NO:95的核酸序列和
hGJB2最小启动子具有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0688] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含MMP15启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，MMP15启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％的核酸序列。在一些方面，MMP15启动子包含SEQ ID NO:96的核酸序列和hGJB2最小启动子具有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0689] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含SPARC启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，SPARC启动子包含与SEQ ID NO:97具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％的核酸序列。在一些方面，SPARC启动子包含SEQ ID NO:97的核酸序列和hGJB2最小启动子具有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0690] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含TSPAN8启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，TSPAN8启动子包含与SEQ ID NO:98具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％的核酸序列。在一些方面，TSPAN8启动子包含SEQ ID NO:98的核酸序列和
hGJB2最小启动子具有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0691] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子包含VIM启动子和hGJB2最小启动子。在一些方面，VIM启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列，和hGJB2最小启动子包含与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％的核酸序列。在一些方面，VIM启动子包含SEQ ID NO:99的核酸序列和hGJB2最小启动子具有SEQ ID NO:86的核酸序列。
[0692] 示例性的CBA启动子(SEQ ID NO:10)
[0693] GTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGG
GCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTT
ATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
[0694] 示例性的CBA启动子(SEQ ID NO:11)
[0695] GTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCG
GGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTT
TTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
[0696] 示例性的CMV/CBA增强子/启动子(SEQ ID NO:12)
[0697] GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAA
TAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAAC
TGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCC
GCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTA
TTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGT
ATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGC
GGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCC
TTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG示例性的CMV/CBA增强
子/启动子(SEQ ID NO:13)
[0698] GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATA
ATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGC
CCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCT
GGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACC
ATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTAT
TTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGC
GAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTAT
GGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
[0699] 示例性的CAG增强子/启动子(SEQ ID NO:14)
[0700] GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAA
TAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAAC
TGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCC
GCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTA
TTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGT
ATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGC
GGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCC
TTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCT
TCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGA
GCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCT
GCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGT
GTGCGTGG GGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGT
GCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAG
GCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCA
CCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCG
TGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAG
GGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTG
CGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTA
GCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGC
CGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGG
GTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAG
[0701] 示例性的CAG增强子/启动子(SEQ ID NO:15)
[0702] GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAA
TAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAAC
TGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCC
GCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTA
TTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGT
ATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGG
GCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTT
CCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGC
CTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGT
GAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGG
CTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGT
GTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGG CGCGGCGCGGGGCTTT
GTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAA
AGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTG
CACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGC
CGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGG
AGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCG
TGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTC
TAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCC
GCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCG
GGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACA
G
[0703] 在一些方面，启动子为如SEQ ID NO:86所述的GJB2最小启动子。在一些方面，启动子与SEQ ID NO:86具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
[0704] 示例性的人类GJB2最小启动子(SEQ ID NO:86)
[0705] AAGCTCTGAGGACCCAGAGGCCGGGCGCGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTTTCCCAGTCTCCGAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGCCACGGCGGGAGACAGGT
[0706] 在某些方面，启动子为如SEQ ID NO:90所述的GDF6启动子。在一些方面，启动子序列与由SEQ ID NO:90表示的启动子序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，启动子为包含SEQ ID NO:90的序列的GDF6启动子序列。
[0707] 示例性的人类GDF6启动子(SEQ ID NO:90)
[0708] CCACAGGTAACTCCGTCGGCGTCCACAGGGGGGCAGGAGATACCAT ACTGCACAGTTGTACGTCTTCCATCTGTTTGGTGTAGAAAAATCTAACCACTACAAGAATGCCACGGGCACTGTGGCAGACAGAAGCAGCGCTACGCC
GCATCGCCTTTCAGCGTGCAGGCCCAGGAATGAGCGAGGCAGTGGGCGGGGAAGACAGGCACGGGGAATCTGGGGAC
AGATAAAGGAAACTCGTGATGGGGCGAGGCTGGGCTGAAGAGAAACAGATTGGGGTAGAGCTGCAAAGGGAGGGGTC
CACTGGAAGGCGAGGGGGGAGGCCGGGAAGAGAGAGGGTGGGAAGGCAGTGTGAGATGGGAGGGCAGTGTGAGAAGA
AAAGCAGGCTGGGGAAGAGGGATTGGAATGCAGAAGGAACTTGGGGAAGGAGGAAGTCCTGCAGGCGGGAGGGAAAG
AAGAGAGGGGGAGCAGCTAAAGTCTGCGTCAGAAGAGGTTGGGGACTGCGAGAGGAGAGGCTGGGGCCTGCAGGGGA
GCGCAGCAGCTTTTAGCATCGATCCAAACTCTAAAGACTCGTGGCCTTTGCCTGACCTCGAGGGTCGGGAATAGACG
CCTGTCTTTGTGGAGAGCGATACCCAACCGAGAAAATGGGGCTGTTCCGAGCTGGGCCCTGCGCCTGGCCCAGGGCG
AGGCTTCTCTGGCTCCGGGCTGGCCCCTGAGGGGCAGCACGCAGCCTGCAGCAGAGGCGCCTGCTCCAAGCTGTCTC
TTGGGGGCGCCGCCGCCGCTTCCCTCCTCCGGGGCCGCTCGCTCCCAGGAAAGTGGAGGCGGCTGGCGAGGACCGAG
AGCCGGGGCCGCGCTGCGGAGGGACCACACCTCCGGGAGTTCGAGGGGGACCCTGGCGCGGCGGGCCAGCCTTTCGG
GCCGGCAGCGCCCGCCTTCCCCCGGTCAGCGCTTGCGGCCCGCGCCGCGCGCACCGCCCGGCAACCCCGCGCGCGTC
CCGCGGGGGCGCTGCGTCTTCCTGCCACACCGGCGCACCGCGGCCCCTCTCCCCCACACCTCCGGCCCGCACCACCC
GGCTCTCCTCCCACCCTCCCCACCCCTCCTCTGCCCTCCCTCCCCATTCCTCCCCTCCCGGCGAGGGGCGGGAGGGG
GCGTGGCGGGGCCGGGGTTTGTGTGGCTGGGACCCGGCTCCTC
[0709] 在某些方面，启动子为如SEQ ID NO:57所述的人类IGFBP2启动子。在一些方面，启动子序列与由SEQ ID NO:57表示的启动子序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，启动子为被包含在SEQ ID NO:57内的人类IGFBP2启动子序列。
[0710] 示例性的人类IGFBP2启动子(SEQ ID NO:57)
[0711] AAGAAACTTGCCCGAGTTTACACAGCTAGTAAATGGTTGCATTAGTCAGGACAGCTAGCCTATATTACAATAACAACCCTCTCAAATCCTAATGGCTTAAAACAACAGAGGTTTAATTTATACTCATTAGCTGTTCAAGGCAGG
AGGCTCTATTCTCTAATCCATACAGTCACTCAGGATCCAGGCTGGTGGAGACCCTG CCATATTGTAGCCTCACCA
TTTAAAACATGAAGAAGATAGAAAGTGAGGAGTCATGTAGGTTTTGTTCCGTTGCCTCAGGCTAGGAGTGACAGGTC
ACTTCATCTCACTCACAGCTCACTGCCCACAACTAGTCACTTGTGACTGTGCGAGTTAAGCTTCTGTGTGTGAAGGA
AGGAAAAGAGAATGGGATAAAGGTGAACATCAGCAGGCTCTACCACAGTAGTTTGAACCAAGACTTGAGCCTAGGTC
ATGTGGCTTCAGAATCTTTGCTCTTAATCACACTAAACAGCCTCTGTAAGTCATCTTTCCTTCATCCAGTGCCTAAG
AACATGCAGTCCAATGCCCTCATCCTTCAGAAGAACTTGAGTGAACTCAGAGAAATTGAGTAGAGTGCCACAGCATG
CCCAAGGCCACACACCCTGAGGTTGGCAGTAGGTCCTGAGTTAGAGTTGTCATTTCTTGGCTCCCCTGGTAGTAGTG
GAAAGGTAAGGTTTTGACATACTAGTTGGATGACCACGGGCAGGTCACTTAAATTGTCTAAGCATCGTTTGACCCTT
GTAAGAATTAAATGAAATAGCACCTGTAAAAGTGTCTGCACGGACTTACTGCTGTTAGTTTTGTTCCTTTCTTCCTG
TTGTCACTGCACTTCCCTGCCTGTTACCCAGGCCATGCAGACCAGCCAGGCCTTCGACTTACAGTGCGGATAAGATT
CCAAATCTCCACGGCTGGTTTCCATGCTTTCTTCCAGGCTTCTGAGGACCCTGTGCTCTGGTTTCTTCTATTTCTTT
TCTATTACTTTTCTGTTACTCTTGAGCACACTTGCTGGAAGCAATATGCATCCAGTTCTCCCTCTCTTGCCTCATTA
CACTTTGCAGAACAACTCCAATCCCTTCCAACCAAGTAGTCCCTTTGAATTTCTTGTCACCCAAGGAATCTCTCTGA
CAGGGGTCTTTGTTAGGGTCACACCCCAGGAGATGGTTGATTATGGCTGAGTCCAGCCTGGAATGATGGGGGTTGGG
GGCAGCTTGGGTAGATGACTCAGTAAATCAAACAGAACAATGAAAGGAGGTCATGCTTGTCCATCTGCATTATTGAA
GACAGCCATAAATGGCCTTACCCCAGAGCGGGTCTGTCACACCTGGAGAGCTGATCTGACCTCTCCAAGACCCCTGC
AACTGAGTGTTCTGGGATCTGTCCTGCAACAAGTGCCTCGAGATTTGTAGGTGGGGGCCCAGAGGGAGGGGGTCTGC
AGACGAAGGGGGCAGGTTTTGCGGGGCACTTAGGGTTCTCATAGGTTGTAGTCACGAGCTCC
[0712] 在某些方面，启动子为如SEQ ID NO:28所述的人类RBP7启动子。在一些方面，启动子序列与由SEQ ID NO:28表示的启动子序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，启动子为被包含在SEQ ID NO:28内的人类RBP7启动子序列。
[0713] 示例性的人类RBP7启动子(SEQ ID NO:28)
[0714] CCCATGGCTCTGTTAAAATCAAAGAAACATCTTTTCCAACAGCCCTTT CAAACTCCTCATCGCATCTCACTGGCTGATTCAGTCATTTAAACCTGCTTCTCCCTAAAGCTGATCACTGGCTAAGCTAATAGGGTTTCCGGGATT
GGTTTAGCCTGATACTAATCCAGGTCTACCTTCAGGAGCCAGACCAAACTGCCTATTGGCATTGCATTCTTGCAGTA
GGGAGGGGAGGTATGGATGGTGTGGAGTCCACCACAAGGTCCATGCCAGTCTTTGCTGAACCAGCATCAGACTCCAT
CAAGCAACAGATGAGAGGTTCCATGATAAAGTGGCCCTCAGCAATCCCCATCCATTGCTGTCTAGGAAGAACAGTGC
TTGTACACAGGTTTAGGACCTCAGTCTTGGCTGTAATCTTCTGGTTTACTTTGCCAGCACCAAACAGAAGGAAAGAA
AGGGCTCAAATTTGACCAAATAAATTATGCTTCTCCTTCCAGAGATAACCTTGAGTCCTGTCTAGGAAGATATTAGA
ATTGTAAAGAAAAAAAAAATTACTCCTTATCCTATGGCAAGTGGAGTCTATGTCTACTTCAGCTGAAATTAAATCCT
GTCCATAATAGATGACCCTTGCTCAAGCTGGCCAGAAGCCATACCAACCAGCACGAAGGTTAAAACTATTATTAGTT
TTTTCTGTGATTTTCATTTTCAGGCCAAGTTTTAGAACAATAAGATTTTAAGAATAGGAAGTAAGTAAGATTTCTGC
ATATCCTGTTCTCTTAGTCAGCTGAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTAGTCCTAACTCAGCCTCCCAAAGTGCTGGGAT
TACAGGCGTGAGCCACCGCACCAAGCCTGGAATCTATGTCTTACAGTTATGAGAATCAACAGCTAGCTCATTATGGG
CAAGGTGATGTCACTCTGGCTTCTCAATGAAAATGGCATTTCTCCCTTGGAAAAGGTCATAGCCAGTCAGTCAGTCA
GTCACGGGAGCGCAGCGGCTTCTAGGGGTGAGTGGGACCCACGCGGCCCCACCTGCTCCTCCCGCGCGCGGCCCCAC
CCCCCTGCCCCGCCCCGCCTGGTTTATAG
[0715] 在某些方面，启动子为如SEQ ID NO:16所述的人类GJB6启动子。在一些方面，启动子序列与由SEQ ID NO:16表示的启动子序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，启动子为被包含在SEQ ID NO:16内的人类GJB6启动子序列。
[0716] 示例性的人类GJB6启动子(SEQ ID NO:16)
[0717] AAATAGCTTCCAACGTTTCCACCCCACCAGCCCTTGCACCACTCCCTGTACTGGCCCTGAGCTTTCTAGTCTTGACTGAAAAGCGGGGAGGCAATGTGGTCTCTCCTGGTGCACTGTCCCGAGGAAGGCCTGCTCCGCTTCCCC
GGAGGAGTCTTCAAAGGATGGAGGTAATTAATAAAAACAACCCCTGTACCTCCTCTAAGTGGTCATTAATTAATAA
AGAACCTCCAGGCTCCTATAGGAGAGGTCTGTGCACCCCGCGGGCTATGAGAAGGCTGGATCACCCAGAAAGACTG
AGGATG TGTCCTGGCAAAAACACAGCCTGCCCCTCACACTGCTCCCCACGGGTGCACTAGGGAGGAAGAGTTCCC
TCGAGGGCCTGAGCAGGCGCCCCACACCTGCACCCGTGCAGAGGGGGCTGGGCCCGCCCTCTGCGCTCCCGAGGGAG
AGCCCTACCCCCTGCATCCCCGGTACCCCGTTCCCTCCAAGGGCCGGAAAGAGGGCCCCGCGCACTGTGCACTTCTT
AGGGGTCCCCCACCCTGCGCCCCCGCCACGGGAAAAAGGTCCCCGCTCTGCGCATCCGGCCCCGGAGGGACAGCCCC
GGTCCTGCACTCCTTGCTCCTCAGGGGGACGGTCCGCGCCCAGCGGCTAGTGCGCCCCGGGTAGGTGGGGGCGGGGG
GCTCGTCGAGTGACAGCGCTCGCCTCCCGCAGCCCGCCCGAGCCGCGTCAGGGCAG
[0718] 在某些方面，启动子为如SEQ ID NO:40所述的人类PARM1启动子。在一些方面，启动子序列与由SEQ ID NO:40表示的启动子序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，启动子为被包含在SEQ ID NO:40内的人类PARM1启动子序列。
[0719] 示例性的人类PARM1启动子(SEQ ID NO:40)
[0720] TGTACAGGAGATAGTCAGGGAATTAGTAATTTTCAAAGAGGTGACTTTGAATTCAAACTTAAATATCATCTTCAGCTGAAACAAAGAAGGGGTGCAGTTATGAGGAAGTGACCAGGTAAAGCATGGCAAACAAAGGTAAAGTTT
GTTATGCGTATTTAAGTCAGAGCCCTCTCCATTGATAAGAGTTTCCAGTAATTTAGTGCCATCCTTTTCTTGCTAT
AGAGTTCTCGTCTCTATCTGAGCACGCAAAAATAACATGCTTTCTTGCTTTCTTGAAGTTGGGCATGGCCATTGAC
TTGCCTTAGCCCATATTTTTCTGTGAAGTGGTCTTCAAAAACCTATATTTCTGCCATAGAGTCACTTACTTAACCT
GCCCTATTTAAAGGGGCTAATGCCTGATAGAATGTCGCTGCATAACTCCATCTGTGTGTGGTCCCTGCATCCATGA
CAACCAAAACCCAGATGCAGAAATTGTTCCTAATCACATAGATTACCCTAGAAACCGGAAGGGCCTTGAAGTCAAA
AGCATTCAGAGAACATGCTGAACAAATTGAATTTGCAGTTTATCTGGCCAGGGAGGATGGAGAGGGGATGGGCACT
TGGTCTGAGTATTTTTTGTTTCTCATTCCAACAGAAATTACTAGATTTACCAAAAAATCTACAAGTGGTAGTGTGA
TAGAGTCAGGCAGAGGAATTGACCATAGATAAGGTGCTCAGGACTCCTAGAGTCAGCTTCTGGTATGTGAGAAAGA
AGTGAGAACAGAGCCCATGGCATATGAAGAAGATATTACAGAAAAAAGAAAGCTGCCTTCCACGCAAATCATTTCT
TTACAAAGGCTTGTTAACTCCTGCAGTGCCAAGAAGCTGAATGCAGCGGCAGACATCCTGGTTCGGGCCCCAGGAA
GCTCAGC CGGGTTTAATGTGGATGAGGGTTTAATGATGTACACGCAGAAGTGTTTTGACAAATGAAGAAGGTCCT
CATTCTTGGAACATGTGCCGGTTCTCCGAGGGAACTCCTAAAAGGCTGTAAGCTCATGTAGGAAAAGCTGAGCTAGA
TTCCTAAGGGCAGAGATGTGCTCACATTTCTTTGCATCCCTAGTTCCCAGCACAGTGCAAGGCGCTGCAAACATTTG
CTGAACCCAGGGTCTCGTGTCTTGACTGTCCAGCAGAGGCCGCTCTGGGCCGGGGCTCTCGGGACCTGAGGGCTGAG
AGAAGGAAGGCCAGGGGGTGGCCCAGTCATCGCCGCGGGGCCCGGGTGGGAGGGGTTTGGCAGCGGCAGGCGCGGCG
GCGGCGGCGGAGGCGGAGGCGGCCCCGGG
[0721] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为BACE2启动子。在一些方面，BACE2启动子包含与SEQ ID NO:92具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，BACE2启动子包含SEQ ID NO:92的核酸序列。
[0722] 示例性的BACE2启动子(SEQ ID NO:92)
[0723] TGTGCTGCGAGGGCTTCATCTCCTAAGCACTAAATGCTAAATTCCCCCTCCCACGCCCATCGCCACTGTCCTCACGGATCCTCGCAGCAGCTTCCCAATCGGTCTCCCTGTCTCCAGCCTCACCACCCCCAACTAAGACCATTCAT
GAAAACAGAGACAACCAAGGAGACAGTCACCCAATGCTGTCCCTTCAGCTTGCATTATTTTCTGACAAGACAGCTCT
GCCATCCATGGAAGCCTGTGTTTGAAGATCTCTGACATAAAGGTCCCTTGCAGAGCTAGACGTGATTCTAAAATTGG
GAACACAGGAATAAAAATCAAATCTTGAGTAGAAGTAGCTGAAAATTGCAGTGATTCGGGGAAGCTTGGCTTCTAAC
TCCCCACTGTTTGAAGATGGGCTTGTTTGTTTTTTAAAACAGCCAACATAATTCAGCTGGAGGAGGTACAAAGAATT
TTCTATTCCTTGTTTCTGTAGAAATCGATGGACTTTAGCTTGTCTAATTGTCCCCCCTGCCTTTAGTATCTAAAATA
AAATAACCCTCGTTGCTTGCATTACTCAACGCATTTCTGCGTCTTGGCGTCTATGGCTAAACGAGTATTAATTAGAC
AGTCCGCAGAGAGCTGGCTGGGGATAGAAGGGGAGGTGGGGGAGAAGGGCAGGGATCACAGCAGGGTGGACTCGTGG
CCCTGATTTGGGATCCTGACAGCAACTTACTAGGTGGCCTGAGGGCTGGGTGCCAGGGGAGGCAGCGGGTTCCAGTA
GCATCTGACCTGCATTAGGGACAGGGGCGCGGCGGAGGGGGCGAAGGGGGCGGGGGTGGGGGGAAGGTGGCTGGGGT
GAAGCCCAGCTTCGCAGCTAGCTGTGGGCAACAGAGGGAGTAAGGGGGGGCAATGAGGCTGGGGCCAGGCGCCAGCA
GCAGCCACGCCCCCCACCTCCCCCGATTTTTAGGGAAAATTCTCCAAAGCTCTCGCATCCTCCTCTGCCTCCTTCCA
CCCTCCACCCTCCCAGCCTCCACTGAGACCTCTTTAAAACCACCCAGGGGCCGCCGGGGGATGAGGCCGGGGAACGG
GCTGGACTGAGGGCGGGGGCTCGGGGGCAGCGGACGGGAAACGCCTCGAAAGCAGCCAGACCCGGCGACTGAAATGA
GGCGGAGGAGCTTGGCGAGGGGAGGCGCAGGCTCGGAAAGGCGCGCGAGGCTCCAGGCTCCTTCCCGATCCACCGCT
CTCCTCGCTGACCTCCGAGTCACCCCCGGAAGCTCCCGCCACTGCCGGGCGAATAGACCCCCGCGGACCCCCAAGCG
CGCGGGGCCGGGGCCCTAGTTCAGGCCCTCGCTGCCCCTTTAAGGGTTCTCGAAACTTTCCCCCCGGTATCAGATGA
GCCTCGTCACATCCGTTGGCCGTGGC
[0724] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为DBI2启动子。在一些方面，DBI2启动子包含与SEQ ID NO:93具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，DBI2启动子包含SEQ ID NO:93的核酸序列。
[0725] 示例性的DBI2启动子(SEQ ID NO:93)
[0726] GAAGAAACCTGCATTTCTTACACTTCAGTGTACTTTCCCCATATTTAACTCCAAGATTTTTGTTAATTTGTTTGGTTTTCCTTTCTCAAACAAAATTATGCTCAGACTGAAAACCCTAGATTTGTTCCCTATTGCATCTTCATT
TCTTCCCAAACATTCCATAAAACGTGACCTACATTAAGTTAGCAAGTTAAGTCTGAAAGCGTCTACCTTCCCTGGG
GAGGGGGAAGGTGTAGGCAGGGCAGAGATTTGTAGTCCAGCCCTCTTGCCACAAATTATGAATTAGAGAGGAATGA
CTTTGCTTTTTTAATGATCTCCAGAGAATTTTCCATCATTTCCCTCTCTTCACCCAGCTCCTTTGCAACCACTGCC
AGAGAAGTCTTCCTTTAGCTTCTTAAACATCGATCCTAAAACACTTCCAGACACCTGTGCTGCTCCTTTCAGTTCC
CATGGAGATTAGGCTGTGTAACAATCTCGCAAAGACGTTCCCCTCCGTCTCCTCATCCTCTTTTCAAACCCTTTTA
CGATTTCCCATCTCACTCAGCATGACAGTCAAAGTCCCTGTGATGGCCAACTTCTGCATCACCTAGCCAGTCTGCC
ACCGCCAAAACTCTCCAGCCTCATCTTACACTTGTTCTCTGCTTGGAATCTTCCCTCCCCTCCTTGAGGAACTTTC
TCAAATGTCACCTTCCCTCAATACTCCCCCTCCTCCATTTAAAACTATAAACTTCCAACTCTCTAAGCCCCTAAAG
TACTCTATATTTAACTTATTGTATAAACTACTGTCCCTACTTGTAAGTTCCAAGATTGCAGGGATTCACCCGCTTT
GTTCACTGCTGTCTGCCAAGGTCTAGAACAGTGCAAGTTACCCA ACAGGAGTTCAATAAACAGCCATTCATTTAA
CAAATATTTGCTGAGCACTTCGTCCCGTCCAAGTTTGTTAAATCAAGACAAATAAGACACCGTCCCTGCCTTTAACG
CACCAGATGGAGAAATGCACCACAGACATAAATGTGCAATACAGGCCTGACACTACGGCCACAAGCAAGTCAAAGAA
CGTGCCAAAAGTTCAGAGGAAGAAGCCTCGGCTTCGCCTTTCGGGAGACCAGTCCAGCTTTCCACCATCACGCTGCT
CATCAGGGACCATCTCCGGGGGTCTCCTCTAGACCCCAAGGGAGGAGCGGGTCCCGCCCGCCATTCCCAGGTCTCAG
AGTTTACTTGTCCAGAGATGCAACTTCCGGCCTCTTCAGGCCGGGCAAGATTTAAGGAAAGAAAAGAAACATAAGGA
CCTCCGTTCTTCGGTCTCCGTCCCCTCCCCTTCCCCCGCGTGCCCCACCTGTTCCCGGCGTCCCCTTCGGCTACTCC
CGGCGTTTGCGCAAGCGGTCCCACGTGGGCTCGGGCGGGGCTAGCGCCGCGGCGGGGGCTGGGCACGCCCCTAGCGC
ATAGCTGGCTTCTGATTGGCTTTCC
[0727] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为FABP3启动子。在一些方面，FABP3启动子包含与SEQ ID NO:94具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，FABP3启动子包含SEQ ID NO:94的核酸序列。
[0728] 示例性的FABP3启动子(SEQ ID NO:94)
[0729] TACCATTCTGCCTTTCACCTGATGTTGCTATCCTCCTCCCTCTTGTTTCCTTCCACCCATCCTTTCCCTCCCACATTACTCTCTTATCCCACCCTATTTTACAACCAGTAGCCTAGGGAAAAGAGCATAGCTCAAATGAGGAAG
AAGGCAGGACAGGCAGTCATGGCTTAGCTGGACTGAGCTGCAGTGCTTCTCCTTCTGGGGAAGGGGGTGCACTGTC
ATCTGCTACTGACACATCCCTCCAAGGCACTCAGCCCTGCAGGGAGCAACCTGATTCTATGACTGACATCTAATCT
TCACATTCACCTTGCAGGAAGGCAAGAAGTGATCCCAGCCTCCAGATGGAAAGATCAAGGCCCAGAGAAGGTCAGT
GGTGGTTGGAGGCCTGAGGTCACACAGCAGCCAAGTCTGGAGTCACTAGTCAAGGTGACCTTGACTAGCCACCCCA
CCTCCCCTTCCCTGCCCCACCATGGCCCTGGGAGATCTGTTGTCCTGTGAGGGAAAGGGGCTCCAGGCTGGGCTGC
ATCTGAAGCCCCTAGATCCAGAGACTTCATTTCTTAGGCTATCTATAAAATCCACCTTCCTTTCTTTTCCCAGGAC
CCCCATACCCTGCTCCCAGCATCGTCTGCCTCAGCTAAGCCATGGGGATTGAGAGACCAGGCCTGGTGCCCAGATA
AACTGACCCTGGGTGAGGGGACAGGGGCCCAGAATGGGCAGGTAGAGACTGAATACTGAAGAAGAATCCTCTGGAG
TCTGTTAG CAGAAGCAGATGGGCCTTGCCTGACTATTGGCAGGCGGACCTGGTGGTCAGACCTCAGTGATCCTCA
GGGACCAGTGAATATTTCAGGCTGGGGCTGAGCATCACCTGCTCCCTTGGCCCCACTTATAGGGCAAAGGGGAGTCT
ACCAGCCTACTCACTGATGACAAACTGGAAAAGTTTGTCCTGTCTCTGCTCTGGCCCCACCTCGCCCTCTCCCCTAC
TTGGAAGTTCCTTTCCTGAACCACTGACTGCCAAAGCTTGAGGGATTAAATAAATCATCTGGCCCAACCTCCTACCA
TAGAGTTGGGAACACTGAAGAAAAGAGACTGGCCCAAGGTCACAGAGAAGGCAGGGTGAACACTGTCACAGGGAGAG
CCAGTGTAGAATAATGGTTAAGCCACGCAAGCTCTAGAACCACTCTATCTGAGTGCAAATCCTGGCTGTCATCTGGT
ACTTGCTTCCTGGAACACATCTGGCCTCAGACTCCTGAGGCCAAGACACACTCCCTGCCCTAAGACTTGCTGGTTCT
ATGGCAGGCAGAGGCAGAAAGAGCCCCACCATCATTCCCAGCAAATGGGAAAAGTTCCCAGTTGCAGATATTAGGGG
TGGGATGGGGCGGGGGTAGTCAGCAACCATAGACTTAGACCCTGAAGAGGCAAAAAAGGAGGGCCATGTTCTTGGGT
CAGCAGAGCTTCTACTCAGCTTCTTCAGCCTCTAGCTCTTTCCTGGTGCTAGTAGCACATTCTCTAGTGGAGGCATC
CAGATGGCAGGGAGGGTCCAGGAAACAGCTGAACATGCTGAGCAGGCCTCCCTTGTCCCCGCTCCCCATGGCCCCAT
GGATCATCCGGTGCTGCAGCTCATCTCATTGGCTGGCTTCTGGTTACTCATCTCTCCTCTTCTCCATCTTCCCAGCC
TGTGGTTGCCGTGGAAACATAGAACAGTGACCTCACCATAGGATGAGGGCTGGGGAGATGCTGTTCTTGGCAGGCGC
T
[0730] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为KLHL14启动子。在一些方面，KLHL14启动子包含与SEQ ID NO:95具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，KLHL14启动子包含SEQ ID NO:95的核酸序列。
[0731] 示例性的KLHL14启动子(SEQ ID NO:95)
[0732] GAAACAGCAGCCATTGATGTAGCTCAGGGTTCTGTGGATCTGTCATTTGGAGCATGTTGGTTCTCCTGTCTCAGCTGGGCTCATTCATGCATCTGAGTTCAGCTATTGGGCAATCTGGGGAATGTTTTGTCCATGTGATGTGTC
ATCTTCTACCAGGCTAGCCTGGGCTTCATCACATGGTATCTGGCAGGGCTCTAAGAGGGAGAGTTGAAACACACAA
GGCCTCTTGAAGCTTAGACTCAGAATTGGCACAAGGTCGCTTCTGGCACATTCCATTGGTCAAAGCAAGTTACAAG
GCCAGCTCACATTCAAGGATTAGGTAAGTCGATTCCACTCTTGATGAGAAGTCTGAAG GATTTGGAACAGTGTCC
ACCATGCAGTAATAAACTCAATAAGTAGTAGCCATTATTATTCTGTTAGAGGTTGCCAGGAAAAGTTTTATAGTGGA
AAGAAATCTGAGTTTACTCTTGAGAGGTAAGTGGAATTTCTATTTGTAGAGAATGAAGGCCTCTCAAAAAGACACAG
CCTAACAATAGGTGCTGCAGTTTAACAGTGGAGCGTGTCCAGAACAGGCTGCCCTTTTAGGCAAGGGCTAGTGTCTT
TCAGGACAGACCCAAACCCCAAATACCAAAACAGAATAAAGTAGTGTCTTAGCATACTTTGAGATCAGACTGTTTCT
GCATTTCACAGTGCTGGGGGTGGGGGGGAGGTGTGGGGGGAAGGGAAAAGCAGCATACCAATGTAGTGAAATCTGGA
AACAACAGCCAAAAAAAGTTTGCATATTGCACAGAGCACTTGAAGATCATAAATCTATGCATGAGAAAGATGTAGTG
GAAATTTTGGGGGGGATTAGAGTTTATTTTTGTCATCTCTGTGAGACAGCTACTCATTCATCCAGATCACAGCTAAG
AAAAAAGCTGGTCACAGAAATTAGCAGTTTCAGCTCAGCAGCGAAGTCGCCAGCCTGTGAAGGCAGAGAGAAATTGA
CTAATTAGCAATGCGCACTAAAACTTGACGGTTCTTTATAGAGAGAGAGAAGAGAGAGGGAGAGAGAGGGAGAGGGA
GGGAGGGGGGGCTCGCTTTTTCCCCTTCTTTCTTCCAAAGATGTTTGAAATCGCAGTCATTTACGCTCGACAATTTT
TACAATAGCCTTGAGCCATAATTTTGCGAGTCTCTCCAGCATCCATCCCCCTGTATGGTCTCTCTCTACTGGCCAAG
CACGACCGTTTCTCTCCCCAACCGTGGATTTCCTATT
[0733] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为MMP15启动子。在一些方面，MMP15启动子包含与SEQ ID NO:96具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，MMP15启动子包含SEQ ID NO:96的核酸序列。
[0734] 示例性的MMP15启动子(SEQ ID NO:96)
[0735] CCTTCCTCCTCCAGGGCCCTCTGCAGACCAGGCTGAGATGGAGGAACCTGCTAAAATCGATGGAGATGCTTCTAGCCTCCCAGTAGGAGGCCCCAGCCATGCCTTCAACCTGGCAGGAGGTGTAGCCACTCCTCATCCTTGGGT
TGCAGGTTGGGTGCTGCTGTTGTGGTCCTTCCCAGAAACTGCCAGTAGAGGGCAGCCTGGGCATCCTAATGCTTAC
TCTGGTTGTTACACAAAGAAAATATTGGGGTCACTGGCGAGCCCACCCACACTCACCAGAATCTCCACTGTAGTCC
CCCTAACAAACAGCCCTTCACTTCCTCTCCCACTTCAGCAATTTGTATTTTGATGCCATTGGCCTCAGATCAGAGT
GTTTTAAATCATCACGCCCTGGCTTATCCCTGGTCGAGCCAGGACACGGGGTGCTTCAGTGGGTCTGTCACCCTCT
CTCCTTGAA GCATGTTGCTTTTATTTATTTACTTTTACTCTCACCCTGCTCCTGTACCAGCAGGGGCCACTTCAA
AGCCAAGGTACAGGGTGATAACTTGTGGTCCAGCATCAGTTTTCTCCACTTCTTTCTCCCACTCACCCCCAGCAAGG
TGCCTGGGGAGACTTGAGCAGATGTTTCATTTTGGCCTGGCCAGTGGCTGAAAGCCAGGCCTCCAATGCACTGTGAC
CTCTGGCTTCCCCAGCAGCTTTCCCAGAGAGGCAGAGGGAGTCTTCATTCTTCCCAGGCGGGGAGACCACGCCTTCC
CTGCCTCCTCCCTCCGCGGGGGGTCGCGTTGGAGGTCACCCCCGCCCCCTAGGCGCTGGGTTGGGAGTGACGCGGGG
TGGGCTGGAGAGGTTTCCTGCCGTCTGGGAAGCGTAAACGGACCGCCCACCTGTCGGGCCTCGGCCGCCCGCACCTG
CTTGTGAGAAGCCTGCGGCTGGGGCACCGCCCCCGGTCCCCGCCCGGGTCCGCGCATTGGGAGCACACTGGCCCTTT
AAGAGCGCGGCGGCCGCGGCGCGCGGG
[0736] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为SPARC启动子。在一些方面，SPARC启动子包含与SEQ ID NO:97具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，SPARC启动子包含SEQ ID NO:97的核酸序列。
[0737] 示例性的SPARC启动子(SEQ ID NO:97)
[0738] CAGGCTACCTCTCAGGCTGACTGAGTCATGCAGCATAGGCTGCCACGTCTCTGGGCTGGCGGGGCCGTCATTATTCCTGGCCTCACTGCAGCTAAATTGAAGAAACGTTTGGTTTGTGGGCCACGTCAAGGAATGTGTAAGAGC
TGCCACGTTGTCGGGTCTGGGTTATTGGGCTTTTCCCCTCCTTCAGAGAAGATTTCCAGGCGTGTGGGTGGGGTTT
CAGAAGAAAATTGATGCCTGCGTGTGAGTGTTCCCTGGACCTGGACCAGCAGCGGCAATATTACAGACCCGGGGGT
TGGGGCAGACTGAGCCAATCTCTGCACCGTCAAAGTTATGGATACAGAGCCCTGGAAAAAGGCTGAAGGATAAGAT
AGCTGACATTTATGAAGTGCTTCATTCATGTAGCAGTGGGCCAAATGCGTACTTTACACTTGAGGAAGCTGAGGCT
GGAGGTTGATAACATGCCTCAAGTCTTCTAGAGTTAAATAACTTTGACCCAGGACCCAAGCCCAGAGTTCTGACTC
AAAAACTAGGCCTCCTAAACATCCTCTTATATGAGGTTAAATTTCATCTTCCTCTGTTTGGCCTTGGCCTGGTTGG
TGGATGCTCTGCTTCGGGGACCCAGGGCCAGATGACAATGGGTTCTTTGTGCCCTTCAGACAATGGGAAGGGCTGC
CTGGGGAAAGATACAGTAACAAGGCAACAGGCTGAGTCAGCCTCCAATGTGCTTGAACCTTCTTAGCTTGGCAGCC
TTGACATTCAGCCAGCCACACAAAGGGTATATCAAGGATGATACCACTAGTAGCAGC TTGTCTTGTCTGTACCTC
TGAACAAGAAAGAGGCTGTTCTGGGTCATCCCTCCAGGCCTGTCCAGCCCTGGCACTCTGTGAGTCGGTTTAGGCAG
CAGCCCCGGAACAGATGAGGCAGGCAGGGTTGGGACGTTTGGTCAGGACAGCCCACCAGGAGGAAAGAAATGAAAGA
CAGAGACAGCTTTGGCTATGGGAGAAGGAGGAGGCCGGGGGAAGGAGGAGACAGGAGGAGGAGGGACCACGGGGTGG
AGGGGAGATAGACCCAGCCCA
[0739] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为TSPAN8启动子。在一些方面，TSPAN8启动子包含与SEQ ID NO:98具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，TSPAN8启动子包含SEQ ID NO:98的核酸序列。
[0740] 示例性的TSPAN8启动子(SEQ ID NO:98)
[0741] CCAAGGACTCTTTTTTCTAAACTTCCCTTCATCTTCTAGTTTGACGCCCTTGGTGGGAAAAGTGTCTGAGATAAGGAAAAGGCATCCTTTCAGTTCTCTGATACTATCTTGAAGCGAGGGATGGAGAAAGGCAAAGAGAGACAC
AGGAGAAGCGTATCCCCTGGGAACAGGTGTCTAGTGGAGTCCAGTAACTCACAGTCTCTCAGTTCCGTCAGCACTG
TCCCTTGGGTCGCAAATTTCTTCCATTAGCCCTTCCACCAGCTGTATTTCAAATGGGGCTGGACAATAATTGTGGC
CAGTGGCCTTGTGTTGTTTGTACTTGCGGACTAGTAGTTCTCACCTGTCTTTCTCTGACTCCTATTAGCCACTGGG
ATTTCAGCAGCTGGTTCAGCCAATTCTACTCAATTCAACATTAAGTTGCAGTGGGCTAGAACTCATGGGCCGATTT
AACAAGTGAAATTCTACCAAGATACATCAAAAATAGCAACAGGACTAGATACTCAGCTCATTTTGTTTTATTTGTA
ATATACCAGTTGTGGCTTTAGTGCCAGTCTGATTCATCTCTCTACTACAAAATGAGGCTCTATAAAGGAAAATATT
GCAACTGGAGTGAGGAATTTGAATCTTATAGGAAGGAATTTGTCTTCTCATGAAGACTTCAGTTTACCAGAAGTAT
CTATTGAGGAAGTGTTTACAAGAAAATGTGCCATTTAGCTTTATTCTAAATTTGCATAATAACTGAACCAAACAAA
AAAATATAGATAGATAGATTGTTCTATCTATAGATAGATAGGGAACATTGGCAGTAGGTGGCAGTAAGTTCCCCTG
AGCACATGGAGGACACAGTTAAATGCATTTGAGGTATGTGGGAAATGGTTTAAAGCAGAATTTTATGCCAACTTTT
AGTAACGGAAGCCTAACAAATGTTTGTTCTTTCAAGTGAGAGAAGCAAGCAATCTGGAACTATTCATAAGCTTATT
TTCTGTATCCTTAAACATATTTTATAATGAATGTATGATTTAAATAGTAAGTTAAGTGTCTGGGGGTACTGCACAC
CTCCCTTGCATACAGT CAAACTTCTTCAGGGTGATGGGGAAGAGGAGTTATAGGCTGCCAAGCAAAATTGCCAAA
CTGGTCTCAGAAATTCACTGCATTGGAGAGCGCGGGATCCTTGCAACACTGACTTTAGCAGTTAAACTAGAGTGGTT
GGGGATGAGTATTCT
[0742] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为VIM启动子。在一些方面，VIM启动子包含与SEQ ID NO:99具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，VIM启动子包含SEQ ID NO:99的核酸序列。
[0743] 示例性的VIM启动子(SEQ ID NO:99)
[0744] ATTCACAATGCATTCCCTCTGCCCACCACATTAATTATCAACTCCTTTTCCTGGCATTTACTCATCCAACGCATGGCCCCACGTTAACTTTCAGTTCCCTTTCTCCCCTACAAATACTCCATAATCCAGCAACCCTGGGATCCCTG
AGATGATGAAGAGGACCAGTGCCCATTCCAGGAGACATCACCGCAGCCCTGAGGAATCGGCTATGGGCACCAGCAGG
GCACAGTGCCACACCTCGCCAATGCCTTGTCCTCCTTTTCCATAGTGAGTCAGTCAGCAAGCGTGTAGAAGTGAGTT
CCACACTCTCTTCCTCCCATAGGGAGATCACTTTTCTCATTCTAAGGGTTCCAGGCACACTCACAATGGTGGCATTT
GCTGAGCAGTGGCTTGAATAAAGGGCTCTCAGAAAGCAAGATGTAACTCAGAGCATAGGCTAGCCCCAGGAATGCTC
TTGGGGAATGACCTGCAGCCTCCCAGTGAAAGAGAGAATAAAAGAAAGCCCCAGCAGGCGAGCTGGGCAGTAGAGAG
TCCTGTAATTCCACCTTGGCAAGCACCATTTGCAAGAACGAACTGGGATAAGGTAAACAAAATATTGCCTAAAAGAG
GCTTGTCCAAAGAAGTCAGAATACGCTCTTCATTTACCTCTAAATTTCAGTACACCATAAATCTAAATACTCAAAAA
AACCTGTGCCTTTTCAATCAAGGTCAATTGCACGAATTCTTTTGGAAAACAGGACCTATGGCATTTCCCAGACAAAT
CACCGTGAACCCTGTACTGTGCATTGCTGTCCTAAAATCCAAAGATTCTGTCATTTGTGTTACATAATTGCCTTTCA
TTTGAACTCATTAATCAAATTGGGGTTTTTAAGCAACACCTAATTAATTCTTTAACTGGCTCATCCACTGATCACTG
AGTTCTATTTTGAAACTACGGACGTCGAGTTTCCTCTTTCACCCAGAATTTTCAGATCTTGTTTAAAAAGTTGGGTG
TGGTTTCATGGGGGGAGGGGGAAGAGCGAGAGGAGACCAGAGGGACGGGGGCGGGGACTCTGCAAGAAAAACCTTCC
CGGTGCAATCGTGATCT
[0745] 在一些方面，内耳支持细胞选择性启动子为GFAP启动子。在一些方面，GFAP启动子包含与SEQ ID NO:91具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，GFAP启动子包含SEQ ID NO:91的核酸序列。
[0746] 示例性的GFAP启动子(SEQ ID NO:91)
[0747] GAACATATCCTGGTGTGGAGTAGGGGACGCTGCTCTGACAGAGGCTCGGGGGCCTGAGCTGGCTCTGTGAGCTGGGGAGGAGGCAGACAGCCAGGCCTTGTCTGCAAGCAGACCTGGCAGCATTGGGCTGGCCGCCCCCCAGGGCC
TCCTCTTCATGCCCAGTGAATGACTCACCTTGGCACAGACACAATGTTCGGGGTGGGCACAGTGCCTGCTTCCCGCC
GCACCCCAGCCCCCCTCAAATGCCTTCCGAGAAGCCCATTGAGCAGGGGGCTTGCATTGCACCCCAGCCTGACAGCC
TGGCATCTTGGGATAAAAGCAGCACAGCCCCCTAGGGGCTGCCCTTGCTGTGTGGCGCCACCGGCGGTGGAGAACAA
GGCTCTATTCAGCCTGTGCCCAGGAAAGGGGATCAGGGGATGCCCAGGCATGGACAGTGGGTGGCAGGGGGGGAGAG
GAGGGCTGTCTGCTTCCCAGAAGTCCAAGGACACAAATGGGTGAGGGGAGCTCTCCCCATAGCTGGGCTGCGGCCCA
ACCCCACCCCCTCAGGCTATGCCAGGGGGTGTTGCCAGGGGCACCCGGGCATCGCCAGTCTAGCCCACTCCTTCATA
AAGCCCTCGCATCCCAGGAGCGAGCAGAGCCAGAGCAGGTTGGAGAGGAGACGCATCACCTCCGCTGCTCGC
[0748] 表2.示例性的启动子
[0749]
[0750]
[0751] 增强子
[0752] 在一些情况下，构建体可包括增强子序列。术语“增强子”是指可增加编码感兴趣的蛋白(例如多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽))的核酸转录水平的核苷酸序列。增强子序列(长度通常为50‑1500bp)通常通过为转录相关蛋白(例如转录因子)提供另
外的结合位点来增加转录水平。在一些方面，增强子序列可存在于内含子序列内。与启动子序列不同，增强子序列可在距转录起始位点远得多的距离处(例如与启动子相比较)起作
用。增强子的非限制性实例包括RSV增强子、CMV增强子和/或SV40增强子。在一些方面，构建体包含通过SEQ ID NO:18举例说明的CMV增强子。在一些方面，构建体包含通过SEQ ID NO:
63举例说明的CMV增强子。在一些方面，构建体包含通过SEQ ID NO:64举例说明的嵌合内含子增强子。在一些方面，增强子序列与由SEQ ID NO:18表示的增强子序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，增强子序列与由SEQ ID NO:63表示的增强子序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，增强子序列与由SEQ ID NO:64表示的增强子序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，增强子序列与由SEQ ID NO:65表示的增强子序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，SV‑40衍生的增强子为SV‑40T内含子序列，其通过SEQ ID NO:19举例说明。在一些方面，增强子序列与由SEQ ID NO:19表示的增强子序列具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
[0753] 在一些情况下，构建体不包括增强子序列。
[0754] 示例性的CMV增强子(SEQ ID NO:18)
[0755] GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATA
ATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGC
CCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCT
GGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACC
ATGG
[0756] 示例性的CMV增强子(SEQ ID NO:63)
[0757] GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATA
ATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGC
CCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCT
GGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACC
ATGGT
[0758] 示例性的SV‑40合成内含子(SEQ ID NO:19)
[0759] GGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAA
TGACGG CTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAG
CGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCG
CTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTG
CGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGC
GGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGT
GCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCC
TCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCA
GCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCT
GGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGA
GGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCC
TTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTT
CATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAG
[0760] 示例性的嵌合内含子(SEQ ID NO:64))
[0761] GGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATG
ACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCA
TGCCTTCTTCTTTTTCCTACAG
[0762] 侧翼非翻译区5’UTR和3’UTR
[0763] 在一些方面，文所述构建体中的任何一种可包括非翻译区(UTR)，比如5’UTR或3’UTR。基因的UTR转录但不翻译。5’UTR始于转录起始位点并且延续至起始密码子但不包括起始密码子。3’UTR紧接在终止密码子后起始并且延续直至转录终止信号。UTR的调控和/或控制特征可被掺入到如本文所述的构建体、组合物、试剂盒或方法中的任何一种中以增强或以其他方式调节多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的表达。
[0764] 天然5’UTR包括在翻译起始中起作用的序列。在一些方面，5’UTR可包含通常已知参与核糖体通过其来起始许多基因翻译的过程的序列，如Kozak序列。Kozak序列具有共有序列CCR(A/G)CCAUGG，其中R为起始密码子(AUG)上游的嘌呤(A或G)三碱基，并且起始密码
子然后为另一个“G”。还已知5’UTR形成参与延伸因子结合的二级结构。
[0765] 在一些方面，5’UTR被包括在本文所述构建体中的任何一种中。5’UTR的非限制性实例，包括来自以下基因的那些：白蛋白、血清淀粉样蛋白A、载脂蛋白A/B/E、转铁蛋白、α胎蛋白、促红细胞生成素和因子VIII可被用于增强核酸分子比如mRNA的表达。
[0766] 在一些方面，来自由耳蜗中的细胞转录的mRNA的5’UTR可被包括在本文所述的构建体、组合物、试剂盒和方法中的任何一种中。在一些方面，5’UTR衍生于内源性GJB2基因座并且可包括通过SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:66举例说明的内源性序列的全
部或部分。在一些方面，5’UTR序列与由SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:66表示的5’UTR序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。
[0767] 3’UTR存在于紧接感兴趣基因终止密码子的3’处。在一些方面，来自由耳蜗中的细胞转录的mRNA的3’UTR可被包括在本文所述的构建体、组合物、试剂盒和方法中的任何一种中。在一些方面，3’UTR衍生于内源性GJB2基因座并且可包括通过SEQ ID NO:22举例说明的内源性序列的全部或部分。在一些方面，3’UTR序列与由SEQ ID NO:22表示的3’UTR序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一些方面，3’UTR衍生于内源性GJB2基因座并且可包括通过SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68举例说明的内源性序列的全部或部分。在一些方面，3’UTR序列与由SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68表示的3’UTR序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。
[0768] 已知3’UTR具有嵌入其中的腺苷和尿苷(在RNA形式中)或胸苷(在DNA形式中)的段。这些富含AU的特征在具有高周转率的基因中特别普遍。基于其序列特征和功能特性，富含AU的元件(ARE)可被分成三类(Chen等人，Mol.Cell.Biol.15:5777‑5788,1995；Chen等
人，Mol.Cell Biol.15:2010‑2018,1995，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中)：I类ARE在富含U的区域内含有AUUUA基序的若干分散拷贝。例如，c‑Myc和MyoD mRNA含有I类ARE。II类ARE具有两个或更多个重叠UUAUUUA(U/A)(U/A)九聚体。GM‑CSF和TNF‑αmRNA为含有II类ARE的实例。III类ARE定义不太明确。这些富含U的区域不含AUUUA基序，该类的两个充分研究的实例为c‑Jun和肌细胞生成素mRNA。
[0769] 已知大多数结合于ARE的蛋白使信使不稳定，而ELAV家族的成员，最显著的是HuR，已被证明会增加mRNA的稳定性。HuR结合于所有三类的ARE。将HuR特异性结合位点设计改造到核酸分子的3’UTR中将导致HuR结合，并且因此使体内信息稳定。
[0770] 在一些方面，3’UTR ARE的引入、去除或修饰可被用于调节编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的mRNA的稳定性。在其他方面，ARE可被去除或突变以增加细胞内稳定性并因此增加多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的翻译和产生。
[0771] 在其他方面，可将非ARE序列掺入到5’或3’UTR中。在一些方面，可将内含子或部分内含子序列掺入到本文提供的构建体、组合物、试剂盒和方法中任何一种中的多核苷酸侧翼区中。内含子序列的掺入可增加蛋白产生以及mRNA水平。
[0772] 示例性的5’UTR序列(SEQ ID NO:20)
[0773] GTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTC
CTCC CGACGCAGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAG
[0774] 示例性的5’UTR序列(SEQ ID NO:21)
[0775] TTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCACCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGT
TCCGTGGCCATGCACCTGGGACTGCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAG
[0776] 示例性的5’UTR序列(SEQ ID NO:66)
[0777] GTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCT
CCCGACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCA
GTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCACCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGG
GTTCCGTGGCCATGCACCTGGGACTGCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAG
[0778] 示例性的3’UTR序列(SEQ ID NO:22)
[0779] CGCATTGCCCAGTTGTTAGATTAAGAAATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGTAGGCC
TCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCCTCTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCT
GTCTTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTTTC
ATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGAC
ACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTTT
CATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAA
GTGAAAACTTTGTAGTATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTCA
GAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATGATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTAT
GAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTC
AATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGT
AATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGGATGTACCACCAACT ACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTC
CCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACA
GTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACT
GGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAAT
TTTTTAAGTGAAAATATAGCTAATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGATCTAT
AGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGG
GTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGATATGCT
TGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAAATATAATCTCTATAATAA
[0780] 示例性的3’UTR序列(SEQ ID NO:67)
[0781] GAAATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACA
ATGGAGCTCTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAAGTT
AGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCA
TTTGTTTCTTTCTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTCCT
GGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTC
TAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTATGATAGGT
TATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAAT
GGTATGTCATTCGCTACTATGATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAG
GCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTT
CCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTG
GATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGC
ATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAA
TGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAA
GATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTAA
TAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATAT TGAGCAGATCTATAGGAAGATTGAACCTGAATAT
TGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCA
AGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGATATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTA
ATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAAATATAATCTCTATAATAA
[0782] 示例性的3’UTR序列(SEQ ID NO:68)
[0783] CGCATTGCCCAGTTGTTAGATTAAGAAATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGTAGGCCTC
AGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCCTCTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTC
TTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTTTCATAT
TTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGA
GAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTTTCATTTG
CTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAA
CTTTGTAGTATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTCAGAGGCTCA
GATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATGATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTT
GCAGCACAGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTCAATCGAGTGA
GACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTA
AGAAATACAGACTGGATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCCTTTTCCATGAC
TGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATG
GGGAGGACAAAATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACTGGACTCTAAAGTC
TGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAA
ATATAGCTAATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGATCTATAGGAAGATTGAAC
CTGAATATTGCCATTATGCTTGAC
[0784] 示例性的3’UTR序列(SEQ ID NO:69)
[0785] GAGCTCAGTGTGAGTTCTACCATTGCCAAACTCGAGCAGTGAATTCTACCAGTGCCATAGGATCCAGTGTGAGTTCTACCATTGCCAAAGGTACCCAG TGAATTCTACCAGTGCCATAGTTAACCGCATTGCCCAGTTGTTAG
ATTAAGAAATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAA
CACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGA
GCCTCTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAGTTC
CACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTT
TCTTTCTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTC
TTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTG
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[0786] 微小RNA调控靶位点(miRTS)
[0787] 在一些方面，本公开涉及包含微小RNA调控靶位点(miRTS)的构建体，所述miRTS可被用于调控(例如减少)编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸在细胞(例
如内耳细胞，例如毛细胞)中的表达。在一些方面，构建体提供在一些细胞(例如内耳细胞，例如毛细胞)中与治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)表达相关的毒性减少。在一些方
面，包含编码治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸的构建体包含微小RNA调
控靶位点(miRTS)。示例性的包含miRTS的多核苷酸构建体在图2F中提供。在一些方面，UTR可包含miRTS。在一些方面，3’UTR可包含miRTS。在一些方面，5’UTR可包含miRTS。
[0788] 在一些方面，治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)在表达微小RNA的细胞中的表达被减少、遏制、抑制或消除。在一些方面，治疗性多肽主要在不表达微小RNA的细胞中表达。在一些方面，与治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)表达相关的毒性在表达微小RNA的细胞中被减少、遏制、抑制或消除。
[0789] 在一些方面，本公开涉及包含微小RNA调控靶位点(miRTS)的构建体，所述miRTS可被用于调控(例如减少)编码多肽的多核苷酸在细胞(例如内耳细胞，例如毛细胞)中的表
达。在一些方面，构建体提供在一些细胞(例如内耳细胞，例如毛细胞)中与多肽表达相关的毒性减少。在一些方面，包含编码多肽的多核苷酸的构建体包含微小RNA调控靶位点
(miRTS)。示例性的包含miRTS的多核苷酸构建体在图2F中提供。在一些方面，UTR可包含
miRTS。在一些方面，3’UTR可包含miRTS。在一些方面，5’UTR可包含miRTS。
[0790] 在一些方面，多肽在表达微小RNA的细胞(例如毛细胞)中的表达被减少、遏制、抑制或消除。在一些方面，多肽主要在不表达微小RNA的细胞(例如支持细胞)中表达。在一些方面，在表达微小RNA的细胞中与多肽表达相关的毒性被减少、遏制、抑制或消除。
[0791] 在一些方面，miRTS为在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中表达的特异性微小RNA。在一些方面，miRTS为在内耳毛细胞中表达的特异性微小RNA。在一些方面，miRTS为在螺旋神经节细胞中表达
的特异性微小RNA。在一些方面，miRTS为在外侧支持细胞中表达的特异性微小RNA。在一些方面，miRTS为在基底膜细胞中表达的特异性微小RNA。在一些方面，miRTS为在内侧支持细胞中表达的特异性微小RNA。在一些方面，miRTS为在螺旋缘细胞中表达的特异性微小RNA。
[0792] 在一些方面，miRTS可为人类miRNA‑182、miRNA‑183、miRNA‑194、miRNA‑140、miRNA‑18a、miRNA‑99a、miRNA‑30b、miRNA‑15a靶序列。在一些方面，miRTS可为人类miRNA‑182靶序列。在一些方面，UTR可包括miRNA‑182靶序列的全部或部分。在一些方面，UTR可含有多于一个miRNA‑182靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑182靶序列可分散于UTR中的多个位置。在一些方面，3’UTR可包括miRNA‑182靶序列的全部或部分。在一些方面，3’UTR可含有多于一个miRNA‑182靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑182靶序列可分散于3’UTR中的多个位置。在一些方面，miRNA‑182靶序列包含与SEQ ID NO:78具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑182靶序列包含SEQ ID NO:78的核酸序列。
[0793] 在一些方面，miRTS可为人类miRNA‑183靶序列。在一些方面，UTR可包括miRNA‑183靶序列的全部或部分。在一些方面，UTR可含有多于一个miRNA‑183靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑183靶序列可分散于UTR中的多个位置。在一些方面，3’UTR可包括miRNA‑183靶序列的全部或部分。在一些方面，3’UTR可含有多于一个miRNA‑183靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑183靶序列可分散于3’UTR中的多个位置。在一些方面，miRNA‑183靶序列包含与SEQ ID NO:79具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑183靶序列包含SEQ ID NO:79的核酸序列。
[0794] 在一些方面，miRTS可为人类miRNA‑194靶序列。在一些方面，UTR可包括miRNA‑194靶序列的全部或部分。在一些方面，UTR可含有多于一个miRNA‑194靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑194靶序列可分散于UTR中的多个位置。在一些方面，3’UTR可包括miRNA‑194靶序列的全部或部分。在一些方面，3’UTR可含有多于一个miRNA‑194靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑194靶序列可分散于3’UTR中的多个位置。在一些方面，miRNA‑194靶序列包含与SEQ ID NO:1具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑194靶序列包含SEQ ID NO:1的核酸序列。
[0795] 在一些方面，miRTS可为人类miRNA‑140靶序列。在一些方面，UTR可包括miRNA‑140靶序列的全部或部分。在一些方面，UTR可含有多于一个miRNA‑140靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑140靶序列可分散于UTR中的多个位置。在一些方面，3’UTR可包括miRNA‑140靶序列的全部或部分。在一些方面，3’UTR可含有多于一个miRNA‑140靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑140靶序列可分散于3’UTR中的多个位置。在一些方面，miRNA‑140靶序列包含与SEQ ID NO:2具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑140靶序列包含SEQ ID NO:2的核酸序列。
[0796] 在一些方面，miRTS可为人类miRNA‑18a靶序列。在一些方面，UTR可包括miRNA‑18a靶序列的全部或部分。在一些方面，UTR可含有多于一个miRNA‑18a靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑18a靶序列可分散于UTR中的多个位置。在一些方面，3’UTR可包括miRNA‑18a靶序列的全部或部分。在一些方面，3’UTR可含有多于一个miRNA‑18a靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑18a靶序列可分散于3’UTR中的多个位置。在一些方面，miRNA‑18a靶序列包含与SEQ ID NO:3具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑18a靶序列包含SEQ ID NO:3的核酸序列。
[0797] 在一些方面，miRTS可为人类miRNA‑99a靶序列。在一些方面，UTR可包括miRNA‑99a靶序列的全部或部分。在一些方面，UTR可含有多于一个miRNA‑99a靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑99a靶序列可分散于UTR中的多个位置。在一些方面，3’UTR可包括miRNA‑99a靶序列的全部或部分在一些方面，3’UTR可含有多于一个miRNA‑99a靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑99a靶序列可分散于3’UTR中的多个位置。在一些方面，miRNA‑99a靶序列包含与SEQ ID NO:4具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑99a靶序列包含SEQ ID NO:4的核酸序列。
[0798] 在一些方面，miRTS可为人类miRNA‑30b靶序列。在一些方面，UTR可包括miRNA‑30b靶序列的全部或部分。在一些方面，UTR可含有多于一个miRNA‑30b靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑30b靶序列可分散于UTR中的多个位置。在一些方面，3’UTR可包括miRNA‑30b靶序列的全部或部分。在一些方面，3’UTR可含有多于一个miRNA‑30b靶序列。在一些方面，多于一个miRNA‑30b靶序列可分散于3’UTR中的多个位置。在一些方面，miRNA‑30b靶序列包含与SEQ ID NO:5具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑30b靶序列包含SEQ ID NO:5的核酸序列。
[0799] 在一些方面，miRTS可为人类miRNA‑15a靶序列。在一些方面，UTR可包括miRNA‑15a靶序列的全部或部分。在一些方面，UTR可含有多于一种miRNA‑15a靶序列。在一些方面，多于一种miRNA‑15a靶序列可分散于UTR中的多个位置。在一些方面，3’UTR可包括miRNA‑15a靶序列的全部或部分。在一些方面，3’UTR可含有多于一种miRNA‑15a靶序列。在一些方面，多于一种miRNA‑15a靶序列可分散于3’UTR中的多个位置。在一些方面，miRNA‑15a靶序列包含与SEQ ID NO:6具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑15a靶序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列。
[0800] 在一些方面，miRTS可为在特定内耳细胞中表达的miRNA的靶序列。在一些方面，miRTS可为在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中表达的miRNA的靶序列。
[0801] 在一些方面，miRTS可为在内耳毛细胞中表达的miRNA的靶序列。在一些方面，在内耳毛细胞中表达的miRNA减少、遏制、抑制或消除多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)在内耳毛细胞中的表达。在一些方面，在内耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑194、miR‑140、miR‑18a、miR‑99a、miR‑30b、miR‑15a、miR182或miR‑183。在一些方面，在内耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑194。在一些方面，miRNA‑194靶序列包含与SEQ ID NO:1具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
在一些方面，miRNA‑194靶序列包含SEQ ID NO:1的核酸序列。在一些方面，在内耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑140。在一些方面，miRNA‑140靶序列包含与SEQ ID NO:2具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
在一些方面，miRNA‑140靶序列包含SEQ ID NO:2的核酸序列。在一些方面，在内耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑18a。在一些方面，miRNA‑18a靶序列包含与SEQ ID NO:3具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
在一些方面，miRNA‑18a靶序列包含SEQ ID NO:3的核酸序列。在一些方面，在内耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑99a。在一些方面，miRNA‑99a靶序列包含与SEQ ID NO:4具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
在一些方面，miRNA‑99a靶序列包含SEQ ID NO:4的核酸序列。在一些方面，在内耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑30b。在一些方面，miRNA‑30b靶序列包含与SEQ ID NO:5具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
在一些方面，miRNA‑30b靶序列包含SEQ ID NO:5的核酸序列。在一些方面，在内耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑15a。在一些方面，miRNA‑15a靶序列包含与SEQ ID NO:6具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
在一些方面，miRNA‑15a靶序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列。在一些方面，在内耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑182。在一些方面，miRNA‑182靶序列包含与SEQ ID NO:78具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑182靶序列包含SEQ ID NO:78的核酸序列。在一些方面，在内耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑183。在一些方面，miRNA‑183靶序列包含与SEQ ID NO:79具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑183靶序列包含SEQ ID NO:79的核酸序列。
[0802] 在一些方面，miRTS可为在螺旋神经节细胞中表达的miRNA的靶序列。在一些方面，在螺旋神经节细胞中表达的miRNA减少、遏制、抑制或消除多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)在螺旋神经节细胞中的表达。在一些方面，在螺旋神经节细胞中表达的miRNA为miR‑194、miR‑18a、miR‑99a、miR‑30b、miR‑15a、miR182或miR‑183。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑194。在一些方面，miRNA‑194靶序列包含与SEQ ID NO:1具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑194靶序列包含SEQ ID NO:1的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑18a。在一些方面，miRNA‑18a靶序列包含与SEQ ID NO:3具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑18a靶序列包含SEQ ID NO:3的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑99a。在一些方面，miRNA‑99a靶序列包含与SEQ ID NO:4具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑99a靶序列包含SEQ ID NO:4的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑30b。在一些方面，miRNA‑30b靶序列包含与SEQ ID NO:5具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑30b靶序列包含SEQ ID NO:5的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑15a。在一些方面，miRNA‑15a靶序列包含与SEQ ID NO:6具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑15a靶序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑182。在一些方面，miRNA‑182靶序列包含与SEQ ID NO:78具有至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑182靶序列包含SEQ ID NO:78的核酸序列。在一些方面，miRNA‑
182靶序列包含SEQ ID NO:78的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑
183。在一些方面，miRNA‑183靶序列包含与SEQ ID NO:79具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑183靶序列包含SEQ ID NO:79的核酸序列。
[0803] 在一些方面，miRTS可为在基底膜细胞中表达的miRNA的靶序列。在一些方面，在基底膜细胞中表达的miRNA减少、遏制、抑制或消除多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)在基底膜细胞中的表达。在一些方面，在基底膜细胞中表达的miRNA为miR‑99a、miR‑30b和miR‑15a。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑99a。在一些方面，miRNA‑99a靶序列包含与SEQ ID NO:4具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑99a靶序列包含SEQ ID NO:
4的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑30b。在一些方面，miRNA‑30b靶序列包含与SEQ ID NO:5具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑30b靶序列包含SEQ ID NO:
5的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑15a。在一些方面，miR‑15a靶序列包含与SEQ ID NO:6具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑15a靶序列包含SEQ ID NO:
6的核酸序列。
[0804] 在一些方面，miRTS可为在外侧支持细胞中表达的miRNA的靶序列。在一些方面，在外侧支持细胞中表达的miRNA减少、遏制、抑制或消除多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)在外侧支持细胞中的表达。在一些方面，在外侧支持细胞中表达的miRNA为miR‑
99a、miR‑30b和miR‑15a。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑99a。在一些方面，miRNA‑99a靶序列包含与SEQ ID NO:4具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑99a靶序列包含SEQ ID NO:4的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑30b。在一些方面，miRNA‑30b靶序列包含与SEQ ID NO:5具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑30b靶序列包含SEQ ID NO:5的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑15a。在一些方面，miRNA‑15a靶序列包含与SEQ ID NO:6具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑15a靶序列包含SEQ ID NO:6的核酸序列。
[0805] 在一些方面，miRTS可为在内侧支持细胞中表达的miRNA的靶序列。在一些方面，在内侧支持细胞中表达的miRNA减少、遏制、抑制或消除多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)在内侧支持细胞中的表达。在一些方面，在内侧支持细胞中表达的miRNA为miR182
和miR‑183。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑182。在一些方面，miRNA‑182靶序列包含与SEQ ID NO:78具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑182靶序列包含SEQ ID NO:
78的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑183。在一些方面，miRNA‑183靶序列包含与SEQ ID NO:79具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑183靶序列包含SEQ ID NO:
79的核酸序列。
[0806] 在一些方面，miRTS可为在螺旋缘细胞中表达的miRNA的靶序列。在一些方面，在螺旋缘细胞中表达的miRNA减少、遏制、抑制或消除多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26)多肽)在螺旋缘细胞中的表达。在一些方面，在螺旋缘细胞中表达的miRNA为miR182和miR‑183。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑182。在一些方面，miRNA‑182靶序列包含与SEQ ID NO:78具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑182靶序列包含SEQ ID NO:78的核酸序列。在一些方面，在耳毛细胞中表达的miRNA为miR‑183。在一些方面，miRNA‑183靶序列包含与SEQ ID NO:79具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，miRNA‑183靶序列包含SEQ ID NO:79的核酸序列。
[0807] 在一些方面，UTR中包括的非内源性调控区可包含多个miRNA调控靶位点(miRTS)。在一些方面，UTR可包含至少一个miRNA‑182靶位点和至少一个miRNA‑183靶位点。在一些方面，UTR中包括的非内源性调控区为不稳定结构域，并且通过SEQ ID NO:80举例说明。在一些方面，UTR可包括与通过SEQ ID NO:80举例说明的非内源性调控区具有至少85％、至少
90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。
[0808] miRNA‑182靶序列(SEQ ID NO:78)
[0809] AGTGTGAGTTCTACCATTGCCAAA
[0810] miRNA‑183靶序列(SEQ ID NO:79)
[0811] AGTGAATTCTACCAGTGCCATA
[0812] miRNA‑194靶序列(SEQ ID NO:1)
[0813] TCCACATGGAGTTGCTGTTACA
[0814] miRNA‑140靶序列(SEQ ID NO:2)
[0815] CCGTGGTTCTACCCTGTGGTA
[0816] miRNA‑18a靶序列(SEQ ID NO:3)
[0817] CTATCTGCACTAGATGCACCTTA
[0818] miRNA‑99a靶序列(SEQ ID NO:4)
[0819] CACAAGATCGGATCTACGGGTT
[0820] miRNA‑30b靶序列(SEQ ID NO:5)
[0821] CTGAGTGTAGGATGTTTACA
[0822] miRNA‑15a靶序列(SEQ ID NO:6)
[0823] CACAAACCATTATGTGCTGCTA
[0824] 示例性的mRNA不稳定结构域序列(SEQ ID NO:80)
[0825] GAGCTCAGTGTGAGTTCTACCATTGCCAAACTCGAGCAGTGAATTCTACCAGTGCCATAGGATCCAGTGTGAGTTCTACCATTGCCAAAGGTACCCAGTGAATTCTACCAGTGCCATAGTTAAC
[0826] 表3.示例性的微小RNA调控靶位点
[0827] 微小RNA调控靶位点 SEQ ID NOmiRNA‑182靶序列 78
miRNA‑183靶序列 79
miRNA‑194靶序列 1
miRNA‑140靶序列 2
miRNA‑18a靶序列 3
miRNA‑99a靶序列 4
miRNA‑30b靶序列 5
miRNA‑15a靶序列 6
[0828] 内部核糖体进入位点(IRES)
[0829] 在一些方面，编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的构建体可包括内部核糖体进入位点(IRES)。IRES形成复杂二级结构，所述结构允许从紧邻IRES所位于处
下游的mRNA的任何位置发生翻译起始(参见例如Pelletier and  Sonenberg,
Mol.Cell.Biol.8(3):1103‑1112,1988)。
[0830] 存在几种本领域技术人员已知的IRES序列，包括来自例如口蹄疫病毒(FMDV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、人类鼻病毒(HRV)、蟋蟀麻痹病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)、甲型肝炎病毒(HAV)、丙型肝炎病毒(HCV)和脊髓灰质炎病毒(PV)的那些。参见例如Alberts,
Molecular Biology of the Cell,Garland Science,2002；以及Hellen等人，Genes 
Dev.15(13):1593‑612,2001，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中。
[0831] 在一些方面，掺入到编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的构建体中的IRES序列为口蹄疫病毒(FMDV)2A序列。口蹄疫病毒2A序列为已显示介导多蛋白裂解的
小肽(长度为约18个氨基酸)(Ryan,MD等人，EMBO 4:928‑933,1994；Mattion等人，J 
Virology 70:8124‑8127,1996；Furler等人，Gene Therapy 8:864‑873,2001；以及Halpin等人，Plant Journal 4:453‑459,1999，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中)。2A序列的裂解活性先前已在包括质粒和基因疗法构建体(AAV和逆转录病毒)的人工系统中得
到证实(Ryan等人，EMBO 4:928‑933,1994；Mattion等人，J Virology70:8124‑8127,1996；
Furler等人，Gene Therapy 8:864‑873,2001；和Halpin等人，Plant Journal 4:453‑459,
1999；de Felipe等人，Gene Therapy 6:198‑208,1999；de Felipe等人，Human Gene 
Therapy I I:1921‑1931,2000；以及Klump等人，Gene Therapy 8:811‑817,2001，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中)。
[0832] 剪接位点
[0833] 在一些方面，本文提供的构建体中的任何一种可包括剪接供体和/或剪接受体序列，其在转录期间发生的RNA加工期间为功能性的。在一些方面，剪接位点参与反式剪接。
[0834] 示例性的剪接供体内含子(SEQ ID NO:SEQ ID NO:23)
[0835] GTAAGTATCAAGGTTACAAGACAGGTTTAAGGAGACCAATAGAAACTGGGCTTGTCGAGACAGAGAAGACTCTTGCGTTTCT
[0836] 示例性的剪接受体内含子(SEQ ID NO:SEQ ID NO:24)
[0837] GATAGGCACCTATTGGTCTTACTGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAG
[0838] 多腺苷酸化序列
[0839] 在一些方面，本文提供的构建体可包括多腺苷酸化(多聚(A))信号序列。大多数新生真核生物mRNA在其3’末端具有在复杂过程期间添加的多聚(A)尾，所述过程包括初级转
录本的裂解和由多聚(A)信号序列驱动的偶联多腺苷酸化反应(参见例如Proudfoot等人，
Cell108:501‑512,2002，其通过参考以其全部结合至本文中)。多聚(A)尾赋予mRNA稳定性和可转移性(Molecular Biology of the Cell，B.Alberts等人第三版，Garland 
Publishing,1994，其通过参考以其全部结合至本文中)。在一些方面，多聚(A)信号序列位于编码序列的3’处。
[0840] 如本文使用的，“多腺苷酸化”是指多腺苷酰部分或其修饰变体与信使RNA分子的共价连接。在真核生物体中，大多数信使RNA(mRNA)分子在3’末端进行多腺苷酸化。3’多聚(A)尾为通过酶(多腺苷酸聚合酶)的作用添加至前体mRNA的腺嘌呤核苷酸的长序列(例如
50、60、70、100、200、500、1000、2000、3000、4000或5000)。在一些方面，将多聚(A)尾添加到含有特定序列例如多腺苷酸化(或多聚(A))信号的转录本上。多聚(A)尾和相关蛋白助于保
护mRNA免受外切核酸酶降解。多腺苷酸化也在转录终止、mRNA从细胞核输出以及翻译中起
作用。多腺苷酸化一般在DNA转录成RNA之后立即在细胞核中发生，但也可稍后在细胞质中
发生。转录已经终止之后，通过与RNA聚合酶相关的核酸内切酶复合物的作用裂解mRNA链。
裂解位点的特征通常为裂解位点附近碱基序列AAUAAA的存在。在mRNA已经裂解之后，将腺
苷残基添加至裂解位点的游离3’末端。
[0841] 如本文使用的，“多聚(A)信号序列”或“多腺苷酸化信号序列”为触发mRNA的核酸内切酶裂解以及一系列腺苷添加至裂解mRNA的3’末端的序列。
[0842] 存在若干可使用的多聚(A)信号序列，包括衍生于以下的那些：牛生长激素(bGH)(Woychik等人，Proc.Natl.Acad Sci.US.A.81(13):3944‑3948,1984；美国专利号5,122,
458，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中)、小鼠‑β‑球蛋白、小鼠‑α‑球蛋白(Orkin等人，EMBO J 4(2):453‑456,1985；Thein等人，Blood 71(2):313‑319,1988，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中)、人类胶原蛋白、多瘤病毒(Batt等人，Mol.Cell Biol.15
(9):4783‑4790,1995，其通过参考以其全部结合至本文中)、单纯疱疹病毒胸苷激酶基因
(HSV TK)、IgG重链基因多腺苷酸化信号(US2006/0040354，其通过参考以其全部结合至本
文中)、人生长激素(hGH)(Szymanski等人，Mol.Therapy15(7):1340‑1347,2007，其通过参考以其全部结合至本文中)、包含SV40多聚(A)位点比如SV40晚期和早期多聚(A)位点的组
(Schek等人，Mol.Cell Biol.12(12):5386‑5393,1992，其通过参考以其全部结合至本文
中)。
[0843] 多聚(A)信号序列可为AATAAA。AATAAA序列可用与AATAAA同源且能够传导多腺苷酸化信号的其他六核苷酸序列取代，所述其他六核苷酸序列包括ATTAAA、AGTAAA、CATAAA、TATAAA、GATAAA、ACTAAA、AATATA、AAGAAA、AATAAT、AAAAAA、AATGAA、AATCAA、AACAAA、AATCAA、AATAAC、AATAGA、AATTAA或AATAAG(参见例如WO 06/12414，其通过参考以其全部结合至本文中)。
[0844] 在一些方面，多聚(A)信号序列可为合成多腺苷酸化位点(参见例如Promega的pCl‑neo表达构建体，其基于Levitt等人，Genes Dev.3(7):1019‑1025,1989，其通过参考以其全部结合至本文中)。在一些方面，多聚(A)信号序列为可溶性神经纤毛蛋白‑1(sNRP)的多腺苷酸化信号(AAATAAAATACGAAATG；SEQ ID NO:89)(参见例如WO 05/073384，其通过参
考以其全部结合至本文中)。在一些方面，多聚(A)信号序列包含或由SV40多聚(A)位点组
成。在一些方面，多聚(A)信号包含或由SEQ ID NO:25组成。在一些方面，多聚(A)信号序列包含或由bGHpA组成。在一些方面，多聚(A)信号包含或由SEQ ID NO:26组成。多聚(A)信号序列的另外实例为本领域已知的。在一些方面，多聚(A)序列与由SEQ ID NO:25表示的多聚(A)序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性。
[0845] 示例性的bGH多聚(A)信号序列(SEQ ID NO:25)
[0846] CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGG
GGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTAT
GG
[0847] 示例性的SV40多聚(A)信号序列(SEQ ID NO:26)
[0848] AACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTA
[0849] 另外的序列
[0850] 在一些方面，本公开的构建体可包括一个或多个填充序列。在一些方面，填充序列可作为调控元件起作用，改变构建体表达。在一些此类方面，在制造用于给予受试者之前可能并不完全去除填充序列。在一些方面，填充序列可具有功能性作用，包括作为接头序列、作为调控区或作为稳定区。如本领域技术人员将意识到的，填充序列在一级序列上可显著变化同时保留其期望的功能。在一些方面，构建体可含有填充序列的任何组合，可作为调控序列起作用的示例性填充序列由SEQ ID NO:128或129表示。
[0851] 在一些方面，本公开的构建体可包含T2A元件或序列。在一些方面，本公开的构建体可包括一个或多个克隆位点。在一些此类方面，在制造用于给予受试者之前可能并不完
全去除克隆位点。在一些方面，克隆位点可具有功能性作用，包括作为接头序列、Kozak位点的部分，或作为编码终止密码子的位点。如本领域技术人员将意识到的，克隆位点在一级序列上可显著变化同时保留其期望的功能。在一些方面，构建体可含有克隆位点的任何组合，示例性的克隆位点由SEQ ID NO:29、30、31、32、33、34、35、36、37或85表示。在一些方面，构建体可含有长度小于5个核苷酸的另外克隆位点。
[0852] 示例性的调控序列C3(SEQ ID NO:128)
[0853] CTTCTTCTGGAGTCTTTTCTGGAATAATTCTGGGAGTGGGCTCAGCCTGCGGGAGAGTAACATTTTTATAACTTGATAGATGTAGCTGAGATGCCTCCCAGAGGGGAGACCCGCCTCTCCTCCGGCAGCTGTGCACGTAGGCTTGT
TCCCAGCAGCCTGGCCAGGGTGGTCCACCTGGTGTTTCTCATCTTCTTTCCCCGGAGCGCTGACTCCTGCGCGTCCT
CTTGGAAGACTCTTGACAGGACGGGTGTTTTATGGGTGTGATTCAGTGTCCTCTTGCATCAGTTCAATGTGGTGGTG
TTCAATCAACCCTTGTAGCGTTAGCAAAATTTGCTCAAGTCATTCCGCAGGAATGTCTGTGTCTTGCTTCCAAGAAA
GCTTGTAAGTGCCGGCAACAGGCCAAGCAGCTCACAAACCTGACCACAAGCCTGTGAGTAATTGTGGGGCAGCACTT
AGCAGTCTTTTATTTTCGACTTATTAAAGTCTCATCTTGGCCTCACCTTCTCCCTGGAAGGTGGCGTGGGTGGGAAC
CACTGGGTCAGATCTTTTTCACCCTTGCCGTGGAGCCAGTTTCCTGTTGCATGTGGGGGAAGCAACATGTGGTGAAG
AGTATAGAAAACGAAAACATGTGGGTACAGTATGTATAAGTGGAGGGAACAAACTCATAATTCCAACTAGTTTCTCA
TGAGAGACTCATGAATCATTGTGGTAGTTCTCAATATAAACTTAATCTAGGCCGGATGTGGTGGCTCACACCTGTAA
TCTCAGCACTCTGGGTGGATCACTTGAGGTCAGGAGTTTGAGACCAGTCTGACCAACATGGAGAAACCCCATCGCTA
CTAAAAATACAAAATTATCCAGATGTGGTGGCTCACACCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCTGAGGCGGGTGGAT
CACTTGAGGTCAGGAGTTTGAGACCAGCCTGACCAACATGGAGAAACTGTGTCTCTACTAAAAATACAAAATTAGCT
GGGCGTGGTGACGCATGCCTGTAATCCCAGCTATTTGGAGGCCGAAGCAGG
[0854] 示例性的调控序列D7(SEQ ID NO:129)
[0855] CTTCTTCTGGAGTCTTTTCTGGAATAATTCTGGGAGTGGGCTCAGCCTGCGGGAGAGTAACATTTTTATAACTTGATAGATGTAGCTGAGATGCCTCCCAGAGGGGAGACCCGCCTCTCCTCCGGCAGCTGTGCACGTAGGCTT
GTTCCCAGCAGCCTGGCCAGGGTGGTCCACCTGGTGTTTCTCATCTTCTTTCCCCGGAGCGCTGACTCCTGCGCGT
CCTCTTGGAAGACTCTTGACAGGACGGGTGTTTTATGGGTGTGATTCAGTGTCCTCTTGCATCAGTTCAATGTGGT
GGTGTTCAATCAACCCTTGTAGCGTTAGCAAAATTTGCTCAAGTCATTCCGCAGGAATGTCTGTGTCTTGCTTCCA
AGAAAGCTTGTAAGTGCCGGCAACAGGCCAAGCAGCTCACAAACCTGACCACAAGCCTGTGAGTAATTGTGGGGCA
GCACTTAGCAGTCTTTTATTTTCGACTTATTAAAGTCTCATCTTGGCCTCACCTTCTCCCTGGAAGGTGGCGTGGG
TGGGAACCACTGGGTCAGATCTTTTTCACCCTTGCCGT GGAGCCAGTTTCCTGTTGCATGTGGGGGAAGCAACAT
GTGGTGAAGAGTATAGAAAACGAAAACATGTGGGTACAGTATGTATAAGTGGAGGGAACAAACTCATAATTCCAACT
AGTTTCTCATGAGAGACTCATGAATCATTGTGGTAGTTCTCAATATAAACTTAATCTAGGCCGGATGTGGTGGCTCA
CACCTGTAATCTCAGCACTCTGGGTGGATCACTTGAGGTCAGGAGTTTGAGACCAGTCTGACCAACATGGAGAAACC
CCATCGCTACTAAAAATACAAAATTATCCAGATGTGGTGGCTCACACCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCTGAGG
CGGGTGGATCACTTGAGGTCAGGAGTTTGAGACCAGCCTGACCAACATGGAGAAACTGTGTCTCTACTAAAAATACA
AAATTAGCTGGGCGTGGTGACGCATGCCTGTAATCCCAGCTATTTGGAGGCCGAAGCAGG
[0856] 示例性的克隆位点A(SEQ ID NO:29)
[0857] TTGTCGACGCGGCCGCACGCGT
[0858] 示例性的克隆位点B(SEQ ID NO:30)
[0859] CTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTGCCACC
[0860] 示例性的克隆位点C(SEQ ID NO:31)
[0861] TAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGA
[0862] 示例性的克隆位点D(SEQ ID NO:32)
[0863] AAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCCTAGG
[0864] 示例性的克隆位点E(SEQ ID NO:33)
[0865] TAAGAGCTC
[0866] 示例性的克隆位点F(SEQ ID NO:34)
[0867] GCTGATCAGCCTCGA
[0868] 示例性的克隆位点G(SEQ ID NO:35)
[0869] GGCATTCCGGTACTGTTGGTAAAGCCACCAGCAAACCGCCCAGAGTA GAAGACCGGTGGCCACC
[0870] 示例性的克隆位点H(SEQ ID NO:36)
[0871] AAGCTTGAATTC
[0872] 示例性的克隆位点I(SEQ ID NO:37)
[0873] AGCTGACGTGCCTCGGACCGCCTAGG
[0874] 示例性的克隆位点J(SEQ ID NO:70)
[0875] GCGGCCGCACGCGT
[0876] 示例性的克隆位点K(SEQ ID NO:71)
[0877] GCGGCCGCACGCGTGGT
[0878] 示例性的克隆位点L(SEQ ID NO:72)
[0879] CTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGT
[0880] 示例性的克隆位点M(SEQ ID NO:73)
[0881] CGCTAGCCACC
[0882] 示例性的克隆位点N(SEQ ID NO:74)
[0883] ACCGGTCGCTAGCCACC
[0884] 示例性的克隆位点O(SEQ ID NO:75)
[0885] GAGCTCGCTGATCAGCCTCGA
[0886] 示例性的克隆位点P(SEQ ID NO:76)
[0887] AAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCT
[0888] 示例性的克隆位点Q(SEQ ID NO:85)
[0889] CTCACCGGT
[0890] 示例性的接头序列(SEQ ID NO:77)
[0891] GGATCCCGGGCT
[0892] 报告序列、元件或报告多肽
[0893] 在一些方面，本文提供的构建体可任选地包括编码报告多肽和/或蛋白的序列(“报告序列”)。报告序列的非限制性实例包括编码以下的DNA序列：β‑内酰胺酶、β‑半乳糖苷酶(LacZ)、碱性磷酸酶、胸苷激酶、绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白、mCherry荧光蛋白、黄色荧光蛋白、氯霉素乙酰转移酶(CAT)和萤光素酶。报告序列的另外实例为本领域已知的。报告多肽的非限制性实例包括β‑内酰胺酶、β‑半乳糖苷酶(LacZ)、碱性磷酸酶、胸苷激酶、绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白、mCherry荧光蛋白、黄色荧光蛋白、氯霉素乙酰转移酶(CAT)、FLAG和荧光素酶。当与驱动其表达的控制元件相关时，报告序列可提供可通过常规方式检测的信号，包括酶促、放射照相、比色、荧光或其他光谱测定；荧光活化细胞分选(FACS)测定；免疫测定(例如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)和免疫组织化学)。
[0894] 在一些方面，报告序列为LacZ基因，并且通过对β‑半乳糖苷酶活性的测定来检测哺乳动物细胞(例如耳蜗毛细胞)中携带LacZ基因的构建体的存在。当报告多肽为荧光蛋白(例如绿色荧光蛋白)或萤光素酶时，可通过荧光技术(例如荧光显微术或FACS)或光度计
(例如分光光度计或IVIS成像仪器)中的光产生来测量哺乳动物细胞(例如耳蜗毛细胞)中
携带荧光蛋白或萤光素酶的构建体的存在。在一些方面，报告序列可被用于验证本文所述
构建体中任何一种的组织特异性靶向能力和组织特异性启动子调控和/或控制活性。在一
些方面，报告多肽可被用于验证本文所述构建体中任何一种的组织特异性靶向能力和组织
特异性启动子调控和/或控制活性。
[0895] 在一些方面，报告序列为FLAG标签(例如3xFLAG标签)，并且通过蛋白结合或检测测定(例如蛋白印迹、免疫组织化学、放射免疫测定(RIA)、质谱)来检测哺乳动物细胞(例如内耳细胞，例如耳蜗毛细胞或支持细胞)中携带FLAG标签的构建体的存在。示例性的3xFLAG标签序列如SEQ ID NO:42所提供的。
[0896] 示例性的3xFLAG标签序列(SEQ ID NO:42)
[0897] GGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCA TGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAG
[0898] 具有终止密码子的示例性3xFLAG标签序列(SEQ ID NO:81)
[0899] GACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTA CAAGGATGACGATGACAAGTAA
[0900] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:62)
[0901] GTGTCACC
[0902] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:55)
[0903] CACAACCT
[0904] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:27)
[0905] CGTGTGTT
[0906] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:41)
[0907] TCGTGGGT
[0908] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:39)
[0909] GCAAACTG
[0910] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:108)
[0911] CCTACGCT
[0912] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:109)
[0913] GCCAAAGC
[0914] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:110)
[0915] CCATCCAC
[0916] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:111)
[0917] CCCGTTCT
[0918] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:112)
[0919] TTCACTGG
[0920] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:113)
[0921] ATACTCTC
[0922] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:114)
[0923] GGCACTTC
[0924] 示例性的条形码标签(SEQ ID NO:115)
[0925] TTTCAGGT
[0926] AAV衣壳
[0927] 本公开提供封装到AAV衣壳中的一种或多种多核苷酸构建体。在一些方面，AAV衣壳来自或衍生于AAV2、3、4、5、6、7、8、9、10、rh8、rh10、rh39、rh43、AAV2‑tYF、AAV2‑P2V2、AAV2‑P2V3、AAV2‑MeBtYFTV、AAV2‑MeB、AAV2‑P2V6、AAV2‑DGEDF或Anc80血清型的AAV衣壳，或其一种或多种杂合体。在一些方面，AAV衣壳来自AAV祖先血清型。在一些方面，AAV衣壳为祖先(Anc)AAV衣壳。Anc衣壳创建自使用演化概率和演化建模以确定可能的祖先序列而构
建的构建体序列。因此，自然界中是否曾存在Anc衣壳/构建体序列为未知的。例如，在一些方面，AAV衣壳为Anc80衣壳(例如Anc80L65衣壳)。在一些方面，AAV衣壳为使用包含SEQ ID NO:43的模板核苷酸编码序列创建的。在一些方面，衣壳包含由SEQ ID NO:44表示的多肽。
在一些方面，衣壳包含与由SEQ ID NO:44表示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的多肽。
[0928] 如本文提供的，AAV衣壳和AAV构建体(例如包含AAV ITR)的任何组合可被用于本公开的重组AAV(rAAV)颗粒中。例如，野生型或变体AAV2 ITR和Anc80衣壳(例如Anc80L65衣壳)、野生型或变体AAV2 ITR和AAV6衣壳等。在本公开的一些方面，AAV颗粒完全由AAV2组分构成(例如衣壳和ITR为AAV2血清型)。在一些方面，AAV颗粒为AAV2/6、AAV2/8或AAV2/9颗粒(例如AAV6、AAV8或AAV9衣壳与具有AAV2 ITR的AAV构建体)。在本公开的一些方面，AAV颗粒为包含Anc80衣壳(例如包含SEQ ID NO:44的多肽)的AAV2/Anc80颗粒，所述Anc80衣壳将
AAV构建体与侧接编码序列例如编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的核酸
的一部分的AAV2 ITR(例如SEQ ID NO:8和9)衣壳化。其他AAV颗粒为本领域已知的，并且描述于例如Sharma等人，Brain Res Bull.2010Feb 15；81(2‑3):273中，其通过参考以其全部结合至本文中。在一些方面，衣壳序列与分别由SEQ ID NO:43或44表示的衣壳核苷酸或氨
基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或
100％同一性。
[0929] 示例性的AAV Anc80衣壳DNA序列(SEQ ID NO:43)
[0930] ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACAACCTCTCTGAGGGCATTCGCGAGTGGTGGGACTTGAAACCTGGAGCCCCGAAACCCAAAGCCAACCAGCAAAAGCAGGACGACGGCCGGGGTCTGGTGCTTCCT
GGCTACAAGTACCTCGGACCCTTCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCCGTCAACGCGGCGGACGCAGCGGCCCTCG
AGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCAAAGCGGGTGACAATCCGTACCTGCGGTATAACCACGCCGACGCCGA
GTTTCAGGAGCGTCTGCAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGAGCAGTCTTCCAGGCCAAGAAGCGG
GTTCTCGAACCTCTCGGTCTGGTTGAGGAAGGCGCTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGACCGGTAGAGCAATCAC
CCCAGGAACCAGACTCCTCTTCGGGCATCGGCAAGAAAGGCCAGCAGCCCG CGAAGAAGAGACTCAACTTTGGGC
AGACAGGCGACTCAGAGTCAGTGCCCGACCCTCAACCACTCGGAGAACCCCCCGCAGCCCCCTCTGGTGTGGGATCT
AATACAATGGCAGCAGGCGGTGGCGCTCCAATGGCAGACAATAACGAAGGCGCCGACGGAGTGGGTAACGCCTCAGG
AAATTGGCATTGCGATTCCACATGGCTGGGCGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGAACCTGGGCCCTCCCCACCT
ACAACAACCACCTCTACAAGCAAATCTCCAGCCAATCGGGAGCAAGCACCAACGACAACACCTACTTCGGCTACAGC
ACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTTAACAGATTCCACTGCCACTTCTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAA
CAACTGGGGATTCCGGCCCAAGAGACTCAACTTCAAGCTCTTCAACATCCAGGTCAAGGAGGTCACGACGAATGATG
GCACCACGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGGTTCAGGTCTTTACGGACTCGGAATACCAGCTCCCGTACGTC
CTCGGCTCTGCGCACCAGGGCTGCCTGCCTCCGTTCCCGGCGGACGTCTTCATGATTCCTCAGTACGGGTACCTGAC
TCTGAACAATGGCAGTCAGGCCGTGGGCCGTTCCTCCTTCTACTGCCTGGAGTACTTTCCTTCTCAAATGCTGAGAA
CGGGCAACAACTTTGAGTTCAGCTACACGTTTGAGGACGTGCCTTTTCACAGCAGCTACGCGCACAGCCAAAGCCTG
GACCGGCTGATGAACCCCCTCATCGACCAGTACCTGTACTACCTGTCTCGGACTCAGACCACGAGTGGTACCGCAGG
AAATCGGACGTTGCAATTTTCTCAGGCCGGGCCTAGTAGCATGGCGAATCAGGCCAAAAACTGGCTACCCGGGCCCT
GCTACCGGCAGCAACGCGTCTCCAAGACAGCGAATCAAAATAACAACAGCAACTTTGCCTGGACCGGTGCCACCAAG
TATCATCTGAATGGCAGAGACTCTCTGGTAAATCCCGGTCCCGCTATGGCAACCCACAAGGACGACGAAGACAAATT
TTTTCCGATGAGCGGAGTCTTAATATTTGGGAAACAGGGAGCTGGAAATAGCAACGTGGACCTTGACAACGTTATGA
TAACCAGTGAGGAAGAAATTAAAACCACCAACCCAGTGGCCACAGAACAGTACGGCACGGTGGCCACTAACCTGCAA
TCGTCAAACACCGCTCCTGCTACAGGGACCGTCAACAGTCAAGGAGCCTTACCTGGCATGGTCTGGCAGAACCGGGA
CGTGTACCTGCAGGGTCCTATCTGGGCCAAGATTCCTCACACGGACGGACACTTTCATCCCTCGCCGCTGATGGGAG
GCTTTGGACTGAAACACCCGCCTCCTCAGATCCTGATTAAGAATACACCTGTTCCCGCGAATCCTCCAACTACCTTC
AGTCCAGCTAAGTTTGCGTCGTTCATCACGCAGTACAGCACCGGACAGGTCAGCGTGGAAATTGAATGGGAGCTGCA
GAAAGAAAACAGCAAACGCTGGAACCCAGAGATTCAATACACTTCCAACTACAACAAATCTACAAATGTGGACTTTG
CTGTTGACACAAATGGCGTTTATTCTGAGCCTCGCCCCATCGGCACCCGTTACCTCACCCGTAATCTG
[0931] 示例性的AAV Anc80衣壳氨基酸序列(SEQ ID NO:44)
[0932] MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPV
EQSPQEPDSSSGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGVGSNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGN
ASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRL
INNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYG
YLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQTTSG
TAGNRTLQFSQAGPSSMANQAKNWLPGPCYRQQRVSKTANQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMATHKDDE
DKFFPMSGVLIFGKQGAGNSNVDLDNVMITSEEEIKTTNPVATEQYGTVATNLQSSNTAPATGTVNSQGALPGMVWQ
NRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEW
ELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSTNVDFAVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL
[0933] 组合物
[0934] 除其他事项之外，本公开提供组合物。在一些方面，组合物包含如本文所述的构建体。在一些方面，组合物包含一个或多个如本文所述的构建体。在一些方面，组合物包含多个如本文所述的构建体。在一些方面，当多于一个构建体被包括在组合物中时，构建体各自不同。
[0935] 在一些方面，组合物包含如本文所述的AAV颗粒。在一些方面，组合物包含一个或多个如本文所述的AAV颗粒。在一些方面，组合物包含多个AAV颗粒。在一些方面，当多于一个AAV颗粒被包括在组合物中时，AAV颗粒各自不同。
[0936] 在一些方面，组合物包含如本文所述的载体。
[0937] 在一些方面，组合物包含细胞。
[0938] 在一些方面，组合物为或包含药用组合物。在一些方面，药用组合物包含药学上可接受的载剂。在一些方面，组合物为或包含合成的外淋巴溶液。在一些方面，合成外淋巴溶液包含20‑200mM NaCl；1‑5mM KCl；0.1‑10mM CaCl2；1‑10mM葡萄糖；以及2‑50mM HEPES，pH在约6‑约9之间。
[0939] 给药和给予体积
[0940] 在一些方面，将本文公开的组合物，例如本文公开的一种或多种AAV载体，作为单个剂量或多个剂量给予。
[0941] 在一些方面，本文公开的组合物作为单个剂量给予。在一些方面，本文公开的组合物作为多个剂量，例如2、3、4、5、6、7、8、9或10个剂量给予。
[0942] 在一些方面，本文公开的组合物(例如包含本文公开的一个或多个rAAV构建体的组合物)以约0.01mL、约0.02mL、约0.03mL、约0.04mL、约0.05mL、约0.06mL、约0.07mL、约
0.08mL、约0.09mL、约1.00mL、约1.10mL、约1.20mL、约1.30mL、约1.40mL、约1.50mL、约
1.60mL、约1.70mL、约1.80mL、约1.90mL或约2.00mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约0.01mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约0.02mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约0.03mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约
0.04mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约0.05mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约0.06mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约0.07mL的
体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约0.08mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约0.09mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约1.00mL的体积给予。
在一些方面，本文公开的组合物以约1.10mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约1.20mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约1.30mL的体积给予。在一些方
面，本文公开的组合物以约1.40mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约1.50mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约1.60mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约1.70mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约1.80mL的体积给
予。在一些方面，本文公开的组合物以约1.90mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物以约2.00mL的体积给予。
[0943] 在一些方面，本文公开的组合物(例如包含本文公开的一个或多个rAAV构建体的组合物)以约0.01‑2.00mL、约0.02‑1.90mL、约0.03‑1.8mL、约0.04‑1.70mL、约0.05‑
1.60mL、约0.06‑1.50mL、约0.06‑1.40mL、约0.07‑1.30mL、约0.08‑1.20mL或约0.09‑1.10mL的体积给予。在一些方面，本文公开的组合物(例如包含本文公开的一个或多个rAAV构建体的组合物)以约0.01‑2.00mL、约0.02‑2.00mL、约0.03‑2.00mL、约0.04‑2.00mL、约0.05‑
2.00mL、约0.06‑2.00mL、约0.07‑2.00mL、约0.08‑2.00mL、约0.09‑2.00mL、约0.01‑1.90mL、约0.01‑1.80mL、约0.01‑1.70mL、约0.01‑1.60mL、约0.01‑1.50mL、约0.01‑1.40mL、约0.01‑
1.30mL、约0.01至1.20mL、约0.01‑1.10mL、约0.01‑1.00mL、约0.01‑0.09mL的体积给予。
[0944] 在一些方面，给药方案包括以每耳蜗至少0.01mL、至少0.02mL、至少0.03mL、至少0.04mL、至少0.05mL、至少0.06mL、至少0.07mL、至少0.08mL、至少0.09mL、至少0.10mL、至少
0.11mL、至少0.12mL、至少0.13mL、至少0.14mL、至少0.15mL、至少0.16mL、至少0.17mL、至少
0.18mL、至少0.19mL或至少0.20mL的体积递送。在一些方面，给药方案包括以每耳蜗至多
0.30mL、至多0.25mL、至多0.20mL、至多0.15mL、至多0.14mL、至多0.13mL、至多0.12mL、至多
0.11mL、至多0.10mL、至多0.09mL、至多0.08mL、至多0.07mL、至多0.06mL或至多0.05mL的体积递送。在一些方面，取决于群体，给药方案包括以每耳蜗约0.05mL、约0.06mL、约0.07mL、约0.08mL、约0.09mL、约0.10mL、约0.11mL、约0.12mL、约0.13mL、约0.14mL或约0.15mL的体积递送。
[0945] 单个AAV构建体组合物
[0946] 在一些方面，本公开提供包含包括单个构建体的AAV颗粒的组合物或系统。在一些此类方面，单个构建体可递送编码功能性(例如野生型或者另外的功能性，例如密码子优化的)多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的多核苷酸。在一些方面，构建体为或包含rAAV构建体。在本文所述的一些方面，单个rAAV构建体能够在靶细胞(例如内耳支持细
胞)中表达其多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)。
[0947] 在一些方面，单个构建体组合物或系统可包含本文所述的任何或所有示例性构建体组分。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:45‑51、82‑84、88或100‑107具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:82具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，示例性的单个构建体由SEQ ID NO:82表示。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:83具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，示例性的单个构建体由SEQ ID NO:83表示。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:84具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，示例性的单个构建体由SEQ ID NO:84表示。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:87具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，示例性单个构建体由SEQ ID NO:87表
示。
[0948] 在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:54的核酸序列。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:54具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:54的核苷酸12‑4754的核酸序列。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:54的12‑4754具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0949] 在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:17的核酸序列。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:17具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少
99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:17的核苷酸12‑4338。
在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:17的核苷酸12‑4338具有至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0950] 在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:7的核酸序列。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:7具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0951] 在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:7的核苷酸12‑4557。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:7的核苷酸12‑4557具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。
[0952] 在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:61具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:61的核酸序列。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:61的核苷酸12‑4429具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:61的核苷酸12‑4429的核酸序列。
[0953] 在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:38具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:38的核酸序列。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:38的核苷酸12‑3976具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:38的核苷酸12‑3976的核酸序列。
[0954] 在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:100具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:100。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:100的核苷酸12‑4645具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:100的核苷酸12‑4645。
[0955] 在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:101具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:101。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:101的核苷酸12‑4708具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:101的核苷酸12‑4708。
[0956] 在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:102具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:102。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:102的核苷酸12‑4993具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:102的核苷酸12‑4993。
[0957] 在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:103具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:103。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:103的核苷酸12‑4496具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:103的核苷酸12‑4496。
[0958] 在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:104具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:104。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:104的核苷酸12‑4253具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:104的核苷酸12‑4253。
[0959] 在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:105具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:105。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:105的核苷酸12‑4320具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:105的核苷酸12‑4320。
[0960] 在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:106具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:106。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:106的核苷酸12‑4464具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:106的核苷酸12‑4464。
[0961] 在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:107具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:107。在一些方面，构建体包含与SEQ ID NO:107的核苷酸12‑4328具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在一些方面，构建体包含SEQ ID NO:107的核苷酸12‑4328。
[0962] 本领域的技术人员将认识到，构建体可经历另外的修饰，包括密码子优化、引入新的但功能上等效的(例如沉默突变)、添加报告序列和/或其他常规修饰。
[0963] 在一些方面，示例性的rAAVAnc80颗粒包含由SEQ ID NO:82表示的构建体。
[0964] 在一个方面，示例性的构建体包含：通过SEQ ID NO:52举例说明的5’ITR、任选的通过SEQ ID NO:70举例说明的克隆位点、通过SEQ ID NO:14举例说明的CAG增强子/启动子、任选的通过SEQ ID NO:72举例说明的克隆位点、通过SEQ ID NO:66举例说明的GJB2 5’UTR序列、任选的通过SEQ ID NO:73举例说明的克隆位点、GJB2编码区、通过SEQ ID NO:77举例说明的接头序列、通过SEQ ID NO:81举例说明的具有终止密码子的FLAG序列、通过SEQ ID NO:67举例说明的3’UTR、任选的通过SEQ ID NO:75举例说明的克隆位点、通过SEQ ID NO:25举例说明的多聚(A)位点、任选的通过SEQ ID NO:76举例说明的克隆位点和通过SEQ 
ID NO:53举例说明的3’ITR。
[0965] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含由SEQ ID NO:83表示的构建体。
[0966] 在一个方面，示例性的构建体包含：通过SEQ ID NO:52举例说明的5’ITR、任选的通过SEQ ID NO:70举例说明的克隆位点、通过SEQ ID NO:12举例说明的CMV/CBA增强子/启动子、通过SEQ ID NO:64举例说明的嵌合内含子、任选的通过SEQ ID NO:72举例说明的克
隆位点、通过SEQ ID NO:66举例说明的GJB2 5’UTR序列、任选的通过SEQ ID NO:73举例说明的克隆位点、GJB2编码区、通过SEQ ID NO:77举例说明的接头序列、任选的通过SEQ ID NO:81举例说明的具有终止密码子的FLAG序列、通过SEQ ID NO:67举例说明的a 3’UTR、任选的通过SEQ ID NO:75举例说明的克隆位点、通过SEQ ID NO:25举例说明的多聚(A)位点、任选的通过SEQ ID NO:76举例说明的克隆位点和通过SEQ ID NO:53举例说明的3’ITR。
[0967] 在一些方面，示例性的rAAVAnc80颗粒包含由SEQ ID NO:84表示的构建体。
[0968] 在一个方面，示例性的构建体包含：通过SEQ ID NO:52举例说明的5’ITR、任选的通过SEQ ID NO:70举例说明的克隆位点、通过SEQ ID NO:63举例说明的CMV增强子、通过SEQ ID NO:61举例说明的人类GJB2启动子、任选的通过SEQ ID NO:72举例说明的克隆位
点、通过SEQ ID NO:66举例说明的GJB2 5’UTR序列、任选的通过SEQ ID NO:73举例说明的克隆位点、GJB2编码区、通过SEQ ID NO:77举例说明的接头序列、任选的通过SEQ ID NO:81举例说明的具有终止密码子的FLAG序列、通过SEQ ID NO:67举例说明的3’UTR、任选的通过含SEQ ID NO:75举例说明的克隆位点、通过SEQ ID NO:25举例说明的多聚(A)位点、任选的通过SEQ ID NO:76举例说明的克隆位点和通过SEQ ID NO:53举例说明的3’ITR。
[0969] 在一些方面，示例性的rAAVAnc80颗粒包含由SEQ ID NO:87表示的构建体。
[0970] 在一个方面，示例性的构建体包含：通过SEQ ID NO:52举例说明的5’ITR、任选的通过SEQ ID NO:70举例说明的克隆位点、通过SEQ ID NO:91举例说明的人类GFAP增强子‑启动子、任选的通过SEQ ID NO:72举例说明的克隆位点、通过SEQ ID NO:66举例说明的
GJB2 5’UTR序列、任选的通过SEQ ID NO:73举例说明的克隆位点、GJB2编码区、通过SEQ ID NO:77举例说明的接头序列、任选的通过SEQ ID NO:81举例说明的具有终止密码子的FLAG
序列、通过SEQ ID NO:80举例说明的不稳定结构域、通过SEQ ID NO:68举例说明的3’UTR，任选的通过SEQ ID NO:34举例说明的克隆位点、通过SEQ ID NO:25举例说明的多聚(A)位
点、任选的通过SEQ ID NO:76举例说明的克隆位点和通过SEQ ID NO:53举例说明的3’ITR。
[0971] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:61的核酸序列的构建体。
[0972] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:90的核酸序列的GDF6启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的克
隆位点、任选的含有SEQ ID NO:62的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序
列的5’UTR序列、GJB2编码区、通过SEQ ID NO:77举例说明的接头序列、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位
点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的3’ITR。
[0973] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:54的核酸序列的构建体。
[0974] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:57的核酸序列的IGFBP2启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的
克隆位点、任选的含有SEQ ID NO:55的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸
序列的5’UTR序列、GJB2编码区comp、通过SEQ ID NO:77举例说明的接头序列、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的
3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的3’ITR。
[0975] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:17的核酸序列的构建体。
[0976] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:28的核酸序列的RBP7启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的克
隆位点、任选的含有SEQ ID NO:27的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序
列的5’UTR序列、GJB2编码区、通过SEQ ID NO:77举例说明的接头序列、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位
点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的3’ITR。
[0977] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:17的核酸序列的构建体。
[0978] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:16的核酸序列的GJB6启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的克
隆位点、任选的含有SEQ ID NO:41的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序
列的5’UTR序列、GJB2编码区、通过SEQ ID NO:77举例说明的接头序列、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位
点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的3’ITR。
[0979] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:7的核酸序列的构建体。
[0980] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:40的核酸序列的PARM1启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的克隆位点、任选的含有SEQ ID NO:39的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序
列的5’UTR序列、GJB2编码区、通过SEQ ID NO:77举例说明的接头序列、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位
点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的3’ITR。
[0981] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:100的核酸序列的构建体。
[0982] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:92的核酸序列的BACE2启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的克隆位点、任选的含有SEQ ID NO:108的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序列的5’UTR序列、GJB2编码区、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的
FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚
(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的
3’ITR。
[0983] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:101的核酸序列的构建体。
[0984] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:93的核酸序列的DBI2启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有S EQ ID NO:85的核酸序列的克隆位点、任选的含有SEQ ID NO:109的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序列的
5’UTR序列、GJB2编码区、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位点和含有含SEQ ID NO:53的核酸序列的3’ITR。
[0985] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:102的核酸序列的构建体。
[0986] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:94的核酸序列的FABP3启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的克隆位点、任选的含有SEQ ID NO:110的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序列的5’UTR序列、GJB2编码区、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的
FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚
(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的
3’ITR。
[0987] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:103的核酸序列的构建体。
[0988] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:95的核酸序列的KLHL14启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的
克隆位点、任选的含有SEQ ID NO:111的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序列的5’UTR序列、GJB2编码区、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚
(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的
3’ITR。
[0989] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:104的核酸序列的构建体。
[0990] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:96的核酸序列的MMP15启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的克隆位点、任选的含有SEQ ID NO:112的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序列的5’UTR序列、GJB2编码区、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的
FLAG序列、包含SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚
(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的
3’ITR。
[0991] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:105的核酸序列的构建体。
[0992] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:97的核酸序列的SPARC启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的克隆位点、任选的含有SEQ ID NO:113的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序列的5’UTR序列、GJB2编码区、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的
FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚
(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的
3’ITR。
[0993] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:106的核酸序列的构建体。
[0994] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:98的核酸序列的TSPAN8启动子序列；含有SEQ ID NO:86的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的
克隆位点、任选的含有SEQ ID NO:124的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序列的5’UTR序列、GJB2编码区、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚
(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的
3’ITR。
[0995] 在一些方面，rAAVAnc80颗粒包含含有SEQ ID NO:107的核酸序列的构建体。
[0996] 在一个方面，构建体包含含有SEQ ID NO:52的核酸序列的5’ITR、任选的含有SEQ ID NO:71的核酸序列的克隆位点、含有SEQ ID NO:99的核酸序列的VIM启动子序列；含有SEQ ID NO:91的核酸序列的hGJB2最小启动子、任选的含有SEQ ID NO:85的核酸序列的克
隆位点、任选的含有SEQ ID NO:114的核酸序列的合成条形码；含有SEQ ID NO:66的核酸序列的5’UTR序列、GJB2编码区、任选的含有SEQ ID NO:81的核酸序列的具有终止密码子的
FLAG序列、含有SEQ ID NO:67的核酸序列的3’UTR、含有SEQ ID NO:25的核酸序列的多聚
(A)、任选的含有SEQ ID NO:76的核酸序列的克隆位点和含有SEQ ID NO:53的核酸序列的
3’ITR。
[0997] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:82)
[0998] CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATT
GACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTA
CGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTA
ACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGT
GTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGA
CCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTAT
[0999] TACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCC
[1000] CCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAG
[1001] CGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGG
[1002] GCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCA
[1003] GAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGC
[1004] GGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCT
[1005] TCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGA
[1006] CTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCG
[1007] GGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGC
[1008] GTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGG
[1009] CTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCC
[1010] CGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTG
[1011] CGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGT
[1012] GCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGG
[1013] GGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCT
[1014] GCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCT
[1015] CCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGC
[1016] AGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCG
[1017] GGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGC
[1018] GAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACT
[1019] TCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCAC
[1020] CCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAA
[1021] TGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTC
[1022] TCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGG
[1023] GGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCT
[1024] GCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGC
[1025] TGGTTATTGTGACCGGTGTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCC
[1026] CCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGCG
[1027] CAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCC
[1028] GCCGCGCTTCCTCCCGACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGT
[1029] GTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGTGCCTCGATCCT
[1030] GCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCACCTAACTAACAG
[1031] CTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTGGGACTGCCTTGAGAAGC
[1032] GTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCGCTAGCCACCATGGATTGGGGCAC
[1033] GCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCCACCAGCATTGGAA
[1034] AGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATTATGATCCTCGTTGTGGC
[1035] TGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTCTGCAACACCC
[1036] TGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACTTCCCCATCTCCC
[1037] ACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACGCCAGCGCTCC
[1038] TAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAGAAGAAGAGGAAGTTC
[1039] ATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAGGAGATCAAAAC
[1040] CCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAAGCAGCA
[1041] TCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGTCTTCTATGTCAT
[1042] GTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCTTG
[1043] TCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGAGAAGACTGTCTT
[1044] CACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCCTGCTGAATGTCACT
[1045] GAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAGCCA
[1046] GTTGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCAT
[1047] GACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGTAAGAAATAGACAGCATGAG
[1048] AGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTC
[1049] CCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGTAGGC
[1050] CTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCTGCTCCCCTAAAGCCTC
[1051] AAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAG
[1052] TTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTTTCAT
[1053] ATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGAGGACAAGAGAA
[1054] AAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGG
[1055] GGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTTTCAT
[1056] TTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGCCTTA
[1057] AACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTATGATAGGTTATTT
[1058] TGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTCAGAGGCT
[1059] CAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATGATTTAATTTGAA
[1060] ATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAGGCTGTCTG
[1061] TTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTCAATCGAGT
[1062] GAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAATGGCCTCAT
[1063] GTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGGATGTACCA
[1064] CCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCCTTTTCCATG
[1065] ACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGGTCGCTTGG
[1066] GAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATGGGGCAGG
[1067] GGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACTGGACTCT
[1068] AAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTTGTTTGCTT
[1069] ACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTAATAACATGTGA
[1070] AAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGATCTATAGGAAG
[1071] ATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAAAATGGTA
[1072] CTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGAATAGCATT
[1073] GTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGATATGCTTGTAAC
[1074] TAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAAATATAATC
[1075] TCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAG
[1076] CCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCA
[1077] CTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGA
[1078] GTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGG
[1079] GAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTAT
[1080] GGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGA
[1081] TGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGC
[1082] GACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGC
[1083] GAGCGAGCGCGCAG
[1084] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:83)
[1085] CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATT
GACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTA
CGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTA
ACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGT
GTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGA
CCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCAC
GTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTG
CAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCG
GAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGC
CCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCG
CGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTG
TAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGCTAG
AGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGACCGGTG
TTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTA
GGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCTCCC
[1086] GACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCC
[1087] GCGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAG
[1088] GAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCACCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGG
[1089] TTCCGTGGCCATGCACCTGGGACTGCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCC
[1090] AGAGTAGAAGCGCTAGCCACCATGGATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCT
[1091] GGGGGGTGTGAACAAACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCG
[1092] TCCTCTTCATTTTTCGCATTATGATCCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTG
[1093] GGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCA
[1094] AGAACGTGTGCTACGATCACTACTTCCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGG
[1095] CCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACG
[1096] TGGCCTACCGGAGACATGAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATA
[1097] AAGAGTGAATTTAAGGACATCGAGGAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCAT
[1098] CGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCAT
[1099] CTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGTCTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCC
[1100] ATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGAC
[1101] TGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGAGAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATT
[1102] GCAGTGTCTGGAATTTGCATCCTGCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGC
[1103] TAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTTGGATCCCGGGCTG
[1104] ACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAG
[1105] GATGACGATGACAAGTAAGAAATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAAC
[1106] CCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATT
[1107] CTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTC
[1108] CAGATGCCACAATGGAGCTCTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCT
[1109] AATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACC
[1110] CCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAG
[1111] GATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTC
[1112] CACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCA
[1113] ACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTT
[1114] TTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACT
[1115] TTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATG
[1116] TTCTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATAT
[1117] GTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATGATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTG
[1118] GTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGT
[1119] GGTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTCAATCGAGTGAGACAGACTAG
[1120] AAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAATGGCCTCATGTCAAATATTTA
[1121] GATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGGATGTACCACCAACTACTACC
[1122] TGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATGGGGCAGGGGAGGG
AGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTAC
TTCAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTAATAACATGTGAAAAGAAT
AGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGATCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATG
GTTTCCAAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGAATAGCATTGTAAAAGC
ATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGATATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAA
AACATTAAAATATAATCTCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTT
GTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAAT
TGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGG
AAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTA
GGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCG
CCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG
[1123] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:84)
[1124] CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGACATTGATTATT
GACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTA
CGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTA
ACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGT
GTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGA
CCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTAAGCTTCCGCAGAAT
CCTATCAGTTTCCCCCTTTCGTGCTGTGTGCATCGAGCAGGAAGGGGCTTGGCAGGTTTTACCTGCCCTCTTTCCTT
TCTGAAAAGTCTGGGCCTCCTCACCCCGAAAGGAGTCACCTCCTTGCAGTTCCCCAGTTGCGAAAAGAGGAGGAAGT
TGGCTGGGCCGGGGGCCGCGGGGGGCACCCTCCGCAGATGGCGGGACCCCCCTGCCGGCCATGGCAAAAACGAGGCT
TGTCTCTCCCACCGCCCCCAACCTTAGTCCTTGGCACATTGTTGAAAGT
[1125] AATTGAATAAAATCGGAAATTCGAGAAGGCGTTCGTTCGGATTGGTGAGA
[1126] TTTTGAGGGGAGAAAGAAGCGGGGACTTCGCCGGCACCAGCGGCGCCCCC
[1127] TCCTCGGCCACCGTTAACCCCCATTCCAGAGGGCACTGCCCCGCCACCCAG
[1128] CCTAGGTCCCCCTGCGAGAGCCTCGCGGGCCCGCGCAGCCTCCGCGACTCG
[1129] AACAGATCTTCAGTCCTTGGAGGAATGCCTGTTTCTCTAACAATAAAAAAT
[1130] TAAAGAAGCGCTCATAAATGCCAAGTCCTCTCGCACTATGCGGAGTACAG
[1131] AGGACAACGACCACAGCCATCCCTGAACCCCGCCCACGGCACAGCGCCGG
[1132] AGCCGGGGTCTGGGGCGCCGCTTCCTGGGGGGTCCCGACTCTCAGCCGCCC
[1133] CCGCTTCACCCGGGCCGCCAAGGGGCTGGGGGAGGCGGCGCTCGGGGTAA
[1134] CCGGGGGAGACTCAGGGCGCTGGGGGCACTTGGGGAACTCATGGGGGCTC
[1135] AAAGGAACTAGGAGATCGGGACCTCGAAGGGGACTTGGGGGGTTCGGGGC
[1136] TTTCGGGGGCGGTCGGGGGTTCGCGGACCCGGGAAGCTCTGAGGACCCAG
[1137] AGGCCGGGCGCGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTTTCCCAGT
[1138] CTCCGAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGCCACGGCG
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ACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGT
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CCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGGTCGAGGTGAGCCCCAC
GTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTG
CAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCG
GAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGC
CCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCG
CGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTG
TAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCC
CTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTG
CCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGG
GGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCA
GGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTT
CGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCG
GGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCG
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GTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGG
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GCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAG
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[1371] 表4.构建体序列(SEQ ID NO:61)的组分
[1372] 组分 构建体中的位置5’ITR 12‑130
克隆位点 131‑147
GDF6启动子 148‑1335
hGJB2最小启动子 1336‑1463
克隆位点 1464‑1472
合成条形码 1473‑1480
5’UTR 1481‑1842
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3xFLAG 2544‑2609
3’UTR(外显子2) 2613‑4019
bGHpA 4041‑4265
克隆位点 4266‑4299
3’ITR 4300‑4429
[1373] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:54)
[1374] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TAAGAAACTTGCCCGAGTTTACACAGCTAGTAAATGGTTGCATTAGTCAGGACAGCTAGCCTATATTACAATAACAA
CCCTCTCAAATCCTAATGGCTTAAAACAACAGAGGTTTAATTTATACTCATTAGCTGTTCAAGGCAGGAGGCTCTAT
TCTCTAATCCATACAGTCACTCAGGATCCAGGCTGGTGGAGACCCTGCCATATTGTAGCCTCACCATTTAAAACATG
AAGAAGATAGAAAGTGAGGAGTCA
[1375] TGTAGGTTTTGTTCCGTTGCCTCAGGCTAGGAGTGACAGGTCACTTCATCTC
[1376] ACTCACAGCTCACTGCCCACAACTAGTCACTTGTGACTGTGCGAGTTAAGC
[1377] TTCTGTGTGTGAAGGAAGGAAAAGAGAATGGGATAAAGGTGAACATCAGC
[1378] AGGCTCTACCACAGTAGTTTGAACCAAGACTTGAGCCTAGGTCATGTGGCT
[1379] TCAGAATCTTTGCTCTTAATCACACTAAACAGCCTCTGTAAGTCATCTTTCC
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[1384] ACCACGGGCAGGTCACTTAAATTGTCTAAGCATCGTTTGACCCTTGTAAGA
[1385] ATTAAATGAAATAGCACCTGTAAAAGTGTCTGCACGGACTTACTGCTGTTA
[1386] GTTTTGTTCCTTTCTTCCTGTTGTCACTGCACTTCCCTGCCTGTTACCCAGGC
[1387] CATGCAGACCAGCCAGGCCTTCGACTTACAGTGCGGATAAGATTCCAAATC
[1388] TCCACGGCTGGTTTCCATGCTTTCTTCCAGGCTTCTGAGGACCCTGTGCTCT
[1389] GGTTTCTTCTATTTCTTTTCTATTACTTTTCTGTTACTCTTGAGCACACTTGC
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[1391] AACAACTCCAATCCCTTCCAACCAAGTAGTCCCTTTGAATTTCTTGTCACCC
[1392] AAGGAATCTCTCTGACAGGGGTCTTTGTTAGGGTCACACCCCAGGAGATGG
[1393] TTGATTATGGCTGAGTCCAGCCTGGAATGATGGGGGTTGGGGGCAGCTTGG
[1394] GTAGATGACTCAGTAAATCAAACAGAACAATGAAAGGAGGTCATGCTTGT
[1395] CCATCTGCATTATTGAAGACAGCCATAAATGGCCTTACCCCAGAGCGGGTC
[1396] TGTCACACCTGGAGAGCTGATCTGACCTCTCCAAGACCCCTGCAACTGAGT
[1397] GTTCTGGGATCTGTCCTGCAACAAGTGCCTCGAGATTTGTAGGTGGGGGCC
[1398] CAGAGGGAGGGGGTCTGCAGACGAAGGGGGCAGGTTTTGCGGGGCACTTA
[1399] GGGTTCTCATAGGTTGTAGTCACGAGCTCCAAGCTCTGAGGACCCAGAGGC
[1400] CGGGCGCGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTTTCCCAGTCTCC
[1401] GAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGCCACGGCGGGA
[1402] GACAGGTCTCACCGGTCACAACCTGTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCT
[1403] CCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTA
[1404] GGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCC
[1405] GGCCCCGCCGCGCTTCCTCCCGACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGA
[1406] GGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGTGCCTC
[1407] GATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCACCTAAC
[1408] TAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTGGGACTGCCTTG
[1409] AGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCGCTAGCCACCATGGATTG
[1410] GGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCCACCAGCA
[1411] TTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATTATGATCCTCGT
[1412] TGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTCTGCA
[1413] ACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACTTCCCCA
[1414] TCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACGCCAG
[1415] CGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAGAAGAAGAGG
[1416] AAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAGGAGAT
[1417] CAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAA
[1418] GCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGTCTTCTA
[1419] TGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTG
[1420] GCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGAGAAGAC
[1421] TGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCCTGCTGAAT
[1422] GTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAA
[1423] AAGCCAGTTGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAA
[1424] AGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGTAAGAAATAGACA
[1425] GCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCT
[1426] AGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCC
[1427] CTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCTGCTCCCCT
[1428] AAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACT
[1429] TAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGT
[1430] ACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGAGGAC
[1431] AAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTC
[1432] CTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTT
[1433] CTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGT
[1434] GCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTATGATAG
[1435] GTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTC
[1436] AGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATGATTT
[1437] AATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAG
[1438] GCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTCA
[1439] ATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAAT
[1440] GGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGG
[1441] ATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCC
[1442] TTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGG
[1443] TCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATG
[1444] GGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACT
[1445] GGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTT
[1446] GTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTAATAA
[1447] CATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGATCTA
[1448] TAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAA
[1449] AATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGA
[1450] ATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGATATG
[1451] CTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAA
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[1453] GTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGA
[1454] AGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCA
[1455] TTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAG
[1456] CAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTG
[1457] GGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACC
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[1461] TTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACC
[1462] ATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTAC
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[1464] TTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAA
[1465] ATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACC
[1466] CCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGAT
[1467] AGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACT
[1468] CTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGAT
[1469] TTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATT
[1470] TAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTA
[1471] TGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCC
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[1473] GCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAG
[1474] AGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGAT
[1475] ACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACAT
[1476] AAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGA
[1477] GGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGG
[1478] CTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGA
[1479] AGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCA
[1480] ATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGC
[1481] CTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACT
[1482] CACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATC
[1483] CTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGT
[1484] TGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCG
[1485] TCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGA
[1486] TTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAAT
[1487] GCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTC
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[1490] AACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAAT
[1491] ATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCG
[1492] ATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCC
[1493] ACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTT
[1494] TTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAG
[1495] CGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAA
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[1498] TGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTA
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[1505] AGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGT
[1506] TCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
[1507] 表5.构建体序列(SEQ ID NO:54)的组分
[1508]
[1509]
[1510] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:17)
[1511] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TCCCATGGCTCTGTTAAAATCAAAGAAACATCTTTTCCAACAGCCCTTTCAAACTCCTCATCGCATCTCACTGGCTG
ATTCAGTCATTTAAACCTGCTTCTCCCTAAAGCTGATCACTGGCTAAGCTAATAGGGTTTCCGGGATTGGTTTAGCC
TGATACTAATCCAGGTCTACCTTCAGGAGCCAGACCAAACTGCCTATTGGCATTGCATTCTTGCAGTAGGGAGGGGA
GGTATGGATGGTGTGGAGTCCACCACAAGGTCCATGCCAGTCTTTGCTGAACCAGCATCAGACTCCATCAAGCAACA
GATGAGAGGTTCCATGATAAAGTGGCCCTCAGCAATCCCCATCCATTGCTGTCTAGGAAGAACAGTGCTTGTACACA
GGTTTAGGACCTCAGTCTTGGCTGTAATCTTCTGGTTTACTTTGCCAGCACCAAACAGAAGGAAAGAAAGGGCTCAA
ATTTGACCAAATAAATTATGCTTCTCCTTCCAGAGATAACCTTGAGTCCTGTCTAGGAAGATATTAGAATTGTAAAG
AAAAAAAAAATTACTCCTTATCCTATGGCAAGTGGAGTCTATGTCTACTTCAGCTGAAATTAAATCCTGTCCATAAT
AGATGACCCTTGCTCAAGCTGGCCAGAAGCCATACCAACCAGCACGAAGGTTAAAACTATTATTAGTTTTTTCTGTG
ATTTTCATTTTCAGGCCAAGTTTTAGAACAATAAGATTTTAAGAATAGGAAGTAAGTAAGATTTCTGCATATCCTGT
TCTCTTAGTCAGCTGAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTAGTCCTAACTCAGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGCGT
GAGCCACCGCACCAAGCCTGGAATCTATGTCTTACAGTTATGAGAATCAACAGCTAGCTCATTATGGGCAAGGTGAT
GTCACTCTGGCTTCTCAATGAAAATGGCATTTCTCCCTTGGAAAAGGTCATAGCCAGTCAGTCAGTCAGTCACGGGA
GCGCAGCGGCTTCTAGGGGTGAGTGGGACCCACGCGGCCCCACCTGCTCCTCCCGCGCGCGGCCCCACCCCCCTGCC
CCGCCCCGCCTGGTTTATAGAAGCTCTGAGGACCCAGAGGCCGGGCGCGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTA
ACTTTCCCAGTCTCCGAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGCCACGGCGGGAGACAGGTCTCACC
GGTCGTGTGTTGTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCC
AGGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTT
CCTCCCGACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCA
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[1513] AGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCGCTAGCCACCATGGATTGGGG
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[1516] GGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTCTGCAACA
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[1526] ACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAG
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[1532] GCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAA
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[1535] AGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTC
[1536] CTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTT
[1537] TCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGC
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[1544] CATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGGATGTA
[1545] CCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCCTTTTCC
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[1547] TGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATGGGGC
[1548] AGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACTGGAC
[1549] TCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTTGTTTG
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[1551] GAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGATCTATAGGA
[1552] AGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAAAATGG
[1553] TACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGAATAGC
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[1555] AACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAAATATA
[1556] ATCTCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCC
[1557] AGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGC
[1558] CACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCT
[1559] GAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGG
[1560] GGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCT
[1561] ATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGT
[1562] GATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGG
[1563] GCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGA
[1564] GCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCC
[1565] TTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTA
[1566] CGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCA
[1567] GCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTT
[1568] CCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGG
[1569] GGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAA
[1570] AAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACG
[1571] GTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGT
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[1573] AGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACA
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[1575] CACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACA
[1576] CCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATC
[1577] CGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTT
[1578] TTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCC
[1579] TATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAAC
[1580] AGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCC
[1581] GCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCG
[1582] CGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCC
[1583] CGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGA
[1584] TGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCT
[1585] TCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACC
[1586] ACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGAT
[1587] TCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCAT
[1588] TCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCG
[1589] CTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTG
[1590] ATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCAT
[1591] AAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCAC
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[1605] CTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGG
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[1609] GGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTG
[1610] GCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
[1611] 表6.构建体序列(SEQ ID NO:17)的组分
[1612]
[1613]
[1614] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:38)
[1615] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TAAATAGCTTCCAACGTTTCCACCCCACCAGCCCTTGCACCACTCCCTGTACTGGCCCTGAGCTTTCTAGTCTTGAC
TGAAAAGCGGGGAGGCAATGTGGTCTCTCCTGGTGCACTGTCCCGAGGAAGGCCTGCTCCGCTTCCCCGGAGGAGTC
TTCAAAGGATGGAGGTAATTAATAAAAACAACCCCTGTACCTCCTCTAAGTGGTCATTAATTAATAAAGAACCTCCA
GGCTCCTATAGGAGAGGTCTGTGCACCCCGCGGGCTATGAGAAGGCTGGATCACCCAGAAAGACTGAGGATGTGTCC
TGGCAAAAACACAGCCTGCCCCTCACACTGCTCCCCACGGGTGCACTAGGGAGGAAGAGTTCCCTCGAGGGCCTGAG
CAGGCGCCCCACACCTGCACCCGTGCAGAGGGGGCTGGGCCCGCCCTCTGCGCTCCCGAGGGAGAGCCCTACCCCCT
GCATCCCCGGTACCCCGTTCCCTCCAAGGGCCGGAAAGAGGGCCCCGCGCACTGTGCACTTCTTAGGGGTCCCCCAC
CCTGCGCCCCCGCCACGGGAAAAAGGTCCCCGCTCTGCGCATCCGGCCCCGGAGGGACAGCCCCGGTCCTGCACTCC
TTGCTCCTCAGGGGGACGGTCCGCGCCCAGCGGCTAGTGCGCCCCGGGTAGGTGGGGGCGGGGGGCTCGTCGAGTGA
CAGCGCTCGCCTCCCGCAGCCCGCCCGAGCCGCGTCAGGGCAGAAGCTCTGAGGACCCAGAGGCCGGGCGCGCTCCG
CCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTTTCCCAGTCTCCGAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGC
CACGGCGGGAGACAGGTCTCACCGGTTCGTGGGTGTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGG
AGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACC
CCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCTCCCGACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGA
CCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCA
CCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTGGGACTGCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCC
CAGAGTAGAAGCGCTAGCCACCATGGATTGGGGC
[1616] ACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCCACCAGCATTGG
[1617] AAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATTATGATCCTCGTTGTG
[1618] GCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTCTGCAACAC
[1619] CCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACTTCCCCATCTC
[1620] CCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACGCCAGCGCT
[1621] CCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAGAAGAAGAGGAAGT
[1622] TCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAGGAGATCAAA
[1623] ACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAAGCAG
[1624] CATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGTCTTCTATGTC
[1625] ATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCT
[1626] TGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGAGAAGACTGTC
[1627] TTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCCTGCTGAATGTCA
[1628] CTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAGC
[1629] CAGTTGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGAT
[1630] CATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGTAAGAAATAGACAGCAT
[1631] GAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCA
[1632] TTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGT
[1633] AGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCTGCTCCCCTAAAG
[1634] CCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAAG
[1635] TTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTT
[1636] TCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGAGGACAAG
[1637] AGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTC
[1638] CTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTT
[1639] TCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGC
[1640] CTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTATGATAGGTT
[1641] ATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTCAGA
[1642] GGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATGATTTAATT
[1643] TGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAGGCTG
[1644] TCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTCAATCG
[1645] AGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAATGGCCT
[1646] CATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGGATGTA
[1647] CCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCCTTTTCC
[1648] ATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGGTCGCT
[1649] TGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATGGGGC
[1650] AGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACTGGAC
[1651] TCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTTGTTTG
[1652] CTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTAATAACATGT
[1653] GAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGATCTATAGGA
[1654] AGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAAAATGG
[1655] TACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGAATAGC
[1656] ATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGATATGCTTGT
[1657] AACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAAATATA
[1658] ATCTCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCC
[1659] AGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGC
[1660] CACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCT
[1661] GAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGG
[1662] GGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCT
[1663] ATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGT
[1664] GATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGG
[1665] GCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGA
[1666] GCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCC
[1667] TTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTA
[1668] CGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCA
[1669] GCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTT
[1670] CCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGG
[1671] GGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAA
[1672] AAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACG
[1673] GTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGT
[1674] TCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATA
[1675] AGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACA
[1676] AAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTATGGTG
[1677] CACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACA
[1678] CCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATC
[1679] CGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTT
[1680] TTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCC
[1681] TATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAAC
[1682] AGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCC
[1683] GCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCG
[1684] CGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCC
[1685] CGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGA
[1686] TGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCT
[1687] TCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACC
[1688] ACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGAT
[1689] TCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCAT
[1690] TCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCG
[1691] CTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTG
[1692] ATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCAT
[1693] AAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCAC
[1694] TTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTG
[1695] GACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACT
[1696] GCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGG
[1697] TATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGA
[1698] GTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTG
[1699] AGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTT
[1700] TCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGT
[1701] GGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGG
[1702] CTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTT
[1703] AGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCT
[1704] AATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGG
[1705] GTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAA
[1706] CGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAA
[1707] CTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGG
[1708] GAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAG
[1709] CGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTC
[1710] GGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGG
[1711] GGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTG
[1712] GCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
[1713] 表7.构建体序列(SEQ ID NO:38)的组分
[1714]
[1715]
[1716] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:7)
[1717] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGT
GGTTGTACAGGAGATAGTCAGGGAATTAGTAATTTTCAAAGAGGTGACTTTGAATTCAAACTTAAATATCATCTTC
AGCTGAAACAAAGAAGGGGTGCAGTTATGAGGAAGTGACCAGGTAAAGCATGGCAAACAAAGGTAAAGTTTGTTAT
GCGTATTTAAGTCAGAGCCCTCTCCATTGATAAGAGTTTCCAGTAATTTAGTGCCATCCTTTTCTTGCTATAGAGT
TCTCGTCTCTATCTGAGCACGCAAAAATAACATGCTTTCTTGCTTTCTTGAAGTTGGGCATGGCCATTGACTTGCC
TTAGCCCATATTTTTCTGTGAAGTGGTCTTCAAAAACCTATATTTCTGCCATAGAGTCACTTACTTAACCTGCCCT
ATTTAAAGGGGCTAATGCCTGATAGAATGTCGCTGCATAACTCCATCTGTGTGTGGTCCCTGCATCCATGACAACC
AAAACCCAGATGCAGAAATTGTTCCTAATCACATAGATTACCCTAGAAACCGGAAGGGCCTTGAAGTCAAAAGCAT
TCAGAGAACATGCTGAACAAATTGAATTTGCAGTTTATCTGGCCAGGGAGGATGGAGAGGGGATGGGCACTTGGTC
TGAGTATTTTTTGTTTCTCATTCCAACAGAAATTACTAGATTTACCAAAAAATCTACAAGTGGTAGTGTGATAGAG
TCAGGCAGAGGAATTGACCATAGATAAGGTGCTCAGGACTCCTAGAGTCAGCTTCTGGTATGTGAGAAAGAAGTGA
GAACAGAGCCCATGGCATATGAAGAAGATATTACAGAAAAAAGAAAGCTGCCTTCCACGCAAATCATTTCTTTACA
AAGGCTTGTTAACTCCTGCAGTGCCAAGAAGCTGAATGCAGCGGCAGACATCCTGGTTCGGGCCCCAGGAAGCTCA
GCCGGGTTTAATGTGGATGAGGGTTTAATGATGTACACGCAGAAGTGTTTTGACAAATGAAGAAGGTCCTCATTCT
TGGAACATGTGCCGGTTCTCCGAGGGAACTCCTAAAAGGCTGTAAGCTCATGTAGGAAAAGCTGAGCTAGATTCCT
AAGGGCAGAGATGTGCTCACATTTCTTTGCATCCCTAGTTCCCAGCACAGTGCAAGGCGCTGCAAACATTTGCTGA
ACCCAGGGTCTCGTGTCTT7GACTGTCCAGCAGA GGCCGCTCTGGGCCGGGGCTCTCGGGACCTGAGGGCTGAGA
GAAGGAAGGCCAGGGGGTGGCCCAGTCATCGCCGCGGGGCCCGGGTGGGAGGGGTTTGGCAGCGGCAGGCGCGGCGG
CGGCGGCGGAGGCGGAGGCGGCCCCGGGAAGCTCTGAGGACCCAGAGGCCGGGCGCGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCC
CCTCC
[1718] GTAACTTTCCCAGTCTCCGAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAA
[1719] AAGGCGCCACGGCGGGAGACAGGTCTCACCGGTGCAAACTGGTTGCGGCC
[1720] CCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCC
[1721] CGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAA
[1722] CGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCTCCCGACGCAGTTTAG
[1723] GACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGA
[1724] CGGTTCCATCAGTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCG
[1725] AACAGCGCTCACCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATG
[1726] CACCTGGGACTGCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCG
[1727] CTAGCCACCATGGATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAA
[1728] CAAACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTT
[1729] CGCATTATGATCCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCA
[1730] GGCCGACTTTGTCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTA
[1731] CGATCACTACTTCCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGAT
[1732] CTTCGTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAG
[1733] ACATGAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTA
[1734] AGGACATCGAGGAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTG
[1735] TGGTGGACCTACACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCC
[1736] TTCATGTACGTCTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGG
[1737] TGAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCC
[1738] GGCCCACGGAGAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAA
[1739] TTTGCATCCTGCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTG
[1740] TTCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTTGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACC
[1741] ATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGAC
[1742] AAGTAAGAAATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTG
[1743] TCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATG
[1744] CAACCATTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAAT
[1745] GGAGCTCTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGT
[1746] CTTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGG
[1747] GTTATTGGTGTAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGT
[1748] TTCTTTCTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAG
[1749] AGAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTA
[1750] AAGGTGAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGT
[1751] GGACAAAGTTACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAA
[1752] CTTTGTAGTATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTAT
[1753] ATGTTCCCCCTGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCAT
[1754] TCGCTACTATGATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGC
[1755] AGCACAGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAAC
[1756] AACATTGTAGCCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGC
[1757] TTATGATAGCAAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAA
[1758] GAAATACAGACTGGATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGT
[1759] CCAACACATCTCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACG
[1760] CTGATTTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATG
[1761] GGGAGGACAAAATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACA
[1762] GATTTGGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTC
[1763] TACTTCAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAA
[1764] AATATAGCTAATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAAT
[1765] ATTGAGCAGATCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGA
[1766] CATGGTTTCCAAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTT
[1767] TCCTGTTGTCAAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATA
[1768] GCTTTAATGATATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACAT
[1769] TTAAAACATTAAAATATAATCTCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCG
[1770] ACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTT
[1771] CCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGG
[1772] AAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGG
[1773] TGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGC
[1774] TGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGG
[1775] ACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTC
[1776] GCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTT
[1777] GCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCG
[1778] CCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATA
[1779] CGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCG
[1780] GGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCG
[1781] CCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCC
[1782] CCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTA
[1783] CGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGG
[1784] CCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCT
[1785] TTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGG
[1786] GCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAA
[1787] AAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAAC
[1788] GTTTACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAG
[1789] TTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCT
[1790] TGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGC
[1791] TGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAA
[1792] GGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAAC
[1793] TGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAAC
[1794] GGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATG
[1795] GGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATC
[1796] GCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAG
[1797] GTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGA
[1798] CGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGA
[1799] TGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATT
[1800] AGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTT
[1801] CCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGAT
[1802] CGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTT
[1803] GATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTC
[1804] TGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACT
[1805] CATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATA
[1806] GGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTT
[1807] GCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGG
[1808] CTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTC
[1809] ATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTG
[1810] AGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTT
[1811] CTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACC
[1812] ACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTT
[1813] TCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCT
[1814] AGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTAC
[1815] ATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAA
[1816] GTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCA
[1817] GCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAA
[1818] CGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCC
[1819] ACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGT
[1820] CGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATC
[1821] TTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTG
[1822] ATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCT
[1823] TTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
[1824] 表8.构建体序列(SEQ ID NO:7)的组分
[1825]
[1826]
[1827] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:100)
[1828] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TTGTGCTGCGAGGGCTTCATCTCCTAAGCACTAAATGCTAAATTCCCCCTCCCACGCCCATCGCCACTGTCCTCACG
GATCCTCGCAGCAGCTTCCCAATCGGTCTCCCTGTCTCCAGCCTCACCACCCCCAACTAAGACCATTCATGAAAACA
GAGACAACCAAGGAGACAGTCACCCAATGCTGTCCCTTCAGCTTGCATTATTTTCTGACAAGACAGCTCTGCCATCC
ATGGAAGCCTGTGTTTGAAGATCTCTGACATAAAGGTCCCTTGCAGAGCTAGACGTGATTCTAAAATTGGGAACACA
GGAATAAAAATCAAATCTTGAGTAGAAGTAGCTGAAAATTGCAGTGATTCGGGGAAGCTTGGCTTCTAACTCCCCAC
TGTTTGAAGATGGGCTTGTTTGTTTTTTAAAACAGCCAACATAATTCAGCTGGAGGAGGTACAAAGAATTTTCTATT
CCTTGTTTCTGTAGAAATCGATGGACTTTAGCTTGTCTAATTGTCCCCCCTGCCTTTAGTATCTAAAATAAAATAAC
CCTCGTTGCTTGCATTACTCAACGCATTTCTGCGTCTTGGCGTCTATGGCTAAACGAGTATTAATTAGACAGTCCGC
AGAGAGCTGGCTGGGGATAGAAGGGGAGGTGGGGGAGAAGGGCAGGGATCACAGCAGGGTGGACTCGTGGCCCTGAT
TTGGGATCCTGACAGCAACTTACTAGGTGGCCTGAGGGCTGGGTGCCAGGGGAGGCAGCGGGTTCCAGTAGCATCTG
ACCTGCATTAGGGACAGGGGCGCGGCGGAGGGGGCGAAGGGGGCGGGGGTGGGGGGAAGGTGGCTGGGGTGAAGCCC
AGCTTCGCAGCTAGCTGTGGGCAACAGAGGGAGTAAGGGGGGGCAATGAGGCTGGGGCCAGGCGCC
[1829] AGCAGCAGCCACGCCCCCCACCTCCCCCGATTTTTAGGGAAAATTCTCCAA
[1830] AGCTCTCGCATCCTCCTCTGCCTCCTTCCACCCTCCACCCTCCCAGCCTCCA
[1831] CTGAGACCTCTTTAAAACCACCCAGGGGCCGCCGGGGGATGAGGCCGGGG
[1832] AACGGGCTGGACTGAGGGCGGGGGCTCGGGGGCAGCGGACGGGAAACGC
[1833] CTCGAAAGCAGCCAGACCCGGCGACTGAAATGAGGCGGAGGAGCTTGGCG
[1834] AGGGGAGGCGCAGGCTCGGAAAGGCGCGCGAGGCTCCAGGCTCCTTCCCG
[1835] ATCCACCGCTCTCCTCGCTGACCTCCGAGTCACCCCCGGAAGCTCCCGCCA
[1836] CTGCCGGGCGAATAGACCCCCGCGGACCCCCAAGCGCGCGGGGCCGGGGC
[1837] CCTAGTTCAGGCCCTCGCTGCCCCTTTAAGGGTTCTCGAAACTTTCCCCCCG
[1838] GTATCAGATGAGCCTCGTCACATCCGTTGGCCGTGGCAAGCTCTGAGGACC
[1839] CAGAGGCCGGGCGCGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTTTCCC
[1840] AGTCTCCGAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGCCACG
[1841] GCGGGAGACAGGTCTCACCGGTCCTACGCTGTTGCGGCCCCGCAGCGCCCG
[1842] CGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACC
[1843] CGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCC
[1844] CGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCTCCCGACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCG
[1845] CGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCA
[1846] GTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTC
[1847] ACCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTGGGAC
[1848] TGCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCGCTAGCCACCA
[1849] TGGATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCC
[1850] ACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATTATGA
[1851] TCCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTT
[1852] GTCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTAC
[1853] TTCCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCA
[1854] CGCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAGAAG
[1855] AAGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGA
[1856] GGAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCT
[1857] ACACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACG
[1858] TCTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCA
[1859] ACGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGG
[1860] AGAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCC
[1861] TGCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAA
[1862] GTCAAAAAAGCCAGTTGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTG
[1863] ATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGTAAGAA
[1864] ATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTC
[1865] AGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTT
[1866] GAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCT
[1867] GCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTT
[1868] CTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGT
[1869] GTAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTC
[1870] TGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTT
[1871] TGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAA
[1872] CATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAG
[1873] TTACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGT
[1874] ATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCC
[1875] CTGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACT
[1876] ATGATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGC
[1877] TGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGT
[1878] AGCCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATA
[1879] GCAAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACA
[1880] GACTGGATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACA
[1881] TCTCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTA
[1882] AAGAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGAC
[1883] AAAATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGA
[1884] AAGACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAA
[1885] AAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGC
[1886] TAATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCA
[1887] GATCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTT
[1888] CCAAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTG
[1889] TCAAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAAT
[1890] GATATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAAC
[1891] ATTAAAATATAATCTCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGC
[1892] CTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGAC
[1893] CCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGC
[1894] ATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCA
[1895] GGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGAT
[1896] GCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTA
[1897] GGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCT
[1898] CACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGG
[1899] CGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATG
[1900] CGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAA
[1901] GCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGG
[1902] TGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTC
[1903] CTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAA
[1904] GCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCAC
[1905] CTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCG
[1906] CCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATA
[1907] GTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATT
[1908] CTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGA
[1909] GCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTAC
[1910] AATTTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAG
[1911] CCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCT
[1912] GCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCAT
[1913] GTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCC
[1914] TCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCT
[1915] GCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGA
[1916] AACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTA
[1917] TAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTT
[1918] GTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTA
[1919] GCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACG
[1920] GAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATG
[1921] CATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAG
[1922] AAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCC
[1923] TGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCG
[1924] CGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGA
[1925] TGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTG
[1926] GAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCA
[1927] TGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGG
[1928] TTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGC
[1929] CATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTT
[1930] TTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATT
[1931] TGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGT
[1932] TTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTT
[1933] GAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCAC
[1934] CGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCC
[1935] GAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGT
[1936] GTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATA
[1937] CCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTC
[1938] GTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGC
[1939] GGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGG
GTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCA
CCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCT
TTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
[1940] 表9.构建体序列(SEQ ID NO:100)的组分
[1941]组分 构建体中的位置
5’ITR 12‑130
克隆位点 121‑147
BACE2启动子 148‑1551
hGJB2最小启动子 1552‑1679
克隆位点 1680‑1688
合成条形码 1689‑1696
5’UTR 1697‑2058
GJB2(外显子2) 2070‑2747
3xFLAG 2760‑2825
3’UTR(外显子2) 2829‑4235
bGHpA 4255‑4481
克隆位点 4482‑4515
3’ITR 4516‑4645
[1942] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:101)
[1943] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TGAAGAAACCTGCATTTCTTACACTTCAGTGTACTTTCCCCATATTTAACTCCAAGATTTTTGTTAATTTGTTTGGT
TTTCCTTTCTCAAACAAAATTATGCTCAGACTGAAAACCCTAGATTTGTTCCCTATTGCATCTTCATTTCTTCCCAA
ACATTCCATAAAACGTGACCTACATTAAGTTAGCAAGTTAAGTCTGAAAGCGTCTACCTTCCCTGGGGAGGGGGAAG
GTGTAGGCAGGGCAGAGATTTGTAGTCCAGCCCTCTTGCCACAAATTATGAATTAGAGAGGAATGACTTTGCTTTTT
TAATGATCTCCAGAGAATTTTCCATCATTTCCCTCTCTTCACCCAGCTCCTTTGCAACCACTGCCAGAGAAGTCTTC
CTTTAGCTTCTTAAACATCGATCCTAA
[1944] AACACTTCCAGACACCTGTGCTGCTCCTTTCAGTTCCCATGGAGATTAGGC
[1945] TGTGTAACAATCTCGCAAAGACGTTCCCCTCCGTCTCCTCATCCTCTTTTCA
[1946] AACCCTTTTACGATTTCCCATCTCACTCAGCATGACAGTCAAAGTCCCTGTG
[1947] ATGGCCAACTTCTGCATCACCTAGCCAGTCTGCCACCGCCAAAACTCTCCA
[1948] GCCTCATCTTACACTTGTTCTCTGCTTGGAATCTTCCCTCCCCTCCTTGAGG
[1949] AACTTTCTCAAATGTCACCTTCCCTCAATACTCCCCCTCCTCCATTTAAAAC
[1950] TATAAACTTCCAACTCTCTAAGCCCCTAAAGTACTCTATATTTAACTTATTG
[1951] TATAAACTACTGTCCCTACTTGTAAGTTCCAAGATTGCAGGGATTCACCCG
[1952] CTTTGTTCACTGCTGTCTGCCAAGGTCTAGAACAGTGCAAGTTACCCAACA
[1953] GGAGTTCAATAAACAGCCATTCATTTAACAAATATTTGCTGAGCACTTCGT
[1954] CCCGTCCAAGTTTGTTAAATCAAGACAAATAAGACACCGTCCCTGCCTTTA
[1955] ACGCACCAGATGGAGAAATGCACCACAGACATAAATGTGCAATACAGGCC
[1956] TGACACTACGGCCACAAGCAAGTCAAAGAACGTGCCAAAAGTTCAGAGGA
[1957] AGAAGCCTCGGCTTCGCCTTTCGGGAGACCAGTCCAGCTTTCCACCATCAC
[1958] GCTGCTCATCAGGGACCATCTCCGGGGGTCTCCTCTAGACCCCAAGGGAGG
[1959] AGCGGGTCCCGCCCGCCATTCCCAGGTCTCAGAGTTTACTTGTCCAGAGAT
[1960] GCAACTTCCGGCCTCTTCAGGCCGGGCAAGATTTAAGGAAAGAAAAGAAA
[1961] CATAAGGACCTCCGTTCTTCGGTCTCCGTCCCCTCCCCTTCCCCCGCGTGCC
[1962] CCACCTGTTCCCGGCGTCCCCTTCGGCTACTCCCGGCGTTTGCGCAAGCGG
[1963] TCCCACGTGGGCTCGGGCGGGGCTAGCGCCGCGGCGGGGGCTGGGCACGC
[1964] CCCTAGCGCATAGCTGGCTTCTGATTGGCTTTCCAAGCTCTGAGGACCCAG
[1965] AGGCCGGGCGCGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTTTCCCAGT
[1966] CTCCGAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGCCACGGCG
[1967] GGAGACAGGTCTCACCGGTGCCAAAGCGTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCG
[1968] CGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCG
[1969] CCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCG
[1970] CCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCTCCCGACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCGCG
[1971] AAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGT
[1972] GCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCAC
[1973] CTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTGGGACTG
[1974] CCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCGCTAGCCACCATG
[1975] GATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCCAC
[1976] CAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATTATGATC
[1977] CTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGT
[1978] CTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACTT
[1979] CCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCAC
[1980] GCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAGAAGA
[1981] AGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAG
[1982] GAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTA
[1983] CACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGT
[1984] CTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAA
[1985] CGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGA
[1986] GAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCCT
[1987] GCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAG
[1988] TCAAAAAAGCCAGTTGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGA
[1989] TTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGTAAGAAA
[1990] TAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCA
[1991] GTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTG
[1992] AAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCTGC
[1993] TCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCT
[1994] TTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTG
[1995] TAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCT
[1996] GAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTT
[1997] GGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAAC
[1998] ATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGT
[1999] TACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTA
[2000] TGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCC
[2001] TGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTAT
[2002] GATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTG
[2003] AGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAG
[2004] CCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGC
[2005] AAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGA
[2006] CTGGATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATC
[2007] TCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAA
[2008] GAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAA
[2009] AATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAA
[2010] GACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAA
[2011] GTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTA
[2012] ATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGA
[2013] TCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCC
[2014] AAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTC
[2015] AAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGA
[2016] TATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATT
[2017] AAAATATAATCTCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTT
[2018] CTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCT
[2019] GGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATC
[2020] GCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGA
[2021] CAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCG
[2022] GTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGA
[2023] ACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACT
[2024] GAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGC
[2025] CTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGT
[2026] ATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAA
[2027] CCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTT
[2028] ACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTC
[2029] GCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCT
[2030] AAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGA
[2031] CCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTG
[2032] ATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGA
[2033] CTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTG
[2034] ATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGA
[2035] TTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTT
[2036] TATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGC
[2037] CCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCC
[2038] CGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTC
[2039] AGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTG
[2040] ATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTAC
[2041] ATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTC
[2042] GAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATG
[2043] GGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGG
[2044] GAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTG
[2045] CCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTA
[2046] TGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTT
[2047] ACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAAT
[2048] ATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCC
[2049] GGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATT
[2050] TCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAG
[2051] TGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGA
[2052] AATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGAT
[2053] TTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTG
[2054] ATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCAT
TTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACC
CCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCA
CCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGC
GCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACAT
ACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGA
CGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGAC
CTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGT
ATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGT
CCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAA
CGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
[2055] 表10.构建体序列(SEQ ID NO:101)的组分
[2056] 组分 构建体中的位置5’ITR 12‑130
克隆位点 131‑147
DBI2启动子 148‑1614
hGJB2最小启动子 1615‑1742
克隆位点 1743‑1751
合成条形码 1752‑1759
5’UTR 1760‑2121
GJB2(外显子2) 2133‑2810
3xFLAG 2823‑2888
3’UTR(外显子2) 2892‑4298
bGHpA 4320‑4544
克隆位点 4545‑4578
3’ITR 4579‑4708
[2057] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:102)
[2058] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TTACCATTCTGCCTTTCACCTGATGTTGCTATCCTCCTCCCTCTTGTTTCCTTCCACCCATCCTTTCCCTCCCACAT
TACTCTCTTATCCCACCCTATTTTACAACCAGTAGCCTAGGGAAAAGAGCATAGCTCAAATGAGGAAGAAGGCAGGA
CAGGCAGTCATGGCTTAGCTGGACTGAGCTGCAGTGCTTCTCCTTCTGGGGAAGGGGGTGCACTGTCATCTGCTACT
GACACATCCCTCCAAGGCACTCAGCCCTGCAGGGAGCAACCTGATTCTATGACTGACATCTAATCTTCACATTCACC
TTGCAGGAAGGCAAGAAGTGATCCCAGCCTCCAGATGGAAAGATCAAGGCCCAGAGAAGGTCAGTGGTGGTTGGAGG
CCTGAGGTCACACAGCAGCCAAGTCTGGAGTCACTAGTCAAGGTGACCTTGACTAGCCACCCCACCTCCCCTTCCCT
GCCCCACCATGGCCCTGGGAGATCTGTTGTCCTGTGAGGGAAAGGGGCTCCAGGCTGGGCTGCATCTGAAGCCCCTA
GATCCAGAGACTTCATTTCTTAGGCTATCTATAAAATCCACCTTCCTTTCTTTTCCCAGGACCCCCATACCCTGCTC
CCAGCATCGTCTGCCTCAGCTAAGCCATGGGGATTGAGAGACCAGGCCTGGTGCCCAGATAAACTGACCCTGGGTGA
GGGGACAGGGGCCCAGAATGGGCAGGTAGAGACTGAATACTGAAGAAGAATCCTCTGGAGTCTGTTAGCAGAAGCAG
ATGGGCCTTGCCTGACTATTGGCAGGCGGACCTGGTGGTCAGACCTCAGTGATCCTCAGGGACCAGTGAATATTTCA
GGCTGGGGCTGAGCATCACCTGCTCCCTTGGCCCCACTTATAGGGCAAAGGGGAGTCTACCAGCCTACTCACTGATG
ACAAACTGGAAAAGTTTGTCCTGTCTCTGCTCTGGCCCCACCTCGCCCTCTCCCCTACTTGGAAGTTCCTTTCCTGA
ACCACTGACTGCCAAAGCTTGAGGGATTAAATAAATCATCTGGCCCAACCTCCTACCATAGAGTTGGGAACACTGAA
GAAAAGAGACTGGCCCAAGGTCACAGAGAAGGCAGGGTGAACACTGTCACAGGGAGAGCCAGTGTAGAATAATGGTT
AAGCCACGCAAGCTCTAGAACCACTCTATCTGAGTGCAAATCCTGGCTGTCATCTGGTACTTGCTTCCTGGAACACA
TCTGGCCTCAGACTCCTGAGGCCAAGACACACTCCCTGCCCTAAGACTTGCTGGTTCTATGGCAGGCAGAGGCAGAA
AGAGCCCCACCATCATTCCCAGCAAATGGGAAAAGTTCCCAGTTGCAGATATTAGGGGTGGGATGGGGCGGGGGTAG
TCAGCAACCATAGACTTAGACCCTGAAGAGGCAAAAAAGGAGGGCCATGTTCTTGGGTCAGCAGAGCTTCTACTCAG
CTTCTTCAGCCTCTAGCTCTTTCCTGGTGCTAGTAGCACATTCTCTAGTGGAGGCATCCAGATGGCAGGGAGGGTCC
AGGAAACAGCTGAACATGCTGAGCAGGCCTCCCTTGTCCCCGCTCCCCATGGCCCCATGGATCATCCGGTGCTGCAG
CTCATCTCATTGGCTGGCTTCTGGTTACTCATCTCTCCTCTTCTCCATCTTCCCAGCCTGTGGTTGCCGTGGAAACA
TAGAACAGTGACCTCACCATAGGATGAGGGCTGGGG
[2059] AGATGCTGTTCTTGGCAGGCGCTAAGCTCTGAGGACCCAGAGGCCGGGCG
[2060] CGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTTTCCCAGTCTCCGAGGGA
[2061] AGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGCCACGGCGGGAGACAGG
[2062] TCTCACCGGTCCATCCACGTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTC
[2063] CCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGC
[2064] GCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCC
[2065] CGCCGCGCTTCCTCCCGACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGG
[2066] TGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGTGCCTCGATCC
[2067] TGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCACCTAACTAACA
[2068] GCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTGGGACTGCCTTGAGAAG
[2069] CGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCGCTAGCCACCATGGATTGGGGCA
[2070] CGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCCACCAGCATTGGA
[2071] AAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATTATGATCCTCGTTGTGG
[2072] CTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTCTGCAACACC
[2073] CTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACTTCCCCATCTCC
[2074] CACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACGCCAGCGCTC
[2075] CTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAGAAGAAGAGGAAGTT
[2076] CATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAGGAGATCAAAA
[2077] CCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAAGCAGC
[2078] ATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGTCTTCTATGTCA
[2079] TGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCTT
[2080] GTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGAGAAGACTGTCT
[2081] TCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCCTGCTGAATGTCAC
[2082] TGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAGCC
[2083] AGTTGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATC
[2084] ATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGTAAGAAATAGACAGCATG
[2085] AGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCAT
[2086] TTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGTA
[2087] GGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCTGCTCCCCTAAAGC
[2088] CTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAAGT
[2089] TAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTTT
[2090] CATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGAGGACAAGA
[2091] GAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTCC
[2092] TGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTTT
[2093] CATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGCC
[2094] TTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTATGATAGGTTA
[2095] TTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTCAGAG
[2096] GCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATGATTTAATTT
[2097] GAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAGGCTGT
[2098] CTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTCAATCG
[2099] AGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAATGGCCT
[2100] CATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGGATGTA
[2101] CCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCCTTTTCC
[2102] ATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGGTCGCT
[2103] TGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATGGGGC
[2104] AGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACTGGAC
[2105] TCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTTGTTTG
[2106] CTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTAATAACATGT
[2107] GAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGATCTATAGGA
[2108] AGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAAAATGG
[2109] TACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGAATAGC
[2110] ATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGATATGCTTGT
[2111] AACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAAATATA
[2112] ATCTCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCC
[2113] AGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGC
[2114] CACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCT
[2115] GAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGG
[2116] GGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCT
[2117] ATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGT
[2118] GATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGG
[2119] GCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGA
[2120] GCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCC
[2121] TTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTA
[2122] CGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCA
[2123] GCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTT
[2124] CCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGG
[2125] GGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAA
[2126] AAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACG
[2127] GTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGT
[2128] TCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATA
[2129] AGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACA
[2130] AAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTATGGTG
[2131] CACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACA
[2132] CCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATC
[2133] CGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTT
[2134] TTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCC
[2135] TATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAAC
[2136] AGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCC
[2137] GCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCG
[2138] CGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCC
[2139] CGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGA
[2140] TGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCT
[2141] TCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACC
[2142] ACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGAT
[2143] TCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCAT
[2144] TCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCG
[2145] CTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTG
[2146] ATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCAT
[2147] AAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCAC
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[2151] TATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGA
[2152] GTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTG
[2153] AGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTT
[2154] TCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGT
[2155] GGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGG
[2156] CTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTT
[2157] AGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCT
[2158] AATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGG
[2159] GTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAA
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[2162] GAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAG
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[2165] GGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTG
[2166] GCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
[2167] 表11.构建体序列(SEQ ID NO:102)的组分
[2168] 组分 构建体中的位置5’ITR 12‑130
克隆位点 131‑147
FABP3启动子 148‑1899
hGJB2最小启动子 1900‑2027
克隆位点 2028‑2036
合成条形码 2037‑2044
5’UTR 2045‑2406
GJB2(外显子2) 2418‑3095
3xFLAG 3108‑3173
3’UTR(外显子2) 3177‑4583
bGHpA 4605‑4829
克隆位点 4830‑4863
3’ITR 4864‑4993
[2169] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:103)
[2170] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TGAAACAGCAGCCATTGATGTAGCTCAGGGTTCTGTGGATCTGTCATTTGGAGCATGTTGGTTCTCCTGTCTCAGCT
GGGCTCATTCATGCATCTGAGTTCAGCTATTGGGCAATCTGGGGAATGTTTTGTCCATGTGATGTGTCATCTTCTAC
CAGGCTAGCCTGGGCTTCATCACATGGTATCTGGCAGGGCTCTAAGAGGGAGAGTTGAAACACACAAGGCCTCTTGA
AGCTTAGACTCAGAATTGGCACAAGGTCGCTTCTGGCACATTCCATTGGTCAAAGCAAGTTACAAGGCCAGCTCACA
TTCAAGGATTAGGTAAGTCGATTCCACTCTTGATGAGAAGTCTGAAGGATTTGGAACAGTGTCCACCATGCAGTAAT
AAACTCAATAAGTAGTAGCCATTATTATTCTGTTAGAGGTTGCCAGGAAAAGTTTTATAGTGGAAAGAAATCTGAGT
TTACTCTTGAGAGGTAAGTGGAATTTCTATTTGTAGAGAATGAAGGCCTCTCAAAAAGACACAGCCTAACAATAGGT
GCTGCAGTTTAACAGTGGAGCGTGTCCAGAACAGGCTGCCCTTTTAGGCAAGGGCTAGTGTCTTTCAGGACAGACCC
AAACCCCAAATACCAAAACAGAATAAAGTAGTGTCTTAGCATACTTTGAGATCAGACTGTTTCTGCATTTCACAGTG
CTGGGGGTGGGGGGGAGGTGTGGGGGGAAGGGAAAAGCAGCATACCAATGTAGTGAAATCTGGAAACAACAGCCAAA
AAAAGTTTGCATATTGCACAGAGCACTTGAAGATCATAAATCT
[2171] ATGCATGAGAAAGATGTAGTGGAAATTTTGGGGGGGATTAGAGTTTATTTT
[2172] TGTCATCTCTGTGAGACAGCTACTCATTCATCCAGATCACAGCTAAGAAAA
[2173] AAGCTGGTCACAGAAATTAGCAGTTTCAGCTCAGCAGCGAAGTCGCCAGC
[2174] CTGTGAAGGCAGAGAGAAATTGACTAATTAGCAATGCGCACTAAAACTTG
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[2182] CGGGAGACAGGTCTCACCGGTCCCGTTCTGTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGC
[2183] GCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCC
[2184] GCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCC
[2185] GCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCTCCCGACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCGC
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[2188] CCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTGGGACT
[2189] GCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCGCTAGCCACCAT
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[2192] CCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTG
[2193] TCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACT
[2194] TCCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCAC
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[2196] AGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAG
[2197] GAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTA
[2198] CACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGT
[2199] CTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAA
[2200] CGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGA
[2201] GAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCCT
[2202] GCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAG
[2203] TCAAAAAAGCCAGTTGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGA
[2204] TTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGTAAGAAA
[2205] TAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCA
[2206] GTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTG
[2207] AAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCTGC
[2208] TCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCT
[2209] TTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTG
[2210] TAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCT
[2211] GAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTT
[2212] GGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAAC
[2213] ATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGT
[2214] TACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTA
[2215] TGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCC
[2216] TGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTAT
[2217] GATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTG
[2218] AGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAG
[2219] CCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGC
[2220] AAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGA
[2221] CTGGATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATC
[2222] TCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAA
[2223] GAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAA
[2224] AATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAA
[2225] GACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAA
[2226] GTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTA
[2227] ATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGA
[2228] TCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCC
[2229] AAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTC
[2230] AAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGA
[2231] TATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATT
[2232] AAAATATAATCTCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTT
[2233] CTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCT
[2234] GGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATC
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[2236] CAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCG
[2237] GTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGA
[2238] ACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACT
[2239] GAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGC
[2240] CTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGT
[2241] ATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAA
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[2243] ACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTC
[2244] GCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCT
[2245] AAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGA
[2246] CCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTG
[2247] ATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGA
[2248] CTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTG
[2249] ATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGA
[2250] TTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTT
[2251] TATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGC
[2252] CCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCC
[2253] CGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTC
[2254] AGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTG
[2255] ATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTAC
[2256] ATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTC
[2257] GAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATG
[2258] GGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGG
[2259] GAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTG
[2260] CCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTA
[2261] TGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTT
[2262] ACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAAT
[2263] ATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCC
[2264] GGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATT
[2265] TCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAG
[2266] TGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGA
[2267] AATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGAT
[2268] TTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTG
[2269] ATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTAT
[2270] GGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAA
[2271] AATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCT
[2272] CGATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTT
[2273] CCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCC
[2274] TTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACC
[2275] AGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGT
[2276] AACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCC
[2277] GTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGC
[2278] TCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTT
[2279] ACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGG
[2280] CTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACA
[2281] CCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTAT
AGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAA
AAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
[2282] 表12.构建体序列(SEQ ID NO:103)的组分
[2283] 组分 构建体中的位置5’ITR 12‑130
克隆位点 131‑147
KLHL14启动子 148‑1402
hGJB2最小启动子 1403‑1530
克隆位点 1531‑1539
合成条形码 1540‑1547
5’UTR 1548‑1909
GJB2(外显子2) 1921‑2598
3xFLAG 2611‑2676
3’UTR(外显子2) 2680‑4086
bGHpA 4108‑4332
克隆位点 4333‑4366
3’ITR 4367‑4496
[2284] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:104)
[2285] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TCCTTCCTCCTCCAGGGCCCTCTGCAGACCAGGCTGAGATGGAGGAACCTGCTAAAATCGATGGAGATGCTTCTAGC
CTCCCAGTAGGAGGCCCCAGCCATGCCTTCAACCTGGCAGGAGGTGTAGCCACTCCTCATCCTTGGGTTGCAGGTTG
GGTGCTGCTGTTGTGGTCCTTCCCAGAAACTGCCAGTAGAGGGCAGCCTGGGCATCCTAATGCTTACTCTGGTTGTT
ACACAAAGAAAATATTGGGGTCACTGGCGAGCCCACCCACACTCACCAGAATCTCCACTGTAGTCCCCCTAACAAAC
AGCCCTTCACTTCCTCTCCCACTTCAGCAATTTGTATTTTGATGCCATTGGCCTCAGATCAGAGTGTTTTAAATCAT
CACGCCCTGGCTTATCCCTGGTCGAGCCAGGACACGGGGTGCTTCAGTGGGTCTGTCACCCTCTCTCCTTGAAGCAT
[2286] GTTGCTTTTATTTATTTACTTTTACTCTCACCCTGCTCCTGTACCAGCAGGG
[2287] GCCACTTCAAAGCCAAGGTACAGGGTGATAACTTGTGGTCCAGCATCAGTT
[2288] TTCTCCACTTCTTTCTCCCACTCACCCCCAGCAAGGTGCCTGGGGAGACTTG
[2289] AGCAGATGTTTCATTTTGGCCTGGCCAGTGGCTGAAAGCCAGGCCTCCAAT
[2290] GCACTGTGACCTCTGGCTTCCCCAGCAGCTTTCCCAGAGAGGCAGAGGGAG
[2291] TCTTCATTCTTCCCAGGCGGGGAGACCACGCCTTCCCTGCCTCCTCCCTCCG
[2292] CGGGGGGTCGCGTTGGAGGTCACCCCCGCCCCCTAGGCGCTGGGTTGGGA
[2293] GTGACGCGGGGTGGGCTGGAGAGGTTTCCTGCCGTCTGGGAAGCGTAAAC
[2294] GGACCGCCCACCTGTCGGGCCTCGGCCGCCCGCACCTGCTTGTGAGAAGCC
[2295] TGCGGCTGGGGCACCGCCCCCGGTCCCCGCCCGGGTCCGCGCATTGGGAGC
[2296] ACACTGGCCCTTTAAGAGCGCGGCGGCCGCGGCGCGCGGGAAGCTCTGAG
[2297] GACCCAGAGGCCGGGCGCGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTT
[2298] TCCCAGTCTCCGAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGC
[2299] CACGGCGGGAGACAGGTCTCACCGGTTTCACTGGGTTGCGGCCCCGCAGC
[2300] GCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCA
[2301] GGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAG
[2302] ACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCTCCCGACGCAGTTTAGGACCCTT
[2303] GTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCC
[2304] ATCAGTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGC
[2305] GCTCACCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTG
[2306] GGACTGCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCGCTAGCC
[2307] ACCATGGATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACA
[2308] CTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATT
[2309] ATGATCCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGA
[2310] CTTTGTCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCA
[2311] CTACTTCCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTG
[2312] TCCACGCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAG
[2313] AAGAAGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACAT
[2314] CGAGGAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGA
[2315] CCTACACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGT
[2316] ACGTCTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGT
[2317] GCAACGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCA
[2318] CGGAGAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCA
[2319] TCCTGCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGG
[2320] GAAGTCAAAAAAGCCAGTTGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACG
[2321] GTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAGTAA
[2322] GAAATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGG
[2323] CTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCA
[2324] TTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCT
[2325] CTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAAT
[2326] TTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATT
[2327] GGTGTAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTT
[2328] CTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAG
[2329] GTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGT
[2330] GAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACA
[2331] AAGTTACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGT
[2332] AGTATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTC
[2333] CCCCTGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCT
[2334] ACTATGATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCAC
[2335] AGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACAT
[2336] TGTAGCCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATG
[2337] ATAGCAAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAAT
[2338] ACAGACTGGATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAAC
[2339] ACATCTCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGAT
[2340] TTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAG
[2341] GACAAAATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTT
[2342] GGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTT
[2343] CAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATAT
[2344] AGCTAATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGA
[2345] GCAGATCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGACATGG
[2346] TTTCCAAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGT
[2347] TGTCAAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTA
[2348] ATGATATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAA
[2349] ACATTAAAATATAATCTCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGT
[2350] GCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTG
[2351] ACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATT
[2352] GCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGG
[2353] CAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGG
[2354] ATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGC
[2355] TAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCG
[2356] CTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCG
[2357] GGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGA
[2358] TGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCA
[2359] AAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGT
[2360] GGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGC
[2361] TCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTC
[2362] AAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGC
[2363] ACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCAT
[2364] CGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAA
[2365] TAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTA
[2366] TTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAAT
[2367] GAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTT
[2368] ACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTA
[2369] AGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGT
[2370] CTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGC
[2371] ATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGG
[2372] CCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAACTGT
[2373] CTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGG
[2374] AAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGT
[2375] ATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGCT
[2376] TGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGT
[2377] AGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGAC
[2378] GGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGAT
[2379] GCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATTA
[2380] GAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTC
[2381] CTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATC
[2382] GCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTG
[2383] ATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCT
[2384] GGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTC
[2385] ATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAG
[2386] GTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTG
[2387] CCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCT
[2388] TTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCAT
[2389] TTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAG
[2390] TTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCT
[2391] TGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCA
[2392] CCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTC
[2393] CGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAG
[2394] TGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACAT
[2395] ACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGT
[2396] CGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGC
GCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGA
GCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGT
GATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGG
CCTTTTGCTCACATGT
[2397] 表13.构建体序列(SEQ ID NO:104)的组分
[2398]组分 构建体中的位置
5’ITR 12‑130
克隆位点 131‑147
MMP15启动子 148‑1159
hGJB2最小启动子 1160‑1287
克隆位点 1288‑1296
合成条形码 1297‑1304
5’UTR 1305‑1666
GJB2(外显子2) 1678‑2355
3xFLAG 2368‑2433
3’UTR(外显子2) 2437‑3843
bGHpA 3865‑4089
克隆位点 4090‑4123
3’ITR 4124‑4253
[2399] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:105)
[2400] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TCAGGCTACCTCTCAGGCTGACTGAGTCATGCAGCATAGGCTGCCACGTCTCTGGGCTGGCGGGGCCGTCATTATTC
CTGGCCTCACTGCAGCTAAATTGAAGAAACGTTTGGTTTGTGGGCCACGTCAAGGAATGTGTAAGAGCTGCCACGTT
GTCGGGTCTGGGTTATTGGGCTTTTCCCCTCCTTCAGAGAAGATTTCCAGGCGTGTGGGTGGGGTTTCAGAAGAAAA
TTGATGCCTGCGTGTGAGTGTTCCCTGGACCTGGACCAGCAGCGGCAATATTACAGACCCGGGGGTTGGGGCAGACT
GAGCCAATCTCTGCACCGTCAAAGTTATGGATACAGAGCCCTGGAAAAAG
[2401] GCTGAAGGATAAGATAGCTGACATTTATGAAGTGCTTCATTCATGTAGCAG
[2402] TGGGCCAAATGCGTACTTTACACTTGAGGAAGCTGAGGCTGGAGGTTGATA
[2403] ACATGCCTCAAGTCTTCTAGAGTTAAATAACTTTGACCCAGGACCCAAGCC
[2404] CAGAGTTCTGACTCAAAAACTAGGCCTCCTAAACATCCTCTTATATGAGGT
[2405] TAAATTTCATCTTCCTCTGTTTGGCCTTGGCCTGGTTGGTGGATGCTCTGCT
[2406] TCGGGGACCCAGGGCCAGATGACAATGGGTTCTTTGTGCCCTTCAGACAAT
[2407] GGGAAGGGCTGCCTGGGGAAAGATACAGTAACAAGGCAACAGGCTGAGTC
[2408] AGCCTCCAATGTGCTTGAACCTTCTTAGCTTGGCAGCCTTGACATTCAGCC
[2409] AGCCACACAAAGGGTATATCAAGGATGATACCACTAGTAGCAGCTTGTCTT
[2410] GTCTGTACCTCTGAACAAGAAAGAGGCTGTTCTGGGTCATCCCTCCAGGCC
[2411] TGTCCAGCCCTGGCACTCTGTGAGTCGGTTTAGGCAGCAGCCCCGGAACAG
[2412] ATGAGGCAGGCAGGGTTGGGACGTTTGGTCAGGACAGCCCACCAGGAGGA
[2413] AAGAAATGAAAGACAGAGACAGCTTTGGCTATGGGAGAAGGAGGAGGCC
[2414] GGGGGAAGGAGGAGACAGGAGGAGGAGGGACCACGGGGTGGAGGGGAG
[2415] ATAGACCCAGCCCAAAGCTCTGAGGACCCAGAGGCCGGGCGCGCTCCGCC
[2416] CGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTTTCCCAGTCTCCGAGGGAAGAGGCGGG
[2417] GTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGCCACGGCGGGAGACAGGTCTCACCGGT
[2418] ATACTCTCGTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGG
[2419] AGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCC
[2420] CAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTT
[2421] CCTCCCGACGCAGTTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTG
[2422] AGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGTGCCTCGATCCTGCCCCACTG
[2423] GAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCACCTAACTAACAGCTGCTGAGA
[2424] GCTGGGTTCCGTGGCCATGCACCTGGGACTGCCTTGAGAAGCGTGAGCAA
[2425] ACCGCCCAGAGTAGAAGCGCTAGCCACCATGGATTGGGGCACGCTGCAGA
[2426] CGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGG
[2427] CTCACCGTCCTCTTCATTTTTCGCATTATGATCCTCGTTGTGGCTGCAAAGG
[2428] AGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTCTGCAACACCCTGCAGCCA
[2429] GGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACTTCCCCATCTCCCACATCCGG
[2430] CTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTGGCC
[2431] ATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAAGGG
[2432] GGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAGGAGATCAAAACCCAGAAG
[2433] GTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAAGCAGCATCTTCTTC
[2434] CGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGTCTTCTATGTCATGTACGACG
[2435] GCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCAACA
[2436] CTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGAGAAGACTGTCTTCACAGTGT
[2437] TCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCCTGCTGAATGTCACTGAATTGTG
[2438] TTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTTGGATC
[2439] CCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCG
[2440] ACTACAAGGATGACGATGACAAGTAAGAAATAGACAGCATGAGAGGGAT
[2441] GAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACA
[2442] CAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGG
[2443] TGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACA
[2444] AAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCAC
[2445] TGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTTTCATATTTTA
[2446] AACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGC
[2447] CAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTT
[2448] TTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTT
[2449] GGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGCCTTAAACTCTG
[2450] TTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTATGATAGGTTATTTTGATGTA
[2451] AAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTCAGAGGCTCAGATTG
[2452] TAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATGATTTAATTTGAAATATGGT
[2453] CTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTC
[2454] ATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTCAATCGAGTGAGACAGA
[2455] CTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAATGGCCTCATGTCAAATA
[2456] TTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGGATGTACCACCAACTAC
[2457] TACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCCTTTTCCATGACTGTGGT
[2458] AGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTTAT
[2459] TGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATGGGGCAGGGGAGGGAG
[2460] AAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTGT
[2461] TGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCA
[2462] GCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTAATAACATGTGAAAAGAATAG
[2463] AAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGATCTATAGGAAGATTGAACCT
[2464] GAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAAAATGGTACTCCACATA
[2465] TTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGAATAGCATTGTAAAAGC
[2466] ATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGATATGCTTGTAACTAAAATAA
[2467] TTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAAATATAATCTCTATAATA
[2468] AGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTT
[2469] GTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTG
[2470] TCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTC
[2471] ATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGG
[2472] GAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTG
[2473] AATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGG
[2474] CCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGG
[2475] TCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCG
[2476] CGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTG
[2477] TGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTA
[2478] GCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCT
[2479] ACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCT
[2480] CGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTT
[2481] AGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTT
[2482] GGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCC
[2483] TTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGA
[2484] ACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGC
[2485] CGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACG
[2486] CGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTAC
[2487] AATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACC
[2488] CGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACA
[2489] AGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATC
[2490] ACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGT
[2491] TAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGG
[2492] GTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCA
[2493] ACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGC
[2494] AATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGT
[2495] TGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGA
[2496] TGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGC
[2497] ATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGG
[2498] AAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATA
[2499] TTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTG
[2500] TAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCA
[2501] CGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAAT
[2502] GGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTC
[2503] TCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTT
[2504] TTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCG
[2505] CAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTT
[2506] CTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTG
[2507] ATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCA
[2508] TGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCG
[2509] TAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTG
[2510] CTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGA
[2511] TCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGT
TACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCG
CAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCT
ACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCG
GAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTC
TGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTT
ACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
[2512] 表14.构建体序列(SEQ ID NO:105)的组分
[2513] 组分 构建体中的位置5’ITR 12‑130
克隆位点 131‑147
SPARC启动子 148‑1226
hGJB2最小启动子 1227‑1354
克隆位点 1355‑1363
合成条形码 1364‑1371
5’UTR 1372‑1733
GJB2(外显子2) 1745‑2422
3xFLAG 2435‑2500
3’UTR(外显子2) 2504‑3910
bGHpA 3932‑4156
克隆位点 4157‑4190
3’ITR 4191‑4320
[2514] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:106)
[2515] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TCCAAGGACTCTTTTTTCTAAACTTCCCTTCATCTTCTAGTTTGACGCCCTTGGTGGGAAAAGTGTCTGAGATAAGG
AAAAGGCATCCTTTCAGTTCTCTGATACTATCTTGAAGCGAGGGATGGAGAAAGGCAAAGAGAGACACAGGAGAAGC
[2516] GTATCCCCTGGGAACAGGTGTCTAGTGGAGTCCAGTAACTCACAGTCTCTC
[2517] AGTTCCGTCAGCACTGTCCCTTGGGTCGCAAATTTCTTCCATTAGCCCTTCC
[2518] ACCAGCTGTATTTCAAATGGGGCTGGACAATAATTGTGGCCAGTGGCCTTG
[2519] TGTTGTTTGTACTTGCGGACTAGTAGTTCTCACCTGTCTTTCTCTGACTCCT
[2520] ATTAGCCACTGGGATTTCAGCAGCTGGTTCAGCCAATTCTACTCAATTCAA
[2521] CATTAAGTTGCAGTGGGCTAGAACTCATGGGCCGATTTAACAAGTGAAATT
[2522] CTACCAAGATACATCAAAAATAGCAACAGGACTAGATACTCAGCTCATTTT
[2523] GTTTTATTTGTAATATACCAGTTGTGGCTTTAGTGCCAGTCTGATTCATCTC
[2524] TCTACTACAAAATGAGGCTCTATAAAGGAAAATATTGCAACTGGAGTGAG
[2525] GAATTTGAATCTTATAGGAAGGAATTTGTCTTCTCATGAAGACTTCAGTTT
[2526] ACCAGAAGTATCTATTGAGGAAGTGTTTACAAGAAAATGTGCCATTTAGCT
[2527] TTATTCTAAATTTGCATAATAACTGAACCAAACAAAAAAATATAGATAGAT
[2528] AGATTGTTCTATCTATAGATAGATAGGGAACATTGGCAGTAGGTGGCAGTA
[2529] AGTTCCCCTGAGCACATGGAGGACACAGTTAAATGCATTTGAGGTATGTGG
[2530] GAAATGGTTTAAAGCAGAATTTTATGCCAACTTTTAGTAACGGAAGCCTAA
[2531] CAAATGTTTGTTCTTTCAAGTGAGAGAAGCAAGCAATCTGGAACTATTCAT
[2532] AAGCTTATTTTCTGTATCCTTAAACATATTTTATAATGAATGTATGATTTAA
[2533] ATAGTAAGTTAAGTGTCTGGGGGTACTGCACACCTCCCTTGCATACAGTCA
[2534] AACTTCTTCAGGGTGATGGGGAAGAGGAGTTATAGGCTGCCAAGCAAAAT
[2535] TGCCAAACTGGTCTCAGAAATTCACTGCATTGGAGAGCGCGGGATCCTTGC
[2536] AACACTGACTTTAGCAGTTAAACTAGAGTGGTTGGGGATGAGTATTCTAAG
[2537] CTCTGAGGACCCAGAGGCCGGGCGCGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCC
[2538] GTAACTTTCCCAGTCTCCGAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAA
[2539] AAGGCGCCACGGCGGGAGACAGGTCTCACCGGTGGCACTTCGTTGCGGCC
[2540] CCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCC
[2541] CGGCCCAGGACCCGCCTAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAA
[2542] CGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCTCCCGACGCAGTTTAG
[2543] GACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGA
[2544] CGGTTCCATCAGTGCCTCGATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCG
[2545] AACAGCGCTCACCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGTGGCCATG
[2546] CACCTGGGACTGCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCG
[2547] CTAGCCACCATGGATTGGGGCACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAA
[2548] CAAACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCATTTTT
[2549] CGCATTATGATCCTCGTTGTGGCTGCAAAGGAGGTGTGGGGAGATGAGCA
[2550] GGCCGACTTTGTCTGCAACACCCTGCAGCCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTA
[2551] CGATCACTACTTCCCCATCTCCCACATCCGGCTATGGGCCCTGCAGCTGAT
[2552] CTTCGTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTGGCCATGCACGTGGCCTACCGGAG
[2553] ACATGAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAAGGGGGAGATAAAGAGTGAATTTA
[2554] AGGACATCGAGGAGATCAAAACCCAGAAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTG
[2555] TGGTGGACCTACACAAGCAGCATCTTCTTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCC
[2556] TTCATGTACGTCTTCTATGTCATGTACGACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGG
[2557] TGAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCAACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCC
[2558] GGCCCACGGAGAAGACTGTCTTCACAGTGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAA
[2559] TTTGCATCCTGCTGAATGTCACTGAATTGTGTTATTTGCTAATTAGATATTG
[2560] TTCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTTGGATCCCGGGCTGACTACAAAGACC
[2561] ATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGAC
[2562] AAGTAAGAAATAGACAGCATGAGAGGGATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTG
[2563] TCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAACACAAAGATTCTGACCTTAAATG
[2564] CAACCATTTGAAACCCCTGTAGGCCTCAGGTGAAACTCCAGATGCCACAAT
[2565] GGAGCTCTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAACAAAGGCCTAATTCTATGCCTGT
[2566] CTTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCCACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGG
[2567] GTTATTGGTGTAAGGTACTTTCATATTTTAAACAGAGGATATCGGCATTTGT
[2568] TTCTTTCTCTGAGGACAAGAGAAAAAAGCCAGGTTCCACAGAGGACACAG
[2569] AGAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTCTTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTA
[2570] AAGGTGAACATTGGTTCTTTCATTTGCTTTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGT
[2571] GGACAAAGTTACCAGTGCCTTAAACTCTGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAA
[2572] CTTTGTAGTATGATAGGTTATTTTGATGTAAAGATGTTCTGGATACCATTAT
[2573] ATGTTCCCCCTGTTTCAGAGGCTCAGATTGTAATATGTAAATGGTATGTCAT
[2574] TCGCTACTATGATTTAATTTGAAATATGGTCTTTTGGTTATGAATACTTTGC
[2575] AGCACAGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTATTCATTGTGGTCATAGCACCTAAC
[2576] AACATTGTAGCCTCAATCGAGTGAGACAGACTAGAAGTTCCTAGTGATGGC
[2577] TTATGATAGCAAATGGCCTCATGTCAAATATTTAGATGTAATTTTGTGTAA
[2578] GAAATACAGACTGGATGTACCACCAACTACTACCTGTAATGACAGGCCTGT
[2579] CCAACACATCTCCCTTTTCCATGACTGTGGTAGCCAGCATCGGAAAGAACG
[2580] CTGATTTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTTATTGACACAGTACCATTTAATG
[2581] GGGAGGACAAAATGGGGCAGGGGAGGGAGAAGTTTCTGTCGTTAAAAACA
[2582] GATTTGGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTGTTGATTAAAGATGAGCTTTGTC
[2583] TACTTCAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTCAGCCTCCAATTTTTTAAGTGAA
[2584] AATATAGCTAATAACATGTGAAAAGAATAGAAGCTAAGGTTTAGATAAAT
[2585] ATTGAGCAGATCTATAGGAAGATTGAACCTGAATATTGCCATTATGCTTGA
[2586] CATGGTTTCCAAAAAATGGTACTCCACATATTTCAGTGAGGGTAAGTATTT
[2587] TCCTGTTGTCAAGAATAGCATTGTAAAAGCATTTTGTAATAATAAAGAATA
[2588] GCTTTAATGATATGCTTGTAACTAAAATAATTTTGTAATGTATCAAATACAT
[2589] TTAAAACATTAAAATATAATCTCTATAATAAGAGCTCGCTGATCAGCCTCG
[2590] ACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTT
[2591] CCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGG
[2592] AAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGG
[2593] TGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGC
[2594] TGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTTGAATTCAGCTGACGTGCCTCGG
[2595] ACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTC
[2596] GCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTT
[2597] GCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCG
[2598] CCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATA
[2599] CGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCG
[2600] GGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCG
[2601] CCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCC
[2602] CCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTA
[2603] CGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGG
[2604] CCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCT
[2605] TTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGG
[2606] GCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAA
[2607] AAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAAC
[2608] GTTTACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAG
[2609] TTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCT
[2610] TGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGC
[2611] TGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAA
[2612] GGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGAACAATAAAAC
[2613] TGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAAC
[2614] GGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATG
[2615] GGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATC
[2616] GCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAG
[2617] GTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGA
[2618] CGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGA
[2619] TGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGAAAAACAGCATTCCAGGTATT
[2620] AGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTT
[2621] CCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGAT
[2622] CGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTT
[2623] GATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTC
[2624] TGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACT
[2625] CATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATA
[2626] GGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATT
GCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGA
GCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAAC
AAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCT
TCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCA
CCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTT
GGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGG
AGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAG
GCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTA
TCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCC
TATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
[2627] 表15.构建体序列(SEQ ID NO:106)的组分
[2628] 组分 构建体中的位置5’ITR 12‑130
克隆位点 131‑147
TSPAN8启动子 148‑1370
hGJB2最小启动子 1371‑1498
克隆位点 1499‑1507
合成条形码 1508‑1515
5’UTR 1516‑1877
GJB2(外显子2) 1889‑2566
3xFLAG 2579‑2644
3’UTR(外显子2) 2648‑4054
bGHpA 4076‑4300
克隆位点 4301‑4334
3’ITR 4335‑4464
[2629] 示例性的构建体序列(SEQ ID NO:107)
[2630] CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGG
TATTCACAATGCATTCCCTCTGCCCACCACATTAATTATCAACTCCTTTTCCTGGCATTTACTCATCCAACGCATGG
CCCCACGTTAACTTTCAGTTCCCTTTCTCCCCTACAAATACTCCATAATCCAGCAACCCTGGGATCCCTGAGATGAT
GAAGAGGACCAGTGCCCATTCCAGGAGACATCACCGCAGCCCTGAGGAATCGGCTATGGGCACCAGCAGGGCACAGT
GCCACACCTCGCCAATGCCTTGTCCTCCTTTTCCATAGTGAGTCAGTCAGCAAGCGTGTAGAAGTGAGTTCCACACT
CTCTTCCTCCCATAGGGAGATCACTTTTCTCATTCTAAGGGTTCCAGGCACACTCACAATGGTGGCATTTGCTGAGC
AGTGGCTTGAATAAAGGGCTCTCAGAAAGCAAGATGTAACTCAGAGCATAGGCTAGCCCCAGGAATGCTCTTGGGGA
ATGACCTGCAGCCTCCCAGTGAAAGAGAGAATAAAAGAAAGCCCCAGCAGGCGAGCTGGGCAGTAGAGAGTCCTGTA
ATTCCACCTTGGCAAGCACCATTTGCAAGAACGAACTGGGATAAGGTAAACAAAATATTGCCTAAAAGAGGCTTGTC
CAAAGAAGTCAGAATACGCTCTTCATTTACCTCTAAATTTCAGTACACCATAAATCTAAATACTCAAAAAAACCTGT
GCCTTTTCAATCAAGGTCAATTGCACGAATTCTTTTGGAAAACAGGACCTATGGCATTTCCCAGACAAATCACCGTG
AACCCTGTACTGTGCATTGCTGTCCTAAAATCCAAAGATTCTGTCATTTGTGTTACATAATTGCCTTTCATTTGAAC
TCATTAATCAAATTGGGGTTTTTAAGCAACACCTAATTAATTCTTTAACTGGCTCATCCACTGATCACTGAGTTCTA
TTTTGAAACTACGGACGTCGAGTTTCCTCTTTCACCCAGAATTTTCAGATCTTGTTTAAAAAGTTGGGTGTGGTTTC
ATGGGGGGAGGGGGAAGAGCGAGAGGAGACCAGAGGGACGGGGGCGGGGACTCTGCAAGAAAAACCTTCCCGGTGCA
ATCGTGATCTAAGCTCTGAGGACCCAGAGGCCGGGCGCGCTCCGCCCGCGGCGCCGCCCCCTCCGTAACTTTCCCAG
TCTCCGAGGGAAGAGGCGGGGTGTGGGGTGCGGTTAAAAGGCGCCACGGCGGGAGACAGGTCTCACCGGTTTTCAGG
TGTTGCGGCCCCGCAGCGCCCGCGCGCTCCTCTCCCCGACTCGGAGCCCCTCGGCGGCGCCCGGCCCAGGACCCGCC
TAGGAGCGCAGGAGCCCCAGCGCAGAGACCCCAACGCCGAGACCCCCGCCCCGGCCCCGCCGCGCTTCCTCCCGACG
CAGTTTAGGACCCTTGTTCGCGAAGAGGTGGTGTGCGGCTGAGACCCGCGTCCTCAGGACGGTTCCATCAGTGCCTC
GATCCTGCCCCACTGGAGGAGGAAGGCAGCCCGAACAGCGCTCACCTAACTAACAGCTGCTGAGAGCTGGGTTCCGT
GGCCATGCACCTGGGACTGCCTTGAGAAGCGTGAGCAAACCGCCCAGAGTAGAAGCGCTAGCCACCATGGATTGGGG
CACGCTGCAGACGATCCTGGGGGGTGTGAACAAACACTCCACCAGCATTGGAAAGATCTGGCTCACCGTCCTCTTCA
TTTTTCGCATTATGATCCTCGTTGTGGCTGCAA
[2631] AGGAGGTGTGGGGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTCTGCAACACCCTGCAG
[2632] CCAGGCTGCAAGAACGTGTGCTACGATCACTACTTCCCCATCTCCCACATC
[2633] CGGCTATGGGCCCTGCAGCTGATCTTCGTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTG
[2634] GCCATGCACGTGGCCTACCGGAGACATGAGAAGAAGAGGAAGTTCATCAA
[2635] GGGGGAGATAAAGAGTGAATTTAAGGACATCGAGGAGATCAAAACCCAG
[2636] AAGGTCCGCATCGAAGGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAAGCAGCATCTTC
[2637] TTCCGGGTCATCTTCGAAGCCGCCTTCATGTACGTCTTCTATGTCATGTACG
[2638] ACGGCTTCTCCATGCAGCGGCTGGTGAAGTGCAACGCCTGGCCTTGTCCCA
[2639] ACACTGTGGACTGCTTTGTGTCCCGGCCCACGGAGAAGACTGTCTTCACAG
[2640] TGTTCATGATTGCAGTGTCTGGAATTTGCATCCTGCTGAATGTCACTGAATT
[2641] GTGTTATTTGCTAATTAGATATTGTTCTGGGAAGTCAAAAAAGCCAGTTGG
[2642] ATCCCGGGCTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACA
[2643] TCGACTACAAGGATGACGATGACAAGTAAGAAATAGACAGCATGAGAGGG
[2644] ATGAGGCAACCCGTGCTCAGCTGTCAAGGCTCAGTCGCTAGCATTTCCCAA
[2645] CACAAAGATTCTGACCTTAAATGCAACCATTTGAAACCCCTGTAGGCCTCA
[2646] GGTGAAACTCCAGATGCCACAATGGAGCTCTGCTCCCCTAAAGCCTCAAAA
[2647] CAAAGGCCTAATTCTATGCCTGTCTTAATTTTCTTTCACTTAAGTTAGTTCC
[2648] ACTGAGACCCCAGGCTGTTAGGGGTTATTGGTGTAAGGTACTTTCATATTT
[2649] TAAACAGAGGATATCGGCATTTGTTTCTTTCTCTGAGGACAAGAGAAAAAA
[2650] GCCAGGTTCCACAGAGGACACAGAGAAGGTTTGGGTGTCCTCCTGGGGTTC
[2651] TTTTTGCCAACTTTCCCCACGTTAAAGGTGAACATTGGTTCTTTCATTTGCT
[2652] TTGGAAGTTTTAATCTCTAACAGTGGACAAAGTTACCAGTGCCTTAAACTC
[2653] TGTTACACTTTTTGGAAGTGAAAACTTTGTAGTATGATAGGTTATTTTGATG
[2654] TAAAGATGTTCTGGATACCATTATATGTTCCCCCTGTTTCAGAGGCTCAGAT
[2655] TGTAATATGTAAATGGTATGTCATTCGCTACTATGATTTAATTTGAAATATG
[2656] GTCTTTTGGTTATGAATACTTTGCAGCACAGCTGAGAGGCTGTCTGTTGTAT
[2657] TCATTGTGGTCATAGCACCTAACAACATTGTAGCCTCAATCGAGTGAGACA
[2658] GACTAGAAGTTCCTAGTGATGGCTTATGATAGCAAATGGCCTCATGTCAAA
[2659] TATTTAGATGTAATTTTGTGTAAGAAATACAGACTGGATGTACCACCAACT
[2660] ACTACCTGTAATGACAGGCCTGTCCAACACATCTCCCTTTTCCATGACTGTG
[2661] GTAGCCAGCATCGGAAAGAACGCTGATTTAAAGAGGTCGCTTGGGAATTTT
[2662] ATTGACACAGTACCATTTAATGGGGAGGACAAAATGGGGCAGGGGAGGGA
[2663] GAAGTTTCTGTCGTTAAAAACAGATTTGGAAAGACTGGACTCTAAAGTCTG
[2664] TTGATTAAAGATGAGCTTTGTCTACTTCAAAAGTTTGTTTGCTTACCCCTTC
[2665] AGCCTCCAATTTTTTAAGTGAAAATATAGCTAATAACATGTGAAAAGAATA
[2666] GAAGCTAAGGTTTAGATAAATATTGAGCAGATCTATAGGAAGATTGAACC
[2667] TGAATATTGCCATTATGCTTGACATGGTTTCCAAAAAATGGTACTCCACAT
[2668] ATTTCAGTGAGGGTAAGTATTTTCCTGTTGTCAAGAATAGCATTGTAAAAG
[2669] CATTTTGTAATAATAAAGAATAGCTTTAATGATATGCTTGTAACTAAAATA
[2670] ATTTTGTAATGTATCAAATACATTTAAAACATTAAAATATAATCTCTATAAT
[2671] AAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGT
[2672] TGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACT
[2673] GTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGT
[2674] CATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTG
[2675] GGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGAAGCTT
[2676] GAATTCAGCTGACGTGCCTCGGACCGCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTG
[2677] GCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAG
[2678] GTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGC
[2679] GCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCT
[2680] GTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGT
[2681] AGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGC
[2682] TACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTC
[2683] TCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTT
[2684] AGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTT
[2685] GGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCC
[2686] TTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGA
[2687] ACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGC
[2688] CGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACG
[2689] CGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTAC
[2690] AATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACC
[2691] CGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACA
[2692] AGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATC
[2693] ACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGT
[2694] TAATGTCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGG
[2695] GTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCGAGGCCGCGATTAAATTCCA
[2696] ACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGC
[2697] AATCAGGTGCGACAATCTATCGCTTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGT
[2698] TGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGA
[2699] TGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGC
[2700] ATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGG
[2701] AAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATA
[2702] TTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTG
[2703] TAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCA
[2704] CGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAAT
[2705] GGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAACTTTTGCCATTC
[2706] TCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTT
[2707] TTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCG
[2708] CAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTT
[2709] CTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTG
[2710] ATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCTCA
[2711] TGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCG
[2712] TAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTG
[2713] CTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGA
[2714] TCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCA
[2715] GATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAA
[2716] GAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGT
[2717] GGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACG
[2718] ATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCA
[2719] CACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAG
[2720] CGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAG
[2721] GTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTC
[2722] CAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCT
[2723] GACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGA
[2724] AAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTT
[2725] TGCTCACATGT
[2726] 表16.构建体序列(SEQ ID NO:107)的组分
[2727]
[2728]
[2729] 药用组合物
[2730] 除其他事项之外，本公开提供药用组合物。在一些方面，本文提供的组合物适合于给予动物，用于改善与综合征性和/或非综合征性听力损失相关的症状。
[2731] 在一些方面，本公开的药用组合物可包含例如多核苷酸，例如一个或多个构建体，如本文所述。在一些方面，药用组合物可包含一个或多个AAV颗粒，例如由一个或多个AAV血清型衣壳衣壳化的一个或多个rAAV构建体，如本文所述。
[2732] 在一些方面，药用组合物包含一种或多种药学或生理学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。如本文使用的，术语“药学上可接受的载剂”包括与药用给予相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂、抗真菌剂等。补充性活性化合物也可被掺入到本文所述组合物中的任何一种中。此类组合物可包含一种或多种缓冲剂，比如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；
一种或多种碳水化合物，比如葡萄糖、甘露糖、蔗糖和葡聚糖；甘露醇；一种或多种蛋白、多肽或氨基酸，比如甘氨酸；一种或多种抗氧化剂；一种或多种螯合剂，比如EDTA或谷胱甘肽；
和/或一种或多种防腐剂。在一些方面，制剂呈剂型，比如可注射溶液剂、可注射凝胶剂、药物释放胶囊剂等。
[2733] 在一些方面，本公开的组合物被配制用于静脉内给予。在一些方面，本公开的组合物被配制用于耳蜗内给予。在一些方面，组合物(例如治疗性组合物)被配制为包含脂质纳米颗粒、聚合物纳米颗粒、微环DNA和/或CELiD DNA。
[2734] 在一些方面，本文公开的组合物被配制为用于耳蜗内给予的无菌混悬剂。在一些方面，组合物包含构建体的量为至少1E11、至少5E11、至少1E12、至少5E12、至少1E13、至少
2E13、至少3E13、至少4E13、至少5E13、至少6E13、至少7E13、至少8E13、至少9E13或至少1E14载体基因组(vg)/毫升(mL)。在一些方面，组合物包含构建体的量为至多1E15、至多5E14、至多1E14、至多5E13、至多1E13、至多9E12、至多8E12、至多7E12、至多6E12、至多5E12、至多
4E12、至多3E12、至多2E12或至多1E12载体基因组(vg)/毫升(mL)。在一些方面，组合物包含构建体的量为1E12‑1E13、5E12‑5E13或1E13‑2E13载体基因组(vg)/毫升(mL)。
[2735] 在一些方面，治疗性组合物被配制为包含合成的外淋巴溶液。例如，在一些方面，合成外淋巴溶液包含20‑200mM NaCl；1‑5mM KCl；0.1‑10mM CaCl2；1‑10mM葡萄糖；和2‑50mM HEPES，pH在约6‑约9之间。在一些方面，治疗性组合物被配制为包含生理学上合适的溶液。例如，在一些方面，生理学上合适的溶液包含市售的具有普朗尼克酸(pluronic 
acid)F68的1xPBS，制备为最终浓度为：8.10mM磷酸氢二钠、1.5mM磷酸二氢钾、2.7mM氯化钾、172mM氯化钠和0.001％普朗尼克酸F68)。在一些方面，利用备选普朗尼克酸。在一些方面，利用备选离子浓度。
[2736] 在一些方面，本文所述药用组合物中的任何一种可进一步包含促进核酸或本文所述构建体中的任何一种进入到哺乳动物细胞中的一种或多种试剂(例如脂质体或阳离子脂
质)。在一些方面，本文所述构建体中的任何一种可使用天然和/或合成聚合物进行配制。可被包括在本文所述组合物中任何一种中的聚合物的非限制性实例可包括但不限于DYNAMIC 
(Arrowhead Research Corp.,Pasadena,Calif.)；来自Mirus 
Bio(Madison,Wis.)和Roche Madison(Madison,Wis.)的制剂；PhaseRX聚合物制剂，非限制性地比如SMARTT POLYMER(PhaseRX,Seattle,Wash.)；DMRI/DOPE；泊洛沙姆、来自Vical
(San Diego,Calif.)的 佐剂；壳聚糖；来自Calando Pharmaceuticals
(Pasadena,Calif.)的环糊精；树枝状聚合物和聚(乳酸‑共‑乙醇酸)(PLGA)聚合物；
TM
RONDEL (RNAi/寡核苷酸纳米颗粒递送)聚合物(Arrowhead Research Corporation,
Pasadena,Calif.)；以及pH反应性共嵌段聚合物，比如但不限于由PhaseRX(Seattle,
Wash.)产生的那些。这些聚合物中的许多已经被证实在将寡核苷酸体内递送到哺乳动物细
胞内方面的功效(参见例如deFougerolles,Human Gene Ther.19:125‑132,2008；Rozema等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.104:12982‑12887,2007；Rozema等人，
Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.104:12982‑12887,2007；Hu‑Lieskovan等人，Cancer Res.65:
8984‑8982,2005；Heidel等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.104:5715‑5721,2007，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中)。
[2737] 在一些方面，组合物包含药学上可接受的载剂(例如磷酸盐缓冲盐水、盐水或抑菌水)。在配制后，溶液将以与剂量制剂相容的方式和治疗有效的量给予。制剂易于以各种剂型给予，所述剂型比如可注射溶液剂、可注射凝胶剂、药物释放胶囊剂等。
[2738] 在一些方面，本文提供的组合物可例如被配制为与其预期的给予途径相容。预期给予途径的非限制性实例为局部给予(例如耳蜗内给予)。在一些方面，提供的组合物包含
一个核酸构建体。在一些方面，提供的组合物包含两个或更多个不同构建体。在一些方面，组合物包括包含编码多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)和/或其功能性特征部
分的编码序列的单个核酸构建体。在一些方面，组合物包含含有编码多肽(例如治疗性多
肽，缝隙连接蛋白26多肽)和/或其功能性特征部分的编码序列的单个核酸构建体，其在被
引入到哺乳动物细胞内时，该编码序列整合到哺乳动物细胞的基因组内。
[2739] 还提供了包含本文所述组合物中任何一种的试剂盒。在一些方面，试剂盒可包括固体组合物(例如包括至少两种不同的本文所述的构建体的冻干组合物)和用于溶解冻干
组合物的液体。在一些方面，试剂盒可包括预加载注射器，其包含本文所述组合物中任何一种。
[2740] 在一些方面，试剂盒包括包含本文所述组合物中任何一种(例如被配制为水性组合物，例如水性药用组合物)的小瓶。
[2741] 在一些方面，试剂盒可包括用于进行本文所述方法中任何一种的说明书。
[2742] 遗传修饰的细胞
[2743] 本公开还提供包含本文所述的核酸、构建体或组合物中任何一种的细胞(例如动物细胞，例如哺乳动物细胞，例如灵长类动物细胞，例如人类细胞)。在一些方面，动物细胞为人类细胞(例如人类支持细胞或人类毛细胞)。在其他方面，动物细胞为非人类哺乳动物
(例如猿猴细胞、猫科细胞、犬科细胞等)。本领域的技术人员将意识到，可将本文所述的核酸和构建体引入到任何动物细胞(例如适合于兽医干预的任何动物的支持细胞或毛细胞)
中。本文描述了构建体和用于将构建体引入到动物细胞内的方法的非限制性实例。
[2744] 在一些方面，动物细胞可为内耳的任何细胞，包括毛细胞和/或支持细胞。此类细胞的非限制性实例包括：亨森氏细胞，代特氏细胞，内淋巴囊和管的细胞，球囊、椭圆囊和壶腹中的过渡细胞，内和外毛细胞，螺旋韧带细胞，螺旋神经节细胞，螺旋隆凸细胞，外球囊细胞，边缘细胞，中间细胞，基底细胞，内柱细胞，外柱细胞，克劳迪厄斯氏细胞，内边缘细胞，内指状细胞或血管纹的细胞。
[2745] 在一些方面，动物细胞为耳蜗的特化细胞。在一些方面，动物细胞为毛细胞。在一些方面，动物细胞为耳蜗内毛细胞或耳蜗外毛细胞。在一些方面，动物细胞为耳蜗内毛细胞。在一些方面，动物细胞为耳蜗外毛细胞。
[2746] 在一些方面，动物细胞为体外的。在一些方面，动物细胞属于内源性地存在于动物中例如在灵长类动物和/或人类中的细胞类型。在一些方面，动物细胞为获自动物并离体培养的自体细胞。在一些方面，离体细胞为内耳细胞。在一些方面，离体细胞为内耳支持细胞。在一些方面，离体细胞为内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细
胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细
胞。
[2747] 方法
[2748] 除其他事项之外，本公开提供方法。在一些方面，方法包括将如本文所述的组合物、构建体或多核苷酸引入到受试者的内耳(例如耳蜗)内。例如，本文提供在一些方面包括给予受试者(例如动物，例如哺乳动物，例如灵长类动物，例如人类)的内耳(例如耳蜗)治疗有效量的本文所述的任何组合物、构建体或多核苷酸的方法。在这些方法中任何一种的一
些方面，受试者先前已被鉴定为具有缺陷型内耳细胞靶基因(例如支持和/或听觉细胞靶基
因，其具有导致由该基因编码的支持和/或听觉细胞靶蛋白的表达和/或活性降低的突变)。
这些方法中任何一种的一些方面进一步包括，在引入或给予步骤之前，确定受试者具有缺
陷型内耳细胞靶基因。这些方法中任何一种的一些方面可进一步包括在受试者中检测内耳
细胞靶基因中的突变。方法中任何一种的一些方面可进一步包括将受试者鉴定或诊断为患
有非综合征性或综合征性感觉神经性听力损失。
[2749] 在一些方面，本文提供了在受试者，例如动物，例如哺乳动物，例如灵长类动物，例如人类的内耳中校正内耳细胞靶基因缺陷的方法。在一些方面，方法包括给予受试者的内耳治疗有效量的本文所述组合物中的任何一种，其中给予在受试者内耳的任何细胞亚群中
修复和/或改善内耳细胞靶基因缺陷。在一些方面，内耳靶细胞可为感觉细胞(例如毛细胞)和/或非感觉细胞(例如支持细胞)和/或内耳细胞的所有或任何亚群。
[2750] 本文还提供了在受试者(例如动物，例如哺乳动物，例如灵长类动物，例如人类)内耳细胞的任何亚群中促进内耳细胞靶蛋白的表达(例如增加表达水平)的方法，其包括：给予受试者的内耳治疗有效量的本文所述组合物中的任何一种，其中给予导致受试者内耳的
任何细胞亚群中内耳细胞靶蛋白(例如多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽))的表
达水平增加。在一些方面，内耳靶细胞可为感觉细胞(例如毛细胞)和/或非感觉细胞(例如
支持细胞)和/或内耳细胞的所有或任何亚群。
[2751] 本文还提供了在鉴定为具有缺陷型内耳细胞靶基因的受试者(例如动物，例如哺乳动物，例如灵长类动物，例如人类)中治疗听力损失例如非综合征性感觉神经性听力损失或综合征性感觉神经性听力损失的方法，其包括：给予受试者的内耳治疗有效量的本文所
述组合物中的任何一种。
[2752] 本文还提供了在被鉴定或诊断为患有内耳障碍的受试者中恢复突触和/或保存螺旋神经节神经的方法，其包括：给予受试者的内耳治疗有效量的本文所述组合物中的任何
一种。
[2753] 本文还提供了将前庭导水管的大小减小和/或恢复至适当大小的方法。本文还提供了在被鉴定或诊断为患有内耳障碍的受试者中将内淋巴pH恢复至适当和/或可接受水平
的方法，其包括：给予受试者的内耳治疗有效量的本文所述组合物中的任何一种。
[2754] 本文还提供了在需要它的受试者的内耳支持细胞中表达多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)的方法。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、外侧大上皮嵴细胞(LGER)和OC90+细胞
(OC90)。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞
(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和
OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[2755] 在一些方面，多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽)在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中的表达被减少、遏制或消除。在一些方面，由治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少。在一些方面，治疗性蛋白主要在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、
成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[2756] 在一些方面，多肽在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中的表达被减少、遏制或消除。在一些方面，由多肽的表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少。在一些方面，蛋白主要在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞
(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[2757] 在一些方面，给予为对受试者的内耳。在一些方面，给予为对受试者的耳蜗。在一些方面，给予为经由圆窗膜注射。
[2758] 本文还提供了在需要它的受试者的内耳支持细胞中增加治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)表达的方法。在一些方面，治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)在非内耳支持细胞中的表达被减少、遏制或消除。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/
OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。在一些方面，治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中的表达被减少、遏制或消除。在一些方面，由治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神
经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少。
在一些方面，治疗性蛋白主要在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞
(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[2759] 本文还提供了在需要它的受试者的内耳支持细胞中促进多肽表达(例如增加表达)的方法。在一些方面，多肽在非内耳支持细胞中的表达被减少、遏制或消除。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞
(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、
成纤维细胞和其他侧壁细胞。在一些方面，多肽在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中的表达被减少、遏制或消除。
在一些方面，由多肽的表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少。在一些方面，蛋白主要在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞
(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[2760] 在一些方面，给予为对受试者的内耳。在一些方面，给予为对受试者的耳蜗。在一些方面，给予为经由圆窗膜注射。
[2761] 本文还提供了降低治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)在非内耳支持细胞中表达的方法。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、外侧大上皮嵴细胞(LGER)和OC90+细胞(OC90)。在一些方
面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞
(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、
成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[2762] 本文还提供了降低多肽在非内耳支持细胞中表达的方法。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞
(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、外侧大上皮嵴细胞(LGER)和OC90+细胞(OC90)。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/
OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[2763] 在一些方面，治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中的表达被减少、遏制或消除。在一些方面，由治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少。在一些方面，治疗性多肽主要在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞
(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维
细胞和其他侧壁细胞。在一些方面，给予为对受试者的内耳。在一些方面，给予为对受试者的耳蜗。在一些方面，给予为经由圆窗膜注射。
[2764] 在一些方面，多肽在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中的表达被减少、遏制或消除。在一些方面，由多肽的表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少。在一些方面，蛋白主要在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞
(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。在一些方面，给予为对受试者的内耳。在一些方面，给予为对受试者的耳蜗。在一些方面，给予为经由圆窗膜注射。
[2765] 本文还提供了在内耳细胞中减少与治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)表达相关的毒性的方法。在一些方面，内耳细胞为内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合。在一些方面，治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的表达在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少、遏制或消除。在一些方面，由治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少。在一些方面，治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)主要在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选自
以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细
胞。在一些方面，给予为对受试者的内耳。在一些方面，给予为对受试者的耳蜗。在一些方面，给予为经圆窗膜注射。
[2766] 本文还提供了减少与多肽在内耳细胞中的表达相关的毒性的方法。在一些方面，内耳细胞为内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合。在一些方面，多肽的表达在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少、遏制或消除。在一些方面，由多肽表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少。在一些方面，蛋白主要在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞
(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和
OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。在一些方面，给予为对受试者的内耳。在一些方面，给予为对受试者的耳蜗。在一些方面，给予为经由圆窗膜注射。
[2767] 本文还提供了在患有听力损失或处于其风险下的受试者中治疗听力损失的方法。在一些方面，治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)的表达在内耳毛细胞、螺旋神经节细
胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少、遏制或消除。在一些方面，由治疗性多肽(例如缝隙连接蛋白26多肽)表达所致的毒性在内耳毛细
胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少。在一些方面，治疗性蛋白(例如缝隙连接蛋白26)主要在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞
(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[2768] 本文还提供了在患有听力损失或处于其风险下的受试者中治疗听力损失的方法。在一些方面，多肽的表达在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少、遏制或消除。在一些方面，由多肽表达所致的毒性在内耳毛细胞、螺旋神经节细胞、外侧支持细胞、基底膜细胞、内侧支持细胞、螺旋缘细胞或其任何组合中被减少。在一些方面，蛋白主要在内耳支持细胞中表达。在一些方面，内耳支持细胞选自以下中的一种或多种：内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞
(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维
细胞和其他侧壁细胞。
[2769] 在一些方面，给予为对受试者的内耳。在一些方面，给予为对受试者的耳蜗。在一些方面，给予为经由圆窗膜注射。
[2770] 本文还提供了包括给予受试者的内耳治疗有效量的本文所述组合物中任何一种的方法。
[2771] 本文还提供了用于治疗听力损失(例如非综合征性感觉神经性听力损失或综合征性感觉神经性听力损失)的手术方法。在一些方面，方法包括以下步骤：在第一切口点处将第一切口引入到受试者的耳蜗中；和耳蜗内给予治疗有效量的本文提供组合物中的任何一
种。在一些方面，组合物在第一切口点处给予受试者。在一些方面，组合物进入到或通过第一切口给予受试者。
[2772] 在本文所述方法中任何一种的一些方面，本文所述的任何组合物进入到或通过耳蜗卵圆窗膜给予受试者。在本文所述方法中任何一种的一些方面，将本文所述组合物中的
任何一种进入到或通过耳蜗圆窗膜给予受试者。在本文所述方法中任何一种的一些方面，
使用能够在圆窗膜中创建多个切口的医疗装置来给予组合物。在一些方面，医疗装置包括
多个微针。在一些方面，医疗装置包括多个微针，后者包括大致圆形的第一方面，其中每个微针具有至少约10微米的直径。在一些方面，医疗装置包括基部和/或能够容纳组合物的储器。在一些方面，医疗装置包括多个中空微针，后者各自地包括能够转移组合物的内腔。在一些方面，医疗装置包括用于产生至少部分真空的手段。
[2773] 在一些方面，本公开的技术被用于治疗患有听力损失或处于其风险下的受试者。在一些此类方面，致病性变体引起听力损失或处于引起其的风险下。
[2774] 在一些方面，将对经历听力损失的受试者进行评价，以确定是否以及在何处可能存在可能引起听力损失的一个或多个突变。在本文所述方法中任何一种的一些方面，受试
者或动物为哺乳动物，在一些方面，哺乳动物为家养动物、农场动物、动物园动物、非人灵长类动物或人类。在本文所述方法中任何一种的一些方面，动物、受试者或哺乳动物为成人、青少年、幼年、儿童、幼儿、婴儿或新生儿。在本文所述方法中任何一种的一些方面，动物、受试者或哺乳动物为1‑5、1‑10、1‑20、1‑30、1‑40、1‑50、1‑60、1‑70、1‑80、1‑90、1‑100、1‑110、
2‑5、2‑10、10‑20、20‑30、30‑40、40‑50、50‑60、60‑70、70‑80、80‑90、90‑100、100‑110、10‑
30、10‑40、10‑50、10‑60、10‑70、10‑80、10‑90、10‑100、10‑110、20‑40、20‑50、20‑60、20‑70、
20‑80、20‑90、20‑100、20‑110、30‑50、30‑60、30‑70、30‑80、30‑90、30‑100、40‑60、40‑70、
40‑80、40‑90、40‑100、50‑70、50‑80、50‑90、50‑100、60‑80、60‑90、60‑100、70‑90、70‑100、
70‑110、80‑100、80‑110或90‑110岁龄。在本文所述方法中任何一种的一些方面，受试者或哺乳动物为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个月龄。
[2775] 在本文所述方法中任何一种的一些方面，方法导致在需要它的受试者中听力改善(例如本文所述用于确定听力改善的指标中的任何一个)，持续至少10天、至少15天、至少20天、至少25天、至少30天、至少35天、至少40天、至少45天、至少50天、至少55天、至少60天、至少65天、至少70天、至少75天、至少80天、至少85天、至少100天、至少105天、至少110天、至少
115天、至少120天、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月或至少12个月。
[2776] 在一些方面，受试者(例如动物，例如哺乳动物，例如人类)患有综合征性或非综合征性感觉神经性听力损失或处于发展其的风险下。
[2777] 在一些方面，受试者(例如动物，例如哺乳动物，例如人类)已被鉴定为患有综合征性或非综合征性感觉神经性听力损失。
[2778] 在一些方面，受试者(例如动物，例如哺乳动物，例如人类)已被鉴定为处于听力损失的风险下(例如处于成为基因突变携带者的风险下)。在一些此类方面，受试者(例如动物，例如哺乳动物，例如人类)可能具有听力损失的某些风险因素或听力损失的风险(例如
已知的亲代携带者、受影响的兄弟姐妹或听力损失的症状)。在一些此类方面，受试者(例如动物，例如哺乳动物，例如人类)已被鉴定为先前未被鉴定的基因突变的携带者(例如经由
遗传测试)。在一些此类方面，经鉴定的突变可能为新的(即先前未在文献中描述的)，并且用于治疗患有或易患听力损失的受试者的方法将针对特定患者的突变个性化。
[2779] 在一些方面，可使用本领域已知的常规功能性听力测试中的任何一种在受试者中确定综合征性或非综合征性感觉神经性听力损失的成功治疗。功能性听力测试的非限制性
实例为各种类型的听觉测定(例如纯音测试、言语测试、中耳测试、听觉脑干反应和耳声发射)。
[2780] 在本文提供的任何方法的一些方面，将两个或更多个剂量的本文所述的任何组合物引入或给予到受试者的耳蜗中。这些方法中任何一种的一些方面可包括将第一剂组合物
引入或给予到受试者的耳蜗中，在引入或给予第一剂量后评价受试者的听力功能，并将另
一剂量的组合物给予到发现在正常范围内不具有听力功能的受试者的耳蜗中(例如如使用
本领域已知的任何听力测试确定的)。
[2781] 在本文提供的任何方法的一些方面，组合物可被配制用于耳蜗内给予。在本文所述方法中任何一种的一些方面，本文所述的组合物可经由耳蜗内给予或局部给予来给予。
在本文所述方法中任何一种的一些方面，通过使用医疗装置(例如本文所述示例性医疗装
置中的任何一种)来给予组合物。
[2782] 在一些方面，可使用本文所述或本领域已知的方法中的任何一种进行耳蜗内给予。例如，在一些方面，可使用以下手术技术将组合物给予或引入到耳蜗内：首先使用以0度、2.5mm硬式内窥镜可视化，清理外耳道并使用圆刀锐利地描绘出约5mm鼓膜耳道瓣。然后将鼓膜耳道瓣抬高，并从后方进入中耳。鉴定并分离鼓索神经，并使用刮匙去除盾骨，暴露圆窗膜。为增强给予或引入组合物的顶端分布，可使用外科激光器在卵圆窗中作小的2mm开窗，以允许在组合物的跨圆窗膜输注期间外淋巴移位。然后将微量输注装置填装并带入到
术野中。装置移动至圆窗，并且尖端落座于骨圆窗悬垂物内，以允许由微针穿透膜。接合脚蹬以允许对组合物的经测量的、稳定输注。然后撤出装置，并用明胶海绵贴片密封圆窗和镫骨底板。
[2783] 在本文提供的任何方法的一些方面，受试者患有综合征性或非综合征性感觉神经性听力损失或处于发展其的风险下。在本文提供的任何方法的一些方面，受试者先前已被
鉴定为在内耳细胞靶基因具有突变，该基因可在支持细胞和/或毛细胞中表达。
[2784] 在本文提供的任何方法的一些方面，受试者已被鉴定为内耳细胞靶基因突变的携带者(例如经遗传测试)。在本文提供的任何方法的一些方面，受试者已被鉴定为在内耳细
胞靶基因具有突变，并且已被诊断患有听力损失(例如非综合征性感觉神经性听力损失或
综合征性感觉神经性听力损失，例如DFNB1、DFNA3)。分别为巴特‑庞弗里综合征、豪猪样鱼鳞病伴耳聋(HID)、掌跖角化病伴耳聋、角膜炎‑鱼鳞病‑耳聋(KID)综合征或沃温克尔综合征。在本文所述方法中任何一种的一些方面，受试者已被鉴定为患有听力损失(例如非综合征性感觉神经性听力损失或综合征性感觉神经性听力损失)。在一些方面，可使用本领域已知的常规功能性听力测试中的任何一种在受试者中确定听力损失(例如非综合征性感觉神
经性听力损失或综合征性感觉神经性听力损失)的成功治疗。功能性听力测试的非限制性
实例包括各种类型的听觉测定(例如纯音测试、言语测试、中耳测试、听觉脑干反应和耳声发射)。
[2785] 在一些方面，受试者细胞为体外的。在一些方面，受试者细胞最初获自受试者并离体培养。在一些方面，离体细胞为内耳细胞。在一些方面，离体细胞为内指状细胞/边缘细胞(IPhC)、内柱细胞(IPC)、外柱细胞(OPC)、代特氏细胞第1和2排(DC1/2)、代特氏细胞第3排(DC3)、亨森氏细胞(Hec)、克劳迪厄斯氏细胞/外沟细胞(CC/OSC)、齿间细胞(Idc)、内沟细胞(ISC)、柯利克尔器细胞(KO)、大嵴上皮嵴细胞(GER)(包括外侧大上皮嵴细胞(LGER))和OC90+细胞(OC90)、成纤维细胞和其他侧壁细胞。
[2786] 在一些方面，受试者细胞先前已被确定为具有缺陷型内耳细胞靶基因。在一些方面，受试者细胞先前已被确定为具有缺陷型毛细胞靶基因。在一些方面，受试者细胞先前已被确定为具有缺陷型支持细胞靶基因。
[2787] 在这些方法的一些方面，在治疗例本文所述组合物的一次或两次或更多次给予后，存在活性内耳细胞靶蛋白(例如多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽))的表达
增加。在一些方面，如本文所述的活性内耳靶蛋白(例如多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽))的表达增加为相对于对照水平，例如与引入包含如本文所述任何构建体的组合
物之前的内耳细胞靶蛋白的表达水平相比较。
[2788] 检测靶蛋白(例如多肽(例如治疗性多肽，缝隙连接蛋白26多肽))的表达和/或活性的方法为本领域已知的。在一些方面，可直接地检测内耳细胞靶蛋白的表达水平(例如检测内耳细胞靶蛋白或靶mRNA)。可被用于直接地检测靶RNA或蛋白(例如多肽(例如治疗性多
肽，缝隙连接蛋白26多肽))的表达和/或活性的技术的非限制性实例包括：实时PCR、蛋白印迹、免疫沉淀、免疫组织化学、质谱或免疫荧光。在一些方面，可间接地检测内耳细胞靶蛋白的表达(例如通过功能性听力测试)。
[2789] 装置、给予和手术方法
[2790] 本文提供了用于治疗听力损失(例如非综合征性感觉神经性听力损失或综合征性感觉神经性听力损失)的治疗性递送系统。在一个方面，治疗性递送系统包括：i)能够在需要它的受试者内耳的圆窗膜中创建一个或多个切口的医疗装置，以及ii)有效剂量的组合
物(例如本文所述组合物中的任何一种)。在一些方面，医疗装置包括多个微针。
[2791] 本文还提供了用于治疗听力损失(例如非综合征性感觉神经性听力损失或综合征性感觉神经性听力损失)的手术方法。在一些方面，方法的步骤为：在第一切口点处将第一切口引入到受试者的耳蜗中；和耳蜗内给予治疗有效量的本文提供的组合物中的任何一
种。在一些方面，组合物在第一切口点处给予受试者。在一些方面，组合物进入到或通过第一切口给予受试者。
[2792] 在本文提供的任何方法的一些方面，本文所述组合物中的任何一种进入到或通过耳蜗卵圆窗膜给予受试者。在本文提供的任何方法的一些方面，本文所述组合物中的任何
一种进入到或通过耳蜗圆窗膜给予到受试者。在本文提供的任何方法的一些方面，使用能
够在圆窗膜中创建多个切口的医疗装置来给予组合物。在一些方面，医疗装置包括多个微
针。在一些方面，医疗装置包括多个微针，后者包括大致圆形的第一方面，其中每个微针具有至少约10微米的直径。在一些方面，医疗装置包括基部和/或能够容纳组合物的储器。在一些方面，医疗装置包括多个中空微针，后者分别包括能够转移组合物的内腔。在一些方
面，医疗装置包括用于产生至少部分真空的手段。
[2793] 在一些方面，本公开描述利用微创、广为接受的手术技术来通过外耳道进入中耳和/或内耳的递送方法。程序包括在卵圆窗处打开中耳和内耳之间的物理屏障之一，并随后使用本文公开的装置，例如如图5‑8中所示的(或微导管)，来经由圆窗膜以受控流速和固定体积递送本文公开的组合物。
[2794] 在一些方面，用于哺乳动物(例如啮齿动物(例如小鼠、大鼠、仓鼠或兔)、灵长类动物(例如NHP(例如猕猴、黑猩猩、猴或猿)或人类)的手术程序可包括通气以增加沿耳蜗长度的AAV载体转导率。在一些方面，与伴随通气进行的手术后的AAV载体耳蜗细胞转导率相比较，手术期间不存在通气可能导致较低的AAV载体耳蜗细胞转导率。在一些方面，通气促进整个耳蜗中约75‑100％的IHC的转导率。在一些方面，通气允许在耳蜗基部处的IHC转导率为约50‑70％、约60‑80％、约70‑90％或约80‑100％。在一些方面，通气允许在耳蜗顶端处的IHC转导率为约50‑70％、约60‑80％、约70‑90％或约80‑100％。
[2795] 本文所述的递送装置可被置于手术室的无菌区中，并且可将管道的末端从无菌区移除并连接于已加载有本文公开的组合物(例如一种或多种AAV载体)的注射器且安装于泵
中。在对系统进行适当装填以去除任何空气之后，然后可在可视化(手术显微镜、内窥镜和/或远端尖端照相机)下将针穿过中耳。可使用针(或微针)来刺穿RWM。可插入针直至止动器
接触到RWM。然后可将装置保持在该位置，同时将本文公开的组合物以受控流速递送至内
耳，持续选定的持续时间。在一些方面，流速(或输注速率)可包括约30μL/min，或约25μL/min‑约35μL/min，或约20μL/min‑约40μL/min，或约20μL/min‑约70μL/min，或约20μL/min‑约90μL/min，或约20μL/min‑约100μL/min的速率。在一些方面，流速为约20μL/min、约30μL/min、约40μL/min、约50μL/min、约60μL/min、约70μL/min、约80μL/min、约90μL/min或约100μL/min。在一些方面，选定的持续时间(即本文公开的组合物流动期间的时间)可为约3分钟，或约2.5分钟‑约3.5分钟，或约2分钟‑约4分钟，或约1.5分钟‑约4.5分钟，或约1分钟‑约5分钟。在一些方面，流至内耳的本文公开组合物的总体积可为约0.09mL，或约0.08mL‑约
0.10mL，或约0.07mL‑约0.11mL。在一些方面，本文公开组合物的总体积等于内耳体积的约
40％‑约50％。
[2796] 一旦递送完成，可移除装置。在一些方面，本文所述的装置可被配置为一次性使用的一次性产品。在其他方面，本文所述的装置可被配置为多次使用的、可灭菌产品，例如具有可更换和/或可灭菌的针子组件。一次性使用的装置可在给予完成之后被适当地丢弃(例如在生物危害锐器容器中)。
[2797] 在一些方面，本文公开的组合物包含一种或多个rAAV构建体。在一些方面，当组合物中包含多于一个rAAV构建体时，rAAV构建体各自不同。在一些方面，rAAV构建体包含抗VEGF编码区，例如如本文所述。在一些方面，组合物包含含有本文所述AAV构建体的rAAV颗粒。在一些方面，rAAV颗粒由Anc80衣壳(例如Anc80L65衣壳)衣壳化。在一些方面，Anc80衣壳包含SEQ ID NO:44的多肽。
[2798] 在一些方面，本文公开的组合物可以手术程序给予受试者。在一些方面，给予，例如经由手术程序，包括经由如本文所述的递送装置将本文公开的组合物注射到内耳中。在一些方面，本文公开的手术程序包括进行经外耳道鼓室切开术(transcanal 
tympanotomy)；进行激光辅助显微镫骨底板造孔术(laser‑assisted  micro‑
stapedotomy)；以及经由如本文所述的递送装置将本文公开的组合物注射到内耳中。
[2799] 在一些方面，手术程序包括进行经外耳道鼓室切开术；进行激光辅助显微镫骨底板造孔术；以及经由如本文所述的递送装置将本文公开的组合物注射到内耳中；在受试者
的圆窗和/或卵圆窗周围应用密封剂；和将受试者的鼓膜耳道瓣降低至解剖位置。
[2800] 在一些方面，手术程序包括进行经外耳道鼓室切开术；准备受试者的圆窗；进行激光辅助显微镫骨底板造孔术；准备如本文所述的递送装置和本文公开的用于递送至内耳的组合物两者；经由递送装置将本文公开的组合物注射到内耳中；在受试者的圆窗和/或卵圆窗周围应用密封剂；和将受试者的鼓膜耳道瓣降低至解剖位置。
[2801] 在一些方面，进行激光辅助显微镫骨底板造孔术包括使用KTP耳科激光和/或CO2耳科激光。
[2802] 作为另一个实例，本文公开的组合物使用专门设计用于耳蜗内给予途径的装置和/或系统给予。在一些方面，本文所述装置的设计元素可包括：注射流体无菌性的保持；引入到内耳的气泡的最小化；以受控速率精确地递送小体积的能力；由外科医师通过外耳道
的递送；对圆窗膜(RWM)或内耳例如RWM之外的耳蜗结构的损伤的最小化；和/或通过RWM回
漏的注射流体的最小化。
[2803] 本文提供的装置、系统和方法还描述用于将组合物安全且有效地递送到内耳中的潜力，以治疗将受益于将本文公开的组合物递送至内耳的病症和障碍，包括但不限于听力
障碍，例如如本文所述。作为另一个实例，通过在镫骨底板中放置通风口并通过RWM注射，本文公开的组合物被分散于整个耳蜗中，在作用部位具有最小稀释度。所描述装置的开发允
许在人类中通过外耳道进行手术给予程序。在将一定量的流体输注到耳蜗的外淋巴中后，
可从耳中移除所描述的装置。在受试者中，装置可在手术显微镜控制下或与内窥镜一起通
过外耳道推进。
[2804] 用于本文公开的方法中任何一种的示例性装置如图5‑8所述。图5说明用于将流体递送至内耳的示例性装置10。装置10包括滚花手柄12和耦合于可伸缩海波管针支撑物24的
远端手柄粘合剂14(例如环氧树脂，比如Loctite 4014)。滚花手柄12(或手柄部分)可包括
滚花特征和/或凹槽以增强握把。滚花手柄12(或手柄部分)可为约5mm‑约15mm厚，或约5mm‑约12mm厚，或约6mm‑约10mm厚，或约6mm‑约9mm厚，或约7mm‑约8mm厚。滚花手柄12(或手柄部分)可为中空的，使得流体可在使用期间通过装置10。装置10还可包括在滚花手柄12的近端
18处的近端手柄粘合剂16、在装置10的远端20处具有止动器28(显示于图34中)的针子组件
26(显示于图6中)和应变消除特征22。应变消除特征22可由Santoprene材料、Pebax材料、聚氨酯材料、硅酮材料、尼龙材料和/或热塑性弹性体组成。可伸缩海波管针支撑物24围绕并支撑布置于其中的弯针38(显示于图6中)。
[2805] 仍然参考图5，止动器28可由热塑性材料或塑料聚合物(比如UV固化聚合物)以及其他合适的材料组成，并且可被用于防止弯针38插入到耳道内太远(例如为防止弯针38插
入到侧壁或其他内耳结构内)。装置10还可包括锥形部分23，其被布置在滚花手柄12和耦合于可伸缩海波管针支撑物24的远端手柄粘合剂14之间。滚花手柄12(或手柄部分)可包括在
手柄部分12的远端处的锥形部分23。装置10还可包括流体连接于装置10的近端16并充当将
装置连接于上游组件(例如泵、注射器和/或在一些方面可与耦合于控制系统和/或电源的
上游组件(未显示))的流体入口管线的管道36。在一些方面，弯针38(显示于图6中)从远端
20延伸，通过可伸缩海波管针支撑物24，通过锥形部分23，通过滚花手柄12，和通过应力消除特征22并直接地流体连接于管道36。在其他方面，弯针38与滚花手柄的中空内部流体连
接(例如经由可伸缩海波管针支撑物24)，后者转而在近端16处与管道36流体连接。在其中
弯针38不一直通过装置10内部延伸的方面，接触面积(例如在重叠的嵌套海波管42之间)、
容限和/或接口组件之间的密封剂必须足以防止治疗性流体泄漏出装置10(其在相对低的
压力(例如约1帕斯卡(Pascal)‑约50Pa，或约2Pa‑约20Pa，或约3Pa‑约10Pa)下操作)。
[2806] 图6说明根据本公开方面的方面的弯针子组件26的侧视图。弯针子组件26包括具有弯曲部分32的针38。弯针子组件26还可包括耦合于弯曲部分32的止动器28。弯曲部分32
包括在装置10的远端20处用于刺穿耳膜(例如RWM)的成角度尖端34。针38、弯曲部分32和成角度顶端34为中空的，使得流体可流经其。弯曲部分32的角度46(如图8所示)可以变化。止动器28的几何形状可为圆柱形、盘形、环形、圆顶形和/或其他合适的形状。止动器28可被模制到弯曲部分32上的位置。例如，止动器28可使用粘合剂或压合接头(compression 
fitting)围绕弯曲部分32同中心地定位。粘合剂的实例包括UV固化粘合剂(比如Dymax 
203A‑CTH‑F‑T)、弹性体粘合剂、热固性粘合剂(比如环氧树脂或聚氨酯)或乳液粘合剂(比如聚乙酸乙烯酯)。止动器28围绕弯曲部分32同中心地安装，使得成角度尖端34以期望的插入深度插入到耳内。弯针38可使用渐进形成以及其他合适的技术由直针形成。
[2807] 图7说明用于将流体递送至内耳的示例性装置10的透视图。管道36的长度可为约1300mm(图7中的尺寸11)‑约1600mm，或约1400mm‑约1500mm，或约1430mm‑约1450mm。应变释放特征22可为约25mm‑约30mm(图7中的尺寸15)的长度，或约20mm‑约35mm的长度。手柄12的长度可为约155.4mm(图7中的尺寸13)，或约150mm‑约160mm，或约140mm‑约170mm。可伸缩海波管针支撑物24可具有两个或更多个嵌套海波管，例如三个嵌套海波管42A、42B和42C，或四个嵌套海波管42A、42B、42C和42D。海波管42A、42B、42C和尖端组件26的总长度(图7中的尺寸17)可为约25mm‑约45mm，或约30mm‑约40mm，或约35mm。另外，可伸缩海波管针支撑物24可具有约36mm，或约25mm‑约45mm，或约30mm‑40mm的长度。三个嵌套海波管42A、42B和42C各自可分别具有3.5mm、8.0mm和19.8mm的长度，正负约20％。可伸缩海波管针支撑物24的最深处嵌套海波管(或最窄部分)可围绕针38同中心地布置。
[2808] 图8说明根据本公开方面的方面的耦合于装置10的远端20的弯针子组件26的透视图。如图8所示，弯针子组件26可包括耦合于弯曲部分32的针38。在其他方面，弯针38可为单根针(例如然后弯曲使得其包括期望的角度46的直针)。针38可为33量规的针，或者可包括
约32‑约34或约31‑35的量规。在更细量规下，必须注意确保管道36没有扭结或受损。针38可附接于手柄12，以将针38安全且准确地放置到内耳中。如图8所示，弯针子组件26还可包括围绕弯曲部分32布置的止动器28。图8还显示弯曲部分32可包括用于刺穿耳膜(例如RWM)的
成角度尖端34。止动器28可具有约0.5mm，或约0.4mm‑约0.6mm，或约0.3mm‑约0.7mm的高度
48。弯曲部分32可具有约1.45mm，或约1.35mm‑约1.55mm，或约1.2mm‑约1.7mm的长度52。在其他方面，弯曲部分32可具有大于2.0mm的长度，使得止动器28的远端和成角度尖端34的远端之间的距离为约0.5mm‑约1.7mm，或约0.6mm‑约1.5mm，或约0.7mm‑约1.3mm，或约0.8mm‑
1.2mm。图8显示止动器28可具有圆柱形、盘形和/或圆顶形的几何形状。普通技术人员将意识到可使用其他几何形状。
[2809] 评估听力损失和恢复
[2810] 在一些方面，听力功能使用听觉脑干反应测量(ABR)来确定。在一些方面，听力通过测量畸变产物耳声发射(DPOAE)来测试。在一些此类方面，测量取自受试者的一只或两只耳朵。在一些此类方面，将记录与同一受试者的先前记录和/或被用于定义例如听力损失的此类反应测量的已知阈值相对于被定义为正常听力的可接受听力范围进行比较。在一些方
面，受试者具有在接受任何治疗之前记录的ABR和/或DPOAE测量。在一些方面，用本文所述的一种或多种技术治疗的受试者，与治疗之前相比较，治疗之后的ABR和/或DPOAE测量将具有改善。在一些方面，ABR和/或DPOAE测量为在给予治疗之后和治疗后以定期随访间隔取得的。
[2811] 在一些方面，听力功能为使用言语模式识别确定的或由言语治疗师确定的。在一些方面，听力功能为通过纯音测试确定。在一些方面，听力功能为通过骨传导测试确定的。
在一些方面，听力功能为通过听觉反射测试确定的。在一些方面，听力功能为通过鼓室导抗测试(tympanometry)确定的。在一些方面，听力功能为通过本领域已知的听力分析的任何
组合来确定。在一些这种方面，测量为整体取得，和/或取自受试者的一只或两只耳朵。在一些此类方面，将记录和/或专业分析与同一受试者的先前记录和/或分析和/或被用于定义
例如听力损失的此类反应测量的已知阈值相对于被定义为正常听力的可接受听力范围进
行比较。在一些方面，受试者具有在接受任何治疗之前进行的言语模式识别、纯音测试、骨传导测试、听觉反射测试和/或鼓室导抗测试测量和/或分析。在一些方面，用本文所述的一种或多种技术治疗的受试者，与治疗之前相比较，治疗之后的言语模式识别、纯音测试、骨传导测试、听觉反射测试和/或鼓室导抗测试测量将具有改善。在一些方面，言语模式识别、纯音测试、骨传导测试、听觉反射测试和/或鼓室导抗测试测量为在给予治疗之后和治疗后以定期随访间隔取得的。
[2812] 产生方法
[2813] AV系统通常为本领域众所周知的(参见例如Kelleher和Vos,Biotechniques,17(6):1110‑17(1994)；Cotton等人，P.N.A.S.U.S.A.,89(13):6094‑98(1992)；Curiel,Nat Immun,13(2‑3):141‑64(1994)；Muzyczka,Curr Top Microbiol Immunol,158:97‑129
(1992)；和Asokan A,等人，Mol.Ther.,20(4):699‑708(2012)，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中)。用于产生和使用AAV构建体的方法描述于例如美国专利号5,139,941、4,
797,368和PCT提交申请US2019/060328中，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中。
[2814] 用于获得病毒构建体的方法为本领域已知的。例如，为产生AAV构建体，方法一般涉及培养宿主细胞，后者含有编码AAV衣壳蛋白或其片段的核酸序列；功能性rep基因；由
AAV反向末端重复(ITR)和编码序列组成的重组AAV构建体；和/或足够的辅助功能以允许将
重组AAV构建体封装到AAV衣壳蛋白内。
[2815] 在一些方面，待在宿主细胞中培养以将AAV构建体封装到AAV衣壳中的组分可反式提供给宿主细胞。或者，任何一个或多个组分(例如重组AAV构建体、rep序列、cap序列和/或辅助功能)可由已使用本领域技术人员已知的方法被设计改造为含有一个或多个此类组分
的稳定宿主细胞提供。在一些方面，此类稳定的宿主细胞含有在诱导型启动子控制下的此
类组分。在一些方面，此类组分可在组成型启动子的控制下。在一些方面，选定的稳定宿主细胞可含有在组成型启动子控制下的选定组分和在一个或多个诱导型启动子控制下的其
他选定组分。例如，可产生稳定的宿主细胞，其衍生于HEK293细胞(其含有在组成型启动子控制下的E1辅助功能)，但其含有在诱导型启动子控制下的rep和/或cap蛋白。其他稳定的
宿主细胞可由本领域技术人员使用常规方法产生。
[2816] 用于产生本公开AAV所需的重组AAV构建体、rep序列、cap序列和辅助功能可使用任何适当的遗传元件(例如构建体)递送至包装宿主细胞。选定的遗传元件可通过本领域，
例如对于核酸操纵技术人员来说已知的任何合适的方法来递送并且包括遗传工程、重组工
程和合成技术(参见例如Sambrook等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold 
Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,N.Y.，其通过参考以其全部结合至本文中)。
类似地，产生AAV颗粒的方法为众所周知的，并且任何合适的方法可被用于本公开(参见例
如K.Fisher等人，J.Virol.,70:520‑532(1993)和美国专利号5,478,745，其通过参考以其全部结合至本文中)。
[2817] 在一些方面，重组AAV可使用三重转染方法产生(例如如美国专利号6,001,650中所述，其通过参考以其全部结合至本文中)。在一些方面，重组AAV为通过用待封装到AAV颗粒中的重组AAV构建体(包含编码序列)、AAV辅助功能构建体和附属功能构建体转染宿主细
胞来产生。AAV辅助功能构建体编码“AAV辅助功能”序列(即rep和cap)，其反式功能用于生产性AAV复制和衣壳化。在一些方面，AAV辅助功能构建体支持有效的AAV构建体产生而不产生任何可检测的野生型AAV颗粒(即含有功能性rep和cap基因的AAV颗粒)。适合于与本公开
一起使用的构建体的非限制性实例包括pHLP19(参见例如美国专利号6,001,650，其通过参
考以其全部结合至本文中)和pRep6cap6构建体(参见例如美国专利号6,156,303，其通过参
考以其全部结合至本文中)。附属功能构建体编码AAV复制所依赖的非AAV衍生病毒和/或细
胞功能(即“附属功能”)的核苷酸序列。附属功能可包括AAV复制所需的那些功能，非限制性地包括参与AAV基因转录的激活、阶段特异性AAV mRNA剪接、AAV DNA复制、cap表达产物的合成和AAV衣壳组装的那些部分。基于病毒的附属功能可衍生于任何已知的辅助病毒，比如腺病毒、疱疹病毒(除单纯疱疹病毒1型以外)和牛痘病毒。
[2818] 用于产生和分离适合于递送至受试者的AAV病毒构建体的另外方法描述于例如美国专利号7,790,449；美国专利号7,282,199；WO 2003/042397；WO 2005/033321，WO2006/
110689；和美国专利号7,588,772中，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中。在一个系统中，生产细胞系用编码侧接ITR的编码序列的构建体和编码rep和cap的构建体瞬时转
染。在另一个系统中，稳定地供应rep和cap的包装细胞系用编码侧接ITR的编码序列的构建体瞬时转染。在这些系统的每一个中，AAV颗粒响应于用辅助腺病毒或疱疹病毒的感染而产生，并且AAV与污染病毒分离。其他系统不需要用辅助病毒感染来恢复病毒颗粒—辅助功能(即腺病毒E1、E2a、VA和E4或疱疹病毒UL5、UL8、UL52和UL29以及疱疹病毒聚合酶)也由系统反式供应。在此列系统中，辅助功能可通过用编码辅助功能的构建体瞬时转染细胞来供应，或者细胞可被设计改造为稳定地含有编码辅助功能的基因，其表达可以在转录或转录后水
平上受控制。
[2819] 在一些方面，确定纯化后的病毒构建体滴度。在一些方面，使用定量PCR确定滴度。在某些方面，利用对构建体特异性的TaqMan探针来确定构建体水平。在某些方面，TaqMan探针由SEQ ID NO:58表示，而正向和反向扩增引物分别通过SEQ ID NO:59和60举例说明。
[2820] 用于量化构建体的示例性Taqman探针(SEQ ID NO:58)
[2821] /56‑FAM/TCTGGCTCA/ZEN/CCGTCCTCTTCATTT/3IABkFQ/
[2822] 用于量化构建体的示例性正向qPCR引物(SEQ ID NO:59)
[2823] CAAACACTCCACCAGCATTG
[2824] 用于量化构建体的示例性反向qPCR引物(SEQ ID NO:60)
[2825] CAGCCACAACGAGGATCATA
[2826] 如本文所述，在一些方面，本公开的病毒构建体为腺相关病毒(AAV)构建体。已经表征若干AAV血清型，包括AAV1、AAV2、AAV3(例如AAV3B)、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11和AAV Anc80以及其变体。在一些方面，AAV颗粒为AAV2/6、AAV2/8、AAV2/
9或AAV2/Anc80颗粒(例如具有AAV6、AAV8、AAV9或Anc80衣壳(例如Anc80L65衣壳)和具有
AAV2 ITR的构建体)。其他AAV颗粒和构建体描述于例如Sharma等人，Brain Res 
Bull.2010Feb 15；81(2‑3):273中，其通过参考以其全部结合至本文中。通常，任何AAV血清型可被用于递送本文所述的编码序列。然而，血清型具有不同趋向性，例如，它们优先地感染不同组织。在一些方面，AAV构建体为自互补的AAV构建体。
[2827] 除其他事项之外，本公开提供制备基于AAV的构建体的方法。在一些方面，此类方法包括使用宿主细胞。在一些方面，宿主细胞为哺乳动物细胞。宿主细胞可被用作AAV辅助构建体、AAV小基因质粒、附属功能构建体和/或与重组AAV生产相关的其他转移DNA的接受
者。该术语包括已转染的初始细胞的后代。因此，如本文使用的“宿主细胞”可指已用外源性DNA序列转染的细胞。可以理解的是，由于自然的、偶然的或故意的突变，单个亲代细胞的后代在形态学上或在基因组或总DNA互补物上不一定与初始亲代完全相同。
[2828] 用于产生和分离适合于递送至受试者的AAV颗粒的另外方法描述于例如美国专利号7,790,449；美国专利号7,282,199；WO 2003/042397；WO 2005/033321、WO 2006/110689；
和美国专利号7,588,772中，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中。在一个系统中，生产细胞系用编码侧接ITR的编码序列的构建体和编码rep和cap的构建体瞬时转染。在另
一个系统中，稳定地供应Rep和Cap的包装细胞系用编码侧接ITR的编码序列的构建体瞬时
转染。在这些系统的每一个中，AAV颗粒响应于用辅助腺病毒或疱疹病毒的感染而产生，并且AAV颗粒与污染病毒分离。其他系统不需要用辅助病毒感染来恢复AAV颗粒——辅助功能
(即腺病毒E1、E2a、VA和E4或疱疹病毒UL5、UL8、UL52和UL29以及疱疹病毒聚合酶)也由系统反式供应。在此类系统中，辅助功能可通过用编码辅助功能的构建体瞬时转染细胞来供应，或者细胞可被设计改造为稳定地含有编码辅助功能的基因，其表达可以在转录或转录后水
平上被控制。
[2829] 在仍然另一个系统中，侧接ITR的编码序列和rep/cap基因通过用基于杆状病毒的构建体感染而引入到昆虫宿主细胞中。此类生产系统为本领域已知的(通常参见例如Zhang
等人，2009,Human Gene Therapy 20:922‑929，其通过参考以其全部结合至本文中)。制备和使用这些和其他AAV生产系统的方法也描述于美国专利号5,139,941；5,741,683；6,057,
152；6,204,059；6,268,213；6,491,907；6,660,514；6,951,753；7,094,604；7,172,893；7,
201,898；7,229,823；和7,439,065中，其每一个均通过参考以其全部结合至本文中。
实施例
[2830] 本公开通过参考以下实验性实施例进一步详细描述。提供这些实施例仅出于说明的目的，并且不预期为限制性的，除非另外说明。因此，本公开绝不应被解释为限于以下实施例，而是应被解释为涵盖由于本文提供的讲授而变为显而易见的任何和所有变化。
[2831] 据信，本领域的技术人员或普通技术人员可使用前述描述和以下实施例以及本领域已知的内容，制备和利用本公开的技术。
[2832] 实施例1：包含多肽或治疗性多肽的病毒构建体的构建
[2833] 该实施例提供产生如本文所述病毒构建体的描述。重组AAV(rAAV)颗粒通过用如由Xiao等人，J Virol.73(5):3994‑4003,1999使用的无腺病毒方法转染而产生，所述文献通过参考以其全部结合至本文中。将具有AAV ITR的顺式质粒、具有AAV Rep和Cap基因的反式质粒以及具有来自腺病毒基因组的必需区的辅助质粒在HEK293细胞中共转染。rAAV构建
体在单个构建体策略下使用所描述的构建体表达人类缝隙连接蛋白26。制备AAV Anc80衣
壳以包封独特的rAAV缝隙连接蛋白26蛋白编码构建体。
[2834] 本领域的普通技术人员将易于理解，依照该实施例可制备类似的构建体。例如，可产生以单一、双重或多重构建体策略表达哺乳动物、灵长类动物或人类缝隙连接蛋白26的rAAV构建体。AAV血清型1、2、3、4、5、6、7、8、9、rh8、rhl0、rh39、rh43和Anc80可被各自制备为包封四组缝隙连接蛋白26构建体，以测试(i)多联体化‑反式剪接策略，(ii)杂合内含子‑同源重组‑反式剪接策略，(iii)外显子同源重组策略，如由Pryadkina等人，
Meth.Clin.Devel.2:15009,2015所概述，其通过参考以其全部结合至本文中，以及(iv)单
个构建体策略。在一些方面，重组AAV(rAAV)颗粒为通过用如由Xiao等人，J Virol.73(5):
3994‑4003,1999使用的无腺病毒方法转染而产生，所述文献通过参考以其全部结合至本文中。
[2835] 实施例2：产生和纯化病毒颗粒
[2836] 该实施例提供病毒构建体纯化的描述。使用三重转染方案产生重组AAV(rAAV)并将其纯化。通过斑点印迹分析级分以确定含有rAAV基因组的那些。使用与AAV构建体基因组的ITR区对应的引物和探针，通过基于定量实时PCR的滴定方法确定每个制备物的病毒基因
组数(vg)(Bartoli等人，Gene.Ther.13:20‑28,2006，其通过参考以其全部结合至本文中)。
[2837] 在该实施例的一些方面，使用标准三重转染方案产生重组AAV(rAAV)，并通过两个连续的氯化铯(CsCl)密度梯度将其纯化，如Pryadkina等人，Mol.Ther.2:15009,2015所述，其通过参考以其全部结合至本文中。在第二次离心结束时，从CsCl密度梯度管中回收500μl的11个级分，并通过在1x PBS中渗析将其纯化。通过斑点印迹分析级分以确定含有rAAV基
因组的那些。使用与AAV构建体基因组的ITR区对应的引物和探针，通过基于定量实时PCR的滴定方法确定每个制备物的病毒基因组数(vg)(Bartoli等人，Gene.Ther.13:20‑28,2006，其通过参考以其全部结合至本文中)。
[2838] 本领域的普通技术人员将易于理解，可依照该实施例进行类似的产生和纯化过程。例如，rAAV颗粒可使用本领域已知的各种柱色谱法进行纯化，和/或病毒基因组可使用备选引物组进行量化。
[2839] 实施例3：病毒颗粒的制剂
[2840] 该实施例涉及包含rAAV颗粒的制备和生理学上可接受的溶液的组合物。产生rAAV13
颗粒并将其纯化至1.2x10  vg/mL的滴度，且然后在生理上可接受的溶液(例如市售的具有
普朗尼克酸F68的1xPBS，制备至最终浓度为：8.10mM磷酸氢二钠、1.5mM磷酸二氢钾、2.7mM
4 5 5 9
氯化钾、172mM氯化钠和0.001％普朗尼克酸F68)中以6x10 、1.3x10 、1.8x10 、4.5x10 和
10
1.3x10 的稀释度制备。
[2841] 在备选方面，产生rAAV并将其纯化至已知浓度(例如约1x1013vg/mL的滴度)，且然后在生理学上可接受的缓冲液(例如市售的具有普朗尼克酸F68的1xPBS，制备至最终浓度
为：8.10mM磷酸氢二钠、1.5mM磷酸二氢钾、2.7mM氯化钾、172mM氯化钠和0.001％普朗尼克酸F68；或者例如包含NaCl，120mM；KCl，3.5mM；CaCl2，1.5mM；葡萄糖，5.5mM；HEPES，20mM的+
人工外淋巴，其用NaOH滴定以将其pH调节至7.5(130mM的总Na 浓度)，如Chen等人，J 
Controlled Rel.110:1‑19,2005中所述，其通过参考以其全部结合至本文中)中以期望的
4 5 5 9 10
浓度(例如6x10、1.3x10 、1.8x10 、4.5x10 和1.3x10 ，vg/mL的稀释液)制备。本领域的普通技术人员将易于理解，可依照该实施例制备备选制剂。例如，rAAV颗粒可被纯化至备选滴度，以备选稀释度制备，并悬浮于备选合适溶液中。
[2842] 实施例4：装置描述
[2843] 该实施例涉及适合于将rAAV颗粒递送至内耳的装置。使用设计用于一致且安全地穿透圆窗膜(RWM)的专用微导管将包含rAAV颗粒的组合物递送至受试者的耳蜗。使微导管
成形，以使得进行递送程序的外科医师可经由外耳道进入中耳腔并使微导管的末端与RWM
接触。微导管的远端可包括至少一个直径为约10微米‑约1,000微米的微针，微针在RWM中产生的穿孔，其足以允许如所描述的构建体(例如rAAV构建体)以不损伤内耳的速率(例如生
理学上可接受的速率，例如约30μL/min‑约90μL/min的速率)进入鼓阶的耳蜗外淋巴，但足够小而无需手术修复即治愈。微导管接近(一个或多个)微针的其余部分加载有规定滴度
12 13
(例如约1x10 ‑5x10  vg/mL)的rAAV/人工外淋巴制剂。微导管的近端连接于允许约30μL‑约100μL的精确的小体积输注的微量操纵器。
[2844] 实施例5：GJB2 mRNA和缝隙连接蛋白26蛋白产生(抗FLAG抗体)的体外证明。
[2845] 该实施例涉及在体外或离体生长的哺乳动物细胞中表达支持细胞蛋白(例如hGJB2基因)的rAAV构建体的引入、调控和表达分析。
[2846] 为仅在支持细胞中调控转基因mRNA的表达，创建了包含微小RNA靶位点的构建体。在其中转基因(例如支持细胞基因或GJB2基因)可能不良好耐受的细胞类型(例如毛细胞)
中，微小RNA识别miRTS并降解mRNA，阻止其表达。构建体的示意图如图3A所示。构建体包含启动子、5’UTR、转基因(GOI)、miRTs、3’UTR和多聚A，侧接反向末端重复。为防止转基因在毛细胞中的表达，并允许在其他耳蜗细胞类型比如支持细胞中表达，可使用在毛细胞中表达
而不在支持细胞中表达的微小RNA(图3B)。
[2847] 用包含eGFP和miRTS的质粒(eGFP‑miRTS)进行体外实验，所述质粒以miRNA对靶DNA比率范围与表达靶向miRTS的微小RNA的质粒(pITR.CMV.mScarlet.miRNA)一起共转染
到HEK293FT细胞中。eGFP表达通过流式细胞术测量并在不存在微小RNA的情况下归一化为
eGFP‑miRTS表达。增加pITR.CMV.mScarlet.miRNA对eGFP‑miRTS的比率导致eGFP表达降低(图3C)。当用包含表达不含miRTS的eGFP的构建体(eGFP)的Anc80颗粒(AAVAnc80‑
CAG.eGFP)转导细胞同时用pITR.CMV.mScarlet.miRNA转染时，通过流式细胞术未观察到
eGFP表达的减少。用包含eGFP和miRTS的构建体(AAVAnc80‑CAG.eGFP.miRTS)转导细胞同时用pITR.CMV.mScarlet.miRNA转染细胞，导致eGFP表达降低(图3D)。
[2848] 当用包含感兴趣的基因和在其3’UTR的miRTS位点的AAVAnc80载体(AAVAnc80‑CAG.GOI.miRTS)转导HEK293FT细胞同时用表达靶向miRTS的微小RNA的
pITR.CAG.mScarlet.miRNA转染时，观察到对感兴趣基因(GOI(GJB2))表达的类似影响。与
AAVAnc80‑CAG.GOI.miRTS单独转导相比较，当细胞用100ng或200ng的
pITR.CAG.mScarlet.miRNA转染同时用AAVAnc80‑CAG.GOI.miRTS转导时，通过实时qPCR和
蛋白印迹测量到感兴趣基因mRNA的减少(图3E和3F)。
[2849] 相反，当用包含感兴趣的基因不含3’UTR miRTS的构建体(AAVAnc80‑CAG.GOI)转导细胞时，pITR.CAG.mScarlet‑miRNA的转染没有降低感兴趣基因的水平(图3G)。在图3H
中，在AAVAnc80‑CAG.GOI.miRTS转导后通过蛋白印迹观察到的蛋白水平降低，并量化了
pITR.CAG.mScarlet‑miRNA。
[2850] 为确定是否存在由用AAVAnc80‑CAG.GOI.miRTS转导引起的对于基因表达的任何实质性脱靶效应，进行了批量RNA测序。聚类分析未能基于用或不用miRT转导检测到任何清晰的样本聚类(图3I)。使用差异表达分析来鉴定与AAVAnc80‑CAG.GOI相比较，由AAVAnc80‑CAG.GOI.miRTS的表达显著上调或下调的基因。仅有表达显著改变的基因与T细胞免疫反应
相关(图3J)，进一步表明没有由含有miRTS的构建体的表达引起的对于基因表达的显著脱
靶效应。
[2851] 耳蜗外植体培养物用表达FLAG标签化感兴趣基因(GOI(GJB2))的AAVAnc80病毒转导，其具有由在毛细胞中表达的miRNA靶向的miRTS(AAVAnc80‑CAG.GOI.FLAG.miRTS1‑4)或没有miRTS(AAVAnc80‑CAG.GOI.FLAG)。图3K(左)显示未处理的耳蜗外植体，用MYO7A标记的毛细胞呈红色。在用AAVAnc80‑CAG.GOI.FLAG转导后，感兴趣的基因在毛细胞(通过白色箭头表示)以及在外侧和内侧支持细胞两者中表达(图3K，右)。相反，在AAVAnc80‑
CAG.GOI.FLAG.miRTS1、AAVAnc80‑CAG.GOI.FLAG.miRTS2和AAVAnc80‑
CAG.GOI.FLAG.miRTS3转导后，如通过FLAG标记(绿色)观察到的，感兴趣基因的表达限于支持细胞(图3L、3M和3N)。在具有在3’UTR中的miRTS的表达感兴趣基因的构建体中，仅
AAVAnc80‑CAG.GOI.FLAG.miRTS4不成功地将表达限于支持细胞。感兴趣基因的FLAG标记与MYO7A(白色箭头)一起在一些毛细胞中共定位(图3O)。进行实验以证实来自转染到
HEK293FT细胞中的rAAV构建体的mRNA表达调控。将包含hGJB2.FLAG
(CAG.5UTR.hGJB2.FLAG.3UTR；SEQ ID NO:82)和任选的位于3’UTR中的miRNA调节靶位点
(miRTS)(CAG.5UTR.hGJB2.FLAG.miRTS.3UTR；图2F；SEQ ID NO:87)的rAAV构建体在用(+)
或不用(‑)另外质粒的情况下以300ng转染到HEK293FT细胞中，所述质粒包含以400ng转染
的miRNA编码区(例如miR‑182和miR‑183)。在转染后72h，收获细胞，用于使用蛋白印迹分析(参见图3P)和实时qPCR(参见图3Q)进行GJB2蛋白和RNA分析。与单独的表达靶质粒的样品
相比较，在共表达靶质粒及miR‑182和miR‑183的样品中检测到GJB2 RNA和蛋白表达的减
少。使用不包括miR‑182和miR‑183靶位点的包含hGJB2.FLAG的类似质粒作为对照，并且在存在和不存在miR‑182和miR‑183共表达的情况下呈现相似的hGJB2蛋白水平(参见图3P和
图3Q)。
[2852] 将包含含有可操作地连接于与最小GJB2启动子组合的支持细胞选择性启动子(GFAP、GJB6、IGFBP2、RPB7、PARM1或GDF6)的GJB2 flag标签化多核苷酸的rAAV构建体的
rAAV颗粒转导到HEK293FT细胞中。将通过CAG启动子的表达用作阳性对照。蛋白和RNA分析
显示这些构建体能够表达缝隙连接蛋白26(图10A‑10B)。
[2853] 将包含可操作地连接于与最小GJB2启动子组合的支持细胞选择性启动子(FABP3、KLHL14、DBI2、TSPAN8、MMP15、SPARC或VIM)的GJB2 flag标签化多核苷酸的质粒转染到
HEK293FT细胞中。通过蛋白印迹从所有构建体观察到缝隙连接蛋白26表达(图10C)。
[2854] 包含rAAV构建体的rAAV颗粒通过Anc80衣壳衣壳化并以不同剂量被转导到新生儿耳蜗外植体中。RNA分析显示GJB2 mRNA表达随给药而增加(图11)。
[2855] 本领域的普通技术人员将易于理解，存在进行与当前实施例相关的实验的备选方法，例如备选病毒滴度、MOI、细胞浓度、细胞收获的时间、用于细胞收获或者mRNA或蛋白分析的试剂、AAV血清型和/或对包含基因的构建体的标准修饰为当前实施例的实际和预期改
变。
[2856] 实施例6：对新生儿耳蜗外植体中转基因GJB2 mRNA表达和缝隙连接蛋白26蛋白产生的初步毛细胞耐受性评价。
[2857] 该实施例涉及在新生儿耳蜗外植体中过表达GJB2基因的rAAV构建体的引入和表达分析。制备由Anc80衣壳衣壳化的模拟品rAAV颗粒或包含rAAV构建体的rAAV颗粒(图2小
9 10
图(A)‑(H))，并将其以已知MOI(例如约4.5x10 或1.3x10  vg/每耳蜗)转导到新生儿耳蜗
外植体中。外植体生长至适合于收获的水平(例如转导后72小时)，并然后被制备用于通过
使用4％PFA固定的免疫荧光染色/成像或RNA提取。制备RNA样品并使用构建体特异性引物，使用以适当试剂按已发表方法中描述的方式进行的定量PCR(例如适当根据RNeasy Micro 
Kit和定量实时PCR)，并相对于对照，证实GJB2基因过表达。当与模拟品转导事件相比较时，在用测试rAAV转导的外植体中观察到稳健的GJB2 mRNA产生。使用免疫荧光染色/成像来确
定毛细胞毒性的耐受性和缺乏，利用靶向Myo7a的抗体(Proteus Biosciences)来描绘内耳
毛细胞，同时使用DAPI染色来定义核定位。在GJB2过表达之后，观察到无或低的毛细胞
(Myo7)毒性。
[2858] 制备包含由CAG、CMV‑GJB2p或smCBA启动子/增强子组合驱动的rAAV构建体的rAAV 9 10 10
Anc80颗粒，并以已知MOI(分别约5.8x10、1.4x10 或1.8x10  vg/每耳蜗)将其转导到小鼠
新生儿(P2)耳蜗外植体中。外植体生长至适合于收获的水平(例如转导后72小时)，并然后
被制备用于通过使用4％PFA固定的免疫荧光染色/成像。然后外植体进行DAPI染色(呈现为
蓝色)并使用抗FLAG抗体(呈现为绿色)和毛细胞特异性抗Myo7a抗体(呈现为红色)进行免
疫染色，随后对外植体成像(示例性数据呈现于图4A‑4C)。在用包含AAVAnc80‑
CAG.5UTR.hGJB2.3F.3UTR(如图2C小图(C)所示，SEQ ID NO:82)的rAAV颗粒以5.8E9 vg/外
植体转导的外植体支持细胞中，观察到稳健的FLAG信号(参见图4A小图(A))。在用包含
AAVAnc80‑smCBA.5UTR.hGJB2.3F.3UTR(如图2D小图(D)所示，SEQ ID NO:83)的rAAV颗粒以
1.4E10 vg/外植体转导的外植体支持细胞中，观察到稳健的FLAG信号。在用包含AAVAnc80‑CMVeGFAPp.5UTR.hGJB2.3F.3UTR(如图2E小图(E)所示，SEQ ID NO:84)的rAAV颗粒以
1.8E10 vg/外植体转导的外植体支持细胞中，观察到稳健的FLAG信号。在样品间检测到
FLAG表达的变化，这可能是载体滴度变化性的结果。
[2859] 实施例7：老龄小鼠的手术方法
[2860] 当前实施例涉及将本文所述的构建体引入到老龄小鼠的内耳。在配制缓冲液(例如人工外淋巴或具有普朗尼克酸F68的1xPBS)中制备包含AAV衣壳和编码缝隙连接蛋白26
蛋白或其特征性功能部分的构建体的rAAV颗粒，并然后将其如Shu等人，Human Gene 
Therapy,27(9):687‑699,2016所述(其通过参考以其全部结合至本文中)给予小鼠的鼓阶。
使用甲苯噻嗪(例如约5‑10mg/kg)和氯胺酮(例如约90‑120mg/kg)的腹膜内注射麻醉年长
于P15的雄性和雌性小鼠。使用电热垫将体温保持在37℃。从右耳后区进行切口并暴露鼓泡和后半规管。将大泡用手术针穿孔并将小孔扩大以提供至耳蜗的通道。用牙钻将鼓阶的耳
蜗侧壁的骨变薄，使得膜性侧壁保持完整。然后在后半规管(PSCC)中钻小孔。通过可视化外淋巴的缓慢泄漏证实耳道造口术的开放性。使用Nanoliter Microinjection System以及
玻璃微量移液器，来以约2nL/秒的速率向鼓阶递送总共约1μL的含有构建体的缓冲液(例如
9 10
在人工外淋巴或具有普朗尼克酸F68的1xPBS中约4.5x10 ‑5x10  vg/每耳蜗的本文所述的
rAAV构建体)。注射后将玻璃微量移液器留置5分钟。耳蜗造口术和注射后，用小块脂肪密封鼓泡和PSCC的开口，并缝合肌肉和皮肤。使得小鼠从麻醉中醒来，并用0.15mg/kg盐酸丁丙诺啡控制其疼痛，持续3天。
[2861] 实施例8：野生型小鼠中缝隙连接蛋白26蛋白的转基因表达和成像。
[2862] 该实施例涉及野生型小鼠和GJB2诱导型条件性敲除小鼠中转基因缝隙连接蛋白26蛋白的转基因表达和分析。通过实施例7中描述的方法给予野生型小鼠包含
10
CAG.hGJB2.FLAG.GFP(图2H中提供的示意图)的AAVAnc80颗粒(1.2x10  vg/耳蜗)至耳蜗。
给予之后10天，在感觉上皮支持细胞的膜中检测到清晰和稳健的外源性缝隙连接蛋白26
(FLAG；紫色)(图9A，中和右小图)。在内毛细胞中也检测到外源性缝隙连接蛋白26的表达。
在所有支持细胞中均检测到内源性缝隙连接蛋白26(红色)(图9A，左和右小图)。
[2863] 给予幼年野生型小鼠1μl包含以下的AAVAnc80颗粒：AAVAnc80‑CMVeGFAPp.5UTR.hGJB2.FLAG.3UTR(SEQ ID NO:84)、AAVAnc80‑GDF6p.mGJB2p.5UTR.hGJ
B2.FLAG.3UTR(包含SEQ ID NO:61的构建体和包含SEQ ID NO:90的支持细胞选择性启动
子)、AAVAnc80‑IGFBP2p.mGJB2p.5UTR.hGJB2.FLAG.3UTR(包含SEQ ID NO:54的构建体和包含SEQ ID NO:57的支持细胞选择性启动子)、AAVAnc80‑PARM1p.mGJB2p.5UTR.hGJB2.FLAG
.3UTR(包含SEQ ID NO:7的构建体和包含SEQ ID NO:40的支持细胞选择性启动子)、
AAVAnc80‑GFAPp.mGJB2p.hGJB2、AAVAnc80‑MMP15p.mGJB2p.hGJB2或AAVAnc80‑
VIMp.mGJB2p.hGJB2。给予具有掺入CMV增强子的启动子的hGJB2构建体导致与内源性缝隙
连接蛋白26表达共定位的支持细胞表达(图9B；星号)。然而，仍然检测到内毛细胞表达(箭头)。相反，给予具有与最小GJB2启动子组合的衍生于支持细胞基因GDF6(图9C)、IGFBP2(图
9D)和PARM1(图9E)的启动子的hGJB2构建体导致支持细胞表达而没有检测到内毛细胞表
达。
[2864] 给予包含AAVAnc80‑GFAPp.mGJB2p.hGJB2的AAVAnc80颗粒没有导致支持细胞表达GJB2(图9F)。给予包含AAVAnc80‑MMP15p.mGJB2p.hGJB2或AAVAnc80‑VIMp.mGJB2p.hGJB2的AAVAnc80颗粒导致支持细胞表达flag标签化hGJB2。如Myo7a染色所示，毛细胞中未检测到
flag标签化hGJB2的表达。类似地，给予具有衍生于支持细胞基因GDF6(图9I)、PARM1(图
9J)、VIM(图9K)和MMP15p(图9L)的启动子的hGJB2构建体导致支持细胞表达而没有检测到
内毛细胞表达。
[2865] 通过具有后半规管开窗的圆窗膜用包含AAVAnc80.CMVe.GFAP.mGJB2p.hGJB2.FLAG、AAVAnc80.CMVe.GDF6.mGJB2p.hGJB2.FLAG或AAVAnc80.CMVe.PARM1.mGJB2p.hGJB2.FL
AG的AAVAnc80颗粒给予幼年WT小鼠。给予后4周，将小鼠安乐死，在固定的PFA中收获内耳，并处理注射的(左)耳用于使用鬼笔环肽标记所有细胞和毛细胞静纤毛束、抗FLAG标记转基
因和毛细胞标志物Myo7a的免疫荧光染色。抗Cx26抗体也被用于一些样品中以使转基因的
表达与内源性Cx26表达共定位。对来自耳蜗基部、中部和顶端的多个区域成像，并且代表性图像呈现于图9M‑9O。
[2866] 在支持细胞中检测到Cx26‑FLAG转基因(绿色)的表达，与内源性Cx26表达(星号)重叠，并且在一些情况下，在内毛细胞中观察到所述转基因表达(箭头)(图9M)。图9N和9O显示在支持细胞中的稳健FLAG(绿色)表达，而在IHC或毛细胞缺失中无明显表达。进一步地，在支持细胞亚型之间观察到差异表达模式。

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