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能够结合羊毛硫氨酸合成酶C-样蛋白(LANCL)的肽组合物及其用途
申请号 CN202280051738.3 申请日 2022-07-22 公开(公告)号 CN117813105A 公开(公告)日 2024-04-02
申请人 横向知识产权私人有限公司; 发明人 安德鲁·吉尔林; D·肯利;
摘要 本 发明 提供了能够结合羊毛硫 氨 酸合成酶C‑样蛋白(LanCL)的多种肽组合物，其具有 镇痛 、抗炎和抗 微 生物 性质。所述组合物包含肽式(I)：X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6，其中X代表特定的氨基酸组，并且肽的长度是3个‑20个氨基酸，肽不包含序列CRSRPVESSC、CRSVEGSCG或CRIIHNNNC，并且不是包含序列EQLERALNSS的线性肽。
权利要求

1.一种能够与羊毛硫氨酸合成酶C‑样(LanCL)蛋白结合的肽，其中所述肽包含式(I)的氨基酸序列：
X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6(I)
其中：
(a)X1选自由以下组成的组：赖氨酸、精氨酸和组氨酸，或X1不存在；
(b)X2选自由以下组成的组：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸和丝氨酸；
(c)X3选自由以下组成的组：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；
(d)X4选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、谷氨酸、脯氨酸和组氨酸，或X4不存在；
(e)X5选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、赖氨酸、组氨酸和甘氨酸，或X5不存在；并且
(f)X6选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪氨酸和组氨酸，或X6不存在；
其中所述肽的长度是3个至20个氨基酸；
其中所述肽的氨基酸序列不包含CRSRPVESSC、CRSVEGSCG或CRIIHNNNC；并且
其中所述肽不是包含氨基酸序列EQLERALNSS的线性肽。
2.根据权利要求1所述的肽，其中X1是精氨酸。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的肽，其中X2选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸和丝氨酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的肽，其中X3选自由以下组成的组：缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的肽，其中X4选自由以下组成的组：天冬酰胺、谷氨酸、脯氨酸和组氨酸，或X4不存在。
6.根据权利要求5所述的肽，其中X4选自由以下组成的组：天冬酰胺、谷氨酸、脯氨酸和组氨酸。
7.根据权利要求5所述的肽，其中X4不存在。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的肽，其中X5选自由以下组成的组：丝氨酸、天冬酰胺和甘氨酸，或X5不存在。
9.根据权利要求8所述的肽，其中X5选自由以下组成的组：丝氨酸、天冬酰胺和甘氨酸。
10.根据权利要求8所述的肽，其中X5不存在。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的肽，其中X6是丝氨酸或天冬酰胺，或X6不存在。
12.根据权利要求11所述的肽，其中X6是丝氨酸或天冬酰胺。
13.根据权利要求11所述的肽，其中X6不存在。
14.根据权利要求1所述的肽，其中：
(a)X1选自由以下组成的组：赖氨酸、精氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代；
(b)X2选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丝氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代；
(c)X3选自由以下组成的组：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代；
(d)X4选自由以下组成的组：天冬酰胺、谷氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代，或X4不存在；
(e)X5选自由以下组成的组：丝氨酸、谷氨酰胺和前述任一种的保守氨基酸取代，或X5不存在；并且
(f)X6是丝氨酸或其保守氨基酸取代，或X6不存在。
15.根据权利要求14所述的肽，其中：
(a)X1是赖氨酸或精氨酸；
(b)X2选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸和丝氨酸；
(c)X3选自由以下组成的组：缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；
(d)X4是天冬酰胺或谷氨酸，或X4不存在；
(e)X5是丝氨酸或谷氨酰胺，或X5不存在；并且
(f)X6是丝氨酸，或X6不存在。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的肽，其中所述肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：RAL、RALN、RALNS、RALNSS、RSV、RSVE、RSVEG、RSVEGS、RPV、RPVE、RPVES、RPVESS、RII、RIIH、RIIHN和RIIHNN。
17.根据权利要求1至15中任一项所述的肽，其中所述肽由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成：RAL、RALN、RALNS、RALNSS、RSV、RSVE、RSVEG、RSVEGS、RPV、RPVE、RPVES、RPVESS、RII、RIIH、RIIHN和RIIHNN。
18.根据权利要求1至15中任一项所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列RALNSS。
19.根据权利要求1至15中任一项所述的肽，其中所述肽由氨基酸序列RALNSS组成。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的肽，其中所述肽是环肽。
21.根据权利要求20所述的肽，其中所述环肽通过两个半胱氨酸残基之间的二硫键形成。
22.根据权利要求21所述的肽，其中所述环肽包含氨基酸序列CQEQLERALNSSC。
23.根据权利要求21所述的肽，其中所述环肽由氨基酸序列CQEQLERALNSSC组成。
24.根据权利要求21所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列CRALNSSC。
25.根据权利要求21所述的肽，其中所述肽由氨基酸序列CRALNSSC组成。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的肽，其中所述肽能够与由氨基酸序列
CRSVEGSCG组成的肽竞争结合LanCL。
27.根据权利要求1所述的肽，其中X1不存在。
28.根据权利要求14或权利要求15所述的肽，其中X1不存在。
29.根据权利要求27或权利要求28所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列ALNSS。
30.根据权利要求27或权利要求28所述的肽，其中所述肽由氨基酸序列ALNSS组成。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的肽，其中式(I)的氨基酸中的一个或更多个是D‑氨基酸。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的肽，其中所述肽不是包含氨基酸序列
QEQLERALNSS的线性肽。
33.一种药物组合物，包含权利要求1至32中任一项所述的肽。
34.一种治疗受试者的状况的方法，所述方法包括向有相应需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1至32中任一项所述的肽。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述状况选自由以下组成的组：疼痛，炎性气道疾病，微生物感染，呼吸道感染，偏头痛，肌肉减少症，葡萄糖耐量受损，糖尿病，肥胖，代谢性疾病和肥胖相关状况，骨关节炎，肌肉紊乱，消耗性紊乱，老化，恶病质，厌食症，AIDS消耗综合征，肌营养不良，神经肌肉疾病，肌萎缩侧索硬化(ALS)，运动神经元疾病，神经肌肉接头疾病，炎性肌病，眼科状况，中枢神经系统状况，神经退行性状况，帕金森病，阿尔茨海默病，烧伤，伤口，损伤或创伤，与LDL胆固醇升高相关的状况，与软骨细胞、蛋白聚糖或胶原蛋白的产生或质量受损相关的状况，与软骨组织的形成或质量受损相关的状况，与肌肉、韧带或腱的质量、形态或功能受损相关的状况，与影响肌肉或结缔组织的炎症、创伤或遗传异常相关的状况，以及骨骼紊乱。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述状况是疼痛。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述状况是神经病理性疼痛。
38.根据权利要求35所述的方法，其中所述状况是炎性气道疾病。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述炎性气道疾病是慢性阻塞性肺病。
40.根据权利要求35所述的方法，其中所述状况是呼吸道感染。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述呼吸道感染是呼吸道病毒感染。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述病毒是流感病毒或冠状病毒。
43.治疗有效量的权利要求1至32中任一项所述的肽在制造用于治疗有相应需要的受试者的状况的药物中的用途。
44.根据权利要求43所述的用途，其中所述状况选自由以下组成的组：疼痛，炎性气道疾病，微生物感染，呼吸道感染，偏头痛，肌肉减少症，葡萄糖耐量受损，糖尿病，肥胖，代谢性疾病和肥胖相关状况，骨关节炎，肌肉紊乱，消耗性紊乱，老化，恶病质，厌食症，AIDS消耗综合征，肌营养不良，神经肌肉疾病，肌萎缩侧索硬化(ALS)，运动神经元疾病，神经肌肉接头疾病，炎性肌病，眼科状况，中枢神经系统状况，神经退行性状况，帕金森病，阿尔茨海默病，烧伤，伤口，损伤或创伤，与LDL胆固醇升高相关的状况，与软骨细胞、蛋白聚糖或胶原蛋白的产生或质量受损相关的状况，与软骨组织的形成或质量受损相关的状况，与肌肉、韧带或腱的质量、形态或功能受损相关的状况，与影响肌肉或结缔组织的炎症、创伤或遗传异常相关的状况，以及骨骼紊乱。
45.根据权利要求1至32中任一项所述的肽，用于在治疗有相应需要的受试者的状况中使用。
46.根据权利要求45所述的用于使用的肽，其中所述状况选自由以下组成的组：疼痛，炎性气道疾病，微生物感染，呼吸道感染，偏头痛，肌肉减少症，葡萄糖耐量受损，糖尿病，肥胖，代谢性疾病和肥胖相关状况，骨关节炎，肌肉紊乱，消耗性紊乱，老化，恶病质，厌食症，AIDS消耗综合征，肌营养不良，神经肌肉疾病，肌萎缩侧索硬化(ALS)，运动神经元疾病，神经肌肉接头疾病，炎性肌病，眼科状况，中枢神经系统状况，神经退行性状况，帕金森病，阿尔茨海默病，烧伤，伤口，损伤或创伤，与LDL胆固醇升高相关的状况，与软骨细胞、蛋白聚糖或胶原蛋白的产生或质量受损相关的状况，与软骨组织的形成或质量受损相关的状况，与肌肉、韧带或腱的质量、形态或功能受损相关的状况，与影响肌肉或结缔组织的炎症、创伤或遗传异常相关的状况，以及骨骼紊乱。
说明书全文

能够结合羊毛硫氨酸合成酶C‑样蛋白(LANCL)的肽组合物及

其用途

发明领域

[0001] 本发明总体上涉及适用于治疗诸如疼痛、炎性状况和呼吸道感染的状况的肽及其用途。
[0002] 背景
[0003] 所有参考文献，包括在本说明书中引用的任何专利或专利申请，都据此通过引用并入，以便能够充分理解本发明。然而，这样的参考文献不应被理解为在澳大利亚或在任何其他国家构成对任何这些文献形成本领域公知常识的一部分的承认。
[0004] 如Lee等人(Int J Mol Sci.2019；20(10):2383)指出的，蛋白质‑蛋白质相互作用(PPI)是几乎所有细胞过程的基础。这些生物化学过程通常包括间接地或直接地调节一系列细胞信号传导事件的激活的受体，这些细胞信号传导事件调节核酸的转录和/或经翻译的蛋白质的翻译后修饰。与这样的受体特异性地结合的药物可以用作激动剂或拮抗剂，影响下游的细胞行为。因此，干扰PPI的肽和小分子作为治疗剂受到追捧，这是由于它们调节疾病相关蛋白质相互作用的潜力。作者指出，更好地识别可靶向的疾病相关PPI和优化肽药物结合特性将可能是其临床成功的关键。然而，对于计算生物学家和蛋白质生物化学家来说，理解分子识别机制和描绘PPI的结合亲和力是一项复杂的挑战，这主要是因为与通常存在于PPI复合物界面的较大、平坦且疏水性的结合界面相比时，小分子更多地结合蛋白质的深折叠口袋。虽然抗体通常在识别这些PPI界面方面更有效，但它们通常不能渗透细胞膜以到达和识别细胞内靶。作者指出，最近，具有平衡的构象灵活性和结合亲和力比小分子药物大多至五倍的肽引起了相当大的关注。例如，环肽具有小分子药物性质，诸如长体内稳定性，同时保持强的抗体样结合亲和力和最小毒性。
[0005] de la Torre and Albericio(2020；Molecules；25(10):2293)报告，基于肽的药物发现领域最近示出显著的活动，并且指出，从2015年至2019年，美国食品药品监督管理局(FDA)已经批准了208种新药物，其中150种是新的化学实体，并且58种是生物制品，包括15种肽或含肽分子。这些包括伊沙佐米(Ixazomib)(一种用于治疗多发性骨髓瘤的N‑酰化,C‑硼酸二肽)、Adlyxin(一种用于治疗骨质疏松症的甲状旁腺激素相关蛋白的34个氨基酸的类似物)、Etelcalcetide(一种用于治疗甲状旁腺功能亢进症的通过二硫桥与L‑Cys连接的Ac‑DCys‑DAla‑(DArg)3‑DAla‑DArg‑NH2)和阿美诺肽(Afamelanotide)(一种用于治疗皮肤损害和疼痛的α‑黑素细胞刺激素(αMSH)的13个氨基酸的线性肽类似物)。作者指出，肿瘤学、代谢和内分泌学是FDA批准的基于肽的治疗剂的最常见适应症，尽管心血管疾病、胃肠病学、骨骼疾病、皮肤病学和性功能障碍也是FDA批准的基于肽的治疗剂的目标适应症。
[0006] 与小分子诸如蛋白质和抗体相比，肽代表了一类独特的药物化合物，这归因于它们独特的生物化学和治疗特性。除了基于肽的天然激素类似物之外，肽已经被开发为破坏蛋白质‑蛋白质相互作用(PPI)和靶向或抑制细胞内分子诸如受体酪氨酸激酶的药物候选物。这些策略已经使肽治疗剂成为领先行业，每年有近20项新的基于肽的临床试验。事实上，目前存在超过400种肽药物正在全球临床开发中，其中超过60种已经在美国、欧洲和日本被批准用于临床使用。
[0007] 虽然基于肽的治疗剂已经取得了相当大的进展，但它们在很大程度上限于特定的疾病和状况的治疗，与这些基于肽的治疗剂所靶向的PPI和细胞信号传导通路相称。因此，仍然存在对于广谱、基于肽的治疗策略的持续的需求，所述治疗策略能够有利地减轻多种疾病、状况或其症状，包括与细胞的老化、损害或应激相关的疾病、状况或其症状。本发明通过提供具有广谱活性诸如镇痛活性、抗炎活性和抗微生物活性的治疗性肽来解决或至少部分地减轻这种限制。
[0008] 发明概述
[0009] 在本文公开的方面中，提供了一种能够结合羊毛硫氨酸合成酶C‑样(LanCL)蛋白的肽，其中所述肽包含式(I)的氨基酸序列：
[0010] X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6(I)
[0011] 其中：
[0012] X1选自由以下组成的组：赖氨酸、精氨酸和组氨酸，或X1不存在；
[0013] X2选自由以下组成的组：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸和丝氨酸；
[0014] X3选自由以下组成的组：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；
[0015] X4选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、谷氨酸、脯氨酸和组氨酸，或X4不存在；
[0016] X5选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、赖氨酸、组氨酸和甘氨酸，或X5不存在；并且
[0017] X6选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪氨酸和组氨酸，或X6不存在。
[0018] 其中肽的长度是3个至20个氨基酸；
[0019] 其中肽的氨基酸序列不包含CRSRPVESSC、CRSVEGSCG或CRIIHNNNC；并且
[0020] 其中肽不是包含氨基酸序列EQLERALNSS的线性肽。
[0021] 在本文公开的另一个方面中，提供了一种能够结合羊毛硫氨酸合成酶C‑样(LanCL)蛋白的肽，其中所述肽包含式(I)的氨基酸序列：
[0022] X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6  (I)
[0023] 其中：
[0024] X1选自由以下组成的组：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；
[0025] X2选自由以下组成的组：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸和丝氨酸；
[0026] X3选自由以下组成的组：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；
[0027] X4选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、谷氨酸、脯氨酸和组氨酸，或X4不存在；
[0028] X5选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、赖氨酸、组氨酸和甘氨酸，或X5不存在；并且
[0029] X6选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪氨酸和组氨酸，或X6不存在。
[0030] 其中肽的长度是3个至20个氨基酸；
[0031] 其中肽的氨基酸序列不包含CRSRPVESSC、CRSVEGSCG或CRIIHNNNC；并且
[0032] 其中肽不是包含氨基酸序列EQLERALNSS的线性肽。
[0033] 附图简述
[0034] 图1示出了SEQ ID NO:1的肽对紫杉醇应激的A549腺癌人类肺泡基底上皮细胞的生存力的影响。将细胞用LanCL1 siRNA(100nM持续48小时)处理以敲除LanCL1表达。然后在存在紫杉醇(IC50～350μM)的情况下，或者在存在单独的媒介物(二甲基亚砜；DMSO)的情况下或在存在浓度为1μM、5μM、25μM、50μM和100μM的SEQ ID NO:1的肽(在DMSO中稀释)的情况下孵育细胞。Y轴示出相对发光单位(RLU)；X轴示出肽的浓度。
[0035] 图2示出了SEQ ID NO:9的肽对紫杉醇应激的A549细胞的生存力的影响。在存在单独的媒介物(DMSO)的情况下或在存在浓度为1μM、5μM、25μM、50μM和100μM的SEQ ID NO:9的肽(在DMSO中稀释)的情况下，用紫杉醇(IC50～350μM)处理细胞。Y轴示出相对发光单位(RLU)；X轴示出肽的浓度。
[0036] 图3示出了在神经病理性疼痛的大鼠Chung模型中，肽RSVEGS(SEQ ID NO:9)、SVEGS(SEQ ID NO:62)和ALNSS(SEQ ID NO:63)对于同侧缩足阈值(PWT；克)的影响。当与媒介物组相比时，*P<0.05，**P<0.01并且***P<0.001(单向ANOVA；每组n＝6)。
[0037] 图4示出了在神经病理性疼痛的大鼠Chung模型中，肽RSVEGS(SEQ ID NO:9)、SVEGS(SEQ ID NO:62)和ALNSS(SEQ ID NO:63)对于对侧缩足阈值(PWT；克)的影响(单向
ANOVA；每组n＝6)。
[0038] 发明详述
[0039] 除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管与本文描述的那些类似或等效的任何方法和材料都可以用于实践或测试本发明，但描述了优选的方法和材料。为了本发明的目的，在下文中定义了以下术语。
[0040] 冠词“一(a)”和“一(an)”在本文中用于指一个/种或多于一个/种(即至少一个/种)的该冠词的语法对象。作为实例，“要素(an element)”意指一种要素或多于一种要素。
[0041] 如本文使用的，术语“约”是指对于参考数量、水平、值、维度、尺寸或量变化多达10％(例如，变化10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％)的数量、水平、值、维度、尺寸或量。
[0042] 在整个本说明书中，除非上下文另外要求，否则词语“包括(comprise)”、“包括(comprises)”和“包括(comprising)”将被理解为意味着包括陈述的步骤或要素或步骤或要素的组，但不排除任何其他步骤或要素或步骤或要素的组。
[0043] 肽
[0044] 本发明人先前已经鉴定了一类新的环肽分子的分子靶(羊毛硫氨酸合成酶C‑样蛋白；LanCL)，镇痛和其他治疗性质先前已经归因于该分子靶。该工作在WO2021/127752中描述。此后，本发明人已经鉴定了肽的新颖的共有序列(式(I))，其出乎意料地保留了至少一些先前归因于这类环状LanCL结合肽的生物活性，包括镇痛活性、抗炎活性和抗微生物活性。此外，本发明人出乎意料地发现，包含该共有序列的许多肽将保留生物活性，而不管它们是以环状肽构型还是线性肽构型存在。因此，在本文公开的方面中，提供了一种能够结合羊毛硫氨酸合成酶C‑样(LanCL)蛋白的肽，其中所述肽包含式(I)的氨基酸序列：
[0045] X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6(I)
[0046] 其中：
[0047] X1选自由以下组成的组：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；
[0048] X2选自由以下组成的组：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸和丝氨酸；
[0049] X3选自由以下组成的组：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；
[0050] X4选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、谷氨酸、脯氨酸和组氨酸，或X4不存在；
[0051] X5选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、赖氨酸、组氨酸和甘氨酸，或X5不存在；并且
[0052] X6选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪氨酸和组氨酸，或X6不存在。
[0053] 其中肽的长度是3个至20个氨基酸；
[0054] 其中肽的氨基酸序列不包含CRSRPVESSC、CRSVEGSCG或CRIIHNNNC；并且
[0055] 其中肽不是包含氨基酸序列EQLERALNSS的线性肽。
[0056] 在实施方案中，X1是精氨酸。在实施方案中，肽不是包含氨基酸序列QEQLERALNSS的线性肽。
[0057] 本发明人还出乎意料地表明，本文描述的肽出乎意料地保留了至少一些先前归因于这类环状LanCL结合肽的生物活性，包括镇痛活性、抗炎活性和抗微生物活性，即使是在不存在X1的情况下。因此，在本文描述的实施方案中，X1不存在。
[0058] 在本文公开的另一个方面中，提供了一种能够结合羊毛硫氨酸合成酶C‑样(LanCL)蛋白的肽，其中所述肽包含式(I)的氨基酸序列：
[0059] X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6  (I)
[0060] 其中：
[0061] X1选自由以下组成的组：赖氨酸、精氨酸和组氨酸，或X1不存在；
[0062] X2选自由以下组成的组：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸和丝氨酸；
[0063] X3选自由以下组成的组：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；
[0064] X4选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、谷氨酸、脯氨酸和组氨酸，或X4不存在；
[0065] X5选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、赖氨酸、组氨酸和甘氨酸，或X5不存在；并且
[0066] X6选自由以下组成的组：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪氨酸和组氨酸，或X6不存在。
[0067] 其中肽的长度是3个至20个氨基酸；
[0068] 其中肽的氨基酸序列不包含CRSRPVESSC、CRSVEGSCG或CRIIHNNNC；并且
[0069] 其中肽不是包含氨基酸序列EQLERALNSS的线性肽。
[0070] 在实施方案中，肽不是包含氨基酸序列QEQLERALNSS的线性肽。
[0071] 在实施方案中，肽的氨基酸序列不包含CRSRPVESSC、CRSVEGSCG、CRIIHNNNC、CRRFVESSCA或CRIVYDSNC。
[0072] 在实施方案中，X2选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸和丝氨酸。
[0073] 在实施方案中，X3选自由以下组成的组：缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
[0074] 在实施方案中，X4选自由以下组成的组：天冬酰胺、谷氨酸和组氨酸，或X4不存在。在实施方案中，X4选自由以下组成的组：天冬酰胺、谷氨酸、脯氨酸和组氨酸。在实施方案中，X4不存在。
[0075] 在实施方案中，X5选自由以下组成的组：丝氨酸、天冬酰胺和甘氨酸，或X5不存在。在实施方案中，X5选自由以下组成的组：丝氨酸、天冬酰胺和甘氨酸。在实施方案中，X5不存在。
[0076] 在实施方案中，X6是丝氨酸或天冬酰胺，或X6不存在。在实施方案中，X6是丝氨酸或天冬酰胺。在实施方案中，X6不存在。
[0077] 在实施方案中，X1选自由以下组成的组：赖氨酸、精氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代；X2选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丝氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代；X3选自由以下组成的组：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代；X4选自由以下组成的组：天冬酰胺、谷氨酸、脯氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代，或X4不存在；X5选自由以下组成的组：丝氨酸、谷氨酰胺和前述任一种的保守氨基酸取代，或X5不存在；并且X6是丝氨酸或其保守氨基酸取代，或X6不存在。
[0078] 在实施方案中，X1不存在或选自由以下组成的组：赖氨酸、精氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代；X2选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丝氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代；X3选自由以下组成的组：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代；X4选自由以下组成的组：天冬酰胺、谷氨酸、脯氨酸和前述任一种的保守氨基酸取代，或X4不存在；X5选自由以下组成的组：丝氨酸、谷氨酰胺和前述任一种的保守氨基酸取代，或X5不存在；并且X6是丝氨酸或其保守氨基酸取代，或X6不存在。
[0079] 在实施方案中，X1是赖氨酸或精氨酸；X2选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸和丝氨酸；X3选自由以下组成的组：缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；X4是天冬酰胺、脯氨酸或谷氨酸，或X4不存在；X5是丝氨酸或谷氨酰胺，或X5不存在；并且X6是丝氨酸，或X6不存在。
[0080] 在实施方案中，X1不存在，或X1是赖氨酸或精氨酸；X2选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸和丝氨酸；X3选自由以下组成的组：缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；X4是天冬酰胺、脯氨酸或谷氨酸，或X4不存在；X5是丝氨酸或谷氨酰胺，或X5不存在；并且X6是丝氨酸，或X6不存在。
[0081] 在实施方案中，肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：RAL、RALN、RALNS、RALNSS、RSV、RSVE、RSVEG、RSVEGS、RPV、RPVE、RPVES、RPVESS、RII、RIIH、RIIHN和RIIHNN。
[0082] 在实施方案中，肽由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成：RAL、RALN、RALNS、RALNSS、RSV、RSVE、RSVEG、RSVEGS、RPV、RPVE、RPVES、RPVESS、RII、RIIH、RIIHN和RIIHNN。
[0083] 在实施方案中，肽包含氨基酸序列ALNSS。在实施方案中，肽由氨基酸序列ALNSS组成。
[0084] 在实施方案中，肽包含氨基酸序列KAPLPRS。在实施方案中，肽由氨基酸序列KAPLPRS组成。
[0085] 在实施方案中，肽包含氨基酸序列RALNSS。
[0086] 在实施方案中，肽由氨基酸序列RALNSS组成。
[0087] 在实施方案中，肽包含氨基酸序列CRALNSSC。
[0088] 在实施方案中，肽由氨基酸序列CRALNSSC组成。
[0089] 在实施方案中，肽能够与由氨基酸序列CRSVEGSCG组成的肽竞争结合LanCL。
[0090] 如本文别处描述的，本发明人出乎意料地表明，长度少至3个氨基酸并且包含式(i)的氨基酸序列的肽将保留生物活性。在本文公开的实施方案中，肽的长度是3个至19个氨基酸残基，优选地长度是3个至18个氨基酸残基，优选地长度是3个至17个氨基酸残基，优选地长度是3个至16个氨基酸残基，优选地长度是3个至15个氨基酸残基，优选地长度是3个至14个氨基酸残基，优选地长度是3个至13个氨基酸残基，优选地长度是3个至12个氨基酸残基，优选地长度是3个至11个氨基酸残基，优选地长度是3个至10个氨基酸残基，优选地长度是3个至9个氨基酸残基，优选地长度是3个至8个氨基酸残基，优选地长度是3个至7个氨基酸残基，优选地长度是3个至6个氨基酸残基，优选地长度是3个至5个氨基酸残基，优选地长度是3个或4个氨基酸残基，或优选地长度是3个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是
20个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是19个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是
18个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是17个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是
16个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是15个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是
14个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是13个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是
12个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是11个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是
10个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是9个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是8个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是7个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是6个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是5个氨基酸残基。
[0091] 在实施方案中，肽的长度是4个氨基酸残基。在实施方案中，肽的长度是3个氨基酸残基。
[0092] 本文描述的肽可以适当地包含天然存在的蛋白原或非蛋白原氨基酸残基。这些氨基酸通常将具有L‑立体化学。下文表1中列出了天然存在的氨基酸。
[0093] 表1
[0094]
[0095]
[0096]
[0097] 如本文使用的，术语“烷基(alkyl)”是指具有1个至10个碳原子的直链的或支链的饱和烃基团。在适当的情况下，烷基基团可以具有指定数目的碳原子，例如C1‑6烷基，所述C1‑6烷基包括具有1个、2个、3个、4个、5个或6个处于直链布置或支链布置的碳原子的烷基基团。合适的烷基基团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2‑甲基丁基、3‑甲基丁基、4‑甲基丁基、正己基、2‑甲基戊基、3‑甲基戊基、4‑甲基戊基、5‑甲基戊基、2‑乙基丁基、3‑乙基丁基、庚基、辛基、壬基以及癸基。
[0098] 如本文使用的，术语“烯基”是指在碳原子之间具有一个或更多个双键并且具有2个至10个碳原子的直链的或支链的烃基团。在适当的情况下，烯基基团可以具有指定数目的碳原子。例如，如在“C2‑C6烯基”中的C2‑C6包括具有2个、3个、4个、5个或6个处于直链布置或支链布置的碳原子的基团。合适的烯基基团的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、丁二烯基、戊烯基、戊二烯基、己烯基、己二烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基以及癸烯基。
[0099] 如本文使用的，术语“炔基”是指具有一个或更多个三键并且具有2个至10个碳原子的直链的或支链的烃基团。在适当的情况下，炔基基团可以具有指定数目的碳原子。例如，如在“C2‑C6炔基”中的C2‑C6包括具有2个、3个、4个、5个或6个处于直链布置或支链布置的碳原子的基团。合适的炔基基团的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基以及己炔基。
[0100] 如本文使用的，术语“环烃基(cycloalkyl)”是指饱和的和不饱和的(但不是芳香族的)环状烃。环烃基环可以包括指定数目的碳原子。例如，3元至8元环烃基基团包括3个、4个、5个、6个、7个或8个碳原子。合适的环烃基基团的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基以及环辛基。
[0101] 如本文使用的，术语“芳基”意图是指在每个环中最多7个原子的任何稳定的、单环的、双环的或三环的碳环体系，其中至少一个环是芳香族的。这样的芳基基团的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、芴基、菲基、联苯基以及联萘基。
[0102] 在实施方案中，肽包含一种或更多种D‑氨基酸。在另一种实施方案中，式(I)的氨基酸中的一个或更多个是D‑氨基酸。
[0103] 如本文别处所述，本发明人出乎意料地发现，本文描述的肽将保留生物活性，而不管它们是以环状肽构型还是线性肽构型存在。因此，在一种实施方案中，肽是线性肽。在另一种实施方案中，肽是环肽。本领域技术人员将熟悉适用于形成环肽的方法，其说明性实例在Choi和Joo(Biomol Ther(Seoul).2020；28(1):118‑24)中描述，该文献的内容通过引用并入本文。
[0104] 在实施方案中，肽通过两个半胱氨酸残基之间的二硫键环化。在实施方案中，在两个半胱氨酸残基之间形成二硫键，其中两个半胱氨酸残基位于紧邻式(I)的C‑末端(X6)和N‑末端(X1)残基的位置；即，肽将包含氨基酸序列半胱氨酸‑X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6‑半胱氨酸。可选择地，在两个半胱氨酸残基之间形成二硫键，其中一个或两个半胱氨酸残基位于式(I)的C‑末端(X6)和N‑末端(X1)残基的远端。例如，肽可以包含氨基酸序列半胱氨酸‑Y‑X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6‑半胱氨酸，或半胱氨酸‑X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6‑Y‑半胱氨酸，或半胱氨酸‑Y‑X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6‑Y‑半胱氨酸，其中Y是一个或更多个氨基酸残基。在另一个实例中，肽可以包含氨基酸序列半胱氨酸‑Y‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6‑半胱氨酸，或半胱氨酸‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6‑Y‑半胱氨酸，或半胱氨酸‑Y‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6‑Y‑半胱氨酸，其中Y是一个或更多个氨基酸残基。在实施方案中，环肽通过两个半胱氨酸残基之间的二硫键形成。
[0105] 如本文别处描述的，本发明人出乎意料地发现，当与它们的线性对应物相比时，包含式(I)的氨基酸序列的某些环肽具有更大的生物活性。例如，发明人已经表明，通过两个半胱氨酸残基之间的二硫键环化的环肽CQEQLERALNSSC当与非环化的对应物QEQLERALNSS相比时，对LanCL具有更大的结合亲和力，并且在甲型流感呼吸道感染的动物模型中体内更有效。因此，在实施方案中，环肽包含氨基酸序列CQEQLERALNSSC。在实施方案中，环肽由氨基酸序列CQEQLERALNSSC组成。
[0106] 本文描述的肽可以通过本领域技术人员熟知的合适的方法制备，所述方法的说明性实例包括通过使用Fmoc或Boc保护的氨基酸残基的溶液或固相合成，以及使用标准微生物培养技术、遗传工程化微生物和重组DNA技术的本领域已知的重组技术(Sambrook和Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版),2001,CSHL Press)。
[0107] 在实施方案中，本文描述的肽形成为药学上可接受的盐。应理解，也设想了非药学上可接受的盐，因为它们可以用作制备药学上可接受的盐的中间体，或在储存或运输期间可以是有用的。合适的药学上可接受的盐对于本领域技术人员将是熟悉的，合适的药学上可接受的盐的说明性实例包括药学上可接受的无机酸的盐或药学上可接受的有机酸的盐，所述无机酸诸如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸，所述有机酸诸如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、磺胺酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸(edetic acid)、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、丹宁酸、抗坏血酸和戊酸。合适的碱盐的说明性实例包括那些与药学上可接受的阳离子形成的碱盐，所述药学上可接受的阳离子诸如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵。碱性含氮基团可以用诸如以下的剂来季铵化：低级烷基卤化物诸如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如硫酸二甲酯和硫酸二乙酯；以及其他的剂。
[0108] 本文还公开了包含本文描述的肽或其药学上可接受的盐的前药。如本文使用的，“前药”通常是指可以在体内代谢以提供或释放本文描述的活性肽或其药学上可接受的盐的化合物。在实施方案中，前药本身也与本文描述的肽或其药学上可接受的盐共享相同或大体上相同的治疗活性，如本文别处描述的。
[0109] 在一些实施方案中，本文描述的肽或其药学上可接受的盐还可以包含C‑末端加帽基团。如本文使用的术语“C‑末端加帽基团”是指阻断C‑末端羧酸的反应性的基团。合适的aC‑末端加帽基团与C‑末端羧酸形成酰胺基团或酯，例如，C‑末端加帽基团形成‑C(O)NHRb a
或‑C(O)OR，其中C(O)来自C‑末端羧酸基团，并且R是氢、烷基、烯基、炔基、环烃基或芳基，b
并且R是烷基、烯基、炔基、环烃基或芳基。在特定的实施方案中，C‑末端加帽基团是‑NH2，形成‑C(O)NH2。在一些实施方案中，本文描述的肽或其药学上可接受的盐包含C‑末端聚乙二醇(PEG)。在实施方案中，PEG具有在220Da至5500Da，优选地220Da至2500Da，更优选地570Da至1100Da的范围内的分子量。
[0110] 在一些实施方案中，本文描述的肽或其药学上可接受的盐还可以包含N‑末端加帽基团。如本文使用的术语“N‑末端加帽基团”是指阻断N‑末端氨基基团的反应性的基团。合适的N‑末端加帽基团是与N‑末端氨基基团形成酰胺基团的酰基基团，例如，N‑末端加帽基a a团形成‑NHC(O)R，其中NH来自N‑末端氨基基团，并且R是烷基、烯基、炔基、环烃基或芳基。
在特定的实施方案中，N‑末端加帽基团是‑C(O)CH3(酰基)，形成‑NHC(O)CH3。
[0111] 在一些实施方案中，本文描述的肽或其药学上可接受的盐可以包含如本文描述的C‑末端加帽基团和N‑末端加帽基团。应当理解，本文公开的肽不包括人类生长激素或其非人类同种型的全长氨基酸序列。
[0112] 治疗和预防的方法
[0113] 如本文别处描述的，本发明人令人惊讶地发现，本文描述的肽具有使它们可用于治疗用途，包括用于治疗与细胞老化、损害和应激相关的状况的有利的性质。这样的状况的说明性实例包括老化、疼痛、炎性状况/炎症和微生物感染。归因于本文描述的肽的活性也使它们可用作抗老化化合物。因此，本文描述的肽可以合适地用于治疗、减轻或以其他方式消除有相应需要的受试者的这样的状况，包括其一种或更多种症状的严重程度。因此，本公开内容延伸到治疗受试者的状况的方法，该方法包括向有相应需要的受试者施用治疗有效量的本文描述的肽。还提供了本文描述的肽在制造用于治疗有相应需要的受试者的状况的药物中的用途。还提供了本文描述的肽，用于在治疗有相应需要的受试者的状况中使用。
[0114] 在实施方案中，状况选自由以下组成的组：疼痛，炎性气道疾病，微生物感染，呼吸道感染，偏头痛，肌肉减少症，葡萄糖耐量受损，糖尿病，肥胖，代谢性疾病和肥胖相关状况，骨关节炎，肌肉紊乱，消耗性紊乱，老化，恶病质，厌食症，AIDS消耗综合征，肌营养不良，神经肌肉疾病，肌萎缩侧索硬化(ALS)，运动神经元疾病，神经肌肉接头疾病，眼科状况，中枢神经系统状况，包括神经退行性状况(例如，帕金森病、阿尔茨海默病)，炎性肌病，烧伤，伤口(wound)，损伤(injury)或创伤(trauma)，与LDL胆固醇升高相关的状况，与软骨细胞、蛋白聚糖或胶原蛋白的产生或质量(quality)受损相关的状况，与软骨组织的形成或质量受损相关的状况，与肌肉、韧带或腱的量(mass)、形态或功能受损相关的状况，与影响肌肉或结缔组织的炎症、创伤或遗传异常相关的状况，以及骨骼紊乱。
[0115] 术语“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”等在本文中可互换地使用，以意指缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制疾病或状况(包括其一种或更多种症状)的严重程度。术语“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”等在本文中也可互换地使用，以包括预防疾病或状况，包括其一种或更多种症状。
[0116] 术语“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”等还包括预防、缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制疾病、状况和/或其一种或更多种症状的严重程度持续至少一段时间。应理解，术语“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”等并不意味着疾病、状况或其一种或更多种症状被永久地预防、缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制，并且因此延伸到暂时预防、缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制疾病、状况或其一种或更多种症状的严重程度。
[0117] 如本文使用的，术语“受试者”是指期望治疗疾病、状况或其一种或更多种症状的哺乳动物受试者。合适的受试者的说明性实例包括灵长类动物，特别是人类，伴侣动物诸如猫和狗以及类似动物，工作动物诸如马、驴以及类似动物，牲畜动物诸如绵羊、牛、山羊、猪以及类似动物，实验室测试动物诸如兔、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠以及类似动物，以及圈养野生动物诸如动物园和野生动物园中的圈养野生动物、鹿、澳洲野狗(dingo)以及类似动物。在实施方案中，受试者是人类。
[0118] 应理解，本文提及受试者并不意味着受试者患有疾病、状况或其一种或更多种症状，而是还包括处于发展疾病、状况或其一种或更多种症状的风险的受试者。
[0119] 在实施方案中，本文公开的方法包括向人类受试者施用如本文描述的肽或其药学上可接受的盐。
[0120] 应理解，本文描述的肽或其药学上可接受的盐有利地以治疗有效量施用。短语“治疗有效量”通常意指获得期望的响应所必需的量。本领域技术人员将理解，肽的治疗有效量将取决于若干因素而变化，所述因素的说明性实例包括待治疗的受试者的健康和身体状况，待治疗的受试者的分类群，待治疗的疾病、状况或症状的严重程度，包含本文描述的肽或其药学上可接受的盐的组合物的制剂，施用途径以及前述中的任何的组合。
[0121] 治疗有效量通常将落在本领域技术人员可以通过常规试验确定的相对宽的范围内。用于施用至人类受试者的本文描述的肽及其药学上可接受的盐的合适的治疗有效量的说明性实例包括约0.001mg/kg的体重至约1g/kg的体重，优选地约0.001mg/kg的体重至约
50g/kg的体重，更优选地约0.01mg/kg的体重至约1.0mg/kg的体重。在本文公开的实施方案中，本文描述的肽和/或其药学上可接受的盐的治疗有效量是每剂量约0.001mg/kg的体重至约1g/kg的体重(例如，0.001mg/kg的体重、0.005mg/kg的体重、0.01mg/kg的体重、
0.05mg/kg的体重、0.1mg/kg的体重、0.15mg/kg的体重、0.2mg/kg的体重、0.25mg/kg的体重、0.3mg/kg的体重、0.35mg/kg的体重、0.4mg/kg的体重、0.45mg/kg的体重、0.5mg/kg的体重、0.5mg/kg的体重、0.55mg/kg的体重、0.6mg/kg的体重、0.65mg/kg的体重、0.7mg/kg的体重、0.75mg/kg的体重、0.8mg/kg的体重、0.85mg/kg的体重、0.9mg/kg的体重、0.95mg/kg的体重、1mg/kg的体重、1.5mg/kg的体重、2mg/kg的体重、2.5mg/kg的体重、3mg/kg的体重、
3.5mg/kg的体重、4mg/kg的体重、4.5mg/kg的体重、5mg/kg的体重、5.5mg/kg的体重、6mg/kg的体重、6.5mg/kg的体重、7mg/kg的体重、7.5mg/kg的体重、8mg/kg的体重、8.5mg/kg的体重、9mg/kg的体重、9.5mg/kg的体重、10mg/kg的体重、10.5mg/kg的体重、11mg/kg的体重、
11.5mg/kg的体重、12mg/kg的体重、12.5mg/kg的体重、13mg/kg的体重、13.5mg/kg的体重、
14mg/kg的体重、14.5mg/kg的体重、15mg/kg的体重、15.5mg/kg的体重、16mg/kg的体重、
16.5mg/kg的体重、17mg/kg的体重、17.5mg/kg的体重、18mg/kg的体重、18.5mg/kg的体重、
19mg/kg的体重、19.5mg/kg的体重、20mg/kg的体重、20.5mg/kg的体重、21mg/kg的体重、
21.5mg/kg的体重、22mg/kg的体重、22.5mg/kg的体重、23mg/kg的体重、23.5mg/kg的体重、
24mg/kg的体重、24.5mg/kg的体重、25mg/kg的体重、25.5mg/kg的体重、26mg/kg的体重、
26.5mg/kg的体重、27mg/kg的体重、27.5mg/kg的体重、28mg/kg的体重、28.5mg/kg的体重、
29mg/kg的体重、29.5mg/kg的体重、30mg/kg的体重、35mg/kg的体重、40mg/kg的体重、45mg/kg的体重、50mg/kg的体重、55mg/kg的体重、60mg/kg的体重、65mg/kg的体重、70mg/kg的体重、75mg/kg的体重、80mg/kg的体重、85mg/kg的体重、90mg/kg的体重、95mg/kg的体重、
100mg/kg的体重、105mg/kg的体重、110mg/kg的体重等)。在实施方案中，本文描述的肽或其药学上可接受的盐的治疗有效量是约0.001mg/kg的体重至约50mg/kg的体重。在实施方案中，本文描述的肽及其药学上可接受的盐的治疗有效量是约0.01mg/kg的体重至约100mg/kg的体重。在实施方案中，本文描述的肽或其药学上可接受的盐的治疗有效量是约0.1mg/kg的体重至约10mg/kg的体重，优选地约0.1mg/kg的体重至约5mg/kg的体重，更优选地约
0.1mg/kg的体重至约1.0mg/kg的体重。剂量方案可以被调整以提供最佳的治疗响应。例如，若干分开的剂量可以每天、每周、每月或以其他合适的时间间隔被施用，或剂量可以如由情况的紧迫性指示的按比例减少。
[0122] 疼痛
[0123] 如本文别处描述的，本发明人发现本文描述的肽具有有利的镇痛性质，包括减轻神经病理性疼痛。因此，在实施方案中，状况是疼痛。在实施方案中，状况是神经病理性疼痛。
[0124] 不受理论或特定的应用模式所束缚，神经性疼痛通常被表征为由神经组织或神经元本身的受伤或疾病而造成的损害引起的疼痛，或者神经组织内的功能障碍引起的疼痛。疼痛可以是外周的疼痛、中枢的疼痛或其组合；换句话说，术语“神经病理性疼痛”通常是指由外周神经系统或中枢神经系统的原发性损伤或功能障碍引发或引起的任何疼痛综合征。
神经病理性疼痛基于以下也是可区分的：其通常不有效地响应于通过普通疼痛药物诸如阿片样物质的治疗。相比之下，伤害性疼痛被表征为由可能对组织造成损害或损伤的有毒的或可能有害的刺激产生的伤害感受器的刺激而引起的疼痛。伤害性疼痛通常响应于普通疼痛药物，诸如阿片样物质。
[0125] 术语“镇痛”在本文中用于描述疼痛感觉减少的状态，包括不存在疼痛感觉的状态，以及对于有毒刺激的敏感性减小或不存在对于有毒刺激的敏感性的状态。如本领域通常理解的，这样的疼痛感觉减少或不存在的状态通常通过施用一种或更多种疼痛控制剂来诱导，并且在不丧失意识的情况下发生。本领域技术人员将熟悉用于确定化合物是否能够提供镇痛作用的合适的方法，该方法的说明性实例包括使用神经病理性疼痛的动物模型，诸如慢性压迫性损伤(chronic constriction injury)、脊神经结扎(spinal nerve ligation)和部分坐骨神经结扎(参见Bennett等人(2003)；Curr.Protoc.Neurosci.，第9章，第9.14单元)，以及伤害性疼痛的动物模型，诸如福尔马林、角叉菜胶或完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant)(CFA)诱导的炎性疼痛。Gregory等人(2013,J.Pain.；14(11)；“:An overview of animal models of pain:disease models and outcome 
measures”)中讨论了其他合适的疼痛模型。
[0126] 如本领域技术人员将知晓的，存在许多可能的神经病和神经病理性疼痛的病因。因此，应理解，本文所预期的是无论病因如何的神经病理性疼痛的治疗或预防。在一些实施方案中，神经病理性疼痛是影响神经的疾病或状况(原发性神经病)和/或由全身性疾病引起的神经病(继发性神经病)的结果，所述影响神经的疾病或状况(原发性神经病)和/或由全身性疾病引起的神经病(继发性神经病)的说明性实例包括糖尿病性神经病；带状疱疹
(Herpes Zoster，shingles)相关神经病；纤维肌痛；多发性硬化、中风、脊髓损伤；慢性手术后疼痛、幻肢痛、帕金森病；尿毒症相关神经病；淀粉样变性神经病；HIV感觉神经病；遗传性运动和感觉神经病(HMSN)；遗传性感觉神经病(HSN)；遗传性感觉和自主神经病；伴有溃疡残毁的遗传性神经病；呋喃妥因(nitrofurantoin)神经病；腊肠样肿胀神经病；营养缺乏引起的神经病、肾衰竭引起的神经病以及复杂的区域性疼痛综合征。可以引起神经病理性疼痛的状况的其他说明性实例包括重复性活动诸如打字或在装配线上工作，已知引起外周神经病的药物诸如若干种抗逆转录病毒药物ddC(扎西他滨(zalcitabine))和ddI(地达诺新
(didanosine))、抗生素(甲硝唑、用于克罗恩病的抗生素、用于结核病的异烟肼)、金化合物(用于类风湿性关节炎)、一些化疗药物(诸如长春新碱以及其他)以及许多其他药物。还已知化学化合物引起外周神经病，化学化合物包括酒精(alcohol)、铅、砷、汞和有机磷杀虫剂。一些外周神经病与感染过程相关(诸如吉兰‑巴雷综合征(Guillain‑Barrésyndrome))。
神经病理性疼痛的其他说明性实例包括热性或机械性痛觉过敏、热性或机械性异常性疼
痛、糖尿病性疼痛、影响口腔的神经病理性疼痛(例如，三叉神经神经病理性疼痛、非典型牙痛(幻牙痛)、灼口综合征)、纤维肌痛以及卡压疼痛(entrapment pain)。
[0127] 在本文公开的实施方案中，神经病理性疼痛选自由以下组成的组：糖尿病性神经病；带状疱疹(Herpes Zoster，shingles)相关神经病；纤维肌痛；多发性硬化、中风、脊髓损伤；慢性手术后疼痛、幻肢痛、帕金森病；尿毒症相关神经病；淀粉样变性神经病；HIV感觉神经病；遗传性运动和感觉神经病(HMSN)；遗传性感觉神经病(HSN)；遗传性感觉和自主神经病；伴有溃疡残毁的遗传性神经病；呋喃妥因神经病；腊肠样肿胀神经病；营养缺乏引起的神经病、肾衰竭引起的神经病、三叉神经神经病理性疼痛、非典型牙痛(幻牙痛)、灼口综合征、复杂的区域性疼痛综合征、重复性劳损、药物诱发的外周神经病、与感染相关的外周神经病、异常性疼痛、感觉过敏(hyperesthesia)、痛觉过敏、灼痛以及射痛。
[0128] 在一些实施方案中，神经病理性疼痛可以伴随有麻木、无力和反射丧失。疼痛可以是严重的和致残的。“痛觉过敏”意指对通常疼痛的刺激的增加的响应。痛觉过敏状况是与由通常不疼痛的刺激引起的疼痛相关的状况。术语“感觉过敏”指的是过度的身体敏感性，特别是皮肤的敏感性。如本文使用的术语“异常性疼痛”指的是由非有毒的刺激引起的疼痛；即，由于通常不引起疼痛的刺激产生的疼痛。异常性疼痛的说明性实例包括热性异常性疼痛(由于冷刺激或热刺激而产生的疼痛)、触觉异常性疼痛(由于轻压力或触摸而产生的疼痛)、机械性异常性疼痛(由于重压力或针刺而产生的疼痛)及类似疼痛。
[0129] 神经病理性疼痛可以是急性的或慢性的，并且在这种情况下，应理解神经病的时间过程可以基于其潜在的病因而变化。例如，在创伤的情况下，神经病理性疼痛的发作或神经病理性疼痛的症状可以是急性的或突然的；然而，最严重的症状可以随着时间发展并且持续数年。经数周至数月的慢性时间过程通常指示中毒性神经病或代谢性神经病。诸如与疼痛性糖尿病性神经病一起发生，或与大多数遗传性神经病一起发生，或与被称为慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根病(CIDP)的状况一起发生的慢性、缓慢进展性神经病，可以具有多年的时间过程。具有复发缓解型症状的神经状况包括吉兰‑巴雷综合征。
[0130] 在一些实施方案中，神经病理性疼痛由特征为神经元超敏反应的状况引起，所述状况诸如纤维肌痛或肠易激综合征。
[0131] 在其他实施方案中，神经病理性疼痛由与导致神经元超敏反应的异常神经再生相关的紊乱引起。这样的紊乱包括乳房疼痛、间质性膀胱炎、外阴痛以及癌症化疗诱导的神经病。
[0132] 在一些实施方案中，神经病理性疼痛与手术、手术前疼痛和手术后疼痛相关，特别地与手术后神经病理性疼痛相关。
[0133] 微生物感染
[0134] 由诸如细菌、病毒和真菌的病原体引起的微生物感染仍然是一个重大的全球健康问题，具有巨大的社会经济成本。虽然细菌感染的治疗主要依赖抗生素，但病毒感染的标准方法仍然是支持性护理和缓解症状。虽然这样的治疗已经示出一些效力，但新出现和重新出现的病原体继续危害着人类和非人类群体，这至少部分归因于产生具有增强的感染性和/或对现有药物干预的抗性的新株的突变。缺乏及时可用的抗病毒剂，包括疫苗，也使全球病毒爆发难以遏制。
[0135] 有超过200种已知的引起感染(包括呼吸道感染)的病毒血清学毒株，其中最常见的包括鼻病毒(30％‑50％)。其他包括冠状病毒(10％‑15％)、流感病毒(5％‑15％)、人类副流感病毒、人类呼吸道合胞病毒、腺病毒、肠道病毒和偏肺病毒。虽然已经鉴定出超过30种冠状病毒，但已知只有3种或4种会引起人类的呼吸道感染。此外，冠状病毒通常难以在体外培养，使得难以研究它们的功能和开发合适的疗法。冠状病毒是有包膜的正链RNA病毒，从内质网‑高尔基体中间区室或顺式高尔基体网络出芽。冠状病毒感染人类和动物。已知人类冠状病毒229E、OC43和最近鉴定出的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS‑CoV‑2；参见Zhu N等人N Engl J Med.2020)是呼吸道感染的主要原因，并且可以引起肺炎，特别是在老年人、新生儿和免疫功能低下的个体中。导致呼吸道感染的冠状病毒的说明性实例在美国专利公布第20190389816号中描述，其内容通过引用以其整体并入本文。
[0136] 另一种普遍的病毒感染是由人类鼻病毒(HRV)引起的，HRV是小核糖核酸病毒科(Picornaviridae family)肠道病毒属(Enterovirus genus)的成员。HRV可以感染上呼吸道和下呼吸道，包括鼻粘膜、鼻窦和中耳，感染会产生普通感冒的症状。感染通常是自限性的，并且局限于上气道。
[0137] 一些病毒感染在一个人身上是无症状的，但在另一个人身上是感染性的。在这些情况下，由于感染者不表现为生病，因此病毒的传播可能是广泛的。在易感人群近距离生活的学校、医院、疗养院和其他地方，传播尤其有害。
[0138] 目前有极少的批准的抗病毒剂用于治疗或预防呼吸道病毒感染，包括流感或普通感冒。这些批准的抗病毒剂包括磷酸奥司他韦(商品名 )、扎那米韦(商品名 )、帕拉米韦(商品名 )和巴洛沙韦玛波西酯(baloxavir marboxil)(商品名 )。
呼吸道感染的治疗通常基于症状(例如，打喷嚏、鼻塞、鼻漏、眼睛刺激、喉咙痛、咳嗽、头痛、发烧、寒战)管理，通常使用非处方口服抗组胺药、阿司匹林、止咳药和鼻减充血剂。症状治疗通常包括服用抗组胺药和/或血管收缩减充血剂，其中许多具有不合意的副作用，诸如嗜睡。
[0139] 不受理论或特定应用模式的束缚，本发明人令人惊讶地发现，本文描述的肽可以用于治疗微生物感染，包括减轻至少一些感染的症状，诸如呼吸道感染的症状。
[0140] 呼吸道感染(RTI)通常定义为上呼吸道或下呼吸道的任何感染性疾病。上呼吸道感染(URTI)包括普通感冒、喉炎、咽炎/扁桃体炎、急性鼻炎、急性鼻窦炎和急性中耳炎。下呼吸道感染(LRTI)包括急性支气管炎、细支气管炎、肺炎和气管炎。在初级护理中，抗生素通常被开处方用于成人和儿童的RTI。RTI是全科诊疗中所有抗生素处方的60％的原因，并且这对卫生系统构成了巨大成本(NICE Clinical Guidelines,No.69；Centre for 
Clinical Practice at NICE(UK),London:National Institute for Health and 
Clinical Excellence(UK)；2008)。
[0141] 在人类和非人类受试者中引起上呼吸道和/或下呼吸道感染的病原体将是本领域技术人员已知的，并且包括细菌和病毒，其说明性实例在Charlton等人(Clinical 
Microbiology Reviews；2018,32(1):e00042‑18),Popescu等人(Microorganisms.2019；7(11):521)和Kikkert,M.(J Innate Immun.2020；12(1):4‑20)中描述，这些文献的内容通过引用以其整体并入本文。在实施方案中，呼吸道感染是病毒感染。
[0142] 引起人类和非人类受试者的呼吸道(上呼吸道和/或下呼吸道)感染的病毒将是本领域技术人员已知的，其说明性实例包括小核糖核酸病毒、冠状病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肠道病毒和偏肺病毒。因此，在本文公开的实施方案中，病毒选自由小核糖核酸病毒、冠状病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肠道病毒和偏肺病毒组成的组。在实施方案中，病毒是流感病毒。在另一种实施方案中，病毒是冠状病毒。引起呼吸道感染的冠状病毒的说明性实例将是本领域技术人员熟悉的，其说明性实例包括SARS‑CoV‑2，如先前在Zhu N等人，(N Engl J Med.2020)和美国专利公布第
20190389816号中描述的，其内容通过引用以其整体并入本文。在实施方案中，病毒是SARS‑CoV‑2。
[0143] 本文描述的肽对于治疗患有基础医学状况的受试者的呼吸道感染可能特别有用，这些基础医学状况本来将加剧呼吸道感染。这样的基础状况将是本领域技术人员已知的，其说明性实例包括慢性阻塞性肺病、哮喘、囊性纤维化、肺气肿和肺癌。在实施方案中，受试者还具有选自由慢性阻塞性肺病、哮喘、囊性纤维化和肺癌组成的组的呼吸系统状况。在另一种实施方案中，受试者免疫功能低下，无论是作为治疗(例如，通过化疗、放疗)还是其他(例如，通过HIV感染)的结果。
[0144] 病毒在人体中的病毒复制通常在初次接触后2小时到6小时开始。在一些情况下，患者在出现症状前的几天具有传染性。症状通常在最初感染之后约2天至5天开始。呼吸道感染，诸如普通感冒，在症状出现的头两天至头三天期间最具传染性。目前还没有已知的缩短感冒持续时间的治疗，尽管症状通常在约7天至10天内自发消退，有些症状可能会持续长达三周。在症状完全消退之前，病毒可能仍然具有传染性。
[0145] 如本文别处所述，本发明人还已经发现，本文描述的肽在限制体内病毒复制和减少IAV感染期间的过度炎症和严重疾病方面令人惊讶地有效。
[0146] 炎性气道疾病
[0147] 在本文公开的实施方案中，状况是炎性气道疾病。炎性气道疾病，诸如慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、慢性支气管炎、肺气肿、囊性纤维化、肺癌和支气管肺发育不良在世界上最流行的疾病之列。尤其是哮喘的患病率在过去20年中已经增加，并且目前在大多数发达国家影响着高达10％的人口。COPD是世界上第六大最常见的死亡原因，并且据说影响约4％‑6％的45岁或以上的人。考虑到直接和间接成本二者，炎性气道疾病构成了社会的重大经济负担，这是无可争议的。
[0148] 哮喘和COPD通过特征性症状和功能异常的存在来识别，其中气道阻塞是两种疾病的必要条件。哮喘中的气道阻塞通常是可逆的，而COPD的典型特征是异常呼气流量，其在几个月的观察期内没有显著变化。这两种气道疾病都与由不同引发因素诱导的肺部炎症有关，这些引发因素的实例包括环境过敏原和致癌物、职业致敏剂、香烟烟雾、石棉和二氧化硅。然而，需要注意的是，一些不吸烟的哮喘患者也会发展类似于COPD的不可逆气道阻塞。
[0149] 慢性阻塞性肺病是一个日益严重的医疗保健问题，随着人口老龄化和全球烟草产品使用的增加，预计该问题将会恶化。戒烟是唯一有效的预防手段。雇主在帮助员工戒烟方面处于独特的地位。在长期无症状期期间，尽管肺功能持续下降；但许多患者只有在他们处于晚期或他们经历了急性加重时才寻求医疗处理。为了帮助保持患者的生活质量并降低与该慢性病相关的医疗护理费用，临床医生需要准确诊断状况，并在患者的漫长病程中对其进行适当管理。
[0150] 正如Devine,FJ(2008；Am Health Drug Benefits；1(7):34‑42)所指出的，COPD是一种可逆性差的肺部疾病，是世界范围内发病率和死亡率的主要原因之一。与美国其他主要慢性病的趋势相反，COPD的患病率和死亡率持续上升，死亡率在1970年和2002年间翻了一番，并且女性死亡率数字现已超过男性死亡率。鉴于大多数COPD病例是由吸烟引起的，COPD本质上是一种可预防的疾病。大多数COPD患者是中年人或老年人。COPD的有效治疗在很大程度上是困难的。已知的降低该疾病发病率的唯一策略是戒烟。
[0151] 哮喘是一种异质性、多因素疾病，基于慢性支气管炎性反应具有可变且大多数可逆的呼吸通路阻塞(Horak等人，2016；Wien Klin Wochenschr.128(15):541‑554)。哮喘的症状(咳嗽、痰、干啰音(rhonchus)、喘鸣(wheezing)、胸闷或气短)是可变的，并且通常与呼气流量受限相关。由于其异质性，许多不同的表型可以归属于哮喘，并且包括：过敏性哮喘、非过敏性哮喘、儿童哮喘/复发性阻塞性支气管炎、迟发性哮喘、固定气流阻塞哮喘、肥胖相关哮喘、职业性哮喘、老年人哮喘和严重哮喘。
[0152] 哮喘的治疗(药物和非药物干预)在很大程度上基于症状控制——评估、调整和审查的循环——并且通常与减少哮喘恶化有关。从药理学的角度来看，哮喘疗法的金标准通常是低剂量吸入型皮质类固醇，通常与按需短效β‑2‑激动剂(SABA)组合。其他治疗包括LTRA(白三烯受体拮抗剂)、低剂量吸入型皮质类固醇和长效β‑2‑激动剂(LABA)的组合。然而，现有的治疗有可能引起副作用，特别是在长期使用期间。预防性药物(例如，吸入型皮质类固醇)的常见副作用是声音嘶哑、口腔和喉咙疼痛以及喉咙真菌感染。
[0153] 本发明人令人惊讶地发现，本文描述的肽可以减轻炎性气道疾病的至少一些炎性介质。
[0154] 本领域技术人员将熟悉炎性气道疾病，其说明性实例包括慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、慢性支气管炎、肺气肿、囊性纤维化、肺癌和支气管肺发育不良。在实施方案中，炎性气道疾病是COPD。在实施方案中，炎性气道疾病是哮喘。在实施方案中，炎性气道疾病是慢性支气管炎。在实施方案中，炎性气道疾病是肺气肿。在实施方案中，炎性气道疾病是囊性纤维化。在实施方案中，炎性气道疾病与肺癌相关。在实施方案中，炎性气道疾病是支气管肺发育不良。
[0155] 本文描述的方法对于治疗易受本来将加剧炎性气道疾病的状况影响的受试者中的炎性气道疾病可能特别有用。本领域技术人员将知道这样的基础状况，其说明性实例包括由例如病毒、细菌或其他病原体引起的呼吸道感染。在另一种实施方案中，受试者免疫功能低下，无论是作为治疗(例如，通过化疗、放疗)还是其他(例如，通过HIV感染)的结果。
[0156] 施用途径
[0157] 如本文描述的肽及其药学上可接受的盐可以通过任何合适的途径向受试者施用，所述合适的途径允许以如本文描述的治疗有效量将肽或其药学上可接受的盐递送至受试者。合适的施用途径将是本领域技术人员已知的，所述合适的施用途径的说明性实例包括肠内施用途径(例如，口服和直肠)、肠胃外施用途径(通常通过注射或微注射
(microinjection)，例如，肌内、皮下、静脉内、硬膜外、关节内、腹膜内、脑池内
(intracisternal)或鞘内)和表面(topical)(经皮或经粘膜)施用途径(例如，含服、舌下、阴道、鼻内或通过吸入、吹入、栓剂或雾化)。在实施方案中，施用途径是通过吸入或吹入。如本文描述的肽及其药学上可接受的盐也可以作为控制释放剂型合适地施用至受试者，以在延长的时间段内提供活性剂的受控释放。术语“控制释放”通常意指释放活性剂以在一段时间内(例如，约8小时至多达约12小时、多达约14小时、多达约16小时、多达约18小时、多达约
20小时、多达一天、多达一周、多达一个月或多于一个月)在受试者中提供恒定的或大体上恒定的活性剂浓度。根据可能的需要，活性剂的控制释放可以在施用之后几分钟内开始，或在施用之后的延迟时间段(滞后时间(lag time))期满之后开始。合适的控制释放剂型对于本领域技术人员而言将是已知的，其说明性实例在Anal,A.K.(2010；Controlled‑Release Dosage Forms.Pharmaceutical Sciences Encyclopedia.11:1‑46)中描述。
[0158] 不受理论或特定应用模式的束缚，可以合意的是根据如本文描述的疾病、状况或其一种或更多种症状的严重程度选择施用途径。在本文公开的实施方案中，将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐经肠施用至受试者。在本文公开的实施方案中，将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐口服施用至受试者。在本文公开的实施方案中，将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐肠胃外施用至受试者。在本文公开的另一种实施方案中，将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐表面施用至受试者。在本文公开的另一种实施方案中，将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐通过吸入施用至受试者。在本文公开的另一种实施方案中，将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐通过吹入施用至受试者。
[0159] 如本文别处描述的，“表面”施用通常意指将合适地呈乳膏、洗剂、泡沫、凝胶、软膏、滴鼻剂、滴眼剂、滴耳剂、经皮贴剂、经皮膜(例如，舌下膜)等形式的活性剂施加至身体的表面，诸如皮肤或粘膜。表面施用还涵盖通过吸入或吹入经由呼吸道的粘膜的施用。在本文公开的实施方案中，表面施用选自由经皮施用和经粘膜施用组成的组。在实施方案中，将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐经皮施用至受试者。在实施方案中，将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐通过吸入、吹入或雾化施用至受试者。
[0160] 在实施方案中，方法包括将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐通过吸入或吹入施用至人类。在另一种实施方案中，方法包括将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐通过吸入或吹入施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，方法包括将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
[0161] 在实施方案中，方法包括将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐口服施用至人类。在另一种实施方案中，方法包括将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐口服施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，方法包括将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐口服施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
[0162] 表面施用的说明性实例在本文别处描述。在实施方案中，表面施用是经皮的。
[0163] 在本文公开的实施方案中，如本文描述的肽或其药学上可接受的盐作为控制释放剂型施用至受试者，控制释放剂型的说明性实例在本文别处描述。在实施方案中，方法包括将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐作为控制释放剂型施用至人类。在另一种实施方案中，方法包括将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐作为控制释放剂型施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，方法包括将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐作为控制释放剂型施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
[0164] 如本文别处所述，若干(即，多个)分开的剂量可以每天、每周、每月或以其他合适的时间间隔被施用，或剂量可以根据情况的紧迫性指示的按比例减少。在需要或另外期望多个剂量的过程的情况下，经由多于一种途径施用如本文公开的肽可以是有益的。例如，可以合意的是，肠胃外地施用第一剂量(例如，经由肌内施用途径、静脉内施用途径；皮下施用途径、硬膜外施用途径、关节内施用途径、腹膜内施用途径、脑池内施用途径或鞘内施用途径)，以在受试者中诱导迅速或急性治疗作用，随后是肠内地(例如，口服地或直肠地)、通过吸入或吹入和/或表面地(例如，经由经皮施用途径或经粘膜施用途径)施用的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量，以在治疗的急性阶段后的延长时间段内提供活性剂的继续的可用性。可选择地，可以合意的是肠内地(例如，口服地或直肠地)施用剂量，随后是肠胃外地(例如，经由肌内施用途径、静脉内施用途径；皮下施用途径、硬膜外施用途径、关节内施用途径、腹膜内施用途径、脑池内施用途径或鞘内施用途径)、通过吸入或吹入和/或表面地(例如，经由经皮施用途径或经粘膜施用途径)施用的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量。可选择地，可以合意的是表面地(例如，经由经皮施用途径或经粘膜施用途径)施用剂量，随后是肠胃外地(例如，经由肌内施用途径、静脉内施用途径；皮下施用途径、硬膜外施用途径、关节内施用途径、腹膜内施用途径、脑池内施用途径或鞘内施用途径)、通过吸入或吹入和/或肠内地(例如，口服地或直肠地)施用的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量。
[0165] 还应理解，在期望多于一种施用途径的情况下，可以根据本文公开的方法使用两种或更多种施用途径的任何组合。合适的组合的说明性实例包括但不限于，(按施用顺序)，(a)肠胃外‑肠内；(b)肠胃外‑表面；(c)肠胃外‑肠内‑表面；(d)肠胃外‑表面‑肠内；(e)肠内‑肠胃外；(f)肠内‑表面；(g)肠内‑表面‑肠胃外；(h)肠内‑肠胃外‑表面；(i)表面‑肠胃外；(j)表面‑肠内；(k)表面‑肠胃外‑肠内；(l)表面‑肠内‑肠胃外；(m)肠胃外‑肠内‑表面‑肠胃外；(n)肠胃外‑肠内‑表面‑肠内；等。
[0166] 药物组合物
[0167] 如本文描述的肽或其药学上可接受的盐可以被配制用于作为纯化学品施用至受试者。然而，在某些实施方案中，可以优选的是将如本文描述的肽或其药学上可接受的盐配制为药物组合物，包括兽医组合物。因此，在本文公开的另一个方面中，提供了如本文描述的肽，用于在治疗如本文描述的有相应需要的受试者的状况中使用。
[0168] 如本文别处所述，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐可以与一种或更多种适合于待治疗的基础状况的其他活性剂一起顺序地或组合地(例如，作为混合物)施用。例如，本文公开的组合物可以被配制用于与通常用于治疗哮喘的吸入型皮质类固醇一起顺序地或者组合地(例如，作为混合物)施用。本领域技术人员将熟悉其他合适的组合或辅助疗法，其选择将取决于基础状况或其症状。
[0169] 在实施方案中，组合物还包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，如本文别处描述的。
[0170] 如本文描述的肽及其药学上可接受的盐可以合适地被制备为药物组合物和单位剂型，以作为以下使用：用于口服使用的固体(例如，片剂或填充胶囊)或液体(例如，溶液、悬浮液、乳液、酏剂或用其填充的胶囊)，用于直肠施用的软膏、栓剂或灌肠剂的形式，用于肠胃外使用(例如，肌内施用、皮下施用、静脉内施用、硬膜外施用、关节内施用和鞘内施用)的无菌可注射溶液的形式；或用于肠胃外(例如，表面、含服、舌下、阴道)施用的软膏、洗剂、乳膏、凝胶、贴剂、舌下条(sublingual strip)或膜等形式。在实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于表面(例如，经皮)递送。合适的经皮递送系统对于本领域技术人员而言将是熟悉的，其说明性实例由Prausnitz和Langer(2008；Nature 
Biotechnol.26(11):1261‑1268)描述，该文献的内容通过引用并入本文。在另一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于舌下递送或含服递送。合适的舌下递送系统和含服递送系统对于本领域技术人员而言将是熟悉的，其说明性实例包括可溶解的条或膜，如由Bala等人(2013；Int.J.Pharm.Investig.3(2):67‑76)描述的，该文献的内容通过引用并入本文。
[0171] 合适的药物组合物及其单位剂型可以包含常规比例的常规成分，具有或不具有另外的活性化合物或要素，并且这样的单位剂型可以包含与待采用的预期的每日剂量范围相称的任何合适的有效量的活性成分。如本文描述的肽及其药学上可接受的盐可以被配制用于以多种肠内、表面和/或肠胃外剂型施用。合适的剂型可以包含两种或更多种本文描述的肽或其药学上可接受的盐的组合作为活性组分。
[0172] 在实施方案中，组合物被配制用于向人类口服施用。在另一种实施方案中，组合物被配制用于向非人类受试者口服施用。在又一种实施方案中，组合物被配制用于向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者口服施用。
[0173] 在另一种实施方案中，组合物被配制用于向人类肠胃外施用。在另一种实施方案中，组合物被配制用于向非人类受试者肠胃外施用。在又一种实施方案中，组合物被配制用于向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者肠胃外施用。在实施方案中，肠胃外施用是皮下施用。
[0174] 在另一种实施方案中，组合物被配制用于向人类表面施用。在另一种实施方案中，组合物被配制用于向非人类受试者表面施用。在又一种实施方案中，组合物被配制用于向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者表面施用。在实施方案中，表面施用是经皮的。
[0175] 在另一种实施方案中，组合物被配制用于通过吸入或吹入向人类施用。在另一种实施方案中，组合物被配制用于通过吸入或吹入向非人类受试者施用。在又一种实施方案中，组合物被配制用于通过吸入或吹入向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者施用。
[0176] 在另一种实施方案中，组合物被配制为待施用至人类的控制释放剂型。在另一种实施方案中，组合物被配制为待施用至非人类受试者的控制释放剂型。在又一种实施方案中，组合物被配制为待施用至非人类受试者的控制释放剂型，所述非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。合适的控制释放剂型的说明性实例在本文别处描述。
[0177] 对于制备本文描述的药物组合物，药学上可接受的载体可以是固体或液体。固体形式制品(preparation)的说明性实例包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂以及可分散颗粒剂。固体载体可以是一种或更多种物质，所述一种或更多种物质还可以充当稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。在粉剂中，载体可以是与细分的(finely divided)活性组分混合的细分的固体。在片剂中，活性组分可以与处于适合的比例的具有必需的结合能力的载体混合并且以期望的形状和尺寸被压实。
[0178] 在一些实施方案中，粉剂和片剂包含从5％或10％至约70％的活性化合物。合适的载体的说明性实例包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂及类似物。术语“制品”意图包括活性化合物与包封材料的制剂，该制剂提供其中活性组分(存在或不存在载体)被载体包围的胶囊。类似地，本文还设想了扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可以用作适合于口服施用的固体形式。
[0179] 为了制备栓剂，首先将低熔点蜡诸如脂肪酸甘油酯或可可脂的共混物熔融，并且将活性组分如通过搅拌均匀地分散于其中。然后将熔融的均匀混合物倾入方便尺寸的模具中，允许冷却并且从而固化。
[0180] 适合于阴道施用的制剂可以作为阴道栓、止血栓、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂(除了活性成分之外还包含诸如本领域已知的适当的载体)被呈现。
[0181] 液体形式制品包括溶液、悬浮液和乳液，例如水或水‑丙二醇溶液。例如，肠胃外注射液体制品可以被配制为在聚乙二醇水溶液中的溶液。
[0182] 如本文描述的肽及其药学上可接受的盐可以被配制用于肠胃外施用(例如，通过注射，例如弹丸式注射(bolus injection)或连续输注)，并且可以以具有添加的防腐剂的安瓿、预填充注射器、小体积输注容器或多剂量容器的单位剂型呈现。组合物可以采取诸如在油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以包含配制剂诸如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。可选择地，活性化合物可以呈粉剂形式，所述粉剂形式通过无菌固体的无菌分离(aseptic isolation)或通过从溶液冻干获得，用于在使用之前用合适的媒介物例如无菌、无热原水构制。
[0183] 适合于口服使用的水性溶液可以通过将活性组分溶解在水中并且根据需要添加合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。
[0184] 适合于口服使用的水性悬浮液可以通过将细分的活性组分与粘性材料分散在水中来制备，所述粘性材料诸如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其他熟知的助悬剂。
[0185] 本文还预期意图在使用之前不久转化为用于口服施用的液体形式制品的固体形式制品。这样的液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。除了活性组分之外，这些制品还可以包含着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工甜味剂和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂以及类似物。
[0186] 对于向表皮的表面施用，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐可以被配制为软膏、乳膏或洗剂，或配制为经皮贴剂。软膏和乳膏可以例如用水性或油性基质，添加合适的增稠剂和/或胶凝剂来配制。洗剂可以用水性或油性基质配制并且通常还将包含一种或更多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。
[0187] 适合于在口中表面施用的制剂包括包含在调味基质(通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄芪胶)中的活性剂的锭剂；包含在惰性基质诸如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯树胶中的活性成分的软锭剂(pastille)；以及包含在合适的液体载体中的活性成分的漱口水
(mouthwash)。
[0188] 溶液或悬浮液通过常规手段例如用滴管、移液器或喷雾器直接施加至鼻腔。制剂可以以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或移液器的后一种情况下，这可以通过患者施用适当的预先确定体积的溶液或悬浮液来实现。在喷雾器的情况下，这可以例如借助于计量雾化喷雾泵或吸入器来实现。为了改善鼻递送和保留，本发明中使用的肽可以用环糊精包封，或者用预计增强鼻粘膜中的递送和保留的剂配制。
[0189] 向气道的施用还可以借助于气雾剂制剂来实现，其中活性成分以具有合适的推进剂的加压包装提供，所述推进剂诸如氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。气雾剂还可以方便地包含表面活性剂诸如卵磷脂。药物的剂量可以通过提供计量阀来控制。
[0190] 可选择地或此外，活性成分可以以干燥粉剂的形式提供，所述干燥粉剂例如化合物在合适的粉剂基质诸如乳糖、淀粉、淀粉衍生物(诸如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP))中的粉剂混合物。方便地，粉剂载体将在鼻腔中形成凝胶。粉剂组合物可以以例如明胶的胶囊或药筒(cartridge)或可以借助于吸入器从其中施用粉剂的泡罩包装的单位剂型呈现。
[0191] 在意图用于向气道施用的制剂(包括鼻内制剂)中，肽通常将具有例如1微米至10微米或更小量级的小粒度。这样的粒度可以通过本领域已知的手段，例如通过微粉化来获得。
[0192] 当需要时，可以采用适于给予活性成分的控制释放或持续释放的制剂，如本文别处描述的。
[0193] 在实施方案中，如本文描述的药物制品优选地呈单位剂型。以这样的形式，制品被再分(subdivide)为包含适当量的活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制品，包装包含离散的量的制品，诸如包装于小瓶或安瓿中的片剂、胶囊和粉剂。此外，单位剂型本身可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂，或者其可以是呈包装形式的适当数目的这些中的任何单位剂型。
[0194] 在实施方案中，本文公开的组合物被配制用于向人类口服施用。在又一种实施方案中，本文公开的组合物被配制用于向非人类口服施用。在另外的实施方案中，本文公开的组合物被配制用于向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类口服施用。
[0195] 在实施方案中，本文公开的组合物被配制用于通过吸入或吹入向人类施用。在又一种实施方案中，本文公开的组合物被配制用于通过吸入或吹入向非人类施用。在另一种实施方案中，本文公开的组合物被配制用于通过吸入或吹入向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类施用。
[0196] 在另一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于向人类受试者口服施用。在另一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于向非人类受试者口服施用。在又一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者口服施用。
[0197] 在另一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于向人类受试者表面施用。在又一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于向非人类受试者表面施用。在另一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者表面施用。在实施方案中，表面施用是经皮的。
[0198] 在另一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于通过吸入或吹入向人类受试者施用。在又一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于通过吸入或吹入向非人类受试者施用。在另一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于通过吸入或吹入向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者施用。
[0199] 在另一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型向人类受试者施用。在又一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型向非人类受试者施用。在另一种实施方案中，如本文描述的肽及其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型向非人类受试者施用，其中非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。在实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
[0200] 如本文别处所述，若干(即，多个)分开的剂量可以每天、每周、每月或以其他合适的时间间隔被施用，或剂量可以如由情况的紧迫性指示的按比例减少。在需要或另外期望多个剂量的过程的情况下，本文公开的组合物可以合适地被配制用于经由所述多种途径施用。例如，可以合意的是，肠胃外地施用第一剂量(例如，肌内、静脉内地；皮下地等)，以在受试者中诱导迅速或其他急性治疗作用，随后是非肠胃外地(例如，肠内地和/或表面地)施用的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量，以在治疗的急性阶段后的延长时间段内提供活性剂的继续的可用性。因此，在实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠胃外施用至受试者(即，作为肠胃外剂型)，并且被配制用于在第一剂量之后非肠胃外施用至受试者(例如，作为肠内剂型和/或表面剂型)。在实施方案中，肠胃外施用选自由肌内施用、皮下施用和静脉内施用组成的组。在另外的实施方案中，肠胃外施用是皮下的。
[0201] 在另一种实施方案中，肠内施用是口服施用。因此，在实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠胃外施用至受试者，并且被配制用于在第一剂量之后口服施用至受试者(例如，作为口服剂型)。
[0202] 在另一种实施方案中，肠内施用是表面施用。因此，在实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠胃外施用至受试者，并且被配制用于在第一剂量之后表面施用至受试者(例如，作为口服剂型)。在实施方案中，表面施用是经皮施用。
[0203] 在另一种实施方案中，可以合意的是，肠胃外地施用第一剂量(例如，肌内、静脉内地；皮下地等)，以在受试者中诱导迅速或其他急性治疗作用，随后是如本文别处描述的控制释放剂型的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)施用，以在治疗的急性阶段后的延长时间段内提供活性剂的控制释放。因此，在另一种实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠胃外施用至受试者，并且被配制为控制释放剂型以在第一剂量之后向受试者施用。在实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
[0204] 还可以合意的是肠内地(例如，口服地或直肠地)施用第一剂量，随后是表面地(例如，经皮地)施用的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量。因此，在实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠内施用至受试者(即，作为肠内剂型；口服的或直肠的)，并且被配制用于在第一剂量之后表面施用至受试者(例如，作为经皮剂型或经粘膜剂型)。在另一种实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于表面施用，所述表面施用选自由经皮施用和经粘膜施用组成的组。在另外的实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于经皮施用。
[0205] 在又一种实施方案中，可以合意的是将如本文公开的肽或组合物作为第一剂量肠内地(例如，口服地或直肠地)施用，随后是作为如本文别处描述的控制释放剂型的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量。因此，在实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠内地施用，并且被配制用于作为控制释放剂型施用，其中控制释放剂型被配制用于在第一剂量后施用。在实施方案中，肠内剂量被配制用于口服施用。在另一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
[0206] 在实施方案中，可以合意的是将如本文公开的肽或组合物作为第一剂量表面地(例如，口服地或直肠地)施用，随后是作为如本文别处描述的控制释放剂型的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量。因此，在实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量表面施用，并且被配制用于作为控制释放剂型施用，其中控制释放剂型被配制用于在第一表面剂量后施用。在实施方案中，表面剂量被配制用于经皮施用。在另一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
[0207] 现在将参考以下实施例来描述本发明，实施例说明了本发明的一些优选的方面。然而，应理解本发明的以下描述的特殊性不取代本发明的先前描述的一般性。
实施例
[0208] 实施例1：LanCL结合测定
[0209] 交联的蛋白质的基于凝胶的分析
[0210] 将先前在存在不同的肽或PBS/DMSO媒介物的情况下用光探针光标记的LANCL1的干燥沉淀重悬在30μLSDS加载缓冲液(Bio Rad的XT样品缓冲液，包含2.5％v/v 2‑巯基乙醇)中，并且加热(60℃，30min)。将蛋白质使用SDS‑PAGE(4％‑15％ CriterionTM TGX Stain‑FreeTM Protein Gel,Bio Rad)分离，并且使用ChemiDocTM MP成像系统(Bio Rad)，用作为激发源的绿色LED光和BP600/20nm发射滤光器，通过凝胶内荧光扫描进行分析。在凝胶内荧光扫描之后，将凝胶用考马斯蓝(Coomassie blue)染色，以确保在每个泳道中加载相同量的蛋白质样品，并且用ChemiDocTM MP成像系统成像。通过使用Image lab软件(Bio Rad)测量对应凝胶带的荧光强度，并且将该值针对用考马斯蓝染色的LANCL1凝胶带的强度值归一化以控制上样差异，从而定量地评估每个光探针在LANCL1中的光掺入。
[0211] 结果
[0212] 如表2中示出的，肽被发现特异性地结合LanCL1，并且从重组LanCL1(rLanCL1)中取代已知的LanCL1配体PAL‑CRSVEGSCGF(SEQ ID NO:22)。ED50取代值在表2中示出。应注意，SEQ ID NO:38的环化肽当与其线性对应物SEQ ID NO:37相比时对rLanCL1具有出乎意料地更大的结合亲和力。类似地，SEQ ID NO:40的环化肽当与其线性对应物SEQ ID NO:39相比时对rLanCL1具有更好的结合亲和力。
[0213] 表2：
[0214]
[0215] 实施例2：呼吸道上皮细胞生存力
[0216] 通过与LANCL1相互作用，本专利中描述的肽已经示出在保护细胞免受化学或氧化应激的损害作用方面发挥作用。开发了一种测定，包括用一定剂量的化疗剂紫杉醇应激细胞，当与未经处理的细胞相比时，所述剂量的紫杉醇引起细胞生存力的50％抑制。然后以增加的浓度向细胞培养物中添加肽，以评估它们恢复经紫杉醇处理的细胞的生存力的能力。
[0217] 简言之，将A549细胞在不透明壁多孔板中培养，其中50000个A549细胞/孔，每孔100μl培养基(DMEM培养基编号11960‑044Thermoscientific+10％ FBS编号10270‑
106Gibco,Thermoscientific+1％丙酮酸钠编号S8636‑100ML,Sigma+1％ Glutamax编号
35050061,Thermoscientific+1％青霉素‑链霉素编号11074440001,Sigma)，96孔板。使用包含无细胞培养基的对照孔来获得背景发光值。将细胞在37℃在5％ CO2中孵育过夜。
[0218] 将紫杉醇(T7402‑5 MG，Sigma‑Aldrich)作为DMSO中的10mM溶液添加至每个孔，直至350μM的最终浓度，与单独的媒介物相比，这导致增殖的50％抑制。向每个孔中添加100μL的培养基+DMSO+肽或培养基+紫杉醇+肽(以不同的浓度)，并且在37℃5％ CO2孵育持续16小时。
[0219] 通过相衬显微术(phase contrast microscopy)评估细胞形态、生存力和汇合。然后根据制造商的使用说明，使用 发光细胞生存力测定(G7571，Promega‑一种基于存在的ATP的定量来确定培养物中活细胞数目的均相方法)来定量代谢活性细胞的数目。
将100μl体积的 试剂添加至每个孔中存在的100μL体积的细胞培养基中，在轨
道摇床上将内容物混合持续2分钟以诱导细胞溶解，并且在室温孵育板持续10分钟以稳定发光信号之后，使用CLARIOstar多孔光度计(BMG Labtech)记录发光，积分时间为0.5秒。
[0220] 结果
[0221] 如表3中示出的，肽被发现恢复了用与体外未经处理的细胞相比，将A549增殖减少了50％的剂量的紫杉醇处理的A549细胞的生存力。与上文表2中的LanCL1结合数据一致，SEQ ID NO:38的环化肽被发现恢复A549生存力，而其线性对应物SEQ ID NO:37则没有恢复A549生存力。类似地，SEQ ID NO:10的环化肽被发现恢复A549生存力，而其线性对应物SEQ ID NO:11则没有恢复A549生存力。出乎意料地，长度是3个氨基酸、4个氨基酸、5个氨基酸和6个氨基酸的相对短的肽(SEQ ID NO:39、42和59‑61)也被发现部分地恢复A549生存力。SEQ ID NO:40的肽(SEQ ID NO:39的环化变体)也恢复A549生存力。SEQ ID NO:9的肽(SEQ ID NO:1的线性片段)也恢复紫杉醇诱导的细胞生存力损失(也参见图2)。
[0222] 为了评估肽的作用是否依赖于LanCL表达，用LanCL1 siRNA(100nM)处理A549细胞持续48小时，这敲除LanCL1表达。然后在存在紫杉醇(IC50～350μM)的情况下，或者在存在单独的媒介物(二甲基亚砜；DMSO)的情况下或在存在浓度为1μM、5μM、25μM、50μM和100μM的SEQ ID NO:1的肽(在DMSO中稀释)的情况下孵育细胞。用对照siRNA(SiCTL)或针对LanCL1的siRNA(SiLanCL1)转染不改变A549细胞生存力。如图1中示出的，在不存在紫杉醇的情况下，SEQ ID NO:1的肽对未转染的A549细胞(NT)或用SiCTL转染的A549细胞的生存力没有显著影响。在SiLanCL1转染的细胞中，SEQ ID NO:1的肽在较高剂量抑制A549增殖。
[0223] 在存在350μM紫杉醇的情况下，SEQ ID NO:1的肽的存在挽救了未转染的A549细胞(NT)或用SiCTL转染的A549细胞的生存力损失。这种作用代表了对上皮细胞的保护作用。相反，SEQ ID NO:1的肽不挽救紫杉醇对A549生存力的负面影响。
[0224] 这些数据表明，包含式(I)的氨基酸序列的肽能够挽救紫杉醇诱导的应激对上皮细胞生存力的负面影响，并且这种挽救作用依赖于LanCL1。
[0225] 表3：
[0226]
[0227] 活性评分：
[0228] 无活性的‑直至100μM无活性；
[0229] 弱的‑在50μM‑100μM，细胞生存力有一定程度或可变的恢复；
[0230] 中等的‑在>25μM细胞生存力有中等的剂量依赖性恢复；
[0231] 强的‑1μM‑5μM以上细胞生存力有明显的剂量依赖性恢复。
[0232] 实施例3：小鼠甲型流感感染模型
[0233] 6‑8周龄C57BL/6雄性小鼠被维持在莫纳什医疗中心(Monash Medical Centre)的Specific Pathogen Free Physical Containment Level 2(PC2)Animal Research Facility中。所有实验程序经哈德逊动物伦理委员会(Hudson Animal Ethics Committee)批准，并且实验程序按照批准的指南进行。本研究中使用的IAV毒株为HKx31(H3N2)，其是携带A/Aichi/2/1968(H3N2)的表面糖蛋白的A/PR/8/34(H1N1)的高产重配毒株
(reassortant)。HKx31按标准程序在10天的鸡胚(embryonated chicken egg)中生长，并在Madin‑Darby犬肾(MDCK)细胞上滴定。
[0234] 对于病毒感染研究，随机分成8只雄性C57BL/6小鼠的组。将小鼠轻度麻醉，并用505
μlPBS中的10 PFU的HKx31(H3N2)鼻内感染(先前显示会诱导严重疾病(Rosli等人,2019；
Tate等人,2016))。在指示的时间点用本文描述的肽(5mg/kg或20mg/kg；如指示的)经由鼻内途径处理小鼠。对照小鼠用单独的PBS处理。对小鼠每天称重，并评估临床疾病的视觉体征，包括不活动、毛杂乱、呼吸困难和蜷缩行为(huddling behaviour)。减轻≥20％其原始体重或表现出严重的疾病临床体征的动物被实施安乐死。在实施安乐死后，立即通过用1mL的PBS冲洗肺部3次来获得支气管肺泡灌洗(BAL)液。然后取出肺并立即冷冻在液氮中。肺匀浆中感染性病毒的滴度通过对MDCK细胞的标准噬斑测定来确定。
[0235] 小鼠BAL液和血清中细胞因子的定量
[0236] 为了检测细胞因子，将BAL液收集并且储存在‑80℃。IL‑6、MCP‑1/CCL2、IFNγ、IL‑10、IL‑12p70和TNFα蛋白的水平使用小鼠炎症试剂盒(Becton Dickinson)通过细胞因子珠阵列(CBA)确定。使用小鼠单克隆克隆F18(Thermo Scientific)和兔多克隆抗体(PBL)通过夹心ELISA确定小鼠IFNα水平(Thomas等人，2014)。使用小鼠单克隆克隆7F‑D3(Abcam)和兔多克隆抗体(PBL)通过夹心ELISA确定小鼠IFNβ水平(Thomas等人，2014)。小鼠IFNλ2/3通过ELISA(R&D系统)定量。
[0237] 来自小鼠的白细胞的回收和表征
[0238] 对于流式细胞术分析，用红细胞溶解缓冲液(Sigma Aldrich)处理BAL细胞，并且使用血细胞计数器经由台盼蓝排除评估细胞数目和生存力。BAL细胞与Fc block(2.4G2；b
eBiosciences)一起孵育，随后用Ly6C、Ly6G、CD11c和I‑A (MHC‑II)的荧光染料缀合的单克+ + b低
隆抗体(BD Biosciences,USA)染色。中性粒细胞(Ly6G)，巨噬细胞(CD11cI‑A )，树突状b高 ‑ +
细胞(DC；CD11c+I‑A )，炎性巨噬细胞(Ly6GLy6C)如先前描述通过流式细胞术进行定量(Rosli等人，2019；Tate等人,2016)。使用BD FACS Canto II流式细胞仪(BD Biosciences)和FlowJo软件(BD Biosciences)分析活细胞(碘化丙啶阴性)。
[0239] 肺水肿和血管渗漏的评估
[0240] 肺湿重与干重的比率用作肺中积液的指标。小鼠安乐死后，手术解剖肺，吸干，并立即称重(湿重)。然后将肺组织在55℃的烘箱中干燥72小时，并重新称重为干重。对每只动物计算湿重与干重的比率以评估组织水肿(Tate等人，2009；Tate等人，2010)。通过添加Bradford蛋白染料来测量无细胞BAL上清液中蛋白质的浓度(Tate等人，2009；Tate等人，2010)。用牛血清白蛋白构建标准曲线，并在595nm处确定光密度(OD)。
[0241] 结果
[0242] 如表4中示出的，使用SEQ ID NO:1的环肽(10mg/kg单剂量)处理通常减少由病毒感染引起的细支气管灌洗液中多形核细胞(PMN)的浸润、病毒滴度和IL‑6水平。在单一
10mg/kg剂量，SEQ ID NO:1、2、9、29、37‑39、42、56和59‑61的肽在减少BAL液中PMN浸润方面与SEQ ID NO:38的肽一样有效，而在单一10mg/kg剂量，SEQ ID NO:23、40、41、50、57和58的肽在减少BAL液中PMN浸润方面相对不如SEQ ID NO:38的肽有效。用SEQ ID NO:43、44、47‑
49和52中的任一种肽处理没有示出在单一10mg/kg剂量时BAL液中的PMN浸润的任何变化
(活性评分：0＝无活性的；1＝活性低于SEQ ID NO:38的肽；2＝与SEQ ID NO:38的肽相当或更具活性)。
[0243] 在第3天，与SEQ ID NO:38相比，用SEQ ID NO:1、9、23、29、37、38、42、50、52、56和59‑61中的任一种肽处理(在10mg/kg单一剂量)示出有效降低病毒滴度。
[0244] 肺和血清样品中的细胞因子概况是可变的，但数据示出用SEQ ID NO:1、9、23、29、37、38、42、44、47、49、50、52、56和59‑61中的任一种肽处理在降低BAL液中IL‑6水平方面与SEQ ID NO:38的肽水平相当。
[0245] 表4：
[0246]
[0247] 实施例4：神经病理性疼痛的体内模型
[0248] 进行本研究以使用Chung大鼠的神经收缩模型评估本文描述的肽对体内神经病理性疼痛的镇痛作用。简言之，在手术时称重为220‑250g的8‑9周龄成年雄性Sprague‑Dawley大鼠购自Charles River UK Ltd。
[0249] 将这些动物以4只的组圈养在以12小时光/暗循环的空调室中。食物和水随意可用。通过将它们放在升起的金属网上持续至少40min，它们被允许适应实验环境持续3天。在手术前的3个连续日使用一系列分级的von Frey纤毛(von Frey hairs)检查基线缩足阈值(PWT)，并且在给药前，在手术后第6天至第8天和手术后第12天至第14天再次评估。
[0250] 每只大鼠用混合有氧气的5％异氟烷麻醉(2L/min)，随后肌内(i.m.)注射氯胺酮90mg/kg加赛拉嗪(xylazine)10mg/kg。将背部剃毛，并且用聚维酮‑碘灭菌。将动物以俯卧位放置，并且在覆盖L4‑L6水平的皮肤上制作旁内侧切口(para‑medial incision)。小心地分离L5脊神经，并且用6/0丝缝合线紧结扎。然后，在完全止血后，将伤口逐层闭合。常规地给予单剂量的抗生素(阿莫西林，15mg/大鼠，i.p.)，以预防术后感染。将动物放置在温度控制的恢复室中直到完全清醒，然后返回至其居住笼。
[0251] 将媒介物(PBS中的1％ DMSO)或肽肌内施用(i.m.)到受伤部位对侧的腿中。由第二名实验者进行给药。将具有经验证的神经病理性疼痛状态的大鼠随机分为5个实验组：
1ml/kg媒介物，0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg和5mg/kg的肽。
[0252] 每组具有8只动物。在测试之前，将动物放置在升高的金属网上的单独的Perspex盒中持续至少40分钟。以力最小的细丝(约1g)开始，将每根细丝垂直施加到爪子腹侧表面的中心，直到稍微弯曲持续6秒。如果动物在受到刺激时收回或抬起爪子，则使用具有比测试的力紧接地更低的力的纤毛。如果没有观察到响应，则测试具有紧接地更高的力的纤毛。诱导可靠响应(5次试验中3次为阳性)所需要的最小量的力被记录为PWT的值。
[0253] 在手术之后第12天至第14天进行药物测试。在施用之前，药物或媒介物施用后1小时、2小时和4小时评估PWT。在两个相邻的测试时间点之间，通过使动物返回至其居住笼(约30min‑60min)来休息。通过以约0.1mg/kg体重至约5mg/kg体重的剂量在同侧肢体中单次肌内注射(IM)施用肽。
[0254] 结果
[0255] 如下文表5中示出的，SEQ ID NO:1、2、3、10、24和37的肽，包括SEQ ID NO:39的6‑mer肽，在口服、皮下和/或肌内施用(口服剂量在2mg/kg‑10mg/kg的范围内，皮下剂量在0.1mg/kg‑3mg/kg的范围内，并且肌内剂量在0.5mg/kg‑5mg/kg的范围内)后，减少了Chung模型中的神经病理性疼痛。
[0256] 表5：
[0257]
[0258] 实施例5：全身性脑心肌炎病毒(EMCV)感染的体内模型
[0259] 在使用全身性脑心肌炎病毒(EMCV)感染小鼠模型的初步实验中，在腹膜内施用SEQ ID NO:1、37和38的肽之后，在腹膜腔内观察到中性粒细胞和炎性巨噬细胞的减少(表
6)。该观察结果与循环MCP‑1的减少相关，MCP‑1是一种促进这两种免疫细胞的迁移和激活的细胞因子。
[0260] 表6：
[0261]
[0262]
[0263] 实施例6：神经病理性疼痛的体内模型(II)
[0264] 如上文实施例4中描述的制备脊神经结扎(Chung)模型。简言之，64只在手术时称重为250‑350g的8‑9周龄成年雄性Sprague‑Dawley大鼠购自Charles River UK Ltd。将这些动物以4只的组圈养在以12小时光/暗循环的空调室中。食物和水随意可用。通过将动物放在升起的金属网上持续至少40分钟，它们被允许适应实验环境持续3天。在手术前的3个连续日使用一系列分级的von Frey纤毛检查基线缩足阈值(PWT)，并且在给药前，在手术后第7天和手术后第12天至第14天再次评估。
[0265] 每只大鼠用混合有氧气的5％异氟烷麻醉(2L/min)，随后肌内(i.m.)注射氯胺酮60mg/kg加赛拉嗪10mg/kg。将背部剃毛，并且用聚维酮‑碘灭菌。将动物以俯卧位放置，并且在覆盖L4‑L6水平的皮肤上制作旁内侧切口。小心地分离L5脊神经，并且用6/0丝缝合线紧结扎。然后，在完全止血后，将伤口逐层闭合。常规地给予单剂量的抗生素(阿莫西林，15mg/大鼠，i.p.)，以预防术后感染。将动物放置在温度控制的恢复室中直到完全清醒，然后返回至其居住笼。
[0266] 将具有经验证的神经病理性疼痛状态的动物随机分为4个实验组：媒介物(首先是5％DMSO，然后是0.9％盐水)，3mg/kg LAT9997，3mg/kg LAT9997 x1和3mg/kg LAT1233x1。
每组包含6只动物。
[0267] 将RSVEGS(SEQ ID NO:9；LAT9997)、SVEGS(SEQ NO:62；LAT9997x1)和ALNSS(SEQ ID NO:63；LAT1233x1)首先溶解在5％ DMSO中，然后溶解在0.9％盐水中，5％ DMSO和0.9％盐水也用作媒介物对照。所有化合物均由GenScript for Lateral Pharma提供。所有媒介物/化合物以1ml/kg体重静脉内施用。
[0268] 缩足阈值(PWT)
[0269] 将动物放置在升高的金属网上的单独的Perspex盒中持续至少40min。以力最小的细丝(1克(g))开始，将每根vFH细丝垂直施加到爪子腹侧表面的中心，直到稍微弯曲持续6秒。如果动物在受到刺激时收回或抬起其爪子，则使用具有比测试的力紧接地更低的力的细丝。如果没有观察到响应，则测试具有紧接地更高的力的细丝。诱导可靠响应(3次试验中2次为阳性)所需要的最小量的力被记录为PWT的值。
[0270] 在手术之前持续3天(pre D1、Pre D2和D0)和手术后第7天每天一次评估PWT，以监测机械性异常性疼痛的发展。
[0271] 所有药物测试均在手术之后第13天至第17天进行。在施用之前(BL)以及药物或媒介物施用后1小时和2小时评估PWT。
[0272] 使用单向方差分析(ANOVA)(IBM statistics SPSS，第27版)进行统计学分析，以比较不同组在相同时间点的PWT。在适当时，使用Fisher最小显著性差异(LSD)事后检验来比较药物处理组和对照组。配对学生t检验(Microsoft Excel 365)用于比较同一组中不同时间点的值。为了相对于媒介物表征药物诱导的PWT变化，从适当的药物值中减去媒介物值。显著性水平设置在P<0.05。
[0273] 结果
[0274] 在未经实验处理的大鼠(手术前)中，PWT范围是10.0g至15.0g。在手术前一天，媒介物组的同侧(左)和对侧(右)后爪的平均PWT分别是14.17±0.83g和15.00±0.00g。LAT9997组的左右后爪的平均PWT是15.00±0.00g，LAT9997 x 1和LAT1233 x 1组的左右后爪的平均PWT是15.00±0.00g。各组间不存在统计学上显著的差异(P>0.05，单向ANOVA)。
[0275] 在手术之后第7天，结扎神经同侧的PWT显著低于手术前确定的PWT(媒介物组是6.00±0.52g；LAT9997组是5.67±0.33g，LAT9997 x 1组是6.33±0.33g，并且LAT1233x1组是5.33±0.42g；所有组与其术前值相比P<0.001，配对学生t检验)。对侧的PWT没有受到手术的显著影响(LAT1233x1组是14.17±0.83g；并且所有其他组是15.00±0.00g；所有组与
其术前值相比P>0.05，配对学生t检验)。
[0276] 媒介物(5％ DMSO)对PWT的影响
[0277] 在测试日施用媒介物(5％ DMSO)之前，(同侧)后爪上的PWT显著低于对侧后爪：同侧的3.33±0.42g，和对侧的14.17±0.83g(参见图3和图4)。在用媒介物处理之后，同侧PWT在给药后1h至4h没有被显著影响，相当于：1小时、2小时和4小时时间点分别是3.67±0.61g、3.67±0.61g和4.00±0.89g(与给药前水平相比，所有P>0.05，配对学生t检验，参见图3和表7)。在对侧，PWT保持不受影响(所有时间点均是14.17±0.83g，参见图4和表8)。
[0278] LAT9997对PWT的影响
[0279] 在3mg/kg，LAT9997诱导Chung模型大鼠的同侧后爪的PWT的显著增加(参见图3和表7)。从给药之后1小时起，效果是显著的：给药之前3.33±0.42g，相比之下，给药之后1小时7.83±1.72g(与给药前水平相比，P<0.05，配对学生t检验)。在给药之后2小时，PWT进一步增加至9.67±1.73g(与给药前水平相比，P<0.01，配对学生t检验)。在给药之后4小时，PWT略微降低至8.17±1.60g(与给药前水平相比，P<0.05，配对学生t检验)。在给药之后2小时和4小时，PWT与媒介物组记录的PWT显著不同(均P<0.05，单向ANOVA)。
[0280] 对侧的PWT在整个观察期内没有变化(给药前是14.17±0.83g，给药之后1小时、2小时和4小时是15.00±0.00g)。在给药后的任何时间点，对侧PWT与媒介物组的PWT没有显著差异(P>0.05，单向ANOVA，参见图4和表8)。
[0281] LAT1233x1对PWT的影响
[0282] 在3mg/kg，LAT1233x1还诱导Chung模型大鼠的同侧后爪的PWT从给药之后1小时起急剧且显著的增加：给药之前3.33±0.42g，相比之下，给药之后1小时10.67±1.67g(与给药前水平相比，P<0.01，配对学生t检验)。在给药之后2小时，PWT进一步略微增加至11.50±1.80g(与给药前水平相比，P<0.01，配对学生t检验)。在给药之后4小时，PWT略微降低至
10.17±1.17g(与给药前水平相比，P<0.01，配对学生t检验)。在给药之后的所有时间点，PWT与媒介物组记录的PWT显著不同(均P<0.01，单向ANOVA；参见图3和表7)。
[0283] 对侧的PWT在整个观察期内没有显著变化(给药前是15.00±0.00g，并且在给药之后1小时、2小时和4小时分别是15.00±0.00g、14.17±0.83g和15.00±0.00g)。在给药后的任何时间点，对侧PWT与媒介物组的PWT没有显著差异(P>0.05，单向ANOVA，参见图4和表8)。
表7：施用LAT9997、LAT9997x1和LAT1233x1后，Chung模型大鼠的同侧PWT随时间的变化。
[0284]
[0285] 每个值代表平均值(±1SEM)。PWT以g表示，如用分级的von Frey纤毛评估的。
[0286] ▲，▲▲：与给药前值相比，分别是P<0.05和0.01(配对学生t检验)；
[0287] *,**,***：与同一时间点的媒介物组相比，分别是P<0.05、0.01和0.001(单向ANOVA)
[0288] 表8：施用LAT9997、LAT9997x1和LAT1233x1后，Chung模型大鼠的对侧PWT随时间的变化。
[0289]
[0290] 每个值代表平均值(±1SEM)。PWT以g表示，如用分级的von Frey纤毛评估的。
[0291] 在任何处理组的时间点之间(配对学生的t检验)，以及在相同时间点的组之间不存在统计学上显著的差异
[0292] (单向ANOVA)。每组n＝6。
[0293] 表9：氨基酸序列
[0294]
[0295]
[0296]

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