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首页 / 专利分类库 / 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 / 与涉及微生物的C12C至C12Q小类相关的引得表 / 微生物 / .细菌或放线菌目 / ..乳杆菌属 / 一种含人参提取物的组合物及其制备方法和应用

一种含人参提取物的组合物及其制备方法和应用
申请号 CN202311534325.3 申请日 2023-11-17 公开(公告)号 CN117503811A 公开(公告)日 2024-02-06
申请人 吉林省百草园生物科技有限公司; 发明人 付翔; 赵雨; 陈禹;
摘要 本 发明 提出了一种含人参提取物的组合物及其制备方法和应用，属于 发酵 提取技术领域。将白参菌经过发酵获得酶液，加入人参和黄芪粉，酶解，加热提取，制得产物与促发酵组合物、 葡萄糖 、 水 混合，鼠李糖乳杆菌和富硒 酵母 菌发酵，制得的发酵产物加入 金属离子 溶液中，搅拌制得Zn‑Fe‑发酵复合物，与 白藜芦醇 、虫草素混合，加入熔融的PEG6000中，分散均匀，冷冻 固化 ，干燥， 粉碎 ，过筛，制得含人参提取物的组合物，具有较好的抗 氧 化、抗衰老、抗 肿瘤 的效果，同时，易于人体吸收且几乎不含有农残或重金属，具有溶出速率快，药效发挥快等特点，具有广阔的应用前景。
权利要求

1.一种含人参提取物的组合物的制备方法，其特征在于，将白参菌经过发酵获得酶液，加入人参和黄芪粉，酶解，加热至沸水提取，制得酶解水提取混合物与促发酵组合物、葡萄糖、水混合，鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌发酵，制得的发酵产物加入金属离子溶液中，搅拌制得Zn‑Fe‑发酵复合物，与白藜芦醇、虫草素混合，加入熔融的PEG6000中，分散均匀，冷冻固化，干燥，粉碎，过筛，制得含人参提取物的组合物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.产酶发酵培养基的制备：将碳源、氮源、维生素、矿物质加入水中，灭菌，制得产酶发酵培养基；
S2.发酵产酶：将白参菌的斜面培养基中加入无菌水洗出斜面上的菌落，用缓冲液配制成菌种种子液，接种至步骤S1中的产酶发酵培养基中，发酵培养，离心除菌，得到上清液，加入硫酸铵，静置沉淀，离心，沉淀溶于缓冲液中，透析，透析液离心，收集上清液，制得酶液；
S3.酶解水提取：将人参、黄芪分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，加入步骤S2制得的酶液中，加热酶解，继续加热至沸提取，过滤，固体留用，滤液经过大孔树脂纯化，洗脱液与上述固体混合，制得酶解水提取混合物；
S4.发酵：将步骤S3制得的酶解水提取混合物、促发酵组合物、葡萄糖加入水中，灭菌，接种活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液，发酵培养，离心除去固体，收集上清液，冷冻干燥，制得发酵产物；
S5.金属离子的络合：将步骤S4制得的发酵产物加入水中，加入可溶性锌盐和可溶性铁盐，搅拌混合均匀，干燥，透析，透析液干燥，制得Zn‑Fe‑发酵复合物；
S6.添加剂的制备：将白藜芦醇、虫草素混合均匀，制得添加剂；
S7.含人参提取物的组合物的制备：将PEG6000加热至熔融，加入步骤S5制得的Zn‑Fe‑发酵复合物和步骤S6制得的添加剂，搅拌混合均匀，冷冻固化，干燥，粉碎，过筛，制得含人参提取物的组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述碳源、氮源、维生素、矿物质和水的质量比为70‑100:7‑12:1‑2:0.5‑1:300‑400，所述碳源为糖度为5‑7的甘蔗汁，所述氮源选自氨基酸、氯化钠、硝酸铵、硝酸钠、硝酸钾、尿素、鱼粉、蛋白胨中的至少一种，所述氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸，所述维生素选自维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸、维生素C、维生素E、维生素D1、维生素D2、维生素D3中的至少一种，所述矿物质选自氯化钾、氯化钠、硫酸钾、硫酸钠、氯化镁、氯化铁、氯化亚铁、氯化铜、氯化锰、氯化锌、氯化钙、硫酸镁、硫酸铜、硫酸铁、硫酸锰、硫酸钙中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述菌种种子液的含菌量为
7 8
10‑10 cfu/mL，接种量为2‑3v/v％，所述发酵培养的条件为23‑26℃，50‑70r/min，发酵36‑
48h，所述硫酸铵的加入量为加入至体系硫酸铵的含量为80‑85wt％，所述静置沉淀的时间为2‑4h，所述透析的透析袋孔径为1000‑1500D，所述透析的时间为3‑5h。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述人参、黄芪的质量比为
10‑15:3‑5，所述混合粉、酶液的质量比为10‑15:100，所述加热酶解的温度为35‑40℃，时间为2‑4h，所述加热至沸提取的时间为1‑3h，所述大孔树脂为D101大孔树脂、HPD100大孔树脂或SYD8大孔树脂，所述纯化的方法为将样品以0.1‑0.2g/mL速率通过大孔树脂，然后以1.5‑
2.5BV水洗脱，然后以3‑5BV 70wt％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述酶解水提取混合物、促发酵组合物、葡萄糖、水的质量比为15‑20:2‑3:5‑7:400‑500，所述促发酵组合物包括菊粉、维生素B6和氯化钙，质量比为10‑12:0.5‑1:0.2‑0.5，所述活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母
8
菌菌种种子液的接种量分别为2‑3v/v％和1‑2v/v％，所述菌种种子液的含菌量为10 ‑
9
10cfu/mL，所述发酵培养的条件为37‑40℃，50‑70r/min，发酵培养48‑72h。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S5中所述可溶性锌盐选自氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、柠檬酸锌、葡萄糖酸锌中的至少一种，所述可溶性铁盐选自氯化铁、硫酸铁、硝酸铁中的至少一种；所述发酵产物、可溶性锌盐和可溶性铁盐的质量比为100:2‑3:
1‑2，所述透析的透析袋孔径为300‑500D，所述透析的时间为1‑2h。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S6中所述白藜芦醇、虫草素的质量比为3‑5:7‑10；步骤S7中所述PEG6000、Zn‑Fe‑发酵复合物、添加剂的质量比为100:10‑
12:3‑5，所述冷冻的温度为‑25至‑20℃，固化的时间为2‑4h，所述过筛的筛网目数为80‑100目。
9.一种如权利要求1‑8任一项所述的制备方法制得的含人参提取物的组合物。
10.一种如权利要求9所述含人参提取物的组合物在制备抗衰老、抗氧化、抗肿瘤的药品中的应用。
说明书全文

一种含人参提取物的组合物及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明涉及发酵提取技术领域，具体涉及一种含人参提取物的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 细胞是生物体结构和功能的基本单位，也是生物体衰老基本单位。细胞衰老(cell aging)是指细胞在执行生命活动过程中，随着时间的推移，细胞增殖与分化能力和生理功能逐渐发生衰退的变化过程。细胞的生命历程都要经过未分化、分化、生长、成熟、衰老和死亡几个阶段。
[0003] 尽管衰老死亡是不可避免的自然规律，但延缓衰老，尤其是努力避免病理性衰老却是可以做到的。据报道，2050年全球60岁以上老年人达到20亿，大约为总人口的20‑30％。面临人口老化进程加快和人口寿命普遍提高的趋势，保障老年人享有良好的健康和较高的生活质量已成为社会科学和生命科学共同关注的重大问题，深入研究更有效的抗衰老产品，必将有利于我国“健康的老龄化”目标的实现。因此，开展延缓衰老的研究、开发延缓衰老的产品具有重要的科学意义和社会价值。
[0004] 人参(Panax ginseng C.A Meyer)作为归属于五加科人参属的植物，在韩国、中国、日本等地，是从约2000年前开始就被使用的生药，用于依靠经验预防疾病、延长寿命。人参代表性的生理活性成分人参皂苷(Ginsenoside)均匀地分布于人参的地上和地下部位。使用人参时，主要使用其根，在人参叶、人参籽中也含有人参皂苷，与人参根的功效相同。到目前为止，已知人参具有如下作用：对中枢神经系统的正面作用，抗致癌作用，抗癌活性，免疫功能控制，抗糖尿病作用，肝功能改善作用，心血管障碍改善，抗动脉硬化作用，血压控制，更年期改善，骨质疏松状况改善，抗压力及抗疲劳作用，抗氧化作用，预防衰老作用等等。
[0005] 目前的人参提取方法中活性成分含量不高，人体吸收利用率较低，且不同的制备方法制得的人参提取物的活性不同。另外，人参及其提取物中残留的农药种类繁多，不易降解，且普遍具有致突变、致癌、致畸的风险。
[0006] 中国专利CN102771790B公开了一种抗衰老的营养保健品，由山药萃取物、人参、鸡血藤、甘草、夜交藤、薏仁、茯苓、桂枝和牡蛎壳粉末组成，该保健品可以增进钙质的摄入减缓衰老引起的骨质疏松症，软化血管从而减缓引发心脑血管疾病、中风现象，可以缓解衰老所表现出来的典型症状，但是，其只能改善衰老表现的症状，对延缓衰老，增强免疫力的作用不明显，无法满足现代人的需要。
[0007] 因此，需要开发一种方法获得活性组分含量高，具有较好的抗肿瘤、抗衰老、抗氧化活性，易于人体吸收且几乎不含有农残含量的人参提取物具有很重要的现实意义。

发明内容

[0008] 本发明的目的在于提出一种含人参提取物的组合物及其制备方法和应用，具有较好的抗氧化、抗衰老、抗肿瘤的效果，同时，易于人体吸收且几乎不含有农残或重金属，具有溶出速率快，药效发挥快等特点，具有广阔的应用前景。
[0009] 本发明的技术方案是这样实现的：
[0010] 本发明提供一种含人参提取物的组合物的制备方法，将白参菌经过发酵获得酶液，加入人参和黄芪粉，酶解，加热至沸水提取，制得酶解水提取混合物与促发酵组合物、葡萄糖、水混合，鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌发酵，制得的发酵产物加入金属离子溶液中，搅拌制得Zn‑Fe‑发酵复合物，与白藜芦醇、虫草素混合，加入熔融的PEG6000中，分散均匀，冷冻固化，干燥，粉碎，过筛，制得含人参提取物的组合物。
[0011] 作为本发明的进一步改进，包括以下步骤：
[0012] S1.产酶发酵培养基的制备：将碳源、氮源、维生素、矿物质加入水中，灭菌，制得产酶发酵培养基；
[0013] S2.发酵产酶：将白参菌的斜面培养基中加入无菌水洗出斜面上的菌落，用缓冲液配制成菌种种子液，接种至步骤S1中的产酶发酵培养基中，发酵培养，离心除菌，得到上清液，加入硫酸铵，静置沉淀，离心，沉淀溶于缓冲液中，透析，透析液离心，收集上清液，制得酶液；
[0014] S3.酶解水提取：将人参、黄芪分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，加入步骤S2制得的酶液中，加热酶解，继续加热至沸提取，过滤，固体留用，滤液经过大孔树脂纯化，洗脱液与上述固体混合，制得酶解水提取混合物；
[0015] S4.发酵：将步骤S3制得的酶解水提取混合物、促发酵组合物、葡萄糖加入水中，灭菌，接种活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液，发酵培养，离心除去固体，收集上清液，冷冻干燥，制得发酵产物；
[0016] S5.金属离子的络合：将步骤S4制得的发酵产物加入水中，加入可溶性锌盐和可溶性铁盐，搅拌混合均匀，干燥，透析，透析液干燥，制得Zn‑Fe‑发酵复合物；
[0017] S6.添加剂的制备：将白藜芦醇、虫草素混合均匀，制得添加剂；
[0018] S7.含人参提取物的组合物的制备：将PEG6000加热至熔融，加入步骤S5制得的Zn‑Fe‑发酵复合物和步骤S6制得的添加剂，搅拌混合均匀，冷冻固化，干燥，粉碎，过筛，制得含人参提取物的组合物。
[0019] 作为本发明的进一步改进，步骤S1中所述碳源、氮源、维生素、矿物质和水的质量比为70‑100:7‑12:1‑2:0.5‑1:300‑400，所述碳源为糖度为5‑7的甘蔗汁，所述氮源选自氨基酸、氯化钠、硝酸铵、硝酸钠、硝酸钾、尿素、鱼粉、蛋白胨中的至少一种，所述氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸，所述维生素选自维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸、维生素C、维生素E、维生素D1、维生素D2、维生素D3中的至少一种，所述矿物质选自氯化钾、氯化钠、硫酸钾、硫酸钠、氯化镁、氯化铁、氯化亚铁、氯化铜、氯化锰、氯化锌、氯化钙、硫酸镁、硫酸铜、硫酸铁、硫酸锰、硫酸钙中的至少一种。
[0020] 作为本发明的进一步改进，步骤S2中所述菌种种子液的含菌量为107‑108cfu/mL，接种量为2‑3v/v％，所述发酵培养的条件为23‑26℃，50‑70r/min，发酵36‑48h，所述硫酸铵的加入量为加入至体系硫酸铵的含量为80‑85wt％，所述静置沉淀的时间为2‑4h，所述透析的透析袋孔径为1000‑1500D，所述透析的时间为3‑5h。
[0021] 作为本发明的进一步改进，步骤S3中所述人参、黄芪的质量比为10‑15:3‑5，所述混合粉、酶液的质量比为10‑15:100，所述加热酶解的温度为35‑40℃，时间为2‑4h，所述加热至沸提取的时间为1‑3h，所述大孔树脂为D101大孔树脂、HPD100大孔树脂或SYD8大孔树脂，所述纯化的方法为将样品以0.1‑0.2g/mL速率通过大孔树脂，然后以1.5‑2.5BV水洗脱，然后以3‑5BV 70wt％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇。
[0022] 作为本发明的进一步改进，步骤S4中所述酶解水提取混合物、促发酵组合物、葡萄糖、水的质量比为15‑20:2‑3:5‑7:400‑500，所述促发酵组合物包括菊粉、维生素B6和氯化钙，质量比为10‑12:0.5‑1:0.2‑0.5，所述活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液的8 9
接种量分别为2‑3v/v％和1‑2v/v％，所述菌种种子液的含菌量为10 ‑10cfu/mL，所述发酵培养的条件为37‑40℃，50‑70r/min，发酵培养48‑72h。
[0023] 作为本发明的进一步改进，步骤S5中所述可溶性锌盐选自氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、柠檬酸锌、葡萄糖酸锌中的至少一种，所述可溶性铁盐选自氯化铁、硫酸铁、硝酸铁中的至少一种；所述发酵产物、可溶性锌盐和可溶性铁盐的质量比为100:2‑3:1‑2，所述透析的透析袋孔径为300‑500D，所述透析的时间为1‑2h。
[0024] 作为本发明的进一步改进，步骤S6中所述白藜芦醇、虫草素的质量比为3‑5:7‑10；步骤S7中所述PEG6000、Zn‑Fe‑发酵复合物、添加剂的质量比为100:10‑12:3‑5，所述冷冻的温度为‑25至‑20℃，固化的时间为2‑4h，所述过筛的筛网目数为80‑100目。
[0025] 本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的含人参提取物的组合物。
[0026] 本发明进一步保护一种上述含人参提取物的组合物在制备抗衰老、抗氧化、抗肿瘤的药品中的应用。
[0027] 本发明具有如下有益效果：
[0028] 本发明首先将白参菌在产酶发酵培养基中进行发酵培养，在发酵的过程中能够产生多种酶，包括纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、蛋白酶等，能够起到很好的生物催化的作用，同时还含有一些能够促进人参中高含量皂苷向稀有皂苷的生物转化。
[0029] 本发明添加的人参和黄芪具有广泛的药理活性，其中，人参的活性成分人参皂苷具有抗凋亡、抗氧化、抗肿瘤等的作用。黄芪的活性成分黄芪多糖具有抗氧化损伤的药理作用，二者联合后能明显提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性，增加抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化物的形成，降低各组织中丙二醛(MDA)含量，能明显提高机体抗衰老、抗氧化、抗肿瘤等的能力。
[0030] 本发明向制得的酶液中加入人参和黄芪，在酶液中复合酶的作用下，能够促进人参、黄芪的植物细胞壁破壁，促进内容物溶出，大大提高了人参皂苷、人参多糖、黄芪多糖、蛋白质、黄酮、三萜等活性物质的提取率，同时，也能够催化基质中纤维素产生绿原酸、多酚等，在加热水提取的作用下，大部分活性物质得以提取出来。
[0031] 随后，将提取物经过过滤，由于人参中农残和重金属含量较高，滤液经过大孔树脂过滤纯化，大孔树脂是利用范德华力和多孔性网状结构的筛选性，在吸附能力和网孔筛选能力的双重分离作用下，根据农残及重金属离子的结构特性及洗脱液解析能力的不同，将其与提取液中其他的活性组分得以分离，可以明显脱除重金属杂质和农药残留物，具有吸附容量大、选择性好、易于解吸附、预处理方便等许多优点，还能够进一步提高提取物中活性物质的含量和纯度。
[0032] 将经过纯化和回收乙醇后的余液与过滤的固体混合得到的酶解水提取混合物接种鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌，在复合菌的协同作用下，能够促进人参提取物中常见皂苷Rb1、Rb2、Rc向稀有皂苷Rh1、Rg2、Rd、Rh4、Rh2、Rg1、Rg5、Rg3等的转化，使得稀有皂苷含量提高，稀有皂苷的含量越高，清除自由基能力越强，抗氧化能力、抗衰老能力、抗肿瘤能力越强，促进人参和黄芪提取后的固渣在发酵菌的作用下，将复杂的糖蛋白等结构发酵成小分子活性物质，进一步将这些底物被发酵菌发酵利用，产生大量的短链脂肪酸、乳酸、寡糖、多肽、氨基酸等，也能够最大程度利用微生物分泌的酶分解消耗掉糖、蛋白质等杂质，提高人参皂苷纯度，同时得到更多种类的转化产物，也显著提高了稀有皂苷转化率。发酵菌的协同作用下能够把复杂的大分子酚类物质转化成小分子酚类物质，使总酚含量增加，并破坏植物细胞壁，提高了总黄酮的含量。富硒酵母菌还能够促进产生大量的具有很好的抗氧化、抗衰老和抗肿瘤活性的含有机硒的化合物，提高了产物中硒的含量。
[0033] 在发酵过程中添加的促发酵组合物包括菊粉、维生素B6和氯化钙，菊粉是一种很好的益生元，能够选择性的促进益生菌包括鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌的增殖，大大提高了发酵菌的含菌量，维生素B6能够延长发酵菌在稳定期的时间，从而大大促进的活性物质的产生效率，氯化钙能够促进发酵菌对恶劣环境的抗性，增加其抵抗外界环境的能力，从而也提高了发酵产率。
[0034] 虫草素是冬虫夏草或蛹虫草中的主要活性组分，能够有效调控胞内谷胱甘肽(GSH)稳态，从而抑制活性氧自由基(ROS)的大量累积，通过激活PI3K/Akt信号通路，上调胞内抗氧化防御水平，进而防止细胞氧化损伤，实现抗衰老。白藜芦醇是一种非黄酮类多酚化合物，具有极好的抗氧化、抗衰老、抗癌的作用，可以通过激活沉默信息因子SIRT1，模拟热量限制抗衰老反应，参与有机生物平均生命期的调控，延缓衰老和延长寿命，同时对多种肿瘤细胞均有显著的抑制作用。两者通过协同增效的作用，能够发挥出更好的抗肿瘤、抗衰老、抗氧化的作用。
[0035] 本发明将制得的发酵产物与锌离子、铁离子混合后，形成的络合物，可以提高机体多种酶的活力，增强机体清除自由基的能力，从而有效地保护生物膜的结构和功能，保护细胞膜免受氧自由基的破坏，延长细胞寿命，提高人体免疫力，提高抗肿瘤的能力，两者具有协同增效的作用。
[0036] 本发明将制得的Zn‑Fe‑发酵复合物和添加剂加入PEG6000熔融体中，将难溶性的Zn‑Fe‑发酵复合物与适宜载体PEG6000形成固体分散体，由于载体材料PEG6000的抑晶作用，药物以无定型态分散态存在，且增加药物的可润湿性，从而与胃肠液接触后，加快药物的溶出速度，促进药物的吸收，改善了Zn‑Fe‑发酵复合物的体外溶出特征，加快了药物的溶出速率，促进了药效的发挥。
[0037] 本发明制得的含人参提取物的组合物具有较好的抗氧化、抗衰老、抗肿瘤的效果，同时，易于人体吸收且几乎不含有农残或重金属，具有溶出速率快，药效发挥快等特点，具有广阔的应用前景。

具体实施方式

[0038] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0039] 白参菌，购于菇路通(云南)农业发展有限公司；鼠李糖乳杆菌，100亿cfu/g，购于西安雅图生物科技有限公司；富硒酵母菌购于安琪酵母股份有限公司。
[0040] D101大孔树脂，购于德州润昕实验仪器有限公司；HPD100大孔树脂，购于廊坊淼阳化工有限公司。
[0041] 活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液的制备方法：将鼠李糖乳杆菌和富8
硒酵母菌分别接种至高氏培养基中，38℃，70r/min，发酵培养24h，制得含菌量为10cfu/mL的菌种种子液。
[0042] 实施例1
[0043] 本实施例提供一种含人参提取物的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
[0044] S1.产酶发酵培养基的制备：将70重量份糖度为7的甘蔗汁、7重量份尿素、0.3重量份维生素A、0.5重量份维生素C、0.2重量份维生素E、0.2重量份硫酸钠、0.05重量份氯化镁、0.1重量份氯化铁、0.05重量份氯化亚铁、0.1重量份氯化铜加入300重量份水中，灭菌，制得产酶发酵培养基；
[0045] S2.发酵产酶：将白参菌的斜面培养基中加入无菌水洗出斜面上的菌落，用pH＝77
的PBS缓冲液配制成菌种种子液，含菌量为10cfu/mL，接种至步骤S1中的产酶发酵培养基中，接种量为2v/v％，23℃，50r/min，发酵培养36h，离心除菌，得到上清液，加入硫酸铵至体系硫酸铵的含量为80wt％，静置沉淀4h，离心，沉淀溶于pH＝7的PBS缓冲液中，用孔径为
1000D的透析袋透析3h，透析液离心，收集上清液，制得酶液；
[0046] S3.酶解水提取：将10重量份人参、3重量份黄芪分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，将10重量份混合粉加入100重量份步骤S2制得的酶液中，加热至35℃，酶解2h，继续加热至沸提取1h，过滤，固体留用，滤液以0.1g/mL速率通过D101大孔树脂，然后以1.5BV水洗脱，然后以3BV 70wt％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，余液与上述固体混合，制得酶解水提取混合物；
[0047] S4.发酵：将15重量份步骤S3制得的酶解水提取混合物、2重量份促发酵组合物、5重量份葡萄糖加入400重量份水中，灭菌，接种活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液，所述活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液的接种量分别为2v/v％和1v/v％，37℃，50r/min，发酵培养48h，离心除去固体，收集上清液，冷冻干燥，制得发酵产物；
[0048] 所述促发酵组合物包括菊粉、维生素B6和氯化钙，质量比为10:0.5:0.2；
[0049] S5.金属离子的络合：将100重量份步骤S4制得的发酵产物加入500重量份水中，加入2重量份硝酸锌和1重量份氯化铁，搅拌混合20min，干燥，用孔径为300D的透析袋透析1h，透析液干燥，制得Zn‑Fe‑发酵复合物；
[0050] S6.添加剂的制备：将3重量份白藜芦醇、7重量份虫草素搅拌混合15min，制得添加剂；
[0051] S7.含人参提取物的组合物的制备：将100重量份PEG6000加热至熔融，加入10重量份步骤S5制得的Zn‑Fe‑发酵复合物和3重量份步骤S6制得的添加剂，搅拌混合30min，‑25℃冷冻固化2h，干燥，粉碎，过80目筛，制得含人参提取物的组合物。
[0052] 实施例2
[0053] 本实施例提供一种含人参提取物的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
[0054] S1.产酶发酵培养基的制备：将100重量份糖度为5的甘蔗汁、12重量份鱼粉、0.3重量份重量份维生素B12、0.5重量份叶酸、1重量份维生素C、0.2重量份维生素E、0.4重量份重量份氯化钠、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份硫酸铜、0.1重量份硫酸铁、0.1重量份硫酸锰、0.1重量份硫酸钙加入400重量份水中，灭菌，制得产酶发酵培养基；
[0055] S2.发酵产酶：将白参菌的斜面培养基中加入无菌水洗出斜面上的菌落，用pH＝78
的PBS缓冲液配制成菌种种子液，含菌量为10cfu/mL，接种至步骤S1中的产酶发酵培养基中，接种量为3v/v％，26℃，70r/min，发酵培养48h，离心除菌，得到上清液，加入硫酸铵至体系硫酸铵的含量为85wt％，静置沉淀2h，离心，沉淀溶于pH＝7的PBS缓冲液中，用孔径为
1500D的透析袋透析5h，透析液离心，收集上清液，制得酶液；
[0056] S3.酶解水提取：将15重量份人参、5重量份黄芪分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，将15重量份混合粉加入100重量份步骤S2制得的酶液中，加热至40℃，酶解4h，继续加热至沸提取3h，过滤，固体留用，滤液以0.2g/mL速率通过HPD100大孔树脂，然后以2.5BV水洗脱，然后以5BV 70wt％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，余液与上述固体混合，制得酶解水提取混合物；
[0057] S4.发酵：将20重量份步骤S3制得的酶解水提取混合物、3重量份促发酵组合物、7重量份葡萄糖加入500重量份水中，灭菌，接种活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液，所述活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液的接种量分别为3v/v％和2v/v％，40℃，70r/min，发酵培养72h，离心除去固体，收集上清液，冷冻干燥，制得发酵产物；
[0058] 所述促发酵组合物包括菊粉、维生素B6和氯化钙，质量比为12:1:0.5；
[0059] S5.金属离子的络合：将100重量份步骤S4制得的发酵产物加入500重量份水中，加入3重量份氯化锌和2重量份硫酸铁，搅拌混合20min，干燥，用孔径为500D的透析袋透析2h，透析液干燥，制得Zn‑Fe‑发酵复合物；
[0060] S6.添加剂的制备：将5重量份白藜芦醇、10重量份虫草素搅拌混合15min，制得添加剂；
[0061] S7.含人参提取物的组合物的制备：将100重量份PEG6000加热至熔融，加入12重量份步骤S5制得的Zn‑Fe‑发酵复合物和5重量份步骤S6制得的添加剂，搅拌混合30min，‑20℃冷冻固化4h，干燥，粉碎，过100目筛，制得含人参提取物的组合物。
[0062] 实施例3
[0063] 本实施例提供一种含人参提取物的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
[0064] S1.产酶发酵培养基的制备：将85重量份糖度为6的甘蔗汁、10重量份蛋白胨、0.4重量份重量份维生素B1、0.3重量份叶酸、0.6重量份维生素C、0.2重量份维生素E、0.4重量份重量份氯化钠、0.1重量份硫酸镁、0.05重量份硫酸铜、0.05重量份氯化铁、0.05重量份氯化锰、0.05重量份硫酸钙加入350重量份水中，灭菌，制得产酶发酵培养基；
[0065] S2.发酵产酶：将白参菌的斜面培养基中加入无菌水洗出斜面上的菌落，用pH＝78
的PBS缓冲液配制成菌种种子液，含菌量为10cfu/mL，接种至步骤S1中的产酶发酵培养基中，接种量为2.5v/v％，25℃，60r/min，发酵培养42h，离心除菌，得到上清液，加入硫酸铵至体系硫酸铵的含量为82wt％，静置沉淀3h，离心，沉淀溶于pH＝7的PBS缓冲液中，用孔径为
1200D的透析袋透析4h，透析液离心，收集上清液，制得酶液；
[0066] S3.酶解水提取：将12重量份人参、4重量份黄芪分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，将12重量份混合粉加入100重量份步骤S2制得的酶液中，加热至37℃，酶解3h，继续加热至沸提取2h，过滤，固体留用，滤液以0.15g/mL速率通过D101大孔树脂，然后以2BV水洗脱，然后以4BV 70wt％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，余液与上述固体混合，制得酶解水提取混合物；
[0067] S4.发酵：将17重量份步骤S3制得的酶解水提取混合物、2.5重量份促发酵组合物、6重量份葡萄糖加入450重量份水中，灭菌，接种活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液，所述活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液的接种量分别为2.5v/v％和
1.5v/v％，38℃，60r/min，发酵培养56h，离心除去固体，收集上清液，冷冻干燥，制得发酵产物；
[0068] 所述促发酵组合物包括菊粉、维生素B6和氯化钙，质量比为11:0.7:0.35；
[0069] S5.金属离子的络合：将100重量份步骤S4制得的发酵产物加入500重量份水中，加入2.5重量份葡萄糖酸锌和1.5重量份硝酸铁，搅拌混合20min，干燥，用孔径为400D的透析袋透析1.5h，透析液干燥，制得Zn‑Fe‑发酵复合物；
[0070] S6.添加剂的制备：将4重量份白藜芦醇、8.5重量份虫草素搅拌混合15min，制得添加剂；
[0071] S7.含人参提取物的组合物的制备：将100重量份PEG6000加热至熔融，加入11重量份步骤S5制得的Zn‑Fe‑发酵复合物和4重量份步骤S6制得的添加剂，搅拌混合30min，‑22℃冷冻固化3h，干燥，粉碎，过90目筛，制得含人参提取物的组合物。
[0072] 实施例4
[0073] 与实施例3相比，不同之处在于，步骤S5中未添加葡萄糖酸锌。
[0074] 实施例5
[0075] 与实施例3相比，不同之处在于，步骤S5中未添加硝酸铁。
[0076] 实施例6
[0077] 与实施例3相比，不同之处在于，促发酵组合物中未添加菊粉，包括维生素B6和氯化钙，质量比为0.7:0.35。
[0078] 实施例7
[0079] 与实施例3相比，不同之处在于，促发酵组合物中未添加维生素B6，包括菊粉和氯化钙，质量比为11:0.35。
[0080] 实施例8
[0081] 与实施例3相比，不同之处在于，促发酵组合物中未添加氯化钙，包括菊粉、维生素B6，质量比为11:0.7。
[0082] 对比例1
[0083] 与实施例3相比，不同之处在于，步骤S3中未添加黄芪。
[0084] 具体如下：
[0085] S3.酶解水提取：将16重量份人参洗净，干燥，粉碎，得到粉料，将12重量份粉料加入100重量份步骤S2制得的酶液中，加热至37℃，酶解3h，继续加热至沸提取2h，过滤，固体留用，滤液以0.15g/mL速率通过D101大孔树脂，然后以2BV水洗脱，然后以4BV 70wt％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，余液与上述固体混合，制得酶解水提取混合物。
[0086] 对比例2
[0087] 与实施例3相比，不同之处在于，未进行步骤S1和S2，步骤S3中酶液由含有100U/mL纤维素酶和50U/mL果胶酶的混合酶液替代。
[0088] 具体如下：
[0089] S3.酶解水提取：将12重量份人参、4重量份黄芪分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，将12重量份混合粉加入100重量份含有100U/mL纤维素酶和50U/mL果胶酶的混合酶液中，加热至37℃，酶解3h，继续加热至沸提取2h，过滤，固体留用，滤液以0.15g/mL速率通过D101大孔树脂，然后以2BV水洗脱，然后以4BV 70wt％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，余液与上述固体混合，制得酶解水提取混合物。
[0090] 对比例3
[0091] 与实施例3相比，不同之处在于，未进行步骤S1和S2，步骤S3中未进行酶解，直接进行加热至沸提取。
[0092] 具体如下：
[0093] S3.酶解水提取：将12重量份人参、4重量份黄芪分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，将12重量份混合粉加入100重量份水中，加热至沸提取2h，过滤，固体留用，滤液以0.15g/mL速率通过D101大孔树脂，然后以2BV水洗脱，然后以4BV 70wt％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，余液与上述固体混合，制得酶解水提取混合物。
[0094] 对比例4
[0095] 与实施例3相比，不同之处在于，步骤S4中未接种鼠李糖乳杆菌菌种种子液。
[0096] 具体如下：
[0097] S4.发酵：将17重量份步骤S3制得的酶解水提取混合物、2.5重量份促发酵组合物、6重量份葡萄糖加入450重量份水中，灭菌，接种活化的富硒酵母菌菌种种子液，所述活化的富硒酵母菌菌种种子液的接种量为4v/v％，38℃，60r/min，发酵培养56h，离心除去固体，收集上清液，冷冻干燥，制得发酵产物；
[0098] 所述促发酵组合物包括菊粉、维生素B6和氯化钙，质量比为11:0.7:0.35。
[0099] 对比例5
[0100] 与实施例3相比，不同之处在于，步骤S4中未接种富硒酵母菌菌种种子液。
[0101] 具体如下：
[0102] S4.发酵：将17重量份步骤S3制得的酶解水提取混合物、2.5重量份促发酵组合物、6重量份葡萄糖加入450重量份水中，灭菌，接种活化的鼠李糖乳杆菌菌种种子液，所述活化的鼠李糖乳杆菌菌种种子液的接种量为4v/v％，38℃，60r/min，发酵培养56h，离心除去固体，收集上清液，冷冻干燥，制得发酵产物；
[0103] 所述促发酵组合物包括菊粉、维生素B6和氯化钙，质量比为11:0.7:0.35。
[0104] 对比例6
[0105] 与实施例3相比，不同之处在于，步骤S4中未添加促发酵组合物。
[0106] 具体如下：
[0107] S4.发酵：将17重量份步骤S3制得的酶解水提取混合物、6重量份葡萄糖加入450重量份水中，灭菌，接种活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液，所述活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液的接种量分别为2.5v/v％和1.5v/v％，38℃，60r/min，发酵培养56h，离心除去固体，收集上清液，冷冻干燥，制得发酵产物。
[0108] 对比例7
[0109] 与实施例3相比，不同之处在于，未进行步骤S4。
[0110] 具体如下：
[0111] S1.产酶发酵培养基的制备：将85重量份糖度为6的甘蔗汁、10重量份蛋白胨、0.4重量份重量份维生素B1、0.3重量份叶酸、0.6重量份维生素C、0.2重量份维生素E、0.4重量份重量份氯化钠、0.1重量份硫酸镁、0.05重量份硫酸铜、0.05重量份氯化铁、0.05重量份氯化锰、0.05重量份硫酸钙加入350重量份水中，灭菌，制得产酶发酵培养基；
[0112] S2.发酵产酶：将白参菌的斜面培养基中加入无菌水洗出斜面上的菌落，用pH＝78
的PBS缓冲液配制成菌种种子液，含菌量为10cfu/mL，接种至步骤S1中的产酶发酵培养基中，接种量为2.5v/v％，25℃，60r/min，发酵培养42h，离心除菌，得到上清液，加入硫酸铵至体系硫酸铵的含量为82wt％，静置沉淀3h，离心，沉淀溶于pH＝7的PBS缓冲液中，用孔径为
1200D的透析袋透析4h，透析液离心，收集上清液，制得酶液；
[0113] S3.酶解水提取：将12重量份人参、4重量份黄芪分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，将12重量份混合粉加入100重量份步骤S2制得的酶液中，加热至37℃，酶解3h，继续加热至沸提取2h，过滤，固体留用，滤液以0.15g/mL速率通过D101大孔树脂，然后以2BV水洗脱，然后以4BV 70wt％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，余液与上述固体混合，制得酶解水提取混合物；
[0114] S4.金属离子的络合：将100重量份步骤S3制得的酶解水提取混合物加入500重量份水中，加入2.5重量份葡萄糖酸锌和1.5重量份硝酸铁，搅拌混合20min，干燥，用孔径为400D的透析袋透析1.5h，透析液干燥，制得Zn‑Fe‑发酵复合物；
[0115] S5.添加剂的制备：将4重量份白藜芦醇、8.5重量份虫草素搅拌混合15min，制得添加剂；
[0116] S6.含人参提取物的组合物的制备：将100重量份PEG6000加热至熔融，加入11重量份步骤S4制得的Zn‑Fe‑发酵复合物和4重量份步骤S5制得的添加剂，搅拌混合30min，‑22℃冷冻固化3h，干燥，粉碎，过90目筛，制得含人参提取物的组合物。
[0117] 对比例8
[0118] 与实施例3相比，不同之处在于，未进行步骤S5。
[0119] 具体如下：
[0120] S1.产酶发酵培养基的制备：将85重量份糖度为6的甘蔗汁、10重量份蛋白胨、0.4重量份重量份维生素B1、0.3重量份叶酸、0.6重量份维生素C、0.2重量份维生素E、0.4重量份重量份氯化钠、0.1重量份硫酸镁、0.05重量份硫酸铜、0.05重量份氯化铁、0.05重量份氯化锰、0.05重量份硫酸钙加入350重量份水中，灭菌，制得产酶发酵培养基；
[0121] S2.发酵产酶：将白参菌的斜面培养基中加入无菌水洗出斜面上的菌落，用pH＝78
的PBS缓冲液配制成菌种种子液，含菌量为10cfu/mL，接种至步骤S1中的产酶发酵培养基中，接种量为2.5v/v％，25℃，60r/min，发酵培养42h，离心除菌，得到上清液，加入硫酸铵至体系硫酸铵的含量为82wt％，静置沉淀3h，离心，沉淀溶于pH＝7的PBS缓冲液中，用孔径为
1200D的透析袋透析4h，透析液离心，收集上清液，制得酶液；
[0122] S3.酶解水提取：将12重量份人参、4重量份黄芪分别洗净，干燥，粉碎，得到混合粉，将12重量份混合粉加入100重量份步骤S2制得的酶液中，加热至37℃，酶解3h，继续加热至沸提取2h，过滤，固体留用，滤液以0.15g/mL速率通过D101大孔树脂，然后以2BV水洗脱，然后以4BV 70wt％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，余液与上述固体混合，制得酶解水提取混合物；
[0123] S4.发酵：将17重量份步骤S3制得的酶解水提取混合物、2.5重量份促发酵组合物、6重量份葡萄糖加入450重量份水中，灭菌，接种活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液，所述活化的鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌菌种种子液的接种量分别为2.5v/v％和
1.5v/v％，38℃，60r/min，发酵培养56h，离心除去固体，收集上清液，冷冻干燥，制得发酵产物；
[0124] 所述促发酵组合物包括菊粉、维生素B6和氯化钙，质量比为11:0.7:0.35；
[0125] S5.添加剂的制备：将4重量份白藜芦醇、8.5重量份虫草素搅拌混合15min，制得添加剂；
[0126] S6.含人参提取物的组合物的制备：将100重量份PEG6000加热至熔融，加入11重量份步骤S4制得的发酵产物和4重量份步骤S5制得的添加剂，搅拌混合30min，‑22℃冷冻固化3h，干燥，粉碎，过90目筛，制得含人参提取物的组合物。
[0127] 对比例9
[0128] 与实施例3相比，不同之处在于，步骤S6中未添加白藜芦醇。
[0129] 具体如下：
[0130] S6.添加剂的制备：虫草素为添加剂。
[0131] 对比例10
[0132] 与实施例3相比，不同之处在于，步骤S6中未添加虫草素。
[0133] 具体如下：
[0134] S6.添加剂的制备：白藜芦醇为添加剂。
[0135] 对比例11
[0136] 与实施例3相比，不同之处在于，步骤S7中未添加添加剂。
[0137] 具体如下：
[0138] S7.含人参提取物的组合物的制备：将100重量份PEG6000加热至熔融，加入15重量份步骤S5制得的Zn‑Fe‑发酵复合物搅拌混合30min，‑22℃冷冻固化3h，干燥，粉碎，过90目筛，制得含人参提取物的组合物。
[0139] 对比例12
[0140] 与实施例3相比，不同之处在于，步骤S7中为Zn‑Fe‑发酵复合物和添加剂的简单混合。
[0141] 具体如下：
[0142] S7.含人参提取物的组合物的制备：将11重量份步骤S5制得的Zn‑Fe‑发酵复合物和4重量份步骤S6制得的添加剂搅拌混合30min，制得含人参提取物的组合物。
[0143] 测试例1抗氧化实验
[0144] 1、清除羟基自由基能力测定
[0145] 向具塞试管中分别加入0.2mL 10mmol/L的FeSO4‑EDTA混合液，0.2mL 20mmol/L的2‑D‑脱氧核糖溶液溶液，0.2mL 1mg/mL实施例1‑8或对比例1‑12制得的含人参提取物的组合物，并用pH＝7的PBS缓冲液补充至1.8mL，然后加入0.2mL 10mmol/L的H2O2溶液，37℃水浴加热反应1h，加入1mL 10％的三氯乙酸终止反应，再加入1mL 1％的硫代巴比妥酸，混匀后沸水浴中加热10min，冷却后离心取上清液，于532nm处测定吸光度。以维生素C(1mg/mL)为阳性对照组。
[0146] 羟基自由基的清除率/％＝(A对照‑A样品)/A对照×100
[0147] 2、对过氧化氢诱导的脂质过氧化的影响
[0148] 取小鼠的肝组织洗净后冰浴下匀浆，制成1wt％的悬浮液。取1mL此悬浮液，0.1mL1mg/mL实施例1‑8或对比例1‑12制得的含人参提取物的组合物溶液、0.1mL 6mmol/L FeSO4溶液、0.1mL 60mmol/L H2O2溶液，对照组加0.1mL的pH＝7的PBS缓冲液。37℃温育1h后，加入1mL 15％三氯乙酸终止反应，离心取上清液，加入1mL 0.67％硫代巴比妥酸后，沸水浴15min，流水冷却，测定波长532nm处的吸光度。以维生素C(1mg/mL)为阳性对照组。
[0149] 脂质过氧化抑制率/％＝(A对照‑A样本)/A对照×100
[0150] 结果见表1。
[0151] 表1
[0152]
[0153]
[0154] 由上表可知，本发明实施例1‑3制得的含人参提取物的组合物具有较好的抗氧化能力。
[0155] 测试例2抗氧化损伤能力测试
[0156] 1、对SH‑SY5Y细胞增殖的影响
[0157] 将SH‑SY5Y细胞(浓度为5.5×104个/mL)接种后，随机分为调零组、对照组、实验组(分为实施例1‑8组、对比例1‑12组)。孵育24h后，实验组加入相应制得的含药DMEM培养基200μL并使药物的终浓度为5mg/mL，对照组加入等量的DMEM培养基，调零组只加200μL的培养基，不含药物和细胞。24h后，测细胞存活率。结果见表2。
[0158] 细胞存活率＝(A实验‑A调零)/(A对照‑A调零)×100％，其中A为吸光度。
[0159] 表2
[0160]
[0161]
[0162] 由上表可知，本发明实施例1‑3制得的含人参提取物的组合物可使得SH‑SY5Y细胞存活率增加。
[0163] 2、对SH‑SY5Y细胞损伤的影响
[0164] 将SH‑SY5Y细胞(浓度为5.5×104个/mL)接种后，随机分为调零组、对照组、实验组(分为实施例1‑8组、对比例1‑12组)、损伤模型组。孵育24h后，实验组加入相应制得的含药DMEM培养基200μL并使药物的终浓度为5mg/mL，对照组和损伤模型组加入等量的DMEM培养基，调零组只加200μL的培养基，预培养24h后，实验组和损伤模型组分别加入150μmol/L的H2O2孵育1.5h后，测细胞存活率。
[0165] 细胞存活率＝(A实验‑A调零)/(A对照‑A调零)×100％，其中A为吸光度。
[0166] 结果见表3。
[0167] 表3
[0168]
[0169]
[0170] 由上表可知，本发明实施例1‑3制得的含人参提取物的组合物可明显使得受H2O2氧化损伤后的SH‑SY5Y细胞的存活率提高。
[0171] 测试例2抗衰老能力测试
[0172] 将SPF级KM小鼠，雄性，18‑22g，适应性饲养7天，进行水迷宫实验，用水迷宫每天训练一次，前6次进行训练，第7次进行筛选，选出能在60s内找到平台的为合格小鼠，随机分为23组，分别为正常组、模型组、阳性对照组、实施例1‑8组、对比例1‑12组，每组6只；正常组每天采用生理盐水皮下注射联合腹腔注射，并用生理盐水进行灌胃；模型组、阳性对照组、实施例1‑8组、对比例1‑12组采用皮下注射150mg/kg D‑半乳糖联合腹腔注射50mg/kg亚硝酸钠构建小鼠衰老模型，阳性对照组造模后灌胃1g/kg维生素E，实施例1‑8组、对比例1‑12组造模后灌胃1g/kg相应制得的药物，第7周时进行水迷宫实验，所有样品均溶于生理盐水，连续实验8周。
[0173] 1、水迷宫实验后潜伏期
[0174] 造模给药的第7周各组小鼠进行水迷宫实验，试验时将大鼠面向水池壁放入水池中没有躲避平台的象限区域，记录大鼠出水时间(潜伏期)。结果见表4。
[0175] 表4
[0176]
[0177]
[0178] 注释：*为与正常组相比，P<0.05；#为与模型组相比，P<0.05。
[0179] 由上表可知，本发明实施例1‑3制得的含人参提取物的组合物能明显缩短小鼠水迷宫实验中潜伏期，对D‑半乳糖所致的小鼠学习记忆能力降低有很好的抑制作用。
[0180] 2、血清及各脏器组织中SOD、GSH‑Px活性及MDA水平检测
[0181] 小鼠连续8周给药后，摘眼球取血，离心，获得血清；然后将脑10％的组织进行匀浆，获得匀浆液，离心，后取上清液；采用ELISA法参照试剂盒说明书要求检测血清及各脏器组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH‑Px)活性及丙二醛(MDA)水平。结果见表5。
[0182] 表5
[0183]
[0184]
[0185] 注释：*为与正常组相比，P<0.05；#为与模型组相比，P<0.05。
[0186] 由上表可知，本发明实施例1‑3制得的含人参提取物的组合物能明显降低血清、脑组织中MDA的水平，提高SOD和GSH‑Px的活性，提高机体抗氧化能力。
[0187] 实施例4、5与实施例3相比，步骤S5中未添加葡萄糖酸锌或硝酸铁。对比例8与实施例3相比，未进行步骤S5。抗氧化能力、抗氧化损伤和抗衰老能力下降。本发明将制得的发酵产物与锌离子、铁离子混合后，形成的络合物，可以提高机体多种酶的活力，增强机体清除自由基的能力，从而有效地保护生物膜的结构和功能，保护细胞膜免受氧自由基的破坏，延长细胞寿命，提高人体免疫力，提高抗肿瘤的能力，两者具有协同增效的作用。
[0188] 实施例6、7、8与实施例3相比，促发酵组合物中未添加菊粉、维生素B6或氯化钙。对比例6与实施例3相比，步骤S4中未添加促发酵组合物。抗氧化能力、抗氧化损伤和抗衰老能力下降。在发酵过程中添加的促发酵组合物包括菊粉、维生素B6和氯化钙，菊粉是一种很好的益生元，能够选择性的促进益生菌包括鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌的增殖，大大提高了发酵菌的含菌量，维生素B6能够延长发酵菌在稳定期的时间，从而大大促进的活性物质的产生效率，氯化钙能够促进发酵菌对恶劣环境的抗性，增加其抵抗外界环境的能力，从而也提高了发酵产率。
[0189] 对比例1与实施例3相比，步骤S3中未添加黄芪。抗氧化损伤和抗衰老能力下降。本发明添加的人参和黄芪具有广泛的药理活性，其中，人参的活性成分人参皂苷具有抗凋亡、抗氧化、抗肿瘤等的作用。黄芪的活性成分黄芪多糖具有抗氧化损伤的药理作用，二者联合后能明显提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性，增加抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化物的形成，降低各组织中丙二醛(MDA)含量，能明显提高机体抗衰老、抗氧化、抗肿瘤等的能力。
[0190] 对比例2与实施例3相比，未进行步骤S1和S2，步骤S3中酶液由含有100U/mL纤维素酶和50U/mL果胶酶的混合酶液替代。对比例3与实施例3相比，未进行步骤S1和S2，步骤S3中未进行酶解，直接进行加热至沸提取。抗氧化能力、抗氧化损伤和抗衰老能力下降。本发明首先将白参菌在产酶发酵培养基中进行发酵培养，在发酵的过程中能够产生多种酶，包括纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、蛋白酶等，能够起到很好的生物催化的作用，同时还含有一些能够促进人参中高含量皂苷向稀有皂苷的生物转化。本发明向制得的酶液中加入人参和黄芪，在酶液中复合酶的作用下，能够促进人参、黄芪的植物细胞壁破壁，促进内容物溶出，大大提高了人参皂苷、人参多糖、黄芪多糖、蛋白质、黄酮、三萜等活性物质的提取率，同时，也能够催化基质中纤维素产生绿原酸、多酚等，在加热水提取的作用下，大部分活性物质得以提取出来。
[0191] 对比例4、5与实施例3相比，步骤S4中未接种鼠李糖乳杆菌菌种种子液或富硒酵母菌菌种种子液。对比例7与实施例3相比，未进行步骤S4。抗氧化能力、抗氧化损伤和抗衰老能力下降。将经过纯化和回收乙醇后的余液与过滤的固体混合得到的酶解水提取混合物接种鼠李糖乳杆菌和富硒酵母菌，在复合菌的协同作用下，能够促进人参提取物中常见皂苷Rb1、Rb2、Rc向稀有皂苷Rh1、Rg2、Rd、Rh4、Rh2、Rg1、Rg5、Rg3等的转化，使得稀有皂苷含量提高，稀有皂苷的含量越高，清除自由基能力越强，抗氧化能力、抗衰老能力、抗肿瘤能力越强，促进人参和黄芪提取后的固渣在发酵菌的作用下，将复杂的糖蛋白等结构发酵成小分子活性物质，进一步将这些底物被发酵菌发酵利用，产生大量的短链脂肪酸、乳酸、寡糖、多肽、氨基酸等，也能够最大程度利用微生物分泌的酶分解消耗掉糖、蛋白质等杂质，提高人参皂苷纯度，同时得到更多种类的转化产物，也显著提高了稀有皂苷转化率。发酵菌的协同作用下能够把复杂的大分子酚类物质转化成小分子酚类物质，使总酚含量增加，并破坏植物细胞壁，提高了总黄酮的含量。富硒酵母菌还能够促进产生大量的具有很好的抗氧化、抗衰老和抗肿瘤活性的含有机硒的化合物，提高了产物中硒的含量。
[0192] 对比例9、10与实施例3相比，步骤S6中未添加白藜芦醇或虫草素。抗氧化能力、抗氧化损伤和抗衰老能力下降。对比例11与实施例3相比，步骤S7中未添加添加剂。虫草素是冬虫夏草或蛹虫草中的主要活性组分，能够有效调控胞内谷胱甘肽(GSH)稳态，从而抑制活性氧自由基(ROS)的大量累积，通过激活PI3K/Akt信号通路，上调胞内抗氧化防御水平，进而防止细胞氧化损伤，实现抗衰老。白藜芦醇是一种非黄酮类多酚化合物，具有极好的抗氧化、抗衰老、抗癌的作用，可以通过激活沉默信息因子SIRT1，模拟热量限制抗衰老反应，参与有机生物平均生命期的调控，延缓衰老和延长寿命，同时对多种肿瘤细胞均有显著的抑制作用。两者通过协同增效的作用，能够发挥出更好的抗肿瘤、抗衰老、抗氧化的作用。
[0193] 对比例12与实施例3相比，步骤S7中为Zn‑Fe‑发酵复合物和添加剂的简单混合。抗氧化能力、抗氧化损伤和抗衰老能力下降。本发明将制得的Zn‑Fe‑发酵复合物和添加剂加入PEG6000熔融体中，将难溶性的Zn‑Fe‑发酵复合物与适宜载体PEG6000形成固体分散体，由于载体材料PEG6000的抑晶作用，药物以无定型态分散态存在，且增加药物的可润湿性，从而与胃肠液接触后，加快药物的溶出速度，促进药物的吸收，改善了Zn‑Fe‑发酵复合物的体外溶出特征，加快了药物的溶出速率，促进了药效的发挥。
[0194] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

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