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副干酪乳杆菌K56在抗衰老、提高先天免疫方面的新应用
申请号	CN202311531094.0	申请日	2020-11-16	公开(公告)号	CN117860789A	公开(公告)日	2024-04-12
申请人	内蒙古伊利实业集团股份有限公司; 内蒙古乳业技术研究院有限责任公司;			发明人	刘伟贤; 赵雯; 洪维鍊; 吉塞拉·阿德里安娜·怀斯;
摘要	本发明提供了副干酪乳杆菌K56的新应用。本发明的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K56的保藏编号为DSM27447或CGMCC No.15139。本发明发现该菌株单菌即具有抗衰老、提高生物体先天免疫、提升生物体对金黄色葡萄球菌感染的抵御能力等功效，从而提供了一种副干酪乳杆菌在制备具有抗衰老、可提高生物体先天免疫、和/或提升生物体对金黄色葡萄球菌感染抵御能力功效的组合物中的应用，其中所述副干酪乳杆菌为保藏编号DSM27447或CGMCC No.15139的副干酪乳杆菌。
权利要求	1.一种副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)在制备具有抗衰老、可提高生物体先天免疫、和/或提升生物体对金黄色葡萄球菌感染抵御能力功效的组合物中的应用，其中所述副干酪乳杆菌为保藏编号DSM27447或CGMCC No.15139的副干酪乳杆菌。 2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述提升生物体对金黄色葡萄球菌感染抵御能力包括：提升个体预防金黄色葡萄球菌感染的能力，降低金黄色葡萄球菌感染个体的能力，和/或缓解金黄色葡萄球菌感染引起的个体食物中毒、肠炎、肺炎、皮肤感染、伤口溃烂和/或脑膜炎。 3.根据权利要求1所述的应用，其中，所述副干酪乳杆菌以固态或液态菌制剂的形式用于制备所述组合物；优选地，所述组合物包括食品组合物、饲料组合物、化妆品组合物或药品组合物。 4.根据权利要求3所述的应用，其中，所述药品组合物还包括药学上可接受的辅料，所述辅料包括赋型剂、稀释剂、填充剂和/或吸收促进剂。 5.根据权利要求3所述的应用，其中，所述食品组合物包括粉剂、锭剂、造粒、微胶囊、液体制剂和/或其他剂型。 6.根据权利要求1所述的应用，其中，所述组合物是用于缓解由于金黄色葡萄球菌感染导致的食物中毒、肠炎、肺炎、皮肤感染、伤口溃烂和/或脑膜炎； 3 12 优选地，其中，所述副干酪乳杆菌的应用量为1.0×10 CFU～1.0×10 CFU/天，更优选 7 11 为1.0×10CFU～1.0×10 CFU/天。 7.根据权利要求1所述的应用，其中，所述组合物是用于抗衰老： 3 12 优选地，其中，所述副干酪乳杆菌的应用量为1.0×10 CFU～1.0×10 CFU/天，更优选 7 11 为1.0×10CFU～1.0×10 CFU/天。 8.根据权利要求1所述的应用，其中，所述组合物是用于提高先天免疫； 3 12 优选地，其中，所述副干酪乳杆菌的应用量为1.0×10 CFU～1.0×10 CFU/天，更优选 7 11 为1.0×10CFU～1.0×10 CFU/天。 9.根据权利要求6‑8中任一项所述的应用，其中，所述组合物为食品组合物。 10.根据权利要求9中任一项所述的应用，其中，所述食品为发酵乳制品、乳酪、含乳饮料、固体饮料或乳粉。
说明书全文	副干酪乳杆菌K56在抗衰老、提高先天免疫方面的新应用 [0001] 本发明是申请号为202011278443.9、申请日为2020年11月16日、发明名称为“副干酪乳杆菌K56在抗衰老、提高先天免疫方面的新应用”的分案申请。技术领域 [0002] 本发明涉及微生物技术领域，尤其是涉及一种副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K56(保藏编号DSM27447或CGMCC No.15139)在制备具有抗衰老、可提高生物体先天免疫、和/或提升生物体对金黄色葡萄球菌感染抵御能力功效的组合物中的新用途。背景技术 [0003] 在体内各种各样的生理过程中，免疫系统是最容易受到攻击的。免疫系统与体内大多数器官和细胞保持持续接触，它的改变势必影响这些器官的组织细胞。随着年龄的增长，免疫系统的功能逐步减退，先天性免疫应答和获得性免疫应答都会随之下降，由此诱发出一些严重影响组织器官的疾病，加剧了机体各系统的衰老。免疫衰老(immunosenescence)就是指由于免疫功能调节失常而导致的易患慢性和急性疾病的现象。免疫功能的衰退是造成机体衰老的重要因素之一，因此机体免疫功能的加强能减少病理性衰老的发生。 [0004] 益生菌是一类通过改变宿主某一部位菌群的组成，从而产生有利于宿主健康作用的单一或组成明确的混合微生物。益生作用则是指某种微生物制剂或发酵制品通过调节宿主黏膜与系统免疫功能以及改善肠道营养与菌群平衡对宿主所产生的有益的生理作用。随着衰老人群的增加，能提供益生作用，控制老化和延长寿命的功能性食品越来越受到青睐。HIROMI KIMOTO‑NIRA等采用快速老化小鼠模型(SAM)中的SAMP6，实验发现SAMP6小鼠服用热灭活的Lactococcus lactis subsp.cremoris H61后小鼠脾细胞产生更多的IL‑12和IFN–γ，该研究认为Lactococcus lactis subsp.cremoris H61之所以能够抑制某些老化现象可能与其免疫调节作用相关。 [0005] 秀丽隐杆线虫(C.elegans)是一种常见的、自由生活的小型土壤线虫，属于小杆亚纲(Rhabditia)、小杆目(Rhabditidia)、小杆总科(Rhabditoidea)。以细菌为食，其生命周期大约为3d，平均寿命为3周。其呈蠕虫状、成体长约1.0～1.5mm，身体直径约70.0μm。秀丽隐杆线虫为两侧对称，体表有一层角质层覆盖物，无分节，有4条主要的表皮索状组织及1个充满体液的假体腔。秀丽隐杆线虫的结构简单、身体透明、易于观察、繁殖周期短等生物学特征赋予了其成为模式生物的前提。通过研究线虫的衰老和寿命控制机制，并将其成果应用于其他生物体，对延长人的寿命及提高人的生活质量有很大意义。本实验借助模式动物秀丽线虫，通过对其寿命进行观察，探究益生菌在其体内的抗衰老作用，为抗衰老、提高先天免疫的益生菌产品开发利用提供理论参考。发明内容 [0006] 本发明的一个目的在于提供副干酪乳杆菌K56的新用途。 [0007] 副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K56菌株已于2013年6月27日保存于德国微生物及细胞培养物收集中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)，保藏编号DSM27447；另外，副干酪乳杆菌K56菌株也已于2017年12月29日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，保藏编号CGMCC No.15139。 [0008] 本发明发现副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K56菌株具有抗衰老、可提高生物体先天免疫、和/或提升生物体对金黄色葡萄球菌感染抵御能力的功效。 [0009] 从而，本发明提供了副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)在制备具有抗衰老、可提高生物体先天免疫、和/或提升生物体对金黄色葡萄球菌感染抵御能力功效的组合物中的应用，其中所述副干酪乳杆菌为保藏编号DSM27447或CGMCC No.15139的副干酪乳杆菌。 [0010] 根据本发明的具体实施方案，本发明中所述提升生物体对金黄色葡萄球菌感染抵御能力包括：提升个体预防金黄色葡萄球菌感染的能力，降低金黄色葡萄球菌感染个体的能力，和/或缓解金黄色葡萄球菌感染引起的个体食物中毒、肠炎、肺炎、皮肤感染、伤口溃烂和/或脑膜炎等症状。 [0011] 根据本发明的具体实施方案，本发明的组合物的应用中，所述抗衰老包括延缓金黄色葡萄球菌感染导致的衰老甚至死亡现象。 [0012] 根据本发明的具体实施方案，本发明中所述副干酪乳杆菌以固态或液态菌制剂的形式用于制备所述组合物。 [0013] 根据本发明的具体实施方案，本发明的所述组合物可以包括食品组合物、饲料组合物、化妆品组合物或药品组合物。 [0014] 根据本发明的具体实施方案，本发明的组合物的应用中，所述生物体为动物或人。本发明的所述组合物可施用于动物或是人类。所述组合物还可包括所属领域中的常规用料组分。例如，对于药物组合物，可包括适量的辅料，所述辅料可以为赋型剂、稀释剂、填充剂和/或吸收促进剂等。对于食品组合物，本发明的副干酪乳杆菌可以按照现有技术中含副干酪乳杆菌的食品进行生产，所述组合物可根据受施予者的需要，而采用不同形态。例如粉剂、锭剂、造粒、微胶囊和/或液体制剂等。 [0015] 根据本发明的具体实施方案，本发明的所述组合物是用于缓解由于金黄色葡萄球菌感染导致的食物中毒、肠炎、肺炎、皮肤感染、伤口溃烂和/或脑膜炎等症状；具体应用时，3 12 7 所述副干酪乳杆菌的应用量为1.0×10 CFU～1.0×10 CFU/天，优选为1.0×10CFU～1.0 11 ×10 CFU/天。 [0016] 根据本发明的具体实施方案，本发明的所述组合物是用于抗衰老(包括延长寿3 12 命)；具体应用时，所述副干酪乳杆菌的应用量为1.0×10 CFU～1.0×10 CFU/天，优选为 7 11 1.0×10CFU～1.0×10 CFU/天。 [0017] 根据本发明的具体实施方案，本发明的所述组合物是用于提高先天免疫；具体应3 12 7 用时，所述副干酪乳杆菌的应用量为1.0×10CFU～1.0×10 CFU/天，优选为1.0×10CFU 11 ～1.0×10 CFU/天。 [0018] 在本发明的一具体实施方案中，本发明的所述组合物为食品组合物，所述食品为发酵乳制品(例如发酵乳、风味发酵乳、发酵乳饮料等)、乳酪、含乳饮料、固体饮料或乳粉。 [0019] 在本发明的另一具体实施方案中，本发明的所述组合物为药物组合物，所述药物可以是口服制剂，也可以是外用制剂，例如涂抹用药膏等。 [0020] 在本发明的另一具体实施方案中，本发明的所述组合物为具有抗衰老、可提高生物体先天免疫、和/或提升生物体对金黄色葡萄球菌感染抵御能力等功效的化妆品。 [0021] 综上所述，本发明提供了副干酪乳杆菌K56的新用途，该菌具有抗衰老、可提高生物体先天免疫、和/或提升生物体对金黄色葡萄球菌感染抵御能力等功效，可以用于制备具有抗衰老、提高先天免疫功效的食品、药物、化妆品及饲料等，具有广泛的应用前景。附图说明 [0022] 图1为S.aureus对秀丽隐杆线虫的致病性和添加益生菌菌株的影响；图中各组别在感染阶段添加的干预物(益生菌)情况分别与培养阶段相同。 [0023] 图2为S.aureus和益生菌干预3天后秀丽隐杆线虫的存活率；图中各组别在感染阶段添加的干预物(益生菌)情况分别与培养阶段相同。 [0024] 图3为益生菌对S.aureus的抑菌效果。具体实施方式 [0025] 为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现结合具体实施例及对本发明的技术方案进行以下详细说明，应理解这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中，各原始试剂材料均可商购获得，未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照仪器制造商所建议的条件。 [0026] 实施例1：益生菌对秀丽隐线虫抗衰老作用测试 [0027] 1.1材料与仪器 [0028] 副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K56来自内蒙古伊利实业集团股份有限公司；鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HN001购自Danisco：乳双歧杆菌(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)BB‑12购自ChrHansen；鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)LGG购自ChrHansen；乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)HN019购自Daniso；发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)LC40购自Biosearch life；野生型秀丽线虫(Caenorhabditis elegans，C.elegans)购自西班牙Biopolis.SL生物技术公司；金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC25923)购自西班牙Biopolis.SL生物技术公司。 [0029] 实验所用其他试剂均购于国药集团化学试剂有限公司。SPX‑150B‑Z型生化培养箱：上海博讯实业有限公司医疗设备厂；奥林巴斯显微镜(OlympusBX41)：南京艾朗仪器有限公司；LDZX‑50KBS立式压力蒸汽灭菌锅：上海申安医疗器械厂；T6紫外/可见分光光度计：北京普析通用仪器有限公司；Multiskan FC型酶标仪：赛默飞世尔(上海)仪器有限公司。 [0030] 1.2实验方法 [0031] 1.2.1益生菌活化 [0032] 取乳杆菌于MRS培养基中，乳双歧杆菌于MRS+Cys培养基中，37℃培养活化，细胞收8 集并使用生理盐水洗脱，调整至1×10CFU于NGM培养基中备用。 [0033] 1.2.2秀丽线虫寿命测定 [0034] 获取了年龄一致的线虫并将其培养在含线虫琼脂培养基(线虫培养基中含有大肠8 杆菌OP50为食物)的培养皿中，添加了不同益生菌(1×10CFU)进行共培养。在线虫成年后， 8 9 它们被转移到接种了金黄色葡萄球菌ATCC25923的培养皿中，添加量为10～10 CFU/mL，来模拟受到金黄色葡萄球菌感染的情况。各组别在感染阶段添加的干预物(益生菌)情况分别与培养阶段相同。使用了两个对照，分别是没有致病菌的条件(线虫培养皿中含有大肠杆菌OP50，即OP50组)，以及有致病菌金黄色葡萄球菌感染但没有任何干预物的(只含有金黄色葡萄球菌的培养皿，即S.aureus组)。另设置培养阶段添加干预物而感染阶段没有任何干预物的组别、以及培养阶段未添加干预物而感染阶段添加干预物的组别。 [0035] 将线虫培养几天后，对它们的存活率进行每日计数。如果线虫对铂丝没有反应，则可被认为是死亡。每种条件均进行了两次独立测定。 [0036] 对存活曲线进行了统计学的比较分析，用GraphPad Prism 4统计学软件包进行了log rank survival显著性分析。关于对线虫存活率的影响各组间在每一天体现的差异，先用Two‑way ANOVA进行分析，再用Tukey’s post hoc test进行各组间的比较。用One‑way ANOVA与Dunnett’s post hoc test分析各组存活率的显著性差异。 [0037] 1.2.3实验结果 [0038] 寿命是秀丽线虫暴露前后变化最直接的反映。 [0039] 实验结果如图1所示，秀丽线虫经S.aureus感染后，在第3天开始，存活率显著下8 降，第5天秀丽线虫全部死亡。于之相比，10CFU副干酪乳杆菌K56处理过的秀丽线虫组，在第3天，存活率为63.35±1.65％，从第5d存活率为15±1.7％，与S.aureus组存活率具有显著性差异(p<0.001)。发酵乳杆菌LC 40处理的秀丽线虫组，在第三天，存活率为25.85± 0.85％，而在第5天线虫存活率为0％，与S.aureus组未有显著性差异。 [0040] 由图2可知，与乳双歧杆菌HN019，乳双歧杆菌BB‑12，鼠李糖乳杆菌HN001，及鼠李糖乳杆菌LGG相比，副干酪乳杆菌K56能够显著延长秀丽线虫寿命。 [0041] 此外，本发明的实验显示，培养阶段添加了副干酪乳杆菌K56干预物而感染阶段没有添加任何干预物的组别的秀丽隐杆线虫存活率，显著高于培养阶段及感染阶段均未添加干预物的组别。 [0042] 实施例2：益生菌对金黄色葡萄球菌的抑菌特性分析 [0043] 采用纸片扩散法分析益生菌对S.aureus的抗菌活力。吸取1mL浓度为1×108CFU/mL的菌悬液于15mL RCA培养基(50℃)中，混和均匀后倾注到平皿中，待琼脂表面凝固后取药敏纸片贴于琼脂表面，每个培养皿贴3张间隔均匀适中的同种药物纸片，静置5min后翻转平皿,微需氧条件下37℃恒温培养,48h后测量并记录抑菌圈的直径。 [0044] 为分析益生菌对秀丽线虫延长寿命的影响是否受抑菌能力的影响，进一步通过纸片扩散法对益生菌菌株的抑菌能力进行评价。结果表明，没有任何益生菌会在平板中产生透明圈，表明本发明涉及的益生菌菌株对S.aureus不会产生抑菌作用(图3)。益生菌并不是通过抑制S.aureus进而对秀丽线虫产生抗衰老、提高先天免疫的作用。 [0045] 以上结果表明副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K56(保藏编号CGMCC No.15139或DSM27447)在抗衰老、提高先天免疫方面具有良好潜力，可以用于食品，如发酵乳、乳酪、含乳饮料、乳粉或其它含有该菌株及其衍生物的任何一种食品。