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一种饲料益生菌成分的检测装置及方法

申请号 CN202311646601.5 申请日 2023-12-04 公开(公告)号 CN117551532A 公开(公告)日 2024-02-13
申请人 深圳市澳华集团股份有限公司; 发明人 邓登; 邓康裕; 赵思帆;
摘要 本 发明 涉及 饲料 检测技术领域,且公开了一种饲料 益生菌 成分的检测装置及方法,包括承载件、驱动件、 粉碎 机构、离心机构和操作台,其中:所述承载件包括承载箱和开设在承载箱内部的粉碎腔,所述承载箱上表面开设有出料口和底部开设有出料口,所述出料口与进料口均与粉碎腔相通;所述驱动件设置在承载箱内且位于粉碎腔下方,所述粉碎机构设置在粉碎腔内且通过驱动件驱动对粉碎腔内的物料进行粉碎处理。该饲料益生菌成分的检测装置通过拼接机构的作用,可以减少驱动件的使用,同时也可以使粉碎与离心同时进行,或在粉碎后对粉碎腔内清洗过程中进行离心,粉碎 叶片 可以辅助对粉碎腔进行清洗,减少 能源 的使用和操作步骤,提高一定的效率。
权利要求

1.一种饲料益生菌成分的检测装置,其特征在于:包括承载件、驱动件、粉碎机构、离心机构和操作台,其中:
所述承载件包括承载箱(1)和开设在承载箱(1)内部的粉碎腔(2),所述承载箱(1)上表面开设有出料口和底部开设有出料口,所述出料口与进料口均与粉碎腔(2)相通;
所述驱动件设置在承载箱(1)内且位于粉碎腔(2)下方,所述粉碎机构设置在粉碎腔(2)内且通过驱动件驱动对粉碎腔(2)内的物料进行粉碎处理;
所述离心机构包括离心盘(3),所述离心盘(3)通过拼接机构可拆卸连接在粉碎机构的上方,所述离心盘(3)的底部设置有多个支撑套(4),所述离心盘(3)的上表面通过开设的通孔与多个支撑套(4)相通;
所述粉碎机构包括有粉碎轴(5)和多个粉碎叶片(6),多个所述粉碎叶片(6)以一定间距均匀分布在粉碎轴(5)的外表面;
所述操作台设置在承载箱(1)的一侧,所述操作台用于支撑进行检测过程。
2.根据权利要求1所述的一种饲料益生菌成分的检测装置,其特征在于:所述拼接机构包括安装(7)、螺纹头(8)和顶筒(9),所述安装块(7)和粉碎轴(5)的上表面均设置有拼接块(10),所述离心盘(3)的下表面开设与拼接块(10)配合的拼接槽(11),所述拼接槽(11)的内壁与拼接块(10)的外表面滑动连接,所述螺纹头(8)设置在安装块(7)的下表面,所述顶筒(9)焊接在安装块(7)的下表面。
3.根据权利要求2所述的一种饲料益生菌成分的检测装置,其特征在于:所述顶筒(9)的内径大于拼接块(10)的宽度,所述顶筒(9)的下表面与离心盘(3)的上表面接触连接且位于螺纹头(8)的外围,所述拼接块(10)的上表面开设有与螺纹头(8)配合的螺纹槽(12)。
4.根据权利要求1所述的一种饲料益生菌成分的检测装置,其特征在于:所述承载箱(1)上进料口的内壁通过开设的螺纹可拆卸连接有箱盖(13),所述箱盖(13)转动连接在粉碎轴(5)的外表面,所述箱盖(13)的上表面且位于粉碎轴(5)的一侧设置有把手。
5.根据权利要求4所述的一种饲料益生菌成分的检测装置,其特征在于:所述箱盖(13)的上表面通过开设的槽转动连接有轴承板(19),所述轴承板(19)的上表面通过开设的通孔套设在粉碎轴(5)的外表面,所述轴承板(19)与粉碎轴(5)之间设置有密封垫(20)。
6.根据权利要求4所述的一种饲料益生菌成分的检测装置,其特征在于:所述操作台包括检测台板(14)、恒温观察箱(15)和灭菌箱(16),所述恒温观察箱(15)设置在检测台板(14)的表面且与灭菌箱(16)的上表面固定连接,所述恒温观察箱(15)用于对待培养物培养观察,所述灭菌箱(16)用于对承载待培养物的器皿进行高温灭菌;
所述灭菌箱(16)上开设有进气口和出气口,所述出气口通过连接管(17)与粉碎腔(2)相通。
7.根据权利要求6所述的一种饲料益生菌成分的检测装置,其特征在于:所述箱盖(13)的上表面设置有通气管(18),所述通气管(18)内设置有,所述通气管(18)的上表面通过开设的通孔与连接管(17)连接且与粉碎腔(2)相通,所述通气管(18)的一侧开设有下料管(21)。
8.一种饲料益生菌成分的检测方法,其特征在于:应用于如权利要求1‑7任一项所述的一种饲料益生菌成分的检测装置,包括:
步骤1、将饲料样品取1g,在无菌条件下进行处理,得到无菌的饲料样品;
步骤2、将无菌的饲料样品放入粉碎腔(2)内,通过驱动件驱动粉碎轴(5)与粉碎叶片(6)回转,使粉碎腔(2)内无菌的饲料样品粉碎呈粉末状,并加入10g生理盐搅拌成浆状;
步骤3、均质处理后将承载样品的试管放置在离心盘(3)上设置的支撑套(4)内离心10分钟,保留离心上清液;
步骤4、将前面步骤得到的离心上清液进行DNA提取:冻融3次促进细胞断裂,提取上清液中的DNA;
步骤5、制备目标菌种的qPCR引物,使用量化PCR法获得PCR扩增曲线并进行分析;
步骤6、根据PCR扩增曲线,计算出与PCR引物对应的目标菌数量。
9.根据权利要求8所述的一种饲料益生菌成分的检测方法,其特征在于:所述步骤5中制备目标菌种的qPCR引物包括:
根据芽孢杆菌16S rRNA基因序列制备第一引物和第二引物:
第一引物:5’‑AGAGTTGATCCTGGCTCAG‑3’,
第二引物:5’‑GGTTACCTTGTTACGACTT‑3’;
根据粪肠球菌16S rRNA基因序列制备第三引物和第四引物:
第三引物:5’‑TGCCGCATGGCATAAGAG‑3’,
第四引物:5’‑TGCATCACCTCGCGGTCTAG‑’3;
根据嗜酸乳杆菌16S rRNA基因序列制备第五引物和第六引物:
第五引物:5’‑CATAGCCGAGTTGAGAGATG‑3’,
第六引物:5’‑ATCTAATCCTGTTCGCTACCCA‑3’。
10.根据权利要求8所述的一种饲料益生菌成分的检测方法,其特征在于:所述步骤6中计算出与PCR引物对应的目标菌数量,包括:
目标菌数量的计算公式为:

其中,N是目标菌的数量,Ct是在PCR扩增过程中样品的阈下周期数,m是标准曲线的斜率,b是标准曲线的截距。

说明书全文

一种饲料益生菌成分的检测装置及方法

技术领域

[0001] 本发明涉及饲料检测技术领域,具体涉及一种饲料益生菌成分的检测装置及方法。

背景技术

[0002] 随着养殖业的自动化、智能化的快速发展,越来越多的动物饲料检测装置出现,这些装置通过对饲料成分检测,来判断动物饲料内有益菌的存活量,进而控制动物对饲料中营养物质的吸收,提高动物的自身免疫
[0003] 饲料中含有的益生菌成分有助于改善动物肠道微生态平衡、增强免疫力、促进消化吸收等作用,益生菌在饲料中的应用可以提高畜禽生产性能,减少饲料消耗,并且减少对环境的污染。
[0004] 对饲料中益生菌的成分检测的预处理过程中,需要使用多个仪器,并使用仪器后需要各个清洗,较为繁琐,且在使用步骤进行过程中需要寻找对应的仪器,影响检测效率,同时现在的检测方法容易有误差,检测结果容易不准确影响饲养人员的判断。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供一种饲料益生菌成分的检测装置及方法,减少寻找仪器以及清洗仪器的步骤和麻烦,同时提高检测结果的准确性。
[0006] 为实现以上目的,本发明通过以下技术方案予以实现:设计一种饲料益生菌成分的检测装置,包括承载件、驱动件、粉碎机构、离心机构和操作台,其中:
所述承载件包括承载箱和开设在承载箱内部的粉碎腔,所述承载箱上表面开设有
出料口和底部开设有出料口,所述出料口与进料口均与粉碎腔相通;
所述驱动件设置在承载箱内且位于粉碎腔下方,所述粉碎机构设置在粉碎腔内且
通过驱动件驱动对粉碎腔内的物料进行粉碎处理;
所述离心机构包括离心盘,所述离心盘通过拼接机构可拆卸连接在粉碎机构的上
方,所述离心盘的底部设置有多个支撑套,所述离心盘的上表面通过开设的通孔与多个支撑套相通;
所述粉碎机构包括有粉碎轴和多个粉碎叶片,多个所述粉碎叶片以一定间距均匀
分布在粉碎轴的外表面;
所述操作台设置在承载箱的一侧,所述操作台用于支撑进行检测过程。
[0007] 可选的,所述拼接机构包括安装螺纹头和顶筒,所述安装块和粉碎轴的上表面均设置有拼接块,所述离心盘的下表面开设与拼接块配合的拼接槽,所述拼接槽的内壁与拼接块的外表面滑动连接,所述螺纹头设置在安装块的下表面,所述顶筒焊接在安装块的下表面。
[0008] 可选的,所述顶筒的内径大于拼接块的宽度,所述顶筒的下表面与离心盘的上表面接触连接且位于螺纹头的外围,所述拼接块的上表面开设有与螺纹头配合的螺纹槽。
[0009] 可选的,所述承载箱上进料口的内壁通过开设的螺纹可拆卸连接有箱盖,所述箱盖转动连接在粉碎轴的外表面,所述箱盖的上表面且位于粉碎轴的一侧设置有把手。
[0010] 可选的,所述箱盖的上表面通过开设的槽转动连接有轴承板,所述轴承板的上表面通过开设的通孔套设在粉碎轴的外表面,所述轴承板与粉碎轴之间设置有密封垫。
[0011] 可选的,所述操作台包括检测台板、恒温观察箱和灭菌箱,所述恒温观察箱设置在检测台板的表面且与灭菌箱的上表面固定连接,所述恒温观察箱用于对待培养物培养观察,所述灭菌箱用于对承载待培养物的器皿进行高温灭菌;灭菌箱上开设有进气口和出气口,所述出气口通过连接管与粉碎腔相通。
[0012] 可选的,所述箱盖的上表面设置有通气管,所述通气管内设置有,所述通气管的上表面通过开设的通孔与连接管连接且与粉碎腔相通,所述通气管的一侧开设有下料管。
[0013] 本发明还设计一种饲料益生菌成分的检测方法,应用于上述的一种饲料益生菌成分的检测装置,包括:步骤1、将饲料样品取1g,在无菌条件下进行处理,得到无菌的饲料样品;
步骤2、将无菌的饲料样品放入粉碎腔内,通过驱动件驱动粉碎轴与粉碎叶片回
转,使粉碎腔内无菌的饲料样品粉碎呈粉末状,并加入10g生理盐搅拌成浆状;
步骤3、均质处理后将承载样品的试管放置在离心盘上设置的支撑套内离心10分
钟,保留离心上清液;
步骤4、将前面步骤得到的离心上清液进行DNA提取:冻融3次促进细胞断裂,提取上清液中的DNA;
步骤5、制备目标菌种的qPCR引物,使用量化PCR法获得PCR扩增曲线并进行分析;
步骤6、根据PCR扩增曲线,计算出与PCR引物对应的目标菌数量。
[0014] 可选的,所述步骤5中制备目标菌种的qPCR引物包括:根据芽孢杆菌16S rRNA基因序列制备第一引物和第二引物:
第一引物:5’‑AGAGTTGATCCTGGCTCAG‑3’,
第二引物:5’‑GGTTACCTTGTTACGACTT‑3’;
根据粪肠球菌16S rRNA基因序列制备第三引物和第四引物:
第三引物:5’‑TGCCGCATGGCATAAGAG‑3’,
第四引物:5’‑TGCATCACCTCGCGGTCTAG‑’3;
根据嗜酸乳杆菌16S rRNA基因序列制备第五引物和第六引物:
第五引物:5’‑CATAGCCGAGTTGAGAGATG‑3’,
第六引物:5’‑ATCTAATCCTGTTCGCTACCCA‑3’。
[0015] 可选的,所述步骤6中计算出与PCR引物对应的目标菌数量,包括:目标菌数量的计算公式为:

其中,N是目标菌的数量,Ct是在PCR扩增过程中样品的阈下周期数,m是标准曲线的斜率,b是标准曲线的截距。
[0016] 本发明提供了一种饲料益生菌成分的检测装置具备以下有益效果:1、该饲料益生菌成分的检测装置通过拼接机构的作用,可以减少驱动件的使用,同时也可以使粉碎与离心同时进行,或在粉碎后对粉碎腔内清洗过程中进行离心,粉碎叶片可以辅助对粉碎腔进行清洗,减少能源的使用和操作步骤,提高一定的效率,方便检测人员的使用。
[0017] 2、该饲料益生菌成分的检测装置通过连接管与通气管之间的连接,在灭菌箱为检测用的器皿高温灭菌的同时,也可以通过通气管上的阀门控制高温灭菌蒸汽进入粉碎腔内,在对粉碎腔内清洗后可以对粉碎腔进行灭菌处理,减少检测人员需要单独灭菌的操作,进一步提高便捷性。
[0018] 本发明提供了一种饲料益生菌成分的检测方法具备以下有益效果:该饲料益生菌成分的检测方法通过量化PCR技术,能够快速、准确地检测出样品中含有的目标细菌数量,可以检测出低至10^2 CFU/g以下的细菌数量,满足对低含量样品的检测需求,可以适用于多种类型的饲料样品,并且适用于不同种类的细菌检测,根据PCR扩增曲线计算细菌含量数据的结果稳定性高,实验方法的操作与数据分析可以得到良好的重复性。
附图说明
[0019] 图1为本发明中检测装置的爆炸结构示意图;图2为本发明中检测装置的立体结构示意图;
图3为本发明中离心机构的剖视结构示意图;
图4为本发明中离心盘的剖视结构示意图;
图5为本发明中承载箱的爆炸结构示意图。
[0020] 图中:1、承载箱;2、粉碎腔;3、离心盘;4、支撑套;5、粉碎轴;6、粉碎叶片;7、安装块;8、螺纹头;9、顶筒;10、拼接块;11、拼接槽;12、螺纹槽;13、箱盖;14、检测台板;15、恒温观察箱;16、灭菌箱;17、连接管;18、通气管;19、轴承板;20、密封垫;21、下料管;25、承接块;26、插接块;27、紧固块;28、插槽。

具体实施方式

[0021] 下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
[0022] 请参阅图1至图5,本发明提供一种技术方案:一种饲料益生菌成分的检测装置,包括承载件、驱动件、粉碎机构、离心机构和操作台,其中:所述承载件包括承载箱1和开设在承载箱1内部的粉碎腔2,所述承载箱1上表面开
设有出料口和底部开设有出料口,所述出料口与进料口均与粉碎腔2相通;
所述驱动件设置在承载箱1内且位于粉碎腔2下方,所述粉碎机构设置在粉碎腔2
内且通过驱动件驱动对粉碎腔2内的物料进行粉碎处理;
所述离心机构包括离心盘3,所述离心盘3通过拼接机构可拆卸连接在粉碎机构的
上方,所述离心盘3的底部设置有多个支撑套4,所述离心盘3的上表面通过开设的通孔与多个支撑套4相通;
所述粉碎机构包括有粉碎轴5和多个粉碎叶片6,多个所述粉碎叶片6以一定间距
均匀分布在粉碎轴5的外表面;
所述操作台设置在承载箱1的一侧,所述操作台用于支撑进行检测过程,通过进料口的作用,可以将抽选的饲料丢入粉碎腔2内,通过驱动件驱动粉碎机构对进入粉碎腔2内的饲料进行粉碎,配合拼接机构的作用,可以在粉碎过程中对之前粉碎后的饲料进行离心,同时进行检测工作,提高一定的效率,同时减少能源的使用,不需要特定的多个装置配合,在出料口处设置阀门,用于控制粉碎后出料,通过离心盘3与粉碎机构之间的连接,可以进行安装拆卸,在使用时安装,不使用时拆卸,或在粉碎机构与离心盘3其中某一部件损坏时可以更换,不影响正常使用。
[0023] 粉碎叶片6还可以替换为回旋叶片,如蛟龙状,进行高速回转粉碎,通过支撑套4的作用,可以对放置的试管进行支撑。
[0024] 同时可以在承载箱1上位于离心盘3的上方设置一个防护罩,避免操作过程中意外碰触或破碎有安全隐患。
[0025] 驱动件为电机,为现有公知技术,在此不做过多叙述,还可以外接减速器,用于调节回转速度,驱动件的目的仅仅在于驱动粉碎轴5回转,提供动力源。
[0026] 本实施例中,作为优选方案,拼接机构包括安装块7、螺纹头8和顶筒9,所述安装块7和粉碎轴5的上表面均设置有拼接块10,所述离心盘3的下表面开设与拼接块10配合的拼接槽11,所述拼接槽11的内壁与拼接块10的外表面滑动连接,所述螺纹头8设置在安装块7的下表面,所述顶筒9焊接在安装块7的下表面,通过拼接块10与拼接槽11之间的连接,可以对离心盘3快速的定位,同时保持离心盘3回转过程中不会产生位置偏移,与粉碎轴5保持同步回转,通过螺纹头8与拼接头上表面开设的螺纹孔配合同时顶筒9的下表面与离心盘3的上表面抵紧,可以对离心盘3进行限位,通过安装块7上的拼接块10与离心盘3之间的配合,可以起到拓展作用,使多个离心盘3拼接,同时能进行更多的离心工作,进一步提高效率,但是略有不足就是由于螺纹的作用可能会使限位越来越紧固,不容易拆卸,但通过顶筒9的作用,可以对螺纹的攻入起到辅助定位的作用,减少限位越来越紧固的情况,顶筒9的内径大于拼接块10的宽度,所述顶筒9的下表面与离心盘3的上表面接触连接且位于螺纹头8的外围,所述拼接块10的上表面开设有与螺纹头8配合的螺纹槽12。
[0027] 承载箱1上进料口的内壁通过开设的螺纹可拆卸连接有箱盖13,所述箱盖13转动连接在粉碎轴5的外表面,所述箱盖13的上表面且位于粉碎轴5的一侧设置有把手,通过箱盖13的作用,可以对粉碎腔2起到辅助封闭的作用,同时箱盖13上可以设置可拆卸的防护罩,用于对离心盘3起到隔断防护的作用,通过箱盖13与粉碎轴5之间的连接,箱盖13可以对粉碎轴5起到辅助支撑的作用,使粉碎轴5稳定的回转,箱盖13的上表面通过开设的槽转动连接有轴承板19,所述轴承板19的上表面通过开设的通孔套设在粉碎轴5的外表面,所述轴承板19与粉碎轴5之间设置有密封垫20,通过轴承板19之间的连接,可以减少箱盖13与粉碎轴5之间的摩擦力,同时可以通过密封垫20与粉碎轴5连接,辅助对粉碎腔2保持密封的同时保证了粉碎轴5的回转,同时如图所示,轴承板19的外圆面横向深入箱盖13的内部,可以减少外界气体进入,起到辅助隔断的作用,密封垫20不仅辅助密封,同时能够提高轴承板19与粉碎轴5之间的摩擦力,使轴承板19稳定的随粉碎轴5回转。
[0028] 操作台包括检测台板14、恒温观察箱15和灭菌箱16,所述恒温观察箱15设置在检测台板14的表面且与灭菌箱16的上表面固定连接,所述恒温观察箱15用于对待培养物培养观察,所述灭菌箱16用于对承载待培养物的器皿进行高温灭菌,灭菌箱16上开设有进气口和出气口,所述出气口通过连接管17与粉碎腔2相通,通过检测台板14的作用,用于放置一些检测用的器具,同时用于对检测过程进行支撑,摆放检测用的器具供检测人员进行观察,通过灭菌箱16的作用,用于对检测用的试管等器具进行高温蒸汽灭菌,通过开设的进气口,通入外接的高温蒸汽进入灭菌箱16内进行灭菌,灭菌箱16的前面还通过开设的槽可拆卸连接有一个收纳盒,收纳盒内可以放置使用的器皿,同时收纳盒的端部设置密封垫20用于与灭菌箱16之间提高密封性,通过现有的限位机构例如螺栓对收纳盒与灭菌箱16之间的连接进行限位,将螺栓通过灭菌箱16侧面穿入,收纳盒侧面开设槽与螺栓穿出的一端滑动连接,灭菌箱16为现有公知技术,目的在于承载需要使用的器皿,通过出气口的作用,可以将高温蒸汽从灭菌箱16内排出,通过恒温观察箱15的作用,用于对培养菌群时提供舒适的环境,为现有公知技术,在此仅为引用,不做过多叙述,可以为恒温培养箱,通过连机管的作用,可以将高温蒸汽通入粉碎腔2内,在对器皿灭菌的过程中也可以对使用后的粉碎腔2进行灭菌,提高一定的利用效率。
[0029] 箱盖13的上表面设置有通气管18,所述通气管18内设置有阀门,所述通气管18的上表面通过开设的通孔与连接管17连接且与粉碎腔2相通,所述通气管18的一侧开设有下料管21,通过通气管18与连接管17之间的连接,使连接管17通过通气管18与粉碎腔2连通,通过阀门的作用,用于控制高温蒸汽是否通入粉碎腔2内,通过下料管21可以使饲料通过下料管21进入粉碎腔2内,下料管21上可以设置一个可拆卸的密封部件,例如螺纹连接一个密封盖。
[0030] 实施例2根据上述实施例,如图5所示,还有一种实施方式为拼接机构包括承接块25、插接块26和紧固块27,承接块贯穿箱盖13转动连接在箱盖13的内部,承接块25的上表面和下表面均设置有插接块26,粉碎轴5的上表面和离心盘3的下表面均开设与插接块26配合的插槽
28,在箱盖13安装在承载箱1上的过程中,承接块25下表面的插接块26插入粉碎轴5上表面开设的插槽28内,然后将离心盘3套设在承接块25上表面的插接块26上,承接块25上表面插接块26的上表面开设与紧固块27配合的槽,紧固块27与插接块26螺纹连接,紧固块27同时与离心盘3的上表面接触连接,进料时通过下料管21下料,同样可以实现一个驱动件同时进行两种操作,并且均可更换使用,减少损坏后影响整体使用。
[0031] 该文中出现的电器元件均与外界的主控器及220V市电电连接,并且主控器可为计算机等起到控制的常规已知设备。
[0032] 本发明还设计一种饲料益生菌成分的检测方法,包括:步骤1、将饲料样品取1g,在无菌条件下进行处理,得到无菌的饲料样品,将无菌的饲料样品放入粉碎腔2内,通过驱动件驱动粉碎轴5与粉碎叶片6回转,使粉碎腔2内无菌的饲料样品粉碎呈粉末状,并加入10g生理盐水搅拌成浆状;样品前处理方法,对于一些粉末状或颗粒状的饲料样品,需进行添加纯化物质、均质、萃取、酶解等处理过程。
[0033] 步骤2、均质处理后将承载样品的试管放置在离心盘3上设置的支撑套4内离心10分钟,保留离心上清液。
[0034] 步骤3、将前面步骤得到的离心上清液进行DNA提取:冻融3次促进细胞断裂,提取上清液中的DNA;在DNA提取阶段,常用的方法有CTAB法、柱式纯化法、磁珠法等,其优缺点各异。同时,也要注意去除携带外源性DNA等污染物。
[0035] 步骤4、制备目标菌种的qPCR引物,使用量化PCR法获得PCR扩增曲线并进行分析;在获得PCR扩增曲线之前,需要利用相应的程序进行引物设计和优化,以确保所选引物能够针对目标序列机特异性扩增,并可以灵敏快速地检测出样品中低含量的目标细菌。此外还需要考虑反应体系(Mg2+离子浓度,引物浓度,模板DNA浓度等)的优化和验证。
[0036] 步骤5、根据PCR扩增曲线,计算出与PCR引物对应的目标菌数量。
[0037] 可选的,所述步骤4中制备目标菌种的qPCR引物包括:根据芽孢杆菌16S rRNA基因序列制备第一引物和第二引物:
第一引物:5’‑AGAGTTGATCCTGGCTCAG‑3’,
第二引物:5’‑GGTTACCTTGTTACGACTT‑3’;
根据粪肠球菌16S rRNA基因序列制备第三引物和第四引物:
第三引物:5’‑TGCCGCATGGCATAAGAG‑3’,
第四引物:5’‑TGCATCACCTCGCGGTCTAG‑’3;
根据嗜酸乳杆菌16S rRNA基因序列制备第五引物和第六引物:
第五引物:5’‑CATAGCCGAGTTGAGAGATG‑3’,
第六引物:5’‑ATCTAATCCTGTTCGCTACCCA‑3’。
[0038] 可选的,所述步骤5中计算出与PCR引物对应的目标菌数量,包括:目标菌数量的计算公式为:

其中,N是目标菌的数量,Ct是在PCR扩增过程中样品的阈下周期数,m是标准曲线的斜率,b是标准曲线的截距。
[0039] 步骤1中的处理过程能够将饲料样品充分破碎并与生理盐水混合,使得样品更加均匀、易于操作。对于一些特殊样品可以进行适当的前处理以达到在后续步骤中更好的检测效果。
[0040] 步骤2中的离心能够快速去除悬浮在上清液中的杂质和细胞残渣,从而得到较为纯净的离心上清液。这有利于后续步骤的进行和PCR反应准确结果得出。
[0041] 步骤3中选择合适的DNA提取方法,可以根据不同实验需要进行选择。例如,CTAB法可以适用于富含多种次生代谢产物的样品,柱式纯化法则注重提高DNA纯度等。
[0042] 步骤4中引物设计和优化是量化PCR方法的关键环节之一,选择适合目标菌种DNA序列的引物并优化反应条件,有助于提高反应的特异性和检测灵敏度。
[0043] 步骤5中通过计算PCR扩增曲线来确定样品中益生菌的数量,这种方法具有准确、快速、可靠的特点,可以满足对饲料样品益生菌含量的高通量检测需求。
[0044] 阈下周期数(Ct值)是PCR扩增反应中所需的周期数,使荧光信号达到预定的阈值。在实时荧光定量PCR (real‑time qPCR)中,通过检测反应混合物中增加的荧光信号以实现定量检测。反应进行时,荧光强度会随着PCR产物数量的增加而增加,当荧光信号仅超过设定的阈值时,这个时间点被称为阈下周期数(Ct值)。
[0045] Ct值通常用来标志模板DNA的初始浓度,在同样的PCR扩增条件下,Ct值越小则说明模板的初始浓度越高,同时也表示反应体系的荧光强度高。通过Ct值可以对样本的含量做出定量分析,通常需要与内部参照物或外部标准曲线一起使用以提高精确度和准确性。标准曲线的斜率和截距是对数函数拟合曲线的两个参数,用于将Ct值转换为模板DNA分子数目并计算未知样品中的目标物质数量。斜率m代表Ct值与模板DNA分子数量之间的比例关系,截距b代表Ct值为0时对应的模板DNA分子数目,也称为初始浓度。在实验过程中,通过使用已知浓度的模板DNA样品来构建标准曲线,并通过对数函数的拟合获得斜率和截距的值,最终用来计算样品的目标物质数量。
[0046] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。