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一种白假丝酵母菌及其在发酵饲料中的应用

申请号 CN202110932445.3 申请日 2021-08-13 公开(公告)号 CN113512503A 公开(公告)日 2021-10-19
申请人 四川天源油橄榄有限公司; 发明人 曾黎黎; 何世勤; 刘书亮; 李建龙; 周巧;
摘要 本 发明 公开了一种白假丝 酵母 菌及其在 发酵 饲料 中的应用。该菌株GL1保藏于中国普通 微 生物 菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC NO.22844。本发明提供的白假丝酵母菌,是从橄榄果渣中提取的一种白假丝酵母的新型菌株,能够应用于发酵饲料中,通过本发明中白假丝酵母菌发酵后能使橄榄果渣‑麸皮(发酵饲料)中蛋白含量增加78%左右,蛋白含量增加明显,且发酵条件简单,在发酵饲料的应用中具有明显的优势。
权利要求

1.白假丝酵母菌(Candida albicans)GL1,该菌株GL1保藏于中国普通生物菌种保藏
管理中心,保藏编号为CGMCC NO.22844。
2.权利要求1所述的白假丝酵母菌GL1在发酵饲料中的应用。
3.一种利用如权利要求1所述的白假丝酵母菌GL1生产发酵饲料的方法,其特征在于,
包括下述步骤:
(1)种子液的制备
将白假丝酵母菌GL1培养后制成酵母菌种子液;
(2)接种发酵
以橄榄果渣、麸皮和纤维素酶为原料制备出橄榄果渣‑麸皮培养基,将步骤(1)中的酵
母菌种子液接种至橄榄果渣‑麸皮培养基中,发酵后得到发酵饲料。
4.根据权利要求3所述的生产发酵饲料的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,种子液的
制备具体包括下述步骤:
A1、将白假丝酵母菌GL1接种于斜面培养基上,28‑32℃静置培养2.0 d,然后转接种到
PDB培养基中,于28‑32℃摇床培养2.5‑3.5d;然后按体积百分比以5%‑15%的接种量接种到
PDB培养基中,于28‑32℃摇床培养2.0‑3.0d,得到培养菌液;
A2、将培养菌液离心,收集菌体;将收集的菌体洗涤后重悬,得到酵母菌种子液。
5.根据权利要求4所述的生产发酵饲料的方法,其特征在于,所述步骤A1中,所述斜面
培养基中:铃薯浸出粉的浓度为4‑8g /L,葡萄糖的浓度为15‑25g /L,氯霉素的浓度为
0.05‑0.15 g /L;琼脂粉18‑22 g /L。
6.根据权利要求4所述的生产发酵饲料的方法,其特征在于,所述步骤A1中, PDB培养
基中,马铃薯浸出粉的浓度为4‑8g /L,葡萄糖的浓度为15‑25g /L,氯霉素的浓度为0.05‑
0.15 g /L。
7.根据权利要求4所述的生产发酵饲料的方法,其特征在于,所述步骤A1中,所述PDB培
养基的初始pH为5.4‑5.8。
8.根据权利要求4所述的生产发酵饲料的方法,其特征在于,所述步骤A2中,收集菌体
是以6000‑10000r/min 在3‑5℃离心培养菌液;洗涤菌体是以3000‑7000r/min在3‑5℃离心
3‑7min。
9.根据权利要求3所述的生产发酵饲料的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,接种发酵
具体包括下述步骤:
B1、制备橄榄果渣‑麸皮培养基:
以橄榄果渣、麸皮和纤维素酶为原料,所述麸皮的添加量为橄榄果渣重量的7%,所述纤
维素酶的添加量为橄榄果渣和麸皮总重量的0.01%‑0.03%;其制备是先将橄榄果渣和麸皮
混合均匀在121℃灭菌20min,然后加入纤维素酶混合均匀后,于43‑47℃静止培养11‑13h;
最后,添加无菌保证培养基终水分含量为50%‑60%,得到橄榄果渣‑麸皮培养基;
B2、按体积百分比5%‑15%的接种量将酵母种子液接种至步骤B1中的橄榄果渣‑麸皮培
养基中,于25‑32℃静置发酵4‑10d,得到发酵饲料。
10.根据权利要求9所述的生产发酵饲料的方法,其特征在于,所述B2中,按体积百分比
10%的接种量将酵母种子液接种至步骤B1中的橄榄果渣‑麸皮培养基。

说明书全文

一种白假丝酵母菌及其在发酵饲料中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种生物技术领域,具体涉及一种白假丝酵母菌及其在发酵饲料中的应用。

背景技术

[0002] 白假丝酵母是属于半知菌纲(Fungi Imperficti)的球壳目(Xylariaceae)假丝酵母属(Candida)的单细胞酵母。白假丝酵母(Candida albicans),又称白念珠菌或者白色念
珠菌,是单细胞真菌。菌体呈圆形或卵圆形,革兰氏染色阳性,着色不均,以芽生方式繁殖。
在组织内易形成芽生孢子及假菌丝,芽生孢子多集中在假菌丝的连接部位,假菌丝中间或
顶端常有较大、壁薄的圆形或梨形厚膜孢子,是本菌特征之一。
[0003] 白假丝酵母在普通的琼脂、血琼脂与沙保培养基上均生长良好,菌落呈类酵母型。在玉米粉培养基上可长出厚膜孢子。白假丝酵母的假菌丝和厚膜孢子有助于鉴定。
[0004] 白假丝酵母属条件致病菌,通常存在于人体表与腔道中,当正常菌群失调或抵抗降低时,白假丝酵母则可侵犯人体许多部位,如皮肤、粘膜、、肠、肾和脑,引起皮肤粘膜
感染(常见鹅口疮、外阴炎及阴道炎)、内脏感染和中枢神经系统感染等,粘膜感染以鹅口疮
最多。
[0005] 现有技术中记载的白假丝酵母是条件致病菌,不具有饲料发酵的应用价值;目前尚没有将白假丝酵母用于制备发酵饲料的报道。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于提供一种白假丝酵母菌及其在发酵饲料中的应用。
[0007] 为实现上述目的,本发明提供了以下技术方案:
[0008] 发明提供的白假丝酵母菌(Candida albicans)GL1,该菌株GL1保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC NO.22844。
[0009] 白假丝酵母菌(Candida albicans)GL1的分离纯化和鉴定,包括下述步骤:
[0010] (1)将橄榄果渣样品10倍系列稀释后,吸取适宜稀释度样液涂布于PDA 培养基平板,26‑30℃培养70‑74h后,挑取具有酵母菌典型菌落特征的菌落进行多次平板划线纯化,
得到初筛菌体,转接种至斜面培养基4℃保存备用;
[0011] (2)用无菌生理盐调整步骤(1)初筛菌体浓度为108CFU/mL,以体积百分比4%‑6%的接种量接种至PDB培养基中,26‑30℃培养70‑74h后,以 8000r/min 4℃离心5min,去
除上清液,生理盐水清洗菌体沉淀,然后将菌体烘至恒重,检测菌体的蛋白含量,菌体蛋白
含量达到41%,编号此菌株为GL1;菌株GL1经过生理生化和分子生物学鉴定为白假丝酵母
菌(Candida albicans),白假丝酵母菌(Candida albicans)GL1菌落呈奶酪状、乳白色,表
面光滑,返光,边缘流苏状。
[0012] 本发明提供的白假丝酵母菌GL1在发酵饲料中的应用。
[0013] 本发明提供的利用上述的白假丝酵母菌GL1生产发酵饲料的方法,包括下述步骤:
[0014] (1)种子液的制备
[0015] 将白假丝酵母菌GL1培养后制成酵母菌种子液;
[0016] (2)接种发酵
[0017] 以橄榄果渣、麸皮和纤维素酶为原料制备出橄榄果渣‑麸皮培养基,将步骤 (1)中的酵母菌种子液接种至橄榄果渣‑麸皮培养基中,发酵后得到发酵饲料。
[0018] 进一步的,所述步骤(1)中,种子液的制备具体包括下述步骤:
[0019] A1、将白假丝酵母菌GL1接种于斜面培养基上,28‑32℃静置培养2.0d,然后转接种到PDB培养基中,于28‑32℃摇床培养2.5‑3.5d;然后按体积百分比以5%‑15%的接种量接
种到PDB培养基中,于28‑32℃摇床培养2.0‑3.0d,得到培养菌液;
[0020] A2、将培养菌液离心,收集菌体;将收集的菌体洗涤后重悬,得到酵母菌种子液。
[0021] 进一步的,所述步骤A1中,所述斜面培养基中:铃薯浸出粉的浓度为 4‑8g/L,葡萄糖的浓度为15‑25g/L,氯霉素的浓度为0.05‑0.15g/L;琼脂粉18‑22 g/L。
[0022] 进一步的,所述步骤A1中,PDB培养基中,马铃薯浸出粉的浓度为4‑8g /L,葡萄糖的浓度为15‑25g/L,氯霉素的浓度为0.05‑0.15g/L。
[0023] 进一步的,所述步骤A1中,所述PDB培养基的初始pH为5.4‑5.8。
[0024] 进一步的,所述步骤A2中,收集菌体是以6000‑10000r/min在3‑5℃离心培养菌液;洗涤菌体是以3000‑7000r/min在3‑5℃离心3‑7min。
[0025] 进一步的,所述步骤(2)中,接种发酵具体包括下述步骤:
[0026] B1、制备橄榄果渣‑麸皮培养基:
[0027] 以橄榄果渣、麸皮和纤维素酶为原料,所述麸皮的添加量为橄榄果渣重量的7%,所述纤维素酶的添加量为橄榄果渣和麸皮总重量的0.01%‑0.03%;其制备是先将橄榄果
渣和麸皮混合均匀在121℃灭菌20min,然后加入纤维素酶混合均匀后,于43‑47℃静止培养
11‑13h;最后,添加无菌水保证培养基终水分含量为50%‑60%,得到橄榄果渣‑麸皮培养
基;
[0028] B2、按体积百分比5%‑15%的接种量将酵母种子液接种至步骤B1中的橄榄果渣‑麸皮培养基中,于25‑32℃静置发酵4‑10d,得到发酵饲料,采用 GB/T6432‑2018检测蛋白含
量。
[0029] 进一步的,所述B2中,按体积百分比10%的接种量将酵母种子液接种至步骤B1中的橄榄果渣‑麸皮培养基。
[0030] 基于上述技术方案,本发明实施例至少可以产生如下技术效果:
[0031] 本发明提供的白假丝酵母菌,是从橄榄果渣中提取的一种白假丝酵母的新型菌株,能够应用于发酵饲料中,通过本发明中白假丝酵母菌发酵后能使橄榄果渣‑麸皮(发酵
饲料)中蛋白含量增加78%左右,蛋白含量增加明显,且发酵条件简单,在发酵饲料的应用
中具有明显的优势,当然也可以将其应用于苹果渣等水果渣中进行发酵。
附图说明
[0032] 图1是本发明中白假丝酵母菌GL1的菌落形态图;
[0033] 图2是本发明中白假丝酵母菌GL1的显微形态图。

具体实施方式

[0034] 一、培养基说明:
[0035] 斜面培养基:将马铃薯浸出粉6.0g、葡萄糖20.0g、氯霉素0.1g和琼脂粉 20.0g,溶解于1000mL蒸馏水中,然后调整pH为5.4‑5.8,最后在121℃灭菌 20min,即得斜面培养基。
[0036] PDB培养基:将马铃薯浸出粉6.0g、葡萄糖20.0g和氯霉素0.1g,溶解于 1000mL蒸馏水中,然后调整pH为5.4‑5.8,最后在121℃灭菌20min,即得 PDB培养基。
[0037] PDA培养基:将马铃薯浸出粉6.0g、葡萄糖20.0g、氯霉素0.1g和琼脂粉 20.0g,溶解于1000mL蒸馏水中,然后调整pH为5.4‑5.8,最后在121℃灭菌 20min,即得PDA培养基。
[0038] 二、实施例
[0039] 实施例1:
[0040] 白假丝酵母菌(Candida albicans)GL1的分离纯化和鉴定,包括下述步骤:
[0041] (1)将橄榄果渣样品10倍系列稀释后,吸取100μL释度样液涂布于PDA 培养基平板,28℃培养72h后,挑取具有酵母菌典型菌落特征的菌落进行多次平板划线纯化,得到初
筛菌体,转接种至斜面培养基4℃保存备用;
[0042] (2)用无菌生理盐水调整步骤(1)初筛菌体浓度为108CFU/mL,以体积百分比5%的接种量接种至PDB培养基中,28℃培养72h后,以8000r/min4℃离心5min,去除上清液,生理
盐水清洗菌体沉淀3次,105℃将菌体烘至恒重,检测菌体的蛋白含量(检测标准为GB/T 
6432‑2018),菌体蛋白含量达到41%,编号此菌株为GL1(如图1和图2所示);菌株GL1经过生
理生化和分子生物学鉴定为白假丝酵母菌(Candida albicans),白假丝酵母菌(Candida 
albicans) GL1菌落呈奶酪状、乳白色,表面光滑,返光,边缘流苏状。
[0043] 白假丝酵母菌(Candida albicans)GL1可以用来发酵橄榄果渣‑麸皮,生产高蛋白饲料。发酵后的橄榄果渣‑麸皮的蛋白含量比初始橄榄果渣‑麸皮的蛋白含量可以提高78%
以上。
[0044] 实施例2:
[0045] 本发明提供的一种利用实施例1中获得的白假丝酵母菌GL1发酵生产发酵饲料的方法,包括下述步骤:
[0046] (1)种子液制备
[0047] A1、将白假丝酵母菌GL1接种于斜面培养基上,30℃静置培养2.0d;然后将白假丝酵母菌从斜面培养基上挑去一环接种到5ml PDB培养基中,于30℃摇床培养3d;然后按体积
百分比以10%的接种量接种到PDB培养基中,于30℃摇床培养2.5d,得到培养菌液;
[0048] A2、将40ml培养菌液以8000r/min在4℃离心5min,收集菌体;将收集的菌体用无菌生理盐水清洗菌体1次,以5000r/min在4℃离心5min进行洗涤,洗涤后的菌体用40ml生理盐
水重悬,得到酵母菌种子液。
[0049] (2)接种发酵
[0050] B1、制备橄榄果渣‑麸皮培养基:
[0051] 以橄榄果渣、麸皮和纤维素酶为原料,所述麸皮的添加量为橄榄果渣重量的7%,所述纤维素酶的添加量为橄榄果渣和麸皮总重量的0.02%;其制备是先将橄榄果渣和麸皮
混合均匀在121℃灭菌20min,然后加入纤维素酶混合均匀后,于45℃静止培养12h;最后,添
加无菌水保证培养基终水分含量为55%,得到橄榄果渣‑麸皮培养基;
[0052] B2、按体积百分比10%的接种量将酵母种子液接种至步骤B1中的橄榄果渣‑麸皮培养基中,于27℃静置发酵6d,得到发酵饲料。
[0053] 实施例3:
[0054] 本发明提供的一种利用实施例1中获得的白假丝酵母菌GL1发酵生产发酵饲料的方法,包括下述步骤:
[0055] (1)种子液制备
[0056] A1、将白假丝酵母菌GL1接种于斜面培养基上,32℃静置培养1.5d;然后将白假丝酵母菌从斜面培养基上挑去一环接种到5ml PDB培养基中,于32℃摇床培养2.5d;然后按体
积百分比以5%的接种量接种到PDB培养基中,于32℃摇床培养2.0d,得到培养菌液;
[0057] A2、将40ml培养菌液以10000r/min在5℃离心3min,收集菌体;将收集的菌体用无菌生理盐水清洗菌体1次,以7000r/min在5℃离心3min进行洗涤,洗涤后的菌体用40ml生理
盐水重悬,得到酵母菌种子液。
[0058] (2)接种发酵
[0059] B1、制备橄榄果渣‑麸皮培养基:
[0060] 以橄榄果渣、麸皮和纤维素酶为原料,所述麸皮的添加量为橄榄果渣重量的7%,所述纤维素酶的添加量为橄榄果渣和麸皮总重量的0.03%;其制备是先将橄榄果渣和麸皮
混合均匀在121℃灭菌20min,然后加入纤维素酶混合均匀后,于47℃静止培养11h;最后,添
加无菌水保证培养基终水分含量为60%,得到橄榄果渣‑麸皮培养基;
[0061] B2、按体积百分比15%的接种量将酵母种子液接种至步骤B1中的橄榄果渣‑麸皮培养基中,于32℃静置发酵4d,得到发酵饲料。
[0062] 实施例4:
[0063] 本发明提供的一种利用实施例1中获得的白假丝酵母菌GL1发酵生产发酵饲料的方法,包括下述步骤:
[0064] (1)种子液制备
[0065] A1、将白假丝酵母菌GL1接种于斜面培养基上,28℃静置培养2.5d;然后将白假丝酵母菌从斜面培养基上挑去一环接种到5ml PDB培养基中,于28℃摇床培养3.5d;然后按体
积百分比以5%的接种量接种到PDB培养基中,于28℃摇床培养3.0d,得到培养菌液;
[0066] A2、将40ml培养菌液以6000r/min在3℃离心7min,收集菌体;将收集的菌体用无菌生理盐水清洗菌体1次,以3000r/min在3℃离心7min进行洗涤,洗涤后的菌体用40ml生理盐
水重悬,得到酵母菌种子液。
[0067] (2)接种发酵
[0068] B1、制备橄榄果渣‑麸皮培养基:
[0069] 以橄榄果渣、麸皮和纤维素酶为原料,所述麸皮的添加量为橄榄果渣重量的7%,所述纤维素酶的添加量为橄榄果渣和麸皮总重量的0.01%%;其制备是先将橄榄果渣和麸
皮混合均匀在121℃灭菌20min,然后加入纤维素酶混合均匀后,于43℃静止培养13h;最后,
添加无菌水保证培养基终水分含量为50%,得到橄榄果渣‑麸皮培养基;
[0070] B2、按体积百分比5%的接种量将酵母种子液接种至步骤B1中的橄榄果渣 ‑麸皮培养基中,于25℃静置发酵10d,得到发酵饲料。
[0071] 实施例5:
[0072] 本发明提供的一种利用实施例1中获得的白假丝酵母菌GL1发酵生产发酵饲料的方法,包括下述步骤:
[0073] (1)种子液制备
[0074] A1、将白假丝酵母菌GL1接种于斜面培养基上,30℃静置培养2.0d;然后将白假丝酵母菌从斜面培养基上挑去一环接种到5ml PDB培养基中,于30℃摇床培养3d;然后按体积
百分比以12%的接种量接种到PDB培养基中,于30℃摇床培养3.0d,得到培养菌液;
[0075] A2、将40ml培养菌液以8000r/min在4℃离心5min,收集菌体;将收集的菌体用无菌生理盐水清洗菌体1次,以6000r/min在5℃离心5min进行洗涤,洗涤后的菌体用40ml生理盐
水重悬,得到酵母菌种子液。
[0076] (2)接种发酵
[0077] B1、制备橄榄果渣‑麸皮培养基:
[0078] 以橄榄果渣、麸皮和纤维素酶为原料,所述麸皮的添加量为橄榄果渣重量的7%,所述纤维素酶的添加量为橄榄果渣和麸皮总重量的0.015%;其制备是先将橄榄果渣和麸
皮混合均匀在121℃灭菌20min,然后加入纤维素酶混合均匀后,于46℃静止培养12h;最后,
添加无菌水保证培养基终水分含量为50%‑60%,得到橄榄果渣‑麸皮培养基;
[0079] B2、按体积百分比12%的接种量将酵母种子液接种至步骤B1中的橄榄果渣‑麸皮培养基中,于30℃静置发酵7d,得到发酵饲料。
[0080] 实施例6:
[0081] 本发明提供的一种利用实施例1中获得的白假丝酵母菌GL1发酵生产发酵饲料的方法,包括下述步骤:
[0082] (1)种子液制备
[0083] A1、将白假丝酵母菌GL1接种于斜面培养基上,29℃静置培养2.0d;然后将白假丝酵母菌从斜面培养基上挑去一环接种到5ml PDB培养基中,于31℃摇床培养3.2d;然后按体
积百分比以8%的接种量接种到PDB培养基中,于30℃摇床培养2.0d,得到培养菌液;
[0084] A2、将40ml培养菌液以7000r/min在4℃离心5min,收集菌体;将收集的菌体用无菌生理盐水清洗菌体1次,以5000r/min在4℃离心5min进行洗涤,洗涤后的菌体用40ml生理盐
水重悬,得到酵母菌种子液。
[0085] (2)接种发酵
[0086] B1、制备橄榄果渣‑麸皮培养基:
[0087] 以橄榄果渣、麸皮和纤维素酶为原料,所述麸皮的添加量为橄榄果渣重量的7%,所述纤维素酶的添加量为橄榄果渣和麸皮总重量的0.02%;其制备是先将橄榄果渣和麸皮
混合均匀在121℃灭菌20min,然后加入纤维素酶混合均匀后,于45℃静止培养12h;最后,添
加无菌水保证培养基终水分含量为55%,得到橄榄果渣‑麸皮培养基;
[0088] B2、按体积百分比10%的接种量将酵母种子液接种至步骤B1中的橄榄果渣‑麸皮培养基中,于28℃静置发酵9d,得到发酵饲料。
[0089] 三、发酵结果:
[0090] 实施例2‑6中,检测橄榄果渣‑麸皮培养基发酵前和发酵后(发酵饲料)的蛋白含量变化,检测标准为GB/T 6432‑2018,并计算蛋白含量提高率,结果如下表1所示:
[0091] 表1蛋白含量
[0092]   橄榄果渣‑麸皮培养基 发酵饲料 蛋白含量提高率实施例2 9.1% 16.2% 78.02%
实施例3 8.8% 12.5% 42.05%
实施例4 8.9% 15.0% 68.54%
实施例5 9.1% 16.1% 76.92%
实施例6 8.9% 15.4% 73.03%
[0093] 由表1‑表5可知,在橄榄果渣‑麸皮培养基发酵4‑10d后,蛋白含量得到的明显提高,发酵4天蛋白含量能提高42.05%,发酵6天,蛋白含量能提高78.02%,而随着发酵时间
的继续延长,蛋白含量的提高率逐渐降低,说明发酵6天左右蛋白含量的提高率为最高。