基本信息:
- 专利标题： 一种合成单链DNA的T7 RNA聚合酶突变体及其筛选方法与应用
- 申请号：CN202411890789.2 申请日：2024-12-20
- 公开(公告)号：CN119876077A 公开(公告)日：2025-04-25
- 发明人： 刘延峰 , 刘龙 , 储未然 , 田荣臻 , 陈坚 , 堵国成 , 李江华 , 武耀康 , 吕雪芹
- 申请人： 江南大学
- 申请人地址： 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号
- 专利权人： 江南大学
- 当前专利权人： 江南大学
- 当前专利权人地址： 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号
- 代理机构： 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙)
- 代理人： 杨慧林
- 主分类号： C12N9/12
- IPC分类号： C12N9/12 ; C12N15/54 ; C12N15/70 ; C12N1/21 ; C12P19/34 ; C12R1/19
摘要：
本发明涉及一种合成单链DNA的T7RNA聚合酶突变体及其筛选方法与应用，属于酶工程技术领域。本发明提供了一种T7RNA聚合酶突变体的定向进化和筛选的方法，首先在底盘菌株基因组中敲除核酸外切酶和错配修复蛋白，敲入单链退火蛋白、含有缺失突变的抗性基因和单链DNA合成模板，构建得到用于筛选的基因工程菌，之后构建T7RNA聚合酶突变体文库，将带有突变体文库的重组质粒转入工程菌中，T7RNA聚合酶突变体合成单链DNA修复抗性基因的缺失突变，使转化后的工程菌能够在抗性平板上生长，经过多轮筛选得到的T7RNA聚合酶突变体经体外验证能够高效合成单链DNA，为单链DNA的合成提供了一种全新的工具，具有应用于基因编辑和进化工程等领域的潜力。