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1. 发明公开

CN110785236A 研究诸如核酸之类的分子的方法无效
公开(公告)号：CN110785236A
公开(公告)日：2020-02-11
申请号：CN201880042093.0
申请日：2018-06-21
申请人：贝斯4创新公司
发明人：卡梅伦·亚历山大·弗雷林 , 佩德罗·昆哈 , 托马斯·亨利·艾萨克
IPC分类号： B01L3/00 , C12Q1/6869
摘要：提供了一种操控不溶混的载体介质中的反应介质的微滴的方法，其中，为了实现化学转化的目的，目标分子被结合到固体支持物，其特征在于以下步骤：(a)在引起微滴和固体支持物结合的条件下使微滴与固体支持物接触；(b)让所述反应介质与所述目标分子反应和(c)之后施加力，以诱导所述反应介质从所述固体支持物脱离并在载体流体中重新形成微滴。在一个实施方案中，固体支持物是颗粒、珠子或类似物。

2. 发明公开

CN109475835A 识别堆中的液滴的方法和相关联的测序仪无效
公开(公告)号：CN109475835A
公开(公告)日：2019-03-15
申请号：CN201780043784.8
申请日：2017-07-14
申请人：贝斯4创新公司
发明人：卡梅伦·亚历山大·弗雷林 , 托马斯·亨利·艾萨克
IPC分类号： B01J19/00 , B01L3/02 , G01N35/10 , C12Q1/68
CPC分类号： B01L3/502784 , B01J2219/00367 , B01J2219/00576 , B01J2219/00702 , B01L3/0268 , B01L2200/0642 , B01L2200/0673 , B01L2300/0627 , B01L2300/0867 , C12Q1/6869 , C40B60/12 , G01N21/6428 , G01N21/6452 , G01N2021/6439 , C12Q2535/107 , C12Q2535/122 , C12Q2563/159 , C12Q2565/629
摘要：公开一种识别液滴流中的各个液滴的内容物的方法，每个液滴包含处于初始未发荧光状态的荧光团，其特征在于，包括以下步骤：将液滴逐个引入到至少一个开放式管中以在其中产生液滴堆；激活液滴内的荧光团以使它们发荧光；从管中依次释放液滴堆中的每个液滴，并在每个液滴出现时沿着管的主轴检测与每个液滴相关联的荧光。还公开一种适于对生物聚合物测序的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)逐步将生物聚合物消化成其构成单体的有序流；(2)将单体的流转化为含单体的水性液滴的对应流，每个液滴另外包含探针，所述探针能够(a)捕获单体以及(b)此后被消化以释放捕获的单体的未猝灭的荧光团特征；(3)将步骤(2)中产生的液滴的流引入到至少一个开放式管的入口端中，以在其中产生液滴堆；以及(4)从管的出口端依次释放每个液滴并在每个液滴出现时检测每个液滴中的荧光团。该方法可以用于对诸如核酸或蛋白质的生物聚合物测序的对应装置中。

3. 发明授权

CN105518152B 液滴储存方法失效
公开(公告)号：CN105518152B
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201480033462.1
申请日：2014-06-13
申请人：贝斯4创新公司
发明人：卡梅伦·亚历山大·弗雷林
IPC分类号： C12Q1/6869
摘要：本发明提供一种储存液滴流的方法，所述液滴的至少一些包含一种或多种单核苷酸和/或寡核苷酸以及液滴流体。其特征在于，在相应的唯一位置将每个液滴依次引入至基板的表面上的步骤，并且其特征还在于通过下列过程制备所述液滴流：所述过程包括由分析物通过逐步焦磷酸解或核酸外切生成有序的核苷酸流并且液滴将每个核苷酸捕获在相应液滴中的步骤。所述方法可以有利地与微液滴测序仪和分析单元一起使用，其中使用荧光光谱法确定前体多核苷酸分析物中核苷酸的序列。还描述了用于执行所述方法的设备。

4. 发明授权

CN104903463B 测序方法有权
公开(公告)号：CN104903463B
公开(公告)日：2018-02-06
申请号：CN201380062971.2
申请日：2013-10-04
申请人：贝斯4创新公司
发明人：卡梅伦·亚历山大·弗雷林 , 巴纳比·巴姆福思 , 布鲁诺·弗拉维奥·诺盖拉·德·索萨·苏亚 , 雷斯 , 托马斯·亨利·艾萨克 , 鲍里斯·布赖纳 , 亚历山德拉·纳塔莱 , 米歇尔·阿马西奥
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6874 , C12Q1/6869 , C12Q2521/101 , C12Q2521/301 , C12Q2521/319 , C12Q2521/501 , C12Q2525/301 , C12Q2563/159 , C12Q2565/1015 , C12Q2565/629
摘要：本发明公开了用于测序多核苷酸分析物的方法，所述方法包括：·a.产生含有单核苷酸的小滴流，其中在所述小滴流中的单核苷酸的顺序与所述分析物中核苷酸的序列对应；·b.向每个小滴中引入多个生物探针类型，每个类型包含处于不可检测状态的不同的标记且适于捕获不同的单核苷酸；·c.使包含在所述小滴中的单核苷酸与其互补探针结合；·d.使所述标记以可检测状态从已经结合单核苷酸的探针释放。所述探针是哑铃形状的探针，其包含荧光供体和猝灭剂标记和单核苷酸缺口。在通过聚合酶和连接酶修复缺口后，通过限制酶切割限制酶识别位点，然后进行外切核酸酶消化，以释放所述标记。

5. 发明公开

CN110621786A 单核苷酸检测方法及相关探针审中-实审
公开(公告)号：CN110621786A
公开(公告)日：2019-12-27
申请号：CN201880032020.3
申请日：2018-05-15
申请人：贝斯4创新公司
发明人：巴纳比·巴姆福思 , 卡梅伦·亚历山大·弗雷林 , 马克·德特莱夫森
IPC分类号： C12Q1/6869 , C12Q1/6823
摘要：对核酸进行测序的方法，其特征在于以下步骤：(1)通过核酸的渐进酶促消化产生单核苷三磷酸流；(2)通过在聚合酶存在下使至少一个单核苷三磷酸与相应的生物探针反应来产生至少一个寡核苷酸使用的探针，所述相应的生物探针包含(a)第一单链寡核苷酸，其包括核酸外切酶封闭位点，位于所述封闭位点5'侧并包括用于捕获该单核苷三磷酸的单核苷酸捕获位点的限制性核酸内切酶识别位点，和位于所述识别位点5'侧并被布置为使荧光团被猝灭的至少一个荧光团区域，和(b)第二和任选的第三单链寡核苷酸，它们分别与第一寡核苷酸分离，并能够与位于捕获位点3'和5'侧翼的第一寡核苷酸上的互补区域杂交；(3)用限制性核酸内切酶在识别位点切割所述经使用的探针的第一寡核苷酸链，以产生带有荧光团的第一寡核苷酸组分；(4)用具有3'-5'核酸外切活性的酶消化该第一寡核苷酸组分，以产生可检测状态的荧光团，以及(5)检测步骤(4)中释放的荧光团。还提供了与具有5'-3'核酸外切活性的酶一起使用的相应方法，以及新的生物探针和由其得到的试剂盒。

6. 发明公开

CN109790572A 单核苷酸检测方法及相关探针无效
公开(公告)号：CN109790572A
公开(公告)日：2019-05-21
申请号：CN201780052454.5
申请日：2017-09-04
申请人：贝斯4创新公司
发明人：巴纳比·巴姆福思 , 卡梅伦·亚历山大·弗雷林
IPC分类号： C12Q1/6869
摘要：提供测序核酸如DNA或RNA的方法。其特征在于以下步骤：(1)通过核酸的逐步酶促消化生成单核苷三磷酸的流；(2)通过在聚合酶和连接酶存在下使至少一个单核苷三磷酸与相应生物探针反应产生至少一个基本双链的寡核苷酸占用探针，所述生物探针含(a)第一单链寡核苷酸，其包括限制性核酸内切酶切口位点、用于捕获单核苷三磷酸的单核苷酸捕获位点和并置于切口位点任一侧的分别带有至少一个荧光团和至少一个猝灭剂以使荧光团猝灭的寡核苷酸区域，和(b)能够与捕获位点任一侧的第一寡核苷酸上的互补区杂交的第二和第三单链寡核苷酸；(3)用切口限制性核酸内切酶在切口位点切割占用探针的第一寡核苷酸链以产生分别带有荧光团和猝灭剂的分离的第一寡核苷酸组分；(4)将步骤(3)中生成的第一寡核苷酸组分与占用探针的互补链分离，和(5)检测带有荧光团的分离的寡核苷酸组分上的荧光团。该方法适于在微滴中进行。还描述了与该方法一起使用的新生物探针和探针系统。

7. 发明公开

CN107206379A 改进的小滴测序装置和方法无效
公开(公告)号：CN107206379A
公开(公告)日：2017-09-26
申请号：CN201680006117.8
申请日：2016-01-21
申请人：贝斯4创新公司
发明人：巴纳比·巴姆福思 , 卡梅伦·亚历山大·弗雷林 , 托马斯·亨利·艾萨克
IPC分类号： B01L3/00 , B01L3/02
CPC分类号： B01L3/502784 , B01F3/0807 , B01F13/0062 , B01L3/0268 , B01L3/502761 , B01L3/5088 , B01L2300/0819 , C12Q1/6869 , C12Q2563/159 , C12Q2565/629 , C12Q2563/149 , C12Q2565/301 , C12Q2565/518
摘要：提供用于对多核苷酸分析物进行测序的装置，并且所述装置包括；●第一区域，在其中通过逐步消化与颗粒连接的分析物的分子产生单个核苷酸流，所述颗粒位于所述第一区域中并且暴露于流动的水性介质；●第二区域，在其中从所述水性介质和所述核苷酸流产生相应的水性小滴流，并且其中所述至少一些小滴含有单个核苷酸，和●第三区域，在其中储存和/或询问每个小滴以揭示所述小滴中可能含有的单个核苷酸特有的性质；其特征在于，所述第一区域包括微流体通道，所述水性介质通过所述微流体通道流动，并且位置在其壁中包括中空的基座，能够向所述基座中施加抽吸，并且所述颗粒能够紧密匹配在所述基座中。

8. 发明公开

CN105518152A 液滴储存方法失效
公开(公告)号：CN105518152A
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201480033462.1
申请日：2014-06-13
申请人：贝斯4创新公司
发明人：卡梅伦·亚历山大·弗雷林
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6806 , B01L3/0241 , B01L3/502761 , B01L3/52 , B01L2200/0605 , B01L2200/0642 , B01L2300/0864 , B01L2300/0893 , C12Q1/6869 , C12Q2521/319 , C12Q2537/149 , C12Q2563/107 , C12Q2563/159 , C12Q2565/629
摘要：本发明提供一种储存液滴流的方法，所述液滴的至少一些包含一种或多种单核苷酸和/或寡核苷酸以及液滴流体。其特征在于，在相应的唯一位置将每个液滴依次引入至基板的表面上的步骤，并且其特征还在于通过下列过程制备所述液滴流：所述过程包括由分析物通过逐步焦磷酸解或核酸外切生成有序的核苷酸流并且液滴将每个核苷酸捕获在相应液滴中的步骤。所述方法可以有利地与微液滴测序仪和分析单元一起使用，其中使用荧光光谱法确定前体多核苷酸分析物中核苷酸的序列。还描述了用于执行所述方法的设备。

9. 发明公开

CN109790566A 单核苷酸检测方法及相关的探针无效
公开(公告)号：CN109790566A
公开(公告)日：2019-05-21
申请号：CN201780056674.5
申请日：2017-09-20
申请人：贝斯4创新公司
发明人：巴纳比·巴姆福思 , 卡梅伦·亚历山大·弗雷林
IPC分类号： C12Q1/6818 , C12Q1/6823 , C12Q1/6869
摘要：提供了一种核酸测序的方法。所述方法的特征在于以下步骤：(1)通过逐步酶消化核酸生成单核苷三磷酸流；(2)通过在聚合酶和连接酶存在下，使至少一个单核苷三磷酸与相应的初级探针反应，产生至少一个基本上双链的初级寡核苷酸占用探针，所述初级探针包含(a)第一单链寡核苷酸，其包含第一限制性核酸内切酶切口位点、用于捕获所述单核苷三磷酸的单核苷酸捕获位点和并置于所述捕获位点任一侧的寡核苷酸侧翼区，和(b)能够与第一寡核苷酸侧翼区杂交的第二和第三单链寡核苷酸；(3)用第一切口限制性核酸内切酶在第一切口位点切割占用初级探针的第一寡核苷酸链，以产生分离的第一寡核苷酸组分；(4)将步骤(3)中产生的第一寡核苷酸组分与占用探针的互补链分离；(5)通过在连接酶存在下使至少一个分离的第一寡核苷酸组分与相应的二级探针反应产生至少一个基本上双链的二级占用探针，所述二级探针包含(c)包含第二限制性核酸内切酶切口位点并带有基本上不可检测状态的荧光团的互补第四寡核苷酸，和任选的(d)至少部分与第四寡核苷酸互补的单链第五寡核苷酸；(6)用第二切口限制性核酸内切酶切割占用二级探针的第四寡核苷酸链，以产生分离的第四寡核苷酸组分，其中至少一些具有可检测状态的荧光团和至少部分为第四寡核苷酸的互补序列的单链第六寡核苷酸；和(7)检测步骤(6)中释放的荧光团。

10. 发明公开

CN108220146A 测序方法无效
公开(公告)号：CN108220146A
公开(公告)日：2018-06-29
申请号：CN201711464744.9
申请日：2013-10-04
申请人：贝斯4创新公司
发明人：卡梅伦·亚历山大·弗雷林 , 巴纳比·巴姆福思 , 布鲁诺·弗拉维奥·诺盖拉·德·索萨·苏亚雷斯 , 托马斯·亨利·艾萨克 , 鲍里斯·布赖纳 , 亚历山德拉·纳塔莱 , 米歇尔·阿马西奥
IPC分类号： C12M1/34 , C12Q1/6869
CPC分类号： C12Q1/6874 , C12Q1/6869 , C12Q2521/101 , C12Q2521/301 , C12Q2521/319 , C12Q2521/501 , C12Q2525/301 , C12Q2563/159 , C12Q2565/1015 , C12Q2565/629
摘要：本发明公开了用于核酸测序的微流体设备，其特征在于包括：第一区，分析物被包含在其中并且被逐步消化成作为其组成的单核苷酸的流；与第一区连接的一级微流体路径，其适于允许包含一级水性微滴的有序流的载体溶剂通过，一级水性微滴中的至少一些包含单核苷酸中的一种；第二区，其放置在一级微流体路径内，并且包含微滴注射器和/或聚结装置，所述聚结装置用于使来自二级微流体路径的二级水性微滴聚结成所述有序流中的一级水性微滴；存储区，其在第二区的下游与一级微流体路径连接，一级水性微滴被存储在所述存储区中；光源，其用于检测在一级微流体路径下游的一个或多个位置处的微滴，和光检测器，其用于检测来自所述位置处的一级水性小滴的荧光。

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