本发明涉及在诸如人类的温血动物体内产生抗血管生成和/或血 管通透性降低效果的方法，其中所述温血动物任选地正在进行电离辐 射的治疗，本发明尤其涉及治疗癌症，尤其是包括实体瘤的癌症的方 法，该方法包括选自：ZD6474与5-FU的联合施用；ZD6474与CPT-11 的联合施用；以及ZD6474与5-FU和CPT-11的联合施用之一；本发明 还涉及包括选自ZD6474和5-FU；ZD6474和CPT-11；以及ZD6474和 5-FU和CPT-11之一的药物组合物；还涉及包括选自ZD6474和5-FU； ZD6474和CPT-11；以及ZD6474和5-FU和CPT-11之一的组合产品， 用于通过特定疗法治疗人体或动物体的方法；本发明还涉及包括选自 ZD6474和5-FU；ZD6474和CPT-11；以及ZD6474和5-FU和CPT-11 之一的试剂盒；还涉及选自ZD6474和5-FU；ZD6474和CPT-11；以及 ZD6474和5-FU和CPT-11之一的组合在制备用于在诸如人类的温血动 物体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效果的药物中的用途，其 中所述温血动物任选地正在进行电离辐射的治疗.

正常的血管生成在包括胚胎发育、伤口愈合和女性生殖功能的若 干成分在内的多个过程中具有重要作用.不良或病理性的血管生成与 包括糖尿病性视网膜病、牛皮癣、癌症、类风湿性关节炎、动脉粥样 硬化、卡波西肉瘤和血管瘤在内的疾病状态有关(Fan et al.，1995， Trends Pharmacol.Sci.16：57-66；Folkman，1995，Nature Medicine1：27-31).血管通透性的改变被认为在正常和病理性生理 过程中均具有作用(Cullinan-Bove et al.，1993，Endocrinology 133：829-837；Senger et al.，1993，Cancer and Metastasis Reviews，12：303-324).业已鉴定了若干种具有体外内皮细胞生长 促进活性的多肽，包括酸性和碱性成纤维细胞生长因子(aFGF&bFGF) 和血管内皮生长因子(VEGF)。与FGFs的生长因子活性相比，由于受 体的表达有限，VEGF的生长因子活性相对地对内皮细胞具有特异性. 最近，有证据表明VEGF是正常和病理性两种血管生成(Jakeman et al.， 1993，Endocrinology，133：848-859；Kolch et al.，1995，Breast Cancer Research and Treatment，36：139-155)和血管通透性 (Connolly et al.，1989，J.Biol.Chem.264：20017-20024)的

重要刺激物.通过利用抗体隔离VEGF对VEGF作用的拮抗可使肿瘤生

长受到抑制(Kim et al.，1993，Nature362：841-844).

受体酪氨酸激酶(RTKs)在使生化信号传输通过细胞的质膜方面 具有重要作用。这些跨膜分子特有地包括通过质膜中的一个区段与胞 内酪氨酸激酶结构域相连的胞外配体-结合结构域。配体与所述受体的 结合刺激了与该受体关联的酪氨酸激酶活性，导致该受体及其它胞内 分子上的酪氨酸残基被磷酸化。在酪氨酸磷酸化方面的这些变化起动 了一个可导致多种细胞反应的信号级联。迄今，业已根据氨基酸序列 同源性定义鉴定了至少19个独特的RTK亚家族。其中一个亚家族目前 包括类fms酪氨酸激酶受体Flt-1、含有激酶插入结构域的受体KDR (也被称为Flk-1)和另一种类fms酪氨酸激酶受体Flt-4。在这些相 关的RTKs中，有2种RTK，即Flt-1和KDR已被证实可与VEGF以高 亲和力结合(De Vries et al.，1992，Science 255：989-991；Terman et al.，1992，Biochem.Biophys.Res.Comm.1992，187：1579- 1586)。VEGF与这些表达在异源细胞中的受体的结合与细胞蛋白质的 酪氨酸磷酸化状态的变化以及钙通量的变化有关。

VEGF是维管生成和血管生成的关键刺激物。该细胞因子通过诱导 内皮细胞增殖、蛋白酶表达和迁移，以及细胞形成毛细管的后续组织， 诱导了血管萌发表型(Keck，P.J.，Hauser，S.D.，Krivi，G.，Sanzo， K.，Warren，T.，Feder，J.，and Connolly，D.T.，Science (Washington DC)，246：1309-1312，1989；Lamoreaux，W.J.， Fitzgerald，M.E.，Reiner，A.，Hasty，K.A.，and Charles，S.T.， Microvasc.Res.，55：29-42，1998；Pepper，M.S.，Montesano，R.， Mandroita，S.J.，Orci，L.and Vassalli，J.D.，Enzyme Protein， 49：138-162，1996)。此外，VEGF可诱导显著的血管通透性(Dvorak， H.F.，Detmar，M.，Claffey，K.P.，Nagy，J.A.，van de Water，L.， and Senger，D.R.，(Int.Arch.Allergy Immunol.，107：233-235， 1995；Bates，D.O.，Heald，R.I.，Curry，F.E.and Williams，B.J. Physiol.(Lond.)，533：263-272，2001)，促进了病理性血管生成 的特征，即形成了具有高的可通透性且不完全的脉管网。

业已证实，单独活化KDR足以促进所有针对VEGF的主要表型反 应，包括内皮细胞增殖、迁移和存活，以及血管通透性的诱导(Meyer， M.，Clauss，M.，Lepple-Wienhues，A.，Waltenberger，J.， Augustin，H.G.，Ziche，M.，Lanz，C.，Büttner，M.，Rziha，H-J.， and Dehio，C.，EMBO J.，18：363-374，1999；Zeng，H.，Sanyal， S.and Mukhopadhyay，D.，J.Biol.Chem.，276：32714-32719，2001； Gille，H.，Kowalski，J.，Li，B.，LeCouter，J.，Moffat，B， Zioncheck，T.F.，Pelletier，N.and Ferrara，N.，J.Biol.Chem.， 276：3222-3230，2001)。

国际专利申请公开号WO 98/13354和WO 01/32651描述了VEGF 受体酪氨酸激酶的若干种抑制剂，即喹唑啉衍生物。WO 98/13354和 WO 01/32651中描述的化合物具有抗VEGF受体酪氨酸激酶的活性，同 时还具有一定的抗EGF受体酪氨酸激酶的活性。本发明化合物ZD6474 属于WO 98/13354的广泛一般性公开内容，并在WO 01/32651中得到 例证。

WO 01/32651对其发明化合物的描述是：“可以单独治疗的形式 应用，或者可以在包括本发明化合物的基础上另外包括一种或多种其 它的物质和/或治疗。这种联合治疗可通过采用同时、序贯或分开施用 该治疗各独立成分的方式而得以实现”。WO 01/32651接着描述了这 种联合治疗的实例，包括手术、放射治疗和许多类型的化疗剂，包括 5-氟尿嘧啶(5-FU)和伊立替康(CPT-11)。WO 01/32651中没有内 容描述其发明的任何化合物与其它治疗联合施用时具有可产生令人惊 讶的有利效果的用途。

出乎意料和令人惊讶的是，我们目前已发现，与特定选择的联合 治疗，即与选自5-FU、CPT-11、以及5-FU和CPT-11之一的联合治疗 结合应用的特定化合物ZD6474可显著地产生比单独应用选自 ZD6474、5-FU、CPT-11，以及5-FU和CPT-11中的任意一项时更好的 抗血管生成和/或血管通透性降低效果。根据本发明的一个方面，与选 自5-FU、CPT-11以及5-FU和CPT-11中的一项联合应用的ZD6474可 显著地产生比单独应用选自ZD6474、5-FU、CPT-11，以及5-FU和 CPT-11中的任意一项时更好的抗癌效果。根据本发明的一个方面，与 选自5-FU、CPT-11、以及5-FU和CPT-11中的一项联合应用的ZD6474 对实体瘤可显著地产生比单独应用选自ZD6474、5-FU、CPT-11，以及 5-FU和CPT-11中的任意一项时更好的效果。根据本发明的一个方面， 与选自5-FU、CPT-11、以及5-FU和CPT-11中的一项联合应用的ZD6474 对结直肠癌可显著地产生比单独应用选自ZD6474、5-FU、CPT-11，以 及5-FU和CPT-11中的任意一项时更好的效果。

本发明治疗方法的抗癌效果包括，但不限于，抗肿瘤效果、反应 率、疾病进展时间和存活率。本发明治疗方法的抗肿瘤效果包括，但 不限于，抑制肿瘤生长、肿瘤生长延缓、肿瘤消退、肿瘤缩小、肿瘤 在治疗中断时再生长的时间增加、疾病进展减慢。预期当本发明治疗 方法被施用于有治疗癌症的需要，具有或不具有实体瘤的温血动物， 诸如人类时，该治疗方法将产生可通过测定例如下述一项或多项：抗 肿瘤效果的程度、反应率、疾病进展时间和存活率而得以确定的效果。

本发明提供了在诸如人类的温血动物体内产生抗血管生成和/或 血管通透性降低效果的方法，包括在施用有效量的选自：a)5-FU； b)CPT-11；以及c)5-FU和CPT-11中的一项之前、之后或同时，对该 动物施用有效量的4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶- 4-基甲氧基)喹唑啉，也被称为ZD6474：

或其药学可接受盐。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 的癌症的方法，包括在施用有效量的选自：5-FU、CPT-11、以及5- FU和CPT-11中的一项之前、之后或同时，对该动物施用有效量的 ZD6474或其药学可接受盐。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 包括实体瘤在内的癌症的方法，包括在施用有效量的选自：5-FU、 CPT-11、以及5-FU和CPT-11中的一项之前、之后或同时，对该动物 施用有效量的ZD6474或其药学可接受盐。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 的结直肠癌的方法，包括在施用有效量的选自：5-FU、CPT-11、以及 5-FU和CPT-11中的一项之前、之后或同时，对该动物施用有效量的 ZD6474或其药学可接受盐。

本发明的一个进一步的方面提供了在诸如人类的温血动物体内产 生抗血管生成和/或血管通透性降低效果的方法，包括在施用有效量的 选自：5-FU、CPT-11、以及5-FU和CPT-11中的一项之前、之后或同 时，对该动物施用有效量的ZD6474或其药学可接受盐，其中ZD6474、 5-FU和CPT-11均可任选地连同药学可接受赋形剂或载体一起施用。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 的癌症的方法，包括在施用有效量的选自：5-FU、CPT-11、以及5- FU和CPT-11中的一项之前、之后或同时，对该动物施用有效量的 ZD6474或其药学可接受盐，其中ZD6474、5-FU和CPT-11均可任选地 连同药学可接受赋形剂或载体一起施用。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 包括实体瘤在内的癌症的方法，包括在施用有效量的选自：5-FU、 CPT-11、以及5-FU和CPT-11中的一项之前、之后或同时，对该动物 施用有效量的ZD6474或其药学可接受盐，其中ZD6474、5-FU和CPT-11 均可任选地连同药学可接受赋形剂或载体一起施用。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 的结直肠癌的方法，包括在施用有效量的选自：5-FU、CPT-11、以及 5-FU和CPT-11中的一项之前、之后或同时，对该动物施用有效量的 ZD6474或其药学可接受盐，其中ZD6474、5-FU和CPT-11均可任选地 连同药学可接受赋形剂或载体一起施用。

本发明的一个进一步的方面提供了一种药物组合物，该组合物包 括ZD6474或其药学可接受盐和5-FU，连同药学可接受赋形剂或载体。

本发明的一个进一步的方面提供了一种药物组合物，该组合物包 括ZD6474或其药学可接受盐和CPT-11，连同药学可接受赋形剂或载 体。

本发明的一个进一步的方面提供了一种药物组合物，该组合物包 括ZD6474或其药学可接受盐，以及5-FU和CPT-11，连同药学可接受 赋形剂或载体。

本发明的一个进一步的方面提供了一种组合产品，该产品包括 ZD6474或其药学可接受盐和5-FU，用于通过特定疗法治疗人体或动物 体的方法。

本发明的一个进一步的方面提供了一种组合产品，该产品包括 ZD6474或其药学可接受盐和CPT-11，用于通过特定疗法治疗人体或动 物体的方法。

本发明的一个进一步的方面提供了一种组合产品，该产品包括 ZD6474或其药学可接受盐以及5-FU和CPT-11，用于治疗经过特定治 疗的人体或动物体的方法。

本发明的一个进一步的方面提供了一种包括ZD6474或其药学可接 受盐和5-FU的试剂盒。

本发明的一个进一步的方面提供了一种包括ZD6474或其药学可接 受盐和CPT-11的试剂盒。

本发明的一个进一步的方面提供了一种包括ZD6474或其药学可接 受盐以及5-FU和CPT-11的试剂盒。

本发明的一个进一步的方面提供了一种试剂盒，包括：

a)第一个单位剂型中的ZD6474或其药学可接受盐；

b)第二个单位剂型中的5-FU；和

c)用于容纳上述第一个和第二个剂型的容器。

本发明的一个进一步的方面提供了一种试剂盒，包括：

a)第一个单位剂型中的ZD6474或其药学可接受盐；

b)第二个单位剂型中的CPT-11；和

c)用于容纳上述第一个和第二个剂型的容器。

本发明的一个进一步的方面提供了一种试剂盒，包括：

a)第一个单位剂型中的ZD6474或其药学可接受盐；

b)第二个单位剂型中的5-FU；

c)第三个单位剂型中的CPT-11；和

d)用于容纳上述第一、第二和第三个剂型的容器。

本发明的一个进一步的方面提供了一种试剂盒，包括：

a)在第一个单位剂型中，包括ZD6474或其药学可接受盐，连同药 学可接受赋形剂或载体；

b)在第二个单位剂型中，包括5-FU连同药学可接受赋形剂或载 体；和

c)用于容纳上述第一个和第二个剂型的容器。

本发明的一个进一步的方面提供了一种试剂盒，包括：

a)在第一个单位剂型中的ZD6474或其药学可接受盐，连同药学可 接受赋形剂或载体；

b)在第二个单位剂型中的CPT-11连同药学可接受赋形剂或载 体；和

c)用于容纳上述第一个和第二个剂型的容器。

本发明的一个进一步的方面提供了一种试剂盒，包括：

a)在第一个单位剂型中的ZD6474或其药学可接受盐，连同药学可 接受赋形剂或载体；

b)在第二个单位剂型中的5-FU连同药学可接受赋形剂或载体；

c)在第三个单位剂型中的CPT-11连同药学可接受赋形剂或载 体；和

d)用于容纳上述第一、第二和第三个剂型的容器。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和选 自：

a)5-FU；

b)CPT-11；和

c)5-FU和CPT-11

中的一项在制备用于在诸如人类的温血动物体内产生抗血管生成 和/或血管通透性降低效果的药物中的用途。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和选 自：

a)5-FU；

b)CPT-11；和

c)5-FU和CPT-11

中的一项在制备用于在诸如人类的温血动物体内产生抗癌症效果 的药物中的用途。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和选 自：

a)5-FU；

b)CPT-11；和

c)5-FU和CPT-11

中的一项在制备用于在诸如人类的温血动物体内产生抗肿瘤效果 的药物中的用途。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和选 自：

a)5-FU；

b)CPT-11；和

c)5-FU和CPT-11

中的一项在制备用于在诸如人类的温血动物体内产生抗癌症效果 的药物中的用途，其中该癌症为结直肠癌。

本发明的一个进一步的方面提供了一种治疗性的联合疗法，包括 对需要这种治疗性疗法的温血动物，诸如人类施用有效量的ZD6474或 其药学可接受盐，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，并施用有效 量的5-FU，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，其中ZD6474和5- FU可同时、序贯或以任意次序分开施用。

本发明的一个进一步的方面提供了一种治疗性的联合疗法，包括 对需要这种治疗性疗法的温血动物，诸如人类施用有效量的ZD6474或 其药学可接受盐，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，并施用有效 量的CPT-11，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，其中ZD6474和 CPT-11可同时、序贯或以任意次序分开施用。

本发明的一个进一步的方面提供了一种治疗性的联合疗法，包括 对需要这种治疗性疗法的温血动物，诸如人类施用有效量的ZD6474或 其药学可接受盐，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，并施用有效 量的5-FU，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，还施用有效量的 CPT-11，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，其中ZD6474、5-FU 和CPT-11可同时、序贯或以任意次序分开施用。

本发明此处定义的联合治疗可通过同时、序贯或分开施用该治疗 的独立成分而得以实现。此处定义的联合治疗可以单独治疗形式应 用，或者可以在包括本发明联合治疗的基础上另外包括手术或放疗或 其它化疗剂。手术可在利用此处所述的ZD6474施用所述的联合治疗之 前、期间或之后，包括局部或完全的肿瘤切除步骤。

任选地与本发明的联合治疗一起应用的其它化疗剂包括被引入此 处作为参考的WO 01/32651所述的那些化疗剂。这种化疗可能包括WO 01/32651所述的5类主要的治疗剂：

(i)其它抗血管生成剂，包括血管导向剂；

(ii)细胞生长抑制剂；

(iii)生物反应调节物(例如干扰素)；

(iv)抗体(例如)；和

(v)医学肿瘤学中应用的抗增殖/抗肿瘤药及它们的组合；以及其 它种类的药剂，包括：

(vi)反义治疗；

(vii)基因疗法；和

(ix)免疫疗法.

ZD6474、5-FU与电离辐射或ZD6474、CPT-11与电离辐射或 ZD6474、5-FU、CPT-11与电离辐射的多重组合的施用可产生若干效 果，诸如抗肿瘤效果，且该效果比单独应用选自ZD6474、5-FU、CPT-11 和电离辐射中任意一项时所获得的效果显著。ZD6474、5-FU与电离辐 射或ZD6474、CPT-11与电离辐射或ZD6474、5-FU、CPT-11与电离辐 射的多重组合的施用可产生若干效果，诸如抗肿瘤效果，且该效果比 应用ZD6474与5-FU的组合所获得的效果显著，比应用ZD6474与 CPT-11的组合所获得的效果显著，也比应用ZD6474、5-FU与CPT-11 的组合所获得的效果显著。ZD6474、5-FU与电离辐射或ZD6474、CPT-11 与电离辐射或ZD6474、5-FU、CPT-11与电离辐射的多重组合的施用可 产生若干效果，诸如抗肿瘤效果，且该效果比应用ZD6474与电离辐射 的组合所获得的效果显著，比应用5-FU与电离辐射的组合所获得的效 果显著，也比应用CPT-11与电离辐射的组合所获得的效果显著，还比 应用5-FU、CPT-11与电离辐射的组合所获得的效果显著。

本发明提供了在诸如人类的温血动物体内产生抗血管生成和/或 血管通透性降低效果的方法，包括在施用有效量的5-FU之前、之后或 同时，和在施用有效量的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施用 有效量的ZD6474或其药学可接受盐。

本发明提供了在诸如人类的温血动物体内产生抗血管生成和/或 血管通透性降低效果的方法，包括在施用有效量的CPT-11之前、之后 或同时，和在施用有效量的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施 用有效量的ZD6474或其药学可接受盐。

本发明提供了在诸如人类的温血动物体内产生抗血管生成和/或 血管通透性降低效果的方法，包括在施用有效量的5-FU之前、之后或 同时，和在施用有效量的CPT-11之前、之后或同时，以及在施用有效 量的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施用有效量的ZD6474或其 药学可接受盐。

本发明提供了治疗诸如人类的温血动物体内的癌症的方法，包括 在施用有效量的5-FU之前、之后或同时，和在施用有效量的电离辐射 之前、之后或同时，对该动物施用有效量的ZD6474或其药学可接受盐。

本发明提供了治疗诸如人类的温血动物体内的癌症的方法，包括 在施用有效量的CPT-11之前、之后或同时，和在施用有效量的电离辐 射之前、之后或同时，对该动物施用有效量的ZD6474或其药学可接受 盐。

本发明提供了治疗诸如人类的温血动物体内的癌症的方法，包括 在施用有效量的5-FU之前、之后或同时，和在施用有效量CPT-11之 前、之后或同时，以及在施用有效量的电离辐射之前、之后或同时， 对该动物施用有效量的ZD6474或其药学可接受盐。

本发明提供了治疗诸如人类的温血动物体内包括实体瘤的癌症的 方法，包括在施用有效量的5-FU之前、之后或同时，和在施用有效量 的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施用有效量的ZD6474或其药 学可接受盐。

本发明提供了治疗诸如人类的温血动物体内包括实体瘤的癌症的 方法，包括在施用有效量的CPT-11之前、之后或同时，和在施用有效 量的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施用有效量的ZD6474或其 药学可接受盐。

本发明提供了治疗诸如人类的温血动物体内包括实体瘤的癌症的 方法，包括在施用有效量的5-FU之前、之后或同时，和在施用有效量 CPT-11之前、之后或同时，以及在施用有效量的电离辐射之前、之后 或同时，对该动物施用有效量的ZD6474或其药学可接受盐。

具体而言，所述包括实体瘤的癌症为结直肠癌。

本发明的一个进一步的方面提供了在诸如人类的温血动物体内产 生抗血管生成和/或血管通透性降低效果的方法，包括在施用有效量的 5-FU之前、之后或同时，和在施用有效量的电离辐射之前、之后或同 时，对该动物施用有效量的ZD6474或其药学可接受盐，其中ZD6474 和5-FU均可任选地连同药学可接受赋形剂或载体一起被施用。

本发明的一个进一步的方面提供了在诸如人类的温血动物体内产 生抗血管生成和/或血管通透性降低效果的方法，包括在施用有效量的 CPT-11之前、之后或同时，和在施用有效量的电离辐射之前、之后或 同时，对该动物施用有效量的ZD6474或其药学可接受盐，其中ZD6474 和CPT-11均可任选地连同药学可接受赋形剂或载体一起被施用。

本发明的一个进一步的方面提供了在诸如人类的温血动物体内产 生抗血管生成和/或血管通透性降低效果的方法，包括在施用有效量的 5-FU之前、之后或同时，和在施用有效量CPT-11之前、之后或同时， 以及在施用有效量的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施用有效 量的ZD6474或其药学可接受盐，其中ZD6474、5-FU和CPT-11均可 任选地连同药学可接受赋形剂或载体一起被施用。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 的癌症的方法，包括在施用有效量的5-FU之前、之后或同时，和在施 用有效量的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施用有效量的ZD6474 或其药学可接受盐，其中ZD6474和5-FU均可任选地连同药学可接受 赋形剂或载体一起被施用。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 的癌症的方法，包括在施用有效量的CPT-11之前、之后或同时，和在 施用有效量的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施用有效量的 ZD6474或其药学可接受盐，其中ZD6474和CPT-11均可任选地连同药 学可接受赋形剂或载体一起被施用。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 的癌症的方法，包括在施用有效量的5-FU之前、之后或同时，和在施 用有效量的CPT-11之前、之后或同时，以及在施用有效量的电离辐射 之前、之后或同时，对该动物施用有效量的ZD6474或其药学可接受盐， 其中ZD6474、5-FU和CPT-11均可任选地连同药学可接受赋形剂或载 体一起被施用。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 包括实体瘤的癌症的方法，包括在施用有效量的5-FU之前、之后或同 时，和在施用有效量的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施用有 效量的ZD6474或其药学可接受盐，其中ZD6474和5-FU均可任选地连 同药学可接受赋形剂或载体一起被施用。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 包括实体瘤的癌症的方法，包括在施用有效量的CPT-11之前、之后或 同时，和在施用有效量的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施用 有效量的ZD6474或其药学可接受盐，其中ZD6474和CPT-11均可任选 地连同药学可接受赋形剂或载体一起被施用。

本发明的一个进一步的方面提供了治疗诸如人类的温血动物体内 包括实体瘤的癌症的方法，包括在施用有效量的5-FU之前、之后或同 时，和在施用有效量的CPT-11之前、之后或同时，以及在施用有效量 的电离辐射之前、之后或同时，对该动物施用有效量的ZD6474或其药 学可接受盐，其中ZD6474、5-FU和CPT-11均可任选地连同药学可接 受赋形剂或载体一起被施用。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和 5-FU在生产适用于在诸如人类的温血动物体内产生抗血管生成和/或 血管通透性降低效果的药物中的用途，其中所述温血动物正在进行电 离辐射的治疗。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和 CPT-11在生产适用于在诸如人类的温血动物体内产生抗血管生成和/ 或血管通透性降低效果的药物中的用途，其中所述温血动物正在进行 电离辐射的治疗。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐与 5-FU和CPT-11在生产适用于在诸如人类的温血动物体内产生抗血管 生成和/或血管通透性降低效果的药物中的用途，其中所述温血动物正 在进行电离辐射的治疗。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和 5-FU在生产适用于在诸如人类的温血动物体内产生抗癌症效果的药物 中的用途，其中所述温血动物正在进行电离辐射的治疗。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和 CPT-11在生产适用于在诸如人类的温血动物体内产生抗癌症效果的药 物中的用途，其中所述温血动物正在进行电离辐射的治疗。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和 5-FU和CPT-11在生产适用于在诸如人类的温血动物体内产生抗癌症 效果的药物中的用途，其中所述温血动物正在进行电离辐射的治疗。

具体而言，诸如人类的温血动物患有结直肠癌。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和 5-FU在生产适用于在诸如人类的温血动物体内产生抗肿瘤效果的药物 中的用途，其中所述温血动物正在进行电离辐射的治疗。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和 CPT-11在生产适用于在诸如人类的温血动物体内产生抗肿瘤效果的药 物中的用途，其中所述温血动物正在进行电离辐射的治疗。

本发明的一个进一步的方面提供了ZD6474或其药学可接受盐和 5-FU和CPT-11在生产适用于在诸如人类的温血动物体内产生抗肿瘤 效果的药物中的用途，其中所述温血动物正在进行电离辐射的治疗。

本发明的一个进一步的方面提供了一种治疗性的联合疗法，包括 对需要这种联合治疗的温血动物，诸如人类施用有效量的ZD6474或其 药学可接受盐，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，和施用有效量 的5-FU，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，以及施用有效量的电 离辐射，其中ZD6474、5-FU和电离辐射可同时、序贯或以任意次序分 开施用。

本发明的一个进一步的方面提供了一种治疗性的联合疗法，包括 对需要这种联合治疗的温血动物，诸如人类施用有效量的ZD6474或其 药学可接受盐，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，和施用有效量 的CPT-11，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，以及施用有效量的 电离辐射，其中ZD6474、CPT-11和电离辐射可同时、序贯或以任意次 序分开施用。

本发明的一个进一步的方面提供了一种治疗性的联合疗法，包括 对需要这种联合治疗的温血动物，诸如人类施用有效量的ZD6474或其 药学可接受盐，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，和施用有效量 的5-FU，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，还施用有效量的 CPT-11，任选地连同药学可接受赋形剂或载体，以及施用有效量的电 离辐射，其中ZD6474、5-FU、CPT-11和电离辐射可同时、序贯或以任 意次序分开施用。

经过电离辐射治疗的诸如人类的温血动物指在施用包括ZD6474和 选自5-FU、CPT-11、以及5-FU和CPT-11中的一项的药物或联合治疗 之前、之后或同时经过电离辐射治疗的诸如人类的温血动物。例如， 该电离辐射可在施用包括ZD6474和选自5-FU、CPT-11、以及5-FU和 CPT-11中的一项的药物或联合治疗之前一周到之后一周的时间段内被 施用于所述诸如人类的温血动物。这意味着ZD6474、5-FU、CPT-11 和电离辐射可以任意次序分别或序贯地施用，或者同时施用。该温血 动物可同时体验ZD6474、5-FU、CPT-11和电离辐射每一项所产生的效 果。

根据本发明的一个方面，电离辐射是在施用ZD6474与选自5-FU、 CPT-11，以及5-FU和CPT-11中的一项的一种组合之前，或者在施用 ZD6474与选自5-FU、CPT-11以及5-FU和CPT-11中的一项的一种组 合之后施用的。

根据本发明的一个方面，电离辐射是在施用ZD6474与选自5-FU、 CPT-11，以及5-FU和CPT-11中的一项的任意组合之前，或者在施用 ZD6474与选自5-FU、CPT-11以及5-FU和CPT-11中的一项的所有组 合之后施用的。

根据本发明的一个方面，ZD6474是在温血动物正在进行电离辐射 的治疗后被施用于该动物的。

如上所述，本发明的联合治疗，即如此处所定义的，ZD6474任选 地连同电离辐射与选自5-FU、CPT-11，以及5-FU和CPT-11中的一项 的组合，具有适合它们的抗血管生成和/或血管通透性效果的益处。血 管生成和/或血管通透性提高存在于广泛的疾病状态中，包括癌症(包 括白血病、多发性骨髓瘤和淋巴瘤)、糖尿病、牛皮癣、类风湿性关 节炎、卡波西肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病变、动脉粥样硬化、动 脉再狭窄、自身免疫病、急性炎症、淋巴水肿、过度瘢痕形成和粘连、 子宫内膜异位、功能失调性子宫出血和与视网膜脉管增生有关的眼病 (包括与年龄有关的黄斑变性)。本发明的联合治疗被认为尤其适用 于预防和治疗诸如癌症和卡波西肉瘤的疾病。具体而言，本发明的联 合治疗被认为可以有利地使例如结肠、乳房、前列腺、肺和皮肤的原 发性和复发性实体瘤的生长减慢。更具体而言，本发明的这种联合治 疗被认为可以抑制与VEGF有关的任何形式的癌症，包括白血病、多发 性骨髓瘤和淋巴瘤，也可例如，抑制那些与VEGF有关的原发性和复发 性实体瘤的生长，尤其是那些生长和扩散显著依赖于VEGF的肿瘤，包 括例如，结肠、乳房、前列腺、肺、外阴和皮肤的某些肿瘤。

根据本发明的一个方面，本发明的这种联合治疗被认为可以有利 地使结直肠癌中的原发性和继发性(复发性)肿瘤的生长减慢。

在本发明的另一个方面中，ZD6474，任选地连同电离辐射与选自 5-FU、CPT-11，以及5-FU和CPT-11中的一项被认为可以抑制那些与 VEGF有关的原发性和复发性实体瘤的生长，尤其是那些生长和扩散显 著依赖于VEGF的肿瘤的生长。

在本发明的另一个方面中，ZD6474，任选地连同电离辐射与选自 5-FU、CPT-11，以及5-FU和CPT-11中的一项被认为可以抑制那些与 VEGF和EGF二者有关的原发性和复发性实体瘤的生长，尤其是那些生 长和扩散显著依赖于VEGF和EGF的肿瘤的生长。

根据本发明的另一个方面，本发明治疗方法的效果被认为至少等 同于该治疗的各组分，即ZD6474、5-FU、CPT-11和电离辐射单独应用 时的效果的加合。

根据本发明的另一个方面，本发明治疗方法的效果被认为比该治 疗的各组分，即ZD6474、5-FU、CPT-11和电离辐射单独应用时的效果 的加合更显著。

根据本发明的另一个方面，本发明治疗方法的效果被认为是协同 效应。

根据本发明，如果通过测定例如反应程度、反应率、疾病进展时 间或存活期，发现联合治疗的效果在治疗上比以常规剂量施用该联合 治疗各组合中的一种或其它时可获得的效果好，则将该联合治疗定义 为提供了协同效应。例如，如果该联合治疗的效果在治疗上比单独应 用ZD6474、5-FU、CPT-11、5-FU与CPT-11或电离辐射时可获得的效 果好，则该联合治疗的效果是协同性的。此外，如果在一组对单独应 用ZD6474、5-FU、CPT-11、5-FU与CPT-11或电离辐射无反应(或反 应弱)的患者中均获得了有利效果，则该联合治疗的效果是协同性的。 另外，如果上述组分中的一种以常规剂量施用，其它组分则以缩减剂 量施用，且通过测定例如反应程度、反应率、疾病进展时间或存活期， 发现治疗效果等同于以常规剂量施用该联合治疗各组分时可获得的效 果，则该联合治疗的效果被定义为提供了协同效应。具体而言，如果 ZD6474、5-FU、CPT-11、5-FU与CPT-11或电离辐射的常规剂量可以 被缩减，而无损于反应程度、反应率、疾病进展时间和存活期中的一 项或几项，尤其无损于反应持续时间，且副作用比施用常规剂量的各 组分时发生的副作用少和/或较不麻烦，则协同作用被认为是存在的。

此处所述的组合物可以是适合口服的形式，例如片剂或胶囊，也 可以是适合鼻内给药或吸入给药的形式，例如粉剂或溶液，也可以是 适合肠胃外注射(包括静脉内、皮下、肌内、血管内或输注)的形式， 例如无菌溶液、悬液或乳剂，也可以是适合局部给药的形式，例如软 膏或乳膏，也可以是适合直肠给药的形式，例如栓剂，或者其给药途 径可能是直接注射进肿瘤，或部位送递或局部送递。在本发明的其它 实施方案中，联合治疗的ZD6474可通过内窥镜、气管内、病变内、经 皮、静脉内、皮下、腹膜内或肿瘤内给药方式实现送递。通常，此处 所述的组合物可以常规方式利用常规赋形剂制备。本发明组合物的单 位剂型形式具有优势。

ZD6474通常被施用给温血动物的单位剂量在每平方米动物体表面 积施用10-500mg的范围内，例如对人体而言约为0.3-15mg/kg。考 虑的单位剂量在特定范围内，例如0.3-15mg/kg，优选0.5-5mg/kg， 即通常的治疗有效剂量。诸如片剂或胶囊的单位剂型往往含有，例如 25-500mg的有效成分。优选地应用0.5-5mg/kg范围内的日剂量。

CPT-11也被称为伊立替康.可根据任何已知的给药途径和剂量施 用CPT-11。例如，可通过每3周以350mg/m2的速率静脉内输注30-90 分钟的方法施用CPT-11。

CPT-11是喜树碱的半合成衍生物，在体内代谢为活性代谢产物 SN-38。

5-FU是5-氟尿嘧啶.可根据任何已知的给药途径和剂量施用5- FU.例如，可将5-FU稀释在500ml 5％葡萄糖溶液或500ml 0.9％氯化 钠溶液中，通过静脉内输注方式每日施用，剂量为15mg/kg：以每分 钟40滴的速率输注4小时；或输注30-60分钟；或每日连续输注24 小时。推荐的5-FU日剂量不超过1g。通常以上述方式中的一种每日施 用5-FU，直到已施用12-15g为止，构成一个5-FU疗程.根据惯例， 5-FU各疗程之间的间隔为4-6周。可选地，可通过连续三天静脉内注 射的方式施用剂量为12mg/kg的5-FU，接着在第5、7和9天，即间 隔几天后的三天中施用剂量为6mg/kg的5-FU，之后是每周一次地通 过静脉内注射施用5-15mg/kg的维持剂量。可选地，可在该患者的治 疗期间，每周一次，通过静脉内注射施用剂量为15mg/kg的5-FU。也 可通过24小时的连续输注，动脉内局部灌注剂量为5-7.5mg/kg的 5-FU。也可通过每周一次口服剂量为15mg/kg的5-FU，或连续6天施 用剂量为15mg/kg的5-FU，之后每周一次施用的剂量则为15mg/kg。

5-FU通常连同甲酰四氢叶酸一起被施用。为消除顾虑，本发明的 联合治疗包括5-FU连同或不连同甲酰四氢叶酸一起施用的用途。

甲酰四氢叶酸可根据任何已知的给药途径和剂量被施用。例如， 可口服甲酰四氢叶酸。当与5-FU组合应用时，可方便地将甲酰四氢叶 酸钙形式的甲酰四氢叶酸通过静脉内方式施用。例如，可通过缓慢的 静脉内注射剂量为200mg/m2的甲酰四氢叶酸钙，接着立即通过静脉内 注射初剂量为370mg/m2的5-FU。考虑到溶液中的钙含量，甲酰四氢叶 酸的注射不应短于3-5分钟。连续5天，每日重复该治疗。后续疗程 在21-28天无治疗的时间间隔后进行。

可选地，可采用下述方案：连续6周，每周2小时输注500mg/m2 的甲酰四氢叶酸，并在这6周期间，中途通过静脉内浓注方式施用 500mg/m2的5-FU。

可选地，也可采用下述方案：连续2天，每天2小时静脉内输注 200mg/m2的甲酰四氢叶酸，随后通过静脉内浓注方式施用400mg/m2的 5-FU，再通过22小时静脉内输注600mg/m2的5-FU。每2周重复一次。

可选地，可以口服方式施用卡培他滨(XelodaTM)、喃氟啶或TS-1 形式的5-FU。卡培他滨是相对无细胞毒性的氟尿嘧啶氨基甲酸酯，可 作为口服的5-FU前体发挥作用。可根据任何已知剂量施用卡培他滨。 例如，可连续14天，每天两次口服剂量为1250mg/m2的卡培他滨(相 当于2500mg/m2的日剂量)，之后中断7天。

本发明的联合治疗包括5-FU以任何形式(包括可系统地或在肿瘤 内转化为5-FU的前体药物和前体形式)施用时、通过任何途径施用时， 以及连同或不连同甲酰四氢叶酸一起施用时，5-FU的用途。

本发明的联合治疗包括CPT-11或SN-38以任何形式(包括可系统 地或在肿瘤内转化为SN-38的前体药物和前体形式，也包括脂质体配 方)施用时，和通过任何途径施用时的用途。

放疗可根据临床放疗中的已知经验施用。电离辐射的剂量应该是 已知被应用在临床放疗中的剂量.被采用的放射疗法应包括例如，γ- 射线、X-射线的应用和/或放射性同位素来源的辐射的直接送递。其它 形式的DNA损伤因子也被包括在本发明内，诸如微波和UV-照射。例 如，可持续5-6周，每周5天，每日施用剂量为1.8-2.0Gy的X-射线。 通常，总分次剂量应在45-60Gy的范围内。单次较大剂量，例如5-10Gy 可作为放疗疗程的一部分施用。单次剂量可在手术期内施用。可采用 一日多次放疗，以在一个时段内定期施用小剂量的X-射线，例如连续 很多天，每小时0.1Gy。放射性同位素的剂量范围可大幅变动，取决于 该同位素的半衰期、所发射射线的强度和类型，以及细胞的吸收情况。

如上所述，有必要根据被治疗的宿主、施用途径和所治疗疾病的 严重程度，对治疗或预防性治疗特定疾病状态所需的各疗法剂量的大 小进行改动。相应地，最适剂量可由治疗任意特定患者的医师确定。 例如，为降低毒性，降低该述联合治疗各组分的上述剂量可能是必要 或理想的。

本发明的联合治疗包括：ZD6474和5-FU；ZD6474和CPT-11； ZD6474、5-FU和CPT-11；ZD6474、5-FU和电离辐射；ZD6474、CPT-11 和电离辐射；ZD6474、5-FU、CPT-11和电离辐射。其中的各药剂是以 任意次序分别或序贯施用的，或者可能是同时施用。

本发明包括5-FU或CPT-11或5-FU与CPT-11连同ZD6474或连 同ZD6474的盐的几种组合。适用在药物组合物中的盐应为药学可接受 盐，而不是可用于制备ZD6474及其药学可接受盐的其它盐。这种盐可 能是可提供药学可接受阳离子的无机或有机碱形成的。由无机或有机 碱形成的这种盐包括，例如，诸如钠或钾盐的碱金属盐，诸如钙或镁 盐的碱土金属盐，铵盐或例如，与甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗 啉或tris-(2-羟乙基)胺形成的盐。

如无另外指明，可根据例如，下述由实施例(a)-(c)例证的任意方 法制备ZD6474：

(i)通过真空旋转蒸发进行蒸发，并在通过过滤除去诸如干燥剂的 残留固体后进行检查操作；

(ii)在环境温度，即18-25℃的范围内，以及在诸如氩的惰性气 体气氛下进行操作；

(iii)利用从E.Merck，Darmstadt，Germany获得的Merck Kieselgel硅石(Art.9385)或Merck Lichroprep RP-18(Art.9303) 反相硅石进行柱层析(通过急骤操作)和中压液相层析(MPLC)；

(iv)获得的产量仅为例证，未必是可获得的最大产量；

(v)熔点未经校正，是利用Mettler SP62自动熔点测定装置、油 浴装置或Koffler加热板装置确定的。

(vi)通过核(通常为质子)磁共振(NMR)和质谱技术确定终产物 结构，如结构式I所示；质子核磁共振化学位移值是以Δ值为标度测 定的，峰的多重性如下所示：s，单峰；d，双峰；t，三重峰；m，多 重峰；br，宽峰；q，四重峰；NMR图谱是于24℃条件下在被设定为 400MHz的机器上完成的。

(vii)中间产物通常不被完全表征，其纯度是通过薄层层析 (TLC)、高效液相层析(HPLC)、红外线(IR)或NMR分析评估的；

(viii)应用到下列缩写词：

DMF N，N-二甲基甲酰胺

DMSO二甲基亚砜

THF四氢呋喃

TFA三氟乙酸

NMP1-甲基-2-吡咯烷酮

方法(a)

在THF/甲醇混合物(1.4ml/1.4ml)中，将37％甲醛水溶液(50μl， 0.6mmol)和氰基氢硼化钠(23mg，0.36mmol)相继加入4-(4-溴-2- 氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉溶液(139mg， 0.3mmol)中。环境温度下搅拌1小时后，加入水，并于真空条件下除 去挥发物。连同水一起研磨残留物，过滤并采用水进行洗涤，并于真 空条件下干燥。通过在中性矾土上进行层析，并相继采用二氯甲烷、 二氯甲烷/乙酸乙酯(1/1)、二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇(50/45/5)进 行洗脱，以纯化干燥后所获的固体。在真空条件下使含有预期产物的 组分蒸发干燥。将所获的白色固体溶解在二氯甲烷/甲醇(3ml/3ml) 中，并加入溶于醚中的3N氯化氢(0.5ml)。于真空条件下除去挥发 物。连同醚一起研磨残留固体，过滤并采用醚进行洗涤，在真空条件 下干燥后，获得4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4- 基甲氧基)喹唑啉盐酸盐(120mg，69％)。

MS-ESI：475-477[MH]+

质子化形式的4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶- 4-基甲氧基)喹唑啉盐酸盐的NMR图谱显示存在A和B2种形态，且 A:B的比率约为9:1。

1H NMR图谱：(DMSOd6；CF3COOD)1.55-1.7(m，A 2H形态)； 1.85-2.0(m，B 4H形态)；2.03(d，A 2H形态)；2.08-2.14(br s，A 1H形态)；2.31-2.38(br s，B 1H形态)；2.79(s，A 3H 形态)；2.82(s，B 3H形态)；3.03(t，A 2H形态)；3.21(br s， B 2H形态)；3.30(br s，B 2H形态)；3.52(d，A 2H形态)； 4.02(s，3H形态)；4.12(d，A 2H形态)；4.30(d，B 2H形态)； 7.41(s，1H形态)；7.5-7.65(m，2H形态)；7.81(d，1H形态)； 8.20(s，1H形态)；8.88(s，1H形态)

元素分析：                发现       C46.0    H5.2    N9.6

C22H24N4O2BrF0.3H2O2.65HCl 需要       C45.8    H4.8    N9.7％

初始材料的制备方法如下：

回流加热由7-苄氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉盐酸盐(8.35g， 27.8mmol)(如WO 97/22596、实施例1所述方法制备)和4-溴-2- 氟苯胺(5.65g，29.7mmol)在2-丙醇(200ml)中形成的溶液4小时。 通过过滤收集回流加热所获的沉淀，相继采用2-丙醇和醚对其进行洗 涤，并于真空条件下干燥，获得7-苄氧基-4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6- 甲氧基喹唑啉盐酸盐(9.46g，78％)。

1H NMR图谱：(DMSOd6；CF3COOD)4.0(s，3H)；5.37(s，2H)； 7.35-7.5(m，4H)；7.52-7.62(m，4H)；7.8(d，1H)；8.14(9s， 1H)；8.79(s，1H)

MS-ESI：456[MH]+

元素分析：           发现      C54.0      H3.7      N8.7

C22H17N3O2BrF 0.9HCl  需要      C54.2      H3.7      N8.6％

回流加热由7-苄氧基-4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉盐 酸盐(9.4g，19.1mmol)在TFA(90ml)中形成的溶液50分钟。使该 混合物冷却，并倾倒在冰上。通过过滤收集冷却后获得的沉淀，并将 其溶解在甲醇(70ml)中。利用浓缩的氨水溶液将该溶液调整为 pH9-10。通过蒸发使该混合物体积浓缩为初始体积的一半。通过过滤 收集浓缩所获的沉淀，相继采用水和醚对其进行洗涤，并于真空条件 下干燥，获得4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-羟基-6-甲氧基喹唑啉 (5.66g，82％)。

1H NMR图谱：(DMSOd6；CD3COOD)3.95(s，3H)；7.09(s，1H)； 7.48(s，1H)；7.54(t，1H)；7.64(d，1H)；7.79(s，1H)； 8.31(s，1H)

MS-ESI：366[MH]+

元素分析：      发现      C49.5      H3.1      N11.3

C15H11N3O2BrF    需要      C49.5      H3.0     N11.5％

使温度维持在0-5范围内，将二碳酸二叔丁酯(41.7g， 0.19mol)在乙酸乙酯(75ml)中形成的溶液分次加入由4-哌啶羧酸 乙酯(30g，0.19mol)在乙酸乙酯中形成并被冷却至5℃的溶液中。 环境温度下搅拌48小时，将混合物倾倒在水(300ml)上。分离有机 层，并相继采用水(200ml)、0.1N盐酸水溶液(200ml)、饱和碳酸 氢钠溶液(200ml)和盐水(200ml)对其进行洗涤，经过干燥(MgSO4) 和蒸发后，获得4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶)羧酸乙酯(48g，98％)。

1H NMR图谱：(CDC l3)1.25(t，3H)；1.45(s，9H)；1.55- 1.70(m，2H)；1.8-2.0(d，2H)；2.35-2.5(m，1H)；2.7-2.95 (t，2H)；3.9-4.1(br s，2H)；4.15(q，2H)

将1M氢化铝锂在THF(133ml，0.133mol)中形成的溶液分次加 入由4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶)羧酸乙酯(48g，0.19mol)在干THF (180ml)中形成并冷却至0℃的溶液中。0℃搅拌2小时后，相继加 入水(30ml)和2N氢氧化钠(10ml)。通过硅藻土过滤除去沉淀，并 采用乙酸乙酯对其进行洗涤。相继采用水、盐水洗涤滤液，经过干燥 (MgSO4)和蒸发后，获得1-(叔丁氧羰基)-4-羟甲基哌啶(36.3g， 89％)。

1H NMR图谱：(CDC l3)1.05-1.2(m，2H)；1.35-1.55(m，10H)； 1.6-1.8(m，2H)；2.6-2.8(t，2H)；3.4-3.6(t，2H)；4.0- 4.2(br s，2H)

将1，4-二叠氮双环[2.2.2]辛烷(42.4g，0.378mol)加入由1- (叔丁氧羰基)-4-羟甲基哌啶(52.5g，0.244mol)在叔丁基甲基醚 (525ml)中形成的溶液中。环境温度下搅拌15分钟后，将该混合物 冷却至5℃，并在2小时内分次加入由甲苯磺酰氯(62.8g，0.33mmol) 在叔丁基甲基醚(525ml)中形成的溶液中，同时将温度维持在0℃。 环境温度下搅拌1小时后，加入石油醚(11)。通过过滤除去沉淀. 使滤液蒸发，获得固体。将该固体溶解在醚中，并相继采用0.5N盐酸 水溶液(2×500ml)、水、饱和碳酸氢钠溶液和盐水对其进行洗涤， 经过干燥(MgSO4)和蒸发后，获得1-(叔丁氧羰基)-4-(4-甲基苯基磺 酰基羟甲基)哌啶(76.7g，85％)。

MS(ESI)：392[MNa]+

1H NMR图谱：(CDCl3)1.0-1.2(m，2H)；1.45(s，9H)；1.65 (d，2H)；1.75-1.9(m，2H)；2.45(s，3H)；2.55-2.75(m，2H)； 3.85(d，1H)；4.0-4.2(br s，2H)；7.35(d，2H)；7.8(d，2H)

将碳酸钾(414mg，3mmol)加入由4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-羟基 -6-甲氧基喹唑啉(546ml，1.5mmol)在DMF(5ml)中形成的悬液中。 环境温度下搅拌10分钟后，加入1-(叔丁氧羰基)-4-(4-甲基苯基磺 酰基羟甲基)哌啶(636mg，1.72mmol)，并95℃加热该混合物2小时。 冷却后，将混合物倾倒在冷却水(20ml)上。通过过滤收集沉淀，并 采用水对其进行洗涤，真空条件下干燥后，获得4-(4-溴-2-氟苯胺 基)-7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基-6-甲氧基喹唑啉(665mg， 79％)。

MS-ESI：561-563[MH]+

1HNMR图谱：(DMSOd6)1.15-1.3(m，2H)、1.46(s，9H)、 1.8(d，2H)、2.0-2.1(m，1H)、2.65-2.9(m，2H)、3.95(s， 3H)、4.02(br s，2H)、4.05(d，2H)、7.2(s，1H)、7.48(d， 1H)、7.55(t，1H)、7.65(d，1H)、7.8(s，1H)、8.35(s，1H)、 9.55(br s，1H)

将TFA(3ml)加入由4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-(1-(叔丁氧羰基) 哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(673mg，1.2mmol)在二氯甲烷 (10ml)中形成的悬液中。环境温度下搅拌1小时后，于真空条件下 除去挥发物。连同水/醚混合物一起研磨残留物。分离有机层。再次采 用醚洗涤水层。采用2N氢氧化钠水溶液将该水层调整至pH10。采用二 氯甲烷对该水层进行提取.使有机层干燥(MgSO4)，并在真空条件下 除去溶剂。连同醚/石油醚的混合物(1/1)一起研磨干燥后所获的固 体，过滤后采用醚进行洗涤，真空条件下干燥，获得4-(4-溴-2-氟苯 胺基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(390mg，70.5％)。

MS-ESI：461-463[MH]+

1H NMR图谱：(DMSOd6)1.13-1.3(m，2H)、1.75(d，2H)、 1.87-2.0(m，1H)、2.5(d，2H)、3.0(d，2H)、3.96(s，3H)、 3.98(d，2H)、7.2(s，1H)、7.5(dd，1H)、7.55(t，1H)、 7.68(dd，1H)、7.80(s，1H)、8.36(s，1H)、9.55(br s，1H)

元素分析：      发现      C54.5      H4.9      N12.1

C21H22N4O2BrF    需要      C54.7      H4.8      N12.1％

方法(b)

将37％的甲醛水溶液(3.5ml，42mmol)加入由4-(4-溴-2-氟苯 胺基)-7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉 (3.49g，6.22mmol)(如上文方法(a)中有关初始材料所述的方法 制备)在甲酸(35ml)中形成的溶液中。95℃加热4小时后，真空条 件下除去挥发物。将残留物悬浮于水中，并通过缓慢加入2N氢氧化钠 溶液将该混合物调整为pH10.5。采用乙酸乙酯对该悬液进行提取。采 用盐水洗涤有机层，经过MgSO4干燥和蒸发后，获得4-(4-溴-2-氟苯 胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(2.61g，88％)。

MS-ESI：475-477[MH]+

1H NMR图谱：(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)、1.8(d，2H)、1.7-1.9 (m，1H)、1.95(t，2H)、2.2(s，3H)、2.85(d，2H)、3.96 (s，3H)、4.05(d，2H)、7.19(s，1H)、7.5(d，1H)、7.55 (t，1H)、7.67(d，1H)、7.81(s，1H)、8.37(s，1H)、9.54 (s，1H)

元素分析：      发现      C55.4      H5.1      N11.6

C22H24N4O2BrF   需要       C55.6      H5.1      N11.8％

方法(c)

回流加热由4-氯-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉

(200mg，0.62mmol)和4-溴-2-氟苯胺基(142mg，0.74mmol)在含 有6N氯化氢(110μl，0.68ml)的异丙醇(3ml)中形成的悬液1.5 小时。冷却后，通过过滤收集沉淀，并相继采用异丙醇和醚对其进行 洗涤，真空条件下干燥后获得4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1- 甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉盐酸盐(304mg，90％)。

元素分析：                发现      C47.9      H4.9      N10.0

C22H24N4O2BrF0.5H2O1.8HCl  需要      C48.2      H5.0      N10.1％

0.08异丙醇

质子化形式的4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶- 4-基甲氧基)喹唑啉盐酸盐的NMR图谱显示存在A和B 2种形态，且 A:B的比率约为9:1。

1H NMR图谱：(DMSOd6)1.6-1.78(m，A2H形态)；1.81-1.93 (brs，B 4H形态)；1.94-2.07(d，A 2H形态)；2.08-2.23(br s，A 1H形态)；2.29-2.37(br s，B 1H形态)；2.73(d，A 3H 形态)；2.77(d，B 3H形态)；2.93-3.10(q，A 2H形态)；3.21 (br s，B 2H形态)；3.27(br s，B 2H形态)；3.42-3.48(d，A 2H形态)；4.04(s，3H形态)；4.10(d，A 2H形态)；4.29(d，B 2H形态)；7.49(s，1H)；7.53-7.61(m，2H)；7.78(d，1H)； 8.47(s，1H)；8.81(s，1H)；10.48(br s，A1H形态)；10.79 (br s，B 1H形态)；11.90(br s，1H)

为获得另一种NMR读数，如上所述，将一些固态碳酸钾加入4-(4- 溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉盐酸 盐的DMSO溶液中，以在NMR管中释放游离的基质.随后再次记录NMR 图谱，显示仅存在如下所示的一种形态：

1H NMR图谱：(DMSOd6；固态碳酸钾)1.3-1.45(m，2H)；1.75 (d，2H)；1.7-1.9(m，1H)；1.89(t，2H)；2.18(s，3H)； 2.8(d，2H)；3.98(s，3H)；4.0(d，2H)；7.2(s，1H)；7.48 (d，1H)；7.55(t，1H)；7.68(d，1H)；7.8(s，1H)；8.35 (s，1H)；9.75(s，1H)

4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基) 喹唑啉(游离基质)的样品由4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1- 甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉盐酸盐(如上所述方法制备)生成的， 方法如下：

将4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基) 喹唑啉盐酸盐(50mg)悬浮于二氯甲烷(2ml)中，并采用饱和碳酸氢 钠溶液对其进行洗涤。使该二氯甲烷溶液干燥(MgSO4)，并通过蒸发 除去挥发物，获得4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶- 4-基甲氧基)喹唑啉(游离基质)。如此生成的游离基质的NMR图谱显 示仅存在如下所示的一种形态：

1H NMR图谱：(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)；1.76(d，2H)；1.7-1.9 (m，1H)；1.9(t，2H)；2.19(s，3H)；2.8(d，2H)；3.95 (s，3H)；4.02(d，2H)；7.2(s，1H)；7.48(d，1H)；7.55 (t，1H)；7.68(dd，1H)；7.8(s，1H)；8.38(s，1H)；9.55 (brs，1H)

获得另一种NMR读数，将一些CF3COOD加入上述4-(4-溴-2-氟苯 胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(游离基质)的 NMR DMSO溶液中，并再次记录NMR图谱。如此获得的质子化形式的 4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑 啉三氟乙酸盐的图谱显示存在A和B2种形态，且A:B的比率约为9:1。

1H NMR图谱：(DMSOd6；CF3COOD)1.5-1.7(m，A 2H形态)；1.93 (br s，B 4H形态)；2.0-2.1(d，A 2H形态)；2.17(br s，A 1H 形态)；2.35(br s，B 1H形态)；2.71(s，A 3H形态)；2.73 (s，B 3H形态)；2.97-3.09(t，A 2H形态)；3.23(br s，B 2H 形态)；3.34(br s，B 2H形态)；3.47-3.57(d，A 2H形态)； 4.02(s，3H)；4.15(d，A 2H形态)；4.30(d，B 2H形态)；7.2 (s，1H)；7.3-7.5(m，2H)；7.6(d，1H)；7.9(s，1H)；8.7 (s，1H)

初始材料的制备方法如下：

将1-(叔丁氧羰基)-4-(4-甲基苯基磺酰基羟甲基)哌啶(40g， 0.11mol)(如上文方法(a)中有关初始材料所述方法制备)加入由 4-羟基-3-甲氧基苯甲酸乙酯(19.6g，0.1mol)和碳酸钾(28g， 0.2mol)在干DMF(200ml)中形成的悬液中。95℃条件下搅拌2.5小 时后，将该混合物冷却至环境温度，并分配在水与乙酸乙酯/醚之间。 采用水、盐水对有机层进行洗涤，并经过干燥(MgSO4)和蒸发。所获 的油从石油醚中结晶出来，将该悬液于5℃条件下保存过夜。通过过滤 收集固体，并采用石油醚对其进行洗涤，真空条件下干燥后获得4- (1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯(35g， 89％)。

m.p.81-83℃

MS(ESI)：416[MNa]+

1HNMR图谱：(CDCl3)1.2-1.35(m，2H)、1.4(t，3H)、1.48 (s，9H)、1.8-1.9(d，2H)、2.0-2.15(m，2H)、2.75(t，2H)、 3.9(d，2H)、3.95(s，3H)、4.05-4.25(br s，2H)、4.35(q， 2H)、6.85(d，1H)、7.55(s，1H)、7.65(d，1H)

元素分析：      发现      C63.4      H8.0      N3.5

C21H31NO60.3H2O  需要      C63.2      H8.0      N3.5％

将甲醛(12M，37％水溶液，35ml，420mmol)加入由4-(1-(叔丁 氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯(35g，89mmol)在 甲酸(35ml)中形成的溶液中。95℃条件下搅拌3小时后，通过蒸发 除去挥发物。将残留物溶解在二氯甲烷中，并加入由3M氯化氢在醚 (40ml，120mmol)中形成的溶液。采用醚稀释后，对混合物进行研磨， 直到形成固体。通过过滤收集该固体，采用醚对其进行洗涤，真空条 件干燥后，于50℃条件下过夜，获得3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基 甲氧基)苯甲酸乙酯(30.6g，定量)。

MS(ESI)：308[MH]+

1H NMR图谱：(DMSOd6)1.29(t，3H)、1.5-1.7(m，2H)、1.95 (d，2H)、2.0-2.15(br s，1H)、2.72(s，3H)、2.9-3.1(m， 2H)、3.35-3.5(br s，2H)、3.85(s，3H)、3.9-4.05(br s，2H)、 4.3(q，2H)、7.1(d，1H)、7.48(s，1H)、7.6(d，1H)

将由3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)苯甲酸乙酯(30.6g， 89mmol)在二氯甲烷(75ml)中形成的溶液冷却至0-5℃。加TFA (37.5ml)后，在15分钟内逐滴加入由发烟的24N硝酸(7.42ml， 178mmol)在二氯甲烷(15ml)中形成的溶液。完成添加后，使该溶液 变热，并于环境温度下搅拌2小时.在真空条件下除去挥发物，并将 残留物溶解在二氯甲烷(50ml)中。将该溶液冷却至0-5℃，加入醚. 通过过滤收集沉淀，并于50℃真空条件下使其干燥。将干燥后所获的 固体溶解在二氯甲烷(500ml)中，加入由3M氯化氢在醚(30ml)中 形成的溶液后，再加入醚(500ml).通过过滤收集固体，并于50℃ 真空条件下干燥后，获得3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-6- 硝基苯甲酸乙酯(28.4g，82％)。

MS(ESI)：353[MH]+

1H NMR图谱：(DMSOd6)1.3(t，3H)、1.45-1.65(m，2H)、 1.75-2.1(m，3H)、2.75(s，3H)、2.9-3.05(m，2H)、3.4-3.5 (d，2H)、3.95(s，3H)、4.05(d，2H)、4.3(q，2H)、7.32 (s，1H)、7.66(s，1H)

在1.8个大气压下，使3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)- 6-硝基苯甲酸乙酯(3.89g，10mmol)在含有吸附于活性炭(50％湿度) (389mg)上的10％铂的甲醇(80ml)中形成的悬液氢化，直到对氢的 吸收停止.过滤该混合物，并使滤液蒸发。将残留物溶解在水(30ml) 中，采用饱和碳酸氢钠溶液将其调整为pH10。采用乙酸乙酯/醚(1/1) 稀释该混合物，并分离有机层。采用乙酸乙酯/醚对水层进一步提取， 并将有机层合并。采用水、盐水洗涤该有机层，并使其经过干燥 (MgSO4)、过滤和蒸发。在醚/石油醚的混合物中研磨由上获得的固 体，过滤后采用石油醚进行洗涤，并于60℃真空条件下干燥后，获得 6-氨基-3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)苯甲酸乙酯(2.58g， 80％)。

m.p.111-112℃

MS(ESI)：323[MH]+

1H NMR图谱：(CDCl3)1.35(t，3H)、1.4-1.5(m，2H)、1.85 (m，3H)、1.95(t，2H)、2.29(s，3H)、2.9(d，2H)、3.8 (s，3H)、3.85(d，2H)、4.3(q，2H)、5.55(br s，2H)、6.13 (s，1H)、7.33(s，1H)

元素分析：       发现      C62.8      H8.5      N8.3

C17H26N2O40.2H2O  需要      C62.6      H8.2      N8.6％

115条件下，将6-氨基-3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基) 苯甲酸乙酯(16.1g，50mmol)在含有乙酸甲脒(5.2g，50mmol)的 2-甲氧基乙醇(160ml)中形成的溶液加热2小时。在4小时内每30 分钟一次地分次加入乙酸甲脒(10.4g，100mmol)。最后的添加完成 后，延长加热30分钟。冷却后，在真空条件下除去挥发物.将所获固 体溶解在乙醇(100ml)和二氯甲烷(50ml)中。通过过滤除去沉淀， 并将滤液浓缩至100ml的终体积。将悬液冷却至5℃，并通过过滤收集 冷却后所获的固体，相继采用冷乙醇和醚对其进行洗涤，于60℃真空 条件下干燥过夜，获得6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3，4- 二氢喹唑-4-酮(12.7g，70％)。

MS(ESI)：304[MH]+

1HNMR图谱：(DMSOd6)1.25-1.4(m，2H)、1.75(d，2H)、 1.9(t，1H)、1.9(s，3H)、2.16(s，2H)、2.8(d，2H)、3.9 (s，3H)、4.0(d，2H)、7.11(s，1H)、7.44(s，1H)、7.97 (s，1H)

85℃条件下回流加热由6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)- 3，4-二氢喹唑-4-酮(2.8g，9.24mmol)在含有DMF(280μl)的亚硫 酰氯(28ml)中形成的溶液1小时。冷却后，通过蒸发除去挥发物。 连同醚一起研磨蒸发后所获的沉淀，过滤后，采用醚进行洗涤，并于 真空条件下干燥。将干燥后所获固体溶解在二氯甲烷中，并加入饱和 的碳酸氢钠水溶液。分离有机层，采用水、盐水对其进行洗涤后，经 过干燥(MgSO4)和蒸发，获得4-氯-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基 甲氧基)喹唑啉(2.9g，98％)。

MS(ESI)：322[MH]+

1HNMR图谱：(DMSOd6)1.3-1.5(m，2H)、1.75-1.9(m，3H)、 2.0(t，1H)、2.25(s，3H)、2.85(d，2H)、4.02(s，3H)、 4.12(d，2H)、7.41(s，1H)、7.46(s，1H)、8.9(s，1H)

可选地，可如下制备6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)- 3，4-二氢喹唑-4-酮：

在20分钟内，将氢化钠(1.44g，在矿物油中形成60％悬液， 36mmol)分次加入由7-苄氧基-6-甲氧基-3，4-二氢喹唑-4-酮(8.46g， 30mmol)(如例如WO 97/22596、实施例1所述方法制备)在DMF(70ml) 中形成的溶液中，并搅拌该混合物1.5小时。分次加入新戊酸氯甲酯 (5.65g，37.5mmol)，并于环境温度下搅拌该混合物2小时。采用乙 酸乙酯(100ml)稀释该混合物，并将其倾倒在冰/水(400ml)和2N 盐酸(4ml)上。分离有机层，并采用乙酸乙酯提取水层，采用盐水洗 涤合并后的提取物，干燥(MgSO4)并通过蒸发除去溶剂。连同醚与石 油醚的混合物一起研磨残留物，通过过滤收集固体，并于真空条件下 干燥后，获得7-苄氧基-6-甲氧基-3-((新戊酰基氧基)甲基)-3，4-二 氢喹唑-4-酮(10g，84％)。

1H NMR图谱：(DMSOd6)1.11(s，9H)、3.89(s，3H)、5.3(s， 2H)、5.9(s，2H)、7.27(s，1H)、7.35(m，1H)、7.47(t，2H)、 7.49(d，2H)、7.51(s，1H)、8.34(s，1H)

在大气压和氢气条件下，搅拌由7-苄氧基-6-甲氧基-3-((新戊酰 基氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑-4-酮(7g，17.7mmol)和10％吸附于木 炭上的铂催化剂(700mg)在乙酸乙酯(250ml)、DMF(50ml)、甲 醇(50ml)和乙酸(0.7ml)中形成的混合物40分钟。通过过滤除去 催化剂，并通过蒸发从滤液中除去溶剂。连同醚一起研磨残留物，通 过过滤收集研磨后所获的固体，并于真空条件下干燥后，获得7-羟基 -6-甲氧基-3-((新戊酰基氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑-4-酮(4.36g， 80％)。

1H NMR图谱：(DMSOd6)1.1(s，9H)、3.89(s，3H)、5.89(s， 2H)、7.0(s，1H)、7.48(s，1H)、8.5(s，1H)

在氮气条件下，将三苯基膦(1.7g，6.5mmol)加入由7-羟基-6- 甲氧基-3-((新戊酰基氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑-4-酮(1.53g， 5mmol)在二氯甲烷(20ml)中形成的悬液，接着相继加入1-(叔丁氧 羰基)-4-(羟甲基)哌啶(1.29g，6mmol)(如上文方法(a)中有关 初始材料所述方法制备)和由偶氮二甲酸二乙酯(1.13g，6.5mmol) 在二氯甲烷(5ml)中形成的溶液。环境温度下搅拌30分钟后，将反 应混合物倾倒在硅石柱上，并采用乙酸乙酯/石油醚(1/1，接着是6/5、 6/4和7/3)进行洗脱。蒸发含有预期产物的洗脱组分，获得可在连同 戊烷一起研磨后结晶的油。通过过滤收集固体，并于真空条件下干燥 后，获得7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基-6-甲氧基-3-((新戊酰 基氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑-4-酮(232g，92％)。

MS-ESI：526[MNa]+

1H NMR图谱：(CDCl3)1.20(s，9H)、1.2-1.35(m，2H)、1.43 (s，9H)、1.87(d，2H)、2.05-2.2(m，1H)、2.75(t，2H)、 3.96(d，2H)、3.97(s，3H)、4.1-4.25(br s，2H)、5.95(s， 2H)、7.07(s，1H)、7.63(s，1H)、8.17(s，1H)

元素分析：      发现      C61.8      H7.5      N8.3

C26H37N3O7        需要      C62.0      H7.4      N8.3％

在环境温度下，搅拌由7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基-6- 甲氧基-3-((新戊酰基氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑-4-酮(2.32g， 4.6mmol)在含有TFA(5ml)的二氯甲烷(23ml)中形成的溶液1小 时。真空条件下除去挥发物。残留物分配在乙酸乙酯与碳酸氢钠之间。 真空条件下除去有机溶剂，并过滤残留物。采用水洗涤沉淀，并于真 空条件下使其干燥。使干燥后所获固体与甲苯一起混合共沸，并于真 空条件下干燥后，获得6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基-3-((新戊酰基 氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑-4-酮(1.7g，92％)。

MS-ESI：404[MH]+

1H NMR图谱：(DMSOd6；CF3COOD)1.15(s，9H)、1.45-1.6(m， 2H)、1.95(d，2H)、2.1-2.25(m，1H)、2.95(t，2H)、3.35 (d，2H)、3.95(s，3H)、4.1(d，2H)、5.95(s，2H)、7.23 (s，1H)、7.54(s，1H)、8.45(s，1H)

将37％的甲醛水溶液(501μl，6mmol)和氰基氢硼化钠(228mg， 3.6mmol)相继地分次加入由6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基-3-((新 戊酰基氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑-4-酮(1.21g，3mmol)在THF/甲醇 (10ml/10ml)混合物中形成的溶液。环境温度下搅拌30分钟后，于 真空条件下除去有机溶剂，残留物分配在二氯甲烷和水之间。分离有 机层，采用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并通过蒸发除去挥发物.连 同醚一起研磨残留物，并通过过滤收集研磨后所获的固体，采用醚对 其进行洗涤，并于真空条件下干燥后，获得6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶 -4-基甲氧基-3-((新戊酰基氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑-4-酮(1.02g， 82％)。

MS-ESI：418[MH]+

1H NMR图谱：(CDCl3)1.19(s，9H)、1.4-1.55(m，2H)、1.9 (d，2H)、2.0(t，2H)、1.85-2.1(m，1H)、2.3(s，3H)、2.92 (d，2H)、3.96(s，3H)、3.99(d，2H)、5.94(s，2H)、7.08 (s，1H)、7.63(s，1H)、8.17(s，1H)

将氨在甲醇(14ml)中形成的饱和溶液加入由6-甲氧基-7-(1-甲 基哌啶-4-基甲氧基-3-((新戊酰基氧基)-3，4-二氢喹唑-4-酮(1.38g， 3.3mmol)在甲醇(5ml)中形成的溶液中。环境温度下搅拌20小时后， 采用二氯甲烷(10ml)稀释该悬液。过滤溶液。于真空条件下蒸发滤 液，并连同醚一起研磨残留物，通过过滤收集研磨后所获固体，并采 用醚对其进行洗涤，于真空条件下干燥后，获得6-甲氧基-7-(1-甲基 哌啶-4-基甲氧基)-3，4-二氢喹唑-4-酮(910mg，83％)。

MS-ESI：304[MH]+

1H NMR图谱：(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)、1.75(d，2H)、 1.7-1.85(m，1H)、1.9(t，2H)、2.2(s，3H)、2.8(d，2H)、 3.9(s，3H)、4.0(d，2H)、7.13(s，1H)、7.45(s，1H)、7.99 (s，1H)

下述实验被用于证实ZD6474与5-FU和CPT-11一起应用时的活 性。

裸鼠体内的人LS-174T结肠肿瘤异种移植物

将0.2ml无血清Roswell Park Memorial Institute(RPMI)- 1640培养基中的107个LS-174T肿瘤细胞皮下(s.c.)注射进10只无 胸腺(nu/nu基因型)小鼠的胁腹内。当肿瘤大小达700-1000mm3(3-4 周)时，手术切除肿瘤，并将较小的肿瘤碎片(20-30mg)皮下移植进 120只裸鼠的右胁腹内。当肿瘤体积达100-200mm3(移植后14-16天) 时，将小鼠随机分为若干组(每组13-15只)，开始治疗。

(a)5-FU+ZD6474

□ 对照组(第1组)接受每日口服(p.o.)ZD6474载体，连续 14天(第0-13天)，并在第0和7天接受2次静脉内(i.v.)注射 盐水(5-FU的载体)。

□ 第2组接受的治疗包括，每日单独口服剂量为25mg/kg/次的 ZD6474，连续14天(第0-13天)，并在第0和7天接受2次静脉内 注射盐水(5-FU的载体)。ZD6474被制备为在1％的polysorbate 80 (即聚氧乙烯(20)山梨醇酐单油酸酯在去离子水中形成的1％(v/v) 溶液)中形成的悬液形式。

□ 第3组接受的治疗包括，在第0和7天接受2次静脉内注射 剂量为75mg/kg/次的5-FU，并连续14天(第0-13天)每天口服ZD6474 载体。

□ 第4组接受的治疗包括，连续14天(第0-13天)每天口服 剂量为25mg/kg/次的ZD6474，并于第0和7天接受2次静脉内注射剂 量为75mg/kg/次的5-FU。

ZD6474的施用体积为10.0ml/kg(20g小鼠施用200μl)。5-FU 的注射体积为10.0ml/kg(20g小鼠施用200μl)。

  组 治疗 联合药物剂量 (mg基质/kg/ 注射次数) 给药途径 治疗次数 治疗次数/天 两次治疗 的间隔天 数(天) 1 ZD6474 的载体和 5-FU的 载体 0.0 口服 ZD6474载 体，静脉内 注射盐水 口服14 次，静脉 内注射2 次 口服1次/天 静脉内注射1 次/天 口服间隔 1天，静脉 内注射间 隔7天 2 ZD6474+ 盐水 25.0 口服 ZD6474，静 脉内注射盐 水 口服14 次，静脉 内注射2 次 口服1次/天 静脉内注射1 次/天 口服间隔 1天，静脉 内注射间 隔7天 3 5- FU+ZD64 74载体 75.0 静脉内注射 5-FU，口服 ZD6474载 体 口服14 次，静脉 内注射2 次 口服1次/天 静脉内注射1 次/天 口服间隔 1天，静脉 内注射间 隔7天 4 ZD6474+ 5-FU ZD6474剂量为 25.0 5-FU剂量为 75.0 口服 ZD6474，静 脉内注射 5-FU 口服14 次，静脉 内注射2 次 口服1次/天 静脉内注射1 次/天 口服间隔 1天 静脉内注 射间隔7 天

每周通过双面游标卡尺测定评估肿瘤体积(mm3)至少2次，取横 断肿瘤的最长直径为长度，以相应的垂直线为宽度，利用公式(π/6)x (长度x宽度)x((长度x宽度)的平方根)计算体积。通过比较对照组 与治疗组之间肿瘤体积上的差异，评估治疗开始后的肿瘤生长抑制情 况.肿瘤体积达2,000mm3时，终止对所有小鼠的研究。切除所有小鼠 的肿瘤，并在研究结束时记录重量。

肿瘤选择后的天数

  治疗 第13天对对照肿瘤 生长的抑制 P值 (单尾双样本t检验) 消退* ZD6474 (25mg/kg/天，口服， 第0-13天) 80％ 0.01 5/15 5-FU (75mg/kg，静脉内，第 0和7天) 68％ 0.03 6/15 ZD6474+5-FU 107％(消退) 0.002 8/13

*与第0天时它们接受治疗前的体积相比，第13天时体积消退≥ 10％的肿瘤数量。

5-FU与ZD6474的组合对肿瘤的生长产生了比单独施用5-FU时显 著更大的抑制效果(第13天时，通过单尾双样本t检验而得P＝0.018)。

5-FU与ZD6474的组合对肿瘤的生长产生了比单独施用ZD6474时 显著更大的抑制效果(第13天时，通过单尾双样本t检验而得 P＝0.027)。

5-FU与ZD6474的组合使肿瘤的消退程度(62％)大于单独施用 ZD6474(33％)或5-FU(40％)时的情况。

(b)CPT-11+ZD6474

□ 对照组(第1组)接受每日口服(p.o.)施用ZD6474载体 连续14天(第0-13天)，并在第0和7天接受2次静脉内(i.v.) 注射盐水(CPT-11的载体)。该对照组没有继续至该治疗阶段的结束， 因为一部分肿瘤的体积被认为过大(约2cm3)。

□ 第2组接受的治疗包括，每日单独口服剂量为25mg/kg/次的 ZD6474，连续21天(第0-20天)，并在第0、7和14天接受3次静 脉内注射盐水(CPT-11的载体)。ZD6474被制备为在1％的polysorbate 80(即聚氧乙烯(20)山梨醇酐单油酸酯在去离子水中形成的1％(v/v) 溶液)中形成的悬液形式。

□ 第3组接受的治疗包括，在第0、7和14天接受3次静脉内 注射剂量为20mg/kg/次的CPT-11，并连续21天(第0-20天)每天 口服ZD6474载体。

□ 第4组接受的治疗包括，连续21天(第0-20天)每天口服 剂量为25mg/kg/次的ZD6474，并在第0、7和14天接受3次静脉内注 射剂量为20mg/kg/次的CPT-11。

ZD6474的施用体积为10.0ml/kg(20g小鼠施用200μl).CPT- 11的注射体积为10.0ml/kg(20g小鼠施用200μl)。

  组 治疗 联合药物剂量 (mg基质 /kg/注射次 数) 给药途径 治疗次数 治疗次 数/天 两次治疗的 间隔天数 (天) 1 ZD6474的载体 和CPT-11的载 体 0.0 口服 ZD6474载 体，静脉内 注射盐水 口服14 次，静脉内 注射2次 口服1 次/天 静脉内 注射1 次/天 口服间隔1 天，静脉内注 射间隔7天 2 ZD6474+盐水 25.0 口服 ZD6474，静 脉内注射盐 水 口服21 次，静脉内 注射3次 口服1 次/天 静脉内 注射1 次/天 口服间隔1 天，静脉内注 射间隔7天 3 CPT- 11+ZD6474载 体 20.0 静脉内注射 CPT-11，口 服ZD6474 载体 口服21 次，静脉内 注射3次 口服1 次/天 静脉内 注射1 次/天 口服间隔1 天，静脉内注 射间隔7天 4 ZD6474+CPT- 11 ZD6474剂量 为25.0 CPT-11剂量 为20.0 口服 ZD6474，静 脉内注射 CPT-11 口服21 次，静脉内 注射3次 口服1 次/天 静脉内 注射1 次/天 口服间隔1天 静脉内注射 间隔7天

每周通过双面游标卡尺测定评估肿瘤体积(mm3)至少2次，取横 断肿瘤的最长直径为长度，以相应的垂直线为宽度，利用公式(π/6)x (长度x宽度)x((长度x宽度)的平方根)计算体积。通过比较对照组 与治疗组之间肿瘤体积上的差异，评估治疗开始后的肿瘤生长抑制情 况。肿瘤体积达2,000mm3时，终止对所有小鼠的研究。切除所有小鼠 的肿瘤，并在研究结束时记录重量。

肿瘤选择后的天数

对采用ZD6474(25mg/kg/天，口服，第0-20天)、CPT-11 (20mg/kg，静脉内注射，第0、7和14天)或它们的组合治疗的小鼠 而言，平均肿瘤体积分别为475mm3、552mm3和336mm3。

类似的试验可被用于观察ZD6474、5-FU和CPT-11的组合在上述 动物模型中的情况。

类似的试验可被用于观察ZD6474、5-FU、CPT-11和电离辐射的组 合在上述动物模型中的情况。