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一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途

阅读：1158发布：2020-06-10

IPRDB可以提供一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，属于微生物药物技术领域，在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂和/或治疗糖尿病的药物中的新用途；上述次级代谢物的制备方法为：将浒苔来源真菌接种于含TSA和甘草次酸发酵液中发酵，分离，纯化，即得目标次级代谢物。本发明次级代谢物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果好，减缓葡萄糖的生成和吸收，防止出现餐后高血糖，对预防和治疗糖尿病具较好的作用，易于被机体吸收；本发明次级代谢物的制备方法能提高次级代谢物的得率，促进浒苔来源真菌的增殖活性，提高其次级代谢产物的产量。，下面是一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，其特征在于：在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂和/或治疗糖尿病的药物中的新用途。

2.根据权利要求1所述的一种浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法，其特征在于：所述次级代谢物为式I所示化合物、其立体异构体、或其可药用盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂，

3.根据权利要求1或2所述的一种浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法，其特征在于：所述次级代谢物对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC50)值为1.2μM。

4.根据权利要求1或2所述的一种浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法，其特征在于：所述次级代谢物对的Ki值为1.42μM。

5.根据权利要求1所述的一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，其特征在于：所述α-葡萄糖苷酶抑制剂和/或治疗糖尿病的药物还包括药学上可接受的辅料。

6.根据权利要求1所述的一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，其特征在于：所述α-葡萄糖苷酶抑制剂和/或治疗糖尿病的药物还包括式II所示化合物、其立体异构体、或其可药用盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂，

7.根据权利要求1-6任一项所述制备方法制得的浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，其特征在于：所述糖尿病为1型糖尿病或2型糖尿病。

8.一种权利要求1-7任一项所述浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法，其特征在于：将浒苔来源真菌接种于含TSA和甘草次酸发酵液中发酵，分离，纯化，即得目标次级代谢物。

9.根据权利要求8所述的一种浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法，其特征在于：所述浒苔来源真菌为Aspergillus terreus OUCMDZ-2739。

10.根据权利要求8所述的一种浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法，其特征在于：所述发酵液中含有9-11μM TSA和0.8-1.3μM甘草次酸。

说明书全文

一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途

技术领域

[0001] 本发明属于微生物药物技术领域，具体涉及一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途。

背景技术

[0002] 对陆生微生物近百年的研究历史，发现了大量的化学结构多样性和生物活性显著的天然产物，极大的推动了生物素药物的发展，如：青霉素、万古霉素、链霉素等。对微生物越来越多的关注，自然导致微生物的重复研究和已知化合物重复开发、新化合物发现的机率降低。因此人们开始关注微生物蕴藏量更大、种类多样性更多的海洋来源微生物。海洋微生物由于其独特的生存环境(高压、高盐、低温、寡营养)导致其具有与陆生微生物截然不同的代谢途径，因而更易产生不同于陆生微生物的次生代谢产物，进而表现出良好的生物活性如：抑制群体感应活性、抑菌活性、抗病毒活性、蛋白激酶抑制活性、细胞毒活性、肿瘤细胞周期抑制活性等，因而日渐成为海洋药物研究工作者青睐的重要天然产物化学资源。海6 9
水中微生物的丰度达到10/mL，海底沉积物微生物丰度更是达到了10/mL。然而海洋样品采集难度高，常规实验室条件下仅有低于5％的海洋微生物被分离得到，即便获得的微生物在实验室培养条件下也不能完全表达其在海洋环境下的所有生物合成途径的代谢产物。因此如何最大程度的开发这些来之不易的海洋微生物资源，使其能最大限度的被人类利用，成为科学工作者的一个重要任务和课题。曲霉属真菌一直以来都是天然产物界研究的重要菌种，其次级代谢产物结构新颖骨架多变，除了常规的甾体、倍半萜、蒽醌等常见结构类型以外，往往还含有：生物碱类、肽类、聚酮类、二倍半萜等多种的骨架。这些结构新颖的化合物往往还含有细胞毒，抗菌，抗病毒等多种活性，成为海洋药物先导化合物的重要来源之一，引起了业内学者的广泛关注。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于提供一种对α-葡萄糖苷酶的抑制效果好，减缓葡萄糖的生成和吸收，防止出现餐后高血糖，对预防和治疗糖尿病具较好的作用，易于被机体吸收的浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途。

[0004] 本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

[0005] 一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂和/或治疗糖尿病的药物中的新用途。

[0006] 作为优选，次级代谢物为式I所示化合物、其立体异构体、或其可药用盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂，

[0007]

[0008] 作为优选，次级代谢物对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC50)值为1.2μM。脱氧野尻霉素和阿卡波糖的IC50值分别为191.7μM和555.1μM，说明目标次级代谢物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果好于脱氧野尻霉素和阿卡波糖。

[0009] 作为优选，次级代谢物对的Ki值为1.42μM。这表明活性化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果好于阿卡波糖，抑制机体α-葡萄糖苷酶活性，减缓葡萄糖的生成和吸收，防止出现餐后高血糖，对预防和治疗糖尿病具较好的作用，尤其是2型糖尿病。

[0010] 作为优选，α-葡萄糖苷酶抑制剂和/或治疗糖尿病的药物还包括药学上可接受的辅料。

[0011] 作为优选，α-葡萄糖苷酶抑制剂和/或治疗糖尿病的药物还包括式II所示化合物、其立体异构体、或其可药用盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂，

[0012]

[0013] 式化合物II对K562细胞的IC50值为13.0μM，对MCF-7细胞的IC50值为10.1μM，且对α-葡萄糖苷酶没有抑制作用，但是该化合物II能够和化合物I发挥增益作用，对治疗糖尿病的效果要好于单独的化合物I。

[0014] 作为优选，糖尿病为1型糖尿病或2型糖尿病。

[0015] 本发明的另一目的在于提供一种促进浒苔来源真菌的多能性相关基因表达，提高次级代谢物的得率，同时促进浒苔来源真菌的增殖活性，提高其次级代谢产物的产量，为微生物医药领域提供新的途径的浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法。

[0016] 本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

[0017] 一种上述浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法，将浒苔来源真菌接种于含TSA和甘草次酸发酵液中发酵，分离，纯化，即得目标次级代谢物。发酵液中TSA和甘草次酸可以对浒苔来源真菌的发酵产生协同的促进作用，在不同的细胞信号通路作用下进行细胞质和细胞核穿梭，使高度凝聚染色质区域变松弛，去除组蛋白ε-N-乙酰赖氨酸残基上的乙酰基团，使得DNA更紧密地缠绕在组蛋白上，且能够与其他转录因子调节蛋白形成共抑制复合物，增强与酶活性位点边缘的氨基酸残基相互作用，提高抑制效果和对酶的选择性，从而抑制基因表达，增强组蛋白的乙酰化程度，促进转录激活，引起转录水平升高，在不改变基因组DNA序列的情况下调控基因的选择性表达，促进了浒苔来源真菌的多能性相关基因表达，提高次级代谢物的得率，同时能够调控浒苔来源真菌氮代谢相关基因的表达，调节细胞内谷氨酰胺合成酶的水平，促进真菌对氮源的吸收和利用，进而促进浒苔来源真菌的增殖活性，提高其次级代谢产物的产量，为微生物医药领域提供新的途径。

[0018] 作为优选，浒苔来源真菌为Aspergillus terreus OUCMDZ-2739。

[0019] 作为优选，发酵液中含有9-11μM TSA和0.8-1.3μM甘草次酸。

[0020] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：

[0021] 本发明浒苔来源真菌的次级代谢物α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC50)值为1.2μM，脱氧野尻霉素和阿卡波糖的IC50值分别为191.7μM和555.1μM，说明目标次级代谢物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果好于脱氧野尻霉素和阿卡波糖，且次级代谢物对的Ki值为1.42μM。这表明活性化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果好于阿卡波糖，抑制机体α-葡萄糖苷酶活性，减缓葡萄糖的生成和吸收，防止出现餐后高血糖，对预防和治疗糖尿病具较好的作用，尤其是2型糖尿病；同时本发明浒苔来源真菌的次级代谢物来自于微生物的次级代谢产物，属于天然α-葡萄糖苷酶抑制剂，易于被机体吸收。本发明浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法促进浒苔来源真菌的多能性相关基因表达，提高次级代谢物的得率，同时促进浒苔来源真菌的增殖活性，提高其次级代谢产物的产量，为微生物医药领域提供新的途径。

[0022] 本发明采用了上述技术方案提供一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。

具体实施方式

[0023] 下面，结合具体实施例对本发明实施方式作进一步说明。

[0024] 实施例1：

[0025] 一种浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法，包括，

[0026] 1)浒苔来源真菌的分离纯化：从来自青岛石老人海水浴场浒苔样品中分离出真菌菌株土曲霉OUCMDZ-2739，将浒苔样品依次用无菌海水、75％乙醇和无菌水洗涤，然后，用研钵捣碎样品，然后存放于含有100mg/mL氯霉素的PDA培养基(每升含马铃薯提取物200g，葡萄糖20g，琼脂15g，和海水1L)中，在28℃下培养至出现单一菌种，将该菌种转移到另一PDA培养基并储存于4℃，通过多相分类学研究、菌落形态及18S rRNA序列分析、菌株发育树的建立，鉴定其为土曲霉OUCMDZ-2739；

[0027] 2)将浒苔来源真菌接种于发酵液中在25℃下发酵30天，发酵液由葡萄糖(10g/L)、麦芽糖(20g/L)、甘露醇(20g/L)、谷氨酸单钠(10g/L)、KH2PO4(0.5g/L)、MgSO4·7H2O(0.3g/L)、酵母抽提物(3g/L)、SEA盐(33g/L)、TSA(10μM)和自来水(1L，pH 7)组成；

[0028] 3)浒苔来源真菌的次级代谢物的提取分离和纯化：将发酵液通过粗棉布过滤以分离滤液和菌丝，滤液用等效体积的乙酸乙酯萃取三次得到乙酸乙酯溶液，菌丝用80％丙酮萃取三次，丙酮溶液经减压浓缩，然后以乙酸乙酯萃取三次得到乙酸乙酯溶液，将上述两个乙酸乙酯溶液组合在一起，并在减压下浓缩，得到31.2g乙酸乙酯溶液提取物；然后将乙酸乙酯提取物利用减压硅胶柱色谱进行逐步洗脱，洗脱液为石油醚-CH2Cl2(1:1和0:1)和CH2Cl2-MeOH(100％～0％)的屈服梯度6个主要馏分(馏分1～6)，6.7g的馏分3通过Sephadex LH-20(1:1CH2Cl2-MeOH)进一步纯化，得到1.4g馏分3.3和1.1g馏分3.4，其中馏分3.3继续用HPLC纯化，洗脱液为70％MeOH-H2O，获得40.3mg目标次级代谢物(tR＝11.5min)和13.6mg化合物II(tR＝16.4min)。

[0029] 实施例2：

[0030] 一种浒苔来源真菌的次级代谢物的制备方法，包括，

[0031] 1)浒苔来源真菌的分离纯化：从来自青岛石老人海水浴场浒苔样品中分离出真菌菌株土曲霉OUCMDZ-2739，将浒苔样品依次用无菌海水、75％乙醇和无菌水洗涤，然后，用研钵捣碎样品，然后存放于含有100mg/mL氯霉素的PDA培养基(每升含马铃薯提取物200g，葡萄糖20g，琼脂15g，和海水1L)中，在28℃下培养至出现单一菌种，将该菌种转移到另一PDA培养基并储存于4℃，通过多相分类学研究、菌落形态及18S rRNA序列分析、菌株发育树的建立，鉴定其为土曲霉OUCMDZ-2739；

[0032] 2)将浒苔来源真菌接种于含TSA和甘草次酸发酵液中在25℃下发酵30天，发酵液由葡萄糖(10g/L)、麦芽糖(20g/L)、甘露醇(20g/L)、谷氨酸单钠(10g/L)、KH2PO4(0.5g/L)、MgSO4·7H2O(0.3g/L)、酵母抽提物(3g/L)、SEA盐(33g/L)、TSA(10μM)、甘草次酸(1.0μM)和自来水(1L，pH 7)组成；

[0033] 3)浒苔来源真菌的次级代谢物的提取分离和纯化：将发酵液通过粗棉布过滤以分离滤液和菌丝，滤液用等效体积的乙酸乙酯萃取三次得到乙酸乙酯溶液，菌丝用80％丙酮萃取三次，丙酮溶液经减压浓缩，然后以乙酸乙酯萃取三次得到乙酸乙酯溶液，将上述两个乙酸乙酯溶液组合在一起，并在减压下浓缩，得到37.5g乙酸乙酯溶液提取物；然后将乙酸乙酯提取物利用减压硅胶柱色谱进行逐步洗脱，洗脱液为石油醚-CH2Cl2(1:1和0:1)和CH2Cl2-MeOH(100％～0％)的屈服梯度6个主要馏分(馏分1～6)，8.1g的馏分3通过Sephadex LH-20(1:1CH2Cl2-MeOH)进一步纯化，得到1.78g馏分3.3和1.49g馏分3.4，其中馏分3.3继续用HPLC纯化，洗脱液为70％MeOH-H2O，获得67.8mg目标次级代谢物(tR＝11.5min)和18.2mg化合物II(tR＝16.4min)。该制备方法用发酵液中TSA和甘草次酸可以对浒苔来源真菌的发酵产生协同的促进作用，在不同的细胞信号通路作用下进行细胞质和细胞核穿梭，使高度凝聚染色质区域变松弛，去除组蛋白ε-N-乙酰赖氨酸残基上的乙酰基团，使得DNA更紧密地缠绕在组蛋白上，且能够与其他转录因子调节蛋白形成共抑制复合物，增强与酶活性位点边缘的氨基酸残基相互作用，提高抑制效果和对酶的选择性，从而抑制基因表达，增强组蛋白的乙酰化程度，促进转录激活，引起转录水平升高，在不改变基因组DNA序列的情况下调控基因的选择性表达，促进了浒苔来源真菌的多能性相关基因表达，提高次级代谢物的得率，同时能够调控浒苔来源真菌氮代谢相关基因的表达，调节细胞内谷氨酰胺合成酶的水平，促进真菌对氮源的吸收和利用，进而促进浒苔来源真菌的增殖活性，提高其次级代谢产物的产量，为微生物医药领域提供新的途径，此外所得目标次级代谢物在乙酸乙酯溶液提取物中占比大大增加，更进一步说明发酵液中TSA和甘草次酸对浒苔来源真菌的发酵产生协同的促进作用。

[0034] 次级代谢物为式I所示化合物：

[0035]

[0036] 化合物II为式II所示化合物：

[0037]

[0038] 实施例3：

[0039] 目标次级代谢物的活性测试

[0040] 1.目标次级代谢物对α-葡萄糖苷酶的抑制性测试：

[0041] α-葡萄糖苷酶溶液的配制：将酶冻干粉用0.1％BSA溶液溶解，配成100U/mL的酶液，置于-20℃的冰箱中冻存。实验前，将100U/mL酶液用移液枪吸取少量，先用0.1％BSA溶液稀释到20U/mL，再用0.1％BSA溶液稀释到0.2U/mL备用。

[0042] PNPG溶液配制：称取一定量的PNPG固体，用0.1mol/L pH为6.8的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解，配成浓度为10mmol/L，然后用1.5mL的离心管分装备用。

[0043] 采用比色法测定α-葡萄糖苷酶的活性。用二甲基亚砜(DMSO)溶解待测活性化合物，配制质量浓度为10mg/mL的备用溶液。再用PBS稀释备用溶液，配置成所需浓度的待测溶液。在96孔板每孔中加入活性化合物溶液(实验组)、阿卡波糖溶液(阳性对照组)或PBS(阴性对照组)10μL，PBS 50μL，酶溶液20μL，摇匀，置于37℃水浴恒温10min，然后加入PNPG溶液20μL，摇匀，37℃反应10min，再加入Na2CO3终止液30μL终止反应，立即于405nm处测定吸光度值。样品对α-葡萄糖苷酶的抑制率按下式计算：抑制率(％)＝[(阴性对照组吸光度－实验组吸光度)/阴性对照组吸光度]×100％。当样品对α-葡萄糖苷酶的抑制率为50％时，将样品质量浓度定为半数抑制浓度(IC50)值。测得目标次级代谢物对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC50)值为1.2μM。脱氧野尻霉素和阿卡波糖的IC50值分别为191.7μM和555.1μM，说明目标次级代谢物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果好于脱氧野尻霉素和阿卡波糖。且上述次级代谢物对的Ki值为1.42μM。这表明活性化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果好于阿卡波糖，抑制机体α-葡萄糖苷酶活性，减缓葡萄糖的生成和吸收，防止出现餐后高血糖，对预防和治疗糖尿病具较好的作用，尤其是2型糖尿病。化合物II对α-葡萄糖苷酶没有抑制作用。

[0044] 2.目标次级代谢物的细胞毒活性测试：

[0045] 分别以人慢性髓性白血病K562细胞和MCF-7细胞为模型，阿霉素为阳性对照药，采用MTT比色法对目标次级代谢物的细胞毒活性测试。

[0046] MTT溶液的配制方法：称取MTT0.5g，溶于100mL的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃冰箱避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器要用铝箔纸包住，实验的时候关闭超净台上的日光灯以避光。

[0047] 方法：取对数生长期的肿瘤细胞，将细胞密度调至每毫升2×105个/mL，按每孔200μL加到96孔细胞培养板中，于37℃通入5％CO2的培养箱中培养4h。样品分别设定5个浓度梯度，每个浓度设3个平行样，同时设阳性、阴性对照，每孔加样品液或空白液各2μL，培养72h，然后每孔加MTT液10μL，继续培养4h，37℃、2000r/min离心8min，吸去上清。每孔加入二甲基亚砜各100μL，在微量振荡器上振荡15min，至结晶完全溶解后，酶标仪测定每孔570nm处的吸光值(OD值)。取三孔的平均吸光值，并按IR％＝(OD空白对照-OD样品)/OD空白对照×100％公式计算样品对细胞增殖的抑制率，并采用bliss法计算出半数抑制率IC50。测得目标次级代谢物的IC50值为9.5μM，化合物II对K562细胞的IC50值为13.0μM，对MCF-7细胞的IC50值为10.1μM。

[0048] 实施例4：

[0049] 一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，在制备用于α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的用途。

[0050] 片剂的制备：取40g目标次级代谢物、0.6g化合物II、37g食用纤维素、17g乳糖、0.1g柠檬酸钠、1.2g硬脂酸镁以及适量片剂辅料，混合均匀，按公知的片剂制作技术和装备制成片剂，产品规格为0.5g/片。

[0051] 实施例5：

[0052] 一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。

[0053] 颗粒剂的制备：取目标次级代谢物36g、0.7g化合物II、食用纤维素67g以及适量颗粒剂辅料混合均匀，使用喷雾干燥工艺进行制粒。

[0054] 实施例6：

[0055] 一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。

[0056] 胶囊剂的制备：取25g目标次级代谢物、0.9g化合物II、45g微晶纤维素及适量胶囊剂辅料，混合均匀，填充胶囊，填充规格为0.45g/粒。

[0057] 实施例7：

[0058] 一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。

[0059] 口服液制剂的制备：称取目标次级代谢物10g、1.0g化合物II、蜂蜜8g以及适量口服液剂辅料，用纯化水配制成100ml的溶液，过滤、灌装，高温瞬时灭菌即得。

[0060] 对比例1：

[0061] 一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途，在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。

[0062] 胶囊剂的制备：取25g目标次级代谢物、45g微晶纤维素及适量胶囊剂辅料，混合均匀，填充胶囊，填充规格为0.45g/粒。

[0063] 实施例9：

[0064] 实施例6和对比例1所得药物的治疗效果

[0065] 2型糖尿病大鼠模型的构建：选取100只SD大鼠(雄性、150-180g)，随机分为2组：其中20只为正常对照组，采用普通饲料喂养；80只为高脂高糖组，采用高脂高糖饲料(含10％猪油、20％蔗糖、2.5％胆固醇)饲养。每天记录摄食量，每周记录一次体重变化。1个月后，高脂高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ，sigma)40mg/Kg，注射前取鼠尾静脉血监测血糖并记录。注射3天后连续监测血糖2天，两次血糖值均高于16.7mmol/L即为造模成功，为2型糖尿病模型组。

[0066] 日常摄食量和体重监测结果显示：高脂高糖组的平均24h摄食量为22.14±2.77g/只，高于正常组(19.24±2.34g/只)；高脂高糖组的体重也比正常组高，但空腹血糖值仍属于正常值范围内。注射STZ三天后，糖尿病模型组的体重开始下降，空腹血糖达到20.8±1.1mmol/L，高于糖尿病标准值16.7mmol/L，与正常组相比差异具有显著性意义(P<0.05)。
且在行为学上具有典型的糖尿病病症：皮毛枯燥、倦怠、多饮、多食、多尿、尿液混浊、消瘦。
表明2型糖尿病大鼠模型制作成功。

[0067] 给药：2型糖尿病模型组被别给实施例6和对比例1所得药物，即为给药1组和给药2组，给药量分别为活性化合物50mg/kg。

[0068] 血液指标测定：动物给药48天后，禁食12小时，断尾取全血于EDTA-K2抗凝采血管中(购自BD)，取10μL抗凝全血测定糖化血红蛋白浓度和血红蛋白浓度，二者比值作为糖化血红蛋白含量(试剂盒购自RNADOX)。

[0069] 给药50天后，小鼠摘眼球取血，室温静置2小时后，于15℃，3000rpm，离心10min，分离血清，用全自动生化仪(日立7100)和生化检测试剂盒(购自中生北控)测定谷丙转氨酶(ALT)，谷草转氨酶(AST)，甘油三酯(TG)，总胆固醇(CHO)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，尿素(UREA)。肌酐(CRE)利用全波长酶标仪进行手工测定，利用全波长酶标仪测定总胆汁酸(TBA)，总胆红素(T-Bil)，直接胆红素(D-Bil)，手工测定所用试剂盒购自北京九强生物。血清胰岛素含量利用ELISA试剂盒(购自Merck Millipore)测定。血清晚期糖基化终末产物AGEs含量利用ELISA试剂盒(购自cell biolabs)。

[0070] 给药50天后，对照组动物血清胰岛素含量为0.05ng/ml、模型组动物血清胰岛素含量为13.56ng/ml、给药1组动物血清胰岛素含量为2.33ng/ml、给药2组动物血清胰岛素含量为3.72ng/ml。这说明在2型糖尿病小鼠动物模型中，给药50天后，模型组动物与正常组动物相比胰岛素含量显著升高，各给药组与模型组相比均有不同程度的降低，这说明目标次级代谢物能够改善动物体内高胰岛素状态，能够用于治疗2型糖尿病。且给药2组降低的程度优于给药1组，这说明实施例6的药物对治疗糖尿病的效果要好于对比例1的药物，具体机理尚且不清。

[0071] 上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。

[0072] 以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

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一种提高红曲菌次级代谢产物的方法-专利编号CN107190026A	2020-05-11	1139
一种微生物次级代谢产物盐酸巴马汀及其应用-专利编号CN104561179A	2020-05-15	914
黄曲霉OUCMDZ-2205次级代谢产物的用途-专利编号CN110156807A	2020-05-12	186
一种土曲霉SKL-001新次级代谢产物LW-4-专利编号CN109293662A	2020-05-13	816
一种土曲霉新次级代谢产物LW-1的用途-专利编号CN109260206A	2020-05-14	1041
一种提高链霉菌次级代谢产物产量的方法-专利编号CN107805640A	2020-05-15	432
土曲霉SKL-001新次级代谢产物LW-4的用途-专利编号CN109125326A	2020-05-14	701
Aspergillus terreus次级代谢产物提取物的用途-专利编号CN109045020A	2020-05-12	714
改变大豆次级代谢产物含量的方法-专利编号CN109832274A	2020-05-11	544
一种链霉菌的次级代谢产物的分离提取方法-专利编号CN110452940A	2020-05-13	869

一种浒苔来源真菌的次级代谢物的新用途

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