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有用于治疗人类乳头瘤病毒的被胍基取代的聚酰胺

阅读：651发布：2021-02-28

IPRDB可以提供有用于治疗人类乳头瘤病毒的被胍基取代的聚酰胺专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明描述了含有胍基、包括四甲基胍基的聚酰胺组合物。所述聚酰胺有用于医学应用，例如用于治疗人类乳头瘤病毒感染。，下面是有用于治疗人类乳头瘤病毒的被胍基取代的聚酰胺专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种具有下式的化合物：

G-(X)n-γq-(X)m-A

或其一种药学上可接受的盐，其中

m是5-12；

n是4-10；

G是未被取代的或被含有1-8个碳原子的烷基取代的胍基；

每个X独立地选自4-氨基-2-羰基-N-甲基咪唑(Im)、4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯(Py)或β-丙氨酸(β)；

γq是γ-氨基丁酸(γ)；2,4-二氨基丁酸(γNH2)；或H2N(CH2)2CH(NHC(＝O)NHR)CO2H，其中R是-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH2(γNHR')或-(CH2)3-N(CH3)2(γNHR")；以及A是3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺(Ta)或3-(二甲基氨基)丙胺(Dp)。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中G是四甲基胍基(TMG)。

3.根据权利要求1所述的化合物，选自下组，该组由以下各项组成：TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyPy-Ta；

TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNHR'-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNHR'-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

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TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

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TMG-PyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

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TMG-PyImPyIm-γ-PyPyPyPyβ-Ta；

TMG-PyImβIm-γ-PyβPyPyβ-Ta；

TMG-PyImPyIm-γ-PyβPyPyβ-Ta；

TMG-PyImβIm-γ-PyPyPyPyβ-Ta；

GUAN-PyImβImγPyβPyPyβ-Ta；

和其药学上可接受的盐。

4.根据权利要求1所述的化合物，其中γq是(R)-2,4-二氨基丁酸(γNH2)。

5.根据权利要求1所述的化合物，其中γ是(S)-2,4-二氨基丁酸(γNH2)。

6.如权利要求1所述的化合物，所述化合物具荧光性或被荧光标记。

7.根据权利要求6所述的化合物，具有下式：TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta-FAM；

和其药学上可接受的盐。

8.一种药物组合物，包含治疗有效量的如权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体。

9.如权利要求1-7中任一项所述的化合物或如权利要求8所述的药物组合物在制备用于治疗人类乳头瘤病毒(HPV)感染细胞的药物中的用途。

说明书全文

有用于治疗人类乳头瘤病毒的被胍基取代的聚酰胺

[0001] 相关申请的交叉引用

[0002] 本申请要求了以下临时申请的权益，其全部披露出于所有目的通过引用结合在此：2011年10月10日由詹姆斯K.巴什金（James K.Bashkin）等人提交并且名称为“有用于治疗人类乳头瘤病毒的被胍基取代的聚酰胺（GUANIDINYL-SUBSTITUTED POLYAMIDES USEFUL FOR TREATING HUMAN PAPILLOMA VIRUS）”的美国临时申请号61/545,311。

[0003] 关于联邦赞助的研究或开发的声明

[0004] 本发明是在由美国国家卫生研究院的分支机构美国国家过敏症和传染病研究院（NIAID）授予的NIH拨款号2R42AI068159的支持下进行的；因此，美国联邦政府拥有本发明的某些权利。

[0005] 联合研究协议中当事人的姓名

[0006] 不适用。

[0007] 通过引用结合以光盘提交的材料

[0008] 不适用。

[0009] 发明背景发明领域

[0010] 本发明涉及聚酰胺化合物和这些化合物的治疗用途，如用于治疗感染了人类乳头瘤病毒（HPV）的受试者的疗法。

[0011] 相关技术说明

[0012] 人类乳头瘤病毒是一种小的双链DNA病毒，它定植不同的复层上皮细胞，如皮肤、口腔以及生殖器粘膜，并且诱导形成自我限制的良性肿瘤，称为乳头瘤（疣）或湿疣。这些良性肿瘤中大多数由于宿主免疫防御的影响而自然地消退。然而，一些HPV具有致癌的可能性并且已经与某些类型的癌症有关。参见洛林茨（Lorincz）等人，《妇产科》（Obstetrics &Gynecology），79:328-337（1992）；博德农（Beaudenon）等人，《自然》（Nature），321:246-249（1986）；以及霍洛韦（Holloway）等人，《妇科肿瘤》（Gynecol.Onc.），41:123-128（1991）。

[0013] HPV是最普遍的性传播病毒。已知超过35种HPV基因型是性传播的，但是肛门-生殖器感染的子集占大部分。在这些最常见的HPV类型中，尤其是具有高风险致癌进程的两种形式（HPV16和HPV18）和造成大部分生殖器疣的两种形式（HPV6和HPV11）。

[0014] 据估计在美国每年有550万人感染HPV，并且据估计目前有0.2亿美国人被感染（凯茨（Cates）等人，《柳叶刀》（Lancet），354，增刊.SIV62，1999）。大约有75个百分比的男性和女性育龄人群已经感染了性传播HPV，但是通过子宫颈癌，主要公共健康风险是针对女性（考茨基（Koutsky），《美国医学杂志》（Am.J.Med.），102(5A),3-8,1997）。因此，仅在美国每年就有数百万人需要治疗。重要的是要注意，宫颈刮片（PAP smear）代表了世界上最大的公共健康筛选程序，并且所述测试基本上是HPV感染的一种测量。用于管理阳性宫颈刮片的当前标准是“随访”。一般而言，除非观察到了晚期子宫颈非典型增生，否则不推荐治疗（《CDC性传播疾病治疗指南》（CDC Sexually Transmitted Diseases Treatment Guidelines），2002）。

[0015] 在HPV阳性受试者中存在对有效的HPV抗病毒药物的显著需求。目前，不存在针对HPV或疣的特异性治疗。AldaraT（M 咪喹莫特）是用于治疗外生殖器疣的一种免疫调节剂，是市场上最成功的治疗。一种有效的特异性HPV治疗具有显著改善咪喹莫特并且与咪喹莫特有效地竞争的可能性。

[0016] 大部分人类子宫颈癌（95%）含有并且表达HPV DNA，而且表达两种病毒性肿瘤蛋白E6和E7，这两种病毒性肿瘤蛋白似乎对细胞转化和维持所述转化状态是关键的。确切地说，在美国已经有四种HPV类型（HPV-16、HPV-18、HPV-31以及HPV-45）与75%-93%的子宫颈癌病例有关。据估计，全世界女性的所有癌症死亡中可能二十个百分比（20%）是来自与HPV有关的癌症。

[0017] HPV也引起了肛门癌，其中所有病例中约85个百分比由HPV-16引起。已经发现HPV类型16和18也引起了接近于一半的阴道癌、外阴癌以及阴茎癌。

[0018] 最近，已经发现HPV感染引起了口咽癌，口咽是咽喉的中间部分，包括软腭、舌根以及扁桃体。在美国，诊断在口咽的癌症当中超过一半与HPV-16有关。

[0019] 这些HPV基于其DNA序列的唯一性被分成几类。

[0020] 这些HPV可以基于与HPV相关的临床病变或这些病变进展到癌症的相对倾向被进一步分为高或低风险。低风险皮肤类型，如HPV类型HPV-1、HPV-2、HPV-3、HPV-4、HPV-5、HPV-7、HPV-8以及HPV-9引起了常见疣（寻常块瘤）、足底疣（跖块瘤）、镶嵌疣、扁平疣（扁平块瘤）以及屠夫疣。此外，HPV类型HPV-6和HPV-11引起了外生殖器、肛门以及子宫颈的疣。高风险类型，如HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33以及HPV45特别常见于上皮内癌瘤、赘瘤以及癌症中。具体地说，已经发现两种HPV类型HPV-16和HPV-18的基因组与子宫颈的约70种浸润性癌瘤以及口咽癌、肛门癌以及其他粘膜组织癌有关。

[0021] 针对HPV感染的当前治疗极其有限。管理通常涉及通过被感染组织的手术、冷冻手术、化学或激光去除来进行疣的实体破坏。这些当前处理中的一些，如激光去除和手术，是昂贵的并且需要使用麻醉来使待治疗的区域失去知觉。冷冻手术去除需要使用特定设备。此外，大部分受试者在所述程序期间和在所述程序之后经历中度疼痛。

[0022] 也已经使用了局部乳膏和溶液，如5-氟尿嘧啶制剂、咪喹莫特制剂、西多福韦制剂、甲醛制剂、戊二醛制剂、西咪替丁制剂、三氯乙酸制剂、博莱霉素制剂、普达非洛制剂以及鬼臼制剂。（赖希曼（Reichman）《哈里森内科医学的7个原则》（Harrison's7Principles of Internal Medicine），第13版（. 伊塞尔巴谢（Isselbacher）等人编）；麦格劳-希尔公司（McGraw-Hill,Inc.），纽约（1993）第801页到第803页。）然而，在这些治疗之后复发是常见的，最有可能是因为病毒仍然潜伏在宿主上皮细胞内。因此，必须使用连续反复的治疗，这会破坏健康组织。这些治疗是不可用的或不被批准用于治疗子宫颈感染。

[0023] 干扰素也已经被用作用于持续的HPV感染和疣的一种治疗。然而，其有效性是有限的。常（Chang）等人（2002）《病毒学杂志》（Journal of Virology）76:8864-74发现一些感染了HPV基因组的细胞在仅数次应用之后就变得对干扰素治疗具有抗性。也参见考赛特（Cowsert）（1994）《国际病毒学》（Intervirol.）37:226-230；伯恩斯坦（Bornstein）等人（1993）《妇产科调查》（Obstetrics Gynecol.Sur.）4504:252-260；布劳德（Browder）等人（1992）《药物疗法年鉴》（Ann.Pharmacother.）26:42-45。

[0024] 因此，需要用于治疗如在此所概述的多种疾病和病状的疗法。

发明内容

[0025] 本发明提供了聚酰胺、含有聚酰胺的组合物、用于治疗HPV感染细胞的方法以及用于治疗感染了HPV的受试者的方法。在一些实施例中，这些聚酰胺抗病毒剂较适用于治疗喉乳头瘤病、子宫颈非典型增生和癌症以及复发性呼吸道乳头瘤病（RRP）。

[0026] 本发明的聚酰胺总体上可以描述为聚合或寡聚分子，这些聚合或寡聚分子含有如图1中所示出的多个羧酰胺重复单元和每分子至少一个胍基。在一个实施例中，聚酰胺是一种具有聚酰胺主链的化合物，所述聚酰胺主链含有内部单元，所述内部单元选自γ-氨基丁酸（γ）；2,4-二氨基丁酸（γNH2），它可以是(R)或(S)异构体并且它可以通过2-氨基（从而形成一个α转角）或通过4-氨基（从而形成一个γ转角）连接到聚酰胺的主链；或H2N(CH2)2CH(NHC(=O)NHR)CO2H（(R)或(S)异构体），其中R是-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH（2 γNHR'）或-(CH2)3-N(CH3)（2 γNHR"），和至少一个胍基，所述胍基侧接到2,4-二氨基丁酸（γNH2）和/或侧接到H2N(CH2)2CH(NHC(=O)NHR)CO2H，其中R是-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH（2 γNHR'），和/或在聚酰胺主链的一个末端位置处。所述化合物可以是此类聚酰胺的一种药学上可接受的盐。在本发明的上下文中，“内部”意指在沿着聚合物主链除了末端（端点）位置或与末端位置紧紧相邻以外的位置。聚酰胺主链可以除上述内部单元以外还含有多个单元（例如5到30、或7到28、或9到24、或11到22或15到21或16到21个单元），这些单元选自下组，该组由以下各项组成：4-氨基-2-羰基-N-甲基咪唑（Im）、4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯（Py）以及β-丙氨酸（β）。

[0027] 在本发明的一个方面，胍基被连接到末端4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯（Py）单元上（即，Py单元中最初存在的伯胺基变为胍基的一部分）。在本发明的另一个方面，去氨基咪唑（des-Im，式XI，图1）形成了分子的氨基末端并且胍基被附接到分子中其他地方的氨基上，例如在Ta或γNH2基团上。

[0028] 在本发明的其他方面中，胍基可以是未被取代的或被取代的。也就是说，胍基中所存在的三个氮原子可以携带除了氢以外的取代基。这些取代基可以是例如烷基、芳烷基和/或芳基。这些不同地被取代的胍基和其相关互变异构体的实例示出在图8A和8B中。在本发明的一个实施例中，这些氮原子中的两个各自携带两个烷基，如C1-C4烷基。举例来说，胍基可以是四甲基胍基（TMG）。

[0029] 化合物可以含有C端端基，所述C端端基选自3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺（Ta）或3-(二甲基氨基)丙胺（Dp）。

[0030] 在一些实施例中，本发明提供了一种下式化合物：

[0031] Z-(X)n-γq-(X)m-A

[0032] 或其一种药学上可接受的盐，其中

[0033] m是3-16（或4-15、或5-14、或6-13或7-12）；

[0034] n是2-14（或3-13、或3-12、或4-12、或4-10）；

[0035] Z是胍基化4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯、N-甲酰化4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯、N-乙酰化4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯或去氨基咪唑（des-Im，式XI，图1）；

[0036] 每个X独立地选自4-氨基-2-羰基-N-甲基咪唑（Im，式II，图1）、4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯（Py，式I，图1）或β-丙氨酸（β，式III，图1）；

[0037] γq是γ-氨基丁酸（γ，式IV，图1）；2,4-二氨基丁酸（γNH2，当2,4-二氨基丁酸是(R)异构体并且到聚酰胺中的键联通过γ氨基发生时对应于图1中的式V）；胍基化2,4-二氨基丁酸；或

[0038] H2N(CH2)2CH(NHC(=O)NHR)CO2H，其中R是-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH（2 γNHR'，式VIII，图1）、胍基化-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH2或-(CH2)3-N(CH3)（2 γNHR"，式IX，图1）；

[0039] A是3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺（Ta，式VII，图1）、胍基化3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺；或3-(二甲基氨基)丙胺（Dp，式VI，图1）；

[0040] 其中所述化合物含有至少一个已经被胍基化的伯胺基。

[0041] 在其他实施例中，本发明提供了一种具有下式的化合物：

[0042] G-(X)n-γq-(X)m-A

[0043] 或其一种药学上可接受的盐，其中

[0044] m是5-12；

[0045] n是4-10；

[0046] G是胍基；

[0047] 每个X独立地选自4-氨基-2-羰基-N-甲基咪唑（Im，式II，图1）、4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯（Py，式I，图1）或β-丙氨酸（β，式III，图1）；

[0048] γq是γ-氨基丁酸（γ，式IV）；2,4-二氨基丁酸（γNH2，当2,4-二氨基丁酸是(R)异构体并且到聚酰胺中的键联通过γ氨基发生时对应于式V）；或H2N(CH2)2CH(NHC(=O)NHR)CO2H，其中R是-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH（2 γNHR'，式VIII）或-(CH2)3-N(CH3)（2 γNHR"，式IX）；以及

[0049] A是3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺（Ta，式VII）或3-(二甲基氨基)丙胺（Dp，式VI）。

[0050] 在某些实施例中，m是10或11。在其他实施例中，m是5、6、7、8或9。在其他实施例中，n是7、8或9。在其他实施例中，n是4、5或6。在另其他实施例中，所述化合物每分子含有不超过2个或不超过1个Im单元。在另一个实施例中，所述化合物在结构序列-(X)m-中和/或在结构序列-(X)n-中不含任何Im单元。在某些实施例中，结构序列-(X)n-可以含有1、2或3个β单元。如果结构序列-(X)n-或-(X)m-含有一个以上β单元，那么所有这些单元可以通过至少一个Im和/或Py单元隔开。聚酰胺可以含有与端基A相邻的β单元。聚酰胺可以含有与另一个端基G相邻的Py单元。在某些实施例中，结构序列-(X)m-可以含有2、3、4或5个β单元。在本发明的某些实施例中，聚酰胺化合物的特征可以是不存在彼此相邻的β单元。

[0051] 在其他实施例中，所述化合物可以是：

[0052] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyPy-Ta；

[0053] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNHR'-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0054] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0055] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNHR'-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0056] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0057] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0058] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0059] TMG-PyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

[0060] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNHR"-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0061] TMG-PyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Dp；

[0062] TMG-PyPyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Dp；

[0063] TMG-PyPyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Ta；

[0064] TMG-PyPyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

[0065] TMG-PyPyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Dp；

[0066] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0067] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0068] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0069] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0070] TMG-PyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0071] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0072] TMG-PyPyβPyPyβPy-γ-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0073] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γ-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0074] 或其一种药学上可接受的盐或其一种混合物。

[0075] 在另一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的一种或多种上文所述的化合物和药学上可接受的载体。

[0076] 在所述实施例的一个方面，所述组合物进一步包含抗病毒剂。所述抗病毒剂可以是例如干扰素、咪喹莫特、西多福韦、甲醛、戊二醛、西咪替丁、5-氟尿嘧啶、三氯乙酸、博莱霉素、普达非洛或鬼臼。

[0077] 在另一个实施例中，本发明提供了一种用于以序列特异性方式结合双链DNA的方法，所述方法包括使在所述DNA内的DNA目标序列与在此所述的一种或多种化合物的DNA结合化合物接触，在允许所述结合发生的条件下。所述方法可以在体内、体外或离体进行。另外，所述方法可以在细胞中进行，并且所述双链DNA对所述细胞而言可以是内源性或异源性的。

[0078] 聚酰胺结合亲和力和序列特异性可以通过本领域中已知的定性和定量足迹滴定实验测定（参见布雷维茨（Brenowitz），M.；塞尼尔（Senear），D.F.；谢伊（Shea），M.A.；阿克斯（Ackers），G.K《.酶学方法》（Methods Enzymol.）1986，130,132；密特拉（Mitra），S.；谢赫巴科瓦（Shcherbakova），I.V.；奥尔特曼（Altman），R.B.；布雷维茨（Brenowitz），M.；勒德拉赫（Laederach），A《. 核酸研究》（Nucl.Acids Res.）2008，36,e63；怀特（White），S.；贝尔德（Baird），E.E.；德万（Dervan），P.B《. 生物化学》（Biochemistry）1996，35,12532；以及怀特（White），S.；贝尔德（Baird），E.E.；德万（Dervan），P.B《. 化学与生物学》（Chemistry&Biology）1997，4,569；所有这些都通过引用结合在此）。

[0079] 出于诊断或制备目的，本发明的聚酰胺可以有用于检测具有特异性序列的双链DNA的存在。含有双链DNA的样品可以通过被连接到固体底物的聚酰胺接触，由此分离出包含所希望的序列的DNA。可替代地，连接到合适的可检测标记（如生物素、半抗原、放射性同位素或染料分子）的聚酰胺可以通过含有双链DNA的样品接触。

[0080] 在又另一个实施例中，本发明提供了一种减少或抑制赘生性细胞增殖的方法，所述方法包括使这些细胞与有效量的上文所述的一种或多种化合物接触。这些赘生性细胞可以是癌细胞，包括选自下组，该组由以下各项组成：结肠癌细胞、肝细胞癌细胞、子宫颈癌细胞、肺表皮样癌细胞、乳腺腺癌细胞、胰腺癌细胞、前列腺癌细胞、骨肉瘤细胞、黑素瘤细胞、急性早幼粒细胞性白血病细胞、急性淋巴母细胞白血病细胞、肝胰腺癌细胞以及伯基特氏淋巴瘤B细胞。

[0081] 本发明进一步提供了一种治疗病毒感染的细胞的方法，所述方法包括使这些细胞与有效量的根据本发明的聚酰胺接触。所述病毒可以是HPV或其他双链DNA病毒。感染了HPV的受试者可以通过一种方法治疗，所述方法包括向所述受试者给予有效量的聚酰胺，所述聚酰胺具有如在此所述的结构。聚酰胺化合物能够以一种药物组合物形式给予，所述药物组合物包含所述化合物和药学上可接受的载体。

[0082] 在再另一个实施例中，本发明提供了一种治疗HPV感染细胞的方法，所述方法包括使这些细胞与在此所述的化合物接触。在本发明的一个方面，所述方法进一步包括使这些细胞与抗病毒剂接触。所述抗病毒剂可以是例如干扰素、咪喹莫特、西多福韦、甲醛、戊二醛、西咪替丁、5-氟尿嘧啶、三氯乙酸、博莱霉素、普达非洛或鬼臼。

[0083] 在又另一个实施例中，本发明提供了一种治疗受试者的HPV感染细胞的方法，所述方法包括向受试者给予在此所述的化合物或药物组合物。在本发明的一个方面，所述方法进一步包括使这些细胞与抗病毒剂接触。所述抗病毒剂可以是例如干扰素、咪喹莫特、西多福韦、甲醛、戊二醛、西咪替丁、5-氟尿嘧啶、三氯乙酸、博莱霉素、普达非洛或鬼臼。在另一个方面，所述HPV可以是HPV1、HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66或HPV68。

[0084] 在其他实施例中，本发明提供了一种治疗HPV16感染细胞的方法，所述方法包括向受试者给予在此所述的化合物。

[0085] 在其他实施例中，本发明提供了一种治疗HPV16、HPV18或HPV31感染细胞的方法，所述方法包括向受试者给予式TMG-(X)n-γq-(X)m-A化合物或其药学上可接受的盐，其中m是5、6、7、8、9、10或11，n是4、5、6、7、8、9、10或11；并且其他取代基如上所述。

[0086] 在其他实施例中，本发明提供了一种通过向受试者给予有效量的一种化合物来治疗受试者的HPV16、HPV18和/或HPV31感染细胞的方法，所述化合物选自：

[0087] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyPy-Ta；

[0088] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNHR'-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0089] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0090] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNHR'-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0091] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0092] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0093] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0094] TMG-PyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

[0095] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γ-NHR"-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0096] TMG-PyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Dp；

[0097] TMG-PyPyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Dp；

[0098] TMG-PyPyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Ta；

[0099] TMG-PyPyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

[0100] TMG-PyPyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Dp；

[0101] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0102] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0103] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0104] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0105] TMG-PyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0106] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0107] TMG-PyPyβPyPyβPy-γ-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0108] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γ-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0109] 或其药学上可接受的盐或其混合物。

[0110] 在所述实施例的某些方面，上述方法进一步包括给予抗病毒剂。所述抗病毒剂可以是例如干扰素、咪喹莫特、西多福韦、甲醛、戊二醛、西咪替丁、5-氟尿嘧啶、三氯乙酸、博莱霉素、普达非洛或鬼臼。

[0111] 本发明的聚酰胺展现了优于西多福韦或干扰素的针对HPV的体外功效，用于治疗HPV相关疾病。这些疾病可以包括生殖器或皮肤疣、口腔或生殖器组织（包括子宫颈上皮细胞）的HPV感染、肛门癌、由HPV造成的赘生性或过度增生性病变、结膜乳头瘤、尖锐湿疣以及复发性呼吸道乳头瘤病（RRP）。

[0112] 附图简要说明

[0113] 图1展示了可以存在于本发明的聚酰胺中的不同构造区块的结构。

[0114] 图2展示了根据本发明的一种具体示例性聚酰胺的结构（化合物NV1096）。

[0115] 图3展示了可以用来提供根据本发明的胍基化聚酰胺的一种合成途径，其中所述胍基被四取代。

[0116] 图4展示了可以用来提供根据本发明的胍基化聚酰胺的一种合成途径，其中所述胍基未被取代（即，胍基中的氮原子不携带除了氢以外的任何取代基）。

[0117] 图5展示了可以用来提供根据本发明的胍基化聚酰胺的一种合成途径，其中所述胍基被单取代或偕-二取代。

[0118] 图6展示了可以用来提供根据本发明的胍基化聚酰胺的一种合成途径，其中所述胍基是N,N'-二取代、N,N,N'-三取代或N,N,N',N'-四取代的。

[0119] 图7展示了可以用来提供根据本发明的胍基化聚酰胺的一种合成途径，其中所述胍基是N,N'-二取代或N,N',N'-三取代的。

[0120] 图8A和8B展示了不同类型的胍基，包括不同的取代型式和互变异构体，这些胍基可以存在于本发明的聚酰胺中。

[0121] 图9展示了在HPV16（365bp:7662-122）的序列上的NV1087的足迹实验。所有反应都是在DMSO和CHAPS的存在下进行的，并且最终DNA浓度是200pM。改变聚酰胺浓度（2nM和5nM）。使反应物与聚酰胺在37℃下孵育5-6小时。相对于参考峰的峰高度降低被解释为意指增加聚酰胺浓度保护DNA免遭DNA酶I消化。

[0122] 发明详细说明

[0123] 缩写与定义

[0124] 为了促进理解本发明，如在此所用的多个术语和缩写如下定义在下文中：

[0125] 如在此所用，术语“赘生性细胞”是指通过比正常更迅速地细胞增殖而生长的异常细胞。因此，本发明的赘生性细胞可以是一个良性赘瘤的细胞或可以是一个恶性赘瘤的细胞。如在此所用，术语“赘生性疾病”是指由患者中赘生性细胞的存在造成或与患者中赘生性细胞的存在有关的患者病状。癌症是赘生性疾病的一个实例。在某些方面，这些赘生性细胞是癌细胞。这些癌细胞可以具有任何类型的癌症，包括例如癌瘤、黑素瘤、白血病、肉瘤或淋巴瘤。

[0126] 术语“癌瘤”是指倾向于渗透周围组织并引起癌转移的由上皮细胞组成的恶性新生长。可以用本发明的环境影响剂治疗的癌瘤包括（但不限于）例如腺泡癌、腺泡状癌、腺样囊性癌、腺囊癌、腺癌、肾上腺皮质癌、肺泡癌、肺泡细胞癌、基底细胞癌、基底样细胞瘤、基底细胞样癌、基底鳞状细胞癌、细支气管肺泡癌、细支气管癌、支气管癌、脑状癌、胆管细胞癌、绒毛膜癌、胶样癌、粉刺癌、子宫体癌、筛状癌、铠甲状癌、皮肤癌、柱状癌、柱状细胞癌、管癌、硬癌、胚胎性癌、髓样癌、表皮样癌、腺样上皮细胞癌、外植癌、溃疡性癌、纤维癌、胶状癌、胶质癌、巨大细胞癌、巨细胞癌、腺癌、粒层细胞癌、发母质癌、多血癌、肝细胞癌、许特莱氏细胞腺癌、透明质癌、肾上腺样癌、幼稚型胚胎性癌、原位癌、表皮内癌、上皮内癌、克龙派切尔氏癌、库尔契茨基氏细胞癌、大细胞癌、豆状癌、豆状癌、脂瘤样癌、淋巴上皮癌、髓质癌、髓性癌、黑色素癌、软癌、粘液癌、粘液性癌、粘液细胞癌、粘液表皮样癌、粘液质癌、粘液样癌、粘液瘤样癌、鼻咽癌、燕麦细胞癌、骨化性癌、类骨质癌、乳头状癌、门脉周癌、浸润前期癌、棘细胞癌、软糊状癌、肾脏的肾细胞癌、储备细胞癌、肉瘤样癌、施奈德癌、硬性癌、阴囊癌、印戒细胞癌、单纯癌、小细胞癌、马铃薯状癌、球状细胞癌、梭细胞癌、髓样癌、鳞状癌、鳞状细胞癌、绳捆癌、血管扩张性癌、血管扩张癌、移行细胞癌、结节性皮癌、结节状皮癌、疣状癌以及绒毛状癌。

[0127] 出于本发明的目的，化学元素是根据元素周期表，CAS版本，《化学与物理手册》（Handbook of Chemistry and Physics），第75版来辨别。另外，有机化学的一般原理描述于《有机化学》（Organic Chemistry），托马斯索瑞尔（Thomas Sorrell），《大学学报》（University Science Books），索萨利托（Sausalito）：1999和《马奇的高等有机化学》（March's Advanced Organic Chemistry），第5版，编者：史密斯（Smith），M.B.和马彻（March），J.，约翰威利父子出版公司（John Wiley&Sons），纽约:2001中。

[0128] 如在此所用，有效量被定义为对所治疗的受试者赋予一种治疗作用所需的量，并且有效量典型地基于受试者的年龄、表面积、体重以及病状来测定。关于动物和人类的剂量（以每平方米体表面的毫克数计）的相互关系由弗赖雷克（Freireich）等人，《癌症化疗报告》（Cancer Chemother.Rep.），50:219（1966）所描述。体表面积可以大致地从受试者的身高和体重测定。参见例如科学年表（Scientific Tables），嘉基制药（Geigy Pharmaceuticals），阿兹利（Ardsley），纽约，537（1970）。如在此所用，“受试者”是指一种动物，如哺乳动物，包括人类。

[0129] 除非另行说明，否则在此所描绘的结构也意指包括所述结构的所有异构（例如对映异构、非对映异构以及几何异构（或构象异构））形式；举例来说，对每个不对称中心的R和S构型、(Z)和(E)双键异构体、以及(Z)和(E)构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构以及几何异构（或构象异构）混合物都在本发明的范围内。除非另行说明，否则本发明化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。另外，除非另行说明，否则在此所描绘的结构也意指包括仅在存在一个或多个同位素增浓原子方面不同的化合物。举例来说，除了氢被氘或氚置换或碳被13C或14C增浓的碳置换之外具有本发明结构的化合物在本发明的范围内。这些化合物适用作例如生物测定中的分析工具或探针。

[0130] 如在此所用，“烷基”是指含有1-8（例如1-6或1-4）个碳原子的饱和脂肪族烃基。烷基可以是直链或分支链。烷基的实例包括（但不限于）甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正庚基或2-乙基己基。烷基可以被一个或多个取代基取代（即任选地被取代），这一个或多个取代基如卤基；环脂肪族基[例如环烷基或环烯基]；杂环脂肪族基[例如杂环烷基或杂环烯基]；芳基；杂芳基；烷氧基；芳酰基；杂芳酰基；酰基[例如(脂肪族基)羰基、(环脂肪族基)羰基或(杂环脂肪族基)羰基]；硝基；氰基；酰胺基[例如(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基烷基氨基羰基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、芳基氨基羰基或杂芳基氨基羰基]；氨基[例如脂肪族氨基、环脂肪族氨基或杂环脂肪族氨基]；磺酰基[例如脂肪族-S(O)2-]]；亚磺酰基；硫基；硫氧基；脲；硫脲；氨磺酰基；磺酰胺；氧代；羧基；氨甲酰基；环脂肪族氧基；杂环脂肪族氧基；芳氧基；杂芳氧基；芳烷氧基；杂芳烷氧基；烷氧基羰基；烷基羰氧基；或羟基。被取代的烷基的一些实例包括（不限于）羧基烷基（如HOOC-烷基、烷氧基羰基烷基以及烷基羰氧基烷基）；氰基烷基；羟基烷基；烷氧基烷基；酰基烷基；芳烷基；(烷氧基芳基)烷基；(磺酰基氨基)烷基（如烷基-S(O)2-氨基烷基)；氨基烷基；酰胺基烷基；(环脂肪族基)烷基；或卤烷基。

[0131] 如在此所用，单独或作为“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中较大部分的一部分使用的“芳基”是指单环（例如苯基）；双环（例如茚基、萘基、四氢萘基、四氢茚基）；以及三环（例如芴基四氢芴基或四氢蒽基、蒽基）环系统，其中单环系统是芳香族或双环或三环系统中的至少一个环是芳香族。双环和三环基团包括苯并稠合2-3元碳环。举例来说，苯并稠合基团包括与两个或更多个C4-8碳环部分稠合的苯基。芳基任选地被一个或多个取代基取代，这一个或多个取代基包括脂肪族基[例如烷基、烯基或炔基]；环脂肪族基；(环脂肪族基)脂肪族基；杂环脂肪族基；(杂环脂肪族基)脂肪族基；芳基；杂芳基；烷氧基；(环脂肪族基)氧基；(杂环脂肪族基)氧基；芳氧基；杂芳氧基；(芳代脂肪族基)氧基；(杂芳代脂肪族基)氧基；芳酰基；杂芳酰基；氨基；氧代（在苯并稠合双环或三环芳基的一个非芳香族碳环上）；硝基；羧基；酰胺基；酰基[例如脂肪族基羰基、(环脂肪族基)羰基、((环脂肪族基)脂肪族基)羰基、(芳代脂肪族基)羰基、(杂环脂肪族基)羰基、((杂环脂肪族基)脂肪族基)羰基或(杂芳代脂肪族基)羰基]；磺酰基[例如脂肪族基-S(O)2-或氨基-S(O)2]；亚磺酰基[例如脂肪族基-S(O)-或环脂肪族基-S(O)-]；硫基[例如脂肪族基-S--]；氰基；卤基；羟基；巯基；硫氧基；脲；硫脲；氨磺酰基；磺酰胺；或氨甲酰基。可替代地，芳基可以未被取代。

[0132] 被取代的芳基的非限制性实例包括卤芳基[例如单、二（如对、间二卤芳基）以及(三卤基)芳基]；(羧基)芳基[例如(烷氧基羰基)芳基、((芳烷基)羰氧基)芳基以及(烷氧基羰基)芳基]；(酰胺基)芳基[例如(氨基羰基)芳基、(((烷基氨基)烷基)氨基羰基)芳基、(烷基羰基)氨基芳基、(芳基氨基羰基)芳基以及(((杂芳基)氨基)羰基)芳基]；氨基芳基[例如((烷基磺酰基)氨基)芳基或((二烷基)氨基)芳基]；(氰基烷基)芳基；(烷氧基)芳基；(氨磺酰基)芳基[例如(氨基磺酰基)芳基]；(烷基磺酰基)芳基；(氰基)芳基；(羟基烷基)芳基；((烷氧基)烷基)芳基；(羟基)芳基；((羧基)烷基)芳基；(((二烷基)氨基)烷基)芳基；(硝基烷基)芳基；(((烷基磺酰基)氨基)烷基)芳基；((杂环脂肪族基)羰基)芳基；((烷基磺酰基)烷基)芳基；(氰基烷基)芳基；(羟基烷基)芳基；(烷基羰基)芳基；烷芳基；(三卤烷基)芳基；
对氨基-间烷氧基羰基芳基；对氨基-间氰基芳基；对卤基-间氨基芳基；或(间(杂环脂肪族基)-邻(烷基))芳基。

[0133] 如在此所用，“芳烷基”是指被一个芳基取代的烷基（例如C1-4烷基）。“烷基”和“芳基”两者均已经定义在上文中。芳烷基的一个实例是苯甲基。芳烷基任选地被一个或多个取代基取代，这一个或多个取代基如脂肪族基[例如烷基、烯基或炔基，包括羧基烷基、羟基烷基或卤烷基（如三氟甲基）]；环脂肪族基[例如环烷基或环烯基]；(环烷基)烷基；杂环烷基；(杂环烷基)烷基；芳基；杂芳基；烷氧基；环烷氧基；杂环烷氧基；芳氧基；杂芳氧基；芳烷氧基；杂芳烷氧基；芳酰基；杂芳酰基；硝基；羧基；烷氧基羰基；烷基羰氧基；酰胺基[例如氨基羰基、烷基羰基氨基、环烷基羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基或杂芳烷基羰基氨基]；氰基；卤基；羟基；酰基；巯基；烷硫基；硫氧基；脲；硫脲；氨磺酰基；磺酰胺；氧代；或氨甲酰基。

[0134] HPV目标

[0135] 本发明提供了有用于治疗HPV感染和其他疾病的聚酰胺和聚酰胺的类似物。不希望受任何具体的理论所束缚，在此所述的聚酰胺的抗HPV活性提供了关于预测和开发用于设计针对所有HPV亚型和对其他双链DNA病毒的聚酰胺的一般规则的信息。所述方法有用于预测何种聚酰胺结构将具有针对其他双链DNA病毒的广谱抗病毒活性，其他双链DNA病毒包括埃-巴二氏病毒、疱疹病毒、腺病毒、BK以及痘病毒。

[0136] 本发明聚酰胺的抗HPV作用的时程实验得出了以下发现：某些活性分子在药物治疗之后在短如30分钟时开始使人类角化细胞中的HPVDNA水平降低了>90%。

[0137] HPV DNA本身锚定到人类染色体。关于此举的不同原因包括需要极其靠近人类DNA复制元件以达成病毒复制和游离基因的细胞核维持以及在细胞分裂期间病毒游离基因恰当分离到子细胞中。另外，虽然对这些过程的了解并不充分，但是病毒基因组必须避开先天性免疫系统，这些先天性免疫系统辨别并消除外来的或非自身的DNA。

[0138] 不受理论束缚，有可能的是，本发明聚酰胺能够从宿主染色体转移环状HPV基因组，促使环状HPV基因组迅速消耗并降解游离基因，或者聚酰胺结合到病毒或细胞核DNA激活了一个过程，所述过程促使特异性消除病毒而不是宿主DNA序列。消耗病毒DNA的一种可能的机制可以包括从细胞染色体转移游离基因首先促使HPV DNA从宿主细胞核排除，并且其次促使HPV DNA被核酸酶迅速酶促降解。一个附加结论是，将HPV DNA系栓到宿主染色体的一个原因是为了保护病毒DNA远离此降解路径。可替代地，聚酰胺可以改变细胞核中游离型DNA的物理特性，促使外来DNA被宿主防御机制辨别并消除。这些预测可以延伸到结合到DNA小沟的其他药物，并且这些预测可以延伸到其他双链DNA病毒，包括埃-巴二氏病毒，这些预测采用类似或相关的游离型维持策略。

[0139] 因此，这些分子可以有用于以序列特异性方式结合双链DNA，包括使所述DNA内的DNA目标序列与在此所述的DNA结合化合物接触，在允许所述结合发生的条件下。此举可以在体内、体外或离体进行。另外，所述方法可以在细胞中进行，并且所述双链DNA对所述细胞而言可以是内源性或异源性的。

[0140] 聚酰胺结合亲和力和序列特异性可以通过本领域中已知的定性和定量足迹滴定实验测定（参见布雷维茨（Brenowitz），M.；塞尼尔（Senear），D.F.；谢伊（Shea），M.A.；阿克斯（Ackers），G.K《.酶学方法》（Methods Enzymol.）1986，130,132；密特拉（Mitra），S.；谢赫巴科瓦（Shcherbakova），I.V.；奥尔特曼（Altman），R.B.；布雷维茨（Brenowitz），M.；勒德拉赫（Laederach），A《. 核酸研究》（Nucl.Acids Res.）2008，36,e63；怀特（White），S.；贝尔德（Baird），E.E.；德万（Dervan），P.B《. 生物化学》（Biochemistry）1996，35,12532；以及怀特（White），S.；贝尔德（Baird），E.E.；德万（Dervan），P.B《. 化学与生物学》（Chemistry&Biology）1997，4,569）。

[0141] 出于诊断或制备目的，本发明的聚酰胺可以有用于检测具有特异性序列的双链DNA的存在。含有双链DNA的样品可以通过被连接到固体底物的聚酰胺接触，由此分离出包含所希望的序列的DNA。可替代地，连接到合适的可检测标记（如生物素、半抗原、放射性同位素或染料分子）的聚酰胺可以通过含有双链DNA的样品接触。

[0142] 此外，这些分子可以用于一种减少或抑制赘生性细胞增殖的方法中，所述方法包括使这些细胞与有效量的在此所述的化合物接触。这些细胞与本发明的药剂接触产生了一种与赘生性细胞有关的基因表达的干扰。所述药剂结合到编码所述基因的DNA序列，由此减少或抑制所述基因的表达。

[0143] 在所述方法的某些实施例中，赘生性细胞可以是癌细胞。这些细胞可以包括结肠癌细胞、肝细胞癌细胞、子宫颈癌细胞、肺表皮样癌细胞、乳腺腺癌细胞、胰腺癌细胞、前列腺癌细胞、骨肉瘤细胞、黑素瘤细胞、急性早幼粒细胞性白血病细胞、急性淋巴母细胞白血病细胞、肝胰腺癌细胞以及伯基特氏淋巴瘤B细胞。通过检测与赘生性疾病有关的病征或症状减弱来辨别功效。具体类型赘生性疾病的病征和症状特性对于有经验的临床医生而言是众所周知的，用于监测病征和病状的方法也如此。举例来说，可以使用成像方法来确定由于根据本发明方法的治疗所致，肿瘤大小已经减小，或者肿瘤大小正在以一个较低的速率增加。

[0144] 另外，这些分子可以有用于一种治疗病毒感染的细胞的方法，所述方法包括使这些细胞与有效量的在此所述的化合物接触。这些方法可以有用于治疗由一种双链DNA病毒所造成的其他感染。

[0145] 在HPV的情况下，已知到染色体的系栓是通过DNA碱基A和T的长序列发生的。这些AT片是含吡咯的聚酰胺的目标，这是由于AT碱基对被如天然产物偏端霉素中所发现的吡咯所识别，所述吡咯可以被视为用于DNA结合的聚酰胺结构的一个部分原粒子。偏端霉素结合到富ATDNA，但这是一个足够小的分子，因为极长AT片对吸引偏端霉素来说是不必要的：仅五个碱基的AT区就足以被偏端霉素所识别。

[0146] 所谓的“脆弱DNA”中的DNA的富AT区是偏端霉素的明显目标，并且由响应于偏端霉素治疗的细胞表达。此外，在DNA重组和处理的模型系统中，如在纤毛虫和其他微生物中所发现，在基因组重组期间所靶向的是富AT区以便消除，表明细胞可以保留进化保守机制用于处理和消除DNA，并且所涉及的富AT序列可能是通过天然产生或合成聚酰胺的吡咯结合的目标。

[0147] 根据此处所描述的本发明，可以通过考虑所谓的选择性指数（SI：IC50与TD50的比）和常规实验来测定选择性指数的最佳范围，开发出针对DNA病毒（如HPV亚型）的有用药物。偏端霉素本身对于大部分或所有应用而言作为一种抗病毒药毒性过大，而我们所设计并且为特定目的建造的靶向富AT DNA区的聚酰胺在细胞培养中总体上具有极低的毒性和极高的SI。

[0148] 在一些实施例中，对HPV类型、尤其是HPV1、6、11、16、18以及31展现抗HPV活性的聚酰胺序列展示了从宿主染色体转移或消除HPV DNA的能力，这种能力可以产生针对HPV的广泛适用性。这些HPV包括HPV11，它部分地负责以呼吸道乳头瘤病以及生殖器疣著称的经常致命的疾病；HPV1和6，它们对应地引起常见疣和外生殖器、肛门以及子宫颈的疣；以及HPV16、18以及31，它们负责肛门和/或子宫颈癌。

[0149] 化学背景

[0150] 可以使用某些具有氮杂环的寡聚物来结合到双链DNA的特定区域。具体来说，N-甲基咪唑（I）、去氨基-N-甲基咪唑（Im）以及N-甲基吡咯（P）对特定碱基具有一种特异性亲和力。此特异性可以基于这些化合物的连接顺序进行修改。已经显示，在以下方面存在特异性：G/C由Im/P或I/P补充，C/G由P/Im或P/I补充，并且A/T和T/A剩余地由P/P补充。

[0151] 实际上，N-甲基咪唑和去氨基-N-甲基咪唑往往与鸟嘌呤有关，而N-甲基吡咯则与胞嘧啶、腺嘌呤以及胸腺嘧啶有关。通过以1个或2个分子形式提供杂环的两条链，形成了与双链DNA的2:1复合物，并且寡聚物的两条链反向平行，其中G/C对具有Im/P或I/P并列，C/G对具有P/Im或P/I，并且T/A对具有P/P并列。杂环寡聚物通过酰胺（氨基甲酰基）基团连接，其中NH可以参与氢与氮不成对电子、特别是腺嘌呤的氮不成对电子键结。

[0152] 可以合成聚酰胺从而通过并入例如γ-氨基丁酸（γ）或γ-氨基-β-氨基丁酸（γNH2）等化合物形成发夹化合物，从而允许单一聚酰胺形成与DNA的复合物。此类结构已经发现显著地增加了聚酰胺对DNA的目标序列的结合亲和力。

[0153] 当AT或TA碱基对是目标序列时，β-丙氨酸（β）可以被一对N-甲基吡咯基团取代。β-丙氨酸的附加灵活性可以帮助整个聚酰胺保持与DNA目标序列“对齐”。

[0154] 在一些实施例中，聚酰胺分子以对鸟苷具有一种特异性亲和力的去氨基-N-甲基咪唑开始。在其他实施例中，聚酰胺分子以3-(二甲基氨基)丙胺（Dp）或3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺（Ta）结束。可以在γ-氨基-丁酸、Ta或在这两个位点处并入染料分子，如果两者在同一分子中均可获得。

[0155] 最近已发现，包含一种新的芳香族氨基酸3-羟基-N-甲基吡咯（Hp），当并入到聚酰胺和成对的相对Py中时，提供了区分A-T与T-A的手段。怀特（White）S.等人，《自然》（Nature）391，436-38（1998）。出乎意料地，用Hp/P对中的羟基置换吡咯上的单一氢原子使聚酰胺的亲和力和特异性调整了一个数量级。在聚酰胺中与P和Im或I一起使用Hp从而形成六个芳香族氨基酸对（I/P、Im/P、P/Im、P/I、Hp/P以及P/Hp）提供了在Hp不分解的环境中，区分DNA小沟中的所有四种沃森-克里克碱基对的法则。

[0156] 天然产生的含吡咯的聚酰胺（如偏端霉素和纺锤菌素）以及其含吡咯/咪唑的合成类似物以高亲和力结合到DNA小沟。特异性聚酰胺-DNA结合的直接证据已经由德万集团使用X射线结晶学、NMR结构测定以及定量亲和力分裂方法进行广泛地报导（贝尔德（Baird）和德万（Dervan），1998；皮尔奇（Pilch）等人《，生物化学》（Biochemistry），38，2143-51，1999；皮尔奇（Pilch）等人，《美国国家科学院院刊》（Proc.Natl.Acad.Sci.USA），93,8306-
111996；王（Wang），埃尔维克（Ellervik）以及德万（Dervan），《生物有机化学与药物化学》（Bioorg.Med.Chem.），9,653-7,2001；怀特（White），贝尔德（Baird）以及德万（Dervan），《生物化学》（Biochemistry），35,12532-27，1996；怀特（White），贝尔德（Baird）以及德万（Dervan），《化学与生物学》（Chem.Biol.），4,569-78，1997，所有这些都通过引用结合在此）。由于H-键结方案，可以设计合成聚酰胺来识别特异性DNA序列。

[0157] 由聚酰胺进行DNA识别的规则概述在以下各段中（怀特（White），贝尔德（Baird）以及德万（Dervan），《化学与生物学》（Chem.Biol.），4,569-78，1997）。吡咯（典型地简称为Py或P）结合到小沟中代表氢键受体的三个核苷酸或A、T以及C（凯尔科普夫（Kielkopf）等人，《科学》（Science），282,111-5，1998；凯尔科普夫（Kielkopf）等人《，自然·结构生物学》（Nat.Struct.Biol.），5,104-9，1998；梅兰德（Melander），赫尔曼（Herman）以及德万（Dervan）《，化学》（Chemistry），6,4487-97，2000，所有这些都通过引用结合在此）。这些核苷酸仅代表小沟的氢键受体：A和C各自提供一对单独的电子而T从结合到C2的羰基氧提供单独的两对。发夹吡咯氨基酸的酰胺NH才是氢键供体。因此，吡咯环充当一个弯曲的间隔子，所述间隔子以正确的和曲率呈现酰胺NH，从而与由A、C以及T（当位于B-形式DNA中时）所代表的氢键受体的图案相匹配。咪唑（以下结构II）典型地简称为I。

[0158] 聚酰胺

[0159] 通式结构

[0160] 本发明的聚酰胺总体上可以称为一种含有多个羧酰胺重复单元以及一个或多个胍基的聚合或寡聚分子，这一个或多个胍基可以在分子的一个或两个末端和/或沿着聚酰胺的主链。聚酰胺可以是一种具有聚酰胺主链的化合物，所述聚酰胺主链含有内部单元，所述内部单元选自γ-氨基丁酸（γ）；2,4-二氨基丁酸（γNH2），它可以是(R)或(S)异构体并且可以通过2-氨基或4-氨基连接到聚酰胺主链；或H2N(CH2)2CH(NHC(=O)NHR)CO2H，其中R是-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH（2 γNHR'）或-(CH2)3-N(CH3)（2 γNHR"），各自可以是(R)或(S)异构体，和至少一个胍基，所述胍基被侧接到2,4-二氨基丁酸（γNH2），侧接到H2N(CH2)2CH(NHC(=O)NHR)CO2H，其中R是-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH（2 γNHR'），或在聚酰胺主链的终端位置处。所述化合物可以是此类聚酰胺的一种药学上可接受的盐。在本发明的上下文中，“内部”意指在沿着聚合物主链除了终端（末端）位置或与终端位置紧紧相邻的位置以外的位置。聚酰胺主链可以含有多个单元（举例来说，5到30、或7到28、或9到24、或11到22或15到21或16到21个单元），这些单元选自下组，该组由以下各项组成：4-氨基-2-羰基-N-甲基咪唑（Im）、4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯（Py）以及β-丙氨酸（β）。典型地，聚酰胺具有从约1000到约2900或从约1200到约2700的一个数均分子量。

[0161] 在本发明的一个方面，胍基被连接到终端4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯（Py）单元上。胍基可以未被取代（GUAN）或被取代。也就是说，胍基中所存在的三个氮原子中的任一个或每一个都可以携带除了氢以外的取代基。这些取代基可以是例如烷基、芳烷基和/或芳基。在本发明的一个实施例中，这些氮原子中的两个各自携带两个烷基，如C1-C4烷基。举例来说，胍基可以是四甲基胍基（TMG）。

[0162] 化合物可以含有端基，所述端基选自3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺（Ta）或3-(二甲基氨基)丙胺（Dp）。可以使Ta端基的伯胺基反应，从而提供胍基。也就是说，聚酰胺的C端可以用例如四甲基胍基（TMG）等胍基封端。

[0163] 根据本发明的某些聚酰胺化合物的结构可以用下式描述：

[0164] Z-(X)n-γq-(X)m-A

[0165] 或其一种药学上可接受的盐，其中

[0166] m是3-16（或4-15、或5-14、或6-13或7-12）；

[0167] n是2-14（或3-13、或3-12、或4-12、或4-10）；

[0168] Z是胍基化4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯、N-甲酰化4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯、N-乙酰化4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯或去氨基咪唑（des-Im，式XI，图1）；

[0169] 每个X独立地选自4-氨基-2-羰基-N-甲基咪唑（Im，式II，图1）、4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯（Py，式I，图1）或β-丙氨酸（β，式III，图1）；

[0170] γq是γ-氨基丁酸（γ，式IV，图1）；2,4-二氨基丁酸（γNH2，当2,4-二氨基丁酸是(R)异构体并且到聚酰胺中的键联通过γ氨基发生时对应于图1中的式V）；胍基化2,4-二氨基丁酸；或

[0171] H2N(CH2)2CH(NHC(=O)NHR)CO2H，其中R是-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH（2 γNHR'，式VIII，图1）、胍基化-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH2或-(CH2)3-N(CH3)（2 γNHR"，式IX，图1）；

[0172] A是3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺（Ta，式VII，图1）、胍基化3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺；或3-(二甲基氨基)丙胺（Dp，式VI，图1）；

[0173] 其中所述化合物含有至少一个已经被胍基化的伯胺基。

[0174] 在这些化合物中，最初存在于所述化合物的前驱体中的至少一个伯胺基（-NH2）已经被转化为胍基。举例来说，可以使存在于构造区块γNHR'中的4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯N端端基、3-(二甲基氨基)丙胺C端端基或-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH2基团的伯胺基胍基化。

[0175] 根据本发明的一个方面的其他特定聚酰胺化合物的结构通过式G-(X)n-γq-(X)m-A进行描述，其中限制条件和定义指定如下。

[0176] 在这些聚酰胺化合物中，聚酰胺分子以胍基开始，如四甲基胍基（TMG，式X）。胍基可以对应于结构式-N=C(NR1R2)(NR3R4)和/或-NR5-C(NR1R2)(=NR3)，其中R1-5是相同或不同的并且可以选自H、烷基（例如C1-C4烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基等）、芳基（苯基、吡啶基、咪唑基）以及其他5或6元环芳基或杂芳基、芳烷基（例如苯甲基）和其被不同地取代的衍生物）或其一种药学上可接受的盐（例如胍基可以呈一种胍盐物质形式）。不同类型的合适的胍基、包括其互变异构体说明在图8A和8B中。

[0177] 本发明的一个方面采用了在聚酰胺（TMG，式X）N端的一个四甲基胍基。此四甲基胍基通过碳-氮双键（亚胺）键联被附接到聚酰胺上。举例来说，当与TMG基团相邻的单元是4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯（Py）时，4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯的4-氨基提供了亚胺键联中所涉及的氮原子。

[0178] 在本发明的其他方面，胍基可以未被取代（GUAN）、单取代、N,N'-二取代、偕-二取代、N,N,N'-三取代或N,N,N',N'-四取代的。未被取代的、单取代、二取代以及三取代的胍基以互变异构体形式存在；这些互变异构体示出在图8A和8B中。如图8A和8B中所说明，碳-氮双键（亚胺）的位置可以变化。

[0179] 胍基的一组广泛的但不是穷尽性的取代型式和相关互变异构体示出在图8A和8B1-5
中。任何H可以独立地被基团R （独立地选自烷基、芳基、芳烷基）取代。在图8A和8B中所示的每一个胍基结构中，水平点虚线表示胍基通过携带所述水平点虚线的键被键结到聚酰胺。应该了解，本发明的胍基取代的化合物可以展现上文所述的互变异构类别。还应该了解，本发明涵盖被不同地取代的胍基取代的聚酰胺的所有互变异构形式和其混合物，并且不限于在正式图式中所描述的任何一种互变异构形式。

[0180] 如通过结晶和/或在0.1%TFA中HPLC所分离并且如用于接触细胞、组织培养物或受试者，胍的高度碱性的性质将总体上使得其以酸加成盐的形式存在，即呈其质子化形式。在此所述的所有互变异构体的所有药学上可接受的盐是本发明的一部分。

[0181] 对应于式G-(X)n-γq-(X)m-A的聚酰胺分子可以用3-(二甲基氨基)丙胺（Dp，式VI）或3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺（Ta，式VII）结束。也就是说，在本发明的某些实施例中，胍基（G）存在于聚酰胺分子的N端并且Dp或Ta单元或其他封端基团（在以上所提到的式中的“A”）存在于所述分子的C端。γq单元出现在聚酰胺主链内的内部位置处，通过结构序列-(X)n-与G单元隔开并且通过结构序列-(X)m-与A单元（Dp或Ta）隔开。γq单元可以在聚酰胺化合物中提供一个发夹转角。结构序列-(X)m-和-(X)n-包括多个连接单元X，这些连接单元X选自下组，该组由以下各项组成：4-氨基-2-羰基-N-甲基咪唑（Im，式II）、4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯（Py，式I）以及β-丙氨酸（β，式III）。

[0182] 单元TMG、X、γq以及A的结构示出在图1中。关于本发明的聚酰胺化合物的以上所提到的式中的术语定义如下。

[0183] TMG可以是N端封端基团和四甲基胍基（式X）。如果胍基不是位于N端，那么N端封端基团可以是des-Im或去氨基咪唑，如图1中的式XI所示。

[0184] X是通过一个或多个聚酰胺构造区块的缩合所得到的单元，这一个或多个聚酰胺构造区块包括N-甲基吡咯的4-氨基-2-羧酸衍生物（提供单元Py，式I）、β-丙氨酸（提供单元β，式III）以及N-甲基咪唑的4-氨基-2-羧酸衍生物（提供单元Im，式II）。

[0185] γq可以是通过以下各物的缩合所获得的单元：γ-氨基丁酸构造区块（提供单元γ，式IV）、称为(R)-2,4-二氨基丁酸和(S)-2,4-二氨基丁酸的γ-氨基丁酸的手性类似物（提供单元γNH2，当采用(R)异构体并且4（γ）位的胺基已经被反应到聚酰胺聚合物主链中时对应于式V）以及H2N(CH2)2CH(NHC(=O)NHR)CO2H，其中R是-(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH2（γNHR'，式VIII）或-(CH2)3-N(CH3)（2 γNHR"，式IX）。后两个单元也可以通过在将此类化合物并入到聚酰胺中之后，2,4-二氨基丁酸的氨基与合适的一种或一些反应物反应而形成。举例来说，γNHR（' 式VIII）可以由已经与Ta（3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺）形成脲的(R)-2,4-二氨基丁酸产生。单元γNHR（" 式IX）可以由已经与Dp（3-(二甲基氨基)丙胺）形成脲的(R)-2,4-二氨基丁酸产生。这些单元（γNHR'、γNHR"）可以具有(R)或(S)立体化学。2,4-二氨基丁酸构造区块可以通过在2（α）位的胺基的反应（缩合）被并入到聚酰胺中，得到一个α转角；或通过在4（γ）位的胺基的反应（缩合）被并入到聚酰胺中，得到一个γ转角。在本发明的上下文中，“2,4-二氨基丁酸”包括(S)以及(R)异构体。

[0186] A可以是通过3-(二甲基氨基)丙胺（提供单元Dp，式VI）或3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺（提供单元Ta，式VII）的缩合所获得的单元。

[0187] 在本发明的某些实施例中，β-丙氨酸单元出现在一个、两个、三个或四个连续的Py和/或Im构造区块之后，如通过-Py-β、-Py-Py-β、-Py-Py-Py-Py-β以及-Im-Py-Py-β所例示。聚酰胺可以每分子含有例如2到7或3到6个β单元。在本发明的不同实施例中，结构序列-(X)m-可以含有2到5个β单元。在其他实施例中，结构序列-(X)n-可以含有1到3个β单元。

[0188] 在本发明的某些实施例中，每分子聚酰胺含有0、1或2个Im单元。

[0189] 本发明的聚酰胺包括以下示例性化合物：

[0190] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyPy-Ta；

[0191] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNHR'-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0192] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0193] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNHR'-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0194] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0195] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0196] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0197] TMG-PyβPyPyImβPyPyγPyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

[0198] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNHR"-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0199] TMG-PyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Dp；

[0200] TMG-PyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Dp；

[0201] TMG-PyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Ta；

[0202] TMG-PyPyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Dp；

[0203] TMG-PyPyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Ta；

[0204] TMG-PyPyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

[0205] TMG-PyPyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Dp；

[0206] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0207] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0208] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0209] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0210] TMG-PyImβPyPy-γ-PyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

[0211] TMG-PyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0212] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0213] TMG-PyPyβPyPyβPy-γ-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0214] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γ-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0215] TMG-PyImPyIm-γ-PyPyPyPyβ-Ta；

[0216] TMG-PyImβIm-γ-PyβPyPyβ-Ta；

[0217] TMG-PyImPyIm-γ-PyβPyPyβ-Ta；

[0218] TMG-PyImβIm-γ-PyPyPyPyβ-Ta；

[0219] GUAN-PyImβIm-γ-PyβPyPyβ-Ta；

[0220] 和其药学上可接受的盐。

[0221] 在又其他实施例中，聚酰胺在C端末端含有FAM（5-羧基荧光素）、BIODIPY或可以用来测定细胞定位的另一化合物。在一些实施例中，在C端末端含有FITC的聚酰胺更易于被细胞吸收。本发明的荧光标记的聚酰胺的一个实例包括以下示例性化合物：

[0222] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta-FAM；

[0223] 其中FAM表示5-羧基荧光素。

[0224] 在甚至其他实施例中，聚酰胺靶向HPV1、HPV6、HPV11、HPV18、HPV16、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66或HPV68。

[0225] 在其他实施例中，聚酰胺靶向DNA病毒，这些DNA病毒包括埃-巴二氏病毒、疱疹病毒、痘病毒以及其他双链DNA病毒。这些病毒内的可能的目标可以包括用于系栓、维持或复制所需的序列。

[0226] 一般合成方案

[0227] 如在此所述的聚酰胺可以使用常规方法从已知起始物质产生。参见例如WO05/033282、别利茨基（Belitsky）等人，（2002）《生物有机化学与药物化学》
（Bioorg.Med.Chem.），10,2767-74；张（Zhang）等人（2006）《美国化学学会志》（J.Am.Chem.Soc.）128:8766-76；特纳（Turner）等人（2001）《有机化学通讯》（Organic Letters），3:1201-03，所有这些都通过引用结合在此。

[0228] 聚酰胺可以使用手动固相合成以及自动化固相化学制备。每次偶合之后可以是HPLC和HPLC/质谱。

[0229] 在液相聚酰胺合成中，可以使用两种主要的酰胺键形成途径：(1)卤仿反应和(2)胺与酸在例如DCC、EDC、PyBOP或HATU等偶合剂（当需要时）存在下的反应。关于在本发明中所采用的杂环构造区块，卤仿反应可以是在肖（Xiao）等人，（2000）《中国化学杂志》（Chin.J.Chem.）,18:603-07和肖（Xiao）等人（, 2000）《有机化学杂志》（J.Org.Chem.），65:5506-13中所描述的方法，这两者出于所有目的通过引用以其全文结合在此。

[0230] 卤仿反应中得到硝基取代的杂环的步骤之后可以是例如用H2和Pd/C还原硝基。所得游离氨基可以被保护或者立即偶合到附加的构造区块。可以针对聚酰胺辨别常见构造区块，允许有效的液相合成：Py-Py二聚物可以被制造并且以大规模纯化，并且然后直接使用或进一步加工，从而形成具有目标序列的主要部分，并且然后是最终产物。

[0231] 又另一种合成方法是以Boc-β-丙氨酸-PAM固相合成树脂或类似可商购的树脂为起始物质，添加如目标序列所需的构造区块来制备聚酰胺寡聚物。

[0232] 化合物中的胍基可以通过任何合适的方法引入，所述方法包括例如转化以下各者上的伯胺基：终端Py单元、Ta端基、H2N(CH2)2CH(NHC(=O)NHR)CO2H单元，其中R是(CH2)3-N(CH3)-(CH2)3-NH（2 γNHR'）或2,4-二氨基丁酸（γNH2）单元。用于使伯胺反应从而形成胍基的合成方法在本领域中是众所周知的。这些方法的实例包括胺与S-甲基异硫脲鎓盐（拉克氏胍合成（Rathke guanidine synthesis））、O-甲基异硫脲鎓盐以及氯甲脒鎓（维尔斯迈尔（Vilsmeier））盐的反应。

[0233] 四取代胍基[-N=C(NR2)2，其中R基可以是相同或不同的并且可以是例如烷基、芳烷基或芳基]可以通过用四取代脲鎓反应物（如HATU[六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓]）处理含有伯胺基的脱保护树脂附接的聚酰胺而被引入到聚酰胺的N端上。图3展示了此合成途径。四取代胍基仅以此段落中所示的形式存在。其中至少一个R是氢的所有胍基能够以多种互变异构形式存在，如图8A和8B中所描绘。本发明包括在此所述的不同胍基的所有可能的互变异构形式和其盐（包括酸加成盐）。

[0234] 未被取代的胍基[-NH-C(=NH)NH2或其互变异构体]可以通过用可商购的N,N'-二Boc-1H-吡唑-1-甲酰胺处理含有伯胺基的脱保护树脂附接的聚酰胺，接着去除Boc而被引入到聚酰胺的N端上。此合成途径说明在图4中。参见罗宾逊（Robinson）等人，《四面体》（Tetetrahedron）1997，53(19),6697。

[0235] 单取代或偕-二取代胍基[-NH-C(=NH)NHR或-NH-C(=NH)NR2，其中R基可以是相同或不同的]可以通过用可商购的二(咪唑-1-基)甲亚胺处理含有伯胺基的脱保护树脂附接的聚酰胺，接着添加伯胺（从而得到单取代胍基）或仲胺（从而得到偕-二取代胍基）而被引入到聚酰胺的N端上。此合成途径说明在图5中。参见吴（Wu）等人，《有机化学杂志》（J.Org.Chem.）2002，67,7553。

[0236] N,N'-二取代、N,N,N'-三取代或N,N,N',N'-四取代胍基[-N=C(NHR)2、-N=C(NHR)(NR2)或-N=C(NR2)2，其中在每种情况下R基可以是相同或不同的]可以通过用可商购的二-(2-吡啶基)硫代碳酸酯处理含有伯胺基的脱保护树脂附接的聚酰胺以得到一种中间体异硫氰酸酯而被引入到聚酰胺的N端上。随后添加一种伯胺或仲胺、脱硫并且添加另一种伯胺或仲胺将得到所希望的N,N'-二取代、N,N,N'-三取代或N,N,N',N'-四取代胍基化聚酰胺，如图6中所示。参见基尔伯恩（Kilburn），J.P.；劳（Lau），J.；琼斯（Jones），R.C.F《. 四面体》（Tetrahedron）2002，58,1739。

[0237] 可替代地，N,N'-二取代或N,N,N'-三取代胍基[-N=C(NHR)2或-N=C(NHR)(NR2)，其中在每种情况下R基可以是相同或不同的]可以通过用一种异硫氰酸酯（含有一个第一R基）处理含有伯胺基的脱保护树脂附接的聚酰胺而被引入到聚酰胺的N端上。脱硫将得到一种中间体碳化二亚胺。添加一种伯胺或仲胺[含有第二R基]到碳化二亚胺将对应地得到所希望的N,N'-二取代或N,N',N'-三取代胍基化聚酰胺，如图7中所示。参见《欧洲化学杂志》（Chemistry-A European Journal），11(5),1459-1466，2005和基尔伯恩（Kilburn）等人《四面体》（Tetrahedron）2002，58,1739。

[0238] 药物组合物

[0239] 配制

[0240] 在本发明的另一个方面，提供了药学上可接受的组合物，其中这些组合物包含如在此所述的任何聚酰胺化合物，并且任选地包含药学上可接受的载体、佐剂或媒剂。在某些实施例中，这些组合物任选地进一步包含一种或多种另外的治疗剂。

[0241] 聚酰胺可以呈药学上可接受的盐形式，如三氟乙酸盐（TFA）以及氯化物、琥珀酸盐、抗坏血酸盐等。这些盐也可以用例如PEG-400、丙二醇等赋形剂来配制。

[0242] 为了提高稳定性，聚酰胺药物可以被放置在具有例如抗坏血酸、BHT或BHA等抗氧化剂的水溶液中，以便开发出一种更稳定的配方。（参见迈耶斯（Mayers）C.L.等人（1993）《药学研究》（Pharma Res），10:445-448和斯图哈（Stuhar）M.，（1984）《药物视界》（Farmaceuticky Obzor）,53;499-504，两者均通过引用结合在此。）

[0243] 为了递送到阴道和子宫颈，聚酰胺可以按溶液、乳液、悬浮液、片剂、凝胶、泡沫、栓剂、膜、海绵以及阴道环形式配制。配制品包括凝胶（例如使用例如羟乙基纤维素和聚丙烯酸等胶凝剂制备的凝胶，例如基于交联丙烯酸的聚合物，如在品牌名称卡波普下出售的那些聚合物）和聚乙烯醇膜，它们可以通过一种涂药器给予到目标位点。可替代地，更低粘度液体配制品（例如PEG溶液）可以在一个聚氨基甲酸酯海绵中递送到子宫颈周围的区域。（见冈田（Okada）（，1991）的《肽和蛋白质药物递送》（Peptide and Protein Drug Delivery）V.H.李（Lee）编，第663页到第666页，马塞尔〃德克尔公司（Marcel Dekker），NY；加格（Garg）等人（2001）《制药技术》（Pharm.Tech.）25:14-24，两者均通过引用结合在此。）由于聚酰胺的电荷，所以聚酰胺可以在一种受控制递送媒剂中通过使用卡波姆（如在品牌名称卡波普下出售的那些卡波姆）配制。如果聚酰胺具有+1或+2的电荷，那么通过调整配制品的离子强度，可以将聚酰胺静电地结合到卡波姆并且由此控制释放速率。在一种半固体剂型中，可以在如美国药典（通过引用结合在此的迪皮亚诺（Dipiano）等人的PCT国际公开号WO04/064913）中所述用于使药物从半固体剂型扩散的膜装置中评估释放速率。在基于卡波姆的凝胶中配制的聚酰胺展现出显著的屈服应力，并且也具有潜在的生物粘附特性（基维格（Kieweg）等人（2004）《药物科学杂志》（J.Pharm Sci.）93,2941-52，此文献通过引用结合在此）。

[0244] 用于商用阴道配制品的任何赋形剂（加格（Garg）等人，2001）都可以被适配用于与本发明的聚酰胺化合物一起使用。也可以采用多种常用赋形剂，如PEG（聚乙二醇）、PVA（聚乙烯醇）以及吐温表面活性剂。除了抗氧化剂之外，还可以使用其他的增容剂或稳定剂。固体形式由于其物理状态而可以允许具有一个更长的存放期的更稳定配方。使用例如卡波姆等聚合物，由生物粘附剂制成的乳液可以是适用的。HPMC（羟甲基丙基纤维素）、PVA以及脂质复合物可以与更低溶解度的药物一起使用。脂质系统可以然后悬浮于用于递送不溶性聚酰胺的一种粘弹性凝胶中。

[0245] 为了更持久或有效的递送，可以使用例如隔膜等可获得的子宫颈阻挡器件进行递送，这些子宫颈阻挡器件可以历经数小时将药物递送在子宫颈位点，也就是说，可以采用甚至更连续的阴道环或缓慢释放的可植入聚合物膜。另外，在临床测试中可以使用若干新阴道递送系统，如阴道海绵技术和SILCS隔膜，所述SILCS隔膜是一种单一尺寸的硅酮装置，所述装置可以将药物递送到子宫颈和阴道壁两处（柯亨（Cohen），（2004）《杀微生物剂季刊》（The Microbiocide Quarterly）,2:15-19，所述文献通过引用结合在此）。为了历经一段延长的时间改良药物的连续递送，阴道环是在从环复合物缓慢释放药物的情况下可获得的（柯亨（Cohen），2004；侯赛因（Hussain）和阿赫桑（Ahsan），（2005），《控制释放杂志》（J.Controlled Release）103:301-13，所述文献通过通过引用结合在此）。还存在许多已经被开发用于受控制的阴道药物递送的其他涂药器和配方（罗宾逊（Robinson）（1999）第26界国际研讨会关于生物活性材料的控制释放的记录（Proc .Of the26th Intl.Symp.Controlled Release of Bioactive Materials），26:2-3，所述文献通过引用结合在此；侯赛因（Hussain）和阿赫桑（Ahsan），2005）。

[0246] 用于经皮递送的配制品包括用于将蛋白质药物递送到生殖器疣的基于脂质的配方（福尔德瓦里（Foldvari）等人，（1999），《生物科技和应用生物化学》（Biotech.Appl.Biochem.）30:129-37；利（Leigh）（2003）《药物和制药科学》（Drugs and the Pharm.Sci.），126:791-800；李（Lee）等人，（2004）《生物材料》（Biomaterials）,26:
205-10，所有这些都通过引用结合在此）；生物粘附剂配制品（博加塔济（Bogataj）和米斯特哈（Mrhar）（1998）《生物粘附粘膜药物递送系统》（Bioadhesive mucosal drug delivery systems），49:445-57；阿马拉尔（Amaral）等人（1999）《避孕》（Contraception），60:361-66；
巴里（Barry），（1987）见《药物递送系统》（Drug Delivery systems），约翰逊（Johnson）和劳埃德-琼斯（Lloyd-Jones）编，第11章，埃利斯霍伍德（Ellis Horwood），齐切斯特（Chichester）；韦马尼（Vermani）等人（2002）《药物开发和工业制药》（Drug Dev.Indust.Pharm.）28:1133-46，所有这些都通过引用结合在此）以及新颖的聚合物系统。
新颖的聚合物包括部分地可吸收的生物可降解的抗病毒阴道内环（沙拉比（Shalaby），（2005）美国专利申请公开号2005/053639，所述公开通过引用结合在此）、直接施用到子宫颈的双面生物粘附聚合膜（西杜（Sidhu）等人（，1997）《英国妇产科杂志》（Br.J.Obstetrics and Gynaecology），104:145-49，所述文献通过引用结合在此）、在子宫颈粘膜处的新颖的缓慢释放的聚合物盘状物以及具有可能远优于生物粘附和剂型保持的优点的热凝胶系统。
（萨尔茨曼（Saltzman）和拉多姆斯基（Radomsky）（1990）《聚合物预印本》（Polymer Preprints），31:245-46；埃德尔曼（Edelman）和马克（Mark）（1998）《自然〃生物技术》（Nature Biotech），16:136-37，两者均通过引用结合在此）。聚酰胺也可以使用细胞膜渗透肽来配制（古普塔（Gupta）等人（2005）《先进药物递送综述》（Adv.Drug Del Rev.）57:637-
51；瓦迪亚（Wadia）和道迪（Dowdy）（2005）《先进药物递送综述》（Adv.Drug Del Rev.），57:
579-96，两者均通过引用结合在此。

[0247] 本发明的聚酰胺也可以用一种药学上可接受的聚合物来配制，所述聚合物被设计成用于缩短或延长肾清除率之前的时间。

[0248] 根据本发明的聚酰胺也可以被配制，从而递送肺、口或咽喉的气雾剂治疗。也可以采用直接注射到HPV病变中用于外部（皮肤）或粘膜皮肤感染。

[0249] 其他疾病适应症可以要求用本发明聚酰胺进行全身性治疗，即通过注射或附加的常见或已知药物递送方法。

[0250] 还应该了解，某些本发明化合物可以按游离形式存在用于治疗或在适当时以其药学上可接受的衍生物或前药形式存在。根据本发明，药学上可接受的衍生物或前药包括（但不限于）药学上可接受的盐、酯、这些酯的盐或任何其他加合物或衍生物，它们在向有需要的受试者给药后能够直接地或间接地提供如在此另外所述的化合物或其代谢物或残余物。

[0251] 如在此所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断范围内适用于与人类和低等动物的组织接触而无不当毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理利益/风险比相称的那些盐。“药学上可接受的盐”意指本发明化合物的任何无毒性盐或酯的盐，它在向接受者给药后能够直接地或间接地提供本发明化合物或其抑制活性代谢物或残余物。

[0252] 药学上可接受的盐在本领域中众所周知。举例来说，S.M.伯奇（Berge）等人在通过引用结合在此的《药物科学杂志》（J.Pharmaceutical Sciences），1977，66,1-19中详细描述了药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机酸和有机酸与无机碱和有机碱的那些盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例为氨基与无机酸（如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸以及高氯酸）或与有机酸（如乙酸（包括三氟乙酸）、草酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸）形成的盐，或通过使用本领域中所用的其他方法（如离子交换法）形成的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。衍生自适当碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐以及N+(C1-4烷基)4盐。本发明还设想了在此所披露的化合物的任何碱性含氮基团的季铵化。可以通过所述季铵化来获得水或油溶性或可分散性产物。代表性碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。适当时，其他药学上可接受的盐包括使用如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根以及芳基磺酸根等平衡离子形成的无毒铵、季铵以及胺阳离子。

[0253] 如上所述，本发明的药学上可接受的组合物除了一种或多种聚酰胺化合物之外，还包含药学上可接受的载体、佐剂或媒剂，如在此所用，所述药学上可接受的载体、佐剂或媒剂包括任何和所有溶剂、稀释剂或其他液体媒剂、分散液或悬浮液助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等，如被适合于所希望的特定剂型。《雷明顿氏药物科学》（Remington's Pharmaceutical Sciences），第16版，E.W.马丁（Martin）（马克出版公司（Mack Publishing Co.），宾夕法尼亚州伊斯顿（Easton,Pa.），1980）披露了用于配制药学上可接受的组合物的各种载体和其已知制备技术。除非任何常规载体介质如因产生任何不合需要的生物作用或另外与药学上可接受的组合物的任何其他组分以一种有害的方式相互作用而都与本发明化合物不相容，否则预期其用途在本发明的范围内。可以充当药学上可接受的载体的物质的一些实例包括（但不限于）离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白，如人类血清白蛋白；缓冲物质，如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物；水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐；胶态二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物；羊毛脂；糖，如乳糖、葡萄糖以及蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素和其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素以及乙酸纤维素；粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油以及大豆油；二醇，如丙二醇或聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原质水；等渗生理盐水；林格氏溶液；乙醇和磷酸盐缓冲溶液；以及其他无毒性相容润滑剂，如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁；以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂与芳香剂、防腐剂以及抗氧化剂也可以根据配制者的判断而存在于组合物中。

[0254] 根据本发明，化合物或药学上可接受的组合物的“有效量”是可有效用于治疗HPV感染或减轻其严重程度的量。如果其他适应症正在用在此所描述的聚酰胺治疗，那么“有效量”将定义为根据针对那些疾病的治疗规范。

[0255] 给药

[0256] 根据本发明方法，可以使用可有效治疗慢性HPV疾病或减轻其严重程度的任何给药量和任何给药途径来给予这些药物组合物。

[0257] 所需的确切量将取决于受试者的人种、年龄、性别、体重、饮食、医学病状以及一般病状、感染的严重程度、特定药剂、其给药模式等，随受试者不同而不同。影响给药方案的其他因素包括药理学考虑因素，如所用化合物的活性、功效、药物动力学以及毒理学概况，是否使用药物递送系统以及这些化合物是否与其他成分一起给予。剂量可以使用本领域中已知的标准方法常规地测定。实际上所用的给药方案因此基于所治疗的受试者而大幅变化并且由此偏离下面所列举的示例性给药方案。为了给药便利性和剂量均一性，本发明的化合物优选地以单位剂型配制。如在此所用的表达“单位剂型”是指适于待治疗受试者的药剂的物理离散单位。然而，应该了解，本发明化合物和组合物的每天总用量应由主治医师在合理医学判断范围内决定。用于任何特定受试者的特定有效剂量水平将取决于多种因素，这些因素包括待治疗病症和病症的严重程度；所用特定化合物的活性；所用特定组合物；受试者的年龄、体重、一般健康、性别以及饮食；给药时间、给药途径以及所用特定化合物的排泄速率；治疗持续时间；与所用特定化合物组合或同时使用的药物；以及医学技术中已知的类似因素。如在此所用的术语“受试者”意指一种动物，例如哺乳动物，包括人类。

[0258] 可以用要求单一日剂量、在一天当中多个间隔剂量、每隔一天单一剂量、每若干天单一剂量的方案或其他恰当的方案来给予这些化合物。

[0259] 举例来说，所配制的聚酰胺能够以约4ml媒剂中的5mg/mL（约2.5mM浓度）的最终浓度通过阴道涂药器每天给予一次，例如到阴道的后穹窿。如果在晚上睡觉之前给药，那么可预料到大部分药物由于缺乏步行而将保留在阴道腔的最高方位，最接近于子宫颈。在一个实施例中，聚酰胺配制品可以给药持续10天。

[0260] 本发明的药学上可接受的组合物可以经口、经直肠、非经肠、潴泡内、阴道内、腹膜内、局部（如通过散剂、软膏或滴剂）、经颊（如经口或鼻喷雾）等向人类和其他动物给药，这取决于所治疗的感染的严重强度。在某些实施例中，可以每天、一天一次或多次以约0.01mg/kg到约50mg/kg并且优选地从约1mg/kg到约25mg/kg的受试者体重的剂量水平经口或非经肠给予本发明化合物，以获得所希望的治疗作用。

[0261] 用于口服的液体剂型包括（但不限于）药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆以及酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还可以含有本领域中常用的惰性稀释剂，如水或其他溶剂、增溶剂以及乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类（尤其是棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油以及芝麻油）、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯以及其混合物。除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包含佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂以及芳香剂。

[0262] 可以根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可以是在无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如呈在1,3-丁二醇中的溶液形式。可以使用的可接受媒剂和溶剂中有水、林格氏溶液、U.S.P.以及等渗氯化钠溶液。另外，常规地使用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于这个目的，可以采用任何温和的不挥发性油，包括合成的单酸甘油酯或二酸甘油酯。另外，如油酸等脂肪酸可以用来制备可注射剂。

[0263] 可注射配制品可以例如通过并入呈无菌固体组合物形式的灭菌剂进行灭菌，这些无菌固体组合物可以在使用之前溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中。

[0264] 为了延长本发明化合物的作用，通常希望减慢从皮下或肌肉内注射吸收化合物。这可以通过使用具有弱水溶性的结晶或非晶形物质的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，溶解速率又可以取决于晶体尺寸和结晶形式。可替代地，通过将化合物溶解或悬浮在一种油媒剂中来实现非经肠给予的化合物形式的延迟吸收。通过形成化合物在生物可降解聚合物（如聚丙交酯-聚乙交酯）中的微胶囊基质来制造可注射贮存形式。取决于化合物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物的释放速率。
其他生物可降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。也通过将化合物诱捕在与身体组织可相容的脂质体或微乳液中来制备贮存可注射配制品。

[0265] 用于经直肠或经阴道给予的组合物可以是栓剂，这些栓剂可以通过将本发明化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体（如可可脂、聚乙二醇）混合而制备；或栓剂蜡，所述栓剂蜡在环境温度下是固体但在体温下是液体并且因此在直肠或阴道腔中熔融并且释放活性化合物。

[0266] 用于口服的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂以及颗粒。在这些固体剂型中，活性化合物与以下混合：至少一种惰性药学上可接受的赋形剂或载体，如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或(a)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇以及硅酸；(b)粘合剂，如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖以及阿拉伯胶；(c)保湿剂，如甘油；(d)崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐以及碳酸钠；(e)溶液迟延剂，如石蜡；(f)吸收促进剂，如季铵化合物；(g)润湿剂，如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，如高岭土和膨润土；以及(i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠以及其混合物。在胶囊、片剂以及丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。

[0267] 也可以使用类似类型的固体组合物作为使用如乳糖（lactose/milk sugar）以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂以及颗粒的固体剂型可以用包衣和外壳(如肠溶衣和药物配制技术中众所周知的其他包衣)来制备。它们可以任选地含有乳浊剂，并且可以具有使其任选地在肠道某一部分中以一种延迟方式仅或优先释放活性成分的组成。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。也可以使用类似类型的固体组合物作为使用如乳糖（lactose/milk sugar）以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。

[0268] 活性化合物也可以呈与如上所指出的一种或多种赋形剂的微胶囊化形式。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂以及颗粒的固体剂型可以用包衣和外壳(如肠溶衣、释放控制包衣以及药物配制技术中众所周知的其他包衣)来制备。在这些固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂（如蔗糖、乳糖或淀粉）混合。正常实践时，这些剂型还可以包含除惰性稀释剂以外的附加物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂以及丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。它们可以任选地含有乳浊剂，并且可以具有使其任选地在肠道某一部分中以一种延迟方式仅或优先释放活性成分的组成。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。

[0269] 用于局部或经皮给予本发明化合物的剂型包括软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。在无菌条件下将活性组分与药学上可接受的载体和任何所需防腐剂或缓冲剂按要求混合。眼用配制品、滴耳剂及滴眼剂也预期属于本发明范畴内。另外，本发明涵盖了使用经皮贴片，这些经皮贴片具有提供化合物向身体的控制递送的额外优点。通过将化合物溶解或分配于恰当介质中来制备这些剂型。还可以使用吸收增进剂来提高化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制速率。

[0270] 如上文总体上所描述，本发明化合物有用于作为HPV疾病、包括慢性HPV疾病的治疗。

[0271] 多于一种的本发明化合物可以分别地、同步地或依次地给予到感染细胞、给予到含有感染细胞的组织或给予到感染受试者。

[0272] 还应该了解，本发明的化合物和药学上可接受的组合物可以用于组合疗法中，也就是说，这些化合物和药学上可接受的组合物可以与一种或多种其他所希望的疗法或医疗程序同时地、在一种或多种其他所希望的疗法或医疗程序之前或在一种或多种其他所希望的疗法或医疗程序之后给予。用于组合方案中的特定疗法组合（疗法或程序）将考虑所希望的疗法和/或程序的相容性和要实现的所希望的作用。还应该了解，所用疗法可以实现针对相同病症的所希望的作用（例如可以与用于治疗相同病症的另一种药剂并行地给予本发明的化合物），或这些疗法可以实现不同的作用（例如控制任何副作用）。如在此所用，通常给予以治疗或预防特定疾病或病状的附加治疗剂被称为“适于所治疗的疾病或病状”。

[0273] 存在于本发明组合物中的附加治疗剂的量将不大于通常将以包含那种治疗剂作为唯一活性剂的组合物形式给予的量。优选地，本发明所披露的组合物中附加治疗剂的量将在通常存在于包含那种药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中的量的从约50%到100%范围内。

[0274] 也可以将本发明化合物或其药学上可接受的组合物并入到用于包覆可植入医学器件的组合物中，所述可植入医学器件如假肢、人工瓣膜、血管移植物、支架以及导管。因此，在另一个方面，本发明包括一种用于包覆可植入器件的组合物，所述组合物包含如上文总体上所描述的本发明化合物，并且在此的类别与子类中，和一种适用于包覆所述可植入器件的载体。在再另一个方面，本发明包括一种用一种组合物包覆的可植入器件，所述组合物包含如上文总体上所描述的本发明化合物，并且在此的类别和子类中，和一种适用于包覆所述可植入器件的载体。合适的包衣和被包覆的可植入器件的一般制备描述在美国专利号6,099,562；5,886,026；以及5,304,121中。包衣典型地是生物相容性聚合材料，如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己酸内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯乙酸乙烯酯以及其混合物。包衣可以任选地被一种合适的氟硅酮、多醣、聚乙二醇、磷脂或其组合的最外包衣进一步覆盖，从而在组合物中赋予控制释放特性。

[0275] 治疗方法

[0276] 本发明的另一个方面涉及治疗生物样本或受试者中的病毒感染的细胞或其他病毒（例如体外或体内），所述方法包括向所述受试者（人类或其他动物）给予一种药物组合物或使所述生物样本与所述药物组合物接触，所述药物组合物包含如在此所述的聚酰胺。也可以采用在此所述的聚酰胺的混合物。如在此所用的术语“生物样本”包括（但不限于）细胞培养物或其提取物；从哺乳动物获得的活检物质或其提取物；以及血液、唾液、尿液、粪便、精液、眼泪或其他体液或其提取物。术语“受试者”包括动物，包括哺乳动物、人类、灵长类动物、犬、猫、马、猪、母牛、绵羊等。

[0277] 在个体的细胞变得暴露并感染了HPV之后，多个HPV游离基因复本在感染细胞内可以变成确定的。HPV游离基因以细胞分裂形式进一步复制，在每个新细胞中形成大致相同数目的HPV游离型复本（例如，在细胞分裂之后，一个含有20-100个复本的细胞将形成两个新细胞，每个含有约20-100个游离基因复本。被设计成用于靶向富A/T区的聚酰胺可以提升HPV游离基因的清除率。因此，本发明的方法也可以有利地用作一种治疗方法来治疗HPV。

[0278] 用于治疗HPV或其他乳头瘤病毒的聚酰胺包括（不限于）在此所述的那些聚酰胺。

[0279] 在一个实施例中，本发明提供了一种治疗HPV感染细胞的方法，所述方法包括使这些细胞与在此所述的化合物或这些化合物的混合物接触。在本发明的一个方面，所述方法进一步包括使这些细胞与抗病毒剂接触。所述抗病毒剂可以是干扰素、咪喹莫特、西多福韦、甲醛、戊二醛、西咪替丁、5-氟尿嘧啶、三氯乙酸、博莱霉素、普达非洛或鬼臼。

[0280] 在另一个实施例中，本发明提供了一种治疗受试者的HPV感染细胞的方法，所述方法包括向一个受试者给予在此所述的化合物或药物组合物。在本发明的一个方面，所述方法进一步包括使这些细胞与抗病毒剂接触。所述抗病毒剂可以是干扰素、咪喹莫特、西多福韦、甲醛、戊二醛、西咪替丁、5-氟尿嘧啶、三氯乙酸、博莱霉素、普达非洛或鬼臼。在另一个方面，HPV可以是HPV11、HPV16、HPV18、HPV1、HPV6或HPV31。

[0281] 在其他实施例中，本发明提供了一种治疗HPV16、HPV18或HPV31感染细胞的方法，q所述方法包括向一个受试者给予根据本发明的聚酰胺、尤其是式Z-(X)n-γ -(X)m-A化合物，或其药学上可接受的盐，其中Z、X、γq、A、m以及n如上所述，或式G-(X)n-γq-(X)m-A化合物，或其药学上可接受的盐，其中G、X、γq、A、m以及n如上所述。

[0282] 在又其他实施例中，本发明提供了一种治疗HPV感染细胞，如HPV16、HPV18或HPV31感染细胞的方法，所述方法是通过向一个受试者给予选自以下的化合物：

[0283] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyPy-Ta；

[0284] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNHR'-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0285] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0286] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNHR'-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0287] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0288] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0289] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0290] TMG-PyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

[0291] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γNHR"-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0292] TMG-PyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Dp；

[0293] TMG-PyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Dp；

[0294] TMG-PyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Ta；

[0295] TMG-PyPyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Dp；

[0296] TMG-PyPyβPyPyPy-γ-PyPyβPyPyPyPyβ-Ta；

[0297] TMG-PyPyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

[0298] TMG-PyPyβPyPyImβPyPy-γ-PyPyβPyPyPyβPyPyPyβ-Dp；

[0299] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0300] TMG-PyPyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0301] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γ□PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Dp；

[0302] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γ-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0303] TMG-PyImβPyPy-γ-PyPyPyβPyPyPyβ-Ta；

[0304] TMG-PyPyβPyPyβPy-γNH2-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0305] TMG-PyPyβPyPyβPyIm-γNH2-PyβPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0306] TMG-PyPyβPyPyβPy-γ-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0307] TMG-PyPyPyβPyPyβPy-γ-PyPyPyβPyPyPyβPyβ-Ta；

[0308] TMG-PyImPyIm-γ-PyPyPyPyβ-Ta；

[0309] TMG-PyImβIm-γ-PyβPyPyβ-Ta；

[0310] TMG-PyImPyIm-γ-PyβPyPyβ-Ta；

[0311] TMG-PyImβIm-γ-PyPyPyPyβ-Ta；

[0312] GUAN-PyImβImγPyβPyPyβ-Ta；

[0313] 和其药学上可接受的盐。

[0314] 在这个实施例的某些方面，所述方法进一步包括给予抗病毒剂。所述抗病毒剂可以是一种干扰素（例如干扰素y和干扰素0）、咪喹莫特、西多福韦、甲醛、戊二醛、西咪替丁、5-氟尿嘧啶、三氯乙酸、博莱霉素、普达非洛、鬼臼、阿昔洛韦以及其他疱疹/巨细胞病毒药物以及抗HIV药物。聚酰胺也可以与光动力性疗法、放射疗法以及化学疗法组合使用。

[0315] 为了可以更全面地了解在此所述的本发明，列举了以下实例。应该了解，这些实例仅用于说明性目的并且不应该理解为以任何方式限制本发明。

[0316] 实例

[0317] 聚酰胺寡聚物可以如下合成：以Boc-β-丙氨酸-PAM固相合成树脂或一种类似的可商购的树脂（如Fmoc-β-丙氨酸-王（Fmoc-β-alanine-Wang）树脂）为起始物质，添加如目标序列所需的构造区块。制备胍基化聚酰胺的最终步骤通过在N端并入四甲基胍基（TMG）来举例说明。TMG-聚酰胺合成涉及使用HATU（六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓）来放置四甲基胍基。

[0318] 表1a列出了根据本发明合成的多个示例性聚酰胺。表1b中所给出的HPLC/MW值是使用低分辨率高压液相色谱/质谱（LR HPLC/MS）所获得的，这提供了单一同位素的中等精确质量而不是平均分子量或准确质量。化合物NV1096的完整结构列举在图2中。表2展示了这些聚酰胺当中的某些针对HPV16、HPV18以及HPV31的所测量的IC50值的一个汇总。IC50是用于50%抑制病毒体外复制所需的化合物浓度。在维持HPV16、HPV18或HPV31DNA的细胞中测试聚酰胺。维持所选择的HPV的细胞在聚酰胺存在下培养72小时。病毒DNA然后使用实时PCR定量并且与媒剂（DMSO）处理的对照培养物相比较。所获得的结果表明，所测试的聚酰胺总体上展现出抑制HPV16、HPV18以及HPV31复制的有效性。表3展示了这些聚酰胺当中的某些针对HPV16、HPV18以及HPV31的所测量的IC50和IC90值的一个汇总。结果进一步表明，所测试的聚酰胺展现出抑制HPV16、HPV18以及HPV31复制的有效性。

[0319] 表1a.

[0320]

[0321]

[0322] GUAN=未被取代的胍

[0323] R’=-CONHCH2CH2CH2N(Me)CH2CH2CH2NH2

[0324] R’’=-CONHCH2CH2CH2N(Me)2

[0325] TMG=四甲基胍基

[0326] β=β-丙氨酸Ta=3,3'-二氨基-N-甲基二丙胺

[0327] γ=γ-氨基丁酸Dp=3-(二甲基氨基)丙胺

[0328] Py=4-氨基-2-羰基-N-甲基吡咯

[0329] Im=4-氨基-2-羰基-N-甲基咪唑

[0330] 表1b.

[0331]

[0332]

[0333]

[0334] 表2.

[0335]

[0336]

[0337] 在表2中，“-”表示在最高剂量测试（10μM）下相对于对照未

[0338] 获得可测量的抗病毒响应。

[0339] 表3.

[0340]

[0341] 可以使用若干替代方法来证实这些化合物对病毒DNA的作用。这些附加程序包括归一化至总DNA，通过不同程序制备DNA，包括DNeasy（总基因组DNA）凯杰（Qiagen）离心柱、DNAzol总基因组DNA制剂以及赫特（Hirt）（低MW DNA制剂；（赫特（Hirt）（，1967），《分子生物学杂志》（J Mol Biol.）26:365-9）。

[0342] 可以使用DNA印记法来证实聚酰胺对HPV DNA水平的影响，这些HPV DNA水平使用实时PCR技术来测定。这些实验可以如先前所述执行（盖默〃哈姆里克（Gamer-Hamrick）和费雪（Fisher），《病毒学》（Virology），301,334-41,2002）。

[0343] 发现有效针对HPV的每种聚酰胺的毒性可以在正常人类角化细胞中使用一种MTT细胞活力测定进行监测（德尼佐（Denizot）和朗（Lang），1986）。

[0344] 其他实施例

[0345] 应该了解，虽然本发明已经结合其上述详细说明进行了描述，但是上述描述是打算说明并且不限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围限定。其他优势和修改在所附权利要求书的范围内。

标题	发布/更新时间	阅读量
乳头凹陷矫正架-专利编号CN107260373B	2020-05-13	1014
乳头肌捆束-专利编号CN110582251A	2020-05-12	545
乳头按摩器-专利编号CN1437440A	2020-05-12	716
乳头皲裂康-专利编号CN105311390A	2020-05-12	361
乳头杯-专利编号CN101453886B	2020-05-11	160
乳头按摩器-专利编号CN1183825C	2020-05-11	830
一种乳头清洗机-专利编号CN106614005B	2020-05-13	760
奶牛乳头穿刺针-专利编号CN109419564A	2020-05-13	669
乳头杯-专利编号CN101453886A	2020-05-11	157
乳头浸洗剂-专利编号CN1225555A	2020-05-11	505

有用于治疗人类乳头瘤病毒的被胍基取代的聚酰胺

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