本发明涉及具有肝素的抗凝血和抗血栓形成药理活性的新型合成多 糖。

肝素属于葡糖胺聚糖类(GAGs)，它们是异种天然硫酸化的多糖。

肝素制剂是含有10-100或100以上的许多个单糖单位的链的混 合物。这种分子大小的不均匀性伴随有结构的不均匀性，其特征在于 它们不仅具有组成成分单糖类的性质、而且具有单糖的取代基(L. Rodén在《糖蛋白和葡糖胺聚糖的生物化学》(The Biochemistry of Glycoproteins and Glycosaminoglycans)中所述，该文献由Lennarz W.J.编辑，Plenum Press，New York和London，267-371，1980)。

每类天然GAGs一般具有一定范围的药理活性。所有获自天然产物 的均可以被组合成制剂。因此，例如，肝素类和硫酸乙酰肝素类具有与 对几种凝固因子有协同作用相关的抗血栓形成活性。

肝素特别是通过抗凝血酶III(AT III)催化抑制两种包括在凝血 级联系统中的酶即因子Xa和因子IIa(或凝血酶)。低分子量肝素类 (LMWHs)制剂含有由4-30个单糖形成的链并对因子Xa比对凝血酶更 具有选择性作用的特性。

某些合成寡糖类、特别是那些在EP 84999中所述的寡糖类具有 通过抗凝血酶III选择性抑制因子Xa而对凝血酶没有任何活性的特 性。

公知因子Xa的抑制需要肝素通过抗凝血酶结合结构域(ABD)结合 AT III且因子IIa(凝血酶)的抑制需要通过ABD结合AT III和通过 未充分确定的结合结构域(TBD)结合凝血酶。

符合肝素ABD的合成寡糖类是公知的并对静脉血栓形成表现出抗血 栓形成活性。这些化合物描述在EP 529,715和EP 621,282以及专利CA 2,040,905中。

这些寡糖类在预防动脉血栓形成中的功效因其不能抑制凝血酶而仍 然没有实现。

PCT/FR 97/01344专利申请中描述了能够通过激活AT III而抑制 凝血酶的肝素型葡糖胺聚糖类的合成。

该专利申请描述了新型生物活性多糖衍生物。特别是它们是抗凝血 药和抗血栓形成药。此外，由于这些多糖通过合成获得，所以能够选择 性地修饰它们的结构且尤其是除去涉及与某些碱性蛋白质诸如血小板因 子4(PF4)(它是在血小板激活过程中释放的)相互作用的不需要的硫 酸化取代基，从而在血块区中产生可观的中和作用。因此，可以获得属 于强有力的抗血栓形成药和抗凝血药的多糖，此外，它们可以避免体内 蛋白质诸如PF4的影响，所述的蛋白质可使肝素特别是对凝血酶的作用 中和。

特别地，已经证实这些硫酸化和烷基化的多糖可以是强有力的抗血 栓形成药和抗凝血药，这取决于所述碳水化合物骨架所带有的烷基和硫 酸化基团的排列方式。

更具体地说，已经发现通过制备多糖序列，能够准确地改变GAG型 的活性以便获得具有肝素特性的有充分活性的产物。

然而，可以证明在人体治疗过程中使用PCT/FR 97/01344专利申请 中所描述的某些产品是困难的，尤其是如果这些产品具有较长的半衰期 则更是如此。在使用上述产品预防或治疗血栓形成的领域中，必须重新 确定或维持血液的流动性，同时又要避免诱发出血。与此不可缺少的功 能特性相关的是仅优选使用具有短半衰期且便于使用它起作用的化合物 以便获得这种平衡。

其原因在于众所周知在对患者的治疗过程中无论因任何偶然因素 均可以引起出血情况，还有必要在抗血栓形成的治疗过程中对患者进 行外科手术。也由于这些不同的原因，优选使用具有短半衰期的化合 物。

在大鼠体内测定了本发明的合成多糖的半衰期，其中令人意外地观 察到它受到所述分子的结构且特别是ABD、TBD(凝血酶结合结构域)和 间隔群分子结构的影响。

因此，本发明涉及新型合成多糖，它们在结构上类似于PCT/FR 97/01344专利申请中所述的化合物的结构，而它们具有特殊性质。其原 因是这些化合物通过抗Xa活性令人意外地具有在对大鼠静脉给药后小 于1.5小时的可调整的可估计的半衰期。

这些化合物是含有三种不同序列的十六糖类：硫酸化五糖序列 DEFGH、非硫酸化七糖序列Z(MN)3和硫酸化四糖序列VWXY。

本发明的化合物是酸形式的合成多糖及其与药物上可接受阳离子形 成的药物上可接受的盐，其阴离子形式符合下列通式(I)、(II)、 (III)、(IV)和(V)中之一：

                             本发明的活性结构

本发明包括酸形式的多糖或其任何药物上可接受的盐形式。在酸形 式中，-COO-和-SO3-官能团分别是-COOH和-SO3H的形式。

措词“本发明多糖的药物上可接受的盐”指的是一个或多个-COO-和/或-SO3-官能团以离子方式与药物上可接受的金属阳离子结合的多 糖。本发明优选的盐是那些选自碱金属阳离子、且更优选是那些阳离子 是Na+或K+的盐。

本发明还涉及一种用于制备本发明多糖的方法。

主要地，这种方法使用如上述文献中所报导制备的二或寡糖合成 子。特别是参考文献EP 300,099、EP 529,715、EP 621,282和EP 649,584 以及C.van Boeckel，M.Petitou，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.， 1993，32，1671-1690。然后使这些合成子彼此偶联以便得到本发明的 完全保护的十六糖前体，接着选择性地将其脱保护并硫酸化，从而得到 本发明的十六糖。

在上述偶联反应中，在异头碳上活化的“供体”二或寡糖与含有游 离羟基的“受体”二或寡糖反应。

按照下列操作序列可以合成本发明的十六糖，所述序列指的是上述 通式(I)中所代表的糖单位。

首先制备在4’位上带有醇官能基的GH、pGH的保护前体和异头碳被 活化的EF、pEF的保护前体。中间产物pGH和pEF彼此反应而产生EFGH。 然后使非还原端单位的4位脱保护以便得到前体pEFGH。

并列的情况是，按照同样的策略制备异头碳被活化的部分YZ(MN) 3D的前体pYZ(MN)3D。

然后四糖pEFGH与pYZ(MN)3D反应而产生YZ(MN)3DEFGH。使非 还原端单位脱保护而得到前体pYZ(MN)3DEFGH。

按照同样方式制备WX的前体pVWX。

pVWX与pYZ(MN)3DEFGH之间的反应由此产生十六糖的直接前体， 将它脱保护并硫酸化而得到预计的十六糖。

对于本领域普通技术人员来说，显而易见的是几种合成策略都是可 行的，这取决于所选择的受体和供体。例如，能够制备供体VWXYZ(MN) 3D并使其与EFGH偶联以便获得所需十六糖的前体。例如，所选择的参 考文献是上述参考文献和《单糖类、其化学和其在天然产物中的作用》 (Monosaccharides，Their chemistry and their roles in natural products)(P.M.Collins和R.J.Ferrier，J.Wiley & Sons，1995) 以及《四面体》(Tetrahedron)(G.J.Boons，1996，52，1095-1121)。

已经对本发明的化合物进行了生物化学和药理学研究，这些研究已 经证实它们另外具有PCT/FR 97/01344专利申请中所述产品的优良特 性。

以大于或等于肝素亲和性的亲和性选择性地与AT III结合的本发 明化合物具有优于肝素的抗凝血和抗血栓形成特性。

已经在下列两种模型大鼠体内经静脉或皮下评估了通式(I)-(V) 产物的总体抗血栓形成活性：按照J.Reyers等在《血栓形成研究》 (Thrombosis Research)1980，18，669-674中所述方法制成的静脉 停滞和用组织促凝血酶原激酶诱发的模型以及如Umetsu等在《血栓形 成与出血》(Thromb.Haemost.)1978，39，74-83中所述由大鼠体内 颈动脉与颈静脉之间植入的分路构成的动脉血栓形成模型。在这两种实 验模型中，本发明化合物的ED50至少小于或等于已经公知的其它合成类 肝素的数量级(ED50为1-50nmol/kg)。本发明的化合物由此具有特别 优良的作用特异性和特别优良的抗血栓形成活性。

本发明的化合物因其生物化学和药物活性而构成了极为有利的药 物。它们的毒性完全与这种用途相适应。它们还非常稳定且由此特别适 于构成特殊药物产品的活性成分。

此外，本发明的化合物并不因在血栓形成过程中激活血小板时释放 的高剂量阳离子血小板蛋白质诸如PF4而中和。本发明的化合物由此最 特别有利地用于治疗和预防来源于动脉或静脉的血栓形成。

在特别是心血管和脑血管系统疾病诸如与动脉硬化和糖尿病有关的 血栓栓塞疾病中呈现的凝固系统体内平衡改变后，可以将它们各种病理 情况，诸如不稳定的绞痛，中风，血管成形术、动脉内膜切除术或安 装血管内假体后的再狭窄；或与血栓溶解、梗塞形成、因局部缺血的痴 呆后的血栓再形成有关的血栓栓塞疾病、与外周动脉疾病有关的血栓栓 塞疾病、与血液透析有关的血栓栓塞疾病、与心房纤维性颤动有关的或 在使用主动脉冠状动脉搭桥血管假体过程中出现的血栓栓塞疾病。可将 本产品另外用于治疗或预防来源于静脉的血栓形成病理情况，诸如肺栓 塞。可以将它们用于预防或治疗外科手术过程中出现的或合并有其它病 理情况诸如癌症和细菌或病毒感染的血栓形成并发症。就用于设置假体 的情况而言，本发明的化合物可以覆盖假体且由此可使它们与血液兼 容。特别地，可以使它们与血管内假体结合(斯腾特印膜)。在这种情 况中，可以如EP 649,854所述通过在非还原或还原端引入一种合适的 侧基而对它们进行任意的化学修饰。

还可以将本发明的化合物用作用多孔气囊进行动脉内膜切除术过程 中的佐剂。

本发明的化合物非常稳定且由此特别适于构成药物的活性成分。

因此，可以将本发明的化合物用于制备用来治疗上述疾病的药物。

根据本发明的另一个方面，本发明的主题由此是含有如上所述合成 多糖作为活性成分的药物组合物。

本发明优选涉及含有本发明化合物的酸形式或其药物上可接受的一 种盐作为活性成分以及任意一种或多种惰性和合适赋形剂的药物组合 物。一般来说，可以将本发明的多糖用于治疗与凝固功能障碍有关的病 理情况。

在每个剂量单元中，所述的活性成分以适于所预定的每日剂量的量存 在。一般来说，根据所预定的给药剂量和给药方式适当调整每个剂量单元， 例如片剂、胶囊等；药袋、药瓶、糖浆等；滴剂、经皮或经粘膜贴剂，使 得这类剂量单元含有0.1-100mg活性成分、优选0.5-50mg。

可以将本发明的化合物与一种或多种用于所需治疗的其它活性成分 合并使用，诸如、例如抗血栓形成剂；抗凝血药；诸如双嘧达莫、阿司 匹林、噻氯匹定、氯吡格雷这样的抗血小板聚集剂或糖蛋白IIb/IIIa 复合物的拮抗剂。

配制所述的药物组合物以便对哺乳动物包括人进行给药，从而治疗 上述疾病。

如此获得的药物组合物可以是各种有利的剂型，诸如、例如注射用 或饮用溶液、包糖衣片、普通片剂或明胶胶囊。注射用溶液是优选的药 物剂型。本发明的药物组合物特别用于预防或有效治疗血管壁疾病诸如 动脉硬化、例如在对肿瘤实施外科手术后或凝固失调后观察到的由细 菌、病毒或酶活化剂诱发的凝固性过高情况。剂量可以在很宽的范围内 改变，这取决于患者的年龄、体重和健康情况、疾病的性质和严重程度、 以及给药途径。这种剂量包括每天经肌内或皮下以连续给药或在固定间 隔给药的方式给予一次或多次剂量的约0.1mg-约100mg，优选每天给 予约0.5-约50mg。

本发明的主题由此是含有上述化合物之一与任意另一种活性成分作 为活性成分的药物组合物。制备这些组合物以便能够通过消化道或非肠 道途径进行给药。

在本发明的用于口服，舌下、皮下、肌内、静脉内、经皮、经粘 膜、局部或直肠给药的药物组合物中，可以将活性组分与标准药物支 持物混合制成给药剂型后对动物和人进行给药。合适的给药剂型包括 口服剂型诸如片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂和口服悬浮液或溶液；舌下 和向颊给药剂型；皮下、肌内、静脉内、鼻内或眼内给药剂型以及直 肠内给药剂型。

当制备片剂形式的固体组合物时，可以将主要的活性组分与药物 载体诸如明胶、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、滑石、阿拉伯树胶等混合。 可以将所述片剂用蔗糖或其它的合适物质包衣，另一种方法是将它们 处理成它们具有持续或延缓的活性并使得它们可连续释放预定量的活 性成分。

通过使活性组分与稀释剂混合并通过将获得的混合物装入软或硬胶 囊而获得胶囊制剂。

水分散性粉剂或颗粒剂可以含有混有分散剂或湿润剂、或悬浮剂(诸 如聚乙烯吡咯烷酮)并混有增甜剂或增味剂的活性组分。

对于直肠给药来说，使用的是制成的用在直肠温度下熔化的粘合剂 制备的栓剂，所述的粘合剂例如是可可油或聚乙二醇。

对于非肠道、鼻内或眼内给药来说，使用的是含有药理兼容性分散 剂和/或湿润剂例如丙二醇或丁二醇的水悬浮液、等渗盐水溶液或无菌 注射用溶液。

对于经粘膜给药来说，可以在有促进剂存在的情况下配制活性成 分，所述的促进剂诸如胆汁盐；亲水性聚合物诸如例如羟丙基纤维素、 羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、葡聚 糖、聚乙烯吡咯烷酮、果胶、淀粉、明胶、酪蛋白、丙烯酸、丙烯酸酯 类及其共聚物、乙烯基聚合物或共聚物、乙烯基醇类、烷氧基聚合物、 聚环氧乙烷聚合物、聚醚类或其混合物。

还可以将所述的活性成分任意与一种或多种支持物或添加剂一起配 制成微胶囊的形式。

也可以将所述的活性成分制成含有环糊精的配合物，所述的环糊精 例如是α、β或γ环糊精、2-羟丙基-β-环糊精或甲基-β-环糊精。

所述的活性成分还可以通过含有它的气囊或通过引入血管的血管内 膨胀剂来释放。由此活性成分的药理功效不受影响。

皮下给药是优选的途径。

下面解释合成用于获得本发明多糖的各种中间产物的方法、制备过 程和图解。

使用下列缩写：TBDMS：叔丁基二甲硅烷基；lev：乙酰丙酰基；Bn： 苄基；Bz：苯甲酰基；TLC：薄层层析法；Olm：三氯乙酰亚氨酰基；LSIMS： 液体次级离子质谱法；ESIMS：电喷离子化质谱法；TMS：三甲硅烷基； TSP：三甲硅烷基四氘化丙酸钠；Tf：triflate；MS：分子筛；PMB： 对甲氧基苄基；MP：对甲氧基苯基；TS：甲苯磺酰基；ET：乙基；Ph： 苯基；Me：甲基；Ac：乙酰基。

Dowex、Sephadex、Chelex和Toyopearl是注册商标。

在下列方法、制备过程和实施例中，可以通过对合适的中间产物使 用下列一般方法来进行有关催化偶联亚氨逐酸酯类(imidates)、裂解 乙酰丙酸酯类、催化偶联硫苷、皂化、甲基化和选择性脱保护对甲氧基 苄基基团、通过氢解苄基酯类或醚类而使寡和多糖脱保护并硫酸化、皂 化酯类或硫酸化的一般过程。

下文具体描述的合成本发明化合物的实施例用于解释目的。

图解1-五糖9的合成

制备1

乙基O-(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)- (1→4)-2，3，6-三-O-苯甲酰基-1-硫-β-D-吡喃葡糖苷(2)

在20分钟内将苯甲酰氯(24.5ml，211mmol)逐滴加入到冷却的(0 ℃)化合物1(16.7g，35.2mmol)(J.Westman和M.Nilsson，《碳水 化合物化学杂志》(J.Carbohydr.Chem.)1995，14(7)，949-960) 溶于吡啶(202ml)所得到的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌20个 小时；TLC显示约50％的转化率。用水和二氯甲烷稀释所述的混合物。 萃取后，用10％碳酸氢钠溶液和水洗涤有机相、将其用硫酸镁干燥并浓 缩。用苯甲酰氯按照上述程序重新处理残余物。将粗产物通过硅胶柱层 析柱进行纯化而得到22g的化合物2。

TCL：Rf＝0.80，硅胶，9/1v/v甲苯/乙醇

制备2

O-(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -O-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1，6-脱水- 2，3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(4)

在氮气环境中将硫苷2(1.05g，1.05mmol)、化合物3(200mg， 1.05mmol)(Jeanloz等《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)1961，26， 3939-3944)和粉状4分子筛(1.1g)的混合物在甲苯(18ml)中搅拌 15分钟。然后使混合物冷却至-20℃并向其中加入新近制备的N-碘琥珀 酰亚胺(1.11mmol)和三氟甲磺酸(0.125mmol)溶于1/1 v/v二氯甲 烷/二噁烷(6ml)所得到的溶液中。10分钟后，过滤红色反应混合物； 用二氯甲烷稀释；萃取；用10％硫代硫酸钠溶液、10％碳酸氢钠溶液和 水依次洗涤；用硫酸镁干燥且然后在真空中浓缩。通过硅胶柱层析对残 余物进行纯化，从而得到1.25g的化合物4。

TCL：Rf＝0.55，硅胶，4/6 v/v庚烷/乙酸乙酯

制备3

O-(4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(5)

将叔丁醇钾(约50mg)加入到化合物4(1.24g，1.11mmol)溶于 1/1 v/v甲烷/二噁烷(7ml)所得到的溶液中。将该混合物搅拌1小时 并进一步加入50mg的叔丁醇钾；然后将该混合物进一步搅拌60分钟。 将反应混合物用Dowex50WX8 H+树脂中和、过滤并在真空中浓缩。在 进行硅胶柱层析后，分离出665mg的油状形式的化合物5。

TCL：Rf＝0.50，硅胶，85/15 v/v二氯甲烷/甲醇

制备4

O-(4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)- O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2，3-二- O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(6)

在氮气环境中将氢化钠(387mg，9.65mmol)加入到冷却的(5℃) 的化合物5(660mg，1.1mmol)溶于干四氢呋喃(8ml)所得到的溶液 中。逐滴加入甲基碘(0.51ml，8.22mmol)并将该混合物在室温下搅拌 20小时。用甲醇破坏过量的氢化钠并将所述混合物倾入50ml的冰冷水 中。用乙酸乙酯萃取(20ml，3次)后，用氯化钠溶液洗涤有机相、将 其用硫酸镁干燥并浓缩至得到690mg的化合物6。

TCL：Rf＝0.25，硅胶，95/5 v/v二氯甲烷/甲醇

制备5

O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三- O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D- 吡喃葡萄糖(7)

将化合物6(690mg，1.03mmol)溶于80％乙酸(7.3ml)并将该混 合物在40℃下搅拌20小时。将所述混合物在真空中浓缩并与甲苯一起 共蒸发。通过8/1/1二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇的硅胶柱层析得到569mg 的化合物7。

TCL：Rf＝0.40，硅胶，9/1 v/v二氯甲烷/甲醇

制备6

O-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)- O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2，3-二- O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(8)

将1-苄氧基-1H-苯并三唑(227mg，1.05mmol)和三乙胺 (1.1.5mmol)加入到化合物7(560mg，0.96mmol)溶于二氯甲烷所得 到的溶液中且然后将该混合物在室温下搅拌20小时。将该反应混合物 用二氯甲烷稀释并用10％碳酸氢钠溶液和水洗涤。将有机相用硫酸镁干 燥、过滤并蒸发至干。将产物用硅胶柱层析纯化而得到600mg的化合物 8。

TCL：Rf＝0.50，硅胶，9/1 v/v二氯甲烷/甲醇

制备7

O-(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -O-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-O-苯 甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡 喃葡萄糖(9)

按照用于制备化合物4所述的程序将化合物8转化成化合物9。偶 联反应在5℃下进行。

TCL：Rf＝0.50，硅胶，2/8 v/v庚烷/乙酸乙酯

图解2-七糖14的合成

制备8

O-(4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2，3-二-O- 甲基-β-D-吡喃葡萄糖(10)

按照与用于制备化合物5所述相同的程序将化合物9转化成化合物 10。

TCL：Rf＝0.35，硅胶，9/1 v/v二氯甲烷/甲醇

制备9

O-(4，6-(O)-亚苄基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(11)

按照与用于制备化合物6所述相同的程序将化合物10转化成化合 物11。

TCL：Rf＝0.50，硅胶，9/1 v/v二氯甲烷/甲醇

制备10

O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三- O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(12)

按照与用于制备化合物7所述相同的程序将化合物11转化成化合 物12。

TCL：Rf＝0.35，硅胶，9/1 v/v二氯甲烷/甲醇

制备11

O-(6-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲 基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(13)

按照与用于制备化合物8所述相同的程序将化合物12转化成化合 物13。

TCL：Rf＝0.40，硅胶，7.0/1.5/1.5 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

制备12

O-(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -O-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃萄糖基)-(1→4)-O-(6-O-苯甲酰基- 2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D- 吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)- (1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1，6- 脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(14)

按照用于制备化合物9所述的程序进行化合物13与二糖2的偶联 反应。

TCL：Rf＝0.40，硅胶，7.0/1.5/1.5 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

图解3-九糖19的合成

制备13

O-(4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲 基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(15)

按照与用于制备化合物5所述相同的程序将化合物14转化成化合 物15。

TCL：Rf＝0.60，硅胶，9/1 v/v二氯甲烷/甲醇

制备14

O-(4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)- O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6-三-O- 甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)]2-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(16)

按照与用于制备化合物6所述相同的程序将化合物15转化成化合 物16。

TCL：Rf＝0.70，硅胶，9/1 v/v二氯甲烷/甲醇

制备15

O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三- O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡 喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4) ]2-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(17)

在40℃下将化合物16(5.05g，2.0mmol)溶于80％乙酸(50ml) 所得到的溶液搅拌20小时。将该混合物在真空中浓缩并与甲苯一起共 蒸发。将残余物溶于乙酸乙酯并用水萃取。将水相用二氯甲烷萃取而将 有机相用硫酸镁干燥、过滤并蒸发至干，从而得到2.68g的化合物17。

TCL：Rf＝0.50，硅胶，9/1 v/v二氯甲烷/甲醇

制备16

O-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)- O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基-(1→4)-[O-(2，3，6-三-O- 甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)]2-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(18)

按照与用于制备化合物8所述相同的程序将化合物17转化成化合 物18。

TCL：Rf＝0.80，硅胶，7.0/1.5/1.5 v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

制备17

O-(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -O-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-O-苯 甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4) ]2-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(19)

在氮气环境中将硫苷2(1.97g，2.0mmol，3.5当量)、七糖18(0.86g， 0.57mmol)和粉状4分子筛(1.1g)的混合物在甲苯(22ml)中搅拌 15分钟。然后在室温下逐滴加入新近制备的含有溶于1/1 v/v的二氯甲 烷/二噁烷(12ml)的N-碘琥珀酰亚胺(496mg，2.2mmol)和三氟甲磺 酸(0.808mmol)所得到的溶液。10分钟后，过滤反应混合物；用二氯 甲烷稀释；萃取；用10％硫代硫酸钠溶液和10％碳酸氢钠溶液洗涤； 用硫酸镁干燥且然后在真空中浓缩。通过硅胶柱层析对粗产物进行纯 化，从而得到1.09g的化合物19。

TCL：Rf＝0.80，硅胶，6/2/2 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

图解4-九糖25的合成

制备18

O-(4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-[(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃 葡糖基)]2-(1→4)-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(20)

按照与用于制备化合物5所述相同的程序将化合物19转化成化合 物20。

TCL：Rf＝0.25，硅胶，5.0/2.5/2.5 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

制备19

O-(4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6-三-O- 甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)]3-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(21)

按照与用于制备化合物6所述相同的程序将化合物20转化成化合 物21。

TCL：Rf＝0.50，硅胶，6/2/2 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

制备20

O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6- 三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D- 吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)- (1→4)]3-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(22)

按照与用于制备化合物7所述相同的程序将化合物21转化成化合 物22。

TCL：Rf＝0.20，硅胶，6/2/2 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

制备21

O-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6-三-O- 甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖 基)-(1→4)]3-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(23)

按照与用于制备化合物8所述相同的程序将化合物22转化成化合 物23。

TCL：Rf＝0.20，硅胶，6/2/2 v/v/v甲苯-乙酸乙酯/乙醇

制备22

O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-1，6-脱水-2，3-二-O-甲基-β-D- 吡喃葡萄糖(24)

将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺氢氯化物(48mg， 0.25mmol)、乙酰丙酸(29mg，0.25mmol)和二甲氨基吡啶(4mg， 0.033mmol)加入到化合物23(320mg，0.167mmol)溶于二噁烷(1ml) 所得到的溶液中。在室温下、氮气环境中将反应混合物搅拌3小时。然 后加入二氯甲烷和水并在萃取后将有机相用水洗涤、用硫酸镁干燥、过 滤并浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析进行纯化，从而得到312mg的化合 物24。

TCL：Rf＝0.50，硅胶，6/2/2 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

制备23

O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三 -O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-1，6-二-O-乙酰基-2，3-二-O- 甲基-α，β-D-吡喃葡萄糖(25)

在室温下将化合物24(312mg，0.155mmol)溶于乙酐(2.2.5ml)、 乙酸(50μl)和三氟乙酸(0.14ml)的混合物所得到的溶液搅拌4小时。 在加入甲苯(10ml)后，将该混合物浓缩并与甲苯一起共蒸发(10ml， 3次)。在通过硅胶柱层析后，分离出324mg的化合物25。

TCL：Rf＝0.65，硅胶，6/2/2 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

图解5-九糖27的合成

制备24

O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三 -O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-乙酰基-2，3-二-O-甲基 -α，β-D-吡喃葡萄糖(26)

在35℃下将化合物25(324mg，0.153mmol)和吗啉(22.3μl， 0.256mmol)溶于甲苯(2ml)所得到的溶液搅拌4小时。接下来，再次 加入吗啉(22.3μl)并在35℃下将反应混合物搅拌20小时。用水将该 混合物快速冷却。用二氯甲烷萃取后，用0.1N盐酸和水依次洗涤有机 相、干燥并蒸发至干。在通过硅胶柱层析后，分离出280mg的化合物26。

TCL：Rf＝0.45，硅胶，6/2/2 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

制备25

O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三 -O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-乙酰基-2，3-二-O-甲基 -α，β-D-吡喃葡萄糖三氯亚氨逐乙酸酯(trichloroacetimidate)(27)

将三氯乙腈(39μl，0.39mmol)和碳酸铯(4.7mg)加入到化合物 26(138mg，0.066mmol)溶于二氯甲烷(1.5ml)所得到的溶液中。在 搅拌2小时后，将该混合物过滤、浓缩并将残余物进行硅胶柱层析而得 到152mg的亚氨逐酸酯(imidate)27。

TCL：Rf＝0.35，硅胶，8/1/1 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

图解6-二糖33的合成

制备26

甲基-O-(4，6-O-异亚丙基-3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基(idopyranosyl)) -(1→4)-2，6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(29)

将化合物28(2.5g，3.53mmol)(M.Petitou等《药物化学杂志》 (J.Med.Chem.)1997，40，1600)如用于合成5的方法处理，在通 过硅胶层析(2/1环己烷/乙酸乙酯)后得到29(2.1g，98％)。

TCL：Rf＝0.32，硅胶，2/1 v/v环己烷/乙酸乙酯

制备27

甲基-O-(4，6-O-异亚丙基-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)- (1→4)-2，6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(30)

将化合物29(2.0g，3.3mmol)如用于合成6的方法处理，在通过 硅胶层析(5/1环己烷/乙酸乙酯)后得到化合物30(1.83g，89％)。

TCL：Rf＝0.38，硅胶，5/2 v/v环己烷/乙酸乙酯

制备28

甲基-O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2，6-二- O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(31)

将70％三氟乙酸的水溶液(3.14ml)加入到化合物30(1.76g， 2.84mmol)溶于二氯甲烷(16ml)所得到的溶液中。50分钟后，在二 氯甲烷中稀释反应介质且然后将其用水洗涤至中性。接着将有机相干燥 (硫酸钠)、过滤且然后浓缩。将残余物上硅胶层析纯化而得到化合物31 (1.45g，88％)。

[α]20D＝+10(c＝1.0，二氯甲烷)。

制备29

甲基-O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸(idopyranosyluronique)) -(1→4)-2，6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(32)

将2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧(3.3mg)、碳酸氢钠溶液(4ml)、 溴化钾(22mg)和四丁基氯化铵(29mg)加入到化合物31(1.16g)溶 于二氯甲烷(6ml)所得到的溶液中。将该混合物冷却至0℃并在15分 钟内加入饱和氯化钠溶液(4.4ml)、饱和碳酸氢钠溶液(2.2ml)和次 氯酸钠(1.3M，5ml)的混合物。在搅拌1小时后，将该混合物用水稀 释并用二氯甲烷萃取(3次)。将有机相用氯化钠水溶液洗涤、用硫酸镁 干燥、过滤并蒸发至干而得到1.34g的粗化合物32。

Rf＝0.22，硅胶，10/1 v/v二氯甲烷/甲醇。

制备30

甲基-O-(苄基-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸酯)- (1→4)-2，6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(33)

在氮气环境中将化合物32溶于N，N-二甲基甲酰胺(11ml)。加入 碳酸氢钾(0.67g)和苄基溴(1.07ml)并将该混合物搅拌90分钟。加 入乙酸乙酯和水并在萃取后浓缩有机相。通过硅胶柱层析得到0.99g的 化合物33。

TLC：Rf＝0.58，硅胶，1/4 v/v甲苯/乙醚。

图解7-四糖36的合成

制备31

甲基-O-(4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸 苄基酯)-(1→4)-O-(3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖 基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄基酯)- (1→4)-2，6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(35)

在-20℃下，在有分子筛存在的情况下用三氟甲磺酸叔丁基二甲硅 烷基酯(0.15ml的1M甲苯溶液)处理溶于甲苯(10ml)的化合物34 (274mg，0.31mmol)(M.Petitou等《药物化学杂志》(J.Med.Chem.) 1997，40，1600)和化合物33(200mg，0.29mmol)。在搅拌10分钟后， 将反应混合物中和(NaHCO3)、过滤并浓缩。通过硅胶柱层析得到化合物 35(334mg，80％)。

[α]20D＝+31(c＝0.76，二氯甲烷)。

制备32

甲基-O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸苄基酯)-(1→4) -O-(3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄基酯)-(1→4)-2，6-二- O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(36)

将化合物35(308mg，0.22mmol)溶于甲苯/乙醇混合物(1/2，43ml) 且然后加入肼乙酸酯(101mg，5当量)。搅拌45分钟后，将该混合物浓 缩且然后上硅胶柱层析纯化而得到化合物36(162mg，89％)。

[α]20D＝+29(c＝1.05，二氯甲烷)。

制备33

甲基O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡 喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]3-O-(6-O-乙酰基-2，3-二-O-甲基 -α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基 糖醛酸苄基酯)-(1→4)-O-(3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡 喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄 基酯)-(1→4)-2，6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(37)

如用于合成化合物35所述将溶于2/1乙醚/二氯甲烷混合物 (2.8ml)的亚氨逐酸酯(imidate)27(177mg，76.6μmol)和受体36 (201mg，0.15mmol)用三氟甲磺酸叔丁基二甲硅烷基酯(11.5μl的1M 二氯甲烷溶液)处理。将化合物在SephadexLH-20层析柱上纯化(1/1 二氯甲烷/乙醇)且然后在硅胶柱上纯化(3/0.5/1甲苯/丙酮/乙醇)且 最后在硅胶柱上纯化(3/2二异丙基醚/乙醇)，从而得到衍生物37 (116mg，44％)。

TLC：Rf＝0.31，硅胶，3/0.5/0.4 v/v/v二异丙基醚/丙酮/乙醇

制备34

甲基O-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6-三 -O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡 喃葡糖基)-(1→4)-]3-O-(6-O-乙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸苄基酯) -(1→4)-O-(3，6-二-O-乙酰基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄基酯)-(1→4)-2，6- 二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(38)

按照用于制备化合物36所述的程序将化合物37(110mg， 0.032mmol)转化成化合物38(95mg，89％)。

TLC：Rf＝0.32，硅胶，1/1 v/v甲苯/丙酮

图解9-三糖43的合成

制备35

O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6- 三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-1，2，3，6-四-O-乙酰基-β-D- 吡喃葡萄糖(40)

在155℃下将商购的麦芽三糖(7g，13.9mmol)分批加入到乙酸钠 (7g，85mmol)溶于乙酐(70ml)所得到的悬浮液中。15分钟后，将 该溶液冷却并倾入冰冷的水(700ml)中。用乙酸乙酯萃取后，将有机 相用水洗涤、用硫酸镁干燥、过滤并浓缩至得到13.1g的化合物40。

TLC：Rf＝0.53，硅胶，7/3 v/v二氯甲烷/乙酸乙酯

制备36

乙基O-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰 基-1-硫-β-D-吡喃葡糖苷(41)

将化合物40(13g，13.5mmol)溶于甲苯(80ml)。在氮气环境中 加入乙硫醇(1.97ml，26.9mmol)和醚合三氟化硼(13.7ml的1M甲苯 溶液)。搅拌60分钟后，将该混合物用水和二氯甲烷稀释。萃取后，将 有机相用10％碳酸氢钠和水洗涤、干燥、过滤并浓缩。将粗产物通过硅 胶柱层析纯化而得到8.6g的化合物41。

TLC：Rf＝0.60，硅胶，7/3 v/v二氯甲烷/乙酸乙酯

制备37

乙基O-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(α-D-吡喃葡糖基)- (1→4)-1-硫-β-D-吡喃葡糖苷(42)

按照用于制备化合物5所述的程序将化合物41转化成化合物42。

TLC：Rf＝0.80，硅胶，13/7/1.6/4 v/v/v/v乙酸乙酯/吡啶/乙酸/ 水

制备38

乙基O-(2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3，6-三-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-2，3，6-三-O-苯 甲酰基-1-硫-β-D-吡喃葡糖苷(43)

按照用于制备化合物2所述的程序将化合物42转化成化合物43。

图解10-多糖46的制备

制备39

甲基O-(2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3，6-三-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三- O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O- 甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(6-O-乙酰 基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基- β-D-吡喃葡糖基糖醛酸苄基酯)-(1→4)-O-(3，6-二-O-乙酰基-2-O- 苄基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜 糖醛酸苄基酯)-(1→4)-2，6-二-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃萄 糖基苷(44)

按照用于制备化合物4所述的程序将硫苷43(170mg，106.7μmol) 和受体38(90mg，27μmol)偶联。首先将产物通过SephadexLH-20层 析(1/1二氯甲烷/乙醇)纯化，随后通过硅胶柱层析(12/10 v/v环己 烷/丙酮)纯化，从而得到89.5mg(68％)的化合物44。

TLC：Rf＝0.43，硅胶，12/10 v/v环己烷/丙酮

制备40

甲基O-(2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3，6-三-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三- O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O- 甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(6-O-乙酰 基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基- β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4)-O-(3，6-二-O-乙酰基-α-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)- (1→4)-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基苷(45)

在氢压(10巴)和有10％披钯木炭(160mg)存在的情况下处理化 合物44(80mg，0.0163mmol)溶于乙酸(3ml)所得到的溶液。过滤后， 将所述溶液浓缩并得到化合物45，不经过纯化而将它用于下面的步骤。

制备41

甲基O-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(α-D-吡喃葡糖基)- (1→4)-O-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-α-D- 吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -[O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4) -O-(α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜 糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基苷(46)

将甲醇(2.8ml)和5N氢氧化钠溶液(0.69ml)的混合物加入到 化合物45(72mg，0.016mmol)中。向一种溶于甲醇(150ml/mmol)得 到的酯溶液中加入5M的氢氧化钠水溶液(用量使得氢氧化钠的浓度在 添加完成时为0.5M)。2-5小时后，加入水并使该混合物通过 SephadexG-25凝胶柱(1.6×115cm)、用水洗脱。将洗脱液浓缩并使 其通过Dowex50H+柱(2ml)且冻干。在此阶段，通过质子NMR证实已 经除去了全部的保护基。如果必要，将产物重新进行氢化和/或皂化。 由此获得了化合物46(34mg，在两步骤中的转化率为68％)。

图解11-二糖54的制备

制备42

甲基O-4，6-O-亚苄基-2-O-苄基-α-D-吡喃葡糖苷(48)

将化合物47(60g)(商购)溶于含有苄基溴(50.5ml)的N，N-二 甲基甲酰胺(858ml)中。将该溶液冷却至+10℃并逐滴加入20％氢氧化 钠水溶液，同时搅拌该混合物。1小时后，使反应温度升至20℃并将所 得的混合物进一步搅拌20小时。然后将溶液倾入水和冰与甲苯的混合 物中并萃取。将有机相浓缩并通过结晶纯化粗产物，从而得到30.0g的 由J.M.Kster等在Justus Liebigs Ann.Chem.1975，2179-2189 中所述的化合物48。

TLC：Rf＝0.60，硅胶，7/3 v/v甲苯/乙酸乙酯

制备43

甲基O-4，6-O-亚苄基-2-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(49)

将化合物48(26.4g)溶于N，N-二甲基甲酰胺(211ml)并冷却至+5 ℃。在氮气环境中加入氢化钠。接下来，逐滴加入碘甲烷(11.3g)并 在室温下将该混合物搅拌1小时。将该混合物用乙酸乙酯稀释、用水洗 涤两次并浓缩至得到28g的由M.Petitou等在《药物化学杂志》(J.Med. Chem.)1997，40，1600-1607中所述的化合物49。

TLC：Rf＝0.70，硅胶，(7/3 v/v甲苯/乙酸乙酯)

制备44

甲基O-2-O-苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(50)

将化合物49(28g)溶于甲醇(468ml)。加入对甲苯磺酸(1.35g) 并在20℃下将该混合物搅拌20小时。将该混合物用甲苯稀释并浓缩。 通过硅胶柱层析纯化得到21g的化合物50。

TLC：Rf＝0.07，硅胶，(6/4 v/v甲苯/乙酸乙酯)

制备45

甲基O-2-O-苄基-3，6-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(51)

将化合物50(11.8g)在氮气环境中溶于二氯甲烷(160ml)。在室 温下加入三甲氧基四氟硼酸铵(7.0g)和2，6-二-叔丁基-4-甲基吡啶 (10.6g)。2小时后，将该混合物倾入水与冰的混合物中并用二氯甲烷 萃取。用碳酸氢钠洗涤有机相并浓缩。通过硅胶层析纯化粗产物而得到 10.1g的化合物51。

TLC：Rf＝0.25，硅胶，(7/3 v/v甲苯/乙酸乙酯)

制备46

乙基2，4，6-三-O-乙酰基-3-O-甲基-1-硫-α-L-吡喃艾杜糖(52)

将1，2，4，6-四-O-乙酰基-3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖(如通过用乙酐 代替苯甲酰氯而用于其过苯甲酰类似物所述制备；Jaurand等《生物药 物化学通讯》(Bio.Med.Chem.Lett.)1992，2，897-900)(48.4g) 溶于甲苯(175ml)。在氮气环境中加入乙硫胺(20ml)和醚合三氟化硼 (1M的甲苯溶液，134ml)。在搅拌1小时后，向该混合物中加入碳酸 氢钠水溶液(400ml)并将该混合物搅拌1小时。然后将该混合物倾入 乙酸乙酯。将有机相用水洗涤两次并浓缩。通过硅胶柱层析纯化而得到 29.6g的化合物52。

TLC：Rf＝0.45，硅胶，(6/4 v/v甲苯/乙酸乙酯)

制备47

甲基O-(2，4，6-三-O-乙酰基-3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4) -2-O-苄基-3，6-二-O-甲基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(53)

将化合物51(10.1g)和化合物52(16.0g)在氮气环境中溶于甲 苯(304ml)。在加入粉状分子筛(4)后，使反应介质冷却至-20℃。 在氮气流中逐滴加入新近制备的N-碘琥珀酰亚胺(10.1g)和三氟甲磺 酸(0.80ml)溶于1/1 v/v二噁烷/二氯甲烷混合物所得到的0.1M溶液。 10分钟后，将红色反应混合物过滤并依次用硫代硫酸钠水溶液和碳酸氢 钠水溶液洗涤。浓缩有机相并通过硅胶层析纯化残余物，从而得到21.1g 的化合物53。

TLC：Rf＝0.30，硅胶，(6/4 v/v甲苯/乙酸乙酯)

制备48

甲基O-(3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2-O-苄基-3，6- 二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(54)

将化合物53(21.1g)溶于295ml的甲醇/二噁烷混合物(1/1 v/v)

并加入叔丁醇钾。30分钟后，用H+形式的Dowex50WX8树脂中和 该混合物并在真空中浓缩。通过硅胶层析进行纯化，从而得到12.7g的 化合物54。

TLC：Rf＝0.08，硅胶，(3/7 v/v甲苯/乙酸乙酯)

图解12-四糖62的制备

制备49

甲基O-(4，6-O-异亚丙基-3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4) -2-O-苄基-3，6-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(55)

将化合物54(12.7g)在氮气环境中溶于四氢呋喃(67ml)。加入2，2- 二甲氧基丙烷(19ml)和对甲苯磺酸且然后将该混合物在室温下搅拌16 小时。接着将反应介质用碳酸氢钠水溶液稀释并用乙酸乙酯萃取以便在 蒸发溶剂后得到粗残余物，将其通过硅胶层析纯化，从而得到10.4g的 化合物55。

TLC：Rf＝0.35，硅胶，(1/1 v/v甲苯/乙酸乙酯)

制备50

甲基O-(4，6-O-异亚丙基-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)- (1→4)-2-O-苄基-3，6-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(56)

将化合物55(10.4g)溶于四氢呋喃(140ml)并冷却至10℃。在 氮气环境中加入氢化钠(1.36g；60％分散在油中)和碘甲烷(1.84ml)。 4小时后，用甲醇破坏过量的氢化钠并将混合物用而氯甲烷萃取并浓缩。 通过硅胶层析纯化残余物，从而得到11.1g的化合物56。

TLC：Rf＝0.55，硅胶，(95/5 v/v甲苯/乙酸乙酯)

制备51

甲基O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2-O-苄基- 3，6-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(57)

将化合物56(11.1g)溶于7/3(v/v)乙酸/水混合物并搅拌过夜。 在有甲苯存在的情况下将该混合物蒸发两次并通过硅胶层析进行纯化， 从而得到9.2g的化合物57。

TLC：Rf＝0.09，硅胶，(1/1 v/v甲苯/乙酸乙酯)

制备52

甲基O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2-O- 苄基-3，6-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(58)

将2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧(13mg)、饱和碳酸氢钠溶液 (16ml)、溴化钾(88mg)和四丁基氯化铵(117mg)加入到化合物57 (4.7g)溶于二氯甲烷(28ml)所得到的溶液中。将该混合物冷却至0 ℃并在15分钟内加入饱和氯化钠溶液(17.8ml)、饱和碳酸氢钠溶液 (8.8ml)和次氯酸钠(1.3M；20ml)的混合物。1小时后，将介质用 乙酸乙酯稀释、用饱和氯化钠水溶液洗涤、用硫酸镁干燥、过滤并蒸发 至干，从而得到3.5g的粗化合物58。

TLC：Rf＝0.14，硅胶，(9/1 v/v二氯甲烷/甲醇)

制备53

甲基O-(苄基-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸酯)-(1→4) -2-O-苄基-3，6-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(59)

将化合物58(3.5g)在氮气环境中溶于N，N-二甲基甲酰胺(29ml) 中。加入碳酸氢钾(1.76g)和苄基溴(2.85ml)并将该混合物搅拌4 小时。加入乙酸乙酯和水并在萃取后浓缩有机相。通过硅胶层析纯化而 得到3.4g的化合物59。

TLC：Rf＝0.43，硅胶，(4/6 v/v甲苯/乙酸乙酯)

制备54

甲基O-(4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛 酸苄基酯)-(1→4)-O-(3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄基酯) -(1→4)-2-O-苄基-3，6-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(61)

将化合物59(0.53g)和化合物60(1.0g)的混合物在有甲苯的情 况下蒸发并溶于二氯甲烷(16.2ml)中。在加入粉状分子筛(4)后， 将该混合物冷却至-20℃。在搅拌15分钟后，加入三氟甲磺酸三甲硅烷 基酯(相当于化合物60的15mol％)。15分钟后，将该混合物用碳酸氢 钠水溶液处理。滤出分子筛后，将滤液用二氯甲烷稀释、用水洗涤、浓 缩并通过硅胶层析纯化，从而得到0.75g的化合物61。

TLC：Rf＝0.45，硅胶，(3/7 v/v甲苯/乙酸乙酯)

制备55

甲基O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸苄基酯)-(1→4) -O-(3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (苄基-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸酯)-(1→4)-2-O- 苄基-3，6-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(62)

将化合物61(0.74g)溶于吡啶(3.0ml)中并在室温下加入乙酸 (4.1ml)和水合肼(0.47ml)溶于吡啶(3.0ml)所得到的混合物。在 搅拌9小时后，加入二氯甲烷和水。分离出有机相并依次用盐酸溶液 (1.0N)、碳酸氢钠水溶液和水洗涤。浓缩有机相并通过硅胶层析纯化， 从而得到0.66g的化合物62。

TLC：Rf＝0.25，硅胶，(98/2 v/v二氯甲烷/甲醇)

按照与下面的反应图解13类似的方式使用二糖55作为原料制备下 面的四糖68。

图解13-四糖68的制备

图解14-二糖75的制备

制备56

甲基2-O-苄基-4，6-二-O-亚苄基-3-O-对甲氧基-苄基-α-D-吡喃葡 糖苷(69)

将化合物48(26.4g)溶于N，N-二甲基甲酰胺(211ml)中并冷却 至5℃。在氮气环境中加入氢化钠(2.5g)。接下来，逐滴加入4-甲氧 基苄基氯(13.3g)并将该混合物在室温下搅拌1小时。将该混合物用 乙酸乙酯稀释、用水洗涤两次并浓缩至得到40.7g的化合物69。

TLC：Rf＝0.80，硅胶，7/3 v/v甲苯/乙酸乙酯

制备57

甲基O-苄基3-O-对甲氧基苄基-α-D-吡喃葡糖苷(70)

将化合物69(34.9g)溶于60％的乙酸水溶液并在60℃下搅拌4 小时。将该混合物用甲苯稀释并浓缩。通过硅胶柱层析纯化得到26.4g 的化合物70。

TLC：Rf＝0.07，硅胶，7/3 v/v甲苯/乙酸乙酯

制备58

甲基2-O-苄基-3-O-对甲氧基苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷 (71)

将化合物70(26.4g)在氮气环境中溶于二氯甲烷(263ml)。在室 温下加入三甲氧基四氟硼酸铵(11.6g)和2，6-二-叔丁基-4-甲基吡啶 (17.4g)。4小时后，将该混合物倾在冰冷水上并用二氯甲烷萃取。用 碳酸氢钠洗涤有机相并浓缩。通过硅胶柱层析纯化粗产物而得到18.5g 的化合物71。

TLC：Rf＝0.25，硅胶，7/3 v/v甲苯/乙酸乙酯

制备59

甲基O-(2，4，6-三-O-乙酰基-3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4) -2-O-苄基-3-O-对甲氧基苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(72)

将化合物71(17.5g)和化合物52(28.2g)在氮气环境中溶 于甲苯(525ml)。在加入4分子筛后，使反应体系冷却至-20℃。在 持续的氮气流中逐滴加入新近制备的N-琥珀酰亚胺(17.4g)和三氟 甲磺酸(1.38ml)溶于1/1 v/v二噁烷/二氯甲烷所得到的0.1M溶液。 10分钟后，过滤红色反应混合物并依次用硫代硫酸钠水溶液和碳酸氢 钠水溶液洗涤。将有机相在真空中浓缩并分离出30.0g的化合物72。

TLC：Rf＝0.45，硅胶，8/2 v/v二氯甲烷/乙酸乙酯

制备60

甲基O-(3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2-O-苄基-3-O- 对甲氧基苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(73)

将化合物72(30.0g)溶于460ml 1/1 v/v甲醇/二噁烷并加入叔 丁醇钾。15分钟后，用Dowex50WX8H+树脂中和该混合物并在真空中浓 缩。通过硅胶柱层析进行纯化以便得到17.4g的化合物73。

TLC：Rf＝0.25，硅胶，95/5 v/v二氯甲烷/甲醇

制备61

甲基O-(4，6-O-异亚丙基-3-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4) -2-O-苄基-3-O-对甲氧基苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃萄糖苷(74)

将化合物73(17.4g)在氮气环境中溶于N，N-二甲基甲酰胺(77ml)。 加入2，2-二甲氧基丙烷(26ml)和对甲苯磺酸且然后将该混合物搅拌30 分钟。用碳酸氢钠水溶液稀释该混合物并用乙酸乙酯萃取，在蒸发溶剂 后得到19.7g的化合物74。

TLC：Rf＝0.45，硅胶，95/5 v/v二氯甲烷/甲醇

制备62

甲基O-(4，6-O-异亚丙基-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)- (1→4)-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(75)

将化合物74(18.5g)溶于N，N-二甲基甲酰胺(24.4ml)并冷却至 0℃。在氮气环境中加入氢化钠(1.47g；60％分散在油中)和碘甲烷 (2.36ml)。1小时后，用甲醇破坏过量的氢化钠并用二氯甲烷萃取该混 合物并浓缩至得到20.0g的化合物75。

TLC：Rf＝0.85，硅胶，95/5 v/v二氯甲烷/甲醇

图解15-二糖60的合成

制备63

甲基O-(4，6-O-异亚丙基-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)- (1→4)-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(76)

将化合物75(18.4g)溶于二氯甲烷(838ml)和水(168ml)。加 入2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(7.1g)并在4℃下将该混合物搅拌 18小时。将该混合物倾入碳酸氢钠水溶液并用二氯甲烷萃取。浓缩有机 相得到12.7g的化合物76。

TLC：Rf＝0.40，硅胶，95/5 v/v二氯甲烷/甲醇

制备64

甲基O-(4，6-O-异亚丙基-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)- (1→4)-2，3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(77)

将化合物76(10.5g)溶于干N，N-二甲基甲酰胺(178ml)且然后 在氮气环境中冷却至0℃。加入氢化钠(1.91g；60％分散在油中)，随 后逐滴加入苄基溴(3.3ml)。30分钟后，反应完成并用甲醇破坏过量的 氢化钠。加入水并用乙酸乙酯将该混合物萃取两次。蒸发溶剂得到13.6g 的化合物77。

TLC：Rf＝0.50，硅胶，1/1 v/v甲苯/乙酸乙酯

制备65

甲基O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖基)-(1→4)-2，3-二-O- 苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(78)

将化合物77(10.5g)溶于77/33(v/v)乙酸/水并搅拌过夜。将 该混合物与甲苯共蒸发两次并通过硅胶柱层析纯化，从而得到11.5g的 化合物78。

TLC：Rf＝0.09，硅胶，1/1 v/v甲苯/乙酸乙酯

     Rf＝0.68，硅胶，9/1 v/v二氯甲烷/甲醇

制备66

甲基O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2，3- 二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(79)

将2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧(33mg)、碳酸氢钠溶液(40ml)、 溴化钾(218mg)和四丁基氯化铵(289mg)加入到化合物78(11.6g) 溶于二氯甲烷(60ml)所得到的溶液中。将该混合物冷却至0℃并在15 分钟内加入饱和氯化钠溶液(44ml)。饱和碳酸氢钠溶液(21.8ml) 和次氯酸钠(1.3M，50ml)的混合物。搅拌1小时后，将该混合物用水 稀释并用二氯甲烷萃取(3次)。将有机相用氯化钠水溶液洗涤、用硫酸 镁干燥、过滤并蒸发至干，从而得到13.4g的粗化合物79。

TLC：Rf＝0.14，硅胶，9/1 v/v二氯甲烷/甲醇

制备67

甲基O-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃艾杜糖醛酸苄基酯)-(1→4) -2，3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(80)

将化合物79在氮气环境中溶于N，N-二甲基甲酰胺(110ml)。加入 碳酸氢钾(6.7g)和苄基溴(10.7ml)并将该混合物搅拌90分钟。加 入乙酸乙酯和水并在萃取后浓缩有机相。通过硅胶柱层析纯化得到9.9g 的化合物80。

TLC：Rf＝0.43，硅胶，4/6 v/v甲苯/乙酸乙酯

制备68

甲基O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸苄基酯)-(1→4) -2，3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(81)

将化合物80在氮气环境中溶于300ml甲醇并回流。逐滴加入1M甲 醇钠的甲醇(65.2ml)溶液并将该混合物搅拌和回流3小时。然后将该 混合物冷却至室温，加入1N氢氧化钠(22.2ml)并将反应混合物进一 步搅拌90分钟。在用Dowex50WX8 H+树脂中和并过滤后，浓缩该混合 物。在氮气环境中将粗产物溶于N，N-二甲基甲酰胺(192ml)并加入分 子筛。加入碳酸氢钾(3.2g)和苄基溴(4.8ml)并将该混合物搅拌5 小时。在加入乙酸乙酯和水、萃取和分离两相后，浓缩有机相。将粗产 物通过硅胶柱层析纯化而得到6.19g的化合物81和1.88g的原料化合 物80。

TLC：Rf＝0.55，硅胶，4/6 v/v甲苯/乙酸乙酯

制备69

甲基O-(苄基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基 糖醛酸酯)-(1→4)-2，3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(82)

将化合物81(6.2g)溶于40ml二噁烷。加入乙酰丙酸(2.1g)、 二环己基碳化二亚胺(3.75g)和4-二甲氨基吡啶(0.2g)并在氮气环 境中将该混合物搅拌2小时。加入乙醚(95ml)并滤出沉淀。将滤液用 硫酸氢钾水溶液洗涤、用硫酸镁干燥、过滤并浓缩。从乙醚/庚烷中结 晶而得到6.2g的化合物82。

TLC：Rf＝0.26，硅胶，95/5 v/v二氯甲烷/丙酮

制备70

O-(苄基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸 酯)-(1→4)-1，3-二-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α，β-D-吡喃葡 萄糖(83)

在氮气环境中将化合物82(6.1g)溶于乙酐(256ml)并冷却至-20 ℃。在30分钟内逐滴加入硫酸(4.9ml)溶于乙酐(49ml)所得到的混 合物。60分钟后，加入乙酸钠直到获得中性pH的混合物为止。然后加 入乙酸乙酯和水并浓缩有机相。通过硅胶柱层析纯化得到4.2g的化合 物83。

TLC：Rf＝0.24，硅胶，8/2 v/v二氯甲烷/乙酸乙酯

制备71

O-(4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸苄基 酯)-(1→4)-3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α，β-D-吡喃葡萄糖(84)

将化合物83(4.2g)溶于四氢呋喃(42ml)并加入哌啶(4.1ml)。 在室温下将该混合物搅拌过夜。加入乙酸乙酯并用0.5N盐酸洗涤该混 合物。浓缩有机相并通过硅胶柱层析纯化残余物，从而得到3.2g的化 合物84。

TLC：Rf＝0.33，硅胶，1/1 v/v二氯甲烷/乙酸乙酯

制备72

O-(4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基糖醛酸苄基 酯)-(1→4)-3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α，β-D-吡喃葡萄糖三 氯亚氨逐乙酸酯(trichloroacétimidate)(60)

在氮气环境中将化合物84(1.59g)溶于干二氯甲烷。加入三氯乙 腈(1.1ml)和碳酸铯(72mg)并将该混合物搅拌1小时。过滤出碳酸 铯并将滤液浓缩。通过硅胶柱层析纯化得到1.57g的化合物60。

TLC：Rf＝0.60，硅胶，3/7 v/v甲苯/乙酸乙酯

图解16-四糖86的合成

制备73

甲基O-(苄基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基 糖醛酸酯)-(1→4)-O-(3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-O-(苄基-2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸 酯)-(1→4)-2，3-二-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(85)

将化合物80(300mg)和化合物60(455.6mg)的混合物与甲苯一 起共蒸发并在氮气环境中溶于干二氯甲烷(6ml)。在加入4分子筛后， 将该混合物冷却至-20℃。在搅拌20分钟后，加入三氟甲磺酸三甲硅烷 基酯(相当于化合物60的15mol％)。10分钟后，将该混合物用碳酸氢 钠水溶液中和。在滤出分子筛后，将滤液用二氯甲烷稀释、用水洗涤、 浓缩并通过硅胶柱层析纯化，从而得到560mg的化合物85。

TLC：Rf＝0.50，硅胶，3/7 v/v甲苯/乙酸乙酯

制备74

甲基O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸苄基酯)-(1→4) -O-(3-O-乙酰基-2-O-苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O- (2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸苄基酯)-(1→4)-2，3-二-O- 苄基-6-O-甲基-α-D-吡喃葡糖苷(86)

将化合物85(532.6mg)溶于吡啶(1.9ml)并在室温下加入乙酸 (2.4ml)和水合肼(0.3ml)溶于吡啶(1.9ml)所得到的混合物。搅 拌9分钟后，加入二氯甲烷和水。分离出有机相并依次用0.1N盐酸、 碳酸氢钠水溶液和水洗涤。浓缩有机相并通过硅胶柱层析纯化，从而得 到451mg的化合物86。

TLC：Rf＝0.45，硅胶，3/7 v/v甲苯/乙酸乙酯

图解17-单糖93的合成

制备75

1，6-脱水-4-O-对甲氧基苯基-2-O-甲苯磺酰基-β-D-吡喃葡萄糖 (88)

在氩气中将环氧化物87(20g，67mmol)(M.Cerny等《捷克化学 通讯选编》(Collect.Czwch.Chem.Commun.)1961，26，2542)和 对甲氧基苯酚(33.3g，268mmol)的混合物加热至90℃。当该混合物 变成液体时，分批加入AlCl3(0.3g，2.35mmol)，在搅拌30分钟并重 新冷却至室温后，将反应介质用二氯甲烷(600ml)稀释；用三乙胺 (0.5ml)中和；用1M氢氧化钠水溶液(120ml)、饱和氯化钠水溶液(3 ×60ml)、10％硫酸氢钾水溶液(50ml)和饱和氯化钠水溶液洗涤。然 后将有机相干燥(硫酸钠)、过滤并浓缩。通过从醚中沉淀和硅胶层析 来纯化残余物，从而得到化合物88(19.4g，69％)。

TLC：Rf＝0.37，硅胶，6/1 v/v二氯甲烷/乙醚

制备76

1，6-脱水-4-O-对甲氧基苯基-3-O-甲基-2-O-甲苯磺酰基-β-D-吡喃 葡萄糖(89)

将甲基碘(54ml，954mmol)和氧化银(18.4g，79.5mmol)加入到 化合物88(3.36g，7.95mmol)溶于干N，N-二甲基甲酰胺(8ml)所得 到的溶液中。在搅拌16小时后，将该混合物过滤(C盐)、用水(3×100ml) 洗涤、干燥(硫酸钠)、过滤、浓缩并通过硅胶层析纯化以得到衍生物89 (3.23g，80％)。

TLC：Rf＝0.36，硅胶，2/3 v/v环己烷/乙醚

制备77

1，6-脱水-4-O-对甲氧基苯基-3-O-甲基-2-O-苯甲酰基-β-D-吡喃甘 露糖(90)

将化合物89(27.4g，62.7mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(315ml)。 然后加入四丁基苯甲酸铵(341g，940mmol)并将该溶液维持在150℃ 下3小时。冷却至室温后，将介质用乙酸乙酯(300ml)稀释、用水洗 涤至中性、干燥并浓缩。直接将相当于化合物90的残余物用于下列步 骤。

TLC：Rf＝0.53，硅胶，10/1 v/v二氯甲烷/乙醚

制备78

1，6-脱水-4-O-对甲氧基苯基-3-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖(91)

将甲醇钠(13.5g，250mmol)加入到上述粗残余物90溶于二氯甲 烷/甲醇(540ml，1/1)所得到的溶液中。搅拌1小时后，将反应介质 用二氯甲烷(500ml)稀释且然后用3％盐酸溶液和水洗涤。干燥、过滤 和浓缩后，将残余物上硅胶柱纯化以便得到化合物91(10.5g，在两步 骤内产率为59％)。

TLC：Rf＝0.29，硅胶，1/1 v/v甲苯/乙醚

制备79

1，6-脱水-2-O-苄基-4-O-对甲氧基苯基-3-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖 (92)

将苄基溴(6.2ml，51.9mmol)加入到化合物91(9.8g，34.6mmol) 溶于N，N-二甲基甲酰胺(180ml)所得到的溶液中，随后在0℃下加入 95％氢化钠(1.16g，48.4mmol)。搅拌16小时后，在0℃下加入甲醇 (3ml)并将反应混合物用乙酸乙酯(200ml)稀释、用水洗涤、干燥、 过滤并浓缩。将相当于化合物92的残余物不经过纯化而直接用于下列 步骤。不过，在硅胶层析后获得了分析级分。

[α]20D＝-49(c＝0.73，二氯甲烷)

制备80

1，6-脱水-2-O-苄基-3-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖(93)

将上述粗化合物92溶于THF/水混合物(311ml，17/1)且然后在0 ℃下加入硝酸铈铵(76g，138mmol)。搅拌30分钟后，将反应混合物用 二氯甲烷(1l)稀释且然后用2％碳酸氢钠水溶液接着用水洗涤。干燥、 过滤并浓缩后，将残余物上硅胶柱纯化而得到化合物93(6.63g，在两 步骤内的产率为72％)。

[α]20D＝-68(c＝1.02，二氯甲烷)

按照与从单糖3至九糖24所进行的类似的反应次序由单糖93制备 下面的九糖94。

图解18-九糖96的合成

制备81

O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)- [O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-1，6-脱水-3-O-甲基-β-D-吡喃甘 露糖(95)

将5％Pd/C(109mg)加入到化合物94(759mg，0.36mmol)溶于 二氯甲烷/叔丁醇混合物(3.3ml，1/2)所得到的溶液中。在10巴和55 ℃下搅拌16小时后，将该混合物过滤并浓缩。将化合物95不经过纯化 和特征鉴定而用于下列步骤。

制备82

O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)- [O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-1，6-脱水-2-O-苯甲酰基-3-O-甲 基-β-D-吡喃甘露糖(96)

将苯甲酰氯(63μl，0.54mmol)和二甲氨基吡啶(9mg，0.073mmol) 加入到化合物95(726mg，0.36mmol)溶于无水吡啶(5.4ml)所得到 的溶液中。在60℃下搅拌2小时后，加入相同量的苯甲酰氯并在35分 钟后浓缩该溶液，将残余物溶于二氯甲烷、用10％硫酸氢钾水溶液、2 ％碳酸氢钠水溶液且然后用水洗涤。接着用硫酸钠干燥有机相、过滤且 然后浓缩。将残余物上硅胶柱纯化以便得到化合物96(684mg，在两步 骤内产率为90％)。

TLC：Rf＝0.5，硅胶，1/1 v/v甲苯/丙酮

图解19-九糖99的合成

制备83

O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)- [O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-1，6-二-O-乙酰基-2-O-苯甲酰基- 3-O-甲基-α，β-D-吡喃甘露糖(97)

如制备23中所述，将化合物96(657mg，0.31mmol)用乙酐(4.5ml)、 乙酸(100μl)和三氟乙酸(0.19ml)的混合物处理。硅胶柱层析后获 得化合物97(432mg，92％)。

TLC：Rf＝0.53，硅胶，1/1 v/v甲苯/丙酮

制备84

O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)- [O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-乙酰基-2-O-苯甲酰基-3-O- 甲基-α，β-D-吡喃甘露糖(98)

将化合物97(382mg，0.17mmol)和苄胺(736μl，6.74mmol)溶 于THF(6ml)所得到的溶液搅拌5小时。然后将该混合物倾在冰上，在 用乙醚萃取后，依次用3％盐酸和水洗涤有机相、干燥并浓缩。硅胶柱 层析后获得化合物98(241mg)。

TLC：Rf＝0.37，硅胶，6/2/2 v/v/v甲苯/乙酸乙酯/乙醇

制备85

O-(6-O-苯甲酰基-4-O-乙酰丙酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡 糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)- [O-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)]3-6-O-乙酰基-2-O-苯甲酰基-3-O- 甲基-α，β-D-吡喃甘露糖三氯亚氨逐乙酸酯(trichloroacétimidate) (99)

将三氯乙腈(57μl，0.56mmol)和碳酸铯(58mg)加入到化合物98 (241mg)溶于二氯甲烷(2.2ml)所得到的溶液中。搅拌1小时后，将 该混合物过滤、浓缩并将残余物进行硅胶柱层析以便得到亚氨逐酸酯 (imidate)99(221mg，在两步骤内产率为56％)。

TLC：Rf＝0.19，硅胶，3/2 v/v环己烷/丙酮

实施例1

甲基O-(2，3，4，6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6- 三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基) -(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O- (2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]3-O-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D- 吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸) -(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3- 二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1 →4)-3-O-甲基-2，6-二-O- 磺基-α-D-吡喃葡糖苷的钠盐(I)

将十六糖46(34mg，11μmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(1ml)。加 入三氧化硫/三乙胺复合物(180mg，0.89mmol)并将该混合物在55℃ 下搅拌20小时。将三乙胺/三氧化硫复合物(5mol/mol羟基官能基)加 入到硫酸化所述化合物的N，N-二甲基甲酰胺(5mg/ml)溶液中。在55 ℃下1天后，将该溶液上SephadexG-25柱(1.6×115cm)并用0.2M 氯化钠洗脱。将含有所述产物的级分浓缩并使用相同的柱、用水洗脱而 脱盐。在冻干后获得化合物I(47mg，87％)，为白色粉末。[α]20D＝+65 (c＝1.0水)

实施例2

甲基O-(2，3，4，6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6- 三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基) -(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O- (2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O- 甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-]3-O-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D- 吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸) -(1→4)-O-(6-O-甲基-2，3-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4) -O-(2，3-二-O-甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-3，6-二-O- 甲基-2-O-磺基-α-D-吡喃葡糖苷的钠盐(II)

实施例3

甲基O-(2，3，4，6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6- 三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基) -(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6- 三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D- 吡喃葡糖基)-(1→4)-]3-O-(3-O-甲基-2，6-二-O-磺基-α-D-吡喃甘露 糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃糖基糖醛酸)-(1→4) -O-(6-O-甲基-2，3-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O- 甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-6-O-甲基-2，3-二-O-磺基-α-D- 吡喃葡糖苷的钠盐(III)

实施例4

甲基O-(2，3，4，6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6- 三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)- (1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6- 三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D- 吡喃葡糖基)-(1→4)-]3-O-(3-O-甲基-2，6-二-O-磺基-α-D-吡喃甘露 糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4) -O-(6-O-甲基-2，3-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O- 甲基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-3，6-二-O-甲基-2-O-磺基-α-D- 吡喃葡糖苷的钠盐(IV)

实施例5

甲基O-(2，3，4，6-四-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6- 三-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃 葡糖基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)- (1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-[O-(2，3，6- 三-O-甲基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D- 吡喃葡糖基)-(1→4)-]3-O-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺基-α-D-吡喃葡糖 基)-(1→4)-O-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡糖基糖醛酸)-(1→4) -O-(6-O-甲基-2，3-二-O-磺基-α-D-吡喃葡糖基)-(1→4)-O-(3-O- 甲基-2-O-磺基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-3，6-二-O-甲基-2-O- 磺基-α-D-吡喃葡糖苷的钠盐(V)

以一种类似的方式通过使合适的四糖与合适的九糖偶联且然后与三 糖41或43偶联(如制备36或38中所述)、随后进行常规的脱保护和 硫酸化反应来制备实施例2-5的化合物。

在实施例2的情况中，所用的四糖是制备55中所述的一种化合物 (化合物62)且所用的九糖是制备25中所述的一种化合物(化合物 27)。

在实施例3的情况中，所用的四糖是制备74中所述的一种化合物 (化合物86)且所用的九糖是制备85中所述的一种化合物(化合物 99)。

在实施例4的情况中，所用的四糖是制备55中所述的一种化合物 (化合物62)且所用的九糖是制备85中所述的一种化合物(化合物 99)。

在实施例5的情况中，所用的四糖是化合物68且所用的九糖是制 备25中所述的一种化合物(化合物27)。

表1

H-1质子(ppm)的1H-NMR(D2O，4.80ppm)δ：

单位1＝带有还原端的单位

单位16＝带有非还原端的单位     单位     实施例2     实施例3     实施例4     实施例5     1     5.08     4.68     5.07     5.08     2     4.93     5.02     5.02     4.93     3     5.37     5.41     5.43     5.37     5     5.49     5.57     5.48     5.57     6     4.66     4.71     4.65     4.70     7、9、11     5.67     5.67     5.68     5.67     4、8、10、12     4.39-4.49     4.39-4.49     4.37-4.47     4.39-4.39     13     5.61     5.61     5.60     5.61     14     4.8     4.94     4.93     4.93     15     5.59     5.59     5.59     5.59     16     5.69     5.69     5.69     5.68

表2

“阴离子电喷离子化”(ESI)质谱法 实施例 通式 计算值 发现值 2 C129H224O128S15 4304.1 4304.5 3 C127H220O134S17 4436.2 4436.2 4 C128H222O131S16 4370.1 4370.4 5 C128H222O131S16 4370.1 4370.5