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含有核酸的脂质纳米粒子

阅读：203发布：2021-02-28

IPRDB可以提供含有核酸的脂质纳米粒子专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供含有核酸的脂质纳米粒子，所述脂质纳米粒子包含：含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)；水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物；以及核酸。，下面是含有核酸的脂质纳米粒子专利的具体信息内容。

1.含有核酸的脂质纳米粒子，所述脂质纳米粒子包含：

含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)；

水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物；以及

核酸。

2.如权利要求1所述的脂质纳米粒子，其中，相对于核酸中的磷原子的摩尔数而言，脂质A中的季铵基的摩尔数为0.01倍摩尔量以上。

3.如权利要求1或2所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的脂质，或者为它们的组合，[化学式1]

式(I)中，

R1～R3相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，

1 3 1 1 2 2 3 4 3 5 6

L～L相同或不同，其不存在，或者为-Z-(CYY)p1-或-Z-(CYY)p2-Z-(CYY)p3-，式-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-，式中，Y7A～Y7D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p1～p3相同或不同，为1～5的整数，X1为可被取代的C1-C4烷基，

A1为药学上允许的阴离子；

[化学式2]

式(II)中，

R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，式-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-中，Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z4～Z6相同或不同，为-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-或-NY14D-CO-O-，式中，Y14A～Y14D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～5的整数，L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-，式-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

Z7～Z9相同或不同，为-O-、-NY27A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY27B-、-NY27C-CO-或-NY27D-CO-O-，式中，Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p7为1～5的整数，p8为0～5的整数，p9为1～5的整数，p10为0～5的整数，p11为1～5的整数，p12为1～5的整数，B1为：[化学式3]

式中，X2及X3相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X4为可被取代的C1-C4烷基；X5及X6相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X7为可被取代的C1-C4烷基；Y28～Y37相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z10及Z11相同或不同，为-O-、-NY38A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY38B-、-NY38C-CO-或-NY38D-CO-O-，式中，Y38A～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p13为0～5的整数；p14～p17相同或不同，为1～5的整数，A2为药学上允许的阴离子；

[化学式4]

式(III)中，

R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-，式-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-中，Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-，式中，Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p18为0～5的整数，p19为1～5的整数，p20为0～5的整数，

11 46 47 48 49 15 50 51 52 53 16

L 不存在，或者为-(CY Y )p21-、-(CY Y )p22-Z -(CY Y )p23-或-(CY Y )p24-Z -(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-，式-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z15～Z17相同或不同，为-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-、-NY58D-CO-O-或-CO-，式中，Y58A～Y58D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

p21为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，p26为1～5的整数，L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-，式-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-中，Y59～Y70相同或不同，为氢原子或可被取代

18 20 71A 71B 71C

的C1-C4烷基；Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-、-NY71D-CO-O-或-CO-，式中，Y71A～Y71D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

p27为1～5的整数，p28为0～5的整数，p29为0～5的整数，p30为0～5的整数，p31为1～5的整数，p32为0～5的整数，

1 2 72 72

J及J 相同或不同，为CY 或N，式中，Y 为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，B2为：

[化学式5]

8 9

式中，X及X 相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X10为可被取代的C1-C4烷基；X11及X12相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X13为可被取代的C1-C4烷基；Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-，式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p33为0～5的整数；p34～p37相同或不同，为1～5的整数，A3为药学上允许的阴离子；

[化学式6]

式(IV)中，

R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-，式-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-，式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p38～p40相同或不同，为1～5的整数，L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-，式-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-中，Y90～Y95相同或不

26 28 96A

同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-，式中，Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数，L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-

30 105 106 31 107 108 97 98 99 100 29 101 102Z -(CY Y )p48-Z -(CY Y )p49-，式-(CY Y )p44-、-(CY Y )p45-Z -(CY Y )p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-中，Y97～Y108相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-NY109C-CO-、-NY109D-CO-O-或-CO-，式中，Y109A～Y109D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-

44 45 46 47 48

C4烷基；p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p49为1～5的整数，J3为CY110或N，式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，A4为药学上允许的阴离子；

[化学式7]

式(V’)、式(V”)中，

R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，

111 114

Y ～Y 相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，

L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-，式-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-中，Y115～Y120相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z32～Z34相同或

121A 121B 121C 121D

不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-、-NY -CO-O-或-CO-，式中，Y121A～Y121D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p51为0～5的整数，p52为1～5的整数，p53为0～5的整数，L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-，式-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-中，Y122～Y133相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z35～Z37相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-，式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p54为1～5的整数，p55为0～5的整数，p56为1～

5的整数，p57为0～5的整数，p58为1～5的整数，p59为1～5的整数，

21 26 135 136 137 138 38

L 及L 相同或不同，其不存在，或者为-(CY Y )p60-、-(CY Y )p61-Z -(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-，式-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z38～Z40相同或不同，为-O-、-

147A 147B 147C 147D 147A 147D

NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NR -CO-、-NY -CO-O-或-CO-，式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p60为1～5的整数，p61为0～5的整数，p62为0～

5的整数，p63为0～5的整数，p64为1～5的整数，p65为0～5的整数，B3及B4相同或不同地为：

[化学式8]

式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子

18 19 20

共同形成可被取代的C4-C6杂环；X 为可被取代的C1-C4烷基；X 及X 相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X21为可被取代的C1-C4烷基；Y148～Y157相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z41及Z42相同或不同，为-O-、-NY158A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY158B-、-NY158C-CO-或-NY158D-CO-O-，式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p66为0～5的整数；p67～p70相同或不同，为1～5的整数，A5及A6相同或不同，为药学上允许的阴离子。

4.如权利要求3所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(I)表示的脂质，式(I)中，L1～L3中的一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，或者L1～L3中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，R1～R3为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。

5.如权利要求3所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(II)表示的脂质，式(II)中，L4～L6中的一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，或者L4～L6中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，R4～R6为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。

6.如权利要求3所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(III)表示的脂质，式(III)中，L8～L10中的一者为-CO-O-(CY39Y40)p18-或-O-CO-(CY39Y40)p18-，或者L8～L10中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY39Y40)p18或-O-CO-(CY39Y40)p18-，R7～R9为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

7.如权利要求3所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(IV)表示的脂质，式(IV)中，L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-，或者L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L14及L15相同或不同地为-CO-O-

90 91 90 91 13 83 84 83 84

(CY Y )p41-或-O-CO-(CY Y )p41-，或者L 为-CO-O-(CY Y )p38-或-O-CO-(CY Y )p38-、且L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-；R10～R12为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

8.如权利要求3所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(V’)表示的脂质，式(V’)中，L17

19 17 19 13

～L 中的一者为-CO-O-或-O-，或者L ～L 中的2个以上相同或不同地为-CO-O-或-O-，R～R15为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

9.如权利要求1～8中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，相对于全部脂质的摩尔数而言，水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物的含量为0.005倍摩尔量以上。

10.如权利要求1～9中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物的水溶性高分子部分选自由聚乙二醇、聚甘油、聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸及聚丙烯酰胺组成的组。

11.如权利要求1～10中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，全部脂质的摩尔数相对于核酸的摩尔数的比率、即全部脂质的摩尔数/核酸的摩尔数为50以上。

12.如权利要求1～11中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，核酸为具有利用了RNA干扰(RNAi)的、靶基因表达抑制作用的核酸。

13.如权利要求12所述的脂质纳米粒子，其中，靶基因为与肿瘤或炎症相关的基因。

14.如权利要求1～13中任一项所述的脂质纳米粒子，所述脂质纳米粒子还包含脂质(脂质B)，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基或1个季铵基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。

15.如权利要求14所述的脂质纳米粒子，其中，相对于全部脂质的摩尔数而言，脂质B的含量为0.1倍摩尔量以上。

16.如权利要求14或15所述的脂质纳米粒子，其中，相对于核酸中的磷原子的摩尔数而言，脂质B中的亲水部的氨基或季铵基的摩尔数为0.01倍摩尔量以上。

17.权利要求14～16中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，脂质B为式(CL-I)、式(CL-II)、式(CL-III)、式(CL-IV)、式(CL-V)、式(CL-VI)或式(CL-VII)，[化学式9]

式(CL-I)中，

R101及R102相同或不同，为直链或支链状的C10-C24烷基、C10-C24链烯基或C10-C24炔基，L101及L102为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基，L103为单键、-CO-或-CO-O-，

L103为单键时，

X101为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，L103为-CO-或-CO-O-时，

X101为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基；

[化学式10]

式(CL-II)中，

R103及R104相同或不同，为直链或支链状的C12-C24烷基、C12-C24链烯基或C12-C24炔基，p101及p102相同或不同，为0～3的整数，

L106及L107为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基，L104及L105相同或不同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，

L108为单键、-CO-或-CO-O-，

L108为单键时，

X102为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-

4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，L108为-CO-或-CO-O-时，

102

X 为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基；

[化学式11]

式(CL-III)中，

R105为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，R106为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，X103及X104相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，或者X103与L111键合到一起而形成C2-C8亚烷基，L111为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基或二烷基氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，或者与X103键合到一起而形成C2-C8亚烷基，L109为C1-C6亚烷基，

L110为单键、或C1-C6亚烷基，其中，L109和L110的碳原子数之和为7以下，L111为氢原子的

110 111 103 110

情况下，L 为单键，L 与X 键合到一起而形成C2-C6亚烷基的情况下，L 为单键、或者亚甲基或亚乙基；

[化学式12]

式(CL-IV)中，

R107为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，R108为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基；

[化学式13]

式(CL-V)中，

R109为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，R110为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，L112为C1-C3亚烷基，

X105为氢原子或C1-C3烷基；

[化学式14]

式(CL-VI)中，

111 112

R 及R 相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，

X106及X107相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，p103～p105相同或不同，为0或1，其中，p103～p105不会同时为0，L113及L114相同或不同，为O、S或NH；

[化学式15]

式(CL-VII)中，

R113及R114相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，X109及X110相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，X108为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，L115为-CO-O-或-O-CO-，

p106为0～3的整数，p107为1～4的整数。

18.如权利要求1～17中任一项所述的脂质纳米粒子，所述脂质纳米粒子还包含中性脂质。

19.如权利要求18所述的脂质纳米粒子，其中，相对于全部脂质的摩尔数而言，中性脂质的含量为0.05倍摩尔量以上。

20.如权利要求18或19所述的脂质纳米粒子，其中，中性脂质选自由磷脂、甾醇、甘油糖脂、神经鞘糖脂及鞘氨基醇组成的组。

21.如权利要求1～20中任一项所述的脂质纳米粒子，所述脂质纳米粒子的平均粒径为

20～65nm。

22.含有核酸的脂质纳米粒子的制造方法，所述制造方法包括下述工序：

工序(a)，在能与水混合的有机溶剂和水的混合溶剂中，将含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)、与核酸混合，从而制备含有脂质A和核酸的第一脂质溶液；

工序(b)，向第一脂质溶液中添加含有水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物的第二脂质溶液，从而制备第三脂质溶液；及

工序(c)，向第三脂质溶液中添加水或缓冲剂水溶液。

23.如权利要求22所述的制造方法，其中，工序(a)中包括与脂质A及核酸同时地混合下述成分中的一种以上的步骤，所述成分为：水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物；中性脂质；及脂质(脂质B)，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。

24.如权利要求22所述的制造方法，其中，工序(b)中的第二脂质溶液还含有中性脂质、及/或脂质(脂质B)，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。

25.如权利要求22～24中任一项所述的制造方法，其中，能与水混合的有机溶剂为醇、二甲基亚砜、四氢呋喃、丙酮、乙腈或它们的混合物。

26.如权利要求22～24中任一项所述的制造方法，其中，能与水混合的有机溶剂为醇。

27.如权利要求25或26所述的制造方法，其中，醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或它们的混合物。

28.如权利要求22～27中任一项所述的制造方法，其中，使工序(b)中得到的第三脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂的含量相对于该溶液而言为50％(v/v)以上。

29.如权利要求22～28中任一项所述的制造方法，其中，工序(c)中，通过添加水或缓冲剂水溶液，从而使工序(b)中得到的第三脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂浓度成为

50％(v/v)以下。

30.如权利要求29所述的制造方法，其中，在1分钟以内使工序(b)中得到的第三脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂浓度成为50％(v/v)以下。

31.如权利要求22～30中任一项所述的制造方法，其中，相对于核酸中的磷原子的摩尔数而言，脂质A中的季铵基的摩尔数为0.01倍摩尔量以上。

32.如权利要求22～31中任一项所述的制造方法，其中，使工序(a)中得到的第一脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂的含量相对于该溶液而言为50％(v/v)以上。

33.如权利要求22～32中任一项所述的制造方法，其中，缓冲剂水溶液为磷酸缓冲水溶液、柠檬酸缓冲水溶液或乙酸缓冲水溶液。

34.如权利要求22～33中任一项所述的制造方法，其中，工序(c)中得到的溶液中的全部脂质的摩尔数相对于核酸的摩尔数的比率、即全部脂质的摩尔数/核酸的摩尔数为50以上。

35.如权利要求22～34中任一项所述的制造方法，其中，核酸为具有利用了RNA干扰(RNAi)的、靶基因表达抑制作用的核酸。

36.如权利要求35所述的制造方法，其中，靶基因为与肿瘤或炎症相关的基因。

37.如权利要求22～36中任一项所述的制造方法，其中，脂质A为式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的脂质，或者为它们的组合，[化学式16]

式(I)中，

1 3

R～R相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，

L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-，式-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-，式中，Y7A～Y7D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p1～p3相同或不同，为1～5的整数，X1为可被取代的C1-C4烷基，

A1为药学上允许的阴离子；

[化学式17]

式(II)中，

R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，式-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-中，Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z4～Z6相同或不同，为-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-或-NY14D-CO-O-，式中，Y14A～Y14D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～5的整数，L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-，式-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

7 9 27A 27B 27C 27D

Z～Z相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-或-NY -CO-O-，式中，Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p7为1～5的整数，p8为0～5的整数，p9为1～5的整数，p10为0～5的整数，p11为1～5的整数，p12为1～5的整数，B1为：[化学式18]

式中，X2及X3相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X4为可被取代的C1-C4烷基；X5及X6相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X7为可被取代的C1-C4烷基；Y28～Y37相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z10及Z11相同或不同，为-O-、-NY38A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY38B-、-NY38C-CO-或-NY38D-CO-O-，式中，Y38A～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p13为0～5的整数；p14～p17相同或不同，为1～5的整数，A2为药学上允许的阴离子；

[化学式19]

式(III)中，

R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-

43 44 12 39 40 13 41 42 14 43 44 39 44(CY Y )p20-，式-Z -(CY Y )p18-或-Z -(CY Y )p19-Z -(CY Y )p20-中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-，式中，Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p18为0～5的整数，p19为1～5的整数，p20为0～5的整数，L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-，式-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z15～Z17相同或不同，为-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-、-NY58D-CO-O-或-CO-，式中，Y58A～Y58D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

p21为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，

26

p 为1～5的整数，

L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-，式-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-中，Y59～Y70相同或不同，为氢原子或可被取代

18 20 71A 71B 71C

的C1-C4烷基；Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-、-NY71D-CO-O-或-CO-，式中，Y71A～Y71D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

p27为1～5的整数，p28为0～5的整数，p29为0～5的整数，p30为0～5的整数，p31为1～5的整数，p32为0～5的整数，

1 2 72 72

J及J 相同或不同，为CY 或N，式中，Y 为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，B2为：

[化学式20]

式中，X8及X9相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X10为可被取代的C1-C4烷基；X11及X12相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X13为可被取代的C1-C4烷基；Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-，式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p33为0～5的整数；p34～p37相同或不同，为1～5的整数，A3为药学上允许的阴离子；

[化学式21]

式(IV)中，

R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-，式-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-，式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p38～p40相同或不同，为1～5的整数，L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-，式-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-中，Y90～Y95相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z26～Z28相同或不同，为-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-，式中，Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数，L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-，式-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-中，Y97～Y108相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-

109C 109D 109A 109D

NY -CO-、-NY -CO-O-或-CO-，式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p44为1～5的整数，p45为0～5的整数，p46为1～5的整数，p47为0～5的整数，p48为1～5的整数，p49为1～5的整数，J3为CY110或N，式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，A4为药学上允许的阴离子；

[化学式22]

式(V’)、式(V”)中，

R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，Y111～Y114相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-，式-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-中，Y115～Y120相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z32～Z34相同或不同，为-O-、-NY121A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY121B-、-NY121C-CO-、-NY121D-CO-O-或-CO-，式中，Y121A～Y121D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p51为0～5的整数，p52为1～5

53

的整数，p 为0～5的整数，

L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-，式-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-中，

122 133 35 37

Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-，式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p54为1～5的整数，p55为0～5的整数，p56为1～

5的整数，p57为0～5的整数，p58为1～5的整数，p59为1～5的整数，

21 26 135 136 137 138 38

L 及L 相同或不同，其不存在，或者为-(CY Y )p60-、-(CY Y )p61-Z -(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-，式-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z38～Z40相同或不同，为-O-、-NY147A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY147B-、-NR147C-CO-、-NY147D-CO-O-或-CO-，式中，Y147A～Y147D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p60为1～5的整数，p61为0～5的整数，p62为0～

5的整数，p63为0～5的整数，p64为1～5的整数，p65为0～5的整数，B3及B4相同或不同地为：

[化学式23]

式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X18为可被取代的C1-C4烷基；X19及X20相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X21为

148 157 41 42

可被取代的C1-C4烷基；Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z 及Z相同或不同，为-O-、-NY158A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY158B-、-NY158C-CO-或-NY158D-CO-O-，式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p66为0～5的整数；p67～p70相同或不同，为1～5的整数，

5 6

A及A相同或不同，为药学上允许的阴离子。

38.如权利要求37所述的制造方法，其中，脂质A为式(I)表示的脂质，式(I)中，L1～L3中的一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，或者L1～L3中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，R1～R3为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。

39.如权利要求37所述的制造方法，其中，脂质A为式(II)表示的脂质，式(II)中，L4～L6中的一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，或者L4～L6中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，R4～R6为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。

8

40.如权利要求37所述的制造方法，其中，脂质A为式(III)表示的脂质，式(III)中，L～L10中的一者为-CO-O-(CY39Y40)p18-或-O-CO-(CY39Y40)p18-，或者L8～L10中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY39Y40)p18或-O-CO-(CY39Y40)p18-，R7～R9为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

13

41.如权利要求37所述的制造方法，其中，脂质A为式(IV)表示的脂质，式(IV)中，L 为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-，或者L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L14及L15相同或不同地为-CO-O-

90 91 90 91 13 83 84 83 84

(CY Y )p41-或-O-CO-(CY Y )p41-，或者L 为-CO-O-(CY Y )p38-或-O-CO-(CY Y )p38-、且L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-；R10～R12为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

42.如权利要求37所述的制造方法，其中，脂质A为式(V’)表示的脂质，式(V’)中，L17～L19中的一者为-CO-O-或-O-，或者L17～L19中的2个以上相同或不同地为-CO-O-或-O-，R13～R15为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

43.如权利要求22～42中任一项所述的制造方法，其中，工序(a)中，与脂质A及核酸同时地混合脂质(脂质B)，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。

44.如权利要求43所述的制造方法，其中，脂质B为式(CL-I)、式(CL-II)、式(CL-III)、式(CL-IV)、式(CL-V)、式(CL-VI)或式(CL-VII)，[化学式24]

式(CL-I)中，R101及R102相同或不同，为直链或支链状的C10-C24烷基、C10-C24链烯基或C10-C24炔基，L101及L102为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基，L103为单键、-CO-或-CO-O-，

L103为单键时，

X101为氢原子、C1-6烷基、C3-6链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，L103为-CO-或-CO-O-时，

101

X 为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基；

[化学式25]

式(CL-II)中，R103及R104相同或不同，为直链或支链状的C12-C24烷基、C12-C24链烯基或C12-C24炔基，p101及p102相同或不同，为0～3的整数，

L106及L107为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C2-C8亚烷基，L104及L105相同或不同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，

L108为单键、-CO-或-CO-O-，

L108为单键时，

X102为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-

4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，

108

L 为-CO-或-CO-O-时，

X102为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基；

[化学式26]

式(CL-III)中，R105为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，R106为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，X103及X104相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，或者X103与L111键合到一起而形成C2-C8亚烷基，L111为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基或二烷基氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，或者与X103键合到一起而形成C2-C8亚烷基，L109为C1-C6亚烷基，

L110为单键、或C1-C6亚烷基，其中，L109和L110的碳原子数之和为7以下，L111为氢原子的情况下，L110为单键，L111与X103键合到一起而形成C2-C6亚烷基的情况下，L110为单键、或者亚甲基或亚乙基；

[化学式27]

式(CL-IV)中，R107为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，R108为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基；

[化学式28]

109

式(CL-V)中，R 为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，R110为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，

112

L 为C1-C3亚烷基，

X105为氢原子或C1-C3烷基；

[化学式29]

式(CL-VI)中，R111及R112相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，X106及X107相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，

103 104 105 103 104 105

p 、p 及p 相同或不同，为0或1，其中，p 、p 及p 不会同时为0，L113及L114相同或不同，为O、S或NH；

[化学式30]

式(CL-VII)中，R113及R114相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，X109及X110相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，X108为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，L115为-CO-O-或-O-CO-，

p106为0～3的整数，

p107为1～4的整数。

45.含有核酸的脂质纳米粒子的制造方法，所述制造方法包括下述工序：

工序(a)，在能与水混合的有机溶剂和水的混合溶剂中，将含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)、核酸、和水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物进行混合，从而制备含有脂质和核酸的第一脂质溶液；及工序(b)，向第一脂质溶液中添加水或缓冲剂水溶液。

46.如权利要求45所述的制造方法，其中，工序(a)中包括将中性脂质、及/或脂质(脂质B)进行混合的步骤，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。

47.如权利要求45或46所述的制造方法，其中，能与水混合的有机溶剂为醇、二甲基亚砜、四氢呋喃、丙酮、乙腈或它们的混合物。

48.如权利要求45或46所述的制造方法，其中，能与水混合的有机溶剂为醇。

49.如权利要求47或48所述的制造方法，其中，醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或它们的混合物。

50.如权利要求45～49中任一项所述的制造方法，其中，工序(a)中得到的第一脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂的含量相对于该溶液而言为50％(v/v)以上。

51.如权利要求45～50中任一项所述的制造方法，其中，工序(b)中，通过添加水或缓冲剂水溶液，从而使工序(a)中得到的第一脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂浓度成为

50％(v/v)以下。

52.如权利要求51所述的制造方法，其中，在1分钟以内使工序(a)中得到的第一脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂浓度成为50％(v/v)以下。

53.如权利要求45～52中任一项所述的制造方法，其中，相对于核酸中的磷原子的摩尔数而言，脂质A中的季铵基摩尔数为0.01倍摩尔量以上。

54.如权利要求45～53中任一项所述的制造方法，其中，使工序(a)中得到的第一脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂的含量相对于该溶液而言为50％(v/v)以上。

55.如权利要求45～54中任一项所述的制造方法，其中，缓冲剂水溶液为磷酸缓冲水溶液、柠檬酸缓冲水溶液或乙酸缓冲水溶液。

56.如权利要求45～55中任一项所述的制造方法，其中，工序(a)中使用的全部脂质的摩尔数相对于核酸的摩尔数的比率、即全部脂质的摩尔数/核酸的摩尔数为50以上。

57.如权利要求45～56中任一项所述的制造方法，其中，核酸为具有利用了RNA干扰(RNAi)的、靶基因表达抑制作用的核酸。

58.如权利要求57所述的制造方法，其中，靶基因为与肿瘤或炎症相关的基因。

59.如权利要求45～58中任一项所述的制造方法，其中，脂质A为式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的脂质，或者为它们的组合，[化学式31]

式(I)中，

R1～R3相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-，式-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-，式中，Y7A～Y7D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p1～p3相同或不同，为1～5的整数，X1为可被取代的C1-C4烷基，

A1为药学上允许的阴离子；

[化学式32]

式(II)中，

R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，式-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-中，Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z4～Z6相同或不同，为-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-或-NY14D-CO-O-，式中，Y14A～Y14D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～5的整数，L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-，式-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

7 9 27A 27B 27C 27D

Z～Z相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-或-NY -CO-O-，式中，Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p7为1～5的整数，p8为0～5的整数，p9为1～5的整数，p10为0～5的整数，p11为1～5的整数，p12为1～5的整数，B1为：[化学式33]

2 3

式中，X及X 相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X4为可被取代的C1-C4烷基；X5及X6相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X7为可被取代的C1-C4烷基；Y28～Y37相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z10及Z11相同或

38A 38B 38C 38D 38A

不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-或-NY -CO-O-，式中，Y ～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p13为0～5的整数；p14～p17相同或不同，为1～5的整数，A2为药学上允许的阴离子；

[化学式34]

式(III)中，

R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-，式-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-中，Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-，式中，Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p18为0～5的整数，p19为1～5的整数，p20为0～5的整数，L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-，式-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z15～Z17相同或不同，为-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-、-NY58D-CO-O-或-CO-，式中，Y58A～Y58D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

p21为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，p26为1～5的整数，L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-，式-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-

65 66 19 67 68 20 69 70 59 70

(CY Y )p30-Z -(CY Y )p31-Z -(CY Y )p32-中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z18～Z20相同或不同，为-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-CO-、-NY71D-CO-O-或-CO-，式中，Y71A～Y71D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

p27为1～5的整数，p28为0～5的整数，p29为0～5的整数，p30为0～5的整数，p31为1～5的整数，

32

p 为0～5的整数，

J1及J2相同或不同，为CY72或N，式中，Y72为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，B2为：

[化学式35]

式中，X8及X9相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X10为可被取代的C1-C4烷基；X11及X12相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X13为可被取代的C1-C4烷基；Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-，式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p33为0～5的整数；p34～p37相同或不同，为1～5的整数，A3为药学上允许的阴离子；

[化学式36]

式(IV)中，

R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-，式-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-，式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p38～p40相同或不同，为1～5的整数，L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-

94 95 26 90 91 27 92 93 28 94 95 90 95(CY Y )p43-，式-Z -(CY Y )p41-或-Z -(CY Y )p42-Z -(CY Y )p43-中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z26～Z28相同或不同，为-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-，式中，Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数，

16 97 98 99 100 29 101 102 103 104

L 不存在，或者为-(CY Y )p44-、-(CY Y )p45-Z -(CY Y )p46-或-(CY Y )p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-，式-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-中，Y97～Y108相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-

109C 109D 109A 109D

NY -CO-、-NY -CO-O-或-CO-，式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p44为1～5的整数，p45为0～5的整数，p46为1～5的整数，p47为0～5的整数，p48为1～5的整数，p49为1～5的整数，J3为CY110或N，式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，A4为药学上允许的阴离子；

[化学式37]

式(V’)、式(V”)中，

R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，Y111～Y114相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-，式-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-中，Y115～Y120相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z32～Z34相同或不同，为-O-、-NY121A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY121B-、-NY121C-CO-、-NY121D-CO-O-或-CO-，式

121A 121D 51 52

中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p53为0～5的整数，L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-，式-(CY122Y123)p54-、-

124 125 35 126 127 128 129 36 130 131 37 132 133(CY Y )p55-Z -(CY Y )p56-或-(CY Y )p57-Z -(CY Y )p58-Z -(CY Y )p59-中，Y122～Y133相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z35～Z37相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-，式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p54为1～5的整数，p55为0～5的整数，p56为1～

57 58 59

5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为1～5的整数，

L21及L26相同或不同，其不存在，或者为-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-，式-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z38～Z40相同或不同，为-O-、-NY147A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY147B-、-NR147C-CO-、-NY147D-CO-O-或-CO-，式中，Y147A～Y147D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p60为1～5的整数，p61为0～5的整数，p62为0～

5的整数，p63为0～5的整数，p64为1～5的整数，p65为0～5的整数，B3及B4相同或不同地为：

[化学式38]

式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X18为可被取代的C1-C4烷基；X19及X20相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X21为可被取代的C1-C4烷基；Y148～Y157相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z41及Z42相同或不同，为-O-、-NY158A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY158B-、-NY158C-CO-或-NY158D-CO-O-，式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p66为0～5的整数；p67～p70相同或不同，为1～5的整数，A5及A6相同或不同，为药学上允许的阴离子。

1 3

60.如权利要求59所述的制造方法，其中，脂质A为式(I)表示的脂质，式(I)中，L～L中的一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，或者L1～L3中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，R1～R3为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。

4 6

61.如权利要求59所述的制造方法，其中，脂质A为式(II)表示的脂质，式(II)中，L～L中的一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，或者L4～L6中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，R4～R6为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。

8

62.如权利要求59所述的制造方法，其中，脂质A为式(III)表示的脂质，式(III)中，L～L10中的一者为-CO-O-(CY39Y40)p18-或-O-CO-(CY39Y40)p18-，或者L8～L10中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY39Y40)p18或-O-CO-(CY39Y40)p18-，R7～R9为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

63.如权利要求59所述的制造方法，其中，脂质A为式(IV)表示的脂质，式(IV)中，L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-，或者L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-；R10～R12为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

64.如权利要求59所述的制造方法，其中，脂质A为式(V’)表示的脂质，式(V’)中，L17～L19中的一者为-CO-O-或-O-，或者L17～L19中的2个以上相同或不同地为-CO-O-或-O-，R13～R15为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

65.如权利要求45～64中任一项所述的制造方法，其中，工序(a)中包括与脂质A、核酸及水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物同时地混合脂质(脂质B)的步骤，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。

66.如权利要求65所述的制造方法，其中，脂质B为式(CL-I)、式(CL-II)、式(CL-III)、式(CL-IV)、式(CL-V)、式(CL-VI)或式(CL-VII)，[化学式39]

式(CL-I)中，R101及R102相同或不同，为直链或支链状的C10-C24烷基、C10-C24链烯基或C10-C24炔基，L101及L102为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基，L103为单键、-CO-或-CO-O-，

L103为单键时，

X101为氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6的烷基或C3-C6的链烯基，L103为-CO-或-CO-O-时，

X101为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6的烷基或C3-C6的链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基；

[化学式40]

式(CL-II)中，R103及R104相同或不同，为直链或支链状的C12-C24烷基、C12-C24链烯基或C12-C24炔基，

101 102

p 及p 相同或不同，为0～3的整数，

L106及L107为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C2-C8亚烷基，L104及L105相同或不同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，

L108为单键、-CO-或-CO-O-，

L108为单键时，

X102为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-

4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，L108为-CO-或-CO-O-时，

X102为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基；

[化学式41]

式(CL-III)中，R105为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，R106为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，X103及X104相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，或者X103与L111键合到一起而形成C2-C8亚烷基，L111为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基或二烷基氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，或者与X103键合到一起而形成C2-C8亚烷基，L109为C1-C6亚烷基，

L110为单键、或C1-C6亚烷基，其中，L109和L110的碳原子数之和为7以下，L111为氢原子的情况下，L110为单键，L111与X103键合到一起而形成C2-C6亚烷基的情况下，L110为单键、或者亚甲基或亚乙基；

[化学式42]

式(CL-IV)中，R107为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，R108为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基；

[化学式43]

式(CL-V)中，R109为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，R110为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，L112为C1-C3亚烷基，

X105为氢原子或C1-C3烷基；

[化学式44]

式(CL-VI)中，R111及R112相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，X106及X107相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，p103、p104及p105相同或不同，为0或1，其中，p103、p104及p105不会同时为0，L113及L114相同或不同，为O、S或NH；

[化学式45]

式(CL-VII)中，R113及R114相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，X109及X110相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，X108为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，L115为-CO-O-或-O-CO-，

p106为0～3的整数，

p107为1～4的整数。

67.含有核酸的脂质纳米粒子，其是利用权利要求22～66中任一项所述的制造方法而得到的。

68.将含有核酸的脂质纳米粒子稳定化的方法，其中，在构成含有核酸的脂质纳米粒子的脂质膜中使用脂质(脂质A)，所述脂质(脂质A)含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基。

69.如权利要求68所述的方法，其中，相对于核酸中的磷原子的摩尔数而言，脂质A中的季铵基的摩尔数为0.01倍摩尔量以上。

70.如权利要求68或69所述的方法，其中，脂质A为式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的脂质，或者为它们的组合，[化学式46]

式(I)中，

R1～R3相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-，式-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-

7D 7A 7D 1 3

NY -CO-O-，式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p～p相同或不同，为1～5的整数，X1为可被取代的C1-C4烷基，

A1为药学上允许的阴离子；

[化学式47]

式(II)中，

R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，式-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-中，Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z4～Z6相同或不同，为-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-或-NY14D-CO-O-，式中，Y14A～Y14D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～5的整数，L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-，式-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

Z7～Z9相同或不同，为-O-、-NY27A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY27B-、-NY27C-CO-或-NY27D-CO-O-，式中，Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p7为1～5的整数，p8为0～5的整数，p9为1～5的整数，p10为0～5的整数，p11为1～5的整数，p12为1～5的整数，B1为：[化学式48]

式中，X2及X3相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共

4 5 6

同形成可被取代的C4-C6杂环；X为可被取代的C1-C4烷基；X及X 相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X7为可被取代的C1-C4烷基；Y28～Y37相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z10及Z11相同或不同，为-O-、-NY38A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY38B-、-NY38C-CO-或-NY38D-CO-O-，式中，Y38A～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p13为0～5的整数；p14～p17相同或不同，为1～5的整数，A2为药学上允许的阴离子；

[化学式49]

式(III)中，

R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-，式-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-中，Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-，式中，Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p18为0～5的整数，p19为1～5的整数，p20为0～5的整数，L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-，式-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z15～Z17相同或不同，为-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-、-NY58D-CO-O-或-CO-，式中，Y58A～Y58D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

p21为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，p26为1～5的整数，L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-，式-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-中，Y59～Y70相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z18～Z20相同或不同，为-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-

71D 71A 71D

CO-、-NY -CO-O-或-CO-，式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

p27为1～5的整数，p28为0～5的整数，p29为0～5的整数，p30为0～5的整数，p31为1～5的整数，p32为0～5的整数，J1及J2相同或不同，为CY72或N，式中，Y72为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，B2为：

[化学式50]

式中，X8及X9相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X10为可被取代的C1-C4烷基；X11及X12相同或不同，为可被取

13

代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X 为可被取代的C1-C4烷基；Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-，式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p33为0～5的整数；p34～p37相同或不同，为1～5的整数，A3为药学上允许的阴离子；

[化学式51]

式(IV)中，

R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，

13 23 83 84 24 85 86 25 87 88 23

L 不存在，或者为-Z -(CY Y )p38-或-Z -(CY Y )p39-Z -(CY Y )p40-，式-Z -(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-，式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p38～p40相同或不同，为1～5的整数，L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-，式-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-中，Y90～Y95相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z26～Z28相同或不同，为-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-

96B 96C 96D 96A 96D

CO-、-CO-NY -、-NY -CO-、-NY -CO-O-或-CO-，式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数，L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-，式-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-

103 104 30 105 106 31 107 108 97 108(CY Y )p47-Z -(CY Y )p48-Z -(CY Y )p49-中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-NY109C-CO-、-NY109D-CO-O-或-CO-，式中，Y109A～Y109D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p44为1～5的整数，p45为0～5的整数，p46为1～5的整数，p47为0～5的整数，p48为1～5

49

的整数，p 为1～5的整数，

J3为CY110或N，式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，A4为药学上允许的阴离子；

[化学式52]

式(V’)、式(V”)中，

R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，Y111～Y114相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-，式-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-

119 120 115 120 32 34

(CY Y )p53-中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY121A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY121B-、-NY121C-CO-、-NY121D-CO-O-或-CO-，式中，Y121A～Y121D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p51为0～5的整数，p52为1～5的整数，p53为0～5的整数，L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-，式-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-中，Y122～Y133相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z35～Z37相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-，式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p54为1～5的整数，p55为0～5的整数，p56为1～

5的整数，p57为0～5的整数，p58为1～5的整数，p59为1～5的整数，L21及L26相同或不同，其不存在，或者为-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-

139 140 141 142 39 143 144 40 145 146 135 136(CY Y )p62-或-(CY Y )p63-Z -(CY Y )p64-Z -(CY Y )p65-，式-(CY Y )p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z38～Z40相同或不同，为-O-、-NY147A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY147B-、-NR147C-CO-、-NY147D-CO-O-或-CO-，式中，Y147A～Y147D相

60 61 62

同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为0～

5的整数，p63为0～5的整数，p64为1～5的整数，p65为0～5的整数，B3及B4相同或不同地为：

[化学式53]

式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X18为可被取代的C1-C4烷基；X19及X20相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X21为可被取代的C1-C4烷基；Y148～Y157相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z41及Z42相同或不同，为-O-、-NY158A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY158B-、-NY158C-CO-或-NY158D-CO-O-，式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p66为0～5的整数；p67～p70相同或不同，为1～5的整数，A5及A6相同或不同，为药学上允许的阴离子。

71.如权利要求70所述的方法，其中，脂质A为式(I)表示的脂质，式(I)中，L1～L3中的一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，或者L1～L3中的2个以上相同或不同地为-CO-O-

1 2 1 2 1 3

(CYY)p1-或-O-CO-(CYY)p1-，R～R 为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。

72.如权利要求70所述的方法，其中，脂质A为式(II)表示的脂质，式(II)中，L4～L6中的一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，或者L4～

6 8 9 8 9 10 11

L中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CYY)p4-、-O-CO-(CYY)p4-、或-O-CO-(CY Y )p5-O-(CY12Y13)p6-，R4～R6为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。

73.如权利要求70所述的方法，其中，脂质A为式(III)表示的脂质，式(III)中，L8～L10中的一者为-CO-O-(CY39Y40)p18-或-O-CO-(CY39Y40)p18-，或者L8～L10中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY39Y40)p18或-O-CO-(CY39Y40)p18-，R7～R9为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

74.如权利要求70所述的方法，其中，脂质A为式(IV)表示的脂质，式(IV)中，L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-，或者L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且

14 15 90 91 90 91 10 12

L 及L 相同或不同地为-CO-O-(CY Y )p41-或-O-CO-(CY Y )p41-；R ～R 为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

75.如权利要求70所述的方法，其中，脂质A为式(V’)表示的脂质，式(V’)中，L17～L19中的一者为-CO-O-或-O-，或者L17～L19中的2个以上相同或不同地为-CO-O-或-O-，R13～R15为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

76.脂质(脂质A)，其含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基，并且，所述脂质(脂质A)选自由式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的脂质组成的组，[化学式54]

式(I)中，

1 3

R～R相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，

L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-，式-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-，式中，Y7A～Y7D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p1～p3相同或不同，为1～5的整数，X1为可被取代的C1-C4烷基，

A1为药学上允许的阴离子；

[化学式55]

式(II)中，

R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，式-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-中，Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z4～Z6相同或不同，为-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-或-NY14D-CO-O-，式中，Y14A～Y14D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～5的整数，L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-

23 24 9 25 26 15 16 17 18 7 19 20 21 22(CY Y )p11-Z-(CY Y )p12-，式-(CY Y )p7-、-(CY Y )p8-Z-(CY Y )p9-或-(CY Y )p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

Z7～Z9相同或不同，为-O-、-NY27A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY27B-、-NY27C-CO-或-NY27D-CO-O-，式中，Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p7为1～5的整数，p8为0～5

9 10 11 12

的整数，p为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为1～5的整数，B1为：

[化学式56]

式中，X2及X3相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X4为可被取代的C1-C4烷基；X5及X6相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X7为可被取代的C1-C4烷基；Y28～Y37相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z10及Z11相同或不同，为-O-、-NY38A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY38B-、-NY38C-CO-或-NY38D-CO-O-，式中，Y38A～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p13为0～5的整数；p14～p17相同或不同，为1～5的整数，A2为药学上允许的阴离子；

[化学式57]

式(III)中，

R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-，式-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-中，Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-，式中，Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p18为0～5的整数，p19为1～5的整数，p20为0～5的整数，L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-，式-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z15～Z17相同或不同，为-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-

58D 58A 58D

CO-、-NY -CO-O-或-CO-，式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

p21为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，p26为1～5的整数，L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-

67 68 20 69 70 59 60 61 62 18 63 64

(CY Y )p31-Z -(CY Y )p32-，式-(CY Y )p27-、-(CY Y )p28-Z -(CY Y )p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-中，Y59～Y70相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z18～Z20相同或不同，为-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-CO-、-NY71D-CO-O-或-CO-，式中，Y71A～Y71D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；

27 28 29 30 31

p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为0～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p32为0～5的整数，J1及J2相同或不同，为CY72或N，式中，Y72为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，B2为：

[化学式58]

式中，X8及X9相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X10为可被取代的C1-C4烷基；X11及X12相同或不同，为可被取

13

代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X 为可被取代的C1-C4烷基；Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-，式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p33为0～5的整数；p34～p37相同或不同，为1～5的整数，A3为药学上允许的阴离子；

[化学式59]

式(IV)中，

R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-，式-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-，式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p38～p40相同或不同，为1～5的整数，L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-，式-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-中，Y90～Y95相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z26～Z28相同或不同，为-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-，式中，Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数，L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-，式-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-中，Y97～Y108相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-

109C 109D 109A 109D

NY -CO-、-NY -CO-O-或-CO-，式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p44为1～5的整数，p45为0～5的整数，p46为1～5的整数，p47为0～5的整数，p48为1～5的整数，p49为1～5的整数，J3为CY110或N，式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，A4为药学上允许的阴离子；

[化学式60]

式(V’)、式(V”)中，

R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，Y111～Y114相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-，式-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-中，Y115～Y120相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z32～Z34相同或不同，为-O-、-NY121A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY121B-、-NY121C-CO-、-NY121D-CO-O-或-CO-，式

121A 121D 51 52

中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p53为0～5的整数，L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-，式-(CY122Y123)p54-、-

124 125 35 126 127 128 129 36 130 131 37 132 133(CY Y )p55-Z -(CY Y )p56-或-(CY Y )p57-Z -(CY Y )p58-Z -(CY Y )p59-中，Y122～Y133相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z35～Z37相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-，式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p54为1～5的整数，p55为0～5的整数，p56为1～

57 58 59

5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为1～5的整数，

L21及L26相同或不同，其不存在，或者为-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-，式-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z38～Z40相同或不同，为-O-、-NY147A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY147B-、-NR147C-CO-、-NY147D-CO-O-或-CO-，式中，Y147A～Y147D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p60为1～5的整数，p61为0～5的整数，p62为0～

5的整数，p63为0～5的整数，p64为1～5的整数，p65为0～5的整数，B3及B4相同或不同地为：

[化学式61]

式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X18为可被取代的C1-C4烷基；X19及X20相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；X21为可被取代的C1-C4烷基；Y148～Y157相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；Z41及Z42相同或不同，为-O-、-NY158A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY158B-、-NY158C-CO-或-NY158D-CO-O-，式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基；p66为0～5的整数；p67～p70相同或不同，为1～5的整数，A5及A6相同或不同，为药学上允许的阴离子。

77.如权利要求76所述的脂质，其中，脂质A为式(I)表示的脂质，式(I)中，L1～L3中的一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，或者L1～L3中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，R1～R3为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。

78.如权利要求76所述的脂质，其中，脂质A为式(II)表示的脂质，式(II)中，L4～L6中的一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，或者L4～L6中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-

12 13 4 6

O-(CY Y )p6-，R～R为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。

79.如权利要求76所述的脂质，其中，脂质A为式(III)表示的脂质，式(III)中，L8～L10中的一者为-CO-O-(CY39Y40)p18-或-O-CO-(CY39Y40)p18-，或者L8～L10中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY39Y40)p18或-O-CO-(CY39Y40)p18-，R7～R9为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

80.如权利要求76所述的脂质，其中，脂质A为式(IV)表示的脂质，式(IV)中，L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-，或者L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者

90 91 90 91 14 15

为-CO-O-(CY Y )p41-或-O-CO-(CY Y )p41-，或者L 及L 相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-；R10～R12为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

81.如权利要求76所述的脂质，其中，脂质A为式(V’)表示的脂质，式(V’)中，L17～L19中的一者为-CO-O-或-O-，或者L17～L19中的2个以上相同或不同地为-CO-O-或-O-；R13～R15为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。

82.将核酸导入细胞内的方法，所述方法使用权利要求1～21及67中任一项所述的含有核酸的脂质纳米粒子。

83.如权利要求82所述的方法，其中，细胞为哺乳类动物的肿瘤或炎症部位中的细胞。

84.如权利要求83所述的方法，其中，细胞为哺乳类动物的肝脏、胃、肺、肾脏、胰脏或脾脏中的细胞。

85.如权利要求82～84中任一项所述的方法，其中，导入细胞内的方法为经由静脉内施予或皮下施予而导入细胞内的方法。

86.癌症或炎症疾病的治疗方法，所述方法包括向哺乳动物施予权利要求1～21及67中任一项所述的含有核酸的脂质纳米粒子的步骤。

87.如权利要求86所述的方法，其中，施予的方法为静脉内施予或皮下施予。

88.药物，其包含权利要求1～21及67中任一项所述的含有核酸的脂质纳米粒子。

89.如权利要求88所述的药物，其用于静脉内施予或皮下施予。

90.癌症或炎症疾病的治疗剂，其包含权利要求1～21及67中任一项所述的含有核酸的脂质纳米粒子。

91.如权利要求90所述的治疗剂，其用于静脉内施予或皮下施予。

说明书全文

含有核酸的脂质纳米粒子

技术领域

[0001] 本发明涉及例如作为药物有用的含有核酸的脂质纳米粒子、及该脂质纳米粒子的制造方法等。另外，本发明涉及对于该脂质纳米粒子的制造而言有用的脂质等。

背景技术

[0002] 作为将质粒DNA(pDNA)、反义寡脱氧核酸(ODN)及短干扰(short interfering)RNA(siRNA)等核酸在体内(in vivo)高效地递送至细胞内的手段，使核酸与阳离子性脂质及其他脂质形成复合体、并施予该复合体的方法是已知的。
[0003] 专利文献1及非专利文献1中，作为含有核酸等的脂质体的制造方法，报道了例如以下方法：将经干燥的阳离子性脂质和siRNA的柠檬酸钠水溶液、及将中性脂质和聚乙二醇化磷脂溶解于HEPES缓冲生理盐水(HEPES[N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-(2-乙烷磺酸)]缓冲生理盐水，以下为“HBS”)和乙醇而得到的溶液加入至乙醚中，形成油包水型(W/O)乳剂后，将溶液混合，利用逆相蒸发法进行处理，由此制造内含siRNA的脂质体。
[0004] 专利文献2及非专利文献2中，报道了以下方法：将ODN溶解于pH3.8的柠檬酸水溶液中，添加脂质的乙醇溶液，使乙醇浓度降低至20v/v％，制备内含ODN的脂质体并使用分级膜(sizingfilm)进行过滤，利用透析除去过量的乙醇，然后进一步于pH 7.5的条件下对试样进行透析从而除去附着于脂质体表面的ODN，由此制造内含ODN的脂质体。
[0005] 另外，专利文献3中报道了例如以下方法：利用T型混合器对将pDNA溶解于柠檬酸水溶液中而得到的溶液、和将脂质溶解于乙醇中而得到的溶液进行混合，使乙醇浓度降低至45v/v％，然后进一步加入柠檬酸缓冲剂溶液，使乙醇浓度降低至20v/v％从而制备内含pDNA的脂质体，并用阴离子交换树脂除去残留的pDNA，利用超滤除去过量的乙醇，由此制造内含pDNA的脂质体。
[0006] 此外，专利文献4中报道了以下方法：在含有水的有机溶剂中，使pDNA与阳离子性脂质以胶束的形式形成复合体，进一步补加脂质，然后利用透析除去有机溶剂，由此制造内含pDNA的脂质体。
[0007] 专利文献5中报道了以下方法：同样地，在表面活性剂的水溶液中，使pDNA与阳离子性脂质以胶束的形式形成复合体，进一步补加脂质，然后利用透析除去表面活性剂，由此制造内含pDNA的脂质体。
[0008] 用于形成上述的复合体的阳离子性脂质通常是具有含有1到多个烃基的脂质亲和性区域、和含有至少一个伯胺、仲胺、叔胺或季铵基的阳离子性的亲水性区域的两亲性分子，一般使用具有2个烃基的阳离子性脂质。
[0009] 另一方面，专利文献6中公开了下述内容：使用具有3个烃基的阳离子性脂质代替具有2个烃基的阳离子性脂质，通过与专利文献3相同的方法而得到了粒径为82-95nm的脂质粒子。该文献中，作为具有3个烃基的阳离子性脂质，具体公开了下式表示的13-B2等：
[0010] [化学式1]
[0011]
[0012] 通过上述方法而制备的封入有核酸的脂质体具有约50-100nm的尺寸。
[0013] 另一方面，非专利文献2中报道了下述内容：在使用封入有(1,2-二氨基环己烷)二氯化铂(II)的粒径为30-100nm的聚合物胶束进行的试验中，聚合物胶束具有的粒径越小，则向肿瘤的递送量越多，抗肿瘤效果越强。另外，非专利文献3中报道了下述内容：通过使用了量子点的渗透性评价实验发现，10nm的量子点在肿瘤内比100nm的量子点更宽泛地分布。也就是说，即使对于脂质粒子而言，向肿瘤的高效递送也需要更小的粒径，但利用上述任一种方法均难以有效地制备具有更小的粒径且稳定性高的脂质粒子。
[0014] 在上述背景下，专利文献7及非专利文献4～7中报道了下述内容：利用为鱼骨状(日文：ヘリッジボーン)结构的微流体将使阳离子性脂质、中性脂质和聚乙二醇化脂质溶解于乙醇中而得到的溶液、与已溶解在乙酸缓冲液中的siRNA混合，除去乙醇从而得到含有siRNA的脂质纳米粒子。该方法中，极性有机溶剂中的阳离子性脂质与核酸发生静电相互作用，从而形成将核酸内封的逆胶束结构，同时，极性有机溶剂的比例减少，由此，制造了具有核酸的逆胶束结构被脂质膜包被而形成的脂质纳米粒子。报道称，该脂质纳米粒子的粒径会根据使溶解有脂质的极性有机溶剂和溶解有核酸的水溶液在微流体中流动的速度、PEG含量的不同而变化，但其粒径非常小。关于使用该方法得到的封入有siRNA的脂质体，报道了其不仅在施予至静脉内时发挥药效、而且在施予至皮下时也在肝脏中发挥药效。
[0015] 现有技术文献
[0016] 专利文献
[0017] 专利文献1：美国专利申请公开第2013/0149374号说明书
[0018] 专利文献2：日本特表2002-501511号公报
[0019] 专利文献3：国际公开第2004/002453号
[0020] 专利文献4：国际公开第96/40964号
[0021] 专利文献5：美国专利申请公开第2010/0041152号说明书
[0022] 专利文献6：美国专利申请公开第2012/0172411号说明书
[0023] 专利文献7：国际公开2011/140627号
[0024] 非专利文献
[0025] 非专利文献1：Biochimica et Biophysica Acta，2012年，第1818卷，1633-1641页[0026] 非专利文献2：Biochimica et Biophysica Acta，2001年，第1510卷，152-166页[0027] 非专利文献3：Proceedings of the National Academy of Sciences，2011年，第108卷，第6期，2426-2431页
[0028] 非专利文献4：The Journal of Physical Chemistry，2012年，第116卷，18440-18450页
[0029] 非专利文献5：Molecular therapy-Nucleic acids，2012年，第1卷，e37
[0030] 非专利文献6：Langmuir，2012年，第28卷，3633-3640页
[0031] 非专利文献7：Journal of Controlled Release，2014年，第196卷，106-112页发明内容
[0032] 发明所要解决的课题
[0033] 本发明的目的在于提供作为药物有用的、较之以往的粒子而言更稳定且经过小型化的含有核酸的脂质纳米粒子、及该脂质纳米粒子的制造方法等。另外，本发明的目的还在于提供对于该脂质纳米粒子的制造而言有用的脂质等。
[0034] 用于解决课题的手段
[0035] 本发明涉及以下的(1)～(91)。
[0036] (1)
[0037] 含有核酸的脂质纳米粒子，所述脂质纳米粒子包含：
[0038] 含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)；
[0039] 水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物；以及
[0040] 核酸。
[0041] (2)
[0042] 如(1)所述的脂质纳米粒子，其中，相对于核酸中的磷原子的摩尔数而言，脂质A中的季铵基的摩尔数为0.01倍摩尔量以上。
[0043] (3)
[0044] 如(1)或(2)所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的脂质，或者为它们的组合，
[0045] [化学式2]
[0046]
[0047] (式(I)中，
[0048] R1～R3相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0049] L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-(式中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-(式中，Y7A～Y7D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p1～p3相同或不同，为1～5的整数)，
[0050] X1为可被取代的C1-C4烷基，
[0051] A1为药学上允许的阴离子)；
[0052] [化学式3]
[0053]
[0054] (式(II)中，
[0055] R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0056] L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-(式中，Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z4～Z6相同或不同，为-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-或-NY14D-CO-O-(式中，Y14A～Y14D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～5的整数)，
[0057] L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-(式中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z7～Z9相同或不同，为-O-、-NY27A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY27B-、-NY27C-CO-或-NY27D-CO-O-(式中，Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p7为1～5的整数，p8为09 10 11 12
～5的整数，p为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为1～5的整数)，[0058] B1为：
[0059] [化学式4]
[0060]
[0061] (式中，X2及X3相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X4为可被取代的C1-C4烷基，X5及X6相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X7为可被取代的C1-C4烷基，Y28～Y37相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z10及Z11相同或不同，为-O-、-NY38A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY38B-、-NY38C-CO-或-NY38D-CO-O-(式中，Y38A～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p13为0～5的整数，p14～p17相同或不同，为1～5的整数)，
[0062] A2为药学上允许的阴离子)；
[0063] [化学式5]
[0064]
[0065] (式(III)中，
[0066] R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0067] L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-(式中，Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-(式中，Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p18为0～5的整数，p19为1～5的整数，p20为0～5的整数)，
[0068] L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-(式中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z15～Z17相同或不同，为-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-、-NY58D-58A 58D 21
CO-O-或-CO-(式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p 为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，p26为1～5的整数)，
[0069] L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-19 67 68 20 69 70 59 70
Z -(CY Y )p31-Z -(CY Y )p32-(式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z18～Z20相同或不同，为-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-CO-、-NY71D-CO-O-或-CO-(式中，Y71A～Y71D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p27为1～5的整数，p28为0～5的整数，p29为0～5的整数，p30为0～5的整数，p31为1～5的整数，p32为0～5的整数)，
[0070] J1及J2相同或不同，为CY72或N(式中，Y72为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0071] B2为：
[0072] [化学式6]
[0073]
[0074] (式中，X8及X9相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X10为可被取代的C1-C4烷基，X11及X12相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X13为可被取代的C1-C4烷基，Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-(式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p33为0～5的整数，p34～p37相同或不同，为1～5的整数)，
[0075] A3为药学上允许的阴离子)；
[0076] [化学式7]
[0077]
[0078] (式(IV)中，
[0079] R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0080] L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-(式中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-(式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p38～p40相同或不同，为1～5的整数)，
[0081] L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-(式中，Y90～Y95相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z26～Z28相同或不同，为-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-(式中，Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数)，
[0082] L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-(式中，Y97～Y108相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-NY109C-CO-、-NY109D-CO-O-或-CO-(式中，Y109A～Y109D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-44 45 46 47 48
C4烷基)，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～
5的整数，p49为1～5的整数)，
[0083] J3为CY110或N(式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0084] X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，
[0085] A4为药学上允许的阴离子)；
[0086] [化学式8]
[0087]
[0088] (式(V’)、式(V”)中，
[0089] R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0090] Y111～Y114相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，
[0091] L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-(式中，Y115～Y120相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z32～Z34相同或不同，为-O-、-NY121A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY121B-、-NY121C-CO-、-NY121D-CO-O-或-CO-(式中，Y121A～Y121D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p51为0～5的整数，p52为1～5的整数，p53为0～5的整数)，
[0092] L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-126 127 128 129 36 130 131 37 132 133 122 133
(CY Y )p56-或-(CY Y )p57-Z -(CY Y )p58-Z -(CY Y )p59-(式中，Y ～Y 相同
或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z35～Z37相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-(式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p54为1～5的整数，p55为0～5的整数，p56为1～5的整数，p57为0
58 59
～5的整数，p 为1～5的整数，p 为1～5的整数)，
[0093] L21及L26相同或不同，其不存在，或者为-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-(式中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z38～Z40相同或不同，为-O-、-NY147A-、-CO-O-、-147B 147C 147D 147A 147D
O-CO-、-CO-NY -、-NR -CO-、-NY -CO-O-或-CO-(式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p60为1～5的整数，p61为0～5的整数，p62为0～5的整数，p63为0～5的整数，p64为1～5的整数，p65为0～5的整数)，
[0094] B3及B4相同或不同地为：
[0095] [化学式9]
[0096]
[0097] (式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X18为可被取代的C1-C4烷基，X19及X20相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂21 148 157
环，X 为可被取代的C1-C4烷基，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z41及Z42相同或不同，为-O-、-NY158A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY158B-、-NY158C-CO-或-NY158D-CO-O-(式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p66为0～5的整数，p67～p70相同或不同，为1～5的整数)，
[0098] A5及A6相同或不同，为药学上允许的阴离子)。
[0099] (4)
[0100] 如(3)所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(I)表示的脂质，式(I)中，L1～L3中的一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，或者L1～L3中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，R1～R3为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。
[0101] (5)
[0102] 如(3)所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(II)表示的脂质，式(II)中，L4～L6中的一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，或者L46 8 9 8 9
～L 中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY Y )p4-、-O-CO-(CY Y )p4-，或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，R4～R6为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。
[0103] (6)
[0104] 如(3)所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(III)表示的脂质，式(III)中，L8～10 39 40 39 40 8 10
L 中的一者为-CO-O-(CY Y )p18-或-O-CO-(CY Y )p18-，或者L ～L 中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY39Y40)p18或-O-CO-(CY39Y40)p18-，R7～R9为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0105] (7)
[0106] 如权利要求3所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(IV)表示的脂质，式(IV)中，L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-，或者L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-；R10～R12为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0107] (8)
[0108] 如(3)所述的脂质纳米粒子，其中，脂质A为式(V’)表示的脂质，式(V’)中，L17～L19中的一者为-CO-O-或-O-，或者L17～L19中的2个以上相同或不同地为-CO-O-或-O-，R13～R15为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0109] (9)
[0110] 如(1)～(8)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，相对于全部脂质的摩尔数而言，水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物的含量为0.005倍摩尔量以上。
[0111] (10)
[0112] 如(1)～(9)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物的水溶性高分子部分选自由聚乙二醇、聚甘油、聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸及聚丙烯酰胺组成的组。
[0113] (11)
[0114] 如(1)～(10)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，全部脂质的摩尔数相对于核酸的摩尔数的比率(全部脂质的摩尔数/核酸的摩尔数)为50以上。
[0115] (12)
[0116] 如(1)～(11)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，核酸为具有利用了RNA干扰(RNAi)的、靶基因表达抑制作用的核酸。
[0117] (13)
[0118] 如(12)所述的脂质纳米粒子，其中，靶基因为与肿瘤或炎症相关的基因。
[0119] (14)
[0120] 如(1)～(13)中任一项所述的脂质纳米粒子，所述脂质纳米粒子还包含脂质(脂质B)，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基或1个季铵基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。
[0121] (15)
[0122] 如(14)所述的脂质纳米粒子，其中，相对于全部脂质的摩尔数而言，脂质B的含量为0.1倍摩尔量以上。
[0123] (16)
[0124] 如(14)或者(15)所述的脂质纳米粒子，其中，其中，相对于核酸中的磷原子的摩尔数而言，脂质B中的亲水部的氨基或季铵基的摩尔数为0.01倍摩尔量以上。
[0125] (17)
[0126] 如(14)～(16)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，脂质B为式(CL-I)、式(CL-II)、式(CL-III)、式(CL-IV)、式(CL-V)、式(CL-VI)或式(CL-VII)，
[0127] [化学式10]
[0128]
[0129] (式(CL-I)中，
[0130] R101及R102相同或不同，为直链或支链状的C10-C24烷基、C10-C24链烯基或C10-C24炔基，
[0131] L101及L102为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基，
[0132] L103为单键、-CO-或-CO-O-，
[0133] L103为单键时，
[0134] X101为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，
[0135] L103为-CO-或-CO-O-时，
[0136] X101为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基)；
[0137] [化学式11]
[0138]
[0139] (式(CL-II)中，
[0140] R103及R104相同或不同，为直链或支链状的C12-C24烷基、C12-C24链烯基或C12-C24炔基，
[0141] p101及p102相同或不同，为0～3的整数，
[0142] L106及L107为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基，
[0143] L104及L105相同或不同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，
[0144] L108为单键、-CO-或-CO-O-，
[0145] L108为单键时，
[0146] X102为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，
[0147] L108为-CO-或-CO-O-时，
[0148] X102为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基)；
[0149] [化学式12]
[0150]
[0151] (式(CL-III)中，
[0152] R105为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0153] R106为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，
[0154] X103及X104相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，或者X103与L111键合到一起而形成C2-C8亚烷基，
[0155] L111为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基或二烷基氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，或者与X103键合到一起而形成C2-C8亚烷基，
[0156] L109为C1-C6亚烷基，
[0157] L110为单键、或C1-C6亚烷基，其中，L109和L110的碳原子数之和为7以下，L111为氢原110 111 103 110
子的情况下，L 为单键，L 与X 键合到一起而形成C2-C6亚烷基的情况下，L 为单键、或者亚甲基或亚乙基)；
[0158] [化学式13]
[0159]
[0160] (式(CL-IV)中，
[0161] R107为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0162] R108为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基)；
[0163] [化学式14]
[0164]
[0165] (式(CL-V)中，
[0166] R109为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0167] R110为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，
[0168] L112为C1-C3亚烷基，
[0169] X105为氢原子或C1-C3烷基)；
[0170] [化学式15]
[0171]
[0172] (式(CL-VI)中，
[0173] R111及R112相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0174] X106及X107相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，[0175] p103～p105相同或不同，为0或1，其中，p103～p105不会同时为0，
[0176] L113及L114相同或不同，为O、S或NH)；
[0177] [化学式16]
[0178]
[0179] (式(CL-VII)中，
[0180] R113及R114相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0181] X109及X110相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，[0182] X108为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，
[0183] L115为-CO-O-或-O-CO-，
[0184] p106为0～3的整数，p107为1～4的整数)。
[0185] (18)
[0186] 如(1)～(17)中任一项所述的脂质纳米粒子，所述脂质纳米粒子还包含中性脂质。
[0187] (19)
[0188] 如(18)所述的脂质纳米粒子，其中，相对于全部脂质的摩尔数而言，中性脂质的含量为0.05倍摩尔量以上。
[0189] (20)
[0190] 如(18)或者(19)所述的脂质纳米粒子，其中，中性脂质选自由磷脂、甾醇、甘油糖脂、神经鞘糖脂(glycosphingolipid)及鞘氨基醇(sphingoid)组成的组。
[0191] (21)
[0192] 如(1)～(20)中任一项所述的脂质纳米粒子，所述脂质纳米粒子的平均粒径为20～65nm。
[0193] (22)
[0194] 含有核酸的脂质纳米粒子的制造方法，所述制造方法包括下述工序：
[0195] 工序(a)，在能与水混合的有机溶剂和水的混合溶剂中，将含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)、与核酸混合，从而制备含有脂质A和核酸的第一脂质溶液；
[0196] 工序(b)，向第一脂质溶液中添加含有水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物的第二脂质溶液，从而制备第三脂质溶液；及
[0197] 工序(c)，向第三脂质溶液中添加水或缓冲剂水溶液。
[0198] (23)
[0199] 如(22)所述的制造方法，其中，工序(a)中包括与脂质A及核酸同时地混合下述成分中的一种以上的步骤，所述成分为：水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物；中性脂质；及脂质(脂质B)，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。
[0200] (24)
[0201] 如(22)所述的制造方法，其中，工序(b)中的第二脂质溶液还含有中性脂质、及/或脂质(脂质B)，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。
[0202] (25)
[0203] 如(22)～(24)中任一项所述的制造方法，其中，其中，能与水混合的有机溶剂为醇、二甲基亚砜、四氢呋喃、丙酮、乙腈或它们的混合物。
[0204] (26)
[0205] 如(22)～(24)中任一项所述的制造方法，其中，能与水混合的有机溶剂为醇。
[0206] (27)
[0207] 如(25)或者(26)所述的制造方法，其中，醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或它们的混合物。
[0208] (28)
[0209] 如(22)～(27)中任一项所述的制造方法，其中，使工序(b)中得到的第三脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂的含量相对于该溶液而言为50％(v/v)以上。
[0210] (29)
[0211] 如(22)～(28)中任一项所述的制造方法，其中，工序(c)中，通过添加水或缓冲剂水溶液，从而使工序(b)中得到的第三脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂浓度成为50％(v/v)以下。
[0212] (30)
[0213] 如(29)所述的制造方法，其中，在1分钟以内使工序(b)中得到的第三脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂浓度成为50％(v/v)以下。
[0214] (31)
[0215] 如(22)～(30)中任一项所述的制造方法，其中，相对于核酸中的磷原子的摩尔数而言，脂质A中的季铵基的摩尔数为0.01倍摩尔量以上。
[0216] (32)
[0217] 如(22)～(31)中任一项所述的制造方法，其中，使工序(a)中得到的第一脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂的含量相对于该溶液而言为50％(v/v)以上。
[0218] (33)
[0219] 如(22)～(32)中任一项所述的制造方法，其中，缓冲剂水溶液为磷酸缓冲水溶液、柠檬酸缓冲水溶液或乙酸缓冲水溶液。
[0220] (34)
[0221] 如(22)～(33)中任一项所述的制造方法，其中，工序(c)中得到的溶液中的全部脂质的摩尔数相对于核酸的摩尔数的比率、即全部脂质的摩尔数/核酸的摩尔数为50以上。
[0222] (35)
[0223] 如(22)～(34)中任一项所述的制造方法，其中，核酸为具有利用了RNA干扰(RNAi)的、靶基因表达抑制作用的核酸。
[0224] (36)
[0225] 如(35)所述的制造方法，其中，靶基因为与肿瘤或炎症相关的基因。
[0226] (37)
[0227] 如(22)～(36)中任一项所述的制造方法，其中，脂质A为式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的脂质，或者为它们的组合，
[0228] [化学式17]
[0229]
[0230] (式(I)中，
[0231] R1～R3相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0232] L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-(式中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-(式中，Y7A～Y7D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p1～p3相同或不同，为1～5的整数)，
[0233] X1为可被取代的C1-C4烷基，
[0234] A1为药学上允许的阴离子)；
[0235] [化学式18]
[0236]
[0237] (式(II)中，
[0238] R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0239] L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-(式中，Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z4～Z6相同或不同，为-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-或-NY14D-CO-O-(式中，Y14A～Y14D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～5的整数)，
[0240] L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-(式中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷7 9 27A 27B 27C 27D
基，Z～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-或-NY -CO-O-(式中，Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p7为1～5的整数，p8为0～5的整数，p9为1～5的整数，p10为0～5的整数，p11为1～5的整数，p12为1～5的整数)，[0241] B1为：
[0242] [化学式19]
[0243]
[0244] (式中，X2及X3相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X4为可被取代的C1-C4烷基，X5及X6相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X7为可被取代的C1-C4烷基，Y28～Y37相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z10及Z11相同或不同，为-O-、-NY38A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY38B-、-NY38C-CO-或-NY38D-CO-O-(式中，Y38A～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p13为0～5的整数，p14～p17相同或不同，为1～5的整数)，
[0245] A2为药学上允许的阴离子)；
[0246] [化学式20]
[0247]
[0248] (式(III)中，
[0249] R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0250] L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-(式中，Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-(式中，Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p18为0～5的整数，p19为1～5的整数，p20为0～5的整数)，
[0251] L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-(式中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z15～Z17相同或不同，为-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-、-NY58D-CO-O-或-CO-(式中，Y58A～Y58D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p21为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，p26为1～5的整数)，
[0252] L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-(式中，Y59～Y70相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z18～Z20相同或不同，为-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-CO-、-NY71D-CO-O-或-CO-(式中，Y71A～Y71D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p27为1～5的28 29 30 31 32
整数，p 为0～5的整数，p 为0～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数)，
[0253] J1及J2相同或不同，为CY72或N(式中，Y72为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0254] B2为：
[0255] [化学式21]
[0256]
[0257] (式中，X8及X9相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X10为可被取代的C1-C4烷基，X11及X12相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X13为可被取代的C1-C4烷基，Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-(式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p33为0～5的整数，p34～p37相同或不同，为1～5的整数)，
[0258] A3为药学上允许的阴离子)；
[0259] [化学式22]
[0260]
[0261] (式(IV)中，
[0262] R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0263] L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-(式中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-(式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p38～p40相同或不同，为1～5的整数)，
[0264] L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-94 95 90 95 26 28
(CY Y )p43-(式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-(式中，Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数)，
[0265] L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-(式中，Y97～Y108相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-NY109C-CO-、-NY109D-CO-O-或-CO-(式中，Y109A～Y109D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-44 45 46 47 48
C4烷基)，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～
5的整数，p49为1～5的整数)，
[0266] J3为CY110或N(式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0267] X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，
[0268] A4为药学上允许的阴离子)；
[0269] [化学式23]
[0270]
[0271] (式(V’)、式(V”)中，
[0272] R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0273] Y111～Y114相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，
[0274] L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-(式中，Y115～Y120相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C432 34 121A 121B 121C
烷基，Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-、-NY121D-CO-O-或-CO-(式中，Y121A～Y121D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p51为0～5的整数，p52为1～5的整数，p53为0～5的整数)，
[0275] L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-126 127 128 129 36 130 131 37 132 133 122 133
(CY Y )p56-或-(CY Y )p57-Z -(CY Y )p58-Z -(CY Y )p59-(式中，Y ～Y 相同
或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z35～Z37相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-(式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p54为1～5的整数，p55为0～5的整数，p56为1～5的整数，p57为0～5的整数，p58为1～5的整数，p59为1～5的整数)，
[0276] L21及L26相同或不同，其不存在，或者为-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-(式中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z38～Z40相同或不同，为-O-、-NY147A-、-CO-O-、-147B 147C 147D 147A 147D
O-CO-、-CO-NY -、-NR -CO-、-NY -CO-O-或-CO-(式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p60为1～5的整数，p61为0～5的整数，p62为0～5的整数，p63为0～5的整数，p64为1～5的整数，p65为0～5的整数)，
[0277] B3及B4相同或不同地为：
[0278] [化学式24]
[0279]
[0280] (式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X18为可被取代的C1-C4烷基，X19及X20相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X21为可被取代的C1-C4烷基，Y148～Y157相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z41及Z42相同或不同，为-O-、-NY158A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY158B-、-NY158C-CO-或-NY158D-CO-O-(式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p66为0～5的整数，p67～p70相同或不同，为1～5的整数)，
[0281] A5及A6相同或不同，为药学上允许的阴离子)。
[0282] (38)
[0283] 如(37)所述的制造方法，其中，脂质A为式(I)表示的脂质，式(I)中，L1～L3中的一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，或者L1～L3中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，R1～R3为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。
[0284] (39)
[0285] 如(37)所述的制造方法，其中，脂质A为式(II)表示的脂质，式(II)中，L4～L6中的一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，或者L4～L6中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-12 13 4 6
O-(CY Y )p6-，R～R为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。
[0286] (40)
[0287] 如(37)所述的制造方法，其中，脂质A为式(III)表示的脂质，式(III)中，L8～L10中的一者为-CO-O-(CY39Y40)p18-或-O-CO-(CY39Y40)p18-，或者L8～L10中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY39Y40)p18或-O-CO-(CY39Y40)p18-，R7～R9为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0288] (41)
[0289] 如(37)所述的制造方法，其中，脂质A为式(IV)表示的脂质，式(IV)中，L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-，或者L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-90 91 13 83 84 83 84 14 15
或-O-CO-(CY Y )p41-，或者L 为-CO-O-(CY Y )p38-或-O-CO-(CY Y )p38-、且L 及L 相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-；R10～R12为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0290] (42)
[0291] 如(37)所述的制造方法，其中，脂质A为式(V’)表示的脂质，式(V’)中，L17～L19中的一者为-CO-O-或-O-，或者L17～L19中的2个以上相同或不同地为-CO-O-或-O-，R13～R15为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0292] (43)
[0293] 如(22)～(42)中任一项所述的制造方法，其中，工序(a)中，与脂质A及核酸同时地混合脂质(脂质B)，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。
[0294] (44)
[0295] 如(43)所述的制造方法，其中，脂质B为式(CL-I)、式(CL-II)、式(CL-III)、式(CL-IV)、式(CL-V)、式(CL-VI)或式(CL-VII)，
[0296] [化学式25]
[0297]
[0298] (式中，R101及R102相同或不同，为直链或支链状的C10-C24烷基、C10-C24链烯基或C10-C24炔基，
[0299] L101及L102为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基，
[0300] L103为单键、-CO-或-CO-O-，
[0301] L103为单键时，
[0302] X101为氢原子、C1-6烷基、C3-6链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，
[0303] L103为-CO-或-CO-O-时，
[0304] X101为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基)；
[0305] [化学式26]
[0306]
[0307] (式中，R103及R104相同或不同，为直链或支链状的C12-C24烷基、C12-C24链烯基或C12-C24炔基，
[0308] p101及p102相同或不同，为0～3的整数，
[0309] L106及L107为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C2-C8亚烷基，
[0310] L104及L105相同或不同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，
[0311] L108为单键、-CO-或-CO-O-，
[0312] L108为单键时，
[0313] X102为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，
[0314] L108为-CO-或-CO-O-时，
[0315] X102为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基)；
[0316] [化学式27]
[0317]
[0318] (式(CL-III)中，R105为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，[0319] R106为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，
[0320] X103及X104相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，或者X103与L111键合到一起而形成C2-C8亚烷基，
[0321] L111为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基或二烷基氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或103
C3-C6链烯基，或者与X 键合到一起而形成C2-C8亚烷基，
[0322] L109为C1-C6亚烷基，
[0323] L110为单键、或C1-C6亚烷基，其中，L109和L110的碳原子数之和为7以下，L111为氢原子的情况下，L110为单键，L111与X103键合到一起而形成C2-C6亚烷基的情况下，L110为单键、或者亚甲基或亚乙基)；
[0324] [化学式28]
[0325]
[0326] (式(CL-IV)中，
[0327] R107为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0328] R108为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基)；
[0329] [化学式29]
[0330]
[0331] (式(CL-V)中，
[0332] R109为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0333] R110为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，
[0334] L112为C1-C3亚烷基，
[0335] X105为氢原子或C1-C3烷基)；
[0336] [化学式30]
[0337]
[0338] (式(CL-VI)中，
[0339] R111及R112相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0340] X106及X107相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，[0341] p103、p104及p105相同或不同，为0或1，其中，p103、p104及p105不会同时为0，[0342] L113及L114相同或不同，为O、S或NH)；
[0343] [化学式31]
[0344]
[0345] (式(CL-VII)中，R113及R114相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0346] X109及X110相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，[0347] X108为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，
[0348] L115为-CO-O-或-O-CO-，
[0349] p106为0～3的整数，
[0350] p107为1～4的整数)。
[0351] (45)
[0352] 如(44)所述的含有核酸的脂质纳米粒子的制造方法，所述制造方法包括下述工序：
[0353] 工序(a)，在能与水混合的有机溶剂和水的混合溶剂中，将含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)、核酸、和水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物进行混合，从而制备含有脂质和核酸的第一脂质溶液；及
[0354] 工序(b)，向第一脂质溶液中添加水或缓冲剂水溶液。
[0355] (46)
[0356] 如(45)所述的制造方法，其中，工序(a)中包括将中性脂质、及/或脂质(脂质B)进行混合的步骤，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。
[0357] (47)
[0358] 如(45)或者(46)所述的制造方法，其中，能与水混合的有机溶剂为醇、二甲基亚砜、四氢呋喃、丙酮、乙腈或它们的混合物。
[0359] (48)
[0360] 如(45)或者(46)所述的制造方法，其中，能与水混合的有机溶剂为醇。
[0361] (49)
[0362] 如(47)或者(48)所述的制造方法，其中，醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或它们的混合物。
[0363] (50)
[0364] 如(45)～(49)中任一项所述的制造方法，其中，工序(a)中得到的第一脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂的含量相对于该溶液而言为50％(v/v)以上。
[0365] (51)
[0366] 如(45)～(50)中任一项所述的制造方法，其中，工序(b)中，通过添加水或缓冲剂水溶液，从而使工序(a)中得到的第一脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂浓度成为50％(v/v)以下。
[0367] (52)
[0368] 如(51)所述的制造方法，其中，在1分钟以内使工序(a)中得到的第一脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂浓度成为50％(v/v)以下。
[0369] (53)
[0370] 如(45)～(52)中任一项所述的制造方法，其中，相对于核酸中的磷原子的摩尔数而言，脂质A中的季铵基摩尔数为0.01倍摩尔量以上。
[0371] (54)
[0372] 如(45)～(53)中任一项所述的制造方法，其中，使工序(a)中得到的第一脂质溶液中的能与水混合的有机溶剂的含量相对于该溶液而言为50％(v/v)以上。
[0373] (55)
[0374] 如(45)～(54)中任一项所述的制造方法，其中，缓冲剂水溶液为磷酸缓冲水溶液、柠檬酸缓冲水溶液或乙酸缓冲水溶液。
[0375] (56)
[0376] 如(45)～(55)中任一项所述的制造方法，其中，工序(a)中使用的全部脂质的摩尔数相对于核酸的摩尔数的比率(全部脂质的摩尔数/核酸的摩尔数)为50以上。
[0377] (57)
[0378] 如(45)～(56)中任一项所述的制造方法，其中，核酸为具有利用了RNA干扰(RNAi)的、靶基因表达抑制作用的核酸。
[0379] (58)
[0380] 如(57)所述的制造方法，其中，靶基因为与肿瘤或炎症相关的基因。
[0381] (59)
[0382] 如(45)～(58)中任一项所述的制造方法，其中，脂质A为式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的脂质，或者为它们的组合，
[0383] [化学式32]
[0384]
[0385] (式(I)中，
[0386] R1～R3相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0387] L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-(式中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-(式中，Y7A～Y7D相同或不同，为氢1 3
原子或可被取代的C1-C4烷基)，p～p相同或不同，为1～5的整数)，
[0388] X1为可被取代的C1-C4烷基，
[0389] A1为药学上允许的阴离子)；
[0390] [化学式33]
[0391]
[0392] (式(II)中，
[0393] R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0394] L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-(式中，Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z4～Z6相同或不14A 14B 14C 14D 14A 14D
同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-或-NY -CO-O-(式中，Y ～Y相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～5的整数)，
[0395] L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-(式中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z7～Z9相同或不同，为-O-、-NY27A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY27B-、-NY27C-CO-或-NY27D-CO-O-(式中，Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p7为1～5的整数，p8为0～5的整数，p9为1～5的整数，p10为0～5的整数，p11为1～5的整数，p12为1～5的整数)，[0396] B1为：
[0397] [化学式34]
[0398]
[0399] (式中，X2及X3相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X4为可被取代的C1-C4烷基，X5及X6相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X728 37 10 11
为可被取代的C1-C4烷基，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z 及Z相同或不同，为-O-、-NY38A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY38B-、-NY38C-CO-或-NY38D-CO-O-(式中，Y38A～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p13为0～5的整数，p14～p17相同或不同，为1～5的整数)，
[0400] A2为药学上允许的阴离子)；
[0401] [化学式35]
[0402]
[0403] (式(III)中，
[0404] R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0405] L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-(式中，Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-(式中，Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p18为0～5的整数，p19为1～5的整数，p20为0～5的整数)，
[0406] L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-(式中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z15～Z17相同或不同，为-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-、-NY58D-CO-O-或-CO-(式中，Y58A～Y58D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p21为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，p26为1～5的整数)，
[0407] L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-(式中，Y59～Y70相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z18～Z20相同或不同，为-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-CO-、-NY71D-CO-O-或-CO-(式中，Y71A～Y71D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p27为1～5的整数，p28为0～5的整数，p29为0～5的整数，p30为0～5的整数，p31为1～5的整数，p32为0～5的整数)，
[0408] J1及J2相同或不同，为CY72或N(式中，Y72为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0409] B2为：
[0410] [化学式36]
[0411]
[0412] (式中，X8及X9相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X10为可被取代的C1-C4烷基，X11及X12相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X13为可被取代的C1-C4烷基，Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-(式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p33为0～5的整数，p34～p37相同或不同，为1～5的整数)，
[0413] A3为药学上允许的阴离子)；
[0414] [化学式37]
[0415]
[0416] (式(IV)中，
[0417] R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0418] L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-(式中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-(式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p38～p40相同或不同，为1～5的整数)，
[0419] L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-(式中，Y90～Y95相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z26～Z28相同或不同，为-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-(式中，Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数)，
[0420] L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-(式中，Y97～Y108相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-NY109C-CO-、-NY109D-CO-O-或-CO-(式中，Y109A～Y109D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p44为1～5的整数，p45为0～5的整数，p46为1～5的整数，p47为0～5的整数，p48为1～5的整数，p49为1～5的整数)，
[0421] J3为CY110或N(式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0422] X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，
[0423] A4为药学上允许的阴离子)；
[0424] [化学式38]
[0425]
[0426] (式(V’)、式(V”)中，
[0427] R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0428] Y111～Y114相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，
[0429] L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-117 118 34 119 120 115 120
(CY Y )p52-Z -(CY Y )p53-(式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z32～Z34相同或不同，为-O-、-NY121A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY121B-、-NY121C-CO-、-NY121D-CO-O-或-CO-(式中，Y121A～Y121D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p51为0～5的整数，p52为1～5的整数，p53为0～5的整数)，
[0430] L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-(式中，Y122～Y133相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z35～Z37相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-(式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原54 55 56 57
子或可被取代的C1-C4烷基)，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p58为1～5的整数，p59为1～5的整数)，
[0431] L21及L26相同或不同，其不存在，或者为-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-(式中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z38～Z40相同或不同，为-O-、-NY147A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY147B-、-NR147C-CO-、-NY147D-CO-O-或-CO-(式中，Y147A～Y147D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p60为1～5的整数，p61为0～5的整数，p62为0～5的整数，p63为0～5的整数，p64为1～5的整数，p65为0～5的整数)，
[0432] B3及B4相同或不同地为：
[0433] [化学式39]
[0434]
[0435] (式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X18为可被取代的C1-C4烷基，X19及X20相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X21为可被取代的C1-C4烷基，Y148～Y157相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，41 42 158A 158B 158C 158D
Z 及Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-或-NY -CO-O-(式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p66为0～5的整数，p67～p70相同或不同，为1～5的整数)，
[0436] A5及A6相同或不同，为药学上允许的阴离子)。
[0437] (60)
[0438] 如(59)所述的制造方法，其中，脂质A为式(I)表示的脂质，式(I)中，L1～L3中的一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-、或者L1～L3中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，R1～R3为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。
[0439] (61)
[0440] 如(59)所述的制造方法，其中，脂质A为式(II)表示的脂质，式(II)中，L4～L6中的一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，或者L4～L6中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，R4～R6为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。
[0441] (62)
[0442] 如(59)所述的制造方法，其中，脂质A为式(III)表示的脂质，式(III)中，L8～L10中的一者为-CO-O-(CY39Y40)p18-或-O-CO-(CY39Y40)p18-，或者L8～L10中的2个以上相同或不同地39 40 39 40 7 9
为-CO-O-(CY Y )p18或-O-CO-(CY Y )p18-，R～R为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0443] (63)
[0444] 如(59)所述的制造方法，其中，脂质A为式(IV)表示的脂质，式(IV)中，L13为-CO-O-83 84 83 84 14 15 90 91
(CY Y )p38-或-O-CO-(CY Y )p38-，或者L 及L 中的一者为-CO-O-(CY Y )p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15相同
90 91 90 91 10 12
或不同地为-CO-O-(CY Y )p41-或-O-CO-(CY Y )p41-；R ～R 为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0445] (64)
[0446] 如(59)所述的制造方法，其中，脂质A为式(V’)表示的脂质，式(V’)中，L17～L19中的一者为-CO-O-或-O-，或者L17～L19中的2个以上相同或不同地为-CO-O-或-O-，R13～R15为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0447] (65)
[0448] 如(45)～(64)中任一项所述的制造方法，其中，工序(a)中，工序(a)中包括与脂质A、核酸及水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物同时地混合脂质(脂质B)的步骤，所述脂质(脂质B)包含亲水部及疏水部，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基。
[0449] (66)
[0450] 如(65)所述的制造方法，其中，脂质B为式(CL-I)、式(CL-II)、式(CL-III)、式(CL-IV)、式(CL-V)、式(CL-VI)或式(CL-VII)，
[0451] [化学式40]
[0452]
[0453] (式(CL-I)中，R101及R102相同或不同，为直链或支链状的C10-C24烷基、C10-C24链烯基或C10-C24炔基，
[0454] L101及L102为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基，
[0455] L103为单键、-CO-或-CO-O-，
[0456] L103为单键时，
[0457] X101为氢原子、C1-C6的烷基、C3-C6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6的烷基或C3-C6的链烯基，
[0458] L103为-CO-或-CO-O-时，
[0459] X101为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6的烷基或C3-C6的链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基)；
[0460] [化学式41]
[0461]
[0462] (式(CL-II)中，
[0463] R103及R104相同或不同，为直链或支链状的C12-C24烷基、C12-C24链烯基或C12-C24炔基，
[0464] p101及p102相同或不同，为0～3的整数，
[0465] L106及L107为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C2-C8亚烷基，
[0466] L104及L105相同或不同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，
[0467] L108为单键、-CO-或-CO-O-，
[0468] L108为单键时，
[0469] X102为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，
[0470] L108为-CO-或-CO-O-时，
[0471] X102为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基)；
[0472] [化学式42]
[0473]
[0474] (式(CL-III)中，
[0475] R105为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0476] R106为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，
[0477] X103及X104相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，或者X103与L111键合到一起而形成C2-C8亚烷基，
[0478] L111为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基或二烷基氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，或者与X103键合到一起而形成C2-C8亚烷基，
[0479] L109为C1-C6亚烷基，
[0480] L110为单键、或C1-C6亚烷基，其中，L109和L110的碳原子数之和为7以下，L111为氢原子的情况下，L110为单键，L111与X103键合到一起而形成C2-C6亚烷基的情况下，L110为单键、或者亚甲基或亚乙基)；
[0481] [化学式43]
[0482]
[0483] (式(CL-IV)中，R107为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，[0484] R108为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基)；
[0485] [化学式44]
[0486]
[0487] (式(CL-V)中，R109为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，[0488] R110为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，
[0489] L112为C1-C3亚烷基，
[0490] X105为氢原子或C1-C3烷基)；
[0491] [化学式45]
[0492]
[0493] (式(CL-VI)中，R111及R112相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0494] X106及X107相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，[0495] p103、p104及p105相同或不同，为0或1，其中，p103、p104及p105不会同时为0，[0496] L113及L114相同或不同，为O、S或NH)；
[0497] [化学式46]
[0498]
[0499] (式(CL-VII)中，R113及R114相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0500] X109及X110相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，[0501] X108为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，
[0502] L115为-CO-O-或-O-CO-，
[0503] p106为0～3的整数，
[0504] p107为1～4的整数)。
[0505] (67)
[0506] 含有核酸的脂质纳米粒子，其是利用(22)～(66)中任一项所述的制造方法而得到的。
[0507] (68)
[0508] 将含有核酸的脂质纳米粒子稳定化的方法，其中，在构成含有核酸的脂质纳米粒子的脂质膜中使用脂质(脂质A)，所述脂质(脂质A)含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基。
[0509] (69)
[0510] 如(68)所述的方法，其中，相对于核酸中的磷原子的摩尔数而言，脂质A中的季铵基的摩尔数为0.01倍摩尔量以上。
[0511] (70)
[0512] 如(68)或者(69)所述的方法，其中，脂质A为式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的脂质，或者为它们的组合，
[0513] [化学式47]
[0514]
[0515] (式(I)中，
[0516] R1～R3相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0517] L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-(式中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-(式中，Y7A～Y7D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p1～p3相同或不同，为1～5的整数)，
[0518] X1为可被取代的C1-C4烷基，
[0519] A1为药学上允许的阴离子)；
[0520] [化学式48]
[0521]
[0522] (式(II)中，
[0523] R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0524] L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-(式中，Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z4～Z6相同或不同，为-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-或-NY14D-CO-O-(式中，Y14A～Y14D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～5的整数)，
[0525] L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-(式中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z7～Z9相同或不同，为-O-、-NY27A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY27B-、-NY27C-CO-或-NY27D-CO-27A 27D 7 8
O-(式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p为1～5的整数，p为0～5的整数，p9为1～5的整数，p10为0～5的整数，p11为1～5的整数，p12为1～5的整数)，[0526] B1为：
[0527] [化学式49]
[0528]
[0529] (式中，X2及X3相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X4为可被取代的C1-C4烷基，X5及X6相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X7为可被取代的C1-C4烷基，Y28～Y37相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z10及Z11相同或不同，为-O-、-NY38A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY38B-、-NY38C-CO-或-NY38D-CO-O-(式中，Y38A～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p13为0～5的整数，p14～p17相同或不同，为1～5的整数)，
[0530] A2为药学上允许的阴离子)；
[0531] [化学式50]
[0532]
[0533] (式(III)中，
[0534] R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0535] L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-(式中，Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-(式中，Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p18为0～5的整数，p19为1～5的整数，p20为0～5的整数)，
[0536] L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-(式中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z15～Z17相同或不同，为-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-、-NY58D-58A 58D 21
CO-O-或-CO-(式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p 为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，p26为1～5的整数)，
[0537] L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-19 67 68 20 69 70 59 70
Z -(CY Y )p31-Z -(CY Y )p32-(式中，Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z18～Z20相同或不同，为-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-CO-、-NY71D-CO-O-或-CO-(式中，Y71A～Y71D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p27为1～5的整数，p28为0～5的整数，p29为0～5的整数，p30为0～5的整数，p31为1～5的整数，p32为0～5的整数)，
[0538] J1及J2相同或不同，为CY72或N(式中，Y72为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0539] B2为：
[0540] [化学式51]
[0541]
[0542] (式中，X8及X9相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X10为可被取代的C1-C4烷基，X11及X12相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X13为可被取代的C1-C4烷基，Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-(式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p33为0～5的整数，p34～p37相同或不同，为1～5的整数)，
[0543] A3为药学上允许的阴离子)；
[0544] [化学式52]
[0545]
[0546] (式(IV)中，
[0547] R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0548] L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-(式中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-(式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p38～p40相同或不同，为1～5的整数)，
[0549] L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-(式中，Y90～Y95相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z26～Z28相同或不同，为-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-(式中，Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数)，
[0550] L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-(式中，Y97～Y108相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-NY109C-CO-、-NY109D-CO-O-或-CO-(式中，Y109A～Y109D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-44 45 46 47 48
C4烷基)，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～
5的整数，p49为1～5的整数)，
[0551] J3为CY110或N(式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0552] X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，
[0553] A4为药学上允许的阴离子)；
[0554] [化学式53]
[0555]
[0556] (式(V’)、式(V”)中，
[0557] R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0558] Y111～Y114相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，
[0559] L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-(式中，Y115～Y120相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C432 34 121A 121B 121C
烷基，Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-、-NY121D-CO-O-或-CO-(式中，Y121A～Y121D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p51为0～5的整数，p52为1～5的整数，p53为0～5的整数)，
[0560] L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-126 127 128 129 36 130 131 37 132 133 122 133
(CY Y )p56-或-(CY Y )p57-Z -(CY Y )p58-Z -(CY Y )p59-(式中，Y ～Y 相同
或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z35～Z37相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-(式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p54为1～5的整数，p55为0～5的整数，p56为1～5的整数，p57为0
58 59
～5的整数，p 为1～5的整数，p 为1～5的整数)，
[0561] L21及L26相同或不同，其不存在，或者为-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-(式中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z38～Z40相同或不同，为-O-、-NY147A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY147B-、-NR147C-CO-、-NY147D-CO-O-或-CO-(式中，Y147A～Y147D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p60为1～5的整数，p61为0～5的整数，p62为0～5的整数，p63为0～5的整数，p64为1～5的整数，p65为0～5的整数)，
[0562] B3及B4相同或不同地为：
[0563] [化学式54]
[0564]
[0565] (式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X18为可被取代的C1-C4烷基，X19及X20相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X21为可被取代的C1-C4烷基，Y148～Y157相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，41 42 158A 158B 158C 158D
Z 及Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-或-NY -CO-O-(式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p66为0～5的整数，p67～p70相同或不同，为1～5的整数)，
[0566] A5及A6相同或不同，为药学上允许的阴离子)。
[0567] (71)
[0568] 如(70)所述的方法，其中，脂质A为式(I)表示的脂质，式(I)中，L1～L3中的一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，或者L1～L3中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，R1～R3为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。
[0569] (72)
[0570] 如(70)所述的方法，其中，脂质A为式(II)表示的脂质，式(II)中，L4～L6中的一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，或者L4～L6中8 9 8 9 10 11
的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY Y)p4-、-O-CO-(CY Y)p4-、或-O-CO-(CY Y )p5-O-(CY12Y13)p6-，R4～R6为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。
[0571] (73)
[0572] 如(70)所述的方法，其中，脂质A为式(III)表示的脂质，式(III)中，L8～L10中的一39 40 39 40 8 10
者为-CO-O-(CY Y )p18-或-O-CO-(CY Y )p18-，或者L～L 中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY39Y40)p18或-O-CO-(CY39Y40)p18-，R7～R9为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0573] (74)
[0574] 如(70)所述的方法，其中，脂质A为式(IV)表示的脂质，式(IV)中，L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-，或者L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-；R10～R12为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0575] (75)
[0576] 如(70)所述的方法，其中，脂质A为式(V’)表示的脂质，式(V’)中，L17～L19中的一者为-CO-O-或-O-，或者L17～L19中的2个以上相同或不同地为-CO-O-或-O-，R13～R15为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0577] (76)
[0578] 脂质(脂质A)，其含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基，并且，所述脂质(脂质A)选自由式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的脂质组成的组，
[0579] [化学式55]
[0580]
[0581] (式(I)中，
[0582] R1～R3相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0583] L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-(式中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-(式中，Y7A～Y7D相同或不同，为氢1 3
原子或可被取代的C1-C4烷基)，p～p相同或不同，为1～5的整数)，
[0584] X1为可被取代的C1-C4烷基，
[0585] A1为药学上允许的阴离子)；
[0586] [化学式56]
[0587]
[0588] (式(II)中，
[0589] R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0590] L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-(式中，Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z4～Z6相同或不同，为-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-或-NY14D-CO-O-(式中，Y14A～Y14D4 5 6
相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p为0～5的整数)，
[0591] L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-(式中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z7～Z9相同或不同，为-O-、-NY27A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY27B-、-NY27C-CO-或-NY27D-CO-O-(式中，Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p7为1～5的整数，p8为0～5的整数，p9为1～5的整数，p10为0～5的整数，p11为1～5的整数，p12为1～5的整数)，[0592] B1为：
[0593] [化学式57]
[0594]
[0595] (式中，X2及X3相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X4为可被取代的C1-C4烷基，X5及X6相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X7为可被取代的C1-C4烷基，Y28～Y37相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z10及Z11相同或不同，为-O-、-NY38A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY38B-、-NY38C-CO-或-NY38D-CO-O-(式中，Y38A～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p13为0～5的整数，p14～p17相同或不同，为1～5的整数)，
[0596] A2为药学上允许的阴离子)；
[0597] [化学式58]
[0598]
[0599] (式(III)中，
[0600] R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0601] L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-(式中，Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-(式中，Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p18为0～5的整数，p19为1～5的整数，p20为0～5的整数)，
[0602] L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-(式中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C415 17 58A 58B 58C 58D
烷基，Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-、-NY -CO-O-或-CO-(式中，Y58A～Y58D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p21为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，p26为1～5的整数)，
[0603] L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-(式中，Y59～Y70相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z18～Z20相同或不同，为-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-CO-、-NY71D-CO-O-或-CO-(式中，Y71A～Y71D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p27为1～5的28 29 30 31 32
整数，p 为0～5的整数，p 为0～5的整数，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数)，
[0604] J1及J2相同或不同，为CY72或N(式中，Y72为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0605] B2为：
[0606] [化学式59]
[0607]
[0608] (式中，X8及X9相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X10为可被取代的C1-C4烷基，X11及X12相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X13为可被取代的C1-C4烷基，Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-(式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p33为0～5的整数，p34～p37相同或不同，为1～5的整数)，
[0609] A3为药学上允许的阴离子)；
[0610] [化学式60]
[0611]
[0612] (式(IV)中，
[0613] R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0614] L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-(式中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-(式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p38～p40相同或不同，为1～5的整数)，
[0615] L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-(式中，Y90～Y95相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z26～Z28相同或不同，为-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-(式中，Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数)，
[0616] L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-(式中，Y97～Y108相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-NY109C-CO-、-NY109D-CO-O-或-CO-(式中，Y109A～Y109D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p44为1～5的整数，p45为0～5的整数，p46为1～5的整数，p47为0～5的整数，p48为1～5的整数，p49为1～5的整数)，
[0617] J3为CY110或N(式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0618] X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，
[0619] A4为药学上允许的阴离子)；
[0620] [化学式61]
[0621]
[0622] (式(V’)、式(V”)中，
[0623] R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0624] Y111～Y114相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，
[0625] L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-(式中，Y115～Y120相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z32～Z34相同或不同，为-O-、-NY121A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY121B-、-NY121C-CO-、-NY121D-CO-O-或-CO-(式中，Y121A～Y121D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p51为0～5的整数，p52为1～5的整数，p53为0～5的整数)，
[0626] L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-(式中，Y122～Y133相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z35～Z37相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-(式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p54为1～5的整数，p55为0～5的整数，p56为1～5的整数，p57为0～5的整数，p58为1～5的整数，p59为1～5的整数)，
[0627] L21及L26相同或不同，其不存在，或者为-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-(式中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z38～Z40相同或不同，为-O-、-NY147A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY147B-、-NR147C-CO-、-NY147D-CO-O-或-CO-(式中，Y147A～Y147D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p60为1～5的整数，p61为0～5的整数，p62为0～5的整数，p63为064 65
～5的整数，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数)，
[0628] B3及B4相同或不同地为：
[0629] [化学式62]
[0630]
[0631] (式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X18为可被取代的C1-C4烷基，X19及X20相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X21为可被取代的C1-C4烷基，Y148～Y157相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z41及Z42相同或不同，为-O-、-NY158A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY158B-、-NY158C-CO-或-NY158D-CO-O-(式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p66为0～5的整数，p67～p70相同或不同，为1～5的整数)，
[0632] A5及A6相同或不同，为药学上允许的阴离子)。
[0633] (77)
[0634] 如，(76)所述的脂质，其中，脂质A为式(I)表示的脂质，式(I)中，L1～L3中的一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，或者L1～L3中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，R1～R3为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。
[0635] (78)
[0636] 如(76)所述的脂质，其中，脂质A为式(II)表示的脂质，式(II)中，L4～L6中的一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-，或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，或者L4～L6中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-12 13 4 6
(CY Y )p6-，R～R为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基、且相同。
[0637] (79)
[0638] 如(76)所述的脂质，其中，脂质A为式(III)表示的脂质，式(III)中，L8～L10中的一者为-CO-O-(CY39Y40)p18-或-O-CO-(CY39Y40)p18-，或者L8～L10中的2个以上相同或不同地为-39 40 39 40 7 9
CO-O-(CY Y )p18或-O-CO-(CY Y )p18-，R ～R为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0639] (80)
[0640] 如(76)所述的脂质，其中，脂质A为式(IV)表示的脂质，式(IV)中，L13为-CO-O-83 84 83 84 14 15 90 91
(CY Y )p38-或-O-CO-(CY Y )p38-，或者L 及L 中的一者为-CO-O-(CY Y )p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-O-CO-(CY83Y84)p38-、且L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-；R10～R12为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0641] (81)
[0642] 如(76)所述的脂质，其中，脂质A为式(V’)表示的脂质，式(V’)中，L17～L19中的一者为-CO-O-或-O-，或者L17～L19中的2个以上相同或不同地为-CO-O-或-O-，R13～R15为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0643] (82)
[0644] 将核酸导入细胞内的方法，所述方法使用(1)～(21)及(67)中任一项所述的含有核酸的脂质纳米粒子。
[0645] (83)
[0646] 如(82)所述的方法，其中，细胞为哺乳类动物的肿瘤或炎症部位中的细胞。
[0647] (84)
[0648] 如(83)所述的方法，其中，细胞为哺乳类动物的肝脏、胃、肺、肾脏、胰脏或脾脏中的细胞。
[0649] (85)
[0650] 如(82)～(84)中任一项所述的方法，其中，导入细胞内的方法为经由静脉内施予或皮下施予而导入细胞内的方法。
[0651] (86)
[0652] 癌症或炎症疾病的治疗方法，所述方法包括向哺乳动物施予(1)～(21)及(67)中任一项所述的含有核酸的脂质纳米粒子的步骤。
[0653] (87)
[0654] 如(86)所述的方法，其中，施予的方法为静脉内施予或皮下施予。
[0655] (88)
[0656] 药物，其包含(1)～(21)及(67)中任一项所述的含有核酸的脂质纳米粒子。
[0657] (89)
[0658] 如(88)所述的药物，其用于静脉内施予或皮下施予。
[0659] (90)
[0660] 癌症或炎症疾病的治疗剂，其包含(1)～(21)及(67)中任一项所述的含有核酸的脂质纳米粒子。
[0661] (91)
[0662] 如(90)所述的治疗剂，其用于静脉内施予或皮下施予。
[0663] 发明效果
[0664] 通过本发明，可提供作为药物有用的、较之以往的粒子而言更稳定且经过小型化的含有核酸的脂质纳米粒子、及该脂质纳米粒子的制造方法等。另外，通过本发明，可提供对于该脂质纳米粒子的制造而言有用的脂质等。

附图说明

[0665] [图1]示出了搭载于包含脂质A的含有核酸的脂质纳米粒子中的核酸对于由血清核酸酶导致的分解的耐性。横轴表示未处理的核酸、核酸单体、或者含有核酸的制剂的编号，纵轴表示未分解的核酸和被血清核酸酶分解的核酸的位置。
[0666] [图2]示出了包含脂质A的含有核酸的脂质纳米粒子的基因抑制评价结果。横轴表示使用的制剂编号及核酸浓度，纵轴表示基因抑制率。
[0667] [图3]示出了包含脂质A及中性脂质的含有核酸的脂质纳米粒子的基因抑制评价结果。横轴表示使用的制剂编号及核酸浓度，纵轴表示基因抑制率。
[0668] [图4]示出了包含脂质A、中性脂质及各种阳离子性脂质的含有核酸的脂质纳米粒子的基因抑制评价结果。横轴表示使用的制剂编号及核酸浓度，纵轴表示基因抑制率。
[0669] [图5]示出了含有核酸的脂质纳米粒子针对胶原蛋白凝胶的渗透性的评价结果。横轴表示使用的制剂编号，黑色的宽度表示含有核酸的脂质纳米粒子的渗透宽度。
[0670] [图6]示出了含有核酸的脂质纳米粒子针对胶原蛋白凝胶的渗透性的评价结果。白色的宽度表示含有核酸的脂质纳米粒子的渗透宽度。
[0671] [图7]示出了对图6的含有核酸的脂质纳米粒子在胶原蛋白凝胶中的渗透距离进行评价的结果。图的横轴表示渗透的距离(mm)，图的纵轴表示经归一化的荧光强度。各图例表示核酸单体(□)、制剂197(○)、制剂199(△)。

具体实施方式

[0672] 以下，对本发明的实施方式进行详细说明。需要说明的是，本发明不限于以下说明的实施方式。
[0673] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子包含：含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)；水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物；以及核酸。本发明中，通过使用含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)，并将其与水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物、及核酸共同制成含有核酸的脂质纳米粒子，从而可得到在物理化学稳定性及生理活性方面更优异的含有核酸的脂质纳米粒子。
[0674] 作为本发明中的、含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)，只要为在分子内含有1个季铵基作为亲水部、且含有3个独立的可具有取代基的烃基的分子即可，不受特别限制，例如可由以下结构式(A)～(C)表示。以下结构式(A)～(C)中，“亲水部(Hydrophilic Unit)”表示具有1个季铵基的亲水部，3个“疏水部(Hydrophobic Unit)”表示3个独立的可具有取代基的烃基。
[0675] 对于构成“亲水部(Hydrophilic Unit)”的季铵基而言，其4个化学键中的0～3个与形成“疏水部(Hydrophobic Unit)”的烃基中的任意0～3个键合，其余的化学键与1个以上可具有取代基的链状及/或环状烃基等键合。作为构成“亲水部(Hydrophilic Unit)”的可具有取代基的链状及/或环状烃基，只要为由碳原子和氢原子构成的基团即可，可为任何基团，优选为碳原子数1～10的基团，更优选为碳原子数1～6的基团，进一步优选为碳原子数1～3的基团。
[0676] 另外，“亲水部(Hydrophilic Unit)”可介由构成所述亲水部的可具有取代基的链状及/或环状烃基等中的碳原子而包含1个以上的醚基、酯基、酰胺基等。此外，作为可具有取代基的链状及/或环状烃基等中的取代基，可举出氨基甲酸酯基(carbamate)、氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、羟基、烷氧基、烷氧基羰基、羟基羰基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、硝基、氰基、氟、氯、或溴等。
[0677] 另外，作为形成“疏水部(Hydrophobic Unit)”的烃基，只要为由8～24个的碳原子和氢原子构成的基团即可，可为任何基团。烃基可从拓扑学的观点考虑进行分类，例如，可举出直链的烃基、支链状的烃基或环状的烃基(例如，胆甾烯基等)，优选为直链或支链状的烃基。另外，烃基也可根据不饱和键(双键或三键)的有无进行分类，具有不饱和键的烃基也可根据芳香性的有无进行分类，优选为仅含有饱和键的烃基(烷基)或具有不饱和键且没有芳香性的烃基(例如，链烯基或炔基等)。作为脂质A中的烃基，优选为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基。
[0678] 形成“疏水部(Hydrophobic Unit)”的烃基可各自与“亲水部(Hydrophilic Unit)”的季铵基直接键合，也可介由醚、酯、酰胺等的键以及构成“亲水部”的可具有取代基的链状及/或环状烃基等而与季铵基键合。另外，如结构式(B)、(C)所示的那样，2个或3个形成“疏水部(Hydrophobic Unit)”的烃基介由碳原子键合，该碳原子可与“亲水部(Hydrophilic Unit)”的季铵基直接键合，或者可介由醚、酯、酰胺等的键以及构成“亲水部”的可具有取代基的链状及/或环状烃基等而与季铵基键合。
[0679] [化学式63]
[0680]
[0681] 作为脂质A，可举出式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、或者式(V’)或式(V”)表示的化合物，
[0682] [化学式64]
[0683]
[0684] (式(I)中，
[0685] R1～R3相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0686] L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-(式中，Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z1～Z3相同或不同，为-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-(式中，Y7A～Y7D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p1～p3相同或不同，为1～5的整数)，
[0687] X1为可被取代的C1-C4烷基，
[0688] A1为药学上允许的阴离子)；
[0689] [化学式65]
[0690]
[0691] (式(II)中，
[0692] R4～R6相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0693] L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-12 13 8 13 4 6
(CY Y )p6-(式中，Y～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z～Z相同或不同，为-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-或-NY14D-CO-O-(式中，Y14A～Y14D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～5的整数)，
[0694] L7不存在，或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-或-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-(式中，Y15～Y26相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z7～Z9相同或不同，为-O-、-NY27A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY27B-、-NY27C-CO-或-NY27D-CO-O-(式中，Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p7为1～5的整数，p8为0～5的整数，p9为1～5的整数，p10为0～5的整数，p11为1～5的整数，p12为1～5的整数)，[0695] B1为：
[0696] [化学式66]
[0697]
[0698] (式中，X2及X3相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X4为可被取代的C1-C4烷基，X5及X6相同或不同，为可7
被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X为可被取代的C1-C4烷基，Y28～Y37相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z10及Z11相同或不同，为-O-、-NY38A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY38B-、-NY38C-CO-或-NY38D-CO-O-(式中，Y38A～Y38D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p13为0～5的整数，p14～p17相同或不同，为1～5的整数)，
[0699] A2为药学上允许的阴离子)；
[0700] [化学式67]
[0701]
[0702] (式(III)中，
[0703] R7～R9相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0704] L8～L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-(式中，Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-(式中，45A 45D 18 19
Y ～Y 相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p 为0～5的整数，p 为1～5的整数，p20为0～5的整数)，
[0705] L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-(式中，Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C415 17 58A 58B 58C 58D
烷基，Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-、-NY -CO-O-或-CO-(式中，Y58A～Y58D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p21为1～5的整数，p22为0～5的整数，p23为1～5的整数，p24为0～5的整数，p25为1～5的整数，p26为1～5的整数)，
[0706] L12不存在，或者为-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-或-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-(式中，Y59～Y70相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z18～Z20相同或不同，为-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-CO-、-NY71D-CO-O-或-CO-(式中，Y71A～Y71D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p27为1～5的整数，p28为0～5的整数，p29为0～5的整数，p30为0～5的整数，p31为1～5的整数，p32为0～5的整数)，
[0707] J1及J2相同或不同，为CY72或N(式中，Y72为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0708] B2为：
[0709] [化学式68]
[0710]
[0711] (式中，X8及X9相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X10为可被取代的C1-C4烷基，X11及X12相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X13为可被取代的C1-C4烷基，Y73～Y82相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z21及Z22相同或不同，为-O-、-NY83A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY83B-、-NY83C-CO-或-NY83D-CO-O-(式中，Y83A～Y83D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p33为0～5的整数，p34～p37相同或不同，为1～5的整数)，
[0712] A3为药学上允许的阴离子)；
[0713] [化学式69]
[0714]
[0715] (式(IV)中，
[0716] R10～R12相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0717] L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-(式中，Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-(式中，Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p38～p40相同或不同，为1～5的整数)，
[0718] L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-(式中，Y90～Y95相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z26～Z28相同或不同，为-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-(式中，Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p41为0～5的整数，p42为1～5的整数，p43为0～5的整数)，
[0719] L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-(式中，Y97～Y108相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z29～Z31相同或不同，为-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-NY109C-CO-、-NY109D-CO-O-或-CO-(式中，Y109A～Y109D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p44为1～5的整数，p45为0～5的整数，p46为1～5的整数，p47为0～5的整数，p48为1～49
5的整数，p 为1～5的整数)，
[0720] J3为CY110或N(式中，Y110为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基)，
[0721] X14及X15相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，
[0722] A4为药学上允许的阴离子)；
[0723] [化学式70]
[0724]
[0725] (式(V’)、式(V”)中，
[0726] R13～R18相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0727] Y111～Y114相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，
[0728] L17～L19及L22～L24相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-(式中，Y115～Y120相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z32～Z34相同或不同，为-O-、-NY121A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY121B-、-NY121C-CO-、-NY121D-CO-O-或-CO-(式中，Y121A～Y121D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p51为0～5的整数，p52为1～5的整数，p53为0～5的整数)，
[0729] L20及L25相同或不同，其不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-(式中，Y122～Y133相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z35～Z37相同或不同，为-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-O-或-CO-(式中，Y134A～Y134D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p54为1～5的整数，p55为0～5的整数，p56为1～5的整数，p57为0～5的整数，p58为1～5的整数，p59为1～5的整数)，
[0730] L21及L26相同或不同，其不存在，或者为-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-(式中，Y135～Y146相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z38～Z40相同或不同，为-O-、-NY147A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY147B-、-NR147C-CO-、-NY147D-CO-O-或-CO-(式中，Y147A～Y147D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p60为1～5的整数，p61为0～5的整数，p62为0～5的整数，p63为064 65
～5的整数，p 为1～5的整数，p 为0～5的整数)，
[0731] B3及B4相同或不同地为：
[0732] [化学式71]
[0733]
[0734] (式中，X16及X17相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X18为可被取代的C1-C4烷基，X19及X20相同或不同，为可被取代的C1-C4烷基，或键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环，X21为可被取代的C1-C4烷基，Y148～Y157相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，Z41及Z42相同或不同，为-O-、-NY158A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY158B-、-NY158C-CO-或-NY158D-CO-O-(式中，Y158A～Y158D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基)，p66为0～5的整数，p67～p70相同或不同，为1～5的整数)，
[0735] A5及A6相同或不同，为药学上允许的阴离子)。
[0736] 以下，有时将式(I)～(IV)、(V’)及(V”)表示的化合物分别称为化合物(I)～(IV)、(V’)及(V”)。对于其他式子编号的化合物也同样。
[0737] 以下，对式(I)～(V”)的各基团的定义进行说明。
[0738] 作为直链或支链状的C8-C24烷基，可举出例如辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、2,6,10-三甲基十一烷基、十五烷基、3,7,11-三甲基十二烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基十五烷-2-基、十九烷基、2,6,10,14-四甲基十五烷基、二十烷基、3,7,11,15-四甲基十六烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基、二十四烷基等，可优选地举出壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基等，可更优选地举出十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基等。
[0739] 作为直链或支链状的C9-C18烷基，可举出例如壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、2,6,10-三甲基十一烷基、十五烷基、3,7,11-三甲基十二烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基十五烷-2-基等，可优选地举出壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基等，可更优选地举出十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基等。
[0740] 作为直链或支链状的C8-C24链烯基，为含有1～3个双键的直链或支链状的C8-24链烯基即可，可举出例如(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、2,
6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基等，可优选地举出(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等，可更优选地举出(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,
11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等。
[0741] 作为直链或支链状的C15-C20链烯基，可举出(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,
11,15-四甲基十六碳-2-烯基等，可优选地举出(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(8Z,
11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等，可更优选地举出(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等。
[0742] 另外，本发明中，在直链或支链状的可被取代的C8-C24链烯基的双键上形式性地加成亚甲基双自由基(methylene biradical)而得到的具有环丙烷环的基团也包括在C8-C24链烯基中。可举出例如与(Z)-十六碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基对应的以下的具有环丙烷环的基团等：
[0743] [化学式72]
[0744]
[0745] [化学式73]
[0746] 及
[0747] [化学式74]
[0748]
[0749] 作为直链或支链状的C8-C24炔基，为含有1～3个三键的直链或支链状的C8-24炔基即可，可举出例如十二碳-11-炔基、十三碳-12-炔基、十五碳-6-炔基、十六碳-7-炔基、十五碳-4,6-二炔基、十六碳-5,7-二炔基、十七碳-8-炔基、十八碳-9-炔基等，可优选地举出十五碳-6-炔基、十六碳-7-炔基、十五碳-4,6-二炔基、十六碳-5,7-二炔基、十七碳-8-炔基、十八碳-9-炔基等，可更优选地举出十七碳-8-炔基、十八碳-9-炔基等。
[0750] 作为C1-C4烷基，可举出例如甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丁基、环丙基甲基等，可优选地举出甲基、乙基等，可更优选地举出甲基。
[0751] 可被取代的C1-C4烷氧基的烷基部分与上述C1-C4烷基定义相同。
[0752] 作为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基中的取代基，可举出羟基、烷氧基、烷氧基羰基、硝基、氰基、氟、氯、溴等。这些取代基中烷氧基及烷氧基羰基的烷基部分与上述C1-C4烷基定义相同。
[0753] 作为可被取代的C1-C4烷基中的取代基，可举出氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、羟基、烷氧基、烷氧基羰基、羟基羰基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、硝基、氰基、氟、氯、溴等。这些取代基中单烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷氧基羰基、单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基的烷基部分与上述C1-C4烷基定义相同。二烷基氨基及二烷基氨基甲酰基中的2个烷基可以各自相同或不同。
[0754] 本发明中，吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基及吗啉-3-基各自包括在环中的氮原子上键合甲基、乙基等C1-C3烷基而成的基团。
[0755] 作为C1-C3烷基，可举出例如甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基等，可优选地举出甲基、乙基等，可更优选地举出甲基等。
[0756] 作为X2及X3键合到一起而与相邻的氮原子共同形成的C4-C6杂环，可举出例如吡咯2 3
烷、哌啶、吗啉、氮杂环庚烷(azepane)等，可优选地举出吡咯烷、哌啶等。作为X 及X键合到一起而与相邻的氮原子共同形成的可被取代的C4-C6杂环中的取代基，可举出可被取代的C1-C4烷基(与上述定义相同)、氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、羟基、烷氧基、烷氧基羰基、羟基羰基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、硝基、氰基、氟、氯、溴等。这些取代基中，单烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷氧基羰基、单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基的烷基部分与上述C1-C4烷基定义相同。二烷基氨基及二烷基氨基甲酰基中的2个烷基可以各自相同或不同。
[0757] X5及X6键合到一起而与相邻的氮原子共同形成的可被取代的C4-C6杂环的、杂环部分及取代基部分各自与上述定义相同。
[0758] X8及X9键合到一起而与相邻的氮原子共同形成的可被取代的C4-C6杂环的、杂环部分及取代基部分各自与上述定义相同。
[0759] X11及X12键合到一起而与相邻的氮原子共同形成的可被取代的C4-C6杂环的、杂环部分及取代基部分各自与上述定义相同。
[0760] X14及X15键合到一起而与相邻的氮原子共同形成的可被取代的C4-C6杂环的、杂环部分及取代基部分各自与上述定义相同。
[0761] X16及X17键合到一起而与相邻的氮原子共同形成的可被取代的C4-C6杂环的、杂环部分及取代基部分各自与上述定义相同。
[0762] X19及X20键合到一起而与相邻的氮原子共同形成的可被取代的C4-C6杂环的、杂环部分及取代基部分各自与上述定义相同。
[0763] 作为C1-C4酰基氧基中的酰基，可举出例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、2-甲基丙酰基、环丙酰基、丁酰基等，可优选地举出乙酰基等。
[0764] 作为可被取代的C1-C4酰基氧基中的取代基，可举出氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、羟基、烷氧基、烷氧基羰基、羟基羰基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、硝基、氰基、氟、氯、溴等。这些取代基中，单烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、烷氧基羰基、单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基的烷基部分与上述C1-C4烷基定义相同。二烷基氨基及二烷基氨基甲酰基中的2个烷基可以各自相同或不同。
[0765] 所谓季铵基，表示含有与4个碳原子之间具有4根共价键的氮原子的基团。季铵基与在伯胺～叔胺上加成氢原子而得到的基团不同，其具有永久正电荷，而与周围的pH无关。
[0766] 作为药学上允许的阴离子，可举出例如氯化物离子、溴化物离子、碘化物离子、硝酸离子、硫酸离子、磷酸离子等无机离子、乙酸离子、草酸离子、马来酸离子、富马酸离子、柠檬酸离子、苯甲酸离子、甲磺酸离子等有机酸离子等，但不限于这些。
[0767] 式(I)中，R1～R3优选为相同的直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，更优选为相同的直链或支链状的C8-C24烷基或C8-C24链烯基，进一步优选为相同的直链或支链状的C15-C20链烯基、或者相同的直链或支链状的C9-C18烷基，最优选为相同的直链的C15-C20链烯基、或相同的直链的C9-C18烷基。
[0768] L1～L3相同或不同，其不存在，或者为-Z1-(CY1Y2)p1-或-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-，优选为-Z1-(CY1Y2)p1-。Y1～Y6相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，作1 6 1 3 7A 7B
为Y ～Y ，优选为氢原子。Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY7C-CO-或-NY7D-CO-O-，优选为-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-。Y7A～Y7D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，优选为氢原子或甲基。p1～p3相同或不同，为1～5的整数，优选为1或2。
[0769] 作为L1～L3，优选相同或不同地为-O-(CY1Y2)p1-、-CO-O-(CY1Y2)p1-、-O-CO-(CY1Y2)p1-、-CO-NY7B-(CY1Y2)p1-或-NY7C-CO-(CY1Y2)p1-，更优选相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，进一步优选相同、为-CO-O-(CH2)2-。
[0770] 式(I)中，优选的是，L1～L3中的1个以上相同或不同地为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-O-CO-(CY1Y2)p1-，R1～R3为相同的直链的C15-C20链烯基，或者为相同的直链的C9-C18烷基。
[0771] L1～L3中的至少一者不存在、或者为-O-(CY1Y2)p1-、-O-CO-(CY1Y2)p1-或-NY7C-CO-(CY1Y2)p1-时，与具有正电荷的氮原子(N+)、-O-(CY1Y2)p1-、-O-CO-(CY1Y2)p1-或-NR6-CO-(CY1Y2)p1-键合的R1～R3相同或不同，各自更优选为辛基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基等，进一步优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等。
[0772] L1～L3中的至少一者为-CO-O-(CY1Y2)p1-或-CO-NY7B-(CY1Y2)p1-时，与-CO-O-(CY1Y2)p1-或-CO-NY7B-(CY1Y2)p1-键合的R1～R3相同或不同，各自更优选为壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基、2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基等，进一步优选为十一烷基、十三烷基、十五烷基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基等。
[0773] X1优选为甲基、羟基丙基或羟基乙基，更优选为甲基。
[0774] 式(II)中，R4～R6优选为相同的直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，更优选为相同的直链或支链状的C8-C24烷基或C8-C24链烯基，进一步优选为相同的直链或支链状的C15-C20链烯基、或者为相同的直链或支链状的C9-C18烷基，最优选为相同的直链的C15-C20链烯基、或者为相同的直链的C9-C18烷基。
[0775] L4～L6相同或不同，其不存在，或者为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，优选为-Z4-(CY8Y9)p4-或-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，更优选为-Z4-(CY8Y9)p4-。Y8～Y13相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，作为Y8～Y13，优选为氢4 6 14A 14B 14C 14D
原子。Z ～Z相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-或-NY -CO-O-，优选为-O-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-。Y27A～Y27D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，优选为氢原子或甲基。p4为0～5的整数，p5为1～5的整数，p6为0～
5的整数，均优选为1或2。
[0776] 作为L4～L6，优选相同或不同地为-O-(CY8Y9)p4-、-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、-CO-NY14B-(CY8Y9)p4-、-NY14C-CO-(CY8Y9)p4-、-NY14D-CO-O-(CY8Y9)p4-或-O-CO-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，更优选相同或不同地为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，进一步优选相同、为-CO-O-CH2-。
[0777] 式(II)中，优选的是，L4～L6中的1个以上相同或不同地为-CO-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、或-O-CO-(CY10Y11)p5-O-(CY12Y13)p6-，R4～R6为相同的直链的C15-C20链烯基，或者为相同的直链的C9-C18烷基。
[0778] L4～L6中的至少一者不存在、或者为-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、-NY14C-CO-(CY8Y9)p4-、-NY14D-CO-O-或-O-CO-(CY10Y11)p5-(CY12Y13)p6-时，与同L7相邻的碳原子、-O-(CY8Y9)p4-、-O-CO-(CY8Y9)p4-、-NY14C-CO-(CY8Y9)p4-、-NY14D-CO-O-或-O-CO-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-键合的R7～R9相同或不同，各自优选为辛基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基等，进一步优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等。
[0779] L4～L6中的至少一者为-CO-O-(CY8Y9)p4-或-CO-NY14B-(CY8Y9)p4-时，与-CO-O-(CY8Y9)p4-或-CO-NY14B-(CY8Y9)p4-键合的R4～R6相同或不同，各自优选为壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基、2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基等，进一步优选为十一烷基、十三烷基、十五烷基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基等。
[0780] L7优选不存在、或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-O-CO-(CY19Y20)p9-或-(CY17Y18)p8-NY27C-CO-(CY19Y20)p9-，更优选其不存在、或为-(CY15Y16)p7-。上述情况下，B1优选为：
[0781] [化学式75]
[0782]
[0783] 更优选为-N+(CH3)3。
[0784] L7为-(CY15Y16)p7-的情况下，p7优选为1～3，更优选为1～2，进一步优选为1，另外，Y15～Y16各自优选为氢原子。作为B1，优选为-N+(CH3)3。
[0785] L7为-(CY17Y18)p8-O-CO-(CY19Y20)p9-或-(CY17Y18)p8-NY27C-CO-(CY19Y20)p9-的情况下，优选p8为0～3、p9为1～3，更优选p8为0～1、p9为1～3，另外，优选Y17～Y20各自为氢原子、Y27C为氢原子或甲基。作为B1，优选为-N+(CH3)3。
[0786] X2及X3优选相同或不同地为甲基或乙基，或者键合到一起而与相邻的氮原子共同形成可被取代的C4-C6杂环；更优选相同、为甲基，或者键合到一起而与相邻的氮原子共同形成吡咯烷或哌啶；进一步优选相同、为甲基。
[0787] X4优选为甲基、乙基、羟基丙基或羟基乙基等，进一步优选为甲基。
[0788] 优选的是，X2及X3相同或不同地为甲基或乙基，X4为甲基、乙基、羟基丙基或羟基乙2 4
基等；进一步优选的是，X～X为甲基。
[0789] B1为：
[0790] [化学式76]
[0791]
[0792] 且L7不存在、或者为-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-O-CO-(CY19Y20)p9-或-(CY17Y18)p8-NY27C-CO-(CY19Y20)p9-的情况也是本发明的优选方式之一。该情况下，更优选的是，B1为：
[0793] [化学式77]
[0794] 并且
[0795] L7不存在，或者为-NH-CO-(CH2)p9-、-O-CO-(CH2)p9-、-CH2-NH-CO-(CH2)p9-或-CH2-O-CO-(CH2)p9-。
[0796] 式(III)中，R7优选为直链或支链状的C8-C24烷基或C8-C24链烯基，更优选为直链或支链状的C15-C20链烯基、或者直链或支链状的C9-C18烷基，最优选为相同的直链的C15-C20链烯基、或为相同的直链的C9-C18烷基。R8及R9优选为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，并且相同；更优选为直链或支链状的C15-C20链烯基、或者直链或支链状的C9-C18烷基，并且相同；最优选为直链的C15-C20链烯基或直链的C9-C18烷基，并且相同。
[0797] L8不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-，优选其不存在或者为-Z12-(CY39Y40)p18-。L9及L10相同或不同，其不存在，或者为-Z12-(CY39Y40)p18-或-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-，优选其相同或不同，不存在或为-Z12-(CY39Y40)p18-。Y39～Y44相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，作为Y39～Y44，优选为氢原子。Z12～Z14相同或不同，为-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-O-或-CO-，优选为-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-或-CO-。Y45A～Y45D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，优选为氢原子或甲基。p18为0～5的整数，优选为0或1。p19为1～5的整20
数，优选为1或2。p 为0～5的整数，优选为0或1。
[0798] 优选的是，L8～L10中的一者为-CO-O-(CY39Y40)p18-或-O-CO-(CY39Y40)p18-，或者L8～L10中的2个以上相同或不同地为-CO-O-(CY39Y40)p18或-O-CO-(CY39Y40)p18-，R7～R9为直链的C15-C20链烯基或C9-C18烷基；并且，R8～R9优选相同。
[0799] 作为L8，优选的是，其不存在，或者为-CO-O-(CY39Y40)p18-、-O-CO-(CY39Y40)p18-、-CO-NY45B-(CY39Y40)p18-或-NY45C-CO-(CY39Y40)p18-；更优选的是，其不存在，或者为-CO-O-(CY39Y40)p18-、-O-CO-(CY39Y40)p18-或-CO-NY45B-(CY39Y40)p18-；进一步优选的是，其不存在，或者为-CO-O-(CH2)p18-、-O-CO-(CH2)p18-或-CO-NH-(CH2)p18-。
[0800] 作为L9及L10，优选的是，其相同或不同，不存在、或者为-CO-O-(CY39Y40)p18-、-O-CO-(CY39Y40)p18-、-CO-NY45B-(CY39Y40)p18-或-NY45C-CO-(CY39Y40)p18-；更优选的是，其相同或不同，不存在、或者为-CO-O-(CY39Y40)p18-或-O-CO-(CY39Y40)p18-；进一步优选的是，其相同或不同，不存在或为-CO-O-(CH2)p18-；最优选的是，其相同、不存在或为-CO-O-(CH2)p18-。
[0801] 式(III)中，优选的是，L8～L10中的一者不存在、或者为-CO-O-(CY39Y40)p18-、-O-CO-(CY39Y40)p18-、-CO-NY45B-(CY39Y40)p18-或-NY45C-CO-(CY39Y40)p18-，或者L8～L10中的2个以上相同或不同，不存在、或者为-CO-O-(CY39Y40)p18-、-O-CO-(CY39Y40)p18-、-CO-NY45B-(CY39Y40)p18-或-NY45C-CO-(CY39Y40)p18-，R7～R9为直链的C15-C20链烯基或C9-C18烷基；并且，R8～R9优选相同。
[0802] L8～L10中的至少一者不存在、或者为-O-(CY39Y40)p18-、-O-CO-(CY39Y40)p18-、-NY45C-CO-(CY39Y40)p18-或-NY45D-CO-O-(CY39Y40)p18-时，与J1或J2、-O-(CY39Y40)p18-、-O-CO-(CY39Y40)p18-、-NY45C-CO-(CY39Y40)p18-或者-NY45D-CO-O-(CY39Y40)p18-键合的R7～R9相同或不同，各自优选为辛基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基等，进一步优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等。
[0803] L8～L10中的至少一者为-CO-O-(CY39Y40)p18-、-CO-NY45B-(CY39Y40)p18-或-CO-(CY39Y40)p18时，与-CO-O-(CY39Y40)p18-、-CO-NY45B-(CY39Y40)p18-或-CO-(CY39Y40)p18键合的R7～9
R相同或不同，各自优选为壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,
13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基、2,6,
10,14-四甲基十五碳-1-烯基，进一步优选为十一烷基、十三烷基、十五烷基、(Z)-十五碳-
8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基等。
[0804] L11不存在，或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-或-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-，优选其不存在、或者为-(CY46Y47)p21-或-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-。Y46～Y57相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，作为Y46～Y57，优选为15 17 58A 58B 58C
氢原子。Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY -、-NY -CO-、-NY58D-CO-O-或-CO-，优选为-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-或-CO-，更优选为-O-CO-或-NY58C-CO-。p21为1～5的整数，优选为1～3。p22为0～5的整数，优选为0～3。p23为1～5的整数，优选为1或2。
[0805] 作为L11，优选其不存在、或者为-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-O-CO-(CY50Y51)p23-、或-(CY48Y49)p22-NY58C-CO-(CY50Y51)p23-，更优选其不存在、或为-(CY46Y47)p21-，进一步优选其不存在、或为-(CH2)p2-。
[0806] L12优选不存在或者为-(CY59Y60)p27-，优选其不存在或者为-(CH2)p27-，更优选其不存在、或者为-CH2-或-(CH2)2-。
[0807] J1及J2相同或不同，为CY72或者N，J1及J2优选相同或不同地为CH、C(OH)或者N。
[0808] L11不存在时，J1优选为CH。
[0809] L9及L10不存在、L12为-CO-(CH2)p29-、J1为CH、J2为N的情况也是本发明的优选方式之一。此时，优选的是，L8为-CO-NY45B-(CH2)p18-，L11不存在或为-(CH2)p21-。
[0810] L9及L10不存在、L12为-O-CO-(CH2)p29-、J1及J2为CH的情况也是本发明的优选方式之一。此时，优选的是，L8为-O-CO-(CH2)p18-，L11不存在。
[0811] B2优选为：
[0812] [化学式78]
[0813]
[0814] 更优选为-N+(CH3)3。
[0815] X8～X10各自与上述X2～X4定义相同。
[0816] 式(IV)中，R10优选为直链或支链状的C8-C24烷基或C8-C24链烯基，更优选为直链或支链状的C15-C20链烯基、或者直链或支链状的C9-C18烷基，最优选为直链的C15-C20链烯基、或直链的C9-C18烷基。R11及R12优选为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基、且相同，更优选为直链或支链状的C15-C20链烯基、或者直链或支链状的C9-C18烷基、且相同，最优选为直链的C15-C20链烯基或直链的C9-C18烷基、且相同。
[0817] L13不存在，或者为-Z23-(CY83Y84)p38-或-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-，优选其不存在或为-Z23-(CY83Y84)p38-。Y83～Y88相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，作为Y83～Y88，优选为氢原子。Z23～Z25相同或不同，为-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-或-NY89D-CO-O-，优选为-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-或-NY89C-CO-，更优选为-CO-NY89B-。Y89A～Y89D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，优选为氢原子或甲基。p38～p40相同或不同，为1～5的整数，优选为1或2。
[0818] 作为L13，优选的是，其不存在，或者为-CO-O-(CY83Y84)p38-、-O-CO-(CY83Y84)p38-、-CO-NY89B-(CY83Y84)p38-、或-NY89C-CO-(CY83Y84)p38-，更优选的是，其不存在，或者为-CO-O-(CH2)p38-、-O-CO-(CH2)p38-或-CO-NCH3-(CH2)p38-，进一步优选的是，其不存在、或为-CO-NCH3-(CH2)p38-。
[0819] L14及L15相同或不同，其不存在，或者为-Z26-(CY90Y91)p41-或-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-，优选其不存在或为-Z26-(CY90Y91)p41-。Y90～Y95相同或不同，为氢原子或可被取90 95 26 28 96A
代的C1-C4烷基，作为Y ～Y ，优选为氢原子。Z ～Z 相同或不同，为-O-、-NY -、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-O-或-CO-，优选为-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、或-CO-。Y96A～Y96D相同或不同，为氢原子或可被取代的C1-C4烷基，优选为氢原子或甲基。p41为0～5的整数，优选为0～2。p42为1～5的整数，优选为1或2。p43为0～5的整数，优选为0～2。
[0820] 作为L14及L15，优选的是，其相同或不同，不存在、或者为-CO-O-(CY90Y91)p41-、-O-CO-(CY90Y91)p41-、-CO-NY96B-(CY90Y91)p41-、-NY96C-CO-(CY90Y91)p41-、-CO-(CY90Y91)p41-；更优选的是，其相同或不同，不存在、或者为-CO-O-(CY90Y91)p41-、-O-CO-(CY90Y91)p41-或-CO-90 91
(CY Y )p41-；进一步优选的是，其相同或不同，不存在、或者为-CO-O-(CH2)p41-、-O-CO-(CH2)p41-或-CO-。
[0821] 式(IV)中，更优的是，L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-、-O-CO-(CY83Y84)p38-或-CO-NY89B-(CY83Y84)p38-，或者L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-、-O-CO-(CY83Y84)p38-或-CO-NY89B-(CY83Y84)p38-、且L14及L15中的一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-，或者L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-、-O-CO-(CY83Y84)p38-或-CO-NY89B-(CY83Y84)p38-、且L14及L15相同或不同地为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-O-CO-(CY90Y91)p41-；R10～R12为直链或支链状的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。R11及R12优选相同。
[0822] L13不存在、或者为-O-(CY83Y84)p38-、-NY89A-(CY83Y84)p38-、-O-CO-(CY83Y84)p38-、-NY89C-CO-(CY83Y84)p38-或-NY89D-CO-O-(CY83Y84)p38-时，R10优选为辛基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基或3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基，更优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0823] L13为-CO-O-(CY83Y84)p38-或-CO-NY89B-(CY83Y84)p38-时，R10更优选为壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基或2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基，进一步优选为十一烷基、十三烷基、十五烷基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基或(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基。
[0824] 另外，L14及L15中的至少一者不存在、或者为-O-(CY90Y91)p41-、-NY96A-(CY90Y91)p41-、-O-CO-(CY90Y91)p41-、-NY96C-CO-(CY90Y91)p41-或-NY96D-CO-O-(CY90Y91)p41-时，与J3、-O-(CY90Y91)p41-、-NY96A-(CY90Y91)p41-、-O-CO-(CY90Y91)p41-、-NY96C-CO-(CY90Y91)p41-或-NY96D-CO-O-(CY90Y91)p41-键合的R11及R12相同或不同，各自更优选为辛基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,
10-三烯基或者3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基，进一步优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0825] L14及L15中的至少一者为-CO-O-(CY90Y91)p41-或-CO-NY96B(CY90Y91)p41-时，与-CO-O-(CY90Y91)p41-或-CO-NY96B(CY90Y91)p41-键合的R11及R12相同或不同，各自更优选为壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基或者2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基，进一步优选为十一烷基、十三烷基、十五烷基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基或者(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基。
[0826] L16不存在，或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-或-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-，优选其不存在、或者为-(CY97Y98)p44-或-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-，更优选其不存在、或者为-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-O-CO-(CY101Y102)p46-、-(CY99Y100)p45-NY109C-CO-(CY101Y102)p46-或-CO-(CY101Y102)p46-，进一步优选其不存在、或者为-(CH2)p44-或-CO-(CH2)p46-。
[0827] J3为CY110或者N，优选为CH或者N。另外，J3为N时，更优选的是，L14不存在、L15为-CO-、L16不存在或为-(CY97Y98)p44-，或者L14不存在、L15不存在、L16为-CO-(CY101Y102)p46-。
[0828] X14及X15各自与上述X2及X3定义相同。
[0829] 式(V’)中，R13优选为直链或支链状的C8-C24烷基或C8-C24链烯基，更优选为直链或支链状的C15-C20链烯基、或者直链或支链状的C9-C18烷基，最优选为直链的C15-C20链14 15
烯基、或直链的C9-C18烷基。R 及R 优选为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基、且相同，更优选为直链或支链状的C15-C20链烯基、或者直链或支链状的C9-C18烷基、且相同，最优选为直链的C15-C20链烯基或直链的C9-C18烷基、且相同。
[0830] L17～L19相同或不同，其不存在，或者为-Z32-(CY115Y116)p51-或-Z33-(CY117Y118)p52-34 119 120 32 115 116 115 116
Z -(CY Y )p53-，优选为-Z -(CY Y )p51-，更优选为-O-(CY Y )p51-或-CO-O-
(CY115Y116)p51-，进一步优选为-O-或-CO-O-。
[0831] 式(V’)中，优选的是，L17～L19相同或不同地为-O-或-CO-O-，R13～R15为直链的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。此时，优选的是，L17～L19相同、为-O-或-CO-O-，R13～R15为相同的直链的C15-C20链烯基或C9-C18烷基。
[0832] L17～L19中的至少一者不存在、或者为-O-(CY115Y116)p51-、-O-CO-(CY115Y116)p51-、-NY121C-CO-(CY115Y116)p518-或-NY121D-CO-O-(CY115Y116)p51-时，与呋喃糖环或同L20相邻的碳、-O-(CY115Y116)p51-、-O-CO-(CY115Y116)p51-、-NY121C-CO-(CY115Y116)p518-或者-NY121D-CO-O-(CY115Y116)p51-键合的R13～R15相同或不同，各自优选为辛基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-
11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、3,7,
11,15-四甲基十六碳-2-烯基等，进一步优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等。
[0833] L17～L19中的至少一者为-CO-O-(CY115Y116)p51-、-CO-NY121B-(CY115Y116)p51-或-CO-(CY115Y116)p51-时，与-CO-O-(CY115Y116)p51-、-CO-NY121B-(CY115Y116)p51-或-CO-(CY115Y116)p51-键合的R13～R15相同或不同，各自优选为壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,
13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,
5,9-三烯基、2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基，进一步优选为十一烷基、十三烷基、十五烷基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,
11-二烯基等。
[0834] L20不存在，或者为-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126Y127)p56-或-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-，优选为-(CY122Y123)p54-，更优选为-(CH2)p54-，进一步优选为-CH2-。
[0835] L21不存在，或者为-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-或-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-，优选其不存在或者为-(CY135Y136)p60-，更优选其不存在或者为-(CH2)p60-，进一步优选其不存在。
[0836] B3优选为：
[0837] [化学式79]
[0838]
[0839] 更优选为-N+(CH3)3。
[0840] Y111及Y112相同或不同，为氢原子、羟基或可被取代的C1-C4烷基，优选相同或不同地为氢原子或羟基，进一步优选相同、为氢原子。
[0841] 式(V”)中，R16～R18、L22～L26、B4、Y113～Y114及A6各自与R13～R15、L17～L21、B3、Y111～Y112及A5定义相同。
[0842] 式(V’)中，Y111为氢原子时，优选吡喃环上的4个取代基各自在吡喃环上的不同的碳原子上进行取代。并且，作为式(V’)，更优选为：
[0843] [化学式80]
[0844]
[0845] 此时，进一步优选的是，L17～L19相同或不同地为-O-或-CO-O-，R13～R15为直链的C15-C20链烯基或C9-C18烷基；最优选的是，L17～L19相同或不同地为-O-或-CO-O-，R13～R15为直链的C15-C20链烯基或C9-C18烷基，L17及L21不存在，Y112为氢原子或羟基。
[0846] 式(V”)中，优选呋喃环上的4个取代基各自在呋喃环上的不同的碳原子上进行取代。并且，作为式(V”)，更优选为：
[0847] [化学式81]
[0848]
[0849] 此时，进一步优选的是，L22～L24相同或不同地为-O-或-CO-O-，R16～R18为直链的C15-C20链烯基或C9-C18烷基，最优选的是，L22～L24相同或不同地为-O-或-CO-O-，R16～R18为直链的C15-C20链烯基或C9-C18烷基，L22及L26不存在，Y114为氢原子或羟基。
[0850] 需要说明的是，式B1、B2、B3及B4的定义中的以下各式的定义中，p13、p33及p66为0时，N+各自与同Z10、Z21及Z41相邻的碳键合。
[0851] [化学式82]
[0852] 及
[0853] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中可包含除了脂质(脂质A)(所述脂质(脂质A)含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基)以外的阳离子性脂质。本发明中使用的脂质A以外的阳离子性脂质为具有脂质亲和性区域(所述区域含有1个以上可具有取代基的烃基)和阳离子性的亲水性区域(所述区域含有至少1个伯氨基、仲氨基、叔氨基及/或季铵基)的两亲性分子即可，不受特别限制(不包括脂质A)，优选为包含亲水部(所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基)和疏水部(所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基)的脂质(脂质B)。
[0854] 作为本发明中使用的脂质A以外的阳离子性脂质，可举出例如国际公开第2013/089151号、国际公开第2011/136368号、国际公开第2014/007398号、国际公开第2010/
042877号或国际公开第2010/054401号中记载的阳离子性脂质等。
[0855] 作为本发明中使用的脂质B，可举出例如式(CL-I)、式(CL-II)、式(CL-III)、式(CL-IV)、式(CL-V)、式(CL-VI)或式(CL-VII)表示的脂质等。
[0856] [化学式83]
[0857]
[0858] (式(CL-I)中，R101及R102相同或不同，为直链或支链状的C10-C24烷基、C10-C24链烯基或C10-C24炔基，
[0859] L101及L102为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C2-C8亚烷基，
[0860] L103为单键、-CO-或-CO-O-，
[0861] L103为单键时，
[0862] X101为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，
[0863] L103为-CO-或-CO-O-时，
[0864] X101为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基)；
[0865] [化学式84]
[0866]
[0867] (式(CL-II)中，R103及R104相同或不同，为直链或支链状的C12-C24烷基、C12-C24链烯基或C12-C24炔基，
[0868] p101及p102相同或不同，为0～3的整数，
[0869] L106及L107为氢原子，或者键合到一起而形成单键或C2-C8亚烷基，
[0870] L104及L105相同或不同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，
[0871] L108为单键、-CO-或-CO-O-，
[0872] L108为单键时，
[0873] X102为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，
[0874] L108为-CO-或-CO-O-时，
[0875] X102为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基)；
[0876] [化学式85]
[0877]
[0878] (式(CL-III)中，R105为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，[0879] R106为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，
[0880] X103及X104相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，或者X103与L111键合到一起而形成C2-C8亚烷基，
[0881] L111为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基或二烷基氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，或者与X103键合到一起而形成C2-C8亚烷基，
[0882] L109为C1-C6亚烷基，
[0883] L110为单键、或C1-C6亚烷基，其中，L109和L110的碳原子数之和为7以下，L111为氢原110 111 103 110
子的情况下，L 为单键，L 与X 键合到一起而形成C2-C6亚烷基的情况下，L 为单键、或者亚甲基或亚乙基)；
[0884] [化学式86]
[0885]
[0886] (式(CL-IV)中，R107为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，[0887] R108为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基)；
[0888] [化学式87]
[0889]
[0890] (式(CL-V)中，R109为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，[0891] R110为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基、C8-C24炔基、C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基，
[0892] L112为C1-C3亚烷基，
[0893] X105为氢原子或C1-C3烷基)；
[0894] [化学式88]
[0895]
[0896] (式(CL-VI)中，R111及R112相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0897] X106及X107相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，[0898] p103、p104及p105相同或不同，为0或1，其中，p103、p104及p105不会同时为0，[0899] L113及L114相同或不同，为O、S或NH)；
[0900] [化学式89]
[0901]
[0902] (式(CL-VII)中，R113及R114相同或不同，为直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，
[0903] X109及X110相同或不同，为C1-C3烷基，或键合到一起而形成C2-C8亚烷基，[0904] X108为氢原子、羟基、可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基、或可被取代的C1-C4酰基氧基，
[0905] L115为-CO-O-或-O-CO-，
[0906] p106为0～3，
[0907] p107为1～4)。
[0908] 式(CL-I)的各基团的定义中，作为直链或支链状的C10-C24烷基，可举出例如癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、6,10-二甲基十一烷-2-基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基十五烷-2-基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基、或者二十四烷基等，可优选地举出癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、或十八烷基等，可更优选地举出十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基或十八烷基等。
[0909] 作为直链或支链状的C10-C24链烯基，为含有1～3个双键的直链或支链状的C10-C24链烯基即可，可举出例如(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基等，可优选地举出(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基等，可更优选地举出(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等。
[0910] 作为直链或支链状的C10-C24炔基，为含有1～3个三键的直链或支链状的C10-C24炔基即可，可举出例如十碳-9-炔基、十二碳-4-炔基、十二碳-11-炔基、十四碳-5-炔基、十四碳-6-炔基、十六碳-7-炔基、十六碳-3,5-二炔基、十六碳-5,7-二炔基或十八碳-9-炔基等，可优选地举出十六碳-7-炔基或十八碳-9-炔基等，可更优选地举出十八碳-9-炔基等。
[0911] 需要说明的是，式(CL-I)中，R101及R103优选为相同的直链或支链状的C10-C24烷基、C10-C24链烯基或C10-C24炔基，更优选为相同的直链或支链状的C10-C24烷基或C10-C24链烯基，进一步优选为相同的直链的C10-C24链烯基。
[0912] 作为C1-C3亚烷基，可举出例如亚甲基、亚乙基、或亚丙基等，可优选地举出亚甲基或亚乙基，可更优选地举出亚甲基。
[0913] 作为C1-C6烷基，可举出例如甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丁基、环丙基甲基、戊基、异戊基、仲戊基、新戊基、叔戊基、环戊基、己基或环己基等，可优选地举出甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基或己基等，可更优选地举出甲基、乙基或丙基等。
[0914] 作为C3-C6链烯基，可举出例如烯丙基、1-丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基等，可优选地举出烯丙基等。
[0915] 作为单烷基氨基及二烷基氨基，各自为被1个、或者相同或不同的2个的以下基团取代的氨基即可：C1-C6烷基(与上述定义相同)、或者被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基(与上述定义相同)，可举出例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、丁基氨基、戊基氨基、己基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、乙基甲基氨基、甲基丙基氨基、丁基甲基氨基、甲基戊基氨基、己基甲基氨基、氨基乙基氨基、氨基丙基氨基、(氨基乙基)甲基氨基或双(氨基乙基)氨基等，可优选地举出甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、氨基丙基氨基或双(氨基乙基)氨基等，可更优选地举出甲基氨基或二甲基氨基等。
[0916] 作为三烷基铵基，为被相同或不同的3个以下基团取代的铵基即可：C1-C6烷基(与上述定义相同)、或者被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基(与上述定义相同)，可举出例如三甲基铵基、乙基二甲基铵基、二乙基甲基铵基、三乙基铵基、三丙基铵基、三丁基铵基、三戊基铵基、三己基铵基、三(氨基乙基)铵基、(氨基乙基)二甲基铵基或者双(氨基乙基)甲基铵基等，可优选地举出三甲基铵基、三乙基铵基、三(氨基乙基)铵基、(氨基乙基)二甲基铵基或者双(氨基乙基)甲基铵基等，可更优选地举出三甲基铵基等。
[0917] 化合物(CL-I)中，三烷基铵基可与药学上允许的阴离子(与上述定义相同)形成盐。
[0918] 作为烷氧基，为被以下基团取代的羟基即可：C1-C6烷基(与上述定义相同)、或者被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基(与上述定义相同)，可举出例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、氨基乙氧基或甲基氨基乙氧基等，可优选地举出甲氧基、乙氧基、氨基乙氧基或甲基氨基乙氧基等，可更优选地举出甲氧基等。
[0919] 作为单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基，各自为被1个、或者相同或不同的2个的以下基团取代的氨基甲酰基即可：C1-C6烷基(与上述定义相同)、或者被氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基(与上述定义相同)，可举出例如甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、丙基氨基甲酰基、丁基氨基甲酰基、戊基氨基甲酰基、己基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基、二乙基氨基甲酰基、乙基甲基氨基甲酰基、甲基丙基氨基甲酰基、丁基甲基氨基甲酰基、甲基戊基氨基甲酰基、己基甲基氨基甲酰基、氨基乙基氨基甲酰基、氨基丙基氨基甲酰基、(氨基乙基)甲基氨基甲酰基、或双(氨基乙基)氨基甲酰基等，可优选地举出甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基或二甲基氨基甲酰基等，可更优选地举出甲基氨基甲酰基、或二甲基氨基甲酰基等。
[0920] L101及L102更优选为氢原子。此时，R101及R102相同或不同，优选为十二烷基、十四烷基、(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，更优选为(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，进一步优选相同、为(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基或(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0921] 需要说明的是，L101及L102为氢原子时，X101更优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，进一步优选为氢原子、甲基、或者被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，进一步优选为氢原子、或甲基等。
[0922] L101及L102键合到一起而形成单键或者C1-C3亚烷基时，R101及R102相同或不同，优选为十四烷基、十六烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基，更优选为(Z)-十八碳-9-烯基、或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，进一步优选相同、为(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0923] L101及L102键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基时，X101更优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，进一步优选为氢原子、甲基、或者被相同或不同的1～3个氨基、羟基或氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，最优选为氢原子或甲基等。
[0924] 本发明的更优选方式之一是，L101及L102键合到一起而形成单键时，L103为-CO-或-CO-O-、优选为-CO-。该情况下，X101优选为氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基、3-氨基丙基、4-氨基丁基或者5-氨基戊基等，进一步优选为1,2-二氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基或1,5-二氨基戊基。R101及R102相同或不同，优选为十四烷基、十六烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基或(Z)-二十碳-11-烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基，更优选为(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-
9,12-二烯基，进一步优选相同、为(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0925] L103更优选为单键。
[0926] L103为单键时，X101更优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基等，进一步优选为氢原子、甲基、羟基甲基、2-羟基乙基、2,3-二羟基丙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、2-羟基-3-甲氧基丙基、氨基甲基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-(N,N-二甲基氨基)乙基、3-(N,N-二甲基氨基)丙基、2-氨基甲酰基乙基、2-二甲基氨基甲酰基乙基、或1-甲基哌啶-4-基等，最优选为氢原子或甲基。
[0927] L103为-CO-或-CO-O-时，更优选的是，X101为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，且该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基等；R3进一步优选为氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基、5-氨基戊基、(N,N-二甲基氨基)甲基、2-(N,N-二甲基氨基)乙基、3-(N,N-二甲基氨基)丙基、1-羟基-2-氨基乙基或1-氨基-2-羟基乙基等，最优选为1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基或5-氨基戊基等。
[0928] L103为单键、且X101为氢原子的情况也是本发明的更优选方式之一。该情况下，R101102
及R 优选相同或不同地为十二烷基、十四烷基、(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,
10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，更优选相同或不同地为(Z)-十四碳-7-烯基或(7Z,
10Z)-十六碳-7,10-二烯基，进一步优选相同、为(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基或(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基。
[0929] L103为单键、且X101为甲基也是本发明的更优选方式之一。该情况下，R101及R102优选相同或不同地为十二烷基、十四烷基、(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，更优选相同或不同地为(Z)-十四碳-7-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，进一步优选相同、为(Z)-十四碳-7-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0930] 式(CL-II)的各基团的定义中，作为直链或支链状的C12-C24烷基，可举出例如十二烷基、十三烷基、十四烷基、2,6,10-三甲基十一烷基、十五烷基、3,7,11-三甲基十二烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基十五烷-2-基、十九烷基、2,6,10,14-四甲基十五烷基、二十烷基、3,7,11,15-四甲基十六烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基或者二十四烷基等，可优选地举出十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基或二十烷基等，可更优选地举出十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基或十八烷基等。
[0931] 作为直链或支链状的C12-C24链烯基，为含有1～3个双键的直链或支链状的C12-C24链烯基即可，可举出例如(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-十九碳-
10-烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,
14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、
2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基或3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基等，可优选地举出(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等，更优选举出(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0932] 作为直链或支链状的C12-C24炔基，为含有1～3个三键的直链或支链状的C12-C24炔基即可，可举出例如十二碳-11-炔基、十三碳-12-炔基、十五碳-6-炔基、十六碳-7-炔基、十五碳-4,6-二炔基、十六碳-5,7-二炔基、十七碳-8-炔基或十八碳-9-炔基等，优选举出十五碳-6-炔基、十六碳-7-炔基、十五碳-4,6-二炔基、十六碳-5,7-二炔基、十七碳-8-炔基或十八碳-9-炔基等，更优选举出十七碳-8-炔基或十八碳-9-炔基等。
[0933] 式(CL-II)的各基团的定义中的C1-C3亚烷基、C1-C6烷基及C3-C6链烯基各自与上述式(CL-I)中的定义相同。
[0934] 单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、烷氧基、单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基各自与上述式(CL-I)中的定义相同。
[0935] R103及R104优选为相同的直链或支链状的C12-C24烷基、C12-C24链烯基或者C12-C24炔基，更优选为相同的直链或支链状的C12-C24烷基、或者C12-C24链烯基。
[0936] L104及L105更优选为相同的-O-、-CO-O-或-O-CO-。
[0937] L104及L105中的至少一者为-O-或-O-CO-时，R103及R104相同或不同，更优选为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基或者3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基，进一步优选为十四烷基、十六烷基、十八烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0938] L104及L105中的至少一者为-CO-O-时，R103及R104各自更优选为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基或者2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基，进一步优选为十三烷基、十五烷基、十七烷基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基或者(8Z,
11Z)-十七碳-8,11-二烯基。
[0939] p101及p102更优选同时为0或1。
[0940] L106及L107更优选键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基。L106及L107键合到一起而形成单键或C1-C3亚烷基时，X102更优选为氢原子、甲基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，进一步优选为氢原子、甲基、或者被相同或不同的1～3个氨基、三烷基铵基、羟基或氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，最优选为氢原子、甲基、2,3-二羟基丙基、3-羟基丙基、氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基或2-氨基甲酰基乙基。这些取代基中，单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、烷氧基、单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基中的烷基部分与上述C1-C4烷基定义相同。二烷基氨基、三烷基铵基及二烷基氨基甲酰基中的2个或3个烷基可以各自相同或不同。
[0941] L106及L107键合到一起而形成单键时，优选的是，L108为-CO-或-CO-O-、优选为-CO-。
[0942] L106及L107键合到一起而形成单键时，p101及p102相同或不同，优选为1～3。
[0943] L106及L107为氢原子时，X102优选为氢原子、甲基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，更优选为氢原子、甲基、或者被相同或不同的1～3个氨基、三烷基铵基、羟基或氨基甲酰基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，进一步优选为氢原子、甲基、2,3-二羟基丙基、3-羟基丙基、氨基甲基、1,
2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基或2-氨基甲酰基乙基等。这些取代基中，单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、烷氧基、单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基中的烷基部分与上述C1-C4烷基定义相同。二烷基氨基、三烷基铵基、及二烷基氨基甲酰基中的2个或3个烷基可以各自相同或不同。
[0944] L108优选为单键。需要说明的是，L108为单键时，L104及L105优选为-O-。
[0945] L108为单键时，X102优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基等，更优选为氢原子、甲基、羟基甲基、2-羟基乙基、2,3-二羟基丙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、2-羟基-3-甲氧基丙基、氨基甲基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-(N,N-二甲基氨基)乙基、3-(N,N-二甲基氨基)丙基、2-氨基甲酰基乙基、2-二甲基氨基甲酰基乙基或1-甲基哌啶-4-基等，进一步优选为氢原子、甲基、2,3-二羟基丙基、3-羟基丙基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基或2-氨基甲酰基乙基等。这些取代基中，单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、烷氧基、单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基中的烷基部分与上述C1-C4烷基定义相同。二烷基氨基、三烷基铵基、及二烷基氨基甲酰基中的2个或3个烷基可以各自相同或不同。
[0946] L104及L105更优选为-O-。其中，L108为单键、且X102为氢原子时，L104及L105优选为相同的-CO-O-或-O-CO-，更优选为-CO-O-。
[0947] L108为-CO-或-CO-O-时，L104及L105优选为相同的-CO-O-或-O-CO-，更优选为-CO-O-。
[0948] L108为-CO-或-CO-O-时，X102优选为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的C1-C6烷基或C3-C6链烯基，优选该取代基中的至少1个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，X102更优选为氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基、5-氨基戊基、(N,N-二甲基氨基)甲基、2-(N,N-二甲基氨基)乙基、3-(N,N-二甲基氨基)丙基或1-氨基-2-羟基乙基等，进一步优选为氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基或5-氨基戊基等。这些取代基中，单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、烷氧基、单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基中的烷基部分与上述C1-C6烷基定义相同。二烷基氨基、三烷基铵基及二烷基氨基甲酰基中的2个或3个烷基可以各自相同或不同。
[0949] L104及L105优选为相同的-CO-O-或-O-CO-，更优选为-CO-O-。
[0950] 式(CL-III)、(CL-IV)及(CL-V)的各基团的定义中，直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基及C8-C24炔基各自与上述式(I)～(IV)中的基团定义相同，优选相同的基团。
[0951] 式(CL-III)、(CL-IV)及(CL-V)的各基团的定义中，作为C8-C24烷氧基乙基及C8-C24烷氧基丙基中的烷基部分，可举出例如上述直链或支链状的C8-C24烷基中示例的基团等。
[0952] 作为炔基氧基乙基及炔基氧基丙基中的炔基部分，可举出例如上述直链或支链状的C8-C24炔基中示例的基团等。
[0953] R105及R106优选相同或不同地为直链或支链状的C8-C24烷基或C8-C24链烯基，更优选相同或不同地为直链或支链状的C8-C24链烯基，进一步优选相同或不同地为直链的C8-C24链烯基。另外，R105及R106更优选相同，该情况下，优选为直链或支链状的C12-C24烷基、C12-C24链烯基或C12-C24炔基，更优选为直链的C12-C24链烯基。直链或支链状的C12-C24烷基、C12-C24链烯基、及C12-C24炔基各自与上述式(CL-II)中的基团定义相同。
[0954] R105及R106优选相同或不同地为直链或支链状的C8-C24烷基或C8-C24链烯基，更优选相同或不同地为直链或支链状的C8-C24链烯基，进一步优选相同或不同地为直链的C8-C24链烯基。另外，R105及R106更优选相同，该情况下，优选为直链或支链状的C15-C20烷基、C15-C20链烯基或者C15-C20炔基，更优选为直链的C15-C20链烯基。直链或支链状的C15-C20烷基、C15-C20链烯基、及C15-C20炔基各自与上述式(I)～(IV)中的基团定义相同，优选相同的基团。
[0955] R105及R106不同的情况下，优选的是，R105为直链或支链状的C15-C20烷基、C15-C20链烯基或C15-C20炔基，R106为直链或支链状的C8-C12烷基。此处，作为直链或支链状的C8-C12烷基，可举出例如辛基、壬基、癸基、十一烷基、或者十二烷基，可优选举出辛基、癸基或者十二烷基。
[0956] 更优选的是，R105为直链的C15-C20链烯基，R106为直链的C8-C12烷基；进一步优选的是，R105为(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，R106为辛基、癸基或十二烷基。
[0957] R105及R106不同的情况下，还优选的是，R105为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，R106为C8-C24烷氧基乙基、C8-C24烷氧基丙基、C8-C24链烯基氧基乙基、C8-C24链烯基氧基丙基、C8-C24炔基氧基乙基或C8-C24炔基氧基丙基。该情况下，更优选的是，R105为直链的C8-C24链烯基，R106为C8-C24链烯基氧基乙基；进一步优选的是，R105为(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基，R106为(Z)-十八碳-9-烯基氧基乙基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基乙基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基氧基乙基；最优选的是，R105为(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，
106
R 为(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基乙基。
[0958] R105及/或R106相同或不同地为直链或支链状的C8-C24烷基或C8-C24链烯基时，优选相同或不同地为十四烷基、十六烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基或(Z)-二十二碳-13-烯基，更优选相同或不同地为十六烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(Z)-二十碳-11-烯基或者(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基，进一步优选相同或不同地为(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基或者(11Z,14Z)-二十碳-
11,14-二烯基，最优选相同、为(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0959] R107及R108各自与上述R105及R106定义相同，优选为与上述R107及R108相同的基团。其中，R107为直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基的情况下，R107及R108优选相同、为(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0960] R109及R110各自与上述R105及R106定义相同，优选为与上述R109及R110相同的基团。其中，R109及R110优选为相同的直链或支链状的C15-C20烷基、C15-C20链烯基或C15-C20炔基，更优选相同、为(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
[0961] 作为X103及X104中的C1-C3烷基，可举出例如甲基、乙基、丙基、异丙基或者环丙基，优选举出甲基或乙基，进一步优选举出甲基。
[0962] 作为X103与X104键合到一起而形成的C2-C8亚烷基，可举出例如亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、亚庚基或亚辛基等，优选举出亚丁基、亚戊基或亚己基等，更优选举出亚己基等。
[0963] 作为X103与L111键合到一起而形成的C2-C8亚烷基，可举出例如亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、亚庚基或亚辛基等，优选举出亚丙基、亚丁基或亚戊基等，更优选举出亚丙基或亚丁基等，进一步优选举出亚丙基。
[0964] 优选的是，X103及X104相同或不同，为甲基或乙基，或者键合到一起而形成亚丁基、103 111
亚戊基或亚己基，或者X 与L 键合到一起而形成亚乙基、亚丙基或亚丁基。另外，优选的是，X103及X104相同或不同，为甲基或乙基，或者键合到一起而形成亚丁基、亚戊基或亚己基；
还优选的是，X103与L111键合到一起而形成亚乙基、亚丙基或亚丁基，X104为甲基或乙基。并且，进一步优选的是，X103及X104相同、为甲基，或者键合到一起而形成亚己基；还进一步优选
103 111 104
的是，X 与L 键合到一起而形成亚丙基或亚丁基，X 为甲基。
[0965] L111中的、C1-C6烷基、C3-C6链烯基、单烷基氨基、烷氧基、单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基各自与上述式(CL-I)中的基团的定义相同。
[0966] 对于L111而言，优选的是，其为氢原子、C1-C6烷基、氨基、单烷基氨基、羟基、烷氧基、或者被相同或不同的1～3个氨基、单烷基氨基、或者羟基或烷氧基取代的C1-C6烷基，或者与X103键合到一起而形成C2-C6亚烷基；更优选的是，其为氢原子、甲基、氨基、甲基氨基、羟基、甲氧基、或者被相同或不同的1～3个氨基或羟基取代的甲基，或者与X103键合到一起而形成亚乙基、亚丙基或亚丁基；进一步优选的是，其为氢原子、C1-C3烷基、或羟基，或者与X103键合到一起而形成亚丙基或亚丁基；最优选的是，其为氢原子，或者与X103键合到一起而形成亚丙基。
[0967] 作为L109及L110中的C1-C6亚烷基，可举出例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基或亚己基等，优选举出亚甲基或亚乙基等。
[0968] L109优选为亚甲基、亚乙基或亚丙基等，更优选为亚甲基或亚乙基等，L110优选为单键、亚甲基或亚乙基等，更优选为单键或亚甲基等。L109和L110的碳原子数之和优选为1～3，103 104
进一步优选为2。上述任一情况下，均优选的是，X 及X 相同或不同地为甲基或乙基等、L111为氢原子、甲基、氨基、甲基氨基、羟基、甲氧基、或者被相同或不同的1～3个氨基或羟基取代的甲基等，或者X103与X104键合到一起而形成亚戊基、亚己基或亚庚基等、L111为氢原子、甲基、氨基、甲基氨基、羟基、甲氧基或者被相同或不同的1～3个氨基或羟基取代的甲基等，
103 111 104
或者X 与L 键合到一起而形成亚丙基、亚丁基或亚戊基等、X 为甲基或乙基等；更优选的是，X103及X104为甲基、L111为氢原子，或者X103与X104键合到一起而形成亚戊基或亚己基、L111为氢原子，或者X103与L111键合到一起而形成亚丙基、X104为甲基等。
[0969] 式(CL-V)的各基团的定义中，作为X105中的C1-C3烷基，可举出例如甲基、乙基、丙基、异丙基或者环丙基等，优选举出甲基、乙基或者异丙基等，更优选举出甲基或乙基等。需要说明的是，作为X105，进一步优选为氢原子或甲基等，最优选为氢原子。
[0970] 作为L112中的C1-C3亚烷基，可举出例如亚甲基、亚乙基或亚丙基等，优选举出亚甲基或亚乙基等。
[0971] 式(CL-VI)及式(CL-VII)的各基团的定义中，直链或支链状的可被取代的C8-C24烷基、C8-C24链烯基及C8-C24炔基各自与上述式(I)～(V”)中的基团定义相同。
[0972] 式(CL-VII)的X108中的可被取代的C1-C4烷基、可被取代的C1-C4烷氧基及可被取代的C1-C4酰基氧基与上述式(I)～(IV)中的基团定义相同。
[0973] 式(CL-VI)中，R111及R112优选为相同的直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，更优选为相同的直链或支链状的C8-C24烷基、或C8-C24链烯基。
[0974] R111及R112优选相同或不同地为辛基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基或者3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基等，更优选相同或不同地为十二烷基、十四烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等，进一步优选相同、为(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或者(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等。
[0975] X106与X107优选相同或不同地为甲基或乙基，更优选相同、为甲基。
[0976] 作为X106与X107键合到一起而形成的C2-C8亚烷基，可举出例如亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、亚庚基或亚辛基等，优选举出亚丁基、亚戊基或亚己基等，更优选举出亚丁基或亚戊基等。
[0977] X106及X107优选相同、为甲基，或者键合到一起而形成亚丁基、亚戊基或亚己基。
[0978] p103及104优选同时为0，p105优选为1。
[0979] L113及L114优选同时为O。
[0980] R113及R114优选为相同的直链或支链状的C8-C24烷基、C8-C24链烯基或C8-C24炔基，更优选为相同的直链或支链状的C8-C24烷基或C8-C24链烯基。
[0981] X109及X110中的C1-C3烷基及C2-C8亚烷基各自与上述式(CL-VI)中的基团定义相同。
[0982] X108优选为氢原子、羟基、甲基或甲氧基等，更优选为氢原子或羟基等，进一步优选为氢原子。
[0983] L115优选为-O-CO-。该情况下，优选的是，p106为0或1，p107为2～4的整数；更优选的是，p106为0或1，p107为3。
[0984] L115为-CO-O-的情况下，优选的是，p106为0，p107为2～4的整数；更优选的是，p106为107
0，p 为3。
[0985] 本发明中使用的脂质B的具体例示于以下表1～27，但本发明的脂质B不限于这些例子。
[0986] [表1]
[0987] 表1
[0988]
[0989] [表2]
[0990] 表2
[0991]
[0992] [表3]
[0993] 表3
[0994]
[0995] [表4]
[0996] 表4
[0997]
[0998] [表5]
[0999] 表5
[1000]
[1001] [表6]
[1002] 表6
[1003]
[1004] [表7]
[1005] 表7
[1006]
[1007] [表8]
[1008] 表8
[1009]
[1010] [表9]
[1011] 表9
[1012]
[1013] [表10]
[1014] 表10
[1015]
[1016] [表11]
[1017] 表11
[1018]
[1019] [表12]
[1020] 表12
[1021]
[1022] [表13]
[1023] 表13
[1024]
[1025] [表14]
[1026] 表14
[1027]
[1028] [表15]
[1029] 表15
[1030]
[1031] [表16]
[1032] 表16
[1033]
[1034] [表17]
[1035] 表17
[1036]
[1037] [表18]
[1038] 表18
[1039]
[1040] [表19]
[1041] 表19
[1042]
[1043] [表20]
[1044] 表20
[1045]
[1046] [表21]
[1047] 表21
[1048]
[1049] [表22]
[1050] 表22
[1051]
[1052] [表23]
[1053] 表23
[1054]
[1055] [表24]
[1056] 表24
[1057]
[1058] [表25]
[1059] 表25
[1060]
[1061] [表26]
[1062] 表26
[1063]
[1064] [表27]
[1065] 表27
[1066]
[1067] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中，作为上述以外的脂质B，也可使用含有季铵基作为亲水部、含有2个独立的可具有取代基的烃基作为疏水部的脂质。表28列出了这样的脂质的具体例。
[1068] [表28]
[1069] 表28
[1070]
[1071] 以下，对本发明的脂质A的制造方法进行说明。需要说明的是，以下所示的制造方法中，定义的基团在该制造方法的条件下发生变化、或者不适合实施该制造方法的情况下，可通过使用有机合成化学中常用的引入及除去保护基团的方法[例如《，有机合成中的保护基团第3版(Protective Groups in Organic Synthesis,third edition)》、Greene(T.W.Greene)著、John Wiley&Sons Inc.(1999年)等中记载的方法]等而得到目标化合物。另外，根据需要，可改变引入取代基等反应工序的顺序。
[1072] 另外，以下所示的制造方法中记载的醚化(第4版实验化学讲座20有机化合物的合成II”、第4版、p.187、丸善(1992年)等)、氨基化(第4版实验化学讲座20有机化合物的合成II”、第4版、p.279、丸善(1992年)等)、酯化(第4版实验化学讲座22有机化合物的合成IV”、第4版、p.43、丸善(1992年)等)、酰胺化(第4版实验化学讲座22有机化合物的合成IV”、第4版、p.137、丸善(1992年)等)等常规的单元反应也可分别使用现有文献中记载的常规反应条件而进行。
[1073] 通过以下合成路径1或2中的任一种方法、或者以这些方法为基准的方法等，可得到化合物(I)。
[1074] 化合物(I)可由氨依据合成路径1而得到。
[1075] [化学式90]
[1076] 合成路径1
[1077]
[1078] (式中，Ms表示甲磺酰基，其他各基团与上述定义相同)
[1079] 通过使氨与化合物1在溶剂(例如，四氢呋喃、甲醇等极性溶剂等)中于高温(例如，80℃以上)进行反应，可得到化合物2。
[1080] 通过使化合物2与化合物3在碱(例如，氢氧化钠等无机碱等)的存在下、于高温(例如，100℃以上)进行反应，可得到化合物4。溶剂并非是必需的，但也可根据情况而使用高沸点的溶剂(例如，乙二醇等极性溶剂等)。
[1081] 通过使化合物4与化合物5在碱(例如，氢氧化钠等无机碱等)的存在下、于高温(例如，100℃以上)进行反应，可得到化合物6。溶剂并非是必需的，但也可根据情况而使用高沸点的溶剂(例如，乙二醇等极性溶剂等)。
[1082] 上述3个加热反应中，也可分别合适地使用微波反应装置。另外，也可使用与化合物1、化合物3及化合物5对应的溴化物或者碘化物等卤化物来代替这些化合物。
[1083] R1-L1与R2-L2相同的化合物4也可由氨使用过量的化合物1而得到。另外，R2-L2与R3-L3相同的化合物6也可由化合物2使用过量的化合物3而得到。此外，R1-L2、R2-L2及R3-L3相同的化合物6也可由氨使用进一步过量的化合物1而得到。
[1084] 通过使化合物6与化合物7在溶剂(例如，氯仿等卤素系溶剂等)的存在下或非存在下、于室温或高温(例如，100℃以上)进行反应，可得到化合物(I)。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对(I)进行处理，从而将化合物(I)的阴离子A1转化为其他的阴离子。
[1085] 对于用于化合物1、化合物3、化合物5及化合物7等的反应的化合物而言，可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(例如，“第5版实验化学讲座13有机化合物的合成I”、第5版、p.374、丸善(2005年)等中记载的方法)或以其为基准的方法获得。
[1086] 另外，化合物1也可通过将对应的R1-L1-OH用甲磺酸酐或者甲磺酰氯进行处理而得到。
[1087] 此外，化合物R1-L1-OH中的L1为-Z1-(CY1Y2)p1-(各基团与上述定义相同)的化合物可通过以下方法获得：使R1-OMs、R1-OH、R1-NY7A-H(Y7A与上述定义相同)或R1-CO2H中的任一者、与HO-(CY1Y2)p1-O-PRO1、MsO-(CY1Y2)p1-O-PRO1、HO2C-(CY1Y2)p1-O-PRO1或H-NY7A-(CY1Y2)p1-O-PRO1(式中，PRO1为甲硅烷基系保护基团(例如，三乙基甲硅烷基(TES)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)等))中的任一者进行(使用了例如氢化钠等强碱的)醚化、(例如取代反应等)氨基化、(例如，使用了1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐或其他缩合剂的)酯化、或(例如，使用了相同的缩合剂的)酰胺化中的任一反应后，通过进行脱保护而得到所述化合物。
[1088] 另外，化合物R1-L1-OH中的L1为-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-(各基团与上述定义相同)的化合物也可同样地通过使用与目标化合物对应的反应基质、应用1次到多次已知的反应而得到。
[1089] 化合物3及5可通过与化合物1相同的方法进行制备。
[1090] 化合物(Ia)可由化合物8依据合成路径2而得到。
[1091] [化学式91]
[1092] 合成路径2
[1093]
[1094] (式中，M1～M3相同或不同，为-(CY1Y2)p1-或-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-(式中，各基团与上述定义相同)，其他各基团各自与上述定义相同)
[1095] 通过在溶剂(例如，氯仿等卤素系溶剂等)中将化合物8和化合物9用碱(例如，三乙胺等有机碱等)、缩合剂(例如，1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐或O-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(O-(7-Aza-1H-Benzotriazole-1-yl)-N,N,N’,N’-Tetramethyluronium Hexafluorophosphate)等缩合剂)及活化剂(N,N-二甲基氨基吡啶等活化剂)进行处理，可得到化合物10。
[1096] 通过使用与上述相同的方法将化合物10与化合物11酯化，可得到化合物12。
[1097] 进而，通过使用与上述相同的方法将化合物12与化合物13酯化，可得到化合物14。
[1098] R1和R2相同的化合物12也可由化合物8通过使用过量的化合物9而得到。另外，R2和R3相同的化合物14也可由化合物10通过使用过量的化合物11而得到。此外，R1、R2及R3相同的化合物14也可由化合物8通过进一步使用过量的化合物9而得到。
[1099] 通过使化合物14与化合物15在溶剂(例如，氯仿等卤素系溶剂等)的存在下或非存在下、于室温或者高温(例如，100℃以上)进行反应而得到化合物(Ia)。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对(Ia)进行处理，从而将化合物(Ia)的阴离子A1转化为其他的阴离子。
[1100] 对于用于化合物8、化合物9、化合物11、化合物14及化合物15等的反应的化合物而言，可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(例如，“第5版实验化学讲座14有机化合物的合成II”、第5版、p.1、丸善(2005年)、“第4版实验化学讲座22有机化合物的合成IV”、第4版、p.1、丸善(1992年)等中记载的方法)或以其为基准的方法获得。
[1101] 通过以下合成路径3～17中的任一种方法、或者以这些方法为基准的方法等，可得到化合物(II)。
[1102] 化合物(IIa)可由化合物16依据合成路径3而得到。
[1103] [化学式92]
[1104] 合成路径3
[1105]
[1106] (式中，M7不存在、且M4为-(CY8Y9)p4-，或者M7不存在、且M4为-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，或者M7为-Z5-(CY10Y11)p5-、且M4为-(CY12Y13)p6-(式中，各基团各自与上述定义相同)。另外，M8不存在、且M5为-(CY8Y9)p4-，或者M8不存在、且M5为-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，或者M8为-Z5-(CY10Y11)p5-、且M5为-(CY12Y13)p6-。此外，M9不存在、且M6为-(CY8Y9)p4-，或者M9不存在、且M6为-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-，或者M9为-Z5-(CY10Y11)p5-、且M6为-(CY12Y13)p6-。其他各基团各自与上述定义相同。)
[1107] 对于化合物22而言，可通过应用与合成路径2中的化合物8与化合物9的酯化反应相同的反应条件、使化合物16与化合物17、化合物19及化合物21依次进行反应而得到。
[1108] 对于化合物(IIa)而言，可通过应用与合成路径2中的经由化合物14与化合物15的反应而合成化合物(Ia)时的反应条件相同的条件、使化合物22与化合物23反应而得到。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对(IIa)进行处理，从而将化合物(IIa)的阴离子A2转化为其他的阴离子。
[1109] 对于用于化合物16、化合物17、化合物19、化合物21及化合物23等的反应的化合物而言，可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(例如，“第5版实验化学讲座14有机化合物的合成II”、第5版、p.1、丸善(2005年)、“第4版实验化学讲座22有机化合物的合成IV”、第4版、p.1、丸善(1992年)等中记载的方法)或以其为基准的方法获得。
[1110] 化合物16也可通过后述的合成路径12～16的方法得到。
[1111] 化合物17中的M7为-Z5-(CY10Y11)p5-的化合物可通过下述方法得到：使R4-OMs、R4-OH、R4-NY14A-H(Y14A与上述定义相同)或R4-CO2H中的任一者与HO-(CY10Y11)p5-CO-O-PRO2、MsO-(CY10Y11)p5-CO-O-PRO2、HO2C-(CY10Y11)p5-CO-O-PRO2或H-NY14A-(CY10Y11)p5-CO-O-PRO2(式中，PRO2为用于保护羧酸的基团(例如，甲基、叔丁基、苄基等))中的任一者进行(使用了例如氢化钠等强碱的)醚化、(例如取代反应等的)氨基化、(例如，使用了1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐等缩合剂的)酯化、或者(例如，使用了相同的缩合剂的)酰胺化中的任一反应后，进行脱保护。
[1112] 化合物19及21可通过与化合物17相同的方法进行制备。
[1113] 合成路径3中，也可在最初实施X4的引入。即，首先使化合物23作用于化合物16，然后使化合物17、19及21依次进行酯化，由此也可得到化合物(IIa)。
[1114] 化合物(IIb)可由化合物16按照合成路径4而得到。
[1115] [化学式93]
[1116] 合成路径4
[1117]
[1118] (式中，各基团各自与上述定义相同)
[1119] 通过使化合物16与化合物24在溶剂(例如，四氢呋喃或者甲苯等非质子性溶剂等)中、在碱(例如，氢化钠等无机碱等)的存在下、于高温(例如，100℃以上)进行反应，可得到化合物25。
[1120] 通过与上述相同的方法使化合物25与化合物26进行醚化后，可得到化合物27。
[1121] 通过与上述相同的方法使化合物27与化合物28进行醚化后，可得到化合物29。
[1122] 上述3个加热反应中，也可分别合适地使用微波反应装置。另外，也可使用与化合物24、化合物26及化合物28对应的溴化物或者碘化物等来代替这些化合物。
[1123] R4-M7和R5-M8相同的化合物27也可由化合物16使用过量的化合物24而得到。另外，R5-M8和R6-M9和相同的化合物29也可由化合物25使用过量的化合物26而得到。此外，R4-M7、R5-M8及R6-M9相同的化合物29也可由化合物16使用进一步过量的化合物24而得到。
[1124] 通过使化合物29与化合物23在溶剂(例如，氯仿等卤素系溶剂等)的存在下或非存在下、于室温或者高温(例如，100℃以上)进行反应而得到化合物(IIb)。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对(IIb)进行处理，从而将化合物(IIb)的阴离子A2转化为其他的阴离子。
[1125] 对于用于化合物16、化合物24、化合物26、化合物28及化合物23等的反应的化合物而言，可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(例如，“第5版实验化学讲座14有机化合物的合成II”、第5版、p.1、丸善(2005年)、“第5版实验化学讲座13有机化合物的合成I”、第5版、p.374、丸善(2005年)等中记载的方法)或以其为基准的方法获得。
[1126] 另外，化合物24也可通过用甲磺酸酐或者甲磺酰氯处理对应的R4-M7-OH而得到。
[1127] 此外，化合物R4-M7-OH中的M7为-Z5-(CY10Y11)p5-(各基团与上述定义相同)的化合4 4 4 14A 14A 4
物可通过下述方法得到：在使R-OMs、R-OH、R-NY -H(Y 与上述定义相同)或R -CO2H中的任一者、与HO-(CY10Y11)p5-O-PRO1、MsO-(CY10Y11)p5-O-PRO1、HO2C-(CY10Y11)p5-O-PRO1或H-NY14A-(CY10Y11)p5-O-PRO1(各基团与上述定义相同)中的任一者进行醚化、氨基化、酯化、或酰胺化中的任一反应后，进行脱保护。
[1128] 化合物26及28可通过与化合物24相同的方法进行制备。
[1129] 如合成路径5所示，化合物(IIc)可利用合成路径4中得到的化合物25、将合成路径3中的酯化等各反应适当组合而得到。此外，如合成路径5所示，化合物(IId)可利用合成路径4中得到的化合物27、将合成路径3中的酯化等各反应适当组合而得到。
[1130] [化学式94]
[1131] 合成路径5
[1132]
[1133] (式中，各基团各自与上述定义相同)
[1134] 化合物(IIe)可由化合物30按照合成路径6而得到。
[1135] [化学式95]
[1136] 合成路径6
[1137]
[1138] (式中，M10、M11及M12各自为独立地为O或者NY14A，其他各基团各自与上述定义相同)[1139] 化合物33可通过使化合物30与化合物17、化合物19及化合物21依次进行酯化或者酰胺化反应而得到。
[1140] 对于化合物(IIe)而言，可通过应用与合成路径2中的经由化合物14与化合物15的反应而合成化合物(Ia)时的反应条件相同的条件、使化合物33与化合物23反应而得到。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对(IIe)进行处理，从而将化合物(IIe)的阴离子A2转化为其他的阴离子。
[1141] 化合物30也可通过后述的合成路径12～16的方法得到。
[1142] 化合物(IIf)可由化合物34按照合成路径7而得到。
[1143] [化学式96]
[1144] 合成路径7
[1145]
[1146] (式中，各基团与上述定义相同)
[1147] 化合物35可通过用合适的保护基团保护化合物34而得到。
[1148] 对于化合物36而言，可通过应用与合成路径2中的经由化合物14与化合物15的反应而合成化合物(Ia)时的反应条件相同的条件、使化合物35与化合物23反应后，在合适的条件下进行脱保护而得到。
[1149] 化合物(IIf)可通过使化合物36与化合物37、化合物39及化合物41依次进行酯化或者酰胺化反应而得到。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对化合物(IIf)进行处理，从而将化合物(IIf)的阴离子A2转化为其他的阴离子。
[1150] 化合物34、35及36可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法获得。另外，化合物34、35及36也可通过使用氧化剂将后述的合成路径12或者17中得到的三元醇化合物进行氧化而得到。
[1151] 化合物37中的M10为NY14A的化合物可通过使R4-M7-OMs(化合物24)与Y14ANH2进行反应而得到。
[1152] 化合物37及39可通过与化合物35相同的方法进行制备。
[1153] 需要说明的是，对于化合物(IIf)而言，也可如合成路径8中记载的那样，使化合物4
24与化合物37、39及41依次进行酯化/酰胺化、最后使化合物23作用于反应产物而引入X 从而得到。
[1154] [化学式97]
[1155] 合成路径8
[1156]
[1157] (式中，各基团与上述定义相同)
[1158] 化合物(IIg)可由氰乙酸乙酯按照合成路径9而得到。
[1159] [化学式98]
[1160] 合成路径9
[1161]
[1162] (式中，Et表示乙基，LAH为氢化铝锂，其他各基团各自与上述定义相同)
[1163] 通过使氰乙酸乙酯与化合物24在溶剂(例如，四氢呋喃等非质子性溶剂等)中、在碱(例如，氢化钠等无机碱等)及根据情况而使用的添加剂(例如，四丁基碘化铵等添加剂)的存在下、于高温(例如，60℃以上)进行反应，可得到化合物42。
[1164] 通过使化合物42与化合物26在溶剂(例如，四氢呋喃等非质子性溶剂等)中、在碱(例如，氢化钠等无机碱等)及根据情况而使用的添加剂(例如，四丁基碘化铵等添加剂)的存在下、于高温(例如，60℃以上)进行反应，可得到43。
[1165] R4和R5相同的化合物43也可由氰乙酸乙酯使用过量的化合物24而得到。
[1166] 通过将化合物43在溶剂(例如，四氢呋喃等非质子性溶剂等)中、使用过量的氢化铝锂(LAH)进行还原，可得到化合物44。
[1167] 通过在溶剂(例如，氯仿等卤素系溶剂等)的存在下或非存在下、使化合物45、化合物46及化合物23依次作用于化合物44，可得到化合物47。X2、X3及X4相同的化合物47也可由44使用过量的化合物45而得到。
[1168] 对于化合物(IIg)而言，可通过应用与合成路径2中的化合物8与化合物9的酯化反应同样的反应条件、使化合物47与化合物21进行反应而得到。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对(IIg)进行处理，从而将化合物(IIg)的阴离子A2转化为其他的阴离子。
[1169] 化合物45及46与化合物23相同。
[1170] 化合物(IIh)可由丙二酸二甲酯按照合成路径10而得到。
[1171] [化学式99]
[1172] 合成路径10
[1173]
[1174] (式中，Me表示甲基，LAH为氢化铝锂，其他各基团各自与上述定义相同)
[1175] 通过使丙二酸二甲酯与化合物24在溶剂(例如，乙腈等非质子性溶剂等)中、在碱(例如，碳酸铯等无机碱等)及根据情况而使用的添加剂(例如，四丁基碘化铵等添加剂)的存在下、于加热(例如，50℃)下反应，可得到化合物48。
[1176] 通过使化合物48与化合物49在溶剂(例如，乙腈等非质子性溶剂等)中、于乙酸酐及碱(例如，氢化钠等无机碱等)的存在下进行反应，可得到化合物50。
[1177] 通过将化合物50在溶剂(例如，四氢呋喃等非质子性溶剂等)中、使用过量的氢化铝锂(LAH)进行还原，可得到化合物51。
[1178] 化合物52可通过应用合成路径2中的化合物8与化合物9的酯化同样的反应条件、使化合物51与化合物19及化合物21进行反应而得到。
[1179] 通过使化合物52与化合物53在溶剂(例如，氯仿等卤素系溶剂等)的存在下或非存在下、于室温或者高温(例如，100℃以上)进行反应，可得到化合物(IIh)。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对(IIh)进行处理，从而将化合物(IIh)的阴离子A2转化为其他的阴离子。
[1180] 化合物49可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(例如，“Helvetica Chimica Acta、92卷、8期、1644-1656页、2009年”等中记载的方法)或以其为基准的方法获得。
[1181] 化合物54及56可按照合成路径12而得到。
[1182] [化学式100]
[1183] 合成路径12
[1184]
[1185] (式中，各基团各自与上述定义相同)
[1186] 化合物54可通过对化合物53的羟基进行保护而得到。
[1187] 另外，化合物53可以以市售品的形式获得。
[1188] 化合物55可通过使化合物45及化合物46作用于化合物54而得到。
[1189] 化合物56可通过对化合物55进行脱保护而得到。
[1190] 化合物58～65可按照合成路径13而得到。
[1191] [化学式101]
[1192] 合成路径13
[1193]
[1194] (式中，Hal为氯、溴、碘等卤素原子，其他各基团各自与上述定义相同)
[1195] 化合物58可通过对化合物57的羟基进行保护而得到。
[1196] 另外，化合物57可以以市售品的形式获得。
[1197] 化合物59可通过使卤化试剂(例如，氯、溴、碘、氯化碘等)作用于化合物58而得到。
[1198] 化合物60可通过使化合物59与氨进行反应而得到。另外，化合物61可通过使化合物45作用于化合物60而得到。另外，化合物63可通过使化合物46作用于化合物61而得到。
[1199] 另外，化合物63可通过使化合物59与化合物62进行反应而得到。
[1200] 化合物63可通过对化合物62进行脱保护而得到。
[1201] 化合物64可通过将化合物58使用合适的氧化剂(例如高锰酸钾、琼斯(Jones)试剂等)进行氧化而得到。
[1202] 化合物67～73可按照合成路径14而得到。
[1203] [化学式102]
[1204] 合成路径14
[1205]
[1206] (式中，各基团各自与上述定义相同)
[1207] 化合物66可通过使氰化物(例如，氰化钠、氰化钾、氰化锂等)作用于化合物59而得到。
[1208] 化合物67可通过将化合物66用氢化铝锂等进行还原而得到。
[1209] 化合物68可通过使化合物45作用于化合物67而得到。另外，化合物69可通过使化合物46作用于化合物68而得到。
[1210] 化合物70可通过对化合物69进行脱保护而得到。
[1211] 化合物71可通过用碱(例如氢氧化钠等)将化合物66水解而得到。
[1212] 化合物72可通过将化合物71进行还原(例如硼烷等)而得到。
[1213] 化合物73可通过使卤化试剂(例如，氯、溴、碘、氯化碘等)作用于化合物72而得到。
[1214] 对于化合物73，通过依次进行合成路径14中的从化合物59起始的各反应，可得到化合物67、68、69、71、72及73的、各官能团(氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、羧酸、羟基及卤素)与季碳之间的亚烷基链进一步延长的化合物。另外，通过重复该反应，可自由地延长各官能团与季碳之间的亚烷基链。
[1215] 化合物76可按照合成路径15合成。
[1216] [化学式103]
[1217] 合成路径15
[1218]
[1219] (式中，M13为-(CH2)p201-，M15为-(CH2)p202-(式中，p201～p202为1～5的整数)、M14为-O-、-CO-O-或-NY27A-，PRO4根据M14而表示保护羟基的基团PRO1、保护羧酸的基团PRO2、或保护胺的基团PRO3(例如叔丁氧基羰基等氨基甲酸酯系保护基团，或苄基等)中的任一者。)[1220] 化合物74可通过合成路径12～14中记载的方法、或以其为基准的方法而得到。
[1221] 化合物75可通过对化合物74恰当地进行保护·脱保护而得到。
[1222] 化合物76可以以化合物75作为原料、通过合成路径12～14中记载的方法或以其为基准的方法而得到。
[1223] 化合物77～79可以如合成路径16中记载的那样，通过以化合物76作为原料、依次进行保护以及脱保护、及以合成路径15为基准的方法而得到。
[1224] [化学式104]
[1225] 合成路径16
[1226]
[1227] (式中，M16及M17各自表示-(CH2)p203-及-(CH2)p204-(式中，p203～p204为1～5的整数)，其他各基团与上述定义相同)
[1228] 化合物82、84、87、89、92及95可按照合成路径17合成。
[1229] [化学式105]
[1230] 合成路径17
[1231]
[1232] (式中，M18为-(CY19Y20)p9-或-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-。另外，b1为：
[1233] [化学式106]
[1234]
[1235] Ar为对硝基苯基，Hal为氯、溴、碘等卤素原子，其他各基团各自与上述定义相同。需要说明的是，p13为0时，N直接与同Z10相邻的碳原子键合。)
[1236] 化合物82可通过在化合物80与化合物81经由酯化而缩合后、进行脱保护而得到。
[1237] 化合物84可通过在化合物83与化合物81经由酰胺化而缩合后、进行脱保护而得到。
[1238] 化合物87可通过在化合物85与化合物86经由酯化而缩合后、进行脱保护而得到。
[1239] 化合物89可通过在化合物85与化合物88经由酰胺化而缩合后、进行脱保护而得到。
[1240] 化合物92可通过在化合物90与化合物91进行亲核取代反应后、进行脱保护而得到。
[1241] 化合物95可通过在化合物93与化合物94进行酯交换反应后、进行脱保护而得到。
[1242] 80、83、85、90及93可使用合成路径13～16或以这些方法为基准的方法而得到。
[1243] 化合物81、86、88、91及94中，M18为-(CY19Y20)p9-的化合物可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或将市售品的官能团按照常规方法进行转化而得到。
[1244] 该情况下，对于b1为以下结构的化合物，
[1245] [化学式107]
[1246]
[1247] 可通过使以下结构的化合物分别与各自所对应的合适的片段经由醚化、氨基化、酯化、酰胺化等进行缩合而得到。
[1248] [化学式108]
[1249]
[1250] (式中，M37为-OH、-CO2H或NY38(其中，Y38为氢原子或可被取代的C1-C4烷基))[1251] 另外，化合物81、86、88、91及94中，M18为-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-的化合物可通过将化合物81、86、88、91及94中的与M18为-(CY19Y20)p9-的化合物相同的化合物与各自所对应的合适的片段经由醚化、氨基化、酯化、酰胺化等进行缩合而得到。
[1252] 以下，可通过合成路径18～22的方法、或以这些方法为基准的方法等得到化合物(III)。
[1253] 化合物(IIIa)可由化合物96按照合成路径18而得到。
[1254] [化学式109]
[1255] 合成路径18
[1256]
[1257] (式中，各基团各自与上述定义相同)
[1258] 通过使化合物96与化合物97在溶剂(例如，氯仿等卤素系溶剂等)的存在下或非存在下、于室温或者高温(例如，100℃以上)进行反应，可得到化合物(IIIa)。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对(IIIa)进行处理，从而将化合物(IIIa)的阴离子A3转化为其他的阴离子。
[1259] 化合物96可使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者文献(美国专利申请公开第2012/0172411号说明书)记载的方法或以其为基准的方法获得。
[1260] 用于化合物97等的反应的化合物可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法方法、或者根据文献而使用已知的方法或以其为基准的方法获得。
[1261] 化合物(IIIb)可由乙醛酸乙酯按照合成路径19而得到。
[1262] [化学式110]
[1263] 合成路径19
[1264]
[1265] (式中，M19为-(CY50Y51)p23-或-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-(式中，各基团各自与2
上述定义相同)，b为：
[1266] [化学式111]
[1267]
[1268] 其他各基团各自与上述定义相同。需要说明的是，p33为0时，N直接与同Z21相邻的碳原子键合。)
[1269] 通过在溶剂(例如，四氢呋喃等醚系溶剂等)中、使乙醛酸乙酯与格式试剂98、99及100依次进行反应，可得到化合物101。需要说明的是，R7、R8及R9相同的化合物101也可通过使过量的化合物98作用于乙醛酸乙酯而得到。
[1270] 通过在溶剂(例如，氯仿等卤素系溶剂等)中将化合物101与化合物102用碱(例如，三乙胺等有机碱等)、缩合剂(例如，1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐等缩合剂)及活化剂(N,N-二甲基氨基吡啶等活化剂)进行处理，可得到化合物103。
[1271] 通过使化合物103与化合物97、104或者105在溶剂(例如，氯仿等卤素系溶剂等)的存在下或非存在下、于室温或者高温(例如，100℃以上)进行反应，可得到化合物(IIIb)。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对化合物(IIIb)进行处理，从而将化合物(IIIb)的阴离子A3转化为其他的阴离子。
[1272] 化合物98可通过使甲磺酰化试剂(甲磺酸酐或者甲磺酰氯等)、溴化物盐(溴化镁或者溴化锂等)、及金属镁依次作用于R7-OH(市售品、使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法获得)而得到。化合物99及100与化合物98同样。
[1273] 化合物104及105与化合物23同样。
[1274] 化合物102与化合物54同样。
[1275] 化合物108、109、及112可分别由氨、甲酸乙酯、及化合物99按照合成路径20而得到。
[1276] [化学式112]
[1277] 合成路径20
[1278]
[1279] (式中，M21为-OH、M22为HO-CO-、M25为-O-CO-；或者M21为-NY45C-H、M22为HO-CO-、M2545C 21 22 25 21 22 14B 25
为-NY -CO-；或者M 为-CO-OH、M 为HO-、M 为-CO-O-；或者M 为-CO-OH、M 为H-NY -、M为-CO-NY14B-。另外，M20不存在、M23为-(CY39Y40)p18-；或者M20不存在、M23为-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-；或者M20为-Z13-(CY41Y42)p19-、M23为-(CY43Y44)p20-。另外，M24为-(CY63Y64)p29-、或-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-，其他各基团各自与上述定义相同。)
[1280] 化合物108可应用与合成路径1中的由氨合成化合物4同样的反应条件、使氨、化合物106及化合物107进行反应而得到。
[1281] 化合物109可应用与合成路径19中的由乙醛酸乙酯合成化合物101同样的反应条件、使甲酸乙酯、化合物99及化合物100进行反应而得到。
[1282] 化合物112可通过在使化合物110与化合物111经由酯化或者酰胺化进行缩合后、进行脱保护而得到。
[1283] 化合物106及107与化合物1同样。
[1284] 化合物110中的M21为-OH的化合物与合成路径1记载的R1-L1-OH同样。另外，化合物110中的M21为-NY45C-H的化合物与化合物37同样。另外，化合物110中的M21为-CO-OH的化合物与化合物17同样。
[1285] 化合物111可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(例如，第4版实验化学讲座20有机化合物的合成II”、第4版、p.187、丸善(1992年)等中记载的方法)或以其为基准的方法获得。
[1286] 化合物(IIIc)及(IIId)可各自由化合物108及112、以及化合物109及112按照合成路径21而得到。
[1287] [化学式113]
[1288] 合成路径21
[1289]
[1290] (式中，各基团各自与上述定义相同)
[1291] 化合物(IIIc)可通过在使化合物108与112经由酰胺化进行缩合后、使化合物114、115、或116作用而得到。
[1292] 化合物(IIId)可通过在使化合物109与112经由酯化进行缩合后、使化合物114、115、或116作用而得到。
[1293] 需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对化合物(IIIc)或者3
(IIId)进行处理，从而将化合物(IIIc)或者(IIId)的阴离子A转化为其他的阴离子。
[1294] 用于反应的各化合物如前文所述。
[1295] 以下，通过合成路径12～13的方法、或以这些方法为基准的方法等，可得到化合物(IV)。
[1296] 化合物127可按照合成路径22而得到。
[1297] [化学式114]
[1298] 合成路径22
[1299]
[1300] (式中，M26及M27相同或不同，为-(CY90Y91)p41-，M28及M29相同或不同，为-O-CO-(CY90Y91)p41-或-CO-O-(CY90Y91)p41-，M30及M31相同或不同，其不存在，或者为-O-CO-(CY90Y91)p41-或-CO-O-(CY90Y91)p41-，其他各基团各自与上述定义相同)
[1301] 通过使化合物118、与化合物119及化合物120经由酯化反应依次进行缩合、或者使化合物122、与化合物123及化合物124经由酯化反应依次进行缩合，可得到化合物121。
[1302] 对于化合物125而言，可通过下述方法得到：在溶剂(例如，四氢呋喃等醚系溶剂等)中、使脱保护试剂(例如，四正丁基氟化铵等脱保护试剂)作用于化合物121，或者在溶剂(例如，四氢呋喃等醚系溶剂等)中、使化合物126及化合物127依次与甲酸乙酯进行加成反应。
[1303] 通过在溶剂(例如，氯仿等非质子性溶剂等)中、使氧化剂(例如，戴斯-马丁(Dess-Martin)试剂等有机系氧化剂或氯铬酸吡啶鎓等无机系氧化剂)作用于化合物125，可得到化合物128。
[1304] 对于用于化合物118、化合物119、化合物120、化合物122、化合物123、化合物124、化合物126及化合物127等的反应的化合物而言，可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(“第4版实验化学讲座22有机化合物的合成IV”、第4版、p.1、丸善(1992年)、“第4版实验化学讲座20有机化合物的合成II”、第4版、p.1、丸善(1992年)、及“第4版实验化学讲座25有机化合物的合成VII”、第4版、p.59、丸善(1991年)等)或以其为基准的方法获得。
[1305] 化合物(IVa)可由化合物128按照合成路径23而得到。
[1306] [化学式115]
[1307] 合成路径23
[1308]
[1309] (式中，各基团各自与上述定义相同)
[1310] 通过使化合物128与化合物129在溶剂(例如，1,2-二氯乙烷等卤素系溶剂等)中、在还原剂(例如，硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化物等氢化物等)、根据情况而使用的添加剂(例如，乙酸等酸)的存在下进行反应，可得到化合物130。
[1311] 通过使化合物130与化合物131在碱(例如，氢氧化钠等无机碱等)的存在下、于高温(例如，100℃以上)进行反应，可得到化合物132。溶剂并非是必需的，但根据情况也可使用例如乙二醇等溶剂。
[1312] 通过使化合物132与化合物133在溶剂(例如，氯仿等卤素系溶剂等)的存在下或非存在下、于室温或者高温(例如，100℃以上)进行反应，可得到化合物(IVa)。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对(IVa)进行处理，从而将化合物(IVa)的阴离子A4转化为其他的阴离子。
[1313] 对于用于化合物129、化合物131及化合物133等的反应的化合物而言，可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(例如，国际公开第2010/042877号、国际公开第2010/054401号、“第5版实验化学讲座13有机化合物的合成I”、第5版、p.374、丸善(2005年)等中记载的方法)或以其为基准的方法获得。
[1314] 化合物(IVb)可按照合成路径24而得到。
[1315] [化学式116]
[1316] 合成路径24
[1317]
[1318] (式中，M32不存在，或者为-Z27-(CY92Y93)p42-，Ns表示邻硝基苯磺酰基，其他各基团各自与上述定义相同)
[1319] 在使化合物134、化合物135、三苯基膦、及偶氮二羧酸二乙酯进行反应后，使硫醇(例如，1-十二烷基硫醇、苯硫酚等)作用于得到的缩合物进行脱Ns化，由此可得到化合物136。
[1320] 将化合物136与137进行酰胺化后，可得到化合物138。
[1321] 化合物(IVb)可使139作用于化合物138而得到。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对化合物(IVb)进行处理，从而将化合物(IVb)的阴离子A4转化为其他的阴离子。
[1322] 化合物134可通过使氯代邻硝基苯磺酰基作用于R11-L14-NH2而得到。R11-L14-NH2可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(例如，“第4版实验化学讲座20有机化合物的合成II”、第4版、p.279、丸善(1992年)等中记载的方法)或以其为基准的方法获得。
[1323] 用于化合物135、137及139等的反应的化合物可通过上述中的任一种方法而得到。
[1324] 化合物(V’a)可按照合成路径25而得到
[1325] [化学式117]
[1326] 合成路径25
[1327]
[1328] (式中，DMTr表示2’,2”-二甲氧基三苯甲基，M33表示-(CY122R123)p54-、-(CY124Y125)p55-Z35-(CY126R127)p56-或-(CY128R129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-，M34、M35、及M36各自为独立地为-O-或-CO-O-，其他各基团各自与上述相同)
[1329] 化合物141可通过使2’,2”-二甲氧基三苯基氯甲烷作用于化合物140而得到。
[1330] 化合物142可通过使化合物141进行3个阶段的醚化、或酯化而得到。
[1331] 化合物143可通过用酸处理化合物142而得到。
[1332] 化合物144可通过在用卤化试剂将化合物143活化后、用对应的胺化合物进行处理而得到。
[1333] 化合物(V’a)可通过使化合物145作用于化合物144而得到。需要说明的是，也可通过例如用合适的阴离子交换树脂对(V’a)进行处理，从而将化合物(V’a)的阴离子A5转化为其他的阴离子。
[1334] 化合物140可以以市售品的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(例如，“The Organic Chemistry of Sugars”、Daniel E.Levy等人著、Taylor&Francis出版公司、2005年等中记载的方法)或以其为基准的方法获得。
[1335] 化合物(V”a)可以以化合物146作为原料、通过与合成路径25相同的方法而得到。
[1336] [化学式118]
[1337] 合成路径26
[1338]
[1339] (式中，各基团各自与上述定义相同)
[1340] 化合物146可以以市售品的形式、天然物的形式、或者使用实施例中记载的方法或以其为基准的方法、或者根据文献而使用已知的方法(例如，“The Organic Chemistry of Sugars”、Daniel E.Levy等人著、Taylor&Francis出版公司、2005年等中记载的方法)或以其为基准的方法获得。
[1341] 通过将以上的合成路径1～26中的任一种方法、或者以这些方法为基准的方法等适当组合，可得到化合物(I)～(V”)。
[1342] 化合物(CL-I)可使用国际公开第2013/089151号中记载的方法、或者以其为基准的方法而得到。
[1343] 化合物(CL-II)可使用国际公开第2011/136368号中记载的方法、或者以其为基准的方法而得到。
[1344] 化合物(CL-III)、化合物(CL-IV)及化合物(CL-V)可使用国际公开第2014/007398号中记载的方法、或者以其为基准的方法而得到。
[1345] 化合物(CL-VI)可使用国际公开第2010/042877号中记载的方法、或者以其为基准的方法而得到。
[1346] 化合物(CL-VII)可使用国际公开第2010/054401号中记载的方法、或者以其为基准的方法而得到。
[1347] 本发明中的脂质A的具体例子示于表29～表44，但脂质A不限于这些具体例子。
[1348] [表29]
[1349] 表29
[1350]
[1351] [表30]
[1352] 表30
[1353]
[1354] [表31]
[1355] 表31
[1356]
[1357] [表32]
[1358] 表32
[1359]
[1360] [表33]
[1361] 表33
[1362]
[1363] [表34]
[1364] 表34
[1365]
[1366] [表35]
[1367] 表35
[1368]
[1369] [表36]
[1370] 表36
[1371]
[1372] [表37]
[1373] 表37
[1374]
[1375] [表38]
[1376]
[1377] [表39]
[1378] 表39
[1379]
[1380] [表40]
[1381] 表40
[1382]
[1383] [表41]
[1384] 表41
[1385]
[1386] [表42]
[1387] 表42
[1388]
[1389] [表43]
[1390] 表43
[1391]
[1392] [表44]
[1393] 表44
[1394]
[1395] 作为本发明中使用的核酸，只要是例如核苷酸及/或与核苷酸具有同等功能的分子聚合得到的分子，则可为任何分子，可举出例如作为核糖核苷酸的聚合体的核糖核酸(RNA)、作为脱氧核糖核苷酸的聚合体的脱氧核糖核酸(DNA)、由RNA和DNA形成的嵌合核酸、及上述核酸中的至少一个核苷酸被与该核苷酸具有同等功能的分子取代而得到的核苷酸聚合体等。此外，含有至少一部分核苷酸及/或与核苷酸具有同等功能的分子聚合而得到的分子的结构的衍生物也包括在本发明的核酸中。需要说明的是，本发明中，尿苷U和胸腺嘧啶T可分别互换来读出。
[1396] 作为与核苷酸具有同等功能的分子，可以举出例如核苷酸衍生物等。
[1397] 作为核苷酸衍生物，只要是例如对核苷酸进行了修饰的分子，则可为任何分子，例如，与RNA或DNA比较，为了提高核酸酶耐性或使其免受其他分解因子的影响而稳定化、为了提高与互补链核酸的亲和性、为了提高细胞透过性、或者为了使其可见，可优选使用对核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸进行了修饰的分子等。
[1398] 作为核苷酸衍生物，可以举出例如糖部修饰核苷酸、磷酸二酯键修饰核苷酸、碱基修饰核苷酸等。
[1399] 作为糖部修饰核苷酸，只要是例如对核苷酸的糖的化学结构的一部分或全部用任意的取代基进行了修饰或取代的核苷酸、或者用任意的原子进行了取代的核苷酸，则可为任意的核苷酸，可优选使用2’-修饰核苷酸。
[1400] 作为糖部修饰核苷酸的修饰基团，可举出例如2’-氰基、2’-烷基、2’-取代烷基、2’-链烯基、2’-取代链烯基、2’-卤素、2’-O-氰基、2’-O-烷基、2’-O-取代烷基、2’-O-链烯基、2’-O-取代链烯基、2’-S-烷基、2’-S-取代烷基、2’-S-链烯基、2’-S-取代链烯基、2’-氨基、2’-NH-烷基、2’-NH-取代烷基、2’-NH-链烯基、2’-NH-取代链烯基、2’-SO-烷基、2’-SO-取代烷基、2’-羧基、2’-CO-烷基、2’-CO-取代烷基、2’-Se-烷基、2’-Se-取代烷基、2’-SiH2-烷基、2’-SiH2-取代烷基、2’-ONO2、2’-NO2、2’-N3、2’-氨基酸残基(从氨基酸的羧酸中除去羟基而得到的基团)、2’-O-氨基酸残基(与上述氨基酸残基的定义相同)等。
[1401] 作为糖部修饰核苷酸，还可以举出例如具有2’位的修饰基团与4’位的碳原子桥联的结构的桥联结构型人工核酸(Bridged Nucleic Acid)(BNA)，更具体而言为2’位的氧原子与4’位的碳原子介由亚甲基桥联而得到的锁人工核酸(Locked Nucleic Acid)(LNA)及亚乙基桥联结构型人工核酸(Ethylene bridged nucleic acid)(ENA)[Nucleic Acid Research,32,e175(2004)]等，它们也包括在2’-修饰核苷酸中。
[1402] 作为糖部修饰核苷酸，还可举出肽核酸(PNA)[Acc.Chem.Res.,32,624(1999)]、氧基肽核酸(OPNA)[J.Am.Chem.Soc.,123,4653(2001)]、肽核糖核酸(PRNA)[J.Am.Chem.Soc.,122,6900(2000)]等。
[1403] 作为糖部修饰核苷酸的修饰基团，优选为2’-氰基、2’-卤素、2’-O-氰基、2’-烷基、2’-取代烷基、2’-O-烷基、2’-O-取代烷基、2’-O-链烯基、2’-O-取代链烯基、2’-Se-烷基或
2’-Se-取代烷基等，更优选为2’-氰基、2’-氟、2’-氯、2’-溴、2’-三氟甲基、2’-O-甲基、2’-O-乙基、2’-O-异丙基、2’-O-三氟甲基、2’-O-[2-(甲氧基)乙基]、2’-O-(3-氨基丙基)、2’-O-[2-(N,N-二甲基氨基氧基)乙基]、2’-O-[3-(N,N-二甲基氨基)丙基]、2’-O-{2-[2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基]乙基}、2’-O-[2-(甲基氨基)-2-氧代(oxo)乙基]或2’-Se-甲基等，进一步优选为2’-O-甲基、2’-O-乙基、2’-氟等，最优选为2’-O-甲基或2’-O-乙基。
[1404] 糖部修饰核苷酸的修饰基团也可以从其大小考虑来定义优选的范围，从氟的大小考虑优选相当于-O-丁基的大小的基团，从-O-甲基的大小考虑更优选相当于-O-乙基的大小的基团。
[1405] 作为糖部修饰核苷酸的修饰基团中的烷基，可举出例如C1-C6烷基，更具体而言，可举出甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基或己基等C1-C6烷基。
[1406] 作为糖部修饰核苷酸的修饰基团中的链烯基，可举出例如C3-C6链烯基，更具体而言，可举出烯丙基、1-丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基等C3-C6链烯基。
[1407] 作为糖部修饰核苷酸的修饰基团中的卤素，可以举出例如氟原子、氯原子、溴原子或碘原子等。
[1408] 作为氨基酸残基中的氨基酸，可以举出例如脂肪族氨基酸(具体而言，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等)、羟基氨基酸(具体而言，丝氨酸、苏氨酸等)、酸性氨基酸(具体而言，天冬氨酸、谷氨酸等)、酸性氨基酸酰胺(具体而言，天冬酰胺、谷氨酰胺等)、碱性氨基酸(具体而言，赖氨酸、羟基赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸等)、含硫氨基酸(具体而言，半胱氨酸、胱氨酸、蛋氨酸等)或亚氨基酸(具体而言，脯氨酸、4-羟基脯氨酸等)等。
[1409] 作为糖部修饰核苷酸的修饰基团中的取代烷基及取代链烯基中的取代基，可以举出例如卤素(与上述定义相同)、羟基、硫烷基、氨基、氧代、-O-烷基(该-O-烷基的烷基部分与上述修饰基团中的C1-C6烷基定义相同)、-S-烷基(该-S-烷基的烷基部分与上述修饰基团中的C1-C6烷基定义相同)、-NH-烷基(该-NH-烷基的烷基部分与上述修饰基团中的C1-C6烷基定义相同)、二烷基氨基氧基(该二烷基氨基氧基的两个烷基部分相同或不同，与上述修饰基团中的C1-C6烷基定义相同)、二烷基氨基(该二烷基氨基的两个烷基部分相同或不同，与上述修饰基团中的C1-C6烷基定义相同)或二烷基氨基烷基氧基(该二烷基氨基烷基氧基的两个烷基部分相同或不同，与上述修饰基团中的C1-C6烷基定义相同，亚烷基部分表示从上述修饰基团中的C1-C6烷基中除去1个氢原子而得到的基团)等，取代数优选为1～3。
[1410] 作为磷酸二酯键修饰核苷酸，只要是对核苷酸的磷酸二酯键的化学结构的一部分或全部用任意的取代基进行了修饰或取代的核苷酸、或者用任意的原子进行了取代的核苷酸，则可为任意的核苷酸，可举出例如磷酸二酯键被硫代磷酸酯键取代的核苷酸、磷酸二酯键被二硫代磷酸酯键取代的核苷酸、磷酸二酯键被磷酸烷基酯键取代的核苷酸或磷酸二酯键被氨基磷酸酯键取代的核苷酸等。
[1411] 作为碱基修饰核苷酸，只要是对核苷酸的碱基的化学结构的一部分或全部用任意的取代基进行了修饰或者取代的核苷酸、或者用任意的原子进行了取代的核苷酸，则可以为任意的核苷酸，可举出例如碱基内的氧原子被硫原子取代的核苷酸、氢原子被C1-C6烷基取代的核苷酸、甲基被氢原子或C2-C6烷基取代的核苷酸、氨基被C1-C6烷基、C1-C6烷酰基等保护基团保护的核苷酸等。
[1412] 进而，作为核苷酸衍生物，还可以举出在核苷酸或糖部、磷酸二酯键或碱基的至少一方被修饰了的核苷酸衍生物中加成其他化学物质(如脂质、磷脂、吩嗪、叶酸、菲啶、蒽醌、吖啶、荧光素、罗丹明、香豆素及色素等)而得到的物质，具体而言，可以举出5’-多胺加成核苷酸衍生物、胆固醇加成核苷酸衍生物、甾体加成核苷酸衍生物、胆汁酸加成核苷酸衍生物、维生素加成核苷酸衍生物、绿色荧光素(Cy3)加成核苷酸衍生物、红色荧光素(Cy5)加成核苷酸衍生物、荧光素(fluoroscein)(6-FAM)加成核苷酸衍生物及生物素加成核苷酸衍生物等。
[1413] 本发明中使用的核酸中，核苷酸或核苷酸衍生物可与该核酸内的其他核苷酸或核苷酸衍生物形成亚烷基结构肽结构、核苷酸结构、醚结构、酯结构、及组合了这些结构中的至少一种的结构等的交联结构。
[1414] 作为本发明中使用的核酸，优选为分子量为1,000kDa以下的核酸，更优选为100kDa以下的核酸，进一步优选为30kDa以下的核酸。作为本发明中使用的核酸，可优选地举出抑制靶基因表达的核酸，可更优选地举出具有利用了RNA干扰(RNAi)的、靶基因表达抑制作用的核酸。
[1415] 作为本发明中的靶基因，只要是产生mRNA并进行表达的基因，则没有特别限定，优选为例如与肿瘤或炎症相关的基因，可举出例如编码血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，以下简称为VEGF)、血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor，以下简称为VEGFR)、成纤维细胞生长因子、成纤维细胞生长因子受体、来自血小板的生长因子、来自血小板的生长因子受体、肝细胞生长因子、肝细胞生长因子受体、Kruppel样因子(Kruppel-like factor，以下简称为KLF)、表达序列标签(Ets)转录因子、核因子、低氧诱导因子、细胞周期相关因子、染色体复制相关因子、染色体修复相关因子、微管相关因子、生长信号途径相关因子、生长相关转录因子或凋亡相关因子等蛋白质的基因等，具体而言可以举出VEGF基因、VEGFR基因、成纤维细胞生长因子基因、成纤维细胞生长因子受体基因、来自血小板的生长因子基因、来自血小板的生长因子受体基因、肝细胞生长因子基因、肝细胞生长因子受体基因、KLF基因、Ets转录因子基因、核因子基因、低氧诱导因子基因、细胞周期相关因子基因、染色体复制相关因子基因、染色体修复相关因子基因、微管相关因子基因(例如CKAP5基因等)、生长信号途径相关因子基因(例如KRAS基因等)、生长相关转录因子基因或凋亡相关因子基因(例如BCL-2基因等)等。
[1416] 作为本发明中的靶基因，优选例如在肝脏、肺、肾脏或脾脏中表达的基因，较优选在肝脏中表达的基因，可以举出例如上述与肿瘤或炎症相关的基因、乙型肝炎病毒基因组、丙型肝炎病毒基因组、编码下述蛋白质的基因等，所述蛋白质为载脂蛋白(APO)、羟甲基戊二酸单酰(HMG)CoA还原酶、kexin 9型丝氨酸蛋白酶(PCSK9)、第12因子、胰高血糖素受体、糖皮质激素受体、白三烯受体、血栓烷A2受体、组胺H1受体、碳酸酐酶、血管紧张肽转变酶、肾素、p53、酪氨酸磷酸酶(PTP)、钠依赖性葡萄糖运输载体、肿瘤坏死因子、白细胞介素、铁调素(hepcidin)、甲状腺素运载蛋白(transthyretin)、抗凝血酶、蛋白质C或matriptase酶(例如TMPRSS6基因等)等。
[1417] 作为抑制靶基因表达的核酸，只要是例如含有与编码蛋白质等的基因(靶基因)的mRNA的一部分的碱基序列互补的碱基序列、并且抑制靶基因表达的核酸，则可使用例如siRNA(短干扰RNA，short interference RNA)、miRNA(微型RNA，microRNA)等双链核酸、shRNA(短发卡RNA，short hairpinRNA)、反义核酸、核酶等单链核酸等任意的核酸，优选为双链核酸。
[1418] 将含有与靶基因的mRNA的一部分碱基序列互补的碱基序列的核酸称为反义链核酸，还将含有与反义链核酸的碱基序列互补的碱基序列的核酸称为有义链核酸。有义链核酸是指由靶基因的一部分碱基序列形成的核酸本身等、能够与反义链核酸配对形成双链形成部的核酸。
[1419] 所谓双链核酸，是指两根链配对从而具有双链形成部的核酸。所谓双链形成部，是指构成双链核酸的核苷酸或其衍生物构成碱基对并且形成双链的部分。关于构成双链形成部的碱基对，通常为15～27个碱基对，优选为15～25个碱基对，更优选为15～23个碱基对，进一步优选为15～21个碱基对，特别优选为15～19个碱基对。
[1420] 作为双链形成部的反义链核酸，优选使用例如包含靶基因的mRNA的一部分序列的核酸、或者在该核酸中取代、缺失或添加1～3个碱基、优选1～2个碱基、更优选1个碱基、并且具有靶蛋白质的表达抑制活性的核酸。构成双链核酸的单链的核酸通常包含15～30个碱基(核苷)的序列，优选为15～29个碱基，更优选为15～27个碱基，进一步优选为15～25个碱基，特别优选为17～23个碱基，最优选为19～21个碱基。
[1421] 构成双链核酸的反义链、有义链中的任一方、或双方的核酸可在与双链形成部连续的3’侧或5’侧具有未形成双链的追加的核酸。所述未形成双链的部分也称为突出部(overhang，悬挂)。
[1422] 作为具有突出部的双链核酸，可以使用例如在至少一方的链的3’末端或5’末端具有包含1～4个碱基、通常包含1～3个碱基的突出部的双链核酸，优选使用具有包含2个碱基的突出部的双链核酸，更优选使用具有包含dTdT或UU的突出部的双链核酸。突出部可仅在反义链一方具有，可仅在有义链一方具有，也可在反义链和有义链双方均具有，优选使用在反义链和有义链双方具有突出部的双链核酸。
[1423] 也可使用与双链形成部连续且与靶基因的mRNA的碱基序列的一部分或全部一致的序列、或者与双链形成部连续且与靶基因的mRNA的互补链的碱基序列的一部分或全部一致的序列。此外，作为抑制靶基因表达的核酸，也可使用例如通过Dicer等核糖核酸酶的作用生成上述双链核酸的核酸分子(国际公开第2005/089287号)、或者不具有3’末端或5’末端的突出部的双链核酸等。
[1424] 上述双链核酸为siRNA的情况下，优选的是，反义链中，由5’末端侧向3’末端侧至少第1～17个碱基(核苷)的序列为与靶基因的mRNA的连续17个碱基的序列互补的碱基的序列；更优选的是，该反义链中，由5’末端侧向3’末端侧第1～19个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续19个碱基的序列互补的碱基的序列，或者第1～21个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续21个碱基的序列互补的碱基的序列，或者第1～25个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续25个碱基的序列互补的碱基的序列。
[1425] 进而，本发明中使用的核酸为siRNA的情况下，优选该核酸中的糖的10～70％、更优选15～60％、进一步优选20～50％为在2’位被修饰基团取代的核糖。本发明中的在2’位被修饰基团取代的核糖是指核糖的2’位的羟基被修饰基团取代，可与核糖的2’位的羟基的立体构型相同或不同，优选与核糖的2’位的羟基的立体构型相同。作为在2’位被修饰基团取代的核糖的修饰基团，可举出糖部修饰核苷酸中的2’-修饰核苷酸的修饰基团的定义中示例的修饰基团及氢原子，优选为2’-氰基、2’-卤素、2’-O-氰基、2’-烷基、2’-取代烷基、2’-O-烷基、2’-O-取代烷基、2’-O-链烯基、2’-O-取代链烯基、2’-Se-烷基、2’-Se-取代烷基等，更优选为2’-氰基、2’-氟、2’-氯、2’-溴、2’-三氟甲基、2’-O-甲基、2’-O-乙基、2’-O-异丙基、2’-O-三氟甲基、2’-O-[2-(甲氧基)乙基]、2’-O-(3-氨基丙基)、2’-O-[2-(N,N-二甲基)氨基氧基]乙基、2’-O-[3-(N,N-二甲基氨基)丙基]、2’-O-{2-[2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基]乙基}、2’-O-[2-(甲基氨基)-2-氧代乙基]、2’-Se-甲基、氢原子等，进一步优选为2’-O-甲基、2’-O-乙基、2’-氟、氢原子等，最优选2’-O-甲基、2’-O-氟。
[1426] 本发明中使用的核酸包括：核酸的结构中的磷酸部、酯部等中含有的氧原子等被取代为例如硫原子等其他原子的衍生物。
[1427] 键合于反义链及有义链的5’末端的碱基的糖中，各个5’位的羟基可被磷酸基或上述修饰基团、或者通过生物体内的核酸分解酶等被转化为磷酸基或上述修饰基团的基团修饰。
[1428] 键合于反义链及有义链的3’末端的碱基的糖中，各个3’位的羟基可被磷酸基或上述修饰基团、或者通过生物体内的核酸分解酶等被转化为磷酸基或上述修饰基团的基团修饰。
[1429] 作为单链的核酸，只要是例如包含由靶基因的连续15～27个碱基(核苷)、优选15～25个碱基、更优选15～23个碱基、进一步优选15～21个碱基、特别优选15～19个碱基组成的序列的互补序列的核酸、或者在该核酸中有1～3个碱基、优选1～2个碱基、更优选1个碱基被取代、缺失或添加，并且具有靶蛋白质的表达抑制活性的核酸，则可以为任意的核酸。该单链的核酸优选包含连续10～30个碱基(核苷)的序列，更优选10～27个碱基、进一步优选10～25个碱基、特别优选10～23个碱基的单链核酸。
[1430] 作为单链核酸，也可以使用将构成上述双链核酸的反义链及有义链经间隔序列(间隔寡核苷酸)连接而得到的核酸。作为间隔寡核苷酸，优选6～12个碱基的单链核酸分子，优选其5’末端侧的序列为2个U。作为间隔寡核苷酸的例子，可以举出包含UUCAAGAGA序列的核酸。关于经由间隔寡核苷酸连接的反义链及有义链的顺序，任一方形成5’侧均可。作为该单链核酸，优选为例如通过茎环结构具有双链形成部的shRNA等单链核酸。shRNA等单链核酸通常为50～70个碱基长度。
[1431] 也可以使用70个碱基长度以下、优选50个碱基长度以下、进一步优选30个碱基长度以下的核酸，其被设计为通过核糖核酸酶等的作用而形成上述单链核酸或双链核酸。
[1432] 需要说明的是，本发明中使用的核酸可采用已知的RNA或DNA合成法、及RNA或DNA修饰法而得到。
[1433] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子是脂质A与核酸形成的复合体，也可含有1种或2种以上的脂质A。
[1434] 对于本发明的含有核酸的脂质纳米粒子而言，除了脂质A和核酸以外，也可含有脂质A以外的1种或2种以上的脂质B、中性脂质及/或水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物。
[1435] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子也可同时含有脂质A、和1种或2种以上的脂质B。
[1436] 需要说明的是，本发明的含有核酸的脂质纳米粒子不仅含有核酸，也可含有与核酸化学性地近似的化合物(阴离子性肽等阴离子性高分子等)。
[1437] 本发明中，核酸可与脂质A、和根据需要而使用的其他脂质(水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物、中性脂质、及/或包含亲水部及疏水部的脂质(脂质B)，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基)一同被溶解于能与水混合的有机溶剂中(第一脂质溶液)。第一脂质溶液的制备中，将核酸溶解于水或缓冲剂水溶液，可添加至脂质的有机溶剂溶液中，另外，也可向核酸的水或缓冲剂水溶液中添加脂质的有机溶剂溶液。此外，也可向经过冷冻干燥的核酸中添加脂质的有机溶剂溶液。
[1438] 也可使用核酸、脂质A、和根据需要而使用的其他脂质(水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物、中性脂质、及/或包含亲水部及疏水部的脂质(脂质B)，所述亲水部含有可具有取代基的1个氨基，所述疏水部含有2个独立的可具有取代基的烃基)一时性地制成有机溶剂溶液(第一脂质溶液)，然后加入含有水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物的有机溶剂溶液(第二脂质溶液)，从而制备第三脂质溶液。
[1439] 本发明中，第一或第三脂质溶液可与水或缓冲剂水溶液进行混合。此时，通过快速地降低有机溶剂浓度，能够得到尺寸小的脂质纳米粒子，而不发生凝聚。
[1440] 在第一或第三脂质溶液与水或缓冲剂水溶液的混合中，可将前者加入后者中，也可将后者加入前者中。另外，还可以一边搅拌，一边同时向容器中加入前者和后者。此外，还可在线将前者与后者混合。该情况下，作为在线混合装置，可使用例如T型连接器等。
[1441] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径受使用的核酸、以及含有具有1个季铵基的亲水部及3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)及其他脂质影响，可通过制造工艺中的各种参数而自由地进行控制。本领域技术人员可对控制本发明的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径所必需的制造工艺中的各种参数进行适当改变而制备粒子样品，通过测定得到的样品的平均粒径来确定。作为平均粒径的控制所必需的参数，可举出有机溶剂溶液中的核酸浓度、各脂质的浓度、温度、有机溶剂的组成等。另外，作为平均粒径的控制所必需的参数，还可举出利用水或缓冲剂水溶液对核酸及脂质有机溶剂溶液进行稀释操作时的温度、水或缓冲剂水溶液的量、各溶液的添加速度等。
[1442] 不含有磷脂酰胆碱(PC)及胆固醇(Chol)的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，具有1个季铵基作为亲水部、且包含3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)的浓度不受特别限定，优选为1～2000μM，更优选为5～400μM，进一步优选为10～200μM，最优选为20～100μM。
[1443] 不含有PC及Chol的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，核酸的浓度不受特别限定，优选为0.03～15μM，更优选为0.15～3.0μM，进一步优选为0.3～1.5μM。
[1444] 不含有PC及Chol的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物的浓度不受特别限定，优选为0.5～200μM，更优选为2.5～40μM，进一步优选为5～20μM。
[1445] 不含有PC及Chol的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，阳离子性脂质的浓度不受特别限定，优选为1～2000μM，更优选为5～400μM，进一步优选为10～200μM，最优选为20～100μM。
[1446] 不含有PC及Chol的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，所有脂质的总浓度不受特别限定，优选为5～2000μM，更优选为25～400μM，进一步优选为50～200μM。
[1447] 含有PC及Chol的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，具有1个季铵基作为亲水部、且包含3个独立的可具有取代基的烃基的脂质(脂质A)的浓度优选为0.2～1800μM，更优选为1～360μM，进一步优选为2～180μM，最优选为5～100μM。
[1448] 含有PC及Chol的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，核酸的浓度优选为0.02～45μM，更优选为0.1～10μM，进一步优选为0.2～5μM，最优选为0.3～3μM。
[1449] 含有PC及Chol的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物的浓度优选为0.3～1000μM，更优选为1.5～200μM，进一步优选为3～100μM，最优选为5～50μM。
[1450] 含有PC及Chol的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，阳离子性脂质的浓度优选为2.5～4200μM，更优选为12.5～840μM，进一步优选为25～420μM，最优选为50～210μM。
[1451] 含有PC及Chol的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，中性脂质的浓度优选为2.5～5000μM，更优选为12.5～1000μM，进一步优选为25～500μM，最优选为50～250μM。
[1452] 含有PC及Chol的情况下，与水或缓冲剂水溶液混合之前的有机溶剂溶液中，所有脂质的总浓度优选为10～8000μM，更优选为50～1600μM，进一步优选为100～800μM，最优选为150～400μM。
[1453] 制备含有核酸及脂质的有机溶剂溶液时的温度只要使核酸及脂质溶解即可，不受特别限定，优选为10～60℃，更优选为20～50℃，进一步优选为20～30℃。需要说明的是，加热至30℃以上的情况下，核酸及脂质的溶解度增大，从而能够以更少的溶剂量进行脂质纳米粒子的制造。
[1454] 作为含有核酸及脂质的有机溶剂溶液中的有机溶剂，不受特别限定，优选为含有0～50％(v/v)的水的甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等C1-C6醇类或它们的混合物，更优选为含有0～50％(v/v)的水的乙醇或者丙醇，进一步优选为含有0～50％(v/v)的水的乙醇。此处，“％(v/v)”表示溶质的体积在溶液整体的体积中所占的百分率，以下相同。
[1455] 也可向含有核酸及脂质的有机溶剂溶液中的溶剂中添加盐酸、乙酸、磷酸等无机酸、或这些酸的盐等。该情况下的溶剂的pH优选为1～7，更优选为1～5，进一步优选为2～4。
[1456] 向含有核酸及脂质的有机溶剂溶液中添加水或缓冲剂水溶液的操作中，使用的水或缓冲剂水溶液的容量不受特别限定，相对于核酸及脂质的有机溶剂溶液的容量而言，优选为0.5～100倍，更优选为1.5～20倍，进一步优选为2.0～10倍。
[1457] 该情况下，添加水或缓冲剂水溶液后的有机溶剂浓度不受特别限定，相对于得到的溶液而言，优选为50％(v/v)以下，更优选为40％(v/v)以下，进一步优选为30％(v/v)以下，最优选为20％(v/v)以下。另外，作为缓冲剂水溶液，只要具有缓冲作用即可，不受特别限定，可举出例如磷酸缓冲水溶液、柠檬酸缓冲水溶液、乙酸缓冲水溶液等。
[1458] 进行上述添加操作时的温度不受特别限定，优选为10～60℃，更优选为20～50℃，进一步优选为20～30℃。
[1459] 上述添加操作中，迅速地降低有机溶剂溶液的浓度是重要的。具体而言，优选在1分钟以内、更优选在0.5分钟以内、进一步优选在0.1分钟以内、最优选在0.05分钟以内使有机溶剂浓度从70％(v/v)以上变化为50％(v/v)以下。
[1460] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中，脂质A的分子的总数不受特别限定，相对于构成本发明的含有核酸的脂质纳米粒子的核酸的磷原子数而言，脂质A中的季铵基的摩尔数优选为0.01倍摩尔量以上，更优选为0.1～10倍摩尔量，进一步优选为0.1～4倍摩尔量，进一步更优选为0.1～2倍摩尔量，最优选为0.1～1倍摩尔量。含有核酸的脂质纳米粒子含有脂质B的情况下，脂质B的分子的总数不受特别限定，相对于构成本发明的含有核酸的脂质纳米粒子的核酸的磷原子数而言，脂质A中的季铵基的摩尔数优选为0.1～10倍摩尔量，更优选为0.5～9倍摩尔量，进一步优选为1～8倍摩尔量，最优选为1.5～6倍摩尔量。
[1461] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子含有脂质B的情况下，脂质A的摩尔数与脂质B的摩尔数的比率(脂质A的摩尔数/脂质B的摩尔数)优选为0.001以上，更优选为0.003～10，进一步优选为0.005～5，进一步更优选为0.01～3，最优选为0.01～2。
[1462] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中，全部脂质的摩尔数与核酸的摩尔数的比率(全部脂质的摩尔数/核酸的摩尔数)优选为50以上，更优选为100～1000，进一步优选为120～800，进一步更优选为140～600，最优选为200～500。
[1463] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子含有脂质B的情况下，含有核酸的脂质纳米粒子中的脂质B的分子的总数不受特别限定，相对于全部脂质的摩尔数而言，优选为0.1倍摩尔量以上，更优选为0.15倍摩尔量以上，进一步优选为0.2倍摩尔量以上，进一步更优选为0.25倍摩尔量。另外，含有核酸的脂质纳米粒子中的脂质B的分子的总数不受特别限定，相对于全部脂质的摩尔数而言，优选为0.7倍摩尔量以下，更优选为0.65倍摩尔量以下，进一步优选为0.6倍摩尔量以下。
[1464] 含有核酸的脂质纳米粒子中，相对于全部脂质的摩尔数而言，脂质B的分子的总数在上述的上限下限的优选范围的组合中更优选为0.10～0.70倍摩尔量，进一步优选为0.15～0.65倍摩尔量，进一步更优选为0.20～0.65倍摩尔量，最优选为0.25～0.60倍摩尔量。
[1465] 作为中性脂质，可以为单纯脂质、复合脂质或衍生脂质中的任一种，可举出例如磷脂、甘油糖脂、神经鞘糖脂、鞘氨基醇(sphingoid)或甾醇等，但不限于这些。中性脂质可使用1种或组合使用2种以上。
[1466] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中含有中性脂质时，中性脂质的分子的总数不受特别限定，相对于全部脂质的摩尔数而言，优选为0.10～0.75倍摩尔量，更优选为0.20～0.70倍摩尔量，进一步优选为0.20～0.65倍摩尔量，最优选为0.30～0.60倍摩尔量。
[1467] 作为中性脂质中的磷脂，可举出例如磷脂酰胆碱(PC)(具体而言，大豆磷脂酰胆碱、蛋黄磷脂酰胆碱(EPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)等)、磷脂酰乙醇胺(具体而言，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、16-O-单甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(POPE)、1-硬酯酰-2-油酰-磷脂酰乙醇胺(SOPE)等)、甘油磷脂(具体而言，磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、棕榈酰油酰磷脂酰甘油(POPG)、溶血磷脂酰胆碱等)、神经鞘氨醇磷脂(具体而言，神经鞘磷脂、磷酸乙醇胺神经酰胺、神经酰胺磷酸甘油、磷酸甘油磷酸神经酰胺等)、甘油磷酸脂、神经鞘磷酸脂、天然卵磷脂(具体而言，蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂等)或氢化磷脂(具体而言，氢化大豆磷脂酰胆碱等)等天然或者合成的磷脂，但不限于这些。
[1468] 作为中性脂质中的甘油糖脂，可以举出例如硫氧基核糖基甘油酯、二糖基甘油二酯、二半乳糖甘油二酯、半乳糖甘油二酯或糖基甘油二酯等，但不限于这些。
[1469] 作为中性脂质中的鞘糖脂，可以举出例如半乳糖基脑苷脂、乳糖脑苷脂或神经节苷脂等，但不限于这些。
[1470] 作为中性脂质中的鞘氨基醇，可以举出例如鞘氨糖、二十鞘氨糖(icosasphingan)、鞘氨醇或它们的衍生物等，但不限于这些。作为衍生物，可以举出将例如鞘氨糖、二十鞘氨糖或者鞘氨醇等的-NH2转化为-NHCO(CH2)xCH3(式中，x为0～18的整数，其中优选6、12或者18)的产物等，但不限于这些。
[1471] 作为中性脂质中的甾醇，可以举出例如胆固醇(Chol)、二氢胆固醇、羊毛甾醇(lanosterol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、菜油甾醇(campesterol)、豆甾醇(stigmasterol)、菜子甾醇(brassicasterol)、麦角钙化甾醇(ergocasterol)、岩藻甾醇(fucosterol)或3β-[N-(N’,N’-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基]胆固醇(3β-[N-(N’,N’-dimethylaminoethyl)carbamoyl]cholesterol)(DC-Chol)等，但不限于这些。
[1472] 作为高分子，可举出包含例如蛋白质、白蛋白、葡聚糖、polyfect、脱乙酰壳多糖(chitosan)、硫酸葡聚糖(dextran sulfate)、例如聚-L-赖氨酸、聚乙烯亚胺、聚天冬氨酸、苯乙烯马来酸共聚物、异丙基丙烯酰胺-丙烯基吡咯烷酮共聚物、聚乙二醇修饰树状聚体(dendrimer)、聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸或聚乙二醇化聚乳酸等高分子或者它们的盐的一种以上形成的胶束等，但不限于这些。
[1473] 此处，高分子中的盐，包括例如金属盐、铵盐、酸加成盐、有机胺加成盐、氨基酸加成盐等。作为金属盐，可举出例如锂盐、钠盐、钾盐等碱金属盐，镁盐、钙盐等碱土金属盐，铝盐或锌盐等，但不限于这些。作为铵盐，可举出例如铵基或四甲基铵基等盐，但不限于这些。作为酸加成盐，可举出例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐或磷酸盐等无机酸盐，及乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐或柠檬酸盐等有机酸盐，但不限于这些。作为有机胺加成盐，可举出例如吗啉或哌啶等的加成盐，但不限于这些。作为氨基酸加成盐，可以举出例如甘氨酸、苯基丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或赖氨酸等的加成盐，但不限于这些。
[1474] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子均可含有例如选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的一种以上物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物、或表面活性剂等。
[1475] 作为选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的一种以上物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物、或表面活性剂，优选举出糖脂质、或水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物，更优选举出水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物。选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的一种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物或者表面活性剂优选为下述具有两面性的物质，所述物质具有分子的一部分与组合物的其他构成成分通过例如疏水性亲和力、静电相互作用等结合的性质，并且具有其他部分与制造组合物时的溶剂通过例如亲水性亲和力、静电相互作用等结合的性质。
[1476] 作为糖、肽或核酸的脂质衍生物或脂肪酸衍生物，可举出例如蔗糖、山梨醇、乳糖等糖、例如来自酪蛋白的肽、来自蛋清的肽、来自大豆的肽、谷胱甘肽等肽、或者例如DNA、RNA、质粒、siRNA、ODN等核酸、与上述组合物的定义中举出的中性脂质或例如硬脂酸、棕榈酸、肉豆蔻酸、月桂酸等脂肪酸结合而成的物质等。
[1477] 作为糖的脂质衍生物或脂肪酸衍生物，还包括例如上述组合物的定义中举出的甘油糖脂或神经鞘糖脂等。
[1478] 作为水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物，可举出例如聚乙二醇、聚甘油、聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、寡糖、糊精、水溶性纤维素、葡聚糖、硫酸软骨素、聚甘油、脱乙酰壳多糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚天冬酰胺、聚-L-赖氨酸、甘露聚糖、普鲁兰多糖、寡甘油等或它们的衍生物、与上述组合物的定义中举出的中性脂质、或例如硬脂酸、棕榈酸、肉豆蔻酸或月桂酸等脂肪酸结合而成的物质、它们的盐等，更优选举出聚乙二醇或聚甘油等的脂质衍生物或脂肪酸衍生物及它们的盐，进一步优选举出聚乙二醇的脂质衍生物或脂肪酸衍生物及它们的盐。
[1479] 作为聚乙二醇的脂质衍生物或脂肪酸衍生物，可举出例如聚乙二醇化脂质[具体而言，为聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(更具体而言为1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DSPE)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DPPE)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DMPE)等)、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚氧乙烯蓖麻油(CREMOPHOR EL)等]、聚乙二醇失水山梨糖醇脂肪酸酯类(具体而言，聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯等)或聚乙二醇脂肪酸酯类等，更优选举出聚乙二醇化脂质。
[1480] 作为聚甘油的脂质衍生物或脂肪酸衍生物，可以举出例如聚甘油化脂质(具体而言，聚甘油-磷脂酰乙醇胺等)或聚甘油脂肪酸酯类等，更优选举出聚甘油化脂质。
[1481] 作为表面活性剂，可以举出例如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(具体而言，聚山梨酸酯80等)、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇(具体而言，普朗尼克(Pluronic)F68等)、失水山梨糖醇脂肪酸酯(具体而言，失水山梨糖醇单月桂酸酯、失水山梨糖醇单油酸酯等)、聚氧乙烯衍生物(具体而言，聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚氧乙烯月桂醇等)、丙三醇脂肪酸酯或聚乙二醇烷基醚等，优选举出聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、丙三醇脂肪酸酯或聚乙二醇烷基醚等。
[1482] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中，含有核酸的脂质纳米粒子中的水溶性高分子的脂质衍生物及脂肪酸衍生物的分子的总数不受特别限定，相对于全部脂质的摩尔数而言，优选为0.005倍摩尔量以上，更优选为0.01～0.30倍摩尔量，进一步优选为0.02～0.25倍摩尔量，进一步更优选为0.03～0.20倍摩尔量，进一步更优选为0.04～0.15倍摩尔量，最优选为0.04～0.12倍摩尔量。
[1483] 本发明中，所谓全部脂质，包括脂质A及水溶性高分子的脂质衍生物及脂肪酸衍生物，根据情况也包括脂质B及中性脂质。即，对于脂质A的摩尔数而言，作为将全部脂质的摩尔数设为1时的倍摩尔量，为从1减去水溶性高分子的脂质衍生物及脂肪酸衍生物的倍摩尔量、与根据情况而使用的脂质B的倍摩尔量及中性脂质的倍摩尔量的总和后的倍摩尔量。
[1484] 此外，对于本发明的含有核酸的脂质纳米粒子，还可以任意地进行利用例如水溶性高分子等的表面改性[参见D.D.Lasic、F.Martin编，“Stealth Liposomes”(美国)，CRC Press Inc，1995年，p.93-102]。作为可用于表面改性的水溶性高分子，可以举出例如聚乙二醇、聚甘油、聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、寡糖、糊精、水溶性纤维素、葡聚糖、硫酸软骨素、聚甘油、脱乙酰壳多糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚天冬酰胺、聚-L-赖氨酸、甘露聚糖、普鲁兰多糖、寡甘油等，优选举出聚乙二醇、聚甘油、聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸及聚丙烯酰胺等，更优选举出聚乙二醇及聚甘油等，但不限于这些。另外，表面改性中，可使用选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的一种以上物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物(与上述定义相同)、或者表面活性剂等。该表面改性是使本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中包含选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的一种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物、或者表面活性剂的方法之一。
[1485] 可以任选地通过将经靶向化的配体以共价键键合于本发明的含有核酸的脂质纳米粒子的脂质成分的极性首残基而将该经靶向化的配体直接键合于本发明的含有核酸的脂质纳米粒子的表面(参见国际公开第2006/116107号)。
[1486] 对于本发明的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径，也可在制备纳米粒子后进一步进行调节。作为调节平均粒径的方法，可举出例如挤出法、将较大的多层膜脂质体(MLV)等机械粉碎(具体而言，使用Manton Gaulin、高压微射流均质机(Microfluidizer)等)的方法[参见R.H.Muller、S.Benita、B.Bohm编著，“Emulsion and Nanosuspensions for the Formulation of Poorly Soluble Drugs”，Germany,Scientific Publishers Stuttgart，1998年，p.267-294]等。
[1487] 对于本发明的含有核酸的脂质纳米粒子的大小而言，优选平均粒径为20～65nm，更优选为30～60nm。
[1488] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子的大小可通过例如动态光散射法进行测定。
[1489] 通过将本发明的含有核酸的脂质纳米粒子导入哺乳类的细胞，可向细胞内导入本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中的核酸。
[1490] 在体内将本发明的含有核酸的脂质纳米粒子向哺乳类的细胞中的导入可按照能够在体内进行的已知的转染的工序进行。例如，通过将本发明的本发明的含有核酸的脂质纳米粒子静脉内施予至包括人在内的哺乳动物，能够送达至产生肿瘤或炎症的脏器或部位，将本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中的核酸导入送达脏器或部位的细胞内。作为产生肿瘤或炎症的脏器或部位，没有特别限定，可举出例如胃、大肠、肝脏、肺、脾脏、胰脏、肾脏、膀胱、皮肤、血管、眼球等。另外，通过将本发明的含有核酸的脂质纳米粒子静脉内施予至包括人在内的哺乳动物，能够送达至例如肝脏、胃、肺、肾脏、胰脏及/或脾脏，将本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中的核酸导入送达脏器或部位的细胞内。肝脏、肺、脾脏及/或肾脏的细胞可以为正常细胞、与肿瘤或炎症相关的细胞或者与其他疾病相关的细胞中的任一种。
[1491] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中的核酸只要是具有利用了RNA干扰(RNAi)的靶基因表达抑制作用的核酸，则能够在体内将抑制靶基因的表达的该核酸等导入哺乳类的细胞内，能够抑制靶基因的表达。施予对象优选为人。
[1492] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中的靶基因只要是例如肝脏、胃、肺、肾脏、胰脏及/或脾脏中表达的基因、优选肝脏中表达的基因，则能够将本发明的含有核酸的脂质纳米粒子用作肝脏、胃、肺、肾脏、胰脏或脾脏相关疾病的治疗剂或预防剂、优选肝脏相关疾病的治疗剂或预防剂。即，本发明还提供肝脏、胃、肺、肾脏、胰脏或脾脏相关疾病等的治疗方法，其中，将上文说明过的本发明的含有核酸的脂质纳米粒子施予至哺乳动物。施予对象优选为人，更优选罹患肝脏、胃、肺、肾脏、胰脏或脾脏相关疾病等的人。
[1493] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子可用作在关于肝脏、胃、肺、肾脏、胰脏或脾脏相关疾病等的治疗剂或预防剂的体内药效评价模型中用于验证抑制靶基因的有效性的工具。
[1494] 本发明的含有核酸的脂质纳米粒子还可用作以例如血液成分等生物体成分(例如，血液、消化管等)中的上述核酸的稳定化、副作用的降低、或者增大对包含靶基因的表达部位的组织或脏器的药物蓄积性等为目的的制剂。
[1495] 将本发明的含有核酸的脂质纳米粒子用作医药品中的肝脏、肺、肾脏或脾脏相关疾病等的治疗剂或预防剂时，作为施予途径，优选使用在治疗时最有效的施予途径，可举出例如口腔内、气管内、直肠内、皮下、肌肉内或静脉内等非口服施予或口服施予，优选举出静脉内施予、皮下施予或肌肉内施予，更优选举出静脉内施予。
[1496] 施予量根据施予对象的症状、年龄、施予途径等的不同而不同，例如，可以以换算为核酸的1天施予量约为0.1μg～1000mg的方式施予。
[1497] 作为适合于静脉内施予或肌肉内施予的制剂，可以举出例如注射剂，可以将通过上述方法制备的组合物的分散液直接以例如注射剂等的形态使用，也可以从该分散液中通过例如过滤、离心分离等除去溶剂进行使用，也可以将该分散液冷冻干燥进行使用，及/或将加入了例如甘露糖醇、乳糖、海藻糖、麦芽糖或甘氨酸等赋形剂的分散液冷冻干燥进行使用。
[1498] 注射剂的情况下，优选向上述组合物的分散液或上述除去溶剂或冷冻干燥而得的组合物中混合例如水、酸、碱、各种缓冲液、生理盐水或氨基酸输液等来制备注射剂。此外，也可以添加例如柠檬酸、抗坏血酸、半胱氨酸或EDTA等抗氧化剂、或者丙三醇、葡萄糖或氯化钠等等渗剂等来制备注射剂。此外，也可以加入例如丙三醇等冷冻保存剂进行冷冻保存。
[1499] 实施例
[1500] 接下来，通过实施例、参考例、比较例及试验例具体地说明本发明。但是，本发明并不限于这些实施例、参考例、比较例及试验例。
[1501] 需要说明的是，实施例及参考例中所示的质子核磁共振光谱(1H  NMR)是在270MHz、300MHz400MHz或500MHz下测得的，根据化合物及测定条件的不同，有时未能清楚地观测到交换性质子。需要说明的是，作为信号多重度的表述，使用通常所用的表述方式，br表示表观上的宽信号。
[1502] 实施例1
[1503] N-甲基-2-(油酰氧基)-N,N-双(2-(油酰氧基)乙基)乙烷氯化铵(N-methyl-2-(oleoyloxy)-N,N-bis(2-(oleoyloxy)ethyl)ethanaminium chloride)(化合物I-1)
[1504] 工序1
[1505] 向三乙醇胺(Sigma-Aldrich公司制，0.115g，0.771mmol)的氯仿(5mL)溶液中加入油酸(东京化成工业公司制，0.784g，2.78mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(东京化成工业公司制，0.591g，3.08mmol)、三乙胺(0.430mL，3.08mmol)及N,N-二甲基氨基吡啶(Nacalai Tesque公司制，0.024g，0.19mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中加入水，用氯仿萃取。依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/己烷＝50/50～100/0)进行纯化，得到三油酸2,2’,2”-次氮基三(乙烷-2,1-二基)酯(2,2’,2”-nitrilotris(ethane-2,1-diyl)trioleate)(0.439g，0.466mmol，收率为60％)。
[1506] ESI-MS m/z:943(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.9Hz,9H),1.23-1.36(m,60H),1.58-1.63(m,6H),1.98-2.04(m,12H),2.29(t,J＝7.6Hz,6H),2.83(t,J＝6.1Hz,
6H),4.11(t,J＝6.1Hz,6H),5.31-5.38(m,6H).
[1507] 工序2
[1508] 向工序1中得到的三油酸2,2’,2”-次氮基三(乙烷-2,1-二基)酯(0.439g，0.466mmol)中添加碘甲烷(东京化成工业公司制，3mL)，于室温彻夜搅拌。于减压下对反应液进行浓缩。将残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，装载于离子交换树脂(Dow Chemical制，Dowex(TM)1x-2 100目，Cl型，约20倍量，预先用水及甲醇洗涤)，用甲醇-氯仿(1:1)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～
88/12)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.342g，0.344mmol，收率为74％)。
[1509] ESI-MS m/z:957(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.9Hz,9H),1.25-1.35(m,60H),1.59-1.63(m,6H),1.99-2.03(m,12H),2.35(t,J＝7.6Hz,6H),3.56(s,3H),4.21(t,J＝4.9Hz,6H),4.61(t,J＝4.9Hz,6H),5.30-5.38(m,6H).
[1510] 实施例2
[1511] N-甲基-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)-N,N-双(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)乙基)乙烷氯化铵(化合物I-2)
[1512] 采用与实施例1相同的方法，使用(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸(Sigma-Aldrich公司制，0.704g，2.51mmol)代替油酸，得到标题的化合物(0.100g，总收率(日文为“通し収率”)为22％)。
[1513] ESI-MS m/z:950(M)+；1H-NMR(CDCl3)0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.25-1.40(m,42H),1.55-1.66(m,6H),2.05(q,J＝6.9Hz,12H),2.35(t,J＝7.6Hz,6H),2.77(t,J＝6.3Hz,6H),
3.54(s,3H),4.21(t,J＝5.1Hz,6H),4.59(br s,6H),5.28-5.43(m,12H).
[1514] 实施例3
[1515] (9Z,12Z)-N-甲基-N,N-二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)十八碳-9,12-二烯-1-铵氯化物((9Z,12Z)-N-methyl-N,N-di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienyl)octadeca-9,
12-dien-1-aminium chloride)(化合物I-3)
[1516] 工序1
[1517] 向氨(东京化成工业公司制，约7mol/L甲醇溶液，8.00mL，56.0mmol)中添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(Nu-Chek Prep,Inc制，3.55g，10.1mmol)，使用微波反应装置于130℃搅拌3小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取5次。合并有机层，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩，由此得到(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-胺的粗产物。
[1518] 向得到的粗产物中添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(2.78g，8.07mmol)及50％氢氧化钠水溶液(2.00mL，50.0mmol)，在油浴上于110℃搅拌60分钟。冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释反应液，用水洗涤，然后用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100/0～90/10)进行纯化，由此得到(9Z,12Z)-三(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基胺(1.09g，1.43mmol，收率为18％)。
[1519] ESI-MS m/z:763(M+H)+.
[1520] 工序2
[1521] 采用与实施例1工序2相同的方法，使用工序1中得到的(9Z,12Z)-三(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基胺(1.05g，1.38mol)代替三油酸2,2’,2”-次氮基三(乙烷-2,1-二基)酯，得到标题的化合物(1.06g，1.30mol，收率为94％)。
[1522] ESI-MS m/z:777(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.1Hz,9H),1.22-1.45(m,48H),1.61-1.69(m,6H),2.05(q,J＝6.8Hz,12H),2.77(t,J＝6.5Hz,6H),3.35(s,3H),
3.44-3.50(m,6H),5.29-5.42(m,12H).
[1523] 实施例4
[1524] (Z)-N-甲基-N,N-二((Z)-十八碳-9-烯基)十八碳-9-烯-1-铵氯化物(化合物I-4)[1525] 采用与实施例3相同的方法，使用甲磺酸(Z)-十八碳-9-烯基酯(Nu-Chek Prep,Inc.制)代替甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯，得到标题的化合物(0.410g，0.501mmol，总收率为24％)。
[1526] ESI-MS m/z:783(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.9Hz,9H),1.22-1.44(m,66H),1.62-1.69(m,6H),1.98-2.04(m,12H),3.35(s,3H),3.45-3.51(m,6H),5.30-5.39(m,
6H).
[1527] 实施例5
[1528] (11Z,14Z)-N,N-二((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基)-N-甲基二十碳-11,14-二烯-1-铵氯化物(化合物I-5)
[1529] 采用与实施例3相同的方法，使用甲磺酸(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基酯(Nu-Chek Prep,Inc.制)代替甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯，得到标题的化合物(0.323g，0.360mmol，总收率为25％)。
[1530] 1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.9Hz,9H),1.24-1.43(m,63H),1.61-1.69(m,6H),2.05(q,J＝6.8Hz,12H),2.77(t,J＝6.6Hz,6H),3.35(s,3H),3.45-3.50(m,6H),5.30-5.42(m,12H).
[1531] 实施例6
[1532] (9Z,12Z)-N-(3-羟基丙基)-N,N-二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)十八碳-9,12-二烯-1-铵氯化物(化合物I-6)
[1533] 向实施例3的工序1中得到的三((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺(0.199g，0.261mmol)的氯仿(0.3mL)溶液中添加3-碘丙烷-1-醇(和光纯药工业公司制，0.194g，
1.04mmol)，使用微波反应装置于130℃反应40分钟。将反应液溶解于少量的乙醇，装载于离子交换树脂(Sigma-Aldirch公司制，Amberlite(R)IRA-400,Cl型，约20倍量，预先用水及乙醇洗涤)，用乙醇洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～88/12)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.146g，0.170mmol，收率为
65％)。
[1534] ESI-MS m/z:821(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.27-1.39(m,49H),1.67-1.74(m,6H),1.93-1.99(m,2H),2.05(q,J＝6.9Hz,12H),2.77(t,J＝6.2Hz,
6H),3.14-3.19(m,6H),3.70-3.74(m,2H),3.79(t,J＝5.1Hz,2H),5.29-5.42(m,12H).[1535] 实施例7
[1536] (9Z,12Z)-N-(2-羟基乙基)-N,N-二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)十八碳-9,12-二烯-1-铵氯化物(化合物I-7)
[1537] 采用与实施例6相同的方法，使用2-碘乙烷-1-醇(东京化成工业公司制)代替3-碘丙烷-1-醇，得到标题的化合物(0.211g，0.250mmol，收率为85％)。
[1538] ESI-MS m/z:807(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.27-1.40(m,49H),1.64-1.71(m,6H),2.05(q,J＝6.8Hz,12H),2.77(t,J＝6.3Hz,6H),3.36-3.41(m,
6H),3.53-3.56(m,2H),4.08-4.12(m,2H),5.29-5.42(m,12H).
[1539] 实施例8
[1540] N,N,N-三甲基-1,3-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-2-铵氯化物(化合物II-1)
[1541] 工序1
[1542] 向2-(二甲基氨基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(Zylexa Pharma公司制，0.252g，1.69mmol)的氯仿(10mL)溶液中加入(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸(2.37g，
8.45mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.62g，8.45mmol)及N,N-二甲基氨基吡啶(0.206g，1.69mmol)，于60℃彻夜搅拌。冷却至室温后，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0)进行纯化，得到双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(二甲基氨基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯((9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(dimethylamino)-2-(((9Z,12Z)-octadeca-9,
12-dien oyloxy)methyl)propane-1,3-diyl dioctadeca-9,12-dienoate)(0.334g，
0.356mmol，收率为21％)。
[1543] ESI-MS m/z:937(M+H)+.
[1544] 工序2
[1545] 向工序1中得到的双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(二甲基氨基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.324g，0.346mmol)的氯仿(3mL)溶液中添加碘甲烷(0.216mL)，于室温搅拌5小时。向反应液中添加碘甲烷(0.216mL)，于室温彻夜搅拌。于减压下对反应液进行浓缩。将残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，装载于离子交换树脂(Dow Chemical制，Dowex(TM)1x-2 100目，Cl型，约20倍量，预先用水及甲醇洗涤)，用甲醇-氯仿(1:1)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～90/10)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.161g，0.164mmol，收率为47％)。
[1546] ESI-MS m/z:951(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.86(t,J＝6.9Hz,9H),1.22-1.36(m,42H),1.54-1.61(m,6H),2.02(q,J＝6.8Hz,12H),2.34(t,J＝7.7Hz,6H),2.74(t,J＝
6.8Hz,6H),3.69(s,9H),4.57(s,6H),5.26-5.39(m,12H).
[1547] 实施例9
[1548] N,N,N-三甲基-1,3-双((Z)-十四碳-9-烯酰基氧基)-2-(((Z)-十四碳-9-烯酰基氧基)甲基)丙烷-2-铵氯化物(化合物II-2)
[1549] 采用与实施例8相同的方法，使用顺式-9-十四碳烯酸(Nu-Chek Prep,Inc制)代替(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸，得到标题的化合物(0.0854g，0.104mmol，总收率为16％)。
[1550] ESI-MS m/z:789(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.1Hz,9H),1.27-1.36(m,36H),1.58-1.64(m,6H),2.02(q,J＝6.5Hz,12H),2.37(t,J＝7.6Hz,6H),3.72(s,9H),4.55(s,6H),5.30-5.38(m,6H).
[1551] 实施例10
[1552] N,N,N-三甲基-1,3-双(油酰氧基)-2-(油酰氧基甲基)丙烷-2-铵氯化物(化合物II-3)
[1553] 采用与实施例8相同的方法，使用油酸代替(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸，得到标题的化合物(1.14g，1.15mmol，总收率为34％)。
[1554] ESI-MS m/z:957(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.83(t,J＝6.9Hz,9H),1.17-1.32(m,60H),1.51-1.59(m,6H),1.96(t,J＝5.5Hz,12H),2.32(t,J＝7.6Hz,6H),3.70(s,9H),4.56(s,6H),5.25-5.34(m,6H).
[1555] 实施例11
[1556] N,N,N-三甲基-1,3-双(硬脂酰氧基)-2-(硬脂酰氧基甲基)丙烷-2-铵氯化物(化合物II-4)
[1557] 工序1
[1558] 向2-(二甲基氨基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(0.100g，0.670mmol)中依次添加甲苯(10mL)、硬脂酸(东京化成工业公司制，0.763g，2.68mmol)、对甲苯磺酸一水合物(0.191g，1.01mmol)，在加热回流条件下彻夜搅拌。于减压下对反应液进行浓缩，将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(氯仿)进行纯化，得到二硬脂酸2-(二甲基氨基)-2-((硬脂酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.120g，0.127mmol，收率为19％)。
[1559] ESI-MS m/z:948(M+H)+
[1560] 工序2
[1561] 使用工序1中得到的二硬脂酸2-(二甲基氨基)-2-((硬脂酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.120g，0.127mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.0260g，0.0260mmol，收率为21％)。
[1562] ESI-MS m/z:963(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.22-1.36(m,84H),1.56-1.65(m,6H),2.37(t,J＝7.6Hz,6H),3.72(s,9H),4.56(s,6H).
[1563] 实施例12
[1564] 1,3-双((Z)-十六碳-9-烯酰基氧基)-2-(((Z)-十六碳-9-烯酰基氧基)甲基)-N,N,N-三甲基丙烷-2-铵氯化物(化合物II-5)
[1565] 采用与实施例8相同的方法，使用顺式-9-十六碳烯酸代替(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸，得到标题的化合物(0.680g，0.748mmol，总收率为63％)。
[1566] ESI-MS m/z:873(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.24-1.36(m,48H),1.56-1.67(m,13H),1.98-2.05(m,12H),2.37(t,J＝7.6Hz,6H),3.75(s,9H),4.53(s,
6H),5.29-5.40(m,6H).
[1567] 实施例13
[1568] N,N,N-三甲基-1,3-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-2-铵氯化物(化合物II-6)
[1569] 工序1
[1570] 向2-二甲基氨基-2-羟基甲基丙烷-1,3-二醇(Zylexa Pharma公司制，0.115g，0.768mmol)的甲苯(5mL)溶液中加入氢化钠(Nacalai Tesque公司制，油性，60％，0.154g，
3.84mmol)及甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(1.32g，3.84mmol)，于加热回流下彻夜搅拌。冷却至室温后，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用己烷萃取。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100/0～95/5)进行纯化，得到N,N-二甲基-1,3-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-2-胺(0.195g，0.217mmol，收率为28％)。
[1571] ESI-MS m/z:895(M+H)+.
[1572] 工序2
[1573] 向工序1中得到的N,N-二甲基-1,3-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-2-胺(0.0849g，0.0949mmol)的氯仿(1mL)溶液中添加碘甲烷(0.119mL)，于室温彻夜搅拌。于减压下对反应液进行浓缩。将残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，装载于离子交换树脂(Dow Chemical制，Dowex(TM)1x-2 100目，Cl型，约20倍量，预先用水及甲醇洗涤)，用甲醇-氯仿(1:1)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～90/10)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.0646g，0.0684mmol，收率为72％)。
[1574] ESI-MS m/z:909(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.9Hz,9H),1.25-1.40(m,48H),1.55-1.63(m,6H),2.02-2.09(m,12H),2.77(t,J＝6.8Hz,6H),3.44(t,J＝6.6Hz,
6H),3.62(s,9H),3.82(s,6H),5.29-5.42(m,12H).
[1575] 实施例14
[1576] N,N,N-三甲基-1,3-双((Z)-十四碳-9-烯基氧基)-2-(((Z)-十四碳-9-烯基氧基)甲基)丙烷-2-铵氯化物(化合物II-7)
[1577] 采用与实施例13相同的方法，使用十四碳烯醇甲磺酸酯(myristoleyl methane sulfonate)(Nu-Chek Prep,Inc制)代替甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯，得到标题的化合物(0.0729g，0.0931mmol，总收率为12％)。
[1578] ESI-MS m/z:747(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.90(t,J＝7.1Hz,9H),1.27-1.37(m,42H),1.54-1.61(m,6H),2.02(q,J＝6.5Hz,12H),3.43(t,J＝6.6Hz,6H),3.64(s,8H),3.81(s,6H),5.31-5.39(m,6H).
[1579] 实施例15
[1580] 1,3-双((Z)-十六碳-9-烯基氧基)-2-(((Z)-十六碳-9-烯基氧基)甲基)-N,N,N-三甲基丙烷-2-铵氯化物(化合物II-8)
[1581] 采用与实施例13相同的方法，使用十六碳烯醇甲磺酸酯(palmitoleyl methane sulfonate)(Nu-Chek Prep,Inc制)代替甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯，得到标题的化合物(0.466g，0.538mmol，总收率为71％)。
[1582] ESI-MS m/z:831(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.23-1.37(m,54H),1.53-1.61(m,14H),2.02(q,J＝5.8Hz,12H),3.43(t,J＝6.5Hz,6H),3.65(s,9H),
3.81(s,6H),5.30-5.40(m,6H).
[1583] 实施例16
[1584] (6Z,9Z,40Z,43Z)-N,N,N-三甲基-25-((3-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)-20,30-二氧代-19,23,27,31-四氧杂四十九碳-6,9,40,43-四烯-25-铵氯化物((6Z,9Z,40Z,43Z)-N,N,N-trimethyl-25-((3-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien yloxy)-3-oxopropoxy)methyl)-20,30-dioxo-19,23,27,31-tetraoxanonatetr aconta-6,9,40,43-tetraen-25-aminium chloride)(化合物II-9)
[1585] 工序1
[1586] 使采用以“Journal Of Organic Chemistry(J.Org.Chem.)”，2002年，第67卷，p.1411-1413中记载的方法为基准的方法合成的3,3'-((2-氨基-2-((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸二叔丁酯(0.500g，0.989mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入碘甲烷(1.40g，9.89mmol)，于室温彻夜搅拌。于减压下对反应液进行浓缩。将残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，装载于离子交换树脂(Dowex(TM)1x-2 100目，Cl型，约20倍量，预先用水及甲醇洗涤)，用甲醇洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝97/3～80/20)进行纯化，得到9-((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)-N,N,N,2,2,16,16-七甲基-4,14-二氧代-3,7,11,15-四氧杂十七烷-9-铵氯化物(0.144g，0.246mmol，收率为25％)。
[1587] ESI-MS m/z:548(M+H)+.
[1588] 工序2
[1589] 使工序1中得到的9-((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)-N,N,N,2,2,16,16-七甲基-4,14-二氧代-3,7,11,15-四氧杂十七烷-9-铵氯化物(0.350g，0.246mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(0.380mL，4.92mmol)，于室温搅拌3小时。向反应液中加入甲苯，于减压下进行浓缩，由此得到1,3-双(2-羧基乙氧基)-2-((2-羧基乙氧基)甲基)-N,N,N-三甲基丙烷-2-铵氯化物三氟乙酸盐的粗产物(0.102g，0.246mmol，粗收率为100％)。
[1590] ESI-MS m/z:422(M+H)+
[1591] 工序3
[1592] 使工序2中得到的1,3-双(2-羧基乙氧基)-2-((2-羧基乙氧基)甲基)-N,N,N-三甲基丙烷-2-铵氯化物三氟乙酸盐的粗产物(0.055g，0.13mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)，添加O-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(和光纯药工业公司制，0.20g，0.53mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.23mL，1.3mmol)、及(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-醇(东京化成工业公司制，0.141g，0.53mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中加入水，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝90/10～80/20)进行纯化，由此得到标题的化合物(8.0mg，6.9mmol，收率为5％)。
[1593] ESI-MS m/z:1125(MH)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.25-1.39(m,48H),1.58-1.66(m,6H),2.05(q,J＝6.9Hz,12H),2.59(t,J＝5.7Hz,6H),2.77(t,J＝
6.7Hz,6H),3.42(s,9H),3.74(t,J＝5.7Hz,6H),4.00(s,6H),4.07(t,J＝6.8Hz,6H),5.29-
5.40(m,12H).
[1594] 实施例17
[1595] (7Z,38Z)-23-((3-((Z)-十六碳-9-烯基氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)-N,N,N-三甲基-18,28-二氧代-17,21,25,29-四氧杂四十五碳-7,38-二烯-23-铵氯化物(化合物II-10)[1596] 采用与实施例16相同的方法，使用(Z)-十六碳-9-烯-1-醇(Nu-Chek Prep,Inc制)代替(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-醇，得到标题的化合物(0.145g，0.134mmol，总收率为17％)。
[1597] ESI-MS m/z:1047(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.24-1.38(m,54H),1.58-1.66(m,6H),1.98-2.05(m,12H),2.58(t,J＝5.7Hz,6H),3.47(s,9H),3.74(t,J＝5.7Hz,6H),4.02(s,6H),4.07(t,J＝6.8Hz,6H),5.30-5.40(m,6H).
[1598] 实施例18
[1599] (5Z,36Z)-N,N,N-三甲基-16,26-二氧代-21-((3-氧代-3-((Z)-十四碳-9-烯基氧基)丙氧基)甲基)-15,19,23,27-四氧杂四十一碳-5,36-二烯-21-铵氯化物(化合物II-11)[1600] 采用与实施例16相同的方法，使用(Z)-十四碳-9-烯-1-醇(Nu-Chek Prep,Inc制)代替(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-醇，得到标题的化合物(0.189g，0.189mmol，总收率为24％)。
[1601] ESI-MS m/z:963(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.87-0.92(m,9H),1.25-1.38(m,42H),1.55-1.66(m,6H),1.98-2.05(m,12H),2.58(t,J＝5.7Hz,6H),3.47(s,9H),3.75(t,J＝
5.7Hz,6H),4.01(s,6H),4.07(t,J＝6.8Hz,6H),5.30-5.41(m,6H).
[1602] 实施例19
[1603] (11Z,14Z)-N,N,N-三甲基-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)二十碳-11,14-二烯-1-铵氯化物(化合物II-12)
[1604] 工序1
[1605] 使氰乙酸乙酯(东京化成工业公司制，1.00g，8,84mmol)和甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(7.62g，22.1mmol)溶解于四氢呋喃(30mL)，在冰冷下加入氢化钠(油性，60％，1.06g，26.5mmol)、及四正丁基碘化铵(Nacalai Tesque公司制，3.27g，8.84mmol)。停止发泡后，于60℃搅拌3小时。向反应液中加入水，用己烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，由此得到2-氰基-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯酸(11Z,14Z)-乙酯的粗产物(3.50g，5.74mmol，粗收率为65％)。
[1606] 工序2
[1607] 将工序1中得到的2-氰基-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯酸(11Z,14Z)-乙酯的粗产物(1.50g，2.46mmol)溶解于四氢呋喃(10mL)，在冰冷下添加氢化铝锂(纯正化学公司制，0.467g，12.3mmol)，搅拌30分钟。向反应液中依次添加水(0.5mL)、15％氢氧化钠水溶液(0.5mL)、水(1.5mL)、硫酸镁，搅拌一段时间后进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝99/1～85/15)进行纯化，得到(11Z,14Z)-2-(氨基乙基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-醇(1.00g，2.46mmol，收率为71％)。
[1608] ESI-MS m/z:573(M+H)+.
[1609] 工序3
[1610] 将工序2中得到的(11Z,14Z)-2-(氨基乙基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-醇(0.350g，0.612mmol)溶解于乙腈(2mL)和四氢呋喃(2mL)中，加入38％甲醛水溶液(和光纯药工业公司制，0.145mL，1.84mmol)、乙酸(0.035mL，0.612mmol)、及三乙酰氧基硼氢化钠(Acros Organics公司制，0.389g，1.84mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中加入水，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝99/1～85/15)进行纯化，得到(11Z,14Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,
14-二烯-1-醇(0.252g，0.420mmol，收率为69％)。
[1611] ESI-MS m/z:600(M+H)+
[1612] 工序4
[1613] 向工序3中得到的(11Z,14Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-醇(0.252g，0.420mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中依次加入(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸(0.141g，0.504mmol)、O-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.192mmol，0.504mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.147mL，0.840mmol)，于室温搅拌4小时。向反应液中加入水，用己烷萃取。用水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5～85/15)进行纯化，由此得到十八碳-9,12-二烯酸(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-
2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-基酯(0.307g，0.356mmol，收率为85％)。
[1614] ESI-MS m/z:863(M+H)+
[1615] 工序5
[1616] 使用工序4中得到的十八碳-9,12-二烯酸(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-基酯(0.307g，0.356mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.260g，0.285mmol，收率为
80％)。
[1617] ESI-MS m/z:877(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.22-1.48(m,54H),1.60-1.66(m,2H),2.05(q,J＝6.8Hz,12H),2.38(t,J＝7.6Hz,2H),2.77(t,J＝
6.3Hz,6H),3.50(s,2H),3.60(s,9H),4.13(s,2H),5.27-5.44(m,12H).
[1618] 实施例20
[1619] N,N,N-三甲基-3-((11Z,14Z)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)二十碳-11,14-二烯基氨基甲酰基氧基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-13)
[1620] 工序1
[1621] 使实施例19工序2中得到的(11Z,14Z)-2-(氨基乙基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-醇(0.918g，1.61mmol)溶解于四氢呋喃(20mL)，加入三乙胺(0.671mL，4.81mmol)、及二碳酸二叔丁酯(国产化学公司制，0.373mL，1.61mmol)，于室温彻夜搅拌。于减压下对反应液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5～50/50)进行纯化，由此得到((11Z,14Z)-2-(羟基甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.918g，1.37mmol，收率为85％)。
[1622] ESI-MS m/z:672(M+H)+.
[1623] 工序2
[1624] 使工序1中得到的((11Z,14Z)-2-(羟基甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.357g，0.531mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)，加入(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸(0.223g，0.797mmol)、O-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.303mmol，0.797mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.186mL，1.06mmol)、及N,N-二甲基氨基吡啶(0.0650g，0.531mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中加入水，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝99/1～90/10)进行纯化，由此得到十八碳-9,12-二烯酸(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-(((叔丁氧基羰基氨基)甲基)-
2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-基酯(0.395g，0.423mmol，收率为80％)。
[1625] ESI-MS m/z:935(M+H)+.
[1626] 工序3
[1627] 使工序2中得到的十八碳-9,12-二烯酸(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-(((叔丁氧基羰基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-基酯(0.395g，0.423mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)，在冰冷下加入三氟乙酸(1.00mL，4.92mmol)，于0℃搅拌
2小时。向反应液中加入1,2-二氯乙烷，于减压下进行浓缩，由此得到十八碳-9,12-二烯酸(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-(氨基乙基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,
14-二烯-1-基酯三氟乙酸盐的粗产物(0.394g，0.423mmol，粗收率为100％)。
[1628] ESI-MS m/z:834(M+H)+.
[1629] 工序4
[1630] 使工序3中得到的十八碳-9,12-二烯酸(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-(氨基乙基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-基酯三氟乙酸盐的粗产物(0.200g，0.215mmol)溶解于乙腈(2mL)，添加按照以“Journal of the American Chemical Society(J.Am.Chem.Soc.)”，1981年，第103卷，p.4194-4199中记载的方法为基准的方法合成的4-硝基苯基碳酸3-(二甲基氨基)丙酯盐酸盐(0.279g，1.07mmol)、三乙胺(0.299mL，2.15mmol)、及N,N-二甲基氨基吡啶(0.0520g，0.429mmol)，于60℃搅拌2小时。向反应液中添加饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝99/1～60/40)进行纯化，由此得到十八碳-9,12-二烯酸(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-((((3-(二甲基氨基)丙氧基)羰基)氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-基酯(0.0800g，0.0830mmol，收率为39％)。
[1631] ESI-MS m/z:964(M+H)+.
[1632] 工序5
[1633] 使用工序4中得到的十八碳-9,12-二烯酸(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-((((3-(二甲基氨基)丙氧基)羰基)氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-基酯(0.053g，0.055mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.025g，0.025mmol，收率为45％)。
[1634] ESI-MS m/z:978(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.17-1.40(m,54H),1.56-1.66(m,2H),2.05(q,J＝6.8Hz,12H),2.09-2.17(m,2H),2.33(t,J＝7.6Hz,
2H),2.77(t,J＝6.2Hz,6H),3.05(d,J＝6.6Hz,2H),3.44(s,9H),3.73-3.79(m,2H),3.85(s,2H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),5.27-5.44(m,12H),5.72(t,J＝6.5Hz,1H).
[1635] 实施例21
[1636] (12Z,15Z)-3-羟基-N,N,N-三甲基-2,2-二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十一碳-12,15-二烯-1-铵氯化物(化合物II-14)
[1637] 工序1
[1638] 使实施例19工序2中得到的(11Z,14Z)-2-(氨基乙基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-醇(1.35g，2.36mmol)溶解于四氢呋喃(10mL)，添加
38％甲醛水溶液(和光纯药工业公司制0.559mL，7.08mmol)、乙酸(0.135mL，2.36mmol)、及三乙酰氧基硼氢化钠(1.50g，7.08mmol)，于室温搅拌1小时。向反应液中添加水，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝99/1～85/15)进行纯化，由此得到(11Z,14Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-醇(0.610g，
1.02mmol，收率为43％)。
[1639] ESI-MS m/z:600(M+H)+.
[1640] 工序2
[1641] 使工序1中得到的(11Z,14Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-醇(0.300g，0.500mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)，加入戴斯-马丁试剂(东京化成工业公司制，0.233g，0.550mmol)，于室温搅拌1小时。向反应液中添加水，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5～70/30)进行纯化，由此得到(11Z,14Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,
14-二烯醛(0.160g，0.268mmol，收率为54％)。
[1642] ESI-MS m/z:598(M+H)+.
[1643] 工序3
[1644] 向镁(Sigma-Ardrich公司制，0.0140g，0.562mmol)中添加乙醚(1mL)、及碘(1小片)，于室温搅拌5分钟。向其中添加使用以国际公开第2010/42877号中记载的方法为基准的方法合成的(6Z,9Z)-18-溴十八碳-6,9-二烯(0.176g，0.535mmol)的乙醚溶液(1mL)，在加热回流下搅拌。确认到碘的颜色消失后，添加工序2中得到的(11Z,14Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯醛(0.160g，0.268mmol)的乙醚溶液(1mL)，于室温搅拌1小时。向反应液中添加水，用己烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝99/1～85/15)进行纯化，由此得到(6Z,9Z,29Z,32Z)-20-((二甲基氨基)甲基)-20-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)三十八碳-6,9,29,32-四烯-19-醇(0.0470g，0.0550mmol，收率为21％)。
[1645] ESI-MS m/z:848(M+H)+.
[1646] 工序4
[1647] 使用工序3中得到的(6Z,9Z,29Z,32Z)-20-((二甲基氨基)甲基)-20-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)三十八碳-6,9,29,32-四烯-19-醇(0.047g，0.055mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.0012g，0.0013mmol，收率为2％)。
[1648] ESI-MS m/z:863(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.17-1.40(m,58H),1.54-1.65(m,2H),2.05(q,J＝6.8Hz,12H),2.77(t,J＝6.5Hz,6H),3.29(d,J＝
14.4Hz,1H),3.51(s,9H),3.56(d,J＝14.2Hz,1H),3.62-3.70(m,1H),5.29-5.42(m,12H).[1649] 实施例22
[1650] (11Z,14Z)-N,N,N-三甲基-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)羰基)二十碳-11,14-二烯-1-铵氯化物(化合物II-15)[1651] 工序1
[1652] 使实施例20的工序1中得到的((11Z,14Z)-2-(羟基甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.300g，0.448mmol)溶解于丙酮(2mL)，在冰冷下加入琼斯试剂(Sigma-Ardrich公司制，2mol/L，0.224mL，0.448mmol)后，于室温搅拌1小时。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5～50/50)进行纯化，由此得到(11Z,14Z)-2-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯酸(0.136g，0.198mmol，收率为
44％)。
[1653] ESI-MS m/z:684(M-H)-.
[1654] 工序2
[1655] 使用工序1中得到的(11Z,14Z)-2-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯酸(0.120g，0.175mmol)和(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-醇(Nu-Chek Prep,Inc公司制，0.0930g，0.350mmol)，采用与实施例20的工序
2相同的方法，得到2-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯酸(11Z,14Z)-(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基酯(0.123g，
0.132mmol，收率为75％)。
[1656] ESI-MS m/z:935(M+H)+.
[1657] 工序3
[1658] 使工序2中得到的2-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯酸(11Z,14Z)-(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基酯(0.123g，0.132mmol)溶解于二氯甲烷(1mL)，在冰冷下添加三氟乙酸(0.300mL，3.89mmol)，搅拌1小时。向反应液中添加饱和碳酸氢钠水溶液，用己烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝99/1～80/20)进行纯化，由此得到2-(氨基甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯酸(11Z,14Z)-(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基酯(0.110g，
0.132mmol，收率为100％)。
[1659] ESI-MS m/z:835(M+H)+.
[1660] 工序4
[1661] 使用工序3中得到的2-(氨基甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯酸(11Z,14Z)-(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基酯(0.110g，0.132mmol)，采用与实施例21工序1相同的方法，得到2-((二甲基氨基甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯酸(11Z,14Z)-(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基酯(0.0720g，0.0830mmol，收率为63％)。
[1662] ESI-MS m/z:862(M+H)+.
[1663] 工序5
[1664] 使用工序4中得到的2-((二甲基氨基甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)二十碳-11,14-二烯酸(11Z,14Z)-(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基酯(0.072g，0.083mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.052g，0.057mmol，收率为
68％)。
[1665] ESI-MS m/z:877(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.09-1.42(m,52H),1.52-1.81(m,6H),2.05(q,J＝6.8Hz,12H),2.77(t,J＝6.6Hz,6H),3.46(s,9H),3.79(s,2H),4.14(t,J＝6.8Hz,2H),5.28-5.43(m,12H).
[1666] 实施例23
[1667] (11Z,14Z)-N,N,N-三甲基-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)二十碳-11,14-二烯-1-铵氯化物(化合物II-16)
[1668] 工序1
[1669] 使丙二酸二甲酯(东京化成工业公司制，1.00g，7.57mmol)溶解于乙腈(20mL)，添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(2.61g,7.57mmol)、碳酸铯(和光纯药工业公司制，4.93g，15.1mmol)及四正丁基碘化铵(2.80g，7.57mmol)，于50℃彻夜搅拌。向反应液中添加水，用己烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10～70/30)进行纯化，由此得到2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)丙二酸二甲酯(1.22g，3.21mmol，收率为42％)。
[1670] ESI-MS m/z:381(M+H)+.
[1671] 工序2
[1672] 使工序1中得到的2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)丙二酸二甲酯(0.200g，0.526mmol)溶解于乙腈(3mL)，加入N,N,N’,N’-四甲基二氨基甲烷(东京化成工业公司制，
0.0860mL，0.631mmol)及乙酸酐(0.0600mL，0.631mmol)。然后，在冰冷下添加氢化钠(油性，
60％,0.0320g，0.788mmol)，于室温搅拌3小时。向反应液中加入饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100/0～60/40)进行纯化，由此得到2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)丙二酸二甲酯(0.0660g，
0.151mmol，收率为29％)。
[1673] ESI-MS m/z:438(M+H)+.
[1674] 工序3
[1675] 使用工序2中得到的2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)丙二酸二甲酯(0.066g，0.15mmol)，采用与实施例19工序2相同的方法，得到2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)丙烷-1,3-二醇(0.013g，0.034mmol，收率为23％)。
[1676] ESI-MS m/z:382(M+H)+.
[1677] 工序4
[1678] 使用工序3中得到的2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)丙烷-1,3-二醇(0.013g，0.034mmol)，采用与实施例20工序2相同的方法，得到双(十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12')-2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)丙烷-1,3-二基酯(0.017g，0.019mmol，收率为56％)。
[1679] ESI-MS m/z:906(M+H)+.
[1680] 工序5
[1681] 使用工序4中得到的双(十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)丙烷-1,3-二基酯(0.017g，0.019mmol)，采用与实施例1工序2相同的方法，得到标题化合物(5.5mg，0.0058mmol，收率为31％)。
[1682] ESI-MS m/z:921(M)+.1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.23-1.40(m,48H),1.53-1.65(m,4H),2.05(q,J＝6.9Hz,12H),2.38(t,J＝7.6Hz,4H),2.77(t,J＝
6.6Hz,6H),3.59(s,9H),3.72(s,2H),4.20(dd,J＝22.1,12.2Hz,4H),5.28-5.44(m,12H).[1683] 实施例24
[1684] N,N,N-三甲基-3-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-17)
[1685] 工序1
[1686] 向2-(溴甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(0.200g，1.01mmol)中添加二甲胺(Sigma-Aldrich公司制，2.0mol/L四氢呋喃溶液，5.02mL，10.1mmol)，在微波照射下于120℃搅拌15小时。向反应液中添加氢氧化锂一水合物(0.0290g，1.21mmol)，过滤分离生成的沉淀。于减压下对滤液进行浓缩，由此得到2-((二甲基氨基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇的粗产物(0.200g，1.23mmol，定量的)。
[1687] ESI-MS m/z:164(M+H)+.
[1688] 工序2
[1689] 使用工序1中得到的2-((二甲基氨基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇的粗产物(0.200g，1.23mmol)，采用与实施例8相同的方法，得到标题的化合物(0.0470g，0.047mmol，总收率为4.4％)。
[1690] ESI-MS m/z:965(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.85-0.94(m,9H),1.24-1.40(m,42H),1.53-1.63(m,6H),2.00-2.10(m,12H),2.38(t,J＝6.9Hz,6H),2.77(t,J＝6.5Hz,6H),3.64(s,9H),3.95(s,2H),4.30(s,6H),5.27-5.43(m,12H).
[1691] 实施例25
[1692] N,N,N-三甲基-3-(油酰氧基)-2,2-双(油酰氧基甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-18)
[1693] 使用油酸代替实施例8的工序1中的(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸，利用与实施例8相同的方法得到标题的化合物(0.663g，0.658mmol，总收率为28％)。
[1694] ESI-MS m/z:971(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.22-1.38(m,60H),1.55-1.65(m,6H),2.01(q,J＝5.9Hz,12H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.64(s,9H),3.98(s,2H),4.29(s,6H),5.29-5.39(m,6H).
[1695] 实施例26
[1696] N,N,N-三甲基-3-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-19)
[1697] 工序1
[1698] 向二甲胺(约2mol/L四氢呋喃溶液，15.0mL，30.0mmol)中添加2-(溴甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(1.52g，7.56mmol)，使用微波反应装置，于120℃加热搅拌15小时。冷却至室温后，向反应液中添加氢氧化锂(0.217g，9.07mmol)，进行过滤，于减压下进行浓缩，由此得到2-((二甲基氨基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇的粗产物。
[1699] 向得到的粗产物中添加甲苯(30mL)、甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(6.51g，18.9mmol)及氢化钠(油性，60％,0.756g，18.9mmol)，在加热回流下彻夜搅拌。冷却至室温后，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用己烷萃取。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100/0～90/10)进行纯化，得到N,N-二甲基-3-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-1-胺(0.196g，0.216mmol，3％)和3-(二甲基氨基)-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-1-醇(1.80g，2.73mmol，收率为36％)。
[1700] N,N-二甲基-3-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-1-胺
[1701] ESI-MS m/z:909(M+H)+.
[1702] 3-(二甲基氨基)-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-1-醇[1703] ESI-MS m/z:661(M+H)+.
[1704] 工序2
[1705] 向工序1中得到的N,N-二甲基-3-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-1-胺(0.120g，0.132mmol)的氯仿(1mL)溶液中添加碘甲烷(0.500mL)，于室温搅拌3小时。于减压下对反应液进行浓缩。将残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，装载于离子交换树脂(Amberlite(R)IRA-400,Cl型，约20倍量，预先用水及乙醇洗涤)，用甲醇-氯仿(1:1)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～90/10)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.0654g，0.0682mmol，收率为57％)。
[1706] ESI-MS m/z:923(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.8Hz,9H),1.22-1.40(m,1H),1.49-1.59(m,6H),2.05(q,J＝6.9Hz,12H),2.77(t,J＝6.7Hz,6H),3.37(t,J＝6.6Hz,6H),
3.45(s,6H),3.55(s,9H),3.58(s,2H),5.28-5.42(m,12H).
[1707] 实施例27
[1708] N,N,N-三甲基-3-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-20)
[1709] 向实施例26工序1中得到的3-(二甲基氨基)-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙烷-1-醇(0.265g，0.401mmol)的1,2-二氯乙烷(4mL)溶液中加入(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸(0.169g，0.602mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(0.154g，0.802mmol)及N,N-二甲基氨基吡啶(0.0250g，0.201mmol)，于室温彻夜搅拌。于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5～90/10)进行纯化，得到十八碳-9,12-二烯酸(9Z,12Z)-3-(二甲基氨基)-2,2-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)甲基)丙酯的粗产物。
[1710] 向得到的粗产物中添加氯仿(2mL)及碘甲烷(东京化成工业公司制，1.00mL)，于室温搅拌5小时。于减压下对反应液进行浓缩。将残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，装载于离子交换树脂(Sigma-Aldirch公司制，Amberlite(R)IRA-400,Cl型，约20倍量，预先用水及乙醇洗涤)，用甲醇-氯仿(1:1)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～90/10)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.220g，0.226mmol，收率为56％)。
[1711] ESI-MS m/z:937(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.22-1.41(m,51H),1.50-1.66(m,6H),2.05(q,J＝6.9Hz,12H),2.38(t,J＝7.5Hz,2H),2.77(t,J＝
6.1Hz,6H),3.39(t,J＝6.6Hz,4H),3.44-3.48(m,2H),3.54-3.58(m,11H),3.73(s,2H),
4.18(s,2H),5.28-5.43(m,11H).
[1712] 实施例28
[1713] N,N,N-三甲基-4-(2-(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰胺基-3-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙氧基)-4-氧基丁烷-1-铵氯化物(化合物II-21)
[1714] 工序1
[1715] 向(1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Key Organics公司制，0.505g，2.28mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸(3.23g，11.4mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(2.19g，11.4mmol)及N,N-二甲基氨基吡啶(0.279g，2.28mmol)，于室温搅拌1小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/氯仿＝100/0～95/5)进行纯化，得到双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(叔丁氧基羰基氨基-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(2.08g，2.06mmol，收率为90％)。
[1716] 1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.7Hz,9H),1.23-1.40(m,9H),1.43(s,9H),1.57-1.66(m,14H),2.05(q,J＝6.8Hz,12H),2.32(t,J＝7.6Hz,6H),2.77(t,J＝6.5Hz,6H),4.34(s,6H),4.81(br s,1H),5.28-5.43(m,12H).
[1717] 工序2
[1718] 向工序1中得到的双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(叔丁氧基羰基氨基-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(2.05g，2.03mmol，90％)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入三氟乙酸(2mL，26.0mmol)，于室温搅拌1小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100/0～
95/5)进行纯化，得到双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(羟基甲基)-2-(9Z,
12Z)-十八碳-9,12-二烯酰胺基丙烷-1,3-二基酯(1.70g，1.84mmol，收率为91％)。
[1719] ESI-MS m/z:909(M+H)+.
[1720] 工序3
[1721] 向工序2中得到的双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(羟基甲基)-2-(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰胺基丙烷-1,3-二基酯(0.8933g，0.983mmol)的二氯甲烷(9mL)溶液中加入(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸(Sigma-Aldrich公司制，2.37g，8.45mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.62g，8.45mmol)及N,N-二甲基氨基吡啶(0.206g，1.69mmol)，于室温搅拌2小时。于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10～75/25)进行纯化，得到双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-((4-(二甲基氨基)丁酰基氧基)甲基)-2-(9Z,12Z)-十八碳-9,
12-二烯酰胺基丙烷-1,3-二基酯(0.900g，0.881mmol，收率为90％)。
[1722] ESI-MS m/z:1022(M+H)+.
[1723] 工序4
[1724] 向工序3中得到的双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-((4-(二甲基氨基)丁酰基氧基)甲基)-2-(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰胺基丙烷-1,3-二基酯(0.805g，0.788mmol)的氯仿(4mL)溶液中添加碘甲烷(0.493mL)，于室温彻夜搅拌。于减压下对反应液进行浓缩。将残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，加入离子交换树脂(Dowex(TM)1x-2 
100目，Cl型，约20倍量，预先用水及甲醇洗涤)，用甲醇-氯仿(1:1)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝90/10～80/20)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.740g，0.690mmol，收率为88％)。
[1725] ESI-MS m/z:1036(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.4Hz,9H),1.21-1.40(m,45H),1.54-1.65(m,6H),2.01-2.08(m,12H),2.09-2.19(m,2H),2.24(t,J＝7.4Hz,2H),
2.32(t,J＝7.5Hz,4H),2.57(t,J＝6.2Hz,2H),2.77(t,J＝6.3Hz,6H),3.41(s,9H),3.84(t,J＝8.3Hz,2H),4.37-4.50(m,6H),5.28-5.43(m,12H),6.72(br s,1H).
[1726] 实施例29
[1727] 4-(1,3-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-2-基氨基)-N,N,N-三甲基-4-氧代丁烷-1-铵氯化物(化合物II-22)
[1728] 工序1
[1729] 向2-氨基-2-(羟基甲基)-1,3-丙二醇(和光纯药工业公司制，7.41g，61.2mmol)的二氯甲烷(60mL)溶液中添加叔丁基二甲基氯硅烷(Sigma-Aldrich公司制，9.43g，60.7mmol)及咪唑(Nacalai Tesque公司制，5.51g，80.9mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中加入饱和食盐水，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。
将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100/0～95/5)进行纯化，得到6-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2,2,3,3,9,9,10,10-八甲基-4,8-二氧杂-3,9-二硅杂十一烷(disilaundecane)-6-胺(3.80g，8.19mmol，收率为40％)。
[1730] ESI-MS m/z:464(M+H)+.
[1731] 工序2
[1732] 向工序1中得到的6-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2,2,3,3,9,9,10,10-八甲基-4,8-二氧杂-3,9-二硅杂十一烷-6-胺(1.28g，2.76mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入4-(二甲基氨基)丁酸盐酸盐(Sigma-Aldrich公司制，0.708g，4.14mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(0.810g，4.14mmol)、N,N-二甲基氨基吡啶(0.0170g，0.138mmol)及N,N-二异丙基乙胺(1.45mL，8.31mmol)，于室温彻夜搅拌。于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5～90/10)进行纯化，得到N-(6-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2,2,3,3,9,9,10,10-八甲基-4,8-二氧杂-3,
9-二硅杂十一烷-6-基)-4-(二甲基氨基)丁酰胺(1.22g，2.11mmol，收率为76％)。
[1733] ESI-MS m/z:578(M+H)+.
[1734] 工序3
[1735] 向工序2中得到的N-(6-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2,2,3,3,9,9,10,10-八甲基-4,8-二氧杂-3,9-二硅杂十一烷-6-基)-4-(二甲基氨基)丁酰胺(1.08g，
1.87mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加四丁基氟化铵(东京化成工业公司制，约1mol/L的四氢呋喃溶液，7.49mL，7.49mmol)，于室温搅拌2小时。向反应液中加入(9Z,12Z)-十八碳-
9,12-二烯酸(2.05g，7.31mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.44g，
7.51mmol)及N,N-二甲基氨基吡啶(0.0340g，0.278mmol)，于室温彻夜搅拌。于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝60/40～50/50)进行纯化，得到双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(4-(二甲基氨基)丁酰胺基)-2-(((9Z,
12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.405g，0.396mmol，收率为
21％)。
[1736] ESI-MS m/z:1022(M+H)+.
[1737] 工序4
[1738] 向工序3中得到的双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(4-(二甲基氨基)丁酰胺基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.335g，0.328mmol)的氯仿(3mL)溶液中添加碘甲烷(东京化成工业公司制，0.200mL)，于室温搅拌2小时。于减压下对反应液进行浓缩。将残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，装载于离子交换树脂(Dowex(TM)1x-2 100目，Cl型，约20倍量，预先用水及甲醇洗涤)，用甲醇-氯仿(1:1)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝90/10～80/20)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.324g，0.302mmol，收率为
92％)。
[1739] ESI-MS m/z:1036(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.23-1.40(m,45H),1.55-1.64(m,6H),2.01-2.12(m,14H),2.34(t,J＝7.6Hz,6H),2.43(t,J＝6.3Hz,
2H),2.77(t,J＝6.6Hz,6H),3.37(s,9H),3.77-3.83(m,2H),4.43(s,6H),5.28-5.42(m,
12H),6.62(br s,1H).
[1740] 实施例30
[1741] 2-(1,3-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-2-基氨基)-N,N,N-三甲基-2-氧代乙烷氯化铵(化合物II-
23)
[1742] 采用与实施例29相同的方法，使用N,N-二甲基甘氨酸(东京化成工业公司制)代替4-(二甲基氨基)丁酸盐酸盐，得到标题的化合物(0.356g，0.341mmol，总收率为17％)。
[1743] ESI-MS m/z:1008(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.23-1.40(m,44H),1.54-1.64(m,26H),2.01-2.08(m,12H),2.35(t,J＝7.6Hz,6H),2.77(t,J＝6.8Hz,
6H),3.40(s,9H),4.46(s,6H),4.70(s,2H),5.28-5.42(m,12H),9.54(br s,1H).
[1744] 实施例31
[1745] 4-((6Z,9Z,29Z,32Z)-20-羟基-20-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)三十八碳-6,9,29,32-四烯-19-基氧基)-N,N,N-三甲基-4-氧代丁烷-1-铵氯化物(化合物III-1)[1746] 使用通过以美国专利申请公开第2012/0172411号说明书中记载的方法为基准的方法得到的4-(二甲基氨基)丁酸(6Z,9Z,29Z,32Z)-20-羟基-20-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)三十八碳-6,9,29,32-四烯-19-基酯(0.144g，0.156mmol)，采用与实施例1的工序2相同的方法，得到标题的化合物(0.146g，0.150mmol，收率为96％)。
[1747] ESI-MS m/z:935(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.9Hz,9H),1.16-1.79(m,60H),1.98-2.17(m,15H),2.52-2.59(m,2H),2.77(t,J＝6.6Hz,6H),3.44(s,9H),3.69-
3.81(m,2H),4.94-4.98(m,1H),5.29-5.42(m,12H).
[1748] 实施例32
[1749] (6Z,9Z,28Z,31Z)-N,N-二甲基-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-铵氯化物(化合物IV-1)
[1750] 工序1
[1751] 向使用以国际公开第2010/042877号中记载的方法为基准的方法得到的(6Z,9Z,28Z,31Z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-酮(0.194g，0.368mmol)的1,2-二氯乙烷(2mL)溶液中加入甲胺(东京化成工业公司制，约40％甲醇溶液，0.110mL，1.1mmol)和乙酸
(0.063mL，1.1mmol)。进一步添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.117g，0.552mmol)后，于室温搅拌
2小时。向反应液中添加甲胺(约40％甲醇溶液，0.110mL，1.1mmol)、乙酸(0.063mL，
1.1mmol)、及三乙酰氧基硼氢化钠(0.117g，0.552mmol)，搅拌2小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用己烷萃取2次。合并有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～90/10)进行纯化，得到(6Z,9Z,28Z,
31Z)-N-甲基三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-胺(0.121g，0.223mmol，收率为61％)。
[1752] ESI-MS m/z:543(M+H)+.
[1753] 工序2
[1754] 向工序1中得到的(6Z,9Z,28Z,31Z)-N-甲基三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-胺(0.121g，0.223mmol)中添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(0.154g，0.446mmol)及50％氢氧化钠水溶液(0.107g，1.34mmol)，在油浴上于135℃搅拌2小时。将反应液冷却至室温，添加饱和食盐水，用己烷洗涤。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100/0～85/15)进行纯化，由此得到(6Z,9Z,28Z,31Z)-N-甲基-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-胺(0.139g，0.175mmol，收率为79％)。
[1755] ESI-MS m/z:792(M+H)+.
[1756] 工序3
[1757] 使用工序2中得到的(6Z,9Z,28Z,31Z)-N-甲基-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-胺(0.139g，0.175mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.114g，0.135mmol，收率为77％)。
[1758] ESI-MS m/z:806(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.26-1.56(m,54H),1.65-1.73(m,2H),1.80-1.88(m,2H),2.05(q,J＝7.0Hz,12H),2.77(t,J＝6.3Hz,
6H),3.22-3.27(m,1H),3.31(s,6H),3.58-3.62(m,2H),5.29-5.42(m,12H).
[1759] 实施例33
[1760] N,N,N-三甲基-3-(棕榈酰氧基)-2,2-双((棕榈酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-24)
[1761] 工序1
[1762] 向实施例24的工序1中得到的2-((二甲基氨基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(0.420g,2.57mmol)的1,2-二氯乙烷(5mL)溶液中加入吡啶(3.12mL，38.6mmol)后，于室温添加棕榈酰氯(东京化成工业公司制，6.22mL，20.6mmol)，于70℃搅拌2小时。将反应液冷却至室温，添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿)进行纯化，由此得到二棕榈酸2-((二甲基氨基)甲基)-2-((棕榈酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.650g，0.740mmol，收率为29％)。
[1763] ESI-MS m/z:879(M+H)+
[1764] 工序2
[1765] 使用工序1中得到的二棕榈酸2-((二甲基氨基)甲基)-2-((棕榈酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.65g，0.74mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.056g，0.060mmol，收率为8％)。
[1766] ESI-MS m/z:893(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.21-1.34(m,72H),1.54-1.64(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.62(s,9H),3.95(s,2H),4.29(s,6H).[1767] 实施例34
[1768] N,N,N-三甲基-3-(十四碳酰氧基)-2,2-双((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-25)
[1769] 采用与实施例33相同的方法，使用肉豆蔻酰氯(和光纯药工业)代替棕榈酰氯，得到标题的化合物(0.045g，0.053mmol，总收率为4％)。
[1770] ESI-MS m/z:809(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.21-1.34(m,60H),1.54-1.64(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.64(s,9H),3.96(s,2H),4.29(s,6H).[1771] 实施例35
[1772] 3-(十二碳酰氧基)-2,2-双((十二碳酰氧基)甲基)-N,N,N-三甲基丙烷-1-铵氯化物(化合物II-26)
[1773] 采用与实施例33相同的方法，使用月桂酰氯(东京化成工业公司制)代替棕榈酰氯，得到标题的化合物(0.085g，0.112mmol，总收率为9％)。
[1774] ESI-MS m/z:725(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.19-1.34(m,48H),1.54-1.64(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.66(s,9H),3.97(s,2H),4.30(s,6H).[1775] 实施例36
[1776] (Z)-N,N,N-三甲基-3,3-双((油酰氧基)甲基)二十一碳-12-烯-1-铵氯化物(化合物II-27)
[1777] 工序1
[1778] 使丙二酸二甲酯(1.00g，7.57mmol)溶解于乙腈(25mL)，添加甲磺酸(Z)-十八碳-9-烯-1-基酯(3.15g，9.08mmol)、碳酸铯(4.93g，15.1mmol)及四丁基碘化铵(3.35g，
9.08mmol)，于60℃搅拌1小时。向反应液中添加水，用己烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10～70/30)进行纯化，由此得到2-(十八碳-9-烯-1-基)丙二酸(Z)-二甲酯(2.54g，6.64mmol，收率为88％)。
[1779] ESI-MS m/z:383(M+H)+
[1780] 工序2
[1781] 使工序1中得到的2-(十八碳-9-烯-1-基)丙二酸(Z)-二甲酯(0.500g，1.31mmol)溶解于甲苯(6mL)，在冰冷下添加氢化钠(油性，60％,0.209g，5.23mmol)，搅拌直到发泡消失为止。接下来，添加2-氯-N,N-二甲基乙胺盐酸盐(东京化成工业公司制，0.377g，2.61mmol)，于100℃搅拌2小时。在冰冷下向反应液中添加水，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝99/1～90/10)进行纯化，由此得到2-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-(十八碳-9-烯-1-基)丙二酸(Z)-二甲酯(0.258g，0.569mmol，收率为44％)。
[1782] ESI-MS m/z:454(M+H)+
[1783] 工序3
[1784] 采用与实施例19的工序2相同的方法，使用工序2中得到的2-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-(十八碳-9-烯-1-基)丙二酸(Z)-二甲酯(0.250g，0.551mmol)，得到(Z)-2-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-(十八碳-9-烯-1-基)丙烷-1,3-二醇(0.220g，0.553mmol，定量的)。
[1785] ESI-MS m/z:398(M+H)+
[1786] 工序4
[1787] 将工序3中得到的(Z)-2-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-(十八碳-9-烯-1-基)丙烷-1,3-二醇(0.220g，0.553mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)，添加N,N-二异丙基乙胺(0.386mL，
2.21mmol)，在冰冷下添加油酰氯(Sigma-aldrich公司制，0.457mL，1.38mmol)，于室温搅拌
10分钟。向反应液中添加水，用己烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10～50/
50)进行纯化，由此得到二油酸(Z)-2-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-((Z)-十八碳-9-烯-1-基)丙烷-1,3-二基酯(0.280g，0.302mmol，收率为55％)。
[1788] ESI-MS m/z:927(M+H)+
[1789] 工序5
[1790] 使用工序4中得到的二油酸(Z)-2-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-((Z)-十八碳-9-烯-1-基)丙烷-1,3-二基酯(0.280g，0.302mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.199g，0.204mmol，收率为67％)。
[1791] ESI-MS m/z:941(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.22-1.39(m,66H),1.55-1.65(m,4H),1.70-1.78(m,2H),1.98-2.06(m,12H),2.33(t,J＝7.6Hz,4H),
3.46(s,9H),3.58-3.65(m,2H),3.93-4.03(m,4H),5.29-5.39(m,6H).
[1792] 实施例37
[1793] (Z)-N,N,N-三甲基-4,4-双((油酰氧基)甲基)二十二碳-13-烯-1-铵氯化物(化合物II-28)
[1794] 工序1
[1795] 采用与实施例36的工序2相同的方法，使用3-氯-N,N-二甲基丙烷-1-胺盐酸盐(东京化成工业公司制)代替2-氯-N,N-二甲基乙胺盐酸盐，得到2-(3-(二甲基氨基)丙基)-2-(十八碳-9-烯-1-基)丙二酸(Z)-二甲酯(0.210g，0.449mmol，收率为34％)。
[1796] ESI-MS m/z:468(M+H)+
[1797] 工序2
[1798] 采用与实施例36的工序3、4、5相同的方法，使用工序1中得到的2-(3-(二甲基氨基)丙基)-2-(十八碳-9-烯-1-基)丙二酸(Z)-二甲酯(0.210g，0.449mmol)代替2-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-(十八碳-9-烯-1-基)丙二酸(Z)-二甲酯，得到标题化合物(0.042g，0.042mmol，总收率为9％)。
[1799] ESI-MS m/z:955(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.22-1.36(m,68H),1.56-1.64(m,4H),1.72-1.82(m,2H),1.96-2.07(m,12H),2.32(t,J＝7.5Hz,4H),
3.38(s,9H),3.39-3.46(m,2H),3.93(d,J＝11.2Hz,2H),3.99(d,J＝11.2Hz,2H),5.28-
5.40(m,6H).
[1800] 实施例38
[1801] N,N,N-三甲基-3-(硬脂酰氧基)-2,2-双((硬脂酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-29)
[1802] 采用与实施例33相同的方法，使用硬脂酰氯(东京化成工业公司制)代替棕榈酰氯，得到标题的化合物(0.085g，0.112mmol，总收率为6％)。
[1803] ESI-MS m/z:977(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.21-1.37(m,84H),1.54-1.64(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.65(s,9H),3.96(s,2H),4.30(s,6H).[1804] 实施例39
[1805] N,N,N-三甲基-3-油酰胺基-2,2-双((油酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-30)
[1806] 工序1
[1807] 将实施例24的工序1中得到的2-((二甲基氨基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(0.410g,2.51mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)、吡啶(5.08mL，62.8mmol)的混合溶剂。在冰冷下，加入油酰氯(1.25mL，3.77mmol)。向反应液中添加水，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝99/1～90/10)进行纯化，由此得到二油酸(Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.190g，0.275mmol，收率为11％)。
[1808] ESI-MS m/z:693(M+H)+
[1809] 工序2
[1810] 将工序1中得到的二油酸(Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.190g,2.51mmol)溶解于甲苯(2mL)，于室温添加叠氮磷酸二苯酯(diphenylphosphoryl azide)(东京化成工业公司制，0.118mL，0.549mmol)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯(0.0830mL，0.549mmol)，搅拌1小时。由于反应的进行不充分，因此进一步添加叠氮磷酸二苯酯(0.118mL，0.549mmol)，于80℃加热搅拌3小时。将反应液冷却至室温，添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5～60/
40)进行纯化，由此得到二油酸(Z)-2-(叠氮甲基)-2-((二甲基氨基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.135g，0.188mmol，收率为69％)。
[1811] ESI-MS m/z:718(M+H)+
[1812] 工序3
[1813] 将工序2中得到的二油酸(Z)-2-(叠氮甲基)-2-((二甲基氨基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.135g,2.51mmol)溶解于四氢呋喃(1mL)和水(0.1mL)的混合溶液，添加三苯基膦(纯正化学工业公司制，0.0740g，0.282mmol)，搅拌3小时。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，由此得到二油酸(Z)-2-(氨基乙基)-2-((二甲基氨基)甲基)丙烷-1,3-二基酯的粗产物(0.130g，0.188mmol，收率为100％)。
[1814] ESI-MS m/z:691(M+H)+
[1815] 工序4
[1816] 向工序3中得到的二油酸(Z)-2-(氨基乙基)-2-((二甲基氨基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.130g,0.188mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.0990mL，0.564mmol)，在冰冷下加入油酰氯(0.0850g，0.282mmol)，于室温搅拌1小时。向反应液中添加水，用己烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝97/3～60/40)进行纯化，由此得到二油酸(Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-(油酰胺甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.105g，
0.110mmol，收率为58％)。
[1817] ESI-MS m/z:956(M+H)+
[1818] 工序5
[1819] 使用工序4中得到的二油酸(Z)-2-((二甲基氨基)甲基)-2-(油酰胺甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.105g，0.110mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.0480g，
0.0480mmol，收率为43％)。
[1820] ESI-MS m/z:970(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.21-1.37(m,60H),1.56-1.65(m,6H),1.96-2.05(m,12H),2.36(t,J＝7.6Hz,6H),3.51(s,9H),3.51-
3.56(m,2H),4.02(s,2H),4.20(d,J＝12.2Hz,2H),4.30(d,J＝12.2Hz,2H),5.27-5.40(m,
6H),8.11-8.20(m,1H).
[1821] 实施例40
[1822] N,N,N-三甲基-4-(油酰氧基)-3,3-双(油酰氧基甲基)丁烷-1-铵氯化物(化合物II-31)
[1823] 工序1
[1824] 向2-(溴甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(东京化成工业公司制，1.00g，5.02mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中、加入叔丁基二甲基氯硅烷(东京化成工业公司制，
3.79g，25.1mmol)、咪唑(Nacalai Tesque公司制，3.42g，50.2mmol)、N,N-二甲基氨基吡啶(0.061g，0.502mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用己烷萃取
2次。用无水硫酸镁干燥有机层后，于减压下进行浓缩。将残余物用硅胶柱色谱法(己烷)进行纯化，由此得到6-(溴甲基)-6-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2,2,3,3,9,9,10,
10-八甲基-4,8-二氧杂-3,9-二硅杂十一烷(2.50g，4.61mmol，92％)。
[1825] 1H-NMR(CDCl3)δ:0.04(s,18H),0.89(s,27H),3.41(s,2H),3.49(s,6H).
[1826] 工序2
[1827] 向工序1中得到的6-(溴甲基)-6-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-2,2,3,3,9,9,10,10-八甲基-4,8-二氧杂-3,9-二硅杂十一烷(1.849g，3.41mmol)的二甲基亚砜(10mL)溶液中加入氰化钠(Nacalai Tesque公司制，0.529g，10.8mmol)，于85℃搅拌3天。冷却至室温后，用己烷稀释反应液，依次用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10)进行纯化，由此得到4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3,3-双((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)丁腈(1.35g，2.77mmol，收率为81％)。
[1828] ESI-MS m/z:489(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.05(s,18H),0.89(s,27H),2.34(s,2H),3.51(s,6H).
[1829] 工序3
[1830] 在冰冷下，向工序2中得到的4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3,3-双((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)丁腈(1.34g，2.75mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加氢化铝锂(0.104g，2.75mmol)，于室温搅拌2小时。向反应液中添加水(0.495mL，27.5mmol)和氟化钠(3.46g，82.0mmol)，于室温彻夜搅拌。通过硅藻土过滤除去不溶物，浓缩滤液。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(乙酸乙酯)进行纯化，由此得到4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3,3-双((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)丁烷-1-胺(0.435g，0.884mmol，收率为32％)。
[1831] ESI-MS m/z:493(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.02(s,18H),0.88(s,27H),1.38-1.43(m,2H),2.71-2.75(m,2H),3.40(s,6H).
[1832] 工序4
[1833] 向工序3中得到的4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3,3-双((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)丁烷-1-胺(0.200g，0.407mmol)的1,2-二氯乙烷(3mL)溶液中添加38％甲醛水溶液(0.295mL)、三乙酰氧基硼氢化钠(0.431g，2.03mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取2次。用无水硫酸镁干燥有机层后，于减压下进行浓缩。将残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝90/10)进行纯化，由此得到4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3,3-双((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-N,N-二甲基丁烷-1-胺的粗产物。
[1834] 向得到的粗产物中添加四氢呋喃(2mL)及四丁基氟化铵(东京化成工业公司制，约1mol/L四氢呋喃溶液，2.06mL，2.06mmol)，于室温搅拌5小时后，于60℃彻夜搅拌。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿洗涤2次。于减压下对水层进行浓缩。向得到的残余物中添加丙酮(2mL)、氢氧化钠(和光纯药工业公司制，2mol/L水溶液，3mL，6mmol)、油酰氯(0.681mL，2.06mmol)，于室温搅拌3小时。向反应液中添加油酰氯(0.681mL，2.06mmol)，于
60℃彻夜搅拌。冷却至室温后，向反应液中添加水，用氯仿萃取2次。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝90/10)进行纯化，由此得到二油酸(Z)-2-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-(油基氧基(oleyloxy)甲基)丙烷-1,
3-二基酯的粗产物。将得到的粗产物溶解于少量的甲醇-氯仿(9:1)，装载于离子交换树脂(Waters制，poraPack Rxn CX，预先用甲醇洗涤)，用氨(Sigma-Aldirch公司制，2mol/L甲醇溶液)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，得到二油酸(Z)-2-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-(油基氧基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.387g，0.399mmol，收率为98％)。
[1835] ESI-MS m/z:971(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.21-1.38(m,62H),1.54-1.65(m,6H),1.97-2.04(m,12H),2.20(s,6H),2.25-2.32(m,8H),4.04(s,6H),
5.29-5.39(m,6H).
[1836] 工序5
[1837] 利用与实施例1工序2同样的方法，使用工序4中得到的二油酸(Z)-2-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-(油基氧基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.109g，0.112mol)代替三油酸2,2’,2”-次氮基三(乙烷-2,1-二基)酯，得到标题的化合物(0.0642g，0.0630mol，收率为56％)。
[1838] ESI-MS m/z:986(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.23-1.37(m,74H),1.55-1.64(m,65H),1.78-1.84(m,2H),1.95-2.06(m,13H),2.35(t,J＝7.6Hz,6H),
3.42(s,8H),3.70-3.77(m,2H),4.08(s,6H),5.29-5.39(m,6H).
[1839] 实施例41
[1840] N,N,N-三甲基-2-(3-(油酰氧基)-2,2-双((油酰氧基)甲基)丙氧基)-2-氧基乙烷-1-铵氯化物(化合物II-32)
[1841] 工序1
[1842] 向使用米国注册专利8816099号说明书中记载的方法合成的2,2-(二甲基-1,3-二氧杂环己烷-5,5-二基)二甲醇(0.200g，1.14mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入三乙胺(0.475mL，3.40mmol)后，在冰冷下添加油酰氯(0.854g，2.84mmol)，直接在冰冷下搅拌1小时。向反应液中添加水，用己烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5)进行纯化，由此得到(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-5,5-二基)双(亚甲基)二油酸酯(0.500g，0.709mmol，收率为63％)。
[1843] ESI-MS m/z:705(M+H)+
[1844] 工序2
[1845] 在冰冷下，向工序1中得到的(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-5,5-二基)双(亚甲基)二油酸酯(0.500g，0.709mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中分2次添加三氟乙酸(2.00mL，26.0mmol)，直接在冰冷下搅拌1小时。向反应液中添加饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10～50/50)进行纯化，由此得到二油酸2,2-双(羟基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.207g，0.311mmol，收率为44％)。
[1846] ESI-MS m/z:665(M+H)+
[1847] 工序3
[1848] 向N,N-二甲基甘氨酸(东京化成工业公司制，0.049g，0.474mmol)中添加亚硫酰氯(1mL，13.7mmol)，于70℃加热搅拌30分钟。将反应液冷却至室温后，于减压下进行浓缩，由此得到N,N-二甲基甘氨酰氯的粗产物。在冰冷下，向工序2中得到的二油酸2,2-双(羟基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.207g，0.311mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.110mL，0.632mmol)、上述N,N-二甲基甘氨酰氯的粗产物，于室温搅拌1小时。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10～40/60)进行纯化，由此得到二油酸2-(((二甲基甘氨酰基)氧基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.077g，0.103mmol，收率为33％)。
[1849] ESI-MS m/z:751(M+H)+
[1850] 工序4
[1851] 向工序3中得到的二油酸2-(((二甲基甘氨酰基)氧基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.0770g，0.103mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入吡啶(0.0330mL，
0.411mmol)后，在冰冷下添加油酰氯(0.0620g，0.205mmol)，于室温搅拌30分钟。向反应液中添加水，用己烷/乙酸乙酯＝1/1的混合溶剂萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5)进行纯化，由此得到二油酸2-(((二甲基甘氨酰基)氧基)甲基)-2-((油酰基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.122g，0.0600mmol，收率为59％)。
[1852] ESI-MS m/z:1015(M+H)+
[1853] 工序5
[1854] 使用工序4中得到的二油酸2-(((二甲基甘氨酰基)氧基)甲基)-2-((油酰基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.122g，0.060mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.017g，0.016mmol，收率为27％)。
[1855] ESI-MS m/z:1029(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.19-1.38(m,58H),1.54-1.66(m,6H),1.98-2.04(m,12H),2.28-2.35(m,6H),3.60(s,9H),4.11(d,J＝
1.8Hz,6H),4.20(s,2H),5.08(s,2H),5.29-5.41(m,6H).
[1856] 实施例42
[1857] N,N,N-三甲基-1,3-双(十四碳酰氧基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-2-铵氯化物(化合物II-33)
[1858] 工序1
[1859] 将2-(二甲基氨基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(1.50g，10.1mmol)溶解于四氢呋喃(10mL)，添加吡啶(4.07mL，50.3mmol)、继而添加十四碳酰氯(4.09mL，15.1mmol)，于60℃加热搅拌2小时。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝99/1～90/10)进行纯化，由此分别得到二(十四酸)2-(二甲基氨基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(1.50g，1.92mmol，收率为19％)、二(十四酸)2-(二甲基氨基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.750g，1.32mmol，收率为13％)、及十四酸2-(二甲基氨基)-3-羟基-2-(羟基甲基)丙酯(0.220g，0.612mmol，收率为6％)。
[1860] ESI-MS m/z:781(M+H)+
[1861] ESI-MS m/z:570(M+H)+
[1862] ESI-MS m/z:360(M+H)+
[1863] 工序2
[1864] 使用工序1中得到的二(十四酸)2-(二甲基氨基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(1.50g，1.92mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.530g，
0.638mmol，收率为33％)。
[1865] ESI-MS m/z:795(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.21-1.33(m,60H),1.55-1.65(m,6H),2.37(t,J＝7.6Hz,6H),3.71(s,9H),4.59(s,6H).
[1866] 实施例43
[1867] N,N,N-三甲基-1,3-双(油酰氧基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-2-铵氯化物(化合物II-34)
[1868] 工序1
[1869] 向实施例42的工序1中得到的十四酸2-(二甲基氨基)-3-羟基-2-(羟基甲基)丙酯(0.220g，0.612mmol)的1,2-二氯乙烷(3mL)溶液中添加吡啶(0.297mL，3.67mmol)，继而添加油酰氯(0.552g，1.84mmol)，于60℃加热搅拌1小时。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝98/2～85/15)进行纯化，由此得到二油酸2-(二甲基氨基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.250g，0.281mmol，收率为46％)。
[1870] ESI-MS m/z:889(M+H)+
[1871] 工序2
[1872] 使用工序1中得到的二油酸2-(二甲基氨基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.250g，0.281mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.065g，0.069mmol，收率为25％)。
[1873] ESI-MS m/z:903(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.22-1.38(m,60H),1.56-1.66(m,6H),1.97-2.05(m,8H),2.39(t,J＝7.6Hz,6H),3.72(s,9H),4.58(s,
6H),5.28-5.40(m,4H).
[1874] 实施例44
[1875] N,N,N-三甲基-1-(油基氧基)-3-(十四碳酰氧基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-2-铵氯化物(化合物II-35)
[1876] 工序1
[1877] 向实施例42的工序1中得到的二(十四酸)2-(二甲基氨基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.750g，1.32mmol)的1,2-二氯乙烷(3mL)溶液中添加吡啶(0.532mL，6.58mmol)，继而添加油酰氯(0.792g，1.84mmol)，于60℃加热搅拌1小时。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5)进行纯化，由此得到二(十四酸)2-(二甲基氨基)-2-((油基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.750g，0.899mmol，收率为68％)。
[1878] ESI-MS m/z:835(M+H)+
[1879] 工序2
[1880] 使用工序1中得到的二(十四酸)2-(二甲基氨基)-2-((油基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.750g，0.899mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.092g，0.104mmol，收率为12％)。
[1881] ESI-MS m/z:849(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.19-1.38(m,60H),1.56-1.65(m,6H),1.98-2.06(m,4H),2.39(t,J＝7.6Hz,6H),3.72(s,9H),4.59(s,
6H),5.30-5.39(m,2H).
[1882] 实施例45
[1883] N,N,N-三甲基-3-(十四碳酰氧基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)-2-(((十四烷基氨基甲酰基)氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-36)
[1884] 工序1
[1885] 向实施例24的工序1中得到的2-((二甲基氨基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(0.820g，5.02mmol)的四氢呋喃(7mL)溶液中加入吡啶(2.03mL，38.6mmol)后，在冰冷下添加十四碳酰氯(0.930mL，3.77mmol)，于60℃搅拌2小时。将反应液冷却至室温，添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5～70/30)进行纯化，由此得到二(十四酸)2-((二甲基氨基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.150g，0.257mmol，收率为5％)。
[1886] ESI-MS m/z:584(M+H)+
[1887] 工序2
[1888] 向工序1中得到的二(十四酸)2-((二甲基氨基)甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.060g，0.103mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中添加三乙胺(0.017mL，0.123mmol)，在冰冷下添加4-硝基苯基氯甲酸酯(东京化成工业公司制，0.025g，0.123mmol)，继而加入十四烷基胺(东京化成工业公司制，0.022g，0.103mmol)，于室温搅拌一夜。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5～70/30)进行纯化，由此得到二(十四酸)2-((二甲基氨基)甲基)-2-(((十四烷基氨基甲酰基)氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.052g，0.063mmol，收率为62％)。
[1889] ESI-MS m/z:824(M+H)+
[1890] 工序3
[1891] 使用工序2中得到的二(十四酸)2-((二甲基氨基)甲基)-2-(((十四烷基氨基甲酰基)氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.052g，0.063mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.012g，0.014mmol，收率为21％)。
[1892] ESI-MS m/z:838(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.22-1.33(m,62H),1.51-1.61(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,4H),3.13(dd,J＝14.2,5.8Hz,2H),3.59(s,
9H),4.12(s,2H),4.19(s,2H),4.21(d,J＝12.0Hz,2H),4.25(d,J＝12.0Hz,2H),6.72(t,J＝5.8Hz,1H).
[1893] 实施例46
[1894] N,N,N-三甲基-3-((十八烷基氨基甲酰基)氧基)-2,2-双((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-37)
[1895] 工序1
[1896] 采用与实施例45相同的方法，使用硬脂胺(东京化成工业公司制)代替十四烷基胺，得到标题的化合物(0.015g，0.016mmol，总收率为0.5％)。
[1897] ESI-MS m/z:894(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.21-1.34(m,70H),1.51-1.62(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,4H),3.13(dd,J＝14.3,5.8Hz,2H),3.60(s,
9H),4.12(s,2H),4.19(s,2H),4.21(d,J＝12.2Hz,2H),4.25(d,J＝12.2Hz,2H),6.69(t,J＝5.8Hz,1H).
[1898] 实施例47
[1899] N,N,N-三甲基-3-(硬脂酰氧基)-2,2-双((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-37)
[1900] 工序1
[1901] 向采用“Angewandte Chemie International Edition”，2009年，第48卷，p.2126–2130中记载的方法合成的(5-(溴甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲醇
(1.00g，4.18mmol)的吡啶(10mL)溶液中添加硬脂酰氯(2.53g，8.36mmol)，于室温搅拌30分钟。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10)进行纯化，由此得到硬脂酸(5-(溴甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲酯(0.95g，1.879mmol，收率为45％)。
[1902] 1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.23-1.40(m,44H),1.54-1.64(m,26H),2.01-2.08(m,12H),2.35(t,J＝7.6Hz,6H),2.77(t,J＝6.8Hz,6H),3.40(s,9H),4.46(s,
6H),4.70(s,2H),28-5.42(m,12H),9.54(br s,1H).
[1903] 工序2
[1904] 向工序1中得到的硬脂酸(5-(溴甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲酯(0.95g，1.879mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中添加二甲胺(2.0mol/L四氢呋喃溶液，5.64mL，11.3mmol)，在微波照射下于120℃搅拌13小时。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝99/1～90/10)进行纯化，由此得到硬脂酸(5-((二甲基氨基)甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲酯(0.14g，0.298mmol，收率为16％)。
[1905] ESI-MS m/z:470(M+H)+
[1906] 工序3
[1907] 采用与实施例41的工序2相同的方法，使用工序1中得到的硬脂酸(5-((二甲基氨基)甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-5-基)甲酯(0.140g，0.298mmol)，得到硬脂酸3-(二甲基氨基)-2,2-双(羟基甲基)丙酯(0.12g，0.279mmol，收率为94％)。
[1908] ESI-MS m/z:430(M+H)+
[1909] 工序4
[1910] 向工序3中得到的硬脂酸3-(二甲基氨基)-2,2-双(羟基甲基)丙酯(0.12g，0.279mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入吡啶(0.122mL，1.51mmol)后，在冰冷下添加十四碳酰氯(0.224g，0.98mmol)，于室温搅拌1小时。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5)进行纯化，由此得到二(十四酸)2-((二甲基氨基)甲基)-2-((硬脂酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.150g，0.176mmol，收率为63％)。
[1911] ESI-MS m/z:851(M+H)+
[1912] 工序5
[1913] 使用工序4中得到的二(十四酸)((二甲基氨基)甲基)-2-((硬脂酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.150g，0.176mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.032g，0.056mmol，收率为32％)。
[1914] ESI-MS m/z:865(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.19-1.33(m,68H),1.54-1.65(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.63(s,9H),3.95(s,2H),4.29(s,6H).[1915] 实施例48
[1916] N,N,N-三甲基-3-(((Z)-十四碳-9-烯酰基)氧基)-2,2-双((((Z)-十四碳-9-烯酰基)氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-39)
[1917] 工序1
[1918] 向肉豆蔻脑酸(Nu-Chek Prep,Inc公司制，2.50g，11.0mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入亚硫酰氯(1.61mL，22.1mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(8.55mL，0.110mmol)，于室温搅拌1小时。于减压下对反应液进行浓缩，由此得到肉豆蔻酰氯的粗产物(2.70g，11.04mmol，收率为100％)。
[1919] 工序2
[1920] 采用与实施例33相同的方法，使用工序1中得到的肉豆蔻酰氯(1.88g，7.66mmol)代替棕榈酰氯，得到标题的化合物(0.350g，0.417mmol，总收率为27％)。
[1921] ESI-MS m/z:803(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.86-0.94(m,9H),1.26-1.39(m,36H),1.53-1.64(m,6H),1.97-2.07(m,12H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.67(s,9H),3.99(s,2H),
4.30(s,6H),5.29-5.39(m,6H).
[1922] 实施例49
[1923] 2-((4-((1,3-双(十四碳酰氧基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)氧基)-N,N,N-三甲基乙烷-1-铵氯化物(化合物II-40)
[1924] 工序1
[1925] 向采用以“Australian Journal of Chemistry”，2013年，第66卷，p.23-29中记载的方法为基准的方法合成的4-((1,3-双(十四碳酰氧基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(0.250g，0.293mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中依次加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(0.084g，0.440mmol)、2-(二甲基氨基)乙烷-1-醇(东京化成工业公司制，0.039g，0.440mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0.036g，0.293mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝99/1～90/
10)进行纯化，由此得到二(十四酸)2-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-氧代丁酰胺基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.200g，0.217mmol，收率为74％)。
[1926] ESI-MS m/z:924(M+H)+
[1927] 工序2
[1928] 使用工序1中得到的二(十四酸)2-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-氧代丁酰胺基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.200g，0.217mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.150g，0.154mmol，收率为71％)。
[1929] ESI-MS m/z:938(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.20-1.34(m,60H),1.56-1.65(m,6H),2.34(t,J＝7.6Hz,6H),2.54(br s,4H),3.48(s,9H),4.13-4.21(m,2H),4.40(s,6H),4.57-4.65(m,2H),6.22(s,1H).
[1930] 实施例50
[1931] 3-((4-((1,3-双(十四碳酰氧基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)氧基)-1-甲基奎宁环-1-铵氯化物(化合物II-41)
[1932] 采用与实施例49相同的方法，使用奎宁环-3-醇(东京化成工业公司制)代替2-(二甲基氨基)乙烷-1-醇，得到标题的化合物(0.350g，0.417mmol，总收率为46％)。
[1933] ESI-MS m/z:976(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.18-1.35(m,66H),1.55-1.66(m,6H),1.97-2.10(m,1H),2.14-2.26(m,2H),2.45-2.70(m,6H),3.34(s,
3H),3.61-4.07(m,6H),4.41(s,6H),5.03-5.10(m,1H),6.50(s,1H).
[1934] 实施例51
[1935] N,N,N-三甲基-16,22-二氧代-19-(((十四烷基氨基甲酰基)氧基)甲基)-17,21-二氧杂-15,23-二氮杂三十七烷-19-铵氯化物(化合物II-42)
[1936] 工序1
[1937] 向2-(二甲基氨基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(0.15g，1.01mmol)中依次添加甲苯(4mL)、三乙胺(0.280mL，2.01mmol)、1-异氰酸十四酯(1.66mL，6.03mmol)，使用微波反应装置于100℃反应4小时。向反应液中添加水，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝99/1～90/10)进行纯化，由此得到双(十四烷基氨基甲酸)2-(二甲基氨基)-2-(((十四烷基氨基甲酰基)氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.872g，1.01mmol，收率为100％)。
[1938] ESI-MS m/z:868(M+H)+
[1939] 工序2
[1940] 使用工序1中得到的双(十四烷基氨基甲酸)2-(二甲基氨基)-2-(((十四烷基氨基甲酰基)氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.872g，1.01mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.761g，0.829mmol，收率为82％)。
[1941] ESI-MS m/z:882(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.22-1.32(m,66H),1.47-1.56(m,6H),3.13(td,J＝14.3,6.0Hz,6H),3.58(s,9H),4.52(s,6H),6.69(t,J＝6.0Hz,3H).
[1942] 实施例52
[1943] N,N,N-三甲基-1,3-双(3,7,11,15-四甲基十六碳酰氧基)-2-((3,7,11,15-四甲基十六碳酰基)甲基)丙烷-2-铵氯化物(化合物II-43)
[1944] 向2-二甲基氨基-2-羟基甲基丙烷-1,3-二醇(0.0170g，0.112mmol)的1,2-二氯乙烷(1mL)溶液中加入3,7,11,15-四甲基十六酸(0.1826g，0.561mmol)、((((1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙叉基)氨基)氧基)-4-吗啉基亚甲基)二甲基六氟磷酸铵(Sigma-Aldirch公司制，0.240g，0.561mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.098mL，0.561mmol)，于60℃彻夜搅拌。冷却至室温后，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5)进行纯化，得到双(3,7,11,15-四甲基十六酸)2-(二甲基氨基)-2-((3,7,11,15-四甲基十六碳酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯的粗产物。向得到的粗产物中添加碘甲烷(1.00mL，
16.0mmol)，于室温彻夜搅拌。于减压下对反应液进行浓缩。残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，装载于离子交换树脂(Dow Chemical制，Dowex(TM)1x-2 100目，Cl型，约20倍量，预先用水及甲醇洗涤)，用甲醇-氯仿(1:1)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝90/10)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.0766g，
0.071mmol，收率为63％)。
[1945] ESI-MS m/z:1043(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.81-0.87(m,36H),0.92(d,J＝6.7Hz,9H),0.97-1.42(m,60H),1.51(tt,J＝19.8,6.7Hz,3H),1.84-1.97(m,3H),2.16(ddd,J＝
15.5,8.4,2.3Hz,3H),2.38(ddd,J＝15.5,5.6,1.6Hz,3H),3.72(s,9H),4.55(s,6H).
[1946] 实施例53
[1947] N,N,N-三甲基-2-((十四碳酰氧基)甲基)-2-十四烷基十六烷-1-铵氯化物(化合物II-44)
[1948] 采用与实施例19相同的方法，分别使用1-溴十四烷(东京化成工业公司制)、肉豆蔻酸(东京化成工业公司制)代替实施例19工序1中使用的甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯和工序4中使用的(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸，得到标题的化合物(0.292g，0.39mmol，总收率为22％)。
[1949] ESI-MS m/z:721(M)+；1H-NMR(CD3OD)δ:0.90(t,J＝6.8Hz,9H),1.28-1.32(m,70H),1.49(br s,2H),1.63-1.66(m,2H),2.42(t,J＝7.2Hz,2H),3.26(s,9H),3.43(s,2H),
4.18(s,2H).
[1950] 实施例54
[1951] 2-十六烷基-N,N,N-三甲基-2-((棕榈酰氧基)甲基)十八烷-1-铵氯化物(化合物II-45)
[1952] 采用与实施例19相同的方法，分别使用1-溴十六烷(东京化成工业公司制)、棕榈酸(东京化成工业公司制)代替实施例19工序1中使用的甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯和工序4中使用的(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸，得到标题的化合物(0.195g，0.23mmol，总收率为5％)。
[1953] ESI-MS m/z:805(M)+；1H-NMR(CD3OD)δ:0.90(t,J＝6.8Hz,9H),1.28-1.33(m,82H),1.49(br s,2H),1.63-1.67(m,2H),2.43(t,J＝7.2Hz,2H),3.26(s,9H),3.43(s,2H),
4.18(s,2H).
[1954] 实施例55
[1955] N,N,N-三甲基-2-((硬脂酰氧基)甲基)-2-十四烷基十六碳-1-铵氯化物(化合物II-46)
[1956] 采用与实施例19相同的方法，分别使用1-溴十四烷(东京化成工业公司制)、硬脂酸(东京化成工业公司制)代替实施例19工序1中使用的甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯和工序4中使用的(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸，得到标题的化合物(0.421g，0.52mmol，总收率为20％)。
[1957] ESI-MS m/z:777(M)+；1H-NMR(CD3OD)δ:0.90(t,J＝6.8Hz,9H),1.29-1.33(m,78H),1.49(br s,2H),1.63-1.67(m,2H),2.43(t,J＝7.2Hz,2H),3.27(s,9H),3.44(s,2H),
4.18(s,2H).
[1958] 实施例56
[1959] 3-(十二碳酰氧基)-N,N,N-三甲基-2,2-双((硬脂酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-47)
[1960] 采用与实施例46相同的方法，分别使用月桂酰氯(东京化成工业公司制)、硬脂酰氯(东京化成工业公司制)代替实施例46工序1中使用的硬脂酰氯和工序4中使用的十四碳酰氯，得到标题的化合物(0.200g，0.417mmol，总收率为0.3％)。
[1961] ESI-MS m/z:893(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.9Hz,9H),1.21-1.32(m,72H),1.57-1.64(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.63(s,9H),3.99(s,2H),4.29(s,6H).[1962] 实施例57
[1963] 3-(十二碳酰氧基)-N,N,N-三甲基-2,2-双((棕榈酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-48)
[1964] 采用与实施例47相同的方法，分别使用月桂酰氯(东京化成工业公司制)、棕榈酰氯(和光纯药工业公司制)代替实施例47工序1中使用的硬脂酰氯和工序4中使用的十四碳酰氯，得到标题的化合物(0.350g，0.40mmol，总收率为0.6％)。
[1965] ESI-MS m/z:837(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.9Hz,9H),1.21-1.33(m,64H),1.56-1.64(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.66(s,9H),3.98(s,2H),4.29(s,6H).[1966] 实施例58
[1967] 3-(十二碳酰氧基)-2-((十二碳酰氧基)甲基)-N,N,N-三甲基-2-((硬脂酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-49)
[1968] 采用与实施例47相同的方法，使用月桂酰氯(东京化成工业公司制)代替实施例47工序4中使用的十四碳酰氯，得到标题的化合物(0.210g，0.249mmol，总收率为0.3％)。
[1969] ESI-MS m/z:809(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.9Hz,9H),1.23-1.34(m,60H),1.53-1.65(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.63(s,9H),3.97(s,2H),4.29(s,6H).[1970] 实施例59
[1971] N,N,N-三甲基-3-(棕榈酰氧基)-2-((棕榈酰氧基)甲基)-2-((硬脂酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-50)
[1972] 采用与实施例47相同的方法，使用棕榈酰氯(东京化成工业公司制)代替实施例47工序4中使用的十四碳酰氯，得到标题的化合物(0.420g，0.44mmol，总收率为0.5％)。
[1973] ESI-MS m/z:921(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.9Hz,9H),1.21-1.32(m,76H),1.55-1.65(m,6H),2.38(t,J＝7.6Hz,6H),3.67(s,9H),399(s,2H),4.29(s,6H).[1974] 实施例60
[1975] 3-(二十碳酰氧基)-N,N,N-三甲基-2,2-双((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-51)
[1976] 采用与实施例47相同的方法，使用二十碳酰氯(Nu-Chek Prep,Inc.制)代替实施例47工序1中使用的硬脂酰氯，得到标题的化合物。
[1977] 实施例61
[1978] 3-(十二碳酰氧基)-2-((十二碳酰氧基)甲基)-2-((二十碳酰氧基)甲基)-N,N,N-三甲基丙烷-1-铵氯化物(化合物II-52)
[1979] 采用与实施例47相同的方法，分别使用二十碳酰氯(Nu-Chek Prep,Inc.制)、月桂酰氯(和光纯药工业公司制)代替实施例47工序1中使用的硬脂酰氯和工序4中使用的十四碳酰氯，得到标题的化合物。
[1980] 实施例62
[1981] N,N,N-三甲基-3-(甲基(3-(十四碳酰氧基)-2,2-双((十四碳酰氧基)甲基)丙基)氨基)丙烷-1-铵氯化物(化合物II-53)
[1982] 工序1
[1983] 向2-(溴甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(0.15g，0.754mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(1mL)溶液中添加N,N,N’-三甲基丙烷-1,3-二胺(0.263g，2.26mmol)，使用微波反应装置于100℃反应2小时。然后，在冰冷下添加N,N-二异丙基乙胺(0.395mL，2.26mmol)，继而添加十四碳酰氯(1.12g，4.52mmol)，于室温搅拌2小时。向反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，进行过滤。于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝99/1～90/10)进行纯化，由此得到二(十四酸)2-(((3-(二甲基氨基)丙基)(甲基)氨基)甲基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.040g，0.046mmol，收率为6％)。
[1984] ESI-MS m/z:866(M+H)+
[1985] 工序2
[1986] 使用工序1中得到的二(十四酸)2-(((3-(二甲基氨基)丙基)(甲基)氨基)甲基)-2-((十四碳酰氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯(0.040g，0.046mmol)，与实施例1工序2同样地操作，得到标题化合物(0.015g，0.016mmol，收率为35％)。
[1987] ESI-MS m/z:880(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.20-1.35(m,62H),1.54-1.65(m,6H),1.87-2.03(m,2H),2.21-2.31(m,2H),2.31(t,J＝7.6Hz,6H),2.49(br s,3H),3.40(s,9H),3.52-3.63(m,2H),4.05(s,6H).
[1988] 实施例63
[1989] (S)-6-(二(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氨基)-N,N,N-三甲基-5-油酰胺基-6-氧代己烷-1-铵氯化物(化合物III-2)
[1990] 工序1
[1991] 向氨(约2mol/L甲醇溶液、18.0mL、36.0mmol)中添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(1.55g，4.50mmol)，使用微波反应装置于130℃搅拌3小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取5次。合并有机层，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩，由此得到(Z)-十八碳-9-烯基胺的粗产物。
[1992] 向得到的粗产物中添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(1.24g，3.60mmol)及50％氢氧化钠水溶液(1.44g、18.0mmol)，在油浴上于110℃搅拌60分钟。冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释反应液，用水洗涤，然后用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～95/5)进行纯化，由此得到(9Z,12Z)-二(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基胺(0.838g，1.631mmol，收率为
36％)。
[1993] ESI-MS m/z:515(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.8Hz,6H),1.26-1.38(m,32H),1.45-1.54(m,4H),2.05(q,J＝6.6Hz,8H),2.60(t,J＝7.1Hz,4H),2.77(t,J＝5.9Hz,
4H),5.29-5.43(m,8H).
[1994] 工序2
[1995] 向(S)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸(1.94g，7.88mmol)的丙酮(5mL)溶液中添加氢氧化钠(2mol/L水溶液，5mL)、油酰氯(2.09g，6.89mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中加入盐酸水溶液(6mol/L)，用氯仿萃取2次。用无水硫酸镁干燥有机层后，于减压下进行浓缩。将残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝90/10～80/20)进行纯化，由此得到(S)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-油酰胺己酸(2.50g，4.89mmol，收率为71％)。
[1996] ESI-MS m/z:510(M-H)-；1H-NMR(CDCl3)δ:0.87(t,J＝7.0Hz,3H),1.20-1.54(m,33H),1.57-1.68(m,2H),1.71-1.93(m,2H),1.96-2.05(m,4H),2.18-2.29(m,2H),3.07-
3.16(m,2H),4.50-4.60(m,1H),4.63-4.76(m,1H),5.28-5.39(m,2H),6.49-6.57(m,1H).[1997] 工序3
[1998] 向工序2中得到的(S)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-油酰胺己酸(0.291g，0.570mmol)的1,2-二氯乙烷(4mL)溶液中添加O-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.433g，1.14mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.498mL，2.85mmol)、工序
1中得到的(9Z,12Z)-二(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基胺(0.293g，0.570mmol)，于室温搅拌4小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取2次。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩。将残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝80/20)进行纯化，由此得到(S)-6-(二(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氨基)-5-油酰胺基-6-氧代己基氨基甲酸叔丁酯(0.489g，0.486mmol，收率为85％)。
[1999] ESI-MS m/z:1008(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.85-0.92(m,9H),1.20-1.72(m,73H),1.97-2.08(m,12H),2.18(t,J＝7.6Hz,2H),2.74-2.80(m,4H),3.02-3.34(m,5H),3.44-
3.53(m,1H),4.55-4.63(m,1H),4.88(td,J＝8.2,4.6Hz,1H),5.28-5.43(m,10H),6.30(d,J＝8.4Hz,1H).
[2000] 工序4
[2001] 向工序3中得到的(S)-6-(二(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氨基)-5-油酰胺基-6-氧代己基氨基甲酸叔丁酯(0.459g，0.456mmol)的1,2-二氯乙烷(2mL)溶液中添加三氟乙酸(0.500mL，6.49mmol)，于室温搅拌1小时。将反应液减压浓缩后，向残余物中加入氯仿和饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取2次。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩。
将残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10～80/20)进行纯化，由此得到N-((S)-6-氨基-1-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)油酰胺
(0.259g，0.286mmol，收率为63％)。
[2002] ESI-MS m/z:907(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.86-0.91(m,9H),1.20-1.71(m,64H),1.96-2.09(m,12H),2.21(t,J＝7.5Hz,2H),2.73-2.88(m,6H),3.08-3.47(m,4H),4.81-
4.88(m,1H),5.28-5.43(m,10H),6.67(br s,1H).
[2003] 工序5
[2004] 向工序4中得到的N-((S)-6-氨基-1-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)油酰胺(0.137g，0.151mmol)的1,2-二氯乙烷(1mL)溶液中添加38％甲醛水溶液(0.300mL)、三乙酰氧基硼氢化钠(0.096g，0.453mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取2次。将有机层用无水硫酸镁干燥后，于减压下进行浓缩。将残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝50/50)进行纯化，由此得到N-((S)-1-(二(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氨基)-6-(二甲基氨基)-1-氧代己烷-2-基)油酰胺(0.122g，0.130mmol，收率为86％)。
[2005] ESI-MS m/z:936(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.83-0.93(m,9H),1.12-1.77(m,64H),1.95-2.25(m,22H),2.73-2.80(m,4H),3.04-3.15(m,1H),3.20-3.34(m,2H),3.44-3.54(m,
1H),4.85-4.91(m,1H),5.28-5.43(m,10H),6.28(d,J＝8.6Hz,1H).
[2006] 工序6
[2007] 采用与实施例8工序2同样的方法，使用工序5中得到的N-((S)-1-(二(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氨基)-6-(二甲基氨基)-1-氧代己烷-2-基)油酰胺(0.104g，0.111mol)代替双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(二甲基氨基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯，得到标题的化合物(0.0707g，0.0718mol，
65％)。
[2008] ESI-MS m/z:950(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.85-0.91(m,9H),1.21-1.83(m,64H),1.97-2.08(m,12H),2.19(t,J＝7.7Hz,2H),2.74-2.80(m,4H),3.05-3.84(m,15H),4.82-
4.90(m,1H),5.28-5.43(m,10H),6.41-6.46(m,1H).
[2009] 实施例64
[2010] (S)-N,N,N-三甲基-5-(二十九烷-15-基氧基)-1,5-二氧代-1-(十四烷氧基)戊烷-2-铵氯化物(化合物III-3)
[2011] 工序1
[2012] 向甲酸乙酯(Nacalai Tesque公司制，2.4mL，29.7mmol)的四氢呋喃(9mL)溶液中添加十四烷基氯化镁(Sigma-Aldrich公司制，1.0mol/L四氢呋喃溶液，59.4mL，59.4mmol)，于60℃搅拌2小时。冰冷却反应液，加入水和硫酸(Nacalai Tesque公司制，2.0mol/L水溶液)。滤取沉淀物，得到二十九烷-15-醇(6.90g，16.2mmol，收率为55％)。
[2013] 1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,6H),1.22-1.34(m,48H),1.37-1.49(m,2H),3.54-3.64(m,1H).
[2014] 工序2
[2015] 向2-氨基戊二酸1-叔丁酯盐酸盐(渡边化学工业公司制，10.0g，30.3mmol)的乙醇(150mL)溶液中添加低聚甲醛(Sigma-Aldrich公司制，5.50g，183mmol)、氰基硼氢化钠(5.70g，90.7mmol)，于室温彻夜搅拌。向反应液中添加饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取2次。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝35/65)进行纯化，由此得到(S)-2-(二甲基氨基)戊二酸5-苄酯1-叔丁酯(8.20g，25.5mmol，收率为84％)。
[2016] 1H-NMR(CDCl3)δ:1.48(s,9H),1.95-2.00(m,2H),2.32(s,6H),2.43(t,J＝7.8Hz,2H),3.04(t,J＝7.5Hz,1H),5.12(s,6H),7.29-7.40(m,5H).
[2017] 工序3
[2018] 向(S)-2-(二甲基氨基)戊二酸5-苄酯1-叔丁酯(8.20g，25.5mmol)的乙醇(200mL)溶液中添加钯-碳(东京化成工业公司制，钯10％，约55％水湿润品，820mg)，在氢气氛下于室温搅拌7小时。通过硅藻土过滤除去不溶物，对滤液进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝85/15)进行纯化，由此得到(S)-5-叔丁氧基-4-(二甲基氨基)-5-氧代戊酸的粗产物(4.83g，20.9mmol，粗收率为82％)。
[2019] 向得到的(S)-5-叔丁氧基-4-(二甲基氨基)-5-氧代戊酸(4.83g，20.9mmol)的粗产物中添加1.2-二氯乙烷(200mL)、工序1中得到的二十九烷-15-醇(9.75g，23.0mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(8.01g，41.8mmol)、N,N-二甲基氨基吡啶(255mg，2.09mmol)，于50℃搅拌3小时。向反应液中添加水，用二氯甲烷萃取2次。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝85/15)进行纯化，由此得到(S)-2-(二甲基氨基)戊二酸1-叔丁酯5-二十九烷-15-基酯(8.13g，12.7mmol，收率为61％)。
[2020] 1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,6H),1.20-1.38(m,48H),1.46-1.57(m,4H),1.91-2.00(m,2H),2.33-2.41(m,8H),3.05(t,J＝7.6Hz,1H),4.82-4.93(m,1H).
[2021] 工序4
[2022] 向工序3中得到的(S)-2-(二甲基氨基)戊二酸1-叔丁酯5-二十九烷-15-基酯(8.13g，12.7mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液中添加三氟乙酸(20mL)，于40℃彻夜搅拌。于减压下对反应液进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝85/15)进行纯化，由此得到(S)-2-(二甲基氨基)-5-(二十九烷-15-基氧基)-5-氧代戊酸(6.70g，
11.5mmol，收率为90％)。
[2023] 1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,6H),1.18-1.37(m,48H),1.44-1.60(m,4H),2.00-2.13(m,2H),2.52-2.74(m,2H),2.87(s,6H),3.62-3.73(m,1H),4.80-4.89(m,1H).[2024] 工序5
[2025] 向工序4中得到的(S)-2-(二甲基氨基)-5-(二十九烷-15-基氧基)-5-氧代戊酸(100mg，0.172mmol)的1,2-二氯乙烷溶液(2.0mL)中添加(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙叉基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉基-碳鎓六氟磷酸盐(96.0mg，0.224mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.060mL，0.344mmol)、十四烷-1-醇()，于室温彻夜搅拌。向反应液中加入水，用二氯甲烷萃取。用水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5～85/15)进行纯化，由此得到(S)-2-(二甲基氨基)戊二酸5-二十九烷-15-基酯1-十四烷基酯(64.0mg，0.0822mmol，收率为48％)。
[2026] 1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,9H),1.12-1.39(m,70H),1.45-1.69(m,6H),1.93-2.03(m,2H),2.29-2.38(m,8H),3.16(t,J＝7.4Hz,1H),4.03-4.17(m,2H),4.80-4.91(m,1H).
[2027] 工序6
[2028] 采用与实施例8工序2同样的方法，使用工序5中得到的(S)-2-(二甲基氨基)戊二酸5-二十九烷-15-基酯1-十四烷基酯，代替双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(二甲基氨基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯，得到标题化合物。
[2029] 实施例65
[2030] (S)-1-(十二烷基氧基)-N,N,N-三甲基-5-(二十九烷-15-基氧基)-1,5-二氧代戊烷-2-铵氯化物(化合物III-4)
[2031] 采用与实施例64同样的方法，使用十二烷-1-醇代替实施例64工序5的十四烷-1-醇，得到标题的化合物。
[2032] 实施例66
[2033] (S)-1-(十六烷基氧基)-N,N,N-三甲基-5-(二十九烷-15-基氧基)-1,5-二氧代戊烷-2-铵氯化物(化合物III-5)
[2034] 采用与实施例64同样的方法，使用十六烷-1-醇代替实施例64工序5的十四烷-1-醇，得到标题的化合物。
[2035] 实施例67
[2036] (S)-N,N,N-三甲基-5-(二十九烷-15-基氧基)-1-(十八烷基氧基)-1,5-二氧代戊烷-2-铵氯化物(化合物III-6)
[2037] 采用与实施例64同样的方法，使用十八烷-1-醇代替实施例64工序5的十四烷-1-醇，得到标题的化合物。
[2038] 实施例68
[2039] (S,Z)-N,N,N-三乙基-5-(二十九烷-15-基氧基)-1-(十八碳-9-烯基氧基)-1,5-二氧代戊烷-2-铵氯化物(化合物III-7)
[2040] 采用与实施例64同样的方法，使用(Z)-十八碳-9-烯-1-醇代替实施例64工序5的十四烷-1-醇，得到标题的化合物。
[2041] 实施例69
[2042] (6Z,9Z,28Z,31Z)-N,N-二甲基-N-(2-(N-甲基硬脂酰胺基)乙基)三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-铵氯化物(化合物IV-2)
[2043] 工序1
[2044] 向采用以国际公开第2010/042877号中记载的方法为基准的方法得到的(6Z,9Z,28Z,31Z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-酮(0.50g，0.256mmol)的1,2-二氯乙烷(2mL)溶液中添加甲醇(2mL)、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(东京化成工业公司制，0.085mL，
0.767mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(0.325g，1.53mmol)，于50℃搅拌5小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取2次。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10～80/20)进行纯化，得到N1-((6Z,9Z,28Z,31Z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基)-N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.0303g，0.0506mmol，收率为20％)。
[2045] ESI-MS m/z:600(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.8Hz,6H),1.13-1.45(m,40H),2.01-2.09(m,8H),2.14(s,3H),2.28-2.40(m,1H),2.43(s,3H),2.52-2.60(m,4H),
2.75-2.80(m,4H),5.29-5.42(m,8H).
[2046] 工序2
[2047] 向工序1中得到的N1-((6Z,9Z,28Z,31Z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基)-N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.0258g，0.0431mmol)的1,2-二氯乙烷(1mL)溶液中加入硬脂酰氯(0.039 0g，0.129mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.038mL，0.215mmol)，于室温搅拌1小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取2次。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10)进行纯化，得到N-(2-((6Z,9Z,28Z,31Z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基(甲基)氨基)乙基)-N-甲基硬脂酰胺的粗产物。
[2048] 向得到的粗产物中添加碘甲烷(1.00mL，16.0mmol)，于50℃搅拌1小时。于减压下对反应液进行浓缩。将残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，装载于离子交换树脂(Dow Chemical制，Dowex(TM)1x-2 100目，Cl型，约20倍量，预先用水及甲醇洗涤)，用甲醇-氯仿(1:1)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝80/20)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.0149g，0.0163mmol，收率为38％)。
[2049] ESI-MS m/z:881(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.84-0.92(m,9H),1.20-2.09(m,78H),2.27-2.38(m,2H),2.74-2.80(m,4H),3.14-3.45(m,9H),3.77-4.09(m,5H),5.28-5.43(m,
8H).
[2050] 实施例70
[2051] (9Z,12Z)-N,N-二甲基-N-(3-((9Z,12Z)-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)十八碳-9,12-二烯酰胺基)丙基)十八碳-9,12-二烯-1-铵氯化物(化合物IV-3)
[2052] 工序1
[2053] 向甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(0.838g，2.43mmol)中加入3-氨基丙烷-1-醇(1.66g，21.9mmol)，于90℃搅拌3小时。于减压下对反应液进行浓缩，将得到的残余物用氨基硅胶色谱柱法(己烷/乙酸乙酯)进行纯化，得到3-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氨基)丙烷-1-醇(0.722g，2.23mmol，收率为92％)。
[2054] ESI-MS m/z:325(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.9Hz,3H),1.26-1.39(m,17H),1.46(tt,J＝7.1,6.9Hz,3H),1.69(tt,J＝5.7,5.4Hz,2H),2.02-2.08(m,4H),2.60(t,J＝7.1Hz,2H),2.75-2.80(m,2H),2.88(t,J＝5.7Hz,2H),3.81(t,J＝5.4Hz,2H),5.30-
5.42(m,4H).
[2055] 工序2
[2056] 利用与实施例63工序5同样的方法，使用工序1中得到的3-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氨基)丙烷-1-醇(0.233g，0.722mol)，代替N-((S)-6-氨基-1-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)油酰胺，得到3-(甲基((9Z,12Z)-十八碳-
9,12-二烯基)氨基)丙烷-1-醇(0.220g，0.652mol，收率为90％)。
[2057] ESI-MS m/z:338(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,3H),1.24-1.40(m,16H),1.47(tt,J＝7.6,7.0Hz,2H),1.69(tt,J＝5.7,5.2Hz,2H),2.01-2.08(m,4H),2.23(s,3H),2.34(t,J＝7.6Hz,2H),2.59(t,J＝5.7Hz,2H),2.75-2.80(m,2H),
3.80(t,J＝5.2Hz,2H),5.29-5.42(m,4H).
[2058] 工序3
[2059] 向甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(2.85g，8.27mmol)的乙腈(30mL)溶液中加入碳酸铯(6.74g，20.7mmol)、四正丁基碘化铵(3.05g，8.27mmol)及N-(叔丁氧基羰基)-2-硝基苯磺酰胺(2.50g，8.27mmol)，于加热回流下搅拌3小时。将反应液冷却至室温，加入水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝70/30)进行纯化，得到2-硝基苯磺酰基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)氨基甲酸叔丁酯(3.21g，5.83mmol)。
[2060] 向得到的2-硝基苯磺酰基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)氨基甲酸叔丁酯(3.21g，5.83mmol)的二氯甲烷(23mL)溶液中加入三氟乙酸(9.63mL，126mmol)，于室温搅拌
0.5小时。将反应液用二氯甲烷稀释，加入氢氧化钠水溶液(1mol/L)和饱和碳酸氢钠水溶液。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5)进行纯化，得到2-硝基-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)苯磺酰胺(2.48g，5.50mmol，收率为67％)。
[2061] ESI-MS m/z:338(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,3H),1.22-1.39(m,16H),1.52(m,2H),2.01-2.05(m,4H),2.77(t,J＝6.6Hz,2H),3.09(q,J＝6.7Hz,2H),5.23(m,1H),5.31-5.42(m,4H),7.71-7.76(m,2H),7.78-7.87(1H),813-8.15(m,1H).
[2062] 工序4
[2063] 向工序2中得到的3-(甲基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)氨基)丙烷-1-醇(0.220g，0.652mol)的四氢呋喃(4mL)溶液中加入工序3中得到的2-硝基-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)苯磺酰胺(0.441g，0.978mmol)、三苯基膦(0.257g，0.978mmol)、偶氮二羧酸二乙酯(Nacalai Tesque公司制，40％甲苯溶液，0.387mL，0.851mmol)，于50℃搅拌2小时。将反应液冷却至室温，加入饱和食盐水，用己烷萃取2次。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝80/20)进行纯化，得到N-(3-(甲基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)氨基)丙基)-2-硝基-N-((9Z,
12Z)-十八碳-9,12-二烯基)苯磺酰胺的粗产物。
[2064] 向得到的N-(3-(甲基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)氨基)丙基)-2-硝基-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)苯磺酰胺的粗产物的乙腈(5mL)溶液中加入1-十二烷基硫醇(0.409mL，1.63mmol)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯(0.246mL，1.630mmol)，于60℃搅拌2小时。向反应液中加入水，用己烷萃取2次。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝75/25)进行纯化，得到N1-甲基-N1,N3-二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)丙烷-1,3-二胺(0.212g，0.363mmol，收率为56％)。
[2065] ESI-MS m/z:586(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,6H),1.22-1.51(m,36H),1.66(tt,J＝7.2,7.1Hz,2H),2.01-2.08(m,8H),2.20(s,3H),2.29(t,J＝7.6Hz,2H),
2.36(t,J＝7.2Hz,2H),2.58(t,J＝7.4Hz,2H),2.62(t,J＝7.1Hz,2H),2.75-2.80(m,4H),
5.29-5.43(m,8H).
[2066] 工序5
[2067] 向工序4中得到的N1-甲基-N1,N3-二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)丙烷-1,3-二胺(0.108g，0.185mmol)的1,2-二氯乙烷(1mL)溶液中加入(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸(0.104g，0.370mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(0.106g，0.555mmol)、N,N-二甲基氨基吡啶(0.0023g，0.0188mmol)，于室温搅拌1小时。于减压下对反应液进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝85/15)进行纯化，得到(9Z,12Z)-N-(3-(甲基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)氨基)丙基)-N-((9Z,
12Z)-十八碳-9,12-二烯基)十八碳-9,12-二烯酰胺(0.146g，0.172mmol，收率为93％)。
[2068] ESI-MS m/z:848(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.21-1.74(m,54H),2.01-2.08(m,12H),2.18(s,3H),2.24-2.33(m,6H),2.74-2.80(m,6H),3.18-3.35(m,
4H),5.29-5.42(m,12H).
[2069] 工序6
[2070] 采用与实施例8工序2同样的方法，使用工序5中得到的(9Z,12Z)-N-(3-(甲基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)氨基)丙基)-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)十八碳-9,12-二烯酰胺(0.100g，0.118mmol)，代替双十八碳-9,12-二烯酸(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(二甲基氨基)-2-(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯，得到标题的化合物(0.0804g，0.0895mol，收率为76％)。
[2071] ESI-MS m/z:862(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝7.0Hz,9H),1.22-1.41(m,46H),1.49-1.78(m,6H),1.93-2.10(m,14H),2.30(t,J＝7.6Hz,2H),2.74-
2.79(m,6H),3.24-3.35(m,8H),3.36-3.47(m,4H),3.59-3.67(m,2H),5.28-5.42(m,12H).[2072] 实施例71
[2073] (R)-2-((2R,3R,4S)-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)四氢呋喃-2-基)-N,N,N-三甲基-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)乙烷氯化铵(化合物V’-1)[2074] 工序1
[2075] (2R,3R,4S)-2-((R)-1,2-二羟基乙基)四氢呋喃-3,4-二醇(Sigma-Aldrich公司制，0.315g，1.92mmol)的吡啶(和光纯药工业公司制，10mL)溶液中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷(0.704g，2.02mmol)、N,N-二甲基氨基吡啶(0.047g，0.384mmol)，于50℃彻夜搅拌。冷却至室温后，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝90/10)进行纯化，得到(2R,3R,4S)-2-((R)-2-(双(4-甲氧基苯基)苯基)甲氧基)-1-羟基乙基)四氢呋喃-3,4-二醇(0.465g，0.997mmol，收率为52％)。
[2076] 1H-NMR(CDCl3)δ:1.67-1.74(m,1H),2.73-2.77(m,1H),3.31(dd,J＝9.8,6.2Hz,1H),3.41-3.50(m,2H),3.70(dd,J＝9.6,1.3Hz,1H),3.79(s,6H),3.94(dd,J＝6.2,3.5Hz,
1H),4.10-4.24(m,3H),4.26-4.30(m,1H),6.81-6.86(m,4H),7.20-7.36(m,7H),7.41-7.45(m,2H).
[2077] 工序2
[2078] 向工序1中得到的(2R,3R,4S)-2-((R)-2-(双(4-甲氧基苯基)苯基)甲氧基)-1-羟基乙基)四氢呋喃-3,4-二醇(0.0669g，0.143mmol)的四氢呋喃(1mL)溶液中添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(0.247g，0.717mmol)、氢化钠(油性，60％,0.0459g，1.15mmol)，在加热回流下彻夜搅拌。冷却至室温后，向反应液中加入饱和食盐水，用己烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝90/10)进行纯化，得到(2R,3R,4S)-2-((R)-2-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)-1-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)乙基)-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)四氢呋喃的粗产物。
[2079] 向得到的(2R,3R,4S)-2-((R)-2-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)-1-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)乙基)-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)四氢呋喃的粗产物中添加二氯甲烷(1mL)、三氟乙酸(0.0500mL，0.649mmol)，于室温搅拌5分钟。
于减压下对反应液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶色谱柱法(己烷/乙酸乙酯＝70/30)进行纯化，得到(R)-2-((2R,3R,4S)-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)四氢呋喃-
2-基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)乙醇(0.0531g，0.0584mmol，收率为41％)。
[2080] 1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.23-1.43(m,48H),1.50-1.62(m,6H),2.01-2.09(m,12H),2.32(dd,J＝8.2,4.2Hz,1H),2.74-2.80(m,6H),3.37-3.50(m,4H),
3.54-3.69(m,3H),3.69-3.77(m,2H),3.80-3.87(m,2H),3.88-3.95(m,2H),4.06(dd,J＝
9.8,4.7Hz,1H),5.28-5.42(m,12H).
[2081] 工序3
[2082] 向工序2中得到的(R)-2-((2R,3R,4S)-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)四氢呋喃-2-基)-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)乙醇(0.0491g，0.0540mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入甲磺酰氯(纯正化学公司制，0.0500mL，0.642mmol)、三乙胺(0.150mL，1.08mmol)，于室温搅拌1小时。向反应液中加入甲磺酰氯(0.0500mL，0.642mmol)、三乙胺(0.150mL，1.08mmol)，于室温搅拌1小时。向反应液中加入氯仿(1mL)，于室温搅拌1小时。向反应液中加入甲磺酰氯(0.0500mL，0.642mmol)、三乙胺(0.150mL，
1.08mmol)，于40℃搅拌2小时后，在加热回流下搅拌2小时。向反应液中加入饱和食盐水，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。向得到的残余物中添加四氢呋喃(1mL)、二甲胺(2.0mol/L四氢呋喃溶液，2mL，2.00mmol)，使用微波反应装置，于
130℃搅拌5小时。于减压下对反应液进行浓缩。将得到的残余物用氨基硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5)进行纯化，得到(R)-2-((2R,3R,4S)-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)四氢呋喃-2-基)-N,N-二甲基-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)乙胺的粗产物。向得到的(R)-2-((2R,3R,4S)-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)四氢呋喃-2-基)-N,N-二甲基-2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)乙胺的粗产物中添加氯仿(0.5mL)、碘甲烷(1.00mL，16.0mmol)，于室温搅拌2小时。于减压下对反应液进行浓缩。
将残余物溶解于少量的甲醇-氯仿(1:1)，装载于离子交换树脂(Dow Chemical制，Dowex(TM)1x-2 100目，Cl型，约20倍量，预先用水及甲醇洗涤)，用甲醇-氯仿(1:1)洗脱。于减压下对洗脱液进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝90/10)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.0130g，0.0132mmol，收率为24％)。
[2083] ESI-MS m/z:951(M)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝7.0Hz,9H),1.23-1.40(m,48H),1.51-1.61(m,6H),2.01-2.09(m,12H),2.74-2.80(m,6H),3.34-3.68(m,17H),3.70-
3.74(m,1H),3.81-3.84(m,1H),3.93-4.02(m,3H),4.07-4.12(m,1H),5.28-5.43(m,12H).[2084] 参考例1
[2085] 甲基二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺(化合物CL-1)
[2086] 向甲胺(Sigma-Aldrich公司制，约2mol/L四氢呋喃溶液、10.5mL、21.0mmol)中添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(1.03g，3.00mmol)，使用微波反应装置，于150℃加热搅拌90分钟。将反应液用乙酸乙酯稀释，用2mol/L氢氧化钠水溶液、继而用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩，由此得到甲基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺的粗产物。
[2087] 向得到的粗产物中添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(0.93g，2.70mmol)及50％氢氧化钠水溶液(0.960g，12.0mmol)，在油浴上于135℃加热搅拌60分钟。
冷却至室温后，将反应液用乙酸乙酯稀释，依次用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～97/3)进行纯化，由此得到标题的化合物(1.07g，2.03mmol，总收率为67％)。
[2088] ESI-MS m/z:529(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.7Hz,6H),1.29(br s,32H),1.40-1.51(m,4H),1.97-2.06(m,8H),2.20(s,3H),2.30(t,J＝7.6Hz,4H),2.77(t,J＝5.8Hz,4H),5.28-5.43(m,8H).
[2089] 参考例2
[2090] 2,2-二亚油基-4-(2-二甲基氨基乙基)-[1,3]-二氧杂环戊烷(化合物CL-2)
[2091] CL-2采用以国际公开第2010/042877号中记载的方法为基准的方法合成。
[2092] 参考例3
[2093] (3R,4R)-3,4-双((Z)-十六碳-9-烯基氧基)-1-甲基吡咯烷(化合物CL-3)
[2094] 工序1
[2095] 使(3R,4R)-1-苄基吡咯烷-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司制，146mg，0.753mmol)溶解于四氢呋喃(5mL)，在冰冷下加入氢化钠(油性，60％,241mg，6.03mmol)后，在加热回流下搅拌30分钟。向反应混合物中滴入甲磺酸(Z)-十六碳-9-烯基酯(Nu-Chek Prep,Inc.制，600mg，1.88mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液，在加热回流下搅拌4小时。冷却至室温后，用水使反应终止。向得到的混合物中添加饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取2次。合并有机层，用无水硫酸镁干燥后，于减压下进行浓缩。将残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～98/2)进行纯化，由此得到(3R,4R)-1-苄基-3,4-双((Z)-十六碳-9-烯基氧基)吡咯烷(231mg，
0.362mmol，收率为48％)。
[2096] ESI-MS m/z:639(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,6H),1.28-1.37(m,36H),1.50-1.60(m,4H),2.01(q,J＝5.9Hz,8H),2.50(dd,J＝9.8,4.6Hz,2H),2.85(dd,J＝
9.8,5.9Hz,2H),3.34-3.47(m,4H),3.59(q,J＝12.6Hz,2H),3.83(t,J＝4.6Hz,2H),5.29-
5.40(m,4H),7.20-7.34(m,5H).
[2097] 工序2
[2098] 使工序1中得到的(3R,4R)-1-苄基-3,4-双((Z)-十六碳-9-烯基氧基)吡咯烷(208mg，0.326mmol)溶解于1,2-二氯乙烷(4mL)，加入氯甲酸1-氯乙酯(东京化成工业公司制，0.107mL，0.978mmol)，于130℃搅拌1小时。向反应溶液中添加甲醇(4mL)，于130℃进一步搅拌1小时。冷却至室温后，于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～92/8)进行纯化。将得到的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，继而用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩，由此得到(3R,4R)-3,4-双((Z)-十六碳-9-烯基氧基)吡咯烷(160mg，0.292mmol，收率为89％)。
[2099] ESI-MS m/z:549(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.6Hz,6H),1.27-1.36(m,34H),1.50-1.59(m,4H),1.82(br s,3H),2.01(q,J＝6.2Hz,8H),2.84(dd,J＝12.5,3.0Hz,
2H),3.10(dd,J＝12.5,5.0Hz,2H),3.43(t,J＝6.8Hz,4H),3.77(dd,J＝5.0,3.0Hz,2H),
5.29-5.40(m,4H).
[2100] 工序3
[2101] 使工序2中得到的(3R,4R)-3,4-双((Z)-十六碳-9-烯基氧基)吡咯烷(107mg，0.195mmol)溶解于1,2-二氯乙烷(1.5mL)、及甲醇(1.5mL)，加入甲醛(0.145mL，1.95mmol)、及三乙酰氧基硼氢化钠(207mg，0.976mmol)，于室温搅拌1小时。向反应溶液中添加饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取水层。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～96/4)进行纯化，由此得到标题的化合物(107mg，0.190mmol，收率为97％)。
[2102] ESI-MS m/z:563(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,6H),1.27-1.38(m,34H),1.52-1.62(m,4H),1.67(br s,2H),2.01(q,J＝6.1Hz,8H),2.32(s,3H),2.47(dd,J＝
9.8,4.4Hz,2H),2.83(dd,J＝9.8,5.8Hz,2H),3.36-3.49(m,4H),3.81(t,J＝4.4Hz,2H),
5.29-5.41(m,4H).
[2103] 参考例4
[2104] 二((Z)-十八碳-9-烯基)氨基甲酸3-(二甲基氨基)丙酯(化合物CL-4)
[2105] 工序1
[2106] 向氨(东京化成工业公司制，约2mol/L甲醇溶液，12.0mL，24.0mmol)中添加甲磺酸(Z)-十八碳-9-烯基酯(1.04g，3.00mmol)，使用微波反应装置于130℃搅拌3小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取5次。合并有机层，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩，由此得到(Z)-十八碳-9-烯基胺的粗产物。
[2107] 向得到的粗产物中添加甲磺酸(Z)-十八碳-9-烯基酯(0.832g，2.40mmol)及50％氢氧化钠水溶液(0.960g、12.0mmol)，在油浴上于110℃搅拌60分钟。冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释反应液，用水洗涤，然后用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～95/5)进行纯化，由此得到二((Z)-十八碳-9-烯基)胺(0.562g，1.085mmol，收率为36％)。
[2108] ESI-MS m/z:519(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.7Hz,6H),1.29(br s,45H),1.41-1.52(m,4H),1.97-2.05(m,8H),2.58(t,J＝7.2Hz,4H),5.28-5.40(m,4H).[2109] 工序2
[2110] 使工序1中得到的二((Z)-十八碳-9-烯基)胺(0.156g，0.301mmol)溶解于氯仿(3mL)，添加采用以“Journal of the American Chemical Society(J.Am.Chem.Soc.)”，1981年，第103卷，p.4194-4199中记载的方法为基准的方法合成的4-硝基苯基碳酸3-(二甲基氨基)丙酯盐酸盐(0.138g、0.452mmol)及三乙胺(0.168mL，1.21mmol)，使用微波反应装置，于110℃搅拌60分钟。向反应液中添加4-硝基苯基碳酸3-(二甲基氨基)丙酯盐酸盐(22.9mg，0.0753mmol)，使用微波反应装置，于110℃搅拌20分钟。向反应液中添加4-硝基苯基碳酸3-(二甲基氨基)丙酯盐酸盐(22.9mg，0.0753mmol)，使用微波反应装置，于110℃搅拌20分钟。向反应液中添加4-硝基苯基碳酸3-(二甲基氨基)丙酯盐酸盐(22.9mg、
0.0753mmol)，使用微波反应装置，于110℃搅拌20分钟。将反应液用氯仿稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，继而用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，进行减压浓缩。将得到的残余物溶解于少量的正己烷/乙酸乙酯(1/4)，使其吸附于氨基修饰的硅胶垫，用正己烷/乙酸乙酯(1/4)洗脱，进行减压浓缩。将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝
100/0～95/5)进行纯化，由此得到标题的化合物(0.173g，0.267mmol，收率为89％)。
[2111] ESI-MS m/z:648(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.6Hz,6H),1.28(br s,44H),1.45-1.55(m,4H),1.75-1.85(m,2H),1.97-2.04(m,8H),2.23(s,6H),2.34(t,J＝
7.6Hz,2H),3.13-3.24(m,4H),4.10(t,J＝6.4Hz,2H),5.28-5.40(m,4H).
[2112] 参考例5
[2113] N-甲基-N,N-双(2-((Z)-十六碳-9-烯基氧基)乙基)胺(化合物CL-5)
[2114] 一边搅拌氢化钠(油性，60％,222mg，5.55mmol)的甲苯(2mL)悬浮液，一边向其中添加N-甲基二乙醇胺(东京化成工业公司制，82.6mg，0.693mmol)的甲苯(2mL)溶液，然后滴入甲磺酸(Z)-十六碳-9-烯基酯(530mg，1.66mmol)的甲苯(2mL)溶液。将得到的混合物在加热回流下搅拌2小时。冷却至室温后，用水使反应终止。向得到的混合物中添加饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸镁干燥有机层后，于减压下进行浓缩。将残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～98/2)进行纯化，由此得到标题的化合物(199mg，0.353mmol，收率为51％)。
[2115] ESI-MS m/z:565(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.8Hz,6H),1.29(br s,36H),1.51-1.56(m,4H),1.97-2.04(m,8H),2.33(s,3H),2.64(t,J＝6.1Hz,4H),3.41(t,J＝6.8Hz,4H),3.52(t,J＝6.1Hz,4H),5.28-5.40(m,4H).
[2116] 参考例6
[2117] (3R,4R)-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯烷-1-甲酸3-(二甲基氨基)丙酯(化合物CL-6)
[2118] 工序1
[2119] 一边搅拌氢化钠(油性，60％,5.80g，145mmol)的甲苯(100mL)悬浮液，一边向其中添加(3R,4R)-1-苄基吡咯烷-3,4-二醇(Diverchim S.A.公司制，3.50g，18.1mmol)的甲苯(70mL)溶液，然后滴入甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(15.6g，45.3mmol)的甲苯(30mL)溶液。将得到的混合物在加热回流下彻夜搅拌。冷却至室温后，使用饱和氯化铵水溶液终止反应。向得到的混合物中添加饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取2次。合并有机层，用无水硫酸镁干燥后，于减压下进行浓缩。将残余物用硅胶柱色谱法(甲醇/氯仿＝0/100～2/98)进行纯化，由此得到(3R,4R)-1-苄基-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯烷(6.96g，10.1mmol，收率为56％)。
[2120] ESI-MS m/z:691(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.9Hz,6H),1.26-1.38(m,30H),1.52-1.62(m,6H),2.05(q,J＝6.3Hz,8H),2.50(dd,J＝9.9,4.3Hz,2H),2.77(t,J＝
5.8Hz,4H),2.85(dd,J＝9.6,5.9Hz,2H),3.37-3.45(m,4H),3.52-3.66(m,2H),3.83(t,J＝
4.6Hz,2H),5.28-5.43(m,8H),7.23-7.33(m,5H).
[2121] 工序2
[2122] 使工序1中得到的(3R,4R)-1-苄基-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯烷(6.96g，10.1mmol))溶解于1,2-二氯乙烷(100mL)，加入氯甲酸1-氯乙酯(3.30mL，30.3mmol)，于130℃搅拌1小时。向反应溶液中添加甲醇(100mL)，于130℃进一步搅拌1小时。冷却至室温后，于减压下进行浓缩，将得到的残余物用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/
0～92/8)进行纯化。将得到的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、继而用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，于减压下进行浓缩，由此得到(3R,4R)-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯烷(5.56g，9.27mmol，收率为92％)。
[2123] ESI-MS m/z:601(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.9Hz,6H),1.29-1.41(m,30H),1.49-1.60(m,4H),1.67(br s,3H),2.05(q,J＝6.5Hz,8H),2.75-2.85(m,6H),3.09(dd,J＝12.4,5.1Hz,2H),3.37-3.49(m,4H),3.76(dd,J＝5.0,3.3Hz,2H),5.28-5.43(m,
8H).
[2124] 工序3
[2125] 采用与参考例4的工序2相同的方法，使用工序2中得到的(3R,4R)-3,4-双((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基)吡咯烷(0.111g，0.185mmol)代替二((Z)-十八碳-9-烯基)胺，由此得到标题的化合物(0.101g，0.139mmol，75％)。
[2126] ESI-MS m/z:730(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.9Hz,6H),1.24-1.40(m,32H),1.50-1.57(m,4H),1.77-1.83(m,2H),2.02-2.08(m,8H),2.23(s,6H),2.34(t,J＝
7.4Hz,2H),2.77(t,J＝6.8Hz,4H),3.38-3.56(m,8H),3.83-3.86(m,2H),4.11(t,J＝
6.5Hz,2H),5.30-5.42(m,8H).
[2127] 实施例72
[2128] 使用实施例1中得到的I-1、参考例1中得到的CL-1及1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DSPE)，如下所述地制造含有核酸的脂质纳米粒子。使用的核酸包含有义链(5’-CCGUCGUAUUCGUGAGCAAGA-3’)、和反义链(5’-UUGCUCACGAAUACGACGGUG-3’)的碱基序列，是抑制荧光素酶(以下表示为Luc)基因的表达的siRNA，自GeneDesign公司获得(以下为“Luc siRNA”)。
[2129] 将实施例1中得到的I-1以成为10mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液(stock solution)。将参考例1中得到的CL-1以成为50mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。将1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DSPE)(日油公司制)以成为20mg/mL的方式溶解于100％异丙醇溶解于中，制成脂质原料溶液。各脂质原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2130] 将Luc siRNA以成为1mg/mL的方式溶解于注射用水，制备Luc siRNA溶液。
[2131] 在20mL的80％异丙醇中添加上述已制成脂质原料溶液的I-1，使其为0.469μmol。接下来，添加200μL上述Luc siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加上述已制成脂质原料溶液的CL-1/PEG-DSPE，使其为1.41μmol/0.209μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂1。
[2132] 实施例73
[2133] 以各种量比使用脂质A及脂质B而得到的含有核酸的脂质纳米粒子的制造例如下所示。
[2134] 使用实施例1中得到的I-1及参考例1中得到的CL-1，如下所述地制造含有核酸的脂质纳米粒子。
[2135] 向20mL的80％异丙醇中添加上述已制成脂质原料溶液的I-1，使其为0.939μmol。接下来，添加200μL上述Luc siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加上述已制成脂质原料溶液的CL-1/PEG-DSPE，使其为0.939μmol/0.209μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂2。
[2136] 实施例74
[2137] 使用实施例1中得到的I-1及参考例1中得到的CL-1，如下所述地制造含有核酸的脂质纳米粒子。
[2138] 向20mL的80％异丙醇中添加上述已制成脂质原料溶液的I-1，使其为1.41μmol。接下来，添加200μL上述Luc siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加上述已制成脂质原料溶液的CL-1/PEG-DSPE，使其为0.469μmol/0.209μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂3。
[2139] 实施例75
[2140] 使用实施例1中得到的I-1，如下所述地制造含有核酸的脂质纳米粒子。
[2141] 向20mL的80％异丙醇中添加上述已制成脂质原料溶液的I-1，使其为1.88μmol。接下来，添加200μL上述Luc siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加上述已制成脂质原料溶液的PEG-DSPE，使其为0.209μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂4。
[2142] 实施例76
[2143] 使用实施例1中得到的I-1及参考例1中得到的CL-1，如下所述地制造含有核酸的脂质纳米粒子。
[2144] 将1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DMPE)(日油公司制)以成为20mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。
[2145] 除了将制剂1的PEG-DSPE变更为PEG-DMPE以外，与实施例72同样地操作，得到制剂5。
[2146] 实施例77
[2147] 除了将制剂2的PEG-DSPE变更为PEG-DMPE以外，与实施例73同样地操作，得到制剂6。
[2148] 实施例78
[2149] 除了将制剂3的PEG-DSPE变更为PEG-DMPE以外，与实施例74同样地操作，得到制剂7。
[2150] 实施例79
[2151] 除了将制剂4的PEG-DSPE变更为PEG-DMPE以外，与实施例75同样地操作，得到制剂8。
[2152] 实施例80
[2153] 使用实施例1中得到的I-1及参考例2中得到的CL-2，如下所述地制造含有核酸的脂质纳米粒子。
[2154] 将参考例2中得到的CL-2以成为10mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。脂质原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2155] 除了将制剂6的CL-1变更为CL-2以外，与实施例77同样地操作，得到制剂9。
[2156] 比较例1
[2157] 向20mL的80％异丙醇中添加0.2mL上述Luc siRNA溶液。继而添加上述已制成脂质原料溶液的CL-1/PEG-DSPE，使这些成分为1.88μmol/0.209μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以约62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂10。
[2158] 比较例2
[2159] 除了将制剂10的PEG-DSPE变更为PEG-DMPE以外，与比较例1同样地操作，得到制剂11。
[2160] 比较例3
[2161] 除了将制剂11的CL-1变更为参考例2中得到的CL-2以外，与比较例1同样地操作，得到制剂12。
[2162] 试验例1
[2163] 制剂中的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径测定
[2164] 使用粒径测定装置(Zetasizer Nano ZS，Malvern公司制)，对制剂中的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径进行测定，将结果示于表45。需要说明的是，表中的PDI表示多分散指数(Polydispersity Index)。
[2165] [表45]
[2166] 表45
[2167]制剂编号 大小(nm) PDI
1 41.1 0.077
2 40.56 0.112
3 51.62 0.064
4 45.37 0.122
5 40.05 0.131
6 40.98 0.145
7 50.07 0.191
8 49.99 0.122
9 47.32 0.172
10 25.99 0.166
11 31.16 0.275
12 47.41 0.125
[2168] 结果，对于实施例72～80及比较例1～3中记载的制剂1～12(通过使脂质B(CL-1或者CL-2)、PEG脂质(PEG-DSPE或者PEG-DMPE)和核酸分散于异丙醇中、并以62mL/秒以上的流速向所得分散液中加入水而使异丙醇浓度相对于得到的溶液而言降低为20％(v/v％)以下从而形成的制剂)而言，其无论含有或不含有脂质A(I-1)，平均粒径均小，为52nm以下。
[2169] 试验例2
[2170] 含有核酸的脂质纳米粒子内siRNA的血清稳定性评价
[2171] 通过以下的方法对实施例72～75、80及比较例1、3中得到的各制剂(制剂1-4、9、10、12)中含有的siRNA的稳定性进行了确认。向以核酸的最终浓度为0.05mg/mL的方式用生理盐水稀释而得到的制剂中添加胎牛血清(FBS，Gibco公司，5891746D)，使胎牛血清为10％(v/v％)，并于37℃孵育120分钟。将该溶液设置于冰上，添加150μL的Trizol试剂(Trizol LS Reagent，Invitrogen公司)及40μL的氯仿后，通过震荡(votrex)进行搅拌，然后静置15分钟，在离心后回收含有核酸的上清液，制成试样。
[2172] 向该试样中添加1当量的上样缓冲液(Novex TBU-Urea Sample Buffer，Invitrogen公司)，供于聚丙烯酰胺凝胶电泳(Novex15％TBE-Urea gel，Invitrogen公司)，在电泳缓冲液(Novex TBE Running Buffer)中泳动，使用核酸染色试剂(SYBR GreenII RNA Gel Stain，Takara Bio公司)，进行染色。
[2173] 结果，不含有I-1的制剂10及12中的siRNA被分解，另一方面，含有I-1的制剂(制剂1～4及9)中的siRNA未被分解(图1)。此外，还确认到I-1的含有率越多，则越能抑制由血清导致的分解。该结果表明，I-1有助于形成能提高siRNA对于血清的稳定性的脂质纳米粒子。
[2174] 试验例3
[2175] 含有核酸的脂质纳米粒子的体外(in vitro)活性评价试验
[2176] 利用以下的方法，将比较例2～3及实施例76～80中得到的各制剂(制剂5～9、11～12)分别导入已强制表达荧光素酶的人宫颈癌源细胞株HeLa细胞(以下，记载为Luc2CP-HeLa)。
[2177] 将各制剂用Opti-MEM(Gibco公司)稀释，使核酸的最终浓度为0.3～100nM，并将稀释后的制剂分别以20μL分注至96孔的培养板，然后将悬浮于含有1.25％胎牛血清(FBS，SAFC Biosciences公司)的最小必需培养基(MEM)中的Luc2CP-HeLa细胞以细胞数量成为7500/80μL/孔的方式接种，在37℃、5％CO2条件下进行培养，由此将各制剂导入Luc2CP-HeLa细胞内。另外，作为阴性对照组，接种了未经过任何处理的细胞。
[2178] 将导入有各制剂的细胞在37℃的5％CO2孵育器内培养24小时，使用细胞增殖试验分析(CellTiter-Fluor Cell Viability Assay，Promega公司，G6080)及荧光素酶定量系统(Steady-Glo Luciferase Assay System，Promega公司，E2520)，按照制品附带的说明书中记载的方法进行处理后，用平板读取器(plate reader)测定各发光强度。根据细胞增殖试验分析中得到的荧光量对得到的荧光素发光量进行修正。算出将阴性对照组的修正后发光量设为1时的相对比例，作为各制剂处理组的发光量。
[2179] 由图2可见，将含有I-1的制剂5～9导入人宫颈癌源细胞株Luc2CP-HeLa细胞内后的Luc的表达率与不含有I-1的制剂11及12相比，抑制率更高。
[2180] 由此可见，含有本发明的脂质A的脂质纳米粒子能将核酸导入细胞内等，是容易在体外向细胞内送达药物的制剂。
[2181] 实施例81
[2182] 如下所述地制备含有实施例1中得到的I-1、PEG-DMPE、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2183] DSPC及胆固醇从日油公司获得。
[2184] 核酸使用了实施例72中记载的1mg/mL Luc siRNA溶液。
[2185] 将实施例1中得到的I-1以成为10mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。
[2186] 将参考例1中得到的CL-1以成为50mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。将PEG-DMPE、DSPC及胆固醇分别以成为20mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。各脂质原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2187] 向20mL的80％异丙醇中添加I-1，使其为0.156μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.145μmol/0.566μmol/1.17μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂13。
[2188] 实施例82
[2189] 如下所述地制备含有实施例1中得到的I-1、PEG-DMPE、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2190] 向20mL的80％异丙醇中添加I-1，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.145μmol/0.515μmol/1.07μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂14。
[2191] 实施例83
[2192] 如下所述地制备含有实施例1中得到的I-1、PEG-DMPE、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2193] 向20mL的80％异丙醇中添加I-1，使其为0.469μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.145μmol/0.464μmol/0.963μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂15。
[2194] 实施例84
[2195] 如下所述地制备含有实施例1中得到的I-1、PEG-DMPE、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2196] 向20mL的80％异丙醇中添加I-1，使其为0.626μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.145μmol/0.413μmol/0.858μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂16。
[2197] 实施例85
[2198] 除了将制剂13的CL-1变更为CL-2以外，与实施例81同样地操作，得到制剂17。
[2199] 实施例86
[2200] 除了将制剂14的CL-1变更为CL-2以外，与实施例82同样地操作，得到制剂18。
[2201] 实施例87
[2202] 除了将制剂15的CL-1变更为CL-2以外，与实施例83同样地操作，得到制剂19。
[2203] 实施例88
[2204] 除了将制剂16的CL-1变更为CL-2以外，与实施例84同样地操作，得到制剂20。
[2205] 比较例4
[2206] 如下所述地制备含有PEG-DMPE、DSPC、胆固醇及CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2207] 向20mL的80％异丙醇中添加0.2mL的Luc siRNA溶液。接下来，以使CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇成为1.88μmol/0.145μmol/0.617μmol/1.28μmol的方式添加各脂质。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂21。
[2208] 比较例5
[2209] 除了将制剂21的CL-1变更为CL-2以外，与比较例4同样地操作，得到制剂22。
[2210] 试验例4
[2211] 含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径测定
[2212] 使用粒径测定装置(Zetasizer Nano ZS，Malvern公司制)，对制剂中的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径进行测定(表46)。需要说明的是，表中的PDI表示多分散指数(Polydispersity Index)。
[2213] [表46]
[2214] 表46
[2215]制剂编号 大小(nm) PDI
13 38.29 0.146
14 45.23 0.163
15 45.74 0.116
16 45.46 0.161
17 50.18 0.135
18 55.92 0.164
19 55.81 0.199
20 53.36 0.192
21 33.44 0.326
22 47.73 0.165
[2216] 结果，对于实施例81～88及比较例4～5中记载的制剂13～22(13-22)(通过使脂质B(CL-1或者CL-2)、DSPC、胆固醇及PEG-DMPE与核酸形成的复合体分散于异丙醇中、并向所得分散液中快速地加入水从而形成的制剂)而言，其无论含有或不含有脂质A(I-1)，平均粒径均小，为56nm以下。
[2217] 试验例5
[2218] 含有核酸的脂质纳米粒子的体外活性评价试验
[2219] 利用以下的方法，将实施例81～88及比较例4～5中得到的制剂13～22分别导入已强制表达荧光素酶的人宫颈癌源细胞株HeLa细胞(以下，记载为Luc2CP-HeLa)。
[2220] 将各制剂用Opti-MEM(Gibco公司)稀释，使核酸的最终浓度为0.3～100nM，并将稀释后的制剂分别以20μL分注至96孔的培养板，然后将悬浮于含有1.25％胎牛血清(FBS，SAFC Biosciences公司)的最小必需培养基(MEM)中的Luc2CP-HeLa细胞以细胞数量成为7500/80μL/孔的方式接种，在37℃、5％CO2的条件下进行培养，由此将各制剂导入Luc2CP-HeLa细胞内。另外，作为阴性对照组，接种了未经过任何处理的细胞。
[2221] 将导入有各制剂的细胞在37℃的5％CO2孵育器内培养24小时，使用荧光素酶定量系统(Steady-Glo Luciferase Assay System，Promega公司，E2520)，按照制品附带的说明书中记载的方法进行处理后，用平板读取器测定发光强度。算出将阴性对照组的发光量设为1时的相对比例，作为各制剂处理组的发光量。
[2222] 由图3可见，将含有CL-1作为脂质B的制剂之中的含有I-1的制剂(制剂13～16)导入人宫颈癌源细胞株Luc2CP-HeLa细胞内后的Luc的表达率与不含有I-1的制剂(制剂21)相比，抑制率更高。另外，含有CL-2作为脂质B的制剂中，含有I-1的制剂(制剂17～20)与不含有I-1的制剂(制剂22)的比较中也为同样的结果。
[2223] 由此可见，含有本发明的脂质A的脂质纳米粒子能将核酸导入细胞内等，是容易在体外向细胞内送达药物的制剂。
[2224] 实施例89
[2225] 如下所述地制备含有I-1、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇及各种脂质B而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2226] 核酸使用了实施例72记载的1mg/mL Luc siRNA溶液。
[2227] 将脂质B、PEG-DMPE、DSPC及胆固醇各自以成为20mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。将脂质A以成为5～10mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。各原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2228] 将实施例1中得到的I-1以成为10mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2229] 向20mL的80％异丙醇中添加I-1，使其为0.626μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-5/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.145μmol/0.413μmol/0.858μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂23。
[2230] 实施例90
[2231] 除了将制剂23的CL-5变更为参考例3中得到的CL-3以外，与实施例89同样地操作，得到制剂24。
[2232] 实施例91
[2233] 除了将制剂23的CL-5变更为参考例4中得到的CL-4以外，与实施例89同样地操作，得到制剂25。
[2234] 比较例6
[2235] 向20mL的80％异丙醇中添加0.2mL的Luc siRNA溶液。接下来，添加各脂质，使CL-5/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇为1.88μmol/0.145μmol/0.617μmol/1.28μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂26。
[2236] 比较例7
[2237] 除了将制剂26的CL-5变更为参考例3中得到的CL-3以外，与比较例6同样地操作，得到制剂27。
[2238] 比较例8
[2239] 除了将制剂26的CL-5变更为参考例6中得到的CL-6以外，与比较例6同样地操作，得到制剂28。
[2240] 比较例9
[2241] 除了将制剂26的CL-5变更为参考例4中得到的CL-4以外，与比较例6同样地操作，得到制剂29。
[2242] 试验例6
[2243] 含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径测定
[2244] 使用粒径测定装置(Zetasizer Nano ZS，Malvern公司制)，对制剂中的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径进行测定(表47)。需要说明的是，表中的PDI表示多分散指数(Polydispersity Index)。
[2245] [表47]
[2246] 表47
[2247]制剂编号 脂质A 脂质B 大小(nm) PDI
23 I-1 CL-5 47.96 0.081
24 I-1 CL-3 45.23 0.102
25 I-1 CL-4 45.28 0.162
26 - CL-5 42.42 0.186
27 - CL-3 36.77 0.168
28 - CL-6 37.83 0.190
29 - CL-4 35.42 0.255
[2248] 结果，对于实施例89～91及比较例6～9中记载的制剂23～29(通过使脂质B(CL-3～6)、DSPC、胆固醇及PEG-DMPE与核酸形成的复合体分散于异丙醇中、并向所得分散液中快速地加入水从而形成的制剂)而言，其无论含有或不含有脂质A(I-1)，平均粒径均小，为50nm以下。
[2249] 试验例7
[2250] 含有核酸的脂质纳米粒子的体外活性评价试验
[2251] 利用以下的方法，将实施例89～91及比较例6～9中得到的各制剂(制剂23～29)分别导入已强制表达荧光素酶的人宫颈癌源细胞株HeLa细胞(Luc2CP-HeLa)。
[2252] 将各制剂用Opti-MEM(Gibco公司)稀释，使核酸的最终浓度为10nM，并将稀释后的制剂分别以20μL分注至96孔的培养板，然后将悬浮于含有1.25％胎牛血清(FBS，SAFC Biosciences公司)的最小必需培养基(MEM)中的Luc2CP-HeLa细胞以细胞数量成为7500/80μL/孔的方式接种，在37℃、5％CO2的条件下进行培养，由此将各制剂导入Luc2CP-HeLa细胞内。另外，作为阴性对照组，接种了未经过任何处理的细胞。
[2253] 将导入有各制剂的细胞在37℃的5％CO2孵育器内培养24小时，使用荧光素酶定量系统(Steady-Glo Luciferase Assay System，Promega公司，E2520)，按照制品附带的说明书中记载的方法进行处理后，用平板读取器测定发光强度。算出将阴性对照组的发光量设为1时的相对比例，作为各制剂处理组的发光量。
[2254] 由图4可见，将含有I-1的制剂(制剂23～25)导入Luc2CP-HeLa内后的Luc的表达率与不含有I-1的制剂(制剂26～29)相比，抑制率更高。
[2255] 由此可见，含有本发明的脂质A的脂质纳米粒子能将核酸导入细胞内等，根据体外试验的结果可推测，上述脂质纳米粒子是即使在体内也能容易地向细胞内送达药物的制剂。
[2256] 如下所述地制备含有各种脂质A、各种脂质B、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2257] 实施例92～216的核酸使用了实施例72记载的1mg/mL Luc siRNA溶液，将脂质A以成为5～10mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中而制成脂质原料溶液，将PEG-DMPE、DSPC及胆固醇分别以成为20mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中而制成脂质原料溶液，将脂质B以成为10～20mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中而制成脂质原料溶液。各原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2258] 实施例92
[2259] 除了将制剂16的I-1变更为实施例4中得到的I-4以外，与实施例84同样地操作，得到制剂30。
[2260] 实施例93
[2261] 除了将制剂24的I-1变更为实施例4中得到的I-4以外，与实施例90同样地操作，得到制剂31。
[2262] 实施例94
[2263] 除了将制剂25的I-1变更为实施例4中得到的I-4以外，与实施例91同样地操作，得到制剂32。
[2264] 实施例95
[2265] 除了将制剂16的I-1变更为实施例5中得到的I-5以外，与实施例84同样地操作，得到制剂33。
[2266] 实施例96
[2267] 除了将制剂24的I-1变更为实施例5中得到的I-5以外，与实施例90同样地操作，得到制剂34。
[2268] 实施例97
[2269] 除了将制剂23的CL-5变更为参考例6中得到的CL-6、并将I-1变更为实施例5中得到的I-5以外，与实施例89同样地操作，得到制剂35。
[2270] 实施例98
[2271] 除了将制剂25的I-1变更为实施例5中得到的I-5以外，与实施例91同样地操作，得到制剂36。
[2272] 实施例99
[2273] 除了将制剂16的I-1变更为实施例13中得到的II-6以外，与实施例84同样地操作，得到制剂37。
[2274] 实施例100
[2275] 除了将制剂23的I-1变更为实施例13中得到的II-6以外，与实施例89同样地操作，得到制剂38。
[2276] 实施例101
[2277] 除了将制剂24的I-1变更为实施例13中得到的II-6以外，与实施例90同样地操作，得到制剂39。
[2278] 实施例102
[2279] 除了将制剂35的I-5变更为实施例13中得到的II-6以外，与实施例97同样地操作，得到制剂40。
[2280] 实施例103
[2281] 除了将制剂25的I-1变更为实施例13中得到的II-6以外，与实施例91同样地操作，得到制剂41。
[2282] 实施例104
[2283] 除了将制剂16的I-1变更为实施例9中得到的II-2以外，与实施例84同样地操作，得到制剂42。
[2284] 实施例105
[2285] 除了将制剂23的I-1变更为实施例9中得到的II-2以外，与实施例89同样地操作，得到制剂43。
[2286] 实施例106
[2287] 除了将制剂24的I-1变更为实施例9中得到的II-2以外，与实施例90同样地操作，得到制剂44。
[2288] 实施例107
[2289] 除了将制剂25的I-1变更为实施例9中得到的II-2以外，与实施例91同样地操作，得到制剂45。
[2290] 实施例108
[2291] 除了将制剂24的I-1变更为实施例3中得到的I-3以外，与实施例90同样地操作，得到制剂46。
[2292] 实施例109
[2293] 除了将制剂24的I-1变更为实施例14中得到的II-7以外，与实施例90同样地操作，得到制剂47。
[2294] 实施例110
[2295] 除了将制剂14的I-1变更为实施例8中得到的II-1以外，与实施例82同样地操作，得到制剂48。
[2296] 实施例111
[2297] 除了将制剂48的CL-1变更为参考例5中得到的CL-5以外，与实施例110同样地操作，得到制剂49。
[2298] 实施例112
[2299] 除了将制剂48的CL-1变更为参考例3中得到的CL-3以外，与实施例110同样地操作，得到制剂50。
[2300] 实施例113
[2301] 除了将制剂48的CL-1变更为参考例4中得到的CL-4以外，与实施例110同样地操作，得到制剂51。
[2302] 实施例114
[2303] 除了将制剂14的I-1变更为实施例10中得到的II-3以外，与实施例82同样地操作，得到制剂52。
[2304] 实施例115
[2305] 除了将制剂49的II-1变更为实施例10中得到的II-3以外，与实施例111同样地操作，得到制剂53。
[2306] 实施例116
[2307] 除了将制剂51的II-1变更为实施例10中得到的II-3以外，与实施例113同样地操作，得到制剂54。
[2308] 实施例117
[2309] 除了将制剂14的I-1变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例82同样地操作，得到制剂55。
[2310] 实施例118
[2311] 除了将制剂49的II-1变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例111同样地操作，得到制剂56。
[2312] 实施例119
[2313] 除了将制剂51的II-1变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例113同样地操作，得到制剂57。
[2314] 实施例120
[2315] 除了将制剂14的CL-1变更为参考例6中得到的CL-6、并将I-1变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例82同样地操作，得到制剂58。
[2316] 实施例121
[2317] 除了将制剂14的I-1变更为实施例28中得到的II-21以外，与实施例82同样地操作，得到制剂59。
[2318] 实施例122
[2319] 除了将制剂49的II-1变更为实施例28中得到的II-21以外，与实施例111同样地操作，得到制剂60。
[2320] 实施例123
[2321] 除了将制剂51的II-1变更为实施例28中得到的II-21以外，与实施例113同样地操作，得到制剂61。
[2322] 实施例124
[2323] 除了将制剂13的I-1变更为实施例24中得到的II-17以外，与实施例81同样地操作，得到制剂62。
[2324] 实施例125
[2325] 除了将制剂62的CL-1变更为参考例4中得到的CL-4以外，与实施例124同样地操作，得到制剂63。
[2326] 实施例126
[2327] 除了将制剂14的I-1变更为实施例70中得到的IV-3以外，与实施例82同样地操作，得到制剂64。
[2328] 实施例127
[2329] 除了将制剂14的I-1变更为实施例63中得到的III-2以外，与实施例82同样地操作，得到制剂65。
[2330] 实施例128
[2331] 除了将制剂14的I-1变更为实施例30中得到的II-23以外，与实施例82同样地操作，得到制剂66。
[2332] 实施例129
[2333] 除了将制剂49的II-1变更为实施例30中得到的II-23以外，与实施例111同样地操作，得到制剂67。
[2334] 实施例130
[2335] 除了将制剂14的I-1变更为实施例37中得到的II-28以外，与实施例82同样地操作，得到制剂68。
[2336] 实施例131
[2337] 除了将制剂49的II-1变更为实施例37中得到的II-28以外，与实施例111同样地操作，得到制剂69。
[2338] 实施例132
[2339] 除了将制剂14的I-1变更为实施例29中得到的II-22以外，与实施例82同样地操作，得到制剂70。
[2340] 实施例133
[2341] 除了将制剂49的II-1变更为实施例29中得到的II-22以外，与实施例111同样地操作，得到制剂71。
[2342] 实施例134
[2343] 除了将制剂14的I-1变更为实施例17中得到的II-10以外，与实施例82同样地操作，得到制剂72。
[2344] 实施例135
[2345] 除了将制剂49的II-1变更为实施例17中得到的II-10以外，与实施例111同样地操作，得到制剂73。
[2346] 实施例136
[2347] 除了将制剂14的I-1变更为实施例39中得到的II-30以外，与实施例82同样地操作，得到制剂74。
[2348] 实施例137
[2349] 除了将制剂49的II-1变更为实施例39中得到的II-30以外，与实施例111同样地操作，得到制剂75。
[2350] 实施例138
[2351] 除了将制剂14的I-1变更为实施例40中得到的II-31以外，与实施例82同样地操作，得到制剂76。
[2352] 实施例139
[2353] 除了将制剂49的II-1变更为实施例40中得到的II-31以外，与实施例111同样地操作，得到制剂77。
[2354] 实施例140
[2355] 除了将制剂14的I-1变更为实施例43中得到的II-34以外，与实施例82同样地操作，得到制剂78。
[2356] 实施例141
[2357] 除了将制剂49的II-1变更为实施例43中得到的II-34以外，与实施例111同样地操作，得到制剂79。
[2358] 实施例142
[2359] 除了将制剂14的I-1变更为实施例23中得到的II-16以外，与实施例82同样地操作，得到制剂80。
[2360] 实施例143
[2361] 除了将制剂49的II-1变更为实施例23中得到的II-16以外，与实施例111同样地操作，得到制剂81。
[2362] 实施例144
[2363] 除了将制剂49的II-1变更为实施例2中得到的I-2以外，与实施例111同样地操作，得到制剂82。
[2364] 实施例145
[2365] 除了将制剂49的II-1变更为实施例12中得到的II-5以外，与实施例111同样地操作，得到制剂83。
[2366] 实施例146
[2367] 除了将制剂49的II-1变更为实施例25中得到的II-18以外，与实施例111同样地操作，得到制剂84。
[2368] 实施例147
[2369] 除了将制剂49的II-1变更为实施例36中得到的II-27以外，与实施例111同样地操作，得到制剂85。
[2370] 实施例148
[2371] 除了将制剂49的II-1变更为实施例27中得到的II-20以外，与实施例111同样地操作，得到制剂86。
[2372] 实施例149
[2373] 除了将制剂49的II-1变更为实施例22中得到的II-15以外，与实施例111同样地操作，得到制剂87。
[2374] 实施例150
[2375] 除了将制剂49的II-1变更为实施例31中得到的III-1以外，与实施例111同样地操作，得到制剂88。
[2376] 实施例151
[2377] 除了将制剂14的I-1变更为实施例44中得到的II-35以外，与实施例82同样地操作，得到制剂89。
[2378] 实施例152
[2379] 除了将制剂49的II-1变更为实施例44中得到的II-35以外，与实施例111同样地操作，得到制剂90。
[2380] 实施例153
[2381] 除了将制剂14的I-1变更为实施例50中得到的II-41以外，与实施例82同样地操作，得到制剂91。
[2382] 实施例154
[2383] 除了将制剂49的II-1变更为实施例50中得到的II-41以外，与实施例111同样地操作，得到制剂92。
[2384] 实施例155
[2385] 除了将制剂14的I-1变更为实施例33中得到的II-24以外，与实施例82同样地操作，得到制剂93。
[2386] 实施例156
[2387] 除了将制剂49的II-1变更为实施例33中得到的II-24以外，与实施例111同样地操作，得到制剂94。
[2388] 实施例157
[2389] 除了将制剂14的I-1变更为实施例34中得到的II-25以外，与实施例82同样地操作，得到制剂95。
[2390] 实施例158
[2391] 除了将制剂49的II-1变更为实施例34中得到的II-25以外，与实施例111同样地操作，得到制剂96。
[2392] 实施例159
[2393] 除了将制剂14的I-1变更为实施例35中得到的II-26以外，与实施例82同样地操作，得到制剂97。
[2394] 实施例160
[2395] 除了将制剂49的II-1变更为实施例35中得到的II-26以外，与实施例111同样地操作，得到制剂98。
[2396] 实施例161
[2397] 除了将制剂14的I-1变更为实施例51中得到的II-42以外，与实施例82同样地操作，得到制剂99。
[2398] 实施例162
[2399] 除了将制剂49的II-1变更为实施例51中得到的II-42以外，与实施例111同样地操作，得到制剂100。
[2400] 实施例163
[2401] 除了将制剂14的I-1变更为实施例52中得到的II-43以外，与实施例82同样地操作，得到制剂101。
[2402] 实施例164
[2403] 除了将制剂49的II-1变更为实施例52中得到的II-43以外，与实施例111同样地操作，得到制剂102。
[2404] 实施例165
[2405] 除了将制剂14的I-1变更为实施例45中得到的II-36以外，与实施例82同样地操作，得到制剂103。
[2406] 实施例166
[2407] 除了将制剂49的II-1变更为实施例45中得到的II-36以外，与实施例111同样地操作，得到制剂104。
[2408] 实施例167
[2409] 除了将制剂49的II-1变更为实施例24中得到的II-17以外，与实施例111同样地操作，得到制剂105。
[2410] 实施例168
[2411] 除了将制剂13的I-1变更为实施例11中得到的II-4以外，与实施例81同样地操作，得到制剂106。
[2412] 实施例169
[2413] 除了将制剂106的CL-1变更为参考例5中得到的CL-5以外，与实施例168同样地操作，得到制剂107。
[2414] 实施例170
[2415] 除了将制剂14的I-1变更为实施例42中得到的II-33以外，与实施例82同样地操作，得到制剂108。
[2416] 实施例171
[2417] 除了将制剂49的II-1变更为实施例42中得到的II-33以外，与实施例111同样地操作，得到制剂109。
[2418] 实施例172
[2419] 除了将制剂14的I-1变更为实施例46中得到的II-37以外，与实施例82同样地操作，得到制剂110。
[2420] 实施例173
[2421] 除了将制剂49的II-1变更为实施例46中得到的II-37以外，与实施例111同样地操作，得到制剂111。
[2422] 实施例174
[2423] 除了将制剂13的I-1变更为实施例38中得到的II-29以外，与实施例81同样地操作，得到制剂112。
[2424] 实施例175
[2425] 除了将制剂107的II-4变更为实施例38中得到的II-29以外，与实施例169同样地操作，得到制剂113。
[2426] 实施例176
[2427] 除了将制剂49的II-1变更为实施例47中得到的II-38以外，与实施例111同样地操作，得到制剂114。
[2428] 实施例177
[2429] 除了将制剂49的II-1变更为实施例15中得到的II-8以外，与实施例111同样地操作，得到制剂115。
[2430] 实施例178
[2431] 除了将制剂49的II-1变更为实施例18中得到的II-11以外，与实施例111同样地操作，得到制剂116。
[2432] 实施例179
[2433] 除了将制剂49的II-1变更为实施例48中得到的II-39以外，与实施例111同样地操作，得到制剂117。
[2434] 实施例180
[2435] 除了将制剂13的I-1变更为实施例70中得到的IV-3以外，与实施例81同样地操作，得到制剂118。
[2436] 实施例181
[2437] 除了将制剂107的II-4变更为实施例70中得到的IV-3以外，与实施例169同样地操作，得到制剂119。
[2438] 实施例182
[2439] 除了将制剂13的I-1变更为实施例63中得到的III-2以外，与实施例81同样地操作，得到制剂120。
[2440] 实施例183
[2441] 除了将制剂107的II-4变更为实施例63中得到的III-2以外，与实施例169同样地操作，得到制剂121。
[2442] 实施例184
[2443] 除了将制剂13的I-1变更为实施例69中得到的IV-2以外，与实施例81同样地操作，得到制剂122。
[2444] 实施例185
[2445] 除了将制剂107的II-4变更为实施例69中得到的IV-2以外，与实施例169同样地操作，得到制剂123。
[2446] 实施例186
[2447] 除了将制剂13的I-1变更为实施例20中得到的II-13以外，与实施例81同样地操作，得到制剂124。
[2448] 实施例187
[2449] 除了将制剂107的II-4变更为实施例20中得到的II-13以外，与实施例169同样地操作，得到制剂125。
[2450] 实施例188
[2451] 向20mL的80％异丙醇中添加实施例24中得到的II-17，使其为0.0782μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.145μmol/0.591μmol/1.23μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂126。
[2452] 实施例189
[2453] 除了将制剂13的I-1变更为实施例6中得到的I-6以外，与实施例81同样地操作，得到制剂127。
[2454] 实施例190
[2455] 除了将制剂13的I-1变更为实施例32中得到的IV-1以外，与实施例81同样地操作，得到制剂128。
[2456] 实施例191
[2457] 除了将制剂107的II-4变更为实施例32中得到的IV-1以外，与实施例169同样地操作，得到制剂129。
[2458] 实施例192
[2459] 向20mL的80％异丙醇中添加实施例32中得到的IV-1，使其为0.156μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-5/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.784μmol/0.358μmol/0.743μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂130。
[2460] 试验例8
[2461] 含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径测定
[2462] 使用粒径测定装置(Zetasizer Nano ZS，Malvern公司制)，对制剂中的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径进行测定(表48)。需要说明的是，表中的PDI表示多分散指数(Polydispersity Index)。
[2463] [表48]
[2464] 表48
[2465]制剂编号 脂质A 脂质B 大小(nm) PDI
30 I-4 CL-1 41.06 0.104
31 I-4 CL-3 46.62 0.097
32 I-4 CL-4 53.82 0.115
33 I-5 CL-1 44.43 0.090
34 I-5 CL-3 53.73 0.073
35 I-5 CL-6 52.91 0.137
36 I-5 CL-4 51.74 0.149
37 II-6 CL-1 52.34 0.122
38 II-6 CL-5 52.00 0.126
39 II-6 CL-3 54.43 0.147
40 II-6 CL-6 52.85 0.238
41 II-6 CL-4 57.72 0.155
42 II-2 CL-1 45.40 0.147
43 II-2 CL-5 48.83 0.129
44 II-2 CL-3 48.35 0.118
45 II-2 CL-4 50.65 0.212
46 I-3 CL-3 55.88 0.076
47 II-7 CL-3 55.27 0.076
48 II-1 CL-1 47.40 0.132
49 II-1 CL-5 47.15 0.130
50 II-1 CL-3 58.84 0.125
51 II-1 CL-4 49.65 0.152
52 II3 CL-1 44.86 0.096
53 II-3 CL-5 47.27 0.084
54 II-3 CL-4 49.53 0.163
55 II-12 CL-1 45.42 0.120
56 II-12 CL-5 44.45 0.159
57 II-12 CL-4 44.55 0.196
58 II-17 CL-6 44.00 0.127
59 II-21 CL-1 43.36 0.110
60 II-21 CL-5 44.79 0.107
61 II-21 CL-4 42.91 0.135
62 II-17 CL-1 47.49 0.119
63 II-17 CL-4 46.42 0.133
[2466] [表49]
[2467] 续表48
[2468]
[2469] [表50]
[2470] 续表48
[2471]
[2472] 结果，实施例92～192中记载的制剂30～130的平均粒径小，为60nm以下。
[2473] 试验例9
[2474] 含有核酸的脂质纳米粒子的体外活性评价试验
[2475] 利用以下的方法，将实施例92～192中得到的各制剂(制剂30～130)分别导入已强制表达荧光素酶的人宫颈癌源细胞株HeLa细胞(Luc2CP-HeLa)。
[2476] 将各制剂用Opti-MEM(Gibco公司)稀释，使核酸的最终浓度为10nM，并将稀释后的制剂分别以20μL分注至96孔的培养板，然后将悬浮于含有1.25％胎牛血清(FBS，SAFC Biosciences公司)的最小必需培养基(MEM)中的Luc2CP-HeLa细胞以细胞数量成为7500/80μL/孔的方式接种，在37℃、5％CO2的条件下进行培养，由此将各制剂导入Luc2CP-HeLa细胞内。另外，作为阴性对照组，接种了未经过任何处理的细胞。
[2477] 将导入有各制剂的细胞在37℃的5％CO2孵育器内培养24小时，使用荧光素酶定量系统(Steady-Glo Luciferase Assay System，Promega公司，E2520)，按照制品附带的说明书中记载的方法进行处理后，用平板读取器测定发光强度。算出将阴性对照组的发光量设为1时的相对比例，作为各制剂处理组的发光量。
[2478] 表49中记载了各次试验回中设置的不含有脂质A的比较例4所记载的制剂21、或比较例6～9所记载的制剂26～29的Luc的表达抑制率。
[2479] 由表49可见，含有脂质A的制剂(制剂30～130)在导入Luc2CP-HeLa内后抑制了Luc的表达。
[2480] 由此可见，含有本发明的脂质A的脂质纳米粒子能将核酸导入细胞内等，是容易在体外向细胞内送达药物的制剂。
[2481] [表51]
[2482] 表49
[2483]
[2484] [表52]
[2485] 续表49
[2486]
[2487] [表53]
[2488] 续表49
[2489]
[2490] [表54]
[2491] 续表49
[2492]
[2493] 如下所述地制备改变了II-3、CL-1、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇的各成分比而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2494] 实施例193
[2495] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2496] 向20mL的80％异丙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.04μmol/0.145μmol/0.761μmol/1.66μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂131。
[2497] 实施例194
[2498] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2499] 向20mL的80％异丙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.04μmol/0.145μmol/0.104μmol/2.32μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂132。
[2500] 实施例195
[2501] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2502] 向20mL的80％异丙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为3.21μmol/0.217μmol/1.61μmol/0.53μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂133。
[2503] 实施例196
[2504] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2505] 向20mL的80％异丙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为3.48μmol/0.217μmol/0.374μmol/1.50μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂134。
[2506] 实施例197
[2507] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2508] 向20mL的80％异丙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为2.63μmol/1.18μmol/1.32μmol/0.44μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂135。
[2509] 比较例10
[2510] 如下所述地制备改变了CL-1、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇的各成分比、且不含有脂质A的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2511] 核酸使用了实施例72记载的1mg/mL Luc siRNA溶液。
[2512] 将参考例1中得到的CL-1、PEG-DMPE、DSPC及胆固醇分别以成为20mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2513] 向20mL的80％异丙醇中添加0.2mL的Luc siRNA溶液。接下来，添加各脂质，使CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇为1.04μmol/0.145μmol/0.860μmol/1.88μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂136。
[2514] 比较例11
[2515] 如下所述地制备改变了CL-1、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇的各成分比、且不含有脂质A的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2516] 向20mL的80％异丙醇中添加0.2mL的Luc siRNA溶液。接下来，添加各脂质，使CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇为1.04μmol/0.145μmol/0.117μmol/2.62μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂137。
[2517] 比较例12
[2518] 如下所述地制备改变了CL-1、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇的各成分比、且不含有脂质A的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2519] 向20mL的80％异丙醇中添加0.2mL的Luc siRNA溶液。接下来，添加各脂质，使CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇为3.21μmol/0.217μmol/1.84μmol/0.61μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂138。
[2520] 比较例13
[2521] 如下所述地制备改变了CL-1、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇的各成分比、且不含有脂质A的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2522] 向20mL的80％异丙醇中添加0.2mL的Luc siRNA溶液。接下来，添加各脂质，使CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇为3.48μmol/0.217μmol/0.437μmol/1.75μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂139。
[2523] 试验例10
[2524] 含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径测定
[2525] 使用粒径测定装置(Zetasizer Nano ZS，Malvern公司制)，对制剂中的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径进行测定(表50)。需要说明的是，表中的PDI表示多分散指数(Polydispersity Index)。
[2526] [表55]
[2527] 表50
[2528]制剂编号 脂质A 脂质B 大小(nm) PDI
131 II-3 CL-1 38.68 0.147
132 II-3 CL-1 41.71 0.097
133 II-3 CL-1 44.32 0.160
134 II-3 CL-1 47.18 0.111
135 II-3 CL-1 37.25 0.123
136   CL-1 36.92 0.199
137   CL-1 33.71 0.102
138   CL-1 34.00 0.206
139   CL-1 37.32 0.157
[2529] 结果，无论含有或不含有脂质A(II-3)，实施例193～197中记载的制剂131～135及比较例10～13中记载的制剂136～139的平均粒径均小，为50nm以下。
[2530] 试验例11
[2531] 含有核酸的脂质纳米粒子的体外活性评价试验
[2532] 利用以下的方法，将实施例193～197中得到的各制剂(制剂131～135)及比较例10～13中得到的各制剂(制剂136～139)分别导入已强制表达荧光素酶的人宫颈癌源细胞株HeLa细胞(Luc2CP-HeLa)。
[2533] 将各制剂用Opti-MEM(Gibco公司)稀释，使核酸的最终浓度为10nM，并将稀释后的制剂分别以20μL分注至96孔的培养板，然后将悬浮于含有1.25％胎牛血清(FBS，SAFC Biosciences公司)的最小必需培养基(MEM)中的Luc2CP-HeLa细胞以细胞数量成为7500/80μL/孔的方式接种，在37℃、5％CO2的条件下进行培养，由此将各制剂导入Luc2CP-HeLa细胞内。另外，作为阴性对照组，接种了未经过任何处理的细胞。
[2534] 将导入有各制剂的细胞在37℃的5％CO2孵育器内培养24小时，使用荧光素酶定量系统(Steady-Glo Luciferase Assay System，Promega公司，E2520)，按照制品附带的说明书中记载的方法进行处理后，用平板读取器测定发光强度。算出将阴性对照组的发光量设为1时的相对比例，作为各制剂处理组的发光量。
[2535] 由表51可见，含有脂质A的制剂(制剂131～135)与各成分的含量无关地均抑制了Luc的表达。
[2536] 由此可见，含有本发明的脂质A的脂质纳米粒子能将核酸导入细胞内等，是容易在体外向细胞内送达药物的制剂。
[2537] [表56]
[2538] 表51
[2539]制剂编号 脂质A 脂质B 大小(％)
131 II-3 CL-1 36.3
132 II-3 CL-1 51.8
133 II-3 CL-1 30.7
134 II-3 CL-1 50.5
135 II-3 CL-1 5.9
136   CL-1 -25.6
137 CL-1 -24.4
138   CL-1 -56.7
139   CL-1 -46.5
[2540] 如下所述地制备含有脂质A、脂质B、PEG-DMPE、DSPC、胆固醇而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2541] 实施例198
[2542] 除了将制剂23的I-1变更为实施例4中得到的I-4以外，与实施例89同样地操作，得到制剂141。
[2543] 实施例199
[2544] 除了将制剂23的I-1变更为实施例5中得到的I-5以外，与实施例89同样地操作，得到制剂142。
[2545] 实施例200
[2546] 除了将制剂16的I-1变更为实施例3中得到的I-3以外，与实施例84同样地操作，得到制剂143。
[2547] 实施例201
[2548] 除了将制剂107的II-4变更为实施例6中得到的I-6以外，与实施例169同样地操作，得到制剂144。
[2549] 实施例202
[2550] 除了将制剂58的II-17变更为实施例8中得到的II-1以外，与实施例120同样地操作，得到制剂145。
[2551] 实施例203
[2552] 除了将制剂35的I-5变更为实施例9中得到的II-2以外，与实施例97同样地操作，得到制剂146。
[2553] 实施例204
[2554] 除了将制剂16的I-1变更为实施例14中得到的II-7以外，与实施例84同样地操作，得到制剂147。
[2555] 实施例205
[2556] 除了将制剂23的I-1变更为实施例14中得到的II-7以外，与实施例89同样地操作，得到制剂148。
[2557] 实施例206
[2558] 除了将制剂58的II-17变更为实施例10中得到的II-3以外，与实施例120同样地操作，得到制剂149。
[2559] 实施例207
[2560] 除了将制剂58的II-17变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例120同样地操作，得到制剂150。
[2561] 实施例208
[2562] 除了将制剂107的II-4变更为实施例16中得到的II-9以外，与实施例169同样地操作，得到制剂151。
[2563] 实施例209
[2564] 除了将制剂49的II-1变更为实施例41中得到的II-32以外，与实施例111同样地操作，得到制剂152。
[2565] 实施例210
[2566] 除了将制剂49的II-1变更为实施例49中得到的II-40以外，与实施例111同样地操作，得到制剂153。
[2567] 实施例211
[2568] 向20mL的80％异丙醇中添加实施例10中得到的II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DMPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为2.85μmol/1.176μmol/0.307μmol/1.23μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂154。
[2569] 实施例212
[2570] 除了将制剂35的I-5变更为实施例31中得到的III-1以外，与实施例97同样地操作，得到制剂155。
[2571] 实施例213
[2572] 除了将制剂130的CL-5变更为参考例1中得到的CL-1以外，与实施例192同样地操作，得到制剂156。
[2573] 实施例214
[2574] 除了将制剂14的I-1变更为实施例53中得到的II-44以外，与实施例82同样地操作，得到制剂157。
[2575] 实施例215
[2576] 除了将制剂14的I-1变更为实施例54中得到的II-45以外，与实施例82同样地操作，得到制剂158。
[2577] 实施例216
[2578] 除了将制剂14的I-1变更为实施例55中得到的II-46以外，与实施例82同样地操作，得到制剂159。
[2579] 试验例12
[2580] 含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径测定
[2581] 使用粒径测定装置(Zetasizer Nano ZS，Malvern公司制)，对制剂中的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径进行测定(表52)。需要说明的是，表中的PDI表示多分散指数(Polydispersity Index)。
[2582] [表57]
[2583] 表52
[2584]制剂编号 脂质A 脂质B 大小(nm) PDI
141 I-4 CL-5 46.18 0.063
142 I-5 CL-5 43.77 0.117
143 I-3 CL-1 47.63 0.107
144 I-6 CL-5 45.12 0.154
145 II-1 CL-6 44.75 0.169
146 II-2 CL-6 49.96 0.161
147 II-7 CL-1 46.44 0.125
148 II-7 CL-5 41.65 0.172
149 II-3 CL-6 48.76 0.223
150 II-12 CL-6 45.24 0.154
151 II-9 CL-5 34.37 0.294
152 II-32 CL-5 45.16 0.106
153 II-40 CL-5 43.31 0.163
154 II-3 CL-1 35.14 0.098
155 III-1 CL-6 48.60 0.148
156 IV-1 CL-1 20.11 0.459
157 II-44 CL-1 46.39 0.133
158 II-45 CL-1 43.46 0.09
159 II-46 CL-1 43.04 0.089
[2585] 结果，实施例198～216中记载的制剂141～159的平均粒径小，为50nm以下。
[2586] 如下所述地制备改变了实施例10中得到的II-3或者实施例19中得到的II-12和参考例1中得到的CL-1、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇的各成分的含量而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2587] 需要说明的是，实施例217～253的核酸使用了实施例72记载的1mg/mL Luc siRNA溶液，将脂质A以成为10mg/mL的方式溶解于100％乙醇中而制成脂质原料溶液，将CL-1、PEG-DSPE、DSPC及胆固醇分别以成为20mg/mL的方式溶解于100％乙醇中而制成脂质原料溶液。各原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2588] 实施例217
[2589] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2590] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.235μmol/1.49μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂160。
[2591] 实施例218
[2592] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2593] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.235μmol/0.486μmol/1.01μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂167。
[2594] 实施例219
[2595] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2596] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为2.02μmol/0.235μmol/1.01μmol/0.337μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂162。
[2597] 实施例220
[2598] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2599] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为2.19μmol/0.235μmol/0.236μmol/0.944μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂163。
[2600] 实施例221
[2601] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2602] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.52μmol/0.235μmol/1.62μmol/0.236μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂164。
[2603] 实施例222
[2604] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2605] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.52μmol/0.235μmol/0.944μmol/0.910μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂165。
[2606] 实施例223
[2607] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2608] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.52μmol/0.235μmol/0.236μmol/1.62μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂166。
[2609] 实施例224
[2610] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2611] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.01μmol/0.235μmol/2.09μmol/0.270μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂167。
[2612] 实施例225
[2613] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2614] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.01μmol/0.235μmol/1.42μmol/0.944μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂168。
[2615] 实施例226
[2616] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2617] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.01μmol/0.235μmol/0.742μmol/1.62μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂169。
[2618] 实施例227
[2619] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2620] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.01μmol/0.235μmol/0.101μmol/2.26μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂170。
[2621] 实施例228
[2622] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2623] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为2.82μmol/0.353μmol/0.779μmol/1.62μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂171。
[2624] 实施例229
[2625] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2626] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为3.03μmol/0.353μmol/1.56μmol/0.521μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂172。
[2627] 实施例230
[2628] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2629] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为3.39μmol/0.353μmol/0.365μmol/1.46μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂173。
[2630] 实施例231
[2631] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2632] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为2.35μmol/0.353μmol/2.50μmol/0.365μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂174。
[2633] 实施例232
[2634] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2635] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为2.35μmol/0.353μmol/1.46μmol/1.41μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂175。
[2636] 实施例233
[2637] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2638] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为2.35μmol/0.353μmol/0.365μmol/2.50μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂176。
[2639] 实施例234
[2640] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2641] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.56μmol/0.353μmol/3.23μmol/0.417μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂177。
[2642] 实施例235
[2643] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2644] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.56μmol/0.353μmol/1.15μmol/2.50μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂178。
[2645] 实施例236
[2646] 如下所述地制备含有实施例10中得到的II-3、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2647] 向20mL的80％乙醇中添加II-3，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.56μmol/0.353μmol/0.156μmol/3.49μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂179。
[2648] 实施例237
[2649] 如下所述地制备含有实施例19中得到的II-12、PEG-DSPE、DSPC、胆固醇及参考例1中得到的CL-1而形成的含有核酸的脂质纳米粒子。
[2650] 向20mL的80％乙醇中添加II-12，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.235μmol/0.486μmol/1.01μmol。然后，以形成20％以下的乙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂180。
[2651] 实施例238
[2652] 除了将制剂162的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例219同样地操作，得到制剂181。
[2653] 实施例239
[2654] 除了将制剂164的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例221同样地操作，得到制剂182。
[2655] 实施例240
[2656] 除了将制剂165的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例222同样地操作，得到制剂183。
[2657] 实施例241
[2658] 除了将制剂166的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例223同样地操作，得到制剂184。
[2659] 实施例242
[2660] 除了将制剂167的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例224同样地操作，得到制剂185。
[2661] 实施例243
[2662] 除了将制剂169的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例226同样地操作，得到制剂186。
[2663] 实施例244
[2664] 除了将制剂170的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例227同样地操作，得到制剂187。
[2665] 实施例245
[2666] 除了将制剂171的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例228同样地操作，得到制剂188。
[2667] 实施例246
[2668] 除了将制剂172的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例229同样地操作，得到制剂189。
[2669] 实施例247
[2670] 除了将制剂173的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例230同样地操作，得到制剂190。
[2671] 实施例248
[2672] 除了将制剂174的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例231同样地操作，得到制剂191。
[2673] 实施例249
[2674] 除了将制剂175的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例232同样地操作，得到制剂192。
[2675] 实施例250
[2676] 除了将制剂176的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例233同样地操作，得到制剂193。
[2677] 实施例251
[2678] 向20mL的80％异丙醇中添加II-12，使其为0.313μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.56μmol/0.353μmol/2.19μmol/1.46μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon  Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂194。
[2679] 实施例252
[2680] 除了将制剂178的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例235同样地操作，得到制剂195。
[2681] 实施例253
[2682] 除了将制剂179的II-3变更为实施例19中得到的II-12以外，与实施例236同样地操作，得到制剂196。
[2683] 试验例13
[2684] 含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径测定
[2685] 使用粒径测定装置(Zetasizer Nano ZS，Malvern公司制)，对制剂中的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径进行测定(表53)。需要说明的是，表中的PDI表示多分散指数(Polydispersity Index)。
[2686] [表58]
[2687] 表53
[2688]制剂编号 脂质A 脂质B 大小(nm) PDI
160 CL-1 II-3 47.52 0.086
161 CL-1 II-3 37.40 0.094
162 CL-1 II-3 39.35 0.095
163 CL-1 II-3 41.37 0.094
164 CL-1 II-3 42.78 0.284
165 CL-1 II-3 40.27 0.150
166 CL-1 II-3 38.03 0.126
167 CL-1 II-3 37.59 0.276
168 CL-1 II-3 43.68 0.209
169 CL-1 II-3 34.06 0.142
170 CL-1 II-3 34.85 0.156
171 CL-1 II-3 38.01 0.089
172 CL-1 II-3 44.22 0.145
173 CL-1 II-3 43.46 0.127
174 CL-1 II-3 43.77 0.279
175 CL-1 II-3 41.89 0.181
176 CL-1 II-3 40.23 0.133
177 CL-1 II-3 22.06 0.185
178 CL-1 II-3 38.50 0.158
179 CL-1 II-3 41.84 0.116
180 CL-1 II-12 44.92 0.073
181 CL-1 II-12 42.99 0.080
182 CL-1 II-12 34.19 0.229
183 CL-1 II-12 44.16 0.168
184 CL-1 II-12 43.04 0.090
185 CL-1 II-12 46.91 0.248
186 CL-1 II-12 43.46 0.168
187 CL-1 II-12 39.04 0.129
188 CL-1 II-12 43.25 0.087
189 CL-1 II-12 42.50 0.158
190 CL-1 II-12 44.49 0.088
191 CL-1 II-12 35.69 0.175
192 CL-1 II-12 41.35 0.136
193 CL-1 II-12 44.50 0.102
[2689] [表59]
[2690] 续表53
[2691]
[2692] 结果，实施例217～253中记载的制剂160～196的平均粒径小，为50nm以下。
[2693] 实施例254
[2694] 用于评价胶原蛋白凝胶中的渗透性的含有核酸的脂质纳米粒子的制备
[2695] 含有I-1、且粒径小的含有核酸的脂质纳米粒子如下所述地进行制备。
[2696] 使用的核酸包含有义链[(5’-Y_N(H)_GCCAGACUUUGUUGGAUUUGAAAtt-3’)]、和反义链[(5’-AAUUUCAAA(M)UC(M)CA(M)AC(M)AA(M)AG(M)UC(M)UG(M)GC(M)U(M)U(M)-3’)]的碱基序列(N(M)：2’-OMe RNA，大写字母：RNA，小写字母：DNA，Y：Alexa488，N(H)：ssH氨基接头)。该siRNA为抑制HPRT1基因的表达的siRNA，自GeneDesign公司获得(以下为“AF488-HPRT1 siRNA”)。将AF488-HPRT1 siRNA以成为1mg/mL的方式溶解于注射用水中，制备AF488-HPRT1 siRNA溶液。PEG-DSPE及DSPC及胆固醇自日油公司获得。
[2697] 将实施例1中得到的I-1以成为10mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。将参考例1中得到的CL-1及PEG-DSPE及DSPC及胆固醇以成为20mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2698] 向20mL的80％异丙醇中添加I-1，使其为0.581μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.235μmol/0.398μmol/0.827μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以62mL/秒以上的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂197。
[2699] 比较例14
[2700] 不含I-1、且粒径大的含有核酸的脂质纳米粒子如下所述地进行制备。
[2701] PEG-DSPE及DSPC及胆固醇自日油公司获得。
[2702] 将参考例1中得到的CL-1及PEG-DSPE及DSPC及胆固醇以成为20mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2703] 使用的核酸使用了实施例80记载的AF488-HPRT1 siRNA。
[2704] 向20mL的80％异丙醇中添加0.2mL的AF488-HPRT1 siRNA溶液。接下来，添加各脂质，使CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇为1.88μmol/0.235μmol/0.587μmol/1.22μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以约0.2mL/秒以下的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂198。
[2705] 比较例15
[2706] 含有I-1、且粒径大的含有核酸的脂质纳米粒子如下所述地进行制备。
[2707] PEG-DSPE及DSPC及胆固醇自日油公司获得。使用的核酸采用了实施例254记载的AF488-HPRT1 siRNA。
[2708] 将实施例1中得到的I-1以成为10mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。将参考例1中得到的CL-1及PEG-DSPE及DSPC及胆固醇以成为20mg/mL的方式溶解于100％异丙醇中，制成脂质原料溶液。原料溶液保存于-20℃，在即将制备制剂之前加热至60℃，使脂质溶解后恢复至室温而进行使用。
[2709] 向20mL的80％异丙醇中添加I-1，使其为0.581μmol。接下来，添加200μL的siRNA溶液并搅拌1分钟，然后向该溶液中添加CL-1/PEG-DSPE/DSPC/胆固醇，使这些成分为1.88μmol/0.235μmol/0.398μmol/0.827μmol。然后，以形成20％以下的异丙醇溶液的方式，以0.22mL/秒以下的流速添加注射用水，形成粗制剂。对于得到的粗制剂，使用Amicon Ultra(Millipore公司制)进行浓缩，进而将溶剂置换为生理盐水，使用0.2μm的过滤器(东洋滤纸公司制)，在净化工作台内进行过滤。进而，对得到的制剂的siRNA浓度进行测定，用生理盐水进行稀释而使得以siRNA浓度计为0.1mg/mL，由此得到制剂199。
[2710] 试验例14
[2711] 含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径测定
[2712] 使用粒径测定装置(Zetasizer Nano ZS，Malvern公司制)，对制剂中的含有核酸的脂质纳米粒子的平均粒径进行测定(表54)。需要说明的是，表中的PDI表示多分散指数(Polydispersity Index)。
[2713] [表60]
[2714] 表54
[2715]制剂编号 大小(nm) PDI
197 39.65 0.118
198 79.45 0.160
199 97.84 0.062
[2716] 试验例15
[2717] 含有核酸的脂质纳米粒子的胶原蛋白凝胶中的渗透性评价
[2718] 针对实施例254及比较例14、15中得到的各制剂，分别利用以下的方法对渗透性进行评价。向500μL大鼠尾源I型胶原蛋白(BD Biosciences公司)中添加13.4μL的1M氢氧化钠(和光公司)及68.78μL的0.17M EDTA溶液(Nacalai Tesque公司)，进行震荡后，添加至500μL管(ASSIST TUBE)中，于室温静置1天。向其中添加制剂197～199，在静置7小时后，使用荧光图像分析仪(Lumino image analyzer)(LAS3000，Fujifilm公司)进行荧光观察。
[2719] 由图5可见，确认到粒径小的含有核酸的脂质纳米粒子(制剂197)能容易地通过胶原蛋白凝胶的间隙而进行渗透，与此相比，粒径大的含有核酸的脂质纳米粒子(制剂197及制剂199)由于无法通过上述间隙，因此滞留于胶原蛋白凝胶的上部。
[2720] 试验例16
[2721] 含有核酸的脂质纳米粒子的胶原蛋白凝胶中的渗透性评价
[2722] 针对实施例254记载的AF488-HPRT1 siRNA、实施例254中得到的制剂197及比较例15中得到的制剂199，分别利用以下的方法对渗透性进行评价。向500μL大鼠尾源I型胶原蛋白(BD Biosciences公司)中添加13.4μL的1M氢氧化钠(和光公司)及68.78μL的0.17M EDTA溶液(Nacalai Tesque公司)，进行震荡后，填充至1mL泰尔茂(TERUMO)注射器中，于室温静置1天。向其中添加AF488-HPRT1 siRNA单体、制剂197及制剂199，在静置24小时后回收凝胶，使用荧光图像分析仪(Lumino image analyzer)(LAS3000，Fujifilm公司)进行荧光观察。
[2723] 由图6可见，确认到粒径小的含有核酸的脂质纳米粒子(制剂197)能容易地通过胶原蛋白凝胶的间隙而进行渗透，与此相比，粒径大的含有核酸的脂质纳米粒子(制剂199)由于无法通过上述间隙，因此滞留于胶原蛋白凝胶的上部。另外，对渗透的距离进行了测定，结果如图7所示，粒径小的含有核酸的脂质纳米粒子(制剂197)显示出相对于粒径大的含有核酸的脂质纳米粒子(制剂199)而言为约2倍的渗透距离。
[2724] 产业上的可利用性
[2725] 利用本发明，能够制造较之以往的粒子而言稳定且经小型化的含有核酸的脂质纳米粒，并且，通过将这样的稳定且经小型化的含有核酸的脂质纳米粒子施予至哺乳类动物等，能够容易地将该核酸导入例如肿瘤组织深处的细胞内等。
[2726] 序列表自由文本
[2727] 序列号1示出了Luc siRNA有义链的碱基序列。
[2728] 序列号2示出了Luc siRNA反义链的碱基序列。
[2729] 序列号3示出了AF488-HPRT1 siRNA有义链的碱基序列。
[2730] 序列号4示出了AF488-HPRT1 siRNA反义链的碱基序列。
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