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电化学检测金属标记的分析物

阅读：1104发布：2021-01-12

IPRDB可以提供电化学检测金属标记的分析物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且描述了用于确定样品中金属标记的分析物(12)的存在或量的方法。所述方法包括以下步骤：将释放剂(20)添加至所述金属标记的分析物(12)，从而将所述金属标记物(18)从所述分析物(12)中释放，所述释放剂(20)与金属标记物(18)形成带电稳定物质(22)，施加电势从而将所述带电稳定物质(22)送至电极(22)，在正电势下溶解所述带电稳定物质(22)，从而形成金属离子(26)，和执行量化测定步骤如阳极溶出伏安法来确定所述金属标记的分析物(12)的存在或量。，下面是电化学检测金属标记的分析物专利的具体信息内容。

权利要求

1.用于确定样品中金属标记的分析物(12)的存在或量的方法，所述方法包括以下步骤：将释放剂(20)添加至所述金属标记的分析物，从而将金属标记物(18)从所述分析物中释放，所述释放剂和所述金属标记物一起形成不可溶的带电物质(22)，施加电势从而将所述带电物质送至电极(24)，其中释放剂是能够在金属标记物表面上形成带电层并因此能够使其在一定电势下迁移的任何盐或化学物质，向所述带电物质施加正电势以形成金属离子(26)，和

执行量化测定步骤以确定所述金属标记的分析物的存在或量。

2.如权利要求1中所述的方法，其中通过施加正电势将所述带电物质(22)送至电极(24)，所述正电势也导致所述金属离子(26)的形成。

3.如权利要求1或2中所述的方法，其中所述带电物质(22)带负电。

4.如权利要求1或2中所述的方法，其中所述释放剂(20)包括具有带电单元的硫醇。

5.如权利要求1或2中所述的方法，其中所述释放剂(20)是硫氰酸铵或硫氰酸钾。

6.如权利要求1或2中所述的方法，其中所述释放剂(20)是硫代硫酸盐或带电的硫醇链。

7.如权利要求1或2中所述的方法，其中所述释放剂(20)提供多个离子以形成所述带电物质。

8.如权利要求7中所述的方法，其中所述释放剂(20)提供多个氯离子以形成所述带电物质(22)。

9.如权利要求8中所述的方法，其中所述释放剂(20)是NaCl或HCl。

10.如权利要求1或2中所述的方法，还包括用所述金属标记物(18)标记所述分析物(12)的步骤，其中所述分析物(12)与结合部分(16)温育，所述结合部分(16)能够结合所述分析物并用所述金属标记物标记。

11.如权利要求10中所述的方法，还包括将所述分析物(12)与另一种结合部分(10)温育的步骤，所述结合部分(10)能够与所述分析物结合并被固定于固体支持物(14)。

12.如权利要求11中所述的方法，其中所述固体支持物(14)是可动的或固定的。

13.如权利要求12中所述的方法，其中所述可动的固体支持物(14)是磁化的。

14.如权利要求12或13中所述的方法，其中所述金属标记物(18)是金属纳米粒子且其中所述固体支持物(14)是比所述金属纳米粒子更大或更小的粒子，从而容许从结合的金属纳米粒子中滤出未结合的金属纳米粒子。

15.权利要求12或13所述的方法，其中所述固体支持物(14)是带电粒子，从而容许电分离。

16.如权利要求12中所述的方法，其中所述固定的固体支持物(14)是三维表面或结构。

17.如权利要求16中所述的方法，其中所述固定的固体支持物(14)是三维多孔结构。

18.如权利要求12中所述的方法，其中所述固定的固体支持物(14)是二维表面或结构。

19.如权利要求1或2中所述的方法，其中所述金属标记物(18)是微粒标记物或纳米粒子。

20.如权利要求19中所述的方法，其中所述金属标记物(18)是银纳米粒子或金纳米粒子。

21.如权利要求20中所述的方法，其中所述金属标记物(18)是银纳米粒子。

22.如权利要求1或2中所述的方法，其中所述量化测定步骤是伏安法。

23.如权利要求22中所述的方法，其中所述伏安法是阳极溶出伏安法。

说明书全文

电化学检测金属标记的分析物

技术领域

[0001] 本发明涉及电化学测定，具体地所述测定利用金属纳米粒子作为电化学标记物。

背景技术

[0002] 涉及金属标记物的现有技术测定，诸如WO2005/121792中所述的那些，需要化学氧化剂来溶解金属纳米粒子。关于这一点的问题是该氧化剂可以通过破坏扫描的基线而干扰扫描的电化学曲线。WO2005/121792中所述的测定依赖于金属离子的形成，从而使该金属通过电解被转移到电极表面。这在分析生物样品时引起问题。生物样品溶液中的蛋白质和其他分子典型地与金属离子结合，从而使它们电化学失活。金属离子还可以通过与化学氧化物的螯合/偶联而引起电化学失活。

[0003] WO2004/016160公开了化学氧化还原裂解剂(cleavant)从纳米粒子标记的分析物中释放有机聚合物纳米粒子的应用。然后使用电化学流式细胞计数来检测由氧化还原裂解剂从聚合物纳米粒子释放的氧化还原产物(诸如金属离子)。

发明内容

[0004] 本发明试图克服一种或多种以上问题。

[0005] 根据本发明的第一方面，提供用于确定金属标记的分析物在样品中的存在或量的方法，所述方法包括以下步骤：将释放剂(release agent)加入到金属标记的分析物中以从所述分析物中释放金属标记物，所述释放剂和所述金属标记物一起形成带电物质(charged species)，施加电势(potential)从而将所述带电物质送至电极，向所述带电物质施加正电势以形成金属离子，和执行量化测定步骤以确定金属标记的分析物的存在或量。

[0006] 金属离子在电极表面处形成。因此金属离子仅有很小的机会在测量前被灭活。因此不需要在金属离子和螯合剂之间形成复合物。而且，由于使用电化学势来溶解金属标记物，所以不需要使用化学氧化剂和避免与化学氧化剂有关的问题。

[0007] 带电物质典型是不可溶的。

[0008] 典型地，释放剂包括带电成分，释放剂的带电成分和金属纳米粒子一起形成带电物质。

[0009] 通过应用正电势，带电物质可以被送至电极，这也导致金属离子的形成。

[0010] 带电物质优选带负电，但是在一些实施方案中其可以带正电。

[0011] 释放剂可以是能够在金属标记物表面上形成带电层并因此能够使其在一定电势下迁移的任何盐或化学物质。

[0012] 释放剂可以包括具有带电单元的硫醇。硫醇起作用来使金属标记物和分析物之间的结合变性或将其破坏。该带电单元为金属标记物提供电荷。

[0013] 合适的释放剂的实例包括硫氰酸铵和硫氰酸钾。代替硫氰酸盐，释放剂可以包括硫代硫酸盐或带电的硫醇链。释放剂可以提供离子以形成带电物质。例如，合适的释放剂包括NaCl或HCl，它们能够提供氯离子以形成带电物质。NaCl和HCl特别有效用作释放剂，因为它们在氧化后不与金属离子形成复合物。

[0014] 释放剂优选浓度为约1M以上。该范围是优选的，因为低于该摩尔浓度，银灵敏度不佳。

[0015] 所述方法还可以包括使用金属标记物标记分析物，其中所述分析物与能够与所述分析物结合的结合部分温育，并被所述金属标记物标记。分析物可以用另一种结合部分来温育，所述结合部分能够与所述分析物结合并固定于固体支持物。所述固体支持物可以是可动的或固定的，固体支持物可以是磁化的，固体支持物可以是比金属纳米粒子更大或更小的粒子，从而容许从结合的金属纳米粒子中滤出未结合的金属纳米粒子，固体支持物可以是带电的粒子，以容许电分离，固体支持物可以是多孔结构，固体支持物可以是2维或3维表面或结构。

[0016] 在优选的实施方案中，金属标记物是银或金，例如银纳米粒子或金纳米粒子。优选地，金属标记物是微粒或纳米粒子标记物诸如银纳米粒子。

[0017] 分析物可以间接标记的，其中标记物附着于一种物质或结合部分，该物质或结合部分再结合分析物。

[0018] 所述量化测定步骤可以是伏安法，诸如阳极溶出伏安法(ASV)。

附图说明

[0019] 现将仅通过举例和参考附图的方式描述优选的实施方案，其中：

[0020] 图1示意性图示本发明的一个实施方案；

[0021] 图2和3显示标准溶液AgNO3+1M NH4 SCN(1-50ppm Ag+)的阳极溶出伏安法(ASV)扫描结果；

[0022] 图4和5显示标准溶液AgNO3+1M NH4 SCN(0.01-0.8ppm Ag+)的阳极溶出伏安法(ASV)扫描结果；

[0023] 图6和7显示在存在氧化剂铁氰化物的条件下的Ag+浓度；

[0024] 图8-11显示在存在/缺乏铁氰化物的条件下的Ag+浓度；

[0025] 图12和13显示在存在或不存在NH4SCN的条件下的银纳米粒子的吸光度；

[0026] 图14a-f显示80％和100％银纳米粒子溶液对尺寸分布的影响；

[0027] 图15和16比较关于KSCN和NH4SCN的结果；

[0028] 图17和18比较预处理时间对方法的实施方案的影响；

[0029] 图19显示关于肌红蛋白的测定的结果，以确定最大化该测定灵敏度所需要的抗体量；

[0030] 图20-23显示关于方法的其他实施方案的结果；和

[0031] 图24和25图示其中所测物质不带电的阴性结果。具体实施方案

[0032] 所述测定确定目的分析物(诸如抗体、模拟表位或核酸链)的存在或量，且图1中示意性示范一个实施方案。在优选的实施方案中，能够结合目的分析物12的第一结合部分10附着于固相14(表面或磁性粒子)。能够结合分析物12上不同区域的第二结合部分用金属标记物18、典型地微粒标记物来标记。

[0033] 将包含分析物12的样品溶液加至固体支持物14。分析物12与第一结合部分10结合。支持物14然后与包含标记的第二结合部分16的溶液温育，所述标记的第二结合部分16结合分析物12。有效地，在基底和银粒子18之间出现“夹心结构”，由此捕获粒子18。然后除去未结合的粒子(诸如提供清洗)。这确保所述粒子不被氧化。

[0034] 在优选的实施方案中，银纳米粒子18用作电化学标记物。银纳米粒子18提供电6
化学信号的分子放大，因为每个40nm银纳米粒子包含约10 银离子。因此，测定的灵敏性提高。另外，银是优选的，因为它形成可以作为生物纳米标记物18使用的稳定纳米粒子。此外，银纳米粒子18易于电氧化形成银离子。一些其他金属纳米粒子需要苛刻的化学氧化剂来形成金属离子。

[0035] 在优选的实施方案中，将硫氰酸铵20引入100并从其生物复合物中去除银纳米粒子18并形成在银纳米粒子周围化学结合的层(可以是单层)，从而生成带负电的纳米粒子22。带电纳米粒子22可以在电势下迁移200到正电极表面。在该电极处的银纳米粒子然后在正电势300下溶解形成银离子26。银离子26然后通过累积溶出伏安法(accumulation stripping voltammetry)测量。一小部分银离子26可以采用与螯合剂复合物的形式，其中释放剂能够螯合银离子。

[0036] 可以使用其他释放剂20(诸如具有带电单元的硫醇，例如硫代硫酸盐)。还可以使用非硫醇盐分子，诸如NaCl和HCl。

[0037] 比较例1

[0038] 该比较例解释在形成WO2005/121792中公开的方法中测量的电活性复合物背后的化学。

[0039] 1.测量银离子(Ag+)复合物

[0040] 银离子在存在NH4SCN的条件下形成强电活性复合物：

[0041]

[0042] 那些复合物可以利用ASV电化学测量。在该过程中，处于负电势的银复合物首先沉积在碳糊电极表面上：

[0043]

[0044] 然后将电势改变为正值，银复合物从电极溶出，产生电流峰值。

[0045]

[0046] 硫氰酸铵还形成与其他金属离子的复合物，且硫氰酸铵将这些金属离子的电化学定位而远离银离子复合物的电化学，由此消除了光谱干扰。

[0047] 制备AgNO3标准溶液(1.25，6.25，12.5，25，37.5，50和62.5ppm AgNO3)。向每个160μl标准溶液中，加入40μl5M NH4SCN。随后，将50μl每种AgNO3和NH4SCN溶液随之应用在电极上并进行ASV。ASV参数如下：

[0048] a)+0.4V，10s(预处理)

[0049] b)线性扫描+0.4V→-1.6V，扫描速度＝1V/s和跨步电势＝0.005V[0050] c)-1.6V，5s

[0051] d)-1.2V，55s

[0052] e)线性扫描-1.2V→+0.1V，扫描速度＝1V/s和跨步电势＝0.01V[0053] 2)在每次测量之间，电极用5M NH4SCN清洗，运行ASV并然后用薄纸擦拭。

[0054] 表1

[0055]

[0056]

[0057] 结果显示在图2和3中。峰下面积与1-50ppm范围内的Ag+浓度成比例。

[0058] 比较例2

[0059] 利用较低Ag+浓度进行相同的实验。

[0060] 表2

[0061]

[0062] 结果显示在图4和5中。

[0063] 比较例3

[0064] 现有技术测定，诸如WO2005/121792中所述的测定，使用氧化剂(铁氰酸盐)来形成银离子，从而用于实施例1和2中所述的方法中。以下测量在存在0.05M K3Fe(CN)6和0.01M K4Fe(CN)6的条件下进行。

[0065] 表3

[0066]

[0067] 获得的结果显示在图6-9中。同时，具有或不具有铁氰化物的银离子的校准曲线非常相似，扫描结果的形状不同。

[0068] 以下实施例举例说明本发明优选实施方案的主题。

[0069] 实施例4

[0070] 具有或不具有铁氰化物的银纳米粒子的电化学性质

[0071] 制备5M NH4SCN，0.25M K3Fe(CN)6和0.05M K4Fe(CN)6的“混合”溶液。制备2份160μl银纳米粒子溶液。将40μl5M NH4SCN加入第一份银溶液中。将40μl所述混合溶液加入第二份溶液中。一旦制备，将50μl各种溶液随之加至电极上并进行ASV。

[0072] 表4

[0073]

[0074] 结果显示在图10中。银纳米粒子在硫氰酸盐的存在下生成与由具有铁氰化物的银纳米粒子生成的峰相似但更强的峰。然而，基线在不具有铁氰化物氧化剂的银纳米粒子的情形中更好。基线更平且在溶出峰后不存在电流上升(在铁氰化物的情形中在溶出峰后存在电流上升)。峰判定和积分或高度确定因此更容易。

[0075] 更甚者(如在下一个实验中所示)，峰下面积与银纳米粒子浓度成比例：

[0076] 表5

[0077]

[0078] 这些数据显示在图11中。

[0079] 实施例5

[0080] 为了检查NH4SCN是否溶解银纳米粒子，可以使用光谱法。具有和不具有NH4SCN的银纳米粒子的吸光度可以从500至300nm测量。

[0081] 银纳米粒子(40nm)在约400nm处具有吸收峰，且我们可以观察到在加入NH4SCN后该峰消失。这可能意味着银纳米粒子溶解，但根据文献，该峰消失的机制是不同的：SCN作为单层偶联于银粒子表面，且银纳米粒子形成聚集物。这是银纳米粒子在400nm处吸光度降低而在约550nm处获得新的吸收峰的原因，因此用更宽范围的波长重复该实验。

[0082] 这些数据显示在图12和13中。

[0083] UV光谱显示在400nm处信号的降低和在约650nm处信号的宽峰增加，这说明纳米粒子尺寸的增加。

[0084] 实施例6

[0085] 在该实验中，在具有1M NH4SCN(过滤的)的100％银纳米粒子溶液和80％银纳米粒子溶液中的银粒子尺寸利用Malvernζ定径仪来测量。图14a显示100％银纳米粒子溶液的结果。测量在t＝0进行并在t＝3小时进行另外三次测量。

[0086] 银纳米粒子溶液的测量显示银纳米粒子在溶液中是稳定的。这显示在图14b中。在加入NH4SCN后，银纳米粒子的尺寸改变，如图1c中所示。在加入硫氰酸铵后，从结果中可以清楚地看到粒子已经聚集且完全不溶解(见图14d)。

[0087] 1小时后，聚集物的尺寸似乎增长(见图14e和f)。

[0088] 实施例7

[0089] 由数据显示硫氰酸铵在银纳米粒子周围形成硫氰酸盐单层。类似的结果可以通过改变分子但保持硫氰酸根单元而获得。在该实验中，银纳米粒子和银离子的测量用NH4SCN以及用KSCN来准备：

[0090] 表6

[0091]

[0092] 结果显示在图15和16中。

[0093] 我们可以观察到KSCN也与Ag+和与银纳米粒子形成电活性复合物，从而产生电流峰。

[0094] 实施例8

[0095] 我们以上证明硫氰酸盐在银纳米粒子表面上形成单层，从而形成带电纳米粒子。这导致纳米粒子聚集。带电粒子在正电势下迁移至电极。以下两个实验显示银纳米粒子可以如何通过阳极溶出伏安法测量。首先，检查预处理时间(U＝+0.4V)对银离子和银纳米粒子的测量值的影响(见表7)：

[0096]

[0097]

[0098] 阳离子的测量值是与时间无关，而银纳米粒子的测量值是时间依赖性的。这证明正电势对测量信号具有影响(见图17)。

[0099] 如图18中所示，第二种方法是为了保持预处理时间相同(10s)并改变预处理的电势。

[0100] 来自Ag+的电流信号与电势无关；来自银纳米粒子的信号是电势依赖性的。

[0101] 电势对银离子根本无影响，但强烈影响银纳米粒子。这些数据显示在银纳米粒子ASV的最后步骤过程中测量的电活化物质是在预处理时间过程中形成。银纳米粒子及其带电覆盖层(coverage)在电势梯度下迁移至电极。电极处的正电势将银纳米粒子溶解为银离子。银离子因此可以在电极上累积，并溶出而进行测量。技术人员应该知道如何进行这步。

[0102] 实施例9

[0103] 电化学免疫测定如下进行：

[0104] 银纳米粒子和抗体缀合

[0105] 1.离心沉淀处于5x2-ml管中的10ml银纳米粒子(British Biocell(英国生物细胞))(13200rpm，5mins，4℃)。

[0106] 2.弃上清并将5个沉淀物合并在一个管中，以使得银纳米粒子最终体积为1ml。

[0107] 3.添加抗体溶液(Hytest)，以获得所需浓度(～0.05mg/ml)。

[0108] 4.在滚筒混合器上温育40min。

[0109] 5.以13200rpm，5mins，4℃离心(从上清中回收纳米粒子，如果需要)。

[0110] 6.将沉淀物重新混悬在1ml封闭缓冲液(3％BSA)中。

[0111] 7.在滚筒混合器上温育40min。

[0112] 8.以13200rpm，5mins，4℃离心(从上清中回收纳米粒子，如果需要)。

[0113] 9.通过将沉淀物重新混悬在1ml0.1M硼酸盐缓冲液pH7.5中，然后离心沉淀(13200rpm，5mins，4℃)(从上清中回收纳米粒子，如果需要)和再次将其重新混悬在1ml0.1M硼酸盐缓冲液pH7.5中来清洗沉淀物。

[0114] 10.在4℃保存，直至使用。

[0115] 电免疫测定：

[0116] 1.用50μl第一抗体溶液(在PBS中10μg/ml)包被板。

[0117] 2.在4℃温育过夜(板密封)。

[0118] 3.用200μl洗涤缓冲液洗涤3x。

[0119] 4.添加150μl封闭缓冲液(Pierce#37536)并在振荡器上温育30分钟。

[0120] 5.用200μl洗涤缓冲液洗涤3x。

[0121] 6.在洗涤缓冲液中制备第一浓度(最高)的分析物并在洗涤缓冲液中进行连续稀释。

[0122] 7.添加50μl分析物溶液并在振荡器上温育30分钟。

[0123] 8.用200μl洗涤缓冲液洗涤3x。

[0124] 9.在洗涤缓冲液中稀释银纳米粒子-抗体缀合物5x，并将其50μl加入各孔中。在振荡器上温育1小时。

[0125] 10.用200μl洗涤缓冲液洗涤3x。

[0126] 11.在4℃保存过夜(密封并无洗涤缓冲液)

[0127] 12.添加50μl1M NH4SCN并在混合器上摇动1h。

[0128] 13.将来自每个孔的溶液应用到碳糊电极的表面上并运行阳极溶出伏安法(ASV)。

[0129] ASV步骤如下：

[0130] a)步骤：+0.4V，10s(预处理)

[0131] b)线性扫描：0.0V→-1.6V，扫描速度＝1V/s和跨步电势＝0.005V[0132] c)步骤：-1.6V，5s(成核)

[0133] d)步骤：-1.2V，55s(电活性物质的沉积[还原])

[0134] e)线性扫描：-1.2V→+0.1V，扫描速度＝1V/s和跨步电势＝0.01V(电活性物质的溶出[氧化])。在该扫描过程中，产生峰电流且峰下面积(即库伦数)与电活性物质浓度成比例。

[0135] 电势是相对于参比电极。参比电极典型地是D2碳硫氰酸铵参比电极。

[0136] 实施例10

[0137] 肌红蛋白测定以观察最大化测定灵敏性所需的抗肌红蛋白Hytest4E2抗体的量[0138] 包被抗体的浓度不显著影响该测定。对于改变4E2抗体的量，灵敏性非常优秀且校准曲线非常相似(5，10和15μg/ml)，如图19中所示。然而，太高浓度的包被抗体可以负面影响该测定。这非常取决于所用的抗体及其附着的表面。获得的灵敏性很好，在约50ng肌红蛋白/ml处达到平台期。与基于分析物的酶法检测的经典ELISA相比，该灵敏性相似或甚至更好。

[0139] 将释放剂诸如具有带电单元的硫醇添加至固相分析物银纳米粒子复合物。合适的释放剂的实例包括硫氰酸铵和硫氰酸钾。备选地，可以使用硫代硫酸盐。硫醇是优选的，因为它们比其他试剂更有效地结合银。

[0140] 硫醇弱化抗体的相互作用，以使得银纳米粒子从复合物中释放。带电的硫醇还在银纳米粒子周围形成一层，从而使该粒子带电，并容许其电迁移至电极，在该电极处进行测量。测量可以利用ASV进行。ASV是一种分析技术，其包括将金属相预浓缩至电极表面上和在阳极电势扫描过程中选择性氧化各种金属相物质。银-硫醇带电纳米粒子是电活性的和稳定的。电活性带电纳米粒子可以通过电化学方式电镀到电极上，作为预浓缩步骤。一旦在电极处，银纳米粒子通过在正电势下氧化而电化学溶解。通过将电势反转为负电势，将离子电镀在电极上。然后银板从电极上电化学溶出(通过再次应用正电势)，从而提供更强的银峰信号。从电极溶出的银离子的量可以与用于提供信号的银纳米粒子的数量有关，用于提供信号的银纳米粒子的数量与测定的固相上捕获的分析物数量有关。

[0141] 代替如上所述的“夹心”或非竞争性免疫测定，其他形式可以等同地用于捕获银粒子，诸如竞争免疫测定或基于半抗原的测定。这样的测定是公知的。

[0142] 金属纳米粒子可以商购获得，且可以通过已知方法缀合于结合部分。

[0143] 结合部分可以是任何物质，其能够结合待检测的分析物，例如蛋白质、肽、抗体或其片段、核酸。

[0144] 第一结合部分不需要固定在固体支持物上。

[0145] 实施例11

[0146] 带电银纳米粒子如上关于实施例4(无铁氰化物)所述制备，区别是使用1M硫代硫酸盐作为释放剂。银纳米粒子-硫代硫酸盐物质通过ASV测量。

[0147] 结果显示在图20中，且证明硫代硫酸盐是该方法中使用的合适释放剂。

[0148] 实施例12

[0149] 重复实施例11的实验，区别是使用1M NaCl作为释放剂。图示NaCl是合适释放剂的结果显示在图21中。

[0150] 实施例13

[0151] 重复实施例11的实验，区别是使用金纳米粒子代替银纳米粒子。使用1M HCl作为释放剂。结果显示在图22中。

[0152] 实施例14

[0153] 重复实施例13的实验，区别是使用1M硫氰酸盐作为释放剂。结果显示在图23中。

[0154] 比较例15

[0155] 在缺乏带电释放剂的条件下，对金和银纳米粒子进行ASV。图24(金)和25(银)图示在纳米粒子不带电时，没有观察到峰。

[0156] 在一种改进中，可以通过使用金和银纳米粒子二者检测相同样品中的两种不同分析物。在该情形中，金纳米粒子附着于识别第一分析物的第一结合部分。金离子和银离子在相同电极上通过ASV测量时，提供不同的可区分的峰。

[0157] 可以提供试剂盒。该试剂盒可以包括用于结合分析物的金属标记物，至少一种释放剂，具有至少一个用于使金属标记物与分析物结合的区域的装置和至少2个电极，所述释放剂用于一旦与分析物结合便释放金属试剂并用于形成具有金属标记物的带电纳米粒子。任选地，该试剂盒可以包括能够结合目的分析物并用金属标记物标记的结合部分。所述装置可以是多孔板。

[0158] 通过参考，将本申请要求其优先权的GB0723137.6和GB0812845.6中的公开内容、以及本申请中所附的摘要引入本文。

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