1.发明领域

本发明涉及一种症状发生前的分析，用于可能发生冠状动脉疾病 及相关血管病个体的早期鉴定。本发明描述了基因特异性、蛋白特异 性和表位特异性的探针及分子遗传学和生物化学分析。

2.背景描述

冠状动脉疾病：动脉粥样硬化(或动脉硬化)是用来描述动脉的 腔逐渐变窄和硬化的术语。这一疾病过程可能发生在人体全身的任何 动脉。例如，供应大脑的动脉粥样硬化会引起中风。外周动脉受阻塞 时会发生坏疽。而向心肌供应氧和营养物质的动脉受到影响时则发生 冠状动脉疾病。

冠状动脉疾病是一种多因素的疾病，它会引起动脉粥样斑的沉积 和供应心肌的动脉的管腔逐渐狭窄。这种斑是由炎症和免疫细胞的混 合物、纤维组织、脂肪类物质如低密度脂类(LDL)和它的修饰物及 α—脂蛋白组成的。腔变窄或阻塞导致向心肌输送氧气和营养物质 的能力下降，产生心肌梗塞、心绞痛、阵发性心绞痛和突发性缺血死 亡如心力衰竭。尽管闭塞通常是缓慢进行的，当一部分已经形成的动 脉粥样斑脱落并沉积在动脉血管某处造成暂时阻塞时，或更多情况 下，当血栓形成发生在动脉管腔内部时，血液供应会突然中断。在这 种情况下根据阻塞处远端肌肉血管的血流量，部分心肌组织死亡，引 起心肌衰竭并常常导致个体死亡。

尽管存在多种理论，动脉粥样斑形成的原因和机制还不十分清楚。 一种关于动脉粥样硬化发病机制的理论涉及如下过程：(1)内皮细胞 功能障碍和/或受损伤，(2)单核细胞募集及巨噬细胞形成，(3)脂类 沉淀及修饰，(4)血管平滑肌细胞增生，(5)细胞外基质合成。根据 这一理论，动脉粥样硬化很可能始于某种形式的损伤，可能来自机械 压力或化学应激。机体如何对这种损伤做出应答，决定了是否而且有 多么迅速这一损伤恶化为动脉粥样硬化损伤。动脉粥样化依次引起动 脉腔变窄，而且危及依赖血液中的氧气和营养物质的心脏组织。

尽管近期在心血管治疗方面的进展已经提高了冠状动脉病病人的 预期寿命，这主要是通过降低脂质水平手段的提高，损伤发生后的控 制，血液供应的外科手术恢复，异常心脏节律的抑制和再次梗塞的阻 止而实现的。然而，在用早期诊断早期阻止疾病的发生方面进展甚微。

治疗冠状动脉疾病的一个关键问题是合适的诊断方法。通常，这 种疾病的最初标志是由心肌缺血和心肌梗塞引起的突发性死亡。在死 于冠状动脉疾病的人中约有半数是突然死亡，此外，对于40％—60％ 确诊为患有冠状动脉疾病的病人而言，心肌梗塞是该病的最初表现。 不幸的是，约有40％的这类初发事件没有被病人注意到。由于各种各 样的原因，病人对病症的觉察与冠状动脉疾病的总数并不十分相关。 (Anderson&Kin，美国心脏学杂志123(5)：1312-1323(1992))。

尽管动脉粥样硬化的病因仍然未知，但疾病易感性的合适诊断可 以给病人提供充裕的时间以降低他们发生冠状动脉疾病的风险。一种 降低冠状动脉疾病发病风险的措施是改变病人的生活方式，例如戒 烟、锻炼、减肥和压力缓释。其他方法包括药物介入和使用阿斯匹林 来治疗高血压、血胆固醇过高及糖尿病。最后，遗传学的治疗方法有 望治疗那些罕见的导致心血管病家族史的遗传性状(例如，改变载脂 蛋白的代谢)。

鉴别高患病风险个体的能力使内科医生集中防治措施于那些可获 得最大益处的人，并将大大激励有患病风险的人遵循这样的措施。

冠状动脉疾病和炎症反应的相互关系：已经积累了证据表明冠状 动脉疾病和相关的血管病可能始于对动脉内皮中某种损伤形式的应 答。损伤可能是轻微的，也可能涉及全部内皮细胞剥落。损伤的病灶 位点引起对血浆组分的渗透性增强，使得血小板和单核细胞粘附在内 皮或内皮下膜的结缔组织上。从激活的血小板或单核细胞释放的炎症 因子又引起平滑肌细胞从血管中层迁移至血管内膜，随后这些细胞增 生。平滑肌细胞合成细胞外基质组分导致胶原、弹性纤维和蛋白多糖 的积聚。单核细胞也进入内膜，转变为巨噬细胞，积累脂类物质，促 进损伤加剧。短暂的或短期存在的损伤事件随后伴随着内皮细胞的再 生、内皮功能的恢复和损伤的治愈。然而，异常的炎症性事件可能引 起动脉粥样斑的发生。

多年来，流行病学的研究表明个体的遗传特性是冠状动脉疾病发 生的一个重要风险因子。心脏病家族史与增加的个体发生冠状动脉疾 病的风险密切相关。脂类和胆固醇代谢历来被认为对冠状动脉疾病有 主要的遗传学影响。例如在家族性的血胆固醇过高中，低密度脂类 (LDL)细胞受体缺陷与高水平的血浆低密度脂类及动脉粥化病的早 现有关系(Brown和Goldstein，科学191(4223)：150-4(1976))

现在普遍认为炎症是动脉粥化病致病过程中的一个重要因素 (Munro，Lab Invest.，58：249-261(1998)；Badimon等，循环，87：3- 16(1993)；Liuzzo等N.E.J.M，331(7)：417-24(1994)；Alexander，N.E.J.M， 331(7)：468-9(1994))。排列在血管上的内皮细胞受损伤导致炎症性细 胞因子包括IL—1(白细胞介素—1)，TNFα(肿瘤坏死因子α)的 积聚，和前列腺素类化合物及生长因子如前列腺素I2(PGI2)、血小板 衍生生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、粒细胞 —单核细胞刺激因子(GM—CSF)的释放。这些因子引起聚集在血 管壁内的炎症细胞例如单核细胞的积聚及调节。而后单核细胞释放其 它的炎症介质，包括IL—1、TNF、前列腺素E2(PGE2)、bFGF、转 化生长因子α及β(TGFα、TGFβ)，所有这些炎症介质募集更多的 炎症细胞到损伤部位，调节内皮细胞和平滑肌细胞的行为并引起动脉 粥样化斑的积聚。

几种炎症反应的产物，包括IL—1β已经在动脉粥样硬化损伤或 冠状动脉病态的内皮上鉴定出来(Galea，et al.，Ath.Thromb.Vasc.生物 学，16：1000-6(1996))。同样地，在冠状动脉疾病患者中测定了血清IL— 1β的滴度(Haselai，et al.，心脏学，76：24-8(1996))。尽管历来认为炎 症因子的出现是对损伤或单核细胞激活的应答，同样也可能是异常的 炎症反应引发了冠状动脉疾病或增大了患病可能性。这样，在这类炎 症反应中出现的细胞因子IL—1和TNF可能部分地决定个体患冠状动 脉疾病的风险。

IL—1基因簇的遗传学：IL—1基因簇位于2号染色体的长臂上 (2q13)，在430Kb的区域内(Nicklin等，染色体，19：382-4(1994))， 它至少包含了IL—1α(IL—1A)、IL—1β(IL—1B)和IL—1受 体拮抗剂(IL—1RN)的基因。激动剂分子IL—1α和IL—1β具有强 促炎活性且位于多种炎症级联放大反应的首端。通常通过诱导其它细 胞因子如白细胞介素—6和白细胞介素—8，它们的作用致使进入损伤 组织的细胞因子激活及再生，导致局部产生血管活性剂，脑发烧反应 和肝的急性期反应。所有这三种IL—1分子都与I型和II型IL—1 受体结合，但仅有I型受体将信号转化至细胞内。相反地，II型受体 作为一种诱骗受体从细胞膜剥落。因此受体拮抗剂和II型受体在反应 中都是抗炎的。

在多种自身免疫病和炎症性疾病包括类风湿性关节炎、肠炎、牛 皮癣等病的发病机制中，不合适的IL—1产生是一个重要因素。此外， 在IL—1的产率方面存在稳定的个体内差异，某些变异是由IL—1基 因座的遗传学差异造成的。因而，IL-1基因有理由成为决定炎症性疾 病部分遗传学可能性的候选者，大多数炎症都具有多基因成分的、多 因素的病因学。事实上，IL-1基因的某些等位基因过量表现的证据正 逐渐增加。

遗传学诊断：遗传学的传统诊断方法依赖于鉴别异常的基因产物 (如镰刀细胞贫血)或异常的表型(如精神发育迟缓)。这些方法对 发病晚且表型不易鉴别的遗传病的使用受到限制，如阿尔茨海默病。 现在遗传学检测手段的发展使鉴别表明有发生疾病可能性的基因突变 成为可能，甚至当疾病是多基因源性的。随着对多因素疾病遗传学基础的 不断了解，可以用分子生物学手段诊断的疾病的数量会不断增加(参见美 国专利号4,582,788；4,666,828；4,801,531：5,110,920)。

遗传检测(也称作遗传扫描，遗传分型或分子诊断)可被广义地定义为 在可分析的范围内检测病人的核酸以决定病人是否带有引起病态或与引起 病态的突变相连的突变(或等位基因或多态性)。连锁是指基因组上排列紧 密的基因序列趋向于一起遗传的现象。由于共同遗传的某种选择性优势， 两段序列也会连锁。

遗传病易感性的早期检测为医疗介入提供了最佳时机。早期遗传学诊断 通过预测及在临床可测的病症发生前早期介入为病人提供预后方案。在多 个成功治愈具有相似病症病人的例子中，熟练的遗传学检测方法能够区分 具有细微或无法测定差别的每个病人，并能提出更加适合于个体的治疗方 案。早期介入将来甚至可能涉及基因治疗这样的方法。

发明概述

本发明提供了一种预测冠状动脉疾病的试剂盒，其包括与 IL-1RN(VNTR)等位基因2或IL-1B(-511)等位基因2的DNA序列互补的寡 核苷酸，和一个对照样品，其中所述的对照样品含有IL-1RN(VNTR)等位 基因2或IL-1B(-511)等位基因2。本发明还提供了一种检测病人对冠状动 脉疾病易感性的体外方法，其包括对病人IL-1基因座的核酸进行分型以确 定基因型；并将所述的基因型与包括一个IL—1RN(VNTR)等位基因2 或1L—1B(-511)等位基因2的对照样品相比较，其中所述基因型与所述 对照样品的相似性表明对冠状动脉疾病增加的易感性。本发明还提供了一 种预测对冠状动脉疾病增加的易感性的体外方法，其包括在取自个体的 DNA样品中检测IL-1RN等位基因2或IL-1B等位基因2的至少一个拷贝 的存在，其中检测到所述的等位基因表明该个体对冠状动脉疾病的易感性 增加。

本发明提供了一种新方法，用于发生冠状动脉疾病及相关血管病易感性 的早期检测。还提供了早期检测所述易感性的试剂盒及鉴别其他与该病相 关的等位基因的方法。

一般地，预测冠状动脉疾病增加的风险率的方法包括检测选自由 IL-1RN等位基因2和IL-1B等位基因2组成的组的等位基因的至少一个拷 贝的存在。具有一或多个这些等位基因意味着冠状动脉疾病的风险率增加。 可以通过分析IL-1区的DNA直接检测等位基因，或通过分析RNA或DNA 的蛋白产物间接检测。

在另一个实施方案中，本发明可描述如下：从病人体内分离核酸，鉴别 呈现在IL-1基因蔟上的一或多个等位基因，将一或多个等位基因与对照样 品相比较。对照样品包括IL-1基因簇上已知与冠状动脉疾病相关的至少一 个等位基因。在优选的实施方案中，对照样品包括IL-1RN(VNTR)等位 基因2和/或IL-1B(—511)等位基因2。鉴别的来自病人体内的等位基因 与对照样品的相似性表明了病人对冠状动脉疾病的易感性。

本发明的另一个实施方案是检测预示冠状动脉疾病的等位基因的试剂 盒。试剂盒一般包括至少一条与IL-1基因家族的DNA互补的寡核苷酸， 和一个对照样品。正如上面提到的，对照样品是一个已知与冠状动脉疾病 有关的等位基因。试剂盒也可以包括DNA制样工具，DNA纯化工具，和 PCR试剂。此外，寡核苷酸可以带有可检测的标记。

本发明的另一个实施方案提供了一种鉴别与冠状动脉疾病相关的等位 基因的方法。该方法包括收集第一组没有冠状动脉疾病的病人群组，收集 第二组有冠状动脉疾病的病人群组(由血管学证据决定)，鉴别第一和第二 群组中IL-1等位基因的存在。与第一群组相比，在第二群组中过量存在的 等位基因被认为与冠状动脉疾病有关。

本发明其余的实施方案和有益效果在下文叙及，而且从本发明的描述看 它们是明显的或者可以从发明的实施中得知。

优选实施方案详述

正如本文广泛而具体描述的，本发明提供了预测病人发生冠状动脉疾病 易感性的方法及诊断试剂盒，寡核苷酸探针和这些方法中用到的其他试剂。 本发明还提供了一种鉴别与冠状动脉疾病相关的遗传标记的方法。

本文所用的短语冠状动脉疾病是指本领域的熟练人员普遍认可的、与供 应心脏的大血管或中等血管中动脉粥样化沉积有关的疾病或状态。这样， 冠状动脉疾病的意思是指以冠状动脉粥样化的病理学为基础的临床综合症 (包括但不局限于心绞痛，心肌梗塞，阵发性心绞痛和突发性缺血死亡)。

术语标记描述在个体间变化的DNA区域。例如，本文描述了来自 IL-1RN的“VNRT”标记。一个给定标记上的不同序列变体称为等位基因 或多态性。“VNRT”标记具有至少5个不同的等位基因，其中 的3个罕见。不同的等位基因可能只有一个碱基的变化，包括取代， 插入或缺失，也可能有一个影响多个碱基的变化，包括取代，插入， 缺失，重复，倒位和其组合。等位基因可以在人体DNA上直接检测 或者用RNA或蛋白质间接检测。

本文所用的检测等位基因的方法被不同地描述为基因分型，测定 或鉴别等位基因或多态性，或任何类似的短语。实际测定的等位基因 可能是一个引发疾病的突变，或是一个与引发疾病的突变相连的突 变。

本文所用的术语IL-1基因簇或IL-1基因座，包括所有位于或邻近 第二号染色体上2q13区的核酸，至少包括IL-1A，IL-1B和IL-1RN 基因及任何其他相连的序列。

术语IL-1RN(VNRT)等位基因2描述了IL-1RN基因的VNTR 标记的第二个等位基因。这个等位基因的特征是具有两个VNTR重复 的拷贝，用本文描述的引物扩增时产生一个240碱基对的产物。

术语IL-1B(—511)等位基因2描述了IL-1B基因的—511标记 的第二个等位基因。这个等位基因带有一个Bsu36I位点，用本文描述 的引物扩增并用Bsu36I消化后产生190碱基对和114碱基对的片段。

患病的可能性或倾向或易感性，意思是某些等位基因被发现与某 种特定的疾病状态有关。与健康人相比它们在患者中过量显现。因此， 这种等位基因的出现表明个体有患病的危险。

本发明涉及通过对病人IL-1基因座DNA的基因分型分析预测病 人患冠状动脉疾病的倾向或易感性的方法。将病人的基因型与包含一 或多个已知与疾病状态关联或相关的IL-1等位基因变体的对照样品相 比较。对照样品可以包含IL-1RN等位基因2和/或IL-1B等位基因2 及与它们相连的等位基因，或按照本文描述的方法鉴别出的其他基 因。对照样品中的等位基因可以是基因组的形式，或是克隆自IL-1基 因簇的DNA序列，或是适于进行分析的终产物。例如，在分析涉及 单克隆检测特异性表位时，对照样品可以包含所述等位基因的相应表 位或蛋白。

测定特定标记存在的技术可以是以杂交，片段大小或序列为基础 的核酸技术，例如限制性片段长度多态性(RFLP)或核酸测序。

这些技术也可以包括分析前扩增核酸的步骤。扩增技术对本领域 的熟练人员而言是已知的，包括克隆，聚合酶链反应(PCR)，特异 等位基因的PCR(PASA)，聚合酶链连接，巢式聚合酶链反应等。扩 增产物可以用多种方法分析，包括片段大小分析，限制性内切酶消化 后片段大小分析，检测反应产物中特殊标记的寡核苷酸引物，等位基 因特异性的寡核苷酸(ASO)杂交，序列测定等等。

此外，如果一个特定的等位基因产生了带有一个氨基酸变体的蛋 白，等位基因检测技术可以是以蛋白质为基础的。例如，氨基酸变体 的特异性表位可以用单克隆抗体检测。

本发明还提供了一种鉴别其他有发生冠状动脉疾病可能性的IL-1 等位基因的方法。将患病病人与未患病病人中存在的IL-1等位基因相 比较，以决定是否患病病人中某一等位基因过量显现。等位基因可以 是已经存在的已知的IL-1等位基因，或者其他的标记可以用任何本领 域已知的技术鉴别，包括那些基因邻近区域的DNA的序列测定。

本发明的另一个实施方案提供了检测病人冠状动脉疾病易感性的 诊断试剂盒。试剂盒可在症状发生前或产前使用。诊断试剂盒可以包 括一或多个能够与来自IL-1基因簇的核酸杂交的寡核苷酸。用所提供 的寡核苷酸，许多分析方式对基因分型是有用的。最常见的方式涉及 核酸结合在诸如滤膜，玻璃珠或微量滴定板等物质上。涉及的技术包 括斑点印迹法，RNA印迹法，DNA印迹法，PCR，FRLP等等。

寡核苷酸可以是各种天然的或合成的组分，例如合成的寡核苷酸， 限制性酶切片段，cDNAs，合成的PNA(蛋白核酸)等。分析也可采 用标记的寡核苷酸使分析易于鉴别。可使用的标记的例子包括放射性 标记，酶，荧光化合物，链霉抗生物素蛋白，抗生物素蛋白，生物素， 磁组分，金属结合组分，抗原或抗体组分等等。

试剂盒也可以包括DNA制样工具，例如AmpliCardTM(Sheffield 大学，Sheffield，英国S10 2JF)，在Tarlow JW等人的皮肤病学调查， 103：387-389(1994)中也有记载，这篇文献引入本文作参考。其他 合适的DNA制样工具包括DNA纯化工具和PCR试剂，例如10倍的 反应缓冲液，热稳定性的聚合酶，和/或脱氧核苷三磷酸。

下面的例子描述了本发明的实施方案，但不应视为限制本发明的 范围。

实施例1：单血管冠状动脉疾病的标记

本研究的目的是检测带有冠状动脉疾病早期表现形式，即单血管 冠状动脉疾病的病人是否在下列基因中更可能具有特异的等位基因： IL-1A(-889标记)，IL-1B(-511和+3953标记)，IL-1RN(VNTR标 记)或TNFα(-308标记)。多血管病通常在涉及多种使数据解释复 杂化的因子的疾病后期表现出来。因而，表现出胸部疼痛症状的病人 由心脏学家评价，有不止一条冠状动脉明显粥样硬化血管学证据的病 人从分析中排除出去。

病人群组：用传统技术碱性股或臂动脉的血管造影。在被检查的 病人中，85人在血管学上没有明显的腔不规则，被分为血管学上具有 正常冠状动脉的对照组。目测时如果心外膜的三条冠状血管之一带有 引起腔直径50％缩减的心外膜狭窄，则病人被分为单血管病组。58 个病人患有单血管病。多血管病的病人被排除。对照组和单血管病组 具有可比的平均年龄，分别为57.6±10.4岁和56.4±9.4岁。对照组 中男性与女性的比例是1:1.7，疾病组中的比例是2.6:1。

一般方法：涉及核酸技术的反应及操作除说明的之外，大体按照 萨姆布鲁克等人在分子克隆实验手册，冷泉港实验室出版(1989)中 描述的那样操作。聚合酶链反应(PCR)一般按照PCR方案：方法和 应用指南，学术出版社，圣地亚哥，CA(1990)描述的那样进行。 基因分型方法学按照美国专利4,666,828；4,683,202；4,801,531； 5,192,659；5,272,057和Mcdowell等人在关节炎与风湿病，38(2)：221-8 (1995)中描述的那样操作。

DNA的制备：用改良的盐析方法(NucleaonIITM，Scotlab，英国) 从全血中提取DNA。

IL-1RN的基因分型分析：Tarlow等人，人类遗传学，91：403-4 (1993)先前描述过与IL—1RN相关的等位基因。PCR反应中用的 酶来自Promaga(英国)。热循环仪是MJ Research DNA Engine或 Biometre。用ABI合成仪合成下列引物：

5’CTCAGCAACACTCCTAT 3’(SEQ ID No.1)

5’TCCTGGTCTGCAGGTAA 3’(SEQ ID No.2)

在镁离子终浓度为1.75毫摩尔，循环流程96℃1分钟1个循环； (94℃1分钟，60℃1分钟，70℃1分钟)30个循环；70℃2分钟1个 循环的条件下进行PCR扩增。PCR扩增后不同的等位基因在用溴化 乙锭染色的2％的琼脂糖凝胶上电泳，在紫外光下显影并鉴别。每次 实验都做不带DNA的阴性对照。

IL-1RN基因的第二个内含子包含一个可变数串联重复区 (VNTR)，产生的5个等位基因如下：

等位基因1包含4个串联重复，表现为412个碱基对的PCR产物；

等位基因2包含2个串联重复，表现为240个碱基对的PCR产物；

等位基因3包含3个串联重复，表现为326个碱基对的PCR产物；

等位基因4包含5个串联重复，表现为498个碱基对的PCR产物；

等位基因5包含6个串联重复，表现为584个碱基对的PCR产物；

IL-1B(-511)的基因分型分析：diGiovine在人类分子遗传学， 1(6)：450(1992)中描述了IL-1B的-511标记。IL-1B-511碱基处单碱 基变化(C/T)标记基于等位基因1(C)的AvaI位点和等位基因2 (T)的Bsu36I位点被鉴别。在95℃2分钟1个循环，(95℃1分钟， 53℃1分钟，74℃1分钟)35个循环；74℃4分钟1个循环的条件下 进行PCR。PCR产物分析是用限制性内切酶AvaI和Bsu36I在37℃消 化8小时，再用8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析片段大小。下列引物 用ABI DNA合成仪合成(Clark等，Nucl.Acids.Res.，14：7897-7914 (1986)[印刷错误刊登在Nucl.Acids.Res.，15(2)：868，(1987)]； GENBANK X04500)：

5’TGGCATTGATCTGGTTCATA 3’(-702/-682)(SEQ ID No：3)

5’GTTTAGGAATCTTCCCACTT 3’(-417/-397)(SEQ ID No：4)

结果：IL-1A(-899标记)，IL-1B(+3953标记)，或TNFα(-308 标记)基因上不同等位基因的频率在对照组与疾病组之间并无显著差 别。然而，IL-1RN基因VNTR标记的等位基因2在单血管病病人中 明显过量显现，相对对照组为41％比22％。据估计，带有至少一个 等位基因2拷贝的人患单血管冠状动脉疾病的可能性是等位基因2阴 性的人的2.44倍(概率＝2.44，p＝0.003，95％置信区间＝1.35—4.43)。

此外，带有两个拷贝的人，即IL-1RN等位基因2是纯合子的人 患单血管冠状动脉疾病的可能性是等位基因2阴性的人的5.36倍(概 率＝5.36，p＝0.005，95％置信区间＝1.6—17.97)。

与对照组的38％相比，IL-1B基因—511标记等位基因2一个拷 贝的携带情况在单血管冠状动脉疾病中增至52％。据估计，带有至少 一个等位基因2拷贝的人患单血管冠状动脉疾病的可能性是等位基因 2阴性的人的1.74倍。这一结果并不十分显著，但小量的样本限制了 研究。

这些发现表明IL-1RN的等位基因2是冠状动脉粥样硬化易感性 的标志。根据该疾病相关等位基因的一个(杂合子)或两个(纯合子) 拷贝，这个等位基因与2.4至5.4倍的冠状动脉疾病增加风险相关。 相对于其他常见的风险因子，该等位基因对冠状动脉疾病风险的影响 见表1。

此外，发现IL-1B基因的一个等位基因与单血管冠状动脉疾病 有关，这个等位基因与1.74倍的冠状动脉疾病增长风险相关。

表1

  风险因子 冠状动脉疾病 增加的风险   抽烟(1包/天) 2.5 惯于久坐的生活方式 1.9 严重肥胖(女性) 3.3 高血压 2.1 高胆固醇(>240) 2.4 IL-1RN(VNTR)等位基因2-杂合子 2.4 IL-1RN(VNTR)等位基因2-纯合子 5.4 IL-1B(-511)等位基因2 1.74—1.92

实施例2：多血管冠状动脉疾病的标记

本研究的目的是检测带有冠状动脉粥样硬化晚期形式或弥散形式 的病人，即多血管冠状动脉疾病的病人是否更有可能在IL-1或TNF α基因簇的基因上具有特异的等位基因。

病人群组：除了目测时不止一条心外膜冠状血管带有引起腔直径 >50％缩减的心外膜狭窄的病人被分为患多血管冠状动脉疾病之外， 按照例1对病人群组进行检测。在被检查的病人中，86人被分为血管 学上具有正常冠状动脉的对照组，315人被发现患有多血管冠状动脉 疾病。对照组和多血管疾病组具有可比的平均年龄，分别为57.6±10.4 岁和60.8±1.13岁。对照组中男性与女性的比例为1:1.7，疾病组中 的比例为2.6:1。

一般方法：反应和方法同实施例1。

结果：对照组和疾病组病人在IL-1A(-899标记)，IL-1B(+3953 标记)，IL-1RN(VNTR标记)基因不同等位基因的频率上无显著差 别。然而，IL-1B基因-511标记的Bsu36I等位基因(等位基因2) 一个拷贝的携带情况在多血管病病人中增加，相对于对照为54％比 38％。据估计，带有至少一个-511标记等位基因2拷贝的人患多血管 冠状动脉疾病的可能性是等位基因2阴性的人的1.92倍。(概率 ＝1.92，p＝0.009，95％置信区间＝1.17—3.16)。-511标记至少在这一群 体中未表现出剂量效应。

总之，IL-1B的一个等位基因被发现与多血管冠状动脉疾病相关。 这个等位基因与1.92倍的冠状动脉疾病增长风险率相关。

单血管与多血管冠状动脉疾病分别显示出与IL-1基因簇的不同基 因有关。IL-1R.A.以产生单血管病表型的方式调节IL-1β的作用， 可能是它们之间真正的生物学差别。此外，可能事实上两个基因作为 一个整体与冠状动脉疾病相关，而这里观察到的联系是表现出冠状动 脉疾病的特定基因总数作用的结果。无论是何种解释，IL-1的生物学 与冠状动脉疾病之间已建立起紧密的联系。

通过研究说明书及实施本文公开的发明，本发明的其它实施方案 及用途对本领域的熟练人员是显而易见的。本文引用的全部文献引入 本文作参考。就后文权利要求表示的本发明的真实范围和精神而言， 说明书和实施例仅应被视作示范性的。

发明背景