P2D10是举例的鼠抗体，其特异性结合人TWEAK并抑制TWEAK功能。 也公开了P2D10抗体的变体，包括举例的人源化变体。这些抗体、其它抗 TWEAK抗体、及其它TWEAK阻断剂可用于治疗或预防TWEAK-介导的疾 病，如炎性疾病及其它本文公开的疾病。
抗TWEAK抗体
本文的公开包括具体举例的抗TWEAK抗体如P2D10、huP2D10-1、和 huP2D10-2的序列。可例如，通过制备并表达编码所述(recited)氨基酸序列的 合成基因，或者通过突变人种系基因来提供编码所述氨基酸序列的基因，从 而制备具体抗体如上述这些抗体。进一步地，这些抗体及其它抗TWEAK抗 体可例如用一或多种以下方法来制备。
现有多种获得抗体，尤其人抗体的方法。一种举例的方法包括筛选蛋白 质表达文库，例如噬菌体或核糖体展示文库。对噬菌体展示的描述见例如美 国5,223,409；Smith(1985)Science228：1315-1317；WO92/18619；WO 91/17271；WO92/20791；WO92/15679；WO93/01288；WO92/01047；WO 92/09690；和WO90/02809。对Fab在噬菌体上展示的描述见例如美国专利 5,658,727；5,667,988；和5,885,793。
除了应用展示文库，其它方法也可用于获得结合TWEAK的抗体。例如， 可以用TWEAK蛋白质或其肽作为非人动物如啮齿类动物如小鼠、仓鼠或大 鼠的抗原。
一个实施方案中，非人动物包含人免疫球蛋白基因的至少一部分。例如， 可以用人Ig基因座的大片段改造有小鼠抗体生成的缺陷的小鼠品系。用杂 交瘤技术，可以制备并选择具有所需特异性的由所述基因衍生的抗原特异性 单克隆抗体。参见例如XENOMOUSETM，Green et al.(1994)Nature Genetics 7：13-21，U.S.2003-0070185，WO96/34096，和WO96/33735。
另一个实施方案中，从非人动物获得单克隆抗体，然后进行修饰，如人 源化或脱敏。Winter描述了举例的可用于制备本文所述人源化抗体的CDR- 移植方法(U.S.5,225,539)。具体人抗体的所有或一些CDR可以用非人抗体的 至少部分来置换。可能仅需要置换结合所需的CDR或这些CDR的结合决定 簇，来获得结合TWEAK的有效人源化抗体。
人源化抗体可以通过用来自人Fv可变区的等效序列置换不直接参与抗 原结合的Fv可变区序列来制备。制备人源化抗体的常用方法见Morrison，S. L.(1985)Science 229：1202-1207，Oi et al.(1986)BioTechniques4：214，和US 5,585,089；US5,693,761；US5,693,762；US5,859,205；和US6,407,213。那些 方法包括分离、操作(manipulate)和表达核酸序列，该序列编码来自至少一条 重链或轻链的所有或部分的免疫球蛋白Fv可变区。这些核酸的来源是本领 域技术人员公知的，并且例如，可以从产生抗预定靶的抗体的杂交瘤(如上 述)，从种系免疫球蛋白基因，或从合成的构建体获得。然后将编码人源化 抗体的重组DNA克隆到合适的表达载体中。
人种系序列，例如，公开在Tomlinson，I.A.et al.(1992)J.Mol.Biol. 227：776-798；Cook，G.P.et al.(1995)Immunol.Today16：237-242；Chothia，D. et al.(1992)J.Mol.Bio.227：799-817；和Tomlinson et al.(1995)EMBO J 14：4628-4638中。V BASE目录提供了人免疫球蛋白可变区序列的全面目录 (Tomlinson，I.A.et al.编辑的MRC Centre for Protein Engineering，Cambridge， UK)。这些序列也可用作人序列(如框架区和CDR)的来源。例如美国专利 6,300,064所述，也可使用共有人框架区。
也可以通过具体缺失人T细胞表位或用WO98/52976和WO00/34317 公开的方法“脱敏”，来修饰非人的结合TWEAK的抗体，简而言之，可以分 析抗体的重链和轻链可变区中结合MHC II类的肽；这些肽代表潜在的T-细 胞表位(如WO98/52976和WO00/34317所限定)。为了检测潜在的T-细胞表 位，可以应用称为“肽联系(threading)”的计算机建模方法，另外可以在人MHC II类结合肽的数据库中检索在VH和VL序列中存在的基序，如WO98/52976 和WO00/34317所述。这些基序结合18个主要MHC II类DR同种异型 (allotype)中的任一个，由此构建潜在的T细胞表位。可以通过取代可变区中 的少量氨基酸残基，或优选通过多个单氨基酸取代，去除所检测的潜在T- 细胞表位。尽可能地进行保守取代。通常，但不是绝对地，可以使用在人种 系抗体序列的位置常见的氨基酸。在确定了脱敏性改变后，通过诱变或其它 合成方法(如从头合成，盒式置换等)构建编码VH和VL的核酸。诱变后的可 变区序列可任选与人的恒定区，如人IgG1或κ恒定区融合。
在一些情况下，潜在的T细胞表位可包括已知或据预测对抗体功能重要 的残基。例如，潜在的T细胞表位通常偏向(biased)CDR。另外，潜在的T 细胞表位可出现在对于抗体结构和结合重要的框架残基上。导致去除这些潜 在表位的那些改变有时需要更多检查(scrutiny)，如通过制备并测试有无此改 变的链来检查。如果可以，与CDR重叠的潜在T细胞表位可以通过CDR区 域外的取代来除去。有时，CDR区域内的改变是唯一选择，因此可以测试 有无此取代的变体。其它时候，去除潜在T细胞表位所需的取代是位于框架 内可能对抗体结合关键的残基位置上。此时，测试有无此取代的变体。因此， 有时设计多种用不同方式脱敏的重链和轻链可变区，并测试多种重链/轻链组 合，来鉴定最佳脱敏抗体。然后，通过考虑不同变体的结合亲和力及脱敏程 度，尤其可变区中仍存在的潜在T细胞表位数，来选择最终的脱敏抗体。可 用脱敏修饰任何抗体，如包含非人序列的抗体，如合成抗体、鼠抗体、其它 非人单克隆抗体，或从展示文库分离的抗体。
也可使用其它人源化抗体的方法。例如，其它方法可以依赖于抗体的三 维结构，在结合决定簇的三维结构附近的框架位置，以及免疫原性肽序列。 参见例如WO90/07861；美国专利5,693,762；5,693,761；5,585,089；5,530,101； 和6,407,213；Tempest et al.(1991)Biotechnology 9：266-271。还有另一种方法 称为“人源化改造(humaneering)”，对其的描述见例如U.S.2005-008625。
所述抗体可包含人Fc区，如野生型Fc区或包含一或多个改变的Fc区。 一个实施方案中，改变如突变恒定区以修饰所述抗体的性质(如提高或降低 如下的一或多个：Fc受体结合，抗体糖基化，半胱氨酸残基数目，效应细胞 功能，或补体功能)。例如，人IgG1恒定区可在一或多个残基，如残基234 和237之一或多个发生突变。抗体可在重链CH2区有突变，所述突变降低 或改变效应功能，如Fc受体结合和补体活化。例如，抗体可有美国专利 5,624,821和5,648,260所述的突变。抗体也可有稳定免疫球蛋白两条重链之 间二硫键的突变，如IgG4铰链区中的突变，这在本领域已经公开(如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30：105-08)。也见例如U.S.2005-0037000。
亲和力成熟。一个实施方案中，例如通过诱变修饰抗TWEAK抗体，来 提供经修饰的抗体的库(pool)。然后评价这项经修饰的抗体，来鉴定功能性 特征发生改变(如结合提高，稳定性提高，抗原性降低或体内稳定性提高) 的一或多种抗体。一个方案(implementation)中，用展示文库技术来选择或筛 选经修饰的抗体的库。然后，例如通过使用较高的严谨度或更有竞争力的结 合和洗涤条件从第二文库中鉴定出具有较高亲和力的抗体。也可使用其它筛 选技术。
一些方案中，所述诱变靶向那些已知或很有可能位于结合界面的区域。 例如，如果所鉴定的结合蛋白质是抗体，那么诱变可以针对本文所述重链或 轻链的CDR区。进一步地，诱变可以针对邻近或邻接CDR的框架区，如特 别是在与CDR相距(junction)10、5或3个氨基酸残基范围内的框架区。对 于抗体，诱变也可限于一或数个CDR，如进行逐步改进。
一个实施方案中，用诱变来使抗体更类似一或多个种系序列。一种举例 的种系化方法包括：鉴定与所述分离的抗体的序列类似(具体数据库中最类 似)的一或多个种系序列。然后在该分离的抗体中以增加方式(incrementally)、 组合方式或两种方式一起(在氨基酸水平)进行突变。例如，制备核酸文库， 使其包含编码一部分或所有可能的种系突变的序列。然后评估被突变的抗 体，从而例如鉴定相比于分离的抗体具有一或多个其它种系残基、且仍有效 (如具有功能许不敢活性)的抗体。一个实施方案中，向分离的抗体中引入尽 可能多的种系残基。
一个实施方案中，用诱变将一或多个种系残基取代或插入到CDR区中。 例如，种系CDR残基可以来自与被修饰的可变区类似(如最类似)的种系序 列。诱变后，可以评估所述抗体的活性(结合或其它功能活性)，来确定所述 一或多个种系残基是否被耐受。在框架区可进行类似诱变。
可以以不同方式选择种系序列。例如，选择符合预定的可选性或相似性 标准的种系序列，所述标准为，例如与供体非人抗体相比有至少某个百分比 的同一性，如至少75，80，85，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，或99.5％的 同一性。可用至少2，3，5，或10个种系序列进行选择。对于CDR1和CDR2， 鉴定相似的种系序列包括选择一个这样的序列。对于CDR3，鉴定相似的种 系序列包括选择一个这样的序列，但也可包括使用两个分别构成氨基末端部 分和羧基末端部分的种系序列。其它方案中，使用超过一个或两个种系序列， 从而例如形成共有序列。
其它实施方案中，可修饰所述抗体，使之具有改变的糖基化模式(即从 原来的或天然的糖基化模式发生改变)。本文中的“改变”指缺失了一或多个碳 水化合物部分和/或将一或多个糖基化位点添加到原来的抗体中。将糖基化位 点加入迄今公开的抗体中可通过改变氨基酸序列、使其包含糖基化位点共有 序列而实现；这些技术是本领域公知的。其它增加抗体上的碳水化合物部分 数目的方法是通过化学方法或酶促方法将糖苷与抗体的氨基酸残基偶联。对 这些方法的描述见WO87/05330和Aplin and Wriston(1981)CRC Crit.Rev. Biochem.22：259-306。可以如本领域所述通过化学方法或酶促方法去除在抗 体上存在的任何碳水化合物部分(Hakimuddin et al.(1987)Arch.Biochem. Biophys.259：52；Edge et al.(1981)Anal.Biochem.118：131；和Thotakura et al. (1987)Meth.Enzymol.138：350)。美国专利5,869,046介绍了一种修饰，其通 过提供拯救受体结合表位来延长体内半寿期。
一个实施方案中，抗体具有与P2D10的CDR序列非实质区别的CDR 序列。非实质区别包括次要氨基酸改变，如CDR，如Chothia或Kabat CDR 序列中任何通常的5-7个氨基酸中有1或2个被取代。通常氨基酸被具有相 似电荷、疏水性或立体化学特征的相关氨基酸取代。这些取代在本领域一般 技术人员了解的范围内。与CDR中不同，可以在结构框架区(FR)进行更为 实质许不敢的改变而不会负面影响抗体的结合性质。对FR的改变包括但不 限于，人源化非人衍生的框架或改造那些对抗原接触或稳定结合位点重要的 框架残基，如改变恒定区的类或亚类，改变那些可能改变效应功能如Fc受 体结合功能的具体氨基酸残基(Lund et al.(1991)J.Immun.147：2657-62； Morgan et al.(1995)Immunology86：319-24)，或改变该恒定区的来源物种。
抗TWEAK抗体可以是全长抗体形式，或是抗体片段形式，如Fab， F(ab’)2，Fd，dAb和scFv片段。其它片段包括包含单个可变区的蛋白质，如 camel或camelized dormain。参见例如U.S.2005-0079574和Davies et al.(1996) Protein Eng.9(6)：531-7。
抗体制备。可以在细菌细胞如大肠杆菌细胞中制备一些抗体如Fab。也 可以在真核细胞中制备抗体。一个实施方案中，抗体(如scFv)在毕赤酵母 (Pichia)(参见，例如Powers et al.(2001)J Immunol Methods.251：123-35)、汉 逊酵母(Hanseula)或糖酵母(Saccharomyces)等酵母细胞中表达。
在优选的实施方案中，抗体在哺乳动物细胞中产生。表达抗体的哺乳动 物宿主细胞例如包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(包括dhfr-CHO细胞，见 Urlauband Chasin(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA77：4216-4220，使用DHFR 选择标记，例如见Kaufman and Sharp(1982)Mol.Biol.159：601-621)、淋巴 细胞系例如NS0骨髓瘤细胞和SP2细胞、COS细胞、以及转基因动物(例如 转基因哺乳动物)的细胞。例如，所述细胞是哺乳动物上皮细胞。
重组表达载体除了携带编码多样化免疫球蛋白结构域的核酸序列，还可 以携带其它序列，如调节宿主细胞中的载体复制的序列(如复制起点)和选择 性标记基因。选择性标记基因有利于选出引入了所述载体的宿主细胞(参见， 例如美国专利4,399,216，4,634,665和5,179,017)。例如，通常选择性标记基 因赋予已经引入载体的宿主细胞对药物，如G418、潮霉素或甲氨蝶呤 (methotrexate)的抗性。
在一例抗体表达系统中，将编码抗体重链和抗体轻链的重组表达载体通 过磷酸钙介导的转染引入dhfr-CHO细胞。在该重组表达载体内，所述抗体 的重链和轻链基因各自与增强子/启动子调节元件(如源自SV40、CMV、腺 病毒等，诸如CMV增强子/AdMLP启动子调节元件或SV40增强子/AdMLP 启动子调节元件)可操作连接，来驱动所述基因的高水平转录。重组表达载 体也携带DHFR基因，其允许通过甲氨蝶呤选择/扩增来选出转染了所述载 体的CHO细胞。对选出的转化宿主细胞进行培养，使之表达抗体重链和轻 链，并从培养基中回收所述抗体。用标准分子生物学技术制备重组表达载体， 转染宿主细胞，选出转化体，培养宿主细胞，并从培养基回收所述抗体。例 如，可以利用蛋白A或蛋白G偶联基质通过亲和层析分离一些抗体。
对于一些含Fc区的抗体，抗体制备系统优选合成含糖基化Fc区的抗体。 例如，IgG分子的Fc区在CH2区的天冬酰胺297处糖基化。该天冬酰胺是 用双触角型寡糖(biantennary-type oligosaccharide)进行修饰的位置。已证实， 这种糖基化是Fcγ受体和补体C1q介导的效应功能所必需的(Burton and Woof(1992)Adv.Immunol.51：1-84；Jefferis et al.(1998)Immunol.Rev. 163：59-76)。在一个实施方案中，Fc区可以在哺乳动物表达系统中产生，从 而使对应于天冬酰胺297的残基适当糖基化。所述抗体的Fc区或其它区域 也可包括其它真核翻译后修饰。
抗体也可以由转基因动物产生。例如，美国专利5,849,992描述了在转 基因哺乳动物乳腺中表达抗体的方法。构建转基因，使其含有乳特异性启动 子、编码目标抗体的核酸序列、以及用于分泌的信号序列。由这类转基因哺 乳动物中的雌性动物产出的乳汁含有分泌至其中的目标抗体。所述抗体可以 从乳汁中纯化，或在一些情况下直接使用。
鉴定
抗体的结合特性可以用任何标准方法如下述方法之一来测量： BIACORETM分析，酶联免疫吸附试验(ELISA)，荧光共振能量转移(FRET)， X线晶体成像技术，序列分析和扫描诱变。可以在体外或在患如本文所述疾 病的动物模型中评价蛋白质抑制TWEAK的一或多种活性的能力。优选地， 所述抗体具有统计学显著的效果，这表明所述抗体抑制TWEAK的一或多种 活性。
一个实施方案中，评价抗体对TWEAK刺激皮肤成纤维细胞中IL-8、 MMP-1、PGE2、IL-6、IP-10和RANTES生成的能力的抑制。合适的实验条 件参见Chicheportiche et al.(2002)Arthritis Res.4(2)：126-133。
另一个实施方案中，评价抗体抑制TWEAK刺激内皮细胞增殖的能力。 见例如U.S.2003-0211993，其描述了如下进行的增殖试验(及其它可用的实 验)：将HVEC接种在96孔微滴板中达到亚汇合(subconfluence)(4000细胞/ 孔)，并在不加供应商的生长补充物(supplier growth supplement)的CS-C培养 基中过夜培养。将培养基换成完全培养基或基础培养基。在基础培养基中培 养细胞，该培养基中含或不含TWEAK(100ng/ml)，bFGF(1/500至1/1000 稀释的bFGF生长补充物(Clonetics)或1ng/ml(R&D Systems))，VEGF(10 ng/ml)或这些因子的组合。在指定情况下，也加入10μg/ml的被测抗体或对 照抗体。细胞在37℃、5％CO2温育3天，用3H-胸苷脉冲最后10小时的培 养物来测量增殖。用BETAPLATETM(EG&G Wallac，Gaithersburg，Md.)测量 结合细胞的放射性。由TWEAK或由TWEAK与bFGF组合介导的增殖下降 表明，所述抗体有效阻断TWEAK活性。
表面等离子体共振(SPR)。目标蛋白质与靶(如TWEAK)的结合相互作用 可用SPR分析。SPR或生物分子相互作用分析(BIA)实时检测生物特异性相 互作用，而无需标记任何相互作用物(interactant)。在BIA芯片结合表面的质 量改变(指示发生了结合)导致邻近表面的光折射率的改变(表面等离子体共 振(SPR)的光学现象)。折射率的改变产生了可检测信号，测定该信号作为生 物分子之间的实时反应的指标。对使用SPR的方法的描述见例如美国专利 5,641,640；Raether(1988)Surface Plasmons Springer Verlag；Sjolander and Urbaniczky(1991)Anal.Chem.63：2338-2345；Szabo et al.(1995)Curr.Opin. Struct.Biol.5：699-705和BIAcore International AB(Uppsala，Sweden)提供的网 上资源。来自SPR的信息可用于提供对生物分子与靶结合的平衡解离常数 (Kd)及动力学参数包括Kon和Koff的准确定量测量。
可以用BIAcore层析技术通过评估不同抗体彼此竞争结合TWEAK(如人 TWEAK，尤其可溶性人TWEAK)的能力来直接定位表位，所述技术参见 Pharmacia BIAtechnology Handbook，″Epitope Mapping″，Section6.3.2，(May 1994)；也参见Johne et al.(1993)J.Immunol.Methods，160：191-198。在例如 Western印迹和免疫沉淀试验中评价抗体的其它一般指导可参见Antibodies： A Laboratory Manual，ed.by Harlow and Lane，Cold Spring Harbor press (1988))。
TWEAK-相关疾病
抗TWEAK抗体(例如本文所述抗体)可用于治疗多种病症，如TWEAK- 相关性疾病。例如，所述抗体可用于治疗患者的炎性、免疫性或自身免疫性 疾病，以及瘤形成疾病。炎性TWEAK-相关疾病的例子包括，类风湿性关节 炎，银屑病关节炎(psoriatic arthritis)，强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis)， 炎性肠病(inflammatory bowel disease)(包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis) 和克隆病(Crohn’s disease))，银屑病(psoriasis)或炎性肌炎(inflammatory myositis)。可治疗的炎性疾病的其它例子包括，郎格汉斯细胞(Langerhans-cell) 的组织细胞增多症(histiocytosis)，成人呼吸窘迫综合征(adult respiratory distress syndrome)/闭塞性细支气管炎(bronchiolitis obliterans)，韦格纳肉芽肿 病(Wegener′s granulomatosis)，脉管炎(vasculitis)，恶病质(cachexia)，口炎 (stomatitis)，特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis)，皮肌炎 (dermatomyositis)或多肌炎(polymyositis)，非传染性巩膜炎(non-infectious scleritis)，牵累肺的慢性结节病(chronic sarcoidosis with pulmonary involvement)，脊髓增生异常综合征/有过多的未成熟细胞的难治性贫血 (myelodysplastic syndrome/refractory anemia with excess blasts)，溃疡性结肠 炎，中度到重度的慢性阻塞性肺病和巨细胞动脉炎(giant cell arteritis)。
可以给有风险、已确诊、或患有这些疾病之一的受试者施用抗TWEAK 抗体，其用量和施用时间导致提供总体(overall)治疗效果。抗TWEAK抗体 可以单独施用或与其它药剂联用。例如，USSN60/679,518描述了联用 TWEAK阻断剂与TNF-α阻断剂的方法。在组合疗法的情况中，施用的量和 时间可以提供，例如协同治疗效果。进一步地，可以将施用TWEAK阻断剂 (有或无第二种药剂)作为初步(primary)治疗，例如一线治疗(first line treatment)，或作为第二步(secondary)治疗，例如在受试者对之前施用的疗法 (即除了用TWEAK阻断剂的疗法之外的疗法)反应不足的情况下。
类风湿性关节炎(RA)
抗TWEAK抗体(如本文所述抗体)可用于治疗类风湿性关节炎及相关疾 病。类风湿性关节炎(″RA″)是导致要见于关节的痛、肿(swelling)、僵硬 (stiffness)和功能丧失的慢性炎性疾病。RA常始于滑膜，即围绕关节产生保 护性囊的膜。在很多患RA的个体中，白细胞从循环浸润到滑膜造成持续的 异常炎症(如滑膜炎(synovitis))。因此，滑膜发炎，引起发热(warmth)、红、 肿和痛。软骨中的胶原蛋白(collagen)逐渐被破坏，使关节腔变窄，并最终破 坏骨。炎症导致病变区的侵蚀性骨破坏。在这个阶段，滑膜的细胞异常地生 长分裂，使正常的薄滑膜变厚，并导致关节触之肿胀且浮肿(puffy)。
随RA进展，异常的滑膜细胞侵入并破坏关节内的软骨和骨。支持并稳 定关节的周围肌肉、韧带和肌腱(tendon)可变弱，不能正常工作。RA也可引 起更广泛的骨流失(loss)，这可导致骨质疏松(osteoporosis)，使骨变脆和更易 折断。所有这些作用都导致与RA有关的痛、损害(impairment)和变形 (deformities)。会受影响的区域包括腕、指节(knuckle)、膝和足跖球(the ball of the foot)。通常，多个关节可受牵涉，甚至脊柱(spine)都可受累。在约25％ 患RA的人中，小血管的炎症可在皮下引起类风湿小结，或肿块(lump)，它 们常形成于紧靠关节处。随疾病进展，还可积液，尤其是在踝(ankle)。很多 患RA的患者也发生贫血，或红细胞正常数目降低。
RA包括多种疾病亚型，如费尔蒂综合征(Felty′s syndrome)，血清阴性的 RA，″经典(classical)″RA，进展性和/或复发性RA，和伴有脉管炎的RA。一 些专家将此病分为1型和2型。1型较不常见，最多持续数月，不留下永久 残疾。2型是慢性的，持续数年，有些例子中持续终生。RA也能表现为皮 下类风湿小结，内脏结节(visceral nodule)，脉管炎导致的腿溃疡或多发性单 神经炎(mononeuritis multiplex)，胸腔或心包积液(pleural or pericardial effusions)，淋巴结病(lymphadenopathy)，费尔蒂综合征，干燥综合征(Sjogren′s syndrome)和巩膜外层炎(episcleritis)。这些疾病亚型以及显示一或多种上述症 状的受试者可用本文所述抗体来治疗。
RA可用多种临床衡量标准(measure)来评价。一些指标(indicia)举例包括 总Sharp得分(TSS)，Sharp侵蚀得分，及HAQ残疾指数(index)。本文的方 法可用于改进这些指标的至少一项。用于治疗RA的抗TWEAK抗体的治疗 性能可以在动物模型上评估，如用小鼠胶原蛋白诱导的关节炎(mCIA)模型 (参见例如Stuart et al.，J.Clin.Invest.69：673-683(1982)。
多发性硬化
抗TWEAK抗体(如本文所述抗体)可用于治疗多发性硬化(MS)及相关疾 病。MS是中枢神经系统疾病，其特征为炎症和脱髓鞘(loss of myelin sheath)。
MS患者可用诊断临床确诊的(definite)MS的标准来鉴定，该标准是由诊 断MS的工作室(workshop)确立的(Poser et al.，Ann.Neurol.(1983)13：227)。简 单的说，患临床确诊的MS的个体已有两次发病(attack)，并有任何(either)两 种损害(lesion)的临床实证(clinical evidence)，或一种损害的临床实证以及另 一种损害的能产生临床症状体征的解剖或生化异常(paraclinical)的实证。确 诊的MS也可以用两次发病的实证、脑脊液中IgG的寡克隆(oligoclonal)带， 或发病、两种损害的临床实证及脑脊液中IgG的寡克隆带的组合来诊断。
对多发性硬化的有效治疗可用多种不同方式来检验。用如下参数来评定 (gauge)治疗的有效性。使用三个主要标准：EDSS(残疾状况拓展量化表)、恶 化表现或MRI(磁共振成像(magnetic resonance imaging))。EDSS是给MS所 致的临床损伤(impairment)分级的工具(Kurtzke(1983)Neurology33：1444)。评 价8个功能系统的神经学损伤的种类和严重程度。主要地，在治疗前，评价 患者如下系统的损伤：锥体(pyramidal)，小脑，脑干，感觉，肠和膀胱，视 觉，大脑等等。以指定的(defined)间隔进行随访。评分从0(正常)到10(MS 致死)。EDSS下降表示治疗有效(Kurtzke(1994)Ann.Neurol.36：573-79)。
多发性硬化的动物模型例如实验性自身免疫性脑炎(autoimmune encephalitis，EAE)小鼠模型，如Tuohy et al.(J.Immunol.(1988)141： 1126-1130)，Sobel et al.(J.Immunol.(1984)132：2393-2401)和Traugott(Cell Immunol.(1989)119：114-129)所述。可在诱导EAE前给小鼠施用本文所述抗 体。用特征性(characteristic)标准评价小鼠来确定所述抗体的效力。
中风
抗TWEAK抗体(如本文所述抗体)可用于治疗(如在最近的48，24，12，8 或2小时内)患中风如血栓栓塞性(thromboembolic)或出血性(hemorrhagic)中 风的受试者，或预防中风，例如在有中风风险的受试者中预防中风。方法例 如参见USSN60/653,811所述。中风是由血管病导致的急性脑损伤的统称。 中风可分为至少两大类：出血性中风(由血液渗漏到正常血管外导致)和缺血 性中风(由于供血不足导致的脑缺血)。一些可导致缺血性中风的事件包括血 栓症(thrombosis)，栓塞(embolism)，和全身性灌注不足(systemic hypoperfusion) (导致缺血和低氧(hypoxia))。
中风通常由于缺氧(oxygen deprivation)和继发事件导致神经性死亡和脑 损伤。由于缺乏供血或其它损害导致死亡的脑区域被称为梗死(infarct)。有时， 本文所述治疗可用于缩小梗死范围或使之最小化，如通过减少引起神经性死 亡或损伤的继发事件来实现。
由在脑动脉壁上形成的血栓导致的脑动脉阻塞通称为脑血栓形成。在脑 栓塞中，阻断(blocking)脑动脉的栓塞性(occlusive)物质来自(arises downstream)循环(如血栓从心脏被运到脑动脉)。因为难于分辨中风是由于血 栓还是栓塞，使用术语血栓栓塞(thromboembolism)来包括这两种中风。全身 性灌注不足可能是血量(blood level)下降，红细胞压积下降，低血压或心脏不 能充分泵血的结果。
而且，抗TWEAK抗体可用作预防性中风疗法或为其一部分，例如施用 到经历过短暂性缺血发作(transient ischemic attack，TIA)或正表现出TIA症状 的受试者。
神经性疾病
抗TWEAK抗体(如本文所述抗体)可用于治疗或预防神经性疾病，如机 械性神经性创伤(mechanical neuronal trauma)和神经变性(neurodegenerative) 疾病。机械性神经性创伤例如有脊髓损伤(SCI)和创伤性脑损伤(TBI)。神经 变性疾病例如有肌萎缩性侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)，进行 性球麻痹(progressive bulbar palsy，PBP)，原发性侧索硬化(primary lateral sclerosis，PLS)，进行性肌萎缩(progressive muscular atrophy，PMA)，帕金森 病(Parkinson′s disease)，亨廷顿病(Huntington′s disease，HD)，和阿尔茨海默 病(Alzheimer’s Disease)。参见例如USSN60/653,813。一个实施方案中，神 经性疾病主要特征为神经细胞的破坏或死亡，所述神经细胞如运动神经元 (如ALS)，基底神经节(basal ganglia)的纹状体神经元(striatal neuron)和/或皮 质(cortical)神经元(如亨廷顿病)，黑质(substantia nigra)神经元(如帕金森病)。
癌症
TWEAK及其受体可参与至少一些类型的癌症如胰腺癌的发病。抗 TWEAK抗体(如本文所述抗体)可用于治疗或预防癌症(如腺癌)及其它瘤形 成性疾病。参见例如2005年5月27日提交的“TREATMENT OF CANCER，” USSN60/685,465。
药物组合物
抗TWEAK抗体(如本文所述抗体)可以配制成药物组合物给受试者施 用，用于如治疗本文所述的疾病。药物组合物通常含有可药用载体。本文所 用的“可药用载体”包括任何及所有溶剂、分散介质(dispersion media)、包衣 (coating)、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等生理相容性试剂。 该组合物可包括可药用盐，如酸加成盐或碱加成盐(参见例如Berge，S.M.，et al.(1977)J.Pharm.Sci.66：1-19)。
药物配制是公知技术，并且进一步描述在例如Gennaro(ed.)，Remington： The Science and Practice of Pharmacy，20th ed.，Lippincott，Williams&Wilkins (2000)(ISBN：0683306472)；Ansel et al.，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，7th Ed.，Lippincott Williams&Wilkins Publishers(1999) (ISBN：0683305727)；and Kibbe(ed.)，Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association，3rd ed.(2000)(ISBN：091733096X)中。
药物组合物可以为多种形式。这些形式包括例如，液体、半固体及固 体剂型，如溶液(如注射液和灌注(infusion)液)、分散体(dispersion)或悬浮液 (suspension)、片剂、丸剂、粉剂、脂质体和栓剂。优选形式可以取决于用 药模式和治疗目的。通常，本文所述试剂的组合物采用注射液或灌注液的形 式。
一个实施方案中，抗TWEAK抗体与赋形剂物质，如氯化钠，七水磷 酸氢二钠(sodium dibasic phosphate heptahydrate)、磷酸二氢钠(sodium monobasic phosphate)，以及稳定剂一起配制。它可以以例如缓冲溶液中的 合适浓度提供，并可以贮存在2-8℃。
这些组合物可以经非肠胃方式施用(如静脉，皮下，腹腔或肌内注射)。 本文所使用的术语“非肠胃施用”指除了肠道施用和局部表面施用以外的施 用模式，通常经注射而施用，包括但不限于经以下模式注射和输注：静脉内 (intravenous)、肌肉内(intramuscular)、动脉内(intraarterial)、鞘内(intrathecal)、 囊内(intracapsular)、眼眶内(intraorbital)、心内(intracardiac)、皮内(intradermal)、 腹腔(intraperitoneal)、经气管(transtracheal)、皮下(subcutaneous)、表皮下 (subcuticular)、关节内(intraarticular)、被膜下(subcapsular)、蛛网膜下 (subarachnoid)、脊柱内(intraspinal)、硬膜外(epidural)以及胸骨内(intrasternal)。
可以将组合物配制成溶液、微乳液、分散体、脂质体或其它适于在高浓 度稳定贮存的有序结构。将合适的溶剂中的所需量的本文所述试剂，根据需 要掺入上文所列的一种或多种成分，再过滤除菌，可以制得无菌注射液。通 常，将本文所述试剂掺入含有基本分散介质和上文所列的所需其它成分的无 菌媒介物(vehicle)中，可制得分散体。在制备无菌注射液所用的无菌粉末的 情况下，优选的制备方法是真空干燥和冻干，其从本文所述试剂和任何其它 所需成分的事先过滤除菌的溶液产生粉末。溶液的适当流动性(proper fluidity) 可以通过以下方法维持，例如，利用卵磷脂之类的包衣、在分散体的情况下 维持所需的粒径(particle size)、以及利用表面活性剂。注射组合物通过在组 合物中包含单硬脂酸盐和明胶之类的延迟吸收剂，可延长吸收时间。
在一些实施方案中，抗TWEAK抗体可以与保护该化合物免于快速释 放的载体(carrier)一起制备，如控释配制剂，包括植入体(implant)以及微囊 递送体系(microencapsulated delivery system)。可以使用生物可降解的生物相 容性聚合物，如乙烯乙酸乙酯(ethylene vinyl acetate)、聚酸酐 (polyanhydride)、聚乙醇酸(polyglycolic acid)、胶原蛋白、聚原酸酯 (polyorthoester)和聚乳酸(polylactic acid)。制备这类配制剂的多种方法已有 专利或者是众所周知的。参见，例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson，ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York(1978)。
抗TWEAK抗体可以用例如改进其在循环(如血液、血清)或其它组织中 的稳定性和/或滞留时间的组分(moiety)进行修饰，所述改进例如是改进至少 1.5、2、5、10或50倍。可以评估被修饰的抗体是否到达炎症位置如关节。
例如，抗TWEAK抗体可以与聚合物缔合(如偶联)，所述聚合物例如基 本上无抗原性的聚合物，如聚环氧烷烃(polyalkylene oxide)或聚环氧乙烷 (polyethylene oxide)。合适的聚合物分子量可以差别很大。可以采用分子量 平均约200-约35,000道尔顿(或约1,000-约15,000、以及2,000-约12,500)的 聚合物。
例如，抗TWEAK抗体可以与水溶性聚合物偶联，所述聚合物例如亲水 聚乙烯聚合物，如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。这类聚合物的例子包括，聚 环氧烷烃均聚物如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇 (polyoxyethylenated polyols)、它们的共聚物和嵌段共聚物，只要维持所述嵌 段共聚物的水溶性即可。其它可用的聚合物包括，聚氧化烯(polyoxyalkylenes) 如聚氧化乙烯(polyoxyethylene)、聚氧化丙烯(polyoxypropylene)、以及聚氧化 乙烯和聚氧化丙烯的嵌段共聚物；聚甲基丙烯酸酯(polymethacrylates)；丙烯 酸共聚物(carbomer)；以及分支或非分支多糖。
在一些方案中，抗TWEAK抗体也可以偶联或缔合标记物或其它试剂如 其它的治疗剂如细胞毒剂或细胞生长抑制剂，但在很多实施方案中，此构型 是不必要的。细胞毒剂和化疗剂举例包括紫杉醇(taxol)、松胞菌素 B(cytochalasin B)、短杆菌肽D(gramicidin D)、长春花碱(vinblastine)、多柔比 星(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、美登木素生物碱(maytansinoid)(如 美登木醇(maytansinol)或DM1美登木素生物碱、美登素(maytansine)的含巯 基衍生物)、米托蒽醌(mitoxantrone)、光辉霉素(mithramycin)、放线菌素 (actinomycin)D、1-去氢睾酮(1-dehydrotestosterone)、糖皮质激素类，普鲁卡 因(procaine)、紫杉烷(taxane)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘 洛尔(propranolol)和嘌呤霉素(puromycin)以及它们的类似物或同系物。
当抗TWEAK抗体与第二种试剂(如抗-TNF-α抗体或其它试剂)联用时， 这两种试剂可以分开或一起配制。可以以协同(synergistically)有效的量配制 或者使用所述试剂。也可以使用一或全部两种所述试剂，但它们的量比各自 单用的量低。例如，可以在例如施用前，混合各种药物组合物并一起施用， 或可以分开施用，如在相同或不同的时间施用。
也可以使用其它TWEAK阻断剂，如USSN60/679,518所述的试剂。所 述试剂可以是能够给受试者施用的任何类型化合物(如有机或无机小分子、 核酸、蛋白质或肽模拟物(peptide mimetic))。一个实施方案中，所述阻断剂 是生物学的，如分子量在5-300kDa之间的蛋白质。例如，TWEAK阻断剂 可抑制TWEAK与TWEAK受体的结合。除结合TWEAK的抗体之外的 TWEAK阻断剂举例包括，结合TWEAK-R的抗体及与细胞表面的 TWEAK-R竞争结合TWEAK的可溶形式的TWEAK-R(如Fn14)。也可以例 如用常规方法或本文所述方法提供药物组合物形式的本文所述其它治疗剂。
给药
可以用多种方法将抗TWEAK抗体施用给受试者，如人类受试者。在很 多应用中，施用途径是下述之一：静脉注射或灌注(IV)，皮下注射(SC)，腹 腔(IP)或肌肉注射。也可以使用关节内递送。也可以使用其它非肠胃施用模 式。这些模式例如包括：动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心内、皮内、经气 管、表皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外以及胸骨内注射。 有些情况下，施用可以直达炎症位置如关节或其它发炎的位置。
施用所述抗体的途径和/或模式也可以根据个案定制，如通过监测受试 者，如使用断层成像(tomographic imaging)，神经学检查(neurological exam)， 及与具体疾病有关的标准参数，如评价类风湿性关节炎的标准来定制。
可以按固定剂量(fixed dose)，或者按mg/kg剂量施用所述抗体。也可以 选择剂量来降低或避免产生针对抗TWEAK抗体的抗体。可以对剂量方案 (dosage regimen)进行调整，以产生所需反应，例如治疗反应或组合治疗效应 (combinatorial therapeutic effect)。通常，抗TWEAK抗体(以及可选的第二种 试剂)的用量可以给受试者提供生物可利用的(bioavailable)量的所述试剂。例 如，可以施用0.1-100mg/kg，0.5-100mg/kg，1mg/kg-100mg/kg，0.5-20mg/kg， 0.1-10mg/kg，或1-10mg/kg的剂量。也可以使用其它剂量。
本文所用的单位剂量(Dosage unit form)或“固定剂量”指物理离散单位， 是适合对受治受试者施用的单次药剂(unitary dosage)；每一单位含有预定量 的活性化合物和所需的药用载体，还可以任选含有其它试剂，所述活性化合 物的预定量是经过计算可以产生所需治疗效应的量。可以给予单一或多重剂 量。可选地或另外地，所述抗体可经连续灌注来施用。
例如，可以在一段时间(一个疗程)内以定期间隔(periodic interval)施用抗 TWEAK抗体，所述一段时间足以包括至少2次(dose)，3次，5次，10次， 或更多，如每日1或2次，或每周约1-4次的给药，或优选每周，每两周， 每月，如约1-12周，优选2-8周，更优选约3-7周，甚至更优选约4、5或6 周给药。可能影响有效治疗受试者所需的剂量的因素和时间(timing)，包括如 疾病或病症严重程度，配制剂，递送途径，治疗史，受试者的总体健康状况 和/或年龄，以及其它存在的疾病。另外，用治疗有效量的化合物治疗受试者 可包括单次治疗或，优选包括系列治疗(series of treatment)。也可用动物模型 来确定有用的剂量，如起始剂量或方案。
如果受试者有发生炎症或其它本文所述疾病的风险，所述抗体可以在疾 病完全发作前施用，如作为预防措施。此种预防性治疗的持续时间可以是所 述抗体的单个剂量，或者所述治疗可以持续(如多重剂量)。例如，对有疾病 风险或有发病倾向的受试者，可以用所述抗体治疗数日，数周，数月或甚至 数年，从而避免疾病的发生或暴发(fulminate)。
药物组合物可包含“治疗有效量”的本文所述试剂。这些有效量可以基于 所施用试剂的效用，或在使用一种以上的试剂时试剂的组合效用来确定。试 剂的治疗有效量也可以因个体的疾病状态、年龄、性别、体重，以及该化合 物在该个体体内激发所需反应的能力等因素而有不同，所述能力例如改进至 少一个疾病参数或改进该疾病的至少一种症状。治疗有效量也可以是，治疗 有益效果超过该组合物的任何毒副作用或有害作用的量。
用于治疗的设备和试剂盒
可以利用医疗设备(medical devices)来施用包含抗TWEAK抗体的药物 组合物。所述设备可设计具有以下性能：例如便携性(portability)，室温贮藏 (storage)，以及使用简易性，从而可以在紧急条件下使用它，如由未受训者 或本领域急救人员从医疗设备和其它医疗装备正取出。该设备可以包括，如 用于贮存含有抗TWEAK抗体的药物制剂的一或多个腔(housing)，并可被构 建(configure)成递送所述抗体的一或多个单位剂量的形状。可以进一步构建 该设备的形状来施用第二种试剂，如抗-TNF-α抗体，为另外还包含抗 TWEAK抗体的单一药物组合物或为两种分开的药物组合物。
例如，药物组合物可以用无针式皮下注射设备(needleless hypodermic injection device)来施用，所述设备参见例如美国专利5,399,163，5,383,851， 5,312,335，5,064,413，4,941,880，4,790,824或4,596,556。众所周知的植入体和 模块(module)有：美国专利4,487,603公开了一种可植入的显微-输注泵，用 于以控制速率分配(dispensing)药物；美国专利4,486,194公开了一种治疗设 备，用于穿过皮肤施用药物；美国专利4,447,233公开了一种药物输注泵， 用于以精确的输注速率递送药物；美国专利4,447,224公开了一种可变流植 入型输注装置，用于连续递送药物；美国专利4,439,196公开了一种渗透型 药物递送体系，其具有多室隔间(multi-chamber compartment)；美国专利 4,475,196公开了一种渗透型药物递送体系。当然，多种其它的设备、植入体、 递送体系和模块也是已知的。
可以用试剂盒形式提供抗TWEAK抗体。一个实施方案中，所述试剂盒 包括(a)装有组合物的容器，所述组合物含有抗TWEAK抗体，还可以含有(b) 信息材料(informational material)。所述信息材料可以是描述性(descriptive)、 指导性(instructional)、商品广告性(marketing)或其它性质的材料，它们与本 文所述方法和/或使用所述试剂的治疗益处有关。
一个实施方案中，所述试剂盒包括用于治疗炎性疾病的第二种试剂，如 抗-TNF-α抗体。例如，所述试剂盒包括装有包含抗TWEAK抗体的组合物 的第一个容器，和装有该第二种试剂的第二个容器。
试剂盒中的信息物质其形式不限。在一个实施方案中，所述信息物质包 含关于该化合物的制备、该化合物的分子量、浓度、有效期、批号或生产地 信息等等的信息。在一个实施方案中，所述信息物质涉及，例如以合适的剂 量(dose)、剂型、或施用模式(如本文所述剂量、剂型、或施用模式)施用抗 TWEAK抗体的方法，来治疗患有炎性疾病或其它本文所述疾病或有相关风 险的受试者。所述信息物质可以以多种形式提供，包括印刷的文字(text)、计 算机可读形式、视频记录、或声频记录，或提供实质性材料的链接(link)或地 址(如在互联网上)的信息。
试剂盒的组合物中，除了含有所述抗体，还可以含有其它成分，如溶剂 或缓冲液、稳定剂、或保存剂(preservative)。所述抗体可以以任何形式，例 如液体、干燥形式或冻干形式，优选基本纯的和/或无菌的形式提供。当所述 试剂以溶液形式提供时，该溶液优选是含水溶液。当所述试剂以干燥形式提 供时，一般加入合适的溶剂来重建。所述溶剂，例如无菌水或缓冲液，可以 选择包含在试剂盒中。
所述试剂盒可以包括一或多个容器用于装载含有所述试剂的一或多种 组合物。在一些实施方案中，所述试剂盒包括相互分隔的容器、分隔体(divider) 或分隔室(compartment)，用于装载组合物和信息材料。例如，可以将组合物 装在大瓶(bottle)、小瓶(vial)或注射器(syringe)中，将信息材料装在塑料的套 (sleeve)或包(packet)中。在其它实施方案中，将试剂盒的不同组件装在一个 不分隔的容器中。例如，将组合物装在大瓶、小瓶或注射器中，而所述大瓶、 小瓶或注射器上贴有标签形式的信息材料。在一些实施方案中，试剂盒包括 一组(a plurality)(如一包(pack))容器，其中每一容器装有一或多个单位剂型(如 本文所述剂型)的所述试剂。所述容器可以包括一个组合(combination)单位剂 量(unit dosage)，例如含有抗TWEAK抗体和第二种试剂(如按所需比例)的单 位。例如，所述试剂盒包括一组注射器、安瓿(ampules)、箔制包(foil packet)、 带气泡的包装袋(blister pack)、或医疗设备，例如每一个都容纳一个单位剂 量。试剂盒中的这些容器可以是隔绝空气的(air tight)、防水的(waterproof)(如 湿度或蒸发引起的变化都无法透过)、和/或避光的(light-tight)。
所述试剂盒还可以选择含有适于施用所述组合物的装置，例如注射器或 其它合适的递送装置。所述装置可以预先装载所述试剂的一或全部两种，或 者也可以是空的但适于装载试剂。
靶向表达TWEAK的细胞
本文所述的抗TWEAK抗体可用于将其所携带的有效物质(payload)靶向 表达TWEAK的细胞或组织或其它与TWEAK有关的结构。例如，所述抗体 可以与能递送外源基因的病毒或病毒样颗粒(如用于基因疗法)或脂质体(如 包容有治疗剂或外源基因的脂质体)连接。用抗体靶向病毒的方法举例见 Roux et al.(1989)Proc Natl Acad Sci USA(1989)86：9079-9083所述。也参见 例如Curr Gene Ther.(2005)5：63-70，Hum Gene Ther.(2004)15：1034-1044。
本发明的抗-TWEAK Ab也可以连接到含治疗剂如化疗剂的脂质体上。 抗体与脂质体的连接可以用任何已知的交联剂来实现，如广泛用于将毒素或 化疗剂与抗体偶联来进行定向递送的异源双功能(heterobifunctional)交联剂。 例如，与脂质体偶联可以用定向碳水化合物的交联试剂4-(4-马来酰亚氨苯基) 丁酸酰肼(4-(4-maleimidophenyl)butyric acid hydrazide，MPBH)来实现 (Duzgunes et al.(1992)J.Cell.Biochem.Abst.Suppl.16E77)。含脂质体的抗体 也可用公知方法制备(参见例如DE3,218,121；Epstein et al.(1985)Proc.Natl. Acad.Sci.USA，82：3688-92；Hwang et al.(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA， 77：4030-34；U.S.4,485,045和4,544,545)。
诊断用途
抗TWEAK抗体可在检测有无TWEAK的体外(如生物样本，如组织， 活检标本)或体内(如受试者的体内成像)诊断方法中使用。例如，可以将人的 或有效人化的抗TWEAK抗体施用到受试者来检测该受试者内的TWEAK。 例如，所述抗体可用，例如MRI可检测标记物或放射性标记物来标记。该 受试者可用检测该可检测标记物的工具来评价。例如，可以扫描该受试者来 评价所述抗体在受试者体内的定位。例如，该受试者可以用例如NMR或其 它断层工具来成像。
用于诊断成像的标记物举例包括放射性标记物，如131I，111In，123I，99mTc， 32P，33P，125I，3H，14C，和188Rh，荧光标记物如荧光素(fluorescein)和罗丹明 (rhodamine)，核磁共振活性标记物，用正电子发射断层摄影术(“PET”)扫描仪 可检测的发射正电子的同位素，化学发光物(chemiluminescer)，如萤光素 (luciferin)，和酶标标记物如过氧化物酶或磷酸酶。也可使用短程辐射源 (short-range radiation emitter)，如用近程检测探针可检测的同位素。可用这 些试剂用已知技术标记蛋白质配体。例如，涉及放射性标记抗体的技术参 见Wensel and Meares(1983)Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy， Elsevier，New York，和Colcher et al.(1986)Meth.Enzymol.121：802-816。
可以用已知技术如放射性核素扫描技术，用如γ照相机或发射断层摄影 术(emission tomography)给受试者体内“造影”。见例如A.R.Bradwell et al.， “Developments in Antibody Imaging”，Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy，R.W.Baldwin et al.，(eds.)，pp65-85(Academic Press 1985)。或者，当放射性标记物(如11C，18F，15O，及13N)发射正电子时，可以 使用正电子发射横断面(transaxial)断层摄影术扫描仪，如位于Brookhaven National Laboratory的Pet VI。
MRI造影剂(contrast agent)。磁共振成像(MRI)利用NMR来观察活体受 试者的内部特征，并用于预后、诊断、治疗和手术。MRI的明显益处在于其 不使用放射性示踪化合物。对一些MRI技术的总结见于EP0502814A。一 般利用不同环境中与水质子弛豫(relaxation)时间常数T1和T2相关的差异来 成像。然而，这些差异不足以提供清晰的高分辨率的影像。
这些弛豫时间常数的差异可以用造影剂改善。这些造影剂的例子包括多 种磁性剂(magnetic agent)，顺磁性剂(paramagnetic agent)(主要改变T1)和铁 磁性或超磁性物质(主要改变T2反应)。螯合剂(如EDTA，DTPA和NTA螯 合剂)可用于一些顺磁性物质(如Fe3+，Mn2+，Gd3+)的连接(和毒性降低)。其它 试剂可以呈颗粒状，如直径小于10μm至约10nm)。颗粒可以具有铁磁性， 反铁磁性，或超磁性。颗粒可以包括，如磁铁矿(Fe3O4)，γ-Fe2O3，铁酸盐， 及属于过渡元素的其它磁性矿物化合物。磁性颗粒可包括含及不含非磁性物 质的一或多种磁性晶体。非磁性物质可包含合成的或天然的聚合物(如 Sepharose，葡聚糖，糊精，淀粉等)。
抗TWEAK抗体也可用指示基团标记，所述基团包含NMR-活性19F原 子，或多种这类原子，因为(i)基本上所有的天然富含氟的原子是19F同位 素，因此，基本所有的含氟化合物具有NMR-活性；(ii)多种化学活性多氟 化合物，如三氟乙酸酐可以用较低价格买到，并且(iii)已发现很多氟化化合 物是医疗上可用于人的，如全氟多醚(perfluorinated polyether)作为血红蛋白 替代物来运送氧。在一段时间的温育后，用如Pykett(1982)Scientific American，246：78-88所述的装备之一进行全身MRI，来定位并造影TWEAK 的分布。
另一方面，本发明提供了检测体外样本(如生物样本，如血清，血浆， 组织，活检标本)中TWEAK的存在的方法。所述方法可用于诊断疾病，如 免疫细胞相关性疾病。所述方法包括：(i)使样本或对照样本与抗TWEAK抗 体接触；和(ii)评价样本中TWEAK的存在，如通过检测抗TWEAK抗体与 TWEAK形成的复合物，或者通过检测所述抗体或TWEAK的存在来评价。 例如，可以将所述抗体固定在例如支持物上，检测被留在支持物上的抗原， 和/或反之。可以包括对照样本。相对于对照样本，试验样本中复合物形成的 统计学显著改变可以指示样本中TWEAK的存在。通常，抗TWEAK抗体可 用于包括荧光极化(polarization)、显微镜检、ELISA、离心、层析和细胞分选 (如荧光活化细胞分选)在内的应用。
实施例1
鼠P2D10重链可变区的序列(CDR用下划线标记)是：
1   EVQLVESGGG LVRPGGSLKL FCAASGFTFS RYAMSWVRQS PEKRLEWVAE
51  ISSGGSYPYY PDTVTGRFTI SRDNAKNTLY LEMSSLKSED TAMYYCARVL
101 YYDYDGDRIE VMDYWGQGTA VIVSS(SEQ ID NO：50)
这是鼠亚组3D重链可变区。
鼠P2D10轻链可变区的序列(CDR用下划线标记)是：
1  DVVMTQSPLS LSVSLGDQAS ISCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPK
51 FLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVAAEDLGV YFCSQSTHFP
101 RTFGGGTTLE IK(SEQ ID NO：51)
这是鼠亚组2kappa轻链。
为huP2D10选择如下的人接受体框架：人56-84m亚组3重链可变区 (NCBI database accession number GI：33318898，Scamurra et al.，direct submission)。序列(CDR用下划线标记)如下：
1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYWMSWVRQA PGKGLEWVAN
51  IKQDGSEKYY VDSVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARDP
101 MTTVVKPSLA TNDYWGQGTL VTVSS(SEQ ID NO：52)
人K107亚组2轻链可变区的序列(NCBI database accession number GI： 21669075，Akahori et al.，direct submission)(CDR用下划线标记)是：
1   DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLL HSNGYNYLDW YLQKPGQSPQ
51  LLIYLGSNRA SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCMQALQTP
101 LTFGGGTKVE IK(SEQ ID NO：53)
在显示的人接受体序列中，CDR(下划线标记的)与muP2D10可变区中的 那些具有相同长度和规范等级。
如下显示鼠P2D10(上)和人接受体56-84m(下)重链可变区的序列比对 (68.8％相同)：
            .         .         .         .         .
1  EVQLVESGGGLVRPGGSLKLFCAASGFTFSRYAMSWVRQSPEKRLEWVAE-50
   ||||||||||||.|||||:| ||||||||| | ||||||.| | |||||
1  EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVAN-50
           .          .         .         .         .
51 ISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAKNTLYLEMSSLKSEDTAMYYCARVL 100
   |   ||  || |.| ||||||||||||.|||:|.||:.||.|.|||||
51 IKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDP 100
            .         . 
101YYDYDGDRIEVMDYWGQGTAVIVSS125(SEQ ID NO：54)
           :   ||||||| | |||
101MTTVVKPSLATNDYWGQGTLVTVSS125(SEQ ID NO：55)
如下显示鼠P2D10(上)和人接受体K107轻链(下)可变区的序列比对 (75.9％相同)：
            .         .         .         .         .
1  DVVMTQSPLSLSVSLGDQASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPK   50
   ||||||||||| |.||: |||||||||||. | |  || ||||||||||.
1  DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ   50
            .         .         .         .         .
51 FLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVAAEDLGVYFCSQSTHFP   100
   ||||  ||| ||||||||||||||||||||||| |||.|||:| |.   |
51 LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP   100
            .
101RTFGGGTTLEIK112(SEQ ID NO：56)
    |||||| .|||
101LTFGGGTKVEIK112(SEQ ID NO：57)
huP2D10轻链有两个版本(L1和L2)。抗体huP2D10-1指包含huP2D10H1 和huP2D10L1的抗体。抗体huP2D10-2指包含huP2D10H1和huP2D10L2 的抗体。
如下显示56-84m人接受体(上)和huP2D10H1重链(下)可变区的序列比 对：
            .         .         .         .         .
1  EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVAN 50
   ||||||||||||||||||||||||||||| || |||||||||||||||||
1  EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWVAE 50
            .         .         .         .         .
51 IKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDP 100
   |   ||  || |.| |||||||||||||||||||||||||||||||||
51 ISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVL 100
            .         .
101MTTVVKPSLATNDYWGQGTLVTVSS125(SEQ ID NO：58)
           ：  |||||||||||||
101YYDYDGDRIEVMDYWGQGTLVTVSS125(SEQ ID NO：59)
下划线标记CDR。huP2D10重链是直接的(straight)CDR移植物(即框架 中无回复突变)。
如下显示K107人kappa接受体(上)和huP2D10L1轻链(下)可变区的序 列比对：
            .                   .         .         .
1  DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ 50
   |||||||||||||||||||||||||||||. | |  || |||||||||||
1  DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQ 50
            .         .         .         .         .
51 LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP 100
    |||  ||| |||||||||||||||||||||||||||||||:| |.   |
51 fLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYfCSQSTHFP  100
            .
101LTFGGGTKVEIK112(SEQ ID NO：60)
    |||||||||||
101RTFGGGTKVEIK112(SEQ ID NO：61)
下划线标记CDR。huP2D10L1轻链在上面所示框架中有两处用小写字 母标出的回复突变：FR2中的L46F和FR3中的Y87F。
如下显示K107人接受体(上)和huP2D10L2轻链(下)可变区的序列比对：
            .         .         .         .         .
1  DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ   50
   |||||||||||||||||||||||||||||. | |  || |||||||||||
1  DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQ   50
            .         .         .         .         .
51 LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP   100
   ||||  ||| ||||||||||||||||||||||.|||||||||| |.   |
51 LLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHFP   100
            .
101LTFGGGTKVEIK112(SEQ ID NO：62)
    |||||||||||
101RTFGGGTKVEIK112(SEQ ID NO：63)
下划线标记CDR。huP2D10L2轻链是直接的CDR移植物(框架中无回 复突变)。
这是成熟huP2D10H1IgG1重链的举例氨基酸序列：
1   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYAMSWVRQA PGKGLEWVAE
51  ISSGGSYPYY PDTVTGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARVL
101 YYDYDGDRIE VMDYWGQGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPSS KSTSGGTAAL
151 GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSVVTVPSSS
201 LGTQTYICNV NHKPSNTKVD KKVEPKSCDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL
251 FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR
301 EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ
351 PREPQVYTLP PSRDELTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK
401 TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS
451 LSPG(SEQID NO：64)
如下显示重链可变区VH区段(SED ID NO：65)的Kabat编号：
Kabat编号1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890
hP2D10   EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYAMSWVRQA PGKGLEWVAE
Kabat编号12a3456789 0123456789 0123456789 012abc3456 78901234
hP2D10   ISSGGSYPYY PDTVTGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR
这是成熟huP2D10L1轻链的举例氨基酸序列：
1   DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPQ
51  FLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YFCSQSTHFP
101 RTFGGGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK
151 VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE
201 VTHQGLSSPV TKSFNRGEC(SEQ ID NO：66)
如下显示此VL区段的Kabat编号(SEQ ID NO：67)：
Kabat No.1234567890 1234567890 1234567abc de89012345 6789012345
hP2D10   DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPQ
Kabat No.6789012345 6789012345 6789012345 6789012345 6789012345
hP2D10   FLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YFCSQSTHFP
这是成熟huP2D10L2轻链的举例氨基酸序列：
1   DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPQ
51  LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCSQSTHFP
101 RTFGGGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK
151 VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE
201 VTHQGLSSPV TKSFNRGEC(SEQ ID NO：68)
如下显示此VL区段的Kabat编号(SEQ ID NO：69)：
Kabat No.1234567890 1234567890 1234567abc de89012345 6789012345
hP2D10   DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPQ
Kabat No.6789012345 6789012345 6789012345 6789012345 6789012345
hP2D10   LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YFCSQSTHFP
实施例2
封闭TWEAK的单克隆抗体mP2D10显著降低了多发性硬化、中风和类 风湿性关节炎的模型的临床严重程度。针对抗TWEAK单克隆抗体mP2D10 在静脉(IV)给药后的药物动力学(PK)建立模型。
经IV注射给予小鼠1、10或100mg/kg的mP2D10。用ELISA测定 mP2D10的血清浓度。浓度-时间PK分布图(profile)用二室模型来分析，其采 用一级消除动力学(first-order elimination)或Michaelis-Menten消除动力学， 从具有V1体积的中央室进行消除。二室间的速度常数是K12(从1室释放 (exiting)到2室)和K21(从2室释放到1室)。对于一级消除动力学模型，消 除速度常数是K10。对于Michaelis-Menten消除动力学模型，药物以 Vm*Cl/(Km+Cl)的速度清除，其中Cl是在中央室的mP2D10浓度，Vm和 Km为常数。用软件ADAPT II(D′Argenio，D.Z.and A.Schumitzky.ADAPT II User′s Guide：Pharmacokinetic/Pharmacodynamic Systems Analysis Software. Biomedical Simulations Resource，Los Angeles，1997.)，用最大似然估计 (Maximum Likelihood estimation)方法来拟合数据。
对于二室线性消除模型，V1是23.2mL/kg，K10是0.0096h-1，K12是 2.501，K21是1.053。曲线下面积(AIC)值为298，Schwarz值为304.2。对于 二室非线性消除模型，V1是0.0235。Vm是9.22mg/kg/hr，Km是484.2μg/mL。 K12是2.348h-1，K21是0.966h-1。AIC值为269，Schwarz值为276。mP2D10 的PK用非线性模型预测比线性模型好。
mP2D10的浓度-时间分布图用应用Michaelis-Menten消除动力学的二室 模型预测比应用一级消除动力学的二室模型好。
本领域技术人员仅使用常规试验就能得到或能确认本文所述的具体实 施方案的很多等效方案。
交叉引用的相关申请
本申请要求2005年5月27日提交的美国申请60/685,149的优先权，该 申请全部内容通过引用并入本文。