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FTO抑制剂

阅读：1135发布：2020-05-15

IPRDB可以提供FTO抑制剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供了抑制FTO的化合物，包括其药学上可接受的盐，氢化物和立体异构体。所述化合物用于药物组合物，以及制备和使用的方法，包括用有效量的化合物或组合物治疗有需要的人，特别是肥胖症，并检测所得到的个人健康或状况的改善。，下面是FTO抑制剂专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种FTO抑制剂，其选自式I化合物，其立体异构体，其氢化物及其药学上可接受的盐，或配制并适于对人给药且包含单位剂量的所述抑制剂的药物组合物，其中所述抑制剂为：其中：

(a)

R1和R2独立地为H或Me；

R3为H、OH或NHR，其中R为H或任选取代的、任选杂化的、任选环状的C1-C18烃基；和R4是任选取代的、任选杂化的、任选环状的C1-C18烃基；

(b)中

R1和R2独立地为H或Me；

R3是H、OH或NHR，其中R是H或C1-C4烷基；

R4是CONHR5；和

R5是任选取代的、任选杂化的、任选环状的C1-C18烃基；

(c)

R1和R2独立地为H或Me；

R3是H、OH或NHR，其中R是H或C1-C4烷基；

R4是COR5；和

R5是任选取代的杂环C3-C18烃基，其包含n元环，其中n＝3-18，包括1至n-1个独立地选自N、O、S和P的杂原子；或者(d)

R1和R2独立地为H或Me；

R3是H、OH或NHR，其中R是H或C1-C4烷基；和R4是任选取代的杂环C3-C18烃基，其包含n元环，其中n＝3-18，包括1至n-1个独立地选自N、O、S和P的杂原子；

其中所述抑制剂不包括化合物309、365、371和361，除非存在于组合物中。

2.权利要求1的抑制剂或组合物，其中所述杂环C3-C18烃基包含：任选取代的3元环：氮丙啶、环氧乙烷、氧氮丙啶；

任选取代的4元环：氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、氧杂氮杂环丁烷；

任选取代的5元环：吡唑、1，2-二唑(吡唑)、1，3-二唑(咪唑)、噻唑、异噻唑、噁唑、异噁唑、呋喃、间二氧杂环戊烯、噻吩；

任选取代的6元环：吡啶、二嗪、三嗪、噁嗪、噻嗪、二噁英、氧硫杂环己二烯、二硫杂环己二烯；

任选取代的9元环：吲哚、苯并噻唑、苯并噁唑、苯并呋喃、苯并间二氧杂环戊烯、苯并噻吩、苯并二硫杂环戊烯；或者任选取代的10元环：喹啉、喹喔啉、喹唑啉、色烯、苯并二噁英、二氢苯并噻喃、苯并二硫杂环己二烯。

3.权利要求1的抑制剂或组合物，其中所述任选取代的、任选杂化的、任选环状的C1-C18烃基在每种情况下为任选取代的C1-C9烷基、C2-C9烯基、C2-C9炔基或C5-C14芳基，其包含1-5个为N、S、O或P的杂原子，包括1-5个氮原子，或被烃取代的杂原子。

4.权利要求1的抑制剂或组合物，其中：R1和R2中的一个或两个是H；

R3是OH；和/或

R为H或C1-C4烷基。

5.权利要求1的抑制剂或组合物，其为(a)其中R3为H，具有下式：

6.权利要求1的抑制剂或组合物，其为(a)其中R3为NHR，具有下式：

7.权利要求1的抑制剂或组合物，其为(b)其中R4为CONHR5，具有下式：

8.权利要求1的抑制剂或组合物，其为(c)其中R4为COR5，具有下式：

9.权利要求1的抑制剂或组合物，其为(d)其中R4为杂环，具有下式：

10.根据权利要求1-9中任一项所述的抑制剂或其药学上可接受的盐或组合物，其与第二种不同的药物共包装或共制剂化，用于抑制体重增加；促进体重减轻；降低血清LDL、胆固醇、LDL-c或甘油三脂；或用于治疗肥胖症或肥胖相关疾病(尤其是肥胖相关糖尿病、高血糖症、糖尿病性肾病、高脂血症、冠心病、动脉粥样硬化、高血压、心血管或脑血管疾病)或阿尔茨海默氏病。

11.如权利要求1-9中任一项所述的抑制剂或组合物在有此需要的人中用于抑制FTO；

抑制体重增加；促进体重减轻，降低血清LDL、胆固醇、LDL-c或甘油三酯，或治疗肥胖或肥胖相关疾病(尤其是与肥胖有关的糖尿病、高血糖症、糖尿病肾病、高脂血症、冠心病、动脉粥样硬化、高血压、心血管或脑血管疾病)或阿尔茨海默氏病的用途。

说明书全文

FTO抑制剂

发明者：黄牛、彭士明(中国北京)

申请人：北京生命科学研究所

[0001] 背景介绍

[0002] 肥胖是全世界严重的健康问题之一，并且许多因素导致这种慢性疾病，包括环境因素和遗传因素。全基因组关联研究调查肥胖患者揭示了FTO(fat mass and obesity)基
因与肥胖密切相关。在FTO敲除小鼠、FTO过表达小鼠和FTO-I367F突变小鼠的转基因动物模型中证实了FTO在肥胖中的功能作用。FTO蛋白是α-酮戊二酸和铁(II)离子依赖性核酸脱甲基酶。其优选的底物是信使RNA中的N6-meA，其位于终止密码子附近并影响基因翻译。

[0003] 我们在US2014/0148383A1中公开了使用基于结构的虚拟筛选方法结合生物学活性测定(包括酶活性测定，细胞活性测定和高脂饮食诱导的肥胖症(DIO)动物模型)鉴定了
已知的FDA已批准的药物-恩他卡朋是FTO抑制剂。恩他卡朋是COMT(儿茶酚-O-甲基转移酶)
抑制剂，用于治疗帕金森病。

[0004] 我们合成了许多衍生物和类似物，然而活性测定显示许多取代减少或消除了FTO抑制活性，阻碍了常规的SAR研究。我们采取了激进的衍生化方法，引入了破坏性的官能团。
这里我们公开了一种新的FTO抑制剂的结构类别，组合物和使用方法。

[0005] EP1978014公开了通过二甲氧基-恩他卡朋(II)的去甲基化来制备恩他卡朋(I)的方法，其中II可以通过使羟基中间体(III)与MHB(OCOR)3反应来制备。该羟基中间体与一些主题化合物在结构上碰巧相关。

发明内容

[0007] 本发明提供了用于抑制FTO和治疗与过量的FTO活性相关的疾病的化合物、组合物和方法，所述疾病包括肥胖，肥胖相关疾病和阿尔茨海默氏病。在一个方面，本发明提供了FTO抑制剂，其选自式I化合物，其立体异构体，其氢化物和其药学上可接受的盐，或配制并适合于给予人的药物组合物，并且以单位剂量包含抑制剂：
其中：
(a)
R1和R2独立地为H或Me；
R3是H，OH或NHR，其中R是H或任选取代的、任选杂化的、任选环状的C1-C18烃基；和
R4是任选取代的、任选杂化的、任选环状的C1-C18烃基；
(b)
R1和R2独立地为H或Me；
R3是H，OH或NHR，其中R是H或C1-C4烷基，特别是Me；
R4是CONHR5；和
R5是任选取代的、任选杂化的、任选环状的C1-C18烃基；
(c)
R1和R2独立地为H或Me；
R3是H、OH或NHR，其中R是H或C1-C4烷基，特别是Me；
R4是COR5；和
R5是任选取代的杂环C3-C18烃基，其包含n元环，其中n＝3-18(3，4，5，6，9或10)，包括1至n-1个独立地选自N、O、S和P的杂原子；或者
(d)
R1和R2独立地为H或Me；
R3是H、OH或NHR，其中R是H或C1-C4烷基，特别是Me；和
R4是任选取代的杂环C3-C18烃基，其包含n元环，其中n＝3-18(3，4，5，6，9或10)，包括1至n-1个独立地选自N、O、S和P的杂原子；
其中所述抑制剂，除非存在于组合物中，不包括化合物309，CAS号：1364322-41-7；365，CAS号：1150310-12-5；371，CAS号：1150310-15-8；和361，CAS号：143542-72-7，例如如果R3是二乙基酰胺并且R4是OH，那么R1和R2中的一个或两个是H。

[0008] 在抑制剂或组合物的实施方案中，杂环C3-C18烃基包含：任选取代的三元环：氮丙啶、环氧乙烷、氧氮丙啶；
任选取代的四元环：氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、氧杂氮杂环丁烷；
任选取代的五元环：吡唑、1，2-二唑(吡唑)、1，3-二唑(咪唑)、噻唑、异噻唑、噁唑、异噁唑、呋喃、间二氧杂环戊烯、噻吩；
任选取代的六元环：吡啶、二嗪、三嗪、噁嗪、噻嗪、二噁英、氧硫杂环己二烯、二硫杂环己二烯；
任选取代的九元环：吲哚、苯并噻唑、苯并噁唑、苯并呋喃、苯并间二氧杂环戊烯、苯并
噻吩、苯并二硫杂环戊烯；或者
任选取代的十元环：喹啉、喹喔啉、喹唑啉、色烯、苯并二噁英、二氢苯并噻喃、苯并二硫杂环己二烯。

[0009] 在抑制剂或组合物的实施方案中，任选取代的、任选杂化的、任选环状的C1-C18烃基在每种情况下为任选取代的C1-C9烷基、C2-C9烯基、C2-C9炔基或C5-C14芳基，其包含1-5个为N、S、O或P的杂原子，包括1-5个氮原子，或被烃取代的杂原子。

[0010] 在抑制剂或组合物的实施方案中：R1和R2中的一个或两个是H；
R3是OH；和/或
R是H或C1-C4烷基，特别是Me。

[0011] 在实施方案中，抑制剂见以下表格。我们测量了在FTO催化去甲基化反应中的化合物抑制活性(US2014/0148383A1)。反应体系在37℃孵育2h，95℃加热5min停止。用核酸酶P1和碱性磷酸酶消化ssDNA。用HPLC-MS/MS分析N6-mA和A的浓度。当底物和酶的浓度分别为
0.5μM和0.1μM时，测得的恩他卡朋对FTO的IC50值为～3μM。

[0012] 表1.(a)抑制剂，其中R3是OH，表明在由FTO催化的去甲基化反应中IC50值＜10μM；实验细节如下。

[0013] 表2.(a)抑制剂，其中R3是NHR，表明在由FTO催化的去甲基化反应中IC50值＜10μM；实验细节如下。

[0014] 表3：(b)抑制剂，其中R4是CONHR 5，表明在由FTO催化的去甲基化反应中IC50值＜10μM；实验细节如下。

[0015] 表4.(c)抑制剂，其中R4是COR 5，表明在由FTO催化的去甲基化反应中IC50值＜10μM；实验细节如下。

[0016] 表5.(d)的抑制剂，其中R4是杂环的，表明在由FTO催化的去甲基化反应中IC50值＜10μM；实验细节如下。

[0017] 另一方面，本发明提供了适合给予人并包含主题或公开的抑制剂的药物组合物。

[0018] 所述组合物可以包含药学上可接受的赋形剂，以有效的单位剂型形式，和/或包含用于靶向疾病或病症的另一种不同的治疗剂。在实施方案中，所述组合物可以进一步包含
第二种不同的药物或与其共同包装或共配制，用于抑制体重增加，促进体重减轻，降低血清LDL，胆固醇，LDL-c或甘油三酯，或治疗肥胖症或肥胖相关疾病(特别是肥胖相关的糖尿病，高血糖症，糖尿病性肾病，高脂血症，冠心病，动脉粥样硬化，高血压，心血管或脑血管疾病)或阿尔茨海默氏病。

[0019] 在实施例中：

[0020] 所述药物是治疗阿尔茨海默氏病的药物，其为乙酰胆碱酯酶抑制剂(特别是他克林，利凡斯的明，加兰他敏和多奈哌齐)或NMDA受体拮抗剂(特别是美金刚)；

[0021] 所述药物是用于抑制体重增加的药物，其为食物摄入抑制剂或食物吸收抑制剂；

[0022] 所述药物是用于抑制体重增加的药物，其为奥利司他，西布曲明，氯卡色林，利莫那班，二甲双胍，艾塞那肽，普兰林肽，苯丁胺/托吡酯或其药学上可接受的盐；

[0023] 所述药物是用于降低血清LDL，胆固醇，LDL-c或甘油三酯的药物，其为阿托伐他汀(Lipitor)，氟伐他汀(Lescol)，洛伐他汀(Altoprev，Mevacor)，普伐他汀(Pravachol)，罗苏伐他汀(Crestor)，辛伐他汀(Zocor)，考来烯胺(Prevalite，Questran)，考来维纶(Welchol)，考来替泊(Colestid)，依泽替米贝(Zetia)，依折麦布-辛伐他汀(Vytorin)，非诺贝特(Lofibra，TriCor)，吉非贝齐(Lopid)，烟酸(Niaspan)，欧米茄-3脂肪酸(Lovaza)，或其药学上可接受的盐。

[0024] 所述药物是糖尿病或低血糖症的药物，如格列苯脲，格列吡嗪，格列喹酮，格列齐特，格列美脲，格列波脲，瑞格列奈，那格列奈，二甲双胍，阿卡波糖，伏格列波糖，罗格列酮，吡格列酮，艾塞那肽，利拉鲁肽，西他列汀，沙格列汀，维达列汀，卡格列净，达格列净，或其药学上可接受的盐。

[0025] 另一方面，本发明提供了用有效量的主题抑制剂或药物组合物治疗有需要的人的方法，并且任选地检测所导致的该人健康或状况的改善。该方法还可以任选地包括确定该
人的先行步骤，尤其是诊断和适用的疾病或病症(本文)。在实施方案中，本发明提供了主题抑制剂或组合物在有需要的人中的方法和用途，以抑制FTO，抑制体重增加，促进体重减轻，降低血清LDL，胆固醇、LDL-c或甘油三酯，或治疗肥胖症、肥胖相关疾病或阿尔茨海默氏病。

[0026] 本发明涵盖本文所述的具体实施方式的所有组合，如同其每一个被单独地费力地叙述。例如，(a)包括组合，其中：R1和R2是H；R3是NH2；并且R4是6元环，其为吡啶，(d)包括组合，其中R1和R2为Me；且R3是OH；且R4是1，3-二唑。

[0027] 本发明的具体实施例的描述

[0028] 具体实施方案和实施例的以下描述以说明而非限制的方式提供。本领域技术人员将容易地认识到可以改变或修改各种非关键参数以产生基本相似的结果。

[0029] 除非有相反的提示或另有说明，在这些描述和整个说明书中，术语“一”表示一个或多个，术语“或”意思是和/或，并且多核苷酸序列应被理解为包括相反链以及本文所述的可选择骨干。此外，属类为该属类所有成员的叙述的简写；例如，(C1-C3)烷基的叙述是所有C1-C3烷基叙述的简写：甲基，乙基和丙基，包括其异构体。

[0030] 烃基是包含1-15个碳原子的取代或未取代的直链、支链或环状烷基、烯基、炔基、酰基、芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、烷基芳基、烯基芳基或炔基芳基，且在其碳骨架中任选地包含一个或多个杂原子。

[0031] 本文所述术语“杂原子”通常是指除碳或氢之外的任何原子。优选的杂原子包括氧(O)、磷(P)、硫(S)、氮(N)和卤素，且优选的杂原子官能团是卤代甲酰基、羟基、醛、胺、偶氮、羧基、氰基、硫氰酸盐、羰基、卤素、过氧羟基、亚胺、醛亚胺、异氰化物、异氰酸酯、硝酸盐、腈、亚硝酸盐、硝基、亚硝基、磷酸盐、膦酰基、硫化物、磺酰基、磺基和巯基。

[0032] 除非另有说明，术语“烷基”本身或作为另一个取代基的一部分，是指直链或支链或环状烃基，或其组合，其为完全饱和的具有指定碳原子数(即C1-C8表示一至八个碳)。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及如正戊基、正己基、正庚基、正辛基等同系物和异构体。

[0033] 术语“烯基”本身或作为另一个取代基的一部分，是指直链或支链或环状烃基或其组合，其可以是单不饱和或多不饱和的，具有指定数目的碳原子(即C2-C8是指二至八个碳)和一个或多个双键。烯基的实例包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)及其更高级的同系物和异构体。

[0034] 术语“炔基”本身或作为另一个取代基的一部分，是指直链或支链烃基或其组合，其可以是单不饱和的或多不饱和的，具有指定的碳原子数(即C2-C8是指二至八个碳)和一个或多个三键。炔基的实例包括乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基及其更高级的同系物和异构体。

[0035] 术语“亚烷基”自身或作为另一个取代基的一部分，是指由烷基衍生的二价基团，例如以-CH2-CH2-CH2-CH2-为实例。通常，烷基(或亚烷基)基团将具有1至24个碳原子，在本发明中优选具有10个或更少碳原子的那些基团。“低级烷基”或“低级亚烷基”是通常具有八个或更少碳原子的较短链烷基或亚烷基。

[0036] 术语“烷氧基”，“烷基氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)以其常规含义使用，并且分别指通过氧原子、氨基或硫原子与分子其余部分连接的上述烷基。

[0037] 除非另有说明，术语“杂烷基”本身或与另一术语组合，是指稳定的直链或支链或环状烃基或其组合，由所述数目的碳原子和1-3个选自氧、氮、磷、硅和硫的杂原子组成，其中氮、硫和磷原子可以任选被氧化，且氮杂原子可以任选被季铵化。杂原子氧、氮、磷和硫可以位于杂烷基的任何内部位置。杂原子硅可以位于杂烷基的任何位置，包括烷基与分子其余部分连接的位置。实例包括-CH2-CH2-O-CH3，-CH2-CH2-NH-CH3，-CH2-CH2-N(CH3)-CH3，-CH2-S-CH2-CH3，-CH2-CH2，-S(O)-CH3，-CH2-CH2-S(O)2-CH3，-CH＝CH-O-CH3，-Si(CH3)3，-CH2-CH＝N-OCH3，和-CH＝CH-N(CH3)-CH3。最多两个杂原子可以是连续的，例如-CH2-NH-OCH3和-CH2-O-Si(CH3)3。

[0038] 类似地，术语“杂亚烷基”自身或作为另一取代基的一部分，是指由杂烷基衍生的二价基团，例如以-CH2-CH2-S-CH2-CH2-和-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-为实例。对于杂亚烷基，杂原子也可以占据链末端(例如，亚烷基氧基、亚烷基二氧基、亚烷基氨基，亚烷基二氨基等)中的任一个或两个。而且，对于亚烷基和杂亚烷基连接基团，没有暗示连接基团的取向。

[0039] 除非另有说明，术语“环烷基”和“杂环烷基”本身或与其它术语组合，分别表示“烷基”和“杂烷基”的环状形式。相应地，环烷基具有指定的碳原子数(即，C3-C8表示三至八个碳)并且也可以具有一个或两个双键。杂环烷基由指定的碳原子数目和选自氧、氮、硅和硫的一至三个杂原子组成，并且其中氮和硫原子可任选被氧化，且氮杂原子可任选被季铵化。另外，对于杂环烷基，杂原子可以占据杂环与分子其余部分连接的位置。环烷基的实例包括环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环烷基的实例包括1-(1，2，5，6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基等。

[0040] 除非另有说明，术语“卤代”和“卤素”本身或作为另一个取代基的一部分，是指氟、氯、溴或碘原子。此外，术语如“卤代烷基”意在包括被卤素原子取代的烷基，所述卤素原子可以是相同或不同的，数量范围为1至(2m′+1)，其中m′是烷基中的碳原子总数。例如，术语“卤代(C1-C4)烷基”是指包括三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。因此，术语“卤代烷基”包括单卤代烷基(被一个卤素原子取代的烷基)和多卤代烷基(被卤素原子取代的烷基，其数量为2至(2m′+1)个卤素原子，其中m′为烷基中的碳原子总数)。除非另有说明，术语“全卤代烷基”是指被(2m′+1)个卤素原子取代的烷基，其中m′是烷基中碳原子的总数。例如，术语“全卤(C1-C4)烷基”意在包括三氟甲基、五氯乙基、1，1，1-三氟-2-溴-2-氯乙基等。

[0041] 术语“酰基”是指通过除去酸的羟基部分的从有机酸衍生的那些基团。相应地，酰基意味着包括例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、癸酰基、新戊酰基、苯甲酰基等。

[0042] 除非另有说明，术语“芳基”是指多不饱和的、通常为芳族的烃取代基，其可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(至多三个环)。芳基的非限制性实例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基和1，2，3，4-四氢化萘。

[0043] 术语“杂芳基”是指含有0至4个选自氮、氧和硫的杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选地被氧化，且氮杂原子任选地被季铵化。杂芳基可以通过杂原子连接到分子的剩余部分。杂芳基的非限制性实例包括1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。

[0044] 为简洁起见，当与其它术语(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)组合使用时，术语“芳基”包括如上所定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳基烷基”指在包括其中芳基连接到烷基(例如，苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)的那些基团，包括其中碳原子(例如亚甲基基团)被例如氧原子(例如苯氧基甲基、2-吡啶氧基甲基、3-(1-萘氧基)丙基等)替代的烷基基团。

[0045] 上述术语中的每一个(例如“烷基”、“杂烷基”、“芳基”和“杂芳基”)指在包括指定基团的取代和未取代形式。下面提供了每种类型基团的优选取代基。

[0046] 烷基和杂烷基(以及被称为亚烷基、烯基、杂亚烷基、杂烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基的那些基团)的取代基可以是选自以下的各种基团：-OR′、＝O、＝NR′、＝N-OR′、-NR′R″、-SR′、卤素、-SiR′R″R″′、-OC(O)R′、-C(O)R′、-CO2R′、-CONR′R″、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR′-C(O)NR″R″′、-NR′-SO2NR″′、-NR″CO2R′、-NH-C(NH2)＝NH、-NR′C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR′、-S(O)R′、-SO2R′、-SO2NR′R″、-NR″SO2R、-CN和-NO2，数量范围为0-3，特别优选具有0、1或2个取代基的那些基团。R′、R″和R″′每个独立地指氢、未取代的(C1-C8)烷基和杂烷基、未取代的芳基、被1-3个卤素取代的芳基、未取代的烷基、烷氧基或硫代烷氧基，或芳基-(C1-C4)烷基基团。当R′和R“连接到相同的氮原子时，它们可以与氮原子结合形成5-、6-或7-元环，例如，-NR′R”意指包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。通常，烷基或杂烷基将具有0至3个取代基，在本发明中优选具有两个或更少取代基的那些基团。更优选地，烷基或杂烷基基团将是未取代的或单取代的。最优选地，烷基或杂烷基基团将是未被取代的。从以上关于取代基的讨论中，本领域技术人员将会理解，术语“烷基”意在包括诸如三卤代烷基(例如-CF3和-CH2CF3)的基团。

[0047] 烷基和杂烷基的优选取代基选自：-OR′、＝O、-NR′R″、-SR′、卤素、-SiR′R″R″′、-OC(O)R′、-C(O)R′、-CO2R′、-CONR′R″、OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR″CO2R′、-NR′-SO2NR″R″′、-S(O)R′、-SO2R′、-SO2NR′R″、-NR″SO2R、-CN和-NO2，其中R′和R“如上所定义。进一步优选的取代基选自-OR′、＝O、-NR′R″、卤素、-OC(O)R′、-CO2R′、-CONR′R″、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR″CO2R′、-NR′-SO2NR″R″′、-SO2R′、-SO2NR′R″、-NR″SO2R，-CN和-NO2。

[0048] 类似地，芳基和杂芳基的取代基是变化的并且选自：卤素，-OR′、-OC(O)R′、-NR′R″、-SR′、-R′、-CN、-NO2、-CO2R′、-CONR′R″、-C(O)R′、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR″CO2R′、-NR′-C(O)NR″R″′、-NR′-SO2NR″R″′、-NH-C(NH2)＝NH、-NR′C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR′、-S(O)R′、-SO2R′、-SO2NR′R″、-NR″SO2R、-N3、-CH(Ph)2，全氟(C1-C4)烷氧基和全氟(C1-C4)烷基，数量范围为0至芳族环系统上的开放化合价的总数；并且其中R′、R”和R”′独立地选自氢、(C1-C8)烷基和杂烷基、未取代的芳基和杂芳基、(未取代的芳基)-(C1-C4)烷基和(未取代的芳基)氧基-(C1-C4)烷基。当芳基为1，2，3，4-四氢萘时，其可以被取代的或未取代的(C3-C7)螺环烷基基团取代，所述(C3-C7)螺环烷基基团可以以本文中对于“环烷基”所定义的相同方式取代。典型地，芳基或杂芳基基团具有0至3个取代基，在本发明中优选具有两个或更少取代基的那些基团。在本发明的一个实施方案中，芳基或杂芳基将是未
取代的或单取代的。在另一个实施方案中，芳基或杂芳基将是未被取代的。

[0049] 芳基和杂芳基的优选取代基选自：卤素、-OR′、-OC(O)R′、-NR′R″、-SR′、-R′、-CN、-NO2、-CO2R′、-CONR′R″、-C(O)R′、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-S(O)R′、-SO2R′、-SO2NR′R″、-NR″SO2R、-N3、-CH(Ph)2、全氟(C1-C4)烷氧基和全氟(C1-C4)烷基，其中R′和R“如上所定义。进一步优选的取代基选自：卤素、-OR′、-OC(O)R′、-NR′R″、-R′、-CN、-NO2、-CO2R′、-CONR′R″、-NR″C(O)R′、-SO2R′、-SO2NR′R″、-NR″SO2R，全氟(C1-C4)烷氧基和全氟(C1-C4)烷基。

[0050] 如本文所使用的取代基-CO2H包括其生物电子等排置换；参见例如The Practice of Medicinal Chemistry；Wermuth，C.G.，Ed.；Academic Press：New York，1996；p.203。

[0051] 芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被式-T-C(O)-(CH2)q-U-的取代基取代，其中T和U独立地为-NH-、-O-、-CH2-或单键，并且q是0-2的整数。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被式-A-(CH2)r-B-的取代基替代，其中A和B独立地为-CH2-、-O-、-NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-，-S(O)2NR′-或单键，并且r是1-3的整数。如此形成的新环的单键之一可以任选地被双键取代。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被式-(CH2)s-X-(CH2)t-的取代基替代，其中s和t独立地为0至3的整数，并且X是-O-、-NR′-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-，或者-S(O)2NR′-。-NR′-和-S(O)2NR′-中的取代基R′选自氢或未取代的(C1-C6)烷基。

[0052] 优选的取代基在本文中公开并且在表格、结构、实施例和权利要求书中示例，并且可以应用于本发明的不同化合物，即任何给定化合物的取代基可以与其他化合物组合使用。

[0053] 在具体的实施方案中，可应用的取代基独立地为取代或未取代的杂原子，取代或未取代的、任选地杂原子C1-C6烷基，取代或未取代的、任选杂原子C2-C6烯基，取代或未取代的、任选杂原子C2-C6炔基，或取代或未取代的、任选杂原子C6-C14芳基，其中每个杂原子独立地为氧、磷，硫或氮。

[0054] 在更具体的实施方案中，适用的取代基独立地为醛、醛亚胺、烷酰氧基、烷氧基、烷氧基羰基、烷氧基、烷基、胺、偶氮、卤素、氨基甲酰基、羰基、甲酰氨基、羧基、氰基、酯、卤素、卤代甲酰基、过氧烃基、羟基、亚胺、异氰化物、异氰酸酯、N-叔丁氧基羰基、硝酸酯、腈、亚硝酸酯、硝基、亚硝基、磷酸酯、膦酰基、硫化物、磺酰基、磺基、巯基、硫醇、硫代氰基，三氟甲基或三氟甲基醚(OCF3)。

[0055] 术语“药学上可接受的盐”意指包括用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐，这取决于在本文所述的化合物上发现的特定取代基，并且适用于药物用途。当本发明化合物含有相对酸性的官能团时，碱加成盐可以通过将这种化合物的中性形式与足够量的所需
碱在纯的或在合适的惰性溶剂中接触而获得。药学上可接受的碱加成盐的实例包括钠盐、
钾盐、钙盐、铵盐，有机氨基盐或镁盐，或类似的盐。当本发明的化合物含有相对碱性的官能团时，酸加成盐可以通过使这些化合物的中性形式与足够量的所需酸(无论是纯的还是在
合适的惰性溶剂中)接触来获得。药学上可接受的酸加成盐的实例包括那些衍生自无机酸
如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸，氢碘酸或亚磷酸等，以及衍生自乙酸、丙酸、异丁酸、草酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、临苯二甲酸，苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸，甲磺酸等相对无毒的有机酸。还包括氨基酸如精氨酸等的盐，以及有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，使得化合物可以转化为碱或酸加成
盐。

[0056] 化合物的中性形式可通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物而再生。化合物的母体形式于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解性，与各种盐的形式不
同，但是对于本发明的目的而言，这些盐相当于化合物的母体形式。

[0057] 除了盐形式之外，本发明提供了呈前药形式的化合物。本文所述化合物的前药是那些在生理条件下经历化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。另外，前体药物可以
通过化学或生物化学方法在离体环境中转化为本发明的化合物。例如，当将前体药物置于
具有合适的酶或化学试剂的透皮贴剂储库中时，前药可被缓慢转化成本发明的化合物。前
药通常是有用的，因为在某些情况下，他们可能比母药更容易施用。例如，它们可能比母体药物口服更具生物利用度。前体药物在药物组合物中的溶解度也可以相对于母体药物提
高。本领域已知各种各样的前药衍生物，例如依赖前药水解裂解或氧化活化的衍生物。前药的一个非限制性例子是本发明的化合物，其以酯(“前药”)的形式给药，但随后代谢水解为羧酸即活性实体。另外的例子包括本发明化合物的肽基衍生物。

[0058] 本发明的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式(包括水合形式)存在。通常，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，并且意图包括在本发明的范围内。本发明的某些化合物可以以多晶或无定形形式存在。通常，所有的物理形式对于本发明所设想的用途是等同
的，并且包含在本发明的范围内。

[0059] 一些主题化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体、非对映异构体，几何异构体和具体指定或描绘的手性是优选的，并且在许多情况下对于最佳活性是关键的；然而所有这样的异构体均在被包括在本发明的范围内。

[0060] 本发明的化合物还可以在构成这种化合物的一个或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以用放射性同位素例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)放射性标记。本发明化合物的所有同位素变体，无论是否是放射性的，均旨在被包括在本发明的范围内。

[0061] 术语“治疗有效量”是指将在某种程度上引起组织、系统、动物或人的生物或医学反应的主题化合物的量，这正是研究人员、兽医、医生或其他临床医师所寻求的，例如当施用时，足以预防所治疗的病症或障碍的一种或多种症状的发展或在某种程度上减轻所治疗的病症或障碍的一种或多种症状。治疗有效量将根据化合物、疾病及其严重程度，以及待治疗的哺乳动物的年龄、体重等而变化。

[0062] 本发明还提供了包含化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物，特别是包含单位剂量的主题化合物的这种组合物，尤其是该组合物与描述组合物用于治疗适用疾病或
病症(本文中)的说明书共包装。

[0063] 用于给药的组合物可以采取散装液体溶液或悬浮液或散装粉末的形式。然而，更通常地，组合物以单位剂量形式呈现以促进精确剂量。术语“单位剂型”是指适合作为人类受试者和其他哺乳动物的单位剂量的物理离散单位，每个单位含有经计算可产生所需治疗
效果的预定量的活性物质，以及合适的药物赋形剂。典型的单位剂量形式包括液体组合物
的预先填充、预先测量的安瓿或注射器，或在固体组合物的情况下的丸剂、片剂、胶囊、锭剂等。在这样的组合物中，化合物通常是次要组分(约0.1％至约50％重量，或优选约1％至约
40％重量)，其余为各种赋形剂或载体以及有助于形成所需剂量的加工助剂形成。

[0064] 合适的赋形剂或载体以及制备可给药组合物的方法是本领域技术人员已知的或明显的，并且在诸如Remington′s Pharmaceutical Science，Mack Publishing Co，NJ
(1991)等的出版物中有更详细的描述。另外，所述化合物可以有利地与本文所述的或本领
域中已知的其他治疗剂联合使用，特别是其他抗坏死剂。因此，组合物可以单独、联合或以单一剂量单位组合。

[0065] 施用的量取决于化合物制剂，施用途径等，并且通常在常规试验中凭经验确定，并且取决于靶标、宿主和施用途径等，必然会发生变化。通常，根据具体应用，单位剂量制剂中的活性化合物的量可以从约1，5，25或100至约5,25，100，500，1000或2000mg变化或调节。在一个具体的实施方案中，将单位剂型包装在适合顺序使用的多包装中，例如泡罩包装，其包含至少6，9或12个单位剂型的片剂。实际使用的剂量可以根据患者的要求和所治疗病症的严重程度而变化。确定特定情况的合适剂量在本领域的技术范围内。一般而言，治疗以小于化合物最佳剂量的较小剂量开始。此后，剂量增加少量，直到在这种情况下达到最佳效果。
为了方便起见，如果需要，可以将总的日剂量分成一部分，并在一天中分批给药。

[0066] 可以通过多种方法施用化合物，包括但不限于非肠道给药、外部给药、口服给药或局部给药，例如通过气雾剂或透皮给药，用于预防性和/或治疗性处理。而且，根据熟练的临床医师的知识，考虑到所施用的治疗剂对患者的所观察到的作用，并且鉴于观察到的反应，可以改变治疗方案(例如剂量和给药次数)给予所施用的治疗剂。

[0067] 本发明的治疗剂可以在治疗有效方案的过程中以治疗有效剂量和总量施用以治疗患者。对于更有效的化合物，每千克患者的微克(μg)量可以是足够的，例如，在约1，10，
100，1000，10000，20000μg/kg至约10，100，1000，10000，20000或80000μg/kg的患者体重范围内，尽管最佳剂量是化合物特异性的，并且通常根据每种化合物的经验确定。

[0068] 通常，临床试验中的常规实验将确定对于每种治疗，每种给药方案和针对特定患者的施用的最佳治疗效果的特定范围，也将根据患者状况和对初始剂量的响应性将其调整
到有效且安全的范围内。然而，最终的给药方案将根据主治医生的判断，考虑因素如年龄、患者的状况和大小以及化合物效力、被治疗的疾病的严重程度。例如，所述化合物的给药方案可以以2至4(优选两个)分剂量口服给药，从10mg至2000mg/天，优选10至1000mg/天，更优选50至600mg/天。间歇性治疗(例如，三周中的一周或四周中的三天)也可以使用。

[0069] 在其具体的实施方案中，待治疗的人具有与肥胖或致病或医学上不希望的体重增加有关的基因型，例如SNP rs7202116(G)，rs1421085(C)或rs9939609(A)或替代或与其连
锁不平衡的代理SNP(关于相关表型；参见下面的参考文献)并具有大于0.5的r2值；和/或
(f)病原表达或过量表达FTO或Fto(例如包含并表达多拷贝fto基因)。关于rs7202116G，见
例如Yang et al.，FTO genotype is associated with phenotypic variability ofbody mass index，Nature，Sep 16，2012，doi：10.1038/nature11401[epub]；关于rs9939609 A，见例如Freathy RM，et al(2008).″Common variation in the FTO gene alters
diabetes-related metabolic traits to the extent expected，given its effect on
BMI″.Diabetes 57(5)：1419-26.doi：10.2337/db07-1466.PMC 3073395.PMID 18346983；
关于rs1421085C，见例如Dina C，et al.，(2007).″Variation in FTO contributes to childhood obesity and severe adult obesity″.Nature Genetics 39(6)：724-6.doi：
10.1038/ng2048.PMID 17496；以及关于多拷贝fto基因小鼠，见例如Church et al.，
Overexpression of Fto leads to increased food intake and results in obesity，
Nature Genetics，published online 14 Nov 2010，doi：10.1038/ng.713.

[0070] 应当理解，这里描述的实施例和实施方案仅用于说明的目的，并且鉴于本领域技术人员会联想到其各种修改或变化，这些变化和修改包括在本申请的精神和范围以及所附
权利要求的范围内。本文引用的所有出版物、专利和专利申请(包括其中的引文)在此以其
全文并入作为参考用于所有目的。

[0071] 实施例：化合物制备

[0072] 化合物347：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以两个合成步骤制备化合物347：

[0073] 步骤1：合成2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-氧代丙酰胺(2)

[0074] 在氮气下，室温下将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(1.0g，4.4mmol)的甲苯(11mL)悬浮液中。将混合物在60℃加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入更多的甲苯并消除。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(10mL)中。

[0075] 在氮气下，在-5℃下将60％NaH(0.35g，8.8mmol)加入到2-氰基-N，N-二乙基乙酰胺(0.56g，4.0mmol)的无水THF(15mL)溶液中。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并在加入3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃再搅拌1小时。将反应混合物升温至0℃，加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10min，用乙酸乙酯(25mL×2)
萃取，有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到标题化合物，为橙色固体(705mg，99％)。MS[MH]+对C16H19N3O6计算值350.1，实测值350.1。

[0076] 步骤2：合成2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-氧代丙酰胺(3)[0077] 在-15℃的氮气下，在2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-氧代丙酰胺(500mg，1.43mmol)的DCM(5mL)溶液中加入1.0M BBr3在DCM(5mL，5mmol)中的溶
液。得到的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并经硫
酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过制备型HPLC(0.5％TFA，甲醇/水)进一步纯化，得到所需产物，为亮黄色固体(80mg，17％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.92(s，1H)，8.28(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(d，J＝1.9Hz，1H)，7.26(s，3H)，5.93(s，1H)，3.66(d，J＝6.0Hz，3H)，
1.33(t，J＝7.0Hz，6H)。MS[MH]+对C14H15N3O6计算值322.0，实测值322.0。

[0078] 化合物315：根据以下操作，在一个合成步骤中从3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛制备化合物315：

[0079] 步骤1：合成(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(吡啶-2-基)丙烯腈(2)

[0080] 将2-(吡啶-2-基)乙腈(142mg，1.2mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(182mg，1mmol)和甲醇(10mL)中的NH4OAc(462mg，6mmol)溶液加热回流过夜。LCMS显示没有3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛剩下。将反应混合物冷却至室温。过滤固体并用甲醇和水洗涤。将固体重新溶于甲醇(5mL)中。加入5mL 1N HCl水溶液调节pH 3～4。通过过滤得到期望的产物，为亮色固体(56mg，20％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.57(m，1H)，8.12(s，1H)，7.92(d，J＝
2.2Hz，1H)，7.84(td，J＝7.8，1.8Hz，1H)，7.70(d，J＝8.1Hz，1H)，7.56(d，J＝2.4Hz，1H)，+
7.31-7.25(m，1H)。MS[MH]对C14H9N3O4计算值284.0，实测值284.0。

[0081] 化合物361：根据以下操作，由丙二酰胺以四个合成步骤制备化合物361：

[0082] 步骤1：合成2-(4，6-二羟基嘧啶-2-基)乙酰胺(2)

[0083] 向NaOEt(在EtOH占21％，167mL，450mmol)的EtOH(170mL)溶液中加入丙二酰胺(22.9g，224mmol)。回流2小时后，减压除去一半EtOH，过滤沉淀的固体并在高真空下干燥过夜。将干燥的固体钠盐(24g)溶于冰冷的水(70mL)中，用3N HCl(50mL)使pH值达到2～3，从水中重结晶，得到浅黄色固体2-(4，6-二羟基嘧啶-2-基)乙酰胺(6.28g，33％)。

[0084] 步骤2：合成2-(4，6-二氯嘧啶-2-基)乙腈(3)

[0085] 2-(4，6-二羟基嘧啶-2-基)乙酰胺(6.28g，37.1mmol)在POCl3(19mL，204mmol)中的溶液置于烧瓶中，然后将烧瓶连接至回流冷凝器。通过冷凝器加入N，N-二甲基苯胺
(10mL，79mmol)。混合物在油浴中小心加热，当反应开始时，油浴迅速除去。在最初的剧烈反应平息之后，反应再回流10分钟。将热材料倾倒在100g冰上，并将所得悬浮液萃取(DCM)。将合并的有机层干燥(硫酸钠)并减压浓缩。通过柱色谱法(二氧化硅，PE/EA＝4/1)纯化产物，+
得到期望的产物，为黄色固体(5.1g，27.1mmol)。MS[MH] C6H3Cl2N3计算值189.0，实测值
189.0。

[0086] 步骤3：合成2-(嘧啶-2-基)乙腈(4)

[0087] 向2-(4，6-二氯嘧啶-2-基)乙腈(2.2g，11.7mmol)和三乙胺(3.0mL，20.8mmol)在乙酸乙酯/甲醇(1/1.40mL)中的溶液中，加入10％Pd/C(400mg)，并将该溶液在氢气(1atm)
下剧烈搅拌2.5小时。将反应经硅藻土过滤并用甲醇洗涤硅藻土。将合并的滤液减压浓缩并通过快速色谱(二氧化硅，PE/EA＝1/1)纯化，得到呈浅红色液体的2-(嘧啶-2-基)乙腈
(618mg，54％)。MS[MH]+C6H5N3计算值120.1，实测值120.1。

[0088] 步骤4：合成(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(嘧啶-2-基)丙烯腈(6)

[0089] 将2-(嘧啶-2-基)乙腈(120mg，1mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(182mg，1mmol)和NH4OAc(462mg，6mmol)的甲醇(10mL)溶液加热回流5小时。LCMS显示没有起始物质剩下。过滤固体并用甲醇和水洗涤，然后溶于甲醇(5mL)中。加入5mL1N.HCl调节pH 3～4，过滤固体，真空干燥，得到所需产物，为亮黄色固体(250mg，88％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.78(d，J＝4.8Hz，2H)，8.35(s，1H)，7.96(d，J＝2.5Hz，1H)，7.59(d，J＝2.5Hz，1H)，7.32(t，J＝+
4.8Hz，1H)。MS[MH]C13H8N4O4计算值285.0，实测值285.0。

[0090] 化合物395：化合物395根据以下操作，由4-甲基嘧啶在四个合成步骤中制备：

[0091] 步骤1：合成4-(氯甲基)嘧啶(2)

[0092] 将4-甲基嘧啶(53.1mmol，5g)溶于CHCl3(100mL)中，将混合物加热至75℃，然后将1，3，5-三氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮(26.6mmol，6.2g)分两次缓慢加入。将混合物在75℃下搅拌过夜。反应完成后，过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(硅胶，PE/EA＝30/1至10/1)纯化残余物以获得呈黄色油状物的所需产物(1.64g，24％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)9.16(s，1H)，8.77(d，J＝5.2Hz，1H)，7.54(d，J＝5.1Hz，1H)，4.60(s，2H)；MS[MH]+C5H6ClN2计算值129.0，实测值129.1；

[0093] 步骤2：合成2-(嘧啶-4-基)乙腈(3)

[0094] 将无水碳酸钾(7.78mmol，1.08g)，碘化钠(3.89mmol，583mg)和三甲基硅烷甲腈(5.83mmol，579mg)溶于乙腈(12mL)中，将混合物加热至50℃。最后，将4-(氯甲基)-嘧啶
(3.89mmol，500mg)滴加到反应混合物中。将混合物在50℃搅拌2小时。然后将其在真空中浓缩，并通过柱层析(硅胶，PE/EA＝1/1)纯化残余物，得到所需产物(120mg，26％)，为黑色油状物。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)9.21(s，1H)，8.81(d，J＝5.2Hz，1H)，7.52(d，J＝
5.0Hz，1H)，3.94(s，2H)；MS[MH]+C6H6N3计算值120.1，实测值120.2。

[0095] 步骤3：合成3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(嘧啶-4-基)丙烯腈(4)

[0096] 将2-(嘧啶-4-基)乙腈(0.95mmol，113mg)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(0.79mmol，145mg)和乙酸铵(4.75mmol，366mg)在甲醇(8mL)中的混合物在80℃下搅拌4小时，然后过滤并用甲醇和水洗涤，得到所需产物(200mg，89％)。1H-NMR(400MHz，DMSO)δ(ppm)9.08(s，
1H)，8.72(d，J＝5.5Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.02(s，1H)，7.74(d，J＝5.5Hz，1H)，7.59(s，1H)，
7.08(s，2H)。MS[MH]-计算值C13H7N4O4283.1，实测值283.0；

[0097] 化合物505：根据以下操作，由3-氯哒嗪以三个合成步骤制备化合物505：

[0098] 步骤1：合成2-氰基-2-(哒嗪-3-基)乙酸叔丁酯(2)

[0099] 向3-氯哒嗪(0.5g，4.38mmol)的NMP(2.5mL)溶液中加入碳酸钾(1.8g，13.15mmol)。然后加入2-氰基乙酸叔丁酯(0.88mL，6.14mmol)。将黄色悬浮液温热至80℃，并在80℃下搅拌3小时。将棕色悬浮液冷却至室温。然后将其加入到水(10mL)中。棕色溶液用HCl酸化(气体逸出，强烈发泡)。有沉淀。过滤悬浮液，滤饼用水洗涤。将滤饼溶于乙酸乙
1
酯中，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发有机相，得到600mg黄色油状的所需产物。H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：14.3(bs，1H)，7.68(dd，1H)，7.35(d，1H)，1.55(s，9H)。MS[MH]+C10H11N3O2计算值206.1，实测值206.1；

[0100] 步骤2：合成2-(哒嗪-3-基)乙腈(3)

[0101] 将上述制备的产物与甲苯(50mL)中的TsOH(142mg)合并。在回流下搅拌12小时后，将反应物冷却至25℃，用饱和NaHCO3稀释并萃取(10％甲醇/CH2Cl2，三次)。将有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过快速色谱(硅胶，40-45％EtOAc/己烷)纯化粗物质，得到所需产物(87mg，17％，两步)，为浅黄色油状物。MS[MH]+C6H5N3计算值120.0，实测值
120.0。

[0102] 步骤3：(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(哒嗪-3-基)丙烯腈(4)的合成

[0103] 将2-(吡嗪-2-基)乙腈(87mg，0.73mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(0.79mmol，145mg)和乙酸铵(366mg，4.75mmol)在甲醇(8mL)中的混合物在80℃下搅拌4小时。然后过
滤，用甲醇和水洗涤，真空干燥，得到黄色固体的所需产物(155mg，75％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.92(s，2H)，9.25(d，J＝4.8Hz，1H)，8.43(s，1H)，8.20(d，J＝8.7Hz，1H)，8.08(d，J＝2.0Hz，1H)，7.95(d，J＝2.0Hz，1H)，7.85(dd，J＝8.7，4.9Hz，1H)。MS[MH]-计算值C6H5N3
283.1，实测值283.0。

[0104] 化合物331：根据以下操作，在一个合成步骤中从3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛制备化合物331：

[0105] 步骤1：(E)-2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-N-(噻唑-2-基)丙烯酰胺(2)

[0106] 将2-氰基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(184mg，1.1mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(200mg，1.1mmol)和NH4OAc(462mg，6mmol)的甲醇(10毫升)溶液加热回流过夜。LCMS显示没有3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛剩下。将反应混合物冷却至室温。过滤固体并用甲醇和水洗
涤。将固体重新溶于甲醇(5mL)中。加入5mL 1N HCl水溶液调节pH 3～4。通过过滤，得到期望的产物，为亮色固体(90mg，25％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.17(s，1H)，7.95(s，1H)，7.50(s，2H)，7.20(s，1H)。MS[MH]+C13H8N4O5S计算值333.0，实测值333.0。

[0107] 化合物394：根据以下操作，由苯-1，2-二胺在四个合成步骤中制备化合物394：

[0108] 步骤1：合成1-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙酮(2)

[0109] 将2-氧代琥珀酸(4.9g，37mmol)，苯-1，2-二胺(4g，37mmol)和4N盐酸盐溶液(9mL)的甲醇(30mL)混合物回流7小时。反应完成后，将其真空浓缩除去溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯中，用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。将有机层合并，减压浓缩。通过柱色谱法(硅胶，PE/EA＝5/1)纯化残余物以获得期望的产物(4g，67％)。MS[MH]+C9H9N2O的计算值：161.06，实测值：161.1。

[0110] 步骤2：合成1-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-溴乙酮(3)

[0111] 1-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙酮(4g，25mmol)溶于四氯甲烷(50mL)中。加入1-溴吡咯烷-2，5-二酮(5.3g，30mmol)和2，2′-(二氮烯-1，2-二基)二(2-甲基丙腈)(411mg，
2.5mmol)。将混合物在100℃下搅拌2小时，然后将其真空浓缩，再溶于乙酸乙酯中。将有机层用水洗涤并浓缩，得到粗产物(2g，33％)，将其不经进一步纯化用于下一步。MS[MH]+
C9H8BrN2O计算值238.97，实测值239.0。

[0112] 步骤3：合成3-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)-3-氧代丙腈(4)

[0113] 将1-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-溴乙酮(2g，8.4mmol)，三甲基硅烷甲腈(1.66g，16.7mmol)，TBAF(2.2g，8.4mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液在室温下搅拌24小时。然后将其真空浓缩并再溶于乙酸乙酯中。将有机层用水洗涤并浓缩，得到粗产物(400mg，26％)，将其不经进一步纯化用于下一步。MS[MH]+C10H7N3O的计算值：186.06，实测值：186.1。

[0114] 步骤4：合成2-(1H-苯并[d]咪唑-2-羰基)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯腈(5)

[0115] 将3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(107mg，0.59mmol)和3-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)-3-氧代丙腈(130mg，0.7mmol)和NH4OAc(273mg，3.54mmol)的甲醇(10mL)溶液加热回流过夜。
LCMS显示形成所需产物，将反应混合物冷却至室温并真空浓缩除去溶剂。所需产物通过
Prep-HPLC(50mg，24％)获得。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)12.63(s，1H)，8.95(s，1H)，
7.85(s，1H)，7.76(d，J＝8.2Hz，1H)，7.65(s，1H)，7.50(t，J＝7.5Hz，1H)，7.38-7.26(m，
2H)，7.12(s，2H)。MS[MH]+C17H11N4O5计算值351.07，实测值351.0。

[0116] 化合物382：根据以下操作，由2-氰基乙酸乙酯以两个合成步骤制备化合物382：

[0117] 步骤1：合成3-吗啉代-3-氧代丙腈(2)

[0118] 将乙醇(3mL)中的乙醇钠(0.1mmol)，氰基乙酸乙酯(1.13g，10mmol)和吗啉(0.85g，10mmol)的混合物在室温下搅拌24小时。过滤收集沉淀，用乙醚洗涤并在乙醇中重结晶，得到3-吗啉代-3-氧代丙腈的白色固体(0.56g，35％)。

[0119] 步骤2：合成(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(哌啶-1-羰基)丙烯腈(3)

[0120] 将3-吗啉代-3-氧代丙腈(300mg，2.0mmol)，3，4-二羟基-5-硝基-苯甲醛(188mg，1.1mmol)和NH4OAc(462mg，6mmol)在甲醇(10mL)中的混合物加热回流5小时。LCMS显示没有
3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛剩下。将反应混合物冷却至室温，真空浓缩至干燥。通过Prep-HPLC(0.5％TFA，甲醇/水)进一步纯化，得到所需产物，为黄色固体(60mg，19％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.87(s，2H)，7.94(d，J＝2.1Hz，1H)，7.77(d，J＝2.1Hz，1H)，7.68(s，1H)，
3.56-3.66(m，8H)。MS[MH]+C14H13N3O6计算值320.1，实测值320.0。

[0121] 化合物351：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以三个合成步骤制备化合物351：

[0122] 步骤1：合成3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯(2)

[0123] 在氮气下，于室温将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)悬浮液中。将混合物在60℃加热15小时。减压除去溶剂。得到的淡黄色固体(500mg，92％)用于下一步而无需进一步处理。

[0124] 步骤2：合成3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-氧代-2-(吡啶-2-基)丙腈(3)

[0125] 在氮气下，在-5℃下将NaH(60％w/w，176mg，4.4mmol)加入到2-(吡啶-2-基)乙腈(236mg，2.0mmol)的无水THF(10mL)溶液中。在-5℃下搅拌得到的悬浮液15分钟，加入3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯(500mg，2.2mmol)的THF(5mL)溶液超过10分钟，再搅拌1小时。将反应混合物温热至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟。用乙酸乙
酯(25mL X 2)萃取混合物。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到所需产物
(425mg，64％)。MS[MH]+C16H14N3O5计算值328.09，实测值328.1。

[0126] 步骤3：合成3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-氧代-2-(吡啶-2-基)丙腈(4)

[0127] 在-15℃下，在氮气下，(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-氧代-2-(吡啶-2-基)丙腈(425mg，1.3mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入1.0MBBr3在二氯甲烷(10mL，10mmol)中的溶液。将得到的悬浮液在-15℃下搅拌1小时，升温至室温过夜。通过加入水(4mL)缓慢淬灭反应并再搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过制备型HPLC进一步纯化，得到期望的产物
(65mg，17％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)16.11(s，1H)，10.65(s，2H)，8.38(t，J＝
5.7Hz，1H)，8.28-7.96(m，1H)，7.84(d，J＝2.0Hz，1H)，7.55(d，J＝2.1Hz，1H)，7.47(d，J＝
8.7Hz，1H)，7.26(t，J＝6.6Hz，1H)。MS[MH]+C14H10N3O5计算值300.05，实测值300.0。

[0128] 化合物371：根据以下操作，由2-氰基乙酰氯以两个合成步骤制备化合物371：

[0129] 步骤1：合成3-氧代-3-(哌啶-1-基)丙腈(2)

[0130] 在0℃下，将哌啶(5mL，50.6mmol)在DCM(25mL)中的混合物加入2-氰基乙酰氯(5mL)，然后温热至室温过夜。反应混合物用水淬灭，真空浓缩至干，残余物通过柱色谱(二氧化硅，PE/EA＝1/1)纯化，得到3-氧代-3-(哌啶-1-基)丙腈，为黄色油状物(500mg，7％)。
MS[MH]+C8H12N2O计算值153.1，实测值153.1。

[0131] 步骤2：合成(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(哌啶-1-羰基)丙烯腈(3)

[0132] 将3-氧代-3-(哌啶-1-基)丙腈(300mg，2mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(273mg，1.5mmol)和NH4OAc(924mg，12mmol)在甲醇(15毫升)中的混合物加热回流3小时。过滤固体并用甲醇和水洗涤，得到粗产物。将溶解于甲醇(5mL)中的固体加入1N·HCl
(0.5mL)，改变颜色并形成固体，将固体过滤并用水洗涤，真空干燥，得到(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(哌啶-1-羰基)丙烯腈，为亮黄色固体(60mg，13％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.86(s，2H)，7.92(d，J＝2.1Hz，1H)，7.75(d，J＝2.0Hz，1H)，7.63(s，1H)，3.56-
3.45(m，4H)，1.55-1.62(m，6H)。MS[MH]+C15H15N3O5的计算值为318.3，实测值为318.0。

[0133] 化合物518：根据以下操作，在两个合成步骤中从2-(吡啶-3-基)乙腈制备化合物518：

[0134] 步骤1：合成3-(氰基甲基)吡啶1-氧化物(2)

[0135] 将2-(吡啶-3-基)乙腈(625mg，5.3mmol)和m-CPBA(1.36g，7.95mmol)在CHCl3(20mL)中的溶液在室温下搅拌过夜。反应混合物用饱和碳酸氢钠猝灭，并用DCM和甲醇
(DCM/甲醇＝10/1)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并真空干燥，得到粗产
物，为白色固体(780mg，＞100％)，将其不经进一步纯化用于下一步。MS[MH]+C7H6N2O计算值
135.0，实测值135.0。

[0136] 步骤2：合成(E)-3-(1-氰基-2-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)乙烯基)吡啶1-氧化物(3)

[0137] 将3-(氰基甲基)吡啶1-氧化物(400mg，3.0mmol)，3，4-二羟基-5-硝基-苯甲醛(270mg，1.5mmol)和NH4OAc(693mg，9mmol)在甲醇(10mL)中的混合物加热回流过夜。LCMS显示没有3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛剩下。将反应混合物冷却至室温。过滤固体并用甲醇和水洗涤。将固体重新溶于甲醇(5mL)中。加入5mL 1N HCl水溶液调节pH 3～4。通过过滤得到期望的产物，为亮色固体(110mg，18％)。1H NMR(301MHz，DMSO)δ13.71(s，1H)，10.89(s，2H)，
8.65(s，1H)，8.26(d，J＝6.2Hz，1H)，8.14(s，1H)，7.99(d，J＝2.0Hz，1H)，7.84(d，J＝
2.0Hz，1H)，7.67-7.50(m，2H)。MS[MH]+C14H9N3O5计算值300.0，实测值300.0。

[0138] 化合物523：根据以下操作，在三个合成步骤中从3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸制备化合物523：

[0139] 步骤1：3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯(2)的合成

[0140] 在氮气下，在室温下将SOCl2(0.76mL，10.56mmol)和无水DMF(0.02mL，0.44mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(1g，4.4mmol)的甲苯(20mL)悬浮液中。将混合物在60℃加热并搅拌15小时。减压除去溶剂。得到的淡黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯
(1g，93％)不经进一步处理就用于下一步。

[0141] 步骤2：合成3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(吡嗪-2-基)丙烯腈(3)

[0142] 在氮气下，在-5℃将60％NaH(336mg，8.4mmol)添加至2-(吡嗪-2-基)乙腈(500mg，4.2mmol)的无水THF(5mL)溶液中。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并加入3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯(500mg，4.07mmol)的THF溶液超过10分钟，并在-5℃下再搅拌1小时。将反应混合物升温至0℃，加入1N·HCl溶液(8mL)淬灭并在室温下搅拌10min，然后用乙酸乙
酯(30mL×3)萃取，有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到所需产物(440mg，33％)。MS[MH]-C15H11N4O5计算值327.08，实测值327.1。

[0143] 步骤3：合成3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(吡嗪-2-基)丙烯腈(4)

[0144] 在-15℃和氮气下，向3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(吡嗪-2-基)丙烯腈(200mg，0.61mmol)的无水二氯甲烷(5mL)溶液中加入1.0M BBr3的二氯甲烷(3mL，
3mmol)溶液。将得到的悬浮液在-15℃下搅拌1小时，升温至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并再搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过制备型HPLC进一步纯化以获得期望的产物(35mg，19％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)15.85(s，1H)，10.75(s，2H)，8.88(s，1H)，
8.34(d，J＝3.7Hz，1H)，8.22(d，J＝2.5Hz，1H)，7.88(d，J＝2.1Hz，1H)，7.56(d，J＝2.1Hz，-
1H)。MS[MH]计算值C13H7N4O5 299.05，实测值299.0。

[0145] 化合物525：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以两个合成步骤制备化合物525：

[0146] 步骤1：合成(E)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(嘧啶-4-基)丙烯腈(2)

[0147] 在氮气和室温下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)溶液中。将混合物在60℃加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。更多的甲苯被添加并再次被除去。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0148] 在氮气下，在-5℃下，将60％NaH(0.18g，4.4mmol)添加至2-(嘧啶-4-基)乙腈(0.44g，2.0mmol)的无水THF(10mL)溶液中。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并加入3，
4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃再搅拌1小时。将反应混合物升温至0℃，加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10min，用乙酸乙酯(25mL×2)萃
取，有机层用硫酸钠干燥，浓缩真空，得到标题化合物，为橙色固体(550mg，85％)。MS[MH]+C15H12N4O5计算值329.0，实测值329.0。

[0149] 步骤2：合成(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(嘧啶-4-基)丙烯腈(3)

[0150] 在-5℃在氮气下，(E)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(嘧啶-4-基)丙烯腈(250mg，0.76mmol)的DCM(5mL)溶液中加入BBr3(0.5mL，5mmol)。得到的红色悬浮液在-
5℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并经硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过制备型HPLC(0.5％TFA，甲醇/水)进一步纯化，得到所需产物，为亮黄色固体(46mg，19％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ15.35(s，1H)，10.67(s，2H)，8.95-7.16(m，5H)。MS[MH]+C15H14N2O5计算值337.0，实测值301.0(自由基)。

[0151] 化合物503：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以两个合成步骤制备化合物503：

[0152] 步骤1：3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-氧代-2-(噻唑-2-基)丙腈(2)的合成

[0153] 在氮气和室温下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)悬浮液中。将混合物在60℃加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入更多的甲苯并消除。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0154] 在氮气和-5℃下，将60％NaH(0.18g，4.4mmol)加入到2-(噻唑-2-基)乙腈(0.24g，2.0mmol)的无水THF(5mL)溶液中。所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并加入3，4-二甲氧基-
5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃下再搅拌1小时。将反应混合物升温至0
℃，加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟，用乙酸乙酯(25mL×2)萃取，有机
层用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到标题化合物，为橙色固体(240mg，39％)。MS[MH]+
C14H11N3O5S计算值334.3，实测值334.3。

[0155] 步骤2：合成3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-氧代-2-(噻唑-2-基)丙腈(3)

[0156] 在-15℃下，在氮气下，3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-氧代-2-(噻唑-2-基)丙腈(224mg，0.67mmol)的DCM(5mL)溶液中加入1.0MBBr3在DCM(3mL，3mmol)中的溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并经硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过制备型HPLC(0.5％TFA，甲醇/水)进一步纯化，得到所需产物，为亮黄色固体(24mg，12％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.88(d，J＝2.0Hz，1H)，7.60(d，J＝
4.0Hz，1H)，7.56(d，J＝2.0Hz，1H)，7.31(d，J＝4.0Hz，1H)。MS[MH]-计算值C12H7N3O5 S
304.0，实测值304.0。

[0157] 化合物374：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以两个合成步骤制备化合物374：

[0158] 步骤1：合成2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-氧代-N-(噻唑-2-基)丙酰胺(2)

[0159] 在氮气和-5℃下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)溶液中。将混合物在60℃加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。更多的甲苯被添加并再次被除去。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0160] 在氮气下，在-5℃下，将60％NaH(0.18g，4.4mmol)加入到2-氰基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(0.35g，2.0mmol)的无水THF(10mL)中。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并加入
3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃下再搅拌1小时。将反应混合物升温至0℃，加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10min，用乙酸乙酯(25mL×2)
萃取，有机层用硫酸钠干燥并浓缩真空，得到标题化合物，为橙色固体(510mg，67％)。MS[MH]+C15H12N4O6S计算值377.0，实测值377.0。

[0161] 步骤2：合成2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-氧代-N-(噻唑-2-基)丙酰胺(3)

[0162] 将2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-氧代-N-(噻唑-2-基)丙酰胺(400mg，1.1mmol)的DCM(5mL)溶液在-15℃和氮气下加入1.0M BBr3在DCM(5mL，5mmol)中的溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水
(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并经硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过制备型HPLC(0.5％TFA，甲醇/水)进一步纯化，得到所需产物，为亮黄色固体(100mg，28％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.88(d，J＝
2.0Hz，1H)，7.60(d，J＝4.0Hz，1H)，7.56(d，J＝2.0Hz，1H)，7.31(d，J＝4.0Hz，1H)。MS[MH]+C13H8N4O65计算值349.0，实测值349.0。

[0163] 化合物655：根据以下操作，由5-氯吡嗪-2-羧酸甲酯以四个合成步骤制备化合物655：

[0164] 步骤1：合成5-(2-(叔丁氧基)-1-氰基-2-氧代乙基)吡嗪-2-羧酸甲酯(2)

[0165] 将2-氰基乙酸叔丁酯(2.1g，15mmol)和t-BuOK(1.6g，15mmol)在无水THF(50mL)中的溶液在室温下搅拌30min，然后加入5-氯吡嗪-3-羧酸甲酯(1.7g，10.0mmol)，将反应混合物加热回流过夜。反应完成后，将其冷却至室温，用水(100mL)淬灭，将固体过滤并真空干燥至得到期望的产物，为黄色固体(1.7g，61％)。MS[M+H]+C13H15N3O4计算值278.1，实测值
278.1。

[0166] 步骤2：合成5-(氰基甲基)吡嗪-2-羧酸甲酯(3)

[0167] 将5-(2-(叔丁氧基)-1-氰基-2-氧代乙基)吡嗪-2-羧酸酯(1.7g，6.14mmol)和p-TsOH(314mg，1.84mmol)的溶液加热回流3小时，然后TLC显示没有起始物质剩下。用水(5mL)淬灭反应混合物，用EA萃取，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并真空干燥，得到粗产物，通过柱层析(二氧化硅，100g，200-300m，通过PE/EA＝5/1洗脱)进一步纯化，得到期望的产物5-(氰基甲基)吡嗪-2-羧酸甲酯(800mg，74％)，为黄色固体。MS[M+H]+C8H7N3O2的计算值178.1，实测值178.1。

[0168] 步骤3：合成(Z)-5-(1-氰基-2-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)乙烯基)吡嗪-2-羧酸甲酯(4)

[0169] 将5-(氰基甲基)吡嗪-2-羧酸甲酯(170mg，1.0mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(183mg，1.0mmol)和NH4OAc(554mg，7.2mmol)在甲醇(15mL)中的溶液加热回流3小时，然后冷却至室温。过滤固体并用水(15mL)洗涤。将固体重新溶于甲醇(5mL)中。加入5mL 1N HCl水溶液至pH＝3～4。通过过滤得到期望的产物，真空干燥，得到亮固体(210mg，61％)。MS[M+H]+C15H10N4O6计算值343.0，实测值343.0。

[0170] 步骤4：合成(Z)-5-(1-氰基-2-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)乙烯基)吡嗪-2-羧酸(5)

[0171] (Z)-5-(1-氰基-2-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)乙烯基)吡嗪-2-羧酸甲酯(150mg，0.44mmol)的DCM(5mL)溶液在-15℃下、氮气下加入1.0M BBr3在DCM(2mL，2mmol)中的溶液。
将悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌
30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。将溶剂真空除去，得到粗产物。通过制备型HPLC(0.5％TFA，甲醇/水)进一步纯化，得到所需产物，为亮黄色固体(55mg，38％)。1H NMR(300MHz，DMSO)δ9.27(s，1H)，9.22(s，1H)，8.57(s，
1H)，8.12(s，1H)，7.98(s，1H)，2.52(s，19H)，0.02(s，1H)。MS[MH]+C14H8N4O6计算值329.0，实测值329.0。

[0172] 化合物656：根据以下操作，在两个合成步骤中从5-氯-1，2，4-噻二唑制备化合物656：

[0173] 步骤1：合成2-(1，2，4-噻二唑-5-基)乙腈(2)

[0174] 在0℃下，将干燥的MeCN(226mg，11mmol)的无水THF(25ml)溶液中加入LiHMDS(5.5mmol，5.5mL)，然后将混合物在0℃下搅拌30分钟，在0℃向该混合物中加入5-氯-1，2，
4-噻二唑(691mg，5.5mmol)的无水THF(5mL)溶液，然后在室温下搅拌过夜。用水(1 mL)淬灭反应混合物，并通过EA(30mL×3)萃取，用硫酸钠干燥，过滤并真空干燥，得到粗产物。通过柱层析(二氧化硅，100g，200-300m，通过PE/EA＝5∶1洗脱)进一步纯化，得到所需产物
(410mg，60％)，为黄色固体。MS[M+H]+计算为C4H3N3S 126.0，实测值126.0。

[0175] 步骤2：合成(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(1，2，4-噻二唑-5-基)丙烯腈(3)

[0176] 将2-(1，2，4-噻二唑-5-基)乙腈(150mg，1.2mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(182mg，1mmol)和NH4OAc(462mg，6mmol)的甲醇(10mL)溶液加热回流5小时。LC-MS显示没有起始物质剩下。过滤固体并用甲醇和水洗涤，然后溶于甲醇(5mL)中。加入5ml 1N.HCl直至pH＝3～4。过滤固体并真空干燥，得到所需产物，为亮黄色固体(200mg，69％)。1H NMR
(400MHz，DMSO)δ10.96(s，1H)，8.97(s，1H)，8.45(s，1H)，8.14(d，J＝2.1Hz，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)。MS[M+H]+C11H6N4O4S的计算值291.0，实测值291.0。

[0177] 化合物660：根据以下操作，由(E)-2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酸以两个合成步骤制备化合物660：

[0178] 步骤1：(E)-2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰氯(2)的合成

[0179] (E)-2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酸(25mg，0.1mmol)的DCM(25ml)溶液中加入一滴DMF和草酰氯(25mg，0.2mmol)。加热反应混合物直至固体溶解，冷却至室温，真空浓缩至干燥。将其不经纯化用于下一步(27mg，100％)。

[0180] 步骤2：(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(1，3-噁嗪烷-3-羰基)丙烯腈(3)

[0181] 0℃下，逐滴添加溶于DCM(3mL)中的酰氯至1，3-噁嗪烷(9mg，0.12mmol)，Et3N(24mg，0.24mmol)的DCM(3mL)溶液中，加完后，将反应混合物缓慢升温至室温过夜。将反应混合物用水淬灭，分离有机层，用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到粗产物，通过制备型HPLC
(0.5％TFA，甲醇/水)进一步纯化，得到所需产物，为黄色固体(5mg，16％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.87(s，2H)，7.95(d，J＝2.0Hz，1H)，7.76(d，J＝2.1Hz，1H)，7.69(s，1H)，5.01(s，+
2H)，3.88-3.84(m，2H)，3.74(s，2H)，1.72-1.66(m，2H)。MS[M+H]C14H14N3O6计算值320.1，实测值319.9

[0182] 化合物661：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以两个合成步骤制备化合物661：

[0183] 步骤1：合成(Z)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(哌啶-1-羰基)丙烯腈(2)

[0184] 在氮气下，室温下将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)悬浮液中。将混合物在60℃下加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入更多的甲苯并消除。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0185] 在氮气下，在-5℃将60％NaH(0.18g，4.4mmol)加入到3-氧代-3-(哌啶-1-基)丙腈(0.30g，2.0mmol)的无水THF(5mL)溶液中。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并加入3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃下再搅拌1小时。将反应混合物升温至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10min，用乙酸乙酯(25mL×2)
萃取，将有机层用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到标题化合物3，为橙色固体(260mg，36％)。MS[MH]+C17H20N3O6计算值362.1，实测值362.1。

[0186] 步骤2：合成(Z)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(哌啶-1-羰基)丙烯腈(3)

[0187] (Z)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(哌啶-1-羰基)丙烯腈(180mg，0.5mmol)的DCM(5mL)溶液在-15℃氮气下加入1.0M BBr3在DCM(3mL，3mmol)中的溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干
燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过制备型HPLC(0.5％TFA，MeOH/H2O)进一步纯化，得到所需产物，为黄色固体(63mg，38％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.96(s，1H)，7.87(d，J＝2.0Hz，
1H)，7.49(s，1H)，3.65(s，4H)，1.60(s，6H)。C15H16N3O6的MS[M-H]-计算值：334.1，实测值：
333.9

[0188] 化合物666：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以两个合成步骤制备化合物666：

[0189] 步骤1：合成2-(氰基甲基)噻唑-4-羧酸(3)

[0190] 在氮气下，在0℃下，将3-溴-2-氧代丙酸在无水THF(5mL)中的溶液加入到2-氰基硫代乙酰胺(1.2g，12mmol)的THF(20ml)悬浮液中。将混合物在70℃加热并搅拌3小时。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过柱层析(二氧化硅，100g，200-300m，通过PE/EA＝1/1洗脱)进一步纯化，得到所需产物，为白色固体(350mg，18％)。

[0191] 步骤2：合成(E)-2-(1-氰基-2-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)乙烯基)噻唑-4-羧酸(4)

[0192] 将2-(氰基甲基)噻唑-4-羧酸(168mg，1.0mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(183mg，1.0mmol)和NH4OAc(554mg，7.2mmol)在甲醇(15mL)中的溶液加热回流3小时，然后冷却至室温。过滤固体并用水(15mL)洗涤。将固体重新溶于甲醇(5mL)中。加入5mL 1N HCl水溶液调节pH 3～4。通过过滤得到期望的产物，真空干燥，得到亮固体(150mg，45％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.98(s，1H)，7.91(s，1H)，7.84(s，1H)，7.15-7.75(m，4H).MS[MH]+C13H7N3O6S的计算值：334.0，实测值334.0。

[0193] 化合物668：根据以下操作，在三个合成步骤中从3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸制备化合物668：

[0194] 步骤1：合成2-氰基-N-(1，2，4-噻二唑-5-基)乙酰胺(2)

[0195] 在氮气下，将NaH(200mg，5mmol，60％)加入到1，2，4-噻二唑-5-胺(500mg，5mmol)的THF(25mL)悬浮液中。所得悬浮液在0℃下搅拌15分钟，加入2-氰基乙酰氯(500mg，5mmol)的THF溶液超过10分钟，并在室温再搅拌1小时，然后通过加入1N·HCl溶液淬灭并在室温下搅拌10分钟。用乙酸乙酯(25mL×2)萃取，有机层用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到粗产物。用PE/EA＝1∶1(5mL)洗涤，得到纯度产物(260mg，30％)。MS[MH]+C5H4N4OS计算值169.0，实测值
169.0。

[0196] 步骤2：合成2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-(1，2，4-噻二唑-5-基)丙烯酰胺(3)

[0197] 在室温氮气下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)悬浮液中。将混合物在60℃加热并搅拌15小时。当反应完成时，通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入甲苯并再次除去。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0198] 在-5℃氮气下，将60％NaH(80mg，2.0mmol)加入到2-氰基-N-(1，2，4-噻二唑-5-基)乙酰胺(250mg，1.5mmol)在无水THF(10mL)中的溶液中。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15
分钟，并加入3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃再搅拌1小
时。将反应混合物升温至0℃；通过加入1N.HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟。用乙酸乙酯(25mL×2)萃取，有机层用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到标题化合物，为橙色固体
(210mg，37％)。MS[M+H]+C14H11N5O6S计算值378.0，实测值378.0。

[0199] 步骤3：合成2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-(1，2，4-噻二唑-5-基)丙烯酰胺(4)

[0200] 在-15℃和氮气下，将2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-(1，2，4-噻二唑-5-基)丙烯酰胺(150mg，0.40mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入1.0M BBr3在DCM(2mL，2mmol)中的溶液。将悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过制备型HPLC(0.5％TFA，甲醇/水)进一步纯化，得到所需产物，为亮黄色固体(50mg，36％).1H NMR(400MHz，DMSO)δ13.80(s，1H)，+
8.33(s，1H)，7.72(d，J＝1.8Hz，1H)，7.47(d，J＝1.8Hz，1H).MS[MH] C12H7N5O6S计算值
350.0，实测值350.0。

[0201] 化合物673：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以两个合成步骤制备化合物67

[0202] 步骤1：合成(Z)-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-(嘧啶-4-基甲基)丙烯酰胺(2)

[0203] 在氮气(室温)下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01 mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)中。将混合物在60℃下加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入更多的甲苯并再次消除。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0204] 在氮气(-5℃)下，将60％NaH(0.18g，4.4mmol)加入到2-氰基-N-(嘧啶-4-基甲基)乙酰胺(0.35g，2.0mmol)的无水THF(5毫升)。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并加入3，
4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃下再搅拌1小时。将反应混合物温热至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟，通过乙酸乙酯
(25mL×2)萃取，将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到化合物3，为橙色固体(169mg，
22％)。MS[M+H]+C17H16N5O6计算值386.1，实测值386.0。

[0205] 步骤2：合成(Z)-2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-(嘧啶-4-基甲基)丙烯酰胺(3)

[0206] 在氮气(-15℃)下，将(Z)-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-(嘧啶-4-基甲基)丙烯酰胺(115mg，0.3mmol)的DCM(5mL)溶液，加入到1.0M BBr3的DCM(3mL，
3mmol)溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。使用Prep-HPLC (0.5％TFA，MeOH/H2O)进一步纯化，得到所需化合物(黄色固体，8mg，7％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ14.18(s，1H)，
10.74(s，2H)9.12(s，1H)，8.75(d，J＝5.2Hz，1H)，7.88(s，1H)，7.55(d，J＝2.1Hz，1H)，7.45(d，J＝4.7Hz，1H)，4.52(s，2H)。MS[M+H]+C15H12N5O6计算值356.1，实测值356.0

[0207] 化合物675：化合物675是通过四步合成3-羟基异噁唑-5-羧酸甲酯而制备的，步骤如下

[0208] 步骤1：合成3-甲氧基异噁唑-5-羧酸甲酯(2)

[0209] 在0°下将3-羟基异噁唑-5-甲酸甲酯(1.0g，7.0mmol)和K2CO3(1.9g，14mmol)的无水DMF(15mL)混合物加入Me2SO4(1.0g，8.4mmol)。反应溶液在0℃连续搅拌，并通过TLC监测，直到全部起始材料被完全消耗；加入50mL水。残余物经EA萃取两次(25mL×2)，有机层用盐
水(25mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥。将有机层真空浓缩，得到所需产物(850mg，77％)，无进一步纯化。MS[M+H]+计算为C6H7NO4 158.0，实测值158.0。

[0210] 步骤2：合成3-(3-甲氧基异噁唑-5-基)-3-氧代丙腈(3)

[0211] 将MeCN(553mg，13.5mmol)和t-BuOK(1.5g，13.5mmol)的无水THF(25mL)和甲苯(15mL)的混合物中加入3-甲氧基异噁唑-5-羧酸甲酯(850毫克，5.4毫摩尔)。将反应溶液在
80℃下连续搅拌24小时，通过TLC监测，直到全部起始材料被完全消耗。加入50mL水。水相用EA萃取两次(25mL X2)，合并有机层，用盐水(25mL×3)洗涤，用无水硫酸钠干燥。将有机层真空浓缩，得到粗产物，其通过二氧化硅色谱(100g，200-300m，通过PE/EA＝3/1洗脱)纯化，得到所需产物，为亮黄色固体(650mg，72％)。MS[M+H]+C7H6N2O3 167.0，实测167.0。

[0212] 步骤3：(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(3-甲氧基异噁唑-5-羰基)丙烯腈(5)

[0213] 将3-(3-甲氧基异噁唑-5-基)-3-氧代丙腈(200mg，1.2mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(183mg，1.0mmol)和NH4OAc(554mg，7.2mmol)的甲醇(15mL)溶液回流3小时，然后冷却至室温。过滤反应混合物，收集固体并用水(15mL)洗涤。将固体重新溶解于甲醇(5mL)中，通过加入5mL 1N HCl水溶液将PH调节至3～5。通过过滤得到所需产物，真空干燥为亮黄色固体(250mg，76％)。MS[MH]+计算为C14H9N3O7 332.0，实测值332.0。

[0214] 步骤4：合成(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(3-羟基异噁唑-5-羰基)丙烯腈(6)

[0215] 在室温下，(E)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(3-甲氧基异噁唑-5-羰基)丙烯腈(150mg，0.45mmol)的AcOH(5mL)溶液，加入0.5mL 33％HBr(AcOH溶液)。将反应溶液在80℃下连续搅拌3小时，并通过LC-MS监测，直到全部起始材料被完全消耗。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物，将其通过Prep-HPLC(0.5％TFA，MeCN/水)纯化，得到期望产物，为黄色固体(22mg，15％)。MS[MH]+C13H7N3O7计算值318.0，实测值318.0.1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.96(s，2H)，8.32(s，1H)，8.18(d，J＝2.1Hz，1H)，7.88(d，J＝2.2Hz，1H)，6.93(s，1H)[0216] 化合物687：根据以下操作，由2-氰基乙酸酯以两个合成步骤制备化合物687：

[0217] 步骤1：合成3-(氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代丙腈(2)

[0218] 将2-氰基乙酸乙酯(565mg，5.0mmol)和氮杂环丁烷(285mg，5.0mmol)的混合物在室温下搅拌过夜。反应溶液经HPLC纯化，得到所需产物。MS[M+H]+C6H9N2O1计算值125.1，实测值125.1

[0219] 步骤2：合成3-(氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代丙腈(3)

[0220] 将3-(氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代丙腈(124mg，1.0mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(183mg，1.0mmol)和CH3COONH4(770mg，10.0mmol)的甲醇(15mL)溶液在80℃下搅拌过夜，然后冷却至室温。将反应混合物过滤以收集固体。将固体重新溶解于甲醇中，加入1N HC1将PH调节至3～5。所需产物通过过滤收集并真空干燥(116mg，40％)。MS(M+H)+C13H12N3O5计算值290.2，实测值289.9。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.93(s，2H)，8.01(d，J＝2.1Hz，1H)，7.97(s，1H)，7.81(d，J＝2.1Hz，1H)，4.48(t，J＝7.2Hz，2H)，4.03(t，J＝7.3Hz，2H)，2.32-2.22(m，2H)

[0221] 化合物688：根据以下操作，由2-氰基乙酸酯以两个合成步骤制备化合物688：

[0222] 步骤1：合成2-氰基-N-(2-羟基乙基)乙酰胺(2)

[0223] 将2-氰基乙酸乙酯(113mg，1.0mmol)和2-氨基乙醇(305mg，5.0mmol)的混合物在室温下搅拌过夜。反应溶液经HPLC纯化，得到所需产物。MS[M+H]+C5H9N2O2计算值129.1，实测值129.1

[0224] 步骤2：合成(E)-2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)N-(2-羟基乙基)丙烯酰胺(3)

[0225] 将2-氰基-N-(2-羟乙基)乙酰胺(65mg，0.5mmol)，3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(92mg，0.5mmol)的甲醇(15mL)溶液和CH3COONH4(385mg，5.0mmol)在80℃下搅拌过夜，然后冷却至室温。将反应混合物过滤以收集固体。将固体重新溶解于甲醇中，加入1N HCl将PH调节至3～5。所需产物通过过滤收集并真空干燥(80mg，54％)。MS[M+H]+C13H12N3O6计算值
294.2，实测值293.8。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.92(s，2H)，8.30(t，J＝5.5Hz，1H)，8.06(s，
1H)，7.95(d，J＝2.1Hz，1H)，7.78(d，J＝2.2Hz，1H)，3.49(t，J＝6.1Hz，2H)，3.28(q，J＝
5.9Hz，2H)，3.17(s，1H).

[0226] 化合物691：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以两个合成步骤制备化合物691：

[0227] 步骤1：合成(Z)-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-乙基丙烯酰胺(3)

[0228] 在氮气下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)溶液中。将混合物在60℃下加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入更多的甲苯并再次去除。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0229] 在氮气(-5℃)下，将60％NaH(0.18g，4.4mmol)加入到2-氰基-N-乙基乙酰胺(0.23g，2.0mmol)的无水THF(5mL)溶液中。将所得的悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并在-5℃下滴加3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并再搅拌1小时。将反应混合物温热至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟，通过乙酸乙酯
(25mL×2)萃取，将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到化合物3，为黄色固体(288mg，
39％)。

[0230] 步骤2：合成(Z)-2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-N-乙基-3-羟基丙烯酰胺(4)

[0231] 在氮气(-15℃)下，(Z)-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-乙基丙烯酰胺(167mg，0.5mmol)的DCM(5mL)溶液中加入1.0M BBr3的DCM溶液(3mL，3mmol)。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干
燥。减压除去溶剂，得到粗产物。使用Prep-HPLC进一步纯化，得到所需化合物(黄色固体，
48mg，33％)1H NMR(400MHz，DMSO)δ14.18(s，1H)，10.74(s，2H)，9.12(s，1H)8.75(d，J＝
5.2Hz，1H)，7.88(s，1H)，7.55(d，J＝2.1Hz，1H)，7.45(d，J＝4.7Hz，1H)，4.52(s，1H)。MS[M+H]+C12H12N3O6计算值294.2，实测值293.8

[0232] 化合物692：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以两个合成步骤制备化合物692

[0233] 步骤1：合成(Z)-2-氰基-N-环丙基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基丙烯酰胺(3)

[0234] 在氮气(室温)下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)溶液中。将混合物在60℃下加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入更多的甲苯并再次消除。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0235] 在氮气(-5℃)下，将60％NaH(0.18g，4.4mmol)加入至2-氰基-N-环丙基乙酰胺(250mg，2.0mmol)的无水THF(5mL)溶液中。将所得的悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并在-5℃下滴加3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟并再搅拌1小时。将反应混合
物温热至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟，通过乙酸乙酯
(25mL×2)萃取，将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到化合物3，为黄色固体(242mg，
36％)。

[0236] 步骤2：合成(Z)-2-氰基-N-环丙基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-羟基丙烯酰胺(4)

[0237] 在氮气(-15℃)下，(Z)-2-氰基-N-环丙基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基丙烯酰胺(166mg，0.5mmol)的DCM(5mL)溶液中加入1.0M BBr3的DCM溶液(3mL，3mmol)。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠
干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过Prep-HPLC进一步纯化，得到所需产物，为黄色固体(25mg，26％)。1 H NMR(400MHz，DMSO)δ10.81(s，1H)，8.82(s，1H)，7.88(d，J＝1.9Hz，1H)，
7.54(d，J＝2.1Hz，1H)，2.83-2.77(m，1H)，0.74-0.64(m，4H)。MS[M-H]-C13H10N3O6计算值
304.2，实测值303.9。

[0238] 化合物697：根据以下操作，由5-(氰基甲基)吡嗪-2-甲酸甲酯以两个合成步骤制备化合物697

[0239] 步骤1：合成(E)-5-(1-氰基-2-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-2-羟基乙烯基)吡嗪-2-羧酸甲酯(3)

[0240] 在氮气(-5℃)下，将60％NaH(0.072g，1.8mmol)加入到5-(氰基甲基)吡嗪-2-羧酸甲酯(0.15g，0.9mmol)的无水THF(5mL)溶液。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并加入3，
4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃下再搅拌1小时。将反应混合物温热至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟，通过乙酸乙酯
(25mL×2)萃取，将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到化合物(E)-5-(1-氰基-2-(3，4-
二甲氧基-5-硝基苯基)-2-羟基乙烯基)吡嗪-2-甲酸甲酯橙色固体(125毫克，30％)。MS[M+H]+C17H14N4O7计算值387.0，实测值387.0。

[0241] 步骤2：合成(E)-5-(1-氰基-2-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-羟基乙烯基)吡嗪-2-羧酸(4)

[0242] 在氮气(-15℃)下，(E)-5-(1-氰基-2-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-2-羟基乙烯基)吡嗪-2-甲酸甲酯(125mg，0.3mmol)的DCM(5mL)中的溶液中加入1.0M BBr3的DCM(3mL，
3mmol)溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。使用Prep-HPLC (0.5％TFA，MeOH/H2O)进一步纯化，得到所需化合物，为黄色固体(15mg，15％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.57(s，
1H)，9.17(s，1H)，8.68(s，1H)，7.81(s，1H)，7.51(s，1H)。MS[M+H]+C14H8N4O7计算值345.0，实测值345.0

[0243] 化合物701：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以两个合成步骤制备化合物701：

[0244] 步骤1：合成(Z)-2-(氮杂环丁烷-1-羰基)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基丙烯腈(3)

[0245] 在氮气下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)溶液中。将混合物在60℃下加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入更多的甲苯并再次消除。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0246] 在氮气(-5℃)下，将60％NaH(0.18g，4.4mmol)加入到2-氰基-N-环丙基乙酰胺(250mg，2.0mmol)的无水THF(5mL)溶液。所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并在-5℃下滴加
3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并再搅拌1小时。将反应混合物温热至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟，通过乙酸乙酯(25mL×2)
萃取，将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到化合物3(146mg，22％)。

[0247] 步骤2：合成(Z)-2-(氮杂环丁烷-1-羰基)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-羟基丙烯腈(4)

[0248] 在氮气(-15℃)下，(Z)-2-(氮杂环丁烷-1-羰基)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基丙烯腈(146mg，0.4mmol)的DCM(5mL)溶液中，加入1.0M的BBr3的DCM(2mL，
2mmol)溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过Prep-HPLC进一步纯化，得到所需产物(18mg，15％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.93(s，2H)，7.93(d，J＝2.1Hz，1H)，7.55(d，J＝
2.1Hz，1H)，4.36(s，4H)，2.35-2.27(m，2H)。MS[M+H]+C13H12N3O6计算值306.2，实测值305.9[0249] 化合物711：根据以下操作，在两个合成步骤中从3-氧代-3-(噻唑-4-基)丙腈制备
化合物711：

[0250] 步骤1：合成(Z)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(噻唑-4-羰基)丙烯腈(2)

[0251] 在氮气(-5℃)下，将60％NaH(0.072g，1.8mmol)加入到3-氧代-3-(噻唑-4-基)丙腈(0.41g，2.7mmol)的无水THF(15毫升)溶液中。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，历时超过5分钟加入3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯(661mg，2.7mmol)的THF溶液，并在-5℃再搅拌1小时。将反应混合物温热至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分
钟，通过乙酸乙酯(25mL×2)萃取，将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到化合物(E)-5-
(1-氰基-2-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-2-羟基乙烯基)吡嗪-2-羧酸甲酯的橙色固体
(600mg，62％)。MS[M+H]+C15H11N3O6S计算值362.0，实测值362.0。

[0252] 步骤2：合成(Z)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(噻唑-4-羰基)丙烯腈(4)

[0253] 在氮气(-15℃)下，(Z)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(噻唑-4-羰基)丙烯腈(70mg，0.2mmol)的DCM(5mL)溶液中，加入1.0M BBr3的DCM(1mL，1mmol)溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入0.5N.NH4OH
(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。使用Prep-HPLC(0.5％TFA，MeOH/H2O)进一步纯化，得到所需化合物，为黄色固体(11mg，17％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.66(s，1H)，
8.61(s，1H)，7.97(s，1H)，7.65(s，1H)。MS[M+H]+C13H7N3O6S计算值334.0，实测值334.0。

[0254] 化合物709：根据以下操作，由(E)-2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酸以两个合成步骤制备化合物709：

[0255] 步骤1：合成(E)-2-(2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰氨基)乙酸甲酯(2)

[0256] 室温下，(E)-2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酸(1)(250mg，1mmol)和2-氨基乙酸甲酯(89mg，1mmol)的THF(15mL)溶液中加入HBTU(600mg，1.5mmol)和DIPEA(388mg，3mmol)。将得到的悬浮液在60℃下搅拌5小时，冷却至室温过夜。加入水并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，得到粗产物，将其不经进一步纯化即用于下一步(120mg，
37.4％)。

[0257] 步骤2：(E)-2-(2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰氨基)乙酸(3)的合成

[0258] (E)-2-(2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰氨基)乙酸甲酯(2)(120mg，0.37mmol)的THF/水(5mL/5mL)溶液中，加入LiOH(24mg，0.55mmol)。将所得悬浮液在0℃搅拌1小时，并通过加入HCl水溶液淬灭。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过Prep-HPLC进一步纯化，得到所需产物(7mg，6.2％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.65(t，J＝5.8Hz，1H)，8.10(s，1H)，7.98(d，J＝
2.1Hz，1H)，7.79(d，J＝2.1Hz，1H)，3.88(d，J＝5.8Hz，2H)。MS[M+H]+C12H10N3O7计算值
308.2，实测值308.0。

[0259] 化合物693：根据以下操作，由2-氰基乙酸乙酯以三个合成步骤制备化合物693：

[0260] 步骤1：合成(S)-2-(2-氰基乙酰氨基)-3-羟基丙酸甲酯(2)

[0261] 将2-氰基乙酸乙酯(1130mg，10.0mmol)和(S)-2-氨基-3-羟基丙酸甲酯(1190mg，10.0mmol)的混合物在室温搅拌过夜。向反应溶液中加入10mL甲醇，过滤收集固体粗产物，将其不经进一步纯化用于下一步。MS[M+H]+C7H11N2O4计算值187.2，实测值187.2。

[0262] 步骤2：合成(S，E)-2-(2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰氨基)-3-羟基丙酸甲酯(3)

[0263] 在室温下，(S)-2-(2-氰基乙酰氨基)-3-羟基丙酸甲酯(930mg，5mmol)(2)和3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(915mg，5mmol)的甲醇(25mL)溶液，中加入CH3COONH4(3850mg，
50mmol)。将反应溶液在60℃下连续搅拌5小时，并通过TLC监测，直到全部起始材料被完全消耗。然后将反应混合物冷却至室温，减压除去溶剂，然后加入饱和NaCl(100mL)溶液。。用EA萃取水溶液三次(50mL×3)。将有机层真空浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅色谱层
析纯化，得到所需产物(705mg，40％)。MS[M+H]+C14H14N3O8计算值352.3，实测值352.3。

[0264] 步骤3：(S，E)-2-(2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰氨基)-3-羟基丙酸(4)

[0265] 在0℃下，(S，E)-2-(2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰氨基)-3-羟基丙酸甲酯(3)(705mg，2mmol)的THF/水(10mL/10mL)溶液中加入LiOH(126mg，3mmol)。将所得悬浮液在0℃搅拌1小时，并通过加入HCl水溶液淬灭。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。使用Prep-HPLC(0.5％TFA，MeOH/H2O)进一步纯化，得到所需化合物(220mg，32.6％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.89(s，1H)，10.94(s，2H)，8.22(d，J＝7.6Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.97(d，J＝2.1Hz，1H)，
7.82(d，J＝2.1Hz，1H)5.05(s，1H)，4.41(m，1H)，3.79(m，2H)。MS[M+H]+C13H12N3O8计算值
338.2，实测值337.8

[0266] 化合物702：根据以下操作，由2-氰基乙酸乙酯以三个合成步骤制备化合物702：

[0267] 步骤1：合成(S)-1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-2-羧酸甲酯(2)

[0268] 将2-氰基乙酸乙酯(113mg，1.0mmol)和(S)-甲基吡咯烷-2-羧酸酯(129mg，1.0mmol)的混合物在室温搅拌过夜。向反应溶液中加入10mL甲醇，过滤收集固体粗产物，将其不经进一步纯化用于下一步。MS[M+H]+C9H13N2O3计算值197.2，实测值197.2。

[0269] 步骤2：合成(S，E)-2-(2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰氨基)-3-羟基丙酸甲酯(3)

[0270] 在室温下，(S)-1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(2)(196mg，1mg)和3，4-二羟基-5-硝基苯甲醛(183mg，1mmol)的甲醇(5mL)溶液中，加入CH3COONH4(770mg，10mmol)。将反应溶液在60℃下搅拌过夜，并通过TLC监测直至全部起始材料被完全消耗。然后将反应混合物冷却至室温。并在减压下除去溶剂，然后加入饱和的NaCl(100mL)水溶液。用EA萃取水溶液三次(50mL×3)。将有机层真空浓缩，得到粗产物，通过二氧化硅色谱层析纯化，得到所需产物(43mg，12％)。MS[M+H]+C16H16N3O7计算362.3，实测值362.3。

[0271] 步骤3：合成(S，E)-1-(2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰基)吡咯烷-2-羧酸(4)

[0272] 在0℃下，(S，E)-2-(2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰氨基)-3-羟基丙酸甲酯(3)(43mg，0.12mmol)的THF/水(2mL/1mL)溶液中，加入LiOH(8mg，0.18mmol)。将所得悬浮液在0℃搅拌1小时，并通过加入HCl水溶液淬灭。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过Prep-HPLC进一步纯化，得到所需产物(6mg，15％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.25(t，J＝7.4Hz，1H)，7.21-7.09(m，2H)，2.30(s，2H)，2.07(s，4H)。MS[M+H]+C15H14N3O7计算值348.3，实测值347.8

[0273] 化合物347N：根据以下操作，由2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-氧代丙酰胺(1，化合物347)以单一合成步骤制备化合物347N：

[0274] 步骤1：合成2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-羟基丙烯酰胺(2)

[0275] 室温下，2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-氧代丙酰胺(350mg，1mmol)的DCM(5mL)溶液中加入HMDS(0.5mL)，然后搅拌48小时。反应完成后，将反应混合物真空浓缩，得到粗产物，通过Prep-HPLC进一步纯化，得到所需产物，为黄色固体
(60mg，19％)。MS[M+H]+C14H16N4O5的计算值321.1，实测值321.1。

[0276] 化合物661N：根据以下操作，由(Z)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(哌啶-1-羰基)丙烯腈，在一个合成步骤中制备化合物661N

[0277] 步骤1：合成3-氨基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-2-(哌啶-1-羰基)丙烯腈(2)

[0278] 3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(哌啶-1-羰基)丙烯腈(20mg，0.06mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入HMDS(1mL)并在室温下搅拌72小时。然后将反应混合物真空浓
缩，得到粗产物，通过HPLC进一步纯化，得到所需产物，为黄色固体(1mg，5％)。MS[MH]+C15H16N4O5计算值333.3，实测值333.1。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.21(s，1H)，7.66(s，1H)，
6.74(s，1H)，1.25-1.65(m，6H)，1.23(s，1H)。

[0279] 化合物691N：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以四个合成步骤制备化合物691N

[0280] 步骤1：合成(Z)-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-乙基丙烯酰胺(3)

[0281] 在氮气(室温)下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)溶液中。将混合物在60℃下加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入更多的甲苯并再次消除。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0282] 在氮气(-5℃)下，将60％NaH(0.18g，4.4mmol)加入至2-氰基-N-乙基乙酰胺(0.23g，2.0mmol)的无水THF(5mL)溶液中。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并加入3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃下再搅拌1小时。将反应混合物温热至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟，通过乙酸乙酯(25mL
×2)萃取，将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到化合物3，为黄色固体(265mg，36％)。

[0283] 步骤2：合成(Z)-3-氯-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-N-乙基丙烯酰胺(4)

[0284] 在0℃下，(Z)-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-乙基丙烯酰胺(176mg，0.5mmol)的DCM(5mL)溶液中加入PCl5(104mg，0.5mmol)。将所得悬浮液搅拌过夜，直到通过LC-MS检测到所有起始材料消耗完。然后使反应混合物冷却至室温，不经进一步纯化而用于下一步。

[0285] 步骤3：合成(Z)-3-氨基-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-N-乙基丙烯酰胺(5)

[0286] 在0℃下，(Z)-3-氯-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-N-乙基丙烯酰胺(150mg，0.4mmol)的DCM溶液中，加入饱和的NH3的乙腈溶液中，然后将反应溶液连续搅拌至
0℃，直至所有原料完全耗尽。通过加入水淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。

[0287] 步骤4：合成(Z)-3-氨基-2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-N-乙基丙烯酰胺(6)

[0288] 在氮气(-15℃)下，(Z)-3-氨基-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-N-乙基丙烯酰胺(67mg，0.2mmol)的DCM(5mL)溶液中，加入1.0M的BBr3的DCM(1mL，1mmol)溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠
干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过Prep-HPLC进一步纯化，得到所需产物，为黄色固体(5mg，9％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.53(s，2H)，9.44(s，1H)，8.02(s，2H)，7.63(d，J＝+
2.0Hz，1H)，7.36(d，J＝2.0Hz，1H)，3.32-3.25(m，2H)，1.14(t，J＝7.1Hz，3H)。MS[M+H]C12H13N4O5计算值293.2，实测值292.8。

[0289] 化合物692N：根据以下操作，由3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸以四个合成步骤制备化合物692N：

[0290] 步骤1：合成(Z)-2-氰基-N-(环丙基甲基)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基丙烯酰胺(3)

[0291] 在氮气(室温)下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)溶液中。将混合物在60℃下加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入更多的甲苯并再次消除。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0292] 在氮气(-5℃)下，将60％NaH(0.18g，4.4mmol)加入到2-氰基-N-环丙基乙酰胺(250mg，2.0mmol)的无水THF(5mL)溶液。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并加入3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃下再搅拌1小时。将反应混合物温热至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟，通过乙酸乙酯(25mL×
2)萃取，将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到化合物3，为黄色固体(165mg，23％)。

[0293] 步骤2：合成(Z)-3-氯-2-氰基-N-(环丙基甲基)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)丙烯酰胺(4)

[0294] 在0℃下，(Z)-2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-N-丙基丙烯酰胺(165mg，0.5mmol)的DCM(5mL)溶液中加入PCl5(104mg，0.5mmol)。将所得悬浮液搅拌过夜，直到通过LC-MS检测到所有起始材料消耗完。然后使反应混合物冷却至室温，不经进一步纯化而用于下一步。

[0295] 步骤3：合成(Z)-3-氨基-2-氰基-N-环丙基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)丙烯酰胺(5)

[0296] 在0℃下，(Z)-3-氯-2-氰基-N-(环丙基甲基)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)丙烯酰胺(164mg，0.5mmol)的DCM溶液中加入饱和的NH3的ACN溶液，然后将反应溶液在0℃下
连续搅拌直至所有原料完全耗尽。通过加入水淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯萃
取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物，将其不经进一步纯化用于下一步。

[0297] 步骤4：合成(Z)-3-氨基-2-氰基-N-环丙基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯酰胺(6)

[0298] 在氮气(-15℃)下，(Z)-3-氨基-2-氰基-N-环丙基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)丙烯酰胺(66mg，0.2mmol)的DCM(5mL)溶液，加入1.0M的BBr3的DCM(1mL，1mmol)溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠
干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过Prep-HPLC进一步纯化，得到所需产物(7mg，12％)。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.52(s，2H)，9.53(s，1H)，7.63(d，J＝2.0Hz，1H)，7.35(d，J＝
2.0Hz，1H)，2.61-2.55(m，1H)，0.86-0.81(m，2H)，0.66-0.61(m，2H)。MS[M+H]+C13H13N4O5计算值305.3，实测值304.9。

[0299] 化合物697N：根据以下操作，由(E)-5-(1-氰基-2-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-2-羟基乙烯基)吡嗪-2-羧酸甲酯以两个合成步骤制备化合物697N：

[0300] 步骤1：合成(E)-5-(2-氯-1-氰基-2-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)乙烯基)吡嗪-2-羧酸甲酯(2)

[0301] 在0℃下，(E)-5-(1-氰基-2-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-2-羟基乙烯基)吡嗪-2-甲酸甲酯(150mg，0.39mmol)的1，2-二氯乙烷(25mL)的溶液中加入PCl5(83mg，
0.40mmol)。将所得悬浮液搅拌过夜，直到通过LC-MS检测到所有起始材料消耗完。然后使反应混合物冷却至室温，不经进一步纯化而用于下一步。

[0302] 步骤2：合成(E)-5-(2-氨基-1-氰基-2-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)乙烯基)吡嗪-2-羧酸甲酯(3)

[0303] 在0℃下，(E)-5-(2-氯-1-氰基-2-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)乙烯基)吡嗪-2-羧酸甲酯(180mg，0.45mmol)的1，2-二氯乙烷(25mL)溶液中加入饱和的NH3的ACN溶液，然后将反应溶液连续搅拌至0℃，直至所有原料完全耗尽。通过加入水淬灭反应并搅拌30分钟。
水相用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物，将其不经进一步纯化用于下一步。

[0304] 步骤3：合成(E)-5-(2-氯-1-氰基-2-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)乙烯基)吡嗪-2-羧酸甲酯(4)

[0305] 在氮气(-15℃)下，(E)-5-(2-氨基-1-氰基-2-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)乙烯基)吡嗪-2-甲酸甲酯(98mg，0.25mmol)的DCM(5mL)溶液中加入1.0M BBr3的DCM(3mL，
3mmol)溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过Prep-HPLC(0.5％TFA，MeOH/H2O)进一步纯化，得到所需产物(11mg，13％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.96-11.2(m，1H)，10.42(m，
1H)1H)，8.94(s，1H)，8.66(s，1H)，7.76(s，1H)，6.79(s，1H)MS[M+H]+C14H9N5O6计算值344.0，实测值344.0。

[0306] 化合物701N：根据以下操作，在四个合成步骤中从3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸制备化合物701N

[0307] 步骤1：合成(Z)-2-(氮杂环丁烷-1-羰基)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基丙烯腈(3)

[0308] 在氮气(室温)下，将SOCl2(0.38mL，5.28mmol)和无水DMF(0.01 mL，0.22mmol)加入到3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酸(500mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)溶液中。将混合物在60℃下加热并搅拌15小时。通过减压蒸馏除去有机溶剂。再加入更多的甲苯并再次消除。将所得微黄色固体3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯溶于无水THF(5mL)中。

[0309] 在氮气(-5℃)下，将60％NaH(0.18g，4.4mmol)加入到3-(氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代丙腈(250mg，2.0mmol)的无水THF(5mL)溶液中。将所得悬浮液在-5℃下搅拌15分钟，并加入3，4-二甲氧基-5-硝基苯甲酰氯的THF溶液超过10分钟，并在-5℃下再搅拌1小时。将反应混合物温热至0℃，通过加入1N·HCl溶液(4mL)淬灭并在室温下搅拌10分钟，通过乙酸乙酯
(25mL×2)萃取，将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到化合物3。

[0310] 步骤2：合成(Z)-2-(氮杂环丁烷-1-羰基)-3-氯-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)丙烯腈(4)

[0311] 在0℃下，(Z)-2-(氮杂环丁烷-1-羰基)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基丙烯腈(175mg，0.5mmol)的DCM(5mL)溶液中加入PCl5(104mg，0.5mmol)。将所得悬浮液搅拌过夜，直到通过LC-MS检测到所有起始材料消耗完。然后使反应混合物冷却至室温，不经进一步纯化而用于下一步。

[0312] 步骤3：合成(Z)-3-氨基-2-(氮杂环丁烷-1-羰基)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)丙烯腈(5)

[0313] 在0℃下，(Z)-2-(氮杂环丁烷-1-羰基)-3-氯-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)丙烯腈(164mg，0.5mmol)的DCM溶液中加入饱和的NH3的ACN溶液，然后将反应溶液在0℃下连
续搅拌直至所有原料完全耗尽。通过加入水淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯萃取。
将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物，将其不经进一步纯化用于下一步。

[0314] 步骤4：合成(Z)-3-氨基-2-(氮杂环丁烷-1-羰基)-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)丙烯腈(6)

[0315] 在氮气(-15℃)下，(Z)-3-氨基-2-(氮杂环丁烷-1-羰基)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)丙烯腈(66mg，0.2mmol)的DCM(5mL)溶液加入1.0M BBr3的DCM(1mL，1mmol)溶液。将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠
干燥。减压除去溶剂，得到粗产物。通过Prep-HPLC进一步纯化，得到所需产物(7mg，12％)。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.52(s，2H)，9.87(s，1H)，7.60(d，J＝2.1Hz，1H)，7.35(d，J＝
2.1Hz，1H)，4.26(s，4H)，2.29(m，2H)。MS[M+H]+C13H13N4O5计算值305.3，实测值305.0。

[0316] 化合物711N：根据以下操作，由(Z)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(噻唑-4-羰基)丙烯腈，在三个合成步骤中制备化合物711N：

[0317] 步骤1：(Z)-3-氯-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-2-(噻唑-4-羰基)丙烯腈(2)的合成。

[0318] 在0℃下，(Z)-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-羟基-2-(噻唑-4-羰基)丙烯腈(150mg，0.42mmol)的1，2-二氯乙烷(25mL)溶液中加入PCl5(86mg，0.42mmol)。将所得悬浮液搅拌过夜，直到通过LC-MS检测到所有起始材料消耗完。然后使反应混合物冷却至室温，不经进一步纯化而用于下一步。

[0319] 步骤2：合成(Z)-3-氨基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-2-(噻唑-4-羰基)丙烯腈(3)

[0320] 在0℃下，(Z)-3-氯-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-2-(噻唑-4-羰基)丙烯腈(185mg，0.42mmol)的二氯乙烷(25mL)溶液中加入饱和的NH3的ACN溶液，然后将反应溶液连续搅拌至0℃，直至所有原料完全耗尽。通过加入水淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到粗产物，将其不经进一步纯化用于下一步。MS[M+H]+C15H12N4O5S的计算值361.0，实测值361.0

[0321] 步骤3：合成(Z)-5-(1-氨基-2-氰基-3-氧代-3-(噻唑-4-基)丙-1-烯基)-2-羟基-3-硝基苯酚铵(4)

[0322] 在氮气(-15℃)下，(Z)-3-氨基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-2-(噻唑-4-羰基)丙烯腈(100mg，0.28mmol)的DCM(5mL)溶液中，加入1.0M BBr3的DCM(1mL，1mmol)溶液。
将所得的红色悬浮液在-15℃下搅拌1小时，并使其温热至室温过夜。通过加入0.5N.NH4OH
(2mL)淬灭反应并搅拌5分钟。水相用乙酸乙酯洗涤。在减压下除去含水层，得到粗产物。通过Prep-HPLC(0.05％FA，MeOH/H2O)进一步纯化，得到所需产物(11mg，15％)1 H NMR
(400MHz，DMSO)δ8.85(s，1H)，7.66(s，1H)1H)，7.38(s，1H)，6.80-6.99(m，1H)，6.66-6.74(m，1H)。MS[M+H]+C13H11N5O5S计算值333.0，实测值333.0。

[0323] 化合物347M：按照以下步骤由2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-羟基丙烯酰胺以三个合成步骤制备化合物347M：

[0324] 步骤1：2-氰基-3-(二乙基氨基)-1-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-氧代丙-1-烯基甲磺酸酯(2)

[0325] 在0℃下，将2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-羟基丙烯酰胺(350mg，1mmol)和Et3N(202mg，2mmol)的DCM(15mL)溶液中加入MsCl(250mg，2mmol)。将反应溶液在室温下搅拌3小时，然后将其真空浓缩，得到粗产物(360mg)，将其不经进一步纯化即用于下一步。

[0326] 步骤2：合成2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-(甲基氨基)丙烯酰胺(3)

[0327] 在室温下，将2-氰基-3-(二乙基氨基)-1-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-3-氧代丙-1-烯基甲磺酸酯(250mg，0.7mmol)和K2CO3(193mg，1.4mmol)的MeCN(10mL)溶液中加入
MeNH2(1.4mmol，0.7mL，2N的THF溶液)。将反应溶液回流2小时，然后加入50mL水。用EA萃取水相两次(50mL×2)，然后将有机层真空浓缩，得到粗产物(210mg)，将其不经进一步纯化用于下一步。MS[M+H]+C17H22N4O5·363.1的计算值，实测值363.1。

[0328] 步骤3：合成2-氰基-3-(3，4-二羟基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-(甲基氨基)丙烯酰胺(4)

[0329] 在氮气(-15℃)下，2-氰基-3-(3，4-二甲氧基-5-硝基苯基)-N，N-二乙基-3-(甲基氨基)丙烯酰胺(210mg，0.58mmol)的DCM(5mL)溶液，加入1.0M BBr3的DCM(2mL，2mmol)溶液。将反应溶液在-15℃下搅拌1小时，然后在室温下过夜。通过加入水(2mL)淬灭反应并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯萃取三次(30mL×3)。将有机层用盐水洗涤并用硫酸钠干燥，然
后将其真空浓缩，得到粗产物，将其通过Prep-HPLC(0.5％TFA，甲醇/水)纯化，得到所需产物，为亮黄色固体(25毫克，13％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.69(s，2H)，7.43(s，1H)，7.20(s，1H)，3.40-3.43(m，4H)，2.69(d，J＝4.9Hz，3H)，1.14(t，J＝6.8Hz，13H)，1.14(t，J＝
6.8Hz，3H)。C12H7N5O6S的[M+H]+计算值：350.0，实测值：350.0。

[0330] 酶活抑制实验：我们测量了由FTO催化的去甲基化反应中的化合物抑制活性(US2014/0148383A1)。反应体系在37℃孵育2h，95℃加热5min停止。用核酸酶P1和碱性磷酸酶消化ssDNA。用HPLC-MS/MS分析N6-mA和A的浓度。当底物和酶的浓度分别为0.5μM和0.1μM时，测得的恩他卡朋对FTO的IC50值为～3μM。表1-3的化合物具有一致性地活性，其IC50小于
10μM，且大多数小于1μM。

[0331] 代表性化合物的示例性IC50数据

[0332] 体内抗肥胖功效：给雄性Wistar大鼠(6周)喂食高脂饮食(45％脂肪，OpenSourceDiets D12451)，并且通过灌胃对12只随机选择的大鼠施用化合物(100mg/kg)。
8周后，药物处理组平均体重均小于对照组。然而，两组的体重正常化食物摄入量没有差异。
药物治疗组血清LDL-c(低密度脂蛋白-胆固醇)较对照组降低，药物处理组大鼠的脂肪肝组
织显示脂肪细胞变小，肝脏脂肪变形水平降低。

[0333] 动脉粥样硬化模型：Ldlr缺陷小鼠：使用给予西式饮食(20％脂肪，0.15％胆固醇)的Ldlr-/-小鼠测量化合物抗动脉粥样硬化效力，通过与饮食混合口服给予化合物(100mg/天)。8周后，药物处理组主动脉窦平均病灶面积小于对照组。

[0334] 肥胖小鼠的体内抗肥胖功效：给雄性C57BL/6小鼠喂高脂肪饮食(45％脂肪，OpenSource饮食D12451)8周。然后选择体重比正常饮食的小鼠(20只小鼠)大20％的肥胖小
鼠进行实验。通过与饮食混合，对10只随机选择的肥胖小鼠口服给予化合物(100mg/kg)。给药13周后，药物处理组组的平均体重增加量比对照组少。

[0335] 遗传性糖尿病db/db小鼠的体内抗糖尿病功效：通过与正常饮食混合，对11只随机选择的雄性db/db小鼠口服给予化合物(100mg/kg)，而另外9只正常饮食的雄性db/db小鼠
作为对照组。20周后，药物处理组组平均空腹血糖显著低于对照组(*p值＜0.05)。

[0336] 从我们在本文的结果和进一步的数据中，我们确定优选的抗体重增加，抗肥胖和抗肥胖相关的疾病，例如抗糖尿病，所述化合物的有效人剂量应该是0.1-10、0.5-10、0.5-
5、0.5-2.5、0.5-1、1-10、1-5、1-2.5、2-10或2-5g/天。

[0337] 这里描述的示例和实施例仅用于说明的目的，并且鉴于本领域技术人员会联想到其各种修改或变化，这些变化和修改包括在本申请的精神和范围以及所附权利要求的范围
内。并且本文引用的所有出版物、专利和专利申请(包括其中的引文)在此以其全文并入作
为参考用于所有目的。

标题	发布/更新时间	阅读量
JAK抑制剂-专利编号CN107531695B	2020-05-11	146
MAGL抑制剂-专利编号CN110267963A	2020-05-11	388
MLKL抑制剂-专利编号CN110573509A	2020-05-11	423
IDO抑制剂-专利编号CN110218182A	2020-05-12	320
腐蚀抑制剂-专利编号CN110832037A	2020-05-11	723
BACE1抑制剂-专利编号CN107108652B	2020-05-13	423
RUNX抑制剂-专利编号CN109789158A	2020-05-13	329
MAGL抑制剂-专利编号CN110267962A	2020-05-12	337
BACE1抑制剂-专利编号CN106795177B	2020-05-13	377
MAGL抑制剂-专利编号CN110248947A	2020-05-12	820

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