一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法专利检索-货架期保存与储存专利检索查询-专利查询网

积极推动地理标志专门立法

2022-03-10 地理标志，立法，知识产权
保护知识产权是对创新最大的激励

2022-03-10 保护知识产权，创新，激励
谢商华：加快制定知识产权基本法

2022-03-10 知识产权基本法
擦亮“双奥之城”品牌

2022-03-10 双奥，知识产权
让冰雪运动“热”力全开

2022-03-10 冰雪运动，知识产权
携手共奋进　走好强国路

2022-03-10 强国，知识产权
坚持创新引领　方能稳中求进

2022-03-10 创新，稳中求进，知识产权
答好“两张卷” 奋进新征程

2022-03-10 知识产权
专家解读政府工作报告中的创新和知识产权相关部署

2022-03-10 政府工作报告，创新，知识产权
今年政府工作报告指出：加强知识产权保护和运用

2022-03-10 政府工作报告，知识产权保护

一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法

阅读：1124发布：2020-08-12

IPRDB可以提供一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法，包括如下步骤：(1)利用灭菌手术刀，在杏鲍菇菇柄中下部划十字伤口，十字伤口大小为(1.8～2.2)cm×(1.8～2.2)cm，十字伤口深度为(0.8～1.2)mm；(2)将乳酸乳球菌乳酸亚种接种体18～22μL接种到十字伤口上，将接种后的杏鲍菇十字伤口向上进行放置，14～16℃黑暗恒温孵育3～5天，然后将温度调高至18～22℃，继续孵育8～15天。本发明所述稳定高效的货架期杏鲍菇病原菌乳酸乳球菌乳酸亚种人工接种方法，解决了目前货架期杏鲍菇溃烂病菌乳酸乳球菌乳酸亚种人工接种发病率低且不稳定这一技术难题。，下面是一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)利用灭菌手术刀，在杏鲍菇菇柄中下部划十字伤口，十字伤口大小为(1.8～2.2)cm×(1.8～2.2)cm，十字伤口深度为(0.8～1.2)mm；

(2)将乳酸乳球菌乳酸亚种接种体18～22μL接种到十字伤口上，将接种后的杏鲍菇十字伤口向上进行放置，14～16℃黑暗恒温孵育3～5天，然后将温度调高至18～22℃，继续孵育8～15天。

2.根据权利要求1所述的稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法，其特征在于，步骤(2)所用的乳酸乳球菌乳酸亚种接种体为菌株SLPE1-3接种体，菌株SLPE1-3于2016年6月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为CGMCC No.12634。

3.根据权利要求2所述的稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法，其特征在于，菌株SLPE1-3接种体的制备方法为：挑取甘油菌划线接种到无菌MRS琼脂营养固体培养基平板上，24～26℃条件下倒置培养45～50小时；挑取单菌落，转接到MRS液体培养基中，24～26℃条件下静置培养10～12小时，至OD600为0.8～1.2；离心，无菌水悬浮至菌体密度为(1.0～5.0)×107CFU/mL，即为接种体。

4.根据权利要求1所述的稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法，其特征在于，步骤(1)所用的杏鲍菇为菇体致密有弹性、菌柄洁白、菌盖边缘内卷呈半球形、菌褶还没有形成、无病斑和伤口的杏鲍菇。

5.根据权利要求4所述的稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法，其特征在于，步骤(1)所用的杏鲍菇为直径5cm～6cm、长度15cm～18cm的杏鲍菇。

6.根据权利要求4所述的稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法，其特征在于，步骤(1)所用的杏鲍菇步骤(1)所用的杏鲍菇，采收后迅速放入无菌保鲜袋中，4℃～8℃保存备用。

7.根据权利要求6所述的稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法，其特征在于，步骤(1)所用的杏鲍菇保存时间不超过36小时。

说明书全文

一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物保护技术领域，具体涉及一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌致病性测定人工接种方法。

背景技术

[0002] 杏鲍菇[Pleurotus eryngii(DC.Ex.Fr.)Quel.]又名刺芹侧耳，属伞菌目(Aaricales)食用真菌，菌体肉质肥厚，有鲍鱼和杏仁味，口感鲜嫩，具有较高的营养和药用价值。目前，杏鲍菇在我国的福建、江苏、广东、上海等地具有较大规模的工厂化栽培，年产量达到50万吨以上，年产值近60亿元。

[0003] 在货架期(15℃～22℃)条件下保存2天～3天，杏鲍菇的菇柄就开始出现淡褐色水渍状凹陷溃烂斑，病斑在菇柄表面迅速扩展，导致杏鲍菇腐败变质，丧失食用价值。正常情况下，货架期5天的杏鲍菇平均发病率高达30％以上，经济损失巨大。根据柯赫氏法则，确定引起该病的病原菌为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)。但是，目前对乳酸乳球菌引起杏鲍菇致病性的研究报道很少，高效稳定的病原菌致病性测定人工接种方法仍未见报道，这严重限制了对该病害进行侵染过程、致病机制、杏鲍菇抗病机制、货架期杏鲍菇防腐保鲜等方面的深入研究。因此，建立起一套稳定高效的货架期杏鲍菇病原菌乳酸乳球菌乳酸亚种致病性测定人工接种技术体系，已成为目前深入研究货架期杏鲍菇溃烂病的前提条件。

发明内容

[0004] 针对上述存在的技术问题，本发明的目的在于提出一种稳定高效的货架期杏鲍菇病原菌乳酸乳球菌乳酸亚种人工接种方法，解决了目前货架期杏鲍菇溃烂病菌乳酸乳球菌乳酸亚种人工接种发病率低且不稳定这一技术难题。

[0005] 本发明的目的可以通过以下措施达到：

[0006] 一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法，包括如下步骤：

[0007] (1)利用灭菌手术刀，在杏鲍菇菇柄中下部划十字伤口，十字伤口大小为(1.8～2.2)cm×(1.8～2.2)cm，十字伤口深度为(0.8～1.2)mm；

[0008] (2)将乳酸乳球菌乳酸亚种接种体18～22μL接种到十字伤口上，将接种后的杏鲍菇十字伤口向上进行放置，14～16℃黑暗恒温孵育3～5天，然后将温度调高至18～22℃，继续孵育8～15天。

[0009] 本发明步骤(2)所用的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)接种体优选菌株SLPE1-3接种体，菌株SLPE1-3是发明人从货架期杏鲍菇溃烂病斑上分离获得，已于2016年6月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，菌种保藏编号为CGMCC No.12634。同时，菌株SLPE1-3可以以甘油菌形式保存于-80℃。

[0010] 本发明所述菌株SLPE1-3接种体的制备方法为：挑取甘油菌划线接种到无菌MRS琼脂营养固体培养基平板上，24～26℃条件下倒置培养45～50小时；挑取单菌落，转接到MRS液体培养基中，24～26℃条件下静置培养10～12小时，至OD600为0.8～1.2；离心无菌水悬浮至菌体密度为(1.0～5.0)×107CFU/mL，即为接种体。

[0011] 本发明所述的MRS琼脂营养固体培养基的配比为：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，柠檬酸二铵2g/L，葡萄糖20g/L，牛肉浸膏10g/L，MgSO4.7H2O 0.58g/L，MnSO4.4H2O 0.25g/L，K2HPO4 2g/L，乙酸钠2g/L，吐温80 1mL/L，琼脂粉16g/L。

[0012] 本发明所述的MRS液体培养基的配比为：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，柠檬酸二铵2g/L，葡萄糖20g/L，牛肉浸膏10g/L，MgSO4.7H2O 0.58g/L，MnSO4.4H2O 0.25g/L，K2HPO4 2g/L，乙酸钠2g/L，吐温80 1mL/L，pH 6.8。

[0013] 本发明步骤(1)所用的杏鲍菇优选菇体致密有弹性、菌柄洁白、菌盖边缘内卷呈半球形、菌褶还没有形成、无病斑和伤口的杏鲍菇，进一步优选直径5cm～6cm、长度15cm～18cm的杏鲍菇。

[0014] 本发明步骤(1)所用的杏鲍菇，采收后迅速放入无菌保鲜袋中，4℃～8℃保存备用。

[0015] 本发明步骤(1)所用的杏鲍菇保存时间不超过36小时。

[0016] 本发明的有益效果：

[0017] 本发明详细规定了病原菌乳酸乳球菌乳酸亚种接种体的制备方法和接种杏鲍菇的选择标准，优化了接种方法、接种部位及发病温度条件，可获得稳定高效的乳酸乳球菌乳酸亚种致病性测定人工接种效果。本发明为深入研究货架期杏鲍菇溃烂病，提供了一种稳定高效的致病性测定人工接种方法。

附图说明

[0018] 图1利用不同方法接种货架期杏鲍菇的发病率。

[0019] 图2利用不同方法接种货架期杏鲍菇的病情指数。

[0020] 图3实施例2方法1乳酸乳球菌乳酸亚种SLPE1-3接种杏鲍菇8天后病害症状。

[0021] 图4实施例2方法1乳酸乳球菌乳酸亚种SLPE1-3接种杏鲍菇12天后病害症状。

具体实施方式

[0022] 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。

[0023] 本发明中所提及的病原菌为乳酸乳球菌乳酸亚种SLPE1-3菌株，该菌株是申请人从货架期杏鲍菇溃烂病斑上分离获得，已于2016年6月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，菌种保藏编号为CGMCC No.12634。本实验室以甘油菌形式保存于-80℃，其他组织或个人可以从申请人处获得该菌株。所用杏鲍菇为市场销售的杏鲍菇，按照“从杏鲍菇工厂采收菇体致密有弹性、菌柄洁白、菌盖边缘内卷呈半球形、菌褶还没有形成、无病斑和伤口的杏鲍菇，杏鲍菇大小为直径5cm～6cm、长度15cm～18cm。将选择的杏鲍菇迅速放入一次性无菌保鲜袋中，然后转移到4℃～8℃的保鲜箱中，运到实验室备用(贮存不超过36小时)”的标准选择或采收杏鲍菇。

[0024] 以下所述的MRS培养基为：蛋白胨10g，酵母提取物5g，柠檬酸二铵2g，葡萄糖20g，牛肉浸膏10g，MgSO4.7H2O 0.58g，MnSO4.4H2O 0.25g，K2HPO4 2g，乙酸钠2g，吐温80 1mL，蒸馏水定容至1000mL，pH 6.8，121℃条件下湿热灭菌20min。固体培养基需添加琼脂粉16g/L。

[0025] 若无特殊说明，下述实施例中所用技术方法均为常规方法；若无特殊说明，下述实施例中所用试验材料，均为常规试剂材料。

[0026] 以下所述实施例仅仅用于描述本发明，不能理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

[0027] 实施例1：接种体制备

[0028] 从-80℃取出保存的乳酸乳球菌乳酸亚种SLPE1-3甘油菌，利用灭菌牙签挑取甘油菌划线接种到无菌MRS琼脂营养平板上，25℃条件下倒置培养48小时；利用灭菌牙签挑取单菌落，转接到MRS液体培养基中，25℃条件下静置培养10小时～12小时，至OD600≈1.0；将菌液转移到50mL无菌离心管中，4000g、4℃条件下离心10分钟，去掉上清，再用预冷无菌水悬浮离心一次；收集菌体沉淀，利用预冷无菌水充分悬浮，并将菌体密度调整到(1.0～5.0)×107CFU/mL，即为病原菌接种体。

[0029] 实施例2：接种方法实验

[0030] 选用大小均一的杏鲍菇，采用以下3种方法进行接种：方法1，利用灭菌手术刀，在杏鲍菇菇柄中下部划十字伤口，伤口大小约为2cm×2cm，伤口深度约1mm；方法2，利用灭菌牙签，在杏鲍菇菇柄中下部划十字伤口，伤口大小约为2cm×2cm，伤口深度约1mm；方法3，利用手术刀在杏鲍菇菇柄中下部挖大小约5mm×5mm、深2mm伤口。将制备的乳酸乳球菌乳酸亚种接种体分别接种到上述3种伤口上，每个伤口接种20μL接种体。以接种灭菌水为对照。每个处理接种24个杏鲍菇，将接种好的杏鲍菇排列放置在塑料保鲜箱内，伤口向上。将保鲜箱密封好，放置在15℃恒温黑暗培养箱内孵育4天，然后将恒温培养箱的温度调高至20℃，继续孵育。

[0031] 实施例3：发病率和病情指数调查方法

[0032] 1.接种后8天至12天调查发病率和病情指数，计算方法如下：

[0033] 发病率＝(发病杏鲍菇数)/(接种杏鲍菇总数)×100％

[0034] 病情指数＝∑(各级发病杏鲍菇数×相对级数值)/(接种杏鲍菇总数×9)×100[0035] 2.货架期杏鲍菇溃烂病的分级标准：

[0036] 0级：未发病；

[0037] 1级：病斑面积占菇柄面积的5％以下；

[0038] 3级：病斑面积占菇柄面积的5％～10％；

[0039] 5级：病斑面积占菇柄面积的11％～25％；

[0040] 7级：病斑面积占菇柄面积的26％～50％；

[0041] 9级：病斑面积占菇柄面积50％以上。

[0042] 根据实施例2所示方法接种后，分别于接种后第8天和12天，按照上述发病率和病情指数调查方法进行调查分析。结果发现，只有利用方法1接种的杏鲍菇发病率分别高达87.5％(第8天)和100％(第12天)，利用方法2、3接种杏鲍菇的发病率均低于30％(图1)。利用方法1接种的杏鲍菇不仅发病率高，病斑扩展也较快，病斑面积占菇柄面积分别高达
19.0％(第8天)和41.7％(第12天)，病情指数分别为为5级(第8天)和7级(第12天)，显著高于方法2、3接种杏鲍菇的病情指数(图2、图3、图4)。三种接种方法中，接种清水对照的杏鲍菇均没有发病。上述结果表明，方法1是一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌致病性测定人工接种方法。

标题	发布/更新时间	阅读量
一种预测冷鲜鸡货架期的方法-专利编号CN111027784A	2020-05-12	599
带鱼的货架期预测模型-专利编号CN101358958B	2020-05-11	726
货架期稳定的糖果-专利编号CN1431868A	2020-05-12	712
一种果蔬货架期和品质的预测方法-专利编号CN110796316A	2020-05-13	822
货架期的测试装置-专利编号CN1432127A	2020-05-11	993
一种延长袋装口含烟货架期的方法-专利编号CN107399507B	2020-05-13	231
鸡精的货架期预测方法-专利编号CN107194512A	2020-05-11	178
带鱼的货架期预测模型-专利编号CN101358958A	2020-05-11	284
一种延长鲜切荸荠货架期的方法-专利编号CN109769926A	2020-05-13	1059
肉类货架期指示装置-专利编号CN204155296U	2020-05-12	238

一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法

一种稳定高效的货架期杏鲍菇溃烂病菌人工接种方法

技术领域

背景技术

发明内容

附图说明

具体实施方式

IPRDB

热门服务

关于我们

友情链接

联系方式