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微管蛋白抑制剂

阅读：175发布：2021-03-01

IPRDB可以提供微管蛋白抑制剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明记载了用于调节微管聚合以及治疗相关疾病状态的通式(I)、(II)、(III)和(V)的化合物。本发明还记载了通式(I)、(III)和(V)的化合物在治疗激酶相关疾病状态中的应用。本发明还记载了通式(II)、(III)和(V)的新化合物。，下面是微管蛋白抑制剂专利的具体信息内容。

权利要求

1.通式(V)的化合物或其药物学可接受的盐或非对映异构体，其中：

X1和X2为N，且X3和X4为独立地被Y取代的C；

R1为H或C1-6烷基；

R2选自OH、OC1-6烷基、C1-6烷基OH、OC2-6烷基OH、C1-6烷基NR8R9、OC2-6烷基NR8R9、C1-6烷基NR8COR9、OC2-6烷基NR8COR9、OCONR8R9、NR8COOR9、NR10CONR8R9、CONR8R9、NR8COR12；

R8和R9各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基或杂环烷基，或可相连形成3-8元环，该环任选地含有选自O、S、N的原子，其中N原子被R14取代；

R12为C2-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基或杂环烷基；

R11和R13各自独立地为H或C1-4烷基，或可相连形成3-8元环，该环任选地含有选自O、S、N的原子，其中N原子被R14取代；

R14选自H、C1-4烷基；

R10为H或C1-4烷基；

R3和R4各自独立地为H、卤素、C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、CF3、或OCF3；

Q为C1-4亚烷基，

W选自C1-4烷基、C2-6烯基以及C1-4烷基OH；

A为被0～3个独立地选自卤素、C1-4烷基、CF3、OCF3、OC1-4烷基和OC2-5烷基NR18R19的取代基任选地取代的苯基或杂芳基；

R18和R19各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基杂环烷基、苯基、萘基、杂芳基、C1-4烷基苯基、C1-4烷基萘基、C1-4烷基杂芳基，或可相连与它们所连接的N一起形成3-8元环，该环任选地含有选自O、S、N，其中所述N原子被R21取代；

R21选自H和C1-4烷基；

Y选自H、C1-4烷基、OH和NR22R23；以及R22和R23各自独立地为H或C1-4烷基；

其中：当

R2为OH、OC1-6烷基、C1-6烷基OH、OC2-6烷基OH、C1-6烷基NR8R9、OC2-6烷基NR8R9、C1-6烷基NR8COR9、OC2-6烷基NR8COR9、OCONR8R9、NR8COOR9、NR10CONR8R9、CONR8R9、NR8COR12；

R8和R9各自独立地为H、C1-4烷基；

A为被0～3个独立地选自卤素、C1-4烷基、CF3、OCF3、OC1-4烷基和OC2-5烷基NR18R19的取代基任选地取代的苯基或杂芳基；

R18和R19各自独立地为H、C1-4烷基时，W为C1-4烷基OH；

其中

杂芳基是包含一个或更多个选自O、N、S的杂原子的5元或6元杂芳香环；

杂环烷基是指包含1-3个选自O、S和N的杂原子的3-8元饱和环，其中N原子被R24取代，而R24为H、C1-4烷基、苯基、萘基或杂芳基。

2.权利要求1的化合物，其中：

R2选自C1-6烷基OH、OC2-6烷基OH、C1-6烷基NR8R9、OC2-6烷基NR8R9、C1-6烷基NR8COR9、OC2-6烷基NR8COR9、OCONR8R9、NR8COOR9、NR10CONR8R9、CONR8R9以及NR8COR12。

3.如权利要求2的化合物，其中：

R1为H或C1-6烷基；

Q为CH；

W选自C1-4烷基、C2-6烯基以及C1-4烷基OH；

A为被0～2个独立地选自卤素、C1-4烷基、CF3、OCF3、OC1-4烷基和OC2-5烷基NR18R19的取代基任选地取代的苯基或杂芳基；以及Y选自H、C1-4烷基和NR22R23。

4.下式的如权利要求1的化合物：

5.下式的化合物或其药物学可接受的盐或非对映异构体

6.一种组合物，其包含载体和至少一种如权利要求1至5之一所述的化合物。

7.至少一种权利要求1至5之一所述的化合物或权利要求6所述的组合物在制备用于治疗患者中与过度增殖相关的疾病或病症的药物中的应用。

8.如权利要求7的应用，其中所述与过度增殖相关的疾病或病症可通过调节微管聚合治疗。

9.如权利要求7或8的应用，其中所述与过度增殖相关的病症或疾病选自以下组中：癌症、传染病、血管再狭窄以及炎性疾病。

10.至少一种如权利要求1至5之一所述的化合物或权利要求6所述的组合物在制备用于治疗患者中与蛋白激酶相关的疾病或病症的药物中的应用。

11.如权利要求10的应用，其中所述与蛋白激酶相关的疾病或病症选自以下组中：遗传性过敏症、细胞介导的过敏反应、风湿性疾病、其它自身免疫性疾病、以及病毒性疾病。

12.至少一种如权利要求1至5之一所述的化合物或权利要求6所述的组合物在制备治疗患者中与炎症和感染相关的疾病和病症的药物中的应用。

说明书全文

微管蛋白抑制剂

技术领域

[0001] 本发明涉及通过给药能够通过结合微管蛋白的化合物抑制癌症和其它增殖性疾病生长的方法，本发明还涉及适用于此给药的新型杂环化合物。

背景技术

[0002] 许多人、兽疾病源于失控或异常的细胞增殖过程。这些疾病中最重要的是癌症，癌症是以非控制性生长和不分化为特征的一大类细胞恶性肿瘤的统称。银屑病是另一类以失控或异常的细胞增殖为特征的疾病。银屑病是一种以出现干燥的鳞屑和色斑为特征的常见的慢性皮肤病。该疾病源于表皮的过度增殖和角质细胞的不完全分化。银屑病经常涉及头皮、肘部、膝部、背部、臀部、指甲、眉毛和生殖器部位，其严重性从轻度到极度令人衰弱不等，导致银屑病关节炎、脓疱性银屑病、剥脱性皮炎(exfoliative psoriatic dermatitis)。目前尚无针对银屑病的通用治疗方法。在较轻度的情况下通常使用局部皮质甾类治疗，更严重时可使用抗增殖剂如抗代谢药物甲氨喋呤、DNA合成抑制剂羟基脲以及微管干扰剂(microtubule disrupter)秋水仙碱来治疗。

[0003] 与异常高水平的细胞增殖相关的其它疾病包括：其中涉及血管平滑肌细胞的再狭窄、其中涉及内皮细胞、炎性细胞和肾小球细胞的炎性疾病、其中涉及心肌细胞的心肌梗塞、其中涉及肾细胞的肾小球肾炎、其中涉及内皮细胞的移植排斥以及其中涉及某些免疫细胞和/或其它受感染细胞的传染性疾病如HIV感染和疟疾。

[0004] 可通过若干机制抑制细胞增殖，包括：烷化剂、拓扑异构酶抑制剂、核苷酸类似物、抗生素、激素拮抗剂和核酸损伤剂(nucleic acid damagingagent)等。抑制细胞增殖的一种药理学重要机制是通过结合微管蛋白。微管蛋白是由α和β亚基组成的不对称二聚体，其聚合形成的细胞骨架的构件称为微管。微管必须呈高度动态以完成其许多功能。在细胞周期的某些阶段或在特定的细胞种类或细胞器内，微管必须稳定以完成如轴突内转运或纤毛和鞭毛的运动。微管在细胞周期的G2期组装，并参与在细胞分裂过程中促进姐妹染色体分离的有丝分裂纺锤体的形成。微管在细胞分裂中的重大作用以及药物与微管蛋白相互作用以干扰细胞周期的能力都使得微管蛋白成为施用包括抗癌药、杀真菌剂和除草剂的良好靶标。典型的微管蛋白配体例如秋水仙碱、紫杉醇、长春花属(Vinca)生物碱如长春碱、大环内酯类抗肿瘤药物、软海绵素(halicondrin)、苯菌灵和甲苯达唑可通过结合微管蛋白直接抑制细胞分裂，导致细胞周期停滞在有丝分裂的G2/M期。该机制是这类化合物具有治疗价值的基础，例如用秋水仙碱治疗痛风，用紫杉醇治疗再狭窄，用紫杉醇、长春碱、大环内酯类抗肿瘤药物和软海绵素治疗癌症，用苯菌灵治疗真菌感染以及用甲苯达唑治疗疟疾和寄生虫病。

[0005] 干扰微管动态或稳定性能够以若干途径抑制细胞分裂。保持微管稳定或抑制其聚合两者都将防止在细胞周期的若干点所需要的细胞骨架重组并导致细胞周期中细胞从一个阶段进行到下一阶段的停滞。已确定三类主要的微管蛋白结合药物，即秋水仙碱类似物、长春花属生物碱和紫杉烷类，其在β微管蛋白分子中均具有特异性结合位点。紫杉醇TM(Taxol )和相关的紫杉烷类代表一类稳定微管的药物，该过程最终导致微管结构的“冻结”以致其不能重组(Jordan M A.和Wilson L.，1998)。之后有丝分裂的停滞诱发凋亡机制导致细胞死亡。大量秋水仙碱类似物以及其它如秋水仙碱般结合至β微管蛋白上相同位点的若干化合物可扰乱微管蛋白聚合并中断微管形成。长春碱以及若干其它长春花相关药物结合到区别于秋水仙碱的位点。于长春花位点结合的化合物可防止微管形成并造成微管不稳定(Jordan等，1986；Rai和Wolff，1996)。因此本发明旨在提供通过结合微管蛋白而可可能地调节微管动态的化合物。

[0006] 因此，本发明的目的是提供对活跃地分裂的细胞具直接或间接毒性并可用于治疗癌症、病毒和细菌感染、血管再狭窄、炎性疾病、自身免疫性疾病或银屑病的化合物。本发明还旨在提供用于治疗所述疾病的治疗组合物。本发明的其它方面涉及提供杀死剧烈增殖性细胞如癌细胞、细菌细胞或上皮细胞，以及治疗各种癌症、感染、炎症和常规增殖性疾病的方法。本发明另一方面涉及提供治疗以出现迅速增殖性细胞为特征的其它疾病如银屑病和其它皮肤病的方法。

[0007] 在一个具体实施方案中，本发明方法用于治疗肉瘤、癌和/或白血病。可将所述方法单独或作为治疗方案的一部分应用的示例性病症包括：纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳突癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、威尔姆氏肿瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室鼓膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听觉神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤、以及视网膜母细胞瘤。

[0008] 在某些具体实施方案中，本发明的方法用于治疗诸如由乳房、前列腺、肾、膀胱、或结肠组织形成的癌的病症。

[0009] 在其它具体实施方案中，本发明方法用于治疗脂肪组织中发生的增殖性或瘤性疾病，如脂肪细胞肿瘤即脂肪瘤、纤维脂瘤、成脂母细胞瘤、脂肪过多症、棕色脂肪瘤(hibemomas)、血管瘤和/或脂肪肉瘤。

[0010] 在其它具体实施方案中，也可以用所述组合物和化合物控制传染物和寄生物(如细菌、锥体虫、真菌等)。

发明内容

[0011] 本发明的发明人发现了一组基于被取代的杂环骨架的化合物，它们可以抑制癌细胞的生长和增殖。本发明的发明人进一步证明这些化合物能结合微管蛋白。这种化合物还可用于治疗其它与过度增殖相关的病症。

[0012] 因此，在第一方面中本发明提供了在患者中调节微管聚合的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种如下通式的化合物或其药物学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶体形式或非对映异构体，

[0013]

[0014] 其中：

[0015] R1为H、C1-4烷基；

[0016] Q为键或C1-4烷基；

[0017] A为被0～3个独立地选自卤素、C1-4烷基、CH2F、CHF2、CF3、CN、芳基、杂芳基、OCF3、OC1-4烷基、OC2-5烷基NR4R5、O芳基、O杂芳基、CO2R4、CONR4R5、硝基、NR4R5、C1-4烷基NR4R5、NR6C1-4烷基NR4R5、NR4COR5、NR6CONR4R5、NR4SO2R5的取代基任选地取代的芳基、杂芳基；

[0018] R4、R5各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR7的原子；

[0019] R6选自H、C1-4烷基；

[0020] R7选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基；

[0021] R2为0～2个独立地选自卤素、C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、CH2F、CHF2、CF3、OCF3、CN、C1-4烷基NR8R9、OC1-4烷基NR8R9、CO2R8、CONR8R9、NR8R9、NR8COR9、NR10CONR8R9、NR8SO2R9的取代基；

[0022] R8、R9各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR11的原子；

[0023] R10选自H、C1-4烷基、芳基或杂芳基；

[0024] R11选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基；

[0025] Y为卤素、OH、NR12R13、NR14COR12、NR14CONR12R13、N14SO2R13；

[0026] R12和R13各自独立地为H、CH2F、CHF2、CF3、CN、任选地被OH、OC1-4烷基或NR15R16取代的C1-4烷基、环烷基、杂环烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3～6元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0027] R14、R15和R16各自独立地选自H、C1-4烷基；

[0028] n＝0-4；

[0029] W选自H、C1-4烷基、C2-6烯基，其中C1-4烷基或C2-6烯基可以任选地被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR15R16取代；

[0030] R15和R16各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3～8元环，该环任选地含有选自O、S、NR17的原子；

[0031] R17选自H和C1-4烷基。

[0032] 在第二方面中本发明提供如下通式的化合物或其药物学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶体形式或非对映异构体，

[0033]

[0034] 其中：

[0035] R1为H、C1-4烷基；

[0036] Q为键或C1-4烷基；

[0037] A为被0～3个独立地选自卤素、C1-4烷基、CH2F、CHF2、CF3、CN、芳基、杂芳基、OCF3、OC1-4烷基、OC2-5烷基NR4R5、O芳基、O杂芳基、CO2R4、CONR4R5、硝基、NR4R5、C1-4烷基NR4R5、NR6C1-4烷基NR4R5、NR4COR5、NR6CONR4R5、NR4SO2R5的取代基任选地取代的芳基、杂芳基；

[0038] R4、R5各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR7的原子；

[0039] R6选自H、C1-4烷基；

[0040] R7选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基；

[0041] R2为0～2个独立地选自C1-4烷基和OC1-4烷基的取代基；

[0042] Y为CH2OH、OC1-4烷基OH、OC1-4烷基R12、OC1-4烷基NR12NR13、C(O)R12、CH2R12、COOR12、CONR12R13、OCONR12R13、CH2NR12R13、NHCOR12、NHCONR12R13；

[0043] R12和R13各自独立地为H、C1-2烷基、(CH2)3NEt2、(CH2)2NMe2、(CH2)5NH2、(CH2)2OH、[0044]

[0045]

[0046] 和

[0047] n＝0-4；

[0048] W选自H、C1-4烷基、C2-6烯基，其中C1-4烷基或C2-6烯基可以任选地被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR15R16取代；

[0049] R15和R16各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3～8元环，该环任选地含有选自O、S、NR17的原子；

[0050] R17选自H和C1-4烷基；

[0051] 其中当Y是CH2R12时，R12不为H、C1-2烷基。

[0052] 在第三方面中本发明提供包含载体和至少一种本发明第二方面的化合物的组合物。

[0053] 在第四方面中本发明提供一种治疗患者中与过度增殖相关的疾病的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种第二方面的化合物或第三方面的组合物。

[0054] 在第五方面中本发明提供如下通式的化合物或其药物学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶体形式或非对映异构体，

[0055]

[0056] 其中：

[0057] X1、X2、X3、X4选择如下：

[0058] (i)X1和X2为N，且X3和X4为独立地被Y取代的C；

[0059] (ii)X1和X4为N，且X2和X3为独立地被Y取代的C；

[0060] (iii)X1和X3为N，且X2和X4为独立地被Y取代的C；

[0061] (iv)X2和X4为N，且X1和X3为独立地被Y取代的C；

[0062] (v)X1为N，且X2、X3和X4为独立地被Y取代的C；

[0063] (vi)X3为N，且X1、X2和X4为独立地被Y取代的C；

[0064] (vii)X4为N，且X1、X2和X3为独立地被Y取代的C；

[0065] (viii)X2为N，且X1、X3和X4为独立地被Y取代的C；以及

[0066] (ix)X1、X2和X3为N，且X4为被Y取代的C。

[0067] R1为H、C1-6烷基、C1-6烷基NR5R6、C1-6烷基NR5COR6、C1-6烷基NR5SO2R6、C1-6烷基CO2R5、C1-6烷基CONR5R6；

[0068] R5和R6各自独立地为H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR7的原子；

[0069] R7选自H、C1-4烷基；

[0070] R2选自C1-6烷基OH、OC2-6烷基OH、C1-6烷基NR8R9、OC2-6烷基NR8R9、C1-6烷基NR8COR9、OC2-6烷基NR8COR9、C1-6烷基杂芳基、OC2-6烷基杂芳基、OCONR8R9、NR8COOR9、NR10CONR8R9、CONR8R9、NR8COR12；

[0071] R8和R9各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基、杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0072] R12为C2-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基、杂环烷基；R11和R13各自独立地为H、C1-4烷基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0073] R14选自H、C1-4烷基；

[0074] R10为H、C1-4烷基；

[0075] R3和R4各自独立地为H、卤素、C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、CF3、OCF3；

[0076] Q为键或C1-4烷基；

[0077] W选自H、C1-4烷基、C2-6烯基，其中C1-4烷基或C2-6烯基可以任选地被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR15R16取代；

[0078] R15和R16各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3～8元环，该环任选地含有选自O、S、NR17的原子；

[0079] R17选自H和C1-4烷基；

[0080] A为被0～3个独立地选自卤素、C1-4烷基、CF3、芳基、杂芳基、OCF3、OC1-4烷基、OC2-5烷基NR18R19、O芳基、O杂芳基、CO2R18、CONR18R19、NR18R19、C1-4烷基NR18R19、NR20C1-4烷基NR18R19、NR18COR19、NR20CONR18R19、NR18SO2R19的取代基任选地取代的芳基、杂芳基；

[0081] R18和R19各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR21的原子；

[0082] R21选自H、C1-4烷基；

[0083] R20选自H、C1-4烷基；

[0084] Y选自H、C1-4烷基、OH、NR22R23；

[0085] R22和R23各自独立地为H、C1-4烷基。

[0086] 在第六方面中本发明提供包含载体和一种或多种第五方面的化合物的组合物。

[0087] 在第七方面中本发明提供一种治疗患者中与过度增殖相关的病症的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种第五方面的化合物或第六方面的组合物。

[0088] 在第八方面中本发明提供一种治疗患者中与蛋白激酶相关的病症的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种第五方面的化合物或第六方面的组合物。

[0089] 在第九方面中本发明提供如下通式的化合物或其药物学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶体形式或非对映异构体，

[0090]

[0091] 其中：

[0092] X1、X2、X3、X4选择如下：

[0093] (i)X1和X2为N，且X3和X4为独立地被Y取代的C；

[0094] (ii)X1和X4为N，且X2和X3为独立地被Y取代的C；

[0095] (iii)X2和X4为N，且X1和X3为独立地被Y取代的C；

[0096] (iv)X1为N，且X2、X3和X4为独立地被Y取代的C；

[0097] (v)X3为N，且X1、X2和X4为独立地被Y取代的C；

[0098] (vi)X4为N，且X1、X2和X3为独立地被Y取代的C；

[0099] (vii)X2为N，且X1、X3和X4为独立地被Y取代的C；以及

[0100] (viii)X1、X2和X3为N，且X4为被Y取代的C。

[0101] R1为H、C1-6烷基、C1-6烷基NR5R6、C1-6烷基NR5COR6、C1-6烷基NR5SO2R6、C1-6烷基CO2R5、C1-6烷基CONR5R6；

[0102] R5和R6各自独立地为H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR7的原子；

[0103] R7选自H、C1-4烷基；

[0104] R2选自OH、OC1-6烷基、OC1-6烷基OH、OC2-6烷基OH、C1-6烷基NR8R9、OC2-6烷基NR8R9、C1-6烷基NR8COR9、OC2-6烷基NR8COR9、C1-6烷基杂芳基、OC2-6烷基杂芳基、OCONR8R9、NR8COOR9、NR10CONR8R9、CONR8R9、NR8COR12；

[0105] R8和R9各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基、杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0106] R12为C2-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基、杂环烷基；

[0107] R11和R13各自独立地为H、C1-4烷基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0108] R14选自H、C1-4烷基；

[0109] R10为H、C1-4烷基；

[0110] R3和R4各自独立地为H、卤素、C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、CF3、OCF3；

[0111] Q为键或C1-4烷基；

[0112] W选自H、C1-4烷基、C2-6烯基，其中C1-4烷基或C2-6烯基可以任选地被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR15R16取代；

[0113] R15和R16各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3～8元环，该环任选地含有选自O、S、NR17的原子；

[0114] R17选自H和C1-4烷基；

[0115] A为被0～3个独立地选自卤素、C1-4烷基、CF3、芳基、杂芳基、OCF3、OC1-4烷基、OC2-5烷基NR18R19、O芳基、O杂芳基、CO2R18、CONR18R19、NR18R19、C1-4烷基NR18R19、NR20C1-4烷基NR18R19、NR18COR19、NR20CONR18R19、NR18SO2R19的取代基任选地取代的芳基、杂芳基；

[0116] R18和R19各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR21；

[0117] R21选自H、C1-4烷基；

[0118] R20选自H、C1-4烷基；

[0119] Y选自H、C1-4烷基、OH、NR22R23；

[0120] R22和R23都各自独立地为H、C1-4烷基。

[0121] 在第十方面中本发明提供包含载体和一种或多种第九方面的化合物的组合物。

[0122] 在第十一方面中本发明提供一种治疗患者中与过度增殖相关的病症的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种第九方面的化合物或第十方面的组合物。

[0123] 在第十二方面中本发明提供一种治疗患者中与蛋白激酶相关的病症的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种第九方面的化合物或第十方面的组合物。

具体实施方式

[0124] 在第一方面中，本发明提供一种调节患者中微管聚合的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种如下通式的化合物或其药物学可接受的盐、水合物、溶剂合物、结晶形式或非对映异构体，

[0125]

[0126] 其中：

[0127] R1为H、C1-4烷基；

[0128] Q为键或C1-4烷基；

[0129] A为被0～3个独立地选自卤素、C1-4烷基、CH2F、CHF2、CF3、CN、基、杂芳基、OCF3、OC1-4烷基、OC2-5烷基NR4R5、O芳基、O杂芳基、CO2R4、CONR4R5、硝基、NR4R5、C1-4烷基NR4R5、NR6C1-4烷基NR4R5、NR4COR5、NR6CONR4R5、NR4SO2R5的取代基任选地取代的芳基、杂芳基；且R4、R5各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR7的原子；且R6选自H、C1-4烷基；且R7选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基；R2为0～2个独立地选自卤素、C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、CH2F、CHF2、CF3、OCF3、CN、C1-4烷基NR8R9、OC1-4烷基NR8R9、CO2R8、CONR8R9、NR8R9、NR8COR9、NR10CONR8R9、NR8SO2R9的取代基；且R8、R9各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR11的原子；且R10选自H、C1-4烷基、芳基或杂芳基；且R11选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基；Y为卤素、OH、NR12R13、NR14COR12、NR14CONR12R13、N14SO2R13；且R12和R13各自独立地为H、CH2F、CHF2、CF3、CN、任选地被OH、OC1-4烷基或NR15R16取代的C1-4烷基、环烷基、杂环烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3～6元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；且R14、R15和R16各自独立地选自H、C1-4烷基；

[0130] n＝0-4；

[0131] W选自H、C1-4烷基、C2-6烯基，其中C1-4烷基或C2-6烯基可以任选地被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR15R16取代；且R15和R16各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3～8元环，该环任选地含有选自O、S、NR17的原子；且R17选自H和C1-4烷基。

[0132] 优选地，该方法用于治疗与过度增殖相关的疾病。

[0133] 优选地，该化合物选自表2中所列的化合物。

[0134] 在第二方面中本发明提供如下通式的化合物或其药物学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶体形式或非对映异构体，

[0135]

[0136] 其中：

[0137] R1为H、C1-4烷基；

[0138] Q为键或C1-4烷基；

[0139] A为被0～3个独立地选自卤素、C1-4烷基、CH2F、CHF2、CF3、CN、芳基、杂芳基、OCF3、OC1-4烷基、OC2-5烷基NR4R5、O芳基、O杂芳基、CO2R4、CONR4R5、硝基、NR4R5、C1-4烷基NR4R5、NR6C1-4烷基NR4R5、NR4COR5、NR6CONR4R5、NR4SO2R5的取代基任选地取代的芳基、杂芳基；且R4、R5各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR7的原子；且R6选自H、C1-4烷基；且R7选自H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基；

[0140] R2为0～2个独立地选自C1-4烷基和OC1-4烷基的取代基；

[0141] Y为CH2OH、OC1-4烷基OH、OC1-4烷基R12、OC1-4烷基NR12NR13、C(O)R12、CH2R12、COOR12、CONR12R13、OCONR12R13、CH2NR12R13、NHCOR12、NHCONR12R13；且R12和R13各自独立地为H、C1-2烷基、(CH2)3NEt2、(CH2)2NMe2、(CH2)5NH2、(CH2)2OH、

[0142]

[0143] 和

[0144] n＝0-4；

[0145] W选自H、C1-4烷基、C2-6烯基，其中C1-4烷基或C2-6烯基可以任选地被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR15R16取代；且R15和R16各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3～8元环，该环任选地含有选自O、S、

[0146] NR17的原子；且R17选自H和C1-4烷基；

[0147] 其中当Y是CH2R12时，R12不为H、C1-2烷基。

[0148] 在第三方面中本发明提供包含载体和至少一种第二方面的化合物的组合物。

[0149] 在第四方面中本发明提供一种治疗患者中与过度增殖相关的病症的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种第二方面的化合物或第三方面的组合物。

[0150] 优选地，所述与过度增殖相关的病症可通过调节微管聚合而治疗。

[0151] 在第五方面中本发明提供如下通式的化合物或其药物学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶体形式或非对映异构体，

[0152]

[0153] 其中：

[0154] X1、X2、X3、X4选择如下：

[0155] (i)X1和X2为N，且X3和X4为独立地被Y取代的C；

[0156] (ii)X1和X4为N，且X2和X3为独立地被Y取代的C；

[0157] (iii)X1和X3为N，且X2和X4为独立地被Y取代的C；

[0158] (iv)X2和X4为N，且X1和X3为独立地被Y取代的C；

[0159] (v)X1为N，且X2、X3和X4为独立地被Y取代的C；

[0160] (vi)X3为N，且X1、X2和X4为独立地被Y取代的C；

[0161] (vii)X4为N，且X1、X2和X3为独立地被Y取代的C；

[0162] (viii)X2为N，且X1、X3和X4为独立地被Y取代的C；以及

[0163] (ix)X1、X2和X3为N，且X4为被Y取代的C；

[0164] R1为H、C1-6烷基、C1-6烷基NR5R6、C1-6烷基NR5COR6、C1-6烷基NR5SO2R6、C1-6烷基CO2R5、C1-6烷基CONR5R6；其中R5和R6各自独立地为H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR7的原子；

[0165] R7选自H、C1-4烷基；

[0166] R2选自C1-6烷基OH、OC2-6烷基OH、C1-6烷基NR8R9、OC2-6烷基NR8R9、C1-6烷基NR8COR9、OC2-6烷基NR8COR9、C1-6烷基杂芳基、OC2-6烷基杂芳基、OCONR8R9、NR8COOR9、NR10CONR8R9、CONR8R9、NR8COR12；

[0167] R8和R9各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基、杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0168] R12为C2-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基、杂环烷基；

[0169] R11和R13各自独立地为H、C1-4烷基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0170] R14选自H、C1-4烷基；

[0171] R10为H、C1-4烷基；

[0172] R3和R4各自独立地为H、卤素、C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、CF3、OCF3；

[0173] Q为键或C1-4烷基，

[0174] W选自H、C1-4烷基、C2-6烯基，其中C1-4烷基或C2-6烯基可以任选地被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR15R16取代；

[0175] R15和R16各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3～8元环，该环任选地含有选自O、S、NR17的原子；

[0176] R17选自H和C1-4烷基；

[0177] A为被0～3个独立地选自卤素、C1-4烷基、CF3、芳基、杂芳基、OCF3、OC1-4烷基、OC2-5烷基NR18R19、O芳基、O杂芳基、CO2R18、CONR18R19、NR18R19、C1-4烷基NR18R19、NR20C1-4烷基NR18R19、NR18COR19、NR20CONR18R19、NR18SO2R19的取代基任选地取代的芳基、杂芳基；

[0178] R18和R19各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR21；

[0179] R21选自H、C1-4烷基；

[0180] R20选自H、C1-4烷基；

[0181] Y选自H、C1-4烷基、OH、NR22R23；

[0182] R22和R23都各自独立地为H、C1-4烷基。

[0183] 在上述描述中应意识到：

[0184] C1-4烷基是指未取代或任选地被取代的直链或支链烷链。

[0185] 芳基是指未取代或任选地被取代的苯基或萘基。

[0186] 杂芳基是指包含一个或更多个选自O、N、S的杂原子的未取代或任选地被取代的5元或6元杂芳香环。

[0187] 环烷基是指3-8元饱和环。

[0188] 杂环烷基是指包含1-3个选自O、S、NR24的杂原子的任选地被取代的3-8元饱和环，其中R24为H、C1-4烷基、芳基、杂芳基。

[0189] 在一个优选的具体实施方案中，所述化合物选自如下通式的化合物或其药物学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶体形式或非对映异构体，

[0190]

[0191] 其中：

[0192] X1、X2、X3、X4选择如下：

[0193] (i)X1和X2为N，且X3和X4为独立地被Y取代的C；

[0194] (ii)X1和X4为N，且X2和X3为独立地被Y取代的C；

[0195] (iii)X1和X3为N，且X2和X4为独立地被Y取代的C；

[0196] (iv)X2和X4为N，且X1和X3为独立地被Y取代的C；

[0197] (v)X1为N，且X2、X3和X4为独立地被Y取代的C；

[0198] (vi)X3为N，且X1、X2和X4为独立地被Y取代的C；

[0199] (vii)X4为N，且X1、X2和X3为独立地被Y取代的C；

[0200] (viii)X2为N，且X1、X3和X4为独立地被Y取代的C；以及

[0201] (ix)X1、X2和X3为N，且X4为被Y取代的C。

[0202] R1为H、C1-6烷基、C1-6烷基NR5R6，其中R5和R6各自独立地为H、C1-4烷基、芳基、杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR7的原子；

[0203] R7选自H、C1-4烷基；

[0204] R2选自C1-6烷基OH、OC2-6烷基OH、C1-6烷基NR8R9、OC2-6烷基NR8R9、C1-6烷基NR8COR9、OC2-6烷基NR8COR9、C1-6烷基杂芳基、OC2-6烷基杂芳基、OCONR8R9、NR8COOR9、NR10CONR8R9、CONR8R9、NR8COR12；

[0205] R8和R9各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基、杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0206] R12为C2-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基、杂环烷基；

[0207] R11和R13各自独立地为H、C1-4烷基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0208] R14选自H、C1-4烷基；

[0209] R10为H、C1-4烷基；

[0210] R3和R4各自独立地为H、卤素、C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、CF3、OCF3；

[0211] Q为CH；

[0212] W选自C1-4烷基、C2-6烯基，其中C1-4烷基或C2-6烯基可以任选地被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR15R16取代；

[0213] R15和R16各自独立地为H、C1-4烷基，或可相连形成任选地被取代的3～8元环，该环任选地含有选自O、S、NR17的原子；

[0214] R17选自H和C1-4烷基；

[0215] A为被0～2个独立地选自卤素、C1-4烷基、CF3、芳基、杂芳基、OCF3、OC1-4烷基、OC2-5烷基NR18R19、O芳基、O杂芳基、CO2R18、CONR18R19、NR18R19、C1-4烷基NR18R19、NR20C1-4烷基NR18R19、NR18COR19、NR20CONR18R19、NR18SO2R19的取代基任选地取代的芳基、杂芳基；

[0216] R18和R19各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR21的原子；

[0217] R21选自H、C1-4烷基；

[0218] R20选自H、C1-4烷基；

[0219] Y选自H、C1-4烷基、NR22R23；

[0220] R22和R23各自独立地为H、C1-4烷基。

[0221] 在上述描述中应意识到：

[0222] C1-4烷基是指未取代或任选地被取代的直链或支链烷链。

[0223] 芳基是指未取代或任选地被取代的苯基或萘基。

[0224] 杂芳基是指包含一个或更多个选自O、N、S的杂原子的未取代或任选地被取代的5元或6元杂芳香环。

[0225] 环烷基是指3-8元饱和环。

[0226] 杂环烷基是指包含1-3个选自O、S、NR24的杂原子的任选地被取代的3-8元饱和环，其中R24为H、C1-4烷基、芳基、杂芳基。

[0227] 在第六方面中本发明提供包含载体和一种或多种第五方面的化合物的组合物。

[0228] 在第七方面中本发明提供一种治疗患者中与过度增殖相关的病症的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种第五方面的化合物或第六方面的组合物。

[0229] 优选地，所述与过度增殖相关的病症可通过调节微管聚合治疗。

[0230] 在第八方面中本发明提供一种治疗患者中与蛋自激酶相关的病症的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种第五方面的化合物或第六方面的组合物。

[0231] 在第九方面中本发明提供如下通式的化合物或其药物学可接受的前药、盐、水合物、溶剂合物、晶体形式或非对映异构体，

[0232]

[0233] 其中：

[0234] X1、X2、X3、X4选择如下：

[0235] (i)X1和X2为N，且X3和X4为独立地被Y取代的C；

[0236] (ii)X1和X4为N，且X2和X3为独立地被Y取代的C；

[0237] (iii)X2和X4为N，且X1和X3为独立地被Y取代的C；

[0238] (iv)X1为N，且X2、X3和X4为独立地被Y取代的C；

[0239] (v)X3为N，且X1、X2和X4为独立地被Y取代的C；

[0240] (vi)X4为N，且X1、X2和X3为独立地被Y取代的C；

[0241] (vii)X2为N，且X1、X3和X4为独立地被Y取代的C；以及

[0242] (viii)X1、X2和X3为N，且X4为被Y取代的C。

[0243] R1为H、C1-6烷基、C1-6烷基NR5R6、C1-6烷基NR5COR6、C1-6烷基NR5SO2R6、C1-6烷基CO2R5、C1-6烷基CONR5R6；其中R5和

[0244] R6各自独立地为H、C1-4烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR7的原子；

[0245] R7选自H、C1-4烷基；

[0246] R2选自OH、OC1-6烷基、C1-6烷基OH、OC2-6烷基OH、C1-6烷基NR8R9、OC2-6烷基NR8R9、C1-6烷基NR8COR9、OC2-6烷基NR8COR9、C1-6烷基杂芳基、OC2-6烷基杂芳基、OCONR8R9、NR8COOR9、NR10CONR8R9、CONR8R9、NR8COR12；

[0247] R8和R9各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基NR1 1R1 3、杂芳基、杂环烷基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0248] R12为C2-4烷基、C1-4烷基NR11R13、杂芳基、杂环烷基；

[0249] R11和R13各自独立地为H、C1-4烷基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR14的原子；

[0250] R14选自H、C1-4烷基；

[0251] R10为H、C1-4烷基；

[0252] R3和R4各自独立地为H、卤素、C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、CF3、OCF3；

[0253] Q为键或C1-4烷基；

[0254] W选自H、C1-4烷基、C2-6烯基，其中C1-4烷基或C2-6烯基可以任选地被C1-4烷基、OH、OC1-4烷基、NR15R16取代；

[0255] R15和R16各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基环烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3～8元环，该环任选地含有选自O、S、NR17的原子；

[0256] R17选自H和C1-4烷基；

[0257] A为被0～3个独立地选自卤素、C1-4烷基、CF3、芳基、杂芳基、OCF3、OC1-4烷基、OC2-5烷基NR18R19、O芳基、O杂芳基、CO2R18、CONR18R19、NR18R19、C1-4烷基NR18R19、NR20C1-4烷基NR18R19、NR18COR19、NR20CONR18R19、NR18SO2R19的取代基任选地取代的芳基、杂芳基；

[0258] R18和R19各自独立地为H、C1-4烷基、C1-4烷基杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-4烷基芳基、C1-4烷基杂芳基，或可相连形成任选地被取代的3-8元环，该环任选地含有选自O、S、NR21的原子；

[0259] R21选自H、C1-4烷基；

[0260] R20选自H、C1-4烷基；

[0261] Y选自H、C1-4烷基、OH、NR22R23；

[0262] R22和R23各自独立地为H、C1-4烷基。

[0263] 在上述描述中应意识到：

[0264] C1-4烷基是指未取代或任选地被取代的直链或支链烷链。

[0265] 芳基是指未取代或任选地被取代的苯基或萘基。

[0266] 杂芳基是指包含一个或更多个选自O、N、S的杂原子的未取代或任选地被取代的5元或6元杂芳香环。

[0267] 环烷基是指3-8元饱和环。

[0268] 杂环烷基是指包含1-3个选自O、S、NR24的杂原子的任选地被取代的3-8元饱和环，其中R24为H、C1-4烷基、芳基、杂芳基。

[0269] 在第十方面中本发明提供包含载体和一种或多种第九方面的化合物的组合物。

[0270] 在第十一方面中本发明提供一种治疗患者中与过度增殖相关的病症的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种第九方面的化合物或第十方面的组合物。

[0271] 在第十二方面中本发明提供一种治疗患者中与蛋白激酶相关的病症的方法，该方法包括给药治疗有效量的至少一种第九方面的化合物或第十方面的组合物。

[0272] 本发明的化合物包括所有的构象异构体(即顺式和反式异构体)。本发明的化合物具有不对称中心并因此存在不同的对映体和非对映异构体形式。本发明涉及本发明化合物的所有光学异构体和立体异构体、以及其混合物的应用，还涉及所有可能使用或含有它们的药物组合物以及治疗方法。通式I、II、III、IV和V的化合物也可以互变异构体的形式存在。本发明涉及所有这类互变异构体以及其混合物的应用。

[0273] 具有游离氨基、酰氨基、羟基或羧基的通式I、II、III、IV和V的化合物可被转化为前药。前药包括其中一个氨基酸残基、或两个或更多个(如二、三或四个)氨基酸残基的多肽链通过肽键共价地结合到通式I、II、III、IV和V的化合物的游离氨基、羟基、羧酸基上的化合物。该氨基酸残基包括通常用三个字母的符号表示的天然存在的20种氨基酸，还包括4-羟基脯氨酸、羟基赖氨酸、锁链素(demosine)、异锁链素(isodemosine)、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和甲硫氨酸砜。前药还包括其中碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺和烷基酯通过前药侧链的羰基碳共价地结合到通式I、II、III、IV和V的上述取代基上的化合物。前药还包括通过磷-氧键结合到通式I、II、III、IV和V的化合物的游离羟基上的通式I、II、III、IV和V的化合物的磷酸衍生物(如酸、酸盐或酯)。前药还包括其中酰氧基烷基或膦酰氧基烷基片段共价地连接到含游离羟基的通式I、II、III、IV和V的化合物上的化合物。酰氧基烷基或膦酰氧基烷基片段也可以通过形成N-(酰氧基烷基)-或N-(膦酰氧基烷基)-吡啶盐共价地连接到含吡啶环的通式I、II、III、IV和V的化合物上。本发明还涵盖含有通式I、II、III、IV和V的化合物的前药的药物组合物。此外，本发明涵盖治疗或预防能够通过调节微管动态治疗或预防的疾病的方法，其包括给药通式I、II、III、IV和V的化合物的前药。本发明还涵盖治疗或预防能够通过干扰微管来治疗或预防的疾病的方法，其包括给药通式II、III、IV和V的化合物的前药。

[0274] 在本发明更为优选的具体实施方案中，所述化合物带W的手性碳表现为S手性，其中W为C1-4烷基或C1-4烷基氨基。所述化合物可以纯异构体或任何比例的异构体混合物来使用。然而所述混合物优选包含至少70％、80％、90％、95％或99％的优选的异构体。

[0275] 在更为优选的具体实施方案中，本发明提供选自表1的化合物的化合物、包含载体和一种或更多种表1的化合物的组合物、以及治疗患者中与过度增殖相关的疾病的方法，其中所述方法包括给药至少一种表1的化合物。

[0276] 更优选地，所述与过度增殖相关的病症可通过调节微管聚合治疗。

[0277] 本发明进一步提供在患者中调节微管聚合的方法，该方法包括给药治疗有效量的通式I、II、III、IV和V中任意之一的化合物。

[0278] 在优选的具体实施方案中，本发明提供一种在患者中调节微管聚合的方法，该方法包括给药治疗有效量的选自表1的化合物。

[0279] 本发明提供可给药以用于治疗与过度增殖相关的病症的通式I、II、III、IV和V的化合物。优选地，所述与过度增殖相关的病症可通过调节微管聚合治疗。在一个优选的具体实施方案中，所述与过度增殖相关的病症选自癌症如：纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳突癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞癌、胆管癌、绒毛膜癌、精母细胞癌、胚胎性癌、威尔姆氏肿瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听觉神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤和如由乳房、前列腺、肾、膀胱、或结肠组织形成的癌症以及发生于脂肪组织的肿瘤疾病如脂肪细胞肿瘤例如脂肪瘤、纤维脂瘤、成脂母细胞瘤、脂肪过多症、棕色脂肪瘤、血管瘤和/或脂肪肉瘤；传染性疾病如病毒、疟疾和细菌感染；血管再狭窄；炎性疾病如自身免疫性疾病、肾小球肾炎、心肌梗塞以及银屑病。

[0280] 通式II、II、和IV的化合物还可用于治疗与过度增殖相关的病症或疾病和/或与蛋白激酶相关的病症或疾病。优选地，所述疾病选自遗传性过敏症如过敏性哮喘、特异性皮炎(湿疹)和过敏性鼻炎；细胞介导的过敏反应如过敏性接触性皮炎和过敏性肺炎；风湿性疾病如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、少年关节炎、干燥性综合征(sjgren’ssyndrome)、硬皮病、多肌炎、强直性脊柱炎、银屑病性关节炎；其它自身免疫性疾病如I型糖尿病、自身免疫性甲状腺疾病和阿尔茨海默氏病；病毒性疾病如EB病毒(EBV)、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、HIV、HTLV1、水痘带状疮疹病毒(VZV)、人类乳头瘤病毒(HPV)。

[0281] 在与过度增殖相关的病症和/或与蛋白激酶相关的病症的治疗或预防中，适宜的剂量水平通常为每天每千克病人体重约0.01到500mg，可单次或多次给药。优选地，该剂量水平为每天约0.1～约250mg/kg，更优选为每天约0.5～约100mg/kg。恰当的剂量水平为每天约0.01～250mg/kg、每天约0.05～100mg/kg、或每天约0.1～50mg/kg。在该范围内，剂量水平可为每天0.05～0.5、0.5～5或5～50mg/kg。对于口服给药，该组合物优选地以片剂的形式提供，所述片剂包含1.0～1000毫克的活性成分，具体而言为1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、
600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克的活性成分用于所要治疗的患者的症状调节。该化合物可以每天1到4次的方案给药，优选为每天一到两次。

[0282] 然而，应理解对于特定病人的具体剂量水平和给药频率可变化并将取决于各种因素，包括：所用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间、年龄、体重、全身健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄率、药物联用、特定疾病的严重性和接受治疗的主体。

[0283] 除灵长类动物如人外，许多其它哺乳动物也可根据本发明的方法来治疗。例如，哺乳动物包括(但不限于)牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、豚鼠、大鼠或其它的牛、绵羊、马、犬、猫科动物、啮齿动物或鼠科动物均可被治疗。然而，该方法还可用于其它物种，如鸟类(如鸡)。

[0284] 可用本发明方法治疗与炎症和传染病有关的疾病和病症。在一个优选的具体实施方案中，所述疾病或病症是需要抑制或促进嗜酸性细胞和/或淋巴细胞的活动以调节炎症反应的疾病或病症。

[0285] 其中需要抑制细胞生长的用上述方法治疗的对象为哺乳动物，包括但不限于牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、豚鼠、大鼠或其它的牛、绵羊、马、犬、猫科动物、啮齿动物或鼠科动物，且优选为人类，男性或女性。

[0286] 术语“治疗有效量”是指能引起组织、系统、动物、或人类的研究人员、兽医、医生、或其它临床医师们所寻求的生物学或医学反应的所述组合物的量。

[0287] 术语化合物“的给药”和/或“给药”化合物应理解为向需要治疗的个体提供本发明的化合物。

[0288] 本发明提供包含至少一种能够以治疗有效的量治疗与过度增殖相关的病症的通式I、II、III、IV、和V的化合物、以及药物学可接受的载体和稀释剂的药物组合物。本发明的组合物可以包含以下描述的其它治疗药物，也可以根据那些药物制剂领域所熟知的技术来配制，如使用常规的固体或液体载体或稀释剂以及适用于所需给药方式的药物添加剂(如：赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、调味剂等)。

[0289] 通式I、II、III、IV、和V的化合物可通过任意适当的方式给药，例如，口服给药如以片剂、胶囊、颗粒剂或散剂的形式给药；舌下给药；含服；胃肠外给药如皮下、静脉内、肌肉内或脑池内注射或输注技术(如无菌可注射水溶液或混悬液或非水溶液或混悬液)；鼻腔给药如通过吸入喷雾剂给药；局部给药如以乳膏或软膏的形式给药；或直肠给药如以栓剂的形式给药；以包含无毒的、药物学可接受的载体或稀释剂的剂量单位剂型给药。该化合物可以如以适于速释或缓释的方式给药。速释或缓释可以通过使用适当的包含本发明化合物的药物组合物实现，或尤其是在缓释的情况下，通过使用诸如皮下植入或渗透泵装置而实现。

[0290] 这里所用的术语“组合物”是指涵盖包含特定量的特定成分的产品以及任何直接或间接由特定量的特定成分相结合得到的产品。“药物学可接受的”是指所述载体、稀释剂或赋形剂必须与组合物中的其它成分相容并且对其受体无毒。

[0291] 用于给药本发明化合物的药物组合物可以方便地采用剂量单位形式，并可通过药学领域熟知的任何方法制备。所有的方法都包括将活性成分与构成一种或更多种辅助成分的载体相结合的步骤。通常，所述药物组合物可通过以下方法来制备：将活性成分与液体载体或磨成细粉的固体载体或上述两者均匀、紧密地相结合，然后若需要可将产品加工成所需的各种制剂。在药物组合物中应包含足以对疾病的发展和状态产生所需效果的量的活性目标化合物。这里所用的术语“组合物”是指涵盖含有特定量的特定成分的产品以及任何直接或间接由特定量的特定成分相结合得到的产品。

[0292] 所述包含活性成分的药物组合物可以是适于口服使用的形式，例如为片剂、药片(troche)、锭剂、水或油混悬液、可分散的粉末或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊、糖浆或酏剂。用于口服的组合物可以根据本领域熟知的任何用于药物组合物生产的方法制备，且该组合物可包含一种或更多种选自以下组中的物质以提供药物学美观和可口的制剂：甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂。片剂包括与适于生产片剂的无毒的、药物学可接受的赋形剂相混合的活性成分。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包衣或用已知的技术包衣以延缓在胃肠道的崩解与吸收，从而在更长时间内提供持续的作用。例如，可以使用延时材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。所述片剂还可包衣以形成渗透性控释治疗片剂。

[0293] 用于口服应用的组合物也可采用其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土相混合的硬明胶胶囊的形式，或采用其中活性成分与水或油性介质如花生油、液体石蜡或橄榄油相混合的软明胶胶囊的形式。

[0294] 水混悬剂包含活性物质与适于生产水混悬剂的赋形剂的混合物。该赋形剂为助悬剂，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶及阿拉伯胶；分散剂或润湿剂可为天然存在的磷脂如卵磷脂、或烯化氧和脂肪酸的缩合产物如聚氧乙烯硬脂酸酯、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物如氧化十七烯十六醇、环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯、或者环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。所述水混悬剂还可包含一种或更多种防腐剂如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或更多种着色剂、一种或更多种调味剂以及一种或更多种甜味剂例如蔗糖、或糖精。

[0295] 油混悬剂可通过将该活性成分混悬在植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中，或在矿物油如液体石蜡中而配制。该油混悬剂可以包含增稠剂如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。可以加入如上述的甜味剂以及调味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂如抗坏血酸加以保存。

[0296] 适于通过加入水而制备水混悬剂的可分散的粉末和颗粒包括活性成分与分散剂或润湿剂、助悬剂以及一种或多种防腐剂的混合物。适当的分散剂或润湿剂及助悬剂的实例如上所述。也可加入其它的赋形剂如甜味剂、调味剂和着色剂。

[0297] 本发明的药物组合物也可以是水包油型乳剂的形式。油相可以是植物油如橄榄油或花生油、或矿物油如液体石蜡、或它们的混合物。适当的乳化剂可以是天然存在的树胶如阿拉伯胶或黄蓍胶、天然存在的磷脂如大豆卵磷脂、和源自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯如脱水山梨醇单油酸酯、以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。该乳剂还可包含甜味剂和调味剂。

[0298] 糖浆和酏剂可以用甜味剂如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖来配制。该组合物还可包含缓和剂、防腐剂、调味剂以及着色剂。

[0299] 该药物组合物可以是无菌可注射水混悬液或油混悬液的形式。该混悬液可以应用上述适宜的分散剂或润湿剂及助悬剂根据已知的技术来配制。该无菌可注射制剂可以是在无毒、肠胃外给药可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或混悬液，如在1，3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受的赋形剂和溶剂包括水、林格氏(Ringer’s)溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无毒的不挥发油也常规地用作溶剂或混悬介质。为此，也可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的甘油单酸酯或二酸酯。此外，脂肪酸如油酸也可用于可注射组合物的制备中。

[0300] 本发明的化合物还可以栓剂的形式用于直肠给药所述药物。这些组合物可以通过将该药物与适当的无刺激性的赋形剂相混合而制备，该赋形剂在常温下是固体但在直肠温度下是液体，并且因此将在直肠中融化并释放药物。这种材料为可可脂和聚乙二醇。

[0301] 对于局部应用而言，可采用包含本发明化合物的乳膏、软膏、凝胶、溶液或混悬液等。(对于本申请而言，局部施用应包括漱口液和含漱剂。)

[0302] 本发明的化合物还可以脂质体的形式给药。正如本领域所熟知，脂质体通常源自磷脂或其它脂质物质。脂质体可由分散于水介质中的单层或多层水化的液晶形成。任何能形成脂质体的无毒、生理学可接受并可代谢的脂质均可使用。除本发明的化合物外，脂质体形式的所述组合物还可包含稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂质为天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱。制备脂质体的方法为本领域所公知。

[0303] 本发明的药物组合物和方法可进一步包含通常用于治疗上述病理状况的如上所述的其它有治疗活性的化合物。根据常规的药物学原则，本领域普通技术人员可选择用于联合治疗的适当药物。治疗药物的联合使用可使协同作用以实施上述各种疾病的治疗或预防。使用该方法可以较低剂量的各种药物达到治疗效果，从而减少不利副作用的可能性。

[0304] 其它治疗药物的实例包括：

[0305] 酪氨酸激酶抑制剂，如伊玛替尼(GlivecTM)、和gefitinib(IressaTM)等；环孢菌素类(如环孢菌素A)，CTLA4-Ig，抗体如ICAM-3、抗-IL-2受体(Anti-Tac)、抗-CD45RB、抗-CD2、抗-CD3(OKT-3)、抗-CD4、抗-CD80、抗-CD86，阻断CD40和gp39相互作用的药物如CD40和/或gp39特异性抗体(即CD154)，由CD40和gp39构建的融合蛋白

[0306] (CD401g和CD8gp39)，NF-κ B功能的抑制剂如核易位抑制剂如脱氧精胍菌素(DSG)，胆固醇生合成抑制剂如HMG CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀和辛伐他汀)，非甾体抗炎药(NSAID)如布洛芬、阿斯匹林、对乙酰氨基酚和环氧化酶抑制剂如罗非考昔，甾体化合物如泼尼松龙或地塞米松，金化合物，抗增殖剂如甲氨喋呤、FK506(他克莫司，Prograf)、麦考酚酸吗乙酯，抗肿瘤剂如硫唑嘌呤、VP-16、依托泊苷、氟达拉滨、顺铂、多柔比星、阿霉素、安吖啶、喜树碱、阿糖胞苷、吉西他滨、氟脱氧尿苷、美法仑和环磷酰胺，TNF-α抑制剂如替尼达普、抗-TNF抗体或可溶性TNF受体，以及雷帕霉素(西罗莫司或Rapamune)或它们的衍生物。

[0307] 当其它治疗药物与本发明化合物联合应用时，可以按照如PhysicianDeskReference(PDR)上所记载的量使用或者由本领域普通技术人员确定其用量。

[0308] 本发明的药物组合物和方法可进一步包含如上所述的其它已知为药物外排系统或药物解毒和排泄系统的抑制剂或底物的治疗活性化合物。这种系统包括P-糖蛋白、与多药耐受相关的蛋白、肺耐药蛋白和谷胱甘肽S-转移酶的同工酶α、μ、π、σ、θ、ζ、κ。与已知可抑制或降低这些系统的活性的药物联合给药可通过增加治疗亚无在细胞中的量而提高本发明所述化合物的效力。使用该方法可以较低的剂量达到治疗效果，从而减少不利副作用的可能性。这些系统的抑制剂或底物的实例包括：维拉帕米、丙磺舒、双嘧达莫、依他尼酸、吲哚美辛、柳氮磺吡啶、丁基硫堇亚胺(buthionine sulfoximine)、环孢菌素A和他莫西芬。

[0309] 本说明书通篇使用的单词“包括/包含”或其变体应理解为是指包括所述元素、整数或步骤，或是一组元素、整数或步骤，但并不排斥其它的元素、整数或步骤，或其它的一组元素、整数或步骤。

[0310] 本说明书中提及的所有出版物并入此处作为参考。

[0311] 本说明书中所包括的任何对文献、法案、材料、装置、论文等的讨论仅仅是为了给本发明提供前后联系。这并非是承认其中某些或全部事物构成此专利的部分现有技术的基础，也并非承认它们是本申请各项权利要求的优先权日之前已存在于澳大利亚的与本发明相关的领域的公知常识。

[0312] 为更好的理解本发明的实质，将参照下列非限制性的实施例来描述本发明优选的形式。

[0313] 实施例

[0314] 材料和方法：

[0315] 化合物的合成

[0316] 通常通过始于二卤杂环的2步反应来制备化合物。

[0317] 第一步为亲核芳香取代反应以生成单氨基一单卤中间体。

[0318] 所述亲核芳香取代反应通常通过将伯胺或仲胺加入到在如乙醇、异丙醇、叔丁醇、1，4-二氧六环、THF、DMF、乙氧基乙醇、甲苯或二甲苯中的二卤代的杂环化合物内而进行。该反应通常在过量胺或非亲核性碱如三乙胺或二异丙基乙胺或无机碱如碳酸钾或碳酸钠存在下升温进行。

[0319] 或者，也可以通过过渡金属催化的胺化反应引入所述氨基取代基。该转化典型的催化剂包括Pb(OAc)2/P(t-Bu)3、Pb2(dba)3/BINAP和Pb(OAc)2/BINAP。这些反应通常在溶剂如甲苯或1，4-二氧六环中于碱如碳酸铯或叔丁醇钠或钾存在下、在室温到回流温度范围内的温度下进行。

[0320] 在合成这些化合物的第一步中所用的胺可以通过购买获得，或用本领域所熟知的方法制备。尤其有利的是可以通过还原肟来制备的α-烷基苄胺。典型的还原剂包括氢化铝锂、钯碳催化剂存在下的氢气、盐酸存在下的锌、在Lewis酸如TiCl3、ZrCl4、NiCl2和MoO3存在下的硼氢化钠或与Amberlyst H15离子交换树脂及LiCl联合的硼氢化钠。

[0321] α-烷基苄胺也可由相应的酮的还原性胺化反应来制备。尽管也可使用催化条件(HCO2NH4、[(CH3)5C5RhCl2]2)或其它的方法(如NH4OAc、Na(CN)BH3)，但Leuckart-Wallach反应为实施这种转化的经典方法。

[0322] α-烷基苄胺也可以由相应的α-烷基苄醇来制备。该方法包括羟基的衍生化为甲磺酸酯或甲苯磺酸酯，以及与用常规的合成方法就能转化为伯胺的氮亲核试剂如邻苯二甲基亚酰胺或叠氮化物的取代反应，或者与合适的氮亲核试剂在Mitsunobu反应类似的条件下将羟基取代。α-烷基苄醇可通过用还原剂如硼氢化钠在如甲醇的溶剂中还原相应的酮而制备。或者，α-烷基苄醇可通过烷基金属类(如格氏试剂)与苯甲醛衍生物加成而获得，上述反应通常在室温或低于室温下，在溶剂如四氢呋喃中进行。

[0323] 高光学纯度的α-烷基苄胺可用上述方法由手性的α-烷基苄醇制备。所述的手性α-烷基苄醇可由相应的酮的手性还原而获得。手性还原方法目前在有机化学领域中众所周知，包括酶促法、不对称氢化法以及手性噁唑硼烷法。

[0324] 合成的第二步通常涉及单胺-单氯中间体与适当地官能团化的偶联剂(coupling partner)的钯介导的偶联反应。常用的偶联剂为硼酸或酯(Suzuki偶联反应：参看例如Miyanura，N.和Suzuki，Chem Rev.1995，952457)、锡烷(Stille偶联反应：参看例如Stille，J.K.，Angew.Chem.，Int.Ed.Engl.，1986，25，508)、格氏试剂(Kumada偶联反应：Kumada，M.；Tamao，K.；Sumitani，K.Org.Synth.1988，Coll.Vol.6，407.)或者有机锌类(Negishi偶联：Negishi，E.；J.Organomet.Chem.2002，653，34)。

[0325] Suzuki偶联为优选的偶联方法且通常在溶剂如DME、THF、DMF、乙醇、丙醇、甲苯或1，4-二氧六环中于碱如碳酸钾、氢氧化锂、碳酸铯、氢氧化钠、氟化钾、磷酸钾存在下进行。
该反应可在升温下进行且所使用的钯催化剂可选自：Pd(PPh3)4、Pd(OAc)2、[PdCl2(dPPf)]、Pd2(dba)3/P(t-Bu)3。

[0326] 由该反应程序形成的产物可用本领域技术人员熟知的技术进一步衍生化。或者，所述单氨基-单卤中间体的衍生化反应可在卤素取代基的取代反应前进行。所述衍生化反应通常涉及最初于胺基上的官能团以及使用本领域技术人员所熟知的方法。

[0327] 或者所述制备程序可颠倒，从钯介导的交叉偶联反应开始制备单卤杂环。之后利用上述方法实施卤素取代基的胺取代。

[0328] 为了使本发明的本质能被更清楚地理解，将参考下列非限定性的实施例来描述其优选的方式。

[0329] 实施例1

[0330] 1-[4-(三氟甲基)苯基]丁-1-醇

[0331]

[0332] N2气氛下，将2M丙基氯化镁在乙醚中的溶液(4ml，8mmol)加入至冷却至0℃的乙醛(1.14g，6.6mmol)的无水四氢呋喃(10ml)溶液中。将混合物于室温下搅拌16小时，之后加入饱和氯化铵溶液。将产物萃取至乙酸乙酯中，乙酸乙酯层经干燥浓缩得到纯品(1.4g，98％)。

[0333] 1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)，1.41(m，2H，CH2)，1.75(m，CH2，2H)，4.77(brs，1H，CH)，7.44-7.62(m，4H，ArH)

[0334] 实施例2

[0335] 1-(1-叠氮基丁基)-4-(三氟甲基）苯

[0336]

[0337] N2气氛下，将冷却至-10℃的1-[4-(三氟甲基)苯基]丁-1-醇(1.4g，6.4mmol)和二苯基磷酰基叠氮化物(2.8ml，12.8mmol)的THF溶液(6ml)用DBU(1.9ml，12.8mmol)处理。所得溶液于室温搅拌20小时，之后用乙醚和水的混合液稀释。将有机相干燥浓缩，以己烷∶乙酸乙酯(10∶1)为洗脱剂用柱色谱纯化残余物获得纯的叠氮化物(0.85g，54％)。1

[0338] H-NMR(CDCl3)δ0.94(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)，1.37(m，2H，CH2)，1.75(m，2H，CH2)，4.50(t，1H，CH)，7.42(d，J＝7.8Hz，2H，ArH)，7.64(d，2H，J＝7.8Hz，ArH)。

[0339] 实施例3

[0340] 1-[4-(三氟甲基)苯基丁-1-胺

[0341]

[0342] 将乙酸乙酯溶液(6ml)与10％HCl(6ml)中的1-(1-叠氮基丁基)-4-(三氟甲基)苯(0.84g，3.5mmol)和三苯基膦(1.8g，6.9mmol)的混合物于室温搅拌64小时。收集水相，且有机相用10％的HCl(3×5ml)萃取。合并水相并用5M NaOH碱化，之后用乙酸乙酯(5×15ml)萃取。有机相经干燥浓缩得到纯的胺(0.4g，54％)。

[0343] 1H-NMR(CDCl3)δ0.91(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.31(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，3.97(m，1H，CH)，7.43(AA’XX’，2H，ArH)，7.58(AA’XX’，2H，ArH)。

[0344] 实施例4

[0345] 3-氟-N-甲氧基N-甲基苯甲酰胺

[0346]

[0347] 向3-氟苯甲酸(140mg，1mmol)和N，O-二甲基盐酸羟胺(107mg，1.1mmol)在二氯甲烷(2.5ml)的混悬液中加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二酰亚胺盐酸盐(EDC)(211mg，1.1mmol)，并将混合物于室温下搅拌75小时。减压下除去溶剂，残余物用乙酸乙酯-己烷(4∶6)色谱分离得到纯的产品(130mg，71％)。

[0348] 1H-NMR(CDCl3)δ3.36(s，3H，N-Me)，3.55(s，3H，N-OMe)，7.1-7.2(m，1H，ArH)，7.3-7.5(m，3H，Ar)。

[0349] 实施例5

[0350] 1-(3-氟苯基）丁-1-酮

[0351]

[0352] N2气氛下，向冷却至-10℃的3-氟-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(130mg，0.71mmol)在无水四氢呋喃(2ml)的溶液中加入丙基氯化镁(532μl，2M乙醚溶液，
1.1mmol)。将该溶液于-10℃搅拌1小时，并于室温下搅拌75分钟。将溶液倾倒至饱和氯化铵水溶液中，并将产品萃取至乙酸乙酯中(3×25ml)。有机相经合并、用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并浓缩得浅黄色油状物，用乙酸乙酯-己烷(1∶9)色谱纯化分离得到纯品(78mg，
66％)。
1

[0353] H-NMR(CDCl3)δ1.01(t，3H，J ＝ 7.4Hz，Me)，1.77(m，2H，CH2CH3)，2.93(t，J ＝7.2Hz，2H，COCH2)，7.15-7.30(m，1H，Ar)，7.3 5-7.50(m，1H，Ar)，7.60-7.70(m，1H，Ar)，
7.70-7.80(m，1H，Ar)。

[0354] 实施例6

[0355] 1-(5-甲基吡啶基-3-基)丁-1-胺

[0356]

[0357] N2气氛下，向1-(5-甲基吡啶基-3-基)丁-1-酮(800mg，4.9mmol)和甲酸铵(1.55g，24.5mmol)的甲醇(5ml)溶液中加入(五甲基环戊二烯基)二氯化铑(III)二聚物(45mg，0.074mmol)。将该溶液加热回流8小时，之后冷却至室温并加入2M盐酸酸化至pH～
2。将混合物用二氯甲烷(3×15mL)洗涤，并加入固体KOH将水相碱化为pH～12。用二氯甲烷(3×15mL)萃取水相并用盐水洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩得纯品(620mg，
77％)。

[0358] 1H-NMR(CDCl3)δ0.91(t，3H，J＝7.4Hz，CH2CH2CH3)，1.14-1.82(m，6H，2×CH2，NH)，2.33(s，3H，CH3)，3.91(t，1H，J＝6.8Hz，CHNH2)，7.47(s，1H，ArH)，8.32(brs，2H，Ar)。

[0359] 实施例7

[0360] (1R)-1-(4-氟苯基)丁-1-醇

[0361]

[0362] N2气氛下，在5分钟内将二乙基苯胺-硼烷复合物(2.4ml，13.4mmol)滴加至冷却至0℃的(1S，2R)-1-氨基茚满-2-醇(201mg，1.4mmol)的无水THF(20ml)溶液中。40分钟后，在90分钟内逐滴加入甲酮的THF(40ml)溶液。然后除去冷却浴，并将溶液于室温下搅拌5小时。加入丙酮(6ml)然后在减压除去溶剂前将所得溶液于室温下搅拌60分钟。将所得残余物溶于甲苯(100ml)中，并依次用1M H2SO4(4×50ml)、H2O(2×50ml)以及盐水(50ml)洗涤，然后干燥(Na2SO4)。

[0363] 1H-NMR(CDCl3)δ0.93(t，3H，J＝7.2Hz CH2CH2CH3)，1.17-1.51(m，2H，CH2CH2CH3)，1.58-1.82(m，2H，CH2CH2CH3)，4.66(t，J ＝ 6.6Hz，CHNH2)，6.98-7.07(m，2H，ArH)，
7.26-7.34(m，2H，ArH)。

[0364] 实施例8

[0365] (1R)-1-吡啶3-基丁-1-醇

[0366]

[0367] 向S-(-)-α，α-二苯基-2-吡咯烷甲醇(500mg，2mmol)和硼酸三甲酯(0.27ml，2.4mmol)的THF(20ml)溶液中加入硼烷-二甲硫复合物(20ml，2M的THF溶液，40mmol)。
将混合物冷却至0℃，并在4小时内逐滴加入1-吡啶-3-基丁-1-酮。将溶液于室温下搅拌过夜，然后用2M HCl(175ml)处理，并继续搅拌4小时。减压下除去挥发性物质并将所得不透明溶液用氨水碱化至pH 11。将产品萃取进入乙酸乙酯(3×100ml)中、用盐水(100ml)洗涤合并的有机相并干燥(Na2SO4)。减压下除去溶剂得到约3g产物。

[0368] 1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t，3H，J＝7.4Hz，CH2CH2CH3)，1.20-1.54(m，2H，CH2CH2CH3)，1.60-1.91(m，2H，CH2CH2CH3)，2.64(brs，1H，OH)，4.73(t，1H，J ＝ 6.6Hz，CHOH)，
7.24-7.30(m，1H，Ar)，7.68-7.74(m，1H，Ar)，8.47-8.52(m，2H，Ar)。

[0369] 实施例9

[0370] 3-氨基-3-苯基丙-1-醇

[0371]

[0372] N2气氛下，20分钟内向冷却至0℃的3-氨基-3-苯基丙酸(2.0g，12.1mmol)的无水四氢呋喃(45ml)混悬液中分批加入固体LiAlH4(920ml，24.2mmol)。于室温下持续搅拌24小时，之后搅拌下加入固体Na2SO4·10H2O直至出现大量的白色沉淀。将有机层用乙醚稀释、用Celite 过滤并真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯(50ml)并用1N HCl(3×40ml)萃取。合并水层并用5M NaOH碱化至pH～12。将水相用乙酸乙酯(3×50ml)萃取，合并的有机相经干燥(Na2SO4)和真空浓缩分离得到产物，其未进一步纯化而直接应用(0.9mg，
49％)。
1

[0373] H-NMR(CDCl3)δ1.84-1.94(m，2H，CH2CH2OH)，2.68(brs，1H，NH2)，3.79(t，2H，J＝5.8Hz，CH2CH2OH)，4.08-4.15(m，1H，CHNH2)，4.77(q，1H，CH)，7.21-7.38(m，5H，ArH)。

[0374] 实施例10

[0375] 6-氯-N-[1-(4-甲基苯基)丁基吡嗪-2-胺

[0376]

[0377] 向1-[4-(三氟甲基)苯基]丁-1-胺(0.40g，1.9mmol)和2，6-二氯吡嗪(0.55g，3.7mmol)的1，4-二氧六环(6ml)溶液中加入无水碳酸钾(0.39g，2.8mmol)。将所得混合物加热回流18小时。冷却至室温后，将混合物用乙酸乙酯和水稀释。有机相经收集、干燥和浓缩。残余物以乙酸乙酯-己烷(1∶1)为洗脱剂经快速色谱纯化获得纯品(0.03g，5％)。

[0378] 1H-NMR(CDCl3)δ0.95(t，3H，J＝7.4Hz，CH3)，1.39(m，2H，CH2)，1.81(m，2H，CH2)，4.77(q，1H，CH)，5.09(brd，1H，NH)，7.42-7.62(m，5H，ArH)，7.80(s，1H，吡嗪H)。

[0379] 实施例11

[0380] N-(3-{1-[(6-氯吡嗪-2-基)氨基]丁基}苯基乙酰胺

[0381]

[0382] 向冷却至0℃的N-[1-(3-氨基苯基)丁基]-6-氯吡嗪-2-胺(0.10g，0.36mmol)和三乙胺(100μL，0.72mmol)的二氯甲烷(3ml)的搅拌下的溶液中加入乙酰氯(31μL，0.43mmol)，将所得混合物于室温下搅拌18小时，然后用二氯甲烷(10ml)稀释并用水(10ml)和盐水(10ml)洗涤。有机相经收集、干燥和浓缩，残余物以乙酸乙酯-己烷(1∶1)为洗脱剂经快速色谱纯化获得纯品(94mg，82％)。

[0383] 1H-NMR(CDCl3)δ0.93(t，3H，J＝7.4Hz，Me)，1.28-1.43(m，2H，CH2)，1.76-1.85(m，2H，CH2)，2.16(s，3H，COCH3)，4.48-4.59(m，1H，CHCH2CH2CH3)5.15(br d，J＝6.8Hz，1H，NH)，
7.06(d，1H，J＝74Hz，Ar)7.23-7.33(m，3H，Ar)，7.54(s，1H，CONH)，7.60(s，1H，吡嗪H)，
7.77(s，1H，吡嗪H)。

[0384] 实施例12

[0385] N-[2-甲氧基-4-(6-{[(1S)-1-吡啶-3-基丁基]氨基}吡嗪-2-基}-N’-乙基脲

[0386]

[0387] 氮气氛下，用2M的碳酸钠水溶液(0.15mL，0.3mmol)处理6-氯-N-[(1S)-1-吡啶-3-基丁基]吡嗪-2-胺(53g，0.2mmol)、4-{[(乙基氨基)羰基]氨基}-3-甲氧基苯基硼酸频哪醇二酯(69mg，0.23mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(23mg，0.02mmol)在甲苯-正丙醇(2.6ml，3∶1)中的混合物。将所得的混合物剧烈搅拌的同时于100℃下加热22小时。冷却后马上加入乙酸乙酯(10ml)、用H2O(6×10ml)和盐水(10ml)洗涤混合物并干燥(Na2SO4)。真空除去溶剂得到粗品，粗品经柱色谱以二氯甲烷-甲醇-氨水(93∶7∶1)为洗脱剂得到产物(60mg)。

[0388] 1H-NMR(CDCl3)δ0.98(t，3H，J ＝ 7.4Hz，CH3)，1.14(t，3H，J ＝ 7.2Hz，CH3)，1.36-1.52(m，2H，CH2)，1.78-1.98(m，2H，CH2)，2.27(s，3H，CH3)，3.23-3.37(m，2H，CH2)，4.84-4.94(m，2H，CH，NHCONH)，5.19(d，1H，J ＝ 6.2Hz，CHNH)，6.31(s，1H，ArNH)，
7.24-7.30(m，1H，ArH)，7.55-7.73(m，4H，ArH)，7.75(s，1H，吡嗪H)，8.21(s，1H，吡嗪H)，
8.49-8.52(m，1H，ArH)，8.69(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)。

[0389] 实施例13

[0390] 4-{[(乙氨基)羰基]氨基}-3-甲基苯基硼酸频哪醇二酯

[0391]

[0392] 将苯胺(500mg，2.7mmol)溶于吡啶(5mL)中并向该溶液中加入异氰酸乙酯(424μL，5.4mmol)。将所得溶液搅拌过夜，期间生成大量沉淀，过滤并真空干燥得到乙基脲(595mg，86％)。
1

[0393] H-NMR(d6-DMSO)δ1.05(t，3H，J＝7.4Hz，CH3)，2.15(s，3H，CH3)，3.09(dq，2H，J＝7.4，5.4Hz，CH2)，6.55(brt，1H，J＝5.4Hz，NH)，7.24(dd，1H，J ＝8.8，2.2Hz，Ar-H)，7.30(d，1H，J＝2.2Hz，Ar-H)，7.66(s，1H，NH)，7.82(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)。

[0394] 向溴化乙基脲(514mg，2mmol)、乙酸钾(784mg，8mmol)及双(频哪氧基)二硼(bis(pinacolato)diboron)(508mg，2mmol)在乙醇(10mL)及二氧六环(2mL)的混合物中的脱气悬浮液中加入二氯[1，1’-双(二苯基膦)二茂铁]合钯(II)二氯甲烷加合物(44mg，0.06mmol)。将该溶液加热回流2h，然后冷却至室温。减压除去溶剂并将残余物溶于二氯甲烷(60mL)中。用水(2×30mL)及盐水(30mL)洗涤、干燥并真空浓缩。残余物经色谱分离用乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗脱得到纯净的固体产物(351mg，58％)。
1

[0395] H-NMR(CDCl3)δ1.12(t，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.34(s，12H，CH3)，2.26(s，3H，CH3)，3.09(dq，2H，J ＝ 6.8，5.2Hz，CH2)，4.69(brt，1H，NH)，6.06(s，1H，NH)，7.49(d，1H，J ＝
7.8Hz，Ar-H)，7.67(m，2H，ArH)。

[0396] 实施例14

[0397] 5-溴-N-(1-苯基丁基)吡啶-3-胺

[0398]

[0399] 向3，5-二溴吡啶(0.4g，1.7mmol)、叔丁醇钠(227mg，3.6mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(145mg，0.09mmol)及外消旋BINAP(105mg，0.2mmol)在无水甲苯(10mL)中的脱气溶液中加入1-苯基丁-1-胺(0.2mL)。将混合物加热回流24h然后冷却至室温并用乙醚稀释、用盐水洗涤(3×30mL)。将该溶液干燥(Na2SO4)并浓缩，残余物经色谱用乙酸乙酯-己烷(40∶60)洗脱。从早期的部分得到纯净的产品97mg。

[0400] 1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t，3H，J ＝ 7.2Hz，CH3)，1.21-1.53(m，2H，CH2)，1.68-1.87(m，2H，CH2)，4.19-4.32(m，2H，CH 和 NH)，6.86(t，1H，J ＝ 2.0Hz，ArH)，
7.20-7.38(m，5H，ArH)，7.88(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)，7.92(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)。

[0401] 实施例15

[0402] 5-[4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基]-3-氯-6-甲基-1，2，4-三嗪

[0403]

[0404] 将3，5-二氯-6-甲基-1，2，4-三嗪(151mg，0.9mmol)、4-(苄氧基)-3-甲氧基苯硼酸(236g，0.9mmol)、四(三苯基膦)合钯(0)(55mg，0.05mmol)及磷酸三钾(249mg，1.2mmol)在二甲氧基乙烷(5mL)中的脱气溶液加热回流24h。冷却至室温后将溶液用CHCl3稀释并通过Celte 过滤。滤液经真空浓缩并将产物经柱色谱纯化用乙酸乙酯-己烷
(25∶75)洗脱得到产物(75mg，22％)。

[0405] 1H-NMR(CDCl3)δ0.88(s，3H，Ar-CH3)，3.98(s，3H，OCH3)，5.26(s，2H，CH2)，6.99(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，7.25-7.44(m，7H，ArH)。

[0406] 实施例16

[0407] 5-[4-(苄氧基)-3-甲氧基苯基]-6-甲基-N-(1-苯基丙基)-1，2，4-三嗪3-胺[0408]

[0409] 用二异丙胺(50μL，0.28mmol)及1-苯基丁-1-胺(46μL，0.28mmol)处理三嗪(50mg，0.14mmol)的乙氧基乙醇(2.5mL)溶液并将所得溶液于110℃加热3天。然后真空除去溶剂得到黄色残余物，经色谱分离使用乙酸乙酯-二氯甲烷(20∶80)洗脱得到浅黄色固体(60mg，90％)。

[0410] 1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t，3H，CH3)，1.21-1.53(m，2H，CH2)，1.78-1.97(m，2H，CH2)，0.62(s，3H，Ar-CH3)，3.89(s，3H，OCH3)，5.10(br q，1H，CH2)，5.22(s，2H，CH2)，5.65(brs，1H，NH)，6.87(d，1H，J＝9.2Hz，ArH)，7.12-7.44(m，12H，Ar-H)。

[0411] 实施例17

[0412] 2-氯-5-甲基-N-[(1S)-1-吡啶-3-基丁基]嘧啶-4-胺

[0413]

[0414] 向(1S)-1-吡啶-3-基丁-1-胺(600mg，4.0mmol)的乙醇(20mL)溶液中加入2，4-二氯-5-甲基嘧啶(717mg，4.4mmol)及二异丙基乙胺(1.4mL，8mmol)。将溶液加热回流
24h，然后减压除去溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯(30mL)中并用H2O(2×15mL)、盐水(15mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。真空浓缩后剩下的残余物经色谱分离使用乙酸乙酯-己烷(9∶1)洗脱得到预期的产品(370mg)。

[0415] 1H-NMR(CDCl3)δ0.96(t，3H，J ＝ 7.2Hz，CH3)，1.23-1.52(m，2H，CH2)，1.85-1.99(m，2H，CH2)，2.03(d，3H，J ＝0.8Hz，Ar-Me)，5.03(br d，1H，J ＝ 7.2Hz，NH)，
5.22-5.33(m，1H，CH)，7.24-7.30(m，1H，ArH)，7.65-7.71(m，1H，ArH)，7.81(d，1H，J ＝
0.8Hz，ArH)，8.51(dd，J＝5.6，1.4Hz，1H，ArH)，8.64(d，1H，1.8Hz，ArH)。

[0416] 实施例18

[0417] N-乙基-N′-[2-甲氧基-4-(5-甲基-4-{[(1S)-1-吡啶-3-基丁基]氨基}嘧啶2-基)苯基]脲

[0418]

[0419] 氮气下用2M碳酸钠水溶液(750μL，1.5mmol)处理2-氯-5-甲基-N-[(1S)-1-吡啶-3-基丁基]嘧啶-4-胺(277mg，1.0mmol)、4-{[(乙氨基)羰基]氨基}-3-甲氧基苯基硼酸频哪醇二酯(416mg，1.3mmol)、四(三苯基膦)合钯(0)(116mg，0.1mmol)在甲苯-正丙醇(12mL，3∶1)中的混合物。将所得混合物剧烈搅拌，同时于100℃加热17小时。冷却后立刻加入乙酸乙酯(25mL)并将混合物用H2O(6×15mL)、盐水(20mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。真空除去溶剂后得到粗品，经柱色谱纯化使用二氯甲烷-甲醇-氨水(93∶7∶1)洗脱得到产品(110mg，57％)。

[0420] 1H-NMR(CDCl3)δ0.99(t，3H，J ＝ 7.4Hz，CH3)，1.18(t，3H，J ＝ 7.2Hz，CH3)，1.33-1.60(m，2H，CH2)，1.82-2.02(m，2H，CH2)，2.11(s，3H，Ar-Me)，3.25-3.39(m，2H，CH2)，3.87(s，3H，OMe)，4.80-4.96(m，2H，2×NH)，5.26-5.36(m，1H，CH)，6.98(brs，1H，Ar-NHCONH)，7.22-7.28(m，1H，ArH)，7.67-7.72(m，2H，ArH)，7.83-7.88(m，1H，ArH)，
8.05(d，1H，J＝0.8Hz，ArH)，8.10(d，1H，J＝8.2Hz，ArH)，8.47(dd，1H，J＝6.6，1.8Hz，ArH)，8.69(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)。

[0421] 实施例19

[0422] 6-氯-N-(1-吡啶-3-基丁基)嘧啶-4-胺

[0423]

[0424] 向1-吡啶-3-基丁-1-胺(100mg，0.67mmol)的乙醇(4mL)溶液中加入4，6-二氯嘧啶(109mg，0.73mmol)及二异丙基乙胺(232μL，1.33mmol)。将该溶液搅拌3天，然后减压除去溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯(25mL)中并用H2O(3×15mL)、盐水(15mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。真空浓缩后剩下的残余物经色谱分离使用乙酸乙酯-己烷(4∶6～9∶1)洗脱得到预期的产品(28mg)。

[0425] 1H-NMR(CDCl3)δ0.96(t，3H，J ＝ 7.2Hz，CH3)，1.22-1.51(m，2H，CH2)，1.76-1.96(m，2H，CH2)，4.76(brs，1H，CH)，5.63(brs，1H，NH)，6.23(s，1H，ArH)，
7.26-7.32(m，1H，ArH)，7.59-7.65(m，1H，ArH)，8.33(s，1H，ArH)，8.53-8.56(m，1H，ArH)，
8.60(d，1H，J＝1.8Hz，ArH)。

[0426] 实施例20

[0427] 2-甲氧基-4-{6-[(1-吡啶-3-基丁基)氨基]嘧啶-4-基}苯酚

[0428]

[0429] 使用与实施例12中所述的相似的方法，用6-氯-N-(1-吡啶-3-基丁基)嘧啶-4-胺(24mg，0.09mmol)与4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯酚(27mg，0.11mmol)反应得到褐色泡沫状的预期产品(12mg)。

[0430] 1H-NMR(CDCl3)δ0.97(t，3H，J ＝ 7.2Hz，CH3)，1.32-1.55(m，2H，CH2)，1.83-1.95(m，2H，CH2)，3.94(s，3H，OMe)，4.87(br s，1H，CH)，5.43(br s，1H，NH)，6.50(s，
1H，ArH)，6.93(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.25-7.31(m，2H，ArH)，7.55(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)，
7.66-7.71(m，1H，ArH)，8.53(dd，1H，J＝4.9，1.6Hz，ArH)，8.58(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，
8.66(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)。

[0431] 筛选

[0432] 化合物稀释

[0433] 为了筛选，将化合物于96孔板内稀释为20μM的浓度。在试验之前将该孔板于37℃保温30分钟。

[0434] 癌细胞系的生长和维持

[0435] K562(慢性骨髓性白血病)、PC3(前列腺癌)和DU145(前列腺癌)是从American Type Culture Collection(ATCC)获得。K562于含有加有Glutamx的10％FBS的RPMI中生长，DU145细胞于加有10％FBS和Glutamx以及MEM非必需氨基酸的DMED中培养。PC3细胞于加有10％FBS和Glutamx以及MEM非必需氨基酸的F12K培养液中生长。所有细胞都在37℃、5％CO2条件下生长。

[0436] TEL：JAK细胞系的建立

[0437] 将涵盖TEL核苷酸1-487的编码区以寡核苷酸5TEL(5’-GGA GGATCC TGA TCT CTC TCG CTG TGA GAC-3’)和3TEL(5’-AGGC GTCGAC TTC TTC TTC ATG GTT CTG-3’)以及U937mRNA作为模板通过聚合酶链式反应(PCR)进行扩增。将BamHI位点引入5TEL引物中，Sal I位点结合到3TEL引物中。以Taq DNA聚合酶(Gibco/BRL)和U937mRNA作为模板产生包含JAK2(核苷酸2994-3914；JAK2F5’-ACGC GTC GAC GGT GCC TTT GAA GAC CGG GAT-3’；JAK2R5’-ATA GTT TAG CGG CCG CTC AGA ATG AAG GTC ATT T-3’)和JAK3(核苷酸2520-3469；JAK3F 5’-GAA GTC GAC TAT GCC TGC CAAGAC CCC ACG ATC TT-3’；JAK3R5’-GGA TCT AGA CTA TGA AAAGGA CAG GGA GTG GTG TTT-3’)的激酶域。将Sal I位点结合到JAK2和JAK3的正向引物中，将Not I位点结合到JAK2反向引物中并将Xba I位点结合到JAK3的反向引物中。

[0438] 通过以下方法产生TEL/JaK2融合：以BamH I/SalI对TELPCR产物进行酶切、以Sal I/Not I对JAK2 PCR产物进行酶切接着连接和亚克隆到以BamH I-Not I(pTELJAK2)进行酶切的哺乳动物表达载体pTRE2(Clontech)中。对于经JAK3 Sal I/Not I酶切的激酶域而言，PCR产物与经BamH I/SaI酶切的TEL产物连接，之后连接到经BamH I/Not I酶切的pTRE2(pTELJAK3)上。

[0439] 将带有去掉pTEF的(pTET-off)质粒(Clontech)的生长因子依赖性小鼠髓样单核细胞系BaF3用pTELJAK2或pTELJAK3进行转染并选择细胞用于独立(factor
independent)生长。BaF3野生型细胞在DMEM10％FCS、10％WEHI 3B调节的培养基中培养。BaF3TEL/JAK细胞在含DMEM10％Tet-系统接受的FBS培养基(未经WEHI3B调节的培养基)中培养。

[0440] 细胞试验按以下方法进行：

[0441] 从培养物中收获细胞以制备细胞悬液。(本试验中应用的细胞应处于对数期晚期并具有高生存力)。细胞在恰当的培养基中稀释至1.1×最终浓度(从50000个细胞/ml到200,000个细胞/ml，取决于不同的细胞系)。

[0442] 将待测化合物(10μl，10×最终浓度)加入至平底96-孔板中。加入细胞悬液(每孔90μl)，将板于37℃、5％CO2下温育40小时。加入MTT(每孔20μl，5mg/mL的PBS液)并将板返回温育箱中继续温育6小时。加入裂解缓冲液(每孔100μl，10％SDS，0.01N HCl)并将板于温育箱中保存过夜。然后于590nm读板。

[0443] 微管蛋白试验

[0444] 通过在恒温分光光度计中在37℃下的比色杯中温育微管蛋白并于340nm测定吸光度随时间的变化，从而进行微管组装的浊度分析试验。微管蛋白在0℃与各待测化合物温育并在加热至37℃前通过加入lmMGTP引发聚合。

[0445] 结果

[0446] 表1和表2中显示了一系列化合物的活性。在20μM的浓度具有抑制高于50％细胞生长的能力的化合物标记为“+”；在20μM不能抑制50％的细胞生长的化合物标记为“-”。未测定的化合物标记为“NT”。同样，在50μM能抑制50％以上的微管蛋白聚合的化合物标记为“+”，在50μM不能抑制50％的微管蛋白聚合的化合物标记为“-”。未测定的化合物标记为“NT”。

[0447] 表1

[0448]

[0449]

[0450]

[0451]

[0452]

[0453]

[0454]

[0455]

[0456]

[0457]

[0458]

[0459]

[0460]

[0461]

[0462]

[0463]

[0464] 表2

[0465]

[0466] 本说明书通篇使用的单词“包括/包含”或其变体应理解为是指包括所述元素、整数或步骤，或是一组元素、整数或步骤，但并不排斥其它的元素、整数或步骤，或其它的一组元素、整数或步骤。

[0467] 本说明书中所包括的任何对文献、法案、材料、装置、论文等的讨论仅仅是为了给本发明提供前后联系。这并非是承认其中某些或全部事物构成此专利的部分现有技术的基础，也并非承认它们是本申请各项权利要求的优先权日之前已存在于任何地方的与本发明

标题	发布/更新时间	阅读量
JAK抑制剂-专利编号CN107531695B	2020-05-11	147
MAGL抑制剂-专利编号CN110267963A	2020-05-11	388
MLKL抑制剂-专利编号CN110573509A	2020-05-11	424
IDO抑制剂-专利编号CN110218182A	2020-05-12	320
腐蚀抑制剂-专利编号CN110832037A	2020-05-11	724
BACE1抑制剂-专利编号CN107108652B	2020-05-13	424
RUNX抑制剂-专利编号CN109789158A	2020-05-13	330
MAGL抑制剂-专利编号CN110267962A	2020-05-12	339
BACE1抑制剂-专利编号CN106795177B	2020-05-13	378
MAGL抑制剂-专利编号CN110248947A	2020-05-12	821

微管蛋白抑制剂

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