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包被的种子和制造包被种子的方法

阅读：750发布：2021-03-02

IPRDB可以提供包被的种子和制造包被种子的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文提供的种子包被物和包被的种子包含至少一种杀真菌剂和至少一种VAM真菌增强成分。由于抑制或消除了不想要的真菌，以及或者增强了VAM真菌的生长、或者缺乏了对VAM真菌的有害的杀真菌剂效应，包被的种子表现出增强的生长。，下面是包被的种子和制造包被种子的方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.包被的种子，包含：

(a)种子；

(b)包被物，含有至少一种杀真菌剂和至少一种选自异黄酮和异类黄酮的化合物。

2.权利要求1的包被的种子，其中所述化合物选自桔皮素、芒柄花素、碱金属芒柄花素酸盐，及其混合物。

3.权利要求1的包被的种子，其中所述至少一种杀真菌剂选自下列FRAC组：苯并咪唑氨基甲酸甲酯类(MBC)，二甲酰亚胺类，脱甲基化抑制剂类(DMI)(SBI：I类)，苯基酰胺类(PA)，胺类(SBI： II类)，硫代磷酸酯类和二噻茂烷类，甲酰胺类，羟基-(2-氨基-)嘧啶类，苯胺基嘧啶类(AP)，N-苯基氨基甲酸酯类，外部醌类抑制剂(QoI)，苯基吡咯类，喹啉类，芳香族类碳氢化合物(AH)，杂芳基化合物类I，肉桂酸类，黑色素生物合成抑制剂类-还原酶(MBI-R)，黑色素生物合成抑制剂类-脱水酶(MBI-D)，羟基苯胺类(SBI：III类)，羟基苯胺类(SBI：IV类)，苯基脲类，内部醌类抑制剂(QiI)，苯甲酰胺类，抗生素类，氰基乙酰胺-肟类，氨基甲酸酯类，二硝基苯基巴豆酸酯类，嘧啶酮-腙类，2，6-二硝基苯胺类，有机锡化合物，羧酸类，杂芳基化合物类II，膦酸酯类，邻氨甲酰苯甲酸类，苯并三嗪类，苯-氨磺酰类，哒嗪酮类，噻吩-甲酰胺类，嘧啶酰胺类，CAA杀真菌剂类(羧酸酰胺类)，四环素，硫代氨基甲酸酯，苯甲酰胺类，FRAC-编码P：宿主植物防御诱导物，FRAC-编码U：未分类的物质，FRAC-编码M：多位点接触物质，和FRAC-编码N：不分类的物质。

4.权利要求1的包被的种子，其中所述至少一种杀真菌剂选自下列FRAC化学组或类别：苯并咪唑类，托布津类，二甲酰亚胺类，咪唑类，哌嗪类，吡啶类，嘧啶类，三唑类，酰基丙氨酸类，噁唑烷酮类，丁内酯类，吗啉类，哌啶类，spiroketalamines，硫代磷酸酯类，二噻茂烷类，苯甲酰胺类，呋喃甲酰胺类，氧硫杂环己烯甲酰胺类，噻唑甲酰胺类，吡唑甲酰胺类，吡啶甲酰胺类，羟基-(2-氨基-)嘧啶类，苯胺基嘧啶类(AP)，N-苯基氨基甲酸酯类，甲氧基丙烯酸酯类，甲氧基氨基甲酸酯类，肟基乙酸酯类，肟基乙酰胺类，恶唑烷二酮类，二氢二恶嗪类，咪唑啉酮类，苯甲基氨基甲酸酯类，苯基吡咯类，喹啉类，芳香族类碳氢化合物(AH)，1，2，4-噻二唑，肉桂酸类，异苯并呋喃酮，吡咯并喹啉酮，三唑苯并噻唑，环丙甲酰胺，甲酰胺，丙酰胺，羟基苯胺类，硫代氨基甲酸酯类，烯丙胺类，肽酰嘧啶核苷，苯基脲类，氰基咪唑，氨磺酰三唑类，甲苯甲酰胺类，烯醇吡喃糖醛酸，吡喃己糖基化合物，链霉素，硫酸链霉素，有效霉素，氰基乙酰胺-肟类，氨基甲酸酯类，二硝基苯基巴豆酸酯类，嘧啶酮-腙类，2，6-二硝基苯胺类，三苯基锡化合物类，羧酸类，异噁唑类，异噻唑酮类，膦酸乙基酯类，亚磷酸及其盐，邻氨甲酰苯甲酸类，苯并三嗪类，苯-氨磺酰类，哒嗪酮类，噻吩-甲酰胺类，嘧啶酰胺类，肉桂酸酰胺类，缬氨酰胺氨基甲酸酯类，扁桃酸酰胺类，四环素，硫代氨基甲酸酯，acylpicolides，苯并噻二唑BTH，苯并异噻唑，噻二唑-氨基甲酰胺类，harpin蛋白，噻唑氨基甲酰胺，苯基-乙酰胺，喹唑啉酮，二苯酮，铜盐，硫，二硫氨基甲酸酯及相关化合物，邻苯二酰亚胺，氯代腈(邻苯二甲腈)，磺酰胺类，胍类，三嗪类，醌类(蒽醌类)，矿物油，有机油和碳酸氢钾。

5.权利要求1的包被的种子，其中所述至少一种杀真菌剂选自苯菌灵、2-(硫氰酸甲基巯基)-1，3-苯并噻唑、多菌灵、呋喃基苯并咪唑、噻唑苯并咪唑、托布津、甲基托布津、乙菌利、异菌脲、腐霉利、乙烯菌核利、抑霉唑、恶咪唑、稻瘟酯、咪鲜安、氟菌唑、嗪氨灵、啶斑肟、氯苯嘧啶醇、氟苯嘧啶醇、戊环唑、双苯三唑醇、糠菌唑、环唑醇、苯醚甲环唑、烯唑醇、氟环唑、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、己唑醇、酰胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、硅氟唑、戊唑醇、氟醚唑、三唑酮、三唑醇、灭菌唑、苯霜灵、呋霜灵、甲霜灵、甲霜灵-M(精甲霜灵)、恶霜灵、甲呋酰胺、 aldimorph、吗菌灵、丁苯吗啉、十三吗啉、苯锈啶、粉病灵、螺环菌胺、敌瘟磷、异稻瘟净、(IBP)、吡菌磷、稻瘟灵、麦锈灵、氟酰胺、灭锈胺、甲呋酰胺、萎锈灵、氧化萎锈灵、噻呋酰胺、呋吡菌胺、吡噻菌胺、啶酰菌胺、乙嘧酚磺酸酯、二甲嘧酚、乙嘧酚、嘧菌环胺、嘧菌胺、嘧霉胺、乙霉威、嘧菌酯、strobilurins、enestrobin、啶氧菌酯、唑菌胺酯、醚菌酯、肟菌酯、嘧菌胺、苯氧菌胺、醚菌胺、恶唑酮菌、氟嘧菌酯、咪唑菌酮、pyribencarb、拌种咯、咯菌腈、喹氧灵、联苯、地茂散、氯硝胺、五氯硝基苯、(PCNB)、四氯硝基苯、(TCNB)、甲基立枯磷、土菌灵、氯唑灵、四氯苯酞、咯奎酮、三环唑、环丙酰菌胺、双氯氰菌胺、氰菌胺、环酰菌胺、稗草畏、萘替芬、特比萘芬、多氧霉素、戊菌隆、氰霜唑、吲唑磺菌胺、苯酰菌胺、灭瘟素-S、春雷霉素、链霉素、硫酸链霉素、有效霉素、霜脲氰、3-碘-2-丙基丁基胺基甲酸酯、霜霉威、硫菌威、乐杀螨、消螨普、嘧菌腙、氟啶胺、薯瘟锡、三苯基氯化锡、毒菌锡、恶喹酸、恶霉灵、辛噻酮、三乙膦酸铝、亚磷酸及其盐、叶枯酞、唑菌嗪、磺菌胺、哒菌清、硅噻菌胺、氟嘧菌胺、烯酰吗啉、氟吗啉、苯噻菌胺、异丙菌胺、valiphenal、双炔酰菌胺、土霉素、磺菌威、氟吡菌胺、阿拉酸式苯-S-甲基、烯丙异噻唑、噻酰菌胺、异噻菌胺、噻唑菌胺、环氟菌胺、丙氧喹啉、苯菌酮、铜(不同的盐类)、硫、福美铁、代森锰锌、代森锰、代森联、丙森锌、福美双、代森锌、福美锌、克菌丹、敌菌丹、灭菌丹、百菌清、苯氟磺胺、甲苯磺菌胺、多果定、双胍辛、双胍辛胺、敌菌灵、二噻农、矿物油、有机油、碳酸氢钾、十三吗啉苯氨基嘧啶、抗生素、放线菌酮、灰黄霉素、二硝基康唑、嘧硫磷、稻瘟酯、5-氯-7-(4-甲基 -哌啶-1-基)-6-(2，4，6-三氟-苯基)-[1，2，4]三唑[1，5-a]嘧啶、2-丁氧基-6-碘 -3-丙基-苯并吡喃-4-酮、3-(3-溴-6-氟-2-甲基-吲哚-1-磺酰基)-[1，2，4]三唑-1-磺酸二甲基酰胺、代森钠、威百亩、聚氨基甲酸酯、棉隆、3-[5-(4- 氯-苯基)-2，3-二甲基-异噁唑烷-3-基]-吡啶、波尔多液、乙酸铜、氢氧化铜、王铜、碱式硫酸铜、硝基苯衍生物、敌螨通、nitrophthalisopropyl 苯基吡咯、硫磺、硫有机金属化合物、苯酞、甲基立枯磷、N-(2-{4-[3-(4- 氯-苯基)-丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基-苯基}-乙基)-2-甲烷磺酰氨基-3-甲基-丁酰胺、N-(2-{4-[3-(4-氯-苯基)-丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基-苯基}-乙基)-2-乙烷磺酰氨基-3-甲基-丁酰胺、3，4-二氯-异噻唑-5-羧酸(2-氰基- 苯基)-酰胺、Flubenthiavalicarb、3-(4-氯-苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基 -3-甲基-丁酰基氨基)-丙酸甲基酯、{2-氯-5-[1-(6-甲基-吡啶-2-基甲氧基亚氨基)-乙基]-苯甲基}-氨基甲酸甲酯、{2-氯-5-[I-(3-甲基-苯甲基氧基亚氨基)-乙基]-苯甲基}-氨基甲酸甲酯；下面分子式的六氯苯酰胺，其中X是CHF2或CH3，R1、R2彼此独立地是卤素、甲基或卤代甲基；烯肟菌酯、次磺酸衍生物、肉桂酰胺及其类似物例如氟酰菌胺酰胺杀真菌剂例如cyclofenamid或(Z)-N-[a-(环丙基甲氧基亚氨基)-2，3-二氟-6-(二氟甲氧基)苯甲基]-2-苯基乙酰胺、噻苯哒唑和氟菌唑。

6.权利要求1的包被的种子，其中所述包被物还含有杀虫剂，杀虫剂选自生物学/发酵产品，放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)，芽孢杆菌属(Bacillus)菌株，洋葱伯克霍尔德氏菌 (Burkholderia cepacia)，假单胞菌属(Pseudomonas)菌株，木霉属 (Trichoderma)菌株，链霉菌属(Streptomyces)菌株；氨基甲酸酯类，氯代烟酰基类；双酰肼类，新烟碱类，硝基胍类，有机磷酸酯类，噁二嗪衍生物，苯基吡唑酮类，吡唑酮类，除虫菊酯，吡咯类，合成的拟除虫菊酯类，硫杂烟碱类和三唑类。

7.权利要求1的包被的种子，其中所述杀真菌剂和所述化合物配制在一起施加。

8.权利要求1的包被的种子，其中所述杀真菌剂和所述化合物相继或同时施加。

9.权利要求1的包被的种子，其中所述化合物是异黄酮，所述异黄酮是选自芒柄花素酸钠和芒柄花素酸钾的碱金属芒柄花素酸盐。

10.生产包被的种子的方法，包括：

(a)提供种子；

(b)用至少一种杀真菌剂包被所述种子；以及

(c)用选自异黄酮和异类黄酮的至少一种化合物包被所述种子。

11.权利要求10的方法，其中所述化合物选自桔皮素、芒柄花素、碱金属芒柄花素酸盐，及其混合物。

12.权利要求10的方法，其中所述至少一种杀真菌剂选自下列 FRAC组：苯并咪唑氨基甲酸甲酯类(MBC)，二甲酰亚胺类，脱甲基化抑制剂类(DMI)(SBI：I类)，苯基酰胺类(PA)，胺类(SBI： II类)，硫代磷酸酯类和二噻茂烷类，甲酰胺类，羟基-(2-氨基-)嘧啶类，苯胺基嘧啶类(AP)，N-苯基氨基甲酸酯类，外部醌类抑制剂(QoI)，苯基吡咯类，喹啉类，芳香族类碳氢化合物(AH)，杂芳基化合物类I，肉桂酸类，黑色素生物合成抑制剂类-还原酶(MBI-R)，黑色素生物合成抑制剂类-脱水酶(MBI-D)，羟基苯胺类(SBI：III类)，羟基苯胺类(SBI：IV类)，苯基脲类，内部醌类抑制剂(QiI)，苯甲酰胺类，抗生素类，氰基乙酰胺-肟类，氨基甲酸酯类，二硝基苯基巴豆酸酯类，嘧啶酮-腙类，2，6-二硝基苯胺类，有机锡化合物，羧酸类，杂芳基化合物类II，膦酸酯类，邻氨甲酰苯甲酸类，苯并三嗪类，苯-氨磺酰类，哒嗪酮类，噻吩-甲酰胺类，嘧啶酰胺类，CAA杀真菌剂类(羧酸酰胺类)，四环素，硫代氨基甲酸酯，苯甲酰胺类，FRAC-编码P：宿主植物防御诱导物，FRAC-编码U：未分类的物质，FRAC-编码M：多位点接触物质，和FRAC-编码N：不分类的物质。

13.权利要求10的方法，其中所述至少一种杀真菌剂选自下列 FRAC化学组或类别：苯并咪唑类，托布津类，二甲酰亚胺类，咪唑类，哌嗪类，吡啶类，嘧啶类，三唑类，酰基丙氨酸类，噁唑烷酮类，丁内酯类，吗啉类，哌啶类，spiroketalamines，硫代磷酸酯类，二噻茂烷类，苯甲酰胺类，呋喃甲酰胺类，氧硫杂环己烯甲酰胺类，噻唑甲酰胺类，吡唑甲酰胺类，吡啶甲酰胺类，羟基-(2-氨基-)嘧啶类，苯胺基嘧啶类(AP)，N-苯基氨基甲酸酯类，甲氧基丙烯酸酯类，甲氧基氨基甲酸酯类，肟基乙酸酯类，肟基乙酰胺类，恶唑烷二酮类，二氢二恶嗪类，咪唑啉酮类，苯甲基氨基甲酸酯类，苯基吡咯类，喹啉类，芳香族类碳氢化合物(AH)，1，2，4-噻二唑，肉桂酸类，异苯并呋喃酮，吡咯并喹啉酮，三唑苯并噻唑，环丙甲酰胺，甲酰胺，丙酰胺，羟基苯胺类，硫代氨基甲酸酯类，烯丙胺类，肽酰嘧啶核苷，苯基脲类，氰基咪唑，氨磺酰三唑类，甲苯甲酰胺类，烯醇吡喃糖醛酸，吡喃己糖基化合物，链霉素，硫酸链霉素，有效霉素，氰基乙酰胺-肟类，氨基甲酸酯类，二硝基苯基巴豆酸酯类，嘧啶酮-腙类，2，6-二硝基苯胺类，三苯基锡化合物类，羧酸类，异噁唑类，异噻唑酮类，膦酸乙基酯类，亚磷酸及其盐，邻氨甲酰苯甲酸类，苯并三嗪类，苯-氨磺酰类，哒嗪酮类，噻吩-甲酰胺类，嘧啶酰胺类，肉桂酸酰胺类，缬氨酰胺氨基甲酸酯类，扁桃酸酰胺类，四环素，硫代氨基甲酸酯，acylpicolides，苯并噻二唑BTH，苯并异噻唑，噻二唑-氨基甲酰胺类，harpin蛋白，噻唑氨基甲酰胺，苯基-乙酰胺，喹唑啉酮，二苯酮，铜盐，硫，二硫氨基甲酸酯及相关化合物，邻苯二酰亚胺，氯代腈(邻苯二甲腈)，磺酰胺类，胍类，三嗪类，醌类(蒽醌类)，矿物油，有机油和碳酸氢钾。

14.权利要求10的方法，其中所述至少一种杀真菌剂选自苯菌灵、 2-(硫氰酸甲基巯基)-1，3-苯并噻唑、多菌灵、呋喃基苯并咪唑、噻唑苯并咪唑、托布津、甲基托布津、乙菌利、异菌脲、腐霉利、乙烯菌核利、抑霉唑、恶咪唑、稻瘟酯、咪鲜安、氟菌唑、嗪氨灵、啶斑肟、氯苯嘧啶醇、氟苯嘧啶醇、戊环唑、双苯三唑醇、糠菌唑、环唑醇、苯醚甲环唑、烯唑醇、氟环唑、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、己唑醇、酰胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、硅氟唑、戊唑醇、氟醚唑、三唑酮、三唑醇、灭菌唑、苯霜灵、呋霜灵、甲霜灵、甲霜灵-M(精甲霜灵)、恶霜灵、甲呋酰胺、aldimorph、吗菌灵、丁苯吗啉、十三吗啉、苯锈啶、粉病灵、螺环菌胺、敌瘟磷、异稻瘟净、(IBP)、吡菌磷、稻瘟灵、麦锈灵、氟酰胺、灭锈胺、甲呋酰胺、萎锈灵、氧化萎锈灵、噻呋酰胺、呋吡菌胺、吡噻菌胺、啶酰菌胺、乙嘧酚磺酸酯、二甲嘧酚、乙嘧酚、嘧菌环胺、嘧菌胺、嘧霉胺、乙霉威、嘧菌酯、strobilurins、enestrobin、啶氧菌酯、唑菌胺酯、醚菌酯、肟菌酯、嘧菌胺、苯氧菌胺、醚菌胺、恶唑酮菌、氟嘧菌酯、咪唑菌酮、pyribencarb、拌种咯、咯菌腈、喹氧灵、联苯、地茂散、氯硝胺、五氯硝基苯、(PCNB)、四氯硝基苯、(TCNB)、甲基立枯磷、土菌灵、氯唑灵、四氯苯酞、咯奎酮、三环唑、环丙酰菌胺、双氯氰菌胺、氰菌胺、环酰菌胺、稗草畏、萘替芬、特比萘芬、多氧霉素、戊菌隆、氰霜唑、吲唑磺菌胺、苯酰菌胺、灭瘟素-S、春雷霉素、链霉素、硫酸链霉素、有效霉素、霜脲氰、3-碘-2-丙基丁基胺基甲酸酯、霜霉威、硫菌威、乐杀螨、消螨普、嘧菌腙、氟啶胺、薯瘟锡、三苯基氯化锡、毒菌锡、恶喹酸、恶霉灵、辛噻酮、三乙膦酸铝、亚磷酸及其盐、叶枯酞、唑菌嗪、磺菌胺、哒菌清、硅噻菌胺、氟嘧菌胺、烯酰吗啉、氟吗啉、苯噻菌胺、异丙菌胺、valiphenal、双炔酰菌胺、土霉素、磺菌威、氟吡菌胺、阿拉酸式苯-S-甲基、烯丙异噻唑、噻酰菌胺、异噻菌胺、噻唑菌胺、环氟菌胺、丙氧喹啉、苯菌酮、铜 (不同的盐类)、硫、福美铁、代森锰锌、代森锰、代森联、丙森锌、福美双、代森锌、福美锌、克菌丹、敌菌丹、灭菌丹、百菌清、苯氟磺胺、甲苯磺菌胺、多果定、双胍辛、双胍辛胺、敌菌灵、二噻农、矿物油、有机油、碳酸氢钾、十三吗啉苯氨基嘧啶、抗生素、放线菌酮、灰黄霉素、二硝基康唑、嘧硫磷、稻瘟酯、5-氯-7-(4-甲基-哌啶-1- 基)-6-(2，4，6-三氟-苯基)-[1，2，4]三唑[1，5-a]嘧啶、2-丁氧基-6-碘-3-丙基- 苯并吡喃-4-酮、3-(3-溴-6-氟-2-甲基-吲哚-1-磺酰基)-[1，2，4]三唑-1-磺酸二甲基酰胺、代森钠、威百亩、聚氨基甲酸酯、棉隆、3-[5-(4-氯-苯基)-2，3- 二甲基-异噁唑烷-3-基]-吡啶、波尔多液、乙酸铜、氢氧化铜、王铜、碱式硫酸铜、硝基苯衍生物、敌螨通、nitrophthalisopropyl苯基吡咯、硫磺、硫有机金属化合物、苯酞、甲基立枯磷、N-(2-{4-[3-(4-氯-苯基)- 丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基-苯基}-乙基)-2-甲烷磺酰氨基-3-甲基-丁酰胺、 N-(2-{4-[3-(4-氯-苯基)-丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基-苯基}-乙基)-2-乙烷磺酰氨基-3-甲基-丁酰胺、3，4-二氯-异噻唑-5-羧酸(2-氰基-苯基)-酰胺、 Flubenthiavalicarb、3-(4-氯-苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酸甲基酯、{2-氯-5-[1-(6-甲基-吡啶-2-基甲氧基亚氨基)-乙基]-苯甲基}-氨基甲酸甲酯、{2-氯-5-[I-(3-甲基-苯甲基氧基亚氨基)-乙基]-苯甲基}-氨基甲酸甲酯；下面分子式的六氯苯酰胺，其中X是CHF2 或CH3，R1、R2彼此独立地是卤素、甲基或卤代甲基；烯肟菌酯、次磺酸衍生物、肉桂酰胺及其类似物例如氟酰菌胺酰胺杀真菌剂例如 cyclofenamid或(Z)-N-[a-(环丙基甲氧基亚氨基)-2，3-二氟-6-(二氟甲氧基) 苯甲基]-2-苯基乙酰胺、噻苯哒唑和氟菌唑。

15.权利要求10的方法，还包括用杀虫剂包被所述种子，杀虫剂选自生物学/发酵产品，放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)，芽孢杆菌属(Bacillus)菌株，洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)，假单胞菌属(Pseudomonas)菌株，木霉属(Trichoderma) 菌株，链霉菌属(Streptomyces)菌株；氨基甲酸酯类，氯代烟酰基类；双酰肼类，新烟碱类，硝基胍类，有机磷酸酯类，噁二嗪衍生物，苯基吡唑酮类，吡唑酮类，除虫菊酯，吡咯类，合成的拟除虫菊酯类，硫杂烟碱类和三唑类。

16.权利要求10的方法，其中包被步骤相继或同时进行。

17.权利要求10的方法，其中所述杀真菌剂和所述化合物配制在一起施加。

18.权利要求10的方法，其中所述化合物是选自芒柄花素酸钠和芒柄花素酸钾的碱金属芒柄花素酸盐。

19.通过权利要求10的方法生产的包被的种子。

20.权利要求19的包被的种子，其中所述化合物选自桔皮素、芒柄花素、碱金属芒柄花素酸盐，及其混合物。

21.权利要求19的包被的种子，其中所述至少一种杀真菌剂选自下列FRAC组：苯并咪唑氨基甲酸甲酯类(MBC)，二甲酰亚胺类，脱甲基化抑制剂(DMI)(SBI：I类)，苯基酰胺类(PA)，胺类(SBI： II类)，硫代磷酸酯类和二噻茂烷类，甲酰胺类，羟基-(2-氨基-)嘧啶类，苯胺基嘧啶类(AP)，N-苯基氨基甲酸酯类，外部醌类抑制剂(QoI)，苯基吡咯类，喹啉类，芳香族类碳氢化合物(AH)，杂芳基类化合物I，肉桂酸类，黑色素生物合成抑制剂-还原酶(MBI-R)，黑色素生物合成抑制剂-脱水酶(MBI-D)，羟基苯胺类(SBI：III类)，羟基苯胺类 (SBI：IV类)，苯基脲类，内部醌类抑制剂(QiI)，苯甲酰胺类，抗生素类，氰基乙酰胺-肟类，氨基甲酸酯类，二硝基苯基巴豆酸酯类，嘧啶酮-腙类，2，6-二硝基苯胺类，有机锡化合物，羧酸类，杂芳基类化合物II，膦酸酯类，邻氨甲酰苯甲酸类，苯并三嗪类，苯-氨磺酰类，哒嗪酮类，噻吩-甲酰胺类，嘧啶酰胺类，CAA杀真菌剂(羧酸酰胺类)，四环素，硫代氨基甲酸酯，苯甲酰胺类，FRAC-编码P：宿主植物防御诱导物，FRAC-编码U：未分类的物质，FRAC-编码M：多位点接触物质，和FRAC-编码N：不分类的物质。

22.权利要求19的包被的种子，其中所述至少一种杀真菌剂选自下列FRAC化学组或类别：苯并咪唑类，托布津类，二甲酰亚胺类，咪唑类，哌嗪类，吡啶类，嘧啶类，三唑类，酰基丙氨酸类，噁唑烷酮类，丁内酯类，吗啉类，哌啶类，spiroketalamines，硫代磷酸酯类，二噻茂烷类，苯甲酰胺类，呋喃甲酰胺类，氧硫杂环己烯甲酰胺类，噻唑甲酰胺类，吡唑甲酰胺类，吡啶甲酰胺类，羟基-(2-氨基-)嘧啶类，苯胺基嘧啶类(AP)，N-苯基氨基甲酸酯类，甲氧基丙烯酸酯类，甲氧基氨基甲酸酯类，肟基乙酸酯类，肟基乙酰胺类，恶唑烷二酮类，二氢二恶嗪类，咪唑啉酮类，苯甲基氨基甲酸酯类，苯基吡咯类，喹啉类，芳香族类碳氢化合物(AH)，1，2，4-噻二唑，肉桂酸类，异苯并呋喃酮，吡咯并喹啉酮，三唑苯并噻唑，环丙甲酰胺，甲酰胺，丙酰胺，羟基苯胺类，硫代氨基甲酸酯类，烯丙胺类，肽酰嘧啶核苷，苯基脲类，氰基咪唑，氨磺酰三唑类，甲苯甲酰胺类，烯醇吡喃糖醛酸，吡喃己糖基化合物，链霉素，硫酸链霉素，有效霉素，氰基乙酰胺-肟类，氨基甲酸酯类，二硝基苯基巴豆酸酯类，嘧啶酮-腙类，2，6-二硝基苯胺类，三苯基锡化合物类，羧酸类，异噁唑类，异噻唑酮类，膦酸乙基酯类，亚磷酸及其盐，邻氨甲酰苯甲酸类，苯并三嗪类，苯-氨磺酰类，哒嗪酮类，噻吩-甲酰胺类，嘧啶酰胺类，肉桂酸酰胺类，缬氨酰胺氨基甲酸酯类，扁桃酸酰胺类，四环素，硫代氨基甲酸酯， acylpicolides，苯并噻二唑BTH，苯并异噻唑，噻二唑-氨基甲酰胺类， harpin蛋白，噻唑氨基甲酰胺，苯基-乙酰胺，喹唑啉酮，二苯酮，铜盐，硫，二硫氨基甲酸酯及相关化合物，邻苯二酰亚胺，氯代腈(邻苯二甲腈)，磺酰胺类，胍类，三嗪类，醌类(蒽醌类)，矿物油，有机油和碳酸氢钾。

23.权利要求19的包被的种子，其中所述至少一种杀真菌剂选自苯菌灵、2-(硫氰酸甲基巯基)-1，3-苯并噻唑、多菌灵、呋喃基苯并咪唑、噻唑苯并咪唑、托布津、甲基托布津、乙菌利、异菌脲、腐霉利、乙烯菌核利、抑霉唑、恶咪唑、稻瘟酯、咪鲜安、氟菌唑、嗪氨灵、啶斑肟、氯苯嘧啶醇、氟苯嘧啶醇、戊环唑、双苯三唑醇、糠菌唑、环唑醇、苯醚甲环唑、烯唑醇、氟环唑、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、己唑醇、酰胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、硅氟唑、戊唑醇、氟醚唑、三唑酮、三唑醇、灭菌唑、苯霜灵、呋霜灵、甲霜灵、甲霜灵-M(精甲霜灵)、恶霜灵、甲呋酰胺、 aldimorph、吗菌灵、丁苯吗啉、十三吗啉、苯锈啶、粉病灵、螺环菌胺、敌瘟磷、异稻瘟净、(IBP)、吡菌磷、稻瘟灵、麦锈灵、氟酰胺、灭锈胺、甲呋酰胺、萎锈灵、氧化萎锈灵、噻呋酰胺、呋吡菌胺、吡噻菌胺、啶酰菌胺、乙嘧酚磺酸酯、二甲嘧酚、乙嘧酚、嘧菌环胺、嘧菌胺、嘧霉胺、乙霉威、嘧菌酯、strobilurins、enestrobin、啶氧菌酯、唑菌胺酯、醚菌酯、肟菌酯、嘧菌胺、苯氧菌胺、醚菌胺、恶唑酮菌、氟嘧菌酯、咪唑菌酮、pyribencarb、拌种咯、咯菌腈、喹氧灵、联苯、地茂散、氯硝胺、五氯硝基苯、(PCNB)、四氯硝基苯、(TCNB)、甲基立枯磷、土菌灵、氯唑灵、四氯苯酞、咯奎酮、三环唑、环丙酰菌胺、双氯氰菌胺、氰菌胺、环酰菌胺、稗草畏、萘替芬、特比萘芬、多氧霉素、戊菌隆、氰霜唑、吲唑磺菌胺、苯酰菌胺、灭瘟素-S、春雷霉素、链霉素、硫酸链霉素、有效霉素、霜脲氰、3-碘-2-丙基丁基胺基甲酸酯、霜霉威、硫菌威、乐杀螨、消螨普、嘧菌腙、氟啶胺、薯瘟锡、三苯基氯化锡、毒菌锡、恶喹酸、恶霉灵、辛噻酮、三乙膦酸铝、亚磷酸及其盐、叶枯酞、唑菌嗪、磺菌胺、哒菌清、硅噻菌胺、氟嘧菌胺、烯酰吗啉、氟吗啉、苯噻菌胺、异丙菌胺、valiphenal、双炔酰菌胺、土霉素、磺菌威、氟吡菌胺、阿拉酸式苯-S-甲基、烯丙异噻唑、噻酰菌胺、异噻菌胺、噻唑菌胺、环氟菌胺、丙氧喹啉、苯菌酮、铜(不同的盐类)、硫、福美铁、代森锰锌、代森锰、代森联、丙森锌、福美双、代森锌、福美锌、克菌丹、敌菌丹、灭菌丹、百菌清、苯氟磺胺、甲苯磺菌胺、多果定、双胍辛、双胍辛胺、敌菌灵、二噻农、矿物油、有机油、碳酸氢钾、十三吗啉苯氨基嘧啶、抗生素、放线菌酮、灰黄霉素、二硝基康唑、嘧硫磷、稻瘟酯、5-氯-7-(4-甲基 -哌啶-1-基)-6-(2，4，6-三氟-苯基)-[1，2，4]三唑[1，5-a]嘧啶、2-丁氧基-6-碘 -3-丙基-苯并吡喃-4-酮、3-(3-溴-6-氟-2-甲基-吲哚-1-磺酰基)-[1，2，4]三唑-1-磺酸二甲基酰胺、代森钠、威百亩、聚氨基甲酸酯、棉隆、3-[5-(4- 氯-苯基)-2，3-二甲基-异噁唑烷-3-基]-吡啶、波尔多液、乙酸铜、氢氧化铜、王铜、碱式硫酸铜、硝基苯衍生物、敌螨通、nitrophthalisopropyl 苯基吡咯、硫磺、硫有机金属化合物、苯酞、甲基立枯磷、N-(2-{4-[3-(4- 氯-苯基)-丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基-苯基}-乙基)-2-甲烷磺酰氨基-3-甲基-丁酰胺、N-(2-{4-[3-(4-氯-苯基)-丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基-苯基}-乙基)-2-乙烷磺酰氨基-3-甲基-丁酰胺、3，4-二氯-异噻唑-5-羧酸(2-氰基- 苯基)-酰胺、Flubenthiavalicarb、3-(4-氯-苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基 -3-甲基-丁酰基氨基)-丙酸甲基酯、{2-氯-5-[1-(6-甲基-吡啶-2-基甲氧基亚氨基)-乙基]-苯甲基}-氨基甲酸甲酯、{2-氯-5-[I-(3-甲基-苯甲基氧基亚氨基)-乙基]-苯甲基}-氨基甲酸甲酯；下面分子式的六氯苯酰胺，其中X是CHF2或CH3，R1、R2彼此独立地是卤素、甲基或卤代甲基；烯肟菌酯、次磺酸衍生物、肉桂酰胺及其类似物例如氟酰菌胺酰胺杀真菌剂例如cyclofenamid或(Z)-N-[a-(环丙基甲氧基亚氨基)-2，3-二氟-6-(二氟甲氧基)苯甲基]-2-苯基乙酰胺、噻苯哒唑和氟菌唑。

24.权利要求19的包被的种子，还包括用杀虫剂包被所述种子的步骤，杀虫剂选自生物学/发酵产品，放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)，芽孢杆菌属(Bacillus)菌株，洋葱伯克霍尔德氏菌 (Burkholderia cepacia)，假单胞菌属(Pseudomonas)菌株，木霉属 (Trichoderma)菌株，链霉菌属(Streptomyces)菌株；氨基甲酸酯类，氯代烟酰基类；双酰肼类，新烟碱类，硝基胍类，有机磷酸酯类，噁二嗪衍生物，苯基吡唑酮类，吡唑酮类，除虫菊酯，吡咯类，合成的拟除虫菊酯类，硫杂烟碱类和三唑类。

25.权利要求19的包被的种子，其中所述包被物配制在一起施加。

26.权利要求19的包被的种子，其中所述杀真菌剂和所述化合物相继或同时施加。

27.权利要求19的包被的种子，其中所述化合物是选自芒柄花素酸钠和芒柄花素酸钾的碱金属芒柄花素酸盐。

28.包被的种子，含有：

(a)种子，它含有至少一种异源基因，该基因编码的蛋白具有选自杀真菌效应和VAM真菌增强效应的效应；

(b)施加于所述种子的包被物，所述包被物含有下列中的至少一个成员：(i)杀真菌剂和(ii)化合物，其中所述化合物选自异类黄酮和异黄酮中的至少一个成员；

(c)其中所述包被的种子含有下列中的至少一个成员：(i)编码具有VAM真菌增强效应的蛋白的异源基因，和(ii)含有化合物的包被物，其中所述化合物选自异类黄酮和异黄酮中的至少一个成员；以及

(d)其中所述包被的种子含有下列中的至少一个成员：(i)编码具有杀真菌效应的蛋白的异源基因，以及(ii)含有杀真菌剂的包被物。

29.权利要求28的包被的种子，其中所述包被物含有异类黄酮，其中所述异类黄酮选自桔皮素、芒柄花素、碱金属芒柄花素酸盐，及其混合物。

30.权利要求28的包被的种子，其中所述异类黄酮选自桔皮素、芒柄花素、碱金属芒柄花素酸盐，及其混合物。

31.权利要求28的包被的种子，其中所述蛋白具有杀真菌效应，其中所述包被物含有选自桔皮素、芒柄花素、碱金属芒柄花素酸盐，及其混合物中的至少一种化合物。

32.权利要求28的包被的种子，其中所述蛋白具有VAM真菌增强效应，其中所述包被物含有杀真菌剂。

33.权利要求28的包被的种子，其中所述至少一种杀真菌剂选自下列FRAC组：苯并咪唑氨基甲酸甲酯类(MBC)，二甲酰亚胺类，脱甲基化抑制剂类(DMI)(SBI：I类)，苯基酰胺类(PA)，胺类(SBI： II类)，硫代磷酸酯类和二噻茂烷类，甲酰胺类，羟基-(2-氨基-)嘧啶类，苯胺基嘧啶类(AP)，N-苯基氨基甲酸酯类，外部醌类抑制剂(QoI)，苯基吡咯类，喹啉类，芳香族类碳氢化合物(AH)，杂芳基化合物类I，肉桂酸类，黑色素生物合成抑制剂类-还原酶(MBI-R)，黑色素生物合成抑制剂类-脱水酶(MBI-D)，羟基苯胺类(SBI：III类)，羟基苯胺类(SBI：IV类)，苯基脲类，内部醌类抑制剂(QiI)，苯甲酰胺类，抗生素类，氰基乙酰胺-肟类，氨基甲酸酯类，二硝基苯基巴豆酸酯类，嘧啶酮-腙类，2，6-二硝基苯胺类，有机锡化合物，羧酸类，杂芳基化合物类II，膦酸酯类，邻氨甲酰苯甲酸类，苯并三嗪类，苯-氨磺酰类，哒嗪酮类，噻吩-甲酰胺类，嘧啶酰胺类，CAA杀真菌剂类(羧酸酰胺类)，四环素，硫代氨基甲酸酯，苯甲酰胺类，FRAC-编码P：宿主植物防御诱导物，FRAC-编码U：未分类的物质，FRAC-编码M：多位点接触物质，和FRAC-编码N：不分类的物质。

34.权利要求28的包被的种子，其中所述至少一种杀真菌剂选自下列FRAC化学组或类别：苯并咪唑类，托布津类，二甲酰亚胺类，咪唑类，哌嗪类，吡啶类，嘧啶类，三唑类，酰基丙氨酸类，噁唑烷酮类，丁内酯类，吗啉类，哌啶类，spiroketalamines，硫代磷酸酯类，二噻茂烷类，苯甲酰胺类，呋喃甲酰胺类，氧硫杂环己烯甲酰胺类，噻唑甲酰胺类，吡唑甲酰胺类，吡啶甲酰胺类，羟基-(2-氨基-)嘧啶类，苯胺基嘧啶类(AP)，N-苯基氨基甲酸酯类，甲氧基丙烯酸酯类，甲氧基氨基甲酸酯类，肟基乙酸酯类，肟基乙酰胺类，恶唑烷二酮类，二氢二恶嗪类，咪唑啉酮类，苯甲基氨基甲酸酯类，苯基吡咯类，喹啉类，芳香族类碳氢化合物(AH)，1，2，4-噻二唑，肉桂酸类，异苯并呋喃酮，吡咯并喹啉酮，三唑苯并噻唑，环丙甲酰胺，甲酰胺，丙酰胺，羟基苯胺类，硫代氨基甲酸酯类，烯丙胺类，肽酰嘧啶核苷，苯基脲类，氰基咪唑，氨磺酰三唑类，甲苯甲酰胺类，烯醇吡喃糖醛酸，吡喃己糖基化合物，链霉素，硫酸链霉素，有效霉素，氰基乙酰胺-肟类，氨基甲酸酯类，二硝基苯基巴豆酸酯类，嘧啶酮-腙类，2，6-二硝基苯胺类，三苯基锡化合物类，羧酸类，异噁唑类，异噻唑酮类，膦酸乙基酯类，亚磷酸及其盐，邻氨甲酰苯甲酸类，苯并三嗪类，苯-氨磺酰类，哒嗪酮类，噻吩-甲酰胺类，嘧啶酰胺类，肉桂酸酰胺类，缬氨酰胺氨基甲酸酯类，扁桃酸酰胺类，四环素，硫代氨基甲酸酯， acylpicolides，苯并噻二唑BTH，苯并异噻唑，噻二唑-氨基甲酰胺类， harpin蛋白，噻唑氨基甲酰胺，苯基-乙酰胺，喹唑啉酮，二苯酮，铜盐，硫，二硫氨基甲酸酯及相关化合物，邻苯二酰亚胺，氯代腈(邻苯二甲腈)，磺酰胺类，胍类，三嗪类，醌类(蒽醌类)，矿物油，有机油和碳酸氢钾。

35.权利要求28的包被的种子，其中所述至少一种杀真菌剂选自苯菌灵、2-(硫氰酸甲基巯基)-1，3-苯并噻唑、多菌灵、呋喃基苯并咪唑、噻唑苯并咪唑、托布津、甲基托布津、乙菌利、异菌脲、腐霉利、乙烯菌核利、抑霉唑、恶咪唑、稻瘟酯、咪鲜安、氟菌唑、嗪氨灵、啶斑肟、氯苯嘧啶醇、氟苯嘧啶醇、戊环唑、双苯三唑醇、糠菌唑、环唑醇、苯醚甲环唑、烯唑醇、氟环唑、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、己唑醇、酰胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、硅氟唑、戊唑醇、氟醚唑、三唑酮、三唑醇、灭菌唑、苯霜灵、呋霜灵、甲霜灵、甲霜灵-M(精甲霜灵)、恶霜灵、甲呋酰胺、 aldimorph、吗菌灵、丁苯吗啉、十三吗啉、苯锈啶、粉病灵、螺环菌胺、敌瘟磷、异稻瘟净、(IBP)、吡菌磷、稻瘟灵、麦锈灵、氟酰胺、灭锈胺、甲呋酰胺、萎锈灵、氧化萎锈灵、噻呋酰胺、呋吡菌胺、吡噻菌胺、啶酰菌胺、乙嘧酚磺酸酯、二甲嘧酚、乙嘧酚、嘧菌环胺、嘧菌胺、嘧霉胺、乙霉威、嘧菌酯、strobilurins、enestrobin、啶氧菌酯、唑菌胺酯、醚菌酯、肟菌酯、嘧菌胺、苯氧菌胺、醚菌胺、恶唑酮菌、氟嘧菌酯、咪唑菌酮、pyribencarb、拌种咯、咯菌腈、喹氧灵、联苯、地茂散、氯硝胺、五氯硝基苯、(PCNB)、四氯硝基苯、(TCNB)、甲基立枯磷、土菌灵、氯唑灵、四氯苯酞、咯奎酮、三环唑、环丙酰菌胺、双氯氰菌胺、氰菌胺、环酰菌胺、稗草畏、萘替芬、特比萘芬、多氧霉素、戊菌隆、氰霜唑、吲唑磺菌胺、苯酰菌胺、灭瘟素-S、春雷霉素、链霉素、硫酸链霉素、有效霉素、霜脲氰、3-碘-2-丙基丁基胺基甲酸酯、霜霉威、硫菌威、乐杀螨、消螨普、嘧菌腙、氟啶胺、薯瘟锡、三苯基氯化锡、毒菌锡、恶喹酸、恶霉灵、辛噻酮、三乙膦酸铝、亚磷酸及其盐、叶枯酞、唑菌嗪、磺菌胺、哒菌清、硅噻菌胺、氟嘧菌胺、烯酰吗啉、氟吗啉、苯噻菌胺、异丙菌胺、valiphenal、双炔酰菌胺、土霉素、磺菌威、氟吡菌胺、阿拉酸式苯-S-甲基、烯丙异噻唑、噻酰菌胺、异噻菌胺、噻唑菌胺、环氟菌胺、丙氧喹啉、苯菌酮、铜(不同的盐类)、硫、福美铁、代森锰锌、代森锰、代森联、丙森锌、福美双、代森锌、福美锌、克菌丹、敌菌丹、灭菌丹、百菌清、苯氟磺胺、甲苯磺菌胺、多果定、双胍辛、双胍辛胺、敌菌灵、二噻农、矿物油、有机油、碳酸氢钾、十三吗啉苯氨基嘧啶、抗生素、放线菌酮、灰黄霉素、二硝基康唑、嘧硫磷、稻瘟酯、5-氯-7-(4-甲基 -哌啶-1-基)-6-(2，4，6-三氟-苯基)-[1，2，4]三唑[1，5-a]嘧啶、2-丁氧基-6-碘 -3-丙基-苯并吡喃-4-酮、3-(3-溴-6-氟-2-甲基-吲哚-1-磺酰基)-[1，2，4]三唑-1-磺酸二甲基酰胺、代森钠、威百亩、聚氨基甲酸酯、棉隆、3-[5-(4- 氯-苯基)-2，3-二甲基-异噁唑烷-3-基]-吡啶、波尔多液、乙酸铜、氢氧化铜、王铜、碱式硫酸铜、硝基苯衍生物、敌螨通、nitrophthalisopropyl 苯基吡咯、硫磺、硫有机金属化合物、苯酞、甲基立枯磷、N-(2-{4-[3-(4- 氯-苯基)-丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基-苯基}-乙基)-2-甲烷磺酰氨基-3-甲基-丁酰胺、N-(2-{4-[3-(4-氯-苯基)-丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基-苯基}-乙基)-2-乙烷磺酰氨基-3-甲基-丁酰胺、3，4-二氯-异噻唑-5-羧酸(2-氰基- 苯基)-酰胺、Flubenthiavalicarb、3-(4-氯-苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基 -3-甲基-丁酰基氨基)-丙酸甲基酯、{2-氯-5-[1-(6-甲基-吡啶-2-基甲氧基亚氨基)-乙基]-苯甲基}-氨基甲酸甲酯、{2-氯-5-[I-(3-甲基-苯甲基氧基亚氨基)-乙基]-苯甲基}-氨基甲酸甲酯；下面分子式的六氯苯酰胺，其中X是CHF2或CH3，R1、R2彼此独立地是卤素、甲基或卤代甲基；烯肟菌酯、次磺酸衍生物、肉桂酰胺及其类似物例如氟酰菌胺酰胺杀真菌剂例如cyclofenamid或(Z)-N-[a-(环丙基甲氧基亚氨基)-2，3-二氟-6-(二氟甲氧基)苯甲基]-2-苯基乙酰胺、噻苯哒唑和氟菌唑。

36.权利要求28的包被的种子，其中所述包被成分还含有杀虫剂，杀虫剂选自生物学/发酵产品，放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)，芽孢杆菌属(Bacillus)菌株，洋葱伯克霍尔德氏菌 (Burkholderia cepacia)，假单胞菌属(Pseudomonas)菌株，木霉属 (Trichoderma)菌株，链霉菌属(Streptomyces)菌株；氨基甲酸酯类，氯代烟酰基类；双酰肼类，新烟碱类，硝基胍类，有机磷酸酯类，噁二嗪衍生物，苯基吡唑酮类，吡唑酮类，除虫菊酯，吡咯类，合成的拟除虫菊酯类，硫杂烟碱类和三唑类。

37.权利要求28的包被的种子，其中所述包被物配制在一起施加。

38.权利要求28的包被的种子，其中所述杀真菌剂和所述化合物相继或同时施加。

说明书全文

1、技术领域

本发明的实施方案涉及了包被的种子。本发明的其它实施方案涉及了用于生产包被的种子的方法。更具体来说，本发明的实施方案涉及了通过用杀真菌剂和至少一种碱金属芒柄花素酸盐 (formononetinate)和芒柄花素包被种子而获得的包被的种子。其它的实施方案可以涉及提供遗传工程改造过的包被的种子，用于生产具有杀真菌活性的蛋白和/或泡囊丛枝菌根(VAM)真菌增强成分和/或任何其它赋予了任何性状的蛋白。本发明的包被，通过刺激有益的菌根真菌的生长和抑制根部其它病原性真菌的生长，刺激了植物从包被的种子的生长和产量。“MYCONATE”是芒柄花素和/或芒柄花素酸钾制备物的商品或商标名。在下文中，当使用术语MYCONATE时，已经注意了指明在所述制备物中使用的是芒柄花素还是芒柄花素酸钾。 MYCONATE是VAMTech，LLC的注册商标。

2、背景技术

菌根是特殊的土壤真菌与植物的细根之间的共生互惠关系；它既不是真菌也不是根，而是从这两种配偶体形成的结构(Muchovej，R.M. (菌根对农业作物的重要性)″Importance of Mycorrhizae for Agricultural Crops″Florida Cooperative Extension Service Bulletin SS-AGR-170(2001))。泡囊丛枝菌根是一种类型的菌根，其中真菌透过了维管植物根的皮层细胞。泡囊丛枝菌根的特征是形成了独特的结构，例如球囊菌门的真菌形成的丛枝状吸胞和泡囊。这些真菌帮助植物从土壤捕获水分和营养物例如磷和微量营养素。这种共生是真菌和植物之间的高度进化的互惠关系，是已知的最普遍的植物共生(Simon， L.等，(内生菌根真菌的起源和多样化以及与陆生维管植物的一致性) ″Origin and diversification of endomycorrhizal fungi and coincidence with vascular land plants″Nature 363：67-69(1993))。

已知泡囊丛枝菌根出现在大约80％的维管植物家族中，包括农业上重要的作物(Schussler，A.等，(新的真菌门，球囊菌门：系统发育与进化)″A new fungal phylum，the Glomeromycota：phylogeny and evolution″Mycological Research 105(12)：1416(2001))。在过去40年中，在菌根真菌生理学和生态学领域的进展已经导致了将VAM真菌用于改进生态系统和农业生产。一个这样的增加这种共生关系在一年生作物中的贡献的应用，是通过使用类黄酮刺激泡囊丛枝菌根的生长来使本地生真菌的活性最大化(Siqueira，J.O.等，(VA菌根和菌根刺激性异黄酮类化合物减少了除草剂的伤害)″VA-mycorrhizae and mycorrhiza stimulating isoflavonoid compounds reduce herbicide injury″Plant and Soil 134：233-242(1991)；Siqueira，J.O.等，(通过类黄酮化合物刺激泡囊丛枝菌根的形成和白三叶草的生长)，″Stimulation of vesicular-arbuscular mycorrhiza formation and growth of white clover by flavonoid compounds″New Phytologist 118：87-93(1991))。

类黄酮包含一大类由植物产生的次级代谢物，通常发现在根、种子和各种植物器官中(Graham，T.L.，(类黄酮和异类黄酮在发育中的大豆秧苗组织以及种子与根渗出物中的分布)，″Flavonoid and isoflavonoid distribution in developing soybean seedling tissues and in seed and root exudates″Plant Physiology 95(2)：594-603(1991))。从在磷酸盐胁迫条件下生长的三叶草根分离到的一种这样的类黄酮被鉴定和表征为芒柄花素(4′-甲氧基-7-羟基异黄酮)(Nair，M.G.等，(从三叶草(Trifolium repens)根分离和鉴定泡囊-丛枝菌根刺激性化合物) ″Isolation and identification of vesicular-arbuscular mycorrhiza-stimulatory compounds from clover(Trifolium repens)roots″ Applied and Environmental Microbiology 52(2)：434-439(1991))。各种研究已经证实，当以4-5mg/L的浓度应用到植物上时，芒柄花素刺激根的定殖和/或泡囊丛枝菌根的菌丝形成和生长(Nair，M.G.等，(从三叶草(Trifolium repens)根分离和鉴定泡囊-丛枝菌根刺激性化合物) ″Isolation and identification of vesicular-arbuscular mycorrhiza-stimulatory compounds from clover(Trifolium repens)roots″ Applied and Environmental Microbiology 52(2)：434-439(1991)；Siqueira， J.O.等，(VA菌根和菌根刺激性异黄酮类化合物减少了除草剂的伤害)，″VA-mycorrhizae and mycorrhiza stimulating isoflavonoid compounds reduce herbicide injury″Plant and Soil 134：233-242(1991)； Siqueira，J.O.，(通过类黄酮化合物刺激泡囊-丛枝菌根的形成和白三叶草的生长)，″Stimulation of vesicular-arbuscular mycorrhiza formation and growth of white clover by flavonoid compounds″New Phytologist 118：87-93(1991)；Baptista，MJ.& J.O.Siqueira，(类黄酮对丛枝菌根真菌巨大巨孢囊霉(Gigaspora gigantea)的孢子萌发和非共生生长的影响)，″Effect of flavonoids on spore germination and asymbiotic growth of the arbuscular mycorrhizal fungus Gigaspora gigantea″Brazilian Journal of Plant Physiology 6(2)：127-134(1994)；Koide，R.T等，(六种一年生花棚植物的菌根接种策略)″Strategies for mycorrhizal inoculation of six annual bedding plant species″HortScience 34(7)：1217-1220 (1999)；Davies，F.T.等，(类黄酮(芒柄花素)对秘鲁高原菌根活性和马铃薯作物生产率的影响)，″Influence of a flavonoid(formononetin)on mycorrhizal activity and potato crop productivity in the highlands of Peru″ Scientia Horticulturae 106：318-329(2005)；Fries，L.L.M.，(磷和芒柄花素对玉米-根内球囊霉(Zea mays-Glomus intraradices)共生现象中同工酶表达的影响)，″Influence of phosphorus and formononetin on isozyme expression in the Zea mays-Glomus intraradices symbiosis″ Physiologia Plantarum 103：172-180(1998)；Ozan，A.等，(发育中的三叶草-球囊霉(Trifolium-Glomus)菌根的同工酶活性以及异黄酮芒柄花素的相关效应)，″Isozyme activity of developing Trifolium-Glomus mycorrhiza and associated effects of the isoflavone formononetin″ Allelopathy Journal 3(2)：217-228(1996)；Da Silva，J.P.& Siqueira，J.O.， (土壤中施加合成的芒柄花素刺激玉米和大豆中丛枝菌根的形成)， ″Soil-applied synthetic formononetin stimulates arbuscular mycorrhizal formation in corn and soybean″Brazilian Journal of Plant Physiology 9(1)：35-41(1997)；Da Silva，J.P.& Siqueira，J.O.，(大豆菌根定殖和生长受到不同真菌种和施加异类黄酮芒柄花素的影响)，″Mycorrhizal colonization and growth of soybean influenced by different fungal species and application of the isoflavonoid formononetin″Pesquisa Agropecuaria Brasileira 33(6)：953-959(1998))。此外，各种使用芒柄花素的研究已经发现了植物生长和生物量的显著增加(Siqueira，J.O.等，(通过类黄酮化合物刺激泡囊-丛枝菌根的形成和白三叶草的生长)，″Stimulation of vesicular-arbuscular mycorrhiza formation and growth of white clover by flavonoid compounds″New Phytologist 118：87-93(1991)；Davies，F.T. (秘鲁土生的丛枝菌根和类黄酮对Yungay马铃薯的生长、产量和叶片元素浓度的影响)，″Influence of arbuscular mycorrhizae indigenous to Peru and a flavonoid on growth，yield，and leaf elemental concentration of ′Yungay′potatoes″HortScience 40(2)：381-385(2005))；以及植物疾病的减少(Elmer，W.，(芒柄花素和NaCl对芦笋菌根定殖和枯萎和根腐病的影响)，″Influence of formononetin and NaCl on mycorrhizal colonization and Fusarium crown and root rot of asparagus″Plant Disease 86(12)：1318-1324(2002))。芒柄花素的化学名称是4′-甲氧基-7-羟基异黄酮(CAS# 485-72-3)。

美国专利Nos.5,002,603、5,085,682和5,125,955报道了使用芒柄花素、一种异类黄酮、作为在植物的根部形成有益的菌根群丛的泡囊丛枝菌根真菌(“VAM真菌”)的生长的刺激剂。美国专利No.5,691,275报道了使用碱金属芒柄花素酸盐作为VAM真菌生长的刺激物。VAM真菌通过增加营养物质和水的摄入、合成生长促进物质、耐旱、耐盐和移植休克、以及与其它的有益微生物相互作用，对于许多植物物种来说可以增进植物的生长(Turk，M.A.等，(菌根的重要性)，″Significance of Mycorrhizae″World J.of Agricultural Sci.2(1)：16-20(2006))。

有许多杀真菌剂可用于农业和园艺应用。它们包括例如表1中列出的那些，它们一部分从Sweets，L.，(用于大豆种子处理的杀真菌剂) ″Soybean Seed Treatment Fungicides，″Integrated Pest & Crop Management Newsletter(Univ.of Missouri-Columbia)16(1)(Jan.20， 2006)获得，一部分从University of Missouri Extension，(疾病管理—— 玉米)″Disease Management-Corn″2005《密苏里疫病管理指南：玉米、大豆、冬小麦》(Missouri Pest Management Guide：Corn，Soybean， Winter Wheat)和University of Missouri Extension，M171：2007《密苏里疫病管理指南：玉米、高粱、大豆、冬小麦》(Missouri Pest Management Guide：Corn，Grain Sorghum，Soybean，Winter Wheat)获得，还有一部分从发明人的个人知识和经验获得。尽管这些文章聚焦于大豆、玉米和冬小麦的杀真菌剂，但那些杀真菌剂在许多其它种子作物中可能也可以用作种子处理物。

表1

活性成分产品商标名的例子(公司) 甲霜灵(metalaxyl) Allegiance Dry(Trace Chemicals LLC) Allegiance-FL(Gustafson LLC) Allegiance-LS(Gustafson LLC) 精甲霜灵(mefenoxam) Apron XL LS(Syngenta) 嘧菌酯(azoxystrobin) ProtegeFL(Gustafson LLC) Dynasty(Syngenta)

克菌丹(captan) Bean Guard(Trace Chemicals LLC) Captan 30-DD(Gustafson LLC) Captan 400(Gustafson LLC) Captan 400C(Gustafson LLC) Enhance(Trace Chemicals LLC) HiMoly/Captan-D(Trace Chemicals LLC) Rival Flowable(Gustafson LLC) Vitavax MDC(Helena) 萎锈灵(carboxin) Bean Guard(Trace Chemicals LLC) Enhance(Trace Chemicals LLC) Kernel Guard Supreme(Trace Chemicals LLC) RTU-Vitavax-Thiram(Gustafson LLC) Vitaflo-280(Gustafson LLC) Vitavax CT(Helena) Vitavax M DC(Helena) Vitavax M(Helena) Vitavax-PCNB(Gustafson LLC) VitavaxT-L(Trace Chemicals LLC) Vitavax-200(Gustafson LLC) Vitavax-34(Gustafson LLC) 咯菌腈(fludioxonil) Maxim 4FS(Syngenta) 代森锰锌(mancozeb) Dithane DF Rainshield(Dow AgroSciences) Dithane F-45 Rainshield(Dow AgroSciences) Dithane M45(Dow AgroSciences) Manzate 75 DF(Griffin LLC) Manzate 80 WP(Griffin LLC) Manzate Flowable(Griffin LLC) Penncozeb 75 DF(Cerexagri) Pennocozeb 80 WP(Cerexagri) 代森锰(maneb) Manex(Griffin LLC) PCNB Rival Flowable(Gustafson LLC) RTU-PCNB(Gustafson LLC) Vitavax-PCNB(Gustafson LLC) TBZ(噻苯哒唑(thiabendazole)) LSP(Gustafson LLC) Rival Flowable(Gustafson LLC) RTU Flowable(Gustafson LLC)

福美双(thiram) Protector-D(Trace Chemicals LLC) Protector-L(Trace Chemicals LLC) RTU Flowable(Gustafson LLC) RTU-Vitavax-Thiram(Gustafson LLC) Triple Noctin L(Trace Chemicals LLC) 42-S Thiram(Gustafson LLC) Vitaflo-280(Gustafson LLC) Vitavax CT(Helena) Vitavax M(Helena) Vitavax T-L(Trace Chemicals LLC) Vitavax-200(Gustafson LLC) 肟菌酯(trifloxystrobin) Trilex(Gustafson LLC) 三乙膦酸铝(Fosetyl Al) Aliette Super(Bayer CropScience) 苯醚甲环唑(difenoconazole) Dividend(Syngenta) 戊唑醇(tebuconazole) Raxil T(Bayer CropScience) 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) Kodiak Concentrate Biological Fungicide (Gustafson LLC) Kodiak Flowable Biological Fungicide (Gustafson LLC) Kodiak HB(Trace Chemicals LLC) 三唑醇(triadimenol) Baytan 30(Gustafson LLC) 苯醚甲环唑+精甲霜灵 (difenoconazole+mefenoxam) 嘧菌酯+甲霜灵 (azoxystrobin+metalaxyl) SoyGard(Gustafson LLC) 克菌丹+萎锈灵+甲霜灵 (captan+carboxin+metalaxyl) Bean Guard Allegiance(Trace Chemicals LLC) 克菌丹+二嗪磷 (captan+diazinon) Captan-Diazinon Seed Treater(Trace Chemicals LLC) 克菌丹+林丹 (captan+lindane) Sorghum Guard(Trace Chemicals LLC) 克菌丹+二嗪磷+林丹 (captan+diazinon+lindane) Kernel Guard(Trace Chemicals LLC) 克菌丹+二嗪磷+林丹+甲霜灵 (captan+diazinon+lindane+ metalaxyl) Agrox Premiere(Agriliance LLC)

克菌丹+PCNB+噻苯哒唑+甲霜灵 (captan+PCNB+thiabendazole +metalaxyl) Rival Pak(Gustafson LLC) 萎锈灵+代森锰+林丹 (carboxin+maneb+lindane) Enhance Plus(Trace Chemicals LLC) 萎锈灵+二嗪磷+林丹 (carboxin+diazinon+lindane) Germate Plus(Trace Chemicals LLC) Kickstart(Helena Chemical Corporation) 萎锈灵+甲霜灵+吡虫啉 (carboxin+metalaxyl +imidacloprid) Latitude(Gustafson LLC) 萎锈灵+PCNB+甲霜灵 (carboxin+PCNB+metalaxyl) Prevail(Trace Chemicals LLC) 萎锈灵+氯菊酯 (carboxin+permethrin) Kernel Guard Supreme(Trace Chemicals LLC) 萎锈灵+福美双 (carboxin+thiram) Vitaflo-280(Gustafson LLC) 萎锈灵+福美双+甲霜灵 (carboxin+thiram+metalaxyl) Stiletto(Trace Chemicals LLC) Stiletto Pak(Trace Chemicals LLC) 地茂散+精甲霜灵 (Chloroneb+mefenoxam) Catapult XL(Agriliance，LLC) Delta Coat XL(Agriliance) 地茂散+甲霜灵 (Chloroneb+metalaxyl) Catapult(Agriliance，LLC) Delta-Coat AD(Agriliance) 代森锰锌+林丹 (Mancozeb+lindane) Grain Guard Plus(Trace Chemicals LLC) 精甲霜灵+咯菌腈 (Mefenoxam+fludioxonil) ApronMAXX RFC(Syngenta) ApronMAXX RTA(Syngenta) ApronMAXX RTA+moly(Syngenta) Maxim XL(Syngenta) Warden RTA(Agriliance) 甲霜灵+吡虫啉 (Metalaxyl+imidacloprid) Concur(Agriliance，LLC) 福美双+甲霜灵 (Thiram+metalaxyl) Protector-L-Allegiance(Trace Chemicals LLC)

对植物施用杀真菌剂可以通过抑制不想要的和/或病原性真菌、例如黑粉菌、霉菌、锈菌和霉病病菌的生长，来刺激植物的生长。例如，可以施用杀真菌剂来抑制马铃薯疫病、小麦锈病、小麦枯萎病、小麦黑穗病或葡萄霉病。

可以施用杀真菌剂的一种方式是作为种子处理。这可以有效地例如抑制由种子腐烂、秧苗枯萎和某些种子的根腐导致的损害。可能引起这种损害的真菌包括例如下列属的种：腐霉属(Pythium)，疫霉属 (Phytophthora)，丝核菌属(Rhizoctonia)，镰孢属(Fusarium)，轮枝孢属(Verticillium)和壳球孢属(Macrophomina)。

杀真菌效应也可以通过提供遗传工程改造过的、产生了能够减少不想要的和/或病原性真菌的生长的蛋白的种子来实现。这样的遗传工程改造的生物体报道在例如Herrera-Estrella，L.& Simpson，J.，(针对细菌和真菌病原体的遗传工程改造的抗性)″Genetically Engineered Resistance to B acterial and Fungal Pathogens″World J.of Micro.& Biotech.11(4)：383-392(2004)和Sainz等的美国专利No.7,098,378中。上述二者在此引为参考。

很少的情况下，可施用用于减少、抑制或消除有害真菌的杀真菌剂也可能对有益的VAM真菌的生长有不利影响。例如，已经报道施用杀真菌剂五氯硝基苯(PCNB)减少了VAM感染的燕麦(Avena sativa) 的根的长度，从而降低了磷的摄入(Gnekow，M.A.& Marschner，H.， (杀真菌剂五氯硝基苯对燕麦的VA菌根和总根长度和磷摄入的影响)， ″Influence of the Fungicide Pentachloronitrobenzene on VA-mycorrhizal and Total Root Length and Phosphorus Uptake of Oats″Plant & Soil 114： 91-98(1989))。已经报道，施用杀真菌剂百菌清(chlorothalonil)降低了银合欢(Leucaena leucocephala)的菌根定殖、磷浓度和干物质产率 (Azis，T.等，(在银合欢中通过百菌清抑制菌根共生)，″Inhibition of Mycorrhizal Symbiosis in Leucaena leucocephala by chlorothalonil″Plant & Soil 131(1)：47-52(1991))。

已经报道泡囊丛枝菌根真菌摩西球囊霉(Glomus mosseae)受到施用杀真菌剂苯菌灵(benomyl)的影响(Chiocchio，V.等，(杀真菌剂苯菌灵对丛枝菌根真菌摩西球囊霉的孢子萌发和菌丝长度的影响)， ″Effect of the Fungicide Benomyl on Spore Germination and Hyphal Length of the Arbuscular Mycorrhizal Fungus Glomus mosseae″Int′l Microbiol.3：173-75(2000))。已经报道洋葱根的VAM定殖受到施用杀真菌剂的抑制(Kough，J.L.等，(施用杀真菌剂后的泡囊丛枝菌根真菌)，″Vesicular-arbuscular Mycorrhizal Fungi after Fungicide Applications″New Phytol.106：707-715(1987))。

发明内容

本发明的实施方案提供了加强VAM真菌的生长、同时抑制一种或多种不想要的或病原性真菌的生长的种子包被成分。本发明的另一个实施方案提供了带有加强VAM真菌的生长并抑制一种或多种不想要的或病原性真菌的生长的包被成分的种子。本发明的另一个实施方案提供了带有抑制不想要的或病原性真菌的生长而不抑制VAM真菌的生长和/或活性的包被成分的种子。本发明的另一个实施方案包括在已经被遗传修饰以产生抑制不想要的和/或病原性真菌的生长的蛋白的种子上提供包被物；这些包被物含有加强VAM真菌生长的成分，并可以包含抑制不想要的和/或病原性真菌的生长的成分，这些真菌可以是、也可以不是与种子产生的蛋白所抑制的相同的不想要的和/或病原性真菌。
本发明的另一个实施方案包括在已经进行了遗传修饰、其产生的植物生产加强VAM真菌生长的蛋白的种子上提供包被物；这些包被物包含杀真菌剂，并可以包含加强VAM真菌生长的成分，这些成分与遗传修饰的种子和/或得到的植物所产生的VAM真菌加强成分相同或不同。
本文还提供了用于提供包被的种子的方法和用于对种子进行包被的方法。在本发明的实施方案中使用的成分包含杀真菌剂以及碱金属芒柄花素酸盐和芒柄花素中的至少一种。

附图说明

图1显示了不同剂量速度的Myconate在VAM真菌刺激分别生长了 8周和10周后的玉米和棉花根的定殖中的有效性。
图2显示了Myconate和杀真菌剂的组合对处理过的玉米种子中萌发和VAM真菌发育的影响的实验结果。
图3显示了芒柄花素及其衍生物的生物合成。图解来自于国际生物化学和分子生物学联合会(International Union of Biochemistry and Molecular Biology)，2004。
图4显示了从2007个实验室研究获得的Myconate刺激玉米的VAM 定殖的剂量效应曲线。
发明详述
当在本文中使用时，用于说明书和权利要求书中的单数形式包括了单数和复数，除非内容明确表示不是这样。尽管在本文中描述了本发明的具体实施方案和实施例，但本领域技术人员将会认识到，可以对其进行各种不同的修改，而不背离在随附的权利要求书中定义的本发明的精神和范围。
本发明的种子包被成分优选包含抗真菌剂以及碱金属芒柄花素酸盐和芒柄花素中的至少一种。正如下面讨论的，也可以存在其它添加剂。
I.加强VAM真菌生长的成分
A.芒柄花素和碱金属芒柄花素酸盐类
芒柄花素和碱金属芒柄花素酸盐类被认为是有用的VAM真菌生长加强成分，并在本文中进行了描述。
芒柄花素是具有下列结构式的异类黄酮：

碱金属芒柄花素酸盐是具有下列结构式的异类黄酮：

ALK可以是锂、钠、钾、铷或铯。由于成本考虑，钠和钾是优选的。
碱金属芒柄花素酸盐在水性溶液中(包括例如在土壤水分或悬浮液中)改变成酸的形式芒柄花素。
B.桔皮素
桔皮素是另一种有用的VAM真菌生长加强成分。桔皮素具有下列结构：

桔皮素的特性被报道在例如美国专利No.6,831,098和Dong，CJ. 等，(桔皮素对AM真菌感染菌丝生长和酶活性的影响)，″Impact of Hesperitin on Infection Hyphal Growth and Enzyme Activity of AM Fungus″Acta Pedologica Sinica 43(3)：473-77(2006)；Dong，CJ.等，(类黄酮对AM真菌和菌根植物的影响)，″Effect of Flavonoids on AM Fungi and Mycorrhizal Plant″Mycosystema 23(2)：294-300(2004)；和Dong，CJ. & Zhao，B.，(AM真菌和根瘤菌之间的相互作用以及类黄酮对它的影响)，″Interaction between AM Fungi and Rhizobium and Effects of Flavonoids on It″Yingyong Shengtai Xuebao 15(9)：1585-1588(2004)中。
C.异黄酮和异类黄酮
异黄酮(异类黄酮)也可以用作VAM真菌生长加强成分。异黄酮是具有3-苯基-4H-1-苯并呋喃-4-酮骨架的化合物。一些异黄酮包括，例如，但不限于5，7，4’-三羟基异黄酮(genistein)、4’，7-二羟基异黄酮 (daidzein)和大豆黄素(glycitein)。
II.杀真菌剂
在本发明的实施方案中可以使用各种不同的杀真菌剂。它们包括例如2006年12月版的杀真菌剂抗性作用委员会(FRAC)的FRAC编码名单1：按照FRAC编码分类的杀真菌剂(Fungicide Resistance Action Committee(FRAC)，FRAC CODE LIST 1：Fungicides sorted by FRAC Code，December 2006)中分类和列表的杀真菌剂。该列表的概述包括 FRAC组编码、FRAC组名称和FRAC化学组或类别，与根据发明人的个人知识和经验做出的添加一起显示在下面。
1.苯并咪唑氨基甲酸甲酯类(MBC)：例如苯并咪唑类、托布津类(thiophanates)
2.二甲酰亚胺类
3.脱甲基化抑制剂类(DMI)(SBI：I类)：例如咪唑类、哌嗪类、吡啶类、嘧啶类、三唑类
4.苯基酰胺类(PA)：例如酰基丙氨酸类、噁唑烷酮类、丁内酯类
5.胺类(SBI：II类)：例如吗啉类、哌啶类、spiroketalamines
6.硫代磷酸酯类和二噻茂烷类
7.甲酰胺类：例如苯甲酰胺类、呋喃甲酰胺类、氧硫杂环己烯甲酰胺类、噻唑甲酰胺类、吡唑甲酰胺类、吡啶甲酰胺类
8.羟基-(2-氨基-)嘧啶类
9.苯胺基嘧啶类(AP)
10.N-苯基氨基甲酸酯类
11.外部醌类抑制剂(QoI)：例如甲氧基丙烯酸酯类、甲氧基氨基甲酸酯类、肟基乙酸酯类、肟基乙酰胺类、恶唑烷二酮类、二氢二恶嗪类、咪唑啉酮类、苯甲基氨基甲酸酯类
12.苯基吡咯类
13.喹啉类
14.芳香族类碳氢化合物(AH)和杂芳基类化合物I：例如1，2，4- 噻二唑类
15.肉桂酸类
16.1.黑色素生物合成抑制剂-还原酶(MBI-R)：例如异苯并呋喃酮、吡咯并喹啉酮、三唑苯并噻唑
16.2.黑色素生物合成抑制剂-脱水酶(MBI-D)：例如环丙甲酰胺、甲酰胺、丙酰胺
17.羟基苯胺类(SBI：III类)
18.羟基苯胺类(SBI：IV类)：例如硫代氨基甲酸酯类、烯丙胺类
19.多氧菌素类：例如肽酰嘧啶核苷
20.苯基脲类
21.内部醌类抑制剂(QiI)：例如氰基咪唑、氨磺酰三唑类
22.苯甲酰胺：例如甲苯甲酰胺
23.到26.抗生素类：例如烯醇吡喃糖醛酸(enopyranuronic acid)、己吡喃糖基化合物、链霉素、有效霉素
27.氰基乙酰胺-肟类
28.氨基甲酸酯类
29.二硝基苯基巴豆酸酯类；嘧啶酮-腙类和2，6-二硝基苯胺类
30.有机金属锡化合物类：例如三苯基锡化合物类
31.羧酸类
32.杂芳基类化合物II：例如异噁唑类、异噻唑酮类
33.膦酸酯类：例如膦酸乙基酯类，亚磷酸及其盐
34.邻氨甲酰苯甲酸类
35.苯并三嗪类
36.苯-氨磺酰类
37.哒嗪酮类
38.噻吩-甲酰胺类
39.嘧啶酰胺类
40.CAA杀真菌剂(羧酸酰胺)：例如肉桂酸酰胺、缬氨酰胺氨基甲酸酯、扁桃酸酰胺
41.四环素
42.硫代氨基甲酸酯
43.苯甲酰胺类：例如acylpicolides
编码P.宿主植物防御诱导物：例如苯并噻二唑BTH、苯并异噻唑、噻二唑-氨基甲酰胺、harpin蛋白
编码U.未分类的物质：例如噻唑氨基甲酰胺、苯基-乙酰胺、喹唑啉酮、二苯甲酮
编码M.多位点接触物质：例如铜盐、硫、二硫氨基甲酸酯类及相关化合物、邻苯二酰亚胺类、氯代腈类(邻苯二甲腈类)、硫酰胺类、胍类、三嗪类、醌类(蒽醌类)
编码N.不分类的物质：例如矿物油、有机油、碳酸氢钾、生物学物质
本领域技术人员将会认识到，在本发明的各种不同实施方案中使用其它杀真菌剂也是可能的，本文没有列出的具体的杀真菌剂或杀真菌剂类别并不意味着对权利要求的限制。因为抑制VAM真菌的生长而没有与加强VAM真菌的生长的成分一起使用的杀真菌剂，也可以用于本发明的实施方案中；在这种情况下，本发明的优点在于这样的杀真菌剂对VAM真菌的有害效应可以被降低。这些杀真菌剂可以包括例如五氯硝基苯、百菌清和苯菌灵。
本发明的某些实施方案包含一种或多种杀真菌剂，它们选自苯菌灵、2-(硫氰酸甲基巯基)-1，3-苯并噻唑、多菌灵、呋喃基苯并咪唑、噻唑苯并咪唑、托布津、甲基托布津、乙菌利、异菌脲、腐霉利、乙烯菌核利、抑霉唑、恶咪唑(oxpoconazole)、稻瘟酯、咪鲜安(prochloraz)、氟菌唑、嗪氨灵、啶斑肟、氯苯嘧啶醇、氟苯嘧啶醇、戊环唑、双苯三唑醇、糠菌唑、环唑醇、苯醚甲环唑、烯唑醇、氟环唑、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、己唑醇、酰胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、硅氟唑、戊唑醇、氟醚唑、三唑酮、三唑醇、灭菌唑、苯霜灵、呋霜灵、甲霜灵、甲霜灵-M(精甲霜灵)、恶霜灵、甲呋酰胺、aldimorph、吗菌灵、丁苯吗啉、十三吗啉、苯锈啶、粉病灵、螺环菌胺、敌瘟磷、异稻瘟净、(IBP)、吡菌磷、稻瘟灵、麦锈灵、氟酰胺、灭锈胺、甲呋酰胺、萎锈灵、氧化萎锈灵、噻呋酰胺、呋吡菌胺、吡噻菌胺、啶酰菌胺、乙嘧酚磺酸酯、二甲嘧酚、乙嘧酚、嘧菌环胺、嘧菌胺、嘧霉胺、乙霉威、嘧菌酯、strobilurins、 enestrobin、啶氧菌酯、唑菌胺酯、醚菌酯、肟菌酯、嘧菌胺、苯氧菌胺、醚菌胺、恶唑酮菌、氟嘧菌酯、咪唑菌酮、pyribencarb、拌种咯、咯菌腈、喹氧灵、联苯、地茂散、氯硝胺、五氯硝基苯、(PCNB)、四氯硝基苯、(TCNB)、甲基立枯磷、土菌灵、氯唑灵、四氯苯酞、咯奎酮、三环唑、环丙酰菌胺、双氯氰菌胺、氰菌胺、环酰菌胺、稗草畏、萘替芬、特比萘芬、多氧霉素、戊菌隆、氰霜唑、吲唑磺菌胺、苯酰菌胺、灭瘟素-S、春雷霉素、链霉素、有效霉素、霜脲氰、3-碘-2- 丙基丁基胺基甲酸酯、霜霉威、硫菌威、乐杀螨、消螨普、嘧菌腙、氟啶胺、薯瘟锡、三苯基氯化锡、毒菌锡、恶喹酸、恶霉灵、辛噻酮、三乙膦酸铝、亚磷酸及其盐、叶枯酞、唑菌嗪、磺菌胺、哒菌清、硅噻菌胺、氟嘧菌胺、烯酰吗啉、氟吗啉、苯噻菌胺、异丙菌胺、valiphenal、双炔酰菌胺、土霉素、磺菌威、氟吡菌胺、阿拉酸式苯-S-甲基、烯丙异噻唑、噻酰菌胺、异噻菌胺、噻唑菌胺、环氟菌胺、丙氧喹啉、苯菌酮、铜(不同的盐类)、硫、福美铁、代森锰锌、代森锰、代森联、丙森锌、福美双、代森锌、福美锌、克菌丹、敌菌丹、灭菌丹、百菌清、苯氟磺胺、甲苯磺菌胺、多果定、双胍辛、双胍辛胺、敌菌灵、二噻农、矿物油、有机油、碳酸氢钾、十三吗啉苯氨基嘧啶、抗生素、放线菌酮、灰黄霉素、二硝基康唑、嘧硫磷、稻瘟酯、5-氯-7-(4-甲基 -哌啶-1-基)-6-(2，4，6-三氟-苯基)-[1，2，4]三唑[1，5-a]嘧啶、2-丁氧基-6-碘 -3-丙基-苯并吡喃-4-酮、3-(3-溴-6-氟-2-甲基-吲哚-1-磺酰基)-[1，2，4]三唑-1-磺酸二甲基酰胺、代森钠、威百亩、聚氨基甲酸酯、棉隆、3-[5-(4- 氯-苯基)-2，3-二甲基-异噁唑烷-3-基]-吡啶、波尔多液、乙酸铜、氢氧化铜、王铜、碱式硫酸铜、硝基苯衍生物、敌螨通、nitrophthalisopropyl 苯基吡咯、硫磺、硫有机金属化合物、苯酞、甲基立枯磷、N-(2-{4-[3-(4- 氯-苯基)-丙炔-2-基氧基]-3-甲氧基-苯基}-乙基)-2-甲烷磺酰氨基-3-甲基-丁酰胺、N-(2-{4-[3-(4-氯-苯基)-丙炔-2-基氧基]-3-甲氧基-苯基}-乙基)-2-乙烷磺酰氨基-3-甲基-丁酰胺、3，4-二氯-异噻唑-5-羧酸(2-氰基- 苯基)-酰胺、flubenthiavalicarb、3-(4-氯-苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基-3- 甲基-丁酰基氨基)-丙酸甲基酯、{2-氯-5-[1-(6-甲基-吡啶-2-基甲氧基亚氨基)-乙基]-苯甲基}-氨基甲酸甲酯、{2-氯-5-[I-(3-甲基-苯甲基氧基亚氨基)-乙基]-苯甲基}-氨基甲酸甲酯；下面分子式的六氯苯酰胺，其中X 是CHF2或CH3，R1、R2彼此独立地是卤素、甲基或卤代甲基；烯肟菌酯、次磺酸衍生物、肉桂酰胺及其类似物例如氟酰菌胺酰胺杀真菌剂例如cyclofenamid或(Z)-N-[a-(环丙基甲氧基亚氨基)-2，3-二氟-6-(二氟甲氧基)苯甲基]-2-苯基乙酰胺、噻苯哒唑和氟菌唑。
本发明的优选实施方案包含了表2中的一种或多种杀真菌剂。
表2
  活性成分   CAS No.   EPA-PC编码   化学物质   嘧菌酯(Azoxystrobin)   131860-33-8   128810   苯菌灵(Benomyl)   17804-35-2   099101
  克菌丹(Captan)   133-06-2   081301   多菌灵(Carbendazim)   10605-21-7   128872   甲酰胺/苯胺(Carboxamide/Anilide)   188425-85-6   128008   萎锈灵(Carboxin)   5234-68-4   090201   地茂散(Chloroneb)   2675-77-6   027301   百菌清(Chlorothalonil)   1897-45-6   081901   铜(及其盐)   7440-50-8(以及其它)   022501(以及其它)   氯硝胺(Dicloran)   99-03-9   031301   苯醚甲环唑(Difenoconazole)   119446-68-3   128847   氯唑灵/土菌灵(Ethazole/Etridiazole)   2593-15-9   084701   丁苯吗啉(Fenpropimorph)   67306-03-0/67564-91-4   121402   咯菌腈(Fludioxonil)   131341-86-1   071503   氟嘧菌酯(Fluoxastrobin)   361377-29-9   128869   氟喹唑(Fluquinconazole)   136426-54-5   ......   粉唑醇(Flutriafol)   76674-21-0   128940   三乙膦酸铝Fosetyl Al   39148-24-8   123301   Harpin蛋白   ......   006477/006506   己唑醇(Hexaconazole)   79983-71-4   128925   恶霉灵(Hymexazole)   10004-44-1   129107   抑霉唑(Imazalil)   35554-44-0   111901   种菌唑(Ipconazole)   125225-28-7   125618   异菌脲(Iprodione)   36734-19-7   109801   春雷霉素(Kasugamycin)   19408-46-9/6980-18-3   230001   代森锰锌(Mancozeb)   8018-01-7   014504   代森锰(Maneb)   12427-38-2   014505   精甲霜灵(Mefenoxam)   70630-17-0   113502   甲霜灵(Metalaxyl)   57837-19-1   113501   腈菌唑(Myclobutanil)   88671-89-0   128857   恶霜灵(Oxadixyl)   77732-09-3   126701   PCNB   82-68-8   056502   亚磷酸   13598-36-2   076002   丙环唑(Propiconazole)   60207-90-1   122101   硫菌威(Prothiocarb)   19622-19-6   ......   丙硫菌唑(Prothioconazole)   178928-70-6   113961   唑菌胺酯(Pyraclostrobin)   175013-18-0   099100   硅噻菌胺(Silthiofam)   175217-20-6   ......   硫酸链霉素   3810-74-0   006310
Strobilurins-其它   多种   多种硫   7704-34-9   077501 TBZ(噻苯哒唑(thiabendazole))   148-79-8   060101 TCMTB   21564-17-0   035603 戊唑醇(Tebuconazole)   107534-96-3   128997 二硫化四甲基秋兰姆(福美双) (Tetramethylthiuram disulfide(Thiram))   137-26-8   079801 甲基和乙基硫菌灵(Thiophanate methyl and ethyl)   23564-05-8   102001 三唑醇(Triadimenol)   55219-65-3   127201 三唑类-其它   多种   多种肟菌酯(Trifloxystrobin)   141517-21-7   129112 灭菌唑(Triticonazole)   131983-72-7   125620 有效霉素(Validamycin)   37248-47-8   ...... 代森锌(Zineb)   12122-67-7   014506 福美锌Ziram   137-30-4   034805 生物学物质芽孢杆菌属种(Bacillus species)   ......   ...... 假单胞菌属种(Pseudomonas species)   ......   ...... 链霉菌属种(Streptomyces species)   ......   ...... 木霉属种(Trichoderma species)   ......   ......
III.其它添加剂
本发明的种子包被成分可以包含除了芒柄花素、碱金属芒柄花素酸盐或杀真菌剂之外其它的生物活性成分。其它的活性成分可以包括但不限于植物基因的激活剂、植物系统性抗性的激活剂、动物驱除剂、肥料、除草剂(当种子对这些除草剂具有抗性时)、杀虫剂(包括但不限于下述类型的杀虫剂：生物学/发酵产品(例如除虫菌素；放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)；芽孢杆菌属(Bacillius)菌株 (包括例如苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis))；洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)；假单胞菌属(Pseudomonas)菌种；木霉属(Trichoderma)菌种；链霉菌属(Streptomyces)菌株或多杀菌素)、氨基甲酸酯类(例如涕灭威)、氯代烟酰基化合物(例如吡虫啉)、双酰肼类化合物(例如米满)、新烟碱类化合物(例如噻虫胺)、硝基胍类化合物(例如nidinotefuran)、有机磷酸酯(例如二嗪磷)、噁二嗪衍生物(例如茚虫威)、苯基吡唑酮(例如fiprinol)、其它的吡唑酮类(例如吡螨胺)、除虫菊酯类(例如除虫菊)、吡咯类化合物(例如溴虫腈)、合成的拟除虫菊酯类(例如高三氟氯氰菊酯)、硫杂烟碱类化合物(例如噻虫嗪)和三唑类化合物(例如唑蚜威))、保湿剂类、微生物接种剂、微量营养物质、杀线虫剂、渗透剂、植物生长调节剂、植物生长促进剂和吸水凝胶。
除了生物学活性成分之外，种子包被成分可以含有许多材料和添加剂，它们或者作为活性成分配方的一部分，或者有助于种子包被物的处理质量或其对种子的功能性和持久性。包被添加剂的例子是将活性成分结合到种子上的包被聚合物。种子包被聚合物可以包括但不限于例如蛋白、多糖、聚酯、聚氨基甲酸酯、从不饱和单体制备的聚合物，以及它们的组合。一种优选的种子包被聚合物是可以从Becker Underwood Inc.购买的被称为SeedkarePolykote的水溶性种子包被聚合物。
其它有助于种子包被物的处理质量或其对种子的功能性和持久性的添加剂包括但不限于表面活性剂、螯合剂、增塑剂、着色剂和染料、增白剂、乳化剂、流动活性剂、聚结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀细菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和抗冻剂。这些添加剂的本质和作用对于制剂技术领域的专业人员来说是众所周知的。添加剂不应该干扰芒柄花素、碱金属芒柄花素酸盐或杀真菌剂或任何其它上面列出的生物活性成分的作用。
关于种子处理技术、方法学和添加剂的进一步信息，可以在例如下面的出版物中发现，它们全部在此引为参考：Asrar等的美国专利申请公开No.20020115565；M.Newman，University of Tennessee at Knoxville，《农药使用者培训：第4类，种子处理》，″Pesticide Applicator Training：Category 4，Seed Treatment″；Paulsrud等，Univ.of Illinois，《俄勒冈州农药使用者培训手册：种子处理》，″Oregon Pesticide Applicator Training Manual：Seed Treatment″2001；Lipps等，Ohio State University Extension，Bulletin 639-98，《农业作物的种子处理》，″Seed Treatment for Agronomic Crops″；《爱荷华州商业农药使用者手册：种子处理》，″Iowa Commercial Pesticide Applicator Manual：Seed Treatment″Iowa State Univ.Extension(Feb.1999)；《农药使用培训：种子处理》，″Pesticide Application Training：Seed Treatment″Kansas State Univ.Ag.Experiment Station & Cooperative Extension Service(Sept.1998)；《CSS 460/560种子生产：种子处理》，″CSS 460/560 Seed Production：Seed Treatment″ Oregon State Univ.Crop & Soil Science(未标日期)；Mathre等，《小粒谷物种子处理》，″Small Grain Cereal Seed Treatment，″Plant Health Instructor(2006)；《种子处理：可持续农业的工具》，″Seed Treatment： A Tool for Sustainable Agriculture″Seed Treatment and Environment Committee of the Int′l Seed Trade Federation(1999).
IV.种子
事实上任何种子都可以用于本发明的实施方案中。优选的种子来自在存在VAM真菌的情况下其生长获得某些益处的植物，特别优选的种子也具有一定的农业价值。种子可以选自例如行间作物包括玉米、大豆、棉花、向日葵、花生等；谷类包括小麦、燕麦、大麦、水稻、高梁等；饲料和干草作物例如苜蓿、饲用牧草等；大田作物例如马铃薯(在这种情况下和其它例如甘薯的情况下，意味着“种子”块茎被用于种植作物，以及真正的种子用于育种和繁殖)、烟草、蚕豆、可食用豆(例如斑纹豆、菜豆和利马豆或其它豆)、豌豆、鹰嘴豆、小扁豆等；蔬菜作物例如西红柿、葫芦、胡椒、洋葱、胡萝卜、芹菜、莴苣以及其它非芸苔属蔬菜种子，加上草皮草、花种子以及其它装饰用物种的种子。用于本发明的优选的种子包括玉米、大豆、棉花、向日葵、苜蓿和小麦加上其它小粒作物，以及上面定义和描述的豆科植物、马铃薯、非芸苔属蔬菜种子、草皮草和牧草种子以及花种子。
应该理解，在本公开和权利要求书中使用的“种子”可以被解释为天然植物、杂交植物、转基因或遗传修饰的植物的种子，或它们的组合。本领域技术人员将会认识到，大多数目前在农业中使用的大豆、棉花和玉米种子的一种或多种所需性状是转基因的。因此，预计按照本发明的包被的种子，除了讨论的在本文中赋予的性状之外，还可以带有许多性状。此外，应该理解，当在本文中讨论种子已经被遗传修饰以带有附加的性状(例如产生杀真菌剂和/或异黄酮的能力)时，修饰并不妨碍之前或之后为其它性状对种子进行遗传修饰。
在本发明的一个实施方案中，种子被工程化以包含至少一种异源基因，该基因编码具有杀真菌活性、即抑制不想要的或病原性真菌的生长的蛋白。蛋白可以在植物发育中的任何时间由种子和/或得到的植株释放。
当被包被的种子编码具有杀真菌活性的蛋白时，包被物可以包含杀真菌剂和促进VAM真菌生长的成分。包被物可以包含促进VAM真菌生长的成分。当包被物不包含杀真菌剂时，杀真菌功能由异源基因编码的蛋白履行。
当包被物确实包含杀真菌剂时，来自于蛋白的杀真菌剂活性可以与包被物中的杀真菌剂减少同样的真菌的生长，或者与包被物中的杀真菌剂减少不同真菌的生长。包含了具有杀真菌活性、可以按照本发明进行包被的蛋白的编码异源基因的转基因种子的例子，包括但不限于在美国专利No.7,098,378、美国专利申请公开号No.20030172396、 Balasubramanian，P.的《植物疾病控制中的生物技术》(″Biotechnology in Plant Disease Control，″Tamil Nadu Ag.Univ.(2005))、Krishnamurthy， K.，等(小麦Puroindoline在转基因水稻中增强了真菌疾病抗性)″Wheat Puroindolines Enhance Fungal Disease Resistance in Transgenic Rice″ MPMI 14(10)：1255-1260(2001)、以及AgrEvo Pty Ltd Press Release，《PR-93：真菌疾病抗性的低芥酸油菜籽栽培品种的开发》(″PR-93： Development of Fungal Disease Resistant Canola Cultivars″(1998))中公开的那些，所有这些文献在此引为参考。
在本发明的另一个实施方案中，种子可以包含至少一种异源基因，该基因编码增加或能够产生促进VAM真菌生长的成分的蛋白。例如，从转基因种子生长的转基因植株，与同样物种的非转基因植株相比，可以产生增加量的芒柄花素和/或桔皮素。在另一个实施方案中，芒柄花素和/或桔皮素的生产组成性地发生。芒柄花素和/或桔皮素可以在植物生命周期的任何阶段生产，并且不限于单一生命周期。
当被包被的种子编码增加或能够产生促进VAM真菌生长的成分的蛋白时，包被物可以包含杀真菌剂和促进VAM真菌生长的成分，或者包被物可以包含杀真菌剂而不含促进VAM真菌生长的成分。当包被物不包含促进VAM真菌生长的成分时，该功能由异源基因编码的蛋白履行。如果包被物包含促进VAM真菌生长的成分时，它可以与转基因种子和/或植株产生的成分相同或不同。对理解本发明的该实施方案可能有帮助的原理陈述在Nair，M.G.等，(三叶草(Trifolium repens)根分离和鉴定泡囊-丛枝菌根刺激性化合物)″Isolation and Identification of Vesicular-Arbuscular Mycorrhiza-Stimulatory Compounds from Clover (Trifolium repens)Roots″App.& Env.Microbiol.57(2)：434-439(1991) 和Deavours，B.E.& Dixon，R.A.，(苜蓿中异类黄酮生物合成的代谢工程)″Metabolic Engineering of Isoflavonoid Biosynthesis in Alfalfa″Plant Physiology 138：2245-2259(2005)中，二者在此引为参考。
加强VAM真菌生长的成分包括例如芒柄花素、碱金属芒柄花素酸盐以及桔皮素。本领域技术人员可以想象出具有本公开的益处的生产一种或多种这些化合物的种子。芒柄花素是一种异黄酮。正如在美国专利No.6,146,668中报道的，异黄酮在植物界中广泛分布，但是主要发现在豆科植物中，最丰富的来源是三叶草和大豆。如图3所示，芒柄花素和其它异类黄酮的生物合成已被报道。
已经报道了在细胞悬浮培养物中芒柄花素和其它异类黄酮的生产。Arias-Castro，C等，(培养条件对光果干草(Glycyrrhiza glabra) 悬浮培养物芒柄花素积累的影响)，″The effect of cultural conditions on the accumulation of formononetin by suspension cultures of Glycyrrhiza glabra″Plant Cell，Tissue & Organ Culture 34(1)：0167-6857(1993)。芒柄花素和其它异类黄酮在愈伤组织培养物中的生产也已经报道。 Mitsugu，K.等，(使用不同生产方式用乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis)的愈伤组织培养物形成查耳酮和异黄酮)″Formation of Chalcones and Isoflavones by Callus Culture of Glycyrrhiza uralensis with Different Production Patterns″Chem.& Pharm.Bulletin，The Pharmaceutical Society of Japan 33(9)：3811-16(1985)；Fedoreyev，S.A. 等，(通过怀槐(Maackia amurensis)的愈伤组织培养物生产异类黄酮)， ″Isoflavonoid production by callus cultures of Maackia amurensis″ Fitoterapia 71(4)：365-72(2000)；也参见Jedinak，A.等，(植物组织培养中的类黄酮生产方法)，″Approaches to Flavonoid Production in Plant Tissue Cultures″Biologia，Bratislava 59(6)：697-710(2004)。
与芒柄花素相关的化合物的生产已经实现。例如，已经在苜蓿的叶中生产了5，7，4’-三羟基异黄酮。Deavours，B.E.& Dixon，R.A.，(苜蓿中异类黄酮生物合成的代谢工程)″Metabolic Engineering of Isoflavonoid Biosynthesis in Alfalfa″Plant Phys.138：2245-59(2005)。尽管以前没有考虑过，但在Deavours以及其它文献中使用的原理可以被扩展和修改，以提供可以按照本文提出的方式包被的产生芒柄花素和产生桔皮素的种子。
V.成分的量
本领域技术人员将会认识到，用于包被一群种子的杀真菌剂的量和芒柄花素和/或碱金属芒柄花素酸盐的量，将根据种子的尺寸、杀真菌剂、芒柄花素和/或碱金属芒柄花素酸盐对该种子的有效活性率的变化而变化。
在本发明的包被物中使用的芒柄花素和/或碱金属芒柄花素酸盐的典型的量，是提供大于每英亩大约6克活性成分的有效处理率的量。例如，对于玉米来说，有效包被用于种植一英亩的种子的芒柄花素的量是大约15-25克。有效包被用于种植一英亩玉米的种子的碱金属芒柄花素酸盐的量是大约24克。
下面的计算可以用于确定对每个种子施加的芒柄花素和/或碱金属芒柄花素酸盐(“活性”)的量：
玉米：典型的种植率为每英亩30,000粒种子，需要的每英亩活性率＝24克；所以所需的施加率是每粒种子0.8毫克。
大豆：典型的种植率为每英亩150,000粒种子，需要的每英亩活性率＝24克；所以所需的施加率是每粒种子0.16毫克。
小麦和其它小粒谷物例如燕麦和大麦：典型的种植率为每英亩 1,000,000粒种子，需要的每英亩活性率＝32克；所以所需的施加率是每粒种子0.032毫克。
蔬菜：表示成每英亩种子数的种植率变化很大，需要的每英亩活性率＝40克；所以施加率被调整到将40克活性物均匀地施加到种植一英亩所需的种子上。
在种子处理过程中产物的施加率可以如下计算：
通过实验或从发表的数据计算在100磅的种子中存在的种子的平均数量(对于玉米来说一个有用的标准是每100磅175,000粒种子)。根据每粒种子所需的活性率(0.8毫克/种子)计算每100磅种子所需的活性物的量(0.8x(175,000/1000))＝140克)。然后根据种子包被物配方中存在的活性物的量(例如35％w/w)，计算加入到100磅种子中所需的产物的量(140/0.35＝400克)。使用配方的比重(在本实施例中是每升1.1克)，人们可以将所需的产物量表示成体积(在本情况下是363.6 毫升或12.3fl.oz.)。校准种子包被设备以将该所需量的产物投送到100 磅种子中。对于大豆和小麦来说，同样的计算得出了每100磅种子的使用率分别为3.36和4.21fl.oz.。
具有推荐的种子包被施加率的种子处理杀真菌剂可以商购。在一个例子中，Maxim XL杀真菌剂(Syngenta)，用于田间玉米的种子处理的推荐率被表示成每100磅种子0.167fl.oz.，或每80,000粒种子0.075 fl.oz.，或每粒种子0.009毫克。在表3中显示了芒柄花素配方的一个例子，以及典型情况下施加到玉米的每粒种子、每100磅种子、每80,000粒种子以及每英亩基础(计数30,000粒种子)上的每种成分的量。还显示了在每种情况下施加的杀真菌剂的量。
表3
产物：Myconate FS350(每公斤产物350克活性成分)
以24克/英亩或0.8毫克/种子施加到玉米

VI.种子施加
一旦活性物质和杀真菌剂的所需施加率作为每100磅种子的量已知，然后就可以施加物质。活性物质和杀真菌剂的施加以及任何其它处理可以依次进行，也可以同时进行，或使用活性制剂和杀真菌制剂的混合物。在依次施加的情况下，优选首先施加杀真菌剂(以允许活性物质从外包被物层快速释放到土壤中)，然后，在杀真菌剂种子包被物干燥后，将种子用活性产物再次包被。在同时施加的情况下，使用同样的设备在同一时间进行活性物质和杀真菌剂处理，但是每种产物通过独立的泵和投送管线投送，直到它们接触到种子之后才混合。
在施加产物混合物的情况下，活性物质与杀真菌产物混合在一起，按照需要稀释或不稀释，然后使用同一个泵和投送管线一起投送到种子。在组合方法中，包被物的某些成分依次施加，而其它成分同时施加或配制在一起。在将活性物质与任何杀真菌产物混合之前，需要通过实验确定在物理、化学或生物学特性方面，任何产物对另一种产物都没有负面影响。
实施例
下面的实施例目的在于指导本领域技术人员实施本发明。它们不应该被解释为限制了本发明的范围，本发明的范围由权利要求书限定。
实施例1：实验室研究(2006)
实施例1描述了在2006年春季和夏季进行的实验研究，该研究评估了不同的市售杀真菌剂种子包被物在存在和不存在碱金属芒柄花素酸盐的情况下，对萌发的玉米秧苗中VAM发育的影响。所有的玉米种子包被物由Sub-Sahara International，Inc.(现在由Becker Underwood Inc. 拥有)使用标准的包被技术制造。使用的处理器是加拿大的Sedpell制造的RP-14旋转种子包被机。进行了连续施加，首先按照标签说明书施加杀真菌剂，然后当种子干燥后，用碱金属芒柄花素酸盐(钾盐)在它们外部再次包被。
列出的杀真菌剂按照表4中给出的量施加。杀真菌剂作为高粘度的液体悬浮液制剂，按照相应的标签上的使用说明进行施加。
表4
杀真菌剂   使用的施加率：   (每100磅玉米种子使用的克数)   使用率的范围和说明 Maxim XL   1.134克咯菌腈加上0.4536克精甲霜灵   在目标作物上该物质的   任何推荐的使用率 Apron XL LS   0.904克精甲霜灵   在目标作物上该物质的   任何推荐的使用率 Allegiance LS   3.816克甲霜灵   在目标作物上该物质的   任何推荐的使用率 Dynasty   0.450克嘧菌酯   在目标作物上该物质的   任何推荐的使用率
用于碱金属芒柄花素酸盐包被的聚合物包被物是Seedkare Polykote。SeedkarePolykote是用于种子包被的液体聚合物乳化物(化学名称：丙烯酸聚乙烯醇共聚物)。该聚合物在处理植物时可以与 SEEDKARE着色剂和SEEDKARE亮光染料混合，使操作者在改变成分的比例时更灵活，节省了花费。当使用从前的粉末种子处理化学物质时，它提供了优良的粘合能力和粉尘控制。
将碱金属芒柄花素酸盐按照下面的重量比率溶解在水中并添加 Polykote：水-70份，碱金属芒柄花素酸盐-45份，Polykote-20份。
种子萌发和VAM发育试验在Formosa农业和环境研究中心 (Formosa Agricultural and Environmental Research Center，LaWard， TX)的温室中进行。
萌发百分率试验使用40粒种子在湿润的纸上在28℃萌发2天后测定。
每种处理使用了在含有低P浓度的4种VAM真菌混合物的95个孢子的无菌盆栽土中种植的5株6周龄的玉米植株(来自秧苗)，在3 周的处理中测定了VAM发育的百分数。最初每种处理的10株植株放置在30ml的Speedling室中，10天后，将5株移植到1升的容器中。结果显示在下面的表5中：
表5：用SeedkarePolykote聚合物、碱金属芒柄花素酸盐和以推荐的使用率施加的不同市售种子包被杀真菌剂包被的玉米种子的种子萌发和VAM发育。碱金属芒柄花素酸盐由韩国的SK Energy and Chemical制造，2006年初发货。
  杀真菌剂   碱金属芒柄花素酸盐mg/种子   萌发％％VAM   无   无   92 54   无   0.5   1.0   93   93 61 66   Maxim XL   0.5   1.0   98   98 70 79   Apron XL   0.5   1.0   88   83 69 72   Allegiance   0.5   1.0   90   98 72 78   Dynasty   0.5   1.0   70   75 65 68
种子萌发  对于所有实验来说，除了用Apron和Dynasty处理的之外，种子萌发在90％以上。在该测试中，Dynasty总是抑制种子的萌发。显示出两种碱金属芒柄花素酸盐施加率的Maxim和施加率为1.0mg碱金属芒柄花素酸盐/种子的Allegiance，使种子萌发从93％增加到98％。与碱金属芒柄花素酸盐/种子的高施加率相比(89％)，总的种子萌发不受低施加率(87％)的影响。
VAM发育-杀真菌剂对VAM发育的影响是有趣的。当与对照(无杀真菌剂)相比时，所有的杀真菌剂都对VAM发育有轻微的增进效应。碱金属芒柄花素酸盐施加率对VAM发育也有一致的影响。1.0mg碱金属芒柄花素酸盐/种子的平均VAM为74％，0.5mg碱金属芒柄花素酸盐的平均VAM为67％，没有用碱金属芒柄花素酸盐处理时基础VAM水平仅仅为54％。杀真菌剂本身对VAM具有一定正面影响，尽管没有碱金属芒柄花素酸盐处理那样强，这个事实是可以解释的，因为除去病原性生物体可能消除了它们对 VAM生物体的任何竞争性影响。
结果表明，以推荐施加率用于种子上的最常用的市售杀真菌剂不抑制VAM在玉米上的发育。此外，较高的碱金属芒柄花素酸盐施加率 (1mg/种子)与较低施加率(0.5mg/种子)相比，产生了更多的VAM 发育。
实施例2：实验室研究(2007)
在实施例1中报道的研究中，已经确定了以推荐施加率用于种子上的最常用的市售杀真菌剂，不抑制Myconate对从杀真菌剂处理过的种子生长的玉米植株的VAM发育的刺激性效应。此外，较高的碱金属芒柄花素酸盐施加率与较低施加率相比，产生了更多的VAM发育。
在2007年进行了进一步的研究，以确定首先，在存在种子包被杀真菌剂的情况下，超过1mg/种子的芒柄花素酸钾施加率是否产生了比 2006年研究中观察到的更高的VAM定殖率；以及其次，确定水不溶性的芒柄花素酸是否以与钾盐同样的方式发挥作用。
方法：本研究在2007年2月到4月之间在Formosa农业和环境研究中心(Formosa Agricultural and Environmental Research Center)的温室中进行，使用了杂交的玉米植株(Zea mays L.)变种Beck′s杂交种5959 (HB)和Dow/Mycogen 2D675(PG)。杂交玉米种子从商业化来源购买，用两种杀真菌剂/杀虫剂种子处理中的一种进行预处理。变种HB用 Beck′s“SureGro”进行商业化处理，所述Beck′s“SureGro”含有咯菌腈和精甲霜灵杀真菌剂；同时使用了Agriliance Actellic 5E(甲基嘧啶磷)杀虫剂，按照标签的说明书进行。变种PG用Syngenta“Cruiser Extreme”(同时，咯菌腈、精甲霜灵和嘧菌酯杀真菌剂加上噻虫嗪杀虫剂)按照标签的说明进行商业化处理。
然后，将玉米种子用两种Myconate制剂中的一种进行再次处理。一种制剂含有98％芒柄花素酸钾(kf)和Polykote聚合物；另一种含有 100％芒柄花素酸(afP)和Polykote聚合物、润湿剂、着色剂和防腐剂。 kf处理，表6中的1到6，含有不同量的芒柄花素酸钾，并使用实验室工作台装置施加。afP处理，18和19，使用商业化设备施加。处理的HB种子接受芒柄花素酸钾施加率为0.2到5.6mg/种子的kf处理。处理的PG种子接受0.8mg/种子的单一芒柄花素施加率的afP处理。每粒种子的芒柄花素浓度通过对施加到种子的包被物进行重量测量来计算。
用于kf处理的对照含有两种种子样品7和8，它们都没有用kf处理，其中之一也没有用VAM孢子处理。用于afP处理的对照用afP处理，但是没有用VAM处理。各种不同的处理，包括对于VAM发育研究来说在播种前在生长培养基中添加VAM孢子，示意性描述在表6中。
表6

种子萌发：下面的方法被用于确定种子萌发。对于每种处理来说，将100粒种子分别播种在含有高温高压灭菌的Miraco-III盆栽混合物的 Speedling培养盘的30ml格中。在浇水后，在连续光照下，将培养盘在环境温度下(大约25℃)温育7天。7天后，记录萌发率和其它相关观测。当种子发育成正常尺寸的秧苗时，种子被认为是萌发了。没有表现出破土的种子，或虽然破土但是发育不良、变形和其它异常(例如具有双重或三重茎干)的种子被认为是没有萌发。萌发率被计算成出现了表明在有利条件下产生正常植株的基本结构的种子的百分率。
对于所有实验处理来说，萌发率在89％到99％的范围内(表7)。在本试验中使用的种子是随机选取的；因此萌发率代表了在每种实验处理中种子的实际萌发能力。Myconate浓度在4.0和5.6mg/种子之间(商业化施加率的5到7倍)显示出最低的萌发率，产生了较高的异常秧苗发生率。用5.6mg/种子处理的种子与较低浓度处理的种子相比，生长得略微矮一些，具有较小的叶片，尺寸均一性较低。在秧苗被移植到含有基于土壤的培养基的1升培养杯中，并在温室中孵育几周以进行 VAM发育研究后，这种差异消失了。
用商业化施加率的Myconate处理的种子(0.8mg/种子，3个样品) 的萌发率在96％到99％之间，超过了对于杂种玉米要求的最低90％的萌发率。为了进行比较，未处理的种子的萌发率显示出类似的范围，95％到97％。在2X商业施加率下(1.6mg/种子)，萌发率也超过了最小标准。因此，我们得出结论，高达1.6mg/种子的Myconate处理对种子萌发能力没有不利影响。
表7

*表现出生长不良、变形或产生了多个茎干的秧苗被分类为异常。它们源自的种子被计数为未萌发。
VAM真菌在玉米根部的定殖率使用通常用于定量泡囊丛枝菌根的方法来确定(Kormanik PP和AC McGraw(1984)，《植物根部中的泡囊丛枝菌根定量》，Quantification of vesicular-arbuscular mycorrhizae in plant roots.In N.C.Schenck主编，《菌根研究方法和原理》，Methods and Principles of Mycorrhizal Research.American Phytopathological Society，St.Paul，MN；Phillips JM和DS Hayman(1970)，(用于清理根部以及染色寄生和泡囊-丛枝菌根真菌以快速评估感染的改进的方法)， Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection. Trans.Br.Mycol.Soc.55：158-160；Read DJ，HK Koncheki和J Hodgson (1976)，(天然植被系统中的泡囊-丛枝菌根)，Vesicular-arbuscular mycorrhiza in natural vegetation systems.New Phytol.77：641-653)。将 Speedling培养盘的格子(体积为30ml)部分(2/3)填充高温高压灭菌的Miraco-III盆栽混合土，并接种95个VAM混合物(批号Lot No. 12-14-04)的孢子。VAM混合物含有幼套球囊霉(Glomus etunicatum)、明球囊霉(Glomus clarum)、哥伦比亚内养囊霉(Entrophospora columbiama)和根内球囊霉(Glomus intraradices)的孢子。混合物通过将幼套球囊霉、明球囊霉和哥伦比亚内养囊霉的干燥过筛(179微米) 孢子制备物与含有根内球囊霉的根内孢子的干燥根碎片进行混合来制备。每种真菌种使用盆栽培养技术单独生产和加工。然后将格子用 Miraco-III混合物填充。在播种后(每格一粒种子，每种处理9-20粒种子)，将培养盘在连续光照下在室温温育。播种10天后，随机选择每种实验处理的5株秧苗和两种未处理对照(处理7和8)的10株秧苗，移植到含有基于沙子的培养基的1升培养杯中。将培养杯在温室中温育，每周按照需要对所有处理施加1-2次低磷(P)营养液(1.175ppm) 以维持适合的土壤湿度。
移植4周后，检测了5株未处理的对照(处理7)的秧苗的VAM 发育，发现表现出略微超过20％的VAM定殖。在随后的天中，从所有剩余的秧苗(每种处理5株秧苗)收集根部样品，储存在冰箱中(4-6 ℃)5天直到进行加工。按照在Phillips JM和DS Hayman(1970)，用于清理根部以及染色寄生和泡囊丛枝菌根真菌以快速评估感染的改进的方法(Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection. Trans.Br.Mycol.Soc.55：158-160)中描述的步骤，将根部样品清洗、清理并染色以进行VAM评估。根部样品以每天30-35个样品的速率进行处理。使用在Kormanik PP和AC McGraw(1984)，《植物根部中的泡囊丛枝菌根定量》(Quantification of vesicular-arbuscular mycorrhizae in plant roots.In N.C.Schenck主编，(《菌根研究方法和原理》，Methods and Principles of Mycorrhizal Research.American Phytopathological Society，St.Paul，MN.)中描述的根部载玻片技术，进行染色的根的 VAM定殖显微镜评估。
表8报道了在这些试验中VAM定殖的结果。芒柄花素酸钾(kf) 和芒柄花素酸(afP)在商业化使用率(0.8mg/种子)下，将VAM定殖分别增加了81％和105％。在用高达0.8mg/种子的Myconate kf进行的三种种子处理下的VAM定殖，与未处理的对照相比，增加了超过 69％到81％；但是，在这三种实验中没有观察到线性剂量效应(图4)。在1.6mg/种子下，Myconate kf将VAM定殖增加了大约30％，显示出了降低的剂量效应。在或者超过4.0mg/种子时，在这些实验中Myconate kf使VAM定殖降低。据我们所知，这是第一个发表的关于芒柄花素抑制VAM定殖的报道；但是在这里观察到的剂量效应对于许多施加到土壤和植物的物质来说是典型的。
在未接种的对照植物(处理8和10)上没有发现VAM发育，表明在实验中没有发生污染。用作没有Myconate的阳性VAM接种对照的未处理的对照植物(处理7)，表现出24.2％的VAM定殖。在同样施加率下，芒柄花素与芒柄花素酸钾相比工作得至少一样好或更好。
表8

结论：本研究显示了Myconate对萌发和VAM发育都没有害处，除非以比推荐的商业化施加率高5到7倍的施加率施加。这些研究也再次证实了，即使是在施加到已经具有一种或多种种子处理杀真菌剂的包被物的种子时，Myconate也保留了其VAM刺激性质。
实施例2：田间研究
在2005和2006年间，进行了田间研究，以证实首先，碱金属芒柄花素酸盐和/或芒柄花素与杀真菌剂的组合不使田间萌发率降低到低于只使用杀真菌剂时观察到的水平；其次，已知从碱金属芒柄花素酸盐和/或芒柄花素处理产生的VAM刺激效应事实上导致了产量的增加，因此对于农民是有价值的；第三，该效应不受用芒柄花素和/或碱金属芒柄花素酸盐处理的种子上杀真菌剂的存在的抑制、降低或失效。
这些实验在印地安那州进行，在本实施例中的玉米或大豆种子用商业化种子处理器由声誉良好的种子公司进行处理。种子处理显示在表10中。用于玉米种子的杀真菌剂是Maxim XL，那些接受了杀真菌剂的玉米种子同时也接受施加的保护性杀虫剂处理，在这种情况下， Poncho 600(噻虫胺)以每粒种子0.25mg活性成分的比率施加(所谓的“Poncho 250”)。在大豆种子上使用的杀真菌剂是四种显示的物质的混合物；大豆种子没有用杀虫剂处理。
表10
  处理类型：   玉米试验-2005 大豆实验-2005   玉米试验-2006   未处理的对照   有有   有   杀真菌剂，不带有   活性成分   Maxim XL加   Poncho 250杀虫剂 Maxim XL+PCNB+ Apron XL+福美双   Maxim XL加   Poncho 250杀虫剂   杀真菌剂，带有活   性成分   Maxim XL加   Poncho 250杀虫剂 Maxim XL+PCNB+ Apron XL+福美双   Maxim XL加   Poncho 250杀虫剂
所有可商购的杀真菌剂和杀虫剂按照标签的推荐方法和提供的使用说明进行施加。
在使用的活性物质是碱金属芒柄花素酸盐(钾盐)的情况下，使用用足够的水稀释后、以制成可以流过处理器的料浆的杀真菌剂和杀虫剂进行连续施加处理。
对于每个试验，将进行了各种处理的种子使用标准的播种机播种在几个地点的小的重复区域中，在每个特定地点对每种处理种植一定数量的行。在整个生长季节中使用标准的农业作法。关于试验设计和步骤的进一步详细内容提供在表11中。
表11
  参数玉米试验-2005 大豆实验-2005 玉米试验-2006   地点数量 3 5 3   重复区总数 5 7 5   种植日期 2005年4月6日到 5月3日 2005年4月16日到 18日 2006年4月20日到 27日   田地尺寸 2或4x30”行 6x15”行 2x30”行   耕作方式常规的和低耕种无耕种常规的和低耕种   播种的种子密度根据位点29k到 33.7k/英亩 156k/英亩根据位点30k到 32.5k/英亩   4月到8月的降水量 20.7” 20.7” 21.1”   收获日期 2005年10月7日到 13日 2005年10月3日到 5日 2006年9月26日到 28日
在作物破土和早期定植后，对破土的植物的数量进行计数并记录，以提供萌发和定植的估算值。然后在收获时，通过在标准的作物称量地磅中对收获的产品进行称重，确定了每块田的产量。将产量调整到整体含有相同的水分含量，并计算为每英亩蒲式耳。定植和产量的结果显示在表12中，具有处理过的种子的田地的结果被表示成相对于未处理种子的田地的增加的百分率。
表12

杀真菌剂(+杀虫剂) 加活性成分   105.1％   106.2％   107.3％
根据植物群体结果，种子上杀真菌剂的存在减少了由于真菌病原体引起的种子和秧苗死亡，因此增加了定植计数，超过了没有使用杀真菌剂处理的种子时观察到的。在三种情况中的两种中，加入碱金属芒柄花素酸盐进一步增加了定植。使用芒柄花素和碱金属芒柄花素酸盐时没有观察到定植的一致增加，因此这不是对材料的记录的权利要求，但是观察到的是平均来说，活性成分不抑制由种子包被杀真菌剂带来的定植的增加。在本实施例中，在三个试验中，在单独存在杀真菌剂的情况下定植的增加是4.0％，在存在杀真菌剂加上芒柄花素的情况下是6.0％。
当种子用杀真菌剂处理时，产量临界增加；在本实施例中，产量平均增加了3.0％，增加在不同作物和年度间是一致的。当碱金属芒柄花素酸盐被添加到杀真菌剂处理中时，相对于未处理的种子田地产量的增加再次增加到超过6.0％的平均水平，是由单独的杀真菌剂引起的增加的两倍。
这一系列实验证明了将芒柄花素和/或碱金属芒柄花素酸盐与杀真菌剂加在一起作为种子的包被物，对杀真菌剂的疾病控制效应没有负面影响，也不抑制芒柄花素和/或碱金属芒柄花素酸盐的产量增加效应。已知芒柄花素和/或碱金属芒柄花素酸盐通过增加植物根部的菌根定殖而发挥作用，正如在实施例1和2中非常清楚地证明的那样，将杀真菌剂与芒柄花素和/或碱金属芒柄花素酸盐组合在同样的种子包被物中不导致对有益的泡囊丛枝菌根真菌的抑制。
尽管出于说明的目的对本发明的具体实施方案进行了描述，但显然对于本领域技术人员来说，可以对本发明的教导的细节进行大量的改动，而不背离在随附的权利要求书中定义的本发明。在本文中讨论的那些专利和公开物，应该被视为表明了本技术领域的技术水平，尽管没有承认任何文件是现有技术对比文件。所有本文中的上述专利和公开物，包括但不限于在发明背景中包含的那些，在此引为参考。在所包含的材料与本说明书中提出的现有定义、陈述或其它公开内容材料有冲突的情况下，本文明确提出的公开内容取代任何引为参考的冲突的材料。
优先权要求
本申请要求2007年2月23日提交的美国临时专利申请No. 60/903,087的优先权。该申请的全部内容在此引为参考。

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